MXPA05004727A - Productos y metodos para mantener o incrementar los niveles de ceramida en la piel. - Google Patents
Productos y metodos para mantener o incrementar los niveles de ceramida en la piel.Info
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Abstract
Estan descritos los metodos y productos tales como panos limpiadores y absorbentes para proporcionar un beneficio para la salud de la piel cuando se utilizan en la forma intentada. Mas especificamente, los datos descritos aqui comprenden un agente, tal como un extracto botanico el cual es capaz de aumentar la actividad de esfingomielinasa de acuerdo a la prueba de analisis de actividad de esfingomielinasa y/o disminuir la actividad de ceramidasa de acuerdo a una prueba de analisis de actividad de ceramidasa. Mediante el aumentar la actividad de la esfingomielinasa y/o disminuir la actividad de ceramidasa, los agentes en combinacion con los productos descritos aqui son capaces de mantener o aumentar el nivel de ceramidas llevando a una salud de la piel mejorada.
Description
PRODUCTOS Y METODOS PARA MANTENER O INCREMENTAR LOS NIVELES DE CERAMIDA EN LA PIEL
Antecedentes de la Invención
La presente invención se relaciona a productos y métodos para mantener o aumentar la concentración intracelular de ceramidas . Más particularmente, la presente invención se relaciona al uso de ciertos agentes, tales como extractos botánicos, en paños limpiadores y productos absorbentes para mantener o aumentar las concentraciones de ceramida intracelular. Las concentraciones de ceramida intracelular son mantenidas o aumentadas en la presente invención al introducir uno o más agentes capaces de aumentar la actividad de esfingomielinasa y/o de disminuir la actividad de la ceramidasa.
La ceramida (N-acilesfingosina) es un metabolito lxpido y es un importante mensajero intracelular que es liberado dentro de una célula dentro de pocas horas de estimulación con varios agentes. La ceramida es vista como un segundo mensajero en el contexto de la conducción de transducción de la señal esfingomielina, y cumple un papel importante en el mecanismo humectante y el mecanismo de barrera de la piel . Las ceramidas son liberadas por esfingomielina como un resultado del efecto enzimático de las esfingomielinasas que son formadas de fosfolipasa C específica para la esfingomielina. Dentro de las células, la ceramida puede influenciar el crecimiento y la diferenciación, regular la secreción de proteína, inducir la fragmentación y apóptosis del ADN, y aumentar la síntesis y la secreción de citoquinas. La hidrólisis de la esfingomielina ocurre rápidamente después de la exposición de las células a la esfingomielinasa exógena o agonista que activa las esfingomielinasas endógenas .
La importancia de las ceramidas en el metabolismo y salud de la piel está bien documentada. Los principales constituyentes celulares de la epidermis son los queratinocitos, melanocitos, células de Langerhans, fibroblastos, células endoteliales y macrofagos. El espacio intracelular consiste de lípidos neutrales, glicoproteinas, productos de degradación de proteína, desmosomas, enzimas activas, productos de las glándulas sebáceas, y ceramidas. En tanto que esta estructura de bloque y mortero está intacta, la piel es dotada con ambas una capa de protección y un filtro selectivamente permeable.
Durante el proceso de diferenciación de la epidermis, que inicia con la división de las células en la capa basal y termina con la muerte de los queratinocitos y el desarrollo de la barrera de lípido, las células modifican su capacidad de síntesis de lípido. El resultado es que la capa basal de la epidermis está caracterizada por fosfolípidos y colesterol, mientras que la capa más externa está caracterizada por colesterol, ácidos libres grasos, y ceramidas. Los lípidos de la capa córnea, el principal componente de la cual consiste de esfingolípidos, juegan un papel crucial en el mantenimiento de la barrera de permeabilidad de la epidermis al agua. Los esfingolípidos son exudados de los cuerpos lamelares de las células granulares de la epidermis . Las ceramidas, que hacen casi el 50% de la capa córnea de la piel, son los lípidos principales polares de la capa córnea y juegan un papel fundamental en la función de barrera de la piel contra la filtración de agua en la adhesión de células y en la diferenciación de la epidermis, como se mencionó antes.
Como la apariencia de la superficie de la piel, sus propiedades funcionales también experimentan cambios con el envejecimiento. La piel envejecida se caracteriza por un reducido contenido de agua en la capa córnea asociada con reducida filtración transdérmica del agua. Se ha mostrado que la concentración de ceramida disminuye con la edad, y esta disminución puede ser responsable de la deshidratación de la piel que se observa en el curso del envejecimiento. Además, anormales niveles de ceramida (deficiencias) han sido detectados en la eczema atópica, dermatosis y dermatitis, dermatitis atópica y la psoriasis.
Además de la edad, otros factores externos pueden reducir la cantidad de ceramidas presentes en la piel y lleva a problemas de irritación de la piel. Por ejemplo, la enzima ceramidasa puede degradar a las ceramidas a esfingosina y ácido no graso con el contacto con las ceramidas. La ceramidasa está presente en la piel en ciertas capas donde desempeña una función de conversión benéfica. Sin embargo, cuando la ceramidasa es introducida en la piel desde una fuente externa tal como bacterias (ceramidasa bacterial) presente en las heces o las secreciones nasales, las ceramidasas pueden degradar las ceramidas como se mencionó antes por tanto reduciendo la concentración intercelular de las ceramidas y llevando a secar la piel ajada.
A la luz de lo anterior, es útil el mantener altos niveles de ceramidas en la piel para mantener y promover una piel saludable. Como tal, puede ser ventajoso el producir productos para el cuidado personal, tales como paños limpiadores húmedos y productos absorbentes para el cuidado, capaces de mantener o aumentar los niveles de ceramidas en la piel. Debido a que el controlar los niveles de ceramida en la piel por la adición de ceramidas naturales no es práctico debido al enorme gasto del lípido purificado, continúa a haber una necesidad por productos económicos que contengan agentes capaces de mantener o aumentar los niveles de ceramidas en la piel .
Síntesis de la Invención
La presente invención se relaciona a productos y métodos para mejorar la salud de la piel al mantener o aumentar la concentración de ceramidas intercelulares. Más específicamente, la presente invención se relaciona a productos tales como paños limpiadores húmedos y a artículos absorbentes que contienen agentes que son capaces de mejorar la salud de la piel que contactan durante el uso normal por el mantenimiento o aumento de la concentración intercelular de ceramidas a través de varios mecanismos .
Los productos de la presente invención pueden comprender un agente, tal como un extracto botánico, para aumentar la actividad de la esfingomielinasa para la producción de ceramidas por al menos alrededor de 100%. En una incorporación, el agente de aumento de la actividad de la esfingomielinasa aumenta la actividad de la esfingomielinasa por al menos alrededor de 100% como se determina por una Prueba de Proyección de la Actividad de la Esfingomielinasa señalada aquí. Debido a que la actividad de la esfingomielinasa es requerida para la producción de ceramidas intercelulares, un aumento en tal actividad enzimática resulta en aumentados niveles de ceramida. Además, los productos de la presente invención pueden comprender un agente de disminución de la actividad de la ceramidasa para disminuir la actividad de la ceramidasa por al menos alrededor de 50%. En una incorporación, el agente de disminución de la actividad de la ceramidasa disminuye la actividad de la ceramidasa por al menos alrededor de 50% como se determina por la Prueba de Exhibición de Actividad de la Ceramidasa CAST señalada aquí . Debido a que las ceramidasas, tales como ceramidasas bacteriales presentes en la piel, pueden degradar las ceramidas, una reducción en la actividad de las ceramidasas reduce la cantidad de ceramidas destruidas. Por el aumento significativo de la actividad de la esfingomielinasa y/o la disminución de la actividad de la ceramidasa, los agentes descritos aquí significativamente mejoran la salud de la piel al mantener o aumentar el nivel de ceramidas en la piel .
Brevemente, por tanto, la presente invención está dirigida a un paño limpiador para mejorar la salud de la piel que comprende un sustrato de paño limpiador fibroso y un agente de aumento de la actividad esfingomielinasa para aumentar la actividad de esfingomielinasa para la producción de ceramidas por al menos alrededor de 100%.
La presente invención es además dirigida a un paño limpiador para mejora la salud de la piel que comprende un sustrato de paño limpiador fibroso y un agente para disminuir la actividad de la ceramidasa para disminuir la actividad de la ceramidasa por al menos alrededor de 50%.
La presente invención es además dirigida a un paño limpiador que comprende un sustrato de paño limpiador fibroso y un agente para aumentar la actividad de la esfingomielinasa para aumentar la actividad de la esfingomielinasa para la producción de ceramidas por al menos alrededor de 100% y un agente para la disminución de la actividad de la ceramidasa para disminuir la actividad de la ceramidasa por al menos alrededor de 50%.
La presente invención es además dirigida a un método para aumentar la concentración intercelular de las ceramidas . El método comprende contactar la piel con un agente para aumentar la actividad de la esfingomielinasa para aumentar la actividad de la esfingomielinasa para la producción de ceramidas por al menos alrededor de 100%.
Otros objetos y características de esta invención serán en parte aparentes y en parte señalados a continuación.
