MXPA06005688A

MXPA06005688A - Composiciones estables de liposoma que comprenden una amina lipofilica que contiene agentes farmaceuticos.

Info

Publication number: MXPA06005688A
Application number: MXPA06005688A
Authority: MX
Inventors: Helen Diana Pliura; Blagoja Ristevski; Charles James Boylan; Hong Li
Original assignee: Delex Therapeutics Inc
Priority date: 2003-11-20
Filing date: 2004-11-22
Publication date: 2006-12-14
Also published as: AU2004290476A1; ZA200604808B; RU2369384C2; KR20060123341A; CN1893926B; BRPI0416650A; CA2588012A1; CN101889981A; EP1689364A4; NO20062877L; JP2007511545A; WO2005048986A1; US20070269502A1; CN1893926A; RU2006121554A; EP1689364A1

Abstract

Una composicion de liposoma estable para entregar un agente farmaceutico, la composicion comprende: (a) un medio acuoso adecuado; (b) liposomas formados de un fosfolipido adecuado; (c) por lo menos un agente farmaceutico estando por lo menos parcialmente encapsulado en los liposomas, y que esta seleccionado de: (i) una amina lipofilica y un acido farmaceuticamente aceptable, en donde el acido farmaceuticamente aceptable es seleccionado de un acido organico o inorganico, y (ii) una sal de acido organico farmaceuticamente aceptable de una amina lipofilica, y opcionalmente un acido organico farmaceuticamente aceptable; en donde la cantidad del acido farmaceuticamente aceptable presente en la composicion es tal que el pH de la composicion de liposoma es menor que o aproximadamente igual al pKa del grupo amino de la amina lipofilica farmaceuticamente activa. Las composiciones, equipos y metodos para la preparacion de la misma, asi como metodos para mejorar adicionalmente la estabilidad de la composicion mediante autoclaves, y metodos para la identificacion de composiciones de liposoma estables de la presente invencion son igualmente proporcionados.

Description

agua o solución acuosa. Si los materiales solubles en agua están incluidos en la fase acuosa durante este proceso el material puede quedar atrapado en la fase acuosa entre las bicapas lípidas. De manera similar los materiales lipofílicos pueden disolverse en el lípido e incorporarse a las mismas bicapas, incluso si el material lipofílico también tiene un grupo polar, este grupo puede extenderse en la fase acuosa interna o externa. La encapsulación de los materiales en los liposomas se puede lograr mediante un número de métodos conocidos en el oficio. El método utilizado con mayor frecuencia involucra la fundición de una fina película de fosfolípidos en la pared de un frasco por evaporación de un solvente orgánico. Cuando esta película se dispersa en un medio acuoso apropiado, se forman los liposomas. Entonces se sonifica la mezcla (agitada por ondas sonoras de alta frecuencia) para dar una dispersión de las vesículas cerradas. Otro método para la creación de liposomas es la mezcla rápida de un lípido en etanol y agua . Con frecuencia esto se logra al inyectar el lípido en una solución acuosa. Esta membrana bicapa con frecuencia funciona de manera similar a las membranas celulares. Por lo tanto exhibe algunas propiedades biológicas tal como la habilidad para ser fácilmente aceptada en el entorno de las células vivientes . Los liposomas pueden fusionarse con las células vivientes como si ellas mismas fueran organillos. Como resultado, en años recientes ha habido mucho interés en utilizar los liposomas como vehículos para suministrar los compuestos que poseen una propiedad específica biológica o farmacológica a un paciente .

Algunas dificultades han surgido en relación al uso de los liposomas como medio de suministro y blanco para los fármacos y otros compuestos. Un problema específico es que los liposomas que se elaboran mediante técnicas convencionales con formulas convencionales, y con frecuencia al paso del tiempo la fase se vuelve inestable, lo que puede hacer que dichos compuestos sean inadecuados en la industria, especialmente en la industria farmacéutica. Esto puede resultar en fugas, descomposición, disipación y en la separación, fusión aglomeración o gelificación de la fase por almacenamiento.

Las técnicas conocidas para aumentar la estabilidad de almacenamiento de los liposomas consta del uso de aditivos químicos como estabilizadores, o la preparación de preparados de polvo seco. Los ejemplos de los métodos para estabilizar a los liposomas mediante el uso de estabilizadores excipientes consta en aquellos divulgados en la Patente de Estados Unidos de América No. 4,818,537, Patente de Estados Unidos de América No. 5,100,662, Patente de Estados Unidos de América No. 5,204,112, Patente de Estados Unidos de América No. 4,804,539 y Patente de Estados Unidos de América No. 5,962,015. Estabilizadores para liposomas han incluido moléculas anfotéricas que cuentan con una región catiónica, por ejemplo trietanolamina, un buffer cosmético común. Estas moléculas pueden ser adicionadas para prevenir acumulación de liposomas . Independientemente de que no se ha demostrado que la trietanolamina proporcione la vida de anaquel adecuada ni la estabilidad del procesamiento. Los polímeros cuaternizados alquilatados , tal como un hidroxicelulosa esteardimonio, se han usado para estabilizar los liposomas tipo lecitina que contienen ingredientes activos que son ácidos . Cadenas de amino alquilo relativamente largas, tal como estearilamina, también han sido usadas para estabilizar liposomas pero estas largas cadenas cargadas de aminos alquilo tienden a ser tóxicas a niveles elevados por lo que las hace menos deseables para aplicaciones farmacéuticas.

Otras técnicas utilizadas para estabilizar los liposomas constan de estrategias de liofilización o secado por aspersión. Estos pasos aumentan la complejidad de elaboración y requieren la reconstitución de los liposomas antes de ser administrados a los pacientes. La reconstitución no es deseable para productos que en última instancia pueden ser utilizados en un escenario de paciente ambulatorio.

Un área específica en la que puede ser apropiada para el suministro de liposoma es en productos farmacéuticos inhalados . Muchos fármacos inhalados se suministran por medio de una solución acuosa que es liberada por un dispositivo capaz de generar gotas de aerosol acuosas . Los requerimientos regulatorios para productos farmacéuticos inhalados requieren que los productos se proporcionen como formulas estériles. Anteriormente, las estrategias para la esterilización de formulas de liposomas se concentraba en la filtración estéril o inclusión de preservativos.

Las formulas liposomales terapéuticas de suministro parenteral (iv, im, se) o rutas de inhalación (pulmonar o nasal) deben ser preparaciones estériles. Sin embargo históricamente se ha observado que los liposomas son inestables ante las difíciles condiciones de autoclavado que llevan a la aglomeración fusión y gelificación de los liposomas de manera muy similar a la que se observa durante el almacenamiento, tanto en el cambio del tamaño de los liposomas como en el tamaño de la distribución hidrólisis/oxidación de lípidos, la degradación química y la liberación no deseada del fármaco encapsulado, por ejemplo tal como se describe en la página 11, líneas 6-10 de WO 2004/00246.

En el pasado ha habido varios grupos que han intentado tratar los problemas de estabilidad asociados al autoclaveado y los compuestos de liposoma. Por ejemplo La patente de Estados Unidos de América No. 5,554,382 y la patente de Estados Unidos de América No. 5,776,486 ambas de las cuales están relacionadas a los métodos para la manufactura estéril de liposomas, muestra que los liposomas son difíciles de esterilizar y que la esterilidad se logra al esterilizar independientemente las partes que los componen - lípidos, amortiguadores, fármacos y agua mediante autoclave o filtración y después mezclarlos en un entorno estéril. Las Patentes muestran que la esterilización por calor del producto terminado no es posible ya que al calentar los liposomas se causa un daño irreparable a los liposomas .

La Patente de los Estados Unidos de América No. 5,542,935 muestra que la esterilización por calor de los productos con liposomas terminados no es posible debido al daño irreparable que causa a los liposomas pero muestra que las suspensiones lipidas multilaminares llenadas con precursores gaseosos pueden ser autoclaveadas . El autoclaveado no cambió el tamaño de las partículas lipidas gaseosas .

La Patente de los Estados Unidos de América No. 5,770,222, la Patente de los Estados Unidos de América No. 6,071,495 y la Patente de los Estados Unidos de América No. 6,479,034 también muestran el autoclaveado de liposomas precursores - por ejemplo sin una carga útil del fármaco.

La Patente de los Estados Unidos de América No. 5,834,025 estipula que los liposomas basados en éster no pueden ser autoclaveados y también divulga que los liposomas elaborados con lípidos éter obtenidos de la arqueobacteria pueden autoclavearse . La seguridad de los liposomas basados en éster, por ejemplo fosfatidilcolina, está bien establecida mientras que se desconoce el perfil de toxicidad de lípidos éter.

La Patente de los Estados Unidos de América No. 5,230,899 describe el autoclaveado de geles preliposoma que contienen muy poca humedad, esencialmente el agua suficiente para que esté presente en una cantidad de hasta 300 moles en relación a los sólidos . Al igual que la Patente de los Estados Unidos de América No. 6,424,857 describe el autoclaveado de pequeños liposomas vacíos (100 nm diámetro) (por ejemplo sin fármaco) sin cambio reportado en el tamaño de partículas .

La Patente de los Estados Unidos de América No. 5,676,928 describe el autoclaveado de liposomas mutilaminares que han sido estabilizados mediante la inclusión de fosfolípidos cargados . La invención es para un compuesto de diagnóstico que consta de por lo menos un solo agente de contraste de imagen.

Por lo general el oficio anterior muestra una forma de usar el calor como paso de esterilización final de una preparación liposomal terminada que contiene fármaco, y no muestra o sugiere una mejora en la fase de estabilidad al concluir la esterilización final de los liposomas .

Por consiguiente, la esterilidad y la pirogenicidad de las preparaciones liposomales por lo general ha sido limitada al uso de filtración a través de filtros de 0.2 micrones para las preparaciones que contienen liposomas menores a 0.2 micrones de diámetro o la aplicación de condiciones asépticas para la manufactura de liposomas más grandes . La irradiación gamma es considerada como inaceptable debido a la degradación inaceptable de la dispersión de liposomas acuosos. (Ver, por ejemplo, Daan Crommelin, Liposomas como Formas de Dosificación Farmacéuticas -Enciclopedia de Tecnología Farmacéutica, Vol. 9, página 13) .

Por lo tanto, la filtración estéril es una opción sólo si los liposomas son lo suficientemente chicos para pasar a través de un sistema de filtro de 0.2 micrones . Si el objetivo de las formulaciones de liposoma es aumentar el tiempo de paso de un fármaco en un determinado sitio de acción, son deseables los liposomas muítilaminares grandes . Los liposomas de 1 a 5 micrones son adecuados para el suministro pulmonar, pero obviamente no son adecuados para la filtración estéril final .

En el pasado, se han agregado preservativos y agentes bacterioestáticos a los productos para inhalación pulmonar. Al incluir las formulas broncodilatadoras, muchos de estos preservativos han probado inducir la constricción pulmonar y contrarrestar los efectos benéficos del broncodilatador . Por consiguiente, el añadir los preservativos a las formulas de liposomas pulmonares solo deberá realizarse con suma precaución y no se considera deseable.

Otra área específica en la que el suministro de liposomas puede ser apropiado es en la liberación sostenida de compuestos de uno o más ingredientes activos, tal como aquellos de las formulaciones divulgadas en la patente de Reexpedición de Estados Unidos de América No. RE38,407 de Delex Therapeutics , Inc. Dichos compuestos pueden permitir el rápido inicio del fármaco, de una parte que no esté encapsulada, seguido por la liberación sostenida de la liberación continúa del agente activo encapsulado en el liposoma. Los requerimientos regulatorios para dichos compuestos también requieren que el porcentaje de fármaco encapsulado sea resistente al paso del tiempo y que las formulaciones sean químicamente y de fase estables con el paso del tiempo .

Existe por lo tanto una necesidad general para desarrollar las formulaciones de liposoma con estabilidad mejorada, en específico la preparación de formulaciones de liposoma estéril y estable de los fármacos que son de fase estable y químicamente estables y por lo tanto adecuadas para uso farmacéutico .

RESUMEN DE LA INVENCIÓN Incluido en el alcance de la invención están los compuestos de liposoma estable y los procesos para su preparación que son de fase estable . Una preparación de liposoma estable para el propósito de la presente invención se considera una en la cual los liposomas dispersos substancialmente retienen su carácter inicial y permanecen substancialmente y uniformemente distribuidos durante la fase continua para alcanzar la vida de anaquel deseada. Los compuestos de liposoma estable de la presente invención no presentan cambios de fase, sedimentación, ni contaminación microbiana cuando se esterilizan por autoclaveado . Los compuestos de la presente invención muestran la degradación química debida a la oxidación o hidrólisis de los liposomas constituyentes o del fármaco encapsulado.

Por lo tanto, en un aspecto de la presente invención se proporciona una compuesto de liposoma estable para transportar un fármaco, el compuesto consta de: a) un medio acuoso adecuado; b) liposomas formados de un fosfolípido apropiado; c) por lo menos un fármaco que por lo menos pueda ser parcialmente encapsulado en los liposomas, y siendo seleccionado de: (i) una amina lipofílica y un ácido farmacéuticamente aceptable, en el cual el ácido farmacéuticamente aceptable seleccionado de un ácido orgánico o inorgánico y (ii) una sal ácida orgánica farmacéuticamente aceptable consta de un ácido orgánico farmacéuticamente aceptable de una amina lipofílica, y opcionalmente un ácido farmacéuticamente aceptable que consta de un ácido orgánico aceptable; en el cual la cantidad de ácido farmacéuticamente aceptable presente en el compuesto sea tal que el pH de los compuestos de liposoma sea menor o aproximadamente igual al pKa del grupo amino de la amina lipofílica activa farmacéuticamente. En algunas realizaciones de la presente invención, los compuestos han sido autoclaveados , de ese modo proporcionando ambos compuestos de liposoma estéril y estable.

En un aspecto de los compuestos de la presente invención el pH de los compuestos es casi igual al p a del grupo amino de la amina lipofílica, y un 50% de amina lipofílica es protonatada en el compuesto. Además en otro aspecto, el pH de los compuestos de liposoma es menor al ?¾ del grupo amino de amina lipofílica, y una porción considerable de la amina lipofílica es protonatada en el compuesto, o el compuesto tiene un pH de 1 a unas 2 unidades de pH por debajo del Pka de grupo de amino de la amina lipofílica. En otro aspecto del presente invento, el pH del compuesto está entre alrededor de 4 y el pKa del grupo amino de la amina lipofílica. En algunas realizaciones, el pH está entre un 4 a un 7, o entre un 4.5 y un 6, o alternativamente entre un 5 y un 6.

Además en otro aspecto de la presente invención, los compuestos también constan de colesterol y/o etanol. Además en otro aspecto del presente invento, el etanol está presente entre un 2.5% y un 10% del total de volumen del compuesto de liposoma.

Además en otro aspecto de la presente invención, el fosfolípido de los compuestos de liposoma de la presente invención tiene una carga neutral neta sobre el pH fisiológico. En otro aspecto de la presente invención, los fosfolípidos constan de fosfatidilcolina . Aún más en otro aspecto de la invención, el medio acuoso del compuesto consta de agua.

Aún más en otro aspecto de la presente invención, el fármaco se usa en ambos, se encapsula en las partículas del liposoma y también está libre en el medio acuoso en el compuesto de la presente invención. En algunas realizaciones, el porcentaje del fármaco encapsulado en el liposoma consta de un 50% hasta un 90% de la cantidad total del fármaco presente en los compuestos de liposoma, o de un 60% hasta un 80% de la cantidad total del fármaco presente en los compuestos de liposoma, o un 50% hasta un 75% de la cantidad total del fármaco presente en el compuesto de liposoma .

Aún más en otro aspecto de la presente invención, el ácido farmacéuticamente aceptable del compuesto de liposoma consta de un ácido orgánico, o un ácido inorgánico. Aún más en otro aspecto de la presente invención las partículas de liposoma del compuesto de liposoma tienen un diámetro de masa promedio (d(0.5) menor a unos 10 micrones . En algunas realizaciones, el diámetro mediano de masa es menor a unos 6 micrones, o unos 4 micrones, o unos 2 micrones.

Aún más en otro aspecto de la presente invención, los compuestos de liposoma autoclaveados son físicamente y químicamente estables por lo menos como un año, o 18 meses o dos años a una temperatura superior al punto de congelación de los compuestos de liposoma.

Aún más en otro aspecto de la presente invención, la amina lipofílica consta de amina lipofílica que tiene un P-valor log mayor a un 1.0 de pH fisiológico. En algunas realizaciones, la amina lipofílica tiene un P-valor log de entre unos 2 y unos de pH fisiológico.

En un aspecto de la presente invención, algunas realizaciones de los compuestos de liposoma son físicamente y químicamente estables al autoclaveado, incluyendo autoclaveado bajo una atmósfera inerte, como por ejemplo autoclaveado a unos 121°C durante un mínimo de unos 15 minutos bajo una atmósfera inerte .

Aún más en otro aspecto de la presente invención la proporción del fármaco para el fosfolípido presente en los compuestos es de entre 1:100 y 1:10 mol/mol. La cantidad de fosfolípidos presente también puede ser de unos 1.5 mM o más en los compuestos de la presente invención.

En compuestos de la presente invención, el porcentaje de medicamento encapsulado en el compuesto de liposoma puede ser substancialmente estable durante un periodo de por lo menos 20 meses. También los compuestos de la presente invención pueden ser substancialmente químicamente estables durante un periodo de por lo menos 20 meses.

En compuestos de la presente invención, el porcentaje de medicamento encapsulado en el compuesto de liposoma puede ser substancialmente estable durante un periodo de por lo menos 20 meses. También los compuestos de la presente invención pueden ser substancialmente químicamente estables durante un periodo de por lo menos 20 meses después del autoclaveado, en donde la cantidad de fosfolípidos no disminuye debido a la hidrólisis química u oxidación en más del 10% (peso/peso) o más del 5% durante un periodo de por lo menos 20 meses. En algunos compuestos autoclaveados, la cantidad de fosfolípidos no disminuye por más de 3 mg/ml del compuesto liposomal durante un periodo de por lo menos 20 meses. De igual manera, que en los compuestos autoclaveados de la presente invención, la amina lipofílica no se degrada químicamente por mas de 5% (peso/peso) , o 2% durante un periodo de por lo menos 20 meses.

Aún más en otro aspecto de la presente invención se proporciona estériles y estables los compuestos para suministrar un fármaco, los compuestos constan: (a) un medio acuoso apropiado; (b) liposomas formados de fosfolípidos apropiado; (c) por lo menos un fármaco estando por lo menos parcialmente encapsulado en los liposomas y siendo seleccionado de: (i) amina lipofílica y un ácido farmacéuticamente aceptable, en dónde el ácido farmacéuticamente aceptable se selecciona de un ácido orgánico o inorgánico, y (ii) una sal acida orgánica farmacéuticamente aceptable de una amina lipofílica, y opcionalmente un ácido farmacéuticamente aceptable que conste de ion ácido orgánico aceptable farmacéuticamente; en donde el compuesto es autoclaveado, en algunas realizaciones bajo una atmósfera inerte, y en donde la cantidad de ácido farmacéuticamente aceptable presente en el compuesto es tal que el pH del compuesto de liposoma es menor que o aproximadamente igual a el pKa del grupo amino de la amina lipofílica activa farmacéuticamente .

Aún en otro aspecto de la presente invención se estipula un método para producir los compuestos de liposoma estable de la presente invención para el suministro de un fármaco, el método consta de los pasos de: (a) proporcionar un medio acuoso apropiado; (b) proporcionar un fosfolípido apropiado; (c) proporcionar por lo menos un fármaco que sea capaz de por lo menos ser parcialmente encapsulado en los liposomas, y ser seleccionado de (i) una amina lipofílica y un ácido farmacéuticamente aceptable, en donde el ácido farmacéuticamente aceptable es seleccionado de un ácido orgánico o inorgánico (ii) una sal acida orgánica farmacéuticamente aceptable de una amina lipofílica, y opcionalmente un ácido farmacéuticamente aceptable que conste de un ácido orgánico armacéuticamente aceptable; en donde el ácido farmacéuticamente aceptable presente en el compuesto sea tal que el pH del compuesto de liposoma sea menor a o aproximadamente igual al pKa del grupo amino de la amina lipofílica activa farmacéuticamente; (d) combinando el medio acuoso, el fosfolípido y el fármaco para formar el compuesto de liposoma, y (e) opcionalmente el autoclaveado de el dicho compuesto. En un aspecto importante de la presente invención, el método incluye el paso de autoclaveado .

Aún más en otro aspecto de la presente invención se proporcionan los compuestos de liposoma estéril y estable de la presente invención, exhibiendo una o más de las siguientes características durante un periodo de por lo menos un año después del autoclaveado y almacenamiento a una temperatura por arriba del punto de congelación: (i) un cambio en el porcentaje de encapsulación de no más de un 5%: (ii) un cambio en el contenido fosfolípido de no más de un 10% por peso; (iii) un cambio en el contenido de amina lipofílica debido a la hidrólisis química y/o oxidación de no más de un 5% por peso; (iv) una falta de formación de agregados visibles; y (v) un cambio en el tamaño del diámetro de la partícula mediana de no más de un 10% según ase determine ópticamente . Los métodos para determinar estos parámetros se detallan abajo.

Aún más en otro aspecto de la presente invención se proporcionan los compuestos de liposoma estable cuando se preparan por los métodos revelados aquí .

Aún más en otro aspecto de la presente invención se estipula un método para el aumento de la estabilidad de los compuestos de liposoma, dicho método consta de los siguiente pasos: (a) proporcionar un medio acuoso apropiado; (b) proporcionar un fosfolípido apropiado; (c) proporcionar por lo menos ion fármaco que por lo menos pueda ser parcialmente encapsulado en los liposomas, y ser seleccionado de: (i) una amina lipofílica y un ácido farmacéuticamente aceptable, en donde el ácido farmacéuticamente aceptable es seleccionado de un ácido orgánico e inorgánico, y (ii) una sal ácida orgánica de una amina lipofílica y opcionalmente un ácido farmacéuticamente aceptable que conste de un ácido orgánico farmacéuticamente aceptable; en donde la cantidad de ácido farmacéuticamente aceptable presente en el compuesto sea tal que el pH del compuesto de liposoma sea menor a o aproximadamente igual al ?¾ del grupo amino de la amina lipofílica activa farmacéuticamente; (d) combinando el medio acuoso, fosfolípido y el fármaco para formar el compuesto de liposoma y (e) autoclaveando el dicho compuesto de liposoma a condiciones efectivas para esterilizar los dichos compuestos, por consiguiente logrando obtener compuestos con estabilidad relativa aumentada en relación a la estabilidad que tenían antes del autoclavaeado .

Aún más en otro aspecto de la presente invención se estipula un método para identificar un compuesto de la fase estable de liposoma, el método consta de los siguientes pasos: (a) proporcionar un compuesto de liposoma que contenga un fármaco, fosfolípido, solución acuosa, y opcionalmente etanol y esterol; (b) ópticamente determinando el diámetro mediano de masa d(0.5) del compuesto de liposoma; (c) centrifugar el compuesto de liposoma a una fuerza-g de entre unos 1000 g y unos 5000 g, a unos 4o C durante unas 2 horas; (d) ópticamente determinar el diámetro medio de a masa d(0.5) de cualesquier porción líquida restante del compuesto de la solución de liposoma después del paso de centrifugado (c) ; y (e) calcular la proporción de diámetro mediano de masa d(0.5) el valor de la solución después del centrifugado con relación a la de esa solución antes del centrifugado; en donde la fase estable del compuesto de liposoma se identifica tal como si el compuesto de liposoma tiene una proporción en el paso (e) de unos 0.6 o mayor, en algunas realizaciones, 0.8 o mayor. En una realización preferida, el compuesto se autoclavea antes del centrifugado.

Los compuestos de la presente invención son particularmente apropiados para el suministro al pulmón de los productos farmacéuticos . En algunas de las realizaciones de la invención, el compuesto además consta de por lo menos un colesterol y etanol. En algunos de las realizaciones de la invención, los compuestos son estables para autoclavear.

Una de las ventajas de la presente invención es que los compuestos son estables y no se fusionan, separan, precipitan, aglomeran o gelifican después del almacenamiento. Estos por lo tanto permanecen como compuestos homogéneos por lo menos una semana y con frecuencia mucho más tiempo, en algunas realizaciones, por más de 12 meses, o más de 18 meses, o incluso más de dos años. La vida de anaquel de dichos compuestos por lo tanto aumenta. Además, este permite que las dosis unitarias de un lote más grande se repartan uniformemente y no requiere la reconstitución del compuesto antes del suministro.

La fase de estabilidad prolongada es una de las características de la fórmula que permite una fórmula farmacéuticamente relevante. Si la fórmula es fase estable por periodos de tiempo prolongados brinda numerosas ventajas. La fase estable de los compuestos de liposoma de la presente invención hace que el proceso final de llenado de las preparaciones finales farmacéuticas sea más robusto, y el llenado final de las formulaciones farmacéuticas no esté limitado por preocupaciones de que el producto se fija o se separa antes o durante el llenado. También la fase estable de los compuestos de liposomas de la presente invención proporciona uniformidad en el contenido entre los diferentes viales individuales llenados con el mismo lote. También, el muestreo individual del contenedor farmacéutico final que contiene la fase estable de las formulaciones farmacéuticas de la presente invención será más uniforme entre cada una de las dosis, por lo tanto brinda una seguridad mejorada para el paciente, sin que se requiera que el paciente agite bien el compuesto antes de usarlo. Esto puede ser particularmente ventajoso para los pacientes adultos mayores. Si la fase de los compuestos del fármaco encapsulado en el liposoma se separa, existe la posibilidad de que el paciente pueda recibir una dosis demasiado alta si la muestra se toma de una capa más densa o del sedimento de la formulación, o que el paciente pueda estar recibiendo una dosis más baja si la muestra se toma de una capa menos densa, o el paciente puede recibir una dosis inefectiva si la muestra se toma de un sobrante de líquido claro. La presente invención proporciona compuestos y métodos que permiten confiar en la reproducibilidad entre cada una de las dosis .

Los compuestos de la presente invención no requieren de aditivos químicos para ser estable. Los liposomas de la invención constan de una amina lipofílica y un ácido, como un ácido orgánico, donde el ácido está presente en una concentración tal que el pH del compuesto de liposoma es más o menos igual o inferior al valor pKa del grupo amino de la amina lipofílica, siempre que el pH de la solución no comprometa la estabilidad química de los compuestos de liposoma, típicamente vistos por abajo de un pH . Estando a un pH que es más o menos a o menor al p a garantiza que por lo menos una porción substancial de la amina lipofílica esté positivamente cargada en los compuestos de liposoma. En un aspecto de la invención, el fármaco consta de una amina lipofílica y un ácido orgánico como un contraión, por ejemplo citrato de fentanil. Esto puede lograrse en los compuestos al combinar base libre de fentanil disuelto en fase etanol, con ácido cítrico en una fase acuosa, y las fases junto con los otros componentes se combinan entre sí para obtener citrato de fentanil dentro del significado de la presente invención. Alternativamente, por ejemplo, la forma de sal del fármaco fentanil, tal como el citrato de fentanil, puede ser comercialmente adquirido como se usa en la preparación de los compuestos de liposoma. En algunos casos, también puede ser adquirido para agregar cantidades adicionales de un ácido, tal como el ácido cítrico, para los compuestos, para ajustar el pH de los compuestos de liposoma, para tolerar un pH que es casi igual a o menor al ??¾ del grupo amino de la amina lipofílica, siempre que el pH de las soluciones de liposoma no estén por debajo de un pH 4, donde típicamente se encuentra la estabilidad química de los compuestos . La habilidad para estabilizar liposomas sin aditivos químicos adicionales es particularmente deseable para compuestos destinados para ser administrados a un paciente ya que elimina el riesgo de efectos secundarios resultantes del aditivo químico.

En las realizaciones de la presente invención, los compuestos de liposoma son más estables después de autoclaveado. La habilidad de autoclaveado de los compuestos de las invenciones estipula un método fácil de esterilizar las fórmulas. A diferencia de la filtración los compuestos de liposoma autoclaveables permitirán liposomas más grandes y por ende una encapsulación más elevada del fármaco. Además la habilidad de autoclavear los compuestos de liposoma pone en evidencia la necesidad de añadir preservativos o agentes bacterioestáticos los cuales por lo general son indeseables, particularmente para formulaciones pulmonares .

De acuerdo a aspectos adicionales de la invención, los compuestos liposomales estables se incluyen en fármacos en sus empaques y en estuches que incluyen un dispositivo para su uso en suministro pulmonar de agentes terapéuticos que puede generar gotitas de aerosol acuoso de los compuestos de liposoma estable .

En otro aspecto de la presente invención esta un compuesto de liposoma estable y un método para la producción del mismo, y uso del mismo, en donde el fosfolípido incluye fosfatidilcolina .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Estas y otras características de la invención se demostrarán mejor en la siguiente descripción detallada, la cual hace referencia a los dibujos anexos: La figura 1 muestra una tabla resumiendo las diferentes compuestos liposomales y los resultados del análisis visual de estabilidad de fase, de ambos procedimientos, antes y después del autoclaveado de los compuestos; La Figura 2 muestra un comparativo de la apariencia de una fase estable de la preparación de liposoma de la presente invención (Figura 2a) con la apariencia de una preparación de liposoma que se separa después de la preparación y el almacenaje (Figura 2b) ; La Figura 3 muestra la fase de estabilidad de liposoma placebo carente de un fármaco amina lipofílica como una función del pH de la formulación (Fig. 3a) ; y el efecto estabilizador de la amina lipofílica en los compuestos como una función de pH (Fig. 3b) ; La Figura 4 muestra una tabla resumiendo las diferentes preparaciones de liposoma, el pH, el tamaño de partícula (d(0.5)) antes y después de autoclaveado, y el índice de la fase de estabilidad antes y después del autoclaveado; La Figura 5 muestra un gráfico ilustrando la relación entre pH después del autoclaveado contra el pH antes del autoclaveado de los compuestos de liposoma de la presente invención; La Figura 6 muestra un gráfico argumentando el % de cambio en fosfatidilcolina contenido después de autoclaveado de varios compuestos de liposoma comparados al contenido de fosfatidilcolina antes del autoclaveado, como una función del pH; La Figura 7 muestra el gráfico argumentando el cambio en la distribución del tamaño de la partícula después del autoclaveado de varios compuestos de liposomas relativos a la distribución del tamaño de la partícula de los compuestos antes del autoclaveado como una función de pH; Las Figuras 8a-8c muestran las fotografías de un compuesto de liposoma inestable, un compuesto de liposoma con una estabilidad intermedia, y un compuesto con liposoma estable de la presente invención, respectivamente; La Figura 9 muestra la fotografía de un compuesto de liposoma que tiene una estabilidad intermedia; La Figura 10 muestra un gráfico argumentando el índice de estabilidad de la fase de los compuestos de fentanxl de la Figura 4, como una función de pH, antes del autoclaveado; La Figura 11 muestra un gráfico argumentando el índice de estabilidad de la fase de los compuestos que contienen fentanxl de la Figura 10, como una función de pH, después del autoclaveado; La Figura 12 muestra como un gráfico argumentando el índice de estabilidad de la fase de los compuestos de liposomas que contienen ondansetron de la Figura 4, como una función del pH, antes del autoclaveado; La Figura 13 muestra un gráfico argumentando el índice de estabilidad de los compuestos de liposoma que contienen ondansetron de la Figura 12, como una función de pH, después de autoclaveado .

La Figura 14 muestra un gráfico argumentando el índice de estabilidad de la fase de los compuestos de liposoma que contienen ondansetron de la Figura 4, como una función del pH, después de autoclaveado, y excluyendo las formulaciones que contienen ácido palmítico como ácido orgánico y formulaciones con 2.4 mmol de ondansetron; La Figura 15 muestra un gráfico argumentando el índice de estabilidad de fase de los compuestos que contienen ondansetron de la Figura 14 como una función del pH, después del autoclaveado; y excluyendo las formulaciones que contienen ácido palmítico como ácido orgánico y formulaciones con 2.4 mmol ondansetron; La Figura 16 muestra un gráfico argumentando la estabilidad de la fase de los compuestos de liposoma que contienen sumatriptan de la Figura 4, como una función del pH, antes del autoclaveado; La Figura 17 muestra un gráfico argumentando el índice de estabilidad de la fase de los compuestos de liposoma que contienen sumatriptan de la Figura 16, como una función del pH, después del autoclaveado; La Figura 18 muestra un gráfico argumentando el índice de estabilidad de la fase de los compuestos de liposoma que contienen proclorperazina de la Figura 4, como una función de pH, antes de autoclaveado; La Figura 19 muestra un gráfico argumentando el índice de estabilidad de la fase de los compuestos de liposoma que contienen proclorperazina de la Figura 18, como una función del pH, después del autoclaveado.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS INCORPORACIONES En la siguiente descripción, se estipulan numerosos detalles específicos para proporcionar un entendimiento detallado de la invención. No obstante, se entiende que la invención puede ser practicada sin estos detalles específicos .

Los métodos de la presente invención se reivindican y describen en la presente como una serie de pasos . Deberá entenderse que estos métodos y los pasos asociados pueden ser desempeñados en cualquier orden lógico. Además, los métodos pueden desempeñarse solos, o conjuntamente con otros procedimientos y tratamientos administrados antes, durante o después de dichos métodos y de los pasos estipulados en la presente sin apartarse del alcance y espíritu de la invención.

Componentes de los Compuestos de Liposoma La presente invención proporciona los compuestos de liposoma que tienen un fármaco incorporado en los liposomas y son estables de fase por un periodo de tiempo prolongado. Los compuestos de liposomas de la presente invención constan de una amina lipofílica y un ácido, tal como un ácido orgánico, donde el ácido está presente en una concentración tal que el pH del compuesto de liposoma es casi igual o menor al valor Ka del grupo amino de la amina lipofílica, siempre que el pH de la solución final no comprometa la estabilidad química de los compuestos de liposoma, típicamente vistas inferiores a un pH . Estando a un pH que es casi igual a o mal p a garantiza que por lo menos una porción substancial de la amina lipofílica está cargada positivamente en los compuestos de liposoma. En algunas realizaciones de la invención, el fármaco puede ser una sal de amina lipofílica y un ácido aceptable, de preferencia un ácido orgánico. Los compuestos según la invención son estables al almacenamiento por lo menos una semana y en la mayoría de los casos durante mucho más tiempo, de preferencia un año o más.

En algunas realizaciones, los fármacos constan de una amina lipofílica y un ácido orgánico como un contraión, por ejemplo, citrato de fentanil . Esto puede preverse en los compuestos al combinar fentanil de base libre disuelto en una fase de etanol, con ácido cítrico en una fase acuosa, y las fases junto con otros componentes se combinan entre sí para proporcionar un citrato de fentanil dentro del significado de la presente invención. Alternativamente, por ejemplo, la forma de sal del fármaco fentanil, tal como citrato de fentanil, puede ser adquirido comercialmente según se usa en la preparación de los compuestos de liposoma. En algunos casos, puede además requerirse que se agreguen cantidades adicionales de un ácido, tal como el ácido cítrico, a los compuestos para poder ajustar el pH de los compuestos de liposomas, para permitirse un pH que sea casi igual a o inferior al p a del grupo amino de la amina lipofílica, siempre y cuando el pH de las soluciones de liposoma no sean menores a un pH4, donde la estabilidad química de los compuestos puede estar incluida.

Los compuestos de liposomas de la presente invención contienen liposomas formados por bicapas cerradas de fosfolípidos . Los fosfolípidos adecuados para formar liposomas cuyo propósito es transportar a los agentes farmacéuticos conocidos en el oficio e incluir, pero no limitados a, ácido fosfatídico (PA) y fosfatidil glicerol (PG) , fosfatidilcolina (PC) , fosfatidiletanolamina (PE) , fosfatidilinositol (PI) fosfatidilserina (PS) , plasmalógenos , y esfingomielina (SM) . Los lípidos utilizados para formar los compuestos de liposoma de la presente invención pueden estar o cargados o neutrales . En una realización, se prefieren los liposomas formados de fosfatidilcolina ya que por lo general son más benignos cuando se administran a un paciente y los fármacos con frecuencia se incorporan mejor a los fosfolípidos neutrales. En otra realización, los liposomas cargados positivos son deseables.

Esteróles tal como el colesterol usualmente se agregan a los compuestos de liposomas para aumentar la estabilidad de los liposomas y promover la incorporación de los liposomas en un entorno viviente . El término "colesterol" tiene como propósito el de abarcar los derivados de colesterol tal como: (3-hidroxi-5, 6-colesteno) y análogos relacionados, tal como 3-amino-5, 6-colesteno, colestano, colestanol y análogos relacionados, tal como 3-hidroxi-colestano; y derivados de colesterol cargados tal como colesteril beta-alanina y colesteril hemisuccinato. En algunas realizaciones, el colesterol está presente de un 0% a un 30% del peso de los fosfolípidos presentes. En otras realizaciones, el colesterol está presente hasta en un 10% del peso del fosfolípido.

Los fármacos de la presente invención son agentes que pueden ser administrados a pacientes con propósitos terapéuticos. Los agentes de la presente invención se seleccionan de un grupo que consta de amina lipofílicas activas farmacéuticamente y sus respectivas sales . Las aminas lipofílicas de la presente invención se refieren a las moléculas que constan de un solvente orgánico soluble (fracción lipofílico) así como una fracción amina que lleva una carga positiva al pH fisiológico. Las aminas lipofílicas de la presente invención tienen un grupo amino cargado positivamente sobre el pH rango de un 3 a un 8.

Los agentes farmacéuticos apropiados incluyen, pero no están limitados a los siguientes : Acebutolol Dihidrocodeina Isoproterenol Nalmefeno Propafenona Albuterol Dihidroergotamina Isoxsuprina Naloxona Propoxifena Alfentanil Diltiazem etatnina Naltrexona Propanolol Alosetrona Difenoxina Labetalol Naratriptán Protriptilina Amitriptilina Disopiramida Leuprolida Nefazadona Pseudoefedrina Anileridina Dubotamina Levamisol Kifedipino Quetiapina Atenolol Dolasetrona Lidocaina Neropinefrina Quinidina Atropina Donepezilo Lisinoprilo Nortriptilina Quinina Azatadina Dopamina Lorazepam Ondansetrón Raloxifena Baclofeno Doxapramo Levorfanol Orfenadrina Reserpina Benztropina Doxepina Mafenida Oxprenolol Rimantadina Bextolol Doxilamina Maprotilina Oxibutinina Ritodrina Biperideno Droperidol Mazindol Oxicodona Ropivacaina Brimonidina Enalaprilo Meclizina Oximorfona Escopolamina Bromocript na Efedrina elfalam Oxitetraciclina Selegilina Bupivacaína Epinefrina eperidina Palonosetrona Sotalol Buprenorfina Ergoloid Mepivacaina Penbutolol Sufentanilo Butenafina Ergotamina Mesoridazina Pentazocrine Sumatriptán Butorfanol Estazolam Metaproterenol Pergolida Tacrina Cafeína Fenoldapam Metaraminol Perfenazina Tamoxifeno Carteolol Fentanil Metaciclina fenazopiridina Terbutalino Cefepina Fexofenadina Metadona fendimetrazina Tetracliclina Cefalexina Flecainida Metotrimeprazina Fenelz na Tietilperazina Cloroprocaina Fluoxetina Metilamfetamina Fenoxibenzamina Tioridazina Clorfeniramina Flufenazina etilclotiazida Fentermina Tiotixeno Cloroquinina Flurazepam Metildopa Fentolamina Tocainida Ciprofloxacino Formoterol Metilergonovina Fenilefrina Tolazolina Citalopram Glipizida Metilfenidato Pimozida Trandolap i1 Clomifeno Haloperidol Metilsergida Pinolol Trazodona Clonidina Hidralazina Metoclopramida Piroxicam Trifluoperazina Codeina Hidrocodona Metolazona Prazosin Triflupromazina Ciclobenzaprina Hidromorfona Metoprolol Primaquina Trihexifenidil Demeclociclina Hidroxicloroquina Mexiletina Procainamida Trimeprazina Desipramina Hidroxicina Midazolam Procarbazina Trimetobenzamida Desmopresina Hiosexamina Minociclina Proclorperazina Verapamilo Destroamfetamina Imipramina Moricizina Prociclidina Zolmitriptán Diazepam Indapamida Morfina Promazina Dietilpropión Isoetarina Moxifloxacina Prometazina Las aminas lipofílicas apropiadas de la presente invención consta de aminas lipofílica que tienen un P-valor log mayor a un 1.0 (por ejemplo, un coeficiente de partición octanol/agua de mayor que 10) , de preferencia entre unos 2 y unos 5 al pH fisiológico. Las aminas lipofílicas de las realizaciones de la presente invención incluye fentanil el cual se ha reportado que tiene un P-valor log de 4.25, ondansetron el cual tiene un P-valor log de 2.37, sumatriptán que tienen un P-valor log de 1.05, y proclorperazina el cual tiene un P-valor log de 3.82.

