NO843664L - Fremgangsmaate til fremstilling av insulinderivater, hvis b-kjede er forlenget c-terminal, nye basisk modifiserte insulinderivater, midler inneholdende disse og deres anvendelse - Google Patents
Fremgangsmaate til fremstilling av insulinderivater, hvis b-kjede er forlenget c-terminal, nye basisk modifiserte insulinderivater, midler inneholdende disse og deres anvendelseInfo
- Publication number
- NO843664L NO843664L NO843664A NO843664A NO843664L NO 843664 L NO843664 L NO 843664L NO 843664 A NO843664 A NO 843664A NO 843664 A NO843664 A NO 843664A NO 843664 L NO843664 L NO 843664L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- insulin
- arg
- formula
- amino acid
- residue
- Prior art date
Links
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical class N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 95
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 5
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims abstract description 43
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims abstract description 32
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims abstract description 27
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims abstract description 26
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 claims abstract description 18
- 125000000962 organic group Chemical group 0.000 claims abstract description 14
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims abstract description 11
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 230000001810 trypsinlike Effects 0.000 claims abstract description 6
- 102000005593 Endopeptidases Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 108010059378 Endopeptidases Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 4
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 claims description 31
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 claims description 19
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 14
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 14
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 11
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 claims description 11
- 150000002148 esters Chemical group 0.000 claims description 11
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 11
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 claims description 9
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 claims description 9
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 claims description 9
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 claims description 8
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 claims description 8
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 8
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 8
- ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N D-arginine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N 0.000 claims description 7
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims description 7
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 108010066381 preproinsulin Proteins 0.000 claims description 6
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 5
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 claims description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 3
- 229950008679 protamine sulfate Drugs 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- QJPWUUJVYOJNMH-VKHMYHEASA-N L-homoserine lactone Chemical group N[C@H]1CCOC1=O QJPWUUJVYOJNMH-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 2
- 101500021084 Locusta migratoria 5 kDa peptide Proteins 0.000 claims description 2
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 claims description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 12
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical group CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- -1 His Chemical compound 0.000 description 5
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 5
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- VPNIQGRFZCTBEZ-SPTGULJVSA-N 3-n-[(2s,3r)-4-(cyclopropylamino)-3-hydroxy-1-phenylbutan-2-yl]-5-[methyl(methylsulfonyl)amino]-1-n-[(1r)-1-phenylethyl]benzene-1,3-dicarboxamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)C=1C=C(C=C(C=1)C(=O)N[C@H](C)C=1C=CC=CC=1)N(C)S(C)(=O)=O)[C@H](O)CNC1CC1)C1=CC=CC=C1 VPNIQGRFZCTBEZ-SPTGULJVSA-N 0.000 description 2
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 2
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 2
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007056 transamidation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 2
- QNURTFDBHAQRSI-OAHLLOKOSA-N (4r)-3-[4-[[2-[(3-iodophenyl)methyl]-3-oxocyclohexen-1-yl]amino]phenyl]-4-methyl-4,5-dihydro-1h-pyridazin-6-one Chemical compound C[C@@H]1CC(=O)NN=C1C(C=C1)=CC=C1NC(CCCC1=O)=C1CC1=CC=CC(I)=C1 QNURTFDBHAQRSI-OAHLLOKOSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940090248 4-hydroxybenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxylysine Chemical group NCC(O)CCC(N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102000003670 Carboxypeptidase B Human genes 0.000 description 1
- 108090000087 Carboxypeptidase B Proteins 0.000 description 1
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 description 1
- 229930028154 D-arginine Natural products 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 101000993800 Sus scrofa Insulin Proteins 0.000 description 1
- HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N Thr-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001599 aminoquinuride Drugs 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001484 arginines Chemical class 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940066758 endopeptidases Drugs 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- CBOIHMRHGLHBPB-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl Chemical compound O[CH2] CBOIHMRHGLHBPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- HOUSDILKOJMENG-UHFFFAOYSA-N n,n'-bis(4-amino-2-methylquinolin-6-yl)urea Chemical compound N1=C(C)C=C(N)C2=CC(NC(=O)NC3=CC4=C(N)C=C(N=C4C=C3)C)=CC=C21 HOUSDILKOJMENG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 239000003791 organic solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940055076 parasympathomimetics choline ester Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003248 quinolines Chemical class 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000979 retarding effect Effects 0.000 description 1