DESCRIPCION DETALLADA DE LAS PREFERIBLES INCORPORACIONES
De conformidad con la presente invención, se ha descubierto que ciertos agentes, tales como ciertos extractos botánicos, pueden utilizarse en productos comunes para mantener o aumentar la concentración de ceramidas en la piel y por tanto mejorar la salud de la piel. Algunos de los agentes descritos aquí son capaces de aumentar la actividad de la esfingomielinasa por al menos alrededor de 100% de conformidad a una Prueba de Exhibición de la Actividad de Esfingomielinasa (SAST) señalada aquí . Por el significativo aumento de la actividad de la esfingomielinasa, la tasa a la cual las ceramidas son producidas es aumentada llevando a una más alta concentración intercelular de ceramidas. Adicionalmente o alternativamente, los productos para el cuidado personal de la presente invención también pueden mejorar la salud de la piel al comprender a un agente capaz de disminuir la actividad de la ceramidasa por al menos alrededor de 50% de conformidad con la Prueba de Exhibición de la Actividad de la Ceramidasa señalada aquí . Por la reducción de la actividad de la ceramidasa en o cerca de la superficie de la piel, el nivel de destrucción de las ceramidas es reducido resultando en una más alta concentración de compuestos activos de ceramida. Además, se ha descubierto que ciertos co-factores orgánicos e inorgánicos pueden usarse en combinación con uno o más de los agentes descritos aquí para proporcionar adicionales beneficios a la piel por la ulterior estimulación de la esfingomielinasa para aumentar la producción de ceramidas .
Los productos para el cuidado personal de la presente invención contienen al menos un agente, tal como un extracto botánico, el cual es capaz de mejorar la salud de la piel contactada por el producto para el cuidado personal durante el uso normal. Numerosos productos para el cuidado personal pueden usarse con los agentes descritos aquí de conformidad con la presente invención para mejorar la piel del usuario. Por ejemplo, uno o más de los agentes y/o co-factores descritos aquí pueden usarse en combinación con los paños limpiadores, tales como paños limpiadores húmedos, paños limpiadores de mano, paños limpiadores de cara, paños limpiadores cosméticos, paños limpiadores para el hogar, paños limpiadores industriales, paños limpiadores secos y similares, para mejorar la salud de la piel por el mantenimiento o aumento del nivel de ceramida en ella. Materiales adecuados para el sustrato del paño limpiador son bien conocidos para aquellos con habilidad en el arte, y son típicamente hechos de material fibroso de hoja que puede ser ya sea un tejido o un no tejido. Por ejemplo, los paños limpiadores que incorporan a los agentes descritos aquí para mejorar la salud de la piel pueden incluir materiales de hoja fibrosa no tejidos que incluyen materiales tejidos soplados con fusión, coformados, colocados por aire, cardados y unidos, materiales hidro-enredados, y de combinaciones de los mismos. Tales materiales pueden comprenderse de fibras sintéticas o naturales, o de una combinación de las mismas. Típicamente, los paños limpiadores definen un peso base desde alrededor de 25 a alrededor de 120 gramos por metro cuadrado y deseablemente desde alrededor de 40 a alrededor de 90 gramos por metro cuadrado.
En una particular incorporación, los paños limpiadores que incorporan a los agentes descritos aquí comprenden un hoja base coformada de micro-fibras poliméricas y de fibras de celulosa que tiene un peso base desde alrededor de 60 a alrededor de 80 gramos por metro cuadrado y deseablemente de alrededor de 75 gramos por metro cuadrado. Tales hojas de base coformada son fabricadas generalmente como se describe en la patente de los Estados Unidos de América número 4,100,324 , la cual es incorporada por referencia. Típicamente, tales hojas base coformadas comprenden una matriz formada por gas de micro-fibras sopladas con fusión poliméricas de termoplástico, tales como, por ejemplo, micro-fibras de polipropileno, y de fibras de celulosa, tales como, por ejemplo, fibras de pulpa de madera.
Los relativos porcentajes de las micro-fibras poliméricas y las fibras de celulosa en la hoja base coformada pueden variar sobre un amplio rango dependiendo con las deseadas características de los paños limpiadores húmedos. Por ejemplo, la hoja base coformada puede comprender desde alrededor de 20 a alrededor de 60 por ciento por peso, y más deseablemente desde alrededor de 30 a alrededor de 40 por ciento por peso de las micro-fibras poliméricas con base en el peso seco de la hoja base coformada siendo usada para proporcionar los paños limpiadores .
Alternativamente, los paños limpiadores que incorporan a los agentes descritos aquí comprenden un compuesto que incluye múltiples capas de materiales. Por ejemplo, los paños limpiadores pueden incluir un compuesto de tres capas que incluye una película elastomérica o una capa soplada con fusión entre dos capas coformadas como se describió antes. En tal con iguración, las capas coformadas pueden definir un peso base desde alrededor de 15 a alrededor de 30 gramos por metro cuadrado y la capa elastomérica puede incluir un material de película tal como una película de polietileno metaloceno.
Como se mencionó antes, un tipo de paño limpiador adecuado para usar en combinación con los agentes descritos aquí para mejorar la salud de la piel incluye a paños limpiadores húmedos que contienen una solución o fórmula líquida. La cantidad de solución contenida dentro de cada paño limpiador húmedo puede variar dependiendo con el tipo de material siendo usado para mejorar al paño limpiador húmedo, el tipo de solución que es usada, el tipo de recipiente siendo usado para almacenar a los paños limpiadores húmedos, y el deseado uso final de los paños limpiadores húmedos. Generalmente, cada paño limpiador húmedo puede contener desde alrededor de 150 a alrededor de 600 por ciento por peso y deseablemente desde alrededor de 250 a alrededor de 450 por ciento por peso de solución con base en el peso seco del paño limpiador para un mejorado limpiado. En un particular aspecto, donde los paños limpiadores húmedos están hechos de un material coformado que comprende desde alrededor de 30 a alrededor de 40 por ciento por peso de micro-fibras poliméricas con base de peso seco del paño limpiador, la cantidad de solución contenida dentro del paño limpiador húmedo es desde alrededor de 300 a alrededor de 400 por ciento por peso y deseablemente desde alrededor de 330 por ciento por peso con base en el peso seco del paño limpiador húmedo. Si la cantidad de solución es menos que el rango antes identificado, el paño limpiador húmedo puede ser muy seco y no adecuadamente se desempeña. Si la cantidad de solución es mayor que el rango antes mencionado, el paño limpiador húmedo puede sobresaturarse y empaparse y la solución puede inundar el fondo del recipiente que sostiene a los paños limpiadores.
En otra incorporación, los productos para el cuidado personal que comprenden uno o más de los agentes descritos aquí para mejorar la salud de la piel pueden incluir a productos para el cuidado personal absorbentes tales como pañales, calzoncillos de aprendizaje, prendas para la incontinencia de adultos, toallas femeninas, toallas de papel, tampones, almohadillas para los senos, almohadillas interlabiales, productos para la administración de heridas, y tisú de baño. Tales productos absorbentes son comúnmente utilizados para absorber varios fluidos incluyendo fluidos corporales tales como sangre, fluido menstrual, secreciones nasales, heces, y orina. Los materiales y los métodos para hacer tales productos absorbentes son bien conocidos para aquellos con habilidad en el arte. Cuando se utilizan en su intencionada manera, los productos absorbentes para el cuidado personal incluyendo al agente o agentes descritos aquí contactan a la piel de tal forma que el agente puede interactuar con los compuestos de la piel que ocurren naturalmente y mejorar la salud de la piel .
En una incorporación de la presente invención, un agente capaz de aumentar la actividad de la enzima esfingomielinasa es introducido en o sobre un producto para el cuidado personal para mejorar la salud de la piel contactada por el producto para el cuidado personal al aumentar la producción de ceramida en la piel por vía de la trayectoria descrita antes. Como previamente se describió, la esfingomielinasa es una enzima que hidroliza al lípido esfingomielina, un componente fosfolípido de las membranas de la célula, para producir ceramida. Como se usa aquí, la frase "aumentada la actividad de la enzima esfingomielinasa" y similares frases significan que la actividad enzimática de la esfingomielinasa sobre la esfingomielina es aumentada en presencia del agente, como se compara a la actividad de la esfingomielinasa sobre la esfingomielina en ausencia del agente. Al introducir uno o más agentes descritos aquí en o sobre un producto para el cuidado personal, los agentes contactan a la piel durante el uso y pueden interactuar con la esfingomielinasa que ocurre naturalmente para aumentar la actividad de la esfingomielinasa. Además para interactuar con la esfingomielinasa que ocurre naturalmente, el agente también puede interactuar con la esfingomielinasa que puede estar presente en los exudados, tales como las heces o las secreciones nasales, para facilitar la producción de ceramida en o cerca de la superficie de la piel. La aumentada actividad de la esfingomielinasa resulta en un aumento de la hidrólisis de la esfingomielina y la producción de ceramidas a través de las reacciones in situ sobre o cerca de la superficie de la piel, las cuales son benéficas y mejoran la salud de la piel como se describió antes.
