[go: up one dir, main page]

MD3584252T2 - Antigene, vectori, compoziții ale virusului imunodeficienței umane și metode de utilizare a acestora - Google Patents

Antigene, vectori, compoziții ale virusului imunodeficienței umane și metode de utilizare a acestora Download PDF

Info

Publication number
MD3584252T2
MD3584252T2 MDE20200025T MDE20200025T MD3584252T2 MD 3584252 T2 MD3584252 T2 MD 3584252T2 MD E20200025 T MDE20200025 T MD E20200025T MD E20200025 T MDE20200025 T MD E20200025T MD 3584252 T2 MD3584252 T2 MD 3584252T2
Authority
MD
Moldova
Prior art keywords
vector
hiv
seq
amino acid
protein
Prior art date
Application number
MDE20200025T
Other languages
English (en)
Inventor
Johannes Petrus Maria Langedijk
Benoit C S Callendret
Manen Danielle Van
Anders Krarup
Jorn Stitz
Frank Wegmann
Jort Vellinga
Original Assignee
Janssen Vaccines & Prevention Bv
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Janssen Vaccines & Prevention Bv filed Critical Janssen Vaccines & Prevention Bv
Publication of MD3584252T2 publication Critical patent/MD3584252T2/ro

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/21—Retroviridae, e.g. equine infectious anemia virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C07K14/08—RNA viruses
    • C07K14/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus human T-cell leukaemia-lymphoma virus
    • C07K14/155—Lentiviridae, e.g. human immunodeficiency virus [HIV], visna-maedi virus or equine infectious anaemia virus
    • C07K14/16—HIV-1 ; HIV-2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C07K14/08—RNA viruses
    • C07K14/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus human T-cell leukaemia-lymphoma virus
    • C07K14/155—Lentiviridae, e.g. human immunodeficiency virus [HIV], visna-maedi virus or equine infectious anaemia virus
    • C07K14/16—HIV-1 ; HIV-2
    • C07K14/162—HIV-1 ; HIV-2 env, e.g. gp160, gp110/120, gp41, V3, peptid T, CD4-Binding site
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C12N15/861—Adenoviral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
    • C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
    • C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
    • C12N2740/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
    • C12N2740/16171—Demonstrated in vivo effect
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
    • C12N2740/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Sunt descrise proteinele sintetice ale anvelopei HIV, vectorii şi compoziţiile acestora şi metodele pentru inducerea imunităţii protectoare împotriva infecţiei cu virusul imunodeficienţei umane (HIV). Vectorii de expresie virală care codifică proteinele sintetice ale plicului HIV pot fi folosiţi în vaccinuri pentru a asigura o imunitate de protecţie îmbunătăţită împotriva HIV.

Description

STADIUL TEHNICII DIN DOMENIUL INVENŢIEI
Virusul imunodeficienţei umane (HIV) afectează milioane de oameni în întreaga lume, iar prevenirea HIV printr-un vaccin eficient rămâne o prioritate majoră, chiar şi într-o eră a tratamentului antiretroviral. HIV-1 este cea mai frecventă şi patogenă tulpină a virusului, cu peste 90% din cazurile de HIV/SIDA derivând din infecţia cu grupul HIV-1 M. Grupul M este împărţit în continuare în grupuri monofiletice - clade - sau subtipuri. În mod ideal, un vaccin eficient ar fi capabil să provoace atât răspunsuri celulare potenţiale, cât şi anticorpi neutralizanţi, capabili să neutralizeze tulpinile HIV-1 de la diferite grupuri monofiletice.
Variabilitatea genetică ridicată a HIV-1 face ca dezvoltarea unui vaccin anti-HIV să fie o provocare fără precedent. Pentru a îmbunătăţi acoperirea potenţialilor epitopi de celule T şi pentru a îmbunătăţi răspunsurile celulare, antigene HIV-1 Gag, Pol şi Env, "mozaic" derivate din proteinele grupului de antigene HIV (Gig), Polimerază (Pol) şi Envelope-Anvelopă (Env), au fost descrise de alţii şi dezvoltaţi în încercarea de a oferi o acoperire maximă a epitopilor potenţiali ai celulelor T (de exemplu Barouch şi colab., Nat Med 2010, 16: 319-323). Antigenele mozaic sunt similare ca lungime şi structură de domeniu cu cele de tip sălbatic, care apar în mod natural cu HIV-1.
De exemplu, antigenele HIV mozaic descrise şi utilizate în vaccinuri includ cele descrise în Barouch şi colab., supra, şi publicaţia de cerere internaţională de brevet de invenţie 2010/059732 cum sunt:
(a) Antigene Gag mozaic, incluzând:
(a)(i) o primă secvenţă de Gag mozaic ("mos1Gag") având secvenţa de aminoacizi aşa cum este prezentată în conţinut în SECV ID NR: 1 şi
(a)(ii) o a doua secvenţă de Gag mozaic ("mos2Gag") având secvenţa de aminoacizi aşa cum este prezentată în conţinut în SECV ID NR: 2;
(b) Antigene Pol mozaic, incluzând:
(b)(i) o primă secvenţă de Pol mozaic ("mos1Pol") având secvenţa de
aminoacizi aşa cum este prezentată în conţinut în SECV. ID NR: 3 şi
(b)(ii) o a doua secvenţă Pol mozaic ("mos2Pol") având secvenţa de aminoacizi aşa cum este prezentată în conţinut în SECV ID NR: 4; şi
(c) Antigene Env mozaic, incluzând:
(c)(i) o primă secvenţă de Env mozaic ("mos1Env") având secvenţa de aminoacizi aşa cum este prezentată în conţinut în SECV ID NR: 5 şi
(c)(ii) o a doua secvenţă de Env mozaic ("mos2Env") având secvenţa de aminoacizi aşa cum este prezentată în conţinut în SECV ID NR: 6.
Secvenţele care codifică aceste antigene au fost clonate în vectori, de exemplu, cum ar fi vectori adenovirali recombinanţi, de exemplu, serotipul adenovirus recombinant 26 (rAd26), iar aceşti vectori recombinanţi au fost utilizaţi anterior ca vaccinuri pentru a genera răspunsuri imune la antigene (vezi, de exemplu, Barouch şi colab., supra; şi publicaţia de cerere internaţională de brevet de invenţie 2010/059732). De exemplu, secvenţele de antigen mozaic mos1Gag şi mos1Pol sunt de obicei combinate într-o proteină de fuziune a Gag şi Pol ("mos1GagPol"), a cărei secvenţă de codare este clonată într-un prim vector Ad26 ("rAd26.mos1GagPol"); şi secvenţele de antigen mos2Gag şi mos2Pol sunt combinate într-o altă proteină de fuziune a Gag şi Pol ("mos2GagPol"), a cărei secvenţă de codare este clonată într-un al doilea vector Ad26 ("rAd26.mos2GagPol"). Constructele care codifică mos1Env şi mos2Env sunt în mod obişnuit clonate în vectorii Ad26 separaţi ("rAd26.mos1Env" şi, respectiv, "rAd26.mos2Env").
Un set de astfel de antigene mozaic descrise mai sus oferă o acoperire globală bună a izolatelor de grup M HIV-1, în care vectori rAd26 care codifică secvenţe de antigen mozaic 1 (de exemplu, rAd26.mos1GagPol şi rAd26.mos1Env) favorizează subtipurile grupului B şi CRF01 HIV-1, şi vectori rAd26 care codifică secvenţele de antigen mozaic 2 (de exemplu, rAd26.mos2GagPol şi rAd26.mos2Env) favorizează tulpinile grupului C. Antigene mozaic HIV-1 Gag, Pol şi Env, exprimate în vectori rAd26, pot fi utilizate pentru a îmbunătăţi atât lăţimea cât şi profunzimea răspunsurilor limfocitelor T specifice antigenului în maimuţele rhesus, fără a compromite mărimea răspunsurilor atât celulare cât şi umoare în comparaţie cu consens sau secvenţă naturală de antigene HIV-1 (Barouch şi colab., supra; şi publicaţia de cerere internaţională de brevet de invenţie 2010/059732).
Cu toate acestea, în urma eforturilor de dezvoltare ulterioară pe componentele vaccinului descrise mai sus, s-a constatat că rAd26.mos2Env a arătat o expresie non-optimă a suprafeţei celulare şi un răspuns imun la primatele non-umane, dar, de asemenea, a afişat o genetică non-raportată, neaşteptată şi imprevizibilă, stabilitate non-optimă în timpul procesului de fabricaţie în comparaţie cu ceilalţi vectori rAd26, cum ar fi rAd26.mos1Env. Astfel, vaccinurile care conţin rAd26.mos2Env pot avea ca rezultat răspunsuri imunitare non-optime împotriva subtipurilor grupului C HIV-1, deoarece antigenul mozaic mos2Env favorizează tulpinile grupului C HIV-1. În consecinţă, este nevoie de o alternativă la antigenul mos2Env la vaccinurile împotriva HIV, care poate fi utilizată pentru a induce răspunsuri imunitare îmbunătăţite împotriva grupului C HIV-1.
EXPUNEREA PE SCURT A INVENŢIEI
Invenţia se referă la proteinele anvelopei virusului imunodeficienţei umane (HIV) sintetic care au îmbunătăţit exprimarea suprafeţei celulare şi stabilitatea genetică în comparaţie cu antigenul mos2Env descris anterior. Invenţia se referă, de asemenea, la compoziţii şi metode de utilizare a unor astfel de noi proteine ale anvelopei HIV sintetice şi/sau secvenţe de codificare ale acestora pentru a induce răspunsuri imune crescute împotriva HIV-1, în special grupul C HIV-1, de preferinţă atunci când sunt utilizate în combinaţie cu alte antigene HIV.
Într-un aspect general, invenţia se referă la un acid nucleic care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 8 sau SECV ID NR: 8 având una sau mai multe mutaţii selectate din grupul format din (i) I529P (adică o înlocuire a lui Ile cu Pro la poziţia 529 din SECV ID NR: 8), (ii) K480E (adică, o substituţie a lui Lys cu Glu la poziţia 480 din SECV ID NR: 8) şi (iii) a combinaţie de EK479-480RRRR (adică o înlocuire a Glu-Lys la poziţiile 479-480 din SECV ID NR: 8 cu patru reziduuri Arg consecutive), I529P, A471C (adică, o substituţie de Ala cu Cys la poziţia 471 din SECV ID NR: 8) şi T575C (adică, o substituţie a lui Thr la Cys la poziţia 575 din SECV ID NR: 8). Într-o realizare, proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde suplimentar o secvenţă de semnal, de exemplu o secvenţă de semnal având secvenţa de aminoacizi aleasă din grupul constând din SECV ID NR: 9-12. Într-o realizare, secvenţa de semnal are secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 9.
În anumite realizări, proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde în plus un
domeniu transmembranar, de preferinţă un domeniu transmembranar având secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 13.
În anumite realizări, proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde în plus un fragment dintr-un domeniu citoplasmatic, de preferinţă un fragment al unui domeniu citoplasmic cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 14 sau aminoacizii 1-4 ai acestora (adică NRVR). În realizări în care proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde în plus un domeniu transmembranar şi un fragment dintr-un domeniu citoplasmatic, este de preferat ca proteina să cuprindă şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 37, care este fuzionată la capătul carboxil terminal (C-terminal) din SECV ID NR: 8 şi capătul amino terminal (N-terminal) al regiunii transmembranare.
Într-o altă realizare, proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde un domeniu de trimerizare, de exemplu, un domeniu de trimerizare cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 15 (GCN4) sau SECV ID NR: 16 (domeniu foldon). Într-o realizare preferată, domeniul de trimerizare cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 15. Astfel de realizări cu domenii de trimerizare sunt utile pentru proteine ale anvelopei HIV sintetice solubile (care nu sunt legate de membrană) bazate pe secvenţele de ectodomeniu furnizate în conţinut aceea care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 8, în care domeniul de trimerizare este situat la capătul C terminal al proteinei sintetice de tip HIV.
În alte realizări, proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde SECV ID NR: 8 cu următoarele mutaţii: EK479-480RRRR, I529P, A471C şi T575C. Introducerea a 6 reziduuri consecutive de arginină (poziţiile 478 şi 481 în secvenţa nativă a SECV ID NR: 8 sunt deja reziduuri Arg) duce la un loc de clivaj al furinei, optimizat, astfel încât să se obţină un ectodomeniu prelucrat (adică clivat). Cele trei mutaţii ale I529P, A471C şi T575C sunt cunoscute sub numele de mutaţii SOSIP, din care ultimele două mutaţii au ca rezultat introducerea unei posibile punţi de disulfură între reziduurile de cisteină recent create. În general, aceste mutaţii au ca rezultat o proteină a anvelopei HIV sintetică solubilă, trimerizată, sintetică, fără a fi necesară un domeniu de trimerizare.
Într-o realizare preferată, invenţia se referă la un acid nucleic care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 17, SECV ID NR: 18 sau aa 1-686 din SECV ID NR: 19. Cel mai preferabil proteina anvelopei HIV sintetică codificată de acidul nucleic cuprinde sau constă din secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 18.
Într-un alt aspect general, invenţia se referă la un vector care cuprinde un acid nucleic care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică conform unei realizări a invenţiei. Într-o realizare, vectorul este un vector viral. Într-o realizare preferată, vectorul viral este un vector adenoviral. Într-o realizare preferată, vectorul adenoviral este un vector adenovirus 26.
Un alt aspect general al invenţiei se referă la o compoziţie, de preferinţă o compoziţie de vaccin, care cuprinde o cantitate eficientă imunogen dintr-un vector conform unei variante de realizare a invenţiei, şi un purtător, în care acidul nucleic care codifică proteina anvelopei HIV sintetică este conectată operabil la o secvenţă promotor. Într-o realizare, compoziţia cuprinde un vector adenovirus, de preferinţă un vector adenovirus 26, care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 18.
Într-un alt aspect general, invenţia se referă la o combinaţie de vaccin pentru inducerea unui răspuns imun împotriva unui virus al imunodeficienţei umane (HIV) la un subiect care are nevoie de acesta. Combinaţia de vaccin cuprinde o primă compoziţie cuprinzând o cantitate eficientă imunogen dintr-un vector, de preferinţă un vector adenovirus, mai preferabil un vector adenovirus 26, care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică având secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 18, o a doua compoziţie cuprinzând o cantitate eficientă imunogenic dintr-un al doilea vector, de preferinţă un al doilea vector adenovirus, mai preferabil un al doilea vector adenovirus 26, care codifică o polipeptidă antigenică HIV cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5 şi, opţional, cel puţin o compoziţie suplimentară care cuprinde o cantitate efectivă imunogen din cel puţin una selectată din grupul constând dintr-un vector care codifică o polipeptidă antigenică având secvenţa de aminoacizi selectată din grupul constând din SECV ID NR: 1-4, 28 şi 29 şi o polipeptidă cuprinzând o cantitate eficientă imunogen dintr-o polipeptidă antigenică izolată HIV, incluzând, dar fără a se limita la, o polipeptidă având reziduuri 30-708 din secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 7, sau o polipeptidă având reziduuri 30-724 din SECV ID NR: 36, în care prima compoziţie, a doua compoziţie şi compoziţia suplimentară opţională sunt prezente în aceeaşi compoziţie sau în una sau mai multe compoziţii diferite.
Cu toate acestea, un alt aspect general al invenţiei se referă la metode de inducere a unui răspuns imun împotriva unui virus al imunodeficienţei umane (HIV) la un subiect care are nevoie de acesta, cuprinzând administrarea către subiect a unei compoziţii sau a unei combinaţii de vaccin în conformitate cu o realizare a invenţiei. Invenţia se referă, de asemenea, la metode de inducere a unui răspuns imun împotriva unui HIV care cuprinde iniţierea şi stimularea răspunsului imun folosind o compoziţie sau o combinaţie de vaccin în conformitate cu o realizare a invenţiei.
Cu toate acestea, un alt aspect al invenţiei se referă la o proteină a anvelopei HIV sintetică care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 8 sau SECV ID NR: 8 având una sau mai multe mutaţii selectate din grupul format din (i) I529P, (ii) K480E, (iii) o combinaţie de EK479-480RRRR, I529P, A471C şi T575C. Într-o realizare, proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde SECV ID NR: 8 cu mutaţii ale EK479-480RRRR, I529P, A471C şi T575C. Într-o altă realizare, proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde reziduurile 30-704 sau 30-711 din secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 18. În încă o altă realizare, proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde reziduurile 30-686 ale secvenţei de aminoacizi a SECV. ID NR: 19.
Un alt aspect al invenţiei se referă la o celulă, de preferinţă o celulă izolată, cuprinzând un vector conform unei realizări a invenţiei.
DESCRIEREA PE SCURT A UNOR VEDERI ALE FIGURILOR
Expunerea pe scurt de mai sus, precum şi următoarea descriere detaliată a invenţiei, vor fi mai bine înţelese atunci când sunt citite împreună cu figurile anexate. Trebuie înţeles că invenţia nu se limitează la realizările precise prezentate în desene.
În figuri:
Fig. 1A-1C sunt reprezentări schematice ale structurii proteinelor anvelopei HIV; FIG. 1A prezintă o proteină a anvelopei HIV de lungime întreagă; FIG. 1B arată structura unei proteine a anvelopei solubile cu un singur lanţ HIV conform unei variante de realizare a invenţiei în care domeniul transmembranar (TM) este înlocuit cu un domeniu de trimerizare GCN4, iar locul de clivaj al furinei este mutat (sC4); FIG. 1C prezintă structura unei proteine a anvelopei HIV legate de o membrană conform unei variante de realizare a invenţiei care cuprinde un domeniu transmembranar şi un
fragment dintr-un domeniu citoplasmatic (C4D7); FIG. 2 prezintă nivelurile de expresie ale proteinei anvelopei solubile sC1, care se bazează pe secvenţa de antigen mozaic mos2Env cu un domeniu suplimentar de trimerizare la capătul C-terminal şi o proteină a anvelopei HIV sintetică (sC4) solubilă, conform unei realizări a invenţiei; expresia a fost măsurată prin Western blot cantitativ folosind un anticorp policlonal împotriva gp120; plasmidele care codifică sC1 sau sC4 au fost exprimate tranzitoriu de două ori şi fiecare transfecţie a fost cuantificată de două ori prin densitometrie; proteina sC1 a arătat niveluri de expresie foarte scăzute în comparaţie cu proteina anvelopei HIV sintetică sC4, care a prezentat niveluri de exprimare relativ ridicate;
Fig. 3A şi 3B arată legarea proteinelor anvelopei HIV sintetic cu anticorpul monoclonal 17b (mAb17b) în prezenţa (gri deschis) şi absenţa (gri închis) a CD4 solubil, determinată prin test ELISA; FIG. 3A prezintă legarea sC1; FIG. 3B arată legarea sC4;
FIG. 4 este o imagine a unui test Western blot dintr-o electroforeză naturală cu gel de poliacrilamidă a proteinei sC1 şi a proteinei anvelopei HIV sintetic sC4;
FIG. 5 prezintă nivelurile de expresie relativă a suprafeţei celulare a proteinelor anvelopei HIV sintetice C1, C1D7, C4 şi C4D7 prin analiza FACS a celulelor care exprimă aceste proteine folosind un anticorp policlonal anti-gp120 (GP120) şi prin legarea la anticorpi neutralizanţi în general PG9 (PG9) şi PG16 (PG16) care sunt dependenţi de structura cuaternară şi se leagă preferenţial la trimerul Env pliat corect;
FIG. 6 este o reprezentare grafică a stabilităţii vectorilor de adenovirus care conţin secvenţe care codifică proteinele anvelopei HIV sintetice conform invenţiei, inclusiv C4 (FLC4), C4D7 şi sC4 de lungime completă după mai multe pasaje virale; adenovirus recombinant 26 de vectori au fost generaţi în celulele PER.C6; după cele 3 pasaje iniţiale pentru transfecţie şi purificare a plăcii, 5 plăci au fost selectate şi amplificate pentru 10 pasaje în format T25, rezultând un număr total de pasaje virale (vpn) de 13; este prezentată stabilitatea după vpn 3, 5, 10 şi 13, aşa cum este determinată de reacţia în lanţ a polimerazei casetelor transgenice E1 (PCR); de exemplu, 3/5 înseamnă 3 plăci au fost stabile din cele 5 plăci testate, iar 5/5
înseamnă 5 plăci au fost stabile din cele 5 plăci testate; şi
Fig. 7A şi 7B prezintă titruri de neutralizare a virusului împotriva particulelor de virus pseudotipate ale anvelopei HIV-1 (EVP) într-un test de neutralizare bazat pe celule TZM-bl la iepuri; valorile IC50 log10-transformat ale grupurilor dozate cu vector înalt adenoviral au fost măsurate faţă de EVP VSV-G (control negativ) şi MW965,26 (Grupul C de nivel 1A) la săptămânile 1, 8, 14 şi 20; fiecare punct reprezintă valoarea IC50 log10-transformat pentru iepure individual, cu media de grup indicată printr-o linie orizontală; HD: cea mai înaltă testare a diluării (linia plină superioară); LD: cea mai mică testare a diluării (linia plină inferioară); LOB: limită de fundal, valoare de 95% a probelor negative compilate (linie punctată); valorile IC50 log10 care depăşesc pragul LD sau HD au fost stabilite la linia corespunzătoare; s-a făcut o comparaţie non-parametrică unidirecţională cu controlul utilizând metoda Dunn pentru clasarea în comun pentru fiecare punct; diferenţe semnificative statistic sunt indicate în graficele: * = P <0,05, ** = P <0,01, şi *** = P <0,001; FIG. 7A arată rezultatele cu VSV-G (control negativ); şi FIG. 7B arată rezultatele cu MW965.26 (Nivelul 1A grupul C).
DESCRIEREA DETALIATĂ A INVENŢIEI
Discuţia despre documente, acte, materiale, dispozitive, articole sau similare, care a fost inclusă în prezenta specificaţie, are scopul de a furniza context pentru invenţie. O astfel de discuţie nu este o admitere a faptului că oricare sau toate aceste materiale fac parte din stadiul tehnicii cu referire la invenţiile dezvăluite sau revendicate.
Cu excepţia cazului în care se defineşte altfel, toţi termenii tehnici şi ştiinţifici folosiţi în conţinut au aceeaşi semnificaţie aşa cum este înţeleasă pentru persoana de specialitate în domeniul la care se referă această invenţie. În caz contrar, anumiţi termeni folosiţi în conţinut au semnificaţiile definite în specificaţie. Trebuie menţionat că, aşa cum este utilizat în conţinut şi în revendicările anexate, formele singulare "o", "un" şi "cea/cel" se referă la plural, cu excepţia cazului în care contextul dictează altfel.
Aşa cum s-a utilizat în conţinut, "subiect" înseamnă orice animal, de preferinţă un mamifer, cel mai preferabil un om, căruia urmează să sau i s-a administrat un vector, compoziţie de vaccin sau combinaţie de vaccin conform exemplelor de realizare ale invenţiei. Termenul "mamifer", utilizat în acest document, cuprinde orice mamifer. Exemple de mamifere includ, dar nu se limitează la, vaci, cai, oi, porci, pisici, câini, şoareci, şobolani, iepuri, cobai, maimuţe, oameni, etc., mai preferabil un om.
Invenţia se referă, în general, la proteine ale anvelopei HIV sintetice, acid nucleic şi vectori care codifică proteinele anvelopei HIV sintetice şi metode de inducere a unui răspuns imun împotriva HIV, cu vectori care codifică proteinele anvelopei HIV sintetice sau proteinele anvelopei HIV sintetice, singure sau în combinaţie cu unul sau mai mulţi vectori care codifică una sau mai multe polipeptide antigenice HIV şi/sau în combinaţie cu una sau mai multe polipeptide antigenice izolate HIV.
Virusul imunodeficienţei umane (HIV) este un membru al genului Lentivirinae, care face parte din familia Retroviridae. Două specii de HIV infectează oamenii: HIV-1 şi HIV-2. HIV-1 este cea mai frecventă tulpină a virusului HIV şi este cunoscut a fi mai patogenă decât HIV-2. Aşa cum s-a utilizat în conţinut, termenii "virusul imunodeficienţei umane" şi "HIV" se referă, dar nu se limitează la, HIV-1 şi HIV-2.
HIV este clasificat în mai multe grupuri cu un grad ridicat de divergenţă genetică. Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "grupul HIV" sau "subtip HIV" se referă la virusurile imunodeficienţei umane asociaţi, clasificaţi în funcţie de gradul lor de similaritate genetică. În prezent, există trei grupuri de izolate HIV-1: M, N şi O. Grupul M (tulpini majore) este format din cel puţin zece grupuri, A până la J. Grupul O (tulpini exterioare) poate consta dintr-un număr similar de grupuri. Grupul N este un nou izolat HIV-1 care nu a fost clasificat nici în grupul M şi nici în O.
Aşa cum s-a utilizat în conţinut, termenii "polipeptida antigenică HIV", "proteină antigenică HIV" şi "imunogen HIV" se referă la o polipeptidă capabilă să inducă un răspuns imun, de exemplu, un răspuns mediat umoral şi/sau celular, împotriva HIV la un subiect. Polipeptida antigenică poate fi o proteină a HIV, un fragment sau epitop al acesteia sau o combinaţie de multiple proteine HIV sau porţiuni ale acestora, care poate induce un răspuns imun sau produce o imunitate, de exemplu, o imunitate protectoare împotriva HIV la un subiect.
De preferinţă, o polipeptidă antigenică este capabilă să genereze la o gazdă un răspuns imun protector, de exemplu, să inducă un răspuns imun împotriva unei boli sau infecţii virale şi/sau să producă o imunitate la (adică, prin vaccinare) un subiect împotriva unei boli virale sau infecţii, care protejează subiectul împotriva bolii virale sau a infecţiei. De exemplu, polipeptida antigenică poate cuprinde o proteină sau fragmente ale acesteia din Virusul Imunodeficienţei Simian (SIV) sau un HIV, cum ar fi proteina anvelopei gp160 HIV sau SIV, proteina matricei/capsidei HIV sau produse de gene gag, pol şi env HIV sau SIV.
O polipeptidă antigenică HIV poate fi orice antigen HIV-1 sau HIV-2 sau fragment din acesta. Exemple de antigene HIV includ, dar nu se limitează la acestea produse genice gag, pol, şi env, care codifică proteine structurale şi enzime esenţiale. Produsele genice gag, pol, şi env sunt sintetizate sub formă de poliproteine, care sunt prelucrate în continuare în alte produse proteice multiple. Produsul proteic primar al genei gag este poliproteina proteinei structurale virală gag, care este prelucrată în continuare în produsele proteice MA, CA, SP1, NC, SP2 şi P6. Gena pol codifică enzimele virale (Pol, polimeraza), iar produsul proteic primar este prelucrat suplimentar în produse proteice RT, RNase H, IN şi PR. Gena env codifică proteine structurale, în special glicoproteine din anvelopa virionului. Produsul proteic primar al genei env este gp160, care este prelucrată în continuare în gp120 şi gp41. Alte exemple de antigene HIV includ proteine de reglare a genelor Tat şi Rev; proteine accesorii Nef, Vpr, Vif şi Vpu; proteine capsidice, proteine nucleocapsidice şi proteine virale p24.
În anumite realizări, polipeptida antigenică HIV cuprinde un antigen HIV Gag, Env sau Pol, sau orice porţiune sau epitop antigenic sau o combinaţie a acestora, de preferinţă un antigen HIV-1 Gag, Env sau Pol sau orice porţiune antigenică sau epitop sau combinaţie a acestora.
Polipeptidele antigenice HIV pot fi de asemenea antigene mozaic. Aşa cum este utilizat în conţinut, "antigenul mozaic" se referă la o proteină recombinantă asamblată din fragmente de secvenţe naturale. Antigenele mozaic seamănă cu antigene naturale, dar sunt optimizate pentru a maximiza acoperirea potenţialilor epitopi de celule T găsite în secvenţele naturale, ceea ce îmbunătăţeşte întinderea şi acoperirea răspunsului imun. Antigene mozaic HIV utilizate pentru invenţie sunt de preferinţă antigene mozaice Gag, Pol şi/sau Env şi mai preferabil antigene mozaic HIV-1 Gag, Pol şi/sau Env. Aşa cum s-a utilizat în conţinut, "un antigen mozaic HIV Gag, Pol şi/sau Env" se referă în mod specific la un antigen mozaic cuprinzând mai mulţi epitopi derivaţi din una sau mai multe secvenţe de poliproteină Gag, Pol şi/sau Env.
Într-o realizare, un antigen HIV mozaic pentru utilizare conform cu invenţia este un antigen mozaic HIV Gag cu epitopi derivaţi din secvenţele de produse de gene gag (exemple sunt prezentate în SECV. ID-uri NR: 1, 2); un mozaic antigen HIV Pol cu epitopi derivaţi din secvenţele din produse de gene pol (exemple sunt prezentate în SECV. ID NR: 3, 4); sau un mozaic antigen HIV Env cu epitopi derivaţi din secvenţele din produse de gene env (exemple sunt furnizate în SECV ID NR: 5, 6; de asemenea, noile antigene ale invenţiei, de exemplu în SECV ID NR: 8, 17, 18, 19, pot fi considerate antigene mozaic HIV). În anumite realizări, un antigen HIV mozaic pentru utilizare conform cu invenţia poate cuprinde o combinaţie de epitopi derivaţi din secvenţe de produse de gene gag, pol, şi/sau env. Exemple ilustrative şi nelimitative includ antigene Env-Pol mozaic cu epitopi derivaţi din secvenţele din produse de gene env şi pol; antigene mozaic Gag-Pol cu epitopi derivaţi din secvenţele din produse de gene gag şi pol; şi antigene mozaic Gag-Env cu epitopi derivaţi din secvenţele din produse de gene gag şi env. Secvenţele de produsele genice gag, pol, şi env pot fi derivate de la unul sau mai multe grupuri.
Exemple de antigene mozaic HIV Gag, Pol şi/sau Env care pot fi utilizate în invenţie includ cele descrise în, de exemplu publicaţia US20120076812; Barouch şi colab., Nat Med 2010, 16: 319-323; şi Barouch şi colab., Cell 155: 1-9, 2013, toate acestea fiind încorporate în conţinut prin referire în întregime. De preferinţă, antigenele HIV Gag, Pol şi/sau Env mozaic pentru utilizare conform cu prezenta invenţie includ, dar nu sunt limitate la, mos1Gag (SECV ID NR: 1), mos2Gag (SECV ID NR: 2), mos1Pol (SECV ID NR: 3), mos2Pol (SECV ID NR: 4), mos1Env (SECV ID NR: 5), mos2Env (SECV ID NR: 6), mos1GagPol (SECV ID NR: 28), mos2GagPol (SECV ID NR: 29) şi combinaţii ale acestora.
Aşa cum s-a utilizat în conţinut, fiecare dintre termenii "proteină a anvelopei HIV sintetică", "proteină env" şi "Env" se referă la o proteină care este exprimată pe anvelopa unui virion HIV şi permite unui HIV să ţintească şi să se ataşeze de membrana plasmatică a celulelor infectate cu HIV, sau un fragment sau derivat al acestora care poate induce un răspuns imun sau produce o imunitate împotriva HIV la un subiect care are nevoie de acesta. Gena HIV env codifică proteina precursoare gp160, care este scindată proteolitic în cele două glicoproteine pline mature, gp120 şi gp41. Reacţia de clivaj este mediată de o protează a celulelor gazdă, furină, într-o secvenţă extrem de conservată în precursorii glicoproteinei anvelopei retrovirale. Mai precis, gp160 trimerizează la (gp 160)3 şi apoi suferă clivaj în cele două gp120 şi gp41 asociate necovalent. Intrarea virală este apoi mediată de un trimer de heterodimeri gp120/gp41. Gp120 este fragmentul de legare a receptorului şi se leagă la receptorul CD4 pe o celulă ţintă care are un astfel de receptor, cum ar fi, de exemplu, o celulă T-helper. Gp41, care este legată necovalent la gp120, este fragmentul de fuziune şi oferă a doua etapă prin care HIV intră în celulă. Gp41 este iniţial îngropat în anvelopa virală, dar când gp120 se leagă de un receptor CD4, gp120 îşi modifică conformaţia, determinând expunerea gp41, unde poate ajuta la fuziunea cu celula gazdă. Gp140 este ectodomeniul neclivat al gp160 trimeric, adică (gp160)3, care a fost utilizat ca surogat pentru starea natală a ţintei clivate, virală.
Conform realizărilor invenţiei, o "proteină a anvelopei HIV sintetică" poate fi o proteină gp160, gp140, gp120, gp41, combinaţii, fuziuni, trunchieri sau derivaţi ai acesteia. De exemplu, o "proteină a anvelopei HIV sintetică" poate include o proteină gp120 asociată necovalent cu o proteină gp41. De asemenea, poate include o proteină trimerică stabilizată gp140 care poate avea sau poate fi modificată pentru a include un domeniu de trimerizare care stabilizează trimerele de gp140. Exemple de domenii de trimerizare includ, dar nu sunt limitate la, domeniul de trimerizare "foldon" cu fibrină T4; domeniul de trimerizare a spirei-spiralată derivat din GCN4; şi subunitatea catalitică din E coli aspartat transcarbamoilaza ca etichetă tag. O "proteină a anvelopei HIV sintetică" poate fi, de asemenea, o proteină a anvelopei trunchiată HIV incluzând, dar fără a se limita la, proteine ale anvelopei care cuprinde o trunchiere la capătul C-terminal în ectodomeniu (adică domeniul care se extinde în spaţiul extracelular), o trunchiere în gp41, cum ar fi o trunchiere în domeniul transmembranar al gp41 sau o trunchiere în domeniul citoplasmatic al gp41. O "proteină a anvelopei HIV sintetică" poate fi în continuare un derivat al unei proteine a anvelopei HIV care are în mod natural mutaţii de secvenţă, de exemplu, în locurile de clivaj ale furinei şi/sau aşa-numitele mutaţii SOSIP
De preferinţă, o "proteină a anvelopei HIV" este o "proteină a anvelopei HIV
sintetică". Aşa cum s-a utilizat în conţinut, termenul "proteină a anvelopei HIV sintetică" se referă la o proteină a anvelopei HIV care nu este naturală, care este optimizată pentru a induce un răspuns imun sau pentru a produce o imunitate împotriva uneia sau mai multor tulpini de HIV la un subiect care are nevoie de aceasta. Proteine Mozaic HIV Env sunt exemple de proteine sintetice HIV Env, iar invenţia oferă noi antigene sintetice HIV Env, de exemplu cele care conţin SECV ID NR: 8, 17, 18 sau 19.
Proteinele anvelopei HIV sintetice şi secvenţe de codificare ale acestora
Realizările invenţiei se referă la noi proteine ale anvelopei HIV sintetice şi molecule de acid nucleic care codifică acestea.
Într-o variantă de realizare, invenţia se referă la o proteină a anvelopei HIV sintetică care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 8 sau SECV ID NR: 8 având una sau mai multe mutaţii selectate din grupul format din (i) I529P, (ii) K480E şi (iii) o combinaţie de EK479-480RRRR, I529P, A471C şi T575C. SECV ID NR: 8 cuprinde un gp120 matur sintetic şi un gp41 trunchiat sintetic fără regiunea transmembrană şi nici domeniul citoplasmatic. SECV ID NR: 8 este o secvenţă naturală, formată dintr-o himeră de secvenţe din antigenul mozaic mos2Env (SECV ID NR: 6) şi alte secvenţe de proteine ale anvelopei HIV. Secvenţa noului antigen Env sintetice cuprinzând SECV ID NR: 8 este optimizată pentru a oferi o acoperire largă şi un răspuns îmbunătăţit al celulelor T împotriva grupului C HIV (în comparaţie cu antigenul mos2Env (SECV ID NR: 6)). În anumite realizări, alţi aminoacizi pot fi adăugaţi la SECV ID NR: 8 sau la una din variantele sale definite în conţinut.
În anumite realizări, proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde suplimentar o secvenţă de semnal. Proteina anvelopei HIV sintetică este sintetizată cu o secvenţă semnal care este scindată din lanţul polipeptidei în curs de transport în timpul transportului său în lumenul reticulului endoplasmatic (ER). În principiu, orice secvenţă semnal cunoscută ar putea fi utilizată. De preferinţă, este utilizată o secvenţă de semnal HIV Env sau o variantă a acesteia. Secvenţe semnal diferite au fost utilizate în domeniu pentru proteinele HIV Env (vezi de exemplu publicaţia de cerere internaţională de brevet de invenţie 2014/107744). În anumite variante de realizare, secvenţa semnal cuprinde SECV ID NR: 9, SECV ID NR: 10, SECV ID NR: 11 sau SECV ID NR: 12. Într-o realizare preferată, secvenţa de semnal cuprinde
SECV ID NR: 9.
În anumite realizări, proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde în plus un domeniu transmembranar. Domeniul transmembranar ancorează proteina anvelopei HIV sintetică la membrana ER şi contribuie la asamblarea membranei şi funcţia anvelopei HIV. De preferinţă, domeniul transmembranar cuprinde SECV ID NR: 13.
Într-o altă realizare, proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde un gp41 având un domeniu citoplasmatic trunchiat. Gp41 are un domeniu citoplasmatic neobişnuit de lung la capătul carboxilic, de obicei aproximativ 150 de aminoacizi (Edwards şi colab., J. Virology, 2002, 76: 2683-2691). S-a raportat că trunchierea domeniului citoplasmatic a indus expunerea regiunilor conservate în ectodomeniul proteinei Env-1 HIV (id.). Domeniul citoplasmatic trunchiat într-o proteină a anvelopei HIV sintetică a invenţiei poate varia de la unu la aproximativ 140 de aminoacizi, cum ar fi 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130 sau 140 aminoacizi cu un domeniu citoplasmatic de lungime completă. În anumite realizări, domeniul citoplasmatic trunchiat este derivat din aminoacizii 704-862 din SECV ID NR: 17 (adică din domeniul citoplasmatic al moleculei C4 din invenţie), prin trunchiere după un aminoacid dat până la capătul C. Într-o realizare preferată, proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde un domeniu citoplasmic trunchiat având 1 până la 10 reziduuri de aminoacizi, mai preferabil 4 până la 8 reziduuri de aminoacizi, şi cel mai preferabil 7 reziduuri de aminoacizi ale unui domeniu citoplasmic cu HIV gp41. Domeniul citoplasmic sau fragmentul acestuia dintr-o proteină a anvelopei HIV sintetică este localizat la capătul C-terminal la domeniului extracelular (ectodomeniu), iar atunci când proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde, de asemenea, un domeniu transmembranar, domeniul citoplasmic sau fragmentul acestuia este situat la capătul C-terminal al domeniului transmembranar. Vezi, de exemplu, FIG. 1A şi 1C. Într-o realizare particulară, proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde un gp41 cu un domeniu citoplasmatic trunchiat având secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 14 sau un fragment al acestuia, cum ar fi reziduurile 1-4 ale acestora (adică NRVR). Alte domenii citoplasmatice trunchiate au fost descrise şi ar putea fi utilizate (de exemplu Schiernle şi colab., PNAS 1997; Abrahamyan şi colab., J Virol 2005).
În realizări în care proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde în plus un
domeniu transmembranar şi un fragment dintr-un domeniu citoplasmatic, este de preferat ca proteina să conţină şi secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 37, care conţine reziduuri 655-682 din SECV ID NR: 18, în care secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 37 este fuzionată la capătul C al SECV ID NR: 8 şi capătul N terminal al domeniului transmembranar.
Într-o realizare preferată în special a invenţiei, proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde în plus un domeniu transmembranar, cum ar fi acela care are secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 13 şi un domeniu citoplasmic trunchiat sau un fragment de domeniu citoplasmic, cum ar fi acela având secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 14 sau reziduurile 1-4 din SECV ID NR: 14 (adică NRVR). Cel mai de preferat, proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde sau constă din secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 18, cu sau fără secvenţa semnal (adică, aminoacidul se află pe 1-29 din SECV ID NR: 18).
Într-o altă realizare, proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde un domeniu de trimerizare care înlocuieşte o regiune transmembrană Env. Domeniul de trimerizare creşte stabilitatea unei structuri trimerice. De preferinţă, proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde o polipeptidă gp140 care este modificată pentru a include un domeniu de trimerizare care stabilizează trimerele de gp140. Exemple de domenii de trimerizare includ, dar nu sunt limitate la, domeniul de trimerizare "foldon" cu fibritină T4, cum ar fi cea care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID: 16; domeniul de trimerizare spira-spiralat derivat din GCN4, cum ar fi cel care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID: 15; subunitatea catalitică a E coli aspartat transcarbamoilaza ca etichetă tag; sau motive de trimerizare pe bază de matrilină. Dacă este prezent, domeniul de trimerizare este de obicei localizat în capătul C-terminal al domeniului extracelular (a se vedea figura 1B). În anumite realizări preferate, în care proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde un domeniu de trimerizare, proteina anvelopei HIV sintetică cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 19, cu sau fără secvenţa semnal (adică reziduuri de aminoacizi 1-29 din SECV ID NR: 19). Aceste variante de realizare cu domenii de trimerizare sunt utile în principal pentru variantele solubile de ectodomeniu ale proteinei anvelopei HIV sintetice. În anumite variante de realizare a unor astfel de variante solubile ale invenţiei, este posibil să mute situsul de clivaj al furinei (de exemplu, mutaţia Lys la Glu la poziţia 480 din SECV. ID NR: 8) pentru a inactiva acest loc de clivaj, astfel
încât proteina va fi cu un singur lanţ; acest lucru se combină bine cu un domeniu de trimerizare, în special cu domeniul de trimerizare GCN4 din SECV ID NR: 19.
Versiuni alternative de astfel de variante de ectodomeniu solubile ale proteinei anvelopei HIV sintetice fără utilizarea domeniilor de trimerizare sunt, de asemenea, exemple de realizare ale invenţiei şi pot fi preparate din SECV. NR. 8: combinând mutaţii care optimizează situsul de clivaj al furinei (înlocuind Gly-Lys dipeptidă la poziţiile 479-480 cu patru reziduuri Arg), precum şi aşa-numitele mutaţii SOSIP (mutaţia I> P la poziţia 529 şi introducerea unei punţi disulfură între poziţiile 471 şi 575 prin înlocuirea respectivelor Ala şi Thr pe acele poziţii în SECV ID NR: 8 fiecare cu un reziduu Cys). Aceasta produce o proteină având secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 8 cu următoarea combinaţie de mutaţii: EK479-480RRRR, I529P, A471C şi T575C.
O posibilă modificare pentru a creşte în continuare conţinutul de trimer al unei proteine ale anvelopei HIV sintetice conform invenţiei (care cuprinde SECV ID NR: 8), este modificarea Ile la Pro la poziţia 529. Aceasta poate fi eficientă atât pentru variante solubile, cât şi pentru membrană.
Vectori
Un alt aspect general al invenţiei se referă la vectori cuprinzând acidul nucleic care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică. Conform exemplelor de realizare a invenţiei, vectorii pot cuprinde oricare dintre proteinele anvelopei HIV sintetice descrise în conţinut. Într-o realizare preferată a invenţiei, vectorul cuprinde acidul nucleic care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 8, SECV ID NR: 17, SECV ID NR: 18 sau SECV ID NR: 19, şi mai preferabil SECV ID NR: 18.
Conform exemplelor de realizare ale invenţiei, acidul nucleic care codifică proteina anvelopei HIV sintetică este legat operaţional cu un promotor, ceea ce înseamnă că acidul nucleic este sub controlul unui promotor. Promotorul poate fi un promotor omolog (adică, derivat din aceeaşi sursă genetică ca vectorul) sau un promotor heterolog (adică, derivat dintr-un vector sau sursă genetică diferită). Exemple de promotori adecvaţi includ promotorul citomegalovirusului (CMV) şi promotorul virusului Rous Sarcoma (RSV). De preferinţă, promotorul este situat în amonte de acidul nucleic într-o casetă de expresie. O secvenţă exemplară de
promotor CMV care poate fi legată în mod operaţional cu acidul nucleic care codifică proteina anvelopei HIV sintetică este prezentată în SECV ID NR: 24.
Conform realizărilor invenţiei, un vector poate fi un vector de expresie. Vectorii de expresie includ, dar nu se limitează la, vectori pentru expresia proteinei recombinante şi vector pentru administrarea acidului nucleic la un subiect pentru expresie într-un ţesut al subiectului, cum ar fi un vector viral. Exemple de vectori virali adecvaţi pentru utilizarea cu invenţia includ, dar nu se limitează la vectori adenovirali, vectori cu virus adeno-asociaţi, vectori cu virus de variolă, vectori MVA, vectori cu virus enteric, vectori cu virusul encefalitei ecvine venezuelene, vectori cu virus Semliki Forest, vectori cu virus Tobacco Mozaic Virus, vectori lentivirali, etc. Vectorul poate fi, de asemenea, un vector non-viral. Exemple de vectori non-virali includ, dar nu se limitează la plasmide, cromozomi artificiali bacterieni, cromozomi artificiali cu drojdie, bacteriofagi etc.
În anumite realizări ale invenţiei, vectorul este un vector adenovirus. Un adenovirus conform invenţiei aparţine familiei Adenoviridae şi, de preferinţă, este unul care aparţine genului Mastadenovirus. Poate fi un adenovirus uman, dar şi un adenovirus care infectează alte specii, inclusiv, dar fără a se limita la un adenovirus bovin (de exemplu, adenovirus bovin 3, BAdV3), un adenovirus canin (de exemplu, CADV2), un adenovirus de porcine (de exemplu, PAdV3 sau 5) sau un adenovirus simian (care include un adenovirus de maimuţă şi un adenovirus de antropoidă, cum ar fi un adenovirus de cimpanzeu sau un adenovirus de gorilă). De preferinţă, adenovirusul este un adenovirus uman (HAdV, sau AdHu), sau un adenovirus simian, cum ar fi adenovirusul de cimpanzeu sau de gorilă (ChAd, AdCh sau SAdV). În invenţie, un adenovirus uman este menţionat dacă este denumit Ad fără o indicaţie de specie, de exemplu notarea sumară "Ad26" înseamnă aceeaşi cu HadV26, care este un serotip de adenovirus uman 26. De asemenea, aşa cum este utilizat în conţinut, notaţia "rAd" înseamnă adenovirus recombinant, de exemplu, "rAd26" se referă la adenovirus 26 uman recombinant.
Cele mai avansate studii au fost efectuate folosind adenovirusuri umane, iar adenovirusurile umane sunt preferate în funcţie de anumite aspecte ale invenţiei. În anumite realizări preferate, un adenovirus recombinant conform invenţiei se bazează pe un adenovirus uman. În realizări preferate, adenovirusul recombinant se bazează pe un serotip de adenovirus uman 5, 11, 26, 34, 35, 48, 49, 50, 52, etc. În conformitate cu o realizare preferată în special a invenţiei, un adenovirus este un adenovirus uman a serotipului 26. Un avantaj al acestei serotipuri este o seroprevalenţă scăzută şi/sau titruri de anticorpi neutralizanţi preexistenţi scăzute la populaţia umană şi experienţă cu utilizarea la subiecţi umani în studiile clinice.
Adenovirusurile simiene au, de regulă, o seroprevalenţă scăzută şi/sau titruri de anticorpi neutralizanţi preexistenţi scăzute la populaţia umană şi o cantitate semnificativă de experienţă a fost raportată folosind vectori adenovirus de cimpanzeu (de exemplu US6083716; publicaţia de cerere internaţională de brevet de invenţie 2005/071093; publicaţia de cerere internaţională de brevet de invenţie 2010/086189; publicaţia de cerere internaţională de brevet de invenţie WO 2010085984; Farina şi colab., 2001, J Virol 75: 11603-13 [13]; Cohen şi colab., 2002, J Gen Virol 83: 151-55 [69]; Kobinger şi colab., 2006, Virologie 346: 394-401 [70]; Tatsis şi colab., 2007, Molecular Therapy 15: 608-17 [71]; vezi şi recenzia de Bangari şi Mittal, 2006, Vaccin 24: 849-62 [72]; şi treceţi în revistă de Lasaro şi Ertl, 2009, Mol Ther 17: 1333-39 [73]). Prin urmare, în alte realizări, adenovirusul recombinant conform invenţiei se bazează pe un adenovirus simian, de exemplu un adenovirus de cimpanzeu. În anumite realizări, adenovirusul recombinant se bazează pe adenovirus simian tip 1, 7, 8, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27.1, 28.1, 29, 30, 31.1, 32, 33, 34, 35.1, 36, 37.2, 39, 40.1, 41.1, 42.1, 43, 44, 45, 46, 48, 49, 50 sau SA7P.
De preferinţă, vectorul adenovirus este un vector viral recombinant deficitar de replicare, cum ar fi rAd26, rAd35, rAd48, rAd5HVR48 etc.
Într-o realizare preferată a invenţiei, vectorii adenovirali cuprind proteine capsidice din serotipuri rare, inclusiv Ad26. În realizarea tipică, vectorul este un virus rAd26. O "proteină adenovirus capsidă" se referă la o proteină din capsidă a unui adenovirus (de exemplu, vectori Ad26, Ad35, rAd48, rAd5HVR48) care este implicată în determinarea serotipului şi/sau tropismului unui anumit adenovirus. Proteinele adenovirale ale capsidei includ în mod obişnuit proteinele fibrei, pentonului şi/sau hexonului. Aşa cum se utilizează în conţinut o "proteină capsidică" pentru un anumit adenovirus, cum ar fi o "proteină Adsid capsidică" poate fi, de exemplu, o proteină chimică de capsidă care include cel puţin o parte dintr-o proteină Ad26 capsidică. În anumite realizări, proteina capsidică este o proteină întreagă a capsidei din Ad26. În
anumite realizări, hexonul, pentonul şi fibra sunt de Ad26.
Un specialist în domeniu va recunoaşte că elementele derivate din serotipuri multiple pot fi combinate într-un singur vector adenovirus recombinant. Astfel, poate fi produs un adenovirus himeric care combină proprietăţi dezirabile din diferite serotipuri. Astfel, în unele realizări, un adenovirus himeric conform invenţiei ar putea combina absenţa imunităţii preexistente a unui prim serotip cu caracteristici precum stabilitatea temperaturii, asamblarea, ancorarea, randamentul producţiei, infecţia redirecţionată sau îmbunătăţită, stabilitatea ADN-ului în celula ţintă şi altele asemenea.
În anumite realizări, vectorul adenovirus recombinant util în invenţie este derivat în principal sau în întregime din Ad26 (adică., vectorul este rAd26). În unele realizări, adenovirusul este deficitar de replicare, de exemplu, deoarece conţine o ştergere în regiunea E1 a genomului. Pentru adenovirusurile care provin din adenovirusul din grupa C, cum ar fi Ad26 sau Ad35, este tipic să se schimbe secvenţa de codificare E4-orf6 a adenovirusului cu E4-orf6 a unui adenovirus din subgrupa C umană, cum ar fi Ad5. Aceasta permite propagarea unor astfel de adenovirusuri în linii celulare bine-cunoscute care exprimă genele E1 ale Ad5, cum ar fi de exemplu celule 293, celule PER.C6 şi altele asemenea (vezi, de exemplu Havenga şi colab., 2006, J Gen Virol 87: 2135-43; publicaţia de cerere internaţională de brevet de invenţie 03/104467). Cu toate acestea, astfel de adenovirusuri nu vor fi capabile să se reproducă în celule non-complementare, care nu exprimă genele E1 ale Ad5.
Prepararea vectorilor adenovirali recombinaţi este bine cunoscută în domeniu. Prepararea vectorilor rAd26 este descrisă, de exemplu, în publicaţia de cerere internaţională de brevet de invenţie 2007/104792 si in Abbink şi colab., (2007) Virol 81 (9): 4654-63. Secvenţe exemplare ale genomului Ad26 se găsesc în GenBank Accession EF 153474 şi în SECV ID NR: 1 din publicaţia de cerere internaţională de brevet de invenţie 2007/104792. Exemple de vectori utili pentru invenţie, de exemplu, sunt cei descrişi în WO2012/082918, a cărei dezvăluire este încorporată aici prin referinţă în întregimea sa.
De obicei, un vector util în invenţie este produs folosind un acid nucleic care
cuprinde întregul genom adenoviral recombinant (de exemplu., un vector plasmidă, cosmidă sau baculovirus). Astfel, invenţia furnizează de asemenea molecule izolate de acid nucleic care codifică vectorii adenovirali ai invenţiei. Moleculele de acid nucleic din invenţie pot fi sub formă de ARN sau sub formă de ADN obţinut prin clonare sau produs sintetic. ADN-ul poate fi dublu-catenar sau monocatenar.
Vectorii adenovirus utili în invenţie sunt de obicei deficienţi de replicare. În aceste realizări, virusul este redus ca replicare prin ştergerea sau inactivarea regiunilor critice pentru replicarea virusului, cum ar fi regiunea E1. Regiunile pot fi substanţial şterse sau inactivate, de exemplu, prin introducerea unei gene de interes, cum ar fi o genă care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică (de obicei legată cu un promotor) sau o genă care codifică o polipeptidă antigenică HIV (de obicei legat cu o promotor) în cadrul regiunii. În unele variante de realizare, vectorii invenţiei pot conţine ştergeri în alte regiuni, cum ar fi regiunile E2, E3 sau E4, sau inserţii de gene heterologe legate cu un promotor în una sau mai multe dintre aceste regiuni. Pentru adenovirusurile mutate cu E2 şi/sau E4, în general, se generează linii celulare complementare cu E2 şi/sau E4 pentru a genera adenovirusuri recombinante. Mutaţiile din regiunea E3 a adenovirusului nu trebuie completate de linia celulară, deoarece E3 nu este necesară pentru replicare.
O linie celulară de ambalare este utilizată de obicei pentru a produce cantităţi suficiente de vectori adenovirus pentru utilizare în invenţie. O celulă de ambalare este o celulă care cuprinde acele gene care au fost şterse sau inactivate într-un vector deficitar de replicare, permiţând astfel replicării virusului în celulă. Liniile de celule de ambalare adecvate pentru adenovirusuri cu o ştergere în regiunea E1 includ, de exemplu, PER.C6, 911, 293 şi E1 A549.
Conform realizărilor invenţiei, şi aşa cum s-a menţionat mai sus, oricare dintre proteinele anvelopei HIV sintetice descrise în conţinut pot fi exprimate în vectorii invenţiei. Având în vedere degenerarea codului genetic, persoana de specialitate este conştientă de faptul că pot fi proiectate mai multe secvenţe de acid nucleic care codifică aceeaşi proteină, în conformitate cu metodele complet de rutină din domeniu. Acidul nucleic care codifică proteina anvelopei HIV sintetică poate fi opţional optimizat la codon pentru a asigura expresia corectă în gazda tratată (de exemplu, umană). Optimizarea codonului este o tehnologie aplicată pe scară largă în domeniu. Unele exemple nelimitate de secvenţe care codifică o proteină a anvelopei
HIV sintetică conform invenţiei sunt furnizate în SECV ID NR: 25, 26 şi 27. În mod obişnuit, acidul nucleic care codifică proteina anvelopei HIV sintetică este clonat în regiunea genomului adenoviral E1 şi/sau E3.
Într-o realizare preferată a invenţiei, vectorul este un vector adenovirus, şi mai preferabil un vector rAd26, cel mai preferabil un vector rAd26 cu cel puţin o ştergere în regiunea E1 a genomului adenoviral, de exemplu cum este cea descrisă în Abbink, J Virol, 2007. 81 (9): p. 4654-63, care este încorporat în conţinut prin referinţă.
Invenţia furnizează, de asemenea, celule, de preferinţă celule izolate, cuprinzând oricare dintre vectorii descrişi în conţinut. Celulele pot fi utilizate pentru producerea de proteine recombinante sau pentru producerea de particule virale.
Realizările invenţiei se referă astfel şi la o metodă de fabricare a unei polipeptide antigenice HIV sintetică. Metoda cuprinde transfectarea unei celule gazdă cu un vector de expresie cuprinzând acidul nucleic care codifică polipeptida antigenică HIV sintetică legată operaţional de un promotor, crescând celula transfectată în condiţii adecvate pentru exprimarea polipeptidei antigenice sintetice HIV şi izolând polipeptida antigentică HIV din celulă. Polipeptida antigenică sintetică HIV poate fi izolată sau colectată din celulă prin orice metodă cunoscută în domeniu, incluzând cromatografia de afinitate, etc. Tehnicile utilizate pentru exprimarea proteinei recombinante vor fi bine cunoscute de către o persoană de specialitate obişnuită în domeniu, având în vedere prezenta descriere.
Invenţia include, de asemenea, o metodă pentru fabricarea unui vector care codifică o polipeptidă antigenică HIV sintetică conform invenţiei, metoda cuprinzând cultivarea unei celule care cuprinde vectorul, pentru a propaga şi multiplica vectorul în timpul cultivării şi izolarea vectorului care codifică virusul polipeptidei antigenică sintetică HIV din invenţie din cultura celulară, de ex din celule, din mediul de cultură sau din ambele. Vectorul poate fi purificat suplimentar conform metodelor cunoscute în domeniu.
În anumite realizări, invenţia furnizează un vector conform unei variante de realizare a invenţiei cuprinzând un acid nucleic care codifică o polipeptidă antigenică sintetică HIV, iar în anumite exemple de realizare, acidul nucleic are o secvenţă de
nucleotide selectată din grupul constând din SECV ID NR: 25, 26 şi 27.
Compoziţii
Într-un alt aspect general, invenţia se referă la o compoziţie care cuprinde un vector care cuprinde un acid nucleic care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică şi un purtător. Conform realizărilor invenţiei, oricare dintre vectori descrişi în conţinut poate fi inclus în compoziţie. De preferinţă, vectorul este un vector viral, mai preferabil un vector adenovirus şi chiar mai preferabil un vector adenovirus 26. Într-o realizare preferată, o compoziţie cuprinde un vector adenovirus, de preferinţă un vector adenovirus 26 care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 8, SECV ID NR: 18 sau SECV ID NR: 19 şi altele de preferinţă secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 18.
Într-un aspect, invenţia furnizează un vaccin combinat cuprinzând unul sau mai mulţi vectori care conţin secvenţe de acid nucleic care codifică (i) o proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 8 (de exemplu, SECV ID NR: 18 sau 19) şi (ii) o a doua proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5. Vectorii pot fi fiecare într-o compoziţie separată sau pot fi combinaţi într-o singură compoziţie. Ambii acizi nucleici din vector (i) sunt intenţionaţi să fie administraţi unui subiect, ceea ce va avea ca rezultat un răspuns imun la HIV care este mai larg decât răspunsul imun care ar fi obţinut la administrarea oricărui vector. Ambele secvenţe de acid nucleic ar putea fi, de asemenea, prezente pe un singur vector.
Conform realizărilor invenţiei, o compoziţie cuprinde o cantitate eficientă imunogen dintr-un vector, cum ar fi un vector viral. Aşa cum este utilizat în conţinut, "o cantitate eficientă imunogen" sau "o cantitate eficientă imunologic" înseamnă o cantitate dintr-o compoziţie suficientă pentru a induce un efect imun dorit sau un răspuns imun la un subiect care are nevoie de acesta. Într-o realizare, o cantitate eficientă imunogen înseamnă o cantitate suficientă pentru a induce un răspuns imun la un subiect care are nevoie de acesta. Într-o altă realizare, o cantitate eficientă imunogen înseamnă o cantitate suficientă pentru a produce imunitate la un subiect care are nevoie de ea, de exemplu, oferă un efect protector împotriva unei boli precum o infecţie virală. O cantitate eficientă imunogen poate varia în funcţie de o varietate de factori, cum ar fi starea fizică a subiectului, vârsta, greutatea, sănătatea, etc.; aplicaţia particulară, indiferent dacă induce răspuns imun sau furnizează imunitate protectoare; vectorul recombinant specific administrat; imunogenul sau polipeptida antigenică codificată de vectorul recombinant administrat; polipeptida antigenică specifică administrată; şi boala particulară, de exemplu, infecţia virală, pentru care se doreşte imunitatea. O cantitate eficientă imunogenic poate fi uşor determinată de către o persoană de specialitate obişnuită în domeniu, având în vedere prezenta descriere.
Drept ghid general, o cantitate eficientă imunogen atunci când este utilizată cu referire la un vector viral recombinant, cum ar fi un vector adenoviral, poate varia de la aproximativ 108 particule virale la aproximativ 1012 particule virale, de exemplu 108, 109, 1010, 1011, sau 1012 particule virale. O cantitate eficientă imunogenic poate fi administrată într-o singură compoziţie sau în mai multe compoziţii, cum ar fi 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 sau 10 compoziţii (de exemplu, tablete, capsule sau injectabile), în care administrarea mai multor capsule sau injecţii asigură colectiv unui subiect cantitatea eficientă imunogen. În general, atunci când este utilizat cu referire la o polipeptidă, cum ar fi o polipeptidă antigenică izolat, o cantitate eficientă imunogen poate varia, de exemplu aproximativ 0,3 până la aproximativ 3000 micrograme (µg), de exemplu 1-1000 µg, de exemplu 10-500 µg, de exemplu aproximativ 10, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 sau 500 µg. Ca un exemplu nelimitativ, este posibilă combinarea administrării vectorului care codifică antigenul sintetic HIV Env al invenţiei (având SECV. NR. 8) cu administrarea unei polipeptide Env, de exemplu 250 µg de proteină trimer HIV Grup C Env cu aminoacizi 30-708 din SECV ID NR: 7. Este de asemenea posibil să se administreze la un subiect o cantitate eficientă imunogen şi apoi să se administreze o altă doză de cantitate eficientă imunogen la acelaşi subiect, într-un aşa-numit regim de stimulare primară. Acest concept general al unui regim de impuls primar este bine cunoscut persoanelor abilitate din domeniul vaccinului. Administrări suplimentare de rapel pot fi adăugate opţional la regim, după caz.
Compoziţiile conform invenţiei cuprind în plus un purtător. Un purtător poate include unul sau mai mulţi excipienţi acceptabili din punct de vedere farmaceutic, precum lianţi, dezintegranţi, agenţi de umflare, agenţi de suspendare, agenţi de emulsionare, agenţi de umectare, lubrifianţi, substanţe aromatizante, îndulcitori, conservanţi, coloranţi, solubilizatori şi acoperiri. Natura precisă a purtătorului sau a altui material poate depinde de calea de administrare, de exemplu, rutele intramusculare, subcutanate, orale, intravenoase, cutanate, intramucosale (de exemplu, intestinul), intranazal sau intraperitoneal. Pentru preparate injectabile lichide, de exemplu, suspensii şi soluţii, purtători şi aditivi adecvaţi includ apă, glicoli, uleiuri, alcooli, conservanţi, agenţi de colorare şi altele asemenea. Pentru preparate orale solide, de exemplu, pulberi, capsule, comprimate, capsule gelatinoase şi tablete, purtători şi aditivi adecvaţi includ amidonuri, zaharuri, diluanţi, agenţi de granulare, lubrifianţi, lianţi, agenţi de dezintegrare şi altele asemenea. Pentru spray-uri nazale/amestecuri inhalante, soluţia/suspensia apoasă poate cuprinde apă, glicoli, uleiuri, emolienţi, stabilizatori, agenţi de umectare, conservanţi, aromatici, arome şi altele asemenea ca purtători şi aditivi adecvaţi.
Compoziţiile invenţiei pot fi formulate în orice materie potrivită pentru administrarea la un subiect pentru a facilita administrarea şi a îmbunătăţi eficacitatea, incluzând, dar fără a se limita la, administrarea orală (enterală) şi injecţiile parenterale. Injecţiile parenterale includ injecţie intravenoasă sau perfuzie, injecţie intra-arterială, injecţie subcutanată, injecţie intramusculară şi injecţie intra-articulară. Compoziţiile invenţiei pot fi, de asemenea, formulate pentru alte căi de administrare, inclusiv implanturi transmucozale, oculare, rectale, cu acţiune lungă, administrare sublinguală, sub limbă, de la mucoasa bucală, ocolind circulaţia portală, inhalare sau intranazală.
Conform anumitor exemple de realizare ale invenţiei, o compoziţie cuprinde o cantitate eficientă imunogen de vector adenovirus purificat sau parţial purificat, cum ar fi un adenovirus 26, care cuprinde un acid nucleic care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică conform invenţiei. Compoziţiile menţionate pot fi formulate ca un vaccin (denumit şi "compoziţie imunogenă") în conformitate cu metodele bine cunoscute în domeniu.
Compoziţiile invenţiei pot cuprinde în mod opţional un adjuvant pentru a intensifica răspunsurile imune. Termenii "adjuvant" şi "stimulent imunitar" sunt utilizaţi în acest sens în mod interschimbabil şi sunt definiţi ca una sau mai multe substanţe care provoacă stimularea sistemului imunitar. În acest context, un adjuvant este utilizat pentru a îmbunătăţi un răspuns imun la vectorii care codifică proteinele anvelopei HIV sintetice conform invenţiei şi/sau polipeptide antigenice HIV utilizate în combinaţie cu vectori care codifică proteinele învelitoare sintetice ale invenţiei.
Adjuvanţii adecvaţi pentru utilizare conform cu invenţia ar trebui să fie cei care sunt potenţial siguri, bine toleraţi şi eficienţi la oameni, cum ar fi QS-21, Detox-PC, MPL-SE, MoGM-CSF, TiterMax-G, CRL-1005, GERBU, TERamide, PSC97B, Adjumer, PG-026, GSK-I, GcMAF, B-aletină, MPC-026, Adjuvax, CpG ODN, Betafectin, săruri de aluminiu (de exemplu, AdjuPhos), Adjuplex şi MF59. Rapoartele optime ale fiecărui component din formulare pot fi determinate prin tehnici bine cunoscute specialiştilor în domeniu, având în vedere prezenta descriere.
Într-o realizare preferată, adjuvantul este o sare de aluminiu, cum ar fi AdjuPhos.
Pregătirea şi utilizarea compoziţiilor imunogene sunt bine cunoscute de specialiştii în domeniu. Compoziţiile farmaceutice lichide includ în general un purtător de lichide cum ar fi apă, petrol, uleiuri animale sau vegetale, ulei mineral sau ulei sintetic. De asemenea, pot fi incluse soluţia salină fiziologică, dextroza sau altă soluţie de zaharide sau glicoli precum etilen glicol, propilenglicol sau polietilenglicol.
De exemplu, vectorul adenovirus recombinant poate fi stocat în memoria tampon care este de asemenea utilizat pentru Adenovirus World Standard (Hoganson şi colab., 2002, Bioprocesing J 1: 43-8): 20 mM Tris pH 8, 25 mM NaCl, glicerol 2,5%. Un alt tampon de formulare adenovirus util, adecvat pentru administrare la om este Tris 20 mM, 2 mM MgCl2, 25 mM NaCl, zaharoză 10% greutate/volum, polisorbat-80 0,02% greutate/volum. Un alt tampon de formulare care este potrivit pentru adenovirus recombinant cuprinde 10-25 mM citrat tampon pH 5,9-6,2, 4-6% (greutate/greutate) hidroxipropil-beta-ciclodextrină (HBCD), 70-100 mM NaCl, 0,018-0,035% (greutate/greutate) polisorbat-80 şi, opţional, 0,3-0,45% (greutate/greutate) etanol. Evident, multe alte tampoane pot fi utilizate şi sunt cunoscute mai multe exemple de formulări adecvate pentru depozitare şi pentru administrarea farmaceutică a vectorilor purificaţi.
Conform realizărilor invenţiei, o compoziţie a invenţiei poate fi utilizată împreună cu unul sau mai mulţi vectori suplimentari care codifică una sau mai multe polipeptide antigenice HIV şi/sau una sau mai multe polipeptide antigenice HIV izolate. Vectorii suplimentari şi/sau polipeptidele antigenice HIV pot fi prezenţi în aceeaşi compoziţie cuprinzând o proteină sintetică HIV Env din invenţie. De asemenea, pot fi prezenţi într-una sau mai multe compoziţii diferite care pot fi utilizate împreună cu o compoziţie care cuprinde o proteină sintetică HIV Env din invenţie într-o combinaţie de vaccin. De preferinţă, unul sau mai mulţi vectori suplimentari sunt vectori virali, cum ar fi vectori adenovirus şi sunt, de preferinţă, 26 de vectori adenovirus. Unul sau mai mulţi vectori suplimentari pot codifica orice polipeptidă antigenică HIV cunoscută specialiştilor în domeniu, având în vedere prezenta descriere.
Într-o realizare, o compoziţie sau o combinaţie de vaccin cuprinde în plus un al doilea vector adenovirus, de preferinţă un adenovirus 26, care codifică o polipeptidă antigenică HIV cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5. Un avantaj al unor astfel de realizări este lărgimea crescută a răspuns imun (care acoperă tulpinile din Grupurile B şi C).
Într-o altă realizare, o compoziţie sau o combinaţie de vaccin conform invenţiei cuprinde suplimentar un vector adenovirus, de preferinţă un vector adenovirus 26, care codifică o polipeptidă antigenică HIV cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 28 (mos1GagPol).
Într-o altă realizare, o compoziţie sau o combinaţie de vaccin conform invenţiei cuprinde suplimentar un vector adenovirus, de preferinţă un vector adenovirus 26, care codifică o polipeptidă antigenică HIV cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 29 (mos2GagPol).
Într-o realizare particulară, o compoziţie sau o combinaţie de vaccin conform invenţiei cuprinde suplimentar un al doilea vector adenovirus, de preferinţă un adenovirus 26 vector, care codifică o polipeptidă antigenică HIV cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5 şi unul sau mai mulţi vectori adenovirus suplimentari, de preferinţă vectori adenovirus 26, care codifică una sau mai multe polipeptide antigenice HIV cuprinzând secvenţa de aminoacizi selectată din grupul format din SECV ID NR: 28 sau SECV ID NR: 29. De exemplu, o compoziţie sau o combinaţie de vaccin conform unei aplicaţii conform invenţiei, poate cuprinde patru vectori adenovirus, de preferinţă vectori adenovirus 26, cu un prim vector care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 8 (de exemplu, SECV ID NR: 18); un al doilea vector care codifică o polipeptidă antigenică HIV cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5; un al treilea vector care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 28; şi un al patrulea vector care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 29.
În unele realizări, compoziţia sau o combinaţie de vaccin cuprinde în plus una sau mai multe polipeptide antigenice HIV izolate. Orice polipeptidă antigenică HIV cunoscută specialiştilor în domeniu în vederea prezentei dezvăluiri poate fi inclusă suplimentar într-o compoziţie sau o combinaţie de vaccin a invenţiei, incluzând, dar fără a se limita la o proteină a anvelopei HIV sintetică (de exemplu, gp160, gp140, gp120, sau gp41), de preferinţă o proteină gp140 trimerică stabilizată, cum ar fi o proteină C sau gp140 grupul A stabilizat. Într-o realizare preferată, polipeptida antigenică HIV izolată este o proteină gp140 grupul C HIV stabilizat, cum ar fi aceea care cuprinde reziduurile 30-708 din secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 7 (reziduurile 1-29 din SECV ID NR: 7 se află în secvenţa semnal). O polipeptidă alternativă sau suplimentară HIV Env, care ar putea fi utilizată în plus faţă de proteina gp140 grup C sau singură, este o proteină trimerică din mozaic, de exemplu, având o secvenţă de aminoacizi descrisă în aminoacizi 30-724 din SECV ID NR: 36 (corespunzător SECV ID NR. 2 din publicaţia de cerere internaţională de brevet de invenţie WO 2014/107744, reziduurile 1-29 din SECV ID NR: 36 sunt în secvenţa semnal).
Conform unui exemplu de realizare particular al invenţiei, o proteină antigenică HIV poate fi o proteină a anvelopei HIV sintetică conform invenţiei. Astfel, o proteină a anvelopei sintetică conform invenţiei poate fi utilizată în formă izolată şi/sau purificată pentru a induce un răspuns imun sau pentru a oferi o imunitate protectoare, etc. împotriva HIV la un subiect care are nevoie de acesta. Oricare dintre proteinele sintetice ale anvelopei descrise în conţinut cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 8 poate fi utilizată ca o proteină antigenică HIV în formă izolată şi/sau purificată. Într-o realizare preferată, atunci când este utilizată în formă izolată ca o proteină antigenică HIV, proteina anvelopei sintetică cuprinde reziduurile 30-711 din secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 18 sau reziduurile 30-686 ale secvenţei de aminoacizi din SECV ID NR: 19, şi mai preferabil reziduurile 30-704 din secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 18. Polipeptida antigenică HIV izolată
poate cuprinde, de asemenea, SECV ID NR: 8 cu următoarele mutaţii: EK479-480RRRR, I529P, A471C şi T575C.
Realizările invenţiei se referă, de asemenea, la compoziţii sau combinaţii de vaccinuri care conţin o proteină a anvelopei HIV sintetică izolată care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 8. Poate fi utilizată oricare dintre proteinele anvelopei HIV sintetice descrise în conţinut. În realizări particulare ale invenţiei, proteina anvelopei izolată HIV conţinând reziduurile 30-704 sau 30-711 din secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 18, reziduurile 30-686 ale secvenţei de aminoacizi din SECV ID NR: 19, sau secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 8 cu următoarele mutaţii: EK479-480RRRR, I529P, A471C şi T575C. Astfel de compoziţii sau combinaţii de vaccinuri pot cuprinde în continuare unul sau mai mulţi vectori de expresie, de exemplu, vectori adenovirali cum ar fi vectori adenovirus 26, care codifică una sau mai multe polipeptide antigenice HIV, cum ar fi proteinele anvelopei HIV sintetice conform invenţiei, sau alte proteine antigenice HIV cum ar fi ca cele prevăzute în SECV ID NR: 4, 5, 7, 28 sau 29, sau fragmente ale acestora.
Invenţia se referă, de asemenea, la o metodă de producere a unei compoziţii sau a unei combinaţii de vaccinuri conform invenţiei. Conform exemplelor de realizare ale invenţiei, o metodă de producere a unei compoziţii sau a unei combinaţii cuprinde combinarea unui vector care cuprinde acidul nucleic care codifică proteina anvelopei HIV sintetică a invenţiei cu un purtător şi, opţional, unul sau mai mulţi vectori care codifică unul sau mai mulţi antigenici HIV suplimentari polipeptide şi/sau una sau mai multe polipeptide antigenice HIV izolate. Unui specialist în domeniu va fi familiar cu tehnicile convenţionale utilizate pentru prepararea unor astfel de compoziţii.
Vaccin şi combinaţii de vaccin
Conform realizărilor invenţiei, o compoziţie poate fi un vaccin. Aşa cum s-a utilizat în conţinut, termenul "vaccin" se referă la o compoziţie care cuprinde un vector de expresie, de preferinţă un vector viral, care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetice conform invenţiei, care poate oferi imunitate protectoare sau un răspuns imun protector la un subiect sau pentru a vaccina un subiect. Conform exemplelor de realizare a invenţiei, la administrarea compoziţiei la un subiect, vectorul de expresie
exprimă proteina anvelopei HIV sintetică codificată, iar proteina anvelopei HIV sintetică exprimată este prezentată sistemului imunitar al subiectului, inducând astfel răspunsul necesar pentru a produce imunitate sau induce un răspuns imun.
Astfel, într-un alt aspect general, invenţia furnizează un vaccin pentru inducerea unui răspuns imun împotriva unui virus al imunodeficienţei umane (HIV) la un subiect. Conform exemplelor de realizare a invenţiei, vaccinul cuprinde o compoziţie care cuprinde o cantitate eficientă imunogen dintr-un vector de expresie care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 8 şi, de preferinţă, secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 18. De preferinţă, vectorul de expresie este un vector viral, mai preferabil un vector adenovirus şi cel mai preferabil un vector adenovirus 26.
Conform exemplelor de realizare a invenţiei, "inducerea unui răspuns imun" atunci când este utilizată cu referire la metodele şi compoziţiile descrise în conţinut cuprinde furnizarea imunităţii protectoare şi/sau vaccinarea unui subiect împotriva unei infecţii, cum ar fi o infecţie cu HIV, în scopuri profilactice ca provocând un răspuns imun dorit sau un efect la un subiect care are nevoie de acesta împotriva unei infecţii, cum ar fi o infecţie cu HIV, în scop terapeutic. De preferinţă, metodele invenţiei sunt destinate unor scopuri profilactice, cum ar fi asigurarea imunităţii protectoare. Răspunsul imun poate fi un răspuns imun celular şi/sau un răspuns imun umoral.
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "imunitate protectoare" sau "răspuns imun protector" înseamnă că subiectul vaccinat este capabil să controleze o infecţie cu agentul patogen împotriva căreia s-a făcut vaccinarea. De obicei, subiectul care a dezvoltat un "răspuns imun protector" dezvoltă doar simptome clinice uşoare până la moderate sau deloc simptome. De obicei, un subiect care are un "răspuns imun protector" sau "imunitate protectoare" împotriva unui anumit agent nu va muri ca urmare a infecţiei cu respectivul agent.
Conform exemplelor de realizare ale invenţiei, compoziţiile de vaccin pot cuprinde în continuare unul sau mai mulţi vectori suplimentari, de exemplu, vectori virali, cum ar fi vectori adenovirus, de preferinţă vectori adenovirus 26 care codifică unul sau mai mulţi polipeptide antigenice HIV şi/sau unul sau mai mulţi antigenici HIV izolaţi polipeptide. Proteina anvelopei HIV sintetică, vectori suplimentari şi/sau una sau mai multe polipeptide antigenice HIV izolate pot fi formulate în aceeaşi compoziţie sau una sau mai multe compoziţii diferite în vaccin.
Invenţia se referă, de asemenea, la combinaţii de vaccinuri pentru iniţierea şi stimularea unui răspuns imun la unul sau mai mulţi HIV la un subiect care are nevoie de acesta, folosind unul sau mai mulţi vectori în combinaţie cu o polipeptidă antigenică izolată. Astfel, într-un alt aspect general, invenţia oferă o combinaţie de vaccinuri pentru inducerea unui răspuns imun împotriva unui HIV la un subiect. Conform exemplelor de realizare ale invenţiei, combinaţia de vaccin cuprinde:
(i) o primă compoziţie care cuprinde o cantitate eficientă imunogen dintr-un vector de expresie care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 8 sau SECV ID NR: 8 având una sau mai multe mutaţii selectate din grupul format din ( a) I529P, (b) K480E şi (c) o combinaţie de EK479-480RRRR, I529P, A471C şi T575C şi un purtător; şi
(ii) o a doua compoziţie cuprinzând o cantitate eficientă imunogen dintr-o polipeptidă antigenică HIV şi un purtător izolat,
în care una din prima şi a doua compoziţie este destinată imunizării şi cealaltă compoziţie este pentru stimularea imunizării.
Conform realizărilor invenţiei, combinaţia de vaccin cuprinde în mod opţional o cantitate eficientă imunogen de unul sau mai mulţi vectori de expresie suplimentari care codifică unul sau mai mulţi polipeptide antigenice HIV. Unul sau mai mulţi vectori de expresie suplimentari pot fi incluşi în prima compoziţie sau a doua compoziţie, sau unul sau mai mulţi vectori de expresie suplimentari pot fi incluşi într-una sau mai multe compoziţii suplimentare pentru a fi administrate împreună cu prima şi/sau a doua compoziţie.
Aşa cum s-a utilizat în conţinut, termenii "co-livrare", "administrare concomitentă" sau "administrat împreună cu" se referă la administrarea simultană a două sau mai multe componente, cum ar fi un vector de expresie virală şi o polipeptidă antigenică izolată sau mai mulţi vectori de expresie virală. "Administrarea simultană" poate fi administrarea a două sau mai multe componente cel puţin în aceeaşi zi. Când două componente sunt "administrate împreună cu", ele pot fi administrate în compoziţii separate, secvenţial, într-o perioadă scurtă de timp, cum ar fi 24, 20, 16, 12, 8 sau 4 ore, sau în interval de 1 oră sau mai puţin, sau pot fi administrat într-o singură compoziţie în acelaşi timp.
În realizări particulare ale unei combinaţii de vaccinuri conform invenţiei, prima compoziţie cuprinde un vector adenovirus, de preferinţă un vector adenovirus 26, care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 18; şi polipeptida antigenică izolată HIV cuprinde reziduurile 30-708 din secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 7 sau reziduurile 30-724 din SECV ID NR: 36. Într-o realizare particulară, prima compoziţie cuprinde suplimentar un vector adenovirus, de preferinţă un vector adenovirus 26, care codifică o polipeptidă antigenică HIV cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR. 5. Într-o altă realizare particulară, prima compoziţie cuprinde în plus unul sau mai mulţi vectori adenovirus, de preferinţă vectori adenovirus 26, care codifică unul sau mai multe polipeptide antigenice HIV suplimentare cuprinzând secvenţele de aminoacizi selectate din grupul constând din SECV ID NR: 28 şi 29.
Un alt aspect general al invenţiei se referă la un kit care cuprinde o combinaţie de vaccin conform unei variante de realizare a invenţiei.
Alte exemple de realizare ale proteinei anvelopei HIV sintetice, vectori de expresie, vectori de expresie suplimentari, polipeptide antigenice HIV codificate de către vectorii de expresie şi polipeptide antigenice izolate etc., care pot fi utilizate în combinaţiile de vaccin ale invenţiei sunt discutate în detaliu mai sus şi în exemplele ilustrative de mai jos.
Metoda pentru inducerea imunităţii de protecţie împotriva infecţiei cu HIV
Invenţia se referă, de asemenea, la o metodă de a induce un răspuns imun împotriva unuia sau mai multor grupuri HIV la un subiect care are nevoie de acesta. Metodele descrise în conţinut includ metode de iniţiere şi stimulare a unui răspuns imun folosind unul sau mai mulţi vectori de expresie în combinaţie cu unul sau mai multe polipeptide antigenice izolate.
Într-un aspect general, o metodă de inducere a unui răspuns imun împotriva unui virus al imunodeficienţei umane (HIV) la un subiect cuprinde administrarea către subiect a unei compoziţii cuprinzând o cantitate eficientă imunogen dintr-un vector de expresie cuprinzând un acid nucleic care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 8. Oricare dintre compoziţiile descrise în conţinut poate fi utilizată într-o metodă de inducere a unui răspuns imun împotriva HIV la un subiect. De preferinţă, compoziţia cuprinde un vector adenovirus, de preferinţă un vector adenovirus 26, cuprinzând un acid nucleic care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 18. Compoziţia poate cuprinde în continuare unul sau mai mulţi vectori suplimentari care codifică unul sau mai mulţi vectori mai multe polipeptide antigenice HIV şi/sau una sau mai multe polipeptide antigenice HIV izolate suplimentare.
Într-un alt aspect general, o metodă de inducere a unui răspuns imun împotriva unui virus al imunodeficienţei umane (HIV) la un subiect cuprinde:
(i) administrarea către subiect a unei prime compoziţii cuprinzând o cantitate eficientă imunogen dintr-un vector de expresie care codifică o proteină a anvelopei HIV mozaic având secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 8 sau SECV ID NR: 8 având una sau mai multe mutaţii selectate dintre grupul format din (a) I529P, (b) K480E şi (c) o combinaţie de EK479-480RRRR, I529P, A471C şi T575C şi un purtător;
(ii) administrarea către subiect a unei doua compoziţii cuprinzând o cantitate eficientă imunogen dintr-o polipeptidă antigenică HIV şi un purtător izolat; şi
(iii) opţional, administrarea către subiect a unei cantităţi eficiente imunogen de unul sau mai mulţi vectori de expresie suplimentari care codifică unul sau mai multe polipeptide antigenice HIV,
în care etapele (i) şi (ii) sunt efectuate în oricare ordine, cu una dintre etapele pentru iniţierea imunizării şi cu cealaltă etapă pentru stimularea imunizării. Conform exemplelor de realizare ale invenţiei, cantitatea opţională, eficientă, a unuia mai mulţi vectori de expresie suplimentari este administrată împreună cu prima compoziţie sau a doua compoziţie. Într-o realizare preferată, cantitatea efectivă opţională a unuia sau mai multor vectori de expresie suplimentari este administrată împreună cu prima compoziţie.
Într-o realizare particulară a unei metode de inducere a unui răspuns imun, prima compoziţie cuprinde un vector adenovirus, de preferinţă un vector adenovirus 26, care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 8 şi un al doilea vector adenovirus, de preferinţă un vector adenovirus 26, care codifică o polipeptidă antigenică HIV cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5; a doua compoziţie cuprinde o polipeptidă antigenică HIV izolată având reziduuri 30-708 din secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 7 sau reziduurile 30-724 din SECV ID NR: 36; şi unul sau mai mulţi vectori de expresie suplimentari sunt vectori adenovirus, de preferinţă vectori adenovirus 26, care codifică una sau mai multe polipeptide antigenice HIV cuprinzând secvenţe de aminoacizi selectate din grupul constând din SECV ID NR: 28 şi 29; în care prima compoziţie este administrată subiectului, împreună cu unul sau mai mulţi vectori de expresie suplimentari, de una sau de mai multe ori pentru iniţierea imunizării, iar a doua compoziţie este administrată subiectului de una sau de mai multe ori pentru stimularea imunizării.
Administrarea compoziţiilor imunogene cuprinzând vectorii de expresie şi/sau polipeptide antigenice este de obicei intramusculară, intradermică sau subcutanată. Cu toate acestea, pot fi avute în vedere şi alte moduri de administrare, cum ar fi intravenoasă, rectală, cutanată, orală, nazală etc. Administrarea intramusculară a compoziţiilor imunogene poate fi realizată prin utilizarea unui ac pentru a injecta o suspensie a vectorilor de expresie, de exemplu vectori adenovirus şi/sau polipeptide antigenice. O alternativă este utilizarea unui dispozitiv de injecţie fără ac pentru a administra compoziţia (de exemplu, Biojector™) sau o pulbere uscată prin congelare care conţine vaccinul.
Pentru injecţii intramusculare, intravenoase, cutanate sau subcutanate sau injecţii la locul afectării, vectorul va fi sub forma unei soluţii apoase acceptabile din punct de vedere parenteral, care nu conţine pirogen şi are un pH, izotonicitate şi stabilitate adecvate. De asemenea, polipeptida antigenică izolată va fi sub forma unei soluţii acceptabile din punct de vedere parental, având un pH, izotonicitate şi stabilitate adecvate. Specialiştii în domeniu sunt capabili să pregătească soluţii adecvate folosind, de exemplu, vehicule izotonice, cum ar fi Injecţia clorurii de sodiu, Injecţia soluţiei Ringer, Injecţia soluţiei Ringer lactat. Pot fi incluşi conservanţi, stabilizanţi, tampoane, antioxidanţi şi/sau alţi aditivi, după cum este necesar. O formulare cu eliberare lentă poate fi de asemenea folosită.
De obicei, administrarea compoziţiilor de vaccin conform exemplelor de realizare a invenţiei va avea un scop profilactic de a genera un răspuns imun împotriva unui antigen HIV înainte de infecţia sau dezvoltarea simptomelor. În alte exemple de realizare, vectorii de expresie, de exemplu, vectori adenovirus şi/sau polipeptide antigenice HIV pot fi administraţi pentru profilaxie post-expunere.
Compoziţiile imunogene care conţin vectori de expresie, de exemplu, vectori adenovirus şi/sau polipeptide antigenice sunt administrate la un subiect, dând naştere la un răspuns imun anti-HIV la subiect. O cantitate dintr-o compoziţie suficientă pentru a induce un răspuns imun detectabil este definită a fi o "doză eficientă imunogen" sau "o cantitate eficientă imunogen". Într-o realizare tipică a invenţiei, răspunsul imunitar este un răspuns imun protector.
Cantitatea administrată şi rata şi timpul de administrare vor depinde de natura şi gravitatea tratamentului. Prescripţia tratamentului, de exemplu, deciziile privind dozajul etc., este în responsabilitatea medicilor generalişti şi a altor medici sau, în context veterinar, a unui medic veterinar şi, în mod obişnuit, ţine cont de tulburarea de tratat, de starea pacientului individual, locul de livrare, metoda de administrare şi alţi factori cunoscuţi practicienilor. Exemple de tehnici şi protocoale menţionate mai sus pot fi găsite în Remington's Pharmaceutical Sciences, ediţia a 16-a, Osol, A. ed., 1980.
După producerea de vectori adenovirus şi formularea opţională a acestor particule în compoziţii, vectorii pot fi administraţi la un individ, în special la un om sau alt primat. Livrarea către un mamifer non-uman nu trebuie să aibă un scop terapeutic, ci poate fi utilizată într-un context experimental, de exemplu în investigarea mecanismelor răspunsurilor imune la proteina anvelopei HIV sintetică exprimată de vectorii adenovirus ai invenţiei.
Într-o realizare a metodelor dezvăluite, unul sau mai mulţi vectori adenovirus care codifică unul sau mai mulţi polipeptide antigenice HIV sunt utilizaţi pentru a primi răspunsul imun. Unul sau mai multe polipeptide antigenice HIV izolate pot fi utilizate împreună cu unul sau mai mulţi vectori adenovirus pentru imunizarea primară. Imunizarea amorsă poate fi administrată o singură dată, dar poate fi opţional, de asemenea, administrată de mai multe ori, de exemplu, administrarea iniţială de iniţiere la ora 0, urmată de o altă administrare de iniţiere aproximativ 4-14 săptămâni, de exemplu 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 sau 14 săptămâni, sau în orice moment între timp, după administrarea iniţială. Pentru a stimula răspunsul imun, pot fi utilizate una sau mai multe polipeptide antigenice HIV izolate, împreună cu unul sau mai mulţi adenovirus suplimentari sau alţi vectori care codifică unul sau mai mulţi polipeptide antigenice HIV. O imunizare stimulantă poate fi de asemenea administrată o dată sau de mai multe ori, de exemplu, mai întâi la aproximativ 18-36, de exemplu 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 sau 36 de săptămâni, sau în orice moment între timp, după administrarea iniţială de iniţiere, urmată de o altă administrare stimulativă la aproximativ 36-52, de ex 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 sau 60 săptămâni sau în orice moment între timp, după administrarea iniţială de iniţiere. Răspunsul imun indus de imunizare este monitorizat.
Realizările metodelor dezvăluite au în vedere, de asemenea, regimuri de impulsuri mai scurte, ceea ce înseamnă că imunizarea cu impuls final este administrată la aproximativ 22-26 săptămâni după administrarea iniţială. Imunizarea de iniţiere poate fi administrată în săptămâna 0. Imunizarea de stimulare poate fi administrată de mai multe ori, de exemplu, mai întâi la aproximativ 7-9 săptămâni sau 11-13 săptămâni sau la aproximativ 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 sau 14 săptămâni sau orice moment între timp, după administrarea de iniţiere, urmată de o altă administrare stimulantă la aproximativ 22-26 săptămâni sau la aproximativ 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 sau 28 de săptămâni, sau în orice moment între timp, după administrarea de iniţiere. În anumite realizări, una sau mai multe polipeptide antigenice HIV izolate sunt administrate împreună cu unul sau mai mulţi vectori adenovirus pentru iniţierea şi/sau stimularea imunizării.
Specialiştii în domeniu apreciază cu uşurinţă că regimul de administrare primară şi de stimulare poate fi ajustat pe baza răspunsurilor imune măsurate după administrări. De exemplu, compoziţiile stimulante sunt, în general, administrate săptămâni sau luni după administrarea compoziţiei de iniţiere, de exemplu, aproximativ 2-3 săptămâni sau 4 săptămâni, sau 8 săptămâni sau 16 săptămâni, sau 20 săptămâni sau 24 săptămâni sau 28 săptămâni sau 30 de săptămâni sau 32 de săptămâni sau la unu-doi ani după administrarea compoziţiei de iniţiere.
Conform realizărilor invenţiei, un adjuvant poate fi administrat împreună cu polipeptida antigenică HIV izolată ca parte a iniţierii şi/sau stimularea imunizării. Orice adjuvant poate fi utilizat având în vedere prezenta descriere, şi în anumite variante de realizare, adjuvantul este o sare de aluminiu, cum ar fi AdjuPhos.
Într-o realizare preferată a invenţiei, vectorii adenovirus utilizaţi în metodele dezvăluite în conţinut includ un vector rAd26. De preferinţă, un vector rAd26 care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 18 sau SECV ID NR: 19, cel mai preferabil SECV ID NR: 18, este utilizat pentru a primi răspunsul imun, singur sau în combinaţie cu unul sau mai mulţi vectori rAd26 suplimentari care codifică una sau mai multe polipeptide antigenice HIV, cum ar fi mos1Env având secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5 şi o polipeptidă antigenică izolată cu HIV, cum ar fi cea care cuprinde reziduurile 30-708 din secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 7 sau reziduuri 30-724 din SECV ID NR: 36, este utilizat pentru a stimula răspunsul imun, sau invers.
Într-o realizare exemplificativă, un vector rAd26 care codifică o proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 18 este utilizată pentru a primi răspunsul imun în combinaţie cu un vector rAd26 care codifică o polipeptidă antigenică HIV având secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5. Unul sau mai mulţi vectori suplimentari rAd26 care codifică unul sau mai multe polipeptide antigenice HIV cu secvenţe de aminoacizi selectate din grupul format din SECV ID NR: 1-4, 28 şi 29 pot fi de asemenea administrate împreună cu ceilalţi vectori rAd26 pentru a primi răspunsul imun. Administrarea de iniţiere în anumite realizări este administrată de două ori înainte de administrarea oricărei imunizări stimulante. O polipeptidă antigenică izolată HIV, cum ar fi cea care cuprinde reziduurile 30-708 din secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 7 (de preferinţă) sau care cuprinde reziduurile 30-724 ale secvenţei de aminoacizi din SECV ID NR: 36 sau o combinaţie de cel puţin două dintre astfel de polipeptide antigenice HIV izolate, este apoi administrată pentru a stimula răspunsul imun şi este de preferat administrată mai mult de o dată. De preferinţă, un adjuvant este administrat suplimentar cu polipeptida antigenică HIV izolată în imunizarea de stimulare.
Într-o realizare particulară, răspunsul imun este determinat de administrarea a patru antigene HIV codificate pe vectori adenovirali, de preferinţă vectori rAd26, cei patru antigeni care sunt codificaţi: (i) o proteină a anvelopei HIV sintetică cuprinzând secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 18, (ii) polipeptidă care are secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, (iii) polipeptidă având secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 28 şi (iv) polipeptidă care are secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 29. Fiecare dintre aceste patru antigene pot fi codificate pe un vector adenoviral separat, de preferinţă un vector rAd26, administrat într-o doză totală de aproximativ 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 sau 10 x 1010 particule virale (vp), de exemplu aproximativ 5x1010 vp (pentru toţi vectorii împreună). Vectorii pot fi preamestecati, de exemplu într-un raport 1:1:1:1. Administrarea de iniţiere poate fi repetată după administrarea de iniţiere, de exemplu la 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 sau 16 săptămâni după administrarea de iniţiere. În această realizare, un răspuns imun este stimulat prin administrarea aceluiaşi vaccin vector adenoviral utilizat pentru administrarea de iniţiere împreună cu proteina izolată HIV Env gp140, de exemplu proteină grup C gp140 (care conţine reziduuri 30-708 din secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 7) sau proteină gp140 mozaic (care conţine reziduuri 30-724 din secvenţa de aminoacizi a SECV ID NR: 36) sau proteină gp140 grup C şi proteină mozaic gp140, la o doză totală de aproximativ 50-300 µg proteină, de ex 50, 100, 150, 200, 250 sau 300 micrograme, sau orice cantitate între ele, a proteinei gp140 grup C, sau de exemplu 50, 100, 150, 200, 250, sau 300 micrograme, sau orice cantitate între proteine mozaic gp140 sau, de exemplu 50, 100, 150, 200, 250 sau 300 micrograme, sau orice cantitate între ele, dintr-o combinaţie de proteină gp140 grup C şi proteină gp140 mozaic (de exemplu, într-un raport 1: 1, fie amestecate împreună, fie administrate separat). De preferinţă, proteina gp140 este administrată împreună cu adjuvant, de exemplu fosfat de aluminiu. Administrarea de adenovirus proteină plus gp140 pentru a stimula răspunsul imun poate fi efectuată la aproximativ 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 sau 30 de săptămâni sau în orice moment între timp, după administrarea de iniţiere. Administrarea de stimulare poate fi repetată, de exemplu la aproximativ 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53 sau 54 de săptămâni sau în orice moment între timp, după administrarea de iniţiere. Toate administrările conform acestei realizări sunt de preferinţă efectuate pe calea intramusculară.
EXEMPLE
Exemplul 1: Proiectarea secvenţelor antigenului anvelopei HIV
Mai multe secvenţe de antigen a anvelopei HIV au fost proiectate având similaritate cu secvenţa de antigen mozaic HIV mos2Env (SECV ID NR: 6; descris anterior şi în publicaţia de cerere internaţională de brevet de invenţie 2010/059732). Secvenţele nou proiectate, legate de membrană, s-au bazat pe (o combinaţie de) secvenţe complet naturale de tip sălbatic din proteinele anvelopei HIV sau pe o himeră de secvenţă de mos2Env şi secvenţe proteice de tip sălbatic HIV. În plus faţă de secvenţele de proteine anvelopei cu lungime întreagă (a se vedea figura 1A), au fost proiectate şi secvenţe care au trunchiere la capătul C-terminal al domeniului citoplasmic (vezi, de exemplu, figura 1C). A se vedea, de exemplu, Schiernle şi colab., PNAS 1997; Abrahamyan şi colab., J Virol 2005); Edwards şi colab., J. Virology, 2002, 76: 2683-2691. Variante solubile au fost de asemenea preparate prin trunchiere la capătul C-terminal înainte de regiunea transmembrană (TM), care a fost înlocuită cu un domeniu de trimerizare, cum ar fi un domeniu de trimerizare GCN4 (vezi, de exemplu, figura 1B). Aceste variante solubile au fost transformate în continuare într-o singură variantă de lanţ prin mutaţia situsului de clivaj furin, inhibând astfel prelucrarea domeniului extracelular al proteinei anvelopei în subunităţi gp120 şi gp41.
Dintre toate constructele generate şi testate, constructele bazate pe C4 aveau cele mai optime proprietăţi, de exemplu, o bună manevrabilitate, pliere, imunogenitate etc., iar acestea au fost selectate pentru studii ulterioare. Au fost, de asemenea, generate o variantă solubilă a constructului C4 având un domeniu de trimerizare GCN4 în locul domeniului transmembranar (sC4, fig. 1B) şi o variantă cuprinzând un fragment de 7 aminoacizi din domeniul citoplasmic (C4D7, fig. 1C). şi testat în studii ulterioare. Secvenţele de aminoacizi ale C4, sC4 şi C4D7 sunt prezentate în SECV ID NR: 17, 19 şi, respectiv, 18. Secvenţele care codifică acestea sunt arătate în SECV ID NR: 25, 27 şi, respectiv, 26. Constructul C1 are o secvenţă de domeniu extracelular bazată pe secvenţa mos2Env (SECV ID NR: 6). O variantă solubilă a constructului C1 având un domeniu de trimerizare GCN4 în locul domeniului transmembranar (sC1) şi o variantă care cuprinde un fragment de 7 aminoacizi din domeniul citoplasmatic (C1D7), similar cu sC4 şi C4D7, aşa cum se arată în fig. 1B şi 1C au fost, de asemenea, generate. Constructul C1 şi variantele sale au fost utilizate în studii ulterioare în scopuri de comparaţie, deoarece acestea se bazează esenţial pe secvenţa mos2Env din stadiul tehnicii. Secvenţele de aminoacizi ale C1, sC1 şi C1D7 sunt prezentate în SECV ID NR: 31, 30 şi, respectiv, 32. Secvenţele de acid nucleic care codifică acestea sunt arătate în SECV ID NR: 34, 33 şi, respectiv, 35. Alte constructe care au fost testate au fost mai puţin optime decât cele bazate pe constructul C4 şi nu au fost preluate în continuare.
Exemplul 2: Expresia şi plierea proteinelor anvelopei HIV sintetice
Au fost măsurate nivelul de expresie, plierea şi expresia de suprafaţă celulară a proteinelor anvelopei HIV sintetice.
Niveluri de expresie
Celulele HEK293F au fost transfectate tranzitoriu cu o plasmidă care codifică proteinele sintetice HIV solubile sC1 şi sC4, aşa cum este descris în Exemplul 1. Nivelurile de expresie ale proteinei solubile au fost măsurate în supernatant folosind Western blot cantitativ (QWB). Rezultatele sunt prezentate în fig. 2. Nivelurile scăzute de expresie pentru sC1 (care în esenţă corespunde mos2Env cu un domeniu transmembranar adăugat) sunt în conformitate cu perspectivele noastre recente pentru mos2Env. După cum au demonstrat rezultatele, varianta sC4 a invenţiei a arătat niveluri de exprimare semnificativ mai mari decât varianta sC1 (control).
Plierea proteinelor
Plierea proteinei a fost testată prin măsurarea legării proteinelor anvelopei HIV sintetice solubile la un anticorp (MAb 17b) cunoscut pentru a lega locul de legare co-receptor al proteinei anvelopei HIV, care este expus numai după legarea CD4, prin testul imunosorbentului legat de enzimă (ELISA). În special, legarea sC4 purificată a fost testată pentru legarea la MAb 17b cu legarea prealabilă a sC4 la CD4 şi fără legarea prealabilă a sC4 la CD4. SC1 purificat a fost utilizat ca un control. Legarea MAb 17b la sC4 fără legarea CD4 prealabilă la proteina anvelopei este o indicaţie a proteinei anvelopei parţial desfăşurate sau pre-declanşate (adică, un Env instabil care adoptă conformaţia "deschisă" în absenţa legării CD4). Rezultatele testului ELISA sunt prezentate în FIG. 3A şi 3B.
Aşa cum se arată în fig. 3B, sC4 prezintă o legare puternică la MAb 17b cu legare prealabilă la CD4, dar nici o legătură detectabilă la MAb 17b fără legarea prealabilă la CD4. În schimb, aşa cum se arată în fig. 3A, sC1 au arătat o legătură mult mai mică la MAb 17 atât cu legare, cât şi fără legare prealabilă la CD4. Rezultatele sugerează că sC4 are un model de pliere corect, fără expunerea site-ului de legare co-receptor înainte de legarea CD4.
Plierea proteinei a fost, de asemenea, analizată prin electroforeza pe gel de poliacrilamidă naturală (PAGE) a sC1 şi sC4 pentru a evalua structura cuaternară a variantelor de proteine solubile şi posibila formare incorectă a punţii de disulfură între protomeri. După electroforeza pe un gel nativ, proteina din gel a fost detectată prin analiza Western blot. După cum arată rezultatele din fig. 4, majoritatea sC4 este prezentă într-o stare trimerică, care este structura cuaternară corectă.
Luate împreună, rezultatele experimentelor de pliere a proteinei demonstrează că proteina anvelopei HIV sintetică solubilă sC4 are profilul de pliere dorit, care este îmbunătăţit în comparaţie cu profilul de pliere al antigenului mos2Env existent (reprezentat de sC1).
Expresia suprafeţei celulare
De asemenea, a fost studiată expresia de suprafaţă celulară a variantelor legate de membrană ale proteinelor anvelopei HIV C1 (lungime întreagă), C4 (lungime întreagă, a se vedea figura 1A), C1D7 şi C4D7. Celulele HEK293T au fost transfectate tranzitoriu doar cu plasmidă care codifică eGFP (control negativ, NC) sau cu plasmidă care codifică eGFP împreună cu un construct de expresie care codifică o variantă de proteină a anvelopei HIV sintetică. După două zile după transfecţie, celulele au fost supuse unei sortări de celule activate prin fluorescenţă (FACS) - analiză la expunerea la mai mulţi anticorpi poli- şi monoclonali îndreptaţi împotriva gp120, şi anticorpi secundari, şi apoi examinaţi pentru nivelurile de expresie ale proteinei de suprafaţă. Calitatea variantelor anvelopei a fost evaluată prin determinarea nivelurilor de expresie generale utilizând un anticorp policlonal anti-gp120 şi prin evaluarea legării relative a anticorpilor cu neutralizare largă PG9 şi PG16, care sunt dependenţi de structura cuaternară, şi se leagă preferenţial la trimerul de anvelopă corect pliat.
Rezultatele experimentelor de exprimare a suprafeţei celulare sunt prezentate în fig. 5. Nivelurile de expresie de suprafaţă ale variantelor trunchiate C1D7 şi C4D7, măsurate folosind un anticorp anti-gp120, sunt mult mai mari decât nivelurile de expresie de suprafaţă ale omologilor lor de lungime întreagă, respectiv C1 şi C4. Acest lucru confirmă că ştergerea a 144 de reziduuri din capătul carboxil terminal al Env creşte nivelurile de exprimare a suprafeţei anvelopei. Construcţia C4 de lungime completă a invenţiei a arătat, de asemenea, o legătură îmbunătăţită PG9 şi PG16 în comparaţie cu C1 de lungime completă, ceea ce sugerează că secvenţa anvelopei C4 este pliată în mod corespunzător (adică un trimer) pe suprafaţa celulei.
Rezultatele demonstrează, de asemenea, că varianta C1D7, care este în esenţă Mos2Env cu un domeniu transmembranar adăugat şi 7 aminoacizi ai domeniului citoplasmatic, pot fi exprimate la suprafaţă pe celulele HEK293T. Acest lucru este în contrast cu constructul solubil din Ad26.mos2Env, care nu poate fi exprimat la niveluri detectabile pe suprafaţă atunci când este transfectat în celule A549. Cu toate acestea, legarea relativă la PG9 şi PG16 este abia detectabilă deasupra fundalului, ceea ce sugerează că secvenţa anvelopei C1D7 este slab pliată şi probabil că nu este prezentă ca un trimer intact pe suprafaţa celulei.
În general, varianta anvelopei C4D7 are cel mai optim profil de legare a anticorpilor, cu expresie gp120 mai mare decât omologul său C4 cu lungime întreagă şi cu o legătură mai mare de 15 ori a PG9 şi PG16 în comparaţie cu C1 şi C1D7 (fig. 5).
Exemplul 3: Stabilitatea vectorilor care codifică secvenţele anvelopei HIV
Lucrările anterioare din laboratoarele noastre (nepublicate) au indicat faptul că vectorii adenovirus 26 (Ad26) care codifică secvenţa antigenului mos2Env au arătat raporturi VP/IU relativ ridicate (indicând o calitate mai mică a loturilor de produse adenovirus) şi, în plus, că astfel de vectori prezintă probleme de stabilitate. În consecinţă, a fost important să se testeze stabilitatea constructelor proteice sintetice cu HIV ale invenţiei într-un fond de adenovirus.
Vectorii recombinanţi Ad26 (rAd26) care codifică secvenţele de antigen HIV conform invenţiei C4, C4D7 şi sC4, aşa cum s-a descris mai sus în Exemplul 1, au fost generate în celulele PER.C6 (denumite "rAd26.C4", "rAd26.C4D7" şi, respectiv "rAd26.sC4"). Clone vectoriale (plăci) au fost selectate şi extinse pentru generarea loturilor de cercetare. Un maxim de 5 clone virale (plăci) au fost reduse până la formatul T25 şi pasate în serie pentru 10 pasaje în format T25 (pasajele 1-3 fiind etapele de transfecţie şi purificare a plăcilor, urmate de 10 pasaje în format T25, rezultând un total din 13 pasaje). Stabilitatea genetică a fost evaluată la numărul de pasaje virale (vpn) 3, 5, 10 şi 13 printr-o analiză PCR a casetei transgenice E1,
urmată de secvenţarea la vpn 13. Rezultatele sunt prezentate în fig. 6.
Vectorii rAd26 care codifică C4 de lungime întreagă (rAd26.C4) au arătat caracteristici de creştere slabe, determinate de niciun efect citopatogenic complet (CPE) în 2-3 zile; instabilitate genetică, determinată de ştergerea regiunii casetei transgenice E1; sau o combinaţie a acestora (fig. 6). Datorită caracteristicilor slabe de creştere şi instabilităţii genetice observate, acest vector care codifică C4 de lungime întreagă nu a fost urmărit în continuare.
În schimb, pentru vectorii rAd26 care codifică C4D7 (rAd26.C4D7) şi sC4 (rAd26.sC4), toate plăcile propagate au rămas stabile genetic în timpul experimentului (fig. 6). Astfel, noile constructe sC4 şi C4D7 depăşesc constructul iniţial mos2Env în ceea ce priveşte stabilitatea pe un fundal vectorial adenoviral. Testarea stabilităţii genetice faşă de vpn 13 reprezintă propagarea mai multor pasaje dincolo de cea utilizată la pregătirea pe scară industrială a vectorilor.
Exemplul 4: Expresie şi antigenicitatea in vivo a secvenţelor anvelopei HIV în vectori adenovirus
Expresia şi antigenicitatea rAd26.C4D7 şi rAd26.sC4 au fost evaluate separat sau în combinaţie cu un vector Ad26 recombinant care codifică mos1Env (SECV ID NR: 5) (denumit în continuare "rAd26.mos1Env") în celule vector A549 transducte (linie de celule umane) in vitro (datele nu sunt arătate) Analiza citometriei de flux a demonstrat că toate antigenele au fost exprimate în culturile celulare transducte cu 2x104 particule virale (vp) ale antigenelor cu o singură anvelopă sub formă de controale sau cu 1x104 vp din cele 2 antigene Env combinate prin transductia adenovirusului. Toate transducţiile au conţinut suplimentar doze unice (1x104 vp) de vectori adenovirus care codifică mos1GagPol ("rAd26.mos1GagPol") şi mos2GagPol ("rAd26.mos2GagPol") (Barouch şi colab., Nat Med 2010, 16: 319-323), astfel încât combinaţiile de vectori evaluaţi au prezentat aceleaşi raporturi relative ale diferiţilor vectori adenovirali ca fiind destinate utilizării pre-clinice şi clinice. De preferinţă, vectorii care codifică proteinele anvelopei HIV sintetice conform invenţiei sunt combinaţi cu vectori care codifică antigenele mos1GagPol şi mos2GagPol pentru utilizare clinică.
Combinaţia de rAd26.mos1Env şi rAd26.C4D7 a dus la o acoperire maximă a epitopilor evaluaţi, determinată prin legarea anticorpului monoclonal. În special, expunerea epitopului PG16, care a fost contribuit prin transformarea cu Ad26.C4D7, este promiţătoare pentru utilizarea vaccinului, deoarece PG16 reprezintă un anticorp monoclonal neutralizant în general, recunoscând regiunea buclelor V1/V2 a HIV-1 Env (Walker şi colab., Science. 2009). Prin urmare, proteina anvelopei HIV sintetică conform invenţiei, derivată din secvenţa C4, creşte lăţimea răspunsului imun împotriva proteinei anvelopei HIV în comparaţie cu răspunsul imun generat doar de mos1Env. S-a dovedit că răspunsurile la anticorp induse de vaccin direcţionate către regiunea proteinei anvelopei se corelează cu protecţia împotriva infecţiei cu HIV-1 în studiul RV144 (Haynes şi colab., N Engl J Med. 2012), şi, astfel, proteina anvelopei HIV sintetică conform invenţiei este un candidat promiţător pentru a include în regimurile de vaccin HIV.
Exemplul 5: Imunogenitatea vectorilor care codifică proteinele anvelopei HIV sintetice
Secvenţele de proteină a anvelopei HIV sintetică conform invenţiei într-un fundal vector Ad26 au fost testate la iepuri pentru a determina dacă aceste constructe au fost o alternativă imunogenă la constructul rAd26.mos2Env.
S-a testat imunogenitatea vectorului de adenovirus care codifică mos1Env (rAd26.mos1Env; SECV ID NR: 5) şi în combinaţie cu vectori adenovirus care codifică proteinele anvelopei sintetice ale invenţiei (rAd26.C4D7 şi rAd26.sC4; cuprinzând SECV ID NR: 8, în special SECV ID NR: 18 şi respectiv 19). În toate cazurile, au fost administraţi vectori adenovirus 26 care codifică antigene mos1GagPol şi mos2GagPol (rAd26.mos1GagPol [SECV ID NR: 28] şi rAd26.mos2GagPol [SECV ID NR: 29]). Mai precis, imunogenitatea rAd26.mos1Env singur (vaccin trivalent: rAd26.mos1GagPol, rAd26.mos2GagPol şi rAd26.mos1Env) a fost comparată cu imunogenitatea rAd26.mos1Env în combinaţie cu unul dintre vaccinurile rAd26.C4D7 sau rAd26.sC4: administrarea fie a rAd26.mos1GagPol, rAd26.mos2GagPol, rAd26.mos1Env şi rAd26.C4D7 sau administrarea rAd26.mos1GagPol, rAd26.mos2GagPol, rAd26.mos1Env şi rAd26.sC4). Această comparaţie a vaccinului trivalent, care nu are vectori care codifică proteinele anvelopei HIV sintetice ale invenţiei, cu vaccinul tetravalent, care conţine vectori care codifică proteinele anvelopei sintetice ale invenţiei, permite determinarea dacă proteinele anvelopei HIV din invenţia contribuie la lărgirea protecţiei.
Administrarea s-a făcut în regimuri de vaccin, în care aceşti vectori Ad26 au fost administraţi la săptămânile 0 şi 6 ca o dublă iniţiere şi o proteină gp140 grup C (o proteină Env gp140 trivalentă având SECV ID NR: 7 fără secvenţa peptidică semnal a reziduurilor 1- 29, vezi şi publicaţia de cerere internaţională de brevet de invenţie 2010/042942) la săptămânile 12 şi 18 ca stimulare dublă (vezi de exemplu Barouch şi colab., 2015, Ştiinţa 349: 320-324). Tabelul 1 descrie regimurile de vaccin utilizate pentru studiul curent. rAd26. liberă se referă la un vector de control lipsit de orice genă care codifică o secvenţă pentru o proteină antigenică HIV. Fiecare grup conţinea şase iepuri.
Tabelul 1: Regimurile de vaccin testate în studiul de imunogenitate la iepuri
Grup Prima şi a doua Imunizare A treia şi a patra imunizare N = adeno vectori Doza (vp) Doza totală (vp) stimulare proteine Doza (ug) Adjuvant 1 rAd26.MoslEnv 2,5x1010 5x1010 GP140 (grupul C) 10 AdjuPhos 250 ug 6 rAd26.Mos1GagPol 1,25x1010 rAd26.Mos2Gagpol 1,25x1010 2 rAd26.Mos1Env 1,25x1010 5x1010 GP140 (grupul C) 10 AdjuPhos 250 ug 6 rAd26.C4D7 1,25x1010 rAd26.Mos1GagPol 1,25x1010 rAd26.Mos2Gagpol 1,25x1010 3 rAd26.Mos1Env 1,25x1010 5x1010 GP140 (grupul C) 10 AdjuPhos 250 ug 6 rAd26.sC4 1,25x1010 rAd26.Mos1GagPol 1,25x1010 rAd26.Mos2Gagpol 1,25x1010 Control rAd26.liber 5x1010 5x1010 N/A 0 AdjuPhos 250 ug 6
Compararea vaccinului trivalent Ad26 (lipsit de noile antigene Env ale invenţiei) cu vaccinul tetravalent Ad26 (care cuprinde antigenele sC4 sau C4D7 Env) permite testarea dacă noile antigene contribuie la o largă protecţie. Un test stabilit de neutralizare bazat pe celule TZM-bl [Montefiori DC. Mol Biol Methods 2009,485: 395-405; Sarzotti-Kelsoe M şi colab., J Immunol Methods 2014.409: 131-146] a fost utilizat pentru a măsura activitatea de neutralizare a candidaţilor vaccin.
Rezultatele sunt prezentate în Fig. 7 şi au fost analizate statistic folosind vaccinul trivalent (grupul 1 din tabelul 1) ca grup de control şi comparând cu fiecare dintre noile vaccinuri cvadrivalente (grupele 2 şi 3 din tabelul 1).
În general, noul derivat C4 (adică codificarea proteinelor Env cuprinzând SECV ID NR: 8, fiind o alternativă pentru mos2Env), constructele adeno au fost imunogene după două imunizări intramusculare omoloage la iepuri.
Capacitatea de neutralizare a serurilor imune de iepure împotriva pseudovirusurilor de nivel 1B a fost absentă (datele nu sunt prezentate), ceea ce nu este neaşteptat, deoarece se ştia că astfel de virusuri sunt mai dificil de neutralizat.
Capacitatea de neutralizare a pseudovirusului a serurilor imune de iepure împotriva virusului Tier 1A grup B nu a fost afectată de adăugarea de noi componente (datele nu sunt prezentate). Acest lucru demonstrează că noul antigen nu a afectat negativ imunogenitatea antigenului grupului B prezent în vaccin (deşi noile componente au fost direcţionate către grupul C, o astfel de interferenţă nedorită nu a putut fi exclusă a priori de a fi testat).
Capacitatea de neutralizare a pseudovirusului a serurilor imune de iepure împotriva unui virus Tier 1 A grup C a fost semnificativ îmbunătăţită în noul cvadrivalent C4D7 care conţine adeno (cvadrivalent, grup 2), comparativ cu imunizarea trivalentă (având doar mos1Env) (grupul 1) (Fig 7 panoul B ). În plus, capacitatea de neutralizare a pseudovirusului a serurilor imune de iepure împotriva virusului Tier 1A grup C din săptămâna 8 a fost semnificativ îmbunătăţită în romanul cvadrivalent sC4 care conţine adeno (cvadrivalent, grupul 3), comparativ cu imunizarea trivalentă (având doar mos1Env) (grupul 1) (Fig. 7 panoul B).
În concluzie, constructele C4D7 şi sC4 codificate în Ad26 au fost imunogene şi adăugarea acestuia a extins capacitatea de legare şi neutralizare a unui vaccin care are mos1Env (în principal grupul B) ca unică componentă codată Ad26, către tulpinile C al grupului (Fig 7B).
Exemplul 6: Imunogenitatea regimurilor de vaccin, incluzând vectori care codifică proteinele anvelopei HIV sintetice din invenţie
Un alt studiu pe iepure a evaluat combinaţia de vector tetravalent
Ad26.Mos4.HIV (constând din patru vectori adenovirali: Ad26.Mos1GagPol [codare SECV ID NR: 28], Ad26.Mos2GagPol [codare SECV ID NR: 29], Ad26.Mos1Env [codare SECV ID NR: 5] şi Ad26.Mos2SEnv [denumirea "C4D7", aşa cum s-a utilizat mai sus, este de asemenea denumită "Mos2S"; acest vector codifică noua SECV ID NR: 18 conform invenţiei], într-un mod 1: 1: 1: 1 amestec în doză totală de 5x109 vp,) aplicat intramuscular ca imunizări duble iniţiere în săptămânile 0 şi 6, în combinaţie cu proteina recombinantă HIV-1 Env îmbunătăţeşte folosind gp140 Grup C [având secvenţa reziduurilor de aminoacizi 30-708 din SECV ID NR: 7], gp140 Mozaic [având secvenţa de resturi de aminoacizi 30-724 din SECV ID NR: 36], sau o combinaţie de gp140 Grup C şi gp140 Mozaic, în săptămânile 13 şi 19. Aceste impulsuri proteice au fost aplicate intramuscular la o doză totală de 10 sau 50 micrograme de proteine combinate cu adjuvant de fosfat de aluminiu de 250 mc, formulate în ziua imunizării.
Rezultatele indică faptul că toate regimurile testate au fost imunogene la toate animalele, inducând titruri ridicate de anticorpi şi activitate de neutralizare moderată împotriva virusurilor pseudotipate de nivel 1. Dacă gp140 Mozaic a fost utilizat ca antigen pentru vaccin, fie singur, fie în combinaţie cu gp140, Grup C titlurile ELISA specifice gp140 Mozaic şi recunoaşterea pseudovirusului Grup B au fost semnificativ crescute la săptămâna 15, comparativ cu grupul de referinţă sporit doar cu gp140 Grup C. Mărimea efectului general al îmbunătăţirii a fost moderată şi mai mare pentru grup crescut cu combinaţia bivalentă gp140 Grup C - gp140 Mozaic în comparaţie numai cu gp140 Mozaic. În săptămâna 21 a studiului, aceste diferenţe au fost pierdute şi răspunsurile imune au fost măsurate pentru grupuri care primesc stimulări bivalente gp140 Grup C - gp140 Mozaic sau monovalente gp140 Grup C au fost statistic distincte.
Regimul de proteine bivalente a arătat o inducere comparabilă a titrurilor ELISA Grup C şi recunoaşterea pseudovirusului ca regim unic de stimulare gp140 Grup C, ceea ce indică faptul că includerea imunogenului gp140 Mozaic grup B nu a avut niciun efect negativ asupra acoperirii antigenului grup C, în timp ce îmbunătăţeşte semnificativ acoperirea grupului B la săptămâna 15 a studiului.
Datele confirmă faptul că vectorul Ad26.Mos2SEnv care codifică un antigen Env sintetic conform invenţiei poate fi utilizat cu succes în regimurile de vaccin.
REFERINŢE
1. Barouch şi colab., Nat Med 2010, 16: 319-323
2. WO 2010/059732
3. Schiernle şi colab., PNAS 94: 8640-8645, 1997
4. Abrahamyan şi colab., J Virol 79: 106-115, 2005
5. US20120076812
6. Barouch şi colab., Cell 155:1-9, 2013
7. Havenga, şi colab., 2006, J Gen Virol 87: 2135-43;
8. WO 03/104467
9. WO 2004/001032
10. WO 2007/104792
11. Abbink şi colab., (2007) Virol 81(9): 4654-63
12. Brevet de invenţie US Nr. 7,270,811
13. Vogels şi colab., (2003) J Virol 77(15): 8263-71
14. WO 00/70071
15. WO2012/082918
16. Walker LM, Phogat SK, Chan-Hui PY, Wagner D, Phung P, Goss JL, şi colab., Broad and potent neutralizing antibodies from an African donor reveal a new HIV-1 vaccine target. Science 2009,326:285-289.
17. Haynes BF, Gilbert PB, McElrath MJ, Zolla-Pazner S, Tomaras GD, Alam SM, şi colab., Immune-correlates analysis of an HIV-1 vaccine efficacy trial. N Engl J Med 2012,366:1275-1286.
18. Barouch şi colab., (2015) Science 349: 320-324
19. Montefiori DC. Measuring HIV neutralization in a luciferase reporter gene assay. Methods Mol Biol 2009,485:395-405.
20. Sarzotti-Kelsoe M, Bailer RT, Turk E, Lin CL, Bilska M, Greene KM, şi colab., Optimization and validation of the TZM-bl assay for standardized assessments of neutralizing antibodies against HIV-1. J Immunol Methods 2014,409:131-146.
21. Edwards şi colab., J. Virology, 2002, 76:2683-2691.
LISTA DE SECVENŢE
<110> Janssen Vaccines & Prevention B.V.
<120> Antigene, virusuri, compoziţii şi metode de utilizare a virusului imunodeficienţei umane
<130> 0265 EP P01 PRI
<160> 37
<170> PatentIn versiunea 3.5
<210> 1
<211> 500
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă de antigen mozaic mos1Gag
<400> 1
<210> 2
<211> 491
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă de antigen mozaic mos2Gag
<400> 2
<210> 3
<211> 850
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă de antigen mozaic mos1Pol
<400> 3
<210> 4
<211> 850
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă de antigen mozaic mos2Pol
<400> 4
<210> 5
<211> 685
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> mos1Env secvenţă de antigen mozaic
<400> 5
<210> 6
<211> 684
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă de antigen mozaic mos2Env
<400> 6
<210> 7
<211> 708
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> trimer gp140 stabilizat al grupului C: C97ZA012-gp140-foldon cu mutaţii de clivaj
<400> 7
<210> 8
<211> 625
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> Fragment C4: gp120 trunchiat gp41 fără peptida semnal şi domeniu transmembranar
<400> 8
<210> 9
<211> 29
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă semnal
<400> 9
<210> 10
<211> 29
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă semnal
<400> 10
<210> 11
<211> 29
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă semnal
<400> 11
<210> 12
<211> 29
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă semnal
<400> 12
<210> 13
<211> 22
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> domeniu transmembranar
<400> 13
<210> 14
<211> 7
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> regiune citoplasmică trunchiată
<400> 14
<210> 15
<211> 32
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> Domeniu de trimerizare GCN4
<400> 15
<210> 16
<211> 30
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220> <223> domeniul de trimerizare foldon
<400> 16
<210> 17
<211> 862
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă C4
<400> 17
<210> 18
<211> 711
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă C4D7
<400> 18
<210> 19
<211> 704
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă sC4
<400> 19
<210> 20
<211> 4050
<212> AND
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă de nucleotide care codifică mos1GagPol
<400> 20
<210> 21
<211> 4023
<212> AND
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă de nucleotide care codifică mos2GagPol
<400> 21
<210> 22
<211> 2055
<212> AND
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă de nucleotide care codifică mos1Env
<400> 22
<210> 23
<211> 2052
<212> AND
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă de nucleotide care codifică mos2Env
<400> 23
<210> 24
<211> 829
<212> AND
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> Promotorul CMV utilizat pentru exprimarea antigenelor la vectorii Ad26
<400> 24
<210> 25
<211> 2586
<212> AND
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă de nucleotide care codifică C4
<400> 25
<210> 26
<211> 2133
<212> AND
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă de nucleotide care codifică C4D7
<400> 26
<210> 27
<211> 2112
<212> AND
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă de nucleotide care codifică sC4
<400> 27
<210> 28
<211> 1350
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă antigen mozaic mos1GagPol
<400> 28
<210> 29
<211> 1341
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă antigen mozaic mos2GagPol
<400> 29
<210> 30
<211> 709
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă sC1
<400> 30
<210> 31
<211> 867
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă C1
<400> 31
<210> 32
<211> 716
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă C1D7
<400> 32
<210> 33
<211> 2127
<212> AND
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă de nucleotide care codifică sC1
<400> 33
<210> 34
<211> 2601
<212> AND
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă de nucleotide care codifică C1
<400> 34
<210> 35
<211> 2148
<212> AND
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> secvenţă de nucleotide care codifică C1D7
<400> 35
<210> 36
<211> 724
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> Secvenţă trimer Env mozaic
<400> 36
<210> 37
<211> 28
<212> PRT
<213> Secvenţă artificială
<220>
<223> Reziduurile 655-682 din SECV ID NR:18
<400> 37

Claims (22)

1. Un vector cuprinzând un acid nucleic care codifică o proteină sintetică a anvelopei unui HIV, în care proteina sintetică a anvelopei unui HIV cuprinde sau constă din secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 18.
2. Vectorul conform revendicării 1, în care vectorul este un vector viral.
3. Vectorul conform revendicării 1 sau 2, în care vectorul este un vector adenoviral.
4. Vectorul conform revendicării 3, în care vectorul adenoviral este un vector adenoviral uman sau un vector adenoviral simian.
5. Vectorul conform revendicării 3, în care vectorul adenoviral este un vector al adenovirusului serotipului 26 (Ad26) uman.
6. Vectorul conform revendicării 1 sau 2, în care vectorul este un vector al virusului adeno-asociat, un vector al virusului variolei, un vector MVA, un vector al virusului enteric, un vector al virusului Encefalitei Ecvine Venezuelene, un vector al Virusului Semliki Forest, un vector al Virusului Mozaicului Tutunului sau un vector lentiviral.
7. Vectorul conform revendicării 1 sau 2, în care vectorul este un vector MVA.
8. Vectorul conform revendicării 1 sau 2, în care vectorul este o plasmidă, un cromozom artificial bacterian, un cromozom artificial de drojdie sau un vector bacteriofag.
9. Compoziţie cuprinzând o cantitate eficientă imunologic dintr-un vector conform oricăreia dintre revendicările 6 sau 7, şi un purtător, în care acidul nucleic care codifică proteina sintetică a anvelopei unui HIV este legată în mod operaţional la o secvenţă promotor.
10. Un produs al unei combinaţii de vaccin, care cuprinde: (i) o primă compoziţie cuprinzând o cantitate eficientă imunologic dintr-un vector Ad26 care codifică o proteină sintetică a anvelopei unui HIV având secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 18; şi (ii) o a doua compoziţie cuprinzând o cantitate eficientă imunologic dintr-un al doilea vector Ad26, care codifică o polipeptidă antigenică a unui HIV care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5, în care prima şi a doua compoziţie sunt prezente în aceeaşi compoziţie sau în compoziţii diferite.
11. Produsul unei combinaţii de vaccin conform revendicării 10, cuprinzând suplimentar cel puţin o compoziţie suplimentară cuprinzând: o cantitate eficientă imunologic dintr-un vector care codifică cel puţin o polipeptidă antigenică având secvenţa de aminoacizi selectată din grupul format din SECV ID NR: 1-4, 28 şi 29, în care prima compoziţie, a doua compoziţie şi compoziţia suplimentară sunt prezente în aceeaşi compoziţie sau în una sau mai multe compoziţii diferite.
12. Produsul unei combinaţii de vaccin conform revendicării 10 sau 11, cuprinzând suplimentar cel puţin o compoziţie suplimentară cuprinzând o cantitate eficientă imunologic de una sau mai multe polipeptide antigenice ale unui HIV izolate, în care prima compoziţie, a doua compoziţie, compoziţia suplimentară şi compoziţia suplimentară sunt prezente în aceeaşi compoziţie sau într-una sau mai multe compoziţii diferite.
13. Produsul unei combinaţii de vaccin conform revendicării 12, în care una sau mai multe polipeptide antigenice a unui HIV izolate includ una sau mai multe polipeptide antigenice a unui HIV selectate din grupul constând dintr-o proteină gp140 trimerică de cladă C a unui HIV stabilizată cuprinzând reziduurile 30-708 din secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 7 şi o proteină trimerică a Env unui HIV în mozaic care conţine reziduurile 30-724 din SECV ID NR: 36.
14. Kit cuprinzând un produs al unei combinaţii de vaccin conform oricăreia dintre revendicările 10-13.
15. Compoziţia conform revendicării 9 sau produsul unei combinaţii de vaccin conform oricăreia dintre revendicările 10-13, pentru utilizare în inducerea unui răspuns imun împotriva HIV la un subiect.
16. O compoziţie cuprinzând: (i) un prim vector al adenovirusului 26 (Ad26) care codifică o proteină sintetică a anvelopei unui HIV care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 18; (ii) un al doilea vector Ad26 care codifică o polipeptidă antigenică a unui HIV care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5; (iii) un al treilea vector Ad26 care codifică o polipeptidă antigenică a unui HIV care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 28; şi (iv) un al patrulea vector Ad26 care codifică o polipeptidă antigenică a unui HIV care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 29.
17. Compoziţia conform revendicării 16, în care primul, al doilea, al treilea şi al patrulea vector Ad26 sunt prezenţi într-un raport de particule virale de 1: 1: 1: 1.
18. O combinaţie de vaccin cuprinzând o compoziţie conform revendicării 16 şi una sau mai multe polipeptide antigenice ale unui HIV izolate.
19. Combinaţia de vaccin conform revendicării 18, în care una sau mai multe polipeptide antigenice a unui HIV izolate cuprind o proteină a anvelopei unui HIV, de exemplu o proteină gp140 trimerică de cladă C a unui HIV stabilizată şi/sau o proteină trimer a anvelopei în mozaic.
20. Combinaţia de vaccin conform revendicării 19, în care proteina trimerică gp140 de cladă C cuprinde reziduurile 30-708 din secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 7 şi/sau în care proteina trimerică a anvelopei în mozaic cuprinde reziduurile 30-724 din secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR. 36.
21. Un vector Ad26 cuprinzând un acid nucleic care codifică o proteină sintetică a anvelopei unui HIV care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 18, pentru utilizare în inducerea unui răspuns imun împotriva HIV la un subiect.
22. Un vaccin vector adenoviral care cuprinde: (i) un prim vector adenovirus 26 (Ad26) care codifică o proteină sintetică a anvelopei unui HIV care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 18; (ii) un al doilea vector Ad26 care codifică o polipeptidă antigenică a unui HIV care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 5; (iii) un al treilea vector Ad26 care codifică o polipeptidă antigenică a unui HIV care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 28; şi (iv) un al patrulea vector Ad26 care codifică o polipeptidă antigenică a unui HIV care cuprinde secvenţa de aminoacizi din SECV ID NR: 29, pentru utilizare într-o administrare de primă-administrare, şi o proteină izolată gp140 a Env unui HIV, de exemplu (a) proteină gp140 de cladă C cuprinzând reziduurile 30-708 din SECV ID NR.: 7, sau (b) proteină gp140 în mozaic cuprinzând reziduurile 30-724 din SECV ID NR: 36 sau o combinaţie de proteină gp140 de cladă C şi proteină gp140 în mozaic, pentru utilizare împreună cu vaccinul vector adenoviral într-o administrare de rapel, în care prima-administrare şi administrarea de rapel sunt pentru generarea unui răspuns imun împotriva HIV la un subiect.
MDE20200025T 2015-12-15 2016-12-15 Antigene, vectori, compoziții ale virusului imunodeficienței umane și metode de utilizare a acestora MD3584252T2 (ro)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP15200138 2015-12-15
EP16194124 2016-10-17

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MD3584252T2 true MD3584252T2 (ro) 2022-01-31

Family

ID=57737697

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MDE20200025T MD3584252T2 (ro) 2015-12-15 2016-12-15 Antigene, vectori, compoziții ale virusului imunodeficienței umane și metode de utilizare a acestora
MDE20181009T MD3390430T2 (ro) 2015-12-15 2016-12-15 Antigenele virusului imunodeficienței umane, vectori, compoziții și metode de utilizare ale acestora

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MDE20181009T MD3390430T2 (ro) 2015-12-15 2016-12-15 Antigenele virusului imunodeficienței umane, vectori, compoziții și metode de utilizare ale acestora

Country Status (30)

Country Link
US (3) US10369214B2 (ro)
EP (3) EP3390430B1 (ro)
JP (2) JP6510149B2 (ro)
KR (1) KR20180086207A (ro)
CN (2) CN108368157B (ro)
AU (2) AU2016369326B2 (ro)
BR (1) BR112018011122A2 (ro)
CA (1) CA3008542C (ro)
CY (2) CY1122705T1 (ro)
DK (2) DK3584252T3 (ro)
EA (1) EA038974B1 (ro)
ES (2) ES2898271T3 (ro)
HR (2) HRP20191902T1 (ro)
HU (2) HUE045993T2 (ro)
IL (1) IL259942B2 (ro)
LT (2) LT3584252T (ro)
MA (3) MA44059B1 (ro)
MD (2) MD3584252T2 (ro)
ME (1) ME03545B (ro)
MX (2) MX383507B (ro)
PH (1) PH12018501047A1 (ro)
PL (2) PL3390430T3 (ro)
PT (1) PT3390430T (ro)
RS (2) RS59447B1 (ro)
SG (2) SG11201804411TA (ro)
SI (2) SI3390430T1 (ro)
SM (2) SMT202100623T1 (ro)
TW (2) TWI707039B (ro)
WO (1) WO2017102929A1 (ro)
ZA (1) ZA201803978B (ro)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PH12017500449B1 (en) 2014-09-26 2022-07-22 Beth Israel Deaconess Medical Ct Inc Methods and compositions for inducing protective immunity against human immunodeficiency virus infection
MA40783A (fr) 2014-10-03 2017-08-08 Los Alamos Nat Security Llc Vaccins contre le vih comprenant un ou plusieurs antigènes episensus de population
EP3031923A1 (en) * 2014-12-11 2016-06-15 Institut Pasteur Lentiviral vector-based japanese encephalitis immunogenic composition
CN108368157B (zh) 2015-12-15 2022-04-15 扬森疫苗与预防公司 人类免疫缺陷病毒抗原、载体、组合物、及其使用方法
EA201892735A1 (ru) 2016-06-16 2019-05-31 Янссен Вэксинс Энд Превеншн Б.В. Состав вакцины против hiv
AU2017318689A1 (en) 2016-09-02 2019-04-11 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Methods for inducing an immune response against human immunodeficiency virus infection in subjects undergoing antiretroviral treatment
MA46230B1 (fr) 2016-09-15 2020-10-28 Janssen Vaccines & Prevention Bv Mutations de protéine d'enveloppe du vih stabilisant la forme trimère
US11229693B2 (en) * 2017-06-15 2022-01-25 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Poxvirus vectors encoding HIV antigens, and methods of use thereof
JP7253529B2 (ja) 2017-07-19 2023-04-06 ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェー 三量体安定化ｈｉｖエンベロープタンパク質変異
WO2019055888A1 (en) 2017-09-18 2019-03-21 Janssen Vaccines & Prevention B.V. METHODS OF INDUCING AN IMMUNE RESPONSE AGAINST HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS INFECTION IN SUBJECTS UNDER ANTIRETROVIRAL TREATMENT
CA3077340A1 (en) * 2017-11-17 2019-05-23 Grifols Diagnostic Solutions Inc. Novel mammalian expressed human immunodeficiency virus envelope protein antigens
US20220211835A1 (en) * 2019-04-17 2022-07-07 The Wistar Institute Replication Deficient Adenoviral Vectors for HIV Vaccine Applications
TW202110476A (zh) 2019-05-22 2021-03-16 荷蘭商傑森疫苗防護公司 於接受抗反轉錄病毒治療之個體中誘發抗人類免疫缺乏病毒感染之免疫反應的方法
IL292760A (en) 2019-11-07 2022-07-01 Janssen Vaccines Prevention B V Protein purification
AU2021270777A1 (en) 2020-05-12 2022-11-10 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Administration of homologous adenoviral vectors
WO2021249011A1 (en) * 2020-06-10 2021-12-16 Sichuan Clover Biopharmaceuticals, Inc. Hiv vaccine compositions, methods, and uses thereof
WO2022006095A2 (en) * 2020-06-29 2022-01-06 Duke University Mosaic hiv-1 envelopes to induce adcc responses
WO2022084333A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Hiv vaccine regimens
AU2022224967A1 (en) 2021-02-23 2023-07-27 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Trimer stabilizing hiv envelope protein mutation
US20230000973A1 (en) * 2021-06-25 2023-01-05 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Combinations of Vaccines and Neutralizing Antibodies for Treating Human Immunodeficiency Virus Infection in Subjects Undergoing Antiretroviral Treatment
WO2023242155A1 (en) 2022-06-14 2023-12-21 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Compositions and methods for the diagnosis of hiv infection

Family Cites Families (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4603112A (en) 1981-12-24 1986-07-29 Health Research, Incorporated Modified vaccinia virus
CA1341245C (en) 1988-01-12 2001-06-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Recombinant vaccinia virus mva
US5298416A (en) 1989-01-18 1994-03-29 British Technology Group Ltd. Attenuated polioviruses
US5505947A (en) 1994-05-27 1996-04-09 The University Of North Carolina At Chapel Hill Attenuating mutations in Venezuelan Equine Encephalitis virus
UA68327C2 (en) 1995-07-04 2004-08-16 Gsf Forschungszentrum Fur Unwe A recombinant mva virus, an isolated eukaryotic cell, infected with recombinant mva virus, a method for production in vitro of polypeptides with use of said cell, a method for production in vitro of virus parts (variants), vaccine containing the recombinant mva virus, a method for immunization of animals
US6479258B1 (en) 1995-12-07 2002-11-12 Diversa Corporation Non-stochastic generation of genetic vaccines
US5741492A (en) * 1996-01-23 1998-04-21 St. Jude Children's Research Hospital Preparation and use of viral vectors for mixed envelope protein vaccines against human immunodeficiency viruses
WO1998010087A1 (en) 1996-09-06 1998-03-12 Trustees Of The University Of Pennsylvania Chimpanzee adenovirus vectors
US5761893A (en) 1996-10-22 1998-06-09 Lofquist Welding, Inc. Crop saving attachment for the snouts of combines
ATE364707T1 (de) 1999-05-17 2007-07-15 Crucell Holland Bv Rekombinanter humaner adenovirus-serotyp 35
US6913922B1 (en) 1999-05-18 2005-07-05 Crucell Holland B.V. Serotype of adenovirus and uses thereof
US6710173B1 (en) 1999-06-25 2004-03-23 Progenics Pharmaceuticals, Inc. Stabilized viral envelope proteins and uses thereof
WO2001019958A2 (en) 1999-09-17 2001-03-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized soluble glycoprotein trimers
CN101676389A (zh) 2000-11-23 2010-03-24 巴法里安诺迪克有限公司 改良安卡拉痘苗病毒变体
CA2785699A1 (en) * 2001-07-05 2003-01-16 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Polynucleotides encoding antigenic hiv type c polypeptides, polypeptides and uses thereof
CA2452119C (en) * 2001-07-05 2013-10-15 Chiron Corporation Polynucleotides encoding antigenic hiv type b and/or type c polypeptides, polypeptides and uses thereof
CA2466413C (en) 2001-12-04 2014-11-04 Bavarian Nordic A/S Flavivirus ns1 subunit vaccine
CN100497639C (zh) 2002-04-25 2009-06-10 克鲁塞尔荷兰公司 生产腺病毒载体的手段和方法
EP1497440B1 (en) 2002-04-25 2008-08-20 Crucell Holland B.V. Stable adenoviral vectors and methods for propagation thereof
AU2003291402A1 (en) 2002-11-07 2004-06-03 Beth Israel Deaconess Medical Center MIP-1Alpha AND GM-CSF AS ADJUVANTS OF IMMUNE RESPONSE
CA2505583C (en) 2002-12-03 2014-07-15 University Of Massachusetts Polyvalent, primary hiv-1 glycoprotein dna vaccines and vaccination methods
WO2004087201A2 (en) 2003-03-28 2004-10-14 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Mva virus expressing modified hiv envelope, gag, and pol genes
WO2005027840A2 (en) 2003-09-15 2005-03-31 Chiron Corporation Combination approaches for generating immune responses
WO2005052119A2 (en) 2003-11-19 2005-06-09 Beth Israel Deaconess Medical Center Adjuvants of immune response
EP1711518B1 (en) 2004-01-23 2009-11-18 Istituto di Richerche di Biologia Molecolare P. Angeletti S.p.A. Chimpanzee adenovirus vaccine carriers
EP2567967A3 (en) * 2004-04-12 2013-08-21 GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Method of using adenoviral vectors to induce an immune response
WO2006002079A2 (en) 2004-06-15 2006-01-05 Progenics Pharmaceuticals, Inc. Hiv-1 neutralizing antibodies elicited by trimeric hiv-1 envelope glycoprotein complex
EP2397490B1 (en) * 2004-07-16 2013-09-04 THE UNITED STATES OF AMERICA, represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Vaccine constructs and combinations of vaccines designed to improve the breadth of the immune response to diverse strains and clades of HIV
AU2005279799A1 (en) * 2004-08-27 2006-03-09 Emory University Recombinant MVA viruses expressing Clade A/G, Clade B and Clade C modified HIV ENV, GAG and POL genes
CA2583843C (en) 2004-10-13 2010-09-21 Crucell Holland B.V. Improved adenoviral vectors and uses thereof
CN101588813A (zh) * 2005-04-12 2009-11-25 杜克大学 诱导人类免疫缺陷病毒的中和抗体的方法
CA2656741A1 (en) 2005-07-06 2007-01-11 University Of Maryland Biotechnology Institute Constrained hiv envelope-based immunogen that simultaneously presents receptor and coreceptor binding sites
EP1917040A4 (en) 2005-08-23 2012-12-12 Univ California POLYVALENT VACCINE
WO2007104792A2 (en) 2006-03-16 2007-09-20 Crucell Holland B.V. Recombinant adenoviruses based on serotype 26 and 48, and use thereof
EP2040747A4 (en) 2006-06-19 2010-08-25 Progenics Pharm Inc SOLUBLE STABILIZED TRIMERS HIV CREAM PROTEINS AND ITS USE
EP2073840A4 (en) 2006-10-23 2010-10-27 Progenics Pharm Inc MODIFIED GP140-HOLL-POLYPEPTIDES OF HIV-1 ISOLATES, COMPOSITIONS, STABILIZED TRIMERS, COMPLEXES, AND ITS USES
US20080279879A1 (en) 2006-11-17 2008-11-13 New York University INDUCTION OF BROADLY REACTIVE NEUTRALIZING ANTIBODIES BY FOCUSING THE IMMUNE RESPONSE ON V3 EPITOPES OF THE HIV-1 gp120 ENVELOPE
EP2998316B1 (en) 2007-03-02 2019-06-12 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Novel method and compositions
SMT202000101T1 (it) 2008-10-10 2020-03-13 Childrens Medical Center Vaccino con trimero di env di hiv-1 stabilizzato biochimicamente
US9017691B2 (en) 2008-11-18 2015-04-28 Beth Israel Deaconess Medical Center Antiviral vaccines with improved cellular immunogenicity
WO2010085984A1 (en) 2009-02-02 2010-08-05 Okairos Ag Simian adenovirus nucleic acid- and amino acid-sequences, vectors containing same, and uses thereof
SG172935A1 (en) 2009-02-02 2011-08-29 Okairos Ag Simian adenovirus nucleic acid- and amino acid-sequences, vectors containing same, and uses thereof
WO2010096561A1 (en) 2009-02-18 2010-08-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Synthetic hiv/siv gag proteins and uses thereof
CN102711794B (zh) 2010-01-04 2015-11-25 Kj生物科学有限公司 用于疫苗和诊断学的Dps融合蛋白
CA2786333C (en) 2010-01-28 2018-03-20 Bavarian Nordic A/S Vaccinia virus mutants containing the major genomic deletions of mva
WO2012030904A2 (en) 2010-08-31 2012-03-08 Theraclone Sciences, Inc. Human immunodeficiency virus (hiv)-neutralizing antibodies
US9701718B2 (en) 2010-12-14 2017-07-11 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Adenovirus serotype 26 and serotype 35 filovirus vaccines
CN103945864A (zh) * 2011-04-25 2014-07-23 先进生物学实验室股份有限公司 截短的hiv包膜蛋白(env)、其相关方法和组合物
WO2013036791A2 (en) 2011-09-09 2013-03-14 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Modified adenoviral vectors and methods of treatment using same
US20130189754A1 (en) 2011-09-12 2013-07-25 International Aids Vaccine Initiative Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies
WO2013040766A1 (zh) * 2011-09-21 2013-03-28 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心 可诱导针对hiv的广谱免疫应答的方法和疫苗
WO2013055908A1 (en) 2011-10-12 2013-04-18 The Scripps Research Institute An hiv-1 gp120 mini v3 loop and uses thereof
WO2014047261A1 (en) 2012-09-19 2014-03-27 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Viruses associated with immunodeficiency and enteropathy and methods using same
DK2920313T3 (da) 2012-11-16 2019-09-02 Beth Israel Deaconess Medical Ct Inc Rekombinante adenovira og anvendelse deraf
EA030983B1 (ru) 2013-01-07 2018-10-31 Бет Изрейэл Диконисс Медикал Сентер, Инк. ВАКЦИНЫ, СОДