[go: up one dir, main page]

ME00614B - Nova anti-cd38 antitela za tretman kancera - Google Patents

Nova anti-cd38 antitela za tretman kancera

Info

Publication number
ME00614B
ME00614B MEP-2009-106A MEP10609A ME00614B ME 00614 B ME00614 B ME 00614B ME P10609 A MEP10609 A ME P10609A ME 00614 B ME00614 B ME 00614B
Authority
ME
Montenegro
Prior art keywords
antibody
epitope
binding fragment
seq
amino acid
Prior art date
Application number
MEP-2009-106A
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Peter U Park
Laura M Bartle
Anna Skaletskaya
Viktor S Golmakher
Daniel Tavares
Jutta Deckert
Vincent Mikol
VéRONIQUE BLANC
Original Assignee
Sanofi Aventis
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=37831721&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=ME00614(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Sanofi Aventis filed Critical Sanofi Aventis
Publication of MEP10609A publication Critical patent/MEP10609A/xx
Publication of ME00614B publication Critical patent/ME00614B/me

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57426—Specifically defined cancers leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6867—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of a blood cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/461—Igs containing Ig-regions, -domains or -residues form different species
    • C07K16/462—Igs containing a variable region (Fv) from one specie and a constant region (Fc) from another
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/924—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Zoology (AREA)

Abstract

Antitela, humanizovana antitela, antitela preoblikovane površine, fragmenti antitela, derivatizovana antitela i konjugatih istih sa citotoksičnim agen sima, sa specifičnošću vezivanja za CD38, u stanju su da ćelije CD38 +  ubijaju apoptozom, ćelijski posredovanom citotoksičnošći zavisnom od antitela (ADCC) i/ili citotoksičnošću zavisnom od komplementa (CDC). Pomenuta antitela i njihovi fragmenti se mogu ko ristiti u tretmanu tumora koji ekspresuju protein CD38, kao što su multipli mijelom, hronična limfocitna leukemija, hronična mijelogena leukemija, akutna mijelogena leukemija, ili akutna limfocitna leukemija, ili u tretmanu autoimunih ili inflamatornih bol esti, kao što su sistemski lupus eritematozus, reumatoidni artritis, multipla skleroza, eritematozus i astma. Pomenuta derivatizovana antitela se mogu koristiti za dijagnozu i mapiranje tumora koji ekspresuju povišene sadržaje CD38. Takođe, daju se citotok sični konjugati, koji sadrže agens za vezivanje za ćeliju i citotoksični agens, terapeutski preparati, koji sadrže ovaj konjugat, postupci za upotrebu ovih konjugata u inhibiciji rasta ćelija i tretmanu bolesti, i komplet koji sadrži citotoksični konjugat.  Određenije, agens za vezivanje za ćeliju je monoklonalno antitelo, njegovi fragmenti koji vezuju epitop, koji prepoznaju i vežu se za protein CD38.

