MX2010011334A

MX2010011334A - Composiciones cosmeticas que comprenden exopolisacaridos derivados de esteras microbianas y su uso.

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Publication number: MX2010011334A
Application number: MX2010011334A
Authority: MX
Inventors: Estelle Loing; Sandrine Briatte; Catherine Vayssier; Martin Beaulieu; Patrice Dionne; Laurent Richert; Xavier Moppert
Original assignee: Innovactiv Inc
Priority date: 2008-04-15
Filing date: 2009-04-15
Publication date: 2011-05-30
Also published as: BRPI0910937B1; US20210330691A1; US11752168B2; US11040058B2; AU2009238172A1; EP2265249B1; CA2720542C; ES2700986T3; CN102083408A; EP2265249A4; EP2265249A1; AU2009238172A2; CA2720542A1; US20110150795A1; PL2265249T3; JP5721619B2; BRPI0910937A2; US20180256627A1; JP2011516584A; KR20100136537A

Abstract

Aquí se describe una composición para el cuidado de la piel que comprenden cuando menos un exopolisacárido (EPS) que se origina de una estera microbiana, en donde el EPS está en una concentración de aproximadamente 0.001 % p/p a aproximadamente 1.5 % p/p de la composición. De preferencia, el EPS se deriva de microorganismos aislados de esteras microbianas encontradas en la Polinesia Francesa. La composición es útil para reducir y evitar signos de envejecimiento de la piel y daño ambiental mediante alteración del metabolismo de las células de la piel y mejorando la hidratación.

Description

COMPOSICIONES COSMÉTICAS QUE COMPRENDEN EXOPOLISACÁRIDOS DERIVADOS DE ESTERAS MICROBIANAS Y SU USO REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama prioridad, bajo 35 U.S.C. § 119(e), de la solicitud provisional de patente de los E.U.A. Número de Serie 61/044,992, presentada en abril 15, 2008. Todos los documentos anteriores se incorporan aquí en su totalidad por referencia.

CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención en general se refiere a composiciones cosméticas y a métodos de su uso.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La piel es una barrera física al medio ambiente. Es la alteración de las propiedades barrea y el daño actual a esta barrera lo que provoca condiciones de la piel .

La epidermis y la dermis, separadas por la membrana basal, constituyen la cubierta cutánea en la hipodermis. La epidermis es la capa más superficial de la piel y le proporciona su resistencia e impermeabilidad. La alteración de esta capa afecta negativamente la calidad percibida de la piel y ' llevará eventualmente a enve ecimiento cutáneo. La dermis, la capa interna de la piel, és tejido conjuntivo compuesto por células (esencialmente fibroblastos) dispersos en un medio complejo denominado la matriz extracelular (ECM) . Esta matriz consiste de colágeno y fibras de elastina, glicoproteinas (fibronectina y laminina) y proteoglicanos . La matriz extracelular sirve como una estructura para las células, permitiendo que tejidos y órganos se unan o adhieran a organismos pluricelulares.

El envejecimiento cutáneo es un fenómeno complejo responsable por cambios progresivos de la piel. El envejecimiento de la piel resulta de dos procesos: (1) un proceso intrínseco, que corresponde al envejecimiento cronológico, y (2) un proceso extrínseco que resulta primordialmente del efecto nocivo de exposición a tensiones ambientales. Factores Genéticos, exposición a UV, factores climáticos (aspereza/viento/frío/calor) , contaminación (química/ radicales libres, de contaminantes, óxido de nitrógeno, metales) , consumo de alcohol o el fumar, son factores involucrados en el envejecimiento cutáneo ¦ Aunque diferentes tipos de células coexisten en la epidermis, los queratinocitos constituyen la mayoría de esta capa y juegan un papel en la resistencia que se proporciona por la barrera mucocutánea. Están involucrados en un programa extremadamente preciso de diferenciación y maduración, que está sujeto a numerosas interacciones entre los compartimientos epidérmico y dérmico. La actividad núcleo de estas células es la síntesis de queratinas, que representa cerca del 90% de todas las proteínas en la epidermis. Las capas inferiores de células adyacentes a la dermis son las células básales que se reproducen. Conforme maduran las células, se mueven hacia la capa exterior de piel llevando a diferenciación terminal de las células. Durante el proceso de maduración, la fisiología, cambian la composición química, forma y operación de las células. Cuando las células llegan a la capa superior de la piel - el estrato córneo - las células se denominan corneocitos y nos son más viables. Los corneocitos carecen de un núcleo y estructuras celulares. Los corneocitos son células de forma hexagonal, planas, llenas con proteínas de queratina, queratina en agua circundadas por una envolvente de proteína y lípidos . La forma celular y la orientación de las proteínas de queratina agregan resistencia al estrato córneo. Hay 10-30 capas de corneocitos apilados. Las células permanecen conectadas entre sí por puentes de proteínas denominados desmosomas. Bicapas apiladas de lípidos circundan a las células en el espacio extracelular. La estructura resultante es la barrera física natural y de retención del agua de la piel.

Durante el proceso de maduración, las células viables que se mueven hacia el estrato córneo, empiezan a agrupar proteínas en gránulos. Estos gránulos están presentes en la capa celular granular de la piel y se llenan con una proteina denominada filagrina. La filagrina se compleja con proteínas de queratina en las células granulares. Este complejo protege a la filagrina contra la descomposición proteolítica . Conforme las células degenerantes se mueven hacia la capa exterior de la piel, las enzimas descomponen el complejo queratina-filagrina . La filagrina está en el exterior de los corneocitos y queratina que retiene agua permanece dentro de los corneocitos del estrato córneo. Cuando el contenido de humedad de la piel se disminuye, enzimas proteolíticas específicas en el estrato córneo se activan para romper o descomponer adicionalmente la filagrina en aminoácidos libres. Los aminoácidos libres, junto con otros productos químicos fisiológicos tales como ácido láctico, urea y sales, están presentes en el estrato córneo. En conjunto estos productos químicos se denominan "factores humectantes naturales" y son responsables por mantener húmeda la piel y plegable al atraer y mantener la propiedad del agua. El contenido de agua del estrato córneo normalmente es de aproximadamente 30%. La descomposición proteolítica de filagrina en aminoácidos solo sucede cuando la piel está seca para controlar la presión osmótica de la piel y la cantidad de agua que retine. La transglutaminasa es una enzima involucrada en la formación de estrato córneo y es un marcador específico de diferenciación de queratinocitos en corneocitos .

La descamación es otro factor importante para mantener lisa la piel. La descamación es el proceso enzimático de disolver los desmosomas, las conexiones de proteina entre corneocitos, y el desprendimiento eventual de estas células. Opuesto a la producción de aminoácidos de degradación proteolitica de proteínas filagrina, las enzimas proteolíticas responsables ' por descamación, funcionan en la presencia de un estrato córneo bien hidratado. Estas enzimas se ubican xntercelularmente. En la ausencia de agua, las células no se descaman normalmente y el resultado es una piel engrosada, seca, áspera con escamas o escamosa.

El último factor que es necesario para explicar como la barrera natural de la piel funciona para mantener la piel húmeda y plegable, es la función de los lípidos intercelulares. Estos lípidos forman bicapas apiladas (multilaminillas) que circundan los corneocitos en el estrato córneo e incorporan agua en esta arquitectura. Los lípidos se derivan de la degradación de células en la capa granular de la piel (similar al origen de los gránulos de proteína) . Estructuras de lípidos especiales denominadas gránulos laminares, se liberan en los espacios extracelulares de las células en degradación. También hay liberación de lípidos de las membranas celulares anteriores. Estos lipidos liberados incluyen colesterol, ácidos grasos libres y esfingolipidos . Ceramida, un tipo de esfingolipido derivada de los gránulos laminares es uno de los componentes lipidos principales responsables por la generación de las estructuras de lipidos apiladas. Estos lipidos atrapan moléculas de agua en su región hidrofilica (que atrae agua) . Los lipidos apilados recientemente formados que circundan los corneocitos proporcionan una barrera impermeable para el paso de agua fuera del estrato córneo y la prevención de los factores humectantes naturales que lixivian de la piel. Capas de lipidos retienen agua y circundan corneocitos para proporcionar barrera de permeabilidad. Los lipidos intercelulares y los corneocitos que contienen proteínas y factores humectantes naturales trabajan en conjunto para proporcionar una barrera eficiente contra pérdida de agua y retención de agua para mantener la flexibilidad de la piel. Las fuerzas protectoras protegen la piel contra desecación y asaltos ambientales. Hay marcadas disminuciones en lipidos intercelulares después de la edad de 40 años, resultando en mayor susceptibilidad a condiciones de piel seca.

La exposición a irritantes compromete la función de barrera del estrato córneo y disminuye su capacidad para proteger la piel contra tensiones ambientales (por ejemplo, radiación ultravioleta, agentes infecciosos, etc. ) .

Exposición repetida y prolongada a irritantes ambientales resulta- en proteínas de la piel desnaturalizadas, desorganización de las capas de lámina de lipidos, eliminación de los lipidos intercelulares protectores, pérdida de factores humectantes naturales y disminuida cohesión entre las células. Estos daños también son responsables por la pérdida de función de las enzimas responsables por descamación de corneocitos. Hay acentuación de estos problemas con exposición a la contaminación, frió, sol, viento, baja humedad o agentes químicos. Un irritante es cualquier agente que sea capaz de producir daño celular si hay exposición por tiempo suficiente y en concentraciones suficientes. La severidad del daño depende del tipo e intensidad de exposición a estos factores irritantes. También hay factores endógenos que hacen a uno susceptible a piel dañada por factores externos. Estos factores incluyen el tener enfermedades activas de la piel tales como psoriasis, eczema, condiciones de piel seca heredada, una historia previa de enfermedad de la piel, piel sensible y/o edad avanzada.

La exposición a UV es responsable por lesiones a la epidermis y dermis. UVB solar (290-315 nm) afecta esencialmente la epidermis, mientras que UVA (315-400 nm) llega primordialmente a la dermis. Estudio detallado de cambios histológicos debidos a exposición a UV revela engrosamiento de la piel, pérdida de elasticidad y disminución en funciones inmunes. Radiaciones UV crónicas provocan modificación de las propiedades biomecánicas de la dermis, que hacen aparecer las arrugas. Radiación actinica afectas la epidermis y dermis a diferentes niveles. La activación del proceso de elastosa corresponde a la implementacion de un tejido anormal en la zona superior de la dermis, lo que es muy característico de la acción crónica de UVB . Este nuevo tejido se caracteriza por una hiperplasia de fibras elásticas anormales y por la ocurrencia de fibras dañadas con la pérdida de la orientación paralela de microfibrilas alrededor de elastina (KLINGMAN LH, J. Invest. Dermatol . 1985-84-272-6).

Este proceso se acopla con un aumento de acumulación de fibras de fibronectina y de compuestos fibrilares, que son diferentes de la elastina. El disponer este tejido es responsable por la pérdida de propiedades físico químicas de la dermis. Fibras de colágeno alteradas por UVB se presentan como haces densos observables. La radicación UVB cuya energía luminosa se absorbe directamente por el ADN, primordialmente lleva a cambio de la base pirimídica.

Por lo tanto, hay necesidad por desarrollar nuevos enfoques para la prevención y/o tratamiento de signos de envejecimiento de la piel y otras condiciones y desordenes de la piel.

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN Más específicamente, de acuerdo con la presente invención, se proporciona una composición para el cuidado de la piel que comprende cuando menos un exopolisacárido (EPS) que se origina de una estera microbiana, el EPS está en una concentración de aproximadamente 0.001% a aproximadamente 1.5% p/p de la composición.

En una modalidad específica, la estera microbiana es una estera microbiana marina. En otra modalidad específica, el EPS como mínimo se genera por fermentación de un microorganismo aislado de la estera microbiana. En otra modalidad específica, el EPS como mínimo comprende cuando menos dos EPSS, cada EPS se origina de diferentes microorganismos aislados de la estera microbiana. En otra modalidad específica, el EPS como mínimo comprende cuando menos dos EPSS, cada EPS se origina de diferentes esteras microbianas. En otra modalidad específica, la estera microbiana se origina de la Polinesia Francesa. En otra modalidad específica, el EPS como mínimo se modifica en forma química o física. En otra modalidad específica, el EPS como mínimo se despolimeriza . En otra modalidad específica, el EPS como mínimo es EPS nativo. En otra modalidad específica, · el EPS como mínimo es sulfatado, acetado, lactado, succinado o piruvado .

En otra modalidad especifica, la composición de la presente invención es para utilizar en cuidado de antienvejecimiento de la piel. En otra modalidad especifica la composición de la presente invención es para utilizar en cuidado después de exposición de la piel al sol. En otra modalidad especifica, la composición de la presente invención es para utilizar en cuidado de la piel con filtro solar. En otra modalidad especifica, la composición de la presente invención es para utilizar para evitar o reducir cuando menos un signo de envejecimiento de la piel.

En una modalidad especifica la composición es para mejorar la hidratación. En otra modalidad especifica, la composición es para mejorar la morfología del estrato córneo. En otra modalidad específica, la composición es para mejorar el micro relieve de la piel. En otra modalidad específica, la composición es para mejorar la descamación. En otra modalidad específica, la composición es para mejorar diferenciación de queratinocitos. En otra modalidad específica, la composición es para reducir la adhesión bacteriana en la superficie de la piel. En otra modalidad específica, la cepa bacteriana es Staphylococcus epidermidis o Staphylococcus aureus. En otra modalidad específica, la composición es para estimular producción de ácido hialurónico por fibroblastos humanos senescentes o que empiezan a envejecer. En otra modalidad específica, la composición es para estimular síntesis de lípidos total de epidermis. En otra modalidad específica, la composición es para estimular la expresión de al menos un gen involucrado en descamación de la piel. En otra modalidad específica, el gen es calicreína 5, neurosina o enzima quimiotripsina de estrato córneo. En otra modalidad específica, la composición es para estimular la expresión de al menos un gen involucrado en diferenciación de queratinocitos . En otra modalidad específica, el gen es filagrina, loricrina o involucrina. En otra modalidad específica, la composición es para estimular la expresión de transglutaminasa . En otra modalidad específica, la composición es para reducir peróxidos de lípidos intracelulares de células de la piel irradiada .