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 1
- DCKVNWZUADLDEH-UHFFFAOYSA-N sec-butyl acetate Chemical compound CCC(C)OC(C)=O DCKVNWZUADLDEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N urethane group Chemical group NC(=O)OCC JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Public Health (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Description
Insulin-ArgB"^"*"-0H, insulin-Arg^^-Arg^^-OH og andre i B-kjeden C-terminalt basisk modifiserte insuliner har i legemidler uten spesielle tilsetninger som surfen jo eller protamin depotkarakter. Slike insuliner, fremgangsmåte til deres fremstilling, midler inneholdende disse og deres anvendelse er allerede kjent (tyske søknader nr. P 33 26 472.4, ;P 33 26 473.2, P 33 27 709.5 og P 33 27 928.4). Fordelene ;av slike forsinket virkende insulintilberedninger er å;finne i den bedre forenlighet og ved den med insulinbehand-ling forbundede langtidsbehandling, fremfor alt i den mang-lende immunogenitet av depothjelpemidlet. ;Ved biosyntesene av ubsykub oppstår fra den umiddelbare forløper det enkjedede proinsulin ved enzymatisk avspalt-ning av såkalt "Connecting-Peptids" det tokjedede insulin. Ved ufullstendig prosess er det imidlertid også å finne såkalte intermediatinsuliner i meget små mengder i det isolerte råinsulin. Disse mellomprodukter fra insulin-biosyntesen er strukturelt oppklart. De består overveiende av B31-Arg- og B31-32-Arg-Arg-insulinderivater. ;Behandler man in vitro proinsuliner av storfe, svin;eller mennesker med trypsin (Chance, Excerpta Medica Inter-national Congress Series No. 231, side 92 og følgende), så oppstår ved siden av de tilsvarende desoktapeptid-B23-30-insuliner fremfor alt en blanding av B31-Arg- og B32-Arg-Arg-insuliner. Den sikre adskillelse og høyrensning av ;disse produkter er meget omstendelig og krever flere gangers ioneutvekslerkromatografi som er forbundet med tap. Utvinningen av preparative mengder av råinsulin til anvendelse i terapien er derfor ikke praktikabel. Dess- ;uten står de til humaninsulin svarende produkter ikke til disposisj on. ;En mulig vei til utvinning av slike derivater består i enzymatisk å spalte genteknologisk fremstilt proinsulin eller analoge herav. Som nevnt, oppstår ved rensefrem-gangsmåten tap. ;Oppfinnelsens oppgave er å tilveiebringe en fremgangsmåte, hvorved de for en terapeutisk anvendelse av de nye galen-iske tilberedninger nødvendige mengder av basisk modifiserte insulinderivater kan fremstilles på enkel måte. ;Den i det følgende omtalte fremgangsmåte ifølge oppfinnelsen løser oppgaven ved enzymkatalysert omdannelse av billig bio-syntetisk insulin, som humaninsulin, svineinsulin eller eventuelt deres forløpere under anvendelse av egnede peptidderivater til de ønskede produkter. ;I det siste år er det blitt kjent forskjellige kjemiske og enzymatiske fremgangsmåter (Biochem. J. 211, (1983) 671-676, US-patenter nr. 3 903 068, 3 276 961, 4 320 197, GB-A-2069502, EP-A-56951 og andre), med hvis hjelp man f.eks. kan omdanne svineinsulin. Dessuten er det også fore-slått fremgangsmåter som muliggjør omdannelsen av egnede preproinsulinderivater og intermediatinsuliner, f.eks. til humaninsulin (tysk søknad P 32 09 184.2). ;Det er nå overraskende funnet at selektivt transamidiering ;ved lysinresten i stilling B29 av selve insulin med peptider som inneholder Arg resp. Arg-Arg og tross Arg i stilling B22 av insulinet forløper med høye utbytter. Dette er også til-fellet for proinsuliner (Lys-Arg-AO) og analoge. ;Oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte til fremstilling av et insulinderivat med formel I, ;
hvori;R<1>betyr H eller H-Phe,;a) R 3 0 betyr resten av en nøytralt, forekommende L-ammo-syre, og ;31 ;R betyr en fysiologisk ufarlig organisk gruppe av basisk karakter med inntil 50 C-atomer, hvis oppbygning er delaktig 0-3 ^-aminosyrer, og hvis eventuelt tilstedeværende endeplasserte karboksy-■ funksjon kan foreligge fri, som esterfunksjon, som amidfunksjon, som lakton eller redusert til CP^OH, eller ;30 ;B) R betyr resten av en basisk, naturlig forekommende L-aminosyre og ;R"^ betyr en fysiologisk ufarlig organisk gruppe av nøytral eller basisk karakter med inntil 50 C-atomer, ved hvis oppbygning det er delaktig 0-3 ot-aminosyrer og hvis eventuelt tilstedeværende endeplasserte karboksyfunksjon kan foreligge fri, som esterfunksjon, som amidfunksjon, som lakton eller redusert til CH2OH, ;og som har et isoelektrisk punkt over 5,8 og deres fysiologisk ufarlige salter, idet fremgangsmåten erkarakterisert vedat ;a) et insulin med formel I, hvori;R1 betyr H eller H-Phe,;R"^ betyr resten av en genetisk kodierbar L-aminosyre og ;31 ;R betyr OH eller en beskyttelsesgruppe av karboksyfunksjonen eller ;b) et proinsulin, proinsulinanalog, preproinsulin eller preproinsulinanalog med formel II ; ;
hvori;C-kjeden og X sammen betyr en sekvens av genetisk kodierbare L-aminosyrer, idet X fortrinnsvis betyr Ala, Thr eller Ser, spesielt imidlertid Thr, Z betyr H- eller H-(D) -Y-(Phe)n~, m og n betyr uavhengig av hverandre 0 eller 1, D betyr en genetisk kodierbar presekvens av L-aminosyrer og Y betyr Arg eller Lys,
omsettes med et peptid resp. aminosyrederivat med formel III ;
hvori;a) R 3 0 betyr resten av en nøytral naturlig forekommende L-aninosyre og ;31 ;R betyr en fysiologisk ufarlig organisk gruppe av basisk karakter med inntil 50 C-atomer, med hvis oppbygning det er delaktig 0-3 av a —aminosyrer, og hvis eventuelt tilstedeværende endeplasserte karboksyfunksjon kan foreligge fri som esterfunksjon, som amidfunksjon, som lakton eller redusert til CH-OH, eller ;30 ;b) R betyr resten av en basisk naturlig forekommende L-aminosyre, og ;31 ;R betyr en fysiologisk ufarlig organisk gruppe av nøytral eller basisk karakter med inntil 50 C-atomer, med hvis oppbygning er delaktig 0-3 a-aminosyrer og hvis eventuelt tilstedeværende endeplasserte karboksyfunksjon kan foreligge fri som esterfunksjon, som ;amidfunksjon, som lakton eller redusert til Cr^OH,;i nærvær av trypsin eller en trypsinlignende endopeptidase i vann eventuelt under tilsetning av et egnet organisk oppløsningsmiddel ved en pH-verdi under insulinets isoelektriske punkt, foretrinnsvis under pH 5,4, og eventuelt innførte beskyttelsesgrupper avspaltes. ;Foretrukket er en fremgangsmåte til fremstilling av insulinderivater med formel I, hvori ;R betyr en rest med formel -X' S, hvori;P ;p betyr 0, 1, 2 eller 3,;X' betyr like eller forskjellige rester av naturlig forekommende nøytrale eller basiske L-aminosyrer og/eller til disse svarende D-aminosyrer og ;S betyr OH eller en fysiologisk ufarlig gruppe som blokkerer karboksygruppen som, hvis p = 0« ogR"^ betyr en nøytral, naturlig forekommende L-aminosyre, har en positivt ladet eller protonerbar basisk rest eller ;ellers kan ha en slik rest og hvori C-Terminus;-X'-S også kan bety resten av en til den tilsvarende alkohol redusert aminosyre eller homoserinlaktonresten. ;Spesielt fremstilles slike forbindelser med formel I, hvori R1 betyr H-Phe og/eller R<30>betyr Ala, Thr eller Ser. Fortrinnsvis fremstiller man forbindelser, hvori A-kjeden og kjeden (B2-30) har sekvensen av humaninsulin. ;Ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen gåes det fortrinnsvis ut fra insuliner med formel I. Videre er ved utgangsfor-bindelsene med formel III slike foretrukket som har sekvensen ; ;