Description

OSNOVA PRONALASKA
CD38 je transmembranski glikoprotein tipa II od 45 kD, sa dugačkim C-terminalom vanćelijskog domena i kratkim N-terminalom citoplazmičkog domena. Ovaj protein CD38 je bifunkcionalni ektoenzim koji može da katalizuje konverziju NAD+ u cikličnu ADP-ribozu (cADPR), a takođe hidrolizuje cADPR u ADP-ribozu. Tokom ontogenije, CD38 se javlja na CD34+ priključen matičnim ćelijama i priključen lozi progenitora limfoidnih, eritroidnih i mijeloidnih ćelija. Ekspresija CD38 se ordžava uglavnom u limfoidnoj lozi sa promenljivim sadržajima ekspresije u raznim fazama razvoja T i B ćelija.
CD38 je nadregulisan u mnogim hematopoietičkim malignitetima i u sojevima ćelija koji proizilaze iz raznih hematopoietičkih maligniteta, uključujući non-Hodgkin-ov limfom (NHL), Burkitt-ov limfom (BL), multipli limfom (MM), B hroničnu limfocitnu leukemiju (B-CLL), B i T akutnu limfocitnu leukemiju (ALL), limfom T ćelija (TCL), akutnu mijeloidnu leukemiju (AML), leukemiju dlakavih ćelija (HCL), Hodgkin-ov limfom (HL) i hroničnu mijeloidnu leukemiju (CML). S druge strane, najprimitivnije pluripotentne matične ćelije hematopoietičkog sistema su CD38 ̅. Ekspresija CD38 kod hematopoietičkih maligniteta i njena korelacija sa napredovanjem bolesti čini da je CD38 atraktivna meta za terapiju antitelima.
Objavljeno je da je CD38 uključen u mobilizaciju Ca2+ (M. Morra et al., FASEB J., 12, 581-592(1998); M. T. Zilber et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97, 2840-2845(2000)), i u transdukciju signala preko fosforilovanja tirozina u brojnim molekulima signalizacije, uključujući fosfolipazu C-y, ZAP-70, syk i c-cbl, u limfoidnim i mijeloidnim ćelijama ili sojevima ćelija (A. Funaro et a\., Eur. J. Immunol., 23, 2407-2411(1993); M. Morra et al., FASEB J., 12, 581-592(1998); A. Funaro et al., J. Immuonol., 145, 2390-2396(1990); M. Zubiaur et al., J. Immunol., 159, 193-205( 1997); S. Deaglio et al., Blood, 102, 2146-2155(2003); E. Todisco et al., Blood, 95, 535-542(2000); M. Konopleva et al., J. Immunol., 161, 4792-4708(1998); M. T. Zilber et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97, 2840-2845(2000); A. Kitanaka et al., J. Immunol., 159, 184-192(1997); A. Kitanaka et al., J. Immunol., 162, 1952-1958(1999); R. Mallone et al„ Int. Immunol., 13, 397-409(2001). Na osnovu ovih opažanja ozvaničeno je da CD38 predstavlja značajan molekul signalizacije u sazrevanju i aktiviranju limfoidnih i mijeloidnih ćelija, tokom njihovog normalnog razvoja.
Tačna uloga CD38 u transdukciji signala i hematopoiezi još uvek nije jasna, a naročito zato što su u većini ovih ispitivanja transdukcije signala korišćeni sojevi ćelija koji ektopički prekomerno ekspresuju CD38 i anti-CD38 monoklonalna antitela, koja nisu fiziološki ligandi. Zato što protein CD38 ima enzimatsku aktivnost, koja proizvodi cADPR, predloženo je da molekul, koji može da indukuje mobilizaciju Ca2+ (H.C. Lee et al., J. Biol. Chem.,264,1608-1615(1989); H.C. Lee i R. Aarhus, Cell Regul., 2,203-209(1991)), vezivanjem CD38 pomoću monoklonalnih antitela pokreće mobilizaciju Ca2+ i transdukciju signala u limfocitima, preko povećanja stvaranja cADPR (H.C. Lee et al., Adv. Exp. Med. Biol.,419,411-419(1997)). Suprotno od ove hipoteze, komadanje i analiza tačkastih mutacija proteina CD38 su pokazali da nije potreban ni njegov citoplazmički kraj, niti njegova enzimatska aktivnost kod signalizacije posredovane sa anti-CD38 antitelima (A. Kitanaka et al., J. Immunol..162,1952-1958(1999); F.E. Lund et al.,J. Immunol., 162,2693-2702(1999); S. Hoshino et al., J. Immunol.,158,741-747(1997)).
Najbolji dokazi funkcije CD38 dolaze iz CD38T nokautiranih miševa, sa urođenim defektom imuniteta i smanjenim humoralnim odgovorom zavisnim od T-ćelija, usled defekta u migraciji dendritičnih ćelija (S. Partida-Sanchez et al., lmmunity, 20,279-291(2004); S. Partida-Sanchez et al., Nat. Med., 7,1209-1216(2001)). Ipak, nije jasno da li je funkcija CD38 u miševima identična u humanim bićima, zato što se shema ekspresije CD38 prilikom hematopoieze mnogo razlikuje između humanih bića i miševa: a) različite nezrele progenitorske matične ćelije kod humanih bića, slične progenitorske matične ćelije kod miševa ekspresuju visok sadržaj CD38 (T.D. Randall et al., Blood, 87,4057-4067(1996); R.N. Dagher et al., Biol. Blood Marrow Transplant., 4,69-74(1998)); b) dok se prilikom razvoja humanih B ćelija, nalaze visoki sadržaji ekspresije CD38 u germinalnom centru B ćelija i u ćelijama plazme (F.M. Uckun, Blood, 76,1908-1923(1990); M. Kumagai et al., J. Exp. Med., 181,1101-1110(1995)), kod miševa su ovi sadržaji ekspresije CD38 u odgovarajućim ćelijama, niski (A.M. Oliver at al., J. Immunol, 158,1108-1115(1997); A. Ridderstad i D.M. Tarlinton, J. Immunol., 160,4688-4695(1998)).
U literaturi je opisano nekoliko anti-humanih CD38 antitela sa različitim proliferativnim svojstvima u raznim ćeijama i sojevima ćelija tumora. Na primer, himerno antitelo OKT10, sa mišjim Fab i humanim lgG1 Fc, vrlo efikasno posreduje u ćelijski posredovanoj citotoksičnosti zavisnoj od antitela (ADCC) protiv ćelija limfoma, u prisustvu mononuklearnih ćelija iz periferne krvi, ili kod MM pacijenata ili kod normalnih osoba (F.K. Stevenson et al., Blood, 77,1071-1079(1991)). Graftovana sa CDR humanizovana verzija anti-CD38 antitela AT13/5, pokazano je da ima snažnu ADCC aktivnost protiv sojeva ćelija pozitivnih na CD38 (US 09/797,941 A1). Pokazano je in vitro da humana monoklonalna anti-CD38 antitela posreduju u ubijanju sojeva ćelija pozitivnih na CD38 pomoću ADCC i/ili citoktoksičnosti zavisne od komplementa (CDC), i da odlažu rast tumora kod miševa SCID koji nose MM soj ćelija RPMI-8226 (WO 2005/103083 A2). S druge strane, nekoliko anti-CD38 antitela, IB4, SUN-4B7 i OKT10, ali ne i IB6, AT1 ili AT2, indukuju proliferaciju mononuklearnih ćelija u perifernoj krvi (PBMC), kod normalnih osoba (C.M. Ausiello et al., Tlssue Antlgens, 56,539-547(2000)).
Za neka od antitela iz prethodnog stanja tehnike, pokazano je da su u stanju da startuju apoptozu u B ćelijama sa CD38+. Međutim, oni mogu da to učine samo u prisustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome. Objavljeno je da agonističko anti-CD38 antitelo (IB4) sprečava apoptozu germinalnog centra (GC) u humanim B ćelijama (S. Župo et al., Eur. J. Immunol24^1218-1222(1994)), a indukuje proliferaciju KG-1 i HL-60 AML ćelija (M. Konopleva et al., J. Immunol., 161,4702-4708(1998)), i indukuje apoptozu limfoblastnih ćelija Jurkat T (M. Morra et al., FASEB J., 12,581-592(1998)). Drugo anti-CD38 antitelo T16, indukuje apoptozu nezrelih limfoidnih ćelija i leukemijskih limfoblastnih ćelija kod pacijenta sa ALL (M. Kumagai et al.,J. Exp. Med., 181,1101-1110(1995)) i leukemijskih mijeloblastih ćelija kod pacijenata sa AML (E. Todisco et al., Blood, 95,535-542(2000)), ali T16 indukuje apoptozu samo u prisustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome (IL-7, IK-3, faktor matičnih ćelija).
S druge strane, neka prethodna antitela indukuju apoptozu posle umrežavanja, ali potpuno su lišena bilo kakve aktivnosti apoptoze ako se inkubiraju sama (WO 2006/099875).
Zato stoje CD38 privlačan cilj u terapiji antitelima za razne hematopoietičke malignitete, generisali smo i ispitali veliki broj anti-humanih CD38 antitela visoke snage, za sledeće tri citotoksične aktivnosti protiv malignih hemaptopietičkih ćelia pozitivnih na CD38: indukcija apoptoze, ADCC i CDC. Ovaj pronalazak opisuje nova anti-CD38 antitela, koja su u stanju da ubiju CD38+ ćelije preko tri različita citotoksična mehanizma: indukcije apoptoze, ADCC i CDC. Naglašava se da ovaj pronalazak opisuje prva anti-CD38 antitela koja su u stanju da direktno indukuju apoptozu CD38+ ćelija, čak i bez prisustva ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome.
PREGLED PRONALASKA
Predmet ovog pronalaska je davanje antitela koja specifično vezuju CD38, a u stanju su da ubijaju ćelije CD38+ apoptozom. lako su neka antitela iz prethodog stanja tehnike u stanju da startuju apoptozu samo ako su umrežena, u protivnom su lišena bilo kakove aktivnosti apoptoze, antitela iz ovog pronalaska su u stanju da indukuju ćelijsku smrt apoptotzom ćelija CD38+, čak i kada se inkubiraju sama. U jednom aspektu ovog pronalaska, antitela iz ovog pronalaska su u stanju da ubijaju CD38+ B ćelije pomoću ADCC ili CDC. U još jednom aspektu, antitela iz ovog pronalaska su u stanju da ubiju CD38+ ćelije pomoću bar dva od gore pomenutih mehanizama, tj. apoptozom, sa ADCC ili CDC. Izuzetno, antitela iz ovog pronalaska su prva anti-CD38 antitela za koja je pokazano da ubijaju CD38+ B ćelije pomoću sva tri mehanizma: apoptozom, sa ADCC i CDC. U sledećoj realizaciji ovog pronalaska, pomenuta antitela su u stanju da ubiju CD38+ B ćelija apoptozom, čak i u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome.
Antitela iz ovog pronalaska, naročito su u stanju da ubijaju maligne CD38+ B ćelije, uključujući ćelije limfoma, ćelije leukemije i ćelije multiplog mijeloma. U nekim realizacijama, CD38+ B ćelija je BHL, BI, MM, B-CLL, ALL, TCL, AML, HCL, HL ili CML ćelija.
U jednom aspektu ovog pronalaska, antitela iz ovog pronalaska su u stanju da ubiju apoptozom najmanje 24% ćelija Daudi-evog limfoma i/ili najmanje 7% ćelija Ramos-ovog limfoma, i/ili 11% ćelija MOLP-8 multiplog mijeloma, i/ili 36% ćelija SU-DHL-8 limfoma, i/ili 62% ćelija DND-41 leukemije, i/ili 27% ćelija NU-DUL-1 limfoma, i/ili 9% ćelija JVM-13 leukemije, i/ili 4% ćelija HC-1 leukemije, u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome.
Antitela iz ovog pronalaska mogu biti poliklonalna ili monoklonalna. Poželjna su monoklonalna anti-CD38 antitela. U poželjnijoj realizaciji, daju se mišja antitela, koja se biraju između 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39, koja su potpuno okarakterisana u pogledu sekvencija aminokiselina varijabilnih regiona i lakog i teškog lanca, sekvencija cDNK gena varijabilnih regiona lakog i teškog lanca, identifikacije njihovih CDR (region određivanja komplementarnosti), identifikacije njihovih površinskih aminokiselina, i načina njihove ekspresije u rekombinantnom obliku.
Ovaj pronalazak obuhvata himerne verzije mišjeg anti-CD38 monoklonalnog antitela, koje se biraju između 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39. Obuhvaćene su takođe verzije sa preoblikovanom površinom ili humanizovane verzije 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitela, gde su ostaci izloženi na površini skeleta varijabilnog regiona antitela, ili njihovih fragmenata koji vezuju epitop, zamenjeni i u lakom i u teškom lancu, sa onima koji bliže potsećaju na poznate humane površine antitela. Ova humanizovana antitela i njihovih fragmeata koji vezuju epitop iz ovog pronalaska, poseduju poboljšana svojstva, u tom smislu što su manje imunogena (ili su u potpunosti ne-imunogena) u poređenju sa mišjim verzijama, kod humanih osoba kojima se ordiniraju. Dakle, razne verzije humanizovanih 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitela i njihovih fragmenata koji vezuju epitop iz ovog pronalaska, specifično prepoznaju CD38, iako nisu imunogeni za humano biće.
Humanizovane verzije 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitela iz ovog pronalaska su potpuno okarakterisane u pogledu njihovih respektivnih sekvencija aminokiselina varijabilnih regiona i lakog i teškog lanca, sekvencija DNK gena varijabilnih regiona lakog i teškog lanca, identifikacije regiona koji određuje komplementarnost (CDR), identifikacije ostataka aminokiselina na površini skeleta varijabilnog regiona, i opisa načina njihove ekspresije u rekombinantnom obliku.
U ovom pronalasku se razmatra takođe upotreba konjugata između citotoksičnih konjugata koji sadrže (1) agens za vezivanje ćelije koji prepoznaje i vezuje CD38, i (2) citotoksični agens. Kod citotoksičnih konjugata, agens za vezivanje ćelije ima visok afinitet prema CD38, a citotoksični agens ima visok stepen citotoksičnosti za ćelije koje ekspresuju CD38, tako da citotokisni konjugati iz ovog pronalaska predstavljaju afikasne agense za ubijanje.
U poželjnoj realizaciji, agens za vezivanje ćelija je anti-CD38 antitelo (npr. 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39) ili njegov fragment koji vezuje epitop, poželjnije humanizovano anti-CD38 antitelo (npr. 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39) ili njegov fragment koji vezuje epitop, pri čemu je citotoksični agens kovalentno spojen, direktno ili preko linkera, koji se može otcepiti ili se ne može otcepiti, za antitelo ili njegov fragment koji vezuje epitop. U poželjnijim realizacijama, agens za vezivanje ćelije su humanizovana 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitela, ili njihov fragment koji vezuje epitop, a citotoksični agens je taxol, majtansinoid, derivat tomamicina, derivat leptomicina, CC-1065 ili neki analog CC-1065.
Poželjnije je da je agens za vezivanje ćelije humanizovano anti-CD38 antitelo 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39, a da je citotoksični agens jedinjenje majtansina, kao što su DM1 ili DM4.
Ovaj pronalazak obuhvata takođe upotrebu fragmenata anti-CD38 antitela, koji zadržavaju svojstvo vezivanja za CD38. U drugom aspektu ovog pronalaska, razmatra se upotreba funkcionalnih ekvivalenata anti-CD38 antitela.
Ovaj pronalazak obuhvata takođe postupak inhibiranja rasta ćelija koje ekspresuju CD38. U poželjnoj realizaciji, postupak za inhibiranje rasta ćelija koje ekspresuju CD38 se odigrava in vivo, i za posledicu ima smrt tih ćelija, mada su takođe obuhvaćene i primene in vitro i ex vivo.
Ovaj pronalazak daje takođe terapeutski preparat koji sadrži anti-CD38 antitelo ili konjugat anti-CD38 antitelo-citotoksični agens, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijent. U nekim realizacijama, ovaj terapeutski preparat sadržii drugi terapeutski agens. Ovaj drugi terapeutski agens se može odabrati iz grupe koju čine antagonisti epidermalnog faktora rasta (EFG), faktora rasta fibroblasta (FGF), faktora rasta hepatocita (HGF), faktora tkiva (TF), proteina C, proteina S, faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGF), heregulina, proteina za stimulaciju makrofage (MSP) ili faktora rasta vaskularnog endotelijuma (VEGF), ili antagonist receptora epidermalnog faktora rasta (EGF), faktora rasta fibroblasta (FGF), faktora rasta hepatocita (FIGF), faktora tkiva (TF), proteina C, proteina S, faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGF), heregulina, proteina za stimulisanje makrofage (MSP), faktora rasta endotelijuma (VEGF), uključujući receptor HER2, receptor HER3, c-ET i drugi receptor tirozin kinaza. Ovaj drugi terapeutski agens se može takođe odabrati iz grupe koju čine antitela koja targetiraju klastere diferencijacije (CD) antigena, uključujući CD3, CD14, CD19, CD20, CD22, CD25, CD28, CD30, CD33, CD36, CD40, CD44, CD52, CD55, CD59, CD59, CD56, CD70, CD79, CD80, CD103, CD134, CD137, CD138 i CD152. Ovaj drugi terapeutski agens se može takođe odabrati iz grupe hemoterapeutskih ili imunomodulatornih agenasa.
Ovaj pronalazak obuhvata još i postupak za tretiranje subjekta koji ima neki kancer ili neku inflamatornu bolest, uključujući autoimunu bolest, koji koristi ovaj terapeutski preparat. U nekim realizacijama kancer se bira iz grupe koju čine NHL, BL, MM, B-CLL, ALL, TCL, AML, HCL, HL i CML. U drugoj realizaciji, autoimuna bolest se bira iz grupe koju čine sistemski lupus eritematozus, multipla skelroza, reumatoidni artritis; Crohn-ova bolest, ulcerativni kolitis, Hashimoto-ov tiroiditis, ankilozni spondilitis, hepatitis C povezan sa krioglubulinemskim vaskulitisom, hronični fokalni encefalitis, bulouzni pemfigoid, hemofilija A, membranoproliferativni glomerulonefritis, Sjogren-ov sindrom, dermatomiozitis odraslih i dece, polimiozitis odraslih, hronična urtikarija, primarna bilijarna ciroza, idiopatska trombocitopenijska purpura, neuromijelitis optika, Graves-ova distiroidna bolest, bulouzni pemfigoid, membranoproliferatovni glomerulonefritis, Churg-Strauss-ov sindrom i astma. U poželjnim realizacijama, citoktoksični konjugat sadrži anti-CD38 antitelo i citotoksični agens. U poželjnijim realizacijama, ovaj citotoksični konjugat sadrži humanizovani konjugat 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitelo-DM1, humanizovano 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitelo-DM4, ili humanizovani konjugat 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitelo-toksan, a ovaj konjugat se ordinira zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem ili ekscipijentima.
U sledećem aspektu ovog pronalaska, anti-CD38 antitelo se koristi za detekciju proteina CD38 u biološkom uzorku. U poželjnoj realizaciji, pomenuta antitela se koriste za određivanje sadržaja CD38 u tkivu tumora.
Ovaj pronalazak sadrži takođe komplet, koji se sastoji od anti-CD38 antitela ili konjugata anti-CD38 antitelo-citotoksični agens, i uputstva za upotrebu. U poželjnim realizacijama anti-CD38 antitela su humanizovana 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitela, citototksični agens je jedinjenje majtansina, kao što su DM1 ili DM4, derivat tromamicina, derivat leptomicina, ili neki taksan, a uputstvo je za korišćenje ovog konjugata za tretman subjekta koji ima kancer. Ovaj komplet može takođe da obuhvata i komponente za dobijanje farmaceutski prihvatljive formulacije, kao što je razblaživač, u slučaju da je konjugat u liofilizovanom stanju ili koncentrovanom obliku, i za ordiniranje takve formulacije.
Ukoliko se drugačije ne naglasi, svi citati i patenti koji su ovde navedeni, uključeni su samim citiranjem.
KRATAK OPIS SLIKA
Slika 1A prikazuje FACS analizu specifičnog vezivanja prečišćenih mišjih anti-CD38 antitela, 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38 do 300-19 ćelija, koje ekspresuju humani CD38, i ćelija Ramos-ovog limfoma, pozitivnih na CD38.
Slika 1B prikazuje FACS analizu specifičnog vezivanja prečišćenih mišjih anti-CD38 antitela, 38SB30, 38SB31, 38SB39 i kontrolnog anti-CD38 antitela AT13/5, za ćelije 300-19, koje ekspresuju humani CD38, i ćelija Ramos-ovog limfoma, pozitivnih na CD38.
Slika 2 prikazuje titracione krive vezivanja 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 načinjene sa Ramos-ovim ćelijama.
Slika 3 prikazuje dijagrame mrlja FACS (FL4-H; bojenje sa TO-PRO-3; y-osa, a FL1-H; bojenje sa Annexin V-FITC; x-osa) za Ramos-ove ćelije, koje podležu apoptozi posle 24 h inkubacije sa 38SB13, 38SB19 ili AT13/5 (10 nM).
Slika 4A prikazuje prosečne procente Ramos-ovih ćelija podleglih apoptozi, posle 24-satne inkubacije sa 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31, 38SB39, 38SB7, 38SB23, IB4, AT13/5, OKT10 ili SUN-4B7. Naneti su prosečni procenti ćelija pozitivnih na Annexin V (y-osa; obuhvaćene su ćelije pozitivne i negativne na TO-PRO-3) iz duplikata uzoraka.
Slika 4B prikazuje prosečne procente Daudi-evih ćelija podleglih apoptozi, posle 24-satne inkubacije sa istim setom antitela, kao na Slici 4A.
Slika 4C prikazuje prosečne procente Molp-8 ćelija podleglih apoptozi, posle 24-satne inkubacije sa istim setom antitela, kao na Slici 4A.
Slika 5A prikazuje dijagram humanog vektora ekspresije upotrebljenog za ekspresiju hu38SB19-LC.
Slika 5B prikazuje dijagram humanog vektora ekspresije upotrebljenog za ekspresiju hu38SB19-HC.
Slika 5C prikazuje dijagram humanog vektora ekspresije upotrebljenog za ekspresiju i hu38SB19-LC i hu38Sb19-HC.
Slika 6A prikazuje aktivnosti ADCC, posredovane antitelima ch38SB13, ch38SB18 i ch38SB19, na Ramos-ove ćelije.
Slika 6B prikazuje aktivnosti ADCC, posredovane antitelima ch38SB30, ch38SB31 i ch38SB39, na Ramos-ove ćelije.
Slika 7A prikazuje aktivnosti ADCC, posredovane antitelima ch38SB18, ch38SB19 i ch38SB31 i ne-vezujućim himernim humanim kontrolnim antitelom lgG1, na ćelije LP-1 multiplog mijeloma.
Slika 7B prikazuje aktivnosti ADCC, posredovane antitelima ch38SB19 i mišjim 38SB19, na Daudi-eve ćelije.
Slika 8A prikazuje aktivnosti ADCC, posredovane antitelom ch38SB19 i nevezujućim himernim humanim kontrolnim tetom lgG1, na NALM-6 B-ALL ćelije.
Slika 8B prikazuje aktivnosti ADCC, posredovane antitelom ch38SB19 i nevezujućim himernim humanim kontrolnim telom lgG1, na MOLT-4 T-ALL ćelije.
Slika 9A prikazuje aktivnosti CDC, posredovane antitelima ch38SB13, ch38SB18 i ch38SB19, ch38SB30 i ch38SB39, na Raji-IMG ćelije.
Slika 9B prikazuje aktivnosti CDC, posredovane antitelima ch38SB19 i ch38SB31, na Raji-IMG ćelije.
Slika 10 prikazuje aktivnosti CDC, posredovane antitelima ch38SB18, ch38SB19 i ch38SB31 i himernim ne-vezujućim humanim kontrolnim antitelom IgG 1, na ćelije LP-1 multiplog mijeloma.
Slika 11A prikazuje aktivnosti CDC, posredovane antitelima ch38SB13, ch38SB19 i ch38SB39, na Daudi-eve ćelije.
Slika 11B prikazuje aktivnosti CDC, posredovane antitelima ch38SB18 i ch38SB30, na Daudi-eve ćelije.
Slika 11C prikazuje aktivnosti CDC, posredovane antitelima ch38SB19 i ch38SB31, na Daudi-eve ćelije.
Slika 12A prikazuje krive titracije vezivanja ch38SB19, hu38SB19 vl.OO i hu38SB19 v1.20, na Ramos-ove ćelije.
Slika 12B prikazuje krive vezivanja, koje porede ch38SB19, hu38SB19 vl.OO i hu38SB19 vl.OO u pogledu njihove sposobnosti da se nadmeću sa vezivanjem biotinilovanog mišjeg 38SB19 antitela za Ramos-ove ćelie.
Slika 13 prikazuje prosečne procente Daudi-evih ćelija podleglih apoptozi, posle 24 h inkubacije sa ch38SB19, hu38SB19 vl.OO ili hu38SB19 v1.20 antitelom.
Slika 14 prikazuje aktivnosti ADCC, posredovane antitelima ch38Sb19, hu38SB19 vl .OO, hu38SB19 v1.20 i nevezujućim himernim humanim kontrolnim antitelom IgG 1, na ćelije LP-1 multiplog mijeloma.
Slika 15A prikazuje aktivnosti CDC, posredovane antitelima ch38Sb19, hu38SB19 v1.00 i hu38SB19 v1.20, na ćelije Raji-IMG limfoma.
Slika 15B prikazuje akivnosti CDC, posredovane antitelima ch38Sb19, hu38SB19 vl.OO i hu38SB19 v1.20, na ćelije LP-1 multiplog mijeloma.
Slika 15C prikazuje akivnosti CDC, posredovane antitelima ch38Sb19, hu38SB19 vl.OO i hu38SB19 v1.20, na ćelije DND-41 akutne limfoblastne leukemije T-ćelija.
Slika 16 prikazuje prosečne procente ćelija pozitivnih na Annexin V, posle 24 h inkubacije sa hu38SB19 vl.OO antitelom, za ćelije SU-DHL-8 difuzne velike B-ćelije limfoma, ćelije NU-DUL-1 B-ćelije limfoma, ćelije DND-41 limfoblastne leukemije T-ćelija, ćelije JVM-13 hronične limfocitne leukemije B-ćelija i ćelije HC-1 leukemije dlakavih ćelija.
Slika 17 prikazuje procenat preživljavanja miševa SCID, koji imaju utvrđene rasejane humane Ramos-ove tumore. Miševi su tretirani sa mišjim 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 ili 38SB39 antitelima ili sa PBS, kako je naznačeno.
Slika 18 prikazuje procenat preživljavanja miševa SCID, koji imaju utvrđene rasejane humane Daudi-eve tumore. Miševi su tretirani sa hu38SB19 ili mu38SB19 antitelom ili sa PBS, kako je naznačeno.
Slika 19 prikazuje srednju zapreminu tumora miševa SCID, koji imaju ksenografte tumora multiplog mijeloma. Miševi su tretirani sa hu38SB19, sa nevezujućim kontrolnim antitelom lgG1, ili sa PBS, kako je naznačeno.
Slika 20 prikazuje srednju zapreminu tumora miševa SCID, koji imaju ksenografte tumora multiplog mijeloma MOLP-8. Miševi su tretirani sa hu38SB19, mu38SB19, sa nevezujućim kontrolnim antitelom lgG1, ili sa PBS, kako je naznačeno.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
Ovde se daju nova antitela koja su u stanju da specifično vezuju CD38. Određenije, ovi pronalazači su otkrili nova antitela koja specifično vezuju CD38 na površini ćelije i ubijaju apoptozom ćelije CD38+. U jednom aspektu ovog pronalaska, anti-CD38 antitela su takođe u stanju da ubiju ćelije CD38+ pomoću citotoksičnosti zavisne od antitela (ADCC). U drugom aspektu, anti-CD38 antitela iz ovog pronalaska su u stanju da ubiju ćelije CD38+ citotoksičnošću zavisnom od komplementa (CDC). U još jednom aspektu, anti-CD38 antitela iz ovog pronalaska su u stanju da ubiju ćelije CD38+ preko bar dva od gore pomenutih mehanizama, apoptozom, sa ADCC i CDC. Određenije, u poželjnoj realizaciji su anti-CD38 antitela iz ovog pronalaska u stanju da ubiju ćelije CD38+ apoptozom, sa ADCC i CDC. Tako, ovaj pronalazak daje prva anti-CD38 antitela koja su u stanju da ubiju ćelije CD38+ pomoću tri različita mehanizma.
Antitela koja su u stanju da vezuju CD38 i startuju smrt ćelija apoptozom u ćelijama CD38+ i ranije su opisana (M. Kumagai et al., J. Exp. Med., 181,1101-1110(1995); E.Todisco et al., Blood,95,535-542(2000)), ali antitela iz ovog pronalaska su prva, za koja je pokazano da maju aktivnost apoptoze u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome. Naziv ”stroma”, kako se ovde koristi, odnosi se na ne-maligno potporno tkivo tumora, koje čini vezivno tkivo, krvni sudovi i inflamatorne ćelije.
Stromalne ćelije proizvode faktore rasta i druge supstance, uključujući citokine, koje mogu da utiču na ponašanje ćelija kancenra. Naziv "citokin”, kako se ovde koristi, odnosi se na male izlučene proteine (npr. IL-1, IL-2, IL-4, IL-5 i IL-6, IFNg, IL-3, IL-7 i GM-CSF) koji posreduju i regulišu imunitet, inflamaciju i hematopoiezu. Ovde je pokazano da antitela iz prethodnog stanja tehnike nisu u stanju da startuju ćelijsku smrt apoptozom u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome. Nasuprot, anti-CD38 antitela iz ovog pronalaska, pod istim uslovima pokazuju snažnu aktivnost apoptoze.
U sledećem aspektu, antitela iz ovog pronalaska su u stanju da vezuju protein CD38 sa Kd od 3x10 9 M ili nižom.
Termin ”CD38”, kako se ovde koristi, odnosi se na tip II transmembranskog proteina, koji sadrži, na primer, sekvenciju aminokiselina, kao što je u Genbank accession number NP 001766. ”CD38+ ćelija” je ćelija koja ekspresuje protein CD38. Poželjno je da ćeliju CD38+ predstavlja ćelija sisara.
U jednoj realizaciji ovog pronalaska, ćelija CD38+ je maligna ćelija. U drugoj realizaciji, ćelija CD38+je B ćelija. U poželjnoj realizaciji, ćelija CD38+ je ćelija tumora izvedena iz hematopoietičkog maligniteta. U poželjnijoj realizaciji, ćelija CD38+ je ćelija limfoma, ćelija leukemije ili ćelija multiplog mijeloma. U još jednoj poželjnoj realizaciji, ćelija CD38+ je NHL, BL, MM, B-CLL, ALL, TCL, AML, HCL, HL ili CML ćelija.
Dakle, u jednoj realizaciji, ovaj pronalazak daje anti-CD38 antitela sposobna da ubiju najmanje 24% ćelija Daudi-evog limfoma, u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome. U drugoj realizaciji, anti-CD38 antitela iz ovog pronalaska su sposobna da ubiju najmanje 7% ćelija Ramos-ovog limfoma, u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome. U drugoj realizaciji, anti-CD38 antitela iz ovog pronalaska su sposobna da ubiju najmanje 11% ćelija MOLP-8 multiplog mijeloma, u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome. U sledećoj realizaciji, anti-CD38 antitela iz ovog pronalaska su sposobna da ubiju najmanje 36% ćelija SU-DHL-8 multiplog mijeloma, u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome. U drugoj realizaciji, anti-CD38 antitela iz ovog pronalaska su sposobna da ubiju najmanje 27% ćelija NU-DUL-1 limfoma, u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome. U sledećoj realizaciji, anti-CD38 antitela iz ovog pronalaska su sposobna da ubiju najmanje 62% ćelija DND-41 leukemije, u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome. U sledećoj realizaciji, anti-CD38 antitela iz ovog pronalaska su sposobna da ubiju najmanje 9% ćelija JVM-13 leukemije, u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome. U sledećoj realizaciji, anti-CD38 antitela iz ovog pronalaska su sposobna da ubiju najmanje 4% ćelija HC-1 leukemije, u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome.
ANTITELA
Termin "antitelo”, ovde se koristi u najširem smislu, i specifično pokriva monoklonalna antitela (uključujući monoklonalna tela čitave dužine) bilo kog izotipa, kao što su IgG, igM, IgA, IgD i IgE, poliklonalna antitela, multispecifična antitela, himerna antitela i fragmente antitela. Antitelo koje reaguje sa specifičnim antigenom može biti generisano rekombinantnim postupcima, kao što je selekcija biblioteka rekombinantnih antitela u fagi ili sličnim vektorima, ili imunizacijom animalnog bića sa antigenom ili nukleinskom kiselinom koja kodira antigen.
Tipično, antitelo IgG se sastoji od dva identična teška lanca i dva identična laka lanca, koji su povezani disulfidnim vezama. Svaki teški i laki lanac sadrži konstantni region i varijabilni region. Svaki varijabilni region sadrži tri segmenta koji se nazivaju "regioni koji određuju komplementarnost” (engl. complementarity-determining regions”) (”CDR”), ili "hipervarijabili regioni”, koji su prvenstveno odgovorni za vezivanje epitopa na antigen. Oni se obično navode kao CDR1, CDR2 i CDR3, numerisani redom sa strane N-terminala. Očuvaniji delovi varijabilnih regiona se nazivaju "regioni skeleta”.
Kako se ovde koristi, ”VH” ili ”VH”, se odnosi na varijabilni region antitela teškog lanca imunoglobulina, uključujući teški lanac fragmenata Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab’ ili F(ab’)2.
Pozivanje na ”VL” ili ”VL” se odnosi na varijabilni region antitela lakog lanca imunoglobulina, uključujući laki lanac fragmenata Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab’ ili F(ab’)2.
"Poliklonalno antitelo" je antitelo koje se stvara između, ili u prisustvu, jednog ili više ne-identičnih antitela. Obično, poliklonalna antitela se stvaraju iz B-limfocita, u prisustvu nekoliko drugih B-limfocita koji proizvode ne-identična antitela. Obično, poliklonalna antitela se dobijaju direktno iz imunizovanog animalnog bića.
"Monoklonalano antitelo”, kako se ovde koristi, predstavlja antitelo koje se dobija iz populacije suštinski homogenih antitela, tj. antitela koja formiraju ovu populaciju su u suštini identična, izuzimajući moguće mutacije koje se dešavaju u prirodi, a koje mogu biti prisutne u neznatnoj količini. Ova antitela su usmerena protiv jednog epitopa, pa su stoga visoko specifična.
"Epitop” je mesto na antigenu za koje se vezuje antitelo. Ukoliko antigen predstavlja neki polimer, kao što je protein ili polisaharid, epitop se može formirati pomoću susednih ostataka ili pomoću ne-susednih ostataka, dovedenih u neposrednu blizinu savijanjem polimera antigena. Kod proteina, epitopi se formiraju pomoću susednih aminokiselina, koje se tipično tu zadržavaju prilikom izlaganja rastvaračima za denaturaciju, dok se epitopi koji se formiraju pomoću ne-susednih aminokiselina tipično izgube prilikom pomenutog izlaganja.
Kako se ovde koristi, simbol ”Kd” se odnosi na konstantu disocijacije posmatrane interakcije antitelo/antigen.
Ovaj pronalazak je proistekao iz novih mišjih anti-CD38 antitela, ovde označenih 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39, koja su potpuno okarakterisana u pogledu sekvencija aminokiselina i lakog i teškog lanca, idenifikacije svih CDR, identifikacije površinskih aminokiselina i načina njihove ekspresije u rekombinantnom obliku. Ovde su opisane primarne sekvencije aminokiselina i DNK antitela 38SB13,
38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 lakog i teškog lanca i humanizovanih verzija.
Sojevi ćelija hibridoma, koji proizvode 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 mišja anti-CD38 antitela, su deponovani u instituciji American Type Culture Collection (10801 University Bld., Manassas, VA, 20110-2209, USA) 21. juna 2006., pod deponovanim brojevima PTA-7667, PTA-7669, PTA-7670, PTA-7666, PTA-7668 i PTA-7671, respektivno.
Obim ovog pronalaska se ne ograničava antitelima i fragmentima koji sadrže ove sekvencije. Umesto toga, sva antitela i fragmenti koji se specifično vezuju za CD38 su u stanju da ubijaju ćelije CD38+ apoptotzom, sa ADCC i/ili CDC, što spada u obim ovog pronalaska. Tako, antitela i fragmenti antitela mogu da se razlikuju od antitela 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39, ili humanizovani derivati u sekvencijama aminokiselina njihovog skeleta, njihovi CDR, laki lanac i teški lanac, isto tako su unutar obima ovog pronalaska.
U jednoj realizaciji, ovaj pronalazak daje antitela ili njihov fragment koji vezuje epitop, koji sadrže jedan ili više CDR, koja imaju sekvenciju aminokiselina koja se bira iz grupe koju čine SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, i 36. U poželjnoj realizaciji, antitela iz ovog pronalaska sadrže najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopne CDR, koji imaju sekvencije aminokiselina koje se biraju iz grupe koju čine SEQ ID NO: 1, 2, 3, 7, 8, 9, 13, 14, 15, 19, 20, 21, 25, 26, 27, 31, 32 i 33, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopne CDR, koji imaju sekvenciju aminokiselina, koja se bira iz grupe koju čine SEQ ID NO: 4, 5, 6, 10,11, 12, 16, 17, 18, 22, 23, 24, 28, 29, 30, 34, 35 i 36.
U poželjnijoj realizaciji, antitela iz ovog pronalaska sadrže tri CDR koji imaju sekvencije aminokiselina koje se biraju iz grupe koju čine SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 i 6. U još poželjnijoj realizaciji, daje se antitelo 38SB13, koje sadrži najmanje jedan teški lanac i
najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna CDR, koji imaju sekvencije aminokiselina koje čine SEQ ID NO: 1, 2 i 3, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna CDR, koji imaju sekvencije aminokiselina koje čine SEQ ID NO: 4, 5 i 6.
U sledećoj poželjnijoj realizaciji, antitela iz ovog pronalaska sadrže tri CDR, koji imaju sekvencije aminokiselina koje se biraju iz grupe SEQ ID NO: 7, 8, 9, 10, 11 i 12. U još poželjnijoj realizaciji, daje se antitelo 38SB18, koje sadrži najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna CDR, koji imaju sekvencije aminokiselina koje čine SEQ ID NO: 7, 8 i 9, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna CDR, koji imaju sekvencije aminokiselina koje čine SEQ ID NO: 10, 11 i 12.
U sledećoj poželjnijoj realizaciji, antitela iz ovog pronalaska sadrže tri CDR, koji imaju sekvencije aminokiselina koje se biraju iz grupe SEQ ID NO: 13, 14, 15, 16, 17 i 18. U još poželjnijoj realizaciji, daje se antitelo 38SB19, koje sadrži najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna CDR, koji imaju sekvencije aminokiselina koje čine SEQ ID NO: 13, 14 i 15, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna CDR, koji imaju sekvencije aminokiselina koje čine SEQ ID NO: 16, 17 i 18.
U sledećoj poželjnijoj realizaciji, antitela iz ovog pronalaska sadrže tri CDR, koji imaju sekvencije aminokiselina koje se biraju iz grupe SEQ ID NO: 19, 20, 21, 22, 23 i 24. U još poželjnijoj realizaciji, daje se antitelo 38SB30, koje sadrži najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna CDR, koji imaju sekvencije aminokiselina koje čine SEQ ID NO: 19, 20 i 21, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna CDR, koji imaju sekvencije aminokiselina koje čine SEQ ID NO: 22, 23 i 24.
U sledećoj poželjnijoj realizaciji, antitela iz ovog pronalaska sadrže tri CDR, koji imaju sekvencije aminokiselina koje se biraju iz grupe SEQ ID NO: 25, 26, 27, 28, 29 i 30. U još poželjnijoj realizaciji, daje se antitelo 38SB31, koje sadrži najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna CDR, koji imaju
sekvencije aminokiselina koje čine SEQ ID NO: 25, 26 i 27, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna CDR, koji imaju sekvencije aminokiselina koje čine SEQ ID NO: 28, 29 i 30.
U sledećoj poželjnijoj realizaciji, antitela iz ovog pronalaska sadrže tri CDR, koji imaju sekvencije aminokiselina koje se biraju iz grupe SEQ ID NO: 31, 32, 33, 34, 35 i 36. U još poželjnijoj realizaciji, daje se antitelo 38SB39, koje sadrži najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna CDR, koji imaju sekvencije aminokiselina koje čine SEQ ID NO: 31, 32 i 33, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna CDR, koji imaju sekvencije aminokiselina koje čine SEQ ID NO: 34, 35 i 36.
U sledećoj realizaciji, anti-CD38 antitela iz ovog pronalaska sadrže VL koji ima sekvenciju aminokiselina koja se bira iz grupe koju čine SEQ ID NO: VL za 38, 40, 42, 44, 46 i 48. U poželjnijoj realizaciji, daje se antitelo 38SB13 koje sadrži VL, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 38. U poželjnijoj realizaciji daje se antitelo 38SB18 koje sadrži VL, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 40. U poželjnijoj realizaciji daje se antitelo 38SB19 koje sadrži VL, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 42. U poželjnijoj realizaciji daje se antitelo 38SB30 koje sadrži VL, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 44. U poželjnijoj realizaciji daje se antitelo 38SB31 koje sadrži VL, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 46. U poželjnijoj realizaciji daje se antitelo 38SB39 koje sadrži VL, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 48.
U sledećoj realizaciji, antitela iz ovog pronalaska sadrže VH koji ima sekvenciju aminokiselina koja se bira iz grupe koju čine SEQ ID NO: 50, 52, 54, 56, 58 i 60. U poželjnijoj realizaciji, daje se antitelo 38SB13 koje sadrži VH, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 50. U poželjnijoj realizaciji, daje se antitelo 38SB18 koje sadrži VH, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 52. U poželjnijoj realizaciji, daje se antitelo 38SB19 koje sadrži VH, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 54. U poželjnijoj realizaciji, daje se antitelo 38SB30 koje sadrži VH,
koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 56. U poželjnijoj realizaciji, daje se antitelo 38SB31 koje sadrži VH, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 58. U poželjnijoj realizaciji, daje se antitelo 38SB39 koje sadrži VH, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 60.
HIMERNA I HUMANIZOVANA ANTITELA 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 I38SB39
Kako se ovde koristi, "himerno antitelo”, predstavlja antitelo u kome je konstantan region, ili njegov deo, promenjen, zamenjen ili izmenjen, tako da je varijabilni region povezan sa konstantnim regionom različite vrste, ili pripada drugoj klasi ili podklasi antitela. "Himerno antitelo” se takođe odnosi na antitelo u kome je varijabilni region, ili njegov deo, promenjen, zamenjen ili izmenjen, tako da je konstantni region povezan sa varijabilnim regionom različite vrste, ili pripada drugoj klasi ili podklasi antitela. Postupci za dobijanje himernih antitela su poznati u stanju tehnike. Videti na primer, Morrison, Science, 229,1202(1985); Oi et a\.,Biotechniques, 4,214(1986); Gillies et al.,J. Immunol Methods, 125,191-202(1989); U.S. Patent No. 5,807,715; 4,816,567; i 4,816,397, koji su svi ovde u celini priključeni kroz citat.
U jednoj realizaciji ovog pronalaska, daju se himerne verzije 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39. Posebno, pomenute himerne verzije sadrže najmanje jedan humani konstantni region. U poželjnijoj realizaciji, ovaj humani konstantni region je humani konstantni region lgG1/kapa.
Termin "humanizovano antitelo”, kako se ovde koristi, odnosi se na himerno antitelo koje sadrži minimalnu sekvenciju izvedenu iz ne-humanog imunoglobulina. Cilj humanizacije je smanjenje imunogeniciteta ksenogenog antitela, kao što je mišje antitelo, prilikom unošenja u humano biće, uz održavanje punog afiniteta vezivanja antigena i specifičnosti antitela. Humanizovana antitela, ili antitela prilagođena tako da ih ne odbacuju drugi sisari, mogu se dobiti korišćenjem nekoliko tehnologija, kao što su preoblikovanje površine i graftovanje CDR. Kako se ovde koristi, tehnologija preoblikovanja površine koristi kombinaciju modelovanja molekula, statističku analizu i
mutagenezu, da bi se izmenile ne-CDR površine varijabilnih regiona antitela, tako da podsećaju na površine poznatih antitela targetiranog domaćina. Tehnologija graftovanja CDR obuhvata supstituisanje regiona koji određju komplementarnost, na primer, mišjeg antitela u domen humanog skeleta, npr. videti WO 92/22653. Poželjno je da humanizovana himerna antitela imaju konstantne regione i varijabilne regione, koji su različiti od regiona koji određuju komplememntarnost (CDR), izvedene suštinski ili isključivo iz odgovarajućih regiona humanog antitela, dok su CDR izvedeni suštinski ili isključivo iz nekog sisara koji se razlikuje od humanog bića.
Strategije i postupci preoblikovanja površine antitela, i drugi postupci za smanjivanje imunogeniciteta antitela u različitom domaćinu, opisani su u US Patent No. 5,639,641, koji je ovde u celini priključen kroz citat. Ukratko, u poželjnom postupku, (1) generiše se poravnavanje položaja skupa varijabilnih regiona teškog i lakog lanca antitela, dajući set položaja izloženih na površini skeleta varijabilnog regiona teškog i lakog lanca, pri čemu je poravnavanje položaja svih varijabilnih regiona identično najmanje oko 98%; (2) set ostataka aminokiselina izloženih na površini skeleta varijabilnog regiona teškog i lakog lanca, definisan za antitelo glodara (ili njegov fragment); (3) identifikuje se set ostataka aminokiselina izloženih na površini skeleta varijabilnog regiona teškog i lakog lanca, koji je najbliže identičan istom setu glodarskih ostataka aminokiselina izloženih na površini; (4) set ostataka aminokiselina izloženih na površini skeleta varijabilnog regiona teškog i lakog lanca, definisan u koraku (2), se supstituiše sa setom ostataka aminokiselina izloženih na površini skeleta varijabilnog regiona teškog i lakog lanca, identifikovanim u koraku (3), izuzimajući one ostatke aminokiselina koji su unutar 0,5 nm od bilo kog atoma, u bilo kom ostatku unutar regiona koji određuju komplementarnost antitela glodara; i (5) dobije se humanizovano antitelo glodara koje poseduje specifičnost vezivanja.
Antitela se mogu humanizovati korišćenjem raznih drugih tehnika, uključujući graftovanje CDR (EP 0239400; WO 91/09967; US Patent No. 5,530,101 i 5,585,089), oblaganje ili preoblikovanje površine (EP 0592106; EP 0519596; Padlan E.A., Molecular lmmunology, 28(4/5),489-498(1991); Studnicka G.M. et al., Protein Engineering, 7(6),805-814(1994); Roguska M.A. et al„ PNAS, 91969-973(1994)), i mešanje lanca (US Patent No. 5,565,332). Humana antitela se mogu napraviti raznim postupcima koji su poznati u stanju tehnike, uključujući postupke izlaganja faga (phage display). Videti takođe, U.S. Patent No. 4,444,887, 4,716,111, 5,545,806 i 5,814,318; i međunarodne patentne publikacije pod brojevima WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735 i WO 91/10741 (sve ove pomenute publikacije u celini su ovde priključene).
Ovaj pronalazak daje humanizovana antitela ili njihove fagmente, koji prepoznaju CD38 i ubijaju ćelije CD38+ apoptozom, sa ADCC i/ili CDC. U sledećoj realizaciji, ova humanizovana antitela, ili fragmenti koji vezuju epitop, imaju sposobnost da ubijaju ćelije CD38+ po sva tri ova mehanizma. U još jednoj realizaciji, ova humanizovana antitela ili njihov fragment koji vezuje epitop, iz ovog pronalaska, u stanju su da ubijaju ćelije CD38+ apoptozom, čak i u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome.
Poželjnu realizaciju ovakvog humanizovanog antitela predstavlja humanizovano 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 ili 38SB39 antitelo ili njihov fragment koji vezuje epitop.
U poželjnijim realizacijama daju se humanizovane verzije preoblikovanih površina 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitela, gde su ostaci, izloženi na površini antitela, ili njihovi fragmenti, zamenjeni i u lakom i u teškom lancu sa onima koji bliže potsećaju na površine poznatog humanog antitela. Humanizovana 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitela ili njihovi fragmenti koji vezuju epitop, iz ovog pronalaska, imaju poboljšana svojstva. Na primer, humanizovana 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitela ili njihovi fragmenti koji vezuju epitop, specifično prepoznaju protein CD38. Poželjnije, humanizovana 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitela ili njihovi fragmenti koji vezuju epitop, imaju i dodatnu sposobnost da ubijaju ćelije CD38+ apoptozom, sa ADCC i/ili CDC.
Humanizovane verzije 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitela su takođe potpuno okarakterisane u pogledu njihovih respektivnih sekvencija aminokiselina varijabilnih regiona i lakog i teškog lanca, sekvencije DNK gena varijabilnih regiona i lakog i teškog lanca, identifikacije CDR, identifikacije njihovih aminokiselina na površini, i opisa načina njihove ekspresije u rekombinantnom obliku. Međutim, obim ovog pronalaska se ne ograničava na antitela i njihove fragemnte koji sadrže ove sekvencije. Pored toga, sva antitela i fragmenti koji se specifično vezuju za CD38, u stanju su da ubiju ćelije CD38+ apoptozom, sa ADCC i/ili CDC, što spada u obim ovog pronalaska. Poželjno je da su ova antitela u stanju da ubijaju ćelije CD38+ po sva tri ova mehanzma. Tako, antitela i fragmenti antitela koji vezuju epitop, iz ovog pronalaska, mogu biti različiti od 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitela ili njihovih humanizovanih derivata, u pogledu sekvencija aminokiselina u njihovom skeletu, po CDR i/ili lakom i teškom lancu, a da još uvek spadaju unutar obima ovog pronalaska.
CDR antitela 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 se identifikuje modelovanjem, a njihove molekulske strukture su predviđene. Ponovo, iako su CDR značajni za prepoznavanje epitopa, oni nisu bitni za antitela i njihove fragmente iz ovog pronalaska. Prema tome, daju se antitela i fragmenti koji imaju poboljšana svojstva, dobijena, na primer, sazrevanjem afiniteta antitela iz ovog pronalaska.
Sekvencije teškog lanca i lakog lanca varijabilnih regiona 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitela, i sekvencije njihovih CDR, nisu ranije bile poznate, a date su u ovoj prijavi. Ova informacija se može upotrebiti za dobijanje humanizovanih verzija 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitela. Ova humanizovana anti-CD38 antitela ili njihovi derivati, mogu se takođe koristiti kao agens za vezivanje ćelija, iz ovog pronalaska.