Preferiblemente, el agente, o una combinación de agentes introducidos en o dentro del producto para el cuidado personal, es capaz de aumentar la actividad de la esfingomielinasa por al menos alrededor de 100%, más preferiblemente al menos alrededor de 200%, aún más preferiblemente al menos alrededor de 300%, y más preferiblemente al menos alrededor de 400%, como se compara a la actividad de la esfingomielinasa en ausencia del agente. En una incorporación, el agente o la combinación de agentes introducidos en o sobre el producto para el cuidado personal, es capaz de aumentar la actividad de la esfingomielinasa por al menos alrededor de 100%, más preferiblemente al menos alrededor de 200%, aún más preferiblemente al menos alrededor de 300%, y más preferiblemente al menos alrededor de 400% como se determina por la Prueba de Exhibición de la Actividad de la Esfingomielinasa (SAST) señalada aquí. Tales aumentos en la actividad de la esfingomielinasa pueden resultar en aumentados niveles intercelulares y extracelulares de ceramidas, que mejoran la salud de la piel. El agente de aumento de la actividad de la esfingomielinasa es preferiblemente por el aumento de la actividad de la esfingomielinasa por al menos alrededor de 100% como se anoto antes. Mientras que este es el propósito y la capacidad del agente bajo muchas circunstancias, se nota que bajo ciertas condiciones de aplicación y condición de la piel, el actual aumento en la actividad experimentada en la piel puede ser otro que al menos alrededor del 100% aún cuando el agente es por el aumento de tal actividad por al menos alrededor de 100%.
Prueba de Exhibición de la Actividad de la Esfingontielinasa (SAST)
Los agentes, tales como extractos botánicos y compuestos relacionados, por ejemplo, son probados por su capacidad para aumentar la actividad de la esfingomielinasa en un sistema que contiene esfingomielina y esfingomielinasa. Un aumento en la actividad de la esfingomielinasa es un aumento en la hidrólisis de la esfingomielina y una aumentada producción de ceramida. La Prueba de Exhibición de la Actividad de la Esfingomielinasa (SAST) para determinar la eficacia de un agente es completada como sigue:
Preparación de las Soluciones de Prueba:
Paso 1 : Preparación de una Solución de Prueba que Comprende Esfingomielinasa, Esfingomielina y un Agente: Combinar lo siguiente para preparar una solución de prueba de 100 micro-litros: 1) 10 micro-litros de agente (tal como un extracto botánico, por ejemplo) donde el agente es una solución acuosa o aceite (si el agente es un polvo o sólido, preparar 10 micro-litros de una solución de 0.1 microgramos/ mililitro al disolver la apropiada cantidad de polvo o de sólido en la salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4); 2) 10 micro-litros de una esfingomielinasa de 0.1 microgramo/mililitro (número de catálogo S7651, de la Sigma Chemical, de St. Louis, Missuri (o su equivalente) en una salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4; 3) 10 micro-litros de una esfingomielina BODIPY FL C5 de 250 microgramos/mililitro (Sondas Moleculares, de Eugene, Oregon (o su equivalente) ) en una solución salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4; y 4) 70 micro-litros de salina de fosfato amortiguado,
Paso 2 : Preparación de una Solución de Prueba de Control que Comprende Esfingomielinasa, y Esfingomielina: Combinar lo siguiente para preparar una solución de prueba de 100 micro-litros: 1) 10 micro-litros de una solución de 0.1 microgramos/ mililitro de 0.1 microgramos/mililitro de esfingomielinasa enana solución salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4; 2) 10 micro-litros de una esfingomielina BODIPY FL C5 de 250 microgramos/mililitro en una solución salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4; y 3) 80 micro-litros de salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4.
Paso 3 : Preparación de una Solución de Prueba de Control que Comprende Esfingomielina: Combinar lo siguiente para preparar una solución de prueba de 100 micro-litros: 1) 10 micro-litros de una esfingomielina BODIPY FL C5 de 250 microgramos/mililitro en una solución salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4; y 2) 90 micro-litros de salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4.
Paso 4 : Preparación de una Solución de Prueba de Control que Comprende un agente y Esfingomielina: Combinar lo siguiente para preparar una solución de prueba de 100 micro-litros: 1) 10 micro-litros de agente donde el agente es una solución acuosa o aceite (si el agente es un polvo o sólido, preparar 10 micro-litros de una solución de 0.1 microgramos/mililitro al disolver la apropiada cantidad de polvo o sólido en la salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4; 2) 10 micro-litros de una esfingomielina BODIPY FL C5 de 250 microgramos/mililitro en una solución salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4; y 3) 80 micro-litros de salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4.
Ensayo:
Paso 1: Agitar cada una de las cuatro soluciones de prueba por 30 minutos en un agitador de laboratorio (por ejemplo, un S/P Vortrex-Genie; de Deerfield, Illinois, a un ajuste de alrededor de 6) , a 25 grados centígrados para completamente mezclar cada solución de prueba y permitir la interacción química y la reacción entre los componentes de la mezcla de prueba.
Paso 2 : Añadir 1 mililitro de una mezcla al 2:1 (por volumen) de cloroformo:metanol para cada solución de prueba para detener las reacciones químicas . Después de añadir la mezcla de cloroformo:metanol, cada solución de prueba es agitada en torbellino (por ejemplo, en una S/P Vortrex-Genie; de Deerfield, Illinois, a un ajuste de alrededor de 6} por un período de tiempo de alrededor de 1 minuto para asegurar que la mezcla de cloroformo ¡metanol es completamente distribuida por toda la mezcla de prueba.
Paso 3 : Remover 0.8 mililitros de solución desde la fase orgánica de cada solución de prueba e introducir la solución removida en un vial de cromatografía de delgada capa para ulterior análisis .
Procedimiento de Cromatografía de Delgada Capa:
Paso 1: Introducir 5 micro-litros de una solución de prueba en una placa de cromatografía de delgada capa, tal como una placa 60 de gel de silicio de cromatografía de delgada capa (de MERCK, de Damstady, Alemania) , o una placa similar. El salpicado de la solución de prueba sobre la placa puede hacerse con un Probador 4 CAMAG Auto TLC (de Muttenz, Suiza) por ejemplo, o un dispositivo similar.
Paso 2 : Desarrollar cada solución de prueba al introducir una mezcla de cloroformo:metanol : hidróxido de amonio a 90:20:0.5 (por volumen) sobre cada placa y dejando a la mezcla correr a una longitud de 8 centímetros.
Paso 3 : Cuantificar los productos de desdoblamiento fluorescente sobre las placas de cromatografía de delgada capa por el análisis de imagen utilizando un Sistema de Reflejo de Placa de Alpha Innotech Flourchem (de San Leandro, California) , o un sistema similar. Cada placa típicamente contiene un máximo de diez muestras de prueba, tres muestras de control positivo (sustrato y una esfingomielinasa) y una muestra de control negativa (sustrato y ninguna enzima) . Las placas fueron reflejadas por la iluminación con una fuente de luz ultravioleta (UV) (364 nanómetros) y una imagen digital fue tomada a través de un filtro de barrera de 585 nanómetros con el Flourchem Imager. Todas las bandas fluorescentes son analizadas utilizando el software de análisis de imagen Flourchem y la brillantez para cada banda es determinada. El software Flourchem determina el Valor de Densidad Integrado (IDV) y el área (pixeles) para cada banda fluorescente. De esta información, un valor de brillantez es calculado por el software Fluorchem. El siguiente cálculo es usado:
Brillantez = Valor de Densidad Integrada / Área
Donde el Valor de Densidad Integrada (IDV) es la suma de todos los valores de píxel, AREA es el tamaño (en pixeles) de la región encerrada por la caja de 2000-2500 pixeles de tamaño. Para calcular el efecto de los compuestos en la actividad de enzima, la brillantez del control negativo es primero restada de todas las muestras. Entonces la banda del compuesto de prueba sobre una placa es dividida por el valor promedio de las tres bandas de control positivo por la misma placa. Un valor arriba de 1 indica un resaltador de la esfingomielinasa, un valor por debajo de 1 indica un inhibidor.
Adecuados agentes para usar en combinación con los productos para el cuidado personal descritos aquí para aumentar la actividad de la esfingomielinasa por al menos alrededor de 100% para finalmente producir una cantidad aumentada de ceramidas intercelulares incluyen a ambos los extractos botánicos y otros compuestos. Específicamente, se ha encontrado que los siguientes agentes aumentan la actividad de la esfingomielinasa como se determina por la Prueba de Exhibición de la Actividad de la Esfingomielinasa descrita aquí por al menos alrededor de 100% y son adecuadas para usar de conformidad con la presente invención: Sedaplant Richter, Chlorella, Hexaplant Richter, Lavanda, Caléndula, Gota Kola PE 4:1, Espirulina, Manzanilla CL, Harpagophytum (Uña del Diablo) , Dragoderm, Phytoplenolin, Aloe Feroz HS, Extracto de Perejil de Mar, Escoba de carnicero HS, Ginseng Americano, Complejo Microta afa, y Activito de Té Verde Japonés Conc. Preferibles agentes son Chlorella, Lavanda, Espirulina, Dragoderm, Phytoplenolin, Aloe Feroz HS, y Ginseng Americano.
