MX2007012041A - Composicion osteoblastica de fibrina mezclada semisolidificada para la aglutinacion de fracturas oseas y su metodo de fabricacion. - Google Patents

Abstract

Se proporciona en una composicion osteoblastica semisolida que contiene fibrina para la union osea y un metodo para preparar la misma. El metodo comprende aislar osteoblastos de un tejido oseo y cultivar/proliferar los osteoblastos aislados en DMEM (Medio de Eagle Modificado de Dulbecco) o a-MEM (Medio Esencial Minimo, Modificacion Alfa) para preparar una suspension osteoblastica; y mezclar la suspension osteoblastica resultante con un factor de la coagulacion para preparar un agente terapeutico osetoblastico. De acuerdo con la presente invencion que tiene la construccion mencionada anteriormente, es posible lograr un injerto oseo capaz de efectuar la union osea que no tiene rechazo de injerto clinico y distribucion uniforme de los osteoblastos via la inyeccion de una mezcla de osteoblastos y fibrina en las partes afectadas para la union osea, y una union osea efectiva y rapida via la inyeccion constante de una composicion osteoblastica semisolida a las partes afectadas.

Description

COMPOSICIÓN OSTEBOLASTICA DE FIBRINA MEZCLADA SEMISOLIDIFICADA PARA LA AGLUTINACIÓN DE FRACTURAS OSEAS Y SU MÉTODO DE FABRICACIÓN CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con una composición osteoblástica semisólida que contiene fibrina para la unión de huesos y un método para preparar la misma. De manera más específica, la presente invención se relaciona con una composición osteoblástica semisólida que fibrina para la unión de huesos, la cual proporciona un agente terapéutico que contiene una mezcla de osteoblastos y fibrina, que puede ser inyectada en una parte afectada para la unión de huesos en el tratamiento de fracturas óseas severas; y un método para preparar la misma.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN De manera general, una fractura ósea simple puede sanar lo suficiente enyesando la fractura ósea durante varias semanas, pero una fractura ósea severa o de efecto óseo requiere injerto óseo. Un método de injerto óseo, preferido por la mayoría de los médicos, es un autoinjerto el cual implica recolectar hueso de una parte del cuerpo del paciente, particularmente la cresta iliaca, seguido por el injerto a la parte afectada del paciente. Este método puede proporcionar excelentes resultados debido al injerto del propio hueso del paciente. Sin embargo, ese autoinjerto es una técnica quirúrgica desventajosa acompañada por dolor muy severo, y presenta una variedad de problemas potenciales asociados con la probable ocurrencia de pérdida de sensibilidad y sensorial en la región del hueso cosechado, necesita de una operación quirúrgica adicional para el injerto del hueso, y de este modo un periodo de tiempo prolongado para la hospitalización y recuperación, lo que conduce a un incremento en los gastos médicos. Además, no existe hueso extra suficiente para injertarse en el cuerpo y de este modo el autoinjerto padece de una gran dificultad para asegurar partes donadoras para proporcionar hueso para el implante óseo. En el caso de una cirugía espinal que necesite una gran cantidad de injerto óseo, se reporta que la incidencia de complicaciones causadas por el autoinjerto óseo es tan alta como de aproximadamente el 23%. El aloinjerto, el cual ha sido usado para aliviar estos inconvenientes exhibidos por el autonijerto, obtiene principalmente huesos de cadáveres y es ventajoso debido a que no necesita una cirugía secundaria adicional para injertar el hueso, pero sufre de desventajas fatales como el debilitamiento de la fuerza ósea durante un proceso de esterilización, ocurrencia de rechazo de injerto, y probabilidad de infección con enfermedades contagiosas como la hepatitis y SIDA. Además, el aloinjerto tiene desventajas como pobres efectos de formación ósea, reacción inmune, absorción ósea y refractura de los huesos correspondientes, limitando de este modo la aplicación del mismo en un intervalo muy estrecho. En consecuencia, el uso de esta técnica quirúrgica ha disminuido desde finales de 1993 debido a que la Food & Drug Administration ha endurecido las regulaciones de bancos de tejidos óseos contra infecciones. En tanto que la inyección de medula ósea es una técnica basada en una afirmación, propuesta por Huggins (1931), Friedenstein (1973), y Ashton (1980), donde las células osteoprogenitoras de medula ósea inducen y facilitan la formación ósea. La inyección de medula ósea generalmente se lleva a cabo únicamente para sanar fracturas óseas, pero también se lleva a cabo en combinación con el injerto óseo. A diferencia de otras técnicas de injerto óseo, esta inyección de medula ósea no implica incisión quirúrgica de la piel para las partes donadoras y de este modo es ventajosa debido a que no existe sitio de morbidez en el donador y no existen complicaciones o efectos laterales adversos. Por lo tanto, aún cuando han sido publicados algunos resultados excelentes a través de una gran cantidad de casos de aplicación clínica, la inyección de medula ósea es desventajosa debido a sus bases teóricas poco sólidas, por las razones de que porciones considerables de los resultados obtenidos no son consistentes entre ellas, la cantidad de medula ósea recolectable de un sitio es limitada y además, está presente un número significativamente limitado de células osteoprogenitoras en la medula ósea.