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se proporciona un uso de al menos un exopolisacárido (EPS) que se origina de una estera microbiana, para la fabricación de una composición para el cuidado de la piel. En una modalidad específica del uso de la presente invención, la composición para el cuidado de la piel es -una composición para el cuidado de la piel antienvejecimiento, una composición para el cuidado de la piel después de asolear o una composición para el cuidado de la piel de filtro solar.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se proporciona un uso de cuando menos de al menos un exopolisacárido (EPS) que se origina de una estera microbiana, para evitar o reducir cuando menos un signo de envejecimiento de la piel.

En una modalidad especifica, el uso es para mejorar hidratación. En otra modalidad especifica, el uso es para mejorar la morfología del estrato córneo. En otra modalidad especifica, el uso es para mejorar micro relieve de la piel. En otra modalidad especifica, el uso es para mejorar descamación. En otra modalidad especifica, el uso es para mejorar diferenciación de queratinocitos . En otra modalidad especifica, el uso es para reducir adhesión bacteriana en la superficie de la piel. En otra modalidad especifica, la cepa bacteriana es Staphylococcus epidermidis o Staphylococcus aureus. En otra modalidad especifica, el uso es para estimular producción de ácido hialurónico por fibroblastos humanos senescentes. En otra modalidad especifica, el uso es para estimular síntesis de lípidos total de epidermis. En otra modalidad específica, el uso es para estimular la expresión de al menos un gen involucrado en la descamación de la piel. En otra modalidad específica, el gen es calicreína 5, neurosina o enzima quimiotrípsica de estrato córneo. En otra modalidad específica, el uso es para estimular la expresión de al menos un gen involucrado en diferenciación de queratinocitos . En otra modalidad especifica, el gen es filagrina, loricrina o involucrina. En otra modalidad especifica, el uso es para estimular la expresión de transglutaminasa . En otra modalidad especifica, el uso es para reducir peróxidos lipidos intracelulares de células de piel irradiadas.

De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se proporciona un método para evitar o reducir un signo de envejecimiento de la piel en un sujeto, que comprende administrar una composición que comprende una cantidad efectiva de al menos un exopolisacárido (EPS) que se origina de una estera microbiana, en la piel del sujeto, con lo que se evita o reduce el signo de envejecimiento de la piel.

Otros objetivos, .ventajas y características de la presente invención serán más aparentes ante lectura de la siguiente descripción no restrictiva de modalidades específicas de las mismas, dadas a manera de ejemplo solamente con referencia a los dibujos acompañantes.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS En los dibujos anexos: La Figura 1 son fotografías de explantes del día cinco después de contacto con contaminantes sin tratamiento EPS (panel izquierdo inferior) y con tratamiento EPS (panel derecho) ; La Figura 2 muestra etiquetado de filagrina en explantes no deslipidados, después de 3 horas sin tratamiento; La Figura 3 muestra etiquetado de filagrina en un explante deslipidado después de 3 horas sin tratamiento; La Figura 4 muestra etiquetado de filagrina en un explante deslipidado después de 3 horas con tratamiento EPS (Pol-6) ; La Figura 5 muestra etiquetado de filagrina en un explante deslipidado después de 3 horas con tratamiento EPS (Pol-6 y Pol-3) ; La Figura 6 muestra etiquetado de filagrina en un explante deslipidado después de 3 horas con tratamiento EPS (Pol-6 y Pol-8) ; La Figura 7 muestra etiquetado de transglutaminasa en un explante no deslipidado después de 3 horas sin tratamiento; • La Figura 8 muestra etiquetado de transglutaminasa en un explante deslipidado después de 3 horas sin tratamiento; La Figura 9 muestra etiquetado de transglutaminasa en un explante deslipidado después de 3 horas con tratamiento EPS (Pol-6) ; La Figura 10 muestra fotografías de morfología de piel muy hidratada (panel superior) a muy seca (panel inferior) ; La Figura 11 muestra fotografías antes y después de estado de hidratación de capas de piel superficial tratadas con EPS; La Figura 12 muestra fotografías antes y después de estado de hidratación de capas de piel superficial tratadas con placebo; La Figura 13 muestra gráficamente la diferencia en hidratación entre tratamiento de EPS y placebo de las Figuras 11 y 12, respectivamente; La Figura 14 muestra fotografías antes y después de estado de micro relieve de piel tratada con EPS; La Figura 15 muestra fotografías antes y después de estado de micro relieve de piel tratada con placebo; y La Figura 16 muestra gráficamente la diferencia en hidratación entre tratamiento de EPS y placebo de las Figuras 14 y 15, respectivamente.

DESCRIPCIÓN DE MODALIDADES ILUSTRATIVAS Esteras microbianas se desarrollan en una gran variedad de sitios encontrados en áreas costera, tales como playas arenosas, marismas, deltas y estuarios, salinas y lagunas. Estos ecosistemas únicos en general están constituidos de capas viscosas laminadas verticalmente, producidas por el desarrollo de diferentes microorganismos. Están sujetas a variaciones extremas de de temperatura, salinidad, acidez y rayos UV. Células de la mayoría de las bacterias están circundadas por capas externas mucilaginosas constituidas esencialmente de polisacáridos . Estas capas están más o menos conectadas a la superficie celular. Polisacáridos también pueden estar presentes en el medio de cultivo. Estos tipos de polisacáridos se refieren como exopolisacáridos (EPS) (Gautret P, Trichet J Automicrites in modern cyanobacterial stromatolite deposits of Rangiroa, Tuamotu Archipelago, French Polinesia Biochemical parameters underlaying their formation 2005 Sedimentary Geology 178 55-73, Mao Che L, Andrefouet S, Bothorel V, Guezennec M, Rougeaux H, Guezennec J, Deslandes E, Trichet J, Matheron R, Le Campion T, Payri C, y Caumette P. Physical, chemical, y microbiological characteristics of microbial mats (KOPARA) in the South Pacific atolls of French Polinesia 2001 Can. J. Microbiol. 47 994-101, Richert L, Golubic S, Le Guedes R, Ratiskol Jl Payri C, Guezennec J. 2005. Characterization of Exopolysaccharides Produced by Cyanobacteria Isolated from Polynesian Microbial Mats Current Microbiology 51 379-384, Richert L, Golubic S, Le Guédés R, Hervé A, Payri C Cyanobacterial populations that build 'kopara' microbial mats in Rangiroa, Tuamotu Archipelago, French Polynesia European 2006 Journal of Phycology 41 (3) 259-279) .

En la Polinesia Francesa crecen esteras microbianas en los arrecifes de coral de atolones e isletas (motu) de algunas altas islas del archipiélago Society. Su espesor depende de sitios y condiciones ambientales y puede estar en el intervalo desde unos cuantos milímetros a varias decenas de centímetros . En el Archipiélago Tuamotu estas esteras microbianas rojizas y gelatinosas se llaman "Kopara". Hace años este recurso natural se consumió cuando había escasez de alimentos; todavía parece ser utilizado para alimento en algunos archipiélagos ' del Océano Pacifico Central y Noroeste. También se empleo como emplasto de sanado. Debido a alguna de sus propiedades, especialmente para nutricionales y médicas, Kopara puede ser de interés en diversos campos, por ejemplo médicos y paramédicos (propiedades antibacterianas y de sanado) , para la industria de alimentos (carotenoides empleados como agentes colorantes) y pedología (estabilizantes) .

Cualquiera que sea el tipo de estanque en donde se encuentren' las Koparas, su estructura es bastante homogénea, consiste de una estera microbiana laminada verticalmente . La mayoría de las esteras microbianas, es dominada por algunos microorganismos caracterizados por sus grupos funcionales cianobacterias (aquellas del genero Phormidium junto con Scytonema, Schizothrix y Chlorococcales) , bacterias fotosintéticas sulfurosa tales como por ejemplo, Cromatium y Tiocapsa, bacterias rojas no sulfurosas (incluyendo PNSB Rhodospirillum y Rhodopseudomonas/Rhodobium/ Blastochloris) y reductores de sulfato (primordialmente Desulfovibrio) .

Estas especies se han descrito parcialmente en la literatura y aunque la mayoría de estas especies no es patogénica, pertenecen a géneros conocidos, ciertas especies sin embargo son novedosas. Algunas de estas bacterias, que viven y se reproducen bajo condiciones extremas, se ha encontrado que son capaces de crecer bajo condiciones de cultivo de laboratorio, para sintetizar y secretar en su medio de cultivo, una variedad de moléculas.

En forma más precisa, la presente invención se refiere a las propiedades ventajosas en los campos cosméticos y de dermatología de EPS secretados de bacterias que se originan de esteras microbianas.

Estos EPSs son polímeros de alto peso molecular (típico de aproximadamente 100,000 Daltons a más de aproximadamente 5,000,000 Daltons). Consisten de cadenas de diversas azúcares de ácidos o neutros. Se conoce que algunos de estos EPSs están ramificados pero la estructura de otros permanece desconocida.

En los ejemplos siguientes se presenta la capacidad de nueve EPS (Pol-1, Pol-2 Pol-9) aislados de esteras microbianas, para estimular la descamación y mejorar la función de barrera de la piel mientras que mantienen la idratación. Estos EPSs difieren químicamente entre sí y se deriva de la fermentación de nueve especies distintas de bacterias de esteras microbianas que se originan de la Polinesia Francesa. Características de cada uno de estos EPSs se proporcionan en la Tabla I siguiente.

TABLA I Microorganismo Composición de Substuyentes azúcar Pol--1 Ácidos Urónicos Lactato >35% Pol--2 Ácidos Urónicos Bajo nivel de cerca del 25% sulfatos alto nivel de acetato; azúcares Lactato neutras Pol--3 Altero-monas Azúcares Bajo nivel de macleoldi: vaci- acidicas 34% Lactato lus-crece a 30 azúcares (aproximagrados C, medio neutras 60% damente 4%) salino Pol -4 Ácidos urónicos Bajo nivel de cerca del 40% sulfatos Pol-5 Al tero-monas Ácidos urónicos Nivel e macleoldi: vasi- cerca del 25% sulfato (8¾) lus-crece a 30 azúcares grados C, medio neutras 57% salino Pol-6 Vibrio Alto nivel de Acetatos alginolyticus: ácidos urónicos presentes halófilos azúcares ácidas Sulfatos 12% azúcares (0.5%) neutras 22% Fosf tos (2.0%) Pol-7 Mayoría de Presencia de azúcares succinatos y neutras acetatos Pol-8 Mayoría de Acetatos y azúcares piruvatos neutras Pol-9 n-acetil-gluco- Acetatos samina >20% mayoría de glucosa también mannosa y ácido glucuró-nico Tabla I (continúa) Las Tablas II y III siguientes suministran proporciones molares de diversos azúcares en EPSs Pol-3 y Pol-6, con base en Glucosa = 10 0 para azúcares neutras y con base en ácido glucurónico = 10.0 para azúcares ácidas .

TABLA II TABLA III Pol-6 Azúcares neutras Glucosa 10.0 Galactosa Ausente Ramnosa 0.7 Mañosa 0.7 Fucosa Trazas Xilosa Ausente Azúcares acidicas Ácido 10.0 Glucurónico Ácido Ausente Glalacturónico Con respecto a Pol-5, no se detectó substituyente en porciones azúcar como se determina con HPLC y Dionex. Las proporciones de monosacáridos se determinaron por cromatografía en fase Gas. D-Glucosa: 17.2% (proporción Molar: 3.2); D-Glalactosa : 15.3% (MR: 2.9); D-Mannosa: 2.6 % (MR: 0,5); ácido-D-glucurónico 13.0 % (MR: 2.0); ácido D-glalacturónico: 6.4% (MR: 1.0).

La presente invención abarca métodos para administrar EPS como mínimo en una cantidad efectiva, para proporcionar los resultados deseados. En modalidades específicas de la presente invención, exopolisacáridos de la presente invención se emplean en una concentración entre aproximadamente 0.01 g/L a aproximadamente 15 g/L en la composición para el cuidado de la piel. Pueden incluirse en una concentración de 0.001% a aproximadamente 1.5 % p/p de la composición.

Los exopolisacáridos de la presente invención pueden formularse en una composición cosmética de aplicación tópica (por ejemplo, una formulación tópica) . Ejemplos no limitantes de estas composiciones tópicamente aplicables incluyen crema para el cuidado de la piel, ungüento-crema limpiadora, loción para el cuidado de la piel, gel para el cuidado de la piel, espuma para el cuidado de la piel, composición protectora solar, cuidado de la piel-filtro solar, crema limpiadora de maquillaje, loción para quitar el maquillaje, crema base, base liquida, preparación de baño y regadera, composición desodorante, composición antitranspitrante, composición de productos para rasurar, gel o loción para después de afeitar, composición de auxiliares de belleza, crema depilatoria, composición de jabón, composición . limpiadora, barra limpiadora, para cuidado del bebé, para cuidado del cabello, ' champú, loción fijadora, loción para tratamiento, crema para el cabello, gel para el cabello, composición colorante, composición reestructurante, composición de permanente, composición contra la pérdida del cabello, o cualquier otra composición que esta adaptada para uso en un régimen cosmético tópico.

Cremas, como es bien conocido en las técnicas de formulación farmacéutica y cosmética, son emulsiones liquidas viscosas o semisólidas, ya sea de aceite-en-agua o agua-en-aceite . Las bases de crema son lavables · con agua y contienen una fase de aceite, un emulsificante y una fase acuosa. La fase de aceite, también denominada la fase "interna" en general comprende petrolato y un alcohol graso tal como cetil o estearil alcohol. La fase acuosa usualmente, aunque no necesariamente excede en volumen a la fase de aceite, y en general contiene un humectante. El emulsificante en una formulación de crema, generalmente es un surfactante no iónico, aniónico, catiónico o anfotérico.