El ácido a ser utilizado en esta presente invención es cualquier ácido farmacéuticamente aceptable. Los ácidos apropiados incluyen ácidos orgánicos e inorgánicos e incluye aquellos ácidos que retienen la efectividad biológica y las propiedades del fármaco y los cuales no son biológicamente o de otra manera indeseables. Los ejemplos incluyen pero no se limitan a, ácido acético, ácido ascórbico, ácido aspártico, ácido benzoico, ácido butírico, ácido carbónico, ácido capróico, ácido cítrico, ácido cinámico, ácido decanóico, ácido enántico, ácido fumárico, ácido furoico, ácido glucónico, ácido glucurónico, ácido glutámico, ácido glicérico, ácido hipúrico, ácido metanesulfónico, ácido mirístico, ácido oleico, ácido oxálico, ácido palmítico, ácido piválico, ácido picolínico, ácido fosfórico, ácido propiónico, ácido succínico, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido sulfúrico, ácido tartárico, ácido undecílico y ácido valérico.

Los compuestos de liposoma utilizados para transportar un fármaco de preferencia tienen un pH fisiológicamente tolerable por el paciente. Por ejemplo, para compuestos inhalados, el pH del tejido pulmonar se reporta que es de 6.8 a 6.9. El pH de los compuestos de liposoma de la presente invención típicamente tiene un valor de entre pH4 y alrededor de un pH8. En la realización, tal como en una realización en donde los compuestos son autoclaveados , el pH de los compuestos de liposoma de la presente invención es entre un pH4 y un pH7. En otra realización, tal como en las que los compuestos están autoclaveados, el pH de los compuestos de liposoma de la presente invención es de entre un pH5 y un pH6. Aun cuando los compuestos de la presente invención pueden ser de fase estable a valores pH menores a un 4, dichas formulaciones no son típicamente químicamente estables, y la oxidación y/o la hidrólisis de los fosfolípidos, entre otras reacciones, pueden ocurrir con valores pH menores con el paso del tiempo.

En la presente invención, el pH del compuesto es menor a o aproximadamente igual al p a del grupo amino del ingrediente activo de amina lipofílica. En una realización, el pH de la solución es de entre 1 a 2 unidades pH por debajo del pKa estipula que una mayor porción del grupo amino de la amina lipofílica está cargada positivamente .

El etanol usualmente forma parte de los compuestos de liposoma, particularmente donde el etanol es usado para preparar los liposomas por métodos de rutina. Existen alternativas disponibles, pero están limitadas a aquellas que no poseen toxicidades no deseadas o que no se conozcan como irritantes a la inhalación. Las alternativas apropiadas son glicoles y gliceroles que cumplen con dicho requerimiento. El contenido de etanol puede estar presente en compuestos de liposoma de la presente invención. En una realización, la concentración de etanol está entre un 2.5% y 10% del volumen total de los compuestos de liposoma. Los compuestos con etanol superiores al 10% del volumen también están dentro del contexto de la presente invención, aunque conforme a las concentraciones que se aproximen o excedan el 15% del volumen total, en tales como a un 20%, la calidad de las partículas de liposomas formadas empieza a comprometerse .

El medio acuoso de la presente invención puede ser cualquier solución acuosa aceptable fisiológicamente tal como los buffers o el agua los cuales no interfieren con la formación de los compuestos de liposoma suministrados. En una realización, el buffer consta de un buffer con una fuerza iónica baja. Se ha demostrado que para buffers, un buffer de fuerza iónica suficientemente baja deberá ser usado de manera tal a que no afecte la eficiencia de los liposomas formados para encapsular el fármaco. En una realización preferida, la solución acuosa es agua .

En algunos casos, se agregan excipientes adicionales a los compuestos de liposoma de la presente invención, tal como un compuesto antioxidante, en algunas realizaciones hasta por 1 o 2% de los fosfolípidos (peso/peso) , típicamente representando el 0.01 - 0.1% del volumen total del compuesto. Componentes adicionales que pueden ser agregados a los compuestos de la presente invención incluyen sólo aquellos que no afectan la estabilidad de la fase de los compuestos de liposoma, y por lo tanto no comprometen la robustez de los compuestos. En una realización preferida, los compuestos consisten esencialmente de un fármaco incluyendo un ácido, un fosfolípido, una solución acuosa, y opcionalmente etanol y un esterol.

Preparación de los compuestos de Liposoma Será entendido por aquellas personas capacitadas en el oficio que las suspensiones de liposoma de la invención pueden ser preparadas por métodos estándar para preparar y dimensionar los liposomas . Estos incluyen hidratación de películas lípidas, inyección de solvente, y evaporación de fase-inversa .

Los compuestos de liposoma en los siguientes ejemplos específicos fueron preparados mezclando la fase etanólica con una fase acuosa. La fase etanólica contiene etanol, fármaco, fosfatidilcolina y colesterol . El fármaco fue seleccionado de un grupo fármacos que consta de aminas lipofílicas . La fase acuosa incluyó agua para inyección y un contra-ion negativo para la amina provista por un ácido. En casos donde el fármaco sea una sal de amina lipofílica y un ácido, la fase acuosa incluyó agua para inyección. En algunas realizaciones, el ácido incluye un ácido hidrofóbico, y esto puede ser agregado a la fase etanólica, lo cual es subsecuentemente mezclado con la fase acuosa . Esto puede ser útil en la preparación de compuestos de liposoma de aminas lipofílicas con un ácido deseado, donde la amina no está disponible como forma de sal del mismo.

La fase acuosa podría constar de una cantidad adicional de ácido que no afecte la estabilidad de la fase. Ambas fases antes de mezclarse se calientan a una temperatura de unos 56 a 60 grados centígrados. Para preparaciones de pequeña escala menores a 1 litro en volumen, las dos fases se mezclan y se colocan en una batidora medioambiental a 75-80 RP .

Las vesículas liposomales se forman y la mezcla se bate durante 10 minutos adicionales a 56-60 grados centígrados. Entonces la mezcla se retira de la batidora y se deja enfriar a temperatura ambiente aproximadamente durante dos horas . Para preparaciones a mayor escala los compuestos de liposoma y la fase etanólica se agregan a una fase acuosa batida en un reactor equipado con características de control de temperatura. La mezcla se bate durante 10 minutos a unos 56-60° C, y después se enfría a temperatura ambiente por un periodo de dos horas . Los compuestos estables están caracterizados en que éstas permanecen homogéneas y no hay separación de fase al almacenarlo durante un periodo de una semana. En general, se ha encontrado que los reactivos pueden ser mezclados juntos o añadidos juntos en cualquier orden siempre y cuando permitan el compuesto de liposoma.

En algunas realizaciones, se ha encontrado que la proporción de agregación de fase de etanol a la fase acuosa tiene un efecto en la distribución del tamaño de partículas de los liposomas formados, particularmente cuando grandes volúmenes de lotes de liposoma se preparen en donde no sea práctico agregar la fase acuosa a la fase etanol . En algunas realizaciones se ha encontrado que el tamaño de las partículas de liposomas disminuye conforme la tasa de etanol adicionada al agua disminuye. Deberá entenderse que los compuestos de liposomas de la presente invención incluyen aquellos con una variedad de distribuciones de tamaño de partículas .

Una variedad de formulaciones han sido preparadas utilizando diferentes aminas lipofílicas, ácidos o sales de las mismas, como se expone en las Figuras 1 y 4 para ilustrar la presente invención.

Una variedad de tamaños de lotes han sido preparados utilizando este método, incluyendo lotes teniendo un volumen total del compuesto de liposoma tan chico como 30 mi, así como lotes más grandes de 1, 2.5, 5 y 15 litros según se describe el Ejemplo 4, abajo. Se ha encontrado que los compuestos de liposomas preparados en ambos volúmenes chicos y grandes son estables en el tiempo. Los estudios de compuestos de liposoma que se efectuaron en lotes de entre 1 y 15 litros han demostrado tener química comparable y estabilidad física, diámetro mediano de masa de las partículas de liposoma, y porcentaje de encapsulación de ingrediente activo comparable .

El compuesto farmacéutico de esta invención puede ser administrado de varias maneras, incluyendo vía de inhalación mediante el sistema pulmonar, tópicamente, parentalmente y similares . Los compuestos pueden incluir formas de dosificación oftálmica, y formas de dosificación inyectable, y puede incluir productos médicos de diagnóstico.

El termino "parenteral" como se usa en la presente y según se entiende por personas calificadas en el oficio (por ejemplo, ver Stedman's Medical Dictionary, 25th edition, 1990 (Williams & Wilkins) ) tiene la intención de incluir cualquier otra ruta que mediante el tracto gastrointestinal, en particular refiriéndose a la introducción de substancias en un organismo por inyección intravenosa, subcutánea, intramuscular, o intramedularmente .

El compuesto farmacéutico puede ser en forma de una preparación inestable estéril, por ejemplo, como una acuosa inyectable estéril, o suspensión oleaginosa o producto de inhalación para su administración vía nebulización. Dado que las formulaciones son de fase estable, estas pueden ser utilizadas en orientación independiente por el usuario final utilizando una variedad de dispositivos tal como nebulizadores que se alimentan por arriba y por abajo.

Estabilidad de liposoma - estabilidad física y química Para el propósito de la presente invención, "compuestos de liposoma estable" son aquellos en los cuales los liposomas dispersos substancialmente retienen su carácter inicial y permanecer substancialmente uniformemente distribuidos a través de la fase continua y mostrar degradación química mínima para el tiempo de anaquel deseado.

El término "estabilidad física" de las composiciones de liposoma según se usan en la presente se refieren a la ausencia de cambios significativos en las características de los liposomas, tal como el tamaño de liposomas (expresado el diámetro mediano de masa d(0.5)), proporción del fármaco libro en el compuesto, sedimentación, agregación, o propiedades de dispersión de luz de los compuestos con el paso del tiempo de almacenamiento.

Como se usa en la presente, el termino "distribución de tamaño de partícula" o "PSD" (por sus siglas en inglés) se refiere a la distribución del tamaño de la partícula en una dispersión liposomal según se mide con técnicas de dispersión de luz dinámica las cuales son muy conocidas por personas capacitadas en el oficio, tal como con Malvern Mastersizer™ 2000. Una manera conveniente de reportar la distribución del tamaño de partícula de los compuestos de liposoma es al reportar el valor d(0.5) el cual se refiere al diámetro mediano de masa de las partículas y representa el tamaño mediano de los liposomas, con 50% de la muestra asociada con liposomas más chicos y 50% de la muestra asociada con liposomas más grandes . El rango preferido de tamaño de partícula de liposomas de la presente invención es inferior a unos 10 micrones, de preferencia menos que unos 6 micrones, o menos de unos 4 micrones, o menos de unos 2 micrones. Se entenderá por las personas calificadas en el oficio que los rangos deseados de los tamaños de las partículas pueden variar dependiendo de la aplicación. Por ejemplo, un valor d(0.5) que cae dentro del rango de 1-3 micrones puede maximizar el porcentaje de liposomas que caen dentro del tamaño de liposomas respirables .

La "El porcentaje de encapsulación" o proporción de encapsulación o %E por varias formulaciones se refiere al porcentaje de amina lipofílica encapsulada dentro del liposoma relativo a la cantidad total de la amina lipofílica en los compuestos. El porcentaje de encapsulación de amina lipofílica en los liposomas de la presente invención es expresada como el porcentaje de fármaco incorporado a los liposomas. Un rango preferido de encapsulación es de unos 50% a unos 90%, de preferencia de un 60% a un 80%, de preferencia un 50% a un 75%. Las personas calificadas en el oficio apreciarán que los diferentes porcentajes de encapsulación pueden ser ventajosos para diferentes aplicaciones, dependiendo, entre otras cosas, en el tiempo de inicial de comienzo y el periodo total de acción del principio activo deseado.

Los liposomas placebo fueron preparados de la forma anterior que no contenía fármaco. Estos liposomas placebo por lo tanto contenían sólo fosfolípidos, colesterol, etanol agua y en algunos casos sal . Se encontró que estos liposomas eran inestables y se sometieron a una separación de fase dentro de horas a días de preparación.

Los liposomas preparados según se cita arriba pero conteniendo la base libre de un medicamento amina lipofílxca como fármaco también fueron inestables al almacenamiento. No se agregó un ácido aceptable a los compuestos . La separación de fase se observó a días de preparación.

Se encontró que los liposomas que contienen forma protonada de la base libre de la amina lipofílxca base ion y un ácido contraión correspondiente proporcionan preparaciones de liposoma estable. En particular, en algunas realizaciones, proporciones molares de ácido: amina con rango de 10:1 a 1:10 (molar/molar) se encontró ser efectiva para mejorar la estabilidad de los Liposomas . Proporciones más estrechas de ácido: amina de entre 3:1 y 1:3 también son efectivas. Además también se encontró que estos liposomas son estables al autoclaveado. Los liposomas preparados con fármaco, que es la sal de amina lipofílxca y un ácido orgánico, también mostraron estabilidad al almacenaje y son estables al autoclaveado.

Diálisis de los productos medicinales encapsulados en el liposoma bajo condiciones que agotan los liposomas del fármaco candidato resulta en los compuestos de liposomas que pasan por separación de fase. En la Tabla 1 abajo, varios compuestos de liposomas fueron dializados sobre periodo de tiempo observados . Los compuestos de liposoma estable de la presente invención con agua como el solvente acuoso mostró substancxalmente el mismo porcentaje de encapsulacion después de diálisis antes .