Cuando está presente sobre un sustrato de paño limpiador seco o sobre un producto absorbente, el agente para aumentar la actividad de esfingomielinasa está presente en una cantidad desde alrededor de 0.01% (por peso del substrato o producto tratado) a alrededor de 50% (por peso del substrato o producto tratado), preferiblemente desde alrededor de 0.01% (por peso del substrato o producto tratado) a alrededor de 10% (por peso del substrato o producto tratado) . Cuando está presente como parte de la fórmula liquida de un paño limpiador húmedo, el agente está presente en una cantidad desde alrededor de 0.01% (por el peso total de la fórmula liquida) a alrededor de 50% (por peso total de la fórmula líquida) , más preferiblemente desde alrededor de 0.01% (por peso total de la fórmula líquida) a alrededor de 10% (por peso total de la fórmula líquida) , y más preferiblemente desde alrededor de 0.01% (por peso total de la fórmula líquida) a alrededor de 10% (por peso total de la fórmula líquida) .
En otra incorporación de la presente invención, un agente capaz de disminuir la actividad de la enzima ceramidasa es introducida en o sobre un producto para el cuidado personal para mejorar la salud de la piel contactada por el producto para el cuidado personal por el mantenimiento o el aumento de la cantidad de ceramidas intercelular y extracelular. Como se mencionó antes, la ceramidasa es una enzima que puede destruir a las ceramidas. Aún cuando la ceramidasa, que está naturalmente presente en la piel, desempeña una función válida y necesaria en algunas capas de la piel, las ceramidasas introducidas sobre la superficie de la piel o en las capas superiores de la piel desde fuentes externas, tales como ceramidasas bacteriales, que pueden estar presentes en la materia fecal, por ejemplo, pueden destruir a las ceramidas y llevar a varios problemas de la piel como se describió antes. Como se usa aquí, la frase "disminución de la actividad de la enzima ceramidasa" significa que la actividad enzimática de la ceramidasa es disminuida en presencia del agente en comparación a la actividad enzimática de la ceramidasa en ausencia del agente. Al introducir los agentes descritos aquí en o sobre un producto para el cuidado personal, el agente contacta a la piel durante el uso y puede interactuar con las ceramidasas depositadas en ella y reducir la actividad enzimática de las ceramidasas . Esto resulta en una disminución en la destrucción de las ceramidas .
El agente, o la combinación de agentes, introducidos en o sobre el producto para el cuidado personal preferiblemente reducen la actividad enzimática de la ceramidasa por al menos alrededor de 50%, más preferiblemente al menos alrededor de 75%, y más preferiblemente al menos alrededor de 90% en comparación a la actividad de ceramidasas en ausencia del agente. En una incorporación, el agente o combinación de agentes, introducidos en o sobre el producto para el cuidado personal preferiblemente reduce la actividad enzimática de la ceramidasa por al menos alrededor de 50%, más preferiblemente al menos alrededor de 75%, y más preferiblemente al menos alrededor de 90% en comparación a la actividad de ceramidasa en ausencia del agente como se determina por una Prueba de Exhibición de la Actividad de la Cermidasa (CAST) establecida aquí. El agente de reducción de la actividad de la ceramidasa es preferiblemente para disminuir la actividad de la ceramidasa por al menos alrededor de 50% como se anotó antes. Mientras que este es el propósito y la capacidad del agente bajo muchas circunstancias, se anota que bajo ciertas condiciones de aplicación y condición de la piel, la actual disminución en la actividad experimentada sobre la piel puede ser otra que al menos alrededor de 50% aún cuando el agente es para la disminución de tal actividad por al menos alrededor de 50%.
Prueba de la Exhibición de Actividad de la Ceramidasa (CAST)
Los agentes, tales como extractos botánicos y compuestos relacionados, por ejemplo, son probados por su capacidad para disminuir la actividad de la ceramidasa en un sistema de ceramidas/ceramida. Una disminución en la actividad de la ceramidasa resulta en un aumento en el nivel de ceramidas. La Prueba de Exhibición de la Actividad de la Ceramidasa (CAST) es completada como sigue:
Preparación de las Soluciones de Prueba:
Paso 1 : Preparación de una Solución de Prueba que Comprende Ceramidasa (Extracto Fecal) , Ceramida y un Agente: Combinar lo siguiente para preparar una solución de prueba de 100 micro-litros ·. 1) 10 micro-litros de agente donde el agente es una solución acuosa o aceite (si el agente es un polvo o sólido, preparar 10 micro-litros de una solución de 0.1 microgramos/ mililitro al disolver la apropiada cantidad de polvo o de sólido en la salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4); 2) 10 micro-litros de un extracto fecal de bebé en una salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4, preparada por la extracción de 1 gramo de heces de bebé en 9 mililitros de salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4 y centrifugando la extracción por alrededor de 2 minutos seguida por la centrifugación para remover cualesquiera sólidos; 3) 10 micro-litros de 350 microgramos/mililitros de una ceramida C5 en una solución salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4.; 4) 70 micro-litros de salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4.
Paso 2 : Preparación de una Solución de Prueba de Control que Comprende Ceramidasa, y Ceramida: Combinar lo siguiente para preparar una solución de prueba de 100 micro-litros: 1) 10 micro-litros de extracto de heces de bebé en la salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4; 2) 10 micro-litros de una ceramida BODIPY FL C5 (Sondas Moleculares, de Eugene, Washington) de 250 microgramos/mililitro en una solución salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4; y 3) 80 micro-litros de salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4.
Paso 3 : Preparación de una Solución de Prueba de Control que Comprende Ceramida: Combinar lo siguiente para preparar una solución de prueba de 100 micro-litros: 1) 10 micro-litros de una ceramida BODIPY FL C5 de 250 microgramos/mililitro en una solución salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4; y 2) 90 micro-litros de salina de fosfato amortiguado, pH= 7.4.
Ensayo:
Paso 1: Dejar cada solución de prueba que permanezca estática a 25 grados centígrados por 18 horas para permitir la interacción y la reacción entre los componentes de la Solución de Prueba.
Paso 2: Añadir 200 micro-litros de una mezcla al
2:1 (por volumen) de cloroformo¡metanol para cada solución de prueba para detener las reacciones químicas . Después de añadir la mezcla de cloroformo :metanol, cada solución de prueba es agitada en torbellino por un período de tiempo de alrededor de 1 minuto para asegurar que la mezcla de cloroformo :metanol es completamente distribuida por toda la mezcla de prueba.
Paso 3 : Remover 0.8 mililitros de solución desde la fase orgánica de cada solución de prueba e introducir la solución removida en un vial de cromatografía de delgada capa para ulterior análisis .
Procedimiento de Cromatografía de Delgada Capa:
Paso 1: Introducir 10 micro-litros de una solución de prueba en una placa de cromatografía de delgada capa, tal como una placa 60 de gel de silicio de cromatografía de delgada capa como se describió antes.
Paso 2 : Desarrollar cada solución de prueba al introducir una mezcla de cloroformo:metanol:hidróxido de amonio a 90:20:0.5 (por volumen) sobre cada placa y dejando a la mezcla correr una longitud de 8 centímetros .
Paso 3 : Iluminar cada placa con una fuente de luz de 364 nanómetros y tomar fotografías con una adecuada cámara, tal como una cámara digital Kodak DC 40. La imagen digital es transferida como un archivo TIFF a un Sistema de Reflejo de Placa de Alpha Innotech Flourchem (de San Leandro, California) y analizar como se describió antes con similares controles de control positivo (sustrato y una ceramidasa) y una muestra de control negativa (sustrato y ninguna enzima) . Un valor arriba de 1 indica un resaltador de ceramidasas y un valor por debajo de 1 indica un inhibidor.
Adecuados para uso en combinación con los productos para el cuidado personal descritos aquí para disminuir la actividad de la ceramidasa por al menos alrededor de 50% para finalmente mantener o aumentar la cantidad de ceramidas en la piel incluyen a ambos los extractos botánicos y otros compuestos. Específicamente, se ha encontrado que los siguientes agentes disminuyen la actividad de la ceramidasa como se determina por la Prueba de Exhibición de la Actividad de la Ceramidasa descrita aquí por al menos alrededor de 50% y son adecuadas para usar de conformidad con la presente invención: Dragoderm, Complejo de Ceramida CLR (P) , Té Verde HS-Chilowt, Extracto de Hojas Comfrey, Proteína Hidrolizada de Soya, Glycoderm, Gel de Aloe 1:1 descolorado, Ginseng Americano, Aloe Feroz HS, y Phytoplenolin.
Cuando está presente sobre un sustrato de paño limpiador seco o sobre un producto absorbente, el agente para disminuir la actividad de ceramidasa está presente en una cantidad desde alrededor de 0.01% (por peso del substrato o producto tratado) a alrededor de 50% (por peso del substrato o producto tratado), preferiblemente desde alrededor de 0.01% (por peso del substrato o producto tratado) a alrededor de 10% (por peso del substrato o producto tratado) . Cuando está presente como parte de la fórmula líquida de un paño limpiador húmedo, el agente está presente en una cantidad desde alrededor de 0.01% (por el peso total de la fórmula líquida) a alrededor de 50% (por peso total de la fórmula líquida) , más preferiblemente desde alrededor de 0.01% (por peso total de la fórmula líquida) a alrededor de 10% (por peso total de la fórmula líquida) .
