MXPA04009186A

MXPA04009186A - El uso de derivados de hidroxipiridona en curacion de heridas.

Info

Publication number: MXPA04009186A
Application number: MXPA04009186A
Authority: MX
Inventors: H Wenger Roland
Original assignee: Aventis Pharma Gmbh
Priority date: 2002-04-20
Filing date: 2003-04-08
Publication date: 2004-11-26
Also published as: SI1499312T1; ES2282615T3; IL164536A; EP1354586A1; DE60312840D1; ATE357915T1; DE60312840T2; EP1499312A1; BR0309403A; IL164536A0; CA2482972C; EP1499312B1; CA2482972A1; WO2003088966A1; PT1499312E; AU2003222802B2; CY1106472T1; US20040014794A1; JP4709489B2; JP2005529875A

Abstract

La presente invencion se relaciona con el uso de compuestos de la formula (I), en la que R1, R2, R3 y R4 tienen los significados indicados en las reivindicaciones, para el tratamiento de curacion de heridas.(ver formula I).

Description

EL USO DE DERIVADOS DE HIDROXIPIRIDONA EN CURACIÓN DE HERIDAS La presente invención se relaciona con el uso de compuestos de la fórmula I, en la que R1; R2; R3 y R4 tienen los significados abajo indicados, en la curación de 'heridas. Los compuestos de la fórmula I tales como sal de 2-aminoetanol de 6-ciclohexil-l-hidroxi-4-metil-2 ( 1H) -piridona, conocida también como olamina de ciclopirox (CPX) son agentes antifungales conocidos utilizados para. ' tratar micosis de la piel y uñas después hace más de 20 años. Además de su actividad antimicótica, CPX también es efectivo contra bacterias tanto gram-positivas como gram-negativas (Dittmar, W., y col. (1981) estudios de laboratorio microbiológicos con ciclopiroxolamina . Arzneimittelforschung 31, 1317-1322). CPX se aplica como una crema o gel al 1% para tratar dermatomicosis y como una laca de uñas al 8% para tratar onicomicosis . CPX se sabe que inhibe diversas actividades enzimáticas fúngales in microorganismos, incluyendo el transporte de transmembrana de aminoácidos, potasio y fosfato. Sin embargo, el mecanismo molecular general de la actividad antimicrobiana de CPX no se conoce exactamente. En estudios dirigidos a efectos cutáneos de una solución de CPX al 1% aplicada en piel de conejo durante 20 días, ocasionalmente el enrojecimiento transiente de la piel saludable y enrojecimiento persistente de piel experimentalmente herida se ha observado (Alpermann, H.G., y Schütz, E. (1981). Los estudios en la farmacología y toxicología de ciclopiroxolamina . Arzneimittelforschung 31, (1328-1332). Ocasionalmente el enrojecimiento transiente de piel saludable se explicó como una reacción lateral de CPX. La angiogenesis terapéutica mediante factores de crecimiento angiogénico o mediante terapia de gene se ha convertido en una modalidad de tratamiento importante durante los pasados pocos años (Hóckel, M. , y col. (1993) . La angiogenesis terapéutica. Arch.surg. 128,423-429). En pruebas clínicas humanas en camino, la terapia de gene de VEGF se aplica para el tratamiento de isquemia de miembro crítica e isquemia al miocardio. La terapia de VEGF también se ha investigado experimentalmente en ulceración gástrica y duodenal, así como en úlceras dérmicas y en substitutos de piel cultivados. Se ha encontrado ahora que los compuestos de la fórmula I tienen una actividad angiogénica potente e inducen angiogenesis como se muestra mediante numerosos vasos dispuestos recientemente formados. Adicionalmente, se ha encontrado que la aplicación tópica de CPX no conduce a alteraciones sistémicas fuertes en expresión de VEGF, que limita su función a regiones de aplicación tópica. Esto es más bien seguro y altamente ventajoso comparado con la terapia de gene. De esta manera, los compuestos de la fórmula I se pueden utilizar para el tratamiento de heridas y/o curación de heridas, debido a la actividad angiogénica potente difiere considerablemente de la actividad antimicrobiana conocida de los compuestos de la fórmula I,. De esta manera, no solamente se impiden las infecciones durante el tratamiento de heridas, sino también se mejora la curación de heridas, v.gr., formando numerosos vasos nuevos en y alrededor de la herida. La invención por lo tanto · se relaciona con el uso de l-hidroxi-2-piridonas de la fórmula I para la preparación de un farmacéutico para el