Dakle, u jednoj realizaciji, ovaj pronalazak daje humanizovana antitela ili njihove fragmente koji vezuju epitop, koji sadrže jedan ili više CDR koji imaju sekvenciju aminokiselina iz grupe koju čine SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 45 i 36. U poželjnoj realizaciji, humanizovana antitela iz ovog pronalaska sadrže najmanje jedan teški lanac i njamanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopne CDR sekvencije aminokiselina koje se biraju iz grupe koju čine SEQ ID NO: 1, 2, 3, 7, 8, 9, 13, 14, 15, 19,20,21, 25, 26, 27, 31, 32 i 33, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopne CDR sekvencije aminokiselina koje se biraju iz grupe koju čine SEQ ID NO: 4, 5, 6, 10,11,12,16,17,18, 22, 23, 24, 28, 29, 30, 34,35 i 36. U sledećoj poželjnoj realizaciji, daje se humanizovana verzija 38SB13, koja sadrži najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, pri čemu pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, a imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 1, 2 i 3, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona za određivanje komlementarnosti koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 4, 5 i 6. U sledećoj poželjnoj realizaciji, daje se humanizovana verzija 38SB18, koja sadrži najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, pri čemu pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, a imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 7, 8 i 9, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona za određivanje komlementarnosti koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 10, 11 i 12. U sledećoj poželjnoj realizaciji, daje se humanizovana verzija 38SB19, koja sadrži najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, pri čemu pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, a imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 13, 14 i 15, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona za određivanje komlementarnosti koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 16, 17 i 18. U sledećoj poželjnoj realizaciji, daje se humanizovana verzija 38SB30, koja sadrži najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, pri čemu pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, a imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 19, 20 i 21, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona za određivanje komlementarnosti koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 22, 23 i 24. U sledećoj poželjnoj realizaciji, daje se humanizovana verzija 38SB31, koja sadrži najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, pri čemu pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, a imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 25, 26 i 27, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona za određivanje komlementarnosti koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 28, 29 i 30. U sledećoj poželjnoj realizaciji, daje se humanizovana verzija 38SB39, koja sadrži najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, pri čemu pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, a imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 31, 32 i 33, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona za određivanje komlementarnosti koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 34, 35 i 36.
U jednoj realizaciji ovaj pronalazak daje humanizovana antitela ili njihove fragmente, koji sadrže VH sa sekvencijom aminokiselina koja se bira iz grupe SEQ ID NO: 66 i 72. U poželjnoj realizaciji, daje se humanizovano antitelo 38SB19 koje sadrži Vh sa sekvencijom aminokiselina predstavljenom sa SEQ ID NO: 66. U sledećoj poželjnoj realizaciji, daje se humanizovano 38SB31 antitelo, koje sadrži VH sa sekvencijom aminokiselina predstavljenom sa SEQ ID NO: 72.
U drugoj realizaciji ovaj pronalazak daje humanizovana antitela ili njihove fragmente, koji sadrže VL sa sekvencijom aminokiselina koja se bira iz grupe SEQ ID NO: 62, 64, 68 i 70. U poželjnoj realizaciji, daje se humanizovano antitelo 38SB19 koje sadrži V|_sa sekvencijom aminokiselina predstavljenom sa SEQ ID NO: 62 i 64. U sledećoj poželjnoj realizaciji, daje se humanizovano 38SB31 antitelo, koje sadrži VL sa sekvencijom aminokiselina predstavljenom sa SEQ ID NO: 68 i 70.
Humanzovana antitela 38SB19 i njihovi fragmenti koji vezuju epitope, iz ovog pronalaska, mogu takođe da sadrže supstitucije u ostacima aminokiselina lakog i/ili teškog lanca, u jednom ili više položaja, definisanih sivim odeljcima u Tabeli 1A i 1B, koji predstavljaju ostatke površine mišjeg skeleta, koji su izmenjeni u odnosu na originalne mišje ostake u odgovarajućem skeletu ostataka na površini u humanom antitelu, 28E4. Ostaci označeni zvezdicom (*) u Tabeli 1B, odgovaraju mišjim povratnim mutacijama u varijanti teškog lanca humanizovanog 38SB19 (SEQ ID NO: 65). Ostaci za povratne mutacije su bliski CDR, i odabiru se kao što je opisano u U.S. Patent No. 5,639,641, ili po analogiji sa selekcijom ostataka koji su postojali u ranijim naporima humanizacije, a koji su doveli do smanjenja afiniteta vezivanja antigena (Roguska et al., publikacija iz 1996, US Patent Application 2003/0235582 i 2005/0118183).
Slično, humanizovana 38SB13, 38SB18, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitela i njihovi fragmenti koji vezuju epitop, iz ovog pronalaska, mogu takođe da obuhvate supstitucije ostataka aminokiselina u lakom i/ili teškom lancu.
POLINUKLEOTIDI, VEKTORI I ĆELIJE DOMAĆINA
Daju se nukleinske kiseline koje kodiraju anti-CD38 antitela iz ovog pronalaska. U jednoj realizaciji molekul nukleinske kiseline kodira teški i/ili laki lanac anti-CD38 imunoglobulina. U poželjnoj realizaciji jedna nukleinska kiselina kodira teški lanac anti-CD38 imunoglobulina, a drugi molekul nukleinske kiseline kodira laki lanac anti-CD38 imunoglobulina.
U sledećem aspektu ovog pronalaska, daju se polinukleotidi koji kodiraju polipeptide sa sekvencijom aminokiselina koja se bira iz grupe SEQ ID NO: 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12,13,14,15,16,17,18,19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70 i 72. U poželjnoj realizaciji, polinukleotid iz ovog pronalaska se bira iz grupe koju čine SEQ ID NO: 37, 39, 41, 42, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69 i 71. Ovaj pronalazak nije ograničen pomenutim samim polinukleotidima, već takođe obuhvata sve polinukleotide koji pokazuju najmanje 80% identičnosti sa pomenutim polinukleotidima.
Ovaj pronalazak daje vektore koji sadrže polinukleotide iz ovog pronalaska. U jednoj realizaciji, vektor sadrži polinukleotid koji kodira teški lanac anti-CD38 imunoglobulina. U drugoj realizaciji, pomenuti nukleotid kodira laki lanac anti-CD38 imunoglobulina. Ovaj pronalazak daje takođe vektore koji sadrže molekule polinukleotida koji kodiraju fuziju proteina, modifikovana antitela, fragmente antitela i njihove proteine.
Da bi ekspresovali teški i/ili laki lanac anti-CD38 antitela iz ovog pronalaska, ubacuju se polinukleotidi, koji kodiraju teške i/ili lake lance, u vektore ekspresije, tako da su geni operativno povezani sa transkripcionim i translacionim sekvencijama. Vektori ekspresije su plazmidi, YAC, kosmidi, retrovirus, epizomi izvedeni iz EBV, i drugi vektori koje poznaje verzirana osoba, kao pogodne za obezbeđivanje ekspresije pomenutih teških i/ili lakih lanaca. Verzirana osoba shvata da se polinukleotid, koji kodira teške i/ili lake lance, može klonirati u različite vektore, ili u isti vektor. U poželjnoj realizaciji, pomenuti polinukleotidi se kloniraju u isti vektor.
Polinukleotidi iz ovog pronalaska i vektori koji sadrže te molekule, mogu se koristiti za transformaciju pogodne ćelije sisara, domaćina. Transformacija se može obaviti bilo kojim poznatim postupkom uvođenja polinukleotida u ćeliju domaćina. Ti postupci su dobro poznati osobi verziranoj u stanje tehnike, i obuhvataju transformaciju posredovanu dekstranom, taloženje kalcijum-fosfata, transficiranje posredovano polibrenom, fuziju protoplasta, elektroporaciju, enkapsuliranje polinukleotida u lipozome, biolističku injekciju i direktnu mikroinjekciju DNK u jezgro.
FRAGMENTI ANTITELA
Antitela iz ovog pronalaska obuhvataju antitela čitave dužine, diskutovana gore, kao i njihove fragemente koji vezuju epitope. Kako se ovde koristi, "fragmenti antitela” predstavljaju bilo koji deo antitela koji zadržava sposobnost vezivanja za epitop, koga prepoznaje antitelo čitave dužine, i obično se nazivaju "fragmenti koji vezuju epitop”. Primeri fragmenata antitela su, ali bez ograničavanja, Fab, Fab’ i F(ab’)2, Fd, Fvs samo jednog lanca (scFV), antitela jednog lanca, Fvs povezani preko disulfida (dsFv) i fragmenti koji sadrže ili VL ili VH region. Fragmenti koji vezuju epitop, uključujući antitela jednog lanca, mogu sadržati varijabilni region (ili regione), sami ili u kombinaciji sa celim ili delimičnim: regionom preklopa, CH1, CH2 i CH3 domenima.
Ovi fragmenti mogu sadržati jedan ili oba fragmenta Fab ili fragment F(ab’)2. Poželjno je da fragmenti antitela sadrže svih šest CDR čitavog antitela, mada su funkcionalni i fragmenti koji sadrže manje od svih tih regiona, kao što je tri, četiri ili pet CDR. Dalje,
fragmenti mogu biti ili mogu kombinovati članove iz bilo koje od sledećih klasa imunoglobulina: IgG, IgM, IgA, IgD ili IgE, i njihovih podklasa.
Fragmenti Fab i F(ab’)2 se mogu dobiti proteolitičkim cepanjem, koristeći enzime, kao što je papain (Fab fragmenti) ili pepsin (F(ab’)2 fragmenti).
"Fragmenti Fvs samo jednog lanca" ("scFvs”) su fragmenti koji vezuju epitop koji sadrži najmanje jedan fragment teškog lanca varijabinog regiona (Vh) antitela povezan sa najmanje jednim fragmentom lakog lanca varijabilnog regiona (VL) antitela. Linker može biti kratak, fleksibilni peptid, koji se bira tako da obezbedi ispravno trodimenziono nabiranje VL i Vh regiona, koje se dešava kada se oni povežu, tako da zadržavaju specifičnost vezivanja za targetirani molekul čitavog antitela, od koga je izveden fragment antitela jednog lanca. Karboksilni terminal sekvencije VL ili VH može biti kovalentno povezan preko linkera sa terminalom aminokiseline sekvencija komplementarnosti VL ili VH sekvencije.
Fragmenti antitela jednog lanca iz ovog pronalaska sadrže sekvencije aminokiselina koje imaju najmanje jedan od varijabilnih regiona ili regiona koji određuju komplementarnost (CDR) iz čitavog antitela opisanog u ovoj prijavi, ali im nedostaju delovi ili konstantni domeni ovih antitela. Ovi konstantni domeni nisu neophodni za vezivanje antigena, ali predstavljaju glavni deo strukture čitavog antitela. Fragmenti antitela jednog lanca mogu stoga da savladaju neke od problema povezanih sa upotrebom antitela koje sadrži deo ili ceo konstantni domen. Na primer, fragmenti antitela jednog lanca teže da budu bez neželjenih interakcija između bioloških molekula i teškog lanca konstantnog regiona, ili bez neželjene biološke aktivnosti. Pored toga, fragmenti antitela jednog lanca su znatno manji od čitavog antitela, pa stoga mogu imati veću kapilarnu permeabilnost nego čitava antitela, što dozvoljava fragmentima antitela jednog lanca da se efikasnije lokalizuju i vezuju za targetirana mesta vezivanja za antigen. Takođe, fragmenti antitela se mogu dobijati na relativno velikoj skali u prokariotskim ćelijama, što olakšava njihovu proizvodnju.
Pored toga, relativno mala veličina fragmenata antitela jednog lanca ih čini manje verovatnim za izazivanje imuno odgovora kod primaoca, nego što je to slučaj sa čitavim antitelima.
Fragmenti antitela jednog lanca se mogu generisati molekulskim kloniranjem, pomoću biblioteke antitela izlaganja faga, ili sličnim tehnikama, koje su dobro poznate verziranom stručnjaku. Ovi proteini se mogu dobiti, na primer, u eukariotskim ćelijama, ili u prokariotskim ćelijama, uključujući bakterije. Fragmenti za vezivanje epitopa iz ovog pronalaska se takođe mogu generisati korišćenjem raznih postupaka izlaganja faga, poznatih u stanju tehnike. Kod postupaka izlaganja faga, izlažu se funkcionalni domeni antitela na površini čestica faga, koji nose sekvencije nukleotida koje ih kodiraju. Naročito se ove fage mogu koristiti za izlaganje domena za vezivanje epitopa ekspresovanih iz repertoara ili biblioteke kombinatornog antitela (npr. humanog ili mišjeg). Faga koja ekspresuje domen za vezivanje epitopa koji se vezuje za posmatrani antigen, može se odabrati ili identifikovati sa antigenom, npr. koristeći vezani ili zahvaćeni obeleženi antigen na čvrstoj površini ili na perlici. Fage, koje se koriste u ovim postupcima, tipično su vlaknaste fage, uključujući fd i M13 domene vezivanja koji se ekspresuju iz fage sa Fab, Fv ili disulfidno stabilizovanih domena FV antitela, rekombinantno fuzionisanih ili sa genom III fage ili sa proteinom gena VIII.
Primeri postupaka izlaganja fage, koji se mogu koristiti za pravljenje fragmenata koji vezuju epitop iz ovog pronalaska, su oni koji su opisani u Brinkman et al., J.Immunol. Methods, 182,41-50(1995); J. Immunol. Methods, 184,177-186(1995); Kettleborough et al., Eur. J. Immunol., 24,952-958(1994); Persic et al., Gene, 187,9-18(1997); Burton et al., Advances in lmmunology, 57,191-280(1994); WO 1992/001047; WO 90/02809; WO 91/10737; WO 92/01047; WO 92/18619; WO 93/11236; WO 95/15982; WO 95/20401; i U.S. Patent No. 5,698,426; 5,223,409; 5,403,484; 5,580,717; 5,427,908; 5,750,753; 5,821,047; 5,571,698; 5,427,908; 5,516,637; 5,780,225; 5,658,727; 5,733,743 i 5,969,108; od kojih je svaki, u celini priključen ovde kroz citat.
Posle selekcije fage, mogu se izolovati regioni fage koji kodiraju fragmente i koristiti za generisanje fragmenata koji vezuju epitop, preko ekspresije u odabranom domaćinu, uključujući ćelije sisara, ćelije insekata, ćelije biljaka, kvasac i bakterije, upotrebom tehnologije rekombinantne DNK, npr. kao što je detaljno opisano u nastavku. Na primer, mogu se primeniti tehnike rekombinantnog dobijanja fragmenata Fab, Fab’ i F(ab’)2, koričenjem postupaka poznatih u stanju tehnike, kao što su oni koji su opisani u WO 92/22324; Mullinax et al., BioTechniques, 12(6),864-869(1992); Sawai et al., AJRI, 34,26-34(1995); i Better et al.,Science, 240.1041-1043(1988); a pomenute reference su u celini ugrađene kroz citat. Primeri tehnika koje se mogu koristiti za dobijanje Fvs jednog lanca i antitela su oni, koji su opisani u U.S. Patent No. 4,946,778 i 5,258,498; Huston et al., Methods in Enzymology, 203,46-88(1991); Shu et al,,PNAS, 90,7995-7999(1993); Skerra et al., Science, 240,1038-1040(1988).
FUNKCIONALNI EKVIVALENTI
Unutar obima ovog pronalaska su takođe i funkcionalni ekvivalenti anti-CD38 antitela i receptora humanozovanog anti-CD38 antitela. Termin "funkcionalni ekvivalenti” obuhvata na primer, antitela sa homolognim sekvencijama, himerna antitela, veštačka antitela i modifikovana antitela, gde je svaki funkcionalni ekvivalent definisan njegovom sposobnošću da se vezuje za protein CD38. Verzirani stručnjak zna da postoji preklapanje u grupi molekula nazvanih "fragmenti antitela” i grupi nazvanoj "funkcionalni ekvivalenti”. Postupci za dobijanje funkcionalnih ekvivalenata su poznati osobi verziranoj u stanje tehnike, a opisani su na primer, u WO 93/21319, EP 239,400; WO 89/09622; EP 338,745 i EP 332,424, koji su, respektivno, u celini ovde ugrađeni kroz citat.
Antitela sa homolognim sekvencijama su ona antitela sa sekvencijama aminokiselina koje poseduju homologiju sekvencije sa sekvencijom aminokiselina anti-CD38 antitela i humanizovanog anti-CD38 antitela iz ovog pronalaska. Poželjno je da homologija postoji sa sekvencijom aminokiselina varijabilnih regiona anti-CD38 antitela i humanizovanog anti-CD38 antitela iz ovog pronalaska. "Homologija sekvencije”, kako se ovde primenjuje na sekvenciju aminokiselina, definiše se kao sekvencija sa najmanje oko 90%, 92%, 93% ili 94% homologije sekvencije, poželjnije najmanje oko 95%, 97% , 98% ili 99% homologije sekvencije sa drugom sekvencijom aminokiselina, što se određuje na primer postupkom pretraživanja FASTA, u skladu sa onim što su dali Pearson i Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85,2444-2448(1988).
Veštačka antitela su fragmenti scFv, dijatela, trijatela, tetratela i mru (videti pregledne članke VVinter, G. i Milstein, C., Nature, 349,293-299(1991); i Hudson, P.J., Current Opinion in lmmunology, 11,548-557(1999)), od kojih svako ima sposobnost vezivanja za antigen. U Fv fragmentu jednog lanca (scFv), domeni VH i VL antitela su povezani fleksibilnim peptidom. Tipično, ovaj linkerski peptid je dugačak oko 15 ostataka aminokiselina. Ukoliko je ovaj linker mnogo manji, na primer ima 5 aminokiselina, formiraju se dijatela, koja su dvovalentni dimeri scFv. Ukoliko je ovaj linker smanjen, na manje od tri ostatka aminokiselina, formiraju se trimerne i tetramerne strukture, koje se nazivaju trijatela i tetratela. Najmanja vezujuća jedinica antitela je CDR, tipično CDR2 teškog lanca, koja poseduje dovoljno specifičnog prepoznavanja i vezivanja da se može koristiti izdvojeno. Ovakav fragment se naziva mru ili jedinica molekulskog prepoznavanja (od engl. molecular recognition unit). Nekoliko ovakvih mru se može povezati sa kratkim linkerskim peptidima, formirajući tako veštački vezujući protein, sa većom jačinom vezivanja za antitelo nego pojedinačni mru.
Funkcionalni ekvivalenti iz ove prijave obuhvaaju takođe modifikovana antitela, tj. antitela modifikovana kovalentnim pripajanjem antitelu bilo koje vrste molekula. Na primer, modifikovana antitela su antitela koja su modifikovana npr. glikozilovanjem, acetilovanjem, pegilovanjem, fosforilovanjem, amidovanjem, derivatizacijom sa poznatim grupama za zaštitu/blokiranje, proteolitičkim cepanjem, povezivanjem sa ćelijskim ligandom ili drugim proteinom, itd. Kovalentno pripajanje ne sprečava antitelo od generisanja anti-idiotipskog odgovora. Ove modifikacije se mogu obaviti poznatim tehnikama, uključujući, ali bez ograničavanja, specifično hemijsko cepanje, acetilovanje, formilovanje, metaboličku sintezu tunikamicina, itd. Pored toga, modifikovana antitela mogu da sadrže jednu ili više ne-klasičnih aminokiselina.
Funkcionalni ekvivalenti se mogu dobiti uzajamnom razmenom različitih CDR na različitim lancima unutar različitih skeleta. Tako na primer, moguće su razne klase antitela za dati set CDR, preko supstitucije različitih teških lanaca, pri čemu se mogu dobiti, na primer lgG1-4, IgM, lgA1 -2, IgD, IgE tipovi i izotipovi antitela. Slično, mogu se dobiti veštačka antitela unutar obima ovog pronalaska, usađivanjem datog seta CDR unutar nekog potpuno sintetičkog skeleta.
Funkcionalni ekvivalenti se mogu lako dobiti mutacijom, izbacivanjem i/ili umetanjem u sekvenciju varijabilnog i/ili konstantnog regiona, koje okružuje poseban set CDR, koristeći se brojnim postupcima poznatim u stanju tehnike. Fragmenti antitela i funkcionalni ekvivalentni iz ovog pronalaska obuhvataju one molekule sa detektibilnim stepenom vezivanja za CD38, ako se porede sa 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitelom. Detektibilni stepen vezivanja obuhvata sve vrednosti unutar opsega od najmanje 10-100%, poželjno najmanje 50%, 60% ili 70%, poželjnije najmanje 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 99% sposobnsti vezivanja mišjeg 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitela za CD38.
POBOLJŠANA ANTITELA
CDR su od primarnog značaja za prepoznavanje epitopa i vezivanje antitela. Međutim, mogu se načiniti izmene na ostacima koji sadrže CDR, bez interferiranja sa spospbnošću antitela da prepozna i veže njegov srodni epitop. Na primer, mogu se načiniti promene koje ne utiču na prepoznavanje epitopa, a ipak povećavaju afinitet vezivanja antitela za epitop.
Tako su u obim ovog pronalaska uključene takođe poboljšane verzije i mišjih i humanizovanih antitela, koje takođe specifično prepoznaju i vezuju se za CD38, poželjno sa većim afinitetom.
Nekoliko ispitivanja daje pregled efekata uvođenja jedne ili više aminokiselina zamenjenih u raznim položajima u sekvenciji antitela, na osnovu poznavanja primarne sekvencije antitela, njegovih svojstava, kao što je vezivanje i nivo ekspresije (Yang,
W.P. et al., J. Mol. Biol., 254,392-403(1995); Rader, C. et al.,Proc. Natl. Acad. Sci USA, 95,8910-8915(1998); Vaughan, T.J. et al., Nature Biotechnology, 16,535-539(1998)).
U ovim ispitivanjima, generišu se ekvivalenti primarnog antitela menjanjem sekvencija teškog i lakog lanca gena u CDR1, CDR2, CDR3 ili skeletnim regionima, koristeći postupke, kao što su poziciono usmerena mutageneza posredovana oligonukleotidom, kasetna mutageneza, grešci sklona PCR, mešanje DNK, ili mutacioni sojevi E. coli (Vaughan, T.J. et al.,Nature Biotechnology, 16,535-539(1998); Adey, N.B. et al., ”Phage Display of Peptides and Proteins”, uredn. Kay, B.H. et al., 16. glava, str. 277-291, Academic Press, 1996). Ovi postupci izmene sekvencije primarnog antitela za rezultat daju poboljšane afinitete sekundarnim antitelima (Gram, H. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89,3576-3580(1992); Boder, E.T. et al„ Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97,10701-10705(2000); Davies, J. i Reichmann, L, lmmunotechnology, 2,169-179(1996); Thompson, J. et al., J. Mol. Biol., 256,77-88(1996); Short, M.K. et al., J. Biol. Chem., 277,16365-16370(2002); Furukavva J. et al., J. Biol. Chem., 276,27622-27628(2001)).
Slično usmerenom strategijom izmene jednog ili više ostatataka aminokiselina antitela, sekvencije antitela opisane u ovom pronalasku, se mogu koristiti za razvijanje anti-CD38 antitela poboljšanih funkcija, uključujući poboljšan afinitet prema CD38.
Poželjne supstitucije amino kiseline su one koje: (1) smanjuju osetljivost prema proteolizi, (2) smanjuju osetljivost prema oksidaciji, (3) menjaju afinitet vezivanja za formiranje kompleksa proteina, i (4) utiču ili modifikuju druga fizičko-hemijska ili funkcionalna svojstva tih analoga. Analozi mogu biti razni muteini ili sekvencije drugačije od sekvencije peptida koji se nalazi u prirodi. Na primer, pojedinačne ili višestruke supstitucije aminokiselina (poželjno, konzervativne supstitucije aminokiselina) mogu se načiniti u sekvenciji koja se nalazi u prirodi (poželjno na delu polipeptida izvan jednog ili više domena koji formiraju međumolekulske kontakte. Konzervativna supstitucija aminokiseline ne treba suštinski da menja strukturne karakteristike polazne sekvencije (npr. zamena aminokiselina ne treba da teži raskidanju spirale u polaznoj sekvenciji, ili raskidanja drugih vrsta sekundarne strukture,
koja karakteriše polaznu sekvenciju). Primeri, poznatih sekundarnih i tercijarnih struktura polipeptida u stanju tehnike su opisani u "Proteins, Structures and Molecular Principles” (Creighton, uredn. VV.H.Freeman i dr., New York (1984)); "Introduction to Protein Structure”, (uredn. C.Branden i J.Tooze, Garland Publiiishing, New York, N.Y. (1991)); i Thomton et al., Nature, 354,105(1991), svi ovde u celini priključeni kroz citat.
Poboljšana antitela su takođe ona antitela koja imaju poboljšane karakteristike, a dobijena su standardnim tehnikama imunizacije životinja, formiranjem hibridoma i selekcijom antitela sa specifičnim karkateristikama.
Poboljšana antitela u skladu sa ovim pronalaskom su posebna antitela sa poboljšanim funkcionalnim svojstvima. Od posebnog interesa su ona antitela sa poboljšanom sposobnošću posredovanja u ćelijskim citotoksičnim efektorskim funkcijama, kao što je ADCC. Takva antitela se mogu dobiti pravljenjem jedne ili više supstitucija u konstantnom skeletu antitela, menjajući tako njegovu interakciju sa receptorima Fc. Postupci dizajniranja ovakvih mutanata se mogu naći, na primer, u Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103(11),4005-4010(2006) i u Okazaki et al., J. Mol. Biol., 336(5), 1239-49(2004)). Videti takođe, WO 03/074679, WO 2004/029207, WO 2004/099249, WO 2006/047350, WO 2006/019447, WO 2006/105338, WO 2007/041635. Moguće je takođe koristiti sojeve ćelije, specifičnim inženjeringom podešenih za proizvodnju poboljšanih antitela. Naročito, ovi sojevi menjaju regulaciju puta glikozilovanja, što daje antitela koja su slabo fukozilovana, ili čak potpuno defukozilovana. Ovakvi sojevi ćelija i postupci njihovog inženjeringa su opisani, npr. u Shinkavva et al., J. Biol. Chem. 278(5),3466-3473(2006); Ferrara et al., J. Biol. Chem., 281(8),5032-5036(2006); Biotechnol. Bioeng., 93(5),851-61 (2006), EP 1331266, EP 1498490, EP 1498491, EP1676910, EP 1792987 i WO 99/54342.
Ovaj pronalazak obuhvata takođe i citotoksične konjugate. Ovi citotoksični konjugati sadrže dve primarne komponente, agens za vezivanje za ćeliju i citotoksični agens.
Kako se ovde koristi, termin "agens za vezivanje za ćeliju” se odnosi na agens koji specifično prepoznaje i vezuje se za CD38 protein na površini ćelije. U jednoj realizaciji ovaj agens za vezivanje za ćeliju specifično prepoznaje CD38, tako što omogućava konjugatima da deluju ciljano sa malim sporednim efektima, koji potiču od nespecifičnog vezivanja.
U drugoj realizaciji, agens za vezivanje za ćeliju iz ovog pronalaska takođe specifično prepoznaje protein CD38, tako da su konjugati u kontaktu sa targetiranom ćelijom dovoljno dugo vremena da se omogući citotoksičnom leku dela konjugata da deluje na ćeliju, i/ili omogući konjugatima dovoljno vremena tokom koga ih usvoji ćelija.
U poželjnoj realizaciji, citotoksični konjugati sadrže anti-CD38 antitelo kao agens za vezivanje za ćeliju, poželjnije mišje 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 ili 38SB39 monoklonalno antitelo. U sledećoj poželjnoj realizaciji, agens za vezivanje za ćeliju je himerna verzija pomenutog anti-CD38 antitela. U poželjnijoj realizaciji, citotoksični konjugat sadrži humanizovano 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop. Ovo 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitelo je u stanju da specifično prepozna CD38, i ciljano se usmeri na citotoksični agens u abnormalnoj ćeliji ili tkivu, kao što su ćelije kancera.
Druga komponenta citotoksičnih konjugata iz ovog pronalaska je citotoksični agens. Termin "citotoksični agens”, kako se ovde koristi, odnosi se na supstancu koja smanjuje ili blokira funkciju ili rast ćelija i/ili izaziva destrukciju ćelije.
U poželjnim realizacijama, ovaj citotoksični agens je mali lek, prolek, taksoid, majtansinoid, kao što su DM1 ili DM4, derivat tomamicina, derivata leptomicina, CC-1065 ili analog CC-1065. U poželjnoj realizaciji, agens za vezivanje za ćeliju iz ovog pronalaska je kovalentno spojen, direktno ili preko otcepivog ili ne-otcepivog linkera, za citotoksični agens.
Agens za vezivanje za ćeliju, citotoksični agens i linkeri se detaljnije diskutuju u nastavku.
AGENSI ZA VEZIVANJE ZA ĆELIJU
Efikasnost jedinjenja iz ovog pronalaska, kao terapeutskih agenasa, zavisi od pažljive selekcije odgovarajućeg agensa za vezivanje za ćeliju. Agens za vezivanje za ćeliju može biti bilo koja od do sada poznatih vrsta, ili koje će postati poznate, a obuhvata peptide i ne-peptide. Agens za vezivanje za ćeliju može biti bilo koje jedinjenje koje se može vezati za ćeliju, bilo na specifičan ili ne-specifičan način. Obično, to mogu biti antitela (naročito monoklonalna antitela), limfokini, hormoni, faktori rasta, vitamini, molekuli za transport hranljivih sastojaka (kao stoje transferin), ili bilo koji drugi molekul ili supstanca koji se vezuju za ćeliju.
Specifičniji primeri agenasa za vezivanje za ćeliju, koji se mogu koristiti su:
a) poliklonalna antitela;
b) monoklonalna antitela;
c) fragmenti antitela, kao što su Fab, Fab’ i F(ab’)2, Fv (Parham, J.lmmunol., 131.2895-2902(1983); Spring et al.,J. Immunol., 113,470-478(1974); Nisonoff et al., Arch. Biochem. Biophys., 89,230-244(1960));
Posebno, kao agens za vezivanje za ćeliju može se koristiti anti-CD38, monoklonalno antitelo koje se bira između 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39, u skladu sa ovim pronalaskom. Slično, pomenuti agens za vezivanje za ćeliju može biti himerna verzija jednog od 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 mnoklonalnih antitela. Poželjno je da se kao agens za vezivanje za ćeliju koristi humanizovano anti-CD38 antitelo iz ovog pronalaska. Poželjnije je da se humanizovano anti-CD38 antitelo bira između humanizovanih ili 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitela preoblikovane površine.
CITOTOKSIČNI AGENSI
U sledećoj realizaciji, humanizovano antitelo ili njegov fragment koji vezuje epitop, mogu biti konjugovani sa lekom, kao što je majtansinoid, formirajući prolek, koji ima specifičnu citotoksičnost prema ćelijama koje ekspresuju antigen, tako što taj lek targetira CD38 protein. Citotoksični konjugati koji sadrže ovakva antitela i mali, visoko toksični lek (npr. majtansionidi, taksani, derivati tomamicina, derivati leptomicina i analozi CC-1065) mogu se koristiti u terapeutskom tretmanu tumora, kao što je limfom, leukemija i multipli mijelom.
Citotoksični agens, koji se koristi u citotoksičnom konjugatu iz ovog pronalaska, može biti bilo koje od jedinjenja koje dovodi do smrti ćelije, ili izaziva smrt ćelija, ili na neki način smanjuje život ćelije. Poželjni citotoksični agensi su, na primer, majtansinoidi i analozi majtansinoida, taksoidi, derivati tomamicina, derivati leptomicina, CC-1065 i analozi CC-1065, dolastatin i analozi dolastatina, definisani niže. Ovi citotoksični agensi su konjugovani na antitela, fragmente antitela, funkcionalne ekvivalente, poboljšana antitela i njihove analoge, kako su ovde opisani.
Citotoksični konjugati se mogu dobiti postupcima in vitro. Da bi se vezao lek ili prolek za antitelo, koristi se grupa za povezivanje. Pogodne grupe za povezivanje su dobro poznate u stanju tehnike, a obuhvataju disulfidne grupe, tioetarske grupe, labilne kisele grupe, fotolabilne grupe, grupe labilne prema peptidazi i grupe labilne prema esterazi. Poželjne grupe za povezivanje su disulfidne grupe i tioetarske grupe. Na primer, konjugati se mogu konstruisati korišćenjem disulfidne reakcije izmene, ili formiranjem tioetarske veze između antitela i leka ili proleka.
MAJTANSINOIDI
Među citotoksičnim agensima koji se mogu koristiti u ovom pronalasku za formiranje citotoksičnog konjugata, su majtansinoidi i analozi majtansinoida. Primeri pogodnih majtansinoida su majtansinol i analozi majtansinola. Majtansinoidi su lekovi koji inhibiraju stvaranje mikrotubula i veoma su toksični u ćelijama sisara.
Primeri pogodnih analoga majtansinola su oni koji imaju modifikovan aromatični prsten i oni koji imaju modifikacije u drugim položajima. Ovi pogodni majtansinoidi su opisani u U.S. Patent No. 4,424,219; 4,256,746; 4,294,757; 4,307,016; 4,313,946; 4,315,929; 4,331,598; 4,361,650; 4,362,663; 4,364,866; 4,450,254; 4,322,348; 4,371,533; 6,333,410; 5,475,092; 5,585,499 i 5,846,545.
Specifični primeri pogodnih analoga majtansinola sa modifikovanim aromatičnim prstenom su:
(1) C-19-dehloro (US. Patent No. 4,256,746) (dobijen redukcijom sa LAH ansamytocin-a P2);
(2) C-20-hidroksi (ili C-20-demetil) ± C-19-dehloro (U.S. Patent No. 4,361,650 i 4,307,016) (dobijen demetilovanjem, korišćenjem Streptomyces ili Actinomyces, ili dehlorovanjem, koršćenjem LAH); i
(3) C-20-demetoksi, C-20-aciloksi (-OCOR, ± dehloro (U.S. Patent No., 4,294,757) (dobijen acilovanjem, upotrebom acil hlorida).
Specifični primeri pogodnih analoga majtansinola, koji ima modifikacije u drugim položajima, su:
(1) C-9-SH (U.S. Patent No. 4,424,219) (dobijen reakcijom majtansinola sa H2S ili
P2S5);
(2) C-14-alkoksimetil (demetoksi/CH2OR) (U.S. Patent No. 4,331,598);
(3) C-14-hidroksimetil ili alciloksimetil (CH2OH ili CH2Oac) (U.S. Patent No. 4,450,254) (dobijen u Nocardia);
(4) C-15-hidroksi/aciloksi (US. Patent No. 4,364,866) (dobijen konverzijom majtansinola pomoću Streptomyces);
(5) C-15-metoksi (U.S. Patent No. 4,313,946 i 4,315,929) (izolovan iz Trevvia nudiflora)
(6) C-18-N-demetil (U.S. Patent No. 4,362,663 i 4,322,348) (dobijen demetilovanjem majtansinola pomoću Streptomyces); i
(7) 4,5-deoksi (U.S. Patent No. 4.371,533) (dobijen redukcijom majtansinola sa titanijum-trihlorid/LAH).
U poželjnoj realizaciji citotoksični konjugati iz ovog pronalaska koriste kao citotoksični agens majtansinoid koji sadrži tiol (DM1), formalno nazvan N2’-deacetil-N2’-(3-merkapto-1-oksopropil)-majtansin. DM1 je predstavljen sledećom strukturnom formulom
(I):
U sledećoj poželjnoj realizaciji, citotoksični konjugati iz ovog pronalaska koriste kao toksični agens majtnsinoid koji sadrži tiol, N2’-deacetil-N-2’-(4-metil-4-merkapto-1-oksopentil)-majtansin. DM4 predstavlja sledeća strukturna formula (II):
U sledećoj realizaciji ovog pronalaska, mogu se koristiti drugi majtansini, uključujući majtansinoide koji sadrže tiol i disulfid, sa mono- ili di-alkil supstitucijom na atomu ugljenika koji nosi atom sumpora. To je majtansinoid koji ima na C-3, C-14 hidroksimetil, C-15 hidroksi ili C-20 demetil, acilovanu aminokiselinu u bočnom lancu, sa acil grupom koja ima ometenu sulfihdril grupu, pri čemu atom ugljenika acil grupe sa tiol funkcionalnošću ima jedan ili dva supstituenta, a pomenuti supstituenti su CH3, C2H5, linearni ili račvasti alkil ili alkenil, koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, ciklični alkil ili alkenil koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, fenil, supstituisani fenil ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal, i gde još jedan od ovih supstituenata može biti H, i
gde acil grupa ima linearni lanac dužine najmanje tri atoma ugljenika, između karbonil funkcionalnosti i atoma sumpora.
Ovi dodatni majtansini su jedinjeja koja predstavlja formula (III):
gde Y’ predstavlja
(CR7R8)i(CR9=CR1o)p(CSC)qAr(CR5R6)mDu(CR11=CR12)r(CSC)sBt(CR3R4)nCR1R2SZ, gde su:
Ri i R2svaki nezavisno, je CH3, C2H5, linearni alkil ili alkenil, koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, račvasti ili ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, fenil, supstituisani fenil, ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal, a pored toga, R2 može biti H;
A, B i D su cikloalkil ili cikloalkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, prost ili supstituisani aril ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal;
R3, R4, R5, R6i R7, Rs, R9, R10. R11 i R12. svaki nezavisno, predstavlja H, CH3, C2H5, linearni alkil ili alkenil koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, račvasti ili ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, fenil, supstituisani fenil, ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal;
I, m, n, 0, p, q, r, s i t, svaki nezavisno, predstavlja 0 ili ceo broj od 1 do 5, pod uslovioma da u bilo kom vremenu najmanje dva od I, m, n, o, p, q, r, s i t nisu nula; i Z je H, SR ili -COR, gde je R linearni alkil ili alkenil, koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, račvasti ili ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, ili prost ili supstituisan aril ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal.
Poželjne realizacije formule (III) su jedinjenja formule (III) u kojima su:
R1 je H, R2 je metil, a Z je H.
R1 i R2 su metil, a Z je H.
R1 je H, R2 je metil, a Z je -SCH3.
R1 i R2 su metil, a Z je -SCH3.
Ovi dodatni majtansini su takođe i jedinjenja predstavljena formulama (IV-L), (IV-D) ili (IV-D. L):
gde
Y predstavlja (CR7R8)i(CR5R6)m(CR3R4)nCRiR2SZ, i gde su:
R1 i R2, svaki nezavisno, je CH3, C2H5, linearni alkil ili alkenil, koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, račvasti ili ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, fenil, supstituisani fenil, ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal, a pored toga, R2 može biti H;
R3, R4, R5, R6, R7 i R8, svaki nezavisno, je H, CH3, C2H5, linearni alkil ili alkenil, koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, račvasti ili ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, fenil, supstituisani fenil, ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal;
I, m i n, svaki nezavisno, je ceo broj od 1 do 5, a pored toga n može biti i 0;
Z je H, SR ili -COR, gde je R linearni ili račvasti alkil ili alkenil, koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, ili prost ili supstituisan aril heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal; i May predstavlja majtansinoid, koji ima bočni lanac na C-3, C-14 hidroksimetil, C-15 hidroksi ili demetilovani C-20.
Poželjne realizacije formula (IV-L), (IV-D) i (IV-D, L) su jedinjenja sa formulama (IV-L), (IV-D) i (IV-D, L), u kojima su:
R1 je H, R2 je metil, svaki od R5, R6, R7 i R8 je H, a I i m su 1, n je 0 i Z je H.
R1 i R2 su metil, svaki od R5, R6, R7 i R8 je H, I i m su 1, n je 0, a Z je H.
R1 je H, R2 je metil, svaki od R5, R6, R7 i R8 je H, I i m su 1, n je 0, a Z je -SCH3.
R1 i R2 su metil, svaki od R5, R6, R7 i R8 je H, I i m su 1, n je 0, a Z je -SCH3.
Poželjno je da citotoksični agens predstavlja formula (IV-L).
Ovi dodatni majtanisni su takođe jedinjenje predstavljena formulom (V):
gde
Y predstavlja (CR7R8)i(CR5R6)m(CR3R4)nCR1R2SZ, gde su:
R1 i R2, svaki nezavisno, je CH3, C2H5, linearni alkil ili alkenil, koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, račvasti ili ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, fenil, supstituisani fenil, ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal, a pored toga, R2 može biti H;
R3, R4, R5, R6, R7 i R8. svaki nezavisno, je H, CH3, C2H5, linearni alkil ili alkenil, koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, račvasti ili ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, fenil, supstituisani fenil, ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal;
I, m i n, svaki nezavisno, je ceo broj od 1 do 5, a pored toga n može biti i 0;
Z je H, SR ili -COR, gde je R linearni ili račvasti alkil ili alkenil, koji ima od 1 do 10
atoma ugljenika, račvasti ili ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, ili
prost ili supstituisan aril ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal.
Poželjne realizacije formule (V) su jedinjenja formule (V), u kojima su:
R1 je H, R2 je metil, svaki od R5, R6, R7 i R8 je H, I i m su 1, n je 0 i Z je H.
R1 i R2 su metil, svaki od R5, R6, R7 i R8 je H, I i m su 1, n je 0, a Z je H.
R1 je H, R2 je metil, svaki od R5, R6, R7 i R8 je H, svaki od I i m je 1, n je 0, a Z je -SCH3.
R1 i R2 su metil, svaki od R5, R6, R7 i R8 je H, I i m su 1, n je 0, a Z je -SCH3.
Ovi dodatni majtansini su još i jedinjenja predstavljena formulama (Vl-L), (Vl-D) ili (VI-
D, L):
gde Y2 predstavlja (CR7R8)i(CR5R6)m(CR3R4)nCRiR2SZ2, gde su:
R1 i R2, svaki nezavisno, je CH3, C2H5, linearni alkil ili alkenil, koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, račvasti ili ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, fenil, supstituisani fenil, ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal, a pored toga, R2 može biti H;
R3, R4, R5, R6, R7 i R8, svaki nezavisno, je H, CH3, C2H5, linearni alkil ili alkenil, koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, račvasti ili ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, fenil, supstituisani fenil, ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal;
I, m i n, svaki nezavisno, je ceo broj od 1 do 5, a pored toga n može biti i 0;
Z je SR ili COR, gde je R linearni alkil ili alkenil, koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, račvasti ili ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, ili prost ili supstituisan aril ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal; a
Ovi dodatni majtansini su takođe i jedinjenja predstavljen formulom (VII):
gde Y2’ predstavlja
(CR7R8)i(CR9=CR1o)p(CsC)p(CR5R6)mDu(CR11=CR12)r(C=C)sBt(CR3R4)nCR1R2SZ2,
gde su:
R1 i R2svaki nezavisno, je CH3, C2H5, linearni ili račvasti alkil ili alkenil, koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, fenil, supstituisani fenil, ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal, a pored toga, R2 može biti H;
A, B i D, svaki nezavisno, su cikloalkil ili cikloalkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, prost ili supstituisani aril ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal; R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11 i R12, svaki nezavisno, predstavlja H, CH3, C2H5, linearni alkil ili alkenil koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, račvasti ili ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, fenil, supstituisani fenil, ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal;
I, m, n, o, p, q, r, s i t, svaki nezavisno, predstavlja 0 ili ceo broj od 1 do 5, pod uslovioma da u bilo kom vremenu najmanje dva od I, m, n, 0, p, q, r, s i t nisu nula; i Z je SR ili -COR, gde je R linearni alkil ili alkenil, koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, račvasti ili ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, ili prost ili supstituisan aril ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal.
Poželjne realizacije formule (VII) su jedinjenja formule (VII) ukojima su: je H, a R2 je metil.
Gore pomenuti majtansinoidi se mogu konjugovati sa anti-CD38 antitelom 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39, ili njihovim homologom ili fragmentom, pri čemu je antitelo povezano sa majtanisonidom korišćenjem tiolske ili disulfidne funkcionalnosti, prisutne na acil grupi acetilovane aminokiseline bočnog lanca koji se nalazi na C-3, C-14 hidroksimetil, C-15 hidroksi ili demetilovanom C-20 majtansinoida, i pri čemu acil grupa acilovane aminokiseline u bočnom lancu ima tiol ili disulfid funkcionalnost, lociranu na atomu ugljenika koji ima jedan ili dva supstituenta, a pomenuti supstituenti su CH3, C2H5, linearni alkil ili alkenil koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, račvasti ili ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, fenil, supstituisani fenil, ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal, a pored toga jedan od supstituenata može biti H, a acil grupa ima linearni lanac dužine od najmanje tri atoma ugljenika između karbonil funkcionalnosti i atoma sumpora.
Poželjni konjugat iz ovog pronalaska je onaj koji sadrži anti- anti-CD38 antitelo 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 ili 38SB39, ili njegov homolog ili fragment, konjugovan sa majtansinoidom formule (VIII):
gde Y1’ predstavlja
(CR7R8)i(CR9=CR10)p(C=C)q(CR5R6)mDu(CR11=CR12)r(C=C)sBt(CR3R4)nCR1R2S-,
gde su:
A, B i D, svaki nezavisno, su cikloalkil ili cikloalkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, prost ili supstituisani aril ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal; R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11 i R12, svaki nezavisno, predstavlja H, CH3, C2H5, linearni alkil ili alkenil koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, račvasti ili ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, fenil, supstituisani fenil, ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal; i
I, m, n, o, p, q, r, s i t, svaki nezavisno, predstavlja 0 ili ceo broj od 1 do 5, pod uslovom da u bilo kom vremenu najmanje dva od I, m, n, o, p, q, r, s i t nisu nula.
Poželjno je da R1 predstavlja H, a R2 metil, ili da su R1 i R2 metil.
Još poželjniji konjugat iz ovog pronalaska je onaj koji sadrži anti-CD38 atitelo 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 ili 38SB39, ili njegov homolog ili fragment, konjugovano sa majtansinoidom formule (IX-L), (IX-D) ili (IX-D, L):
gde Y1 predstavlja (CR7R8)I(CR5R6)m(CR3R4)nCR1R2S-, gde su:
R1 i R2, svaki nezavisno, je CH3, C2H5, linearni alkil ili alkenil, koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, račvasti ili ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, fenil, supstituisani fenil, ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal, a pored toga, R2 može biti H;
R3, R4, R5, R6, R7 i R8, svaki nezavisno, je H, CH3, C2H5, linearni alkil ili alkenil, koji ima od 1 do 10 atoma ugljenika, račvasti ili ciklični alkil ili alkenil, koji ima od 3 do 10 atoma ugljenika, fenil, supstituisani fenil, ili heterociklični aromatični ili heterocikloalkil radikal;
I, m i n, svaki nezavisno, je ceo broj od 1 do 5, a pored toga n može biti i 0; i
hidroksi i demetilovanom C-20.
Poželjne realizacije formula (IX-L), (IX-D) ili (IX-D, L) su jedinjenja sa formulama (IX-L), (IX-D) ili (IX-D, L) u kojima su:
R1 je H, a R2 je metil, ili su R1 i R2 metil,
R1 je H, R2 je metil, svaki od R5, R6, R7 i R8 je H; I i m su 1; i n je 0,
R1 i R2 su metil, svaki od R5, R6, R7 i R8 je H; I i m su 1; i n je 0.
Poželjan citotoksični agens ima formulu (IX-L).
Sledeći poželjan konjugat iz ovog pronalaska je onaj koji sadrži anti-CD38 antitelo 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 ili 38SB39, ili njegov homolog ili fragment, konjugovano sa majtansinoidom formule (X):
gde su svi supstituenti definisani za formulu (IX), gore.
Od gore opisanih jedinjenja, naročito su poželjna jedinjenja u kojima R1 predstavlja H, R2 je metil, svaki od R5, R6, R7 i R8 je H, I i m su 1, a n je 0.
Posebno poželjna još su i bilo koje od gore opisanih jedinjenja, u kojima su R1 i R2 metil, svaki od R5, R6, R7 i R8 je H, I i m su 1, a n je 0.
Pored toga, poželjan je L-aminoacil stereoizomer.
Svaki od majtansinoida pomenutih u U. S. Patent Application No. 10/849, 136, podnetoj
20. maja 2004, može takođe da se koristi u citotoksičnom konjugatu iz ovog pronalaska.
Celokupni opis iz U. S. Patent Application No. 10/849, 136 je ovde priključen kroz citat.
VEZIVNE GRUPE KOJE SADRŽE DISULFID
Da bi se povezao majtansinoid sa agensom za vezivanje za ćeliju, kao što je 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 ili 38SB39 antitelo, majtansinoid sadrži vezivni ostatak. Ovaj vezivni ostatak sadrži hemijsku vezu koja dozvoljava oslobađanje potpuno aktivnog majtansinoida na posmatrano mesto. Pogodne hemijske veze su dobro poznate u stanju tehnike, a to su disulfidne veze, veze labilne kiseline, fotolabilne veze, veze labilne prema peptidazi i veze labilne prema esterazi. Poželjne su disulfidne veze.