Sin estar atado a una particular teoría, parecería que los agentes descritos aquí para la reducción de la actividad de la enzima ceramidasa logran esto en una de dos formas, o a través de una combinación de ambas. Primero, los agentes pueden actualmente des-regularizar la producción de la ceramidasa desde la fuente externa, que puede ser bacterial. Por la interacción con las bacterias y des-regularizando, o apagando o reduciendo la producción de ceramidasa, la cantidad de ceramidas destruidas por la enzima ceramidasa es reducida conforme la concentración de ceramidasa es disminuida. Alternativamente, o en combinación con la des-regularización, los agentes pueden interactuar químicamente con las moléculas de ceramidasa y bloquear o atar uno o más sitios activos en la enzima de tal forma que la ceramidasa no es capaz, o al menos capaz, de reaccionar con y de destruir las ceramidas . Aún cuando este mecanismo solo no reduce laconcentración total de ceramidasas en o cerca de la superficie de la piel, efectivamente previene la destrucción de las ceramidas al reducir la actividad de la ceramidasa.
En una incorporación alternativa de la presente invención, un solo agente puede introducirse en o sobre un producto para el cuidado personal para producir un efecto dual; esto es, el agente actúa para aumentar la actividad de la esfingomielinasa y disminuir la actividad de ceramidasa simultáneamente. Por ejemplo, el Dragoderm ha sido mostrado para aumentar la actividad de la esfingomielinasa por más de 300% como se determina por la Prueba de Exhibición de la Actividad de Esfingomielinasa (SAST) señalada aquí y también ha sido mostrado que disminuye la actividad de ceramidasa por al menos alrededor de 90% como se determina por la Prueba de Exhibición de la Actividad de Ceramidasa (CAST) señalada aquí. Como tal, cuando el Dragoderm es introducido en o sobre el producto para el cuidado personal, produce el efecto dual de no solamente aumentar la actividad de la esfingomielinasa sobre la piel para finalmente producir un aumentado nivel de ceramidas, pero también disminuye la destrucción de ceramidas sobre la piel por la disminución de la actividad de la ceramidasa. Por tanto, el Dragonderm proporciona un beneficio dual que es altamente deseable. Junto con el Dragonderm, el Aloe Feroz HS, Ginseng Americano, y Phytophenolin han sido mostrados que no solamente aumentan la actividad de la esfingomielinasa, pero que también disminuyen la actividad de la ceramidasa.
En una incorporación adicional a la presente invención, una combinación de agentes puede ser utilizada para producir el efecto dual de aumentar la actividad de esfingomielinasa mientras que se disminuye la actividad de ceramidasa para producir un nivel incrementado de cerámidas en la piel para una salud de la piel mejorada. Por ejemplo, un agente capaz de aumentar la actividad de esfingomielinasa puede ser usada en combinación con un segundo agente capaz de disminuir la actividad de ceramidasa. Preferiblemente, a fin de no disminuir la efectividad global de la combinación de agentes, el agente utilizado para aumentar la actividad de esfingomielinasa no aumentará significativamente también la actividad de ceramidasa y el agente utilizada para disminuir la actividad de ceramidasa no disminuirá significativamente la actividad de esfingomielinasa. En una incorporación, por ejemplo, la Chlorella, la cual se ha mostrado que aumenta la actividad de esfingomielinasa formada de desde alrededor de 400% basado sobre la prueba de escaneo de actividad de esfingomielinasa SAST y que esta demostrado que no tiene efectos sobre la actividad de ceramidasa basados sobre la prueba de exploración de actividad de ceramidasa que puede ser combinada por el complejo de cerámida CAST el cual se ha demostrado que disminuye la actividad de ceramidasa por mas de alrededor de 90% basado sobre la prueba de exploración de actividad de ceramidasa CAST mientras que no se afecta significativamente la actividad de esfingomielinasa basados sobre la prueba de exploración de actividad de esfingomielinasa SAST.
En aún una incorporación adicional de la presente invención, los agentes descritos aquí para aumentar la actividad de la esfingomielinasa disminuye la actividad de la ceramidasa puede ser utilizados en combinación con un cofactor orgánico, el cual es capaz de aumentar la actividad de la esfingomielinasa para producir una cantidad incrementada de ceramidas . Los ejemplos de los cofactores orgánicos adecuados para usarse en combinación con los agentes descritos aquí para aumentar la actividad de esfingomielinasa incluyen la glutationa reducida y los extractos de hongos tales como Schixosaccharomyces, Lipomyces y Saccharomyces. Los cof ctores inorgánicos adecuados incluyen magnesio. Cuando esta presente sobre un substrato de paño limpiador seco o sobre un producto absorbente en combinación con un agente capaz de aumentar la actividad de esfingomielinasa, el cofactor está presente en una cantidad de desde alrededor de 0.01% (por peso del substrato o producto tratado) a alrededor de 10% (por peso del substrato o producto tratado) , preferiblemente de desde alrededor de 0.01% (por peso del substrato o producto tratado) a alrededor de 1% (por peso del substrato o producto tratado) . Cuando esta presente forma parte de la fórmula líquida de un paño limpiador húmedo con un agente capaz de aumentar la actividad de esfingomielinasa, el cofactor está presente en una cantidad de desde alrededor de 0.01% (por peso total de la fórmula líquida) a alrededor de 10% (por peso total de la fórmula líquida) , mas preferiblemente de desde alrededor de 0.01% (por peso total de la fórmula líquida) a alrededor de 1% (por peso total de la fórmula líquida) .
La presente invención esta ilustrada por el siguiente ejemplo el cual es meramente para los propósitos de ilustración y no debe verse como que limite el alcance de la invención o la manera en la cual esta puede ser practicada.
EJEMPLO En este ejemplo los extractos botánicos y otros compuestos fueron probados para determinar que efecto tuvo cada compuesto sobre la actividad de esfingomielinasa para la prueba de exploración de actividad de esfingomielinasa establecida aquí y sobre la actividad de acuerdo a la prueba de exploración de actividad de ceramidasa establecida aquí. Cada uno de los compuestos probados, la compañía en donde los compuestos fueron comprados, el número de producto del compuesto, y la forma física del compuesto se establecen en la tabla 1.
Tabla 1
Compuesto Compañía Número de Forma producto Física
Sedapla t Richter Chemisenes 732384 Acuoso Laboratorium, Berlin Chlorella Bio-botanica, 951289 Acuoso Haup uge, NY Hexaplant Richter Chemisches 732431 Acuoso Laboratorium, Berlin Lavanda Gattefosse, 21189 Acuoso Cedex, France Marigold Bell Flavors & 62565 Acuoso (caléndula) Fragantes, Inc. Northbrook Illinois Gotu Kola PE : 1 Bio-botanica 980657 Polvo Hauppauge NY Espirulina Bio-botanica 951288 Acuoso Hauppauge NY Manzanilla CL Dragoco , Totowa 2/033026 Acuoso NJ Harpagophytum Indexa- EG522 Acuoso International (garra del diablo) Sourcing, Uppersaddle River, NJ Dragoderm Dragoco, Totowa 1012550 Acuoso NJ Fitopleionolina Bio-botanica 980510 Acuoso Hauppauge NY Aloe Feroz HS Alban Muller 7114158 Aceite Internacional Northvale NJ Extracto de perej il Phillip Rocklel R10418 Acuoso del mar Escoba de carnicero Alban Muller 8025951 Acuoso HS Internacional Northvale NJ Ginseng americano Bio-botanica 9865 Acuoso Hauppauge NY Complejo icroat Nurtute nc . 970512-06 Acuoso afa Missoula, MT Activito de Active Organics, 300230-94 Líquido concentración de té Dallas, TX verde aponés Aceite de árnica Chemisches 732407 Aceite CLR Laboratorium Berlín Aceite de brasil Croda Parsippany, BR2-1004 Aceite NJ Aceite de cártamo Arista 33767 Aceite Industries, Darien CT Aceite de oliva Croda Parsippany, OL2-175 Aceite NJ Aceite de prémula Croda Parsyppany, IPH1-1059 Aceite de la tarde NJ Complejo de Chemisches 732207 Acuoso ceramida CLR (P) Laboratorium Berlin Aceite de zanahoria Chemisches 832526 Aceite CLR Laboratorium Berlin Aceite de caléndula Chemisches 832622 Aceite CLR Laboratorium Berlin Aceite de durazno Croda Parsipanny AP-167 Aceite
Aceite de St . Chemisches 732208 Aceite John' s Word CLR Laboratorium Berlin Te verde HS-Chilowt Alban Muller, 12373-00 Acuoso Montreuil Cedex France Biodynes TRF Brooks 39656 Acuoso (extracto de Industries, South levadura) Plainfield, NJ Extracto de hojas Bell Flavors & Reg: 062565 Acuoso Comfrey Fragance, No thbrook, IL Gel aloe 1 : 1 Tri- Industries Acuoso decolorizado Northvale, NJ Acetato tocofenil- Rocke Chem Acuoso alfa-Dl Aceite de borraja Arista Industries Aceite Darien, CT Proteína de soya Croda Parsippany, Hydrosoy Acuoso hidrolizada NJ 2000SA Complejo de péptido Chemisches 832641 Polvo de leche MPC Laboratorium Berlin Avena completa Croda Parsippany Cromoist 0- Acuoso hidrolizada NJ 25 Elastina Croda Parsippany, Crolastin Acuoso hidrolizada NJ Fosfato de Laureth Roíd , Cranbury Acuoso de potasio MAP NJ (0.2% en PBS) Mackeleen EN- 77 Mcinty e Group EN-77 Acuoso girasol University Park sedaminopropil 11 morfolina lactato, (0.25% en PBS) Tween 20 (0.1% en Sigma Chemical St Acuoso PBS) Lous Mo Aceite de girasol Croda Parsippany, SN2-104 Aceite NJ Aceite de aguacate Chemisches 832601 Aceite CLR Laboratorium, Berlin Glycoderm Chemisches GLYCODERM Acuoso Laboratorium, (P) Berlin
Prueba de exploración de actividad esfingomielinasa Cada unos de los compuestos antes mencionados fue probado respecto de su capacidad para aumentar la actividad de esfingomielinasa. Cada compuesto fue preparado como una solución de prueba en la misma manera como se establece aquí.