hvori;R<30>betyr Ala, thr, Ser, Leu eller beskyttet lys,;A og B er like eller forskjellige og betyr D-Arg, D-Lys, ;beskyttet Arg eller beskyttet lys,;C betyr D-Arg, D-Lys, beskyttet Arg, beskyttet Lys eller ;kolinestergruppen,;r, s og t er like eller forskjellige og betyr 0 eller 1,;og r+s+t er større enn 1, idet den C-terminale aminosyre også kan være redusert til tilsvarende alkohol. ;Ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen lar det seg eksempelvis fremstille: Des-Phe^-svineinsulin-Arg^^-OH Des-Phe^-humaninsulin-Arg53 "'"-OH r. ni. Bl • • -i • B31 , B32 Des-Pne -svinemsulm-Arg -Arg -OH Des-Phe Bl -humaninsulin-Arg B31 -Arg B3 2-OH Svineinsulin-Arg B31-OCH.. ;B31 ;Humaninsulin-Arg -OCH-.;B31 ;Storf einsulin-Arg -OCH-. Svineinsulin-Arg B31 -Arg B3 2 -OCH.. ;B 31 R 3 2 Humaninsulin-Arg -Arg -OCH., ;RID "R ^ 1 Des-Thr -humaninsulin-Val -OH Des-Thr<B30->humaninsulin-Val<B30->AlaB3<1->Arg<B32->OH ;B31 ;Humaninsulin-Lys -OH;B 3 1 ;Humaninsulin-D-Arg -OH;R 3 1 R 3 ? Humaninsulin-D-Arg -Arg -OH Humaninsulin-Arg -D-Arg -OH ;B 3 1 R 3 2 Humaninsulin-Lys -Arg -OH ;R 3 1 R 3 ? Humaninsulin-Arg<B31>-Lys<B32>-OH Humaninsulin-Argininol<B31>;R 3 1 R 3 2 Humaninsulin-Val -Arg -OH ;R31 Ril R?? Humaninsulin-Val -Arg -Arg -OH B31 R3 2 Humaninsulin-Arg -Argininol ;R 3 1 R 3 ? R 3 3 Humaninsulin-Lvs -Ara -Ara -OH ;Humaninsulin-Arg ; Humaninsulin-Arg ;
B31 ;Humaninsulin-Arg -NH_ Humaninsulin-Arg B31 -Arg B3 2-NH„ ;B31 ;Humaninsulin-Orn -OH;R 3 1 R 3 2 Humaninsulin-Leu -Cit -OH Humaninsulin-(B30)-OCH2CH2-NH2Humaninsulin-(B3 0)-NH-CH--CH--NH,, ;R 3 1 ;Humaninsulin-Arg -0-CH--CH_-NH:,;B3 0 B3 0 Des-Thr -humaninsulin-Arg -OH Des-ThrB30-humaninsulin-LysB30-OCH-. ;R 3 1 ;Humaninsulin-Arg -CH2-CH2-N(CH3)2 Humaninsulin-(B3 0)-0-CH2-CH2-N(CH3)3 ;Humaninsulin-(B3 0)-NH-CH^-CH -N(CH,)-;B3 1 ;Humaninsulin-Leu -0-CH--CH -CH^-NCC-H_)_;B30... B30 B31 ;Des-Thr -humaninsulin-Arg -Arg -OH;m, B30 , . n. B30 B31 ,. B32 ^u Des-Thr -humaninsulm-Lys -Ala -Arg -OH ;men spesielt;B31 ;Humaninsulin-Arg -OH;B31 B3 2 ;Humaninsulin-Arg -Arg -OH;Genetisk kodierbare er følgende L-aminosyrer:;5iY'di§»§er, Thr, Val, Leu, Ile, Asp, Asn, Glu, Gin, Cys, Met, Arg, Lys, His,Tyr, ?he, Trp, Pro ;(nøytrale aminosyrer understreket).;Med en nøytral, naturlig forekommende aminosyre forstår;man spesielt Gly,Ala, Ser, Thr, Val, leu, Ile, Asn, Gin, Cys, Met, Tyr, Phe, Pro eller Hyp. Med en basisk, naturlig forekommende aminosyre forstår man spesielt Arg, Lys, Hyl, Orn, Cit eller His. ;Med grupper som eventuelt blokkerer en fri karboksyfunksjon ved den C-terminale ende av B-kjeden i forbindelsen ifølge oppfinnelsen, forstår man fremfor alt ester- og amidgrupper, fortrinnsvis (C, til C , )-alkoksy, (C_. til C, )-cykloalkyloksy, NH2, (C1 til Cg)-alkylamino, Di-(C-L til Cg)-alkylamino ;eller basiske grupper, som (C^til Cg)-alkoksy, (C^til C^)-alkylamino-(C2til Cg)-alkoksy, Di-(C^ til C^)-alkylamino-(C2til Cg)-alkoksy, tri-(C1til C4)-ammonio-(C2til Cg)-alkoksy, amino-(C2til Cg)-alkylamino, /Tcitil )-alkyl-amino/-(C2til Cg)-alkylamino, /Di-(C^ til C^)-alkylamino/- ;(C2til Cg)-alkylamino eller /Tri-(C1til )-alkylamino/- ;(C~ til C,)-alkylamino, spesielt -0-/CH-/ -NR-,, -0-/CH- 7 - ;ffi 6--ffl - 2- p 2 - 2-'p NR3, -NH-/ CH2_/p-NR3, hvori p = 2 til 6 og R er lik eller forskjellig og betyr hydrogen eller (C^til C^)-alkyl. ;Som insuliner kan det anvendes alle naturlig isolerte insuliner med Lys (B29), fortrinnsvis imidlertid fra svin og mennesker, det samme gjelder for proinsulin. Som egnede preproinsuliner kommer det fremfor alt i betraktning slike utvunnet på genteknologisk måte som ved tilsvarende kodiering i presekvensen av en basisk aminosyrerest i stilling BO av molekylet, som kan spaltes med trypsin eller et trypsinlignende fritt eller bærefiksert enzym. ;Des-Phe B1-insuliner som utgangsforbindelser for fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er eksempelvis kjent fra DE-PS 20 05 658 eller fra EP-A-46 979. ;Ved genteknologiske metoder er i mellomtiden humant eller primat-proinsulin tilgjengelig som utgangsmaterial. Dertil lar det seg imidlertid også konstruere relativt enkle plas-mider som ved spalting av tilsvarende proinsulinderivater fører til nye insulinderivater fordi de i stedet av natur-lige ved B31 eller B32 befinnende argininer koderer for andre nøytrale eller basiske aminosyrer. ;Fremstillingen av proinsulin under anvendelse av rekombina-sjons-DNA-metodologien krever dannelsen av en DNA-sekvens som koderer for aminosyresekvensen av et proinsulin, ;hvilket lar seg oppnå fra begge ved isolering, konstruksjon eller en kombinasjon. Proinsulin-DNA anvendes i lesefasen i en egnet kolonierings- og ekspresjonsbærer. Bæreren tjener til transformering av en egnet mikroorganisme og den derved dannede transformerte mikroorganisme underkastes deretter fermentasjonsbetingelser som fører til dannelse av ytterligere kopier av proinsulingenholdige vektoren og til ekspresjon av proinsulin, et proinsulinderivat eller en proinsulinforløper (resp. et preproinsulinderivat). ;Dreier det seg ved ekspresjonsproduktet om en proinsulin-forløper, da inneholder et slikt produkt vanligvis proin-sulinaminosyresekvensen, som ved dens endeplasserte amino-gruppe er bundet til et bruddstykke av et protein som normalt uttrykkes ved gensekvensen, hvori proinsulinet eller proinsulinderivatet er blitt anvendt. ;Som peptider eller aminosyrederivater som kan anvendes til enzymkatalysert reaksjon, kommer det fremfor alt på tale alle eventuelt i sidekjeden og ved karboksylenden beskyttede Di-, Tri- og tetrapeptider med Gly, 1- eller D-aminosyrer ;som N-terminus, foruten slike som har karboksylenden av amino-syren som basisk amid eller likeledes slik esterderivatisert, fortrinnsvis kolinester eller amider med en ekstra kvarternær ammoniumrest. Tilstedeværende frie COOH-, OH-, SH-, tø-NH2~, guanidino- og/eller imidazolgrupper foreligger, hvis nødven-dig, beskyttet på i og for seg kjent måte (sammenlign f.eks. Bodanszky et al. i Peptide Synthesis, 2. utgave (1976), ;John WiJey&Sons).;Uretanbeskyttelsesgrupper av e-aminofunksjonen av Lys eller Orn er eksempelvis Fmoc, Fcboc, Z, Boe, Ddz, Bpoc, Z, ;(N02), Pyoc, Dobz, Moe, Mboc, Iboc, Adoc, Adpoc, Msc eller Pioc, foretrukket er Z eller Boe. Fjerningen av disse aminobeskyttelsesgrupper foregår med syrer, baser eller reduktivt (sammenlign Kontakte Merck 3/79, s. 14 ff). ;Beskyttelsesgrupper av guanidinogruppen av argininet er f.eks. Adoc, tosyl, Boe, Z, Mesitylen-2-sulfonyl (Mts) ;og lignende. Avspaltingen kan foregå hydrolytisk eller hydrogenolytisk (sammenlign Kontakte Merck 1/80, s. 23, 30). ;COOH-sidefunksjonen av Asp og Glu kan blokkeres som alkyl-ester, fortrinnsvis metyl, etyl- eller tert.butylester eller som benzylester eller modifisert benzylester (p-N02, p-Cl, p-Br og lignende). Deblokkeringen foregår ved alkalisk eller sur forsåpning eller hydrogenering (sammenlign Kontakte Merck 3/79, s. 14, 20). ;OH-sidefunksjonen av Thr eller Ser kan blokkeres på kjent måte ved eter- eller acylbeskyttelsesgrupper som f.eks. ;(C^til Cg)-alkyl, fortrinnsvis tert.butyl eller (C^til Cg)-alkanoyl. ;Valget av beskyttelsesgrupper og syntesestrategi bestemmes av typen av aminosyrene og de C-terminale grupper som blokkerer karboksygruppen. ;Som foretrukket dipeptider kan anvendes slike, hvor en N-terminal alanyl- eller threonylrest som er sammenknyttet med L-/D-arginin- eller L-/D-lysinresten, er blokkert med egnede sure eller basisk avspaltede beskyttelsesgrupper. ;Som irreversibel karboksylbeskyttelse av L-/ eller D-Arg resp. L-/ eller D-Lys kan det imidlertid også være koblet et basisk diamin til peptidet. Slike dipeptidforbindelser er fremfor alt fordelaktige, når D-Arg eller D-Lys anvendes som aminosyrerest, da disse peptidderivater ikke erkjennes av sterselektivt trypsin eller eksempelvis lysylendopepti-dase-Lys-C^og derfor er det for omdannelsesreaksjonen ikke nødvendig med sidekjedebeskyttelse. ;Som aminkomponent er det også mulig en basisk aminosyre, fortrinnsvis D-, L-Arginin og D-, L-lysin. De tilsvarende tripeptider må foruten ved karboksylgruppen bare i til-fellet av variantene i sidekjeden være blokkert med egnede sure eller basisk avspaltbare beskyttelsesgrupper. Sidekjedebeskyttelse for D-aminosyrerester kan imidlertid også velges for forbedring av de etter omsetningen gjennom-førte renseoperasjoner. ;De ovennevnte peptider eller aminosyrederivater fremstilles etter standardfremgangsmåter slik de eksempelvis er omtalt i "The Peptides Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 1, Major Methods of Peptide Bond Formation, Part A", utgitt ;E. Gross, J. meierhofer, Academic Press N.Y. (1979).;Ved siden av trypsin egner det seg for fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen også slike endopeptidaser som er kjent fra litteraturen som trypsinlignende, dvs. slike som spalter spesifikt peptidbindinger ved karboksyenden av basiske aminosyrer (sammenlign f.eks. EP-A-17938). ;De til den enzymatiske omsetning anvendte aminosyre- resp. peptidforbindelser anvendes fortrinnsvis i 40-150 ganger molart overskudd referert til insulinkomponentene. Som enzym-substrat-forhold kan det anvendes et vektforhold fortrinnsvis 1:5 til 1:20, spesielt 1:10 mellom enzym og insulinkomponenter. ;For å bringe aminosyre- og peptidforbindelser ifølge oppfinnelsen som viser liten vannoppløselighet i reaksjon, kan det til den forøvrig vandige reaksjonsoppløsning settes et egnet med vann blandbart organisk oppløsningsmiddel som metanol, dimetylformamid eller dioksan inntil homogen oppløsning. ;Reaksjonsblandingens vanninnhold bør imidlertid ikke synke under 50% av blandingen av vann/organisk oppløsningsmiddel for at utbyttenedsettende denaturering av insulinkomponentene og/eller trypsin undertrykkes. ;pH-verdiene hvor den enzymatiske reaksjon gjennomføres ligger vanligvis mellom 4-5, fortrinnsvis ved ca. pH 4,5. Ved høyere pH-verdier enn det angitte området, reduseres utbyttene av de foretrukkede transamideringsreaksjoner ;B2 9 ;ved posisjon Lys ved uønsket proteolytisk spalting ved » 522 ;Arg ;Oppfinnelsen vedrører videre insulinderivater med formel;I, hvori;R<3>^ betyr resten av en basisk, naturlig forekommende L-aminosyre og ;R<3>^ betyr en fysiologisk ufarlig organisk gruppe av nøytral eller basisk karakter med inntil 50 C-atomer, ved hvis oppbygning det er delaktig 0 til 3 a-aminosyrer og hvis eventuelt tilstedeværende endeplasserte karboksyfunksjon kan foreligge fri, som esterfunksjon, som amidfunksjon, som lakton eller redusert til CH^OH, idet disse erkarakterisert vedet isoelektrisk punkt større enn 5,8 samt deres fysiologisk ufarlige salt. ;Videre er slike foretrukket, hvori R"*" betyr H-PHe og/eller A-kjeden og kjeden ( 332-29 ) har sekvensen av humaninsulin
31
og/eller hvori R betyr OH.
Spesielt foretrukket er slike insulinderivater som i stilling B30 har Arg eller Lys.
Felles for alle disse insulinderivater er at den eller de ekstra på overflaten av molekylet befinnende positive ladninger, gir molekylet et i nøytralområdet forskjøvet isoelektrisk punkt. Alt etter derivat måles isoelektriske punkter fra 5,8 til ca. 8,5, spesielt 6,2 til 8,2 i den isoelektriske fokusering. Dermed er derivatene mindre oppløselige i nøytralområdet enn nativ insulin eller proinsulin, som har sitt isoelektriske punkt og dermed området for maksimal uoppløselighet ved pH = 5,4, mens de i nøytralområdet normalt foreligger oppløst.
Oppløselighetsegenskapene av insulin og proinsulin lar seg påvirke i området over det isoelektriske punkt, dvs.
i terapeutisk spesielt interessante nøytralområdet ved tilsetning av zinkioner. Zink virker derved som depotprinsipp, således det stabiliserer den heksamere tilstand av insulinet samt dets krystalliseringstendens. I subku-tant vev oppløser disse aggregater seg igjen.
Et ytterligere vanlig depotprinsipp er krystallisering
av insulinet eller prosinsulin som kompleks med et basisk protein, f.eks. globin eller protamin.