tratamiento de heridas y/o curación de herida, en las que R1, R2 y R3 son idénticos o diferentes y son un átomo de hidrógeno o alquilo que tiene 1 a 4 átomos de carbono, y R4 es un radical hidrocarburo saturado que tiene 6 a 9 átomos de carbono o un radical de la fórmula II en donde X es S u 0, Y es un átomo de hidrógeno o hasta 2 átomos de halógeno tales cómo cloro y/o bromo, Z es un solo enlace o un radical divalente que comprende a) O, o b) S, o c) -C(R5) (R6)-; en donde R5 y R6 son idénticos o diferentes y son independientemente átomo de hidrógeno o alquilo de d) otros radicales divalentes que tienen 2 a 10 carbonos en la forma de una cadena, que opcionalmente comprende además uno o más de lo siguiente: i) un enlace doble de carbono a carbono, o ii) 0, S, o una mezcla de los mismos, en donde si 2 o más átomos de O y/o S o una mezcla de los mismos están presentes, cada átomo de O o S se separa por cuando menos 2 átomos de carbono; y, en cualquiera de los radicales bivalentes anteriores, las tres valencias de los átomos de carbono del radical bivalente están saturados por un átomo de hidrógeno, alquilo de (C1-C4) , o una mezcla de los mismos; y Ar es un sistema de anillo aromático que tiene hasta dos anillos que se pueden substituir por hasta tres radicales del grupo que consiste en flúor, cloro, bromo, metoxi, alquilo de d-C4)f trifluorometilo y trifluorometoxi en forma libre o de sal. En los radicales "Z", los miembros de cadena de carbono son de preferencia grupos -CH2. Si los grupos -CH2 se substituyen por grupos alquilo (CÍ-CJ ) , CH3 y C2H5 son substituyentes preferidos. Los radicales de ejemplo de "Z" son: -O-, -S-, -CH2-, -(CH2)m- (m = 2 - 10), -C(CH3)2-, -CH20-,-OCH2-, -CHZS-, -SCHZ-, -SCH(C2H5)-, -CH=CH-CH20, -0-CH2-CH=CH-CH20-, OCH2-CH20-, -OCH2-CH2CH20- , -SCH2CH2CH2S-, -SCH2CH2CH2CH20-, -SCH2CH2OCH2CH20-, -SCH2CH2OCH2CH20-CH2CH2S- o -S-CH2-C ( CH3 ) 2-CH2-S- . El radical "S" denota un átomo de azufre; un radical "O" denota un átomo de oxigeno. El término "Ar" denota fenilo o sistemas condensados tales como naftilo, tetrahidronaftilo e indenilo, y también sistemas aislados tales como aquellos, que se derivan de bifenilo, difenilalcanos, éteres de difenilo y tioéteres de difenilo. El término "radical hidrocarburo saturado que tiene 6 a 9 átomos de carbono" significa que el radical puede ser cadena recta, ramificado o cíclico y no contiene múltiples enlaces alifáticos, es decir, ningunos enlaces etilénicos o acetilénicos . Ejemplos del radical R4- son v.gr., hexilo, heptilo, octilo, ciclohexiloo cicloheptilo. El radical hidrocarburo R4 en el compuesto de la fórmula I es de preferencia un alquilo de (C6-C8) o radical ciclohexilo, que también puede estar enlazado a través de un grupo metileno o etileno al anillo piridona o puede contener un grupo endometilo. R4 también puede ser un radical aromático que, sin embargo, está de preferencia ligado al radical piridona a través de cuando menos un átomo de carbono alifático. Los representantes importantes de la clase de compuesto caracterizado por la fórmula I son: 6- [4- ( 4-clorofenoxi ) fenoximetil] -l-hidroxi-4-metil-2-piridona 6- [4- (2, 4-diclorofenoxi) fenoximetil] -l-hidroxi-4-metil-2-piridona, 6- (bifenilil-4-oximetil) -l-hidroxi-4-metil-2-piridona, 6- ( 4-bencil-fenoximetil ) -l-hidroxi-4-metil-2-piridona, 6- [4- (2, 4-dicloro-benciloxi ) fenoximetil] -l-hidroxi-4-metil-2- Piridona, 6- [4- (4-clorofenoxi) fenoximetil] -l-hidroxi-3, 4-dimetil-2-piridona, 6- [4- (2, 4-diclorobencil ) fenoximetil] -l-hidroxi-3, 4-dimetil-2-piridona, 6-14- (cinamiloxi) fenoximetil] -l-hidroxi-4-metil-2-piridona, 1-hidroxi-4-metil-y- [4- (4-trifluorometilfenoxi) fenoxiraetil] - 2-piridona, l-hidroxi-4-metil-6-ciclohexil-2-piridona, l- idroxi-4-metil-6- (2,4, 4-trimetilpentil ) -2-piridona, l-hidroxi-4-metil-6- (n-hexil-, -6-iso-hexil-, -6-n-heptil- o 6-iso-heptil-2-piridona, l-hidroxi-4-metil-6-octil- o -6-ixo-octil-2-piridona, en particular l-hidroxi-4-metil-y6-ciclohexil-metil- o 6-ciclohexiletil-2-piridona, en donde el radical ciclohexilo en cada caso también puede llevar un radical metilo, l-hidroxi-4-metil-6- (2-biciclo [2,2,1] heptil) -2-piridona, l-hidroxi-3, 4-dimetil-6-bencil