Paso 1: Preparación de la Solución de Prueba que comprende esfingomielinasa, esfingomeleina y compuesto de prueba : Una solución de prueba de 100 microlitros fue preparada mediante el combinar lo siguiente: (1) 10 microlitros de compuesto de prueba (el compuesto de prueba fue un polvo, una solución de 10 microlitros de 0.1 microgramos/mililitro de solución fue preparada mediante el disolver la cantidad apropiada de polvo en una solución de agua salada amortiguada con fosfato, pH=7.4 (VWR, Wet Chester, Pa) ; (2) 10 microlitros de 0.1 microgramos/mililitros de esfingomielinasa (Sigma Chemical de St Louis Missouri) en agua salada amortiguada con fosfato, pH=7.4 solución; (3) 10 microlitros de 250 microgramos/mililitro de BODIPY C5 esfingomeleina (Bodipy FL C5 esfingomeleina, Sondas Moleculares Eugene Oregon) en solución amortiguada con fosfato, pH=7.4 solución; y (4) 70 microlitros de agua salada amortiguada con fosfato, pH=7.4.
Paso 2 : Preparación de solución de prueba de control que comprende esfingomielinasa y esfingomeleina ; Una solución de prueba de 100 microlitros fue preparada mediante el combinar lo siguiente: (1) 10 microlitros de una solución de 0.1 microgramos/mililitro de esfingomielinasa de agua salada amortiguada con fosfato, pH=7.4; (2) 10 microlitros de una solución de 250 microgramos/mililitros de esfingomielina BODIPY FL C5 en agua salada amortiguada con fosfato, pH=7.4 y (4) 80 microlitros de agua salada amortiguada con fosfato,
Paso 3 : Preparación de solución de prueba de control que comprende esfingomielina : Una solución de prueba de 100 microlitros fue preparada mediante el combinar lo siguiente: (1) 10 microlitros una solución 250 microgramos/mililitros de BODIPY C5 esfingomeleina (Bodipy FL C5 esfingomeleina, en solución amortiguada con fosfato, pH=7.4 solución; y (2) 90 microlitros de agua salada amortiguada con fosfato, pH=7.4.
Paso 4 : Preparación de solución de prueba de control que comprende compuesto de prueba y esfingomielina: Una solución de prueba de 100 microlitros fue preparada mediante el combinar lo siguiente: (1) 10 microlitros de compuesto de prueba (si el compuesto de prueba fue un polvo, una solución de 10 microlitros de 0.1 microgramos/mililitro de solución fue preparada mediante el disolver la cantidad apropiada de polvo en una solución de agua salada amortiguada con fosfato, pH=7.4 (2) 10 microlitros de una solución de 250 microgramos/mililitro de BODIPY FL C5 esfingomieleina en agua salada amortiguada con fosfato, pH=7.4 solución; y (3) 80 microlitros de agua salada amortiguada con fosfato, pH=7. .
Ensayo
Paso 1 : Cada solución de prueba fue agitada por 30 minutos sobre un agitador de laboratorio a 25°C para mezclar cabalmente cada solución de prueba y permitir la interacción química y la relación entre los componentes de mezcla de prueba.
Paso 2: Un microlitro de una mezcla de 2:1 (por volumen) de cloroformo: metanol fue agregada a cada solución de prueba para retener las reacciones químicas . Después de la adición de la mezcla de cloroformo:metanol, cada una de la solución de prueba fue arremolinada por un período de tiempo para asegurar que la mezcla de cloroformo:metanol fue distribuida cabalmente a través de la mezcla de prueba.
Paso 3 : 0.8 mililitros de una solución f eron removidos de la fase orgánica de cada solución de prueba y se introdujeron en un recipiente de cromatografía de capa delgada para una análisis adicional .
Procedimiento de capa de Cromatografía de capa delgada :
Paso 1 : 5 microlitros de una solución de prueba fueron introducidos en una placa de gel de sílice de cromatografía de capa delgada 60 (MERCK, de Damstady, Alemania) . El manchado de la solución de prueba se hizo con un muestreador CAMAG Auto TLC 4 de Muttenz, Suiza.
Paso 2 : cada solución de prueba fue desarrollada mediante el introducir una mezcla de cloroformo :metanol : hidróxido de amonio de 90:20:0.5 (por volumen) sobre cada placa y se dejo que la mezcla corriera una longitud de 8 centímetros .
Paso 3 : cada banda fue cuantificada con un sistema de formación de imágenes de placa Alpha Innotech Flourchem Píate Imaging System (San Leandro California) . Cada placa contuvo un máximo de diez muestras con letra incluyendo tres muestras de control positivo y una muestra de control negativo. Las placas fueron formadas en imágenes mediante el iluminar con una fuente de luz ultravioleta (364 nm) y una imagen digital fue tomada a través de un filtro de barrera de 585 nm con un formador de imágenes Flourchem. Todas las bandas fluorescentes fueron analizadas usando el software de imagen Fluorchem y la brillantez para cada banda se determinó. El Flourchem determino el valor de densidad integrado (IDV) y el área (pixeles) para cada banda fluorescente . La brillantez fue entonces determinada de estos valores . Para calcular el efecto del compuesto sobre la actividad de enzima, la brillantez de control negativo fue primero restada de todas las muestras . La banda de compuesto de prueba sobre la placa fue dividida por el valor promedio de las tres bandas de control positivo para la misma placa.
Un valor arriba de 1 indica un mejorador de esfingomielinasa y un valor debajo de 1 indica un inhibidor.
Prueba de exploración de actividades de ceramidasa
Cada uno de los compuestos antes notados también fue probado por su habilidad para disminuir la actividad de ceramidasa. Cada compuesto fue preparado como una solución de prueba en la misma manera como se establece aquí.
Preparación de la solución de prueba:
Paso 1 : Preparación de la solución de prueba que comprende ceramidasa (extracto fecal) agente y ceramida. Una solución de prueba de 100 microlitros fue preparada mediante el combinar lo siguiente (1) 10 microlitros de un compuesto de prueba (si el compuesto de prueba fue un polvo, 10 microlitros de una solución de 0.1 microgramos/mililitro fue preparada mediante el disolver la cantidad apropiada de sólido en una solución de agua salada amortiguada con fosfato pH=7.4); (2) 10 microlitros de extracto fecal de infante en agua salada amorituguada con fosfato, pH=7.4; (3) 10 microlitros de 250 microgramos/mililitros C5 ceramida en agua salada amortiguada con fosfato pH=7.4 y (4) 70 microlitros de agua salada amortiguada con fosfato, pH=7.4.
Paso 2 : Preparación de solución de prueba de control que comprende ceramidasa y ceramida: Una solución de prueba de 100 microlitros fue preparada mediante el combinar lo siguiente (1) 10 microlitros de extracto fecal de infante en agua salada amortiguada con fosfato, pH=7.4; (2) 10 microlitros de 250 microgramos/mililitros C5 cerámida en agua salada amortiguada con fosfato pH=7.4 y (3) 80 microlitros de agua salada amortiguada con fosfato, pH=7.4.
Paso 3 : Preparación de solución de prueba de control que comprende cerámida que comprende : Una solución de prueba de 100 microlitros fue preparada mediante el combinar lo siguiente: (1) 10 microlitros de cerámica de 250 microgramos/mililitros y 5 en agua salada amortiguada con fosfato pH=7.4); y (2) 90 microlitros de agua salada amortiguada con fosfato, pH=7.4.
Ensayo:
Paso 1: Cada solución de prueba se dejo permanecer estática a 25°C por 18 horas para permitir la interacción y reacción entre los componentes de solución de prueba .