Ved anvendelsen av proinsulinet i oppløsning eller i for-bindelse med et av de omtalte depotprinsipper, krever det en ytterligere proteolytisk avbygning for å frigjøre nativt, fullvirksomt insulin. Intakt proinsulin har bare ca. 1/8 av den biologiske virkning av insulin, fordi således forstillingen en del av den biologisk aktive overflateregion, rezeptorbindingsregionen, er maskert med det i proinsulinet tilstedeværende C-peptid. Som prosinsulin kommer det riktignok for diabetesterapeien bare på tale bare homologt, altså bare slikt med menneskelig sekvens (sammenlign f.eks. DE-A1-32 32 036). Heterologt proinsulin har en signifikant immunogenitet. Det er i denne sammenheng bemerkelsesverdig at også humane proinsuliner kan ha variasjoner i C-peptiddelen.
Overraskende ble det nå o funnet at insulin-Arg B 3 0-OH og andre insulinderivater, hvis B-kjede C-terminalt har en organisk gruppe av basisk karakter, til forskjell fra proinsulin,
har en omtrent like høy biologisk aktivitet som nativt insulin.
De ifølge oppfinnelsen oppnådde insulinderivater er egnet som legemidler til behandling av Diabetes mellitus fra en farmasøytisk ufarlig bærer og et insulinderivat med formel I som virksomt stoff. De er helt nye forsinkelsesprinsipper som kan bringes til virkning uten depothhjelpestoffer som zink eller protaminsulfat. Depotvirkningen går tilbake på et inherent, proteinkjemisk betinget, fysikalsk prinsipp, insulinderivatets tungtoppløselighet til dets isoelektriske punkt. Dens gjenoppløsning under fysiologiske betingelser oppnås muligens ved avspalting av de ekstra basiske grupper som alt etter derivat kommer i stand ved tryptisk eller trypsinlignende og/eller karboksypeptidase B eller til karboksypeptidase B lignende og/eller esteraseaktivitet.
De respektivt avspaltede grupper er enten rent fysiologiske metaboliter, som aminosyrer, eller også lett metaboliserbare, fysiologisk ufarlige stoffer.
Insulinderivatene som virksomme stoffer av disse nye legemidler er også til forskjell til de i litteraturen omtalte intermediater, som dessuten inneholder deler av det heterologe C-peptid, vanligvis ikke sterkere immunogent enn det tilsvarende insulin selv.
Midlene ifølge oppfinnelsen inneholder som virksomt stoff et eller flere av de nye insulinderivater.med formel I.
De har fortrinnsvis en pH-verdi mellom 2,5 og 8,5, inneholder et egnet isotonimiddel, et egnet konserveringsmiddel og eventuelt en egnet puffer for et pH-område mellom 5,0 og 8,5.
En typisk anvendelsesform av de omtalte derivater er preparater som under det isoelektriske punkt foreligger som opp-løsninger i en fysiologisk ufarlig bærer. Derved kan opp-løsningens pH typisk utgjøre pH = 5,0. ligger altså tydelig høyere enn den for sure gamle insuliner (typisk pH = 3).
En nøytral injeksjonsoppløsning byr under tiden tydelige fordeler med hensyn til deres forenelighet.
En ytterligere typisk anvendelsesform er suspensjoner av amorfe eller krystallinske utfellinger av de omtalte derivater i en fysiologisk ufarlig bærer av omtrent nøytral pH.
Det er også mulig å forsterke den i derivatene inherente tungtoppløselighet i fysiologisk pH-området ved ekstra depotprinsipper, som f.eks. ved tilsetning av zink eller protaminsulfat. Den tilsatte sinkmengde kan derved utgjøre inntil 100 ug Zn2+/100 insulinenheter, typisk ca. 50 \ ig Zn<2+>/100 insulinenheter. Protaminmengden kan utgjøre
mellom 0,28 mg og 0,6 mg pr. 100 enheter (referert til protaminsulfat). På denne måte er det fremstillbart spesielt langvirksomme preparater for hvilke det i frem-tiden gis bredere anvendelse enn tidligere etterat nettopp en basalmengde av insulin synes terapeutisk fordelaKTIG: Dette er allerede nå en erkjennelse fra terapien med insulindoseringsapparater.
Som fysiologisk ufarglig og med insulinderivatene forenelig bærermedium egner det seg en steril vandig oppløsning som gjøres isotont til blod på den vanlige måte, f.eks. ved glycerol, koksalt, glukose og dessuten inneholder et av de vanlige konserveringsmidler, f.eks. fenol, m-kresol eller p-hyroksybenzosyreester. Bærermediet kan i tillegg inneholde et pufferstoff, f.eks. natriumacetat, natriumcitrat, natriumfosfat. For innstilling av pH-verdien anvendes fortynnede syrer (typisk HC1) resp. lut (typiskNaOH).
Insulinderivatene kan anvendes i midlene og også som alkali-eller ammoniumsalter. En ønskelig mengde av et eller flere av insulinderivater med formel I eller et insulinderivat med formel I kan foreligge i en blanding av ytterligere av disse insulinderivater uavhengig fra hverandre i repsektivt oppløst, amorfog/eller krystallinsk form.
Det er ofte fordelaktig til tilberedning å sette en egnet mengde av en egnet stabilisator som hindrer utfelling av protein ved termiskmekanisk belastning ved kontakt med forskjellige materialer. Slike stabilisatorer er eksempelvis kjent fra EP-A-18609, DE-A-32 40 177 eller fra WO-83/00288.
Ved midlene ifølge oppfinnelsen som også kan inneholde et av de kjente forsinkningsprinsipper som f.eks. protaminsulfat, globin eller zink i egnede mengder, kan et slikt forsinkelsesprinsipp anvendes i kombinasjon med den samlede virksomme stoffdel eller med deler herav eller et eller flere insulinderivater med formel I i en blanding. Et middel kan inneholde forskjellige insulinderivater med formel I i kombinasjon med flere forskjellige forsinkende virkende hjelpestoffer.
Med de terapeutiske midler ifølge oppfinnelsen er det
altså tydelig oppnåelig mangfoldig og meget fint avstemm-bare virkningskarakteristika, dermed skulle det etter de innledningsvis anførte bemerkninger være forbundet frem-skritt, spesielt med henblikk på diabetiske senkomplika-sj oner.
Oppfinnelsen skal forklares nærmere ved hjelp av noen eksempler.
Eksemgler:
1) 6 g insulin fra svin oppløses i 20 ml vann og 5 ml iseddik sammen med 37 g H-Thr-Arg(Adoc)2~0But.Hac og med iseddik innstilles en pH-verdi på 4,6. Etter avkjøling til 0°C settes til oppløsningen 0,6 g trypsin oppløst i 2 ml vann. Reaksjonen holdes 24 timer ved 4-10°C. Deretter felles ved tilsetning av 200 ml metanol eller
aceton reaksjonsproduktet humaninsulin-B31-Arg(Adoc)2~OBut og frasentrifugeres. Det klare overstående opp-arbeides for gjenvinning av dipeptidderivatet.
Utfellingen vaskes enda en gang med en blanding av metanol/eter og tørkes i vakuum. Ved hjelp av HPLC måles 47% av produktet i råblandingen. Adskillelse og rensing HI-Arg B31 (Adoc)2"OBut foregåo r på o kiselgel som omtalt i EP-A-82359.
HI-Arg B31OH fåes ved entimes behandling med trifluor-eddiksyre og etterfølgende utfelling med eter.