o 6-dimetilbencil-2-piridona o l-hidroxi-4-metil-6- (ß-feniletil) -2-piridona. Los compuestos arriba mencionados de la fórmula I se pueden emplear tanto en forma libre como también como sales; el uso en forma libre se prefiere. Si se utilizan bases orgánicas, se emplean de preferencia bases poco volátiles, por ejemplo, alcanolaminas de bajo peso molecular, tal como etanolamina, dietanolamina, N-etiletanolamina, N-metildietanolamina, trietanolamina, dietilaminoetanol, 2-amino-2-metil-n-propanol, dimetilaminopropanol , 2-amino-2-metilpropandiol , triisopropanolamina . Bases poco volátiles adicionales que se pueden mencionar son, por ejemplo, etilendiamina, hexametilendiamina, morofolina, piperidina, piperazina, ciclohexilamina, tributilaraina, dodecilamina, N, N-dimetildodecilamina, estearilamina, oleilamina, bencilamina, dibencilaraina, N-etilbencilamina, dimetilestearilamina, N-metilmorfolina, N-metilpiperazina, 4-metilciclohexilamina, N-hidroxietilmorfolina . Las sales de hidróxidos de amonio cuaternario tales como hidróxido de trimetilbencilamino, hidróxido de tetrametilamonio o hidróxido de tetraetilamonio también se pueden utilizar, y además guanidina y sus derivados, en particular sus productos de alquilación. Sin embargo, también es posible emplear, por ejemplo, alquilaminas de bajo peso molecular tales como metilamina, etilamina, o trietilamina como agentes que forman sal. Las sales con cationes inorgánicos/ por "ejemplo sales de metal alcalino, en particular sales de sodio, potasio o amonio, sales de metal alcalino térreo tales como en particular las sales de magnesio o calcio, y sales con cationes di- a tetravalentes, por ejemplo la sal de zinc, aluminio o zirconio, también son apropiadas para los compuestos que se van a emplear de conformidad con la invención . Los compuestos de la fórmula I se pueden preparar, por ejemplo, mediante el proceso de conformidad con EUA 2,540,218 o EUA 4,797,409..

La presente invención también se relaciona con el uso del compuesto de la fórmula I en el que Ar es un sistema bicíclico, que se deriva de difenilo, difenilalcano o éter de difenilo. La presente invención también se relaciona con el uso del compuesto de la fórmula y, que contiene un radical ciclohexilo en la posición R4. La presente invención también se relaciona con el uso del compuesto de la fórmula I, que contiene un radical octilo de la fórmula -CH2-CH (CH3) -CH2-C (CH3) 3 en la posición R4. La presente invención también se relaciona con el uso del compuesto de la fórmula I, en donde l-hidroxi-4-metil-6- [4- ( -clorofenoxi ) fenoxiraetil] -2- (1H) -piridona, l-hidroxi-4-metil-6-ciclotiexii-2-- (IR) piridona o l-hidroxi-4-metil-6- (2, 4, 4-trimetilpentil ) -2- (lH)piridona se emplea. La presente invención también se relaciona con el uso de los compuestos de la fórmula I para la- producción de. un farmacéutico para el tratamiento de heridas. Debido a la inducción de angiogenesis la curación de heridas se mejora, debido a que se forman vasos nuevos de sangre y el suministro de la herida con nutrición y oxigeno se mejora. De esta manera, también la curación de herida de heridas no infectadas se aumenta dramáticamente. Los compuestos de la fórmula I no solamente previenen las infecciones de la herida por v.gr, levadura, bacterias, u hongos, pero también soportan la curación de herida mediante un mejor suministro de la herida mediante la inducción de vasos sanguíneos recientemente formados. De esta manera, la curación de herida de heridas no infectadas e infectadas se mejora mediante el tratamiento de los compuestos de la fórmula I . El término "heridas" se entiende como que significa v.gr., abrasiones, quemaduras, mordazas, heridas de aplastamiento, cortadas, úlceras de pie diabético, heridas abiertas, cuchilladas, injerto de órganos, heridas de bala, incisiones, úlceras de pierna, úlceras de presión, heridas de quemado, raspaduras, quemaduras de piel, llagas, heridas de exprimido, heridas de cuchillada, transplante, úlceras venenosas o heridas debidas a cirugía o cirugía plástica. El término "curación de heridas" se entiende como que significa procesos regenerativos para el cierre de una herida; especialmente nuevas formaciones