Las lociones son preparaciones para aplicarse a la superficie de la piel sin fricción, y típicamente son preparaciones líquidas o semilíquidas en donde partículas sólidas, incluyendo el agente activo, están presentes en una base de agua o alcohol. Las lociones son usualmente suspensiones de sólidos, y de preferencia para el presente propósito, comprenden una emulsión- aceitosa líquida del tipo aceite-en-agua . Las lociones son formulaciones preferidas para tratar grandes áreas del cuerpo, debido a la facilidad de aplicar una composición más fluida. En general, es necesario que la materia insoluble en una loción sea finamente dividida. Las lociones típicamente contienen agentes de suspensión para producir mejores dispersiones así como compuestos útiles para localizar y mantener el agente activo en contacto con la piel, por ejemplo metil celulosa, carboximetil celulosa sodio o semej antes .

Las soluciones son mezclas homogéneas, preparadas al disolver una mas sustancias químicas (solutos) en un líquido, de manera tal que las moléculas de la sustancia disuelta se dispersen entre aquellas del solvente. La solución puede contener otros productos químicos cosméticamente aceptables para amortiguar, estabilizar o conservar el soluto. Ejemplos comunes de solventes empleados para preparar soluciones son etanol, agua, propilen glicol o cualesquiera otros vehículos cosmé icamente aceptables.

Los geles son sistemas semisólidos de tipo suspensión. Geles de fase sencilla contienen macromoléculas orgánicas distribuidas en forma sustancialmente uniforme a través del líquido portador, que típicamente es acuoso, pero también de preferencia contiene un alcohol y opcionalmente, aceite. "Macromoléculas orgánicas" es decir agentes de gelificación son polímeros de ácido acrílico entrelazados tales como la familia de polímeros "carbómero", por ejemplo carboxipolialquileños que pueden obtenerse comercialmente bajo CarbopolMR. Otros ejemplos son polímeros hidrofílicos tales como polietilen óxidos, copolímeros de polioxietileno-polioxipropileno y polivinilalcohol; polímeros celulósicos tales como hidroxipropil celulosa, hidroxietil celulosa, hidroxipropil metilcelulosa, hidroxipropil metilcelulosa ftalato, y metil celulosa; gomas tales como tragacanto y goma xantano, alginato de sodio y gelatina. A fin de preparar un gel uniforme, agentes de dispersión tales como alcohol o glicerina pueden agregarse o el agente de gelificación puede dispersarse por trituración, mezclado o agitación mecánica o sus combinaciones.

Los ungüentos son preparaciones semisólidas que típicamente se basan en petrolato u otros derivados de petróleo. La base de ungüento específica a emplearse, como se prefiere por aquellos con destreza en la técnica, es aquella que proporcione un número de características convenientes, por ejemplo emoliencia o semejantes. Como con otros portadores o vehículos, una base de ungüento deberá ser inerte, estable, no irritante y no sensibilizante. Como se explica en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th Ed (Easton, Pa : Mack Publishing Co., 1995), en las páginas 1399-1404, y las bases de ungüento pueden agruparse en cuatro clases: bases -oleaginosas; bases emulsificables ; bases de emulsión; y bases solubles en agua. Las bases de ungüento oleaginosas incluyen por ejemplo aceites vegetales, grasas obtenidas de animales e hidrocarburos semisólidos que se obtienen de petróleo. Bases de ungüento emulsificables, también conocidas como bases de ungüento absorbentes, contienen poco o nada de agua e incluyen por ejemplo sulfato de hidroxiestearina, lanolina anhidra y petrolato hidrofilico. Bases de ungüentos en emulsión son emulsiones de agua-en-aceite (W/0= Water-in-Oil) o emulsiones de aceite-en-agua (0/W= Oil-in-Water) e incluyen por ejemplo cetil alcohol, gliceril monoestearato, lanolina, y ácido esteárico. Bases de ungüento solubles en agua preferidas se preparan a partir de polietilen glicoles de variante peso molecular, de nuevo ver Remington's The Science and Practice of Pharmacy, para mayor información.

Las pastas son formas de dosis semisólidas en donde el agente activo se suspende en una base conveniente. Dependiendo de la naturaleza de la base, las pastas se dividen entre pastas grasas o aquellas ; elaboradas a partir de geles acuosos de fase sencilla. La base en una pasta grasa, generalmente es petrolato o petrolato hidrofilico o semejantes. Las pastas elaboradas a partir de geles acuosos de una sola fase, en general incorporan carboximetilcelulosa o semejantes como una base.

Formulaciones también pueden prepararse con liposomas, micelios y microesferas . Los liposomas son vesículas microscópicas que tienen una pared de lipidos que comprende una bicapa de lipidos y en el presente contexto, encapsulan uno o más componentes de las formulaciones antienvejecimiento. Preparaciones de liposomas aquí incluyen preparaciones catiónicas (de carga positiva) , aniónicas (de carga negativa) y neutras. Liposomas catiónicos están fácilmente disponibles. Por ejemplo liposomas de N [1-2, 3-dioleiloxi ) propil] -N, N, N-trietilamonio (DOTMA) están disponibles bajo la marca LipofectinMR (GIBCO BRL, Grand Island, N Y.). Similármente, liposomas aniónicos y neutros están fácilmente disponibles por igual, por ejemplo de Avanti Polar Lipids (Birmingham, Ala), o pueden prepararse fácilmente utilizando materiales fácilmente disponibles. Estos materiales incluyen fosfatidil colina, colesterol, fosfatidil etanolamina, dioleoilfosfatidil colina (DOPC) , dioleoilfosfatidil glicerol (DOPG) , y dioleoilfosfatidil etanolamina (DOPE) , :entre otros. Estos materiales también pueden mezclarse con DOTMA en proporciones apropiadas. Métodos para producir liposomas que utilizan estos materiales son bien conocidos en la técnica .

Se conocen en la técnica micelios que están constituidos de moléculas surfactantes dispuestas de manera tal que sus grupos de cabeza polar forman una cubierta esférica exterior, mientras que las cadenas de hidrocarburos hidrofóbicas se orientan hacia el centro de la esfera, formando un núcleo. Los micelios forman una solución acuosa que contiene surfactante a una concentración suficientemente elevada, de manera tal que resultan naturalmente los micelios. Surfactantes útiles para formar micelios incluyen pero no están limitados a laurato de potasio, octan sulfonato de sodio, decan sulfonato de sodio, dodecan sulfonato de sodio, lauril sulfato de sodio, -docusato de sodio, bromuro de deciltrimetilamonio, bromuro de dodeciltrimetilamonio, bromuro de tetradeciltrimetilamonio, cloruro de tetradeciltrimetil amonio, cloruro ¦ de dodecilamonio, polioxil-8 dodecil éter, polioxil-12 dodecil éter, nonoxinol 10, y nonoxinol 30.

Microesferas, similármente pueden incorporarse en las presentes formulaciones. Como los liposomas y micelios, las microesferas esencialmente encapsulan uno o más componentes de las presentes formulaciones. En general, aunque no necesariamente, se forman de lipidos, de preferencia lipidos cargados tales como fosfolipidos . La preparación de microesferas de lipidos es bien conocida en la técnica y se describe en los textos y literatura pertinentes .

En una modalidad, la composición de la presente invención además comprende cuando menos un ingrediente/agente activo adicional. En una modalidad adicional, el ingrediente activo adicional como mínimo anteriormente mencionado modula cuando menos uno de diferenciación celular, actividad metabólica celular, estructura celular, proliferación celular, procesos extracelulares y pigmentación.

La composición de la presente invención además puede comprender cuando menos uno de un agente que modula diferenciación o proliferación celular, un agente anestésico, un agente antiacné, agente antienvejecimiento, agente antibacteriano, agente anticelulitis, agente antifugal, agente antiinflamatorio, agente anti-irritante, agente antioxidante, agente antiparasitario, agente anticontaminación o anticontaminante, agente antipruritico, agente antirosácea, agente antiseborrea, agente antitensión, agente antitelangectasia, agente antiviral, agente antiarrugas, agente para el cuidado del bebé, agente para el baño y el cuerpo, agente calmante, agente de limpieza, agente de síntesis de colágeno, agente inhibitorio de elastasa, agente exfoliante, agente exfoliante o descamación facial, estabilizador, agente para el cuidado de los pies, agente depurador de radicales libres, agente modulador de función inmune, agente queratolítico, agente de desprendimiento, agente eliminador de maquillaje, agente estimulador de melanogénesis , agente para el cuidado del cabello, agente inhibidor de matriz metaloproteinasa, agente humectante, agente absorbente de aceite, o agente osmoregulador, agente anti fotoenvejecimiento, agente protector, agente de re uvenecimiento, agente regenerador, agente de reestructuración, agente de piel sensible, agente de producto para rasurar, agente mej orador protector de la piel, agente aclarador de la piel, agente reparador de la piel, agente adelgazante, agente suavizante, agente ablandador, agente protector solar, agente de bronceado sin sol, agentes de tensión y agentes blanqueadores, o cualquier otro agente adaptado para utilizar en un régimen cosmético que comprende aplicación tópica de la composición cosmética, y que complementa o suplementa el efecto de los EPS de la presente invención.

Sin estar asi limitados, agentes que modulan la diferenciación o proliferación celular, incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos , péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen ácido retinóico y sus derivados (retinol, retinaldehido, retinol palmitato, ácido transretinóico, ácido 13-cis retinóico, ácido 9-cis retinóico, retinoil glucuronoides , tretinoina, isotretinoina, etretinato, acitretino, tazaroteno, adapaleno, ß-caroteno, retinil éster) , vitamina D Y sus derivados (colecalciferol, ergócalciferol, 25- hidroxicolecalciferol) , factores de crecimiento, derivados de extradiol. También incluyen cualquiera de sus combinaciones .

Sin estar asi limitados, anestésicos incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen clorhidrato de lidocaina y sus derivados. También incluye cualquier combinación de los mismos.

Sin estar asi limitados,. agentes antiacné incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos, péptidos, extractos de levadura, y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen benzoil peróxido, ácido retinóico y sus derivados (retinol;. retinaldehido, retinil palmitato, ácido transretinóico, ácido 13-cis retinóico, 9-cis retinóico, retinoil glucuronoides , tretinoina, isotretinoina, etretinato, acitretina, tazaroteno, adapaleno, ß-caroteno, retinil éster) , ácido salicilico, azufre, cal sulfurada, alcohol y acetona. También incluyen cualquier combinación de los mismos.

Sin estar así limitados, agentes antiarrugas/anti envejecimiento incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos de vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteolíticos , péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen ácido hialurónico, 2-pirrolidona carboxilato de sodio, glicosaminoglicanos, quinetina, ácido retinóico y sus derivados (retinol, retinaldehído, retinil palmitato, ácido transretinóico, ácido 13-cis retinóico, ácido 9-cis retinóico, retinoil glucuronoides, tretinoína, isotretinoína, etretinato, acitretina, tazaroteno, adapaleno, ß-caroteno, retinil éster) , factor de crecimiento epidérmico, ceramida, etilbisiminometilguayacol cloruro de manganeso, inhibidores de glicación, extracto de chrysanthellum indicum y extracto de aquae de aphanizomenon flos . También incluyen cualquier combinación de los mismos .

Sin estar así limitados, los agentes antibacterianos incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteolíticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales, y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen extracto de eucalipto, fosfato de clindamicina, cavacrol, eritromicina, y antibióticos que pertenecen al grupo de tetraciclinas . También incluye cualquier combinación de los mismos.

Sin estar asi limitados, agentes antifungales incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extracto de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos , péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen- econazol, quetoconazol, miconazol, anfotericina B, terbinafina y octopirox. También incluye cualquier combinación de los mismos.

Sin estar asi limitados, agentes antiinflamatorios incluyen datos de plantas como extractos de algas, extracto de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos, péptidos, extractos de levadura, sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen alantoina, vitamina E y sus derivados (a-tocoferol, d-tocoferol, ?-tocoferol) , aceite de manzanilla, aceite de gingko biloba y extracto de camellia sinensis. También incluyen cualquier combinación de los mismos.

Sin estar asi limitados, agentes anti irritantes/de alisamiento/suavizantes/calmantes incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extracto vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos , péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen alantoina, extracto de camellia sinensis, aceite de lavanda, aloe vera, extracto de tilo, extracto de epilobium angustifolium, extracto de chysanthellum indicum, extracto de cola nítida y extracto de fermentos de alteromonas . También incluye cualquier combinación de los mismos.

: Sin estar así limitados, agentes antioxidantes incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetables, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen furfuriladenina, pantenol, ácido lipoico, ubiquinona, niacinamida, melatonina, catalasa, glutationa, superóxido dismutasa, polifenoles, cisteina, alantoína, quinetina, vitamina C y sus derivados (ascorbil palmitato, ascorbil fosfato de magnesio, ascorbil fosfato de sodio) , vitamina E y sus derivados (a-tocoferol, d-tocoferol, ?-tocoferol) , extracto de semillas de uvas y extracto de camelia sinensis. También incluyen cualquiera de sus combinaciones .

Sin estar asi limitados, agentes antipruriticos incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteolíticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen tenaldina, trimeprazina, y ciproheptadina . También incluyen cualquiera de sus combinaciones.

Sin estar así limitados, agentes anti- rosácea/anti-telangiectasia incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteolíticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen metronidazol , vasoconstrictores, peróxido de benzoilo, ácido azelaico, azufre, proteínas de soya y glicosaminoglicanos . También incluyen cualquiera de sus combinaciones.

Sin estar asi limitados, agentes anti-seborrea incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen- derivados de progesterona, isoleutrol e hinoquitiol. También incluyen cualquiera de sus combinaciones • Sin estar asi limitados, agentes de piel sensible incluyen' extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen aceite de rosas y aceite de jazmín. También incluyen cualquiera de sus combinaciones.

Sin estar asi limitados, agentes limpiadores incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen lauril sulfato de amonio, lauret sulfato de amonio, MEA cocamida, lauril sulfato de trietanolamina, estearato de sodio y extracto de hojas de ortiga. También incluyen cualquiera de sus combinaciones.

Sin estar asi limitados, agentes de síntesis de colágeno incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteolíticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen ácido retinóico y sus derivados (retinol, retinaldehido, retinil palmitato, ácido trans- retinóico, ácido 13-cis retinóico, ácido 9-cis retinóico, retinoil glucuronoides , tretinoína, isotretinoína, etretinato, acitretina, tazaroteno, adapaleno, ß-caroteno, retinil éster) , vitamina C y sus derivados (ascorbil palmitato, ascorbil fosfato de magnesio, ascorbil fosfato de sodio) , factores de crecimiento y sus derivados. También incluyen cualquiera de sus combinaciones.