2) 600 mg svineinsulin oppløses i 2 ml H20, 0,8 ml DMF og 0,5 ml eddiksyre sammen med 12,6 g Hac.Thr.Arg(Adoc)2~Arg(Adoc)2.OBut og avkjøles til 0°C. Til blandingen settes 60 mg trypsin oppløst i 0,2 ml vann. Etter 24 timer kan det i en prøve ved hjelp av HPLC bestemmes R 3 1 R 3 2
40% av HI-Arg -Adoc)2-Arg (Adoc)2-OBut.
3) 60 mg svineinsulin oppløses i 0,5 ml vann, 0,2 ml dimetylformamid og 0,1 ml eddiksyre sammen med 676 mg Hac.2 HCl+Thr(But)-D-Arg-Arg(Adoc)2-OBut. pH-verdien innstilles med trietylamin på 5,0 og tilsettes 6 mg oppløst i 0,1 m vann. Etter 24 timer kan det ved hjelp av HPLC bestemmes 34% av reaksjonsproduktet
R 3 1 R 3 ?
HI-(B3 0)-(But)-D-Arg -Arg -(Adoc) -OBut.
4) 6 g humaninsulin oppløses i 20 ml vann og 5 ml eddiksyre sammen med 48 g HC1.Hac.Thr(But).Arg(Adoc)2-OBut og omsettes som i eksempel 1 med 0,6 g trypsin. Omsetningsgrad etter 16 timer: 35%. 5) 85 mg proinsulin av svin oppløses med 483 mg Hac.HCl.-Thr(But)-Arg(Adoc)2-OBut i 0,5 ml H20 og 0,3 ml eddiksyre. pH-verdien innstilles på 5,0 og tilsettes 8 mg trypsin oppløst i 0,1 ml vann. Omsetningsgrad etter 24 timer: 37%. 6) 85 mg proinsulin av svin omsettes med 1,2 g Hac.Thr-Arg(Adoc)2Arg(Adoc)2~OBut som i eksempel 5. Omsetningsgrad ved hjelp av HPLC: 33%.
Claims (8)
1. Fremgangsmåte til fremstilling av et insulinderivat med formel I
hvori
R1 betyr H eller H-Phe
30
a) R betyr resten av en nøytral, naturlig forekommende L-aminosyre og
R3"'" betyr en fysiologisk ufarlig organisk gruppe av basisk karekter med inntil 50 C-atomer, ved hvis oppbygning er delaktig 0-3 a-aminosyrer og deres eventuelt tilstedeværende endeplasserte karboksyfunksjon kan foreligge fri, som esterfunksjon, som amidfunksjon, som lakton eller redusert til CH2 OH, eller
b) R <3> ^ betyr resten av en basisk, naturlig forekommende L-aminosyre, og
31
R betyr en fysiologisk ufarlig organisk gruppe av nøytral eller basisk karakter med inntil 50 C-atomer, ved hvis oppbygning er delaktig 0-3 a-aminosyrer og deres evntuelt tilstedeværende endeplasserte karboksyfunksjon kan foreligge fri, som esterfunksjon, som amidfunksjon, som lakton eller redusert til CH2 OH , og som har et isoelektrisk punkt over 5,8, og deres fysiologisk ufarlige salter, karakterisert ved at a) et insulin med formel I, hvori
R <1> betyr H eller H-Phe,
R3*"1 betyr resten av en genetisk kodierbar L-amino
syre og
R betyr OH eller en beskyttelsesgruppe av karboksy
funksjonen, eller
b) et proinsulin, proinsulinanalog, preproinsulin eller
preproinsulinanalog med formel II ;hvori
C-kjeden og X sammen betyr en sekvens av genetisk kodierbare L-aminosyrer, Z betyr H- eller H-(D) -Y-(Phe) -, og m og n betyr uavhengig av hverandre 0 eller 1, D betyr en genetisk kodierbar presekvens av L-aminosyrer og Y betyr Arg eller Lys,
omsettes med et peptid resp. aminosyrederivat med formel III ;hvori
a)R<3> ^ betyr resten av en nøytral naturlig forekommende L-aminosyre og
R3"*" betyr en fysiologisk ufarlig organisk gruppe av basisk karakter, med inntil 50 C-atomer, ved hvis oppbygning er delaktig 0-3 a-aminosyrer og hvis eventuelt tilstedeværende endeplasserte karboksy funksjon, kan foreligge fri, som esterfunksjon, som amidfunksjon, som lakton eller redusert til CH^ OH, eller
b) R^ ® betyr resten av en basisk, naturlig forekommende L-aminosyre og
31
R betyr en fysiologisk ufarlig organisk gruppe av
nøytral eller basisk karakter med inntil 50 C-atomer, ved hvis oppbygning er delaktig 0-3 a-aminosyrer, og hvis eventuelt tilstedeværende endeplasserte karboksyfunksjon kan foreligge fri, som esterfunksjon, som amidfunksjon, som lakton eller redusert til CH^ OH,
i nærvær av trypsin eller en trypsinlignende endopeptidase i vann eventuelt under tilsetning av et egnet organisk oppløsningsmiddel ved en pH-verdi under insulinets isoelektriske punkt, fortrinnsvis under pH 5,4, og eventuelt innførte beskyttelsesgrupper avspaltes.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det fremstilles insulinderivater med formel I, hvori
31
R betyr en rest med formel -C <1> PS, hvori
p betyr 0,1, 2 eller 3,
X' betyr like eller forskjellige rester av naturlig forekommende nøytrale eller basiske L-aminosyrer og/eller til disse svarende D-aminosyrer og
S betyr OH eller en fysiologisk tålbar gruppe som
blokkerer karboksygruppen, som hvis p = 0 ogR<3> ^ betyr en nøytral forekommende L-aminosyre, har en positivt ladet eller protonerbare basisk rest eller ellers kan ha en slik rest og hvori C-terminus
-X <1> -X også kan bety resten av en til den tilsvarende alkohol redusert aminosyre eller homoserinlaktonresten.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 eller 2,
karakterisert ved minst av trekkene at det fremstilles insulinderivater med formel I, hvori R <3> ^ betyr Ala, Thr, Ser, Arg eller Lys, at A-kjeden og kjeden (B2-30) har sekvensen av humaninsulin, at det dannede derivatet med formel I har et isoelektrisk punkt fra 6,2 til 31
8,2, at i derivatet betyr R OH, at peptidet resp. amino-syrederivatet med formel III ifølge krav 1, anvendes i et 40- til 150-ganger molart overskudd referert til insulin-komponenten, og at enzym-substrat-vektforholdet ligger mellom 1:5 og 1:20.
4. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av kravene 1-3, karakterisert ved at det gåes ut fra insulinet med formel I.
5. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av kravene 1-4, karakterisert ved at det fremstilles et insulinderivat med et egnet isotonimiddel og et egnet konserveringsmiddel, bringes i en fysiologisk tålbar form, som inneholder insulinderivater med formel I oppløst og/eller i suspensjon, idet eventuelt tungtoppløseligheten i det fysiologiske pH-området forsterkes ved tilsetning av zink, fortrinnsvis i en mengde inntil 100^ g zink/100 I.U., eller av et hjelpemiddel med forsinkende virkning, fortrinnsvis protaminsulfat i en mengde fra 0,28 mg til 0,6 mg pr. 100 enheter.
6. Fremgangsmåte ifølge krav 5,
karakterisert ved at det dessuten også innarbeides en egnet puffer og pH-verdien ligger mellom 4,0 og 8,5.
7. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av kravene 1-6, karakterisert ved at utgangsforbind-elsen med formel III har sekvensen
hvori
R3^ betyr Ala, Thr, Ser, Leu eller beskyttet Lys,
A og B er like eller forskjellige og betyr D-Arg, D-Lys,
beskyttet Arg eller beskyttet Lys,
C betyr D-Arg, D-Lys, beskyttet Arg, beskyttet Lys eller
kolinestergruppen,
r, s og t er like eller forskjellige og betyr 0 eller 1 og r+s+t er større enn 1, idet den C-terminale aminosyre også kan være redusert til tilsvarende alkohol.
8. Fremgangsmåte ifølge et av kravene 1-7, karakterisert ved at det fremstilles B31 B31 B3 2 humaninsulin-Arg -OH eller humaninsulin-Arg -Arg -OH.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19833333640 DE3333640A1 (de) | 1983-09-17 | 1983-09-17 | Verfahren zur herstellung von insulin-derivaten, deren b-kette c-terminal verlaengert ist, neue basisch modifizierte insulin-derivate diese enthaltende mittel und ihre verwendung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO843664L true NO843664L (no) | 1985-03-18 |
Family
ID=6209365
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO843664A NO843664L (no) | 1983-09-17 | 1984-09-14 | Fremgangsmaate til fremstilling av insulinderivater, hvis b-kjede er forlenget c-terminal, nye basisk modifiserte insulinderivater, midler inneholdende disse og deres anvendelse |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5015728A (no) |
| EP (1) | EP0140084B1 (no) |
| JP (1) | JPH0691834B2 (no) |
| KR (1) | KR850002282A (no) |
| AT (1) | ATE53590T1 (no) |
| AU (1) | AU577801B2 (no) |
| CA (1) | CA1246478A (no) |
| DE (2) | DE3333640A1 (no) |
| DK (1) | DK172462B1 (no) |
| ES (1) | ES8600218A1 (no) |
| FI (1) | FI82838C (no) |
| GR (1) | GR80366B (no) |
| HU (1) | HU194282B (no) |
| IL (1) | IL72966A (no) |
| NO (1) | NO843664L (no) |
| NZ (1) | NZ209545A (no) |
| PH (1) | PH22422A (no) |
| PT (1) | PT79201B (no) |
| ZA (1) | ZA847258B (no) |
Families Citing this family (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3326472A1 (de) * | 1983-07-22 | 1985-02-14 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Neue insulin-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung sowie pharmazeutische mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3327928A1 (de) * | 1983-08-03 | 1985-02-21 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur herstellung von insulin-derivaten |
| DE3334407A1 (de) * | 1983-09-23 | 1985-04-04 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | In position b 30 modifizierte insulin-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung sowie pharmazeutische mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
| DK113585D0 (da) * | 1985-03-12 | 1985-03-12 | Novo Industri As | Nye peptider |
| DK347086D0 (da) * | 1986-07-21 | 1986-07-21 | Novo Industri As | Novel peptides |
| WO1988002633A1 (en) * | 1986-10-20 | 1988-04-21 | Novo Industri A/S | Protamine zinc insulin preparations |
| DE3717370A1 (de) * | 1987-05-22 | 1988-12-01 | Hoechst Ag | Mischkristalle aus insulin und insulinderivaten, verfahren zur herstellung dieser mischkristalle, diese mischkristalle enthaltende pharmazeutische mittel und ihre verwendung zur behandlung von diabetes mellitus |
| DE3827533A1 (de) * | 1988-08-13 | 1990-02-15 | Hoechst Ag | Pharmazeutische zubereitung zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3936876A1 (de) * | 1989-11-06 | 1991-05-23 | Hoechst Ag | Neue insulinderivate, verfahren zu deren herstellung, ihre verwendung und eine sie enthaltende pharmazeutische zubereitung |
| EP0622376B1 (de) * | 1993-04-27 | 2001-08-08 | Hoechst Aktiengesellschaft | Amorphe monosphärische Formen von Insulinderivaten |
| US6444641B1 (en) | 1997-10-24 | 2002-09-03 | Eli Lilly Company | Fatty acid-acylated insulin analogs |
| US6323311B1 (en) | 1999-09-22 | 2001-11-27 | University Of Utah Research Foundation | Synthesis of insulin derivatives |
| KR20040070237A (ko) * | 2001-12-20 | 2004-08-06 | 일라이 릴리 앤드 캄파니 | 연장된 작용 시간을 갖는 인슐린 분자 |
| CA2518776A1 (en) * | 2003-04-29 | 2004-11-11 | Eli Lilly And Company | Insulin analogs having protracted time action |
| DE102006031962A1 (de) * | 2006-07-11 | 2008-01-17 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Amidiertes Insulin Glargin |
| DE102006031955A1 (de) * | 2006-07-11 | 2008-01-17 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Verfahren zur Herstellung von Insulinanaloga mit dibasischem B-Kettenende |
| KR101820024B1 (ko) | 2008-10-17 | 2018-01-18 | 사노피-아벤티스 도이칠란트 게엠베하 | 인슐린과 ｇｌｐ－1 효능제의 병용물 |
| LT2498801T (lt) | 2009-11-13 | 2018-05-10 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Farmacinė kompozicija, apimanti despro36eksendin-4(1-39)-lys6-nh2 ir metioniną |
| PL3417871T3 (pl) | 2009-11-13 | 2021-06-14 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Kompozycja farmaceutyczna zawierająca agonistę GLP-1, insulinę i metioninę |
| MX339614B (es) | 2010-08-30 | 2016-06-02 | Sanofi - Aventis Deutschland GmbH | Uso de ave0010 para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de la diabetes mellitus tipo 2. |
| US9821032B2 (en) | 2011-05-13 | 2017-11-21 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical combination for improving glycemic control as add-on therapy to basal insulin |
| PL2750699T3 (pl) | 2011-08-29 | 2015-12-31 | Sanofi Aventis Deutschland | Kombinacja farmaceutyczna do stosowania w kontroli glikemii u pacjentów z cukrzycą typu 2 |
| TWI559929B (en) | 2011-09-01 | 2016-12-01 | Sanofi Aventis Deutschland | Pharmaceutical composition for use in the treatment of a neurodegenerative disease |
| CA2970200A1 (en) | 2014-12-12 | 2016-06-16 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Insulin glargine/lixisenatide fixed ratio formulation |
| TWI748945B (zh) | 2015-03-13 | 2021-12-11 | 德商賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患治療 |
| TW201705975A (zh) | 2015-03-18 | 2017-02-16 | 賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 | 第２型糖尿病病患之治療 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EG10440A (en) * | 1970-02-07 | 1977-09-30 | Hoechst Ag | Process for the preparation of des-phenylalamin b1-insuli |
| DE2460753A1 (de) * | 1974-12-21 | 1976-06-24 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung von humaninsulin |
| DK146482C (da) * | 1979-04-13 | 1986-10-06 | Shionogi & Co | Fremgangsmaade til fremstilling af et b30-threonin-insulin |
| JPS55138393A (en) * | 1979-04-13 | 1980-10-29 | Shionogi & Co Ltd | Semisynthesis of insulin |
| JPS55138391A (en) * | 1979-04-13 | 1980-10-29 | Shionogi & Co Ltd | New synthetic method of peptide derivative |
| DK319780A (da) * | 1980-07-24 | 1982-01-25 | Forenede Bryggerier As | Fremgangsmaade til enzymatisk udskiftning af b-30 aminosyren i insuliner |
| DE3033127A1 (de) * | 1980-09-03 | 1982-04-08 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Neue analoga des insulins |
| DE3101382A1 (de) * | 1981-01-17 | 1982-09-02 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | "verfahren zur herstellung von humanisulin oder dessen derivaten aus schweineinsulin oder dessen derivaten" |
| DK149824C (da) * | 1982-01-22 | 1987-03-16 | Carlsberg Biotechnology Ltd | Fremgangsmaade til enzymatisk udskiftning af b-30 aminosyrer i insuliner |
| DE3209184A1 (de) * | 1982-03-13 | 1983-09-15 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur umwandlung von praeproinsulinanaloga zu insulinen |
| NL8201650A (nl) * | 1982-04-21 | 1983-11-16 | Akzo Nv | Semisynthetische bereiding van humane insuline. |
| DE3326472A1 (de) * | 1983-07-22 | 1985-02-14 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Neue insulin-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung sowie pharmazeutische mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3327928A1 (de) * | 1983-08-03 | 1985-02-21 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur herstellung von insulin-derivaten |
| DE3334407A1 (de) * | 1983-09-23 | 1985-04-04 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | In position b 30 modifizierte insulin-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung sowie pharmazeutische mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
-
1983
- 1983-09-17 DE DE19833333640 patent/DE3333640A1/de not_active Withdrawn
-
1984
- 1984-03-17 PH PH31214A patent/PH22422A/en unknown
- 1984-09-10 HU HU843416A patent/HU194282B/hu not_active IP Right Cessation
- 1984-09-11 EP EP84110813A patent/EP0140084B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-09-11 DE DE8484110813T patent/DE3482470D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1984-09-11 AT AT84110813T patent/ATE53590T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-09-13 FI FI843593A patent/FI82838C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-09-13 JP JP59190727A patent/JPH0691834B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1984-09-13 CA CA000463076A patent/CA1246478A/en not_active Expired
- 1984-09-14 DK DK198404398A patent/DK172462B1/da not_active IP Right Cessation
- 1984-09-14 AU AU33072/84A patent/AU577801B2/en not_active Ceased
- 1984-09-14 ZA ZA847258A patent/ZA847258B/xx unknown
- 1984-09-14 ES ES535916A patent/ES8600218A1/es not_active Expired
- 1984-09-14 GR GR80366A patent/GR80366B/el unknown
- 1984-09-14 PT PT79201A patent/PT79201B/pt not_active IP Right Cessation
- 1984-09-14 NO NO843664A patent/NO843664L/no unknown
- 1984-09-14 NZ NZ209545A patent/NZ209545A/xx unknown
- 1984-09-15 KR KR1019840005641A patent/KR850002282A/ko not_active Application Discontinuation
- 1984-09-17 IL IL72966A patent/IL72966A/xx not_active IP Right Cessation
-
1988
- 1988-03-23 US US07/172,236 patent/US5015728A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5015728A (en) | 1991-05-14 |
| DK172462B1 (da) | 1998-08-31 |
| AU577801B2 (en) | 1988-10-06 |
| NZ209545A (en) | 1989-02-24 |
| GR80366B (en) | 1985-01-11 |
| PH22422A (en) | 1988-09-12 |
| FI82838B (fi) | 1991-01-15 |
| IL72966A (en) | 1989-08-15 |
| PT79201B (de) | 1986-09-10 |
| AU3307284A (en) | 1985-03-21 |
| DK439884D0 (da) | 1984-09-14 |
| EP0140084A1 (de) | 1985-05-08 |
| ATE53590T1 (de) | 1990-06-15 |
| ES535916A0 (es) | 1985-10-01 |
| FI843593L (fi) | 1985-03-18 |
| KR850002282A (ko) | 1985-05-10 |
| DK439884A (da) | 1985-03-18 |
| PT79201A (de) | 1984-10-01 |
| HUT36144A (en) | 1985-08-28 |
| HU194282B (en) | 1988-01-28 |
| ES8600218A1 (es) | 1985-10-01 |
| DE3333640A1 (de) | 1985-04-25 |
| DE3482470D1 (de) | 1990-07-19 |
| EP0140084B1 (de) | 1990-06-13 |
| FI82838C (fi) | 1991-04-25 |
| FI843593A0 (fi) | 1984-09-13 |
| JPS6094998A (ja) | 1985-05-28 |
| JPH0691834B2 (ja) | 1994-11-16 |
| IL72966A0 (en) | 1984-12-31 |
| ZA847258B (en) | 1985-05-29 |
| CA1246478A (en) | 1988-12-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO843664L (no) | Fremgangsmaate til fremstilling av insulinderivater, hvis b-kjede er forlenget c-terminal, nye basisk modifiserte insulinderivater, midler inneholdende disse og deres anvendelse | |
| US4701440A (en) | Insulin derivatives, processes for their preparation and their use, and pharmaceutical agents for the treatment of diabetes mellitus | |
| US4608364A (en) | Pharmaceutical agent for the treatment of diabetes mellitus | |
| TWI433681B (zh) | 具有極度延遲時間／作用型態之新穎胰島素衍生物（二） | |
| DK172241B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af en krystalsuspension af et eller flere insulinderivater samt en sådan krystalsuspension | |
| US5491216A (en) | Tri-arginine insulins | |
| US9260503B2 (en) | Multi-substituted insulins | |
| TW200817432A (en) | Amidated insulin glargine | |
| CA2468100A1 (en) | Insulin molecule having protracted time action | |
| CZ290079B6 (cs) | Způsob produkce inzulinu a meziprodukt pro tento způsob | |
| WO2019200594A1 (zh) | 酰化的glp-1衍生物 | |
| US5432261A (en) | Motlin-like polypeptide and use thereof | |
| HU228934B1 (hu) | Eljárás inzulinvegyületek elõállítására | |
| KR20090038868A (ko) | 이염기성 ｂ쇄 말단을 갖는 인슐린 유사체를 제조하는 방법 | |
| NO843799L (no) | Insulinderivater som er modifisert i stilling b30, fremgangsmaate til deres fremstilling og deres anvendelse samt farmasoeytisk middel til behandling av diabetes mellitus | |
| CN107266556A (zh) | 一种非洲爪蟾胰高血糖素样肽‑1（glp‑1）类似物及其应用 | |
| KR920005659B1 (ko) | 인슐린 유도체의 제조방법 | |
| Misoka et al. | Efficient purification and analysis for stability of human secretin precursor-like peptide produced in Escherichia coli | |
| ZA200404273B (en) | Insulin molecule having protracted time action. |