TABLA 1 De manera sorprendente, el autoclaveado de los fármacos s encapsulados en el liposoma de la presente invención resulta en fármacos encapsulados en el liposoma apropiadamente estable y estéril. Aún más sorprendente, en algunos casos se observó que los fármacos encapsulados en el liposoma mostraron una mejora de estabilidad relativa a los productos pre- autoclaveados estables .

Como tal, en otro aspecto de la presente invención, se estipula un método de aumento de estabilidad en los compuestos de liposomas, donde los compuestos de liposomas de la presente invención son autoclaveados bajo una atmósfera inerte. Aunque no se requiere que dichos compuestos sean estériles para sus aplicaciones, tal como los compuestos tópico, el paso de autoclaveado pueden ser utilizados en el método para mejorar la estabilidad de los liposomas .

Las condiciones de autoclaveado apropiadas para su uso con la presente invención incluyen aquellas que permiten la esterilización de principio activo encapsulado en el liposoma y lo cual no resulta en una disminución sustancial en la estabilidad química de los compuestos con el paso del tiempo. En una realización, los productos medicinales encapsulados en el liposoma son autoclaveados a 121 °C por un mínimo de 15 minutos bajo una atmósfera inerte tal como nitrógeno o argón. En una realización, una atmósfera inerte es una que por lo general contiene menos de un 1.5% oxígeno. Las temperaturas altas de la misma manera pueden ser utilizadas con periodos de tiempo más cortos . Si una formulación puede soportar el ciclo de calentamiento/enfriamiento entonces la esterilización final representa un método robusto, rápido y económico para la preparación de farmacéuticos estériles .

Numerosas formulaciones han sido preparadas utilizando diferentes aminas lipofílicas, ácidos orgánicos, o sales de las mismas, como se expone en las Figuras 1 y 4 y sus pruebas de estabilidad para además ilustrar los compuestos estables y métodos para la preparación del compuesto estable de la invención presente .

Es una característica de la presente invención que los compuestos de fármacos encapsulados en el liposoma constituyan dispersiones homogéneas. En algunos compuestos, las dispersiones homogéneas toman una apariencia translúcida y no requieren agitarse antes de su administración ya que están homogéneamente dispersas, a pesar de la tendencia del usuario final a incluir dicho paso en formas de dosificación turbias. Los compuestos estables fueron observados para ser físicamente y químicamente estable sobre largos periodos de tiempo y no indicaron ningún agregado visible, en algunas realizaciones, incluso después de 24 meses. Los productos medicinales encapsulados en el liposoma inestables muestran precipitación, separación y agregación después de un periodo de tiempo.

En la presente invención, Un compuesto de liposoma estable es uno cuya fase es estable y substancialmente no forma agregados, de preferencia unos que no forman agregados alrededor de por lo menos un año, de preferencia en por lo menos unos 18 meses o más, incluso aún preferible sobre por lo menos unos 24 meses, aun cuando los periodos puedan ser más largos o cortos según se requiera, dependiendo de, ínter alia, el ingrediente activo que habrá de transportar se y el modo de suministro.

La fase de estabilidad de los compuestos de liposoma también pueden ser pronosticar mediante un protocolo según se describe en el Ejemplo 3 aquí, el cual mide el valor d(0.5) de las partículas de liposoma y el obscurecimiento en el supernadante de los compuestos de liposomas al centrifugarlo. Otros detalles se exponen en los Ejemplos que figuran a continuación .

Además, los productos de medicamento de liposoma estable encapsulada de la presente invención se caracterizan por el tamaño de partícula substancialmente consistente con el paso del tiempo durante el almacenamiento, incluyendo aquellos productos de medicamento con liposoma estable encapsulada que han sido esterilizados mediante autoclaveado según se describe en la presente. Por ejemplo, Ejemplo 4 abajo muestra la distribución del tamaño de partículas de varios compuestos de liposomas de la presente invención permanecieron substancialmente sin cambio sobre periodos de tiempo de hasta 20 meses de almacenamiento, poniendo en evidencia que las formulaciones de la presente invención son substancialmente estables en tamaño de partículas con el paso del tiempo de almacenamiento. Mayores detalles se exponen en los ejemplos abajo.

Además, los productos medicinales encapsulados en el liposoma estable de la presente invención se caracterizan por lo substancialmente estable del porcentaje de encapsulación del ingrediente activo con el paso del tiempo durante el almacenamiento, incluyendo aquellos productos medicinales encapsulados en el liposoma estable que han sido esterilizados mediante el autoclaveado según se describe aquí . Mientras que se ha demostrado que el autoclavear algunas compuestos de la presente invención afectan el porcentaje de encapsulación del ingrediente activo relativo al porcentaje de encapsulación del ingrediente activo antes de autoclavear, debe de entenderse que la diferencia en el porcentaje de encapsulación con el paso del tiempo como se expone aquí se refiere al cambio en el porcentaje de encapsulación con el paso del tiempo, del compuesto que no ha sido autoclaveado, o durante el periodo de tiempo de almacenamiento después del autoclaveado. También debe de entenderse que el porcentaje deseado de medicamento libre al medicamento encapsulado puede variar en los compuestos presentes para su uso, dependiendo de la naturaleza del ingrediente activo, la dosis deseada y la contribución relativa de medicamento encapsulado y libre para efecto terapéutico deseado.

Para evidenciar la estabilidad física de los liposomas, el Ejemplo 4 abajo muestra la estabilidad del porcentaje de encapsulación del ingrediente activo de varios compuestos de liposomas de la presente invención sobre los periodos de tiempo de hasta 20 meses bajo una atmósfera inerte. Mayores detalles referentes al Ejemplo 4 se exponen abajo. Además, los compuestos de liposoma estable de la presente invención se caracterizan por ser substancialmente químicamente estables con el paso del tiempo. El termino "estabilidad química" según se usa aquí se utiliza para referirse a la ausencia de cambios significativos al la estructura de la amina lipofílica, ácido, fosfolípido, colesterol u otros componentes del compuesto final. Para el ingrediente activo, específicamente la amina lipofílica, la estabilidad química se define como menor a unos 5% de degradación o cambio en la potencia del ingrediente activo, de preferencia menos de unos 2% de degradación sobre el periodo de almacenamiento. El portador de fosfolípidos, la estabilidad química se define como la presencia menor a uno 10% de perdida en el contenido fosfolípido debido a la degradación de liposomas por hidrólisis u oxidación.

En una realización, los compuestos de liposomas de la presente invención se encontró que son substancialmente estables a 4°C, pH4 por lo menos un año con algo de oxígeno presente. En otra realización según se describe en el Ejemplo 4 abajo, la estabilidad química de fosfatidilcolina de los compuestos de liposoma de la presente invención se encontró que son substancialmente inalterables sobre periodos de tiempo de hasta 20 meses. Mayores detalles referentes al Ejemplo 4 se exponen abajo.

El pH de los compuestos de liposomas de la presente invención típicamente tiene ambas fases y estabilidad química con un valor pH de entre un pH 4 y un pH8. En una realización, los liposomas de la presente invención tienen estabilidad química y de fase a un pH de entre un pH4 y un pH7. En otra realización, el compuesto de liposoma de la presente invención tiene estabilidad química y de fase a un pH de entre un 4.5 y un 6.5 , o de un pH5 y un pH6. Aun cuando los compuestos de liposomas de la presente invención pueden ser de fase estable a valores de pH menores a un 4, dichas formulaciones no son típicamente químicamente estables, y oxidación y/o hidrólisis de el fosfolípido, entre otras reacciones, pueden suceder de manera importante a los dichos valores inferiores de pH con el paso del tiempo.

Los compuestos de liposoma de la presente invención constan de un lipofílico con un grupo amino cargado como un ingrediente activo que transmite estabilidad a los compuestos de liposomas . Se ha observado que los liposomas preparados en ausencia de una amino lipofílico cargado son inestables y sedimentan rápidamente. Los fosfolípidos que comúnmente se usan en la preparación de liposomas incluyen fosfatidilcolina . A pesar de que no es deseable estar limitado por una teoría en particular, a continuación se proporciona una descripción de las interacciones y fuerzas que pueden contribuir a la estabilización o desestabilización de compuestos de liposomas. En rangos fisiológicos de pH, la fosfatidilcolina se comporta como una molécula neutral con una carga neta de cero. A un pH fisiológico, la carga negativa del grupo fosfatidil se equilibra por la carga del amonio cuaternario nitrógeno del grupo colina. Dentro del liposoma, las moléculas de fosfatidilcolina generalmente alineada de una manera lado-a-lado de manera tal que el grupo colina cargado positivamente de una molécula interactúa electro-estáticamente con el grupo fosfatidil de un molécula lípido adyacente . La carga neta de dicha preparación liposomal es cero (como se refleja por medidas potenciales zeta ) . La inclusión de medicamentos sin carga en los liposomas no altera la carga neta de los liposomas . La estabilización de los liposomas con medicamentos amina lipofílica se logra por la selección de pH del compuesto de liposoma de manera tal que pH es casi igual a o menor que el pKa de la amina lopofílica, transmitiendo la amina lipofílica con carga positiva en aumento. Una amina lipofílica cargada positiva así puede insertarse dentro de las bicapas fosfolípidas de la estructura del liposoma de manera tal que se alinea más cerca la carga positiva de la amina con el grupo fosfatidil cargado negativamente y puede trastornar el equilibro de la carga en la superficie del liposoma para crear un liposoma con una carga neta positiva con un pH fisiológico. Se cree que estando a un pH menor al p a de la amina lipofílica por lo tanto puede mejorar su función en el medicamento como un estabilizador en las formulaciones de liposoma per se, al permitir un liposoma cargado en la superficie. Los liposomas cargados pueden así repelerse entre sí permitiendo resistencia a la agregación. Esto podría de la misma manera explicar la incapacidad de los compuestos de liposoma placebo estable preparado que no contienen una amina lipofílica y las sales de las mismas, y un ácido farmacéuticamente aceptable. Además, esto podría de igual manera explicar la incapacidad de preparar compuestos de liposomas estables con aminas lipofílicas que se presentan predominantemente como sin carga, moléculas neutrales.

Así, en la presente invención, el pH de los compuestos de liposomas de la presente invención es casi igual a o menor al valor pK¾ del grupo amino del ingrediente activo amina lipofílica .

Deberá entenderse que los diferentes rangos, según se comentan arriba y se utilizan en el contexto de la presente invención en relación a la estabilidad deberá entenderse que son aproximados y que sirven como una directriz, y las personas capacitadas en el oficio comprenderán que incluye cualesquier variantes de las mismas siempre y cuando los compuestos resultantes sean estables como se define aquí .

Las ventajas de la presente invención se ilustran a detalle mediante los siguientes ejemplos. Los ejemplos y sus detalles específicos estipulados aquí, se presentan únicamente para ilustrar y no deberán interpretarse como una limitación en las reivindicaciones de la presente invención.

Ejemplos Ejemplo 1 - Preparación de Liposomas Cada lote de prueba de la preparación de liposoma fue preparado con 1.2 g de lecitina de soya purificada, 0.12 g de colesterol disuelto en 3 gm de etanol y calentado a 56 grados Celsius. En algunas preparaciones, la fase etanólica también contenía la amina lipofílica o una sal de la amina lipofílica (Figura 1) en una cantidad que proporcionara la concentración blanco en la formulación final . Después de la disolución de todos los elementos en la fase etanólica, la solución etanólica se mezclo con 27 g de solución acuosa calentada a 56 grados Celsius. La fase acuosa opcional contenía varios ácidos o sales como se indica en la Figura 1. Posteriormente al mezclado de las dos fases líquidas, la mezcla se batió a 56 grados Celsius durante 10 minutos en una batidora orbital y después se enfrió gradualmente a temperatura ambiente . La presencia de liposomas muítilaminares se confirmó con microscopio. Las preparaciones de liposomas seleccionados fueron autoclaveados a 121 grados Celsius durante 15 minutos .

Ejemplo 2 - Fase de estabilidad en Almacenaje La fase de estabilidad de las preparaciones de liposoma de la presente invención permite liposomas farmacéuticamente útil. La fase de estabilidad de las preparaciones como se observa en el Ejemplo 1 fueron monitoreadas visualmente para la formación de sedimento o agregados . Los compuestos de liposomas que no tienen una fase lo suficientemente estable, típicamente muestran sedimentación muy rápidamente, con frecuencia de la noche a la mañana, mientras otras no muestran signos de sedimentación aún después de años de almacenamiento. Un ejemplo de los aspectos visuales de liposomas en fase estable se muestra en la Figura 2a Mientras que un ejemplo del aspecto visual de la preparación de fase inestable en la Figura 2b muestra una sedimentación obvia y separación de fase.

En referencia a la Figura 1, los compuestos de liposoma placebo carentes de un fármaco, generalmente son de fase inestable y sedimentan rápidamente. Sobre el rango pH de 4 a 7, los liposomas placebo de la Figura 1 que no han sido autoclaveados son de fase inestable (Figura 3a) . Las preparaciones de liposoma placebo que parecían ser de fase estable por lo general estaban asociadas con los extremos de pH, principalmente menor a pH3 y mayor a pH8, donde la estabilidad química generalmente se ve comprometida.

En referencia nuevamente a la Figura 1, se encontró que el agregar sal a la amina lipofílica tenía un efecto estabilizador en la preparación de liposoma. En contraste, una preparación de liposoma que solo contiene el fentanil amina lipofílica (sin un ácido contraión) es inestable. No obstante, conforme el porcentaje de ácido en la formulación aumenta, la fase de estabilidad de la preparación aumenta. El efecto estabilizador de la amina lipofílica en combinación con la concentración adecuada de ácido, da preparaciones de liposoma que son de fase estable con valores de pH menores a un 7 como se muestra en la Figura 3b antes del autoclaveado . En contraste a las formulaciones placebo las preparaciones de liposoma que contienen una amina lipofílica son de fase estable sobre un rango de pH de un pH4 a un pH6 a excepción de las preparaciones que contienen cloruro de sodio.