Sin estar así limitados, agentes exfoliantes incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteolíticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen alfa/beta hidroxi ácidos, ácido salicilico, ácido glicólico, ácido láctico, ácido cítrico y polvo de cáscaras de nueces. También incluyen cualquiera de sus combinaciones .

Sin estar así limitados, agentes de exfoliación facial incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteolíticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen ácido glicólico, ácido láctico, ácido tricloroacético y fenol. También incluyen cualquiera de sus combinaciones.

Sin estar así limitados agentes afirmantes/de tensión incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteolíticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen dimetilaminoetanol, activos neuro-cosméticos (tipo BotoxMR) , quitosana, extracto de árnica, aceite de hinojo dulce y extracto de papaya. También incluyen cualquiera de sus combinaciones .

Sin estar asi limitados, agentes de depuración de radicales libres/anticontaminación/anti-tensión incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen extractos de semilla de uvas, alfa-tocoferol y sus ésteres, superóxido dismutasa, algunos agentes quelantes de metales, vitamina C y sus derivados (ascorbil palmitato, ascorbil fosfato de magnesio, ascorbil fosfato de sodio) . También incluyen cualquiera de sus combinaciones.

Sin estar asi limitados, agentes para el cuidado del cabello incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos¦ sintéticos'. Más particularmente, estos agentes incluyen poli-D-glucosamina, poli-N-acetil-D-glucosamina, cloruro de estearalconio y lauril sulfato de trietanolamina . También incluyen cualquiera de sus combinaciones .

Sin estar asi limitados, agentes inhibidores de matriz metalloproteinasa incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen extracto de camelia sinensis, polifenoles, extracto de spatholobi caulis, extracto de euonymus alatus, extracto de rhizoma notopterygn, quercetina, glicosaminoglicanos, polimetoxi flavonoide, N-acetil-cisteina, 2-furildioxima, isoflavona, vitamina- C y sus derivados (ascorbil palmitato, ascorbil fosfato de magnesio, ascorbil fosfato de sodio) , ácido retinóicó y sus derivados (retinol, retinaldehido, retinil palmitato, ácido trans-retinóico, ácido 13-cis retinóicó, ácido 9-cis retinóicó, retinoil glucuronoides, tretinoina, isotretinoina, etretinato, acitretina, tazaroteno, adapaleno, ß-caroteno, retinil éster) y derivados hidroxamato. También incluyen cualquiera de sus combinaciones .

Sin estar asi limitados, agentes humectantes incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen extracto de pepino, 2-pirrolidona carboxilato de sodio, PCA de sodio, hialuronato de sodio, quitina y sus derivados, alfa hidroxi ácidos, ácido hialurónico y proteina de trigo hidrolizado. También incluyen cualquiera de sus combinaciones .

Sin estar asi limitados agentes osmoregulatores incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen manitol, dulcitol y betaina.

Sin estar asi limitados, agentes protectores incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen poli-N-acetil-D-glucosamina, poli-D-glucosamina, alquilamidas , quitosana, extracto de chrysanthellum indicum, extracto de camellia sinensis y extracto de fermento de alteromonas. También incluyen cualquiera de sus combinaciones.

Sin estar así limitados, agentes rejuvenecentes incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteolíticos , péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen extracto de romero, extracto de palosanto, extracto de geranio y vitamina E y- sus derivados (a-tocoferol, d-tocoferol, ?-tocoferol) . También incluyen cualquiera de sus combinaciones.

Sin estar asi limitados, agentes de reparación de la piel incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteolíticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen ácido retinóico y sus derivados (retinol, retinaldehido, retinil palmitato, ácido trans-retinóico, ácido 13-cis retinóico, ácido 9-cis retinóico, retinoil glucuronoides, tretinoina, isotretinoina, etretinato, acitretina, tazaroteno, adapaleno, ß-caroteno, retinil éster) , alantoina, extracto de eucalipto, aceite de lavanda, aceite de rosas y activadores de síntesis de colágeno y activadores de componentes de matriz extracelular de la piel. También incluyen cualquiera de sus combinaciones .

Sin estar así limitados, agentes adelgazantes/anticelulíticos incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, idrolizados proteolíticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen extracto de chrysanthellum indicum, dihidromicetina, teobromina, teofilina, aminofilina, cafeína, hidrocloruro isopropzlarterenol, epinefrina, agonistas de a-MSH, activadores de adenilato ciclasa e inhibidores de fosfodiesterasa . También incluyen cualquiera de sus combinaciones .

Sin estar así limitados, agentes protectores de los rayos del sol/fotoenve ecimiento incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen ácido p-aminobenzoico (???? = p-aminobenzoic acid) y sus derivados, gluconolacto, salicilatos, cinnamatos, benzofenonas , dibenzoilmetanos , oxibenzona, vitamina E y sus derivados (a-tocoferol, d-tocoferol, ?-tocoferol) , cloruro de manganeso de etilbisiminometilguayacol, glicosaminoglicanos, ácido retinóico y sus derivados (retinol-, retinaldehido, retinil palmitato, ácido trans- retinóico, ácido 13-cis retinóico, ácido 9-cis retinóico, retinoil- glucuronoides , tretinoina, isotretinoina, etretinato, acitretina, tazaroteno, adapaleno, ß-caroteno, retinil éster) , dióxido de titanio, octil metoxicinnamato, benzofenona, octil salicilato, extracto de epilobium angustifolium, extracto de rumex occidentalis , extracto de chrysanthellum indicum, extracto de camellia sinensis y extracto de fermento de alteromonas. También incluyen cualquiera de sus combinaciones.

Sin estar asi limitados, agentes estimuladores de melanogénesis/bronceado sin sol, incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen dihidroxiacetona, agonistas cc-MSH, activadores de adenilato ciclasa e inhibidores de fosfodiesterasa . También incluye cualquiera de sus combinaciones .

Sin estar asi limitados, agentes tonificantes incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen extracto de hinojo, extracto de azahar, extracto de palosanto y extracto de avellano o nogal de brujas. También incluyen cualquiera de sus combinaciones.

Sin estar asi limitados, agentes blanqueadores/pigmentantes incluyen extractos de plantas, extractos de algas, extractos de frutas, extractos vegetales, extractos de plantas leguminosas, fermentos, hidrolizados proteoliticos, péptidos, extractos de levadura y sus derivados, extractos de microorganismos, extractos derivados de animales y compuestos sintéticos. Más particularmente, estos agentes incluyen arbutina, ácido azealeico, vitamina C y sus derivados (ascorbil palmitato, ascorbil fosfato de magnesio, ascorbil fosfato de sodio) , hidroquinona, N-acetil-4-S-cisteanimilfehol, ácido kójico, melanostat (melanostatina) , tretinoina, ácido retinóico y sus derivados (retinol, retinaldehido, retinil palmitato, ácido trans-retinóico, ácido 13-cis retinóico, ácido 9-cis retinóico, retinoil glucuronoides , tretinoina, isotretinoina, etretinato, acitretina tazaroteno, adapaleno, ß-caroteno, retinil éster) , extracto de rummex occidentals, regaliz, mora, gayuba (arctostaphylos uva-ursi) , ' inhibidores de tirosinasa, inhibidores de transferencia de melanosoma y depuradores de melanina. También incluyen cualquiera de sus combinaciones.

' En una modalidad, la composición de la presente invención además comprende un portador tópico, vehículo, excipiente o aditivos farmacéuticos aceptable (es decir portador tópico/cosmético aceptable, vehículo, excipiente o aditivos) . Este portador, vehículo, excipiente o aditivos son bien conocidos en la técnica y pueden emplearse, por ejemplo 'para mejorar la formulación- final respecto a propiedades organolépticas, penetración de la piel y accesibilidad del ingrediente activo. Ejemplos de portadores, vehículos o excipientes incluyen: agente amortiguador, agente portador, agente quelante, agente acondicionador, agente colorante, agente que elimina la sensación pegajosa, agente emoliente, agente emulsificante, agente formador de película, agente de espumado, agente humectante, agente lactilado, agente lipofílico, agente lubricante, agente neutralizante, agente-aceite, agente opacificante, agente conservador, agente solubilizante, agente solvente, agente estabilizante, agente surfactante, agente espesante, agente de viscosidad, agente absorbente de agua, agente humectante, perfume y agua termal. También incluyen cualquiera de sus combinaciones .

La composición de la presente invención puede formularse para proporcionar un sistema de suministro controlado en forma específica. Ejemplos no limitantes, de estos sistemas de suministro incluyen sistemas de suministro lento, sistema de suministro rápido, sistema de suministro inmediato, sistema de suministro retardado, sistema de suministro de orden cero y sistemas de suministro de velocidad dual o múltiple. Estos sistemas de suministro controlado pueden lograrse con formulaciones específicas que incluyen sistemas de suministro químico, emulsiones múltiples, microemulsiones , nanoemulsiones, encapsulaciones tales como liposomas, microesferas, nanoesferas, microespon as, perlas y ciclodextrinas , matrices poliméricas, conjugados cosméticos poliméricos, aceite para el cuerpo/oleosina, película molecular soluble en aceite, parches para la piel, dosis unitarias.

Sin estar así limitados, agentes amortiguadores son sales de bases/ácidos, compatibles con la naturaleza de la piel y con su pH. Acetato de sodio es un ejemplo de un agente amortiguador frecuentemente empleado.

Sin estar así limitados, agentes portadores son ingredientes capaces de agregar la aplicación del ingrediente activo, isohexadecano · es un ejemplo de un portador frecuentemente empleado .

Sin estar así limitados, agentes quelantes son ingredientes capaces de ligar cationes mono y divalentes, tales como EDTA, EDTA trisodio, EDTA tetrasodio, EDTA disodio o una combinación de los mismos.

Sin estar así limitados, agentes acondicionadores son ingredientes con acción lubricante y efecto hidratante, tales como cloruro de cetrimonio, cloruro de dicetildimonio, trideceth-12, quaternium-Z7 , quaternium-18 , polyquaternium-10, metosulfato de behentrimonio, cetearil alcohol, estearamidopropil dimetilamina , trimetilsililamodimeticona, isolaureth-6, octoxinol-4, dimeticona, dimeticonol, ciclopentasiloxano, pareth-7, pareth-9, ácido linoleico y glicerina o una combinación de los mismos.

Sin estar así limitados, agentes que eliminan la sensación pegajosa, son ingredientes capaces de adsorber en materiales pegajosos, y reducir su tendencia a adherirse, tales como ciclopentasiloxano, dimeticona y vinil dimeticona, fenil timeticona, isopropil ésteres, isostearato ésteres, dimetil sebacato y dipropil sebacato, o una combinación de los mismos.

Sin estar asi limitados, agentes emolientes son ingredientes con acción lubricante y efecto hidratante, tales como isopropil palmitato, aceite de semilla de girasol,- aceite mineral, estearil estearato, isopropil miristato, lanolina, caprilico, triglicérido cáprico, ciclopentasiloxano, dimeticona, vinil dimeticona, bis- fenilpropil dimeticona, alguil dimeticona, sorbitan estearato, diestearato de sacarosa, miristil alcohol, miristil lactato, cetil acetato, · dicaprilil éter, floraéster-20 , aceite de soya maleado, ciclometicona, manteca de karité, aceite de coco hidrogenado, isopropil palmitato, diisostearoil trimetilolpropano siloxi silicato y alquil benzoato, o una combinación de los mismos.

Sin estar asi limitados, agentes emulsificantes son ingredientes capaces de evitar la separación de substancias inmiscibles en una emulsión, de ayudar a distribuir uniformemente un substrato en otro, de mejorar textura, homogeneidad, consistencia y estabilidad, tales como cetearil alcohol, gliceril estearato, polímero entrelazado de alquil acrilato, ácido esteárico, cera emulsificante, sorbitan oleato, sorbitan estearato, polisorbato, polietilen glicopolisorbato, trietanolamina, ciclopentasiloxano, dimeticona copoliol, PEG-30 dipolihidroxiestearato, sacarosa diestearato, PEG-100 estearato, dioctilsulfosucinato de sodio, poliacrilamida, isoparafina, laureth-7, cetil fosfato, DEA cetil fosfato, glicol estearato, estearil alcohol, cetil alcohol, metosulfato de behentrimonio y ceteareth-2, o una combinación de los mismos.

Sin estar asi limitados, agentes formadores de película son ingredientes capaces de formar una película dimensionalmente estable y continua, para reducir al mínimo la pegajosidad de la fórmula, tales como proteína de trigo, copolímero de eicoseno, perfluorometilisopropil éter, diisostearoil trimetilolpropan siloxi silicato, trimetilsiloxisilicato, dimeticona, vinil dimeticona y ciclopentasiloxano, o una combinación de los mismos.

Sin estar así limitados, los agentes de espumado son ingredientes capaces de regular la cantidad de aire en un producto, tal como lauramida DEA y cocamida MEA, laureth sulfosuccinato disodio, N-octadecil sulfosuccinamato disodio, lauril sulfato de amonio, lauril sulfato de tri-etanolamina, lauril sulfato de sodio y 2- etilhexilsulfato de sodio, o una combinación de los mismos.

Sin estar asi limitados, agentes humectantes son ingredientes capaces de mantener humedad constante y retener humedad, tales como glicerina, PEG-8, butilen glicol y propilen glicol, o una combinación de los mismos.

Sin estar asi limitados, agentes lubricantes son ingredientes capaces de agregar la propiedad resbaladiza o deslizable y reducir fricción para mejorar aplicación, tal como dimeticona y dimeticona copoliol, o una combinación de los mismos .

Sin estar asi limitados, agentes neutralizantes son ingredientes capaces de cambiar el balance ácido-alcalino, tales como trietanolamina e hidróxido de sodio, o una combinación de los mismos.

. Sin estar asi limitados, agentes opacificantes son ingredientes capaces de cambiar el aspecto de un producto claro o translúcido a uno más - cremosa o nacarado, tal como gliceril estearato y PEG-100 estearato, o una combinación de los mismos.

Sin estar asi limitados, agentes conservadores son ingredientes capaces de retardar o evitar deterioro microbiano o químico y proteger contra decoloración, tales como DMDM hidantoína, metilparabeno, propilparabeno, fenoxietanol, etilparabeno, butilparabeno, imidazolidinil urea, diazolidinil urea, quaternium-8 , quaternium-14 , quaternium-15, propilen glicol, ácido dehidroacético, metilcloroisotiazolinona, metilisotiazolinona y germaben, o una combinación de los mismos.

Sin estar así limitados, agentes solubilizantes son ingredientes capaces de permitir que ingredientes compatibles sean parte de una solución homogénea, tales como pólisorbato, ceteareth, esteareth y PEG o una combinación de los mismos.

' Sin estar así limitados, agentes estabilizantes son ingredientes capaces de mantener propiedades físicas y químicas durante y después del procesamiento, evitan o limitan cambios en las propiedades físicas de una sustancia durante la vida del producto, tales como polietileno, cloruro de sodio, estearil alcohol, goma xantano, EDTA tetrasodio y dimeticona copoliol, o una combinación de los mismos .

Sin estar así limitados, agentes surfactantes son ingredientes capaces de reducir la tensión superficial cuando se disuelven en agua o una solución de agua, reducir tensión interfacial entre dos líquidos o entre un líquido y un sólido, tal como dioctilsulfosücinato de sodio, octoxinol-40, isolaureth-6, lauril sulfato de amonio, lauril alcohol, lauramida DEA y cocoamidopropil betaína, o una combinación de los mismos .

Sin estar así limitados, agentes espesantes son ingredientes capaces de absorber agua para impartir cuerpo, mejorar la consistencia o textura, y estabilizar una emulsión, tal como ácido esteárico, silicato de magnesio aluminio, carbómero (incluyendo carbómero de sodio y carbómero de potasio) , polímero entrelazado alquil acrilato, poliacrilamida, isoparafina, laureth-7, cetil alcohol, goma xantano, alquil dimeticona, hidroxietilcelulosa, gliceril estearato, pentaeritritil tetraestearato, estearil alcohol y poliquaternium-10 , o una combinación de los mismos.

Sin estar así limitados, agentes de viscosidad son ingredientes capaces de controlar el grado de fluidez y la resistencia interna a fluir exhibida por un fluido, tales como silicato de magnesio aluminio, caprilil glicol y miristil alcohol, o una combinación de los mismos.

Sin estar así limitados, agentes absorbentes de agua son ingredientes capaces de absorber el agua de los productos para mantener la humedad, tales como polímero de carboxivinilo, copolímero acrílico, poliacrilamida, polisacáridos, goma natural, arcilla, arcilla modificada, sal metálica, ácido graso, o una combinación de los mismos.

¦ Sin estar así limitados, agentes humectantes son ingredientes capaces de reducir la tensión superficial del agua para mejor penetración o dispersión sobre la superficie, tales como caprilato, caprilil glicol, gliceril caprato, poligliceril-2 caprato, poligliceril-6, poligliceril-3 laurato y ???-laureth sulfato, o una combinación de los mismos.

Los exopolisacáridos o composiciones de la presente invención pueden empacarse en cualquier forma conveniente, incluyendo pero no limitados a un tarro, una botella, un tubo, una barra, un aplicador de bolita, un dispositivo de roclo en aerosol, etc., en la forma convencional. Los exopolisacáridos o composiciones de la presente" invención pueden empacarse como un equipo de dos os más compartimientos separados, incluyendo uno que contiene los ingredientes activos y un segundo que contiene un vehículo aceptable en forma tópica/dermatológica, que pueden mezclarse en conjunto en cierto punto en tiempo fijo antes de aplicación. Por ejemplo, los ingredientes activos, en la forma de una crema, un polvo, una tableta, una cápsula o un líquido, pueden estar contenidos en paquetes sellados, para un solo uso, que pueden abrirse y mezclarse con el vehículo tópicamente aceptable, que también puede almacenarse en forma previamente dividida en paquetes de un solo usó sellados. En forma alterna, los ingredientes activos y el vehículo tópicamente-aceptable pueden proporcionarse en más grandes cantidades de las cuales la cantidad requerida puede retirarse utilizando diversos dispositivos de medición, tales como una cuchara o copa de medición para sólidos, o una ampolleta o gotero calibrado para líquidos. Los exopolisaccáridos o composiciones de la presente invención pueden dispersarse sobre un substrato y después empacarse subsecuentemente. Substratos convenientes incluyen vendajes, incluyendo vendajes de película y vendas. En una modalidad, el equipo o paquete puede comprender instrucciones para uso/aplicación, por ejemplo instrucciones para evitar o reducir una condición de la piel o un signo de envejecimiento de la piel.

En otro aspecto, la presente invención proporciona el uso (por ejemplo, uso cosmético o terapéutico) de exopolisacáridos , para evitar o reducir un signo de envejecimiento de la piel u otra condición de la piel en un sujeto.

En otro aspecto, la presente invención proporciona el uso (por ejemplo, uso cosmético o terapéutico) de exopolisacáridos para evitar o reducir un signo de envejecimiento de la piel. Sin estar así limitados, como se emplea aquí, los términos "signo de envejecimiento de la piel" se refiere a arrugas, líneas finas, pérdida de firmeza y elasticidad de la piel, pérdida de textura, deshidratación, como debilitamiento de mecanismo de defensa de la piel, inflamación, daños por el sol (párticularmente tensión oxidativa inducida por radiación UV) , rojez, telanginstacia, flacidez de la piel, exceso de cebo, poros agrandados, círculos obscuros, pérdida de firmeza de la piel, manchas cafés, manchas de edad, piel hiper pigmentada, espesor de la piel incrementado, manchas, pérdida de elasticidad de la piel y contenido de colágeno, piel seca, lentigines, melasmas, piel opaca, bolsas bajo los ojos, perturbación de producción de sebo, pérdida de comodidad de la piel y desvitalización de la piel (reducida actividad metabólica) o cualquier combinación de las mismas.

Como se emplea aquí, los términos "reducir" en la expresión "reducir enve ecimiento de la piel" o "reducir condición o desorden de la piel", se pretende que retiran a una reducción de un signo de envejecimiento de la piel persistente, o condición o desorden de la piel, respectivamente. Abarca corrección/tratamiento completo o parcial del signo de envejecimiento o condición o desorden de la piel, respectivamente. Como se emplea aquí, el término "evitar" en la expresión "evitar signo de enve ecimiento de la piel" o "evitar condición o desorden de la piel" se pretende que se refiera a un retraso en el inicio de, o una prevención completa o parcial de un signo de envejecimiento de la piel, o condición o desorden de la piel, respectivamente Como se emplea aquí, la expresión "que se origina de una estera .microbiana" como se refiere a un EPS, se pretende que se refiera al origen del microorganismo que secreta el EPS. Un EPS secretado por una cepa de microorganismo cultivada in vitro de una cepa que se aisló originalmente de una estera microbiana, también se abarca por la expresión "que se origina de una estera microbiana" . Similarmente, la expresión "microorganismo aislado de una estera microbiana" abarca una cepa de microorganismo cultivada in vitro de una cepa originalmente aislada de una estera microbiana. También incluye microorganismos recombinantes que contienen el gen que codifica el EPS.

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso de exopolisacáridos para mejorar la consistencia de piel por atrición de células, descamación y mejora de estructuras de fibras de colágeno.

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso de exopolisacáridos para mejorar la morfología del estrato córneo.

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso de exopolisacáridos para mejorar la descamación.

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso de exopolisacáridos para reducir adhesión bacteriana en la superficie de la piel.

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso de exopolisacáridos para mejorar la hidratación.

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso de exopolisacáridos para mejorar micro relieve de la piel .

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso de exopolisacáridos para estimular la producción de ácido hialurónico por fibroblastos humanos senescentes.

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso de exopolisacáridos para estimular síntesis de lípidos total de epidermis.

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso (por ejemplo, uso cosmético) de exopolisacáridos, para estimular la expresión de genes involucrados en la función de descamación. En una modalidad adicional, los genes anteriormente mencionados codifican KLK5 (calicreína, enzima de estrato córneo) , KLK6 (neurosina) y KLK7 (enzima quimotripsica de estrato córneo) .

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso (por ejemplo, uso cosmético) de exopolisacáridos para estimular la expresión de genes involucrados en diferenciación de queratinocitos . En una modalidad adicional, los genes anteriormente mencionados codifican filagrina e involucrina.

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso (por ejemplo, uso cosmético) de exopolisacáridos para estimular la expresión de transglutaminasa.

En otro aspecto, la presente invención proporciona el uso de exopolisacáridos para la preparación de un medicamento para evitar o reducir una condición de la piel o signo de envejecimiento de la piel.

En otro aspecto, la presente invención proporciona el uso de exopolisacáridos para la preparación de un medicamento para mejorar la consistencia de la piel por atrición de células, descamación y mejora de estructura de fibras de colágeno.

La condición de la piel relacionada a envejecimiento puede en modalidades más especificas, involucrar arrugas, lineas finas, manchas de edad, daño por el sol (particularmente tensión oxidativa inducida por radiación UV) , manchas, piel hiper-pigmentada, manchas de edad, espesor de piel incrementado, pérdida de elasticidad de la piel y contenido de colágeno, piel seca, lentigines, y/o melasmas o cualquier combinación de los mismos.

El método para suministrar exopolisacáridos o composiciones de la presente invención puede variar, pero usualmente involucra aplicación a un área de piel tendiente a, o afectada por, un signo de enve ecimiento de la piel, por ejemplo, cualquier signo de la piel asociado con, provocado por, o afectado por, envejecimiento intrínseco y/o envejecimiento extrínseco.

¦ Una crema, loción, gel, ungüento, pasta o semejantes, puede dispersarse en la superficie afectada y frotarse levemente. Una solución puede aplicarse de la misma forma, pero más típicamente se aplicará con un gotero, torunda o semejantes, y aplicará cuidadosamente a las áreas afectadas.

El régimen de aplicación dependerá de una cantidad de factores que pueden determinarse fácilmente, tales como la severidad de la condición y su respuesta a tratamiento inicial, pero normalmente involucrará una o más aplicaciones por día en una base continua. Una persona con destreza ordinaria puede fácilmente determinar la cantidad óptima de la formulación a administrar, metodologías de administración y velocidades de repetición. En general, se contempla que las formulaciones de la invención se apliquen en el intervalo de una o dos veces por semana hasta una o dos veces diariamente. Por tanto como se emplea aquí la expresión "cantidad efectiva" como se refiere a una composición de la presente invención, es una cantidad que evita efectivamente o reduce un signo de envejecimiento de la piel o una condición o desorden de la piel del sujeto. Típicamente constituye una cantidad suficiente para cubrir la piel que se va a tratar. La cantidad efectiva puede variar dependiendo de la forma de la composición (por ejemplo gel, crema, suero, etc.) y el tipo de piel del suj eto .

En una modalidad, el sujeto anteriormente mencionado es un mamífero. En una modalidad adicional, el mamífero anteriormente mencionado es un humano.

La presente invención se ilustra con mayor detalle por los siguientes ejemplos no limitantes.

EJEMPLO 1 EFECTOS DE EPS EN QÜERATINOCITOS HUMANOS (Viabilidad in Vitro) ' La evaluación de citotoxicidad de cada EPS se realiza utilizando el ensayo MTT, a fin de determinar las concentraciones que no son nocivas a los queratinocitos humanos (NHEK, 3er paso) .

El Ensayo de Proliferación Celular MTT mide la proporción de proliferación celular y por el contrario, cuando eventos metabólicos llevan a apoptosis o necrosis, la reducción en viabilidad celular. El ensayo se basa en la capacidad de la dehidrogenasa mitocondrial para reducir el MTT tetrazolio amarillo (bromuro de 3-(4,5- dimetiltiazolil-2) -2, 5-difeniltetrazolio) , para generar equivalentes reductores tales como NADH y NADPH. El formazano púrpura intracelular resultante puede ser solubilizado y cuantificado por medios espectrofotométricos . Los resultados se dan en la Tabla IV a continuación.

TABLA IV Preparación Concentración % de Viabilidad EPS (mg/mL) celular de conversión MTT 0.056 98 Pol-1 0.018 102 0.006 98 0.111 97 Pol-2 0.037 103 0.012 101 0.037 95 Pol-3 0.012 97 0.004 101 0.056 95 Pol-4 0.018 101 0.006 98 0.037 105 Pol-5 0.012 104 0.004 104 0.111 99 Pol-6 0.037 94 0.012 94 0.056 104 Pol-7 0.018 101 0.006 102 0.056 87 Pol-8 0.018 91 0.006 96 0.012 100 Pol-9 0.004 101 0.001 108 No se observó alteración de viabilidad a las concentraciones de polisacárido probadas en este ensayo.

EJEMPLO 2 EFECTO DE EPS EN FIBROBLASTOS HUMANOS SENESCENTES (Viabilidad In Vltro) La evaluación de citotoxicidad de cada compuesto se realizó al utilizar el ensayo TT como se describió en el Ejemplo 1 anterior, a fin de determinar las concentraciones que no son nocivas a fibroblastos humanos senescentes. Estas células senescentes se obtuvieron por sub-cultivos de fibroblastos dérmicos normales y se obtuvo un fenotipo senescente del i2avo paso. La Tabla V a continuación proporciona resultados de viabilidad.

TABLA V Preparación Concentración % de Viabilidad EPS (mg/mL) celular de conversión MTT 0.167 101 5 Pol-1 0.056 104 0.018 108 0.333 99 Pol-2 0.111 107 0.037 104 10 0.333 102 Pol-3 0.111 105 0.037 105 Pol-4 0.500 112 0.166 118 0.055 117 0.333 104 Pol-5 0.111 116 0.037 117 0.111 94 Pol-6 0.037 95 0.012 93 0.167 104 Pol-7 0.055 100 0.018 100 25 0.500 99 Pol-8 0.166 112 0.055 112 0.111 105 Pol-9 0.037 102 0.012 95 No se observó alteración de viabilidad a las concentraciones de polisacárido probadas en este ensayo.

EJEMPLO 3 EFECTO DE EPS EN SÍNTESIS DEN ÁCIDO HIALURÓNICO POR FIBROBLASTOS HUMANOS SENESCENTES Este estudio se ha realizado a fin de evaluar los efectos de EPSs en la sintesis de ácido hialurónico por fibroblastos humanos senescentes. La síntesis de ácido hialurónico es un marcador de actividad de fibroblastos y este compuesto es un humectante de piel natural), ya que posee propiedades higroscópicas. Estas células senescentes se obtienen por sub-cultivos de fibroblatos dérmicos normales y se obtiene un fenotipo senescente del i2avo paso.

• Análisis de expresión de genes de EPSs probados demuestra una disminución de sintesis de proteinas de matriz éxtracelular, una disminución en sensibilidad a factores de crecimiento, y un aumento de sintesis de metaloproteinasas de matriz. Estos compuestos no tienen efecto directo en crecimiento celular, han demostrado que estimulan la proliferación de fibroblastos senescentes en la presencia del factor de crecimiento epidérmico (EGF) . Este efecto fue atribuido a un aumento en sensibilidad de células a EGF. Con base en esta observación para EGF, una situación similar puede existir para otros factores como ??Gß, GF tiene la capacidad por activar la síntesis HA. Se ha observado sin embargo, que las células más viejas se desensibilizan a GF . Dos tipos de efectos de EPSS de esta manera se han probado: su efecto directo en la producción de HA y su posibilidad por restaurar la sensibilidad de las células a ??Gß.

Fibroblastos senescentes fueron previamente cultivados por 24 horas hasta confluencia. Después, el medio de cultivo se retiró y reemplazó por medio de ensayo que contiene o no (control) , los EPSS probados solos, TGF solo o la mezcla de EPSS probados con TGFfi . Las células fueron entonces cultivadas por 72 horas. Al final de la incubación, la concentración de ácido hialurónico se evalúa en el sobrenadante por un ensayo ELISA estándar de acuerdo con los procedimientos del fabricante (R&D Systems DY3614) y viabilidad celular se evalúa utilizando un ensayo de incorporación MTT estándar. Los resultados se dan en la Tabla VI a continuación.

TABLA VI Cultivo sin TGFB Tratamiento Concentración HA ^g ml) % de control (g/D Control 2.48 100 TGFp 1.10"5 11.73 473** 0.333 4.05 163* Pol-2 0.111 3.81 154 0.037 3.50 141 0.333 5.67 228** Pol-3 0.111 4.79 193** 0.037 3.03 122 Cultivo con TGFp Tratamiento Concentración HA ^g/ml) % de control (g/D TGF 1.10"6 16.05 100 Pol-5 0.33 10.93 68* con TGF3 10 0.111 12.09 75 ng/mL 0.037 15.51 97 Pól-7 0.167 6.44: con TGF/3 10 0.055 7.34 56 ng/mL 0.018 11.26 86 Pol-8 0.500 6.07 46** con G 10 0.166 7.18 55** ng/mL 0.055 10.04 77 Pol-9 0.111 7.88 60** con TGF/3 10 0.037 9.45 72* ng/m 0.012 9.42 72** El GF a 10 ng/ml ha incrementado en forma clara y significante la síntesis de ácido hialurónico (4 veces) .

El compuesto Pol-3 sin TGF significativamente aumentó, con una dosis de respuesta, la producción de ácido hialurónico (HA) . El compuesto Pol-2 presenta los mismos efectos que el producto Pol-3, pero con una actividad más débil .

Los compuestos Pol-5, Pol-7, Pol-8 y Pol-9 no tienen ningún efecto en la producción HA basal pero disminuyen significativamente el efecto estimulador de TGF en producción de HA.

Los resultados obtenidos con productos Pol-5, Pol-7, Pol-8 y Pol-9 sugieren un enlace con el receptor, pero con un efecto antagonista debido a que disminuyen la respuesta a TGF .

EJEMPLO 4 EFECTO DE EPSS EN LA PRODUCCIÓN DE PERÓXIDOS LÍPIDOS EN CULTIVO CELULAR HUMANO EXPUESTO A IRRADIACIÓN DE UV Este estudio se realizó para .evaluar los efectos de EPSs de la invención en la cuantificación relativa de la cantidad de peróxidos de lípidos (LP) (degradación de lipidos de la piel) en células humanas expuestas o no a irradiación de UV7A+UVB. La evaluación se obtiene al utilizar una sonda fluorescente especifica y análisis de citometria de flujo fluorescente. Este método ofrece una gran sensibilidad debido a que la fluorescencia de cada célula se mide y se evalúan numerosas células (10000 células por condición experimental) .

Los queratinocitos se pre-cultivaron en medio SFM completo hasta 100% de confluencia. El medio de cultivo después se reemplazó con medio de ensayo que contiene o no los EPSS probados o la referencia y las células se incubaron a 37 grados C y C02 al 5% por 24 horas. Después de incubación, una sonda especifica, análogo fluorescente de lipidos (Cll-Fluor) y EPS probado o las referencias se incorporaron y las células se incubaron; a 37 grados C y C02 al 5% por 45 minutos. La sonda después se eliminó al enjuagar con medio de cultivo. El medio de lavado se reemplazó con medio de cultivo que contiene los EPSs probados o las referencias. Controles sin tratar se llevaron a cabo en paralelo. Las células se irradiaron a 210 mJ/cm2 de UVB. Controles no irradiados se llevaron a cabo en paralelo. Después de irradiación, las células se incubaron por 1 h a 37 grados C y C02 al 5%, después se enjuagaron con PBS y tripsinaron. Los parámetros de fluorescencia se midieron por citometria de flujo con un citómetro FACSArrayMR operado por el programa del sistema FACSArrayMR (Becton-Dickinson) en 10 000 células individuales (sin selección de población celular) . En este ensayo, la sonda fluorescente Cll-Fluor insertada en células de membrana, disminuyó ante oxidación. Los resultados se dan en la Tabla VII a continuación.

TABLA VII La irradiación aumentó significativamente la cantidad de peróxidos lipidos intracelulares (7 veces) . La referencia BHA a 50 uM reduce la cantidad de peróxidos lipidos intracelulares de células irradiadas (76% de protección) . Este resultado se esperó y validó el ensayo.

El compuesto Pol-5 tiene una tendencia a reducir la cantidad de peróxidos lipidos intracelulares de células irradiadas .

EJEMPLO 5 EFFECTOS DE EPSS EN LA EXPRESIÓN DE GENES QUE CODIFICAN PROTEASAS INVOLUCRADAS EN DESCAMACIÓN Y MARCADORES DE DIFERENCIACIÓN EN CULTIVOS DE QUERATINOCITOS HUMANOS Este ensayo se realiza a fin de medir los efectos de EPSs en la inducción de codificación de ARNm para diferenciación de proteínas (filagrina, loricrina, involucrina) y para la enzima tríptica de estrato córneo involucrada en descamación (calicreína 5, 6 y 7) . La expresión relativa de los marcadores selectos se ensayó utilizando la tecnología de "reacción de cadena polimerasa cuantitativa en tiempo real (RT-QPCR = Quantitative Polymerase Chain Reaction) .

¦ Queratinocitos fueron previamente cultivados en medio de cultivo. A la confluencia, el medio de cultivo se cambió en medio de ensayo (SFM sin EGF y extracto pituitario) que contiene o no (control) el compuesto de prueba y' las células se incubaron por 24 h a 37 grados C y C02 al 5%. Al final del experimento, las células se lavaron en amortiguador PBS y congelaron inmediatamente a - 80 grados C con 300 1 por pozo de reactivo Tri.

Pares de cebadores que permiten la amplificación de un producto de Reacciones de Cadena Polimerasa (PCR) específico de cada marcador selecto se emplearon: gliceraldehído 3-fosfato dehidrogenasa de hígado (G3PDH) se emplea como un marcador de referencia en este experimento.

La extracción de ARN total se realizó por Tri-Reagent de acuerdo con el protocolo. La eliminación de ADN contaminante se realizó por tratamiento DNAse Utilizando el sistema "DNA-free". Transcripción inverse de ARNm en la presencia de oligo(dT) y Superscript II transcriptasa inversa se realizó.

Inicialmente, la modulación de expresión de genes se evaluó en seis EPSs a la primera concentración (Tabla VIII) . Como una segunda etapa, se evaluó en cuatro EPSs a tres concentraciones (Tabla IX) .

TABLA VIII TrataConcentraPro easas Diferenciamiento ción (g/L) involucradas ción de en Proteínas descamación INV FLG KLK5 KLK6 LOR KLK7 Control 100 100 100 100 Ácido 10~7 M 100 100 retinóico 1.5 mM 146 315 79 35 CaCl2 268 29 207 110 282 125 291 98 Pol-1 0.056 110 82 152 47 70 96 Pol-2 0.111 109 80 129 75 103 76 Pol-3 0 037 121 79 148 174 105 96 Pol-4 0 056 65 99 115 60 78 58 Pol-5 0 .037 105 110 178 61 78 94 Pol-6 0 .111 235 1247 480 372 686 234 TABLA IX TrataConcenProteasas Diferenciación miento trainvolucradas en de Proteínas ción descamación INV FLG LOR (g/L) KL 5 KLK6 KLK7 Control 100 100 100 100 100 100 0.111 109 117 102 140 87 125 Pol-2 0.033 94 109 101 160 109 222 0.011 98 108 100 144 126 69 0.037 101 116 131 173 221 170 Pol-3 0.0123 57 96 114 113 157 64 0.0041 54 102 114 96 130 31 0.037 86 113 135 165 64 92 Pol-5 0.0123 82 107 90 157 106 94 0.0041 71 83 87 139 98 145 0.111 319 1284 988 491 591 233 Pol- 6 0.033 160 380 407 236 203 61 0.011 103 102 153 107 93 72 Ácido retinóico mostró un perfil de diferenciación inverso. CaCl2 mostró un perfil prodiferenciación. Estos resultados se esperaron y validaron el ensayo.

. Pol-6 mostró un fuerte aumento de genes que codifican descamación y diferenciación. Este exopolisacárido induce diferenciación de queratinocitos de células a corneocitos (efecto pro-diferencia) .

La segunda serie de pruebas mostró que Pol-3 presenta un perfil pro-diferencia.

EJEMPLO 6 EFECTOS DE EPSS EN LA SÍNTESIS DE LÍPIDOS EPIDÉRMICOS Evaluación de fosfolipidos y síntesis de lípidos neutros en epidermis reconstruida Este estudio se realizó para evaluar los efectos de EPSs de la invención en síntesis de lípidos. Fosfolipidos (membranas celulares) y lípidos neutros (incluyendo lípidos específicos de epidermis) se midieron por separado utilizando cromatografía de capa delgada. Epidermis humana reconstruida SkinEthicMR se empleó para modelo, su composición es cercana a la epidermis humana normal.

Los tejidos epidérmicos se colocaron en placas de 24-pozos y cultivaron por 12 horas en medio SkinEthicMR. El medio después se reemplazó por medio fresco y los EPSS probados se aplicaron en la superficie de epidermis (tratamiento tópico), a las concentraciones indicadas. Tres epidermis de control estuvieron . sin tratar y tres epidermis de referencia se trataron con ácido retinóico, un estimulante conocido de lipidos de piel total, en el medio de cultivo (tratamiento sistémico) . Todos los tratamientos se realizaron en triplicado y cultivaron por 72 horas en total. Después de 24 horas de tratamiento, el medio de cultivo se reemplazó por medio etiquetado (0.225 µ(?/????3 de [14C] acetato) y se trataron las epidermis. El etiquetado se llevó a cabo durante un periodo de incubación de 48-horas. El marcador Radioactivo empleado fue sal de sodio de ácido [2-14C] -acético, Amersham CFA14 (2.04 Gbq/ mol, 55 mCi/mmol) . Las epidermis se lavaron en solución PBS y se disociaron. Después, se lisaron células por tratamiento con ácido perclórico a 0.5 M en hielo. Los lipidos se extrajeron por metanol/cloroformo (2:1) y se realizó separación de fase al agregar PBS y cloroformo después de neutralización de acuerdo con el procedimiento descrito por Bligh y Dyer. La radioactividad se cuantificó al incorporar en fase orgánica (lipidos) con destello de liquido (LKB 1210 Rackbeta) después de evaporación de cloroformo. Las fases orgánicas se secaron bajo nitrógeno y se realizó cromatografía de capa delgada (TLC, placas Merck K60) al utilizar sistemas de dos solventes cloroformo/metanol/agua para Fosfolípidos (50: 18. 2.6) o hexano/éter/ácido acético para lipidos Neutros (15. 5.6 0 19) . Los diversos metabolitos se cuantificaron al realizar un conteo directo de la radioactividad de los diversos puntos en placas TLC con Phosphorlmager CycloneMR y Multigauge software (Fujifilm). Los resultados se dan en la Tabla X siguiente.

TABLA X TrataConcentra% Control miento ción (g/L) TL C FFA Control 100 100 100 Ácido retinóico 10-6 M 175** 77* 76 Pol-1 0.168 77 112 104 Pol-2 0.333 118 105 103 Í?ol-3 0.111 165** 73 93 Pol-4 0.168 176** 75 89* Pol-5 0.111 157* 85 79 Pol-6 0.333 183** 68 84* Pol-7 0.168 ]_74** 62 81* Pol-8 0.168 159** 71 44** Pol-9 0.037 127 76 70* Tabla X (Continua) Síntesis de lipidos: Total de Lipidos (TL) Colesterol (C) Ácidos Grasos Libres (FFA) Ácidos Grasos Esterificados (EFA) Esfingomielina (SM) Fosfolípidos (PL) Sulfato Colesterol (CS04) Ceramidas y cerebrósidos (Cera/Cere) La incorporación basal de 14C-Acetato en los lipidos epidérmicos fue fuerte, revelando que el metabolismo de queratinocitos epidérmicos fue normal.

La referencia ácido retinóico aumenta significativamente la síntesis total de lipidos (175% de control) como se espera.

Los EPSs Pol-3, Pol-4, Pol-5, ' Pol-6 , Pol-7 y Pol-8 han incrementado significativamente la síntesis total de lipidos (165%, 176%, 157%, 183%, 174% y 159% del control respectivamente) . Los compuestos PoMl Pol-2 y Pol-9 sin embargo no modifican significativamente las síntesis totales de lipidos.