de vasbs capilares y aumentan el tejido conector y células epiteliales. Los compuestos de la fórmula y y sus sales fisiológicamente tolerables se pueden administrar a animales, de preferencia mamíferos, y en particular a humanos como farmacéuticos para el tratamiento de heridas y/o curación de heridas. Se pueden administrar por sí mismos, o en mezclas uno con otro o en la forma de preparaciones farmacéuticas, que permiten la administración tópica. El término "mamíferos" se entiende que significa, v.gr. , humano, caballo, ganado, ratas, ratones, ovejas o perro. Los farmacéuticos se pueden administrar percutáneamente o tópicamente, por ejemplo en la forma de emulsiones, ungüentos, soluciones o tinturas, polvos, o de otras maneras, por ejemplo en la forma de aerosoles o espumas. Para uso de conformidad con la invención de los compuestos mencionados, son apropiadas preparaciones farmacéuticas líquidas, semisólidas y sólidas, en particular soluciones, crema, ungüento, polvos y preparaciones de gel, en donde las últimas se usan de preferencia debido a su liberación aumentada de compuesto activo. Las .preparaciones farmacéuticas de conformidad con la invención se preparan de una manera conocida en sí y familiar a uno experto en el ramo, portadores farmacéuticamente aceptables inertes, inorgánicos y/u orgánicos siendo utilizados además de los compuestos de la fórmula I y/o sus sales fisiológicamente tolerables. Los compuestos de la fórmula I también se pueden incorporaren una gasa quirúrgica, venda o vendaje. Los vendajes apropiados se ilustran con mayor detalle por los siguientes ejemplos: Vendajes de alginato Los vendajes de herida de alginato son tejidos de fibras de alginato de calcio. El alginato de calcio es un biopolímero marino que se deriva de algas. Los alginatos son altamente absorbentes. Cuando los vendajes de alginatos se ponen en contacto con exudado de herida, se forma un gel suave, manteniendo un ambiente húmedo en la superficie de herida que es conducivo a la formación de tejido de granulación y epitelialización . Los vendajes de alginato se indican para heridas que exudan pesadamente, ya que tienen la capacidad de absorber tanto como 20 veces su peso. Vendajes compuestos Son generalmente de múltiples capas, incorporando una capa no adherente que está en contacto con la herida, y diversas capas absorbentes, de mechas y semioclusivas. La capa absorbente no incorpora una espuma, alginato, hidrocoloide, o hidrogel. Un refuerzo de- cinta adhesiva no tejida asegura el vendaje a la piel. Estos vendajes se utilizan para cubrir vendajes para todas las fases de curación de herida y son vendajes primarios para muchos tipos de heridas postoperativas . Capas de contacto Las capas de contacto son vendajes de hoja delgada colocadas directamente sobre una herida abierta para proteger el tejido de herida del contacto directo con otros agentes o vendajes aplicados a la herida. Vendajes secundarios siempre se usan con capas de contacto.

Vendajes de espuma Los vendajes de espuma se hacen principalmente de poliuretano, pero silicona también se usa. Están disponibles ya sea como vendajes de espuma planos o como rellenos, y se pretenden para uso sobre heridas de granulación y epiteliialización que producen algún exudado. Gasa Los vendajes de gasa tejida se hacen de hilo de algodón 100%. Los hilos se tejen horizontal y verticalmente, con 10 a 20 pasos de fabricación separados empleados en el proceso de producir esponja de 10.16 x 10.16 cm (4 x 4 pulgadas), de 12 capas. Los vendajes de gasa tejidos vienen en una amplia variedad de tipos y se usan comúnmente para empaque y desbridamiento . Las telas no tejidas no están tejidas ni tejidas de punto. Las fibras se disponen de manera que parezca que están tejidas. La mayoría de vendajes no tejidos se fabrican de una mezcla de rayón y poliéster. El rayón proporciona suavidad y absorbencia, mientras que el póliéster proporciona resistencia. La aplicación primaria de vendajes de gasa no tejida es para absorción y envoltura. Vendajes de gasa impregnados Los vendajes de gasa impregnados son materiales tejidos o no tejidos en los que las substancias se han incorporado hacia el material de vendaje.

Vendajes hidrocoloides Los vendajes hidrocoloides son vendajes de segunda generación populares, que son de absorción moderada, retención de humedad, cómodos a la herida y autoadhesivos . ¦ También son oclusivos, formando una barrera contra la contaminación bacteriana. Además de estar disponibles en formas dimensionales, los hidrocoloides se suministran como polvos, gránulos, pastas y otras formas especializadas. Los componentes funcionales principales son gelatina, pectina, o hidrocoloides relacionados. Están indicados para uso en úlceras de presión, quemaduras, y una variedad de otros tipos de herida. Vendajes de hidrogel Los hidrogeles son vendajes semipermeables de los cuales el agua es el componente principal. Glicerina y propilenglicol sé incluyen como humectantes, y un almidón de ' copolimero se añade en ocasiones como absorbente. Los vendajes están disponibles como obleas impregnadas con gasa, hojas, y geles amorfos, y están indicados para heridas de espesor parcial y completo que no drenan a drenaje moderadamente . Vendajes de película transparente. Los vendajes de película transparente son vendajes oclusivos que consisten de una membrana de poliuretano enmarcada por una capa adhesiva. Los vendajes varían en espesor, grado de oclusividad, y otras propiedades. Los vendajes de película transparente están indicados para uso en incisiones quirúrgicas pequeñas, puntos de inserción para catéteres venosos periféricos y centrales, quemaduras superficiales, heridas de rotura de espesor parcial, y como vendajes secundarios. Vendajes biológicos y biosintéticos Este sector incluye un grupo de vendajes basados en colágeno compatible naturalmente absorbente y biológico, vendajes construidos de aminoácidos biocompatibles relacionados e hidrolizados de proteína, vendajes que combinan materiales sintéticos y biológicamente derivados. Los compuestos de la fórmula I se pueden administrar tópicamente a humanos y otros mamíferos tales como perro, gato, caballo, cerdo, ganado u ovejas. Las preparaciones farmacéuticas normalmente contienen de alrededor de 0.05% a aproximadamente 5%, de preferencia de 0.5% a 2%, especialmente de manera preferente 1% en peso de los compuestos de la fórmula I y/o sus sales fisiológicamente tolerables. También son posibles porcentajes menores y mayores. Además de los ingredientes activos de la fórmula I y/o sus sales fisiológicamente aceptables y de substancias portadoras, las preparaciones farmacéuticas pueden contener aditivos tales como, por ejemplo, rellenos, aglutinantes, lubricantes, agentes humectantes, estabilizadores, emulsionantes, conservadores, colorantes, espesadores, diluyentes, substancias tampón, solventes, solubilizadores, agentes para lograr un efecto de depósito, sales para alterar la presión osmótica, agentes de revestimiento o antioxidantes. También pueden contener dos o más compuestos de la fórmula I y/o sus sales fisiológicamente tolerables. Además, en adición a cuando menos un compuesto de la fórmula I. y/o sus sales fisiológicamente tolerables, las preparaciones farmacéuticas también pueden contener uno o más de otros ingredientes terapéutica o profilácticamente activos. Estos ingredientes activos adicionales pueden ser dexpantenol, alantoina, dextranómero, y/o extractos de la planta Echinacea. Se entiende que los cambios que no afectan substancialmente la actividad de las diversas modalidades de esta invención se incluyen dentro de la invención descrita en la presente. De esta manera, los siguientes ejemplos se pretenden para ilustrar, pero no limitar, la presente invención. Ejemplo 1 Inducción de expresión de gene VEGF mediante CPX Métodos Cultivo de célula Las células HRCH05 que contienen un gene reportero dependiente de HIF-1, transfectado, se describieron anteriormente (Wanner, R.M. , y col. (2000) Epolones induce erythropoietin expression via hypoxia-inducible factor-la activation. Blood 96, 1558-1565) . La linea de célula hpetamo HepG2 humana se obtuvo de la American Type Culture Collection (ATTCC números HB-8065) . Todas las lineas de célula se cultivaron en medio de Eagle modificado con Dulbecco (DMEM, high glucose, Life Technologies) suplementado con 10% de FCS inactivado por calor, 100 U/ml de penicilina, 100 ug/ml de estroptomicina, 1 x aminoácidos no esenciales y 1 mM de Na-piruvato (todo comprado de Life Technologies) en una atmósfera