Vezivni ostatak sadrži takođe i reaktivnu hemijsku grupu. U poželjnoj realizaciji, ova reaktivna hemijska grupa može biti kovalentno vezana za majtansinoid, preko veznog ostatka disulfidne veze.
Naročito poželjne reaktivne hemijske grupe su N-sukcinimidil estri i N-sulfosukcinimidil estri.
Naročito poželjni majtansinoidi, koji sadrže vezni ostatak koji sadrži reaktivnu hemijsku grupu, su C-3 estri majtansinoida i njegovi analozi, gde vezivni ostatak sadrži disulfidnu vezu, a hemijski reaktivna grupa sadrži N-sukcinimidil ili N-sulfosukcinimidil estar.
Mnogi položaji na majtansinoidima mogu poslužiti kao položaj za hemijsko povezivanje vezivnog ostatka. Na primer, očekuje se da koristan može biti položaj C-3, koji ima hidroksilnu grupu, položaj C-14 modifikovan sa hidroksimetil, položaj C-15 modifikovan sa hidroksi i položaj C-20 koji ima hidroksi grupu. Međutim, poželjan je položaj C-3, a položaj C-3 u majtansinolu je naročito poželjan.
lako je sinteza estara majtansinola, koji imaju vezivni ostatak opisan kao vezivni ostatak koji sadrži disulfidnu vezu, onaj ko je verziran u stanje tehnike, zna da se unutar ovog
pronalaska mogu upotrebiti i vezivni ostaci sa drugim hemijskim vezama (opisanim gore), kao i drugi majtansinoidi. Specifični primeri drugih hemijskih veza su veze labilne kiseline, fotolabilne veze, veze labilne prema peptidazi i veze labilne prema esterazi. Opis U. S. Patent No. 5, 208, 020, priključen ocde, objašnjava dobijanje majtansinoida koji sadrže takve veze.
Sinteza majtansinoida i derivata majtansinoida koji imaju disulfidni ostatak sa reaktivnom grupom, opisana je u U. S. Patent No. 6, 441, 163 i 6, 333, 410, i u U. S. Application No. 10/161, 651, a svi su ovde priključeni kroz citat.
Majtansinoidi koji sadrže reaktivnu grupu, kao što je DM1, reaguju sa antitelom, kao što je 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 ili 38SB39 antitelo, dajući citotoksične konjugate. Ovi konjugati se mogu prečistiti pomoću HPLC ili gel-filtriranjem.
Nekoliko odličnih shema za dobijanje ovakvih konjugata antitelo-majtansinoid, dato je u U. S. Patent No. 6, 33, 410 i u U. S. Application No. 09/867, 598, 10/161, 651 i 10/024, 290, a svi su ovde u celini prikljkučeni kroz citat.
Obično, rastvor antitela u puferu u vodi se može inkubirati sa molskim viškom majtansinoida, koji ima disulfidni ostatak sa reaktivnom grupom. Reakciona smeša se može tretirati dodatkom viška amina (kao što je etanolamin, taurin, itd ). Konjugat majtansinoid-antitelo se može zatim prečistiti gel-filtriranjem.
Broj molekula majtansinodida vezanih za molekul antitela, može se odrediti spektrofotometrijskim merenjem odnosa absorbancija na 252 nm i 280 nm. Poželjan je prošek od 1-10 molekula majtansinoida po antitelu.
Konjugati antitela sa majtansinoidnim lekovima se mogu vrednovati u pogledu njihove sposobnosti da suzbiju proliferaciju raznih neželjenih sojeva ćelija in vitro. Na primer, sojevi ćelija, kao što je soj ćelija Daudi-evog humanog limfoma, soj ćelija Ramos-ovog humanog limfoma, soj ćelija MOLP-8 humanog multiplog mijeloma, i soj MOLT-4 humane T-akutne limfocitne leukemije, mogu se lako koristiti za testiranje citotoksičnosti ovih jedinjenja. Ćelije koje treba da se vrednuju izlože se ovim jedinjenjima tokom 24 h, pa se mere frakcije preživelih ćelija u direktnim testovima, pomoću poznatih postupaka. Vrednosti IC50 se zatim izračunavaju iz rezultata ovih testova.
VEZIVNE GRUPE KOJE SADRŽE PEG
Majtansinoidi se mogu takođe povezati sa agensima za vezivanje za ćelije, korišćenjem vezivnih grupa PEG, kao što je opisano u U. S. Application No. 10/024, 290. Ove PEG vezivne grupe su rastvorne i u vodi i u nevodenim rastvaračima, i mogu se koristiti da se jedan ili više citotoksičnih agenasa pripoji agensu za vezivanje za ćeliju. Primeri PEG vezivnih grupa su heterobifunkcionalni PEG linkeri koji vezuju citotoksične agense i agense za vezivanje za ćeliju, sa suprotnih krajeva ovih linkera, preko funkcionalne sulfhidril ili disulfidne grupe sa jednog kraja, a aktivnog estra sa drugog kraja.
Kao opšti primer sinteze citotoksičnog konjugata koji koristi PEG vezivnu grupu, za specifične detalje navodi se ponovo U. S. Application No. 10/024, 290. Sinteza počinje reakcijom jednog ili više citotoksičnih agenasa koji imaju reaktivni PEG ostatak, sa agensom za vezivanje za ćeliju, što daje izmeštanje aktivnog terminalnog estra sa svakog reaktivnog PEG ostatka pomoću ostatka neke aminokiseline u agensu za vezivanje za ćeliju, dajući citotoksični konjugat koji sadrži jedan ili više citotoksičnih agenasa kovalentno vezanih za agens za vezivanje za ćeliju, preko PEG vezivne grupe.
TAKSANI
Citotoksični agens, koji se koristi u citotokičnim konjugatima u skladu sa ovim pronalaskom, može biti takođe taksan ili njegov derivat.
Taksani su familija jedinjenja koja sadrže paklitaksel (Taxol), prirodni citotoksični proizvod, i docetaksel (Taxotere), polu-sintetski derivat, dva jedinjenja koja se široko koriste u tretmanu kancera. Taksani su mitotički otrovi koji inhibiraju depolimerizaciju tubulina, što dovodi do smrti ćelije, lako su docetaksel i paklitaksel korisni agensi u tretmanu kancera, njihova antitumorna aktivnost je ograničena, zbog njihove ne-
specifične tokisčnosti prema normalnim ćelijama. Dalje, sama jedinjenja, kao što su
paklitaksel i docetaksel nisu dovoljno snažna za upotrebu u konjugatima agenasa za
vezivanje za ćelije.
Poželjan taksan, koji se koristi za dobijanje citotoksičnih konjugata, je taksan formule
(XI):
Postupci sinteze taksana, koji se mogu koristiti u citotoksičnim konjugatima iz ovog pronalaska, zajedno sa postupcima konjugovanja taksana na agense za vezivanje za ćeliju, kao što su antitela, opisani su detaljno u U. S. Patent No. 5, 416, 064, 5, 475, 092, 6, 340, 701, 6, 372. 738 i 6, 436, 931 i u U. S. Application No. 10(024, 290, 10/144, 042, 10/207, 814, 10/210, 112 i 10/369, 563.
DERIVATI TOMAMICINA
Citotokični agens u skladu sa ovim pronalaskom može biti takođe i derivat tomamicina. Derivati tomamicina su pirolo[1, 4]benzodiazepini (PBD), poznata klasa jedinjenja koja pokazuje biološka svojstva kovalentnog vezivanja za N2 gvanin u malom žljebu DNK. PBD su brojna veziva malog žljeba, kao što su antramicin, neotramicin i DC-81.
Novi derivati tomamicina koji zadržavaju visoku citotoksičnost, a mogu se efikasno povezati sa agensima za vezivanje za ćeliju opisani su u međunarodnoj prijavi PCT/IB2007/000142, čiji je sadržaj ovde priključen kroz citat. Kompleksi agens za vezivanje za ćeliju-derivat tomamicina, omogućavaju da se ciljano primeni potpuno citotoksično delovanje derivata tomamicina, samo protiv neželjenih ćelija, pa se
delovanja.
Citotoksični agens u skladu sa ovim pronalaskom sadrži jedan ili više derivata tomamicina, povezanih sa agensom za vezivanje za ćeliju, kao što je 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitelo, preko vezivne grupe. Ova vezivna grupa je deo hemijskog ostatka koji je kovalentno vezan za derivat tomamicina konvencionalnim postupcima. U poželjnoj realizaciji ovaj hemijski ostatak može biti kovalentno vezan za derivat tomamicina preko disulfidne veze.
Derivati tomamicina korisni za ovaj pronalazak imaju formulu (XII), prikazanu niže:
gde
----- predstavlja opcionu prostu vezu; a
- - - - predstavlja ili prostu vezu ili dvogubu vezu;
pod uslovom da - - - - predstavlja prostu vezu, a U i U', iste ili različite, nezavisno predstavlja H, dok se W i W\ isti ili različiti, nezavisno biraju iz grupe koju čine OH, etar, kao što je -OR, estar (npr. acetat), kao što je -OCOR, karbonat, kao što je -OCOOR, karbamat, kao što je -OCONRR’, cikliči karbamat, tako da su N10 i C11 delovi ciklličnog prstena, urea, kao što je -NRCONRR’, tiokarbamat, kao što je -OCSNHR, ciklični tiokarbamat, tako da su N10 i C11 deo cikličnog prstena, -SH, sulfid, kao što je -SR, sulfoksid, kao što je -SOR, sulfon, kao što je -SOOR, sulfonat, kao što je -SO3-, sulfonamid, kao što je -NRSOOR, amin, kao što je -NRR’, opcioni ciklični amin, tako da su N10 i C11 deo cikličnog prstena, derivat hidroksilamina, kao što je -NROR’, amid, kao što je -NRCOR, azid, kao što je -N3, cijano, halo, trialkil ili triarilfosfonijum, grupa izvedena iz aminokiseline. Poželjno je da su W i W’, isti ili različiti, OH, OMe, OEt, NHCONH2, SMe;
a kada - - - - predstavlja dvogubu vezu, odsutni su U i U’, a W i W’ predstavlja H;
R1, R2, R1’ R2’ su isti ili različiti, a nezavisno se biraju između halida ili alkila, opciono supstituisanog sa jednim ili više Hal, CN, NRR’, CF3, OR, aril, het, S(O)qR, ili R1 i R2 i R1’ i R2’ zajedno formiraju grupu koja sadrži dvogubu vezu =B i =B’, respektivno.
Poželjno je da R1 i R2 i R1 ’ i R2’ zajedno formiraju grupu koja sadrži dvogubu vezu, =B i =B’, respektivno.
B i B’ su iste ili različite, a nezavisno se biraju između alkenil, opciono supstituisan sa jednim ili više Hal, CN, NRR’, CF3, OR, aril, het, S(O)qR, ili B i B’ predstavlja atom kiseonika.
Poželjno je da je B = B’.
Poželjnije je da je B = B’ = (=CH2) ili =CH-CH3.
X i X’, su isti ili različiti, a nezavisno se biraju između jednog ili više -O-, -NR-, -(C=O)-, -S(O)q-,
Poželjno je da je X = X’.
Poželjnije je da je X = X’ = O.
A i A’ su isti ili različiti, a nezavisno se biraju između alkil ili alkenil, koji opciono sadrži atom kiseonika, azota ili sumpora, svaki opciono susptituisan sa jednim ili više Hal, CN, NRR’, CF3, OR, S(O)qR, aril, het, alkil, alkenil.
Poželjno je da je A = A’.
Poželjnije je da je A = A’ = linearni, nesupstituisani alkil.
Y i Y’ su isti ili različiti, a nezavisno se biraju između H i OR.
Poželjno je da je Y = Y’.
Poželjnije je da je Y = Y’ = O-alkil, poželjnije O-metil.
T je -NR-, -O-, -S(O)q-, ili 4- do 10-člani aril, cikloalkil, heterociklil ili heteroaril, svaki opciono supstituisan sa jednim ili više Hal, CN, NRR’, CF3, R, OR, S(O)qR, i/ili jednim ili više linkera, ili račvasti alkil, opciono supstituisan sa jednim ili više Hal, CN, NRR’, CF3, OR, S(O)qR, i/ili jednim ili više linkera, ili linearni alkil, supstituisan sa jednim ili više Hal, CN, NRR’, CF3, OR, S(O)qR, i/ili jednim ili više linkera.
Poželjno je da T predstavlja 4- do 10-člani aril ili heteroaril, poželjnije fenil ili piridil, opciono supstituisan sa jednim ili više linkera.
Pomenuti linker sadrži veznu grupu. Pogodne vezne grupe su dobro poznate u stanju tehnike, a to su tiolna, sulfidna, disulfidna grupa, tioetarske grupe, grupe labilne kiseline, fotolabilne grupe, grupa labilne prema peptidazi i grupe labine prema esterazi. Poželjne su disulfidne grupe i tioetarske grupe.
Ukoliko je vezivna grupa grupa koja sadrži tiol-, sulfid (ili takozvani tioetar, -S-) ili disulfid (-S-S-), bočni lanac koji sadrži tiolnu, sulfidnu ili disulfidnu grupu, može biti linearan ili račvast, aromatičan ili heterocikličan. Onaj ko je uobičajeno verziran u stanje tehnike lako može identifikovati pogodne bočne lance.
Poželjan pomenuti linker ima formulu: -G-D-(Z)P-S-Z’, gde su G je prosta ili dvoguba veza, -O-, -S- ili -NR-;
D je prosta veza ili -E-, -E-NR-, -E-NR-F-, -E-O-, -E-O-F-, -ENR-CO-, -E-NR-CO-F-, -ECO-, -CO-E-, -E-CO-F, -E-S-, -E-S-F-, -E-NR-C-S-, -E-NR-CS-F-; gde su E i F, isti ili različiti, a nezavisno se biraju između linearnog i račvastog -(OCH2CH2)ialkil(OCH2CH2)j-, -alkil(OCH2CH2)ralkil-, -(OCH2CH2)i-,
-(OCH2CH2)icikloalkil(OCH2CH2)j-, -(OCH2CH2)iheterociklil(OCH2CH2)j, -(OCH2CH2)iaril(OCH2CH2)j-,-(OCH2CH2)iheteroaril(OCH2CH2)r, -alkil(OCH2CH2), alkil(OCH2CH2)j-, -alkil(OCH2CH2)i-,
alkil(OCH2CH2)icikloalkil(OCH2CH2)j-, -alkil(OCH2CH2)iheterociklil(OCH2CH2)r, -alkil(OCH2CH2)iaril(OCH2CH2)j-, -alkil(OCH2CH2)iheteroaril(OCH2CH2)j-, -cikloalkil-alkil, -alkil-cikloalkil-, -heterociklil-alkil-, -alkil-heterociklil-, -alkil-aril-, -aril-alkil-, -alkil-heteroaril-, -heteroaril-alkil-;
gde su i i j identični ili različiti, a nezavisno se biraju između 0, 1 do 2000;
Z je linearni ili račvasti -alkil-; p je 0 ili 1;
Z’ predstavlja H, zaštitna grupa tiola, kao što je COR, R20 ili SR20, gde R20 predstavlja H, metil, alkil, opciono supstituisani cikloalkil, aril, heteroaril ili heterociklil, pod uslovom da kada Z’ predstavlja H, da je tada pomenuto jedinjenje u ravnoteži sa odgovarajućim jedinjenjem formiranim unutarmolekulskom ciklizacijom, do koje dolazi usled adicije tiolne grupe, -SH, na iminsku vezu -NH=, u jednom od PBD ostataka, n i n’ su jednaki ili različiti, a predstavlja ih 0 ili 1. q je 0, 1 ili 2.
R i R’ su jednaki ili različiti, a nezavisno se biraju između H, alkil, aril, svaki opciono supstituisan sa Hal, CN, NRR’, CF3, R, OR, S(O)qR, aril, het;
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, hidrati ili hidratisane soli, ili polimorfne kristalne strukture ovih jedinjenja, ili njihovi optitčki izomeri, racemati, dijastereomeri ili enantiomeri.
Jedinjenja opšte formule (XII), koja imaju geometrijske i stereoizomere, su takođe deo ovog pronalaska.
Poznato je da se N-10 i C-11 dvoguba veza derivata tomamicina formule (XII) lako konvertuje, na reversibilan način, u odgovarajuće adukte imina, u prisustvu vode, alkohola, tiola, primarnog ili sekundarnog amina, uree, i drugih nukleofila. Ovaj proces je povratan i može lako regenerisati odgovarajuće derivate tomamicina u prisustvu
temperaturama (Z. Tozuka, J. Antibiotics, 36, 276(1983)).
Dakle, reversibilni derivati tomamicina, opšte formule (XIII) se mogu takođe koristiti u ovom pronalasku:
gde su A, X, Y, n, T, A’, X’, Y’, n’, R1, R2, R1’ i R2’ definisani u formuli (XII), a W i VV’ su isti ili različiti, a biraju se iz grupe koju čine OH, etar, kao što je -OR, estar (npr. acetat), kao što je -OCOR, -COOR, karbonat, kao što je -OCOOR, karbamat, kao što je -OCONRR’, ciklični karbamat, tako da su N10 i C11 deo cikličnog prstena, urea, kao što je -NRCONRR’, tiokarbamat, kao što je -OCSNHR, ciklični tiokarbamat, ali tako da su N10 i C11deo cikličnog prstena, sulfid, kao što je -SR, sulfoksid, kao što je -SOR, sulfon, kao što je -SOOR, sulfonat, kao što je -SO3-, sulfonamid, kao što je -NRSOOR, amin, kao što je -NRR’, opciono ciklični amin, ali tako da su N10 i C11 deo cikličnog prstena, derivat hidroksilamina, kao što je -NROR’, amid, kao što je -NRCOR, -NRCONRR’, azid, kao što je -N3, cijano, halo, trialkil ili triarilfosfoijum, grupa izvedena iz aminokiseline. Poželjno je da su W i W’ isti ili različiti, a da predstavljaju OH, OMe, OEt, NHCONH2, SMe.
Jedinjenja formule (XIII) se mogu posmatrati i kao solvati, uključujući vodu ako je rastvarač voda, a ovi solvati su naročito korisni.
U poželjnoj realizaciji, derivati tomamicina iz ovog pronalaska se biraju iz grupe koju čine:
8, 8'-[1, 3-benzendiilbis(metilenoksi)]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-metoksi-1, 2, 3, 11a-tetrahidro-5H-pirolo[2, 1 -c][1, 4]benzodiazepin-5-on] metoksi-1, 2, 3, 11 a-tetrahidro-5H-pirolo[2, 1 -c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[1, 5-pentandiilbis(oksi)]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-metoksi-1, 2, 3, 11 a-tetrahidro-5H-pirolo[2, 1-c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[1, 4-butandiilbis(oksi)]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-metoksi-1, 2, 3, 11a-tetrahidro-5H-pirolo[2, 1-c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[3-metil-1, 5-pentandiilbis(oksi)]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-metoksi-1, 2, 3, 11a-tetrahidro-5H-pirolo[2, 1 -c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[2, 6-piridindiilbis(oksi)]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-metoksi-1, 2, 3, 11 a-tetrahidro-5H-pirolo[2, 1 -c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[4-(3-terc-butoksikarbonilaminopropiloksi)-2, 6-piridindiilbis-(metilenoksi)]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-metoksi-1, 2, 3, 11a-tetrahidro-5H-pirolo[2, 1c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[5-(3-aminopropiloksi)-1, 3-benzendiilbis(metilenoksi)]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-metoksi-1, 2, 3, 11 a-tetrahidro-5H-pirolo[2, 1 -c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[5-(N-metil-3-terc-butoksikarbonitaminopropil)-1, 3-benzendiilbis-(metilenoksi)]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-metoksi-1, 2, 3, 11 a-tetrahidro-5H-pirolo[2, 1 -c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-{5-[3-(4-metil-4-metildisulfanil-pentanoilamino)propiloksi]-1, 3-benzendiilbis(metilenoksi)}-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-metoksi-1, 2, 3, 11 a-tetrahidro-5H-pirolo[2, 1-c](1, 4)benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[5-acetiltiometil-1, 3-benzendiilbis(metitenoksi)]-bis[(S)-2-metilen-7metoksi-
1, 2, 3, 11 a-tetrahidro-5H-piroto[2, 1 -c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
bis-{2-[(S)-2-metilen-7-metoksi-5-okso-1, 3, 11a-tetrahidro-5H-
pirolo[2, 1 c][1, 4]benzodiazepin-8-iloksi]-etil}-karbaminska kiselina terc-butilestar
tetrahidro-5H-pirolo[2, 1-c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[5-(N-4-merkapto-4, 4-dimetilbutanoil)amino-1, 3-benzendiilbis(metilenoksi)]bis[7-metoksi-2-metilen-1, 2, 3, 11 a-tetrahidro-5H-pirolo[2, 1 -c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[5-(N-4-metilditio-4, 4-dimetilbutanoil)-amino-1, 3-benzendiilbis(metilenoksi)]-bis[7-metoksi-2-metilen-1, 2, 3, 11a-tetrahidro-5H-pirolo[2, 1-c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[5-(N-metil-N-(2-merkapto-2, 2-dimetiletil)amino-1, 3-benzendiil(metilenoksi)]-bis[7-metoksi-2-metilen-1, 2, 3, 11a-tetrahidro-5H-pirolo[2, 1-c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[5-{N-metil-N-(2-metilditio-2, 2-dimetiletil)amino-1, 3-benzendiil(metilenoksi)]-bis[7-metoksi-2-metilen-1, 2, 3, 11a-tetrahidro-5H-pirolo[2, 1-c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[(4-(2-(4-merkapto-4-metil)-pentanamido-etoksi)-piridin-2, 6-dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1, 2, 3, 11a-tetrahidro-pirolo[2, 1-c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[(1-(2-(4-metil-4-metildisulfanil)-pentanamido-etoksi)-benzen-3, 5-dimetil)dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1, 2, 3, 11a-tetrahidro-pirolo[2, 1-c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[(4-(3-(4-metil-4-metildisulfanil}pentanamido-propoksi)-piridin-2, 6-dimetil)dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1, 2, 3, 11 a-tetrahidro-pirolo[2, 1 -c][1, 4] benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[(4-(4-(4-metil-4-metildisulfanil)-pentanamido-butoksi)-piridin-2, 6-dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1, 2, 3, 11 a-tetrahidro-pirolo[2, 1-c][1, 4]benzodiazepin-5-on] 8, 8'-[(4-(3-[4-(4-metil-4-metildisuifanil-pentanoil)-piperazin-1-il]-propil-piridin-2, 6-dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1, 2, 3, 11 a-tetrahidro-pirolo[2, 1 -c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[(1-(3-[4-(4-metil-4-metildisulfanil-pentanoil)-piperazin-1-il]-propil)-benzen-3, 5-dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1, 2, 3, 11 a-tetrahidro-pirolo[2, 1-c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[(4-(2-{2-[2-(4-metil-4-metildisulfanil-pentanoilamino)-etoksi]-etoksi}-etoksi})-piridin-2, 6-dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1, 2, 3, 11 a-tetrahidro-pirolo[2, 1-c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[(1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-metil-4-metildisulfanil-pentanoilamino)-etoksi]-etoksi}etoksi)-
etoksi]-etoksi}-etoksi)-benzen-3, 5-dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden7-dimetoksi-
1, 2, 3, 11a-tetrahidro-pirolo[2, 1-c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[(1-(2-{2-[2-(4-metil-4-metildisulfanil-pentanoilamino)-etoksi]-etoksi}-etoksi)-benzen-3, 5-dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1, 2, 3, 11a-tetrahidro-pirolo[2, 1-c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-j(4-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-metil-4-metildisulfanil-pentanoilamino)-etoksi]-etoksi}-etoksi)-etoksi]-etoksi}-etoksi)-piridin-2, 6-dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1, 2, 3, 11 a-tetrahidro-pirolo[2, 1 -c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[(1-(2-[metil-(2-metil-2-metildisulfanil-propil)-amino]-etoksi)-benzen-3, 5-dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1, 2, 3, 11a-tetrahidro-pirolo[2, 1c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[(4-(3-[metil-(4-metil-4-metildisulfianil-pentanoil)-amino]-propil)-piridin-2, 6-dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-djmetoksi-1, 2, 3, 11 a-tetrahidro-pirolo[2, 1-c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[(4-(3-[metil-(2-metil-2-metildisuifanil-propil)-amino]-propil)-piridin-2, 6-dimetil}-dioksi]-
bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1, 2, 3, 11a-tetrahidro-pirolo[2, 1-c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
8, 8'-[(1-(4-metil-4-metildisulfanil)-pentanamido)-benzen-3, 5-dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1, 2, 3, 11a-tetrahidro-pirolo[2, 1-c][1, 4]benzodiazepin-5-on]
kao i odgovarajući merkapto derivati, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, hidrati ili hidratisane soli, ili polimorfnekristalne strukture ovih jedinjenja, ili njihovi optičkli izomeri, racemati, dijastereomeri ili enantiomeri.
Poželjna su jedinjenja formule:
gde su X, X’, A, A’, Y, Y’, T, n, n’ definisani gore.
Jedinjenja formule (XII) se mogu dobiti na brojne načine, koji su poznati onima koji su verzirani u stanje tehnike. Ova jedinjenja se mogu sintetizovati, na primer, primenom ili prilagođavanjem postupaka opisanih niže, ili njihovim varijacijama koje razume verzirani stručnjak. Odgovarajuće modifikacije i supstitucije su jasne i dobro poznate, ili su lako dostupne iz naučne literature onima koji su verzirani u stanje tehnike. Ovi postupci se naročito mogu naći u R. C. Larock, "Comprehensive Organic Transformations”, Wiley-VCH izdavači, 1999.
Postupci za sintezu derivata tomamicina, koji se mogu koristiti u ovom pronalasku, opisani su u međunarodnoj prijavi PCT/IB2007/000142. Jedinjenja iz ovog pronalaska se mogu dobiti raznim putevima sinteze. Reagensi i polazni materijali su komercijalno dostupni, ili ih lako sintetizuju dobro poznatim tehnikama oni koji su uobičajeno verzirani u stanje tehnike (videti, na primer, WO 00/12508, WO 00/12507, WO 2005/040170, WO 2005/085260, FR 1516743, M. Mori et al., Tetrahedron, 42, 3793-3806(1996)).
Molekuli konjugata iz ovog pronalaska se mogu formirati korišćenjem bilo koje od tehnika. Derivati tomamicina iz ovog pronalaska se mogu povezati sa nekim antitelom ili drugim agensom za vezivanje za ćeliju preko linkera labilne kiseline, ili protolabilnog linkera. Ovi derivati se mogu kondenzovati sa peptidom, koji ima pogodnu sekvenciju, a zatim povezati sa agensom za vezivanje za ćeliju dajući linker labilan prema peptidazi. Ovi konjugati se mogu dobiti tako da sadrže primarnu hidroksilnu grupu, koja se može sukcinilovati i povezati sa agensom za vezivanje za ćeliju, dajući konjugat koji se može otcepiti unutarćelijskim esterazama da bi se oslobodio ovaj derivat. Poželjno je da se ovi derivati sintetizuju tako da sadrže slobodnu ili zaštićenu tiolsku grupu, a zatim se svaki, od jednog ili više disulfidnih ili tiolskih derivata, kovalentno povezuje sa agensom za vezivanje za ćeliju, preko disulfidne veze ili tioetarske veze.
Brojni postupci konjugacije se navode u US Patent No. 5, 416, 064 i 5, 475, 092. Derivati tomamicina se mogu modifikovati tako da daju slobodnu amino grupu, a zatim povezati sa antitelom ili drugim agensom za vezivanje za ćeliju, preko linkera labilne kiseline, ili protolabilnog linkera. Derivati tomamicina sa slobodnom amino ili karboksilnom grupom mogu se kondenzovati sa peptidom, a zatim povezati sa agensom za vezivanje za ćeliju, dajući linker labilan prema peptidazi. Derivati tomamicina sa slobodnom hidroksilnom grupom na linkeru se mogu sukcinilovati i povezati sa agensom za vezivanje za ćeliju, dajući konjugat koji se može cepati unutarćelijskim esterazama, oslobađajući slobodan lek. Poželjnije je da se derivati tomamicina tretiraju tako da daju slobodnu ili zaštićenu tiolsku grupu, a zatim se dimeri tomamicina koji sadrže disulfid- ili tiol povezuju sa agensom za vezivanje za ćeliju preko disulfidnih veza.
Poželjni su oni konjugati monoklonalno antitelo- ili agens za vezivanje za ćeliju-derivat tomamicina, koji su spojeni preko disulfidne veze, kao što je gore diskutovano, a koji su u stanju da oslobađaju derivate tomamicina. Ovi konjugati, koji se vezuju za ćeliju, dobijaju se poznatim postupcima, kao što je modifikovanje monoklonalnih antitela sa sukcinimidil piridil-ditiopropionatom (SPDP) (Carlsson et al., Biochem. J., 173, 723-737(1978)). Dobijena tiopiridil grupa se zatim izmesti tretmanom sa derivatom tomamicina koji sadrži tiol, dajući konjugate povezane preko disulfida. Alternativno, u slučaju arilditio derivata tomamicina, formiranje konjugata povezanog sa ćelijom se ostvaruje direktnim izmeštanjem aril-tiol u derivatu tomamicina, pomoću sulfhidril grupa, prethodno uvedenih u molekule antitela. Konjugati, koji sadrže 1 do 10 derivata tomamicina, povezani preko disulfidnog mosta, dobijaju se jednostavno, bilo kojim postupkom.
Određenije, rastvor antitela modifikovanog sa ditio-nitropiridilom, koncentracije 2, 5 mg/ml_ u 0, 05 M kalijum-fosfatnom puferu, od pH 7, 5, koji sadrži još 2 mM EDTA, tretira se sa derivatom tomamicina koji sadrži tiol (1, 3 molski ekvivalent/ditiopiridil grupa). Oslobađanje tio-nitropiridina iz modifikovanog antitela se prati spektrofotometrijski, na 325 nm, a završava se za oko 16 h. Konjugat antitelo-derivat tomamicina se prečisti i oslobodi od neizreagovalog leka i drugih materijala niske molarne mase, pomoću gel filtriranja, kroz kolonu Sephadex G-25 ili Sephacryl S300. Broj ostataka derivata tomamicina vezanih za antitelo se može odrediti merenjem odnosa absorbancija na 230 nm i 275 nm. Ovim postupkom se može prosečno vezati 1-10 molekula derivata tomamicina na molekul antitela, preko disulfidnih veza.
Efekat konjugacije na afinitet vezivanja za ćelije koje ekspresuju antigen, može se odrediti korišćenjem postupaka koji su ranije opisali Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93, 8618-8623(1996). Citotoksičnost derivata tomamicina i njihovih konjugata sa antitelom na sojeve ćelija se može meriti povratnom ekstrapolacijom krivih ćelijske proliferacije, kao što su opisali Goldmacher et al., J. Immunol., 135, 3648-3651(1985). Citotoksičnost ovih jedinjenja na sojevima ćelija se može odrediti klonogenskim testovima, kao što su opisali Goldmacher et al., J. Cell. Biol., 102, 1312-1319(1986).
DERIVATI LEPTOMICINA
U skladu sa ovim pronalaskom citotoksičan može biti takođe i derivat leptomicina. U skladu sa ovim pronalaskom "derivat leptomicina” se odnosi na članove familije leptomicina, kako ih su definisali Kalesse et al., Synthesis1 8, 981-1003(2002), a to su: leptomicin, kao što je leptomicin A i leptomicin B, kalistatini, ratjadoni, kao što je ratjadon A i ratjadon B, anguinomicini, kao što su anguinomicin A, B, C, D, kasusamicini, leptostatin, leptofuranini, kao što su leptofuranin A, B, C, D. Poželjni su derivati leptomicina A i B.
Određenije, derivati iz ovog pronalaska imaju formulu (I):
0)
gde su:
Ra i Ra’ su H ili -alki; poželjno je da Ra predstavlja -alk, poželjno metil, a Ra da je H;
R17 je alkil, opciono supstituisan sa OR, CN, NRR’, perfluoroalkil; poželjno je da R17 predstavlja alkil, poželjnije metil ili etil;
R9 je alkil, opciono supstituisan sa OR, CN, NRR’, perfluoroalkil; poželjno je da R9 predstavlja alkil, poželjnije metil;
X je -O- ili -NR-; poželjno je da X predstavlja -NR-;
Y je -U-, -NR-U-, -0-U-. -NR-CO-U-. -U-NR-CO-, -U-CO-, -CO-U-;
poželjno je da kada X predstavlja -O-, da je Y tada -U-, -NR-U-, -U-NR-CO-;
gde se U bira između linearnog ili račvastog -alk-, -alk(OCH2CH2)m-, -(OCH2CH2)m-alk-,
-alki(OCH2CH2)m-alk-, -(OCH2CH2)m-, -cikloalkil-, -heterociklil-, -cikloalkil-alk-, -alk-
cikloalkil-, -heterociklil-alkil-, -alk-heterociklil-;
gde m predstavlja ceo broj koji se bira između 1 i 2000;
poželjno je da U predstavlja linearan ili račvasti -alk-,
Z je -alk-;
n je 0 ili 1; poželjno je da n predstavlja 0;
T predstavlja H, zaštićena tiol grupa, kao što su Ac, Ri ili SRi, gde Ri predstavlja H, metil, alk, cikloalkil, opciono supstituisani aril ili heterociklil, ili T predstavlja
gde su:
Ra, Ra’, R17, R9, X, Y, Z i n definisani gore;
poželjno je da T predstavlja H ili SR1, gde predstavlja alk, poželjnije metil;
R, R’ su identični ili različiti, a predstavlja ih H ili alkil;
U gornjem tekstu alk predstavlja linearan ili račvasti alkil; poželjno je da alk predstavlja -(CH2-q(CH3)q)p-, gde p predstavlja ceo broj od 1 do 10; a q predstavlja ceo broj od 0 do 2; poželjno je da alk predstavlja -(CH2)- ili -C(CH3)2-,
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, hidrati, ili hidratisane soli, ili polimorfne kristalne strukture ovih jedinjenja, ili njihovi optički izomeri, racemati, dijastereomeri ili enantiomeri.
Poželjna jedinjenja se mogu izabrati između:
(2-metilsulfanil-etil)amid (2E, 10E, 12E, 16Z, 18E)-(R)-6-hidroksi-3, 5-7, 9, 11, 15, 17-heptametil-19-((2S, 3S)-3-metil-6-okso-3, 6-dihidro-2H-piran-2-il)-8-okso-nonadeka-
2. 10. 12. 16. 18- pentaenoinske kiseline
bis[(2-merkaptoetil)-amid (2E, 10E, 12E, 16Z, 18E)-(R)-6-hidroksi-3, 5-7, 9, 11, 15, 17-heptametil-19-((2S, 3S)-3-metil-6-okso-3, 6-dihidro-2H-piran-2-il)-8-okso-nonadeka-
2. 10. 12. 16. 18- pentaenoinske kiseline]
(2-merkapto-etil)amid (2E, 10E, 12E, 16Z, 18E)-(R)-6-hidroksi-3, 5-7, 9, 11, 15, 17-heptametil-19-((2S, 3S)-3-metil-6-okso-3, 6-dihidro-2H-piran-2-il)-8-okso-nonadeka-
2. 10. 12. 16. 18- pentaenoinske kiseline
(2-metildisulfanil-etil)-amid (2E, 10E, 12E, 16Z, 18E)-(R)-6-hidroksi-3, 5, 7, 9, 11, 15, 17-heptametil-19-((2S, 3S)-3-metil-6-okso-3, 6-dihidro-2H-piran-2-il)-8-okso-nonadeka-
2. 10. 12. 16. 18- pentaenoinske kiseline
(2-metil-2-metildisulfanil-propil)-amid (2E, 10E, 12E, 16Z, 18E)-(R)-6-hidroksi-3, 5, 7, 9, 11, 15, 17-heptametil-19-((2S, 3S)-3-metil-6-okso-3, 6-dihidro-2H-piran-2-il)-8-okso-nonadeka-2, 10, 12, 16, 18-pentaenoinske kiseline
(2-merkapto-2-metil-propil)-amid (2E, 10E, 12E, 16Z, 18E)-(R)-6-hidroksi-3, 5, 7, 9, 11, 15, 17-heptametil-19-((2S, 3S)-3-metil-6-okso-3, 6-dihidro-2H-piran-2-il)-8-okso-nonadeka-
2. 10. 12. 16. 18- pentaenoinske kiseline
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, hidrati, ili hidratisane soli, ili polimorfne kristalne strukture ovih jedinjenja, ili njihovi optički izomeri, racemati, dijastereomeri ili enantiomeri.
Da bi se povezao ovaj derivat sa agensom za vezivanje za ćeliju, ovaj derivat mora da sadrži ostatak (vezivna grupa) koji dozvoljava da se taj derivat veže sa agensom za vezivanje za ćeliju preko veze, kao što je disulfidna veza, sulfidne (ili kako se ovde naziva, tioetarske) veze, grupe labilne prema kiselini, fotolabilne grupe, grupe labilne prema peptidazi ili grupe labilne prema esterazi. Ovi derivati se dobijaju tako da sadrže ostatak koji je neophodan za povezivanje derivata leptomicina sa agensom za vezivanje za ćeliju, preko, na primer, disulfidne veze, tioetarske veze, grupe labilne kiseline, prema peptidazi labilne grupe ili prema esterazi labilne grupe. Da bi se još pojačala rastvorljivost u vodenim rastvorima, vezivna grupa može sadržati i polietilenglikolni distancer. Poželjno je da se koristi sulfidna ili disulfidna veza, zato što redukciona sredina targetirane ćelije dovodi do cepanja sulfida ili disulfida i oslobađa derivate i sa tim povezani porast citotoksičnosti.
Jedinjenja iz ovog pronalaska se mogu dobiti raznim putevima sinteze. Reagensi i polazni materijali su komercijalno dostupni, ili se lako sintetizuju tehnikama dobro
poznatim onima koji su verzirani u stanje tehnike. Postupci sinteze derivata leptomicina, koji se mogu koristiti u citotoksičnim konjugatima iz ovog pronalaska, zajedno sa postupcima konjugovanja pomenutih derivata leptomicina sa agensima za vezivanje za ćeliju, kao što su antitela, detaljno su opisani u European Patent Application No. 06290948. 6, čiji je sadržaj ovde priključen kroz citat.
ANALOZI CC-1065
Citotoksični agens, koji se može koristiti u citotokičnim konjugatima iz ovog pronalaska, može biti takođe CC-1065 ili neki njegov derivat.
CC-1065 je snažan anti-tumorni antibiotik, izolovan iz čorbe kulture Streptomyces zelensis. CC-1065 je oko 1000 puta snažniji in vitro, nego obično korišćeni lekovi protiv kancera, kao što su doxorubicin, methotrexate i vincristine (B. K. Bhuyan et al., Cancer Res., 42, 3532-3537(1982)). CC-1065 i njegovi analozi su opisani u U. S. Patent No. 6, 372, 738, 6, 340, 701, 5, 846, 545 i 5, 585, 499.
Citotoksična snaga CC-1065 je u korelaciji sa njegovom aktivnošću alkilovanja i njegovim vezivanjem za DNK, ili interkalacionom aktivnošću sa DNK. Ove dve aktivnosti su koncentrisane na odvojenim delovima molekula. Tako, aktivnost alkilovanja je sadržana ne subjedinici ciklopropanpiroindola (CPI), a aktivnost vezivanja DNK je koncetrisana na dve pirolindolske subjedinice.
Mada CC-1065 ima neke interaktivne karakteristike kao citotoksični agens, on ima ograničenja u terapeutskoj upotrebi. Ordiniranje CC-1065 miševima izaziva odloženu hepatotoksičnost, koja vodi smrti 50. dana posle jedne intravenozne doze od 12, 5 pg/kg (V. L. Reynolds et al., J. Antibiotics, XXIX, 319-334(1986)). Ovo je potstaklo napore za razvoj analoga koji ne izazivaju odloženu toksičnost, a opisana je sinteza prostijih analoga modelovanih na CC-1065 (M. A. VVarpehoski et al., J. Med. Chem., 31, 590-603(1988)).
U drugoj seriji analoga, CPI ostatak je zamenjen sa ostatkom ciklopropabenzindola (CBI) (D. L. Boger et al., J. Org. Chem., 55, 5823-5833(1990); D. L. Boger et al., BioOrg. Med. Chem. Lett., 1, 115-120(1991)). Ova jedinjenja zadržavaju visoku snagu polaznog leka in vitro, ali bez izazivanja odložene toksičnosti kod miševa. Kao i CC-1065, ova jedinjenja su agensi za alkilovanje koji se na kovalentan način vezuju u manji žljeb DNK, izazivajući smrt ćelije. Međutim, kliničko vrednovanje većine analoga koji su obećavali, Adozelesin i Carzelesin, je dovelo do razočaravajućih rezultata (B. F. Foster et al., Investigational New Drugs, 13, 321-326(1996); I. Wolff et al., Clin. Cancer Res., 2, 1717-1723(1996)). Ovi lekovi pokazuju slabe terapeuske efekte zbog njihove sistemske toksičnosti.
Terapeutska efikasnost analoga CC-1065 može se uveliko poboljšati promenom distribucije in vivo, preko targetiranog oslobađanja na mesto tumora, što dovodi do smanjene toksičnosti u tkivima koja nisu targetirana, pa tako i niže sistemske toksičnosti. Da bi se postigao ovaj cilj, opisani su konjugati analoga i derivata CC-1065 sa agensom za vezivanje za ćelije, koji specifično targetiraju ćelije tumora (U. S. Patent 5, 475, 092, 5, 585, 499, 5, 846, 545). Ovi konjugati tipično pokazuju visoku citotoksičnost na specifičnom targetu in vitro, i izuzetnu anti-tumornu aktivnost na modelima ksenografta humanog tumora kod miševa (R. V. J. Chari et al., Cancer Res., 55, 4079-4084(1995)).
Nedavno su opisani prolekovi analoga CC-1065 sa poboljšanom rastvorljivošću u vodenim medijumima (European Patent Application No. 06290379. 4). U ovim prolekovima, fenolna grupa dela molekula za alkilovanje je zaštićena sa funkcionalnošću koja čini lek stabilnim pri skladištenju u kiselim vodenim rastvorima i pruža povećanu rastvorljivost leka u vodi, u poređenju sa nezaštićenim analogom. Ova zaštitna grupa se lako otcepljuje in vivo, pri fiziološkom pH, dajući odgovarajući aktivni lek. Među prolekovima, opisanim u EP 06290379. 4, fenolni supstituent je zaštićen kao sulfonska kiselina, sadržeći fenil karbamat, koji poseduje naelektrisanje pri fiziološkom pH, pa na taj način poboljšava rastvorljivost u vodi. Da bi se još poboljšala rastvorljivost u vodi, može se uvesti opcioni polietilenglikolski distancer u linker između indolil
distancera ne menja snagu leka.
Postupci sinteze analoga CC-1065, koji se mogu koristiti u citotoksičnim konjugatima iz ovog pronalaska, zajedno sa postupcima konjugovanja ovih analoga sa agensima za vezivanje za ćeliju, kao što su antitela, detaljno su opisani u EP 06290379. 4 (čiji sadržaj je ovde priključen kroz citat) i u U. S. Patent No. 5, 475, 092, 5, 846, 545, 5, 585, 499, 6, 534, 660 i 6, 586, 618, kao i u U. S. Application No. 10/116, 053 i 10/265/452.
DRUGI LEKOVI
Lekovi, kao što su methotrexate, daunorubicin, vincristine, vinblastine, melphalan, mitomycin C, chlorambucil, calicheamicin, tubulysin i analozi tubulysin-aduocarmycin-a i analozi duocarmycin-a, dolastatin i analozi dolastatin-a, takođe su pogodni za dobijanje konjugata iz ovog pronalaska. Molekuli leka se mogu takođe povezati sa molekulom antitela preko intermedijarnog molekula nosača, kao što je serum albumina. Jedinjenja doxyrubicin i daunorubicin, mogu takođe biti korisni citotoksični agensi, kao što je opisano u, na primer, U. S. Serial No. 09/740991.
TERAPEUTSKI PREPARAT
Ovaj pronalazak se odnosi na terapeutski preparat za tretman hiperproliferativnog poremećaja, ili inflamatorne bolesti, ili autoimune bolesti sisara, koji sadrži terapeutski efikasnu količinu jedinjenja iz ovog pronalaska i farmaceutski prihvatljivi nosač. U jednoj realizaciji, pomenuti farmaceutski preparat je za tretman kancera, uključujući (ali bez ograničavanja) sledeće: karcinom, kao što je karcinom bešike, dojke, debelog creva, bubrega, jetre, pluća, jajnika, pankreasa, stomaka, cerviksa, tiroide i kože; uključujući karcinom skvamoznih ćelija; hematopoietičke tumore limfoidne loze, uključujući leukemiju, akutnu limfocitnu leukemiju, akutnu limfoblastnu leukemiju, limfom B-ćelija, limfom T-ćelija, Burkitt-ov limfom; hematopoietičke tumore mijeloidne loze, uključujući akutne i hronične mijelogene leukemije i promijelocitnu leukemiju; tumore mezenhimalnog porekla, uključujući fibrosarkom i rabdomiosarkom; druge tumore, uključujući melanom, semiom, tetratokarcinom, neuroblastom i gliom; tumore centralnog
i perifernog nervnog sistema, uključujući astrocitom, neuroblastom, gliom i švanome; tumore mezenhimalnog porekla, uključujući fibrosarkom, rabdomioskaram i osteosarkom; i druge tumore, uključujući melanom, kseroderma pigmentozum, keratoaktantom, seminom, folikularni kancer tiroide i teratokarcinom, kao i druge kancere za koje tek treba da se odredi da dominantno ekspresuju CD38. U poželjnoj realizaciji, farmaceutski preparati iz ovog pronalaska se koriste za tretman kancera, kao što su non-Hodgkin-ov limfom, Hodgkin-ov limfom, lekemija dlakavih ćelija, multipli mijelom, hronična limfocitna leukemija, hronična mijeloidna leukemija, akutna mijeloidna leukemija, ili akutna limfocitna leukemija, u kojima se ekspresuje CD38, kao i drugi kanceri kod kojih tek treba da se odredi da se dominantno ekspresuje CD38. U sledećoj realizaciji može se koristiti farmaceutski preparat iz ovog pronalaska za tretiranje autoimunih bolesti, kao što je sistemski lupus eritematozus, reumatoidni artritis, multipla skleroza, Crohn-ova bolest, ulcerativni kolitis, gastritis, Hashimoto-ov tiroiditis, ankilozni spondilitis, krioglobulinemički vaskulitis povezan sa hepatitisom C, hronični fokalni encefalitis, bulozni pemfigoid, hemofilija A, membranoproliferativni glomerulonefritis, Sjogren-ov sindrom, dermatomiozitis odraslih i dece, polimiozitis odraslih, hronična urtikarija, primarna bilijarna ciroza, idiopatska trombocitopenična purpura, neuromijelitis optika, Graves-ova distiroidna bolest, bulozni pemfigoid, membranoproliferativni glomerulonefritis, Churg-Srauss-ov sindrom i astma. U sledećoj realizaciji pomenuti farmaceutski preparat se odnosi i na druge poremećaje, kao što su na primer, odbacivanje grafta, kao što je odbacivanje transplantata bubrega, odbacivanje transplantata jetre, odbacivanje transplantata pluća, odbacivanje transplantata srca, i odbacivanje transplantata koštane srži; bolest grafta protiv domaćina; virusne infekcije, kao što je mV infekcija, HIV infekcija, AIDS, itd.; i infekcije parazitima, kao što su giardiaza, amebiaza, šistosomiaza i druge, koje određuje onaj ko je uobičajeno verziran u struci.
Ovaj pronalazak daje farmaceutske preparate koji sadrže:
a) efikasnu količinu antitela, fragmenta antitela ili drugog knjugata iz ovog pronalaska, i
b) farmaceutski prihvatljiv nosač, koji može biti inertan ili fiziološki aktivan.
Kako se ovde koristi, "farmaceutski prihvatljivi nosači" su bilo koji i svi rastvarači, medijumi za dispergovanje, obloge, antibakterijski agensi i antigljivični agensi i slično, koji su fiziološki kompatiibilni. Primeri pogodnih nosača, razblaživača i/ili ekscipijenata su jedan ili više, koji se biraju između vode, slanog rastvora, slanog fosfatnog pufera, dekstroze, glicerina, etanaola, i slično, kao i njihove kombinacije. U mnogim slučajevima, poželjno je uključiti u preparate i izotonične agense, kao što su šećeri, polialkoholi ili natrijum-hlorid. Posebno relevantni primeri pogodnog nosača su: (1) Dulbecco-ov slani fosfatni pufer, pH~7, 4, koji sadrži ili ne sadrži od oko 1 mg/mL do 25 mg/ml_ seruma humanog albumina, (2) 0, 9% slani rastvor (0, 9 m/V % natrijum-hlorid (NaCI)), i (3) 5 m/V % dekstroza; koji takođe mogu da sadrže neki antioksidant, kao što je triptamin, i agens za stabulizaciju, kao što je Tvveen 20.
Ovi preparati mogu takođe sadržati i još neki terapeutski agens, prema potrebi za posmatrani poremećaj koji se tretira. Poželjno je da antitelo, fragment antitela, konjugat antitela iz ovog pronalaska i dodatno aktivno jedinjenje imaju komplementarne aktivnosti i da ne utiču štetno jedan na drugi. U poželjnoj realizaciji, dodatni terapeutski agens je antagonist epidermalnog faktora rasta (EFG), faktora rasta fibroplasta (FGF), faktora rasta hepatocita (HGF), faktora tkiva (TF), proteina C, proteina S, faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGF), heregulina, proteina za stimulisanje makrofage (MSP) ili faktora rasta vaskularnog endotelijuma (VEGF), ili antagonist receptora epidermalnog faktora rasta (EGF), faktora rasta fibroplasta (FGF), faktora rasta hepatocita (PIGF), faktora tkiva (TF), proteina C, proteina S, faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGF), heregulina, proteina za stimulisanje makrofage (MSP) ili faktora rasta vaskularnog endotelijum (VEGF), uključujući receptor PIER2, receptor PIER3, c-MET i druge receptore tirozin kinaza. U poželjnoj realizaciji, dodatni terapeutski agens je agens koji targetira klastere diferencijacije (CD) antigena, uključujući CD3, CD14, CD19, CD20, CD22, CD25, CD28, CD30, CD33, CD36, CD40, CD44, CD52, CD55, CD59, CD56, CD70, CD79, CD80, CD103, CD134, CD137, CD138 i CD152. U poželjnoj realizaciji dodatni terapeutski agens je hemoterapeutik ili imunomodulatorni agens.
Preparati iz ovog pronalaska mogu biti u raznim oblicima. To su, na primer, tečni, polučvrsti i čvrsti oblici za doziranje, ali poželjan oblik zavisi od nameravanog načina ordiniranja i terapeutske primene. Tipični poželjni preparati su u obliku injektibilnih ili infuzionih rastvora. Poželjan način ordiniranja je parenteralni (npr. intravenozni, intramuskularni, intraperitonealni, subkutani). U poželjnoj realizaciji, preparati iz ovog pronalaska se ordiniraju intravenozno, kao bolus ili kontinualna infuzija, tokom određenog perioda vremena. U sledećoj poželjnoj realizaciji, oni se injektiraju intramuskularno, subkutano, intra-artikularno, intrasinovijalno, intratumoralno, peritumoralno, intraleziono ili perileziono, da bi se iskazali lokalni, kao i sistemski terapeutski efekti.
Sterilni preparati za parenteralno ordiniranje se mogu dobiti ugrađivanjem antitela, fragmenta antitela ili konjugata antitela iz ovog pronalaska u zahtevanu količinu odgovarajućeg rastvarača, posle čega sledi sterilizacija mirkofiltriranje. Kao rastvarač, ili tečni nosač, može se koristiti voda, slani rastvor, slani fosfatni pufer, dekstroza, glicerin, etanol i slično, kao i njihove kombinacije. U mnogim slučajevima je poželjno da se u preparat uključe izotonični agensi, kao što su šećeri, polialkoholi, ili natrijum-hlorid. Ovi preparati mogu takođe da sadrže adjuvante, a naročito agense za kvašenje, izotonizovanje, emulgovanje, dispergovanje i stabilizovanje. Sterilni preparati za parenteralno ordiniranje se mogu takođe dobiti u obliku sterilnih čvrstih preparata koji se mogu u trenutku upotrebe rastvoriti u sterilnoj vodi ili nekom drugom sterilnom medijumu za injektiranje.
Antitelo, fragment antitela ili konjugat antitela iz ovog pronalaska, može se takođe ordinirati oralno. Kao čvrsti preparati za oralno ordiniranje mogu se koristiti tablete, pilule, prahovi (u želatinskim kapsulama, kesicama) ili granule. U ovim preparatima, aktivni sastojak u skladu sa ovim pronalaskom se meša sa jednim ili više inertnih razblaživača, kao što su škrob, celuloza, saharoza, laktoza ili silicijum-dioksid, u atmosferi argona. Ovi preparati mogu takođe da sadrže supstance različite od ovih razblaživača, na primer, jedan ili više lubrikanata, kao što su magnezijum-stearat ili talk, agens za bojenje, za oblaganje (tablete obložene šećerom) ili glazure.
Kao tečni preparati za oralno ordiniranje mogu se koristiti farmaceutski prihvatljivi rastvori, suspenzije, emulzije, sirupi i eliksiri, koji sadrže inertne razblaživače, kao što su voda, etanol, glicerin, biljna ulja ili parafinsko ulje. Ovi preparati mogu da sadrže i supstance različite od razblaživača, na primer, agense za kvašenje, zaslađivače, zgušnjivače, arome ili stabilizatore.
Doza zavisi od željenog efekta, trajanja tretmana i puta ordiniranja koji se koristi; ona je obično između 5 mg i 1000 mg na dan, za oralno ordiniranje odrasloj osobi, sa jediničnom dozom koja se kreće od 1 mg do 250 mg aktivne supstance. Obično će doktor odrediti odgovarajuću dozu, zavisno od starosti, mase i drugih faktora, specifičnih za osobu koja treba da se tretira.