DESCRIPCIÓN Problema Técnico Por lo tanto, la presente invención ha sido producida en vista de los problemas anteriores, y es un objetivo de la presente invención proporcionar una composición osteoblástica semisólida que contiene fibrina para la unión ósea y un método para preparar la misma, que no tiene el rechazo de injerto clínico vía la inyección de una mezcla de osteoblastos y fibrina en el sitio donde se busca la unión ósea, y es capaz de lograr una unión ósea efectiva y rápida vía la inyección de una composición la cual se formó en un cierto grado, para aliviar problemas asociados con la probabilidad de formación de tejido óseo en regiones indeseables resultante del escape de osteoblastos inyectados del sitio de unión ósea y entonces la propagación de los mismos a otros sitios vía el flujo sanguíneo, lo cual podría ser causado por la inyección de una suspensión de osteoblastos sola. Otro objetivo de la presente invención es proporcionar una composición osteoblástica semisólida que contiene fibrina para la unión ósea y un método para preparar la misma, la cual es capaz de efectuar una operación quirúrgica con una incisión mínima cuando los osteoblastos y la fibrina sean inyectados en un sitio donde se busque la unión ósea, y que son capaces de lograr la unión ósea via una inyección simple y efectiva de una composición mezclada de osteoblastos y fibrina sin escisión de las regiones dañadas correspondientes tras la utilización de radiación.

Solución Técnica De acuerdo con un aspecto de la presente invención, los objetivos anteriores y otros pueden ser logrados por la provisión de un método para preparar una composición osteoblástica semisólida que contiene fibrina para la unión ósea, que comprende: Aislar osteoblastos de un tejido óseo y cultivar/proliferar los osteoblastos aislados en DMEM (Medio de Eagle Modificado de Dulbecco) o a-MEM (Medio Esencial Mínimo, Modificación Alfa) para preparar una suspensión osteoblástica; y mezclar la suspensión osteoblástica resultante con un factor de coagulación para preparar un agente terapéutico osteoblástico . Aquí, el factor de coagulación es una mezcla de trombina y fibrinógeno. Aquí, los pasos de preparación del agente terapéutico incluyen disolver trombina liofilizada en DMEM o a-MEM líquido y entonces mezclar de 1 a 100 IU/mL de la trombina disuelta con la solución osteoblástica mezclada; y disolver fibrinógeno liofilizado en DMEM o a-MEM líquido y entonces mezclar de 20 a 100 mg/mL del fibrinógeno disuelto con la solución osteoblástica mezclada que contiene trombina mezclada en ella. De acuerdo con otro aspecto de la presente invención, se proporciona una composición osteoblástica preparada por el método mencionado anteriormente para preparar una composición osteoblástica semisólida que contiene fibrina para la unión ósea.

Efectos Ventajosos De acuerdo con una composición osteoblástica semisólida que contiene fibrina para la unión ósea de la presente invención y un método para preparar la misma, que tiene la construcción que se describió anteriormente, esto permite el injerto óseo, que no tiene rechazo de injerto clínico vía inyección de una mezcla de osteoblastos y fibrina en el sitio donde se busca la unión ósea, y es capaz de lograr una unión ósea efectiva y rápida vía la inyección una composición que ha sido formada en cierto grado, para aliviar problemas asociados con la probabilidad de formación de tejido óseo en regiones indeseables resultante del escape de los osteoblastos inyectados del sitio para la unión ósea y entonces la propagación de los mismos a otros sitios vía el flujo sanguíneo, lo cual es causado por la inyección de una suspensión de osteoblastos solos. Además, la presente invención permite el injerto óseo que es capaz de efectuar una operación quirúrgica con incisión mínima cuando son inyectados osteoblastos y fibrina en el sitio donde se busca la unión ósea, y que es capaz de lograr la unión ósea vía una inyección simple y efectiva de una composición mezclada de osteoblastos y fibrinas sin incisión de las regiones dañadas correspondientes tras la utilización de radiación.

DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Los anteriores y otros objetivos, características y otras ventajas de la presente invención serán comprendidas de manera más clara a partir de la siguiente descripción detallada tomada en conjunto con los dibujos acompañantes, en los cuales: La Figura 1 es una vista que muestra la cascada de polimerización de la fibrina; La Figura 2 es un diagrama esquemático que muestra la polimerización de una matriz de fibrina; La Figura 3 es un diagrama de flujo que muestra un proceso para preparar una composición osteoblástica semisólida que contiene fibrina para la unión ósea de acuerdo con la presente invención; La Figura 4 es una fotografía que muestra la inyección de una mezcla de fibrina y osteoblastos después de la introducción de una fractura ósea de 15 mm en tamaño en el antebrazo de un conejo; La Figura 5 es una radiografía tomada 6 semanas después de la inyección de un agente terapéutico osteoblástico semisólido que contiene una mezcla de fibrina y osteoblastos después de la introducción de una fractura ósea de 15 mm de tamaño en el antebrazo de un conejo; La Figura 6 es una fotografía de una sección de tejido teñida con Hematoxilina-Eosina, tomada 6 semanas después de la inyección de un agente terapéutico osteoblástico semisólido que contiene una mezcla de fibrina y osteoblastos después de la introducción de una fractura ósea de 15 mm de tamaño del antebrazo de un conejo; y La Figura 7 es una fotografía de una sección de tejido teñida con Tricromo de Masson, tomada 6 semanas después de la inyección de una mezcla de fibrina y osteoblastos después de la introducción de una fractura ósea de 15 mm de tamaño en el antebrazo de un conejo.