humedecida que contiene 5% de C02 a 37°G. Las presiones parciales de oxigeno en la incubadora (Forma Scientific, modelo 3131) fueron 140 miti de Hg (20% de 02 v/v, normoxia) o 7 mm de Hg (1% de 02 v/v, hipoxia) . Olamina de ciclopirox (CPX) , mesilato de deferoxamina (DFX) y 2, 2' -dipiridilo (DP) se compraron de Sigma. Las soluciones dematerial de COX y DP se prepararon en metanol a 0.5M y 1 M, respectivamente. DFX se disolvió recientemente a 10 mM hacia el medio de cultivo de célula. Ensayos de transfección transiente, gene reportador y viabilidad Células de HepG2 se electroporaron transientemente con una construcción de luciferasa impulsada por promotor VEGF como se describió anteriormente (Ikeda, E.,y- col. (1995) activación transcripcional inducida por hipoxia y estabilidad de mRNA aumentada de factor de crecimiento endotelial vascular en células de C6y glioma. J. Biol.Chem. 2170, 19761-19766) . Después de la estimulación, células transfectadas transientemente y estables se lisaron en tampón de lisis pasivo (Promega) y la actividad de luciferasa se determinó usando un equipo de ensayo de luciferasa de conformidad con las instrucciones del fabricante (Promega) en un luminómetro de 96 pozos (Microlumat LB96P, EG&G Berthold) . La proliferación de célula/viabilidad se determinó por el ensayo de bromuro de tetrazolio de 3- (4, 5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difenilo (MTT) como se describió (30, 31). Las absorbancias a 570 nm se determinaron en un fotómetro de 96 pozos (Rainbow, SLT Labsystems) . Resultados CPX en una concentración de 5 uM a 20uM concentraciones fuertemente indujeron la proteina HIF-1 alfa en células de epatoma HepG2 normóxicas después de 6 y 24 horas de tratamiento. Mientras que no se pudo detectar proteina HIF-lalfa en células normóxicas, hipoxia (1% de 02) también indujo fuertemente HIF-lalfa. La combinación de CPX e hipoxia no aumentó adicionalmente los niveles de HIF-lalfa después de 6 horas, sino más bien diminuyó los niveles de HIF-lalfa después de 24 horas de tratamiento. Como se determina por Northern el manchado de mRNA derivado de células HepG2 tratadas con CPX, DFX y DP durante 24, 48 y 72 horas, estos queladores de hierro también indujeron la expresión de los genes FEGF de blanco de HIF-lendógeno, transportador-1 de glucosa (Glut-1) y aldolasa, pero no de los genes de control L28 y ß-actina. La funcionalidad de expresión VEGF mRNA inducida por CPX se demostró adicionalmente mediante la acumulación de proteina VEGF en el sobrenadante del cultivo de célula HepG2, que aumentó de una manera dependiente de dosis después de 6 o 24 horas de tratamiento. El gene reportero de luciferasa impulsado por un fragmento promotor de VEGF 1180 bp se transfectó transientemente en células HepG2, que se dividieron y trataron con concentraciones incrementantes de CPX durante 24 horas. Un aumento dependiente en dosis en actividad de luciferasa se observó, sugiriendo que CPX activa transcripcionalmente la expresión FEGF. En resumen, estos resultados demuestran que CPX puede activar transcripción de FEGF endógena, expresión de mRNA y acumulación de proteina secretada. Ejemplo 2 Falta de inducción de gene de meta HIF-1 por CPX en el riñon de rata perfundido aislado DXF sistemáticamente administrado puede inducir estabilidad de HIF-1 ubicuita y expresión de eritropoietina especifica de riñon en ratones ( ang, G. L., y Semenza, G. L. (1993) Desferrioxamine . induceserythroproietin gene expression and hypoxia-inducible factorl DNA-binding activity: implications for models of hypoxia signal transduction . Blood 82, 36510-3615) . Respecto a una aplicación tópica de CPX como un agente que induce HIF-1 para angiogenesis terapéutica, fue importante probar si CPX podía conducir a una inducción ' sistémica de VEGF. Como un modelo ex vivo, ríñones de rata aislados se perfundieron durante 3 horas bajo condiciones normóxicas con concentraciones incrementantes de CPX. Sin embargo, CPX no indujo los niveles de mRNA de los genes de meta HIF-1 VEGF, Glut-1 o aldolasa a concentraciones que varían de 0.1 uM a 100 uM. Las concentraciones de CPX superiores (33 uM y 100 uM) condujeron a una regulación descendente de función de riñon como se indica por un fuerte aumento en los regímenes de excreción de albúmina y sodio. Después de la perfusión con 3% de oxígeno durante 3 horas, un