Ejemplo 3 - Estabilidad de varios compuestos del fármaco encapsulado en el liposoma incluyendo compuestos autoclaveados En la industria farmacéutica, las formulaciones estériles pueden ser "terminalmente esterilizadas", por ejemplo, son esterilizadas por autoclave después de haber llenado los viales individuales . Los productos medicinales encapsulados en el liposoma de la presente invención vía autoclaveado pueden proporcionar compuestos de liposoma estériles y estable empaquetadas individualmente apropiadas para su uso en la industria farmacéutica.

Como se expone arriba, varias referencias previas del oficio relacionadas al autoclaveado de liposomas pone en evidencia el punto de vista amplio que tienen las personas capacitas en el oficio que los liposomas, en particular aquellos basados en fosfatidilcolina, son frágiles e inestables en las rudas condiciones del autoclaveado que conllevan a la aglomeración de liposomas, cambio en el tamaño de liposoma, o distribución de tamaño, hidrólisis/oxidación de lípidos, degradación química y liberación indeseable del fármaco encapsulado (por ejemplo, ver WO 2004/002468). Como se describe aquí, las realizaciones de los compuestos de liposoma de la presente invención solo pueden soportar autoclaveado, pero también parece que tienen una fase de estabilidad mejorada después de autoclaveado. Adem s, los siguientes parámetros relacionados a la estabilidad de los compuestos de liposoma de la presente invención fueron medidas tanto antes como después del autoclaveado para evidenciar más el efecto de estabilización del autoclaveado en compuestos de la presente invención: pH, distribución del tamaño de partícula, hidrólisis lípida, oxidación lípida, y fase de estabilidad. Una argumentación sobre cada uno de estos parámetros figura a continuación.

Las preparaciones de liposoma fueron preparadas con varias aminas lipofílicas añadidas como la base en combinación con cantidades variables de diferentes ácidos. Cada lote de prueba de la preparación de liposoma fue preparada con 1.2 g de lecitina de soya purificada, 0.12 g de colesterol y una base de amina lipofílica disuelta en 3 gm de etanol y calentada a 56 grados Celsius. Una fase acuosa de 27gm de agua para inyección opcional contenía varios ácidos o sales fue calentada a 56 grados Celsius . En formulaciones donde el ácido de prueba fue ácido palmítico, el ácido fue disuelto en la fase etanólica mientras que todos los otros ácidos fueron disueltos en la fase acuosa. Después de la disolución de los componentes en la fase etanólica, se agregó la solución etanólica a la solución acuosa, la mezcla se batió a 56 grados Celsius durante 10 minutos en una batidora orbital y después gradualmente enfriada a temperatura ambiente. La presencia de liposomas multilaminares se confirmó con microscopio. Las muestras de cada preparación de liposoma fueron transferidas a viales de vidrio sellados y autoclaveados a 121 grados Celsius durante 20 minutos.

Una variedad de parámetros de compuestos de liposoma fueron medidas tanto antes como después del autoclaveado para caracterizar ambas la estabilidad física y la estabilidad química de los compuestos .

Figura 4 proporciona un resumen de las preparaciones, el pH, el tamaño de partícula antes y después del autoclaveado, y el índice de la fase de estabilidad, antes y después del autoclaveado.

Estabilidad con respecto al pH: Una preocupación con los liposomas autoclaveados es el potencial para la degradación química de fosfolípido o componentes de medicamento. Una degradación química en una formulación se refleja con frecuencia por cambios en pH. Como se muestra en la Figura 5, la relación entre pH después del autoclaveado contra pH antes de autoclavear los compuestos de liposoma de la presente invención pueden describirse generalmente por la ecuación pH(post) = pH (anterior) , que indican que no hubo cambio en pH para las formulaciones que cuentan con un pH inicial menor a 7. Las preparaciones de liposoma que fueron ligeramente alcalinas antes del autoclaveado, específicamente las formulaciones con pH> 8, tuvieron menor pH después del autoclaveado y los puntos en la gráfica se desviaron de la relación lineal deseada. Las formulaciones autoclaveadas con valores de pH más altos parecen resultar en la degradación química de los componentes de la formulación.

El impacto de Autoclaveado en Contenido Fosfatidilcolina: Una preocupación con los liposomas autoclaveados es su potencial para hidrólisis de fosfolípidos base éster como fosfatidilcolina. Se determinaron las concentraciones de fosfatidilcolina de doce formulaciones de la presente invención antes y después del autoclaveado. Fosfatidil colina y su producto hidrólisis relacionado lisofosfatidil-colina fueron probadas por una fase normal HPLC utilizando una columna sílice-diol con detección de dispersión de luz de evaporación y un gradiente de elución A (n-hexano: 2-propanol: ácido acético: trietilamina 81. 4:17:1.5:08) a eluyente B (2-propanol: agua: ácido acético: trietilamina 84.4:14:1.5:0.08) durante 15 minutos a 1.5 a 2 mL/índice de flujo mínimo.

Las doce formulaciones de la Figura 4 fueron seleccionada para cubrir el rango completo de los valores de pH de las formulaciones de la Figura 4. Aun cuando la hidrólisis puede ser significativa a valores de pH menores a 4 o valores de pH mayores a 10 como se muestra en la Figura 6, las preparaciones de liposoma de la presente invención entre 4 y 9 , y de preferencia entre pH4 y pH7 podrían ser autoclaveadas sin una pérdida significativa de fosfolípido, típicamente inferior al 10%, de preferencia una pérdida menor a 5%.

Impacto del Autoclaveado en la Oxidación de Lípido: La oxidación de lípidos durante el autoclaveado fue minimizada al preparar y llenar las formulaciones bajo una atmósfera inerte. La Tabla 2 abajo resume los cambios en la oxidación de lípido después del autoclaveado para compuestos liposomales que contienen fentanil : ácido cítrico (1:1) como fármaco. La oxidación de los componentes lípidos fue probada por un ensayo colorimétrico . Todas las muestras que contienen lípidos, y estándares, fueron sometidas al reactivo FOX (oxidación ferrosa/naranja de xilenol) y medidas a 562nm. Ensayos en vacío fueron preparados por reacción con trifenilfosfina, medida a 562nm y reducida de las lecturas de absorción de las muestras . Se efectúo la cuantitación contra la curva estándar de hidroperóxido de eumeno. La exclusión de oxígeno fue observado para prevenir la oxidación durante el proceso de autoclaveado.

TABLA 2 El Impacto del Autoclaveado en el índice de Estabilidad de Fase: La estabilidad de fase de los compuestos de liposoma de la presente invención proporciona los compuestos de liposoma farmacéuticamente útiles . Los compuestos de liposoma que no son suficientemente estables de fase típicamente muestran la sedimentación del tipo que se muestra en la Figura 2b, muy rápidamente, con frecuencia de la noche para la mañana, mientras que otros pueden sedimentar solo después de semanas de almacenamiento. La vida de anaquel deseada para un producto farmacéutico en algunas realizaciones es de dos años o más bajo condiciones específicas de almacenamiento. Por ejemplo, en una realización los compuestos de liposoma de la presente invención que contienen citrato de fentanil como ingrediente activo/ácido orgánico han mostrado que el producto retiene la estabilidad de fase por más de dos años a 4 grados Celsius .

Durante el desarrollo de la formulación para nuevos medicamentos candidato, no es práctico monitorear la estabilidad en tiempo real de un periodo de meses o años para evaluar la fase de estabilidad. Como resultado, hemos desarrollado un método mediante el centrifugado para proporcionar una herramienta analítica para predecir la estabilidad de la fase a largo plazo del compuesto de liposoma.

En el ensayo, los compuestos liposomales fueron preparadas como se describe aquí y resumidas en la Figura 4. La distribución del tamaño de partículas de los liposomas se efectúa mediante un método de luz dispersa utilizando a Malvern Mastersizer 2000, después de la disolución de los liposomas en disolvente en agua para inyección. Una muestra de las preparaciones liposomales fue retirada y la distribución del tamaño de partícula fue medida utilizando un Malvern Mastersizer. El diámetro mediano de masa (d(0.5) del compuesto de liposoma fue registrada. Una alícuota de 3ml de cada preparación de liposoma fue centrifugada a unos 2,292g y 4°C durante 2 horas. Después del centrifugado, una alícuota de la muestra fue retirada de la capa superior de la muestra centrifugada y la distribución del tamaño de partícula utilizando el Malvern Mastersizer. El diámetro mediano de masa de la capa superior del supernadante fue registrado .

Un ejemplo de compuestos de liposoma probadas por el presente protocolo se muestra en las Figuras 8a-8-c. Cuando la muestra fue fase inestable, el centrifugado proporciono un pelet sólido en el fondo del tubo de centrifugado, y un supernadante claro, Figura 8a Después de efectuada la medición con el Malvern Mastersizer, esencialmente no se detectaron partículas en la supernadante ya que se confirmó con un valor de obscuración esencialmente de cero. La obscuración es muy conocida por las personas capacitadas en este oficio por ser la prueba apropiada para determinar la cantidad de volumen de liposomas . Cuando la muestra era de fase estable, ningún pelet era visible después del centrifugado y la muestra en el tubo de centrifugado permaneció como una dispersión homogénea. Después de efectuada la medición con el Malvern Mastersizer, el valor de la obscuración confirmó la presencia de numerosos liposomas en el supernadante y el diámetro mediano de masa de los liposomas por lo general era de 60% - 100% del valor registrado en la formulación inicial.

Utilizando el valor d(0.5) como el indicador para la consistencia de la distribución del tamaño de partícula, nosotros definimos un índice de Estabilidad de Fase (índice PS) mediante la siguiente ecuación: índice Estabilidad de Fase = d(0.5) post-centrifugado/d(0.5%) pre-centrifugado Cuando la muestra fue fase estable como se define aquí, después del centrifugado no hubo pelet visible y los liposomas permanecieron uniformemente distribuidos durante toda la fase líquida Figura 8c, y el índice PS fue un tanto mayor que un 0.6.

Si la misma muestra tenía una estabilidad intermedia de fase, después del centrifugado un gradiente de densidad o comprimido parcial se observaron durante una inspección visual como en la Figura 8b, y típicamente, un índice PS mayor a o igual a 0.1 pero menor a o igual a 0.6. Para ilustrar con mayor detalle los compuestos con estabilidad intermedia de fase, la Figura 9 muestra una fotografía del compuesto liposomal de estabilidad intermedia de fase. Después del centrifugado, algunos liposomas han fijado y el comprimido es visible. El supernadante no era clara, con algunos liposomas que permanecieron en suspensión. Esta foto fue tomada con luz ultravioleta filtrada para permitir la visualización de la demarcación entre el comprimido y el supernadante.

El índice PS para varios compuestos de liposomas se midió utilizando este método en ambos antes y después de autoclavear los compuestos, y los datos se resumen en la Figura 4.

El resultado, las formulación que contienen solo base libre de los medicamentos por lo general fueron de fase inestable antes y después del autoclaveado . La única excepción fue la formulación con Sumatriptán.

No obstante el Sumatriptán lleva una carga con el pH de la formulación final a diferencia de todas las otras moléculas que están sin carga o solo parcialmente cargadas con el pH de la formulación final. El resultado, el autoclaveado de las formulaciones de liposoma aumentaron el número de formulaciones de liposoma que fueron caracterizadas por el índice PS mayor a 0.6 según se resume en la Tabla 3 a continuación: Tabla 3 Antes del autoclaveado, el 51% de las formulaciones generalmente tenían una fase de estabilidad baja o nula, con sólo el 26% de las formulaciones que tenían una excelente fase de estabilidad. Después del autoclaveado, el número de preparaciones de liposoma con fase estable aumentó dramáticamente por encima del 62% de todas las preparaciones.

Al añadir la cantidad apropiada de un ácido, fue posible dosificar el pH de las preparaciones para que estuviera en rangos por debajo del pKa de manera tal que una cantidad creciente del grupo amino del fármaco amina lipofílica fue protonada. A rangos de pH entre unos 4 y unos 7, y seguido del paso del autoclaveado, los liposomas mostraron ondansetrón o fentanil . Muchas de las formulaciones preparadas con ondansetrón fueron completamente 2 pH unidades menores al pKa.

Tamaño de Partículas de Liposomas : Anteriormente el oficio sugería que los liposomas deberían cambiar significativamente en tamaño después del autoclaveado. La distribución del tamaño de partículas de los liposomas se conduce por un método de dispersión de luz empleando un Malvern Mastersizer 2000, después de haber diluido los liposomas en el agente de dispersión en agua para inyección. Los resultados de nuestros estudios utilizando preparaciones con índice PS > 0.6 después del autoclavado, muestran que la medición del d(0.5) de los liposomas, medido antes del centrifugado de la preparación nativa o la preparación autoclaveada, aumenta fraccionariamente después del autoclaveado con la mayoría de las formulaciones mostrando menos del 33% de aumento en el tamaño de liposoma. Mayores cambios en el tamaño del liposoma fueron registrados para las formulaciones con valores de pH menores a pH 4 o mayores a pH7 como se muestra en la Figura 7. Como se argumentó arriba, el rango de pH preferido para las formulaciones es de entre 4-7, y de preferencia entre 5-6, para optimizar la estabilidad física y química de toda la formulación.

Ejemplo 4 - Estabilidad de Almacenamiento Las preparaciones que contienen una mezcla de fentanil libre y fentanil encapsulado en el liposoma se prepararon al mezclar la fase etanólica con la fase acuosa en varios tamaños de lotes. La fase etanólica consta de etanol, citrato de fentanil, fosfatidilcolina y colesterol . La fase acuosa consta de agua para inyección. Antes de mezclarse amabas fases se calentaron a una temperatura de unos 56 a 60 grados centígrados. Las dos mezclas se mezclaron y las mezclas fueron batidas durante otros 10 minutos a unos 56-60 grados centígrados. La mezcla se dejó enfriar a temperatura ambiente durante aproximadamente unas dos horas. Típicamente, cada mi de la formulación acuosa final contenida 500 mcg fentanil (como 800 mcg citrato de fentanil) , 40 mg fosfatilcolina, 4mg colesterol, y 100 mg etanol, en una solución de agua para inyección. Después del llenado, las preparaciones se autoclavearon para la esterilización final (se presentó algo de aire) . Las preparaciones finales contenían entre 30 y 40% de fentanil como medicamento libre con el restante (70 a 60%) en la fracción encapsulada.

Tabla 4 Las preparaciones liposomales acuosas fueron almacenadas a 4 grados Celsius y monitoreadas para la estabilidad de la distribución de tamaño de partículas y cambio en la encapsulación del fármaco. La distribución del tamaño de partícula de los liposomas se conduce por un método de luz dispersa empleando un Malvern Mastersizer 2000, después de la dilución de los liposomas en el agente de dispersión, Agua filtrada para Irrigación. El porcentaje de encapsulación del fármaco dentro de los liposomas se prueba al centrifugar los liposomas a una fuerza centrifuga alta (gmax 277816) , a 4°C durante 2 horas . Las condiciones extremas fueron necesarias para crear un pelet apropiado para las formulaciones de fase muy estable. El supernadante y el pelet fueron ambos analizados para fármaco por fase inversa HPLC utilizando un columna C8 con detección UV y buffer de 40/40/20 buffer acetato de amonio/metanol/acetonitrilo . La muestra clara también fue inyectada, para calcular el balance de masa. El porcentaje encapsulado se calcula por: %E= C (comprimido) x 100% C (comprimido) + C (supernadante) Donde C(pelet) es la concentración de fármaco en el pelet y C (supernadante) es la concentración de fármaco en el supernadante .

No se observaron cambios significativo en la distribución del tamaño de partícula, porcentaje de encapsulación o contenido de fosfatidilcolina . Las preparaciones fueron de fase estable por inspección visual y para muestras del lote de 15 litros el índice del Tamaño de Partícula fue de 0.72 después de 19 meses de almacenamiento.

Aun cuando aquí se describen las realizaciones de la invención, se entenderá por las personas capacitadas en el oficio que a esto se le pueden hacer variaciones sin desviarse del espíritu de la invención o del alcance de las reivindicaciones anexas . Además se entenderá por aquellos capacitados en el oficio que elementos de las diferentes realizaciones de la presente invención pueden ser combinados en cualquier manera lógica.

Claims

R E I V I N D I C A C I O N E S

1. ün compuesto de liposoma estable para transportar un fármaco, el compuesto consta de: (a) un medio acuoso apropiado; (b) liposomas formados de un fosfolípido apropiado ; (c) por lo menos un fármaco siendo al menos parcialmente encapsulado en los liposomas, y siendo seleccionados de : (i) una amina lipofílica y un ácido farmacéutico aceptable, donde el ácido farmacéutico aceptable se selecciona de un ácido orgánico e inorgánico, y (ii) una sal acida orgánica farmacéuticamente aceptable de una amina, y opcionalmente un ácido farmacéuticamente aceptable que consta de un ácido orgánico farmacéuticamente aceptable; en donde la cantidad de ácido farmacéutico aceptable presente en el compuesto sea tal que el pH del compuesto de liposoma es menor a o aproximadamente igual al del p a del grupo amino de la amina lipofílica activa farmacéutica.

2. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque el pH del compuesto es más o menos igual al pKa del grupo amino de la amina lipofílica, y más o menos 50% de la amina lipofílica es protonatada en el compuesto.

3. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque el pH del compuesto de liposoma es menor que el pKa del grupo amino de la amina lipofílica, y una porción mayor de la amina lipofílica es protonatada en el compuesto .

4. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque el compuesto tiene un pH de alrededor de 1 a unas 2 unidades de pH menores al pKa del grupo amino de la amina lipofílica.

5. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque el pH del compuesto de liposoma está entre un 4 y el pKa del grupo amino de la amina lipofílica.

6. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque el compuesto tiene un pH de entre un 4 y un 8.

7. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 6, caracterizado porque el compuesto tiene un pH de entre un 4 a un 7.

8. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 6, caracterizado porque el compuesto tiene un pH de entre un 4.5 y un 6.5.

9. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 6, caracterizado porque el compuesto tiene un pH de entre un 5 y un 6.

10. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque comprende además colesterol.

11. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque comprende además etanol.

12. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 11, caracterizado porque el etanol presente es de entre un 2.5% y un 10% del volumen total del compuesto de liposoma.

13. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque el fosfolípido tiene una carga neta neutral a un pH fisiológico.

14. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 13, caracterizado porque el fosfolípido consta de fosfatidilcolina .

15. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque el medio acuoso es agua.

16. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque el fármaco también es libre en el medio acuoso.

17. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 16, caracterizado porque el porcentaje del fármaco encapsulado en el liposoma consta de 50% a un 90% de la cantidad total del fármaco presente en el compuesto de liposoma.

18. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 17, caracterizado porque el porcentaje de fármaco encapsulado en el liposoma consta de un 60% a un 80% del volumen total de fármaco presente en el compuesto de liposoma.

19. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 18, caracterizado porque el porcentaje del fármaco encapsulado en el liposoma consta de de un 50% a un 75% del volumen total del fármaco presente en el compuesto de liposoma.

20. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque el ácido farmacéuticamente aceptable del paso (b) (i) consta de un ácido orgánico.

21. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque el ácido farmacéuticamente aceptable del paso (b) (i) consta de un ácido inorgánico.

22. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque las partículas del liposoma del compuesto de liposoma tiene un diámetro mediano de masa (d(0.5) menor a unos 10 micrones .

23. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 22, caracterizado porque las partículas del liposoma del compuesto de liposoma tienen un diámetro mediano de masa de (d(0.5) menor a unos 6 micrones.

24. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 22, caracterizado porque las partículas del liposoma del compuesto de liposoma tienen un diámetro mediano de masa (d(0.5) menor a unos 4 micrones.

25. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 22, caracterizado porque las partículas del liposoma del compuesto de liposoma tienen un diámetro mediano de masa (d(0.5) menor a unos 2 micrones .

26. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque la amina lipofílica consta de una amina lipofílica que tiene una P-valor log mayor a un 1.0 a pH fisiológico.

27. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 26, caracterizado porque la amina lipofílica tiene un P-valor log de entre unos 2 y 5 a pH fisiológico.

28. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque la proporción del fármaco para fosfolípidos es de entre 1:100 y un 1:10 mol/mol.

29. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque la cantidad de fosfolípido presente es de un 1.5 if o más en el compuesto .

30. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque después del centrifugado a una fuerza g de entre unos 1000 y unos 5000, a temperatura de unos 4°C, y un periodo de tiempo de unas 2 horas, la proporción de la distribución del tamaño de partícula de los liposomas del compuesto de liposoma después del centrifugado relativo a aquel anterior al centrifugado es igual o mayor a un 0.6

31. Un compuesto tal y como se reivindica en cualquiera de las cláusulas 1-30, caracterizado porque dicho compuesto de liposoma es autoclaveado y el dicho compuesto es físicamente y químicamente estable al autoclaveado.

32. Un compuesto tal y como se reivindica en cualquiera de las cláusulas 1-30, caracterizado porque el compuesto de liposoma esta autoclaveado y el dicho compuesto es físicamente y químicamente estable al autoclaveado a una temperatura de unos 121°C durante un mínimo de unos 15 minutos

33. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 31, caracterizado porque los compuestos de liposoma son físicamente y químicamente estables por lo menos durante un año a una temperatura superior al punto de congelación de los compuestos de liposoma.

34. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 31, caracterizado porque los compuestos de liposoma son físicamente y químicamente estables por lo menos durante 18 meses a una temperatura superior al punto de congelación de los compuestos de liposoma.

35. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 31, caracterizado porque los compuestos de liposoma son físicamente y químicamente estables por lo menos durante 24 meses a una temperatura superior al punto de congelación de los compuestos de liposoma.

36. ün compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 31, caracterizado porque el porcentaje de encapsulacion del fármaco en el compuesto de liposoma es substancialmente estable durante un periodo de por lo menos 20 meses bajo una atmósfera inerte .

37. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 31, caracterizado porque la cantidad de fosfolípido químicamente no se degrada más de un 10% (peso/peso) durante un periodo de por lo menos 20 meses.

38. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 31, caracterizado porque la cantidad de fosfolípido químicamente no se degrada más de un 5% (peso/peso) durante un periodo de por lo menos 20 meses.

39. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 31, caracterizado porque la amina lipofílica químicamente no se degrada más de un 5% (peso/peso) durante un periodo de por lo menos 20 meses.

40. Un compuesto tal y como se reivindica en la cláusula 31, caracterizado porque la amina lipofílica químicamente no se degrada más de un 2% (peso/peso) durante un periodo de por lo menos 20 meses.

41. Un compuesto de liposoma estéril y estable para transportar un fármaco, el compuesto consta de: (a) un medio acuoso apropiado; (b) liposomas formado de un fosfolípido apropiado; por lo menos un fármaco siendo por lo menos parcialmente encapsulado en los liposomas, y siendo seleccionado de: una amina lipofílica y un ácido farmacéuticamente aceptable, donde el ácido farmacéuticamente aceptable es seleccionado de un ácido orgánico o inorgánico, y una sal ácida orgánica farmacéuticamente aceptable de una amina lipofílica, y opcionalmente un ácido orgánico farmacéuticamente aceptable, y opcionalmente un ácido farmacéuticamente aceptable que comprenda un ácido orgánico farmacéuticamente aceptable ; en donde el compuesto es autoclaveado, y donde la cantidad de ácido farmacéuticamente aceptable presente en el compuesto es tal que el pH del compuesto de liposoma es menor a o aproximadamente igual al pKa del grupo amino de la amina lipofílica farmacéuticamente activa.

42. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque el pH del compuesto de liposoma es más o menos igual al pKa del grupo amino de la amina lipofílica, y un 50% de la amina lipofílica es protonatada en el compuesto.

43. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque el pH del compuesto de liposoma es menor al pKa del grupo amino de la amina lipofílica, y una porción mayor de la amina lipofílica es protonada en el compuesto.

44. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque el compuesto tiene un pH de un 1 a unas 2 unidades de pH menor al pKa del grupo amino de la amina lipofílica.

45. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porgue el pH del compuesto de liposoma esta entre un 4 y el pKa del grupo amino de la amina lipofílica.

46. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque el compuesto tiene un pH de entre un 4 y un 8.

47. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 46, caracterizado porque el compuesto tiene un pH de entre un 4 y un 7.

48. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 47, caracterizado porque el compuesto tiene un pH de entre un 4.5 y un 6.5.

49. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 48, caracterizado porque el compuesto tiene un pH de entre un 5 y un 6.

50. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque comprende además colesterol .

51. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque comprende además etanol .

52. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 51, caracterizado porque el etanol está presente entre un 2.5% y un 10% del volumen total del compuesto de liposoma.

53. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque el fosfolipido tiene una carga neta neutra a un pH fisiológico.

54. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 53, caracterizado porque el fosfolipido consta de fosfatidilcolina .

55. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque el medio acuoso es agua.

56. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque el fármaco también está libre en el medio acuoso .

57. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 56, caracterizado porque el porcentaje de fármaco encapsulado en el liposoma consta de un 50% a un 90% de la cantidad total del fármaco presente en los compuestos de liposoma .

58. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 57, caracterizado porque el porcentaje de fármaco encapsulado en el liposoma consta de un 60% a un 80% de la cantidad total del fármaco presente en los compuestos de liposoma .

59. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 58, caracterizado porque el porcentaje de fármaco encapsulado en el liposoma consta de un 50% a un 75% de la cantidad total del fármaco presente en los compuestos de liposoma.

60. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque el ácido farmacéuticamente aceptable del paso b(i) consta de un ácido orgánico.

61. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque el ácido farmacéuticamente aceptable del paso b(i) consta de un ácido inorgánico

62. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque las partículas del compuesto de liposoma tienen un diámetro mediano de masa de (d(0.5)) menor a unos 10 micrones .

63. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque las partículas del compuesto de liposoma tienen un diámetro mediano de masa de (d(0.5)) menor a unos 6 micrones.

64. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque las partículas del compuesto de liposoma tienen un diámetro mediano de masa de (d(0.5)) menor a unos 4 micrones.

65. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque las partículas del compuesto de liposoma tienen un diámetro mediano de masa de (d(0.5)) menor a unos 2 micrones.

66. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque los compuestos de liposoma son físicamente y químicamente estables y estériles por lo menos durante un año a una temperatura superior al punto de congelación de los compuestos de liposoma.

67. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 66 , caracterizado porque los compuestos de liposoma son físicamente y químicamente estables y estériles por lo menos durante un año aproximadamente a una temperatura superior al punto de congelación de los compuestos de liposoma.

68. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 67, caracterizado porque los compuestos de liposoma son físicamente y químicamente estables y estériles por lo menos durante unos 18 meses a una temperatura superior al punto de congelación de los compuestos de liposoma.

69. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque la amina lipofílica consta de una amina lipofílica que tiene un P-valor log mayor a un 1.0 a pH fisiológico.

70. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque la amina lipofílica consta de una amina lipofílica que tiene un P-valor log de entre un 2 y un 5 a pH fisiológico.

71. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque la proporción del fármaco para fosfolípido es de entre un 1:100 y 1:10 mol/mol.

72. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque la cantidad de fosfolípidos presente es de un 1.5 mM o más en el compuesto.

73. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque el porcentaje de medicamento encapsulado en el compuesto de ' liposoma es substancialmente estable por un periodo de por lo menos 20 meses.

74. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque los compuestos son substancialmente estables químicamente por un periodo de por lo menos 20 meses.

75. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque la cantidad de fosfolípido no disminuye debido a la degradación química más de un 10% peso/peso) durante un periodo de por lo menos 20 meses.

76. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque la cantidad de fosfolípido no disminuye debido a la degradación química más de un 5% (peso/peso) durante un periodo de por lo menos 20 meses.

77. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque la cantidad de amina lipofílica no disminuye debido a la degradación química más de un 5% (peso/peso) durante un periodo de por lo menos 20 meses.

78. Un compuesto estéril y estable tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque la cantidad de amina lipofílica no disminuye debido a la degradación química más de un 2% (peso/peso) durante un periodo de por lo menos 20 meses.

79. Un método para producir un compuesto de liposoma estable para transportar un fármaco, el método consta de los pasos : (a) proporcionar un medio acuoso apropiado; (b) proporcionar un fosfolípido apropiado; (c) proporcionar por lo menos un fármaco que por lo menos pueda ser parcialmente encapsulado en los liposomas y seleccionado de: (i) una amina lipofílica y un ácido farmacéuticamente aceptable donde el ácido farmacéuticamente aceptable se seleccione de un ácido orgánico o inorgánico, y (ii) una sal acida orgánica farmacéuticamente aceptable de una amina lipofílica, y opcionalmente un ácido farmacéuticamente aceptable que comprende un ácido orgánico farmacéuticamente aceptable; en donde la cantidad de ácido farmacéuticamente aceptable presente en el compuesto es tal que el pH del compuesto de liposoma sea menor a o aproximadamente igual al pKa del grupo amino de la amina lipofílica activa farmacéuticamente; (d) combinar el medio acuosos, fosfolípido y fármaco para formar el compuesto de liposoma; y (e) opcionalmente autoclavear el dicho compuesto.

80. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79, caracterizado porque el compuesto de liposoma se autoclavea, y donde el compuesto es un compuesto estéril.

81. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque el pH del compuesto de liposoma es más o menos igual al pKa del grupo amino de la amina lipofílica, y un 50% de amina lipofílica es protonatada en el compuesto.

82. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porgue el pH del compuesto de liposoma es más o menos igual al pKa del grupo amino de la amina lipofílica, y una mayor proporción de amina lipofílica es protonatada en el compuesto.

83. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque el compuesto de liposoma tiene un pH de 1 a unas 2 pH unidades menores al pKa del grupo amino de la amina lipofílica.

84. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque el pH del compuesto de liposoma es de entre un 4 y el pKa del grupo amino de la amina lipofílica.

85. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque el compuesto tiene un pH de entre un 4 a un 8.

86. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque el compuesto tiene un pH de entre un 4 a un 7.

87. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque el compuesto tiene un pH de entre un 4.5 a un 6.5

88. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque el compuesto tiene un pH de un 4 a un 8.

89. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque por lo menos además se proporciona un de colesterol y etanol, y el paso (d) consta del paso de combinación de medio acuoso, fosfolípidos, fármaco, y por lo menos uno de colesterol y etanol para formar los compuestos de liposoma .

90. EL método tal y como se reivindica en la cláusula 89, caracterizado porque el etanol está presente a entre un 2.5% y un 10% del volumen total del compuesto de liposoma.

91. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque el fosfolípido tiene una carga neutral a un pH fisiológico.

92. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque el fosfolípido consta de fosfatidilcolina .

93. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porgue el medio acuoso es agua.

94. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque el fármaco también está libre en el medio acuoso.

95. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque el porcentaje de fármaco encapsulado en el liposoma consta de entre un 50% a un 90% de la cantidad total de fármaco presente en el compuesto de liposoma.

96. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque el porcentaje de fármaco encapsulado en el liposoma consta de entre un 60% a un 80% de la cantidad total de fármaco presente en el compuesto de liposoma.

97. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque el porcentaje de fármaco encapsulado en el liposoma consta de entre un 50% a un 75% de la cantidad total de fármaco presente en el compuesto de liposoma.

98. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque el ácido farmacéuticamente aceptable del paso c(i) consta de un ácido orgánico.

99. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porgue el ácido farmacéuticamente aceptable del paso c(i) consta de un ácido inorgánico.

100. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque las partículas del liposoma del compuesto de liposoma tiene un diámetro mediano de masa de (d(0.5) menor a unos 10 micrones .

101. El método tal y como se reivindica en la cláusula 100, caracterizado porque las partículas del liposoma del compuesto de liposoma tiene un diámetro mediano de masa de (d(0.5) menor a unos 6 micrones.

102. El método tal y como se reivindica en la cláusula 100, caracterizado porque las partículas del liposoma del compuesto de liposoma tiene un diámetro mediano de masa de (d(0.5) menor a unos 4 micrones.

103. El método tal y como se reivindica en la cláusula 100, caracterizado porque las partículas del liposoma del compuesto de liposoma tiene un diámetro mediano de masa de (d(0.5) menor a unos 2 micrones.

104. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque los compuestos de liposoma son físicamente y químicamente estables y estériles por lo menos durante un año a temperatura superior al punto de congelación de los compuestos de liposomas .

105. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque los compuestos de liposoma son físicamente y químicamente estables y estériles por lo menos durante unos 18 meses a temperatura superior al punto de congelación de los compuestos de liposomas .

106. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque los compuestos de liposoma son físicamente y químicamente estables y estériles por lo menos durante unos 24 meses a temperatura superior al punto de congelación de los compuestos de liposomas .

107. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque la amina lipofílica consta de una amina lipofílica que tiene un P-valor log mayor a un 1.0 pH fisiológico.

108. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porque la amina lipofílica consta de una amina lipofílica que tiene un P-valor log de entre un 2 y un 5 a pH fisiológico.

109. El método tal y como se reivindica en la cláusula 79 u 80, caracterizado porgue la proporción de fármaco para fosfolípido es de entre 1:100 y 1:10 mol/mol.

110. El método tal y como se reivindica en la cláusula 80, caracterizado porque la cantidad de fosfolípidos presente es de un 1.5 mM o más en el compuesto .

111. El método tal y como se reivindica en la cláusula 80, caracterizado porque el porcentaje del fármaco encapsulado en el compuesto de liposoma es substancialmente estable durante un periodo de por lo menos 20 meses.

112. El método tal y como se reivindica en la cláusula 80, caracterizado porque los compuestos son substancialmente estables durante un periodo de por lo menos 20 meses .

113. El método tal y como se reivindica en la cláusula 80, caracterizado porque la cantidad de fosfolipidos no disminuye debido a la hidrólisis u oxidación química más de un 10% (peso/peso) durante un periodo de por lo menos 20 meses.

11 . El método tal y como se reivindica en la cláusula 80, caracterizado porque la cantidad de fosfolípido no disminuye debido a la hidrólisis u oxidación química más de un 5% (peso/peso) durante un periodo de por lo menos 20 meses.

115. El método tal y como se reivindica en la cláusula 80, caracterizado porque la amina lipofilica no se degrada químicamente más de un 5% (peso/peso) durante un periodo de por lo menos 20 meses.

116. El método tal y como se reivindica en la cláusula 80, caracterizado porque la amina lipofilica no se degrada químicamente más de un 2% (peso/peso) durante un periodo de por lo menos 20 meses.

117. Un compuesto de liposoma estable y estéril tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque muestra una o más de las siguientes características durante un periodo de por lo menos un año después del autoclaveado y almacenamiento a una temperatura superior al punto de congelación del compuesto : (i) un cambio en el porcentaje de encapsulación de no más de 5%; (ii) un cambio en la concentración de fosfolxpidos de no más de un 10% por peso; (üi) un cambio den la concentración de la amina lipofilica debido a hidrólisis y/o oxidación quimica de no más de un 5% por peso; (iv) ausencia de formación de agregados visibles; (v) un cambio en el diámetro mediano de masa de no más de un 10% según se determina ópticamente .

118. Un compuesto de liposoma estable tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porgue se prepara por el método de la cláusula 79.

119. Un compuesto de liposoma estable y estéril tal y como se reivindica en la cláusula 41, caracterizado porque se prepara por el método de la cláusula 80.

120. Un compuesto farmacéutico que comprende de un compuesto liposomal tal y como se reivindica en cualesquiera de las cláusulas 1 a 78.

121. El uso de un compuesto de liposoma de tal y como se reivindica en cualquiera de las cláusulas 1 a 78, como un medicamento.

122. El uso tal y como se reivindica en la cláusula 121, caracterizado porque el medicamento es administrado vía inhalación a través del sistema pulmonar, tópicamente o parentalmente .

123. El uso tal y como se reivindica en la cláusula 122, caracterizado porque el fármaco tópico es apropiado para su administración oftálmica .

124. El uso tal y como se reivindica en la cláusula 122, caracterizado porque el medicamento es apropiado para administración pulmonar.

125. Un dispositivo que contiene un compuesto de liposoma estable tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque son gotitas para la inhalación del compuesto por un paciente .

126. Un estuche para el suministro del fármaco a un paciente, el estuche consta de instrucciones para su uso, un dispositivo que contiene el compuesto de liposoma estable tal y como se reivindica en la cláusula 1 caracterizado porque es capaz de generar por aerosol gotitas del compuesto para ser inhaladas por el paciente.

127. ün método para aumentar la estabilidad de los compuestos de liposoma, dicho método consta de los siguientes pasos : (a) proporcionar un medio acuoso apropiado; (b) proporcionar un fosfolípido apropiado; (c) proporcionar por lo menos un fármaco que por lo menos pueda ser parcialmente encapsulado en los liposomas, y ser seleccionado de: (i) una amina lipofílica y un ácido farmacéuticamente aceptable, donde el ácido farmacéuticamente aceptable se selecciona de un ácido orgánico o inorgánico, y (ii) una sal ácida orgánica de una amina lipofílica farmacéuticamente aceptable, y opcionalmente un ácido orgánico farmacéuticamente aceptable . en donde la cantidad de ácido farmacéuticamente aceptable presente en el compuesto sea tal que el pH de los compuestos del liposoma sea menor a o aproximadamente igual al pKa del grupo amino de la amina lipofílica farmacéuticamente activa ; combinar el medio acuoso, fosfolípido y fármaco para formar el compuesto de liposoma; y autoclavear el dicho compuesto de liposoma a condiciones efectivas para esterilizar los dichos compuestos, permitiendo por lo tanto compuestos con estabilidad aumentada en relación a la estabilidad del compuesto antes del autoclaveado.

128. El método tal y como se reivindica en la cláusula 127, caracterizado porque el paso de autoclaveado se efectúa a temperatura de unos 121°C durante un mínimo de 15 minutos bajo una atmósfera inerte.

129. El método tal y como se reivindica en la cláusula 128, caracterizado porque la atmósfera inerte durante el autoclaveado consta de argón o nitrógeno.

130. Un método para identificar una fase estable del compuesto de liposoma, el método consta de los siguientes pasos : (a) proporcionar Un compuesto de liposoma que conste de un fosfolípido, una solución acuosa, un fármaco, y opcionalmente etanol y un esterol, ópticamente determinar el diámetro mediano de masa (d(0.5)) valor del compuesto de liposoma; centrifugar el compuesto de liposoma entre unos 1000 g y unos 5000 g, a unos 4°C durante unas 2 horas; (d) ópticamente determinar el diámetro mediano de masa (d(0.5)) valor de la porción supernadante de la solución del compuesto de liposoma después del paso (c) centrifugado; calcular la proporción del diámetro mediano de masa (d(0.5)) valor de distribución del tamaño de partícula de la solución después del centrifugado a aquel de la solución antes del centrifugado . en donde la fase estable del compuesto de liposoma se identifica como tal si el compuesto tiene un proporción en el paso (e) de unos 0.6 o mayor.

131. Un método tal y como se reivindica en la cláusula 130, caracterizado porque la fase estable del compuesto de liposoma se identifica como tal si el compuesto tiene una proporción en el paso (e) de unos 0.8 ó mayor.

132. Un método tal y como se reivindica en la cláusula 130, caracterizado porque antes del centrifugado el compuesto es autoclaveado .

133. Un compuesto de liposoma que tiene una estabilidad que ha sido aumentada por el método tal y como se reivindica en cualesquiera de la cláusulas 127-129.

134. Una fase estable del compuesto de liposoma identificado por el método tal y como se reivindica en cualesquiera de las cláusulas 130-132. R E S U M E N Una composición de liposoma estable para entregar un agente farmacéutico, la composición comprende: (a) un medio acuoso adecuado; (b) liposomas formados de un fosfolípido adecuado; (c) por lo menos un agente farmacéutico estando por lo menos parcialmente encapsulado en los liposomas, y que está seleccionado de: (i) una amina lipofílica y un ácido farmacéuticamente aceptable, en donde el ácido farmacéuticamente aceptable es seleccionado de un ácido orgánico o inorgánico, y (ii) una sal de ácido orgánico farmacéuticamente aceptable de una amina lipofílica, y opcionalmente un ácido orgánico farmacéuticamente aceptable; en donde la cantidad del ácido farmacéuticamente aceptable presente en la composición es tal que el pH de la composición de liposoma es menor que o aproximadamente igual al pKa del grupo amino de la amina lipofílica farmacéuticamente activa. Las composiciones, equipos y métodos para la preparación de la misma, así como métodos para mejorar adicionalmente la estabilidad de la composición mediante autoclaves, y métodos para la identificación de composiciones de liposoma estables de la presente invención son igualmente proporcionados .