MEJOR MODO PARA LLEVAR A CABO LA INVENCIÓN Aquí posteriormente, se describirá una composición osteoblástica semisólida que contiene fibrina para la unión ósea de acuerdo con la presente invención y método para preparar la misma con mayor detalle con referencia a los dibujos acompañantes. Para superar las desventajas exhibidas por las terapias convencionales para tratar trastornos y enfermedades relacionadas con los huesos, como implantes e injerto óseo, ha sido desarrollada una técnica para transplantar osteoblastos antólogos que no tienen efectos laterales adversos sobre la parte afectada, vía un cultivo de osteoblastos, como método de tratamiento final, en conjunto con una mejora en las terapias convencionales. Sin embargo, para lograr una unión ósea rápida, es necesario mezclar los osteoblastos con una matriz a través de la cual pueden ser tratadas lesiones muy diversas, y por lo tanto es posible tratar la mayoría de las enfermedades óseas que no compartan beneficios terapéuticos con la inyección de una suspensión osteoblástica líquida que consista de osteoblastos únicamente. Puede decirse que el agente terapéutico osteoblástico semisólido para la unión ósea, la cual es una mezcla de osteoblastos y fibrina, es un producto más avanzado de un método de inyección de suspensión osteoblástica líquida el cual se basa en la terapia celular. El método de inyección convencional de una suspensión osteoblástica líquida, el cual implica transplantar osteoblastos solos, puede tratar únicamente tipos de defectos óseos y puede sufrir de problemas asociados con la probabilidad de formación de tejido óseo en regiones indeseables resultantes del escape de los osteoblastos inyectados de los sitios de formación ósea y entonces la propagación de los mismos a otros sitios vía el flujo sanguíneo. En contraste, el agente terapéutico osteoblástico semisólido que contiene fibrina de acuerdo con la presente invención está constituido de una mezcla de osteoblastos y fibrina y por lo tanto, también puede tratar de manera rápida y efectiva una amplia gama de fracturas óseas y varias enfermedades óseas. Se reporta que el cemento de fibrina promueve la neovascularización en modelos con animales (Schlag G. Clinical Orthopedics, 1988) y es muy efectivo para mejorar la aplicabilidad de los métodos usados en el injerto de materiales de implante para el reemplazo óseo, como polvo óseo desmineralizado, vidrio reactivo, hidroxiapatita y granulos de coral, tras efectuar una operación de injerto quirúrgico de esos materiales. Además, el cemento de fibrina sirve como un vehículo de liberación de bioactivadores efectivo para una matriz ósea. Como ejemplos de esos bioactivadores, puede hacerse mención del TGF-/3-1 (Factor del crecimiento transformador beta-1) y BMP relacionada con TGF-/3 (Proteína morfogénica ósea relacionada con el factor del crecimiento transformante beta) . Recientemente, el cemento de fibrina ha recibido mucha atención como un material constituyente de la matriz que libera efectivamente células, en aplicaciones de diseño de tejidos (Huang Q. Tissue Engineering 2002). Las características mencionadas anteriormente del cemento de fibrina conducen a un proceso de unión ósea rápida en la presente composición que implica osteoblastos mezclados con cemento de fibrina como material de la matriz, seguido por la aplicación para la unión ósea. Refiriéndose a los dibujos, la Figura 1 muestra la cascada de polimerización de la fibrina y la Figura 2 muestra esquemáticamente la polimerización de una matriz de fibrina. Para sanar una fractura ósea, deberá preceder la inmovilización de las regiones de la fractura y deberá asegurase un suministro suficiente de sangre en la aplicación del esfuerzo apropiado en las regiones de la fractura ósea. Una fractura ósea, una vez que a ocurrido, usualmente es acompañado a la piel, músculos, ligamentos, vasos sanguíneos, nervios y articulaciones a su alrededor. Tras una revisión histológica, el proceso de cicatrización de una fractura ósea implica tres fases, es decir, las fases de inflamación, reparación y remodelación, y esas etapas no se dividen estrictamente sino que progresan continuamente superponiéndose entre sí. La fase de inflamación es una etapa en la cual las células en la matriz ósea, los vasos sanguíneos, y también los tejidos blancos como el periostio y los músculos alrededor de las regiones de la fractura ósea se dañan debido al trauma que causa la fractura, dando como resultado la formación de un hematoma en una cavidad medular y debajo del periostio. Los derivados inflamatorios derivados de células necróticas dañadas conducen a vasodilatación y exudación de plasma sanguíneo, produciendo por lo tanto un edema agudo. Después de la fase de inflamación, el cambio a una fase de reparación es seguido por el inicio de formación de nueva matriz . La fase de reparación se inicia con la organización del hematoma formado en los sitios fracturados. El hematoma crea un andamio de fibrina, el cual recibe entonces células de reparación. Entonces, los factores del crecimiento u otras proteínas formadas por esas células de reparación inducen la migración y proliferación celular, y la formación de una matriz de reparación, los cuales son el primer paso de la restauración de la fractura ósea. La mayoría de las células que crean tejidos óseos durante la cicatrización de una fractura ósea aparecen en el sitio de la fractura junto con tejidos de granulación, y de callos, los cuales están constituidos de tejidos fibrosos, cartílago y huesos entrelazados, alrededor del sitio de la fractura. La mineralización del callo es iniciada por acciones en serie de las células osteogénicas . La matriz, la cual es sintentizada por esas células osteogénicas contiene un gran número de fibras de colágeno de tipo I espaciadas regularmente que proporcionan condiciones para la deposición de complejos de fosfato de calcio en esos espacios. Sin embargo, esta fase de reparación no es una etapa en la cual se haya completado la unión ósea, y de este modo da como resultado que los callos de la fractura inmaduros tengan una fuerza ósea más débil que los tejidos óseos normales. Por lo tanto, durante la etapa de remodelación, los callos de la fractura adquieren la fuerza o resistencia exhibida por los tejidos óseos normales. Como para la etapa de remodelación, los huesos entrelazados dentro de los callos son reemplazados por huesos lamelares maduros, y los callos no necesarios y superfluos son absorbidos gradualmente. Sobre la base de los resultados de examen radioisotópico, puede observarse que se mantiene un incremento de la actividad del radioisótopo en el sitio de la fractura durante un periodo de tiempo prolongado, aún después de completar la unión ósea y recuperación de las funciones del sitio de la fractura hasta un estado normal, como se muestra en la radiografía. Por lo tanto, la etapa de remodelación continúa durante varios años después de que ha ocurrido la unión clínica de la fractura ósea. La Figura 3 muestra un diagrama de flujo que ilustra un proceso para preparar una composición osteoblástica semisólida que contiene fibrina para la unión ósea de acuerdo con la presente invención. Refiriéndose ahora a la Figura 3, un método para preparar una composición osteoblástica semisólida que contiene fibrina para la unión ósea de acuerdo con la presente invención, comprende aislar osteoblastos de un tejido óseo y cultivar/proliferar los osteoblastos aislados en DMEM (Medio de Eagle' s Modificado de Dulbecco' s) o a-MEM (Medio Esencial Mínimo, Modificación Alfa) para preparar una suspensión osteoblástica (SlOO); y mezclar la suspensión osteoblástica resultante con un factor de la coagulación para preparar un agente terapéutico osetoblástico (S200) . Aquí, el factor de la coagulación es una mezcla de trombina y fibrinógeno. Aquí, el paso de preparación del agente terapéutico incluye disolver trombina liofilizada en DMEM líquido o a-MEM y entonces mezclar 1 IU/mL a 100 IU/mL de la trombina disuelta con la solución osteoblástica mezclada (S210) ; y disolver el fibrinógeno liofilizado en DMEM líquido o a-MEM y entonces mezclar de 20 a 100 mg/mL del fibrinógeno disuelto en la solución osteoblástica mezclada que contiene trombina mezclada en ella (S220) .

En tanto que, una concentración de trombina determina el tiempo de polimerización de la fibrina. Por lo tanto, el tiempo de polimerización de la fibrina puede reducirse dentro de un intervalo de 4 horas a 3 segundos, dependiendo de la concentración de la trombina. La trombina fue aplicada a una concentración tal que la composición de la presente invención se formó para evitar que los osteoblastos y los factores de la coagulación se fugaran de los sitios de la lesión cuando se inyectaron en el sitio de unión de la fractura ósea, la inyección de la composición en el sitio afectado conduce a una rápida formación de una matriz, y se formó una matriz porosa de fibrina óptima para la formación ósea.

MODO PARA LLEVAR A CABO LA INVENCIÓN Aquí posteriormente, se describirán los efectos de una composición osteoblástica semisólida que tiene fibrina para la unión ósea de acuerdo con un ejemplo de la presente invención, con mayor detalle con referencia a los dibujos acompañantes. Primero, se aislaron osteoblastos de los tejidos correspondientes y se cultivaron en DMEM o a-MEM durante 4 semanas a números de proliferación suficiente de osteoblastos. Entonces, los osteoblastos resultantes fueron suspendidos en DMEM o a-MEM para preparar una suspensión de osteoblastos . Después de preparar un cemento de fibrina grado médico fraguado a temperatura ambiente, se disolvió fibrinógeno agregando una cantidad apropiada de DMEM o a-MEM líquido a un frasco que contenía fibrinógeno liofilizado. Además, también se disolvió trombina agregando una cantidad apropiada de DMEM o a-MEM líquido a un frasco que contenía la trombina liofilizada. Entonces, se agregó la trombina disuelta en 1/5 del volumen de la suspensión osteoblástica líquida y se mezcló bien. Una suspensión osteoblástica mezclada con trombina fue mezclada con una cantidad igual de fibrinógeno para preparar 500 µl de una composición osteoblástica. 30 conejos blancos Nueva Zelanda, con un peso de aproximadamente 3 kg, sin importar el sexo, fueron divididos en un grupo control para injerto óseo, y un grupo experimental para injerto de una composición osteoblástica semisólida que contenía fibrina para la unión ósea, consistiendo cada grupo de 15 conejos. De acuerdo al método de Henry, se hizo una incisión longitudinal en el antebrazo de los conejos, exponiendo por lo tanto el eje del radio, y entonces se produjo un efecto óseo de 15 mm de tamaño usando una sierra, seguido por la remoción completa del periostio del área afectada del hueso.

En el grupo control, previamente se recolectó hueso esponjoso de hueso largo y se llevo a cabo el injerto óseo en el área del defecto óseo, seguido por supura de la piel y tejidos subcutáneos. En el grupo experimental, la piel y los tejidos subcutáneos fueron suturados cuidadosamente de modo que el área del defecto óseo dejara un espacio vacío, y se inyectó la composición osteoblástica 3 semanas después, como se muestra en la Figura 4. Después de tomar radiografías en las semanas 3, 6 y 9 del inicio del experimento, se evaluó la unión ósea asignando los puntos correspondientes a las áreas de osteotomía proximal y distal en el área del defecto óseo, respectivamente, dependiendo del grado de unión ósea de las mismas, y la suma de los puntos así ganados.

Tabla 1 Método para determinar la unión de fractura ósea para lesiones Tabla 2 Resultados después de nueve semanas del injerto óseo en grupos control y experimentales La Figura 5 muestra una radiografía tomada 6 semanas después de la inyección del agente terapéutico osteoblástico semisólido que contiene una mezcla de fibrina y osteoblastos después de la introducción de una fractura ósea de 15 mm de tamaño del antebrazo de un conejo y que puede observarse que se logró también completo de la fractura ósea. La Figura 6 muestra una fotografía de una sección de tejido teñida con hematoxilina-eosina, tomada 6 semanas después de la inyección de un agente terapéutico osteoblástico semisólido que contiene una mezcla de fibrina y osteoblastos después de la introducción de una fractura ósea de 15 mm de tamaño en el antebrazo de un conejo y se observó una isla ósea formada sola. La Figura 7 muestra una fotografía de una sección de tejido teñida con Tricomo de Masson, tomada 6 semanas después de la inyección de una mezcla de fibrina y osteoblasto seguida por la introducción de una fractura ósea de una tamaño de 15 mm en el tamaño de un conejo, y puede confirmarse que se produjo colágeno a lo largo de patrones predeterminados, presentando de este modo el progreso de la formación ósea y formación de vasos sanguíneos entre ellas (una rede elíptica de líneas punteadas) . De este modo, de acuerdo con la presente invención, se proporciona un injerto óseo sin rechazo inmunológico mezclando osteoblastos con fibrina e inyectando la mezcla en las partes afectadas para la unión ósea, cuando la unión ósea no progresa debido a una fractura ósea severa, y que exhibe efectos de unión ósea efectiva y rápida vía la inyección de una composición la cual se formó en un cierto grado. Aplicabilidad industrial Como es evidente de lo anterior, de acuerdo con una composición osteoblástica semisólida que contiene fibrina para la unión ósea de la presente invención y un método para preparar la misma, que tiene la formulación que se describió anteriormente, permite la reunión de una fractura ósea, que no tiene rechazo de injerto clínico vía la inyección de una mezcla de osteoblastos y fibrina en un sitio donde se busca la unión ósea, y capaz de lograr una unión ósea efectiva y rápida vía la inyección de una composición la cual se formó en un cierto grado, para aliviar problemas asociados con la probabilidad de formación de tejido óseo en regiones indeseables resultante del escape de los osteoblastos inyectados del sitio para la unión ósea y la propagación posterior de los mismos hacia otros sitios vía el flujo sanguíneo, lo cual puede ser causado por la inyección de una suspensión de osteoblastos solos. Además, la presente invención permite la unión de un fractura ósea es capaz de efectuar una operación quirúrgica con una incisión mínima cuando son inyectados osteoblastos y fibrina en un sitio donde se busca la unión ósea y que es capaz de lograr una unión ósea vía una unión simple y efectiva de una composición mezclada de osteoblastos y fibrina sin incisión de las regiones dañadas correspondientes tras el uso de un sistema de radiación como el de rayos X. Aunque las modalidades preferidas de la presente invención han sido descritas para propósitos ilustrativos, aquellos expertos en la técnica apreciarán, que son posibles varias modificaciones, adiciones y sustituciones, sin apartarse del alcance y espíritu de la invención como se describe en los dibujos acompañantes .

Claims (4)

1. REIVINDICACIONES 1. Un método para preparar una composición osteoblástica semisólida que contiene fibrina para unión ósea, caracterizado porque comprende: aislar osteoblastos de un tejido óseo y cultivar/proliferar los osteoblastos aislados en DMEM (Medio de Eagle Modificado de Dulbecco) o a-MEM (Medio Esencial Mínimo, Modificación Alfa) para preparar una suspensión osteoblástica; y mezclar la suspensión osteoblástica resultante con un factor de la coagulación para preparar un agente terapéutico osetoblástico .
2. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el factor de la coagulación es una mezcla de trombina y fibrinógeno.
3. 3. El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque los pasos de preparación del agente terapéutico incluyen: disolver trombina liofilizada en DMEM líquido o a-MEM y entonces mezclar de 1 a 100 IU/mL de la trombina disuelta con la solución osteoblástica mezclada; y disolver el fibrinógeno liofilizado en DMEM o a-MEM líquido y entonces mezclar de 20 mg/mL a 100 mg/mL del fibrinógeno disuelto con la solución osteoblástica mezclada que contiene trombina mezclada en ella.
4. 4. Una composición osteoblástica, caracterizada porque se prepara por el método para preparar una composición osteoblástica semisólida que contiene fibrina para la unión ósea de conformidad con la reivindicación 1.