POSTUPCI TERAPEUTSKE UPOTREBE
U sledećoj realizaciji ovaj pronalazak daje postupak za ubijanje CD38+ ćelija, ordinranjem pacijentu, kome je to potrebno, antitela koje se vezuje za pomenuti CD38, a u stanju je da ubija pomenute CD38+ ćelije apoptozom, sa ADCC i/ili CD. Za terapiju se može koristiti bilo koja vrsta antitela, fragmenata antitela ili citotoksičnih konjugata iz ovog pronalaska. Tako, ovaj pronalazak obuhvata upotrebu anti-CD38 monoklonalnih antitela, njihovih fragmenata, ili njihovih citotoksičnih konjugata, kao medikamenata.
U poželjnoj realizaciji, antitela, fragmenti antitela ili citotoksični konjugati iz ovog pronalaska se koriste za tretman hiperproliferativnog poremećaja, ili inhflamatorne bolesti, ili autoimune bolesti sisara. U poželjnijoj realizaciji, jedan od ovde opisanih farmaceutskih preparata, koji sadrži antitelo, fragment antitela ili citotoksični konjugat iz ovog pronalaska, koristi se za tretman hiperproliferativnog poremećaja sisara. U jednoj realizaciji taj poremećaj je kancer. Posebno, kancer predstavlja metastazirani kancer.
Prema tome, farmaceutski preparati iz ovog pronalaska su korisni za tretman ili prevenciju raznih kancera, uključujući (ali bez ograničavanja) sledeće: karcinom, kao što je karcinom bešike, dojke, debelog creva, bubrega, jetre, pluća, jajnika, pankreasa, stomaka, cerviksa, tiroide i kože; uključujući karcinom skvamoznih ćelija;
hematopoietičke tumore limfoidne loze, uključujući leukemiju, akutnu limfocitnu leukemiju, akutnu limfoblastnu leukemiju, limfom B-ćelija, limfom T-ćelija, Burkitt-ov limfom; hematopoietičke tumore mijeloidne loze, uključujući akutne i hronične mijelogene leukemije i promijelocitnu leukemiju; tumore mezenhimalnog porekla, uključujući fibrosarkom i rabdomiosarkom; druge tumore, uključujući melanom, semiom, tetratokarcinom, neuroblastom i gliom; tumore centralnog i perifernog nervnog sistema, uključujući astrocitom, neuroblastom, gliom i švanome; tumore mezenhimalnog porekla, uključujući fibrosarkom, rabdomioskaram i osteosarkom; i druge tumore, uključujući melanom, kseroderma pigmentozum, keratoaktantom, seminom, folikularni kancer tiroide i teratokarcinom, kao i druge kancere za koje tek treba da se odredi, da dominantno ekspresuju CD38. Poželjan poremećaj je NHL, BL, MM, B-CLL, ALL, TCL, AML, HCL, HL ili CML, u kojima se ekspresuje CD38, ako i drugi kanceri za koje tek treba da se odredi, da dominantno ekspresuju CD38. U sledećoj realizaciji može se koristiti farmaceutski preparat iz ovog pronalaska za tretiranje autoimunih bolesti, kao što je sistemski lupus eritematozus, reumatoidni artritis, multipla skleroza, Crohn-ova bolest, ulcerativni kolitis, gastritis, Hashimoto-ov tiroiditis, ankilozni spondilitis, krioglobulinemični vaskulitis povezan sa hepatitisom C, hronični fokalni encefalitis, bulozni pemfigoid, hemofilija A, membranoproliferativni glomerulonefritis, Sjogren-ov sindrom, dermatomiozitis odraslih i dece, polimiozitis odraslih, hronična urtikarija, primarna bilijarna ciroza, idiopatska trombocitopenična purpura, neuromijelitis optika, Graves-ova distiroidna bolest, bulozni pemfigoid, membranoproliferativni glomerulonefritis, Churg-Srauss-ov sindrom i astma. U sledećoj realizaciji pomenuti farmaceutski preparat se odnosi i na druge poremećaje, kao što su na primer, odbacivanje grafta, kao što je odbacivanje transplantata bubrega, odbacivanje transplantata jetre, odbacivanje transplantata pluća, odbacivanje transplantata srca, i odbacivanje transplantata koštane srži; bolest grafta protiv domaćina; virusne infekcije, kao što je mV infekcija, HIV infekcija, AIDS, itd.; i infekcije parazitima, kao što su giardiaza, amebiaza, šistosomiaza i druge, koje određuje onaj ko je uobičajeno verziran u struci.
Slično, ovaj pronalazak daje postupak za inhibiranje rasta odabranih populacija ćelija, koje sadrže targetirane ćelije, ili tkiva koje sadrži targetirane ćelije, sa efikasnom količinom antitela, fragmenta antitela ili konjugata antitela iz ovog pronalaska, ili antitela, fragmenta antitela ili terapeutskog agensa koji sadrži citotoksični konjugat, bilo samog ili u kombinacij sa drugim citotoksičnim ili terapeutskim agensom. U poželjnoj realizaciji treapeutski agens je antagonist epidermalnog faktora rasta (EGF), faktora rasta fibroplasta (FGF), faktora rasta hepatocita (HGF), faktora tkiva (TF), proteina C, proteina S, faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGF), heregulina, proteina za stimulisanje makrofage (MSP) ili faktora rasta vaskularnog endotelijuma (VEGF), ili antagonist receptora epidermalnog faktora rasta (EGF), faktora rasta fibroplasta (FGF), faktora rasta hepatocita (HGF), faktora tkiva (TF), proteina C, proteina S, faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGF), heregulina, proteina za stimulisanje makrofage (MSP) ili faktora rasta vaskularnog endotelijuma (VEGF), uključujući receptor HER2, receptor HER3, c-MET i druge receptore tirozin kinaza. U poželjnoj realizaciji, dodatni terapeutski agens je agens koji targetira klastere diferencijacije (CD) antigena, uključujući CD3, CD14, CD19, CD20, CD22, CD25, CD28, CD30, CD33, CD36, CD40, CD44, CD52, CD55, CD59, CD56, CD70, CD79, CD80, CD103, CD134, CD137, CD138 i CD152. U poželjnoj realizaciji dodatni terapeutski agens je hemoterapeutik ili imunomodulatorni agens.
Postupak inhibiranja rasta odabrane populacije ćelija može se obaviri in vitro, in vivo ili ex vivo. Kako se ovde koristi, "inhibiranje rasta” znači usporavanje rasta ćelija, smanjivanje vitalnosti ćelija, izazivanje smrti ćelija, liza ćelija i indukovanje smrti ćelija, bilo tokom kratkog ili dugog perioda vremena.
Primeri upotreba in vitro, su tretmani autologne koštane srži, pre njene transplantacije u istog pacijenta, da bi se ubile bolesne ili maligne ćelije; tretmani koštane srži pre njene transplantacije u cilju ubijanja kompetentnih T ćelija i prevencije bolesti grafta protiv domaćina (GVHD); tretmani kultura ćelija sa ciljem ubijanja svih ćelija izuzev željenih varijanti, koje ne ekspresuju targetirani antigen; ili ubijanje varijanata koje ekspresuju neželjeni antigen.
Uslove ne-kliničke upotrebe in vitro, lako određuje onaj ko je uobičajeno verziran u stanje tehnike.
Primeri kliničke ex vivo upotrebe su uklanjanje ćelija tumora ili limfoidnih ćelija iz koštane srži, pre autologne transplantacije u tretmanu kancera ili u tretmanu autoimune bolesti, ili uklanjanje T ćelija i drugih limfoidnih ćelija iz autologne ili alogene koštane srži ili tkiva, pre transplantacije, u cilju sprečavanja bolesti grafta protiv domaćina (GVHD). Tretman se može obaviti kao što sledi. Sakupi se koštana srž iz pacijenta ili druge osobe, a zatim se inkubira u medijumu koji sadrži serum, kome je dodat citotoksični agens iz ovog pronalaska. Opseg koncentracije je od oko 10 pM do 1 pM, tokom oko 30 min do oko 48 h, na oko 37°C. Tačne uslove koncentracije i vremena inkubacije, tj. dozu, lako određuje onaj ko je uobičajeno verziran u stanje tehnike. Posle inkubacije, ćelije koštane srži se isperu medijumom koji sadrži serum, pa se vrate pacijentu i. v. infuzijom, u skladu sa poznatim postupcima. U uslovima kada pacijent prima drugi tretman, kao što je tokom ablativne hemoterapije ili ozračivanja celog tela, između vremena sakupljanja koštane srži i ponovne infuzije tretiranih ćelija, tretirane ćelije koštane srži se čuvaju smrznute u tečnom azotu, korišćenjem standardne medicinske opreme.
U kliničkoj upotrebi in vivo, antitelo, fragment antitela koji vezuje epitop, ili citotoksični konjugat iz ovog pronalaska, se dodaju u rastvore koji se testiraju na sterilnost i sadržaje endotoksina. Primeri pogodnih protokola ordiniranja citotoksičnih konjugata su kao što sledi. Konjugati se daju jedanput nedeljno, tokom 4 nedelje, svake nedelje kao i. v. bolus. Doziranje bolusa je u 50 do 100 mL normalnog slanog rastvora, kome je dodato 5 do 10 mL seruma humanog albumina. Doze su 10 pg do 100 mg po jednom ordiniranju, i. v. (opseg od 100 ng do 1 mg/kg na dan). Poželjnije je da se doze kreću od 50 pg do 30 mg. Najpoželjnije je da se doze kreću od 1 mg do 20 mg. Posle 4 nedelje tretmana, pacijent nastavlja da prima tretman na nedeljnoj bazi. Specifične kliničke protokole, u pogledu puta ordiniranja, ekscipijenata, razblaživača, doza, vremena itd., može da određuje onaj ko je uobičajeno verziran u stanje tehnike, kako to traži klinička situacija.
DIJAGNOSTIKA
Antitela ili fragemnti antitela iz ovog pronalaska se mogu takođe koristiti za detekciju CD38 u biološkom uzorku in vitro ili in vivo. U jednoj realizaciji, anti-CD38 antitela iz ovog pronalaska se koriste za određivanje sadržaja CD38 u nekom tkivu ili u ćelijama iz tog tkiva. U poželjnoj realizaciji, tkivo je obolelo tkivo. U poželjnoj realizaciji ovog postupka, tkivo predstavlja tumor ili njegova biopsija. U poželjnoj realizaciji ovog postupka, tkivo ili njegova biopsija se prvo izvadi iz pacijenta, pa se sadržaji CD38 u tom tkivu ili biopsiji mogu odrediti nekim imunotestom sa antitelima ili fragmentima antitela iz ovog pronalaska. U sledećoj poželjnoj realizaciji, sadržaj CD38 se određuje u uzorku tkiva ili njegovj biopsiji, koji mogu biti smrznuti ili fiksirani. Isti postupak se može koristiti za određivanje drugih svojstava proteina CD38, kao što su sadržaji ćelija na površini, ili lokalizacija ćelija.
Gore opisani postupak se može koristiti za dijagnozu kancera kod osobe za koju se zna ili se sumnja da ima kancer, pri čemu se sadržaj CD38, koji se izmeri u tom pacijentu, poredi sa istim u normalnoj, referentnoj osobi, ili sa standardom. Pomenuti postupak se može zatim koristiti za određivanje da li taj tumor ekspresuje CD38, što može ukazati da će taj tumor dobro odgovoriti na tretman antitelima, fragmentima antitela ili konjugatima antitela iz ovog pronalaska. Poželjno je da tumor predstavlja NHL, BL, MM, B-CLL, ALL, TCL, AML, HCL, HL ili CML, u kojima se CD38 ekspresuje, kao i drugi kanceri kod kojih tek treba da se odredi da dominantno ekspresuju CD38.
Ovaj pronalazak daje još monoklonalna antitela, humanizovana antitela i fragement koji vezuje epitop, koji su još obeleženi za upotrebu u istraživanjima ili dijagnostičkim primenama. U poželjnim realizacijama, obeležje predstavlja radioaktivno obeležavanje, fluorofor, hromofor, agens za imidž ili metalni jon.
Daje se takođe postupak za dijagnozu u kome se pomenuta obeležana antitela, ili fragmenti koji vezuju epitop, ordiniraju subjektu pod sumnjim da ima kancer ili inflamatornu bolest ili autoimunu bolest, pa se meri ili prati raspodela obeleženog agensa unutar tela te osobe.
KOMPLET
Ovaj pronalazak sadrži takođe i komplete, npr. koji sadrže opisani citotoksični konjugat i uputstvo za upotrebu tog citotoksičnog konjugata za ubijanje određene vrste ćelija. Ovo uputstvo može sadržati upute za upotrebu citotoksičnih konjugata in vitro, in vivo i ex vivo.
Tipično, ovaj komplet ima odeljak u kome je sadržan citotoksični konjugat. Ovaj citotoksični konjugat može biti u liofilizovanom obliku, tečnom obliku, ili nekom drugom obliku uključenom u komplet. Ovaj komplet može takođe da sadrži dodatne elemente neophodne za praktikovanje postupka opisanog u uputstvu kompleta, kao što su sterilizovani rastvor za rekonstituisanje liofilizovanog praha, dodatne agense za kombinovanje sa citotoksičnim konjugatom pre ordiniranja pacijentu, i pomoćne spravice koje pomažu u ordiniranju tog konjugata pacijentu.
PRIMERI
Ovaj pronalazak sada opisuju primeri koji slede, koji su samo ilustracija, a nisu namenjeni ograničavanju ovog pronalaska.
Primer 1
Mišja CD38 antitela
Ćelije 300-19, soj pre-B ćelija, izveden iz miša Balb/c (M. G. Reth et al., Nature, 17, 353-355(1985)), stabilno ekspresuju visok sadržaj humanog CD38 i koriste se za imunizaciju miševa Balb/c VAF. Miševi se subkutano imunizuju sa oko 5*106 ćelija300-19 koje ekspresuju CD38, po mišu, na svakih 2-3 nedelje, u skladu sa standardnim protokolima imunizacije, koji se koriste u ImmunoGen, Ine. Imunizovani moševi su injektirani sa drugom dozom antigena, tri dana pre nego što su žrtvovani, radi generisanja hibridome. Sakupi se slezina miša, u skladu sa standardnim protokolima za animalna bića, i samelje između dva sterilna, smrznuta mikroskopska stakla, kako bi se dobila supenzija jednih ćelija u medijumu RPMI-1640. Peletiraju se ćelije slezine, operu i fuzionišu sa ćelijama mišjeg mijeloma P3X63Ag8. 563 (J. F. Kearney et al., J. Immunol., 123, 1548-1550(1979)), korišćenjem polietilenglikola-1500 (Roche 783 641). Fuizionisane ćelije se
ponovo suspenduju u selekcionom medijumu RPMI-1640, koji sadrži hipoksantin-aminopterin-timidin (HAT) (Sigma H-0262), pa se selekcionišu za rast na pločama za kultivisanje sa 96 bazenčića ravnog dna (Corning-Costar 3596, 200 pL suspenzije ćelija po bazenčiću), na 37°C (5% C02). Posle 5 dana inkubacije, ukloni se 100 pL iz bistrog sloja svakog bazenčića, pa se zameni sa 100 µL medijuma RPMI-1640, koji sadrži kao dodatak hipoksantin-timidin (HT) (Sigma H-0137). Sa inkubacijom na 37°C (5% C02) se nastavi sve dok kloni hibridome ne budu spremni za testiranje antitela. Mogu se takođe koristiti i druge tehnike imunizacije i dobijanja hibridoma, uključujući i one koje su opisane u J. Langone i H. Vunakis (uredn., "Methods in Enzimology”, Vol. 121, "Imunochemical Techniques, Part I”; Academic Press, Florida; i E. Harlovv i D. Lane, "Antibodies: A Laboratory Manual”, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 1988).
Klasifikacijom ćelija aktiviranih fluorescencijom (FACS), koristeći instrument Bacton Dickinson FACSCalibur, ili FACSArray machine, bistri slojevi kulture iz hibridoma su testirani (sa FITC ili PE-konjugovanim anti-mišjim IgG antiserumom) na izlučivanje mišjih monoklonalnih antitela, koja se vezuju za ćelije 300-19, koje eskpresuju CD38, ali ne i za polazne ćelije 300-19. Kloni hibridoma, za koje je testiranjem utvrđeno da su pozitivni, bili su subklonirani, pa je identifikovan izotip svakog, koji je izlučivao anti-CD38 antitelo, korišćenjem komercijalnih reagenasa za izotipove (Roche 1493027). Ukupno je 29 antitela bilo pozitivno na vezivanje CD38, pa su prečišćena hromatoghrafijom na Proteinu A ili G, korišćenjem standardnog protokola, pa zatim dalje karakterisani
Primer 2
Karakterizacija vezivanja anti-CD38 antitela
FACS histogrami pokazuju na Slici 1 vezivanje anti-CD38 antitela, 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 za ćelije 300-19 koje ekspresuju CD38, i odsustvo vezivanja za polazne ćelije 300-19. Inkubira se 3 h 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitelo (10 nM) ili sa ćelijama 300-19 koje ekspresuju CD38, ili sa polaznim ćelijama 300-19 (1 -2x 105 ćelija po uzorku) u 100 µL ledom-ohlađenog medijuma RPMI-1640, sa dodatkom 2% normalnog kozjeg seruma. Zatim se ćelije peletiraju, operu i inkubiraju 1 h na ledu, sa FITC-konjugovanim kozjim anti-mišjim IgG-antitelom (Jackson Laboratory, 100 µL, 6 pg/mL u hladnom medijum RPMI-1640, sa dodatkom 2% normalnog kozjeg seruma). Ćelije se ponovo peletiraju, operu, ponovo suspenduju u 200 µL PBS, koji sadrži 1% formaldehida, pa analiziraju korišćenjem instrumenta FACSCalibur flow cytometer, pomoću softvera CellOuest (BD Biosciences).
FACS histogrami ćelija 300-19 koje ekspresuju CD38, inkubiranih sa 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 ili 38SB39, pokazuju jako fluorescentno pomeranje, u poređenju sa odgovarajućom negativnom kontrolom (ćelije inkubirane samo sa FITC-konjugovanim, kozjim anti-mišjim IgG-antitelom (Slika 1). Takođe, nije opaženo značajno fluorescentno pomeranje kada su polazne ćelije 300-19 inkubirane sa bilo kojim od ovih antitela. Slični rezultati su dobijeni i kada je korišćena pozitivna kontrola anti-CD38 antitela, AT13/5 (Serotec, MCA1019).
Jako fluoresentno pomeranje je opaženo takođe i kada su ćelije Ramos-ovog limfoma (ATCC CRL 1596) inkubirane sa 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 ili 38SB39 (Slika 1). Vrednosti opaženih konstanti disocijacije (Kp) antitela 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39, za veziavanje Ramos-ovih ćelija bile su određene na osnovu FACS analize krivih, prikazanih na Slici 2, korišćenjem nelinearnog regresionog postupka na sigmoidalne krive odgovora na dozu (softver, GraphPad Prizm, version 4, San Diego, CA). Vrednosti su bile sledeće: 0,10 nM, 0,10 nM, 0,12 nM, 0,16 nM, 0,11 nM i 3,03 nM, respektivno.
Primer 3
Izazivanje apoptoze u ćelijama Ramos-ovog i Daudi-evog limfoma, pomoću 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30. 38SB31 i 38SB39 antitela
Anti-CD38 antitela 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 izazivaju apoptozu u sojevima ćelija Ramos-ovog i Daudi-evog limfoma (ATCC CCI-213) i soju ćelija multiplog mijeloma MOLP-8 (DSMZ ACC 569). Stepen apoptoze je meren pomoću analize FACS, posle bojenja sa FITC konjugatima Annexin V (Biosource PHN1018) i TO-PRO-3 (Invitrogen T3605). Annexin V vezuje fosfatidilserin na spoljašnjoj, ali ne i na unutrašnjoj strani bisloja membrane ćelije nedirnutih ćelija. U zdravim, normalnim ćelijama, fosfatidilserin se ekspresuje na unutrašnjoj strani membranskog bisloja, a prelazak fosfatidilserina sa unutrašnjeg na spoljašnji listić membrane plazme je jedan od najranijih detektabilnih signala apoptoze. Vezivanje Annexin-a V je stoga signal za izazivanje apoptoze. TO-PRO-3 je boja monomerne cijaninske nukleinske kiseline, koja može da prodre samo kroz membranu plazme, ukoliko je integritet membrane prekinut, što se dešava u poslednjim stadijumima apoptoze.
Eksponencijalno rastuće ćelije se zaseju sa oko 2x105 ćelija/mL na ploče sa 24 bazenčića, u medijumu RPMI-1640, sa dodatkom 10% seruma goveđeg fetusa (FBS), 2 mM L-glutamina i 50 pg/mL gentamicina (u nastavku se označava kao kompletni medijum RPMI-1640). Ćelije obično rastu u kompletnom medijumu RPMI-1640, ukoliko se drugačije ne naglasi. Ćelije se inkubiraju sa anti-CD38 antitelima (10 nM), tokom 24 h, na 37°C, u vlažnoj atmosferi, koja sadrži 5% C02. Ćelije se zatim peletiraju, dva puta operu sa 500 µL PBS, ponovo suspenduju u 100 µL vezivnog pufera (uzet iz kompleta Annexin V-FITC), koji sadrži 5 µL Annexin-a V-FITC, pa se 15 min inkubiraju u ledu. Zatim se ovoj smeši doda 400 µL vezivnog pufera i TO-PRO-3 (do konačne koncentarcije 1 µM), pa se odmah meri fluorescencija povezana sa ćelijama na FTIC i TO-PRO-3, pomoću FACS. Za svaki uzorak prikupljeno je četiri hiljade očitavanja. Grafici mrlja fluorescencije za TO-PRO-3 (FL4-H; y-osa) i fluorescencije za Annexin V-FITC (FL1-F1; x-osa) generisani su kroišćenjem softvera CellOuest.
Rezultati su prikazani na Slikama 3 i 4. Slika 3 je primer ovog dijagrama mrlja za Daudi-eve ćelije, posle 24 h inkubacije sa raznim anti-CD38 antitelima. Prosečni procenti ćelija pozitivnih na Annexin V (obuhvaćene su ćelije i pozitivne i negativne na TO-PRO-3) iz dvostrukih uzoraka, određeni su iz ovih grafika, i prikazani na Slici 4. Neočekivano, 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 su pokazali jake aktivnosti apoptoze. Više od 30% Daudi-evih ćelija, izloženih nekom od ovih antitela su bile pozitivne na Annexin V, u poređenju sa samo oko 6% kod netretiranih ćelija (Slike 3 i 4A). Antitela 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 su pokazala najmanje 2, 4-struko jače aktivnosti apoptoze (24%, posle oduzimanja vrednosti za netretiranu kontrolu), nego prethodna mišja CD38 antitela, testirana sa istom koncentracijom, 10 nM (AT13/5, OKT10, IB4 i SUN-4B7, manje od 10% pozitivnih na Annexin V, posle oduzimanja vrednosti za neteretiranu kontrolu) i dva druga anti-CD38 antitela, generisana u našoj laboratoriji (38SB7 i 38SB23, nisu viša od netretirane kontrole, tj. oko 6% pozitivna na Annexin V) (Slika 4A). AT13/5 je dobavljen iz Serotec (MCA1019), a OKT10 je dobijen i prečišćen iz hibridoma (ATCC CRL-8022). IB4 i SUN-4BT su poklon prof. F. Malavsi, sa Univerziteta u Torinu, Italija. Slično, antitela 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 su pokazala najmanje 3, 5-puta jaču aktivnost apoptoze na drugim sojevima ćelija Ramos-ovog limfoma, (7% ili više pozitivnih na Annexin V, posle oduzimanja vrednosti za netretiranu kontrolu), nego mišja CD38 antitela iz prethodnog stanja tehnike, AT13/5, OKT10, IB4 i SUN-4B7, ili dva druga nova anti-CD38 antitela, 38SB7 i 38SB23 (manje od 2% pozitivna na Annexin V, posle oduzimanja vrednosti za netretiranu kontrolu) (Slika 4B). Konačno, 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 antitela su pokazala jaku pro-apoptotičku aktivnost i za soj ćelija multiplog mijeloma MOLP-8 (Slika 4C). Približno 50% ćelija MOLP-8, tretiranih sa ovim antitelima, bile su pozitivne na Annexin V, u poređenju sa 39% za netretirane ćelije. Nasuprot, tretman sa bilo kojim mišjim antitelima iz prethodnog stanja tehnike, AT13/5, OKT10, IB4 i SUN-4B7, ili sa dva nova anti-CD38 antitela 38SB7 i 38SB23, nisu dala povećanje apoptoze ćelija.
Primer 4
Kloniranje i sekvencioniranje lakog i teškog lanca anti-CD38 antitela Antitelo 38SB19
Dobijanje RNK iz ćelija hibrodoma, koje proizvode antitelo 38SB19 Preparati ukupne RNK su dobijeni iz 5x106 ćelija hibrodoma, koje proizvode antitelo 38SB19, koristeći komplet Oiagen's RNeasy miniprep kit. Ukratko, 5x106 ćelija se peletira i ponovo suspenduje u 350 µL pufera RLT (koji sadrži 1% |3-merkaptoetanola). Ova suspenzija se homogenizuje propuštanjem kroz iglu kalibra 21, 5 i špric, grubo 1020 puta, ili sve dok nije više viskozna. Ovom homogenatu se doda etanol (350 µL 70% etanola u vodi), pa se dobro promeša. Ovaj rastvor se prebaci u spin-kolonu, stavljenu u sabirnu epruvetu od 2 mL, pa se vrti 15 s sa >8000xg. Ova kolona se dva puta opere sa 500 µL pufera RPE, a zatim prebaci u svežu epruvetu i eluira sa 30 µL vode bez RN-aze i vrti 1 min. Eluat (30 µL) se vrati nazad u kolonu na sekundu i eluira tokom 1 min vrtenja. Alikvot ovog eluata od 30 µL se razblaži vodom, i koristi za merenje UV absorpcije na 260 nm, radi kvantittativnog određivanja RNK.
Dobijanje cDNK reakcijom sa reversnom transkriptazom (RT)
Generiše se cDNK varijabilnog regiona antitela 38SB19 iz ukupne RNK, koristeći komplet Invitrogen’s Superscript kit. Protokoli iz ovog kompleta su striktno poštovani, koristeći do 5 pg ukupne RNK iz Qianesy mini preps. Ukratko, RNK, 1 µL nasumičnog prajmera i 1 µL dNTP se dovedu do 12 µL sa sterilnom destilovanom vodom bez Rnaze, pa se 5 min inkubiraju na 65°C. Ova smeša se zatim drži najmanje 1 min na ledu. Zatim se dodaju 4 µL 5*reakcionog pufera, 2 µL 0, 1 m DTT i 1 µL RNazeOUT, pa se ta smeša 2 min inkubira na 25°C, u uređaju MJ Research thermalcycler. Ovaj uređaj se zaustavi tako da se doda 1 µL Superscriptil enzima, pa se ponovo startuje za sledećih 10 min, na 25°C, pre nego što se prebaci na 55°C, tokom sledećih 50 min. Reakcija se inaktivira zagrevanjem tokom 15 min na 70°C, pa se ukloni RNK, dodavanjem 1 µL Rnaze H, i 20 min inkubira na 37°C.
Degenerat PCR reakcija
Procedura prve runde degenerata PCR reakcije na cDNK, izvedene iz hibridoma ćelija, zasniva se na postupcima opisanim u Wang et al. (2000) i Co et al. (1992). Prajmeri za ovu rundu (Tabela 2) sadrže restrikciona mesta da se olakša kloniranje u pBluescript II plazmide.
Komponente PCR reakcije (Tabela 3) se pomešaju na ledu u PCR epruvetama tankih zidova, pa se zatim prebace u uređaj MJ Research thermacycler, prethodno zagrejan i zaustavljen na 94°C. Reakcije se obavljaju korišćenjem programa koji su dali Wang et al, 2000, kao što sledi:
Ime: Wang45 94°C 3, 00 min
94°C 0, 15 s 45°C 1, 00 min 72°C 2, 00 min Goto 2 29 puta 72°C 6, 00 min 4°C za stalno kraj
Smeše RCR reakcije se vode na 1% gelu nisko topive agaroze, iseca se traka od 300 do 400 bp, prečisti korišćenjem Zymo DNK mini kolona, pa pošalje u Agecourt biosciences, radi sekvencionisanja. Respektivni PCR prajmeri 5’ i 3’, se koriste za sekvencionisanje prajmera da bi se generisao varijabilni region cDNK u 38SB19, iz oba smera.
Kloniranje 5’ kraja sekvencije
Pošto degenerat prajmera, korišćenih za kloniranje sekvencija cDNK lakog lanca i teškog lanca varijabilnog regiona 38SB19, menja sekvencije sa 5’ kraja, potrebni su dodatni napori u sekvencionisanju da se dešifruje kompletna sekvencija. Preliminarna sekvencija cDNK iz postupaka opisanih gore, koristi se za traženje NCBI IgBlast mesta (http: //www-ncbi-nim. nih. gov. /igblast/) za mišju sekvenciju germ soja, iz koje se izvodi sekvencija 38SB19. Prajmeri PCR su dizajnirani (Tabela 3) da se poništi liderska sekvencija mišjeg antitela, tako da nova PCR reakcija može dati kompletan varijabilni region cDNK, neizmenjen PCR prajmerima. PCR reakcije, prečišćavanje traka i sekvencionisanje se obavljaju kao što je opisano gore.
Analiza peptida kao potvrda sekvencije
Informacija o sekvenciji cDNK za varijabilni region je kombinovana sa sekvencijom konstantnog regiona germ-soja, da bi se dobila čitava dužina sekvencija cDNK antitela. Zatim se izgračunavaju molekulske težine teškog lanca i lakog lanca, pa se porede sa molekulskim težinama dobijenim pomoću analize LC/MS za mišje 38SB19 antitelo.
Tabela 4 daje izračunatu masu iz sekvencija cDNK za 38SB19 LC i HC, zajedno sa vrednostima merenim pomoću LC/MS. Merenja molekulske težine su konzistentna sa sekvencijama CDNK i za laki i za teški lanac 38SB18.
Primer 5
Rekombinantna ekspresija hu38SB19 antitela
Sekvencije varijabilnog regiona hu38SB19 su optimizirane kodonom i sintetizovane pomoću Blue Heron Biotechnology. Sekvencije su okružene mestima restrikcionog enzima za kloniranje unutar okvira, sa respektivnim konstatnim sekvencijama i u jednom lancu i u tandemskom dvojnom lancu ekspresionih plazmida sisara. Varijabilnii region lakog lanca se klonira u EcoRI i BsiWI mesta i u ps38SB19LCZv1, 0 i ps38SB19v1, 00 plazmide (slika 5A i 5C). Varijabilni region teškog lanca se klonira u Hindlll i Apa1 mesta i u pd38SB19HCNv1, 0 i ps38Sb19v1. 00 plazmide (slika 5B i 5C). Ovi plazmidi se mogu koristiti za ekspresiju hu38SB19 i u prolaznim i u stabilnim transficiranjima ćelija sisara. Slični konstrukti vektora ekspresije se koriste za dobijanje drugih himernih i humanizovanih antitela.
Prolazna transficiranja za ekspresiju hu38SB19 u ćelijama HEK-293T obavljena su korišćenjem CaP04 reagensa iz BD Biosciences. Dati protokoli su blago modifikovani za povećane prinose ekspresije. Ukratko, zaseje se 2*106 ćelija HEK-293T na ploče za kultivisanje tkiva od 10 cm, obložene polietileniminom (PEI) 24 h pre transficiranja. Transficiranje počinje pranjem ćelija sa PBS i zamenom medija sa 10 ml_ DMEM (Invitrogen), sa 1% ultra niskog IgG FBS (Hyclone). U kapima se dodaje rastvor A (10 pg DNK, 86, 8 µL rastvora Ca2+ dopunjen do 500 µL vodom) u rastvor B, uz snažno mešanje. Smeša se inkubira 1 min na sobnoj temperaturi, pa se 1 mL smeše u kapima dodaje na svaku od ploča od 10 cm. Približno 16 h posle transficiranja medijumi se zamene sa 10 mL svežeg DMEM sa 1% ultra niskog IgG FBS. Približno 24 h kasnije na svaku od ploča od 10 cm doda se 2 mM natrijum-butirat. Transficiranje se sakupi posle 4 dana.
Supernatant se dobija za afinitetnu hromatografiju Proteina A, dodavanjem 1/10 zapremine 1 M pufera Tris/HCI, pH 8, 0. Supernatant sa podešenim pH se filtrira kroz membranski filter od 22 pm i prebaci na kolonu Protein A Sepharose (HiTrap Protein A HP, 1 mL, Amersham Biosciences), uravnoteženu sa vezivnim puferom (PBS, pH 7, 3). Pre-kolona sa Q-Sepharose-om (10 mL) se uzlazno poveže sa kolonom sa Proteinom A, za vreme šaržiranja uzorka, da bi se smanjila kontaminacija sa ćelijskim materijalom, kao što je DNK. Posle šaržiranja uzorka, pre-kolona se ukloni, a orijentacija kolone sa Proteinom A se obrne u suprotnom smeru, za pranje i eluiranje. Kolona se pere vezivnim puferom, dok se ne dobije stabilna osnovna linija, bez absorbancije na 280 nm. Antitelo se eluira sa puferom 0, 1 M sirćetne kiseline, koji sadrži 0, 15 M NaCI, pH 2, 8, koristeći protok od 0, 5 mL/min. Sakupe se frakcije od približno 0, 25 mL i neutrališu dodatkom 1/10 zapremine 1M Tris/HCI pH 8, 0. Frakcije pika se dijalizuju preko noći protiv PBS, a prečišćeno antitelo se kvantitativno određuje preko absorbancije OD28o. Humanizovana i himerna antitela se mogu takođe prečistiti korišćenjem kolone sa Proteinom G, sa nešto različitom procedurom.
Sva opisana himerna i humanizovana anti-CD38 antitela su ekspresovana i prečišćena sličnim procedurama, opisanim gore.
Primer 6
Aktivnosti citotoksičnosti posredovane ćelijom, zavisne od antitela (ADCC) himernih anti-CD38 antitela.
Pošto je za neka anti-CD38 antitela ranije pokazano da imaju ADCC i/ili CDC aktivnost kao himerna ili humanizovana antitela sa humanizovanim konstantnim regionima IgG 1 (J. H. EIlis et al., J. Immunol., 155, 925-937(1995); F. K: Stevenson et al., Blood, 77, 1071-1079(1991); WO 2005/103083), napravljene su i testirane himerne verzije 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39, koje se sastoje od mišjih varijabilnih regiona i humanog lgG1/lgkapa konstantnog regiona, u pogledu aktivnosti ADCC i/ili CDC. Prvo su testirani ch38SB13, ch38SB18, ch38SB19, ch38SB30, ch38SB31 i ch38SB39 u pogledu ADCC, koristeći Ramos-ove ćelije kao targetirane ćelije, i prirodne humane ćelije ubice (NK), kao efektorske ćelije. Za mernje liže ćelija korišćen je test
6604(2001)).
Prvo se izoluju NK ćelije iz humane krvi (od normalnog donora; dobavljene iz Research Blood Components, Ine., Brighton, MA), korišćenjem modifikovanog protokola za izolovanje NK, iz kompleta Kit II (Miltenyl Biotech). Krv se 2-3 puta razblaži rastvorom Hank’ Balanced Salt Solution (HBSS). U koničnoj epruveti od 50 mL, 25 mL razblažene krvi se pažjivo rasloji iznad 25 mL Ficoll Paque, pa se 45 min centrifugira sa 400xg, na 19°C. Mononuklearne ćelije iz periferne krvi (PBMC) se sakupe sa interfejsa, prebace u novu koničnu epruvetu od 50 m i operu jedanput sa HBSS. Ove PBMC se ponovo suspenduju u 2 mL pufera za izolovanje NK, a zatim se u ovu suspenziju ćelija doda 500 µL koktela Biotin-antitelo (iz kompleta za izolovanje NK, 130-091-152, Miltenyi Biotch). Ovaj koktel Biotin-antitelo sadrži biotinilovana antitela koja se vezuju za limfocite, izuzimajući NK ćelije. Ova smeša se 10 min inkubira na 4°C, a zatim se dodaju 1, 5 mL pufera za izolovanje NK (PBS, 0, 1% BSA, 1mM EDTA) i 1 mL prerlica Anti-Biotin Micro Beads. Ova smeša ćelija-antitelo se inkubira još 15 min na 4°C. Zatim se ćelije operu jedanput sa 50 mL pufera za izolovanje NK, pa ponovo suspenduju u 3 mL pufera za izolovanje NK. Posle toga se kolona MACS LS (na separatoru MACS, Mitenyi Biotech) prethodno opere sa 3 mL pufera za izolovanje NK. Suspenzija se zatim ubaci u LS kolonu. Efluent (frakcija sa neobeleženim ćelijama) se sakupi u novu koničnu epruvetu od 50 mL. Kolona se 3 puta opere sa 3 mL pufera za izolovanje NK. Sakupi se sav efluent u istu epruvetu i opere jedanput sa 50 mL pufera za izolovanje NK. Ćelije NK se zaseju u 30 mL RPMI-1640, sa dodatkom 5% seruma goveđeg fetusa i 50 pg/mL gentamicina.
Uzmu se alikvoti (50 µL/bazenčić) raznih koncentracija ch38SB13, ch38SB18, ch38SB19, ch38SB30, ch38SB31 i ch38SB39 antitela u medijumu RPMI-1640, sa dodatkom 0, 1% BSA, 20 mM HEPES, pH 7, 4 i 50 pg/mL gentamicina (u nastavku se navodi kao medijum RHBP), na ploču sa 96 bazenčića, okruglog dna. Ramos-ove target-ćelije se resuspenduju sa 106 ćelija/mL u medijumu RHBP, pa se dodaju u svaki bazenčić (100 µL/bazenčić), koji već sadrže razblaženja antitela. Ova ploča, koja sadrži targetirane ćelije i razblaženja antitela, se 30 min inkubira na 37°C. Zatim se dodaju NK ćelije (50 µL/bazenčić) u bazenčiće, koji sadrže targetirane ćečije, tipično u odnosu 1 targetirana ćelija na 3-6 NK ćelija. Doda se medijum RHBP (50 µL/bazenčić) u kontrolne bazenčiće sa NK ćelijama. Takođe, doda se 20 µL triton X-100 rastvora (medijum RPMI-1640, 10% Triton X-100) u 3 bazenčića koji sadrže samo targetirane ćelije bez antitela, da bi se odredilo maksimalno moguće oslobađanje LDH. Ove smeše se inkubiraju 4 h na 37°C, zatim 10 min centrifugiraju sa 1200 o/min, pa se pažljivo uzme 100 µL supernatanta i prebaci na novu ploču sa 96 bazenčića ravnog dna. U svaki bazenčić se doda LDH reakciona smeša (100 µL/bazenčić) iz kompeta Cytotoxicity Detection Kit (Roche 1 644 793), pa se 5-30 min inkubira na sobnoj temperaturi. Meri se optička gustina uzoraka na 490 nm (OD490). Procenat specifične lize svakog uzroka se određuje pripisujući 100% lize vrednosti OD490 uzorka tretiranog sa Triton X-100, a 0% liže vrednosti OD490 netretiranom kontrolnom uzorku, koji sadrži samo targetirane ćelije. Uzorcikoji sadrže samo NK ćelije dali su zanemarljive vrednosti za OD49o.
Kada su efektorske NK ćelije testirane sa targetiranim Ramos-ovim ćelijama, himerna anti-CD38 antitela su pokazala vrlo snažne aktivnosti ADCC (Slika 6). Vrednosti EC50 su određene ne-linearnim postupkom regresije za sigmoidne krive doza - odgovor, i nađeno je kao što sledi: 0, 0013 p/mL za ch3813, 0, 0013 p/mL za ch38SB18, 0, 0018 p/mL za ch38SB19, 0, 0022 pg/mL za ch38SB30, 0, 0012 pg/mL za ch38SB31, 0, 1132pg/mL za ch38SB39. Himerna anti-CD38 antitela su takođe pokazala snažnu ADCC aktivnost na ćelije multiplog mijeloma LP-1 (DSMZ ACC 41) (vrednosti EC50: 0, 00056 pg/mL za ch38SB18; 0, 00034 pg/mL za ch38SB19; 0, 00024 pg/mL za
ch38Sb31). (Slika 7A). Antitelo ch38SB19 takođe efikasno ubija ćelije Daudi-evog limfoma (Slika 7B), ćelije NALM-6 B-ALL (DSMZ ACC 128) (Slika 8A) i ćelije MOLT-4 T-ALL (ATTC CRL-1582) (Slika 8B), pomoću ADCC, što ukazuje da anti-CD38 antitela sa neobično snažnom apoptičkom aktivnošću imaju takođe i snažnu ADCC aktivnost prema raznim ćelijama tumora, izvedenim iz raznih hematopoietičkih maligniteta. Takođe, ne-vezujuće kontrolno lgG1 kontrolno antitelo (rituximab, Biogenldec) (Slika 7A, 8A i 8B) ili mu38SB19 (Slika 7B) nisu imali značajnu ADCC aktivnost u istom eksperimentu.
Primer 7
CDC aktivnosti himernih anti-CD38 antitela
CDC aktivnosti ch38SB13, ch38SB18, ch38SB19, ch38SB30, ch38SB31 i ch38SB39 merene su na osnovu modifikovanog postupka, koji su dali H. Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods, 202, 163-171(1997). Humani komplement je bio liofilizovani komplement humanog seruma (Sigma-Aldrich S1764), rekonstituisan sa sterilnom prečišćenom vodom, kako traži proizvođač, a zatim petostruko razblažen sa RHPB medijumom, neposredno pred početak eksperimenta. Targetirane ćelije se suspenduju sa 106 ćelija/mL u medijumu RHPB, pa se u alikvotima unesu u bazenčiće ploče sa 96 bazenčića ravnog dna, za kultivisanje tkiva (50 µL/bazenčić). Zatim se dodaje 50 µL raznih koncentracija (od 10 nM do 0, 001 nM) anti-38 antitela u RHPB medijumu (jedno antitelo po uzorku), a posle toga 50 µL/bazenčić rastvora komplementa. Ploča se zatim 2 h inkubira na 37°C u vlažnoj atmosferi, koja sadrži 5% CO2, a posle toga u svaki bazenčić se doda 50 µL 40% reagensa Alamar Blue (Biosource DAL1100) razblaženog u RHPB (konačno 10%), da bi se merila vitalnost ćelija. Alamar Blue prati smanjivanje kapaciteta vitanih ćelija. Ploča se inkubira 5-18 h, na 37°C, pre merenja fluorescencije (u relativnim fluorescentnim jedinicama, RFU) na 540/590 nm. Procenat specifične vitalnosti ćelija za svaki uzorak se određuje, prvo korigovanjem eksperimentalnih vrednosti za osnovnu fluorescenciju, oduzimanjem osnovne vrednosti RFU (bazenčići samo sa medijumom, bez ikakvih ćelija) od vrednosti RFU za svaki uzorak, pa zatim deljenjem korigovanih RFU vrednosti sa korigovanom RFU vrednošću uzoraka sa netretiranim ćelijama.
Kada su CDC aktivnosti uzoraka himernih anti-CD38 antitela testirane sa ćelijama Raji-IMG, korišćenjem humanog komplementa sa konačnim razblaženjem 5%, himerna anti-CD38 antitela su pokazala vrlo snažne CDC aktivnosti (Slika 9). Ćelije Raji-IMG su izvedene iz ćelija Raji (ATCC CCL-86) i ekspresuju niže sadržaje inhibitora komplementa membrane CD55 i CD59. Vrednosti EC50 su određene ne-linearnom regresijom iz sigmoidalnih krivih doza - odgovor, prikazanih na Slici 8, i bile su kao što sledi: 0, 005 pg/mL za ch38SB13, 0, 0101 pg/mL za ch38SB18, 0, 028 pg/mL za
ch38SB19, 0, 020 pg/mL za ch38SB30, 0, 010 pg/ml_ za ch38SB31 i 0, 400 pg/mL za ch38SB39. Himerna anti-CD38 antitela su takođe pokazala snažnu CDC aktivnost prema ćelijama multiplog mijeloma LP-1 (vrednosti EC50: 0, 032 pg/mL za ch38SB18, 0, 030 pg/mL za ch38SB19, 0, 043 pg/mL za ch38SB31), dok kontrolni ne-vezujući himern IgG 1 (rituximab, Biogenldec) nije pokazao bilo kakvu CDC aktivnost (Slika 10). Kada su himerna anti-CD38 antitela testirana sa ćelijama Daudi-evog limfoma, različita anti-CD38 antitela su se razlikovala u pogledu njihovih CDC aktivnosti (Slika 11). lako je specifična vitalnost Daudi-evih ćelija bila manja od 15%, nakon inkubacije sa 1, 25 p/mL ch38SB19, u prisustvu komplementa, došlo je samo do marginalnog smanjenja specifične vitalnosti ovih ćelija, posle njihove inkubacije sa ch38SB18 ili ch38SB39 (1, 25 pg/mL, ili veće koncentracije) u prisustvu komplementa (specifična vitalnost je bila 85% i 91%, respektivno). Takođe, opaženo je skromno smanjenje specifične vitalnosti kada su Daudi-eve ćelije inkubirane sa 1, 25 pg/mL, ili većim koncentracijama, ch38SB13, ch38SB30 i ch38SB31, u pirsusvu komplementa (specifična vitalnost je bila 65%, 45% i 53%, respektivno).
Primer 8
Afinitet vezivanja i apopoptićka, ADCC i CDC aktivnost humanizovanih anti-CD38 antitela
Dve verzije humanizovanog 38SB19 (hu38SB19 vl. OO i v1. 20) i himerno 38SB19 su pokazali slične afinitete vezivanja, kada su testirani sa Ramos-ovim ćelijama, sa vrednostima KD od 0, 23 nM, 0, 25 nM i 0, 18 nM, respektivno (Slika 12A). Afiniteti vezivanja himernih i humanizovanih 38SB19 antitela su takođe poređeni u testu kompeticionog vezivanja, u kome je merena njihova sposobnost kompeticije vezivanja sa biotinilovanim mišjim 38SB19 antitelom. Mišje 38SB19 antitelo obeleženo biotinom (3*1010 M) se pomeša sa raznim koncentracijama ch38SB19, hu38SB19 vl. OO ili hu38SB19 v1. 20. Ova smeša antitela se inkubira sa Ramos-ovim ćelijama, pa se meri količina vezanog biotinilovanog mišjeg 38SB19 za ove ćelije, pomoću FITC-konjugovanog streptavidina, analizom FACS. Hu38Sb19 vl. OO, hu38SB19 v1. 20 i ch38SB19 su se ravnopravno nadmetali u vezivanju sa biotinilovanim mišjim 38SB19 (Slika 12B), što ponovo ukazuje da je afintitet vezivanja ostao nedirnut posle humanizacije. Kada se porede ch38SB19, hu38SB19 vl. OO i hu38SB19 v1. 20 (108 do 1011 M) u pogledu njihovog indukovanja apoptoze Daudi-evih ćelija, oni pokazuju slične apopotičke aktivnosti (Slika 13). Pord toga, hu39SB19 vl. OO i v1. 20 pokazuju takođe sličnu ADCC aktivnost na ćelijama LP-1 kao i ch38SB19 (Slika 14), i sličnu CDC aktivnost kao i ch38SB19 na ćelijama Raji-IMG i ćelijama LP-1 (Slika 15). Hu38SB19 vl. OO je pokazao takođe sličnu CDC aktivnost kao i ch38SB19 na soju ćelija DND-41 (DSMZ 525) akutne limfoblastne leukemije T-ćelija (Slika 15). Hu38SB19 vl. OO je testiran još i u poglednu njegovog svojstva da indukuje apoptozu na setu raznih sojeva ćelija (Slika 16). Tretman sa hu38SB19 vl. OO (108 M) imao je za rezultat dramatičan porast ćelija pozitivnih na Annexin V, kod soja ćelija SU-DHL-8 (DSMZ ACC 573) limfoma B ćelija (od 7% u netretiranoj kontroli, do 97% u ćelijma tretiranim sa hu38SB19), i kod NU-DUL-1 (DSMAZ ACC 579) (od 10% kod netretirane kontrole, do 37% kod ćelija tretiranih sa hu38SB19), i kod soja ćelija T-ALL DND-41 (od 7% za netretiranu kontrolu, do 69% kod ćelija tretiranih sa hu38SB19). Pored toga, tretman sa hu38SB19 vl. OO (108 M) je povećao deo ćelija pozitivnih na Annexin V kod soja ćelija JVM-13 (DSMZ ACC 19) limfocitne leukemije B-ćelija (od 8% za netretiranu kontrolu, do 17% za ćelije tretirane sa hu38SB19), i kod soja ćelija leukemije dlakavih ćelija HC-1 (DSMZ ACC 301) (od 6% za netretiranu kontrolu, do 10% za ćelje tretirane sa hu38SB19).
Slično, dve verzije humanizovanog 38SB31 (hu38SB31 V1. 1 i v1. 2) i hiimerno 38SB31 su pokazali slične afinitete vezivanja, kada su testirani sa Ramos-ovim ćelijama, sa vrednostima KD 0, 13 nM, 0, 11 nM i 0, 12 nM, respektivno. Afiniteti vezivanja himernih i humanizovanih 38SB31 antitela, poređeni su takođe u testu kompeticije vezivanja, kao što je opisano gore, i pokazali su se jednako dobro. Dalje, hu38SB31 v1. 1 je testirano još u pogledu sposobnosti indukovanja apoptoze u nekoliko sojeva ćelija. Humanizovano antitelo je pokazalo slične apopoptičke aktivnosti kao i ch38SB31, za ćelije Ramos, Daudi, MOLP-8 i SU-DHL-8. Pored toga, hu38SB31 v1. 1 je u ovim sojevima ćelija pokazalo takođe slične ADCC i ADC aktivnosti, kao i ch38SB31.
Primer 9
Efikasnost 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 in vivo
Anti-tumorne aktivnosti 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 i 38SB39 in vivo, ispitivane su na modelu preživljavanja humanog ksenografta tumora imunodeficitarnih miševa (ženke CB. 17 SCID), ostvarenog sa ćelijama Ramos-ovog limfoma. Ženke miševa CB. 17 SCID se inokuliraju lateralno u repnu venu, sa 2*106 Ramos-ovih ćelija, u 0, 1 mL medijuma bez seruma. Nekoliko dana posle inokulacije ćelijama tumora, miševi se nasumce podele u sedam grupa, na osnovu telesne mase. U grupi je bilo po 10 miševa, izuzimajući grupu koja je tretirana sa 38SN31, koja je imala 6 miševa, i grupu tretiranu sa 28SB39 koja je imala 8 miševa. Antitela se miševaima daju inravenozno, sa dozom 40 mg/kg, dvaput nedeljno, tokom tri uzastopne nedelje, počevši sa sedmim danom posle inokulacije ćelija. Miševi se žrtvuju ako im se parališe jedna ili obe zadnje noge, ako je gubitak telesne mase bio veći od 20% u odnosu na vrednost pre tretmana, ili ukoliko je životinja bila suviše bolesna da uzima hranu i vodu. Tretman sa 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 ili 38SB39 je signifikantno produžio preživljavanje miševa, u poređenju sa miševima tretiranim sa PBS (Slika 17). Medijana preživljavanja miševa tretiranih sa PBS bila je 22 dana, a onih u grupama tretiranim sa antitelom od 28 do 33 dana.
Anti-tumorne aktivnosti in vivo za mu38SB19 i hu38SB19 ispitane su još i na modelima tumora humanog ksenografta, na imunodeficitarnim miševima. Na modelu preživljavanja Daudi-evog limfoma, SCID miševi su inokulirani lateralno u repnu venu, sa 5*106 Daudi-evih ćelija, u 0, 1 mL medijuma bez seruma. Ispitivanje je obavljeno kao što je opisano gore. Tretman, bilo sa mu38SB19 ili sa hu38SB19, signifikantno je produžio preživljavanje miševa, u poređenju sa miševima tretiranim sa PBS (Slika 18). Medijana preživljavanja miševa tretiranih sa PBS bila je 22 dana, dok je medijana preživljavanja miševa tretiranih antitelima bila 47 dana.
Na modelu tumora multiplog mijeloma NCI-H929, SCID miševi su inokulirani subkutano sa 107 ćelija. Kada su se 6. dana tumori mogli opipati, životinje su nasumično podeljene u grupe od po 10, prema telesnoj masi, i počelo se sa tretmanom antitelima. Miševima se intravenozno daju hu38SB19 antitelo i nevezujuće kontrolno himerno lgG1 antitelo (rituximab, Biogenldec), sa dozom 40 mg/kg, dvaput nedeljno, u tri uzastopne nedelje.
Prati se zapemina tumora, a životinje se žrtvuju ukoliko tumor dostigne veličinu od 2000 mm3, ili postane nekrotičan. Grupa tretirana sa PBS stigla je do veličine tumora od 1000 mm3 89. dana, a grupa sa himernim IgG 1 kontrolnim antitelom 84. dana (Slika 19). Tretman sa hu39SB19 je kompletno sprečio rast tumora kod svih 10 životinja. Nasuprot tome, samo su dve životinje u grupi tretiranoj sa PBS i tri životinje u grupi tretiranoj sa himernim IgG 1 kontrolnim antitelom pokazale regresiju tumora.
Na modelu tumora multiplog mijeloma MOLP-8. SCID miševi su inokulirani subkutano sa 107 ćelija. Kada su se 4. dana tumori mogli napipati, životinje su nasumično razdeljene u grupe po 10, prema telesnoj masi i započeo je tretman sa antitelima. Hu38SB19 i mu38SB19 antitela, ili himerno IgG 1 kontrolno antitelo, davani su miševima intravenozno sa dozom 40 mg/kg, dvaput nedeljno, tokom tri uzastopne nedelje. Praćena je zapremina tumora, a životinje su žrtvovane ukoliko je tumor dostigao veličinu od 2000 mm3, ili je postao nekrotičan. Grupa tretirana sa PBS je dostigla srednju veličinu tumora od 500 mm3 22. dana, a himerna lgG1 kontrolna grupa 23. dana (Slika 20). Ni jedan od tumora u ovim grupama se nije smanjo. Nasuprot, tretman sa hu38SB19 ili mu38SB19 doveo je do smanjenja tumora kod 8 od 10 ili 6 od 10 životinja, respektivno.
TABELE Tabela 1A
Ostaci na površini skeleta lakog lanca mu38SB19 i odgovarajući ostaci humanog 1. 69 antitela na istim pozicijama Kabat. Ostaci koji su različiti, pa stoga izmenjeni u hu38SB19, prikazani su u sivim odeljcima. Ostaci sa zvezdicom (*) su povratno mutirani u ostatak mu38SB19, u jednoj ili više hu38SB19 varijanata.
Ostaci na površini skeleta lakog lanca mu38SB19 i odgovarajući ostaci humanog 1. 69 antitela na istim pozicijama Kabat
Tabela 1B
Ostaci na površini skeleta lakog lanca mu38SB19 i odgovarajući ostaci humanog 1. 69 antitela na istim pozicijama Kabat. Ostaci koji su različiti, pa stoga izmenjeni u hu38SB19, prikazani su u sivim odeljcima.
Tabela 2
Prajmeri, korišćeni za degenraciju PCR reakcija, zasnovani su na onima koje su dali Wang et al., 2000, izuzimajući HindKL, koji je zasnovan na onom koji su dali Co et al, 1992. Mešane baze su definisane kao što sledi: H=A+T+C, S=g+C, Y=C+7, K=G+T, M=A+C, R=A+g, W=A+T, V=A+C+G
Tabela 3
Mešavine lakog i teškog lanca reakcije PCR za kloniranje cDNK sekvencije varijabilnog regiona 38SB19
Tabela 4
Prajmeri sa 5’ kraja mišje liderske sekvencije, korišćeni u drugoj rundi reakcija PCR za 38SB19. Prajmeri sa 3’ kraja su identični sa onima koji su korišćeni u prvoj rundi
reakcija, zato što su oni sastavni deo respektivnih sekvencvija konstantnog regiona.
Tabela 5
Molekulske težine cDNK, izračunate i određene sa LC/MS, za laki i teški lanac mišjeg 38SB19 antitela