Paso 2: 200 microlittros de una mezcla de 2:1 (por volumen) de cloroformo :metanol fue agregada a cada solución de prueba para retener las reacciones químicas. Después de la adición de la mezcla de cloroformo:metanol, cada una de las soluciones de prueba fue arremolinada por un período de tiempo de 1 minuto para asegurar una mezcla de cloroformo-.metanol fuera cabalmente distribuida a través de la mezcla de prueba.
Paso 3: 0.8 mililitros de solución fueron removidos de la fase orgánica de cada solución de prueba e introducir la solución de prueba en un recipiente de cromatografía de capa delgada para un análisis adicional .
Procedimiento de cromatografía de capa delgada:
Paso 1: 10 microlitros de solución de prueba fueron introducidos en una capa 60 de gel de sílice de cromatografía de capa delgada de alto desempeño.
Paso 2 : cada solución de prueba fue desarrollada mediante el introducir una mezcla de cloroformo:metanol: hidróxido de sodio de 90:20:05 (por volumen) sobre cada placa y dejando la mezcla correr a una longitud de 8 cm.
Paso 3 : Cada banda fue cuantificada con un sistema de formación de imágenes de placa Alph Innotech Flourchem Píate o (o sistema similar) como se discutió arriba.
Los resultados de estos experimentos se establecen en la tabla 2.
Tabla 2: Compuesto Efecto sobre Efecto sobre actividad de actividad ceramidasa esfingomielinasa Sedaplant Richter 7.6 veces actividad = 1 veces actividad
Chlorella 7.1 veces actividad Sin efecto Hexaplant Richter 6.6 veces actividad = 1 veces actividad
Lavanda 6.4 veces actividad Sin efecto arigold (caléndula) 6.4 veces actividad = 1 veces actividad
Gotu Kola PE 4:1 5.2 veces actividad = 1 veces actividad
Espirulina 5.7 veces actividad Sin efecto Manzanilla CL 5.1 veces actividad = 1 veces actividad
Harpagophytum (garra 4.9 veces actividad = 1 veces actividad del diablo) Dragoderm 4.5 veces actividad = 0.1 veces actividad Fitopleionolina .3 veces actividad = 0.5 veces actividad Aloe Feroz HS 4.1 veces actividad > 0.5 veces actividad Extracto de perej il 3. veces actividad del mar Escoba de carnicero 3.4 veces actividad Sin efecto HS Ginseng americano 3.2 veces actividad = 1 veces actividad
Complejo Microat 3.1 veces actividad 0.5 veces afa actividad Activito de 2. veces actividad = 1 veces actividad concentración de té verde japonés Aceite de árnica CLR 1.8 veces actividad = 1 veces actividad
Aceite de brasil 1.8 veces actividad = 1 veces actividad
Aceite de cártamo Sin efecto = 1 veces actividad
Aceite de oliva Sin efecto = 1 veces actividad
Aceite de prémula de Sin efecto = 1 veces actividad la tarde Complejo de ceramxda Sin efecto < 0.1 veces CLR (P) actividad Aceite de zanahoria Sin efecto = 1 veces actividad CLR Aceite de caléndula Sin efecto = 1 veces actividad CLR Aceite de durazno Sin efecto = 1 veces actividad
Aceite de St . John's Sin efecto = 1 veces actividad Word CLR Te verde HS-Chilowt 0.8 veces actividad = 0.1 veces actividad Biodynes TRF 0.8 veces actividad Sin efecto (extracto de levadura) Extracto de hojas 0.7 veces actividad = 0.1 veces Comfrey actividad Gel aloe 1 : 1 0.7 veces actividad = 0.5 veces decolorizado actividad Acetato tocofenil- 0.6 veces actividad 1 veces actividad alfa-Dl Aceite de borraja 0.6 veces actividad = 1 veces actividad
Proteina de soya 0.6 veces actividad = 0.1 veces hidrolizada actividad Complejo de péptido 0. veces actividad Sin efecto de leche MPC Avena completa 0.3 veces actividad = 1 veces actividad hidrolizada Elastina hidrolizada 0.2 veces actividad Sin efecto Fosfato de Laureth 0.1 veces actividad Sin efecto de potasio MAP (0.2% en PBS) Mackeleen EN- 77 0.1 veces actividad Sin efecto girasol sedaminopropil morfolina lactato, (0.25% en PBS) Tween 20 (0.1% en 0.1 veces actividad Sin efecto PBS) Aceite de girasol Sin efecto = 1 veces actividad
Aceite de aguacate Sin efecto = 1 veces actividad CLR Glycoderm Sin efecto < 0.1 veces actividad
Como los datos establecidos en la tabla indican, varios compuestos probados exhibieron la capacidad y aumentaron la actividad de esfingomielinasa y/o de disminuir la actividad de ceramidasa. Notablemente el Dragoderm, la Phytoplenoilina, el Aloe Feroz HS, y el Ginseng americano son agentes altamente preferidos ya que todos estos no solo aumentan la actividad de esfingomielinasa sino también disminuyen la actividad de la ceramidasa.
En vista de lo anterior, se verá que son logrados varios objetos de la invención. Como pueden hacerse varios cambios en los productos y métodos arriba descritos sin departir del alcance de la invención, se intenta que toda la materia contenida en la descripción anterior sea interpretada como ilustrativa y no en un sentido limitante.
Claims (48)
1. Un paño limpiador para mejorar la salud de la piel que comprende un substrato de limpiador fibroso y un agente que aumenta la actividad de esfingomielinasa para incrementar la actividad de esfingomielinasa para la producción de cerámidas por lo menos por alrededor de 100%.
2. El paño limpiador tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque, el agente de incremento de actividad de esfingomielinasa es para aumentar la actividad de esfingomielinasa por lo menos por alrededor e 100% como se determinó por la prueba de análisis de actividad de esfingomielinasa SAST.
3. El paño limpiador tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque el agente es seleccionado del grupo que consiste de Sedaplant Ritcher, C lorella, Hexaplant Richter, Lavanda, Marigold (caléndula) , Gotu Kola PE 4:1, Spirula, manzanilla CL, Harpagophytum (garra del diablo) , Dragoderm, Phytoplenolina, Aloe Feroz HS, Extracto de perejil de mar, escoba de carnicero HS, Ginseng americano, complejo icroat Afa y Actifito de concentración de te verde japonés .
4. El paño limpiador tal y como se reivindica en la cláusula 3 , caracterizado porque el agente es seleccionado del grupo que consiste de Sedaplant Ritcher, Chlorella, Hexaplant Richter, Lavanda, Marigold (caléndula) y Gotu Kola PE 4:1.
5. El paño limpiador tal y como se reivindica en la cláusula 3, caracterizado porque el agente es Dragoderm.
6. El paño limpiador tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque el agente aumenta la actividad esfingomielinasa por lo menos por alrededor de 200%.
7. El paño limpiador tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque el agente aumenta la actividad de esfingomielinasa por lo menos por alrededor de 400%.
8. El paño limpiador tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque el paño limpiador es un paño limpiador seco y el agente esta presente en una cantidad de desde alrededor de 0.01% por peso del substrato tratado a alrededor de 50% por peso del substrato tratado.
9. El paño limpiador tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque el paño limpiador es un paño limpiador húmedo y además comprende una fórmula líquida, dicho agente estando presente en una cantidad de desde alrededor de 0.01% (por peso total de la fórmula líquida) a alrededor de 50% (por peso total de la fórmula líquida.
10. El paño limpiador tal y como se reivindica en la cláusula 1, caracterizado porque comprende además un cofactor seleccionado del grupo que consiste de glutationa reducida, Schizosaccharomyces, Lipoyces, Saccharomyces y magnesio .
11. Un paño limpiador para mejorar la salud de la piel que comprende un substrato de paño limpiador fibroso y un agente de disminución de actividad de ceramidasa para disminuir la actividad de ceramidasa por lo menos por alrededor de 50%.
12. El paño limpiador tal y como se reivindica en la cláusula 11, caracterizado porque el agente que disminuye la actividad de ceremidasa es para disminuir la actividad de ceramidasa por lo menos por alrededor de 50% como se determino por la prueba de examen de actividad de ceramidasa CAST.
13. El paño limpiador tal y como se reivindica en la cláusula 11, caracterizado porque la actividad de ceramidasa es disminuida por lo menos por alrededor de 75%.
14. El paño limpiador tal y como se reivindica en la cláusula 11, caracterizado porque la actividad de ceramidasa es disminuida por lo menos por alrededor de 90%.
15. El paño limpiador tal y como se reivindica en la cláusula 11, caracterizado porque el agente es seleccionado del grupo que consiste de Dragoderm, complejo de cerámida CRL (P) , té verde HS-Chilowt, extracto de hojas Comfrey, proteína de soya hidrolizada y glicoderm.
16. El paño limpiador tal y como se reivindica en la cláusula 11, caracterizado porque el paño limpiador seco y el agente está presente en una cantidad de desde alrededor de 0.1% (por peso del substrato tratado) a alrededor de 50% (por peso del substrato tratado) .
17. El paño limpiador tal y como se reivindica en la cláusula 11, caracterizado porque el paño limpiador es un paño limpiador húmedo y además comprende una fórmula líquida, dicho agente estando presente en una cantidad de desde alrededor de 0.01% (por peso total de la fórmula líquida) a alrededor de 50% (por peso total de la fórmula líquida) .