aumento en Glut-1 pero no en VEGF y niveles de aldolasa mRNA se observó que no se elevó adicionalmente por CPX. Ejemplo 3 Inducción de angiogenesis en la membrana clorioalantóica de pollo (CAM) mediante CPX Ensayo de membrana corioalantoica de embrión de pollo (CAM) Método Se realizaron ensayos de CAM como se describe por Olivo, M., y col. (Un estudio comparativo sobre los efectos de factor-alfa de necrosis de tumor (TNF-alfa) , factor angiogénico humano (h-AF) y factor de crecimiento de fibroblasto básico (bFGF) en la membrana corioalantoica del embrión de pollo (1992). Anat. Red. 234, 105-115). Brevemente, huevos fertilizados (comprados de Lohmann Tierzucht, Cuxhaven, Alemania) se incubaron a 37°C en una atmósfera humedecida. Los huevos se mantuvieron sobre sus lados y se voltearon hacia arriba dos veces al día. Después de 6 días, se perforó un agujero pequeño' a través de la cáscara hacia el saco de aire (visualizado usando una fuente de luz fuerte) y una ventana de aproximadamente 0.5 cm2 se aserró hacia el lado del huevo. La ventana se selló con cinta y los huevos se reincubaron hasta el día 9, cuando se aplicó sal de 6-ciclohexil-l-hidroxi-4-metil-2 ( 1H ) -piridona 2-aminoetanol (CPX al CAM usando el método ElvaxÍR) (ver Olivo, M., y col., arriba). Por lo tanto, cuentas de copolimero de etileno/acetato de vinilo (Elvax<R> 40L-03, DuPont, provistas por C. H.Erbslóh KG, refeld, Alemania) se lavaron extensamente en etanol y se secaron bajo presión reducida. Las cuentas de Elvax(R) se disolvieron luego en cloruro de metileno a 10% (p/v) y se añadió CPX a la concentración deseada. Una gota (40 uL) de esta solución se entubó hacia un portaobjetos de vidrio siliconizado y el solvente se dejó evaporar completamente. Usando fórceps, el disco de Elvax(R) se levantó cuidadosamente de los portaobjetos de vidrio y se colocó hacia el CAM. Al día 11, la ventana se agrandó y el CAM se documentó usando una cámara digital (Olympus) acoplada a un ocular de un estereomicroscopio. Resultado Basado en las observaciones que la expresión VEGF inducida por CPX en el cultivo de célula (ver ejemplo 1) la capacidad angiogénica en un modelo en vivo de angiogénesis se analizó. Por lo tanto, el CAM de pollo al día 9 de desarrollo se tendió con discos de polímero inerte que contienen diversas concentraciones de CPX o solvente solamente. ' Después de dos días de incubación, no se pudieron observar señales de angiogénesis con los discos de control de solvente. En contaste, los discos de polímero que contiene 50 mM de CPX indujeron consistentemente angiogénesis de CAM como se muestra por numerosos vasos recientemente formados, radialmente dispuestos. Un total de 10 CAMs" tratados- con 50 mM de CPX mostraron angiogénesis similar, mientras que todos los 7 CAMs de control carecieron de cuaíésquiera señales de" angiogénesis. 5 mM de CPX no fúe distinguible de los controles y 500 mM de CPX fue tóxico para los embriones de pollo Ejemplo 4 Modelo de herida de piel de ratón Método Ambas orejas de ratón NMRI adulto se hirieron bajo anestesia, con 100 mg/kg de cetamina (Narketan™ ) y 5 mg/kg de Xilazina (RompuntR)) mediante punción de agujeros de 2 mm de diámetro utilizando una herramienta de punción de orejas normal. Las orejas se trataron diariamente con una crema para la piel común que contiene (Batrafen<R> ) o que no contienen 1% (p/v) de CPX. Una oreja se trató con CPX y la otra oreja con la crema de control. La cantidad de crema fue suficiente para cubrir el agujero y se distribuyó igualmente sobre la oreja completa. Resultado CPX puede inducir angiogenesis en un modelo de herida de piel de ratón punzonada a través de los agujeros de oreja" de 2 mm de diámetro (una forma usual de marcar ratones de instalaciones de animales) se trataron diariamente con una crema dérmica comercialmente disponible que contiene 1% de CPX en una oreja y una crema dérmica común idéntica pero libre de CPX en la otra oreja, respectivamente. El CPX puede ocasionar enro ecimiento del margen de herida, que nunca se observó en el área de piel sana de la misma oreja. En esta serie 4 de 10 animales mostraron efectos similares y ninguno de los animales tuvo enrojecimiento más pronunciado en el margen de herida tratada con placebo que el margen de herida tratada con CPX. El enrojecimiento inducido por CPX podría ser crecimiento de vaso mejorado.

Claims

REIVINDICACIONES 1.- El uso de l-hidroxi-2-piridonas de la fórmula
I: para la preparación de un farmacéutico para curar heridas, en donde las heridas son abrasiones, quemaduras, rajadas, heridas de rotura, cortes, pie diabético, úlceras, heridas abiertas, cuchilladas, injerto de órganos, heridas de bala, incisiones, heridas de quemada, raspones, quemaduras de piel mataduras, heridas de apretón, heridas de puñal, tránsplante, úlceras venosas o heridas debidas a cirugía o cirugía plástica, en donde el compuesto de la fórmula I se administra tópicamente en la forma de emulsiones, ungüentos, soluciones, tinturas, polvo, crema o preparación de gel o en la forma de aerosoles o espumas, en la que R1, R2 y R3 son idénticos o diferentes y son un átomo de hidrógeno o alquilo que tiene 1-4 átomos de carbono, y R4 es un radical hidrocarburo saturado que tiene 6 a 9 átomos de carbono o un radical de la fórmula II en donde X es S u 0, Y es un átomo de hidrógeno o hasta 2 átomos de halógeno tales como cloro y/o bromo, Z es un enlace sencillo o el radical divalente que comprende: a) 0, o b) S, o c) -C(R5) (R6)-; en donde R5 y R6 son idénticos o diferentes y son independientemente átomo de Hidrógeno o alquilo- (Ci-C ) ; o d) otros radicales divalentes que tienen 2 a 10 carbonos en la forma de una cadena, que puede comprender opcionalmente uno o más de los siguientes: i) un enlace doble de carbono-carbono, o ii) 0, S, o una mezcla de los mismos, en donde si 2 o más átomos de 0 y/o S o una mezcla de los mismos están presentes, cada átomo de 0 o S se separa por cuando menos 2 átomos de carbono; y en cualquiera de los radicales bivalentes anteriores, las valencias libres de los átomos de carbono del radical bivalente están saturadas por un átomo de hidrógeno, alquilo- (C1-C4) , o una mezcla de los mismos; y Ar es un sistema de anillo aromático que tiene hasta dos anillos que se pueden substituir por hasta tres radicales del grupo que consiste en flúor, cloro, bromo, metoxi, alquilo- (C1-C4 ) , trifluormetilo y trifluormetoxi en forma libre o de sal. 2. - El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde Ar en el compuesto de la fórmula I es un sistema biciclico, que se deriva de bifenilo, difenilalcano o éter de difenilo .
3. - El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el compuesto de la fórmula I contiene un radical ciclohexilo en la posición R4.
4. - El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el compuesto de la fórmula I contiene un radical octilo de la fórmula -CH2-CH (CH3) -CH2-C (CH3) 3 en la posición R4.
5. - El uso de conformidad con una o más de las reivindicaciones 1, en donde el compuesto de la fórmula I es l-hidroxi-4-metil-6- [4- ( 4-clorofenoxi ) fenoximetil ] -2- ( 1H ) -piridona, l-hidroxi-4-metil-6-ciclohexil-2- (1H) piridona o l-hidroxi-4-metil-6- (2, 4, 4-trimetilpentil ) -2- ( 1H) piridona .
6. - El uso de conformidad con una o más de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el compuesto de la fórmula I se administra por si solo, o en mezclas entre si.
7. - El uso de conformidad con una o más de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la dosis del compuesto de la fórmula I en la preparación farmacéutica es de alrededor de 0.05% a aproximadamente 5%, de preferencia de 0.5% a 2%, especialmente de preferencia 1% en peso del compuesto de la fórmula I y/o sus sales fisiológicamente tolerables.
8. - El uso de conformidad con una o más de las reivindicaciones 1 a ? , en donde la preparación farmacéutica contiene además un ingrediente activo tal como dexpantenol, alantoina, dextranómero o extractos de la planta Echinacea o una mezcla de dichos ingredientes.