EJEMPLO 7 EFECTOS DE EPSS EN ADHESIÓN DE STAPHYLOCOCCUS EPIDERMIDIS Y STAPHYLOCOCCUS AÜREUS EN SUPERFICIE DE PIEL HUMANA ! Este estudio se lleva a cabo para evaluar la actividad de EPSs en la adhesión de la bacteria etiquetada con biotina (Staphylococcus epidermidis y S. aureus) en la superficie de piel humana.

Trozos de piel humana (4 cm x 4 cm) se preparan a partir de una biopsia abdominal retirada de un sujeto sano durante cirugía reductiva cosmética.

S. epidermidis y S. aureus, las cepas bacterianas empleadas en este experimento, tienen las propiedades para adherirse a cualquier soporte como se demuestra en biomateriales, catéteres y en diversas células. Las bacterias se sembraron en medio LB-agar, después cultivaron a 37 grados C en medio líquido LB hasta fase semi-log (DO640 =' 04). Las bacterias después se fijaron en etanol 70%, lavaron y etiquetaron con biotina. Las bacterias purificadas parcialmente etiquetadas con biotina se repartieron en alícuotas y congelaron a -80 grados C antes de uso.

Una placa de 96 pozos se preparó con la piel. Los EPSS probados se aplicaron por 1 hora. Al final de incubación, los EPSS se retiraron y la piel se puso en contacto con S. epidermidis o con S. aureus. Después de 2 horas de incubación a temperatura ambiente y 3 lavados en PBS, guanidina 4 M se agrega en cada pozo y deja por 40 minutos a temperatura ambiente. El sobrenadante después se extrae y congela a -80 grados C.

Una muestra de cada sobrenadante y cada bacteria se transfiere a una membrana de nitrocelulosa (Hybond, ECL, Amersham) , utilizando un dispositivo MilliBlot dotblot (Millipore) . Todos los controles se realizaron para evaluar la especificidad de la respuesta final. Un control de interferencia con el sistema de detección se realiza al transferir medio de cultivo o compuestos probados en la membrana nitrocelulosa sin contacto previo con bacterias o piel. No se observó interferencia en este ensayo. Sitios no específicos en membranas se saturaron por 2h, a 37 grados C, en un amortiguador de saturación PBS/0.05% de leche sin grasa Tween 20/5% (PBSTM) . Después de lavado extenso en PBSTM, los sitios antigénicos específicos se etiquetaron con conjugado de Estreptavidina-peroxidasa de rábano picante diluido en PBSTM. Después de lavado extenso en PBSTM', la actividad de peroxidasa se revela utilizando el método ECL quimioluminescente (quimioluminescencia mejorada, Amersham) en película MR KodakMR. Los resultados se dan en la Tabla XI a continuación.

TABLA XI Adhesión Bacteriana de S. epldermldls Tratamiento Concentración % de % de Control Inhibición Control 100 0 Pol-1 1.8 g/L 62** 38 Pol-5 0.9 g/L 35** 65 Adhesión Bacteriana de S. aureus La adhesión de bacterias S. epidermídis fue significante y fue satisfactoria la amplitud de señal. Los compuestos Pol-1 y Pol-5 disminuyeron significativamente la adhesión de S. epidermidis a la piel (respectivamente 38% y 65% de inhibición) .

La adhesión de bacterias S. aureus fue significante y la amplitud de señal fue satisfactoria. Los compuestos Pol-1 y Pol-5 disminuyen significativamente la adhesión- de S. aureus a la piel (respectivamente 49% y 66% de inhibición) .

En conclusión, los compuestos Pol-1 y Pol-5 exhiben propiedades capaces de crear una película o máscara que protege de la adhesión de las bacterias S. epidermidis o S. aureus en la superficie de la piel humana.

EJEMPLO 8 EFECTOS DE UNA FORMULACIÓN EPS EN CREMA EN ACTIVIDAD ANTICONTAMINACIÓN Este estudio se realizó para evaluar la actividad anticontaminación de un producto cosmético a través de su efecto contra radicales libres en piel normal. Una mezcla de contaminantes y metales pesados se empleó para imitar los efectos nocivos de una contaminación ambiental (como vapores, humo...)- Explantes se emplearon como un modelo de piel en este experimento, como un buen modelo de piel humana .

Trozos de piel humana (27 explantes) se prepararon de una biopsia abdominal retirada de un sujeto sano (64 años de edad) durante cirugía reductiva cosmética. Se colocaron en medio BEM a 37 grados C y C02 al 5%. Los EPSS probados se aplicaron en la superficie de la epidermis (tratamiento tópico) a las concentraciones indicadas (2 mg por explante) . Se aplicaron el primer día (Día 0) y después de uno, dos, tres y cuatro días (Día 1, Día 2, Día 3 y Día 4) .

En el Día 4, 30 pL de una mezcla de metales pesados (Tabla XII) e hidrocarburos se aplicaron en un disco de papel y colocaron inmediatamente en explantes identificados.

TABLA XII Metales pesados empleados Concentración (mg/L) para la mezcla Aluminio 20 Arsénico 20 Plomo 20 Cromo 20 Mercurio 20 Níquel 5 Cadmio 2 El Día 0 y el Día 5, 3 explantes de cada lote se retiraron y fijaron en líquido Bouin para observación morfológica. Después de 48 horas en medio Bouin, se deshidrataron explantes, incrustaron en parafina y tiñeron con tinción Tricrómica de Masson. El ensayo MDA (Malondialdehído, un producto estable de la alteración radical) , se realiza en medio de cultivo el Día 3, 24 horas después de irradiación para cuantificar la eficiencia de productos contra radicales libres generados por contaminantes. Los resultados se dan en la Tabla XIII siguiente .

Explantes sin tratamiento (T) , Día 5: el estrato córneo fue grueso, ligeramente laminado, claramente queratinizado en la superficie y ligeramente queratinizado en su base. Paraqueratosis fue moderada. La epidermis tuvo 4 á 5 capas celulares con una buena morfología. El relieve de la unión dérmica-epidérmica fue claro. Dermis papilar indicó fibras de colágeno gruesas que forman una malla más o menos compacta. Ver Figura 1, panel superior izquierdo .

Explantes con contaminantes (TP) , Dia 5: el estrato córneo fue grueso, ligeramente laminado, claramente queratinizada en la superficie. Paraqueratosis fue moderada. La epidermis tuvo 4 a 5 capas celulares con profundas alteraciones. Estas alteraciones se caracterizaron por la presencia de muchas células con núcleos picnóticos a través de la epidermis. Desprendimiento de la unión dérmica-epidérmica fue claro. Su relieve fue más bien claro. Dermis papilar indicó gruesas fibras de colágeno que forman una malla no muy compacta. Ver Figura 1, panel izquierdo inferior.

Explantes con contaminantes, tratados con Pol-5 (PP) 1 Dia 5: el estrato córneo fue grueso, ligeramente laminado y claramente queratinizado en la superficie. Paraqueratosis fue moderada. La epidermis tuvo 4 a 5 capas celulares con pocas alteraciones. El desprendimiento de la unión dérmica-epidérmica fue ligero. El relieve de la unión dérmica-epidérmica fue más bien claro. Dermis papilar indicó gruesas fibras de colágeno que forman una malla no muy compacta. Ver Figura 1, panel derecho.

TABLA XIII Tratamiento Concen% de % de tración ContamiProtección de MDA nación (pmol/mL) Piel (T) 503. 6 0.00 / Piel + tocoferol 392.28 0.00 / (R) 527.60 0.00 / Piel + excipiente 498.53 0.00 / (E) Piel + Pol-5 (F) Piel + Contaminante 675.34 100.00 0.0 (TP) 544.93 24.13 75.9 Piel + tocoferol + contaminante (RP) 640.40 79.67 20.3 Piel + excipiente + Contaminante (EP) Piel + Pol-5 + 624.06 55.90 44.1 contaminante (PP) El control a Tocoferol tiene reducida actividad de contaminantes que validan el ensayo. Resultados para Pol-5 indican actividad potencial anticontaminación.

EJEMPLO 9 EFECTO DE EPSS EN REESTRUCTURACIÓN DE BARRERA DE LA PIEL EN EXPLANTES DE PIEL HUMANA Este ensayo busca demostrar los efectos reestructurantes en barrera de la piel de EPSs probados. Actividad biológica se estimó por la destreza histológica de morfología general, y por inmunoetiquetado de filagrina y transglutaminasa de membrana. Superiores niveles de expresión de filagrina y/o transglutaminasa (por ejemplo, en más capas celulares) son signos de diferenciación de queratinocitos incrementada.

Explantes de piel humana se obtuvieron de cirugía plástica- abdominal de una mujer de 48-años de edad. Una zona estaba reducida en grasa (deslipidada) utilizando una mezcla de éter / acetona para incrementar la sensibilidad al EPS probado y para retirar factores externos que derivan potencialmente resultados comparativos (por ejemplo, espesor de grasa y contenido pueden variar sobre la muestra e introducir parámetros que derivan los resultados entre controles y EPSS de prueba) . En esta zona deslipidada, se obtuvieron 24 explantes experimentales. Seis (6) explantes experimentales se generaron de la sección no reducida en grasa. Todos los 30 explantes se pusieron en medio BEM y almacenaron en una incubadora a 37 grados C y 5% de C02- Este material se dividió en 10 lotes de 3 explantes.

Los EPSs probados se aplicaron tópicamente justo después de eliminación de lípidos a una concentración de 4 mg por explante. Periodo de contacto fue de 3 horas. ? los tiempos TO y 3 h, cada uno de los 3 explantes del lote se cortó en dos partes. La primer parte se fijó en medio Bouin regular, para observación de morfología general. La segunda mitad se congeló y mantuvo a -80 grados C para inmunoetiquetado especifico de filagrina y transglutaminasa membrana'.

Después de 48 horas de fijar en medio Bouin regular, se desecaron muestras e impregnaron en parafina. Muestras congeladas se cortaron en rebanadas con espesor de 7 µ?? en un criostato, y después se pegaron sobre portaobjetos histológicos para etiquetado.

Observación de morfología general se logró utilizando tinciones de Tricrómico tipo Masson. Filagrina se marcó en porta-objetos congelados a los tiempos TO y T3h con el clon monoclonal OKTBl anti-filagrina, con un sistema biotina / estreptavidina revelado en FITC, con núcleo coloreado utilizando tinción de yoduro de propidio. Transglutaminasa de la membrana se marca en porta-objetos congelados a los tiempos TO y T3h con anti- transglutaminasa, clon monoclonal BC1, con un sistema biotina / estreptavidina revelado en FITC con núcleo coloreado utilizando tinción de yoduro de propidio.

Filagrina A TO, filagrina se expresó ligeramente en la base del estrato córneo con un número de capas celulares normal en explantes no-deslipidados . Filagrina estuvo ligeramente más presente en explantes deslipidados.

Como puede observarse en la Figura 2, a 3h, la filagrina se expresó en forma distinta en explantes no tratados y no deslipidados. Como puede observarse en la Figura 3, filagrina se expresó ligeramente en explantes deslipidados y no tratados. Un número moderado de capas celulares pudo observarse.

Después de aplicación de Pol-6 (Figura 4) , Pol-3 y Pol-8 en explantes deslipidados, filagrina se expresó fuertemente en capas celulares 11/12 (Pol-6) y 8/9 (Pol-3 y 8), respectivamente.

Después de aplicación de una mezcla de Pol-6 y Pol-3 e explantes deslipidados, filagrina se expresó en forma distinta en 8/9 capas celulares (Figura 5).

Después de aplicación de una mezcla de Pol-6 y Pol-8 en explantes deslipidados, filagrina se expresa en forma distinta en 8/9 capas celulares (Figura 6) .

Transglutaminasa de membrana En T0, transglutaminasa se expresó en forma muy ligera y errática en 3/4 capas celulares en la base del estrato córneo, en explantes no deslipidados y no tratados y en explantes recientemente deslipidados.

A 3h, transglutaminasa se expresó muy ligeramente en explantes no deslipidados y no tratados (Figura 7). Transglutaminasa no se observó en explantes deslipidados y no tratados (Figura 8).

Para tratamiento con Pol-6 (Figura 9) y Pol-3 en explantes deslipidados, transglutaminasa se expresó en forma distinta en 5/6 capas celulares.

Resultados de inmunotinción de filagrina y transglutaminasa de membrana (TGM) se presentan en la Tabla XIV a continuación.

TABLA XIV Piel deslipidada, ++++ 11/12 +++ 5/6 tratada con producto Pol-6, T3h Piel deslipidada, ++++ 8/9 + 4/5 tratada con producto Pol-3, T3h Piel deslipidada, +++ 8/9 - - tratada con producto Pol-8, T3h Piel deslipidada, +++ 8/9 + 2/3 tratada con una mezcla de Pol-6 y 3, T3h Piel deslipidada, +++ 8/9 + 3/4 tratada con una mezcla de Pol-6 y 8, T3h Ausente: - Bajo: + Moderado: ++ Claro/Neto: +++ Fuerte ++++ Explantes deslipidados mostraron un deterioro muy neto del estrato córneo con una morfología comparable en una piel deshidratada combinado con un deterioro importante de la apariencia de la dermis (desorden de fibras de colágeno) .

La observación de morfología general muestra que después de 3 horas de contacto, EPS Pol-3 mejoró la morfología del estrato córneo, lo que resultará en una actividad humectante superficial del estrato córneo. La mezcla de Pol-3 y Pol-8 y la mezcla de Pol-6 y Pol-8 mejora la morfología del estrato córneo (efecto humectante) .

EPS Pol-6 mejora la estructura de la piel a nivel del estrato córneo y dermis. Específicamente, la morfología general mostró que después de 3 horas de contacto' con EPS Pol-6, el estrato córneo fue esponjoso, indicando renovación de células y descamación. Fibras de colágeno aparecen más densas y más organizadas.

Expresión de filagrina mostró que todos los EPSs aplicados llevan a un incremento neto (intensidad y número) de capas celulares después de 3 horas de contacto.

Expresión de transglutaminasa de membrana mostró que EPS Pol-6 y la mezcla de Pol-6 y Pol-8 induce una actividad reestructurante de barrera de la piel.