18. Un paño limpiador que comprende un substrato limpiador fibroso y un agente de aumento de actividad de esfingomielinasa para aumentar la actividad de esfingomielinasa para la producción de cerámidas al menos por alrededor de 100% y un agente para disminuir la actividad de ceramidasa para disminuir la actividad de ceramidasa por lo menos por 50%.
19. El paño limpiador tal y como se reivindica en la cláusula 18, caracterizado porque el agente es Dragoderm.
20. Un producto para mejorar la salud de la piel que comprende un substrato absorbente y un agente para incrementar la actividad de esfingomielinasa para aumentar la actividad de esfingomielinasa para la producción de ceramidas por lo menos por alrededor de 100%.
21. El producto tal y como se reivindica en la cláusula 20, caracterizado porque el agente para aumentar la actividad de esfingomielinasa es para aumentar la actividad de esfingomielinasa por lo menos por alrededor de 100% como se determinó por la prueba de análisis de actividad de esfingomielinasa SAST.
22. El producto tal y como se reivindica en la cláusula 20, caracterizado porque el agente es seleccionado del grupo que consiste de Sedaplant Ritc er, Chlorella, Hexaplant Richter, Lavanda, arigold (caléndula) , Gotu Kola PE 4:1, Spirula, manzanilla CL, Harpagophytum (garra del diablo) , Dragoderm, P ytoplenolina, Aloe Feroz HS, Extracto de perejil de mar, escoba de carnicero HS, Ginseng americano, complejo Microat Afa y Actifito de concentración de te verde japonés .
23. El producto tal y como se reivindica en la cláusula 20, caracterizado porque el agente es seleccionado del grupo que consiste de Sedaplant Ritcher, Chlorella, Hexaplant Richter, Lavanda, Marigold (caléndula) y Gotu Kola PE 4:1.
24. El producto tal y como se reivindica en la cláusula 20, caracterizado porque agente aumenta la actividad esfingomielinasa por lo menos por alrededor de 200%.
25. El producto tal y como se reivindica en la cláusula 20, caracterizado porque el agente aumenta la actividad de esfingomielinasa por lo menos por alrededor de 400%.
26. El producto tal y como se reivindica en la cláusula 20, caracterizado porque el agente esta presente en una cantidad de desde alrededor de 0.01% (por peso del producto tratado) a alrededor de 50% por (peso del producto tratado) .
27. El producto tal y como se reivindica en la cláusula 20, caracterizado porque el producto es seleccionado del grupo que consiste de un pañal, calzoncillos de aprendizaje, prendas para la incontinencia del adulto, toallas femeninas, toallas de papel, tapones, almohadillas para el pecho, almohadillas para entre los labios, tisú facial, productos para el manejo de heridas y tisú para baño.
28. El producto tal y como se reivindica en la cláusula 20, caracterizado porque comprende además un cofactor seleccionado del grupo que consiste de glutationa reducida, Schizosaccharomyces, Lipomyces, Saccharomyces y magnesio.
29. Un producto para mejorar la salud de la piel que comprende un substrato absorbente y un agente de disminución de actividad de ceramidasa para disminuir la actividad de ceramidasa por lo menos por alrededor de 50%.
30. El producto tal y como se reivindica en la cláusula 29, caracterizado porque el agente para disminuir la actividad de ceremidasa es para disminuir la actividad de ceramidasa por lo menos por alrededor de 50% como se determino por la prueba de examen de actividad de ceramidasa CAST.
31. El producto tal y como se reivindica en la cláusula 29, caracterizado porque el agente es capaz de disminuir la actividad de ceramidasa por lo menos por alrededor de 75%.
32. El producto tal y como se reivindica en la cláusula 29, caracterizado porque el agente es capaz de disminuir la actividad de ceramidasa por lo menos por alrededor de 90%.
33. El producto tal y como se reivindica en la cláusula 29, caracterizado porque el agente es seleccionado del grupo que consiste de Dragoderm, complejo de ceramida CRL (P) , té verde HS-Chilowt, extracto de hojas Comfrey, proteína de soya hidrolizada y glicoderm.
34. El producto tal y como se reivindica en la cláusula 29, caracterizado porque el agente está presente en una cantidad de desde alrededor de 0.1% (por peso del substrato tratado) a alrededor de 50% (por peso del substrato tratado) .
35. El producto tal y como se reivindica en la cláusula 29, caracterizado porque el agente es Dragoderm.
36. El producto tal y como se reivindica en la cláusula 29, caracterizado porque el producto es seleccionado del grupo que consiste de un pañal, calzoncillos de aprendizaje, prendas para la incontinencia del adulto, toallas para la mujer, toallas de papel, tapones, almohadillas para el pecho, almohadillas para entre los labios, tisú facial, productos para el manejo de heridas y tisú para baño.
37. Un producto para mejorar la salud de la piel que comprende un substrato absorbente y un agente para aumentar la actividad de esfingomielinasa para aumentar la actividad de esfingomielinasa para la producción de ceramidas por lo menos por alrededor de 100% y un agente para disminuir la actividad de ceramidasa para disminuir la actividad de ceramidasa por lo menos por alrededor de 50%.
38. El producto tal y como se reivindica en la cláusula 37, caracterizado porque el agente para aumentar la actividad de esfingomielinasa es para aumentar la actividad de esfingomielinasa por lo menos por alrededor de 100% como se determinó por la prueba de análisis de actividad de esfingomielinasa SAST y el agente para disminuir la actividad de ceramidasa es para disminuir la actividad de ceramidasa por lo menos por alrededor de 50% como se determino por la prueba de análisis de actividad de ceramidasa CAST.
39. Un método para aumentar la concentración intracelular de las ceramidas, el método comprende poner en contacto la piel con un agente para aumentar la actividad de esfingomielinasa para la producción de ceramidas por lo menos por alrededor de 100%.
40. El método tal y como se reivindica en la cláusula 39, caracterizado porque el agente de aumento de actividad de esfingomielinasa es para aumentar la actividad de esfingomielinasa por lo menos por alrededor de 100% como se determinó por la prueba de análisis de actividad de esfingomielinasa SAST.
41. El método tal y como se reivindica en la cláusula 39, caracterizado porque el agente esta contenido en un producto para el cuidado personal .
42. El método tal y como se reivindica en la cláusula 39, caracterizado porque el producto para el cuidado personal es seleccionado del grupo que consiste de paños limpiadores húmedos, paños limpiadores secos, pañales, tapones, almohadillas para el pecho, toallas femeninas, almohadillas para entre los labios, tisú facial, tisú para cuarto de baño y toallas de papel .
43. El método tal y como se reivindica en la cláusula 39, caracterizado porque el agente es seleccionado del grupo que consiste de Sedaplant Ritcher, Chlorella, Hexaplant Richter, Lavanda, Marigold (caléndula) , Gotu Kola PE 4:1, Spirula, manzanilla CL, Harpagophytum (garra del diablo) , Dragoderm, Phytoplenolina, Aloe Feroz HS, Extracto de perejil de mar, escoba de carnicero HS, Ginseng americano, complejo Microat Afa y Actifito de concentración de te verde japonés .
4 . El método tal y como se reivindica en la cláusula 43, caracterizado porque el agente es seleccionado del grupo que consiste de Sedaplant Ritcher, Chlorella, Hexaplant Richter, Lavanda, Marigold (caléndula) y Gotu Kola PE 4:1.
45. El método tal y como se reivindica en la cláusula 43, caracterizado porque el agente es Dragoderm.
46. Un método para disminuir la actividad de ceramidasa sobre la piel, el método comprende el poner en contacto a la piel con un agente para disminuir la actividad de ceramidasa para disminuir la actividad de ceramidasa por lo menos por alrededor de 50%.
47. El método tal y como se reivindica en la cláusula 46, caracterizado porque el agente para disminuir la actividad de ceramidasa es para disminuir la actividad de ceramidasa por lo menos por alrededor de 50% como se determinó por una prueba de análisis de actividad de ceramidasa CAST.
48. El método tal y como se reivindica en la cláusula 40, caracterizado porque el agente es seleccionado del grupo que consiste de Dragoderm, complejo de cremida CLR (P) , té verde HS-Chilowt, extracto de hojas Comfrey, proteína de soya hidrolizada y glicoderm. R E S U M E Están descritos los métodos y productos tales como paños limpiadores y absorbentes para proporcionar un beneficio para la salud de la piel cuando se utilizan en la forma intentada. Mas específicamente, los datos descritos aquí comprenden un agente, tal como un extracto botánico el cual es capaz de aumentar la actividad de esfingomieliriasa de acuerdo a la prueba de análisis de actividad de esfingomielinasa y/o disminuir la actividad de ceramidasa de acuerdo a una prueba de análisis de actividad de ceramidasa. Mediante el aumentar la actividad de la esfingomielinasa y/o disminuir la actividad de ceramidasa, los agentes en combinación con los productos descritos aquí son capaces de mantener o aumentar el nivel de ceramidas llevando a una salud de la piel mejorada.
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