Claims (77)

1.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, koje se specifično vezuje za CD38, naznačeno time, što je pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, u stanju da ubija CD38+ ćelije apoptozom, ćelijski posredovanom citotokičnošću zavisnom od antitela (ADCC) i citoksičnošću zavisnom od komplementa (CDC).
2.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 1, naznačeno time, što je pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, u stanju da ubija CD38+ ćelije apoptozom, u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome.
3.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema bilo kom od Zahteva 1-2, naznačeno time, što je pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, monoklonalno antitelo.
4.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema bilo kom od Zahteva 1-3, naznačeno time, što pomenutu CD38+ ćeliju predstavlja ćelija limfoma, ćelija leukemije ili ćelija multiplog mijeloma.
5.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 4, naznačeno time, što pomenutu CD38+ ćeliju predstavlja ćelija non-Hodgkin-ovog limfoma (NHL), ćelija Burkitt-ovog limfoma (BL), ćelija multiplog mijeloma (MM), ćelija hronične limfocitne leukemije B ćelija (B-CLL), ćelija akutne limfocitne leukemije B i T (ALL), ćelija liimfoma T ćelija (TCL), ćelija akutne mijeloidne leukemije (AML), ćelija leukemije dlakavih ćelija (HCL), ćelija Hodgkin-ovog limfoma (HL), ili ćelija hronične mijeloidne leukemije (CML).
6.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 1, naznačeno time, što je pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, u stanju da ubije apoptozom najmanje 24% ćelija Daudi-evog limfoma, u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome.
7.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 1, naznačeno time, što je pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, u stanju da ubije apoptozom više od 7% ćelija Ramos-ovog limfoma, u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome.
8.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 1, naznačeno time, što je pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, u stanju da ubije apoptozom više od 11% ćelija multiplog mijeloma MOLP-8, u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome.
9.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 1, naznačeno time, što je pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, u stanju da ubije apoptozom više od 36% ćelija SU-DHL-8 limfoma, u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome.
10.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 1, naznačeno time, što je pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, u stanju da ubije apoptozom više od 62% ćelija leukemije DND-41, u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome.
11.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 1, naznačeno time, što je pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, u stanju da ubije apoptozom više od 27% ćelija limfoma NU-DUL-1, u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome.
12.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 1, naznačeno time, što je pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, u stanju da ubije apoptozom više od 9% ćelija leukemije JVM-13, u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome.
13.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 1, naznačeno time, što je pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, u stanju da ubije apoptozom više od 4% ćelija leukemije HC-1, u odsustvu ćelija strome ili citokina izvedenih iz strome.
14.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema bilo kom od prethodnih Zahteva, naznačeno time, što se pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, vezuje sa CD38 sa vrednošću Kd od 3x10"9 M ili nižom.
15.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevima 1-14, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži jedan ili više regiona koji određuju komplementarnost, a koji imaju sekvencije amino kiselina koje se biraju između SEQ ID NO: 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31,32, 33, 34, 35 i 36.
16.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 15, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina koje se biraju iz grupe koju čine SEQ ID NO: 1, 2, 3, 7, 8, 9, 13, 14, 15, 19, 20, 21, 25, 26, 27, 31, 32 i 33, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina koje se biraju iz grupe koju čine SEQ ID NO: 4, 5, 6, 10, 11, 12, 16, 17, 18, 22, 23, 24, 28, 29, 30, 34, 35 i 36.
17.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 16, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži laki lanac varijabilnog regiona, koji ima sekvenciju aminokiselina koja se bira iz grupe koju čine SEQ ID NO: 38, 40, 42, 44, 46 i 48.
18.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 16, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži teški lanac varijabilnog regiona, koji ima sekvenciju aminokiselina koja se bira iz grupe koju čine SEQ ID NO: 50, 52, 54, 56, 58 i 60.
19.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 16, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 1, 2 i 3, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 4, 5 i 6.
20.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 19, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži laki lanac varijabilnog regiona, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 38.
21.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 19, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži teški lanac varijabilnog regiona, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 50.
22.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 16, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 7, 8 i 9, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 10, 11 i 12.
23.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 22, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži laki lanac varijabilnog regiona, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 40.
24.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 22, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži teški lanac varijabilnog regiona, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 52.
25.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 16, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 13, 14 i 15, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 16, 17 i 18.
26.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 25, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži laki lanac varijabilnog regiona, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 42.
27.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 25, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži teški lanac varijabilnog regiona, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 54.
28.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 16, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 19, 20 i 21, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 22, 23 i 24.
29.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 28, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži laki lanac varijabilnog regiona, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 44.
30.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 28, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži teški lanac varijabilnog regiona, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 56.
31.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 16, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 25, 26 i 27, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 28, 29 i 30.
32.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 31, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži laki lanac varijabilnog regiona, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 46.
33.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 31, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži teški lanac varijabilnog regiona, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 58.
34.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 16, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži najmanje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 31, 32 i 33, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 34, 35 i 36.
35.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 34, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži laki lanac varijabilnog regiona, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 48.
36.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 34, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži teški lanac varijabilnog regiona, koji ima sekvenciju aminokiselina koju čini SEQ ID NO: 60.
37.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 16, naznačeno time, što se pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, dobija iz hibridoma soja ćelija koji se bira iz grupe soja ćelija hibridoma deponovanih u American Type Culture Collection (10801 University Bld, Manassas, VA, 20110-2209, USA) 21. juna 2006, pod deponovanim brojevima PTA-7667, PTA-7669, PTA-7670, PTA-7666, PTA- 7668 i PTA-7671.
38.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 16, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrži najmanje jedan humani konstantni region.
39.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 38, naznačeno time, što je pomenuti konstantni region humani lgG1/kapa konstantni region.
40.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 16, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, predstavlja humanizovano antitelo ili antitelo preoblikovane površine.
41.Humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 40, naznačeni time, što pomenuto humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrže najmaje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 1, 2 i 3, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 4, 5 i 6.
42.Humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 40, naznačeni time, što pomenuto humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrže najmaje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 7, 8 i 9, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 10, 11 i 12.
43.Humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 40, naznačeni time, što pomenuto humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrže najmaje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 13, 14 i 15, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 16, 17 i 18.
44.Humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 43, naznačeni time, što pomenuto humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrže teški lanac varijabilnog regiona, koji ima sekvenciju aminokiselina predstavljenu sa SEQ ID NO: 66.
45.Humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 43, naznačeni time, što pomenuto humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrže laki lanac varijabilnog regiona, koji ima sekvenciju aminokiselina koja se bira iz grupe koju čine SEQ ID NO: 62 i 64.
46.Humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 40, naznačeni time, što pomenuto humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrže najmaje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 19, 20 i 21, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 22, 23 i 24.
47.Humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 40, naznačeni time, što pomenuto humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrže najmaje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 25, 26 i 27, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 28, 29 i 30.
48.Humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 47, naznačeni time, što pomenuto humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrže teški lanac varijabilnog regiona, koji ima sekvenciju aminokiselina predstavljenu sa SEQ ID NO: 72.
49.Humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 47, naznačeni time, što pomenuto humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrže laki lanac varijabilnog regiona, koji ima sekvenciju aminokiselina koja se bira iz grupe koju čine SEQ ID NO: 68 i 70.
50.Humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 40, naznačeni time, što pomenuto humanizovano antitelo, ili antitelo preoblikovane površine, ili njegov fragment koji vezuje epitop, sadrže najmaje jedan teški lanac i najmanje jedan laki lanac, a pomenuti teški lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 31, 32 i 33, a pomenuti laki lanac sadrži tri uzastopna regiona koji određuju komplementarnost, koji imaju sekvencije aminokiselina predstavljene sa SEQ ID NO: 34, 35 i 36.
51.Antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema Zahtevu 16, naznačeno time, što pomenuto antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, predstavlja Fab, Fab’, F(ab’)2 ili Fv fragment.
52.Konjugat, naznačen time, što sadrži antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema bilo kom od Zahteva 1 do 51, povezano sa nekim citotoksičnim agensom.
53.Konjugat prema Zahtevu 52, naznačen time, što se pomenuti citotoksični agens bira iz grupe koju čine majtansionoid, neki mali lek, derivat tomamicina, derivat leptomicina, neki prolek, neki taksoid, CC-165 i neki analog CC-1965.
54.Konjugat prema Zahtevu 53, naznačen time, što pomenuti citotoksični agens predstavlja majtansin DM1, formule:
55.Konjugat prema Zahtevu 53, naznačen time, što pomenuti citotoksični agens predstavlja majtansin DM4, formule:
56.Konjugat prema Zahtevu 53, naznačen time, što pomenuti citotoksični agens predstavlja derivat tomamicina, koji se bira iz grupe koju čine: 8,8'-[1,3-benzendiilbis(metilenoksi)]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-metoksi-1,2,3,11 a-tetrahidro- 5H-pirolo[2,1 -c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[5-metoksi-1,3-benzendiilbis(metilenoksi)]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7- metoksi-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[1,5-pentandiilbis(oksi)]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-metoksi-1,2,3,11a-tetrahidro-5H- pirolo[2,1 -c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[1,4-butandiilbis(oksi)]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-metoksi-1,2,3,11 a-tetrahidro-5H- pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[3-metil-1,5-pentandiilbis(oksi)]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-metoksi-1,2,3,11 a-tetrahidro-5H- pirolo[2,1 -c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[2,6-piridindiilbis(oksi)]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-metoksi-1,2,3,11a-tetrahidro-5H- pirolo[2,1 -c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[4-(3-terc-butoksikarbonilaminopropiloksi)-2,6-piridindiilbis-(metilenoksi)]- bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-metoksi-1,2,3,11a-tetrahidro-5H- pirolo[2,1c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[5-(3-aminopropiloksi)-1,3-benzendiilbis(metilenoksi)]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7- metoksi-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[5-(N-metil-3-terc-butoksikarbonilaminopropil)-1,3-benzendiilbis- (metilenoksi)]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-metoksi-1,2,3,11 a-tetrahidro-5H- pirolo[2,1 -c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-{5-[3-(4-metil-4-metildisulfanil-pentanoilamino)propiloksi]-1,3- benzendiilbis(metilenoksi)}-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-metoksi-1,2,3,11a-tetrahidro- 5H-pirolo[2,1-c](1,4)benzodiazepin-5-on] 8,8'-[5-acetiltiometil-1,3-benzendiilbis(metilenoksi)]-bis[(S)-2-metilen-7metoksi- 1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirolo[2,1 -c][1,4]benzodiazepin-5-on] bis-{2-[(S)-2-metilen-7-metoksi-5-okso-1,3,11 a-tetrahidro-5H- pirolo[2,1c][1,4]benzodiazepin-8-iloksi]-etil}-karbaminska kiselina terc-butilestar 8,8'-[3-(2-acetiltioetil)-1,5-pentandiilbis(oksi)]-bis[(S)-2-metilen-7-metoksi1,2,3,11a- tetrahidro-5H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[5-(N-4-merkapto-4,4-dimetilbutanoil)amino-1,3-benzendiilbis(metilenoksi)]bis[7- metoksi-2-metilen-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[5-(N-4-metilditio-4,4-dimetilbutanoil)-amino-1,3-benzendiilbis(metilenoksi)]- bis[7-metoksi-2-metilen-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5- on] 8,8'-[5-(N-metil-N-(2-merkapto-2,2-dimetiletil)amino-1,3-benzendiil(metilenoksi)]- bis[7-metoksi-2-metilen-1,2,3,11a-tetrahidro-5H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5- on] 8,8'-[5-{N-metil-N-(2-metilditio-2,2-dimetiletil)amino-1,3-benzendiil(metilenoksi)]- bis[7-metoksi-2-metilen-1,2,3,11 a-tetrahidro-5H-pirolo[2,1 -c][1,4]benzodiazepin-5- on] 8,8'-[(4-(2-(4-merkapto-4-metil)-pentanamido-etoksi)-piridin-2,6-dimetil)-dioksi]- bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1,2,3,11a-tetrahidro- pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[(1-(2-(4-metil-4-metildisu!fanil)-pentanamido-etoksi)-benzen-3,5-dimetil)dioksi]- bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1,2,3,11a-tetrahidro-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5- on] 8,8'-[(4-(3-(4-metil-4-metildisulfanil}pentanamido-propoksi)-piridin-2,6-dimetil)dioksi]- bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1,2,3,11a-tetrahidro- pirolo[2,1-c][1,4] benzodiazepin-5-on] 8,8'-[(4-(4-(4-metil-4-metildisulfanil)-pentanamido-butoksi)-piridin-2,6-dimetil)- dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1,2,3,11 a-tetrahidro- pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[(4-(3-[4-(4-metil-4-metildisuifanil-pentanoil)-piperazin-1-il]-propil-piridin-2,6- dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1,2,3,11 a-tetrahidro- pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[(1-(3-[4-(4-metil-4-metildisulfanil-pentanoil)-piperazin-1-il]-propil)-benzen-3,5- dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1,2,3,11 a-tetrahidro- pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[(4-(2-{2-[2-(4-metil-4-metildisulfanil-pentanoilamino)-etoksi]-etoksi}-etoksi})-piridin- 2,6-dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1,2,3,11a-tetrahidro- pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[(1-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-metil-4-metildisulfanil-pentanoilamino)-etoksi]-etoksi}etoksi)- etoksi]-etoksi}-etoksi)-benzen-3,5-dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden7-dimetoksi- 1,2,3,11a-tetrahidro-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[(1-(2-{2-[2-(4-metil-4-metildisulfanil-pentanoilamino)-etoksi]-etoksi}-etoksi)-benzen- 3,5-dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1,2,3,11a-tetrahidro- pirolo[2,1 -c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-j(4-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-metil-4-metildisulfanil-pentanoilamino)-etoksi]-etoksi}- etoksi)-etoksi]-etoksi}-etoksi)-piridin-2,6-dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7- dimetoksi-1,2,3,11a-tetrahidro-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[(1-(2-[metil-(2-metil-2-metildisulfanil-propil)-amino]-etoksi)-benzen-3,5-dimetil)- dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1,2,3,11a-tetrahidro-pirolo[2,1c][1,4]benzodiazepin- 5-on] 8,8'-[(4-(3-[metil-(4-metil-4-metildisulfianil-pentanoil)-amino]-propil)-piridin-2,6- dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1,2,3,11a-tetrahidro- pirolo[2,1 -c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[(4-(3-[metil-(2-metil-2-metildisuifanil-propil)-amino]-propil)-piridin-2,6-dimetil}-dioksi]- bis[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1,2,3,11a-tetrahidro-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on] 8,8'-[(1-(4-metil-4-metildisulfanil)-pentanamido)-benzen-3,5-dimetil)-dioksi]-bis[(S)-2- et-(E)-iliden-7-dimetoksi-1,2,3,11a-tetrahidro-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-on]
57.Konjugat prema Zahtevu 53, naznačen time, što citotoksični agens predstavlja derivat leptomicina, koji se bira iz grupe koju čine: (2-metilsulfanil-etil)amid (2E,10E,12E,16Z,18E)-(R)-6-hidroksi-3,5-7,9,11,15,17- heptametil-19-((2S,3S)-3-metil-6-okso-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)-8-okso-nonadeka- 2.10.12.16.18-pentaenoinske kiseline bis[(2-merkaptoetil)-amid (2E, 10E, 12E, 16Z, 18E)-(R)-6-hidroksi-3,5-7,9,11,15,17- heptametil-19-((2S,3S)-3-metil-6-okso-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)-8-okso-nonadeka- 2.10.12.16.18-pentaenoinske kiseline] (2-merkapto-etil)amid (2E, 10E, 12E, 16Z, 18E)-(R)-6-hidroksi-3,5-7,9,11,15,17- heptametil-19-((2S,3S)-3-metil-6-okso-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)-8-okso-nonadeka- 2.10.12.16.18-pentaenoinske kiseline (2-metildisulfanil-etil)-amid (2E,10E,12E,16Z,18E)-(R)-6-hidroksi-3,5,7,9,11,15,17- heptametil-19-((2S,3S)-3-metil-6-okso-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)-8-okso-nonadeka- 2.10.12.16.18-pentaenoinske kiseline (2-metil-2-metildisulfanil-propil)-amid (2E,10E,12E,16Z,18E)-(R)-6-hidroksi- 3,5,7,9,11,15,17-heptametil-19-((2S,3S)-3-metil-6-okso-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)-8- okso-nonadeka-2,10,12,16,18-pentaenoinske kiseline (2-merkapto-2-metil-propil)-amid (2E,10E,12E,16Z,18E)-(R)-6-hidroksi-3,5,7,9,11,15,17- heptametil-19-((2S,3S)-3-metil-6-okso-3,6-dihidro-2H-piran-2-il)-8-okso-nonadeka- 2.10.12.16.18-pentaenoinske kiseline.
58.Upotreba antitela, ili njegovog fragmenta koji vezuje epitop, prema bilo kom od Zahteva 1-51, ili konjugata, prema bilo kom od Zahteva 52-57, kao medikamenta.
59.Farmaceutski preparat, naznačen time, što sadrži antitelo, ili njegov fragment koji vezuje epitop, prema bilo kom od Zahteva 1-51, ili konjugat, prema bilo kom od Zahteva 52-57, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijent.
60.Farmaceutski preparat prema Zahtevu 59, naznačen time, što taj pomenuti farmaceutski preparat sadrži i dodatni terapeutski agens.
61.Farmaceutski preparat prema Zahtevu 60, naznačen time, što taj dodatni terapeutski agens predstavlja antagonist epidermalnog faktora rasta (EGF), faktora rasta fibroblasta (FGF), faktora rasta hepatocita (HGF), faktora tkiva (TF), proteina C, proteina S, faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGF), heregulina, proteina za stimulaciju faga (MSP) ili faktora rasta vaskularnog endotelijuma (VEGF), ili antagonist receptora epidermalnog faktora rasta (EGF), faktora rasta fibroblasta (FGF), faktora rasta hepatocita (HGF), faktora tkiva (TF), proteina C, proteina S, faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGF), heregulina, proteina za stimulaciju faga (MSP) ili faktora rasta vaskularnog endotelijuma (VEGF), uključujući receptor HER2, receptor HER3, c-MET i ostale receptore tirozin kinaza.
62.Farmaceutski preparat prema Zahtevu 60, naznačen time, što taj dodatni terapeutski agens predstavlja antitelo usmereno protiv klastera diferencijacije antigena, koji se biraju iz grupe koju čine CD3, CD14, CD19, CD20, CD22, CD25, CD28, CD30, CD33, CD36, CD40, CD44, CD52, CD55, CD59, CD56, CD70, CD79, CD80, CD103, CD134, CD137, CD138 i CD152.
63.Upotreba antitela, ili njegovog fragmenta koji vezuje epitop, prema bilo kom od Zahteva 1-51, ili konjugata, prema bilo kom od Zahteva 52-57, kao medikamenta za tretiranje kancera ili autoimune bolesti.
64.Upotreba prema Zahtevu 63, gde se pomenuti kancer bira iz grupe koju čine karcinom, uključujući karcinom bešike, dojke, debelog creva, bubrega, jetre, pluća, jajnika, pankreasa, stomaka, cerviksa, tiroide i kože; uključujući i karcinom skvamoznih ćelija; tumori mezenhimalnog porekla, uključujući fibrosarkom i rabdomiosarkom; ostali tumori, uključujući melanom, seminom, tetratokarcinom, neuroblastom i gliom; tumori centralnog i perifernog nervnog sistema, uključujući astrocitom, neuroblastom, gliom i švanome; tumori mezenhimalnog porekla, uključujući fibrosarkom, rabdomiosarkom i osteosarkom; i drugi tumori, uključujući melanom, kseroderma pigmentozum, keratoaktantom, seminom, folikularni karcinom tiroide i teratokarcinom.
65.Upotreba prema Zahtevu 63, gde poemnuti kancer predstavljaju hematopoietički tumori limfoidne loze, uključujući leukemiju, non-Hodgkin-ov limfom, akutnu limfocitnu leukemiju, akutnu limfoblastnu leukemiju, limfom B-ćelija, limfom T-ćelija, Burkitt-ov limfom, Hodgkin-ov limfom, leukemiju dlakavih ćelija, multipli mijelom, hroničnu limfocitnu leukemiju; hematopoietičke tumore mijeloidne loze, uključujući akutnu u hroničnu leukemiju i promijelocitnu leukemiju.
66.Upotreba prema Zahtevu 63, gde se pomenuta autoimuna ili inflamatorna bolest bira iz grupe koju čine sistemski lupus eritematozus, reumatoidni artritis, multipla skleroza, Crohn-ova bolest, ulcerativni kolitis, gastritis, Hashimoto-ov tiroiditis, ankilozni spondilitis, krioglobulinemični vaskulitis povezan sa hepatitisom C, hronični fokalni encefalitis, bulozni pemfigoid, hemofilija A, membranoproliferativni glomerulonefritis, Sjogren-ov sindrom, dermatomiozitis odraslih i dece, polimiozitis odraslih, hronična urtikarija, primarna bilijarna ciroza, idiopatska trombocitopenična purpura, neuromijelitis optika, Graves-ova distiroidna bolest, bulozni pemfigoid, membranoproliferativni glomerulonefritis, Churg-Strauss-ov sindrom i astma.
67.Upotreba prema Zahtevu 63, koja još sadrži korišćenje dodatnog terapeutskog agensa za proizvodnju istog ili različitog preparata.
68.Upotreba prema Zahtevu 67, gde dodatni terapeutski agens predstavlja antagonist faktora rasta fibroblasta (FGF), faktora rasta hepatocita (HGF), faktora tkiva (TF), proteina C, proteina S, faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGF), heregulina, proteina za stimulaciju faga (MSP) ili faktora rasta vaskularnog endotelijuma (VEGF), ili antagonist receptora epidermalnog faktora rasta (EGF), faktora rasta fibroblasta (FGF), faktora rasta hepatocita (HGF), faktora tkiva (TF), proteina C, proteina S, faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGF), heregulina, proteina za stimulaciju faga (MSP) ili faktora rasta vaskularnog endotelijuma (VEGF), uključujući receptor HER2, receptor HER3, c-MET i ostale receptore tirozin kinaza.
69.Upotreba prema Zahtevu 67, gde dodatni terapeutski agens predstavlja antitelo usmereno protiv klastera diferencijacije antigena, koji se biraju iz grupe koju čine CD3, CD14, CD19, CD20, CD22, CD25, CD28, CD30, CD33, CD36, CD40, CD44, CD52, CD55, CD59, CD56, CD70, CD79, CD80, CD103, CD134, CD137, CD138 i CD152.
70.Postupak za dijagnozu kancera kod osobe za koju se zna ili sumnja da ima kancer, naznačen time, što se pomenuti postpak sastoji od: a)dodođenja u kontakt pomenutog pacijenta sa antitelom, ili njegovim fragmentom koji vezuje epitop, prema Zahtevima 1-51, b)merenja vezivanja pomenutog antitela, ili njegovog fragmenta koji vezuje epitop, sa pomenutim ćelijama, i c)poređenja ekspresije u delu b) sa istom u normalnoj osobi, ili sa standardom.
71.Postupak prema Zahtevu 70, naznačen time, što se pomenuti kancer bira iz grupe koju čine karcinom, uključujući karcinom bešike, dojke, debelog creva, bubrega, jetre, pluća, jajnika, pankreasa, stomaka, cerviksa, tiroide i kože; uključujući i karcinom skvamoznih ćelija; tumori mezenhimalnog porekla, uključujući fibrosarkom i rabdomiosarkom; ostali tumori, uključujući melanom, seminom, tetratokarcinom, neuroblastom i gliom; tumori centralnog i perifernog nervnog sistema, uključujući astrocitom, neuroblastom, gliom i švanome; tumori mezenhimalnog porekla, uključujući fibrosarkom, rabdomiosarkom i osteosarkom; i drugi tumori, uključujući melanom, kseroderma pigmentozum, keratoaktantom, seminom, folikularni karcinom tiroide i teratokarcinom.
72.Postupak prema Zahtevu 70, naznačen time, što pomenuti kancer predstavljaju hematopoietički tumori limfoidne loze, uključujući leukemiju, non-Hodgkin-ov limfom, akutnu limfocitnu leukemiju, akutnu limfoblastnu leukemiju, limfom B-ćelija, limfom T- ćelija, Burkitt-ov limfom, Hodgkin-ov limfom, leukemiju dlakavih ćelija, multipli mijelom, hroničnu limfocitnu leukemiju; hematopoietičke tumore mijeloidne loze, uključujući akutnu i hroničnu leukemiju i promijelocitnu leukemiju.
73.Postupak prema Zahtevu 70, naznačen time, što su pomenute ćelije smrznute, ili fiksirane u tkivu, ili ćelije iz pomenutog pacijenta.
74.Polinukleotid, naznačen time, što kodira polipeptid koji se bira iz grupe koju čine SEQ ID NO: 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 i 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 68, 60, 62, 64, 66, 68, 70 i 72.
75.Polinukeotid, prema Zahtevu 74, naznačen time, što pomenuti polinukleotid ima sekvenciju koja poseduje najmanje 80% homologije sa polinukleotidom koji se bira iz grupe koju čine: SEQ ID NO: 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69 i 71.
76.Rekombinantni vektor, naznačen time, što sadrži nukleinsku kiselinu iz bilo koga od Zahteva 74 ili 75.
77. Ćelija domaćina, naznačena time, što sadrži vektor prema Zahtevu 76.
MEP-2009-106A 2006-10-19 2007-10-16 Nova anti-cd38 antitela za tretman kancera ME00614B (me)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP06291628A EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2006-10-19 Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
PCT/IB2007/004172 WO2008047242A2 (en) 2006-10-19 2007-10-16 Novel anti-cd38 antibodies for the treatment of cancer

Publications (2)

Publication Number Publication Date
MEP10609A MEP10609A (hr) 2011-12-20
ME00614B true ME00614B (me) 2011-12-20

Family

ID=37831721

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MEP-2009-106A ME00614B (me) 2006-10-19 2007-10-16 Nova anti-cd38 antitela za tretman kancera

Country Status (45)

Country Link
US (5) US8153765B2 (me)
EP (4) EP1914242A1 (me)
JP (2) JP5607364B2 (me)
KR (5) KR101534452B1 (me)
CN (1) CN101616933B (me)
AR (1) AR063488A1 (me)
AU (1) AU2007311511C1 (me)
BR (1) BRPI0718130B1 (me)
CA (2) CA2663209C (me)
CL (3) CL2007002995A1 (me)
CO (1) CO6190555A2 (me)
CR (1) CR10679A (me)
CY (2) CY1122302T1 (me)
DK (1) DK2076540T3 (me)
DO (1) DOP2017000177A (me)
EA (1) EA025215B1 (me)
ES (1) ES2726754T3 (me)
FR (1) FR20C1061I2 (me)
GT (1) GT200900079A (me)
HK (1) HK1139956A1 (me)
HR (1) HRP20190742T1 (me)
HU (2) HUE043351T2 (me)
IL (1) IL197217B (me)
LT (2) LT2076540T (me)
MA (1) MA30895B1 (me)
ME (1) ME00614B (me)
MX (1) MX2009004050A (me)
MY (1) MY159374A (me)
NL (1) NL301077I2 (me)
NO (3) NO345911B1 (me)
NZ (1) NZ575188A (me)
PE (1) PE20081171A1 (me)
PH (1) PH12012502467A1 (me)
PL (1) PL2076540T3 (me)
PT (1) PT2076540T (me)
RS (1) RS58716B1 (me)
SG (4) SG10201501733QA (me)
SI (1) SI2076540T1 (me)
SV (1) SV2009003203A (me)
TN (1) TN2009000058A1 (me)
TW (4) TWI609884B (me)
UA (1) UA114879C2 (me)
UY (1) UY30655A1 (me)
WO (1) WO2008047242A2 (me)
ZA (1) ZA200901395B (me)

Families Citing this family (326)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8263746B2 (en) 2004-02-06 2012-09-11 Morphosys Ag Anti-CD38 human antibodies and uses thereof
US9200061B2 (en) * 2004-02-06 2015-12-01 Morpho Sys AG Generation and profiling of fully human HuCAL gold®-derived therapeutic antibodies specific for human CD3i
WO2006122355A1 (en) * 2005-05-16 2006-11-23 Qrsciences Pty Ltd A system and method for improving the analysis of chemical substances using nqr
US9180149B2 (en) 2005-09-07 2015-11-10 Sillajen Biotherapeutics, Inc. Systemic treatment of metastatic and/or systemically-disseminated cancers using GM-CSF-expressing poxviruses
EP2860192B1 (en) 2005-10-12 2017-09-27 MorphoSys AG Generation and profiling of fully human HuCAL GOLD-derived therapeutic antibodies specific for human CD38
EP1914242A1 (en) * 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
US7259237B1 (en) 2006-12-29 2007-08-21 Miller Kent D Pan-antiviral peptides
PT2019104E (pt) 2007-07-19 2013-12-03 Sanofi Sa Agentes citotóxicos compreendendo novos derivados de tomaimicina e sua utilização terapêutica
PA8849001A1 (es) * 2008-11-21 2010-06-28 Lilly Co Eli Anticuerpos de c-met
EP2191842A1 (en) * 2008-11-28 2010-06-02 Sanofi-Aventis Antitumor combinations containing antibodies recognizing specifically CD38 and cytarabine
EP2191840A1 (en) * 2008-11-28 2010-06-02 Sanofi-Aventis Antitumor combinations containing antibodies recognizing specifically CD38 and melphalan
EP2191843A1 (en) * 2008-11-28 2010-06-02 Sanofi-Aventis Antitumor combinations containing antibodies recognizing specifically CD38 and cyclophosphamide
EP2191841A1 (en) * 2008-11-28 2010-06-02 Sanofi-Aventis Antitumor combinations containing antibodies recognizing specifically CD38 and vincristine
FR2947269B1 (fr) 2009-06-29 2013-01-18 Sanofi Aventis Nouveaux composes anticancereux
FR2949469A1 (fr) * 2009-08-25 2011-03-04 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application en therapeutique
CN103347393A (zh) 2009-09-14 2013-10-09 杰能斯有限公司 溶瘤牛痘病毒组合癌症疗法
UY32913A (es) 2009-10-02 2011-04-29 Sanofi Aventis Nuevos maitansinoides y el uso de dichos maitansinoides para preparar conjugados con un anticuero
AU2010335282B2 (en) 2009-12-22 2015-05-21 Roche Glycart Ag Anti-HER3 antibodies and uses thereof
PL2516465T3 (pl) * 2009-12-23 2016-11-30 Przeciwciała anty-bv8 i ich zastosowania
US9220743B2 (en) * 2010-01-22 2015-12-29 Nuovo Biologics, Llc Pan-antiviral peptides for protein kinase inhibition
EP2789622B1 (en) 2010-04-15 2017-03-01 MedImmune Limited Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
KR101772354B1 (ko) 2010-04-15 2017-08-28 시애틀 지네틱스, 인크. 표적화된 피롤로벤조디아제핀 접합체
SI2580243T1 (sl) 2010-06-09 2020-02-28 Genmab A/S Protitelesa proti humanemu CD38
FR2963007B1 (fr) 2010-07-26 2013-04-05 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application therapeutique
CN103118706B (zh) 2010-09-27 2016-05-18 莫佛塞斯公司 抗cd38抗体与来那度胺或硼替佐米用于治疗多发性骨髓瘤和nhl
UA112170C2 (uk) * 2010-12-10 2016-08-10 Санофі Протипухлинна комбінація, що містить антитіло, яке специфічно розпізнає cd38, і бортезоміб
JOP20210044A1 (ar) 2010-12-30 2017-06-16 Takeda Pharmaceuticals Co الأجسام المضادة لـ cd38
EP2661278B1 (en) * 2011-01-04 2019-06-19 SillaJen Biotherapeutics, Inc. Tumor specific complement dependent cytotoxicity (cdc) antibodies generated by administration of oncolytic vaccinia virus, for use in the treatment of cancer
SG193996A1 (en) 2011-03-29 2013-11-29 Immunogen Inc Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
US8795673B2 (en) 2011-03-29 2014-08-05 Immunogen, Inc. Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process
RU2013151599A (ru) 2011-04-21 2015-05-27 Сиэтл Дженетикс, Инк. Новые конъюгаты связывающее соединение-активное соединение (adc) и их применение
JP6125489B2 (ja) * 2011-04-29 2017-05-10 アペクシジェン， インコーポレイテッド 抗ｃｄ４０抗体および使用方法
HUE048876T2 (hu) 2011-05-09 2020-08-28 Mayo Found Medical Education & Res Rákos megbetegedések kezelése
CN107903325B (zh) 2011-05-16 2021-10-29 埃泰美德(香港)有限公司 多特异性fab融合蛋白及其使用方法
JP6170494B2 (ja) 2011-09-20 2017-07-26 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ ピロロベンゾジアゼピン
KR101891859B1 (ko) 2011-10-14 2018-08-24 메디뮨 리미티드 피롤로벤조디아제핀
AU2012322932B2 (en) 2011-10-14 2016-11-10 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines
ES2687246T3 (es) 2011-10-14 2018-10-24 Seattle Genetics, Inc. Pirrolobenzodiazepinas y conjugados dirigidos
EP3309162A1 (en) 2011-10-14 2018-04-18 Seattle Genetics, Inc. Targeted conjugates of pyrrolobenzodiazepines
NZ756727A (en) 2011-10-28 2022-12-23 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Polypeptide constructs and uses thereof
WO2013075740A1 (en) * 2011-11-23 2013-05-30 Sanofi Antibody purification method
CA2864092C (en) * 2012-02-10 2021-06-29 Seattle Genetics, Inc. Detection and treatment of cd30+ cancers
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
CN104470544B (zh) 2012-05-01 2018-01-12 基因泰克公司 抗pmel17抗体和免疫缀合物
CA2873889A1 (en) 2012-07-09 2014-01-16 Genentech, Inc. Anti-cd22 antibodies and immunoconjugates
ES2643225T3 (es) 2012-07-09 2017-11-21 Genentech, Inc. Inmunoconjugados que comprenden anticuerpos anti-CD79b
CA2879665A1 (en) 2012-08-02 2014-02-06 Genentech, Inc. Anti-etbr antibodies and immunoconjugates
RU2650618C2 (ru) 2012-09-25 2018-04-16 МорфоСис АГ Комбинации и их применение
AU2013327638B2 (en) 2012-10-01 2018-06-14 Mayo Foundation For Medical Education And Research Cancer treatments
WO2014055877A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Immunogen, Inc. Use of a pvdf membrane to purify cell-binding agent cytotoxic agent conjugates
MX364327B (es) 2012-10-12 2019-04-23 Medimmune Ltd Conjugados del anticuerpo pirrolobenzodiazepina - anti-cd22.
WO2014057120A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
SI2906253T1 (sl) 2012-10-12 2018-11-30 Adc Therapeutics Sa Konjugati pirolobenzodiazepin-protitelo proti PSMA
MX364328B (es) 2012-10-12 2019-04-23 Medimmune Ltd Conjugados del anticuerpo pirrolobenzodiazepina.
MX338711B (es) 2012-10-12 2016-04-28 Medimmune Ltd Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de las mismas.
AU2013328673B2 (en) 2012-10-12 2017-07-13 Medimmune Limited Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
US9415117B2 (en) 2012-10-12 2016-08-16 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
JP6392763B2 (ja) 2012-10-12 2018-09-19 エイディーシー・セラピューティクス・エス・アーＡｄｃ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｓａ ピロロベンゾジアゼピン−抗体結合体
ES2680153T3 (es) 2012-10-12 2018-09-04 Adc Therapeutics Sa Conjugados de anticuerpos anti-PSMA-pirrolobenzodiazepinas
EP2914302B1 (en) 2012-11-05 2017-01-04 MorphoSys AG Radiolabelled antibody and uses thereof
US9624308B2 (en) 2012-11-05 2017-04-18 Pierre Fabre Medicament Antigen binding proteins
UA118255C2 (uk) 2012-12-07 2018-12-26 Санофі Композиція, яка містить антитіло до cd38 і леналідомід
US10342869B2 (en) 2012-12-07 2019-07-09 The Regents Of The University Of California Compositions comprising anti-CD38 antibodies and lenalidomide
NZ710746A (en) 2013-03-13 2018-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CN105407921A (zh) * 2013-03-13 2016-03-16 赛诺菲 包含抗cd38抗体和卡非佐米的组合物
US9821074B2 (en) 2013-03-13 2017-11-21 Genentech, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
WO2014159835A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
ES2774976T3 (es) 2013-04-29 2020-07-23 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Anticuerpos anti-CD38 y fusiones con interferón alfa-2b atenuado
US11117975B2 (en) 2013-04-29 2021-09-14 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Anti-CD38 antibodies and fusions to attenuated interferon alpha-2B
NO2994485T3 (me) * 2013-05-06 2018-06-09
WO2015023355A1 (en) 2013-08-12 2015-02-19 Genentech, Inc. 1-(chloromethyl)-2,3-dihydro-1h-benzo[e]indole dimer antibody-drug conjugate compounds, and methods of use and treatment
MX2016003248A (es) 2013-09-17 2016-06-07 Genentech Inc Metodos de uso de anticuerpos anti-lgr5.
US9956299B2 (en) 2013-10-11 2018-05-01 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine—antibody conjugates
WO2015052534A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP3054983B1 (en) 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
CN103513040B (zh) * 2013-10-16 2015-03-11 常晓天 蛋白cd38在制备类风湿性关节炎诊断标记物中的应用
PL3063173T3 (pl) * 2013-10-31 2021-01-11 Sanofi Swoiste przeciwciała anty-cd38 do leczenia nowotworów u ludzi
PE20160724A1 (es) 2013-11-04 2016-08-04 Glenmark Pharmaceuticals Sa Produccion de inmunoglobulinas heterodimericas de redireccionamiento de celulas t
SG11201604784XA (en) 2013-12-13 2016-07-28 Genentech Inc Anti-cd33 antibodies and immunoconjugates
JP6980384B2 (ja) 2013-12-16 2021-12-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド １−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール二量体抗体−薬物コンジュゲート化合物、並びに使用及び処置の方法
JP6721507B2 (ja) 2013-12-23 2020-07-15 バイエル・ファルマ・アクティエンゲゼルシャフト Ｋｓｐ阻害剤との抗体薬物複合体（ａｄｃ）
JP2017506640A (ja) * 2014-02-14 2017-03-09 セントローズ， エルエルシー 細胞外標的化薬物共役体
RU2714258C2 (ru) 2014-02-14 2020-02-13 Селлектис Клетки для иммунотерапии, сконструированные для нацеливания на антиген, присутствующий одновременно на иммунных клетках и на патологических клетках
US9732154B2 (en) 2014-02-28 2017-08-15 Janssen Biotech, Inc. Anti-CD38 antibodies for treatment of acute lymphoblastic leukemia
US9603927B2 (en) 2014-02-28 2017-03-28 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies with anti-CD38 antibodies
WO2015149077A1 (en) * 2014-03-28 2015-10-01 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind to cd38 and cd3
UA119352C2 (uk) 2014-05-01 2019-06-10 Тева Фармасьютикалз Острейліа Пті Лтд Комбінація леналідоміду або помалідоміду і конструкції анти-cd38 антитіло-атенуйований інтерферон альфа-2b та спосіб лікування суб'єкта, який має cd38-експресуючу пухлину
CA2946662A1 (en) 2014-05-22 2015-11-26 Genentech, Inc. Anti-gpc3 antibodies and immunoconjugates
WO2015195555A1 (en) 2014-06-16 2015-12-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Blocking cd38 using anti-cd38 antibody conjugated to protein g to protect nk cells
CN113134095A (zh) 2014-06-16 2021-07-20 梅约医学教育与研究基金会 治疗骨髓瘤
WO2015195556A1 (en) 2014-06-16 2015-12-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Blocking cd38 using anti-cd38 f(ab')2 to protect nk cells
US9212225B1 (en) * 2014-07-01 2015-12-15 Amphivena Therapeutics, Inc. Bispecific CD33 and CD3 binding proteins
AU2015289644A1 (en) 2014-07-15 2017-02-02 Juno Therapeutics, Inc. Engineered cells for adoptive cell therapy
US10617757B2 (en) 2014-08-08 2020-04-14 The Regents Of The University Of California Methods for treating multiple myeloma
EP4074735A1 (en) 2014-08-28 2022-10-19 BioAtla, Inc. Conditionally active chimeric antigen receptors for modified t-cells
MX2017003115A (es) * 2014-09-09 2017-11-17 Janssen Biotech Inc Terapias de combinacion con anticuerpos anti-cd38.
EP3191521A2 (en) 2014-09-12 2017-07-19 F. Hoffmann-La Roche AG Cysteine engineered antibodies and conjugates
TW201625689A (zh) 2014-09-12 2016-07-16 建南德克公司 抗－ｂ７－ｈ４抗體及免疫結合物
EA201790569A1 (ru) 2014-09-12 2017-08-31 Дженентек, Инк. Антитела и иммуноконъюгаты против cll-1
US9518118B2 (en) 2014-09-12 2016-12-13 Genentech, Inc. Anti-HER2 antibodies and immunoconjugates
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CA2957491A1 (en) * 2014-09-16 2016-03-24 Innate Pharma Neutralization of inhibitory pathways in lymphocytes
MX2017003472A (es) 2014-09-17 2017-10-31 Genentech Inc Inmunoconjugados que comprenden anticuerpos anti-her2.
US9446148B2 (en) 2014-10-06 2016-09-20 Mayo Foundation For Medical Education And Research Carrier-antibody compositions and methods of making and using the same
US10544199B2 (en) 2014-10-29 2020-01-28 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Interferon alpha 2B variants
US11773166B2 (en) 2014-11-04 2023-10-03 Ichnos Sciences SA CD3/CD38 T cell retargeting hetero-dimeric immunoglobulins and methods of their production
MA40894A (fr) * 2014-11-04 2017-09-12 Glenmark Pharmaceuticals Sa Immunoglobulines hétéro-dimères reciblant des lymphocytes t cd3/cd38 et leurs procédés de production
EP3220959A1 (en) 2014-11-19 2017-09-27 ImmunoGen, Inc. Process for preparing cell-binding agent-cytotoxic agent conjugates
WO2016083468A1 (en) 2014-11-25 2016-06-02 Adc Therapeutics Sa Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
WO2016086196A2 (en) 2014-11-26 2016-06-02 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind cd3 and cd38
CN113735976A (zh) 2014-11-26 2021-12-03 森科股份有限公司 结合cd3和肿瘤抗原的异二聚体抗体
BR112017011749A2 (pt) * 2014-12-04 2018-05-15 Janssen Biotech Inc anticorpos anti-cd38 para o tratamento de leucemia mieloide aguda
GB201506389D0 (en) * 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506411D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Bergenbio As Humanized anti-axl antibodies
MA42043A (fr) 2015-05-07 2018-03-14 Agenus Inc Anticorps anti-ox40 et procédés d'utilisation de ceux-ci
US10533057B2 (en) 2015-05-13 2020-01-14 Morphosys Ag Treatment for multiple myeloma (MM)
MY198983A (en) 2015-05-20 2023-10-06 Janssen Biotech Inc Anti-cd38 antibodies for treatment of light chain amyloidosis and other cd38-positive hematological malignancies
JP6797137B2 (ja) 2015-05-29 2020-12-09 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｏｘ４０に対する抗体およびその使用
CN107849096B (zh) 2015-05-30 2022-05-24 分子模板公司 去免疫化的志贺毒素a亚基支架和包含它们的细胞靶向分子
US10668149B2 (en) 2015-06-22 2020-06-02 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies for heme malignancies with anti-CD38 antibodies and survivin inhibitors
KR20180018808A (ko) 2015-06-22 2018-02-21 바이엘 파마 악티엔게젤샤프트 효소적으로 절단가능한 기를 갖는 항체 약물 접합체 (adc) 및 항체 전구약물 접합체 (apdc)
EP3313441B1 (en) 2015-06-24 2024-02-21 Janssen Biotech, Inc. Immune modulation and treatment of solid tumors with antibodies that specifically bind cd38
US20170044265A1 (en) 2015-06-24 2017-02-16 Janssen Biotech, Inc. Immune Modulation and Treatment of Solid Tumors with Antibodies that Specifically Bind CD38
MA42895A (fr) 2015-07-15 2018-05-23 Juno Therapeutics Inc Cellules modifiées pour thérapie cellulaire adoptive
TW201707725A (zh) 2015-08-18 2017-03-01 美國馬友醫藥教育研究基金會 載體－抗體組合物及其製造及使用方法
CA2998611A1 (en) * 2015-09-14 2017-03-23 Leukemia Therapeutics, LLC Identification of novel diagnostics and therapeutics by modulating rhoh
US11078286B2 (en) 2015-09-20 2021-08-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies specific for fibroblast growth factor receptor 4 (FGFR4) and methods of their use
TW201713360A (en) 2015-10-06 2017-04-16 Mayo Foundation Methods of treating cancer using compositions of antibodies and carrier proteins
WO2017060322A2 (en) 2015-10-10 2017-04-13 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Ptefb-inhibitor-adc
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
DK3370770T3 (da) 2015-11-03 2021-03-01 Janssen Biotech Inc Subkutane formuleringer af anti-cd38-antistoffer og anvendelser deraf
US10781261B2 (en) 2015-11-03 2020-09-22 Janssen Biotech, Inc. Subcutaneous formulations of anti-CD38 antibodies and their uses
CN105837688B (zh) * 2015-11-20 2019-02-26 北京大学深圳研究生院 单域抗体及其编码基因，免疫毒素及其编码基因、制备方法、表达载体、应用，及宿主细胞
KR20180083944A (ko) 2015-12-02 2018-07-23 아게누스 인코포레이티드 항체 및 이의 사용 방법
EP3399861A4 (en) 2016-01-07 2019-08-07 Mayo Foundation for Medical Education and Research METHOD FOR THE TREATMENT OF CANCER WITH INTERFERON
CN108778327B (zh) * 2016-01-09 2021-11-05 嘉立医疗科技(广州)有限公司 用于癌症治疗的钙粘蛋白-17特异性抗体和细胞毒性细胞
GB201601431D0 (en) 2016-01-26 2016-03-09 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines
MA47022A (fr) 2016-02-05 2018-12-12 Immunogen Inc Procédé efficace de préparation de conjugués agent de liaison cellulaire-agent cytotoxique
GB201602356D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
GB201602359D0 (en) 2016-02-10 2016-03-23 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
WO2017139698A1 (en) 2016-02-12 2017-08-17 Mayo Foundation For Medical Education And Research Hematologic cancer treatments
IL260750B2 (en) 2016-03-04 2024-02-01 Morphosys Ag Clinical assessment of m-protein response in multiple myeloma
CN109476756B (zh) 2016-03-15 2022-05-31 埃泰美德(香港)有限公司 一种多特异性Fab融合蛋白及其用途
AU2017238118A1 (en) 2016-03-21 2018-10-11 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods for improving the therapeutic index for a chemotherapeutic drug
US11305020B2 (en) 2016-03-21 2022-04-19 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods for reducing toxicity of a chemotherapeutic drug
CN108883195A (zh) 2016-03-24 2018-11-23 拜耳制药股份公司 具有酶促可裂解基团的细胞毒性活性物质的前药
US10618969B2 (en) 2016-04-06 2020-04-14 Mayo Foundation For Medical Education And Research Carrier-binding agent compositions and methods of making and using the same
KR20200087875A (ko) 2016-04-15 2020-07-21 바이오아트라, 엘엘씨 항 Axl항체 및 이의 면역접합체와 이것들의 용도
GB201607478D0 (en) 2016-04-29 2016-06-15 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine Conjugates
WO2017196847A1 (en) 2016-05-10 2017-11-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Variable new antigen receptor (vnar) antibodies and antibody conjugates targeting tumor and viral antigens
KR20180137517A (ko) 2016-05-13 2018-12-27 바이오아트라, 엘엘씨 항 ror2 항체, 항체 단편 및 이의 면역접합체와 이것들의 용도
EP3465221B1 (en) 2016-05-27 2020-07-22 H. Hoffnabb-La Roche Ag Bioanalytical method for the characterization of site-specific antibody-drug conjugates
WO2017214182A1 (en) 2016-06-07 2017-12-14 The United States Of America. As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Fully human antibody targeting pdi for cancer immunotherapy
CN109310781B (zh) 2016-06-15 2024-06-18 拜耳制药股份公司 具有ksp抑制剂和抗-cd123-抗体的特异性抗体-药物-缀合物(adc)
EP3475304B1 (en) 2016-06-28 2022-03-23 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind somatostatin receptor 2
EP3474895A1 (en) 2016-06-28 2019-05-01 UMC Utrecht Holding B.V. TREATMENT OF IgE-MEDIATED DISEASES WITH ANTIBODIES THAT SPECIFICALLY BIND CD38
CN117330747A (zh) 2016-07-15 2024-01-02 武田药品工业株式会社 用于评估对于成浆细胞和浆细胞耗竭性疗法的应答的方法和材料
CN110087673A (zh) 2016-07-19 2019-08-02 梯瓦制药澳大利亚股份有限公司 抗cd47联合治疗
US10478497B2 (en) * 2016-07-20 2019-11-19 Hybrigenics S.A. Combinations of inecalcitol with an anti-CD38 agent and their uses for treating cancer
WO2018026533A1 (en) 2016-08-02 2018-02-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies targeting glypican-2 (gpc2) and use thereof
JP7093767B2 (ja) 2016-08-11 2022-06-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド ピロロベンゾジアゼピンプロドラッグ及びその抗体コンジュゲート
KR20190053203A (ko) 2016-09-01 2019-05-17 메이오 파운데이션 포 메디칼 에쥬케이션 앤드 리써치 Ｔ－세포 암을 표적화하는 방법 및 조성물
KR20220151022A (ko) 2016-09-01 2022-11-11 메이오 파운데이션 포 메디칼 에쥬케이션 앤드 리써치 암 치료용 담체－ｐｄ－ｌ１ 결합제 조성물
WO2018048958A1 (en) 2016-09-06 2018-03-15 Mayo Foundation For Medical Education And Research Paclitaxel-albumin-binding agent compositions and methods for using and making the same
AU2017324335A1 (en) 2016-09-06 2019-03-28 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods of treating PD-L1 expressing cancer
WO2018048815A1 (en) 2016-09-06 2018-03-15 Nantibodyfc, Llc Methods of treating triple-negative breast cancer using compositions of antibodies and carrier proteins
GB201617466D0 (en) 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
TWI788307B (zh) * 2016-10-31 2023-01-01 美商艾歐凡斯生物治療公司 用於擴增腫瘤浸潤性淋巴細胞之工程化人造抗原呈現細胞
CA3041340A1 (en) 2016-11-09 2018-05-17 Agenus Inc. Anti-ox40 antibodies, anti-gitr antibodies, and methods of use thereof
CA3036983A1 (en) 2016-11-21 2018-05-24 Cureab Gmbh Anti-gp73 antibodies and immunoconjugates
EP3558388A1 (de) 2016-12-21 2019-10-30 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Binder-wirkstoff-konjugate (adcs) mit enzymatisch spaltbaren gruppen
US11236171B2 (en) 2016-12-21 2022-02-01 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies specific for FLT3 and uses thereof
WO2018114804A1 (de) 2016-12-21 2018-06-28 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Spezifische antikörper-wirkstoff-konjugate (adcs) mit ksp-inhibitoren
EP3558386A1 (de) 2016-12-21 2019-10-30 Bayer Aktiengesellschaft Prodrugs von cytotoxischen wirkstoffen mit enzymatisch spaltbaren gruppen
US20180325931A1 (en) 2017-01-21 2018-11-15 Ningbo Zhiming Biotechnology Co., Ltd. Use of paeoniflorin-6'-o-benzenesulfonate in treatment of sjögren's syndrome
ES2871001T3 (es) 2017-02-08 2021-10-28 Adc Therapeutics Sa Conjugados de pirrolobenzodiazepinas y anticuerpos
GB201702031D0 (en) 2017-02-08 2017-03-22 Medlmmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
RS63502B1 (sr) 2017-04-18 2022-09-30 Medimmune Ltd Konjugati pirolobenzodiazepina
EP3612234B1 (en) 2017-04-20 2024-03-13 ADC Therapeutics SA Combination therapy with an anti-axl antibody-drug conjugate
AU2018268970B2 (en) 2017-05-19 2024-12-12 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibody targeting tnfr2 for cancer immunotherapy
WO2018224685A1 (en) 2017-06-08 2018-12-13 Tusk Therapeutics Ltd Cd38 modulating antibody
KR102442736B1 (ko) 2017-06-14 2022-09-16 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 항-cd19 adc의 투여를 위한 투약량 체제
CA3067311A1 (en) 2017-06-20 2018-12-27 Sorrento Therapeutics, Inc. Cd38 antibody drug conjugate
PL3538645T3 (pl) 2017-06-20 2021-11-08 Institut Curie Komórki odpornościowe z defektem suv39h1
WO2019005208A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services ANTIBODIES TO HUMAN MESOTHELIN AND USES IN ANTICANCER THERAPY
WO2019006280A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Lentigen Technology, Inc. HUMAN MONOCLONAL ANTIBODIES SPECIFIC TO CD33 AND METHODS OF USE
EP3434692A1 (en) * 2017-07-24 2019-01-30 Encefa Compounds which specifically binds to cd38 for use in the treatment of neurodegenerative diseases
JP7370958B2 (ja) 2017-07-31 2023-10-30 アクティニウム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 血液悪性腫瘍の治療
EP4296680A3 (en) * 2017-08-10 2024-03-20 Grifols Diagnostic Solutions Inc. An oligomerization tag comprising an immunoglobulin fc region and a polyhis domain
EP3668896A1 (en) * 2017-08-16 2020-06-24 Black Belt Therapeutics Limited Cd38 modulating antibody
EP3668543A1 (en) 2017-08-16 2020-06-24 Black Belt Therapeutics Limited Cd38 antibody
WO2019035938A1 (en) 2017-08-16 2019-02-21 Elstar Therapeutics, Inc. MULTISPECIFIC MOLECULES BINDING TO BCMA AND USES THEREOF
BR112020003003A2 (pt) 2017-08-18 2020-08-11 Medimmune Limited conjugados de pirrolobenzodiazepina
CA3075399A1 (en) 2017-09-13 2019-03-21 Teneobio, Inc. Heavy chain antibodies binding to ectoenzymes
CN111094353A (zh) * 2017-09-14 2020-05-01 葛兰素史密斯克莱知识产权发展有限公司 用于癌症的组合治疗
CN116999572A (zh) 2017-09-29 2023-11-07 第一三共株式会社 抗体－药物偶联物、药物组合物及其在制备治疗肿瘤的药物中的应用
CN111183157A (zh) 2017-10-02 2020-05-19 威特拉公司 Cd138抗体分子及其用途
KR20200061402A (ko) * 2017-10-10 2020-06-02 사노피 항-cd38 항체 및 항-cd3 및 항-cd28 항체와의 조합
AU2018359527A1 (en) 2017-10-31 2020-05-07 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating high risk multiple myeloma
SG11202003501XA (en) 2017-11-01 2020-05-28 Juno Therapeutics Inc Antibodies and chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen
AU2018360800B2 (en) 2017-11-01 2024-11-21 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors specific for B-cell maturation antigen (BCMA)
WO2019089858A2 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods of assessing or monitoring a response to a cell therapy
WO2019089855A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Process for generating therapeutic compositions of engineered cells
WO2019089848A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods associated with tumor burden for assessing response to a cell therapy
ES2971659T3 (es) 2017-11-01 2024-06-06 Juno Therapeutics Inc Procedimiento para la producción de una composición de células T
US20230132400A9 (en) * 2017-11-10 2023-04-27 Actinium Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for treatment of a hematological disease
JP2021505168A (ja) 2017-12-08 2021-02-18 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 操作されたｔ細胞の組成物を製造するための方法
EP3720949A1 (en) 2017-12-08 2020-10-14 Juno Therapeutics, Inc. Serum-free media formulation for culturing cells and methods of use thereof
SG11202005217VA (en) 2017-12-08 2020-07-29 Juno Therapeutics Inc Phenotypic markers for cell therapy and related methods
EP3694546A1 (en) 2018-01-30 2020-08-19 Cellectis Combination comprising allogeneic immune cells deficient for an antigen present on both t-cells and pathological cells and therapeutic antibody against said antigen
CN110144008B (zh) 2018-02-12 2021-03-19 杭州尚健生物技术有限公司 Cd38蛋白抗体及其应用
GB201803342D0 (en) 2018-03-01 2018-04-18 Medimmune Ltd Methods
BR112020015479A2 (pt) * 2018-03-08 2020-12-08 Phanes Therapeutics, Inc. Anticorpos anticlaudina 18.2 e usos dos mesmos
US10982006B2 (en) 2018-04-04 2021-04-20 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind fibroblast activation protein
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US12048745B2 (en) 2018-05-01 2024-07-30 Augusta University Research Institute, Inc. Methods for detecting and reversing immune therapy resistance
MA52640A (fr) 2018-05-16 2021-03-24 Janssen Biotech Inc Procédés de traitement de cancers et d'amélioration de l'efficacité d'agents thérapeutiques de redirection de lymphocytes t
CN108752475B (zh) * 2018-06-14 2021-07-30 北京智仁美博生物科技有限公司 抗人cd38抗体及其用途
TW202019962A (zh) 2018-07-10 2020-06-01 法商賽諾菲公司 標靶CD38及TGF-β的組合療法
JP7459043B2 (ja) 2018-07-12 2024-04-01 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ 親和性成熟ｃｄ２２特異的モノクローナル抗体およびその使用
CA3106146A1 (en) 2018-07-13 2020-01-16 Genmab A/S Variants of cd38 antibody and uses thereof
WO2020012038A1 (en) 2018-07-13 2020-01-16 Genmab A/S Trogocytosis-mediated therapy using cd38 antibodies
CA3106544A1 (en) 2018-08-08 2020-02-13 Mitchell Ho High affinity monoclonal antibodies targeting glypican-2 and uses thereof
EP3833759A1 (en) 2018-08-09 2021-06-16 Juno Therapeutics, Inc. Methods for assessing integrated nucleic acids
CN112513087B (zh) * 2018-09-11 2023-01-24 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗cd38抗体、其抗原结合片段及医药用途
CN109293773B (zh) * 2018-09-25 2020-09-04 上海邦耀生物科技有限公司 靶向cd38蛋白的抗体、嵌合抗原受体和药物
CN109265551B (zh) * 2018-09-25 2020-09-15 华东师范大学 Cd38抗体、嵌合抗原受体和药物
CN113195540A (zh) 2018-10-17 2021-07-30 詹森生物科技公司 提供皮下施用抗cd38抗体的方法
JP2022505445A (ja) 2018-10-26 2022-01-14 テネオバイオ， インコーポレイテッド Ｃｄ３８に結合する重鎖抗体
BR112021008289A2 (pt) 2018-11-01 2021-10-26 Juno Therapeutics, Inc. Métodos para tratamento utilizando receptores de antígeno quimérico específico para antígeno de maturação de célula b
PE20211058A1 (es) 2018-11-01 2021-06-07 Juno Therapeutics Inc Receptores de antigenos quimericos especificos para el miembro d del grupo 5 de la clase c del receptor acoplado a proteina g (gprc5d)
CN113015805B (zh) 2018-11-13 2024-12-03 詹森生物科技公司 抗cd38抗体产生期间的痕量金属的控制
JP7608334B2 (ja) * 2018-12-14 2025-01-06 モルフォシス・アーゲー 抗体製剤
EP3883608A1 (en) 2019-01-08 2021-09-29 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Cross-species single domain antibodies targeting mesothelin for treating solid tumors
US12122843B2 (en) 2019-01-22 2024-10-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services High affinity monoclonal antibodies targeting glypican-1 and methods of use
JP2022523710A (ja) * 2019-01-28 2022-04-26 マルチチュード インコーポレーテッド Ｃｄ４４に特異的な抗体
US11939390B2 (en) 2019-01-28 2024-03-26 Sanofi-Aventis U.S. Llc Methods of treating multiple myeloma
MX2021010313A (es) 2019-02-27 2021-09-23 Genentech Inc Dosificacion para el tratamiento con anticuerpos anti-tigit y anti-cd20 o anti-cd38.
CN113574071A (zh) 2019-03-15 2021-10-29 莫佛塞斯公司 用于治疗自身抗体介导的自身免疫疾病的抗-cd38抗体及其药物组合物
KR20210139270A (ko) 2019-03-15 2021-11-22 메드임뮨 리미티드 암의 치료에 사용하기 위한 아제티도벤조디아제핀 이량체 및 이를 포함하는 컨쥬게이트
MA55761A (fr) * 2019-04-23 2022-03-02 Sanofi Sa Formulations et anticorps anti-cd38
SG11202111372VA (en) 2019-05-01 2021-11-29 Juno Therapeutics Inc Cells expressing a chimeric receptor from a modified cd247 locus, related polynucleotides and methods
JP2022531222A (ja) 2019-05-01 2022-07-06 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 改変されたｔｇｆｂｒ２遺伝子座から組換え受容体を発現する細胞、関連ポリヌクレオチド、および方法
US20210171650A1 (en) 2019-05-14 2021-06-10 Sanofi Methods of administering anti-cd38 antibody
US11655302B2 (en) 2019-06-10 2023-05-23 Sanofi Anti-CD38 antibodies and formulations
MX2022000016A (es) 2019-06-27 2022-02-24 Crispr Therapeutics Ag Uso de linfocitos t con receptor de antigeno quimerico e inhibidores de linfocitos citoliticos naturales para el tratamiento del cancer.
AU2020298572A1 (en) 2019-07-02 2021-11-18 Fred Hutchinson Cancer Center Recombinant Ad35 vectors and related gene therapy improvements
MX2022000922A (es) 2019-07-23 2022-05-03 Mnemo Therapeutics Celulas inmunes defectuosas para suv39h1.
CN112538114A (zh) * 2019-09-20 2021-03-23 上海普铭生物科技有限公司 抗人cd38抗体及其应用
AU2020371628A1 (en) * 2019-10-21 2022-05-19 Purdue Research Foundation Engineered natural killer cells and methods for using the same in immunotherapy and autophagy inhibition techniques
EP4031250A1 (en) 2019-10-22 2022-07-27 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services High affinity nanobodies targeting b7h3 (cd276) for treating multiple solid tumors
US20220389103A1 (en) 2019-11-06 2022-12-08 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for treatment of hematologic cancers
GB201916150D0 (en) 2019-11-06 2019-12-18 Univ Of Ireland Galway Treatment of multiple myeloma
CN112876563B (zh) * 2019-11-29 2022-08-16 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 药物组合物及其制备方法和应用
WO2021113739A1 (en) 2019-12-05 2021-06-10 Thomas Ballet Formulations of anti-cd38 antibodies for subcutaneous administration
EP4069740A1 (en) * 2019-12-06 2022-10-12 Sanofi-Aventis U.S. LLC Use of isatuximab for the treatment of relapsed and/or refractory multiple myeloma
US20230032465A1 (en) 2019-12-12 2023-02-02 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Antibody-drug conjugates specific for cd276 and uses thereof
EP4077391A1 (en) 2019-12-18 2022-10-26 Teneofour, Inc. Heavy chain antibodies binding to cd38
JP2023510397A (ja) 2020-01-16 2023-03-13 ジェンマブ エー／エス Ｃｄ３８抗体の製剤およびその使用
IL297147A (en) 2020-04-10 2022-12-01 Juno Therapeutics Inc Methods and Uses Related to Transgenic Cell Therapy with a Chimeric Antigen Receptor Directed to a B-Cell Maturation Antigen
KR20230005268A (ko) * 2020-04-24 2023-01-09 밀레니엄 파머슈티컬스 인코퍼레이티드 항-cd19 항체 및 이의 용도
US20230178239A1 (en) 2020-05-13 2023-06-08 Juno Therapeutics, Inc. Methods of identifying features associated with clinical response and uses thereof
JP2023531531A (ja) 2020-06-26 2023-07-24 ジュノ セラピューティクス ゲーエムベーハー 組換え受容体を条件付きで発現する操作されたｔ細胞、関連ポリヌクレオチド、および方法
WO2021260657A1 (en) 2020-06-26 2021-12-30 Crispr Therapeutics Ag Allogeneic cell therapy of b cell malignancies using genetically engineered t cells targeting cd19
CN111808193B (zh) * 2020-06-30 2022-04-05 源道隆（苏州）医学科技有限公司 可结合人cd38的纳米抗体及其应用
EP4188395A1 (en) 2020-07-30 2023-06-07 Institut Curie Immune cells defective for socs1
CN114075285B (zh) * 2020-08-20 2023-05-30 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 抗人cd38人源化单克隆抗体及其应用
EP4211244A1 (en) 2020-09-14 2023-07-19 Vor Biopharma, Inc. Compositions and methods for cd38 modification
WO2022093745A1 (en) 2020-10-26 2022-05-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Single domain antibodies targeting sars coronavirus spike protein and uses thereof
CN112300281B (zh) * 2020-10-29 2021-06-11 杭州爱唯生命科技有限公司 含有nk细胞的药物组合物及其治疗癌症的用途
WO2022099257A1 (en) 2020-11-03 2022-05-12 Sanofi-Aventis U.S. Llc Use of isatuximab for the treatment of multiple myeloma
KR20230090367A (ko) 2020-11-04 2023-06-21 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 변형된 불변 cd3 이뮤노글로불린 슈퍼패밀리 쇄 유전자좌로부터 키메라 수용체를 발현하는 세포 및 관련 폴리뉴클레오티드 및 방법
US20240003879A1 (en) 2020-11-27 2024-01-04 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for diagnosis and monitoring of toxic epidermal necrolysis
JP2024508207A (ja) 2020-12-02 2024-02-26 ブイアイビー ブイゼットダブリュ がんに対する組み合わせ治療におけるｌｔｂｒアゴニスト
WO2022137186A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Crispr Therapeutics Ag Cancer treatment using cd38 inhibitor and/or lenalidomide and t-cells expressing a chimeric antigen receptor
KR20230142834A (ko) 2021-01-14 2023-10-11 모르포시스 아게 항-cd38 항체 및 이의 용도
US20240101673A1 (en) 2021-02-03 2024-03-28 Mozart Therapeutics, Inc. Binding agents and methods of using the same
US20220275090A1 (en) 2021-02-22 2022-09-01 Janssen Biotech, Inc. Combination Therapies with Anti-CD38 Antibodies and PARP or Adenosine Receptor Inhibitors
TW202302642A (zh) 2021-03-01 2023-01-16 德商莫菲西斯公司 用於治療抗體介導移植物排斥用途之抗ｃｄ３８抗體
EP4301755A1 (en) 2021-03-03 2024-01-10 Juno Therapeutics, Inc. Combination of a t cell therapy and a dgk inhibitor
WO2022232612A1 (en) 2021-04-29 2022-11-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Lassa virus-specific nanobodies and methods of their use
JP2024517863A (ja) 2021-05-06 2024-04-23 ジュノ・セラピューティクス・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング 細胞を刺激し、形質導入する方法
EP4337763A1 (en) 2021-05-10 2024-03-20 Institut Curie Methods for the treatment of cancer, inflammatory diseases and autoimmune diseases
AR125851A1 (es) 2021-05-12 2023-08-16 Crispr Therapeutics Ag Células inmunes modificadas genéticamente que se focalizan en cd70 para su uso en el tratamiento de neoplasias malignas hematopoyéticas
AR125852A1 (es) 2021-05-12 2023-08-16 Crispr Therapeutics Ag Células inmunes modificadas genéticamente que se focalizan en cd70 para su uso en tratamiento de tumores sólidos
CN113244175B (zh) * 2021-05-22 2022-11-04 苏州大学 一种免疫囊泡美登素偶联物及其制备方法与应用
WO2022248602A1 (en) 2021-05-25 2022-12-01 Institut Curie Myeloid cells overexpressing bcl2
CA3216228A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Cross species single domain antibodies targeting pd-l1 for treating solid tumors
CN113278075B (zh) * 2021-06-18 2021-12-14 芜湖森爱驰生物科技有限公司 一种炎症检测试剂盒
WO2022271987A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 TeneoFour, Inc. Anti-cd38 antibodies and epitopes of same
TW202321303A (zh) 2021-07-19 2023-06-01 德商莫菲西斯公司 抗pla2r自體抗體媒介膜性腎病變之治療
MX2024001211A (es) 2021-07-28 2024-02-12 Genentech Inc Proteinas de fusion fc heterodimericas il15/il15r alfa para el tratamiento de tipos de cancer de sangre.
WO2023056403A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Genentech, Inc. Methods for treatment of hematologic cancers using anti-tigit antibodies, anti-cd38 antibodies, and pd-1 axis binding antagonists
CN113896802A (zh) * 2021-10-09 2022-01-07 宜明昂科生物医药技术（上海）有限公司 靶向cd47和cd38的重组融合蛋白及其制备和用途
WO2023076876A1 (en) 2021-10-26 2023-05-04 Mozart Therapeutics, Inc. Modulation of immune responses to viral vectors
JP2024540054A (ja) 2021-11-03 2024-10-31 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 癌を治療する方法及びｂｃｍａ×ｃｄ３二重特異性抗体の有効性を向上させる方法
CA3237175A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Janssen Biotech, Inc. Corticosteriod reduction in treatment with anti-cd38 antibodies
CN113912727B (zh) * 2021-11-16 2023-05-02 福州迈新生物技术开发有限公司 抗cd38蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用
JP2025501272A (ja) 2021-12-28 2025-01-17 ムネモ・セラピューティクス 不活性化されたｓｕｖ３９ｈ１及び改変ｔｃｒを有する免疫細胞
CN114457017B (zh) * 2022-01-19 2023-10-17 四川大学华西第二医院 一种小鼠成纤维细胞肿瘤细胞株HXLyAF-KBM及其应用
KR20240137075A (ko) 2022-01-28 2024-09-19 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 세포 조성물의 제조 방법
EP4472740A1 (en) 2022-01-31 2024-12-11 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Cd38 as a biomarker and biotarget in t-cell lymphomas
EP4479431A1 (en) 2022-02-18 2024-12-25 Rakuten Medical, Inc. Anti-programmed death-ligand 1 (pd-l1) antibody molecules, encoding polynucleotides, and methods of use
AU2023231217A1 (en) 2022-03-07 2024-10-17 Sanofi-Aventis U.S. Llc Use of isatuximab in combination with other agents for the treatment of multiple myeloma
WO2023187024A1 (en) 2022-03-31 2023-10-05 Institut Curie Modified rela protein for inducing interferon expression and engineered immune cells with improved interferon expression
WO2023215737A1 (en) 2022-05-03 2023-11-09 Genentech, Inc. Anti-ly6e antibodies, immunoconjugates, and uses thereof
WO2023213969A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Juno Therapeutics Gmbh Viral-binding protein and related reagents, articles, and methods of use
WO2023220655A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Celgene Corporation Methods to overcome drug resistance by re-sensitizing cancer cells to treatment with a prior therapy via treatment with a t cell therapy
WO2023230548A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Celgene Corporation Method for predicting response to a t cell therapy
WO2023230581A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Celgene Corporation Methods of manufacturing t cell therapies
WO2023240135A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Actinium Pharmaceuticals, Inc. Bifunctional chelators and conjugates
WO2024040151A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Pfizer Inc. Sirp alpha fusion protein and anti-cd38 antibody combination therapies
WO2024054944A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Juno Therapeutics, Inc. Combination of a t cell therapy and continuous or intermittent dgk inhibitor dosing
TW202423970A (zh) 2022-10-10 2024-06-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 Ｇｐｒｃ５ｄ ｔｃｂ及ｃｄ３８抗體之組合療法
WO2024094660A1 (en) 2022-10-31 2024-05-10 Genmab A/S Cd38 antibodies and uses thereof
WO2024095173A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating cancers
WO2024100604A1 (en) 2022-11-09 2024-05-16 Juno Therapeutics Gmbh Methods for manufacturing engineered immune cells
WO2024124132A1 (en) 2022-12-09 2024-06-13 Juno Therapeutics, Inc. Machine learning methods for predicting cell phenotype using holographic imaging
WO2024161021A1 (en) 2023-02-03 2024-08-08 Juno Therapeutics Gmbh Methods for non-viral manufacturing of engineered immune cells
WO2025019228A1 (en) 2023-07-20 2025-01-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Fully human monoclonal antibodies and chimeric antigen receptors against cd276 for the treatment of solid tumors
EP4509142A1 (en) 2023-08-16 2025-02-19 Ona Therapeutics S.L. Fgfr4 as target in cancer treatment

Family Cites Families (128)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2429001A (en) 1946-12-28 1947-10-14 Axel H Stone Artificial hand
US2429004A (en) 1947-02-20 1947-10-14 Wachsman Michael Fabric contacting circuit closer for knitting machines
FR1516743A (fr) 1966-04-01 1968-02-05 Rhone Poulenc Sa Nouvel antibiotique et son procédé de préparation par culture de streptomyces croceus
US4307016A (en) * 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) * 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) * 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
WO1982001188A1 (en) * 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4313946A (en) * 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4315929A (en) * 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
JPS57192389A (en) * 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) * 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US4946778A (en) * 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5258498A (en) * 1987-05-21 1993-11-02 Creative Biomolecules, Inc. Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins
IL89489A0 (en) 1988-03-09 1989-09-10 Hybritech Inc Chimeric antibodies directed against human carcinoembryonic antigen
WO1989009622A1 (en) 1988-04-15 1989-10-19 Protein Design Labs, Inc. Il-2 receptor-specific chimeric antibodies
JP3105898B2 (ja) 1988-04-16 2000-11-06 セルテック リミテッド 組換えｄｎａタンパクの製造方法
EP1541682A3 (en) 1988-09-02 2005-07-06 Dyax Corp. Generation and selection of recombinant varied binding proteins
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
WO1991010737A1 (en) 1990-01-11 1991-07-25 Molecular Affinities Corporation Production of antibodies using gene libraries
US5780225A (en) * 1990-01-12 1998-07-14 Stratagene Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules
EP1690935A3 (en) 1990-01-12 2008-07-30 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5698426A (en) 1990-09-28 1997-12-16 Ixsys, Incorporated Surface expression libraries of heteromeric receptors
EP0564531B1 (en) 1990-12-03 1998-03-25 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins with altered binding properties
IE921169A1 (en) 1991-04-10 1992-10-21 Scripps Research Inst Heterodimeric receptor libraries using phagemids
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
US6407213B1 (en) 1991-06-14 2002-06-18 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
JPH07503124A (ja) 1991-06-14 1995-04-06 ゾーマ・コーポレーション 微生物によって生産される抗体断片とそれらの複合体
US5565332A (en) * 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
ATE463573T1 (de) 1991-12-02 2010-04-15 Medimmune Ltd Herstellung von autoantikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
DK0563475T3 (da) 1992-03-25 2000-09-18 Immunogen Inc Konjugater af cellebindende midler og derivater af CC-1065
AU4025193A (en) 1992-04-08 1993-11-18 Cetus Oncology Corporation Humanized C-erbB-2 specific antibodies
JPH06511156A (ja) * 1992-07-16 1994-12-15 イコス　コーポレイション 炎症性疾患状態に関連する症状の緩和
US5639641A (en) * 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
EP0733070A1 (en) 1993-12-08 1996-09-25 Genzyme Corporation Process for generating specific antibodies
EP1231268B1 (en) 1994-01-31 2005-07-27 Trustees Of Boston University Polyclonal antibody libraries
US5516637A (en) * 1994-06-10 1996-05-14 Dade International Inc. Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage
GB9424449D0 (en) * 1994-12-02 1995-01-18 Wellcome Found Antibodies
ES2304786T3 (es) 1995-04-27 2008-10-16 Amgen Fremont Inc. Anticuerpos anti-il-8 humanos, derivados a partir de xenoratones inmunizados.
EP0823941A4 (en) 1995-04-28 2001-09-19 Abgenix Inc HUMAN ANTIBODIES DERIVED FROM IMMUNIZED XENO MOUSES
JP2978435B2 (ja) 1996-01-24 1999-11-15 チッソ株式会社 アクリロキシプロピルシランの製造方法
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
ES2384942T3 (es) 1996-12-03 2012-07-16 Amgen Fremont Inc. Anticuerpos humanos que se unen específicamente al TNF alfa
TR199902553T2 (xx) 1997-04-14 2000-03-21 Micromet Gesellschaft F�R Biomedizinische Forschung Mbh �nsan v�cuduna kar�� antijen resept�rlerinin �retimi i�in yeni metod ve kullan�mlar�.
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
EP2261229A3 (en) 1998-04-20 2011-03-23 GlycArt Biotechnology AG Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
GB9818731D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Compounds
PT1193270E (pt) 1998-08-27 2003-10-31 Spirogen Ltd Pirrolobenzodiazepinas
US7223397B1 (en) 1999-01-07 2007-05-29 Research Development Foundation Potentiation of anti-CD38-Immunotoxin cytotoxicity
PT1242401E (pt) 1999-11-24 2007-03-30 Immunogen Inc Agentes citotóxicos compreendendo taxanos e o seu uso terapêutico
NZ518764A (en) * 1999-12-29 2004-02-27 Immunogen Inc Cytotoxic agents comprising modified doxorubicins and daunorubicins and their therapeutic use
JP2003534022A (ja) * 2000-05-26 2003-11-18 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション Ｒａｎｋリガンド介在障害の治療に有用な抗−ｒａｎｋリガンドモノクローナル抗体
GB0013810D0 (en) * 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
US6333410B1 (en) * 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
BR0114475A (pt) 2000-10-06 2003-12-23 Kyowa Hakko Kogyo Kk Célula para a produção de composição de anticorpo
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
US6716821B2 (en) * 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
WO2003074679A2 (en) 2002-03-01 2003-09-12 Xencor Antibody optimization
US6534660B1 (en) 2002-04-05 2003-03-18 Immunogen, Inc. CC-1065 analog synthesis
US6756397B2 (en) * 2002-04-05 2004-06-29 Immunogen, Inc. Prodrugs of CC-1065 analogs
AU2003236018A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. METHOD OF ENHANCING ACTIVITY OF ANTIBODY COMPOSITION OF BINDING TO FcGamma RECEPTOR IIIa
CA2481837A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Production process for antibody composition
US6596757B1 (en) * 2002-05-14 2003-07-22 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use
US7538195B2 (en) 2002-06-14 2009-05-26 Immunogen Inc. Anti-IGF-I receptor antibody
JP4580340B2 (ja) 2002-09-27 2010-11-10 ゼンコー・インコーポレイテッド 最適化Ｆｃ変異体およびそれらの生成方法
US7541440B2 (en) * 2002-09-30 2009-06-02 Immunomedics, Inc. Chimeric, human and humanized anti-granulocyte antibodies and methods of use
AU2003295411A1 (en) * 2002-11-07 2004-06-03 Celltech R & D Human monoclonal antibodies to heparanase
PT1578446E (pt) 2002-11-07 2015-07-22 Immunogen Inc Anticorpos anti-cd33 e processo para tratamento de leucemia mieloide aguda usando os mesmos
US7276497B2 (en) * 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
WO2005014649A2 (en) * 2003-08-08 2005-02-17 Pharmacia Corporation Method for the preparation of molecules having antibody activity
US20050208627A1 (en) * 2003-09-18 2005-09-22 Bowdish Katherine S Elicitation of antibodies to self peptides in mice by immunization with dendritic cells
JPWO2005035741A1 (ja) 2003-10-09 2006-12-21 協和醗酵工業株式会社 ゲノムが改変された細胞
ATE516288T1 (de) 2003-10-22 2011-07-15 Us Gov Health & Human Serv Pyrrolobenzodiazepinderivate, zusammensetzungen, die diese enthalten, und damit in zusammenhang stehende verfahren
WO2005056766A2 (en) * 2003-12-04 2005-06-23 Medimmune, Inc. TARGETED DRUG DELIVERY USING EphA2 OR Eph4 BINDING MOIETIES
EP1720907B1 (en) * 2004-02-06 2015-04-08 MorphoSys AG Anti-cd38 human antibodies and uses therefor
EP1723152B1 (en) 2004-03-09 2015-02-11 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines
JP4633788B2 (ja) * 2004-04-13 2011-02-16 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 抗ｐ−セレクチン抗体
JP5848861B2 (ja) * 2004-04-20 2016-01-27 ジェンマブ エー／エスＧｅｎｍａｂ Ａ／Ｓ Ｃｄ２０に対するヒトモノクローナル抗体
AR049390A1 (es) * 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
CA2571404A1 (en) * 2004-06-21 2005-12-29 Washington University Antibodies against west nile virus and therapeutic and prophylactic uses thereof
AU2005272993B2 (en) 2004-07-15 2010-02-11 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
EP2412728B1 (en) * 2004-08-03 2015-01-07 Innate Pharma Therapeutic compositions against cancer targeting 4IG-B7-H3
US20060223147A1 (en) 2004-08-05 2006-10-05 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd., Process for producing glycoprotein composition
WO2006047350A2 (en) 2004-10-21 2006-05-04 Xencor, Inc. IgG IMMUNOGLOBULIN VARIANTS WITH OPTIMIZED EFFECTOR FUNCTION
US20060257396A1 (en) * 2004-12-15 2006-11-16 Jacobsen Jack S Abeta antibodies for use in improving cognition
KR101335798B1 (ko) * 2005-02-15 2013-12-02 듀크 유니버시티 항-ｃｄ19 항체 및 종양학에서 이의 용도
ZA200709003B (en) * 2005-03-23 2009-05-27 Genmab As Antibodies against CD38 for treatment of multiple myeloma
AU2006230413B8 (en) 2005-03-31 2011-01-20 Xencor, Inc Fc variants with optimized properties
TW200745162A (en) * 2005-05-24 2007-12-16 Morphosys Ag Generation and profiling of fully human hucal gold-derived therapeutic antibodies specific for human CD38
DE102005030112A1 (de) 2005-06-28 2007-01-18 Patent-Treuhand-Gesellschaft für elektrische Glühlampen mbH Lötzusatzwerkstoff
WO2007041635A2 (en) 2005-10-03 2007-04-12 Xencor, Inc. Fc variants with optimized fc receptor binding properties
RS52060B (en) 2006-01-25 2012-04-30 Sanofi Cytotoxic agents comprising new tomaymycin derivatives
EP1864682A1 (en) 2006-06-09 2007-12-12 Sanofi-Aventis Leptomycin derivatives
EP1914242A1 (en) * 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
CA2731255C (en) 2008-07-21 2018-06-05 David M. Goldenberg Structural variants of antibodies for improved therapeutic characteristics
CN103118706B (zh) * 2010-09-27 2016-05-18 莫佛塞斯公司 抗cd38抗体与来那度胺或硼替佐米用于治疗多发性骨髓瘤和nhl
JOP20210044A1 (ar) * 2010-12-30 2017-06-16 Takeda Pharmaceuticals Co الأجسام المضادة لـ cd38
NZ756727A (en) * 2011-10-28 2022-12-23 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd Polypeptide constructs and uses thereof
EP2819089A4 (en) 2012-02-20 2015-09-23 Knowre Korea Inc METHOD AND SYSTEM FOR PROVIDING EDUCATIONAL SERVICES BASED ON A KNOWLEDGE UNIT AND A COMPUTER READABLE RECORDING MEDIUM
US10342869B2 (en) * 2012-12-07 2019-07-09 The Regents Of The University Of California Compositions comprising anti-CD38 antibodies and lenalidomide
MX2017003115A (es) * 2014-09-09 2017-11-17 Janssen Biotech Inc Terapias de combinacion con anticuerpos anti-cd38.
BR112017011749A2 (pt) * 2014-12-04 2018-05-15 Janssen Biotech Inc anticorpos anti-cd38 para o tratamento de leucemia mieloide aguda
US11119960B2 (en) * 2015-01-06 2021-09-14 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Adapter to concatenate connectors
MY198983A (en) * 2015-05-20 2023-10-06 Janssen Biotech Inc Anti-cd38 antibodies for treatment of light chain amyloidosis and other cd38-positive hematological malignancies
US10668149B2 (en) * 2015-06-22 2020-06-02 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies for heme malignancies with anti-CD38 antibodies and survivin inhibitors
US20170044265A1 (en) * 2015-06-24 2017-02-16 Janssen Biotech, Inc. Immune Modulation and Treatment of Solid Tumors with Antibodies that Specifically Bind CD38
DK3370770T3 (da) * 2015-11-03 2021-03-01 Janssen Biotech Inc Subkutane formuleringer af anti-cd38-antistoffer og anvendelser deraf
US10781261B2 (en) * 2015-11-03 2020-09-22 Janssen Biotech, Inc. Subcutaneous formulations of anti-CD38 antibodies and their uses
KR20200061402A (ko) * 2017-10-10 2020-06-02 사노피 항-cd38 항체 및 항-cd3 및 항-cd28 항체와의 조합
US11605302B2 (en) 2020-11-10 2023-03-14 Rockwell Collins, Inc. Time-critical obstacle avoidance path planning in uncertain environments

Also Published As

Publication number Publication date
KR20150023010A (ko) 2015-03-04
GT200900079A (es) 2010-07-09
TW201518322A (zh) 2015-05-16
ES2726754T3 (es) 2019-10-09
PH12012502467A1 (en) 2013-06-17
JP2014221761A (ja) 2014-11-27
MA30895B1 (fr) 2009-11-02
SG173345A1 (en) 2011-08-29
UY30655A1 (es) 2008-05-31
DK2076540T3 (da) 2019-05-13
AU2007311511B9 (en) 2020-11-12
TN2009000058A1 (en) 2010-08-19
US20120156218A1 (en) 2012-06-21
NO345911B1 (no) 2021-10-11
CY2020039I2 (el) 2021-05-05
KR20140105035A (ko) 2014-08-29
HK1139956A1 (en) 2010-09-30
KR101534452B1 (ko) 2015-07-06
NL301077I1 (me) 2020-12-02
WO2008047242A3 (en) 2008-06-26
EP1914242A1 (en) 2008-04-23
NO2021044I1 (no) 2021-10-13
EA200970393A1 (ru) 2009-12-30
ZA200901395B (en) 2010-06-30
MX2009004050A (es) 2009-04-28
CN101616933A (zh) 2009-12-30
MEP10609A (hr) 2011-12-20
AU2007311511B2 (en) 2013-08-22
TWI609884B (zh) 2018-01-01
PT2076540T (pt) 2019-06-06
CL2012002012A1 (es) 2012-11-05
PL2076540T3 (pl) 2019-08-30
US20200408765A1 (en) 2020-12-31
EP2076540B1 (en) 2019-02-27
PE20081171A1 (es) 2008-09-26
JP2010506582A (ja) 2010-03-04
WO2008047242A9 (en) 2009-02-05
IL197217B (en) 2019-12-31
CL2007002995A1 (es) 2008-05-16
KR20170129960A (ko) 2017-11-27
AU2007311511C1 (en) 2021-11-04
LT2076540T (lt) 2019-06-10
TWI609885B (zh) 2018-01-01
AU2007311511A1 (en) 2008-04-24
TW201734053A (zh) 2017-10-01
FR20C1061I2 (fr) 2022-02-11
US20170343550A1 (en) 2017-11-30
EP3498735A1 (en) 2019-06-19
AR063488A1 (es) 2009-01-28
SV2009003203A (es) 2009-10-27
UA114879C2 (uk) 2017-08-28
EP2076540A2 (en) 2009-07-08
CA2663209C (en) 2018-02-13
CY1122302T1 (el) 2021-01-27
EA025215B1 (ru) 2016-12-30
SI2076540T1 (sl) 2019-06-28
BRPI0718130A2 (pt) 2013-11-05
WO2008047242A8 (en) 2009-08-06
NO20091712L (no) 2009-05-13
WO2008047242A2 (en) 2008-04-24
MY159374A (en) 2016-12-30
US20110262454A1 (en) 2011-10-27
CN101616933B (zh) 2015-06-10
TWI538917B (zh) 2016-06-21
US20090304710A1 (en) 2009-12-10
KR20150119976A (ko) 2015-10-26
CR10679A (es) 2009-06-24
NL301077I2 (nl) 2021-02-03
SG10202012950TA (en) 2021-02-25
TW200823236A (en) 2008-06-01
CL2017001580A1 (es) 2018-03-02
HUS2000048I1 (hu) 2020-12-28
JP6121366B2 (ja) 2017-04-26
CA2663209A1 (en) 2008-04-24
FR20C1061I1 (me) 2021-01-22
CA2989609A1 (en) 2008-04-24
BRPI0718130B1 (pt) 2022-05-03
CY2020039I1 (el) 2021-03-12
NO20211026A1 (no) 2009-05-13
SG10201501733QA (en) 2015-04-29
DOP2017000177A (es) 2017-09-15
NO348288B1 (no) 2024-11-11
TW201630938A (zh) 2016-09-01
RS58716B1 (sr) 2019-06-28
IL197217A0 (en) 2011-08-01
US8153765B2 (en) 2012-04-10
NZ575188A (en) 2012-07-27
KR101852317B1 (ko) 2018-04-25
EP3909980A1 (en) 2021-11-17
HRP20190742T1 (hr) 2019-06-14
LTPA2020536I1 (lt) 2020-12-28
KR101800328B1 (ko) 2017-11-22
CO6190555A2 (es) 2010-08-19
JP5607364B2 (ja) 2014-10-15
SG174777A1 (en) 2011-10-28
KR20090078330A (ko) 2009-07-17
HUE043351T2 (hu) 2019-08-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20200408765A1 (en) Novel anti-cd38 antibodies for the treatment of cancer
AU2020264364B2 (en) Novel anti-cd38 antibodies for the treatment of cancer