EJEMPLO 10 Prueba Clínica de Hidratación Y Propiedades de Reestructuración de Barrera de la Piel de Composición para el Cuidado de la Piel que Contiene Polisacáridos La meta de este ensayo fue estimar en forma objetiva en un panel de 20 voluntarios, la actividad humectante y la capacidad para reestructuración de barrera de lípidos de una crema que contiene EPSs, después de 30 días de uso. Esta actividad se estimó en comparación con un placebo. Ambas formulaciones se aplicaron utilizando un diseño de cara dividida. Voluntarios o voluntarias se reclutaron en la población de sujetos entre 30 y 50 años, con piel tendiente a sequedad. El efecto humectante se estimó en forma cuantitativa por marcado especial de descamación fisiológica, muestreado de superficie tipo D-Squames®. El efecto de reestructuración se estimó por análisis del micro-relieve en muestras pegadas con cianoacrilato y por fotografías .

Una formulación para el cuidado de la piel se preparó que contiene Pol-6 y Pol-3.

TABLA XV Ingrediente % P/p Agua C.S. para 100% P/p Gliceril Estearato 5.00% Triglicérido caprílico/cáprico 5.00% Miristil Miristato 5.00% Butilen Glicol 5.00% Polysorbate 60 5.00% Glicerina 5.00% Butyrospermum Parkii 1.00% Cetil Alcohol 1.00% Phenonip 0.80% Estearato de Sorbitan 0.50% Carbómero 0.15% Trietanolamina 0.11% Dimeticona 0.04% Perfume 0.02% Polisacárido Pol-3 .02% Polisacárido Pol-6 .02% 100% Evaluación cuantitativa de hidratación por marca especial (Diagnoskin™) utilizando descamación fisiológica.

La evaluación del nivel de humedad cutánea por el sistema DIAGNOSKIN™ se realizó a través de cuantificación de descamación fisiológica. Estuvieron involucrados 18 voluntarios en la evaluación de la formulación activa y 19 voluntarios fueron parte del grupo de placebo.

Aplicación en la piel de una banda adhesiva flexible, D-Squam™ muestreó las capas superficiales de corneocitos al retirar. La evaluación de esta descamación se realizó utilizando un microscopio (objetivo 25X, luz directa) . Con base en estas observaciones, las muestras de la piel se calificaron de 1 a 12, 12 que es el nivel más alto posible de hidratación. La Figura 10 muestra tres fotografías de morfología de la piel de la más hidratada a la menos hidratada.

Composición activa: Un aumento de 9.82% de la calidad de descamación después de 30 días de aplicación de crema activa se observa como puede verse en la Tabla XVI a continuación: TABLA XVI El aspecto morfológico de las muestras reveló una textura de la piel de una piel mucho mas hidratada cuando se trata con una mezcla de Pol-6 y Pol-3 por 30 días. De hecho, placas celulares y zonas gruesas (indicando deshidratación cutánea) notadas en T0, prácticamente desaparecieron después de 30 días de tratamiento. Después se observaron células sencillas, sinónimo de una piel mas hidratada. Ver Figura 11 para fotografías antes y después.

Placebo : una reducción de 7.14% de la calidad de descamación después de 30 días de aplicación del placebo se observa como puede verse en la Tabla XVII siguiente.

TABLA XVII Calificaciones D-Squam1111 JO J30 J30-J0 Promedio 6.32 5.89 -0.42 o o - 7.14% Aspecto morfológico de muestras para voluntarios que se les ha aplicado placebo, mostró un deterioro importante de la piel con pequeñas placas celulares que indican un aumento de deshidratación cutánea. Ver Figura 12 para fotografías antes y después.

El espacio entre el placebo y la crema activa (17%) muestra una clara mejora de la descamación de la piel, ligado con una superior velocidad de diferenciación/descamación. Esta diferencia se ilustra en la Figura 13. Una renovación más eficiente de los revestimientos superficiales de la piel se observa en conjunto con efectos de tensión y reestructuración responsables por una piel más agradable y uniforme.

Evaluación cuantitativa de efecto reestructurante.

Muestreado se realizó en mejillas de 18 voluntarias para crema activa y placebo. Muestras de superficie se prepararon al depositar una gota de pegamento de cianoacrilato directamente en la piel y al aplicar inmediatamente un portaobjetos histológico limpio. La rápida polimerización (30 segundos) del pegamento cianoacrilato permite tomar muestras de un espesor homogéneo de la parte externa del estrato córneo (4 - 6 capas de corneocitos) sin dolor. La observación de las muestras utilizando un microscopio (objetivo 2.5X) con luz directa lateral, permitió una evaluación que toma en cuenta los parámetros del micro-relieve (lineas primarias, lineas secundarias, polígonos... ) .

Composición activa: una mejora del micro-relieve por 9.09% se observa después de 30 días de aplicación de crema activa como puede verse en la Tabla XVIII siguiente.

TABLA XVIII Observaciones microscópicas de las pieles sin tratar y tratadas ponen en contraste diferencias en los parámetros del micro-relieve. Voluntarias tratadas con la crema activa durante 30 días mostraron una perfecta organización y estructura de la piel con la intersección de líneas primarias y secundarias que forman polígonos. Antes de tratamiento, estos mismos parámetros no se notaron traduciendo el estado de una piel deshidratada que se muestra en lugar de una orientación de líneas primarias y secundarias sobre lineas de tensión de la piel (lineas de tensión de piel) . Ver Figura 14 para fotografías de antes y después de la piel de una voluntaria tratada.

Composición de placebo : una- reducción de 6.49% de la calidad del micro-relieve, se observa después de 30 días de aplicación del placebo como puede verse en la Tabla XIX A continuación.

TABLA XIX Observaciones microscópicas de las pieles de voluntarias tratadas durante 30 días con placebo mostró un deterioro de micro-relieve con un alineamiento de las líneas primarias y secundarias sobre líneas de tensión de la piel, traduciéndose en una deshidratación significante de la piel. Ver Figura 15 para fotografías antes y después de la piel de una voluntaria tratada con placebo.

Este estudio mostró una ganancia de 16% en la calidad del micro-relieve de la piel con una crema formulada con exopolisacáridos . Esta diferencia se ilustra en la Figura 16.

Este estudio evidencia la actividad exfoliante de los exopolisacáridos de la invención, que muestra descamación mejorada de la piel mientras que mejora su micro-relieve. La textura de la piel fue mejorada en forma distintiva .

EJEMPLO 11 PRUEBA CLÍNICA DE PROPIEDADES ANTI-CONTAMINACIÓN DE COMPOSICIÓN PARA EL CUIDADO DE LA PIEL QUE CONTIENE EPSS Un estudio clínico se realiza para determinar la eficacia del cuidado de la piel ante contaminación con Pol-5, bajo condiciones normales de uso. Para este propósito, 63 voluntarias deL género femenino, de 30 a 50 años de edad con una piel sensible, que viven en una gran ciudad, participaron y 50% de ellas fueron fumadoras. Se instruyó a las voluntarias que utilizaran el agente para el cuidado de la piel' anticontaminación descrito en el Ejemplo 12 siguiente, dos veces al día durante 4 semanas y de otra forma no cambiar sus hábitos cosméticos. Completaron 2 cuestionarios auto administrados en D7 y D28. La recolección de datos y logística de material se realizaron por correo .

Comentarios específicos se han identificado en los cuestionarios de 57 respondientes: los respondientes encontraron que la crema es fácil de aplicar, la crema tuvo un olor agradable, la crema tuvo una textura agradable, la crema penetró rápidamente, proporcionó una sensación de bienestar, protegió la piel contra contaminación, luchó contra los efectos fatales debido a contaminación, dio un buen efecto de aspecto sano, dejó la piel más bella, dejó la complexión menos opaca o deslucida.

Después de 4 semanas de uso estándar de una crema formulada con Pol-5, más de 70% de opiniones expresadas son favorables. Una gran mayoría de voluntarias (74.5%) calificaron el producto como más bien bueno (23.6%), bueno (34.5%) o muy bueno (16.75). La mayoría de las voluntarias restantes tuvieron una opinión neutra del producto (21.8%) .

EJEMPLO 12 FORMULACIONES PARA EL CUIDADO DE LA PIEL QUE CONTIENEN EPSS Sin estar así limitados, los polisacáridos de la presente invención pueden incluirse en una formulación que comprende al menos los siguientes ingredientes: Agua C.S. para 100% P/p Triglicérido caprílico/cáprico 5% Gliceril estearato 4% Propilen glicol 3% Miristil mistirato 3% Polysorbate 60 2% Dicaprilil carbonato 2% Butirospermum Parkii 1% Ácido esteárico 1% Cetil alcohol 1% Phenonip 0.8% Sobitan esterato 0.5% Carbómero 0.15% Trietanolamina 0.15% D meticona 0.04% Perfume 0.01% Polisacárido Pol-5 0.02%

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición para el cuidado de la piel que comprende al menos un exopolisacárido (EPS) que se origina de una estera microbiana, el EPS está en una concentración de aproximadamente 0 001% p/p a aproximadamente 1.5 % p/p de la composición.

2. La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la estera microbiana es una estera microbiana marina.

3. La composición de conformidad con la reivindicación 1 o 2, caracterizada porque al menos un EPS se genera por fermentación de un microorganismo aislado de la estera microbiana.

4. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque el EPS como mínimo comprende al menos dos EPSs, cada EPS se origina de diferentes microorganismos aislados de la estera microbiana .

5. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque el EPS como mínimo comprende cuando menos dos EPSs, cada EPS se origina de diferentes esteras microbianas.

6. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la estera microbiana se origina de la Polinesia francesa.

7. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada porque el EPS como mínimo se modifica en forma química o física.

8. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada porque el EPS como mínimo es despolimerizado .

9. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada porque el EPS como mínimo es un EPS nativo.

10. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizada porque al menos el EPS como mínimo está sulfatado, acetado, lactado, succinado o piruvado .

11. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para uso en cuidado para piel, anti-envej ecimiento .

12. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para uso en cuidado para piel después broncear.

13. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para utilizar en cuidado para la piel de filtro solar.

14. La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para utilizar en evitar o reducir cuando menos un signo de envejecimiento de la piel.

15. La composición de conformidad con la reivindicación 14, para mejorar la hidratación.

16. La composición de conformidad con la reivindicación 14, para mejorar la morfología del estrato córneo .

17. La composición de conformidad con la reivindicación 14, para mejorar el micro-relieve de la piel .

18. La composición de conformidad con la reivindicación 14, para mejorar la descamación.

19. La composición de conformidad con la reivindicación 14, para mejorar la diferenciación de queratinocitos .

20. La composición de conformidad con la reivindicación 14, para reducir adhesión bacteriana en la superficie de la piel .

21. La composición de conformidad con la reivindicación 20, caracterizada porque la cepa bacteriana es Staphylococcus epidermidis o Staphylococcus aureus .

22. La composición de conformidad con la reivindicación 14, para estimular la producción de ácido hialurónico por fibroblastos humanos senescentes.

23. La composición de conformidad con la reivindicación 14, para estimular síntesis de lipidos total de epidermis.

24. La composición de conformidad con la reivindicación 14, para estimular la expresión de al menos un gen involucrado en descamación de la piel.

25. La composición de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el gen es calicreina 5, neurosina o enzima quimotripsica de estrato córneo .

26. La composición de conformidad con la reivindicación 14, para estimular la expresión de al menos un gen involucrado en diferenciación de queratinocitos .

27. La composición de conformidad con la reivindicación 26, caracterizada porque el gen es filagrina, loricrina o involucrina .

28. La composición de conformidad con la reivindicación 14, para estimular la expresión de transglutaminasa .

29. La composición de conformidad con la reivindicación 14, para reducir peróxidos lípidos intracelülares de células de piel irradiadas.

30. Un uso de al menos un exopolisacárido (EPS) que se origina de una estera microbiana, para la producción de una composición para el cuidado de la piel.

31. El uso de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque la composición para el cuidado de la piel es una composición anti-envej ecimiento para el cuidado de la piel, una composición para el cuidado de la piel para después de broncear o una composición para el cuidado de la piel-filtro solar.

32. Un uso de al menos un exopolisacárido (EPS) que se origina de una estera microbiana, para evitar o reducir cuando menos un signo de envejecimiento de la piel.

33. El uso de conformidad con la reivindicación 30, para mejorar la hidratación.

34. El uso de conformidad con la reivindicación 32, para mejorar la morfología del estrato córneo.

35. El uso de conformidad con la reivindicación 32, para mejorar el micro-relieve de la piel.

36. El uso de conformidad con la reivindicación 32, para mejorar la descamación.

37. El uso de conformidad con la reivindicación 32, para mejorar la diferenciación de queratinocitos.

38. El uso de conformidad con la reivindicación 32, para reducir adhesión bacteriana en la superficie de la piel .

39. El uso de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado porque la cepa bacteriana es Staphylococcus epidermidis o Staphylococcus aureus.

40. El uso de conformidad con la reivindicación 32, para estimular la producción de ácido hialurónico por fibroblastos humanos senescentes.

41. El uso de conformidad con la reivindicación 32, para estimular síntesis de lípidos total de epidermis.

42. El uso de conformidad con la reivindicación 32, para estimular la expresión de al menos un gen involucrado en descamación de la piel.

43. El uso de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque el gen es calicreína 5, neurosina o enzima quimotrípsica de estrato córneo.

44. El uso de conformidad con la reivindicación 32, para estimular la expresión de al menos un gen involucrado en diferenciación de queratinocitos .

45. El uso de conformidad con la reivindicación 44, caracterizado porque el gen es filagrina, loricrina o involucrina.

46. El uso de conformidad con la reivindicación 32, para estimular la expresión de transglutaminasa.

47. El uso de conformidad con la reivindicación 32, para reducir peróxidos lípidos intracelulares de células de piel irradiadas .

48. Un método para evitar o reducir un signo de enve ecimiento de la piel en un sujeto, que comprende administrar una composición que comprende una cantidad efectiva de al menos un exopolisacárido (EPS) que se origina de una estera microbiana en la piel del sujeto, con lo que el signo de envejecimiento de la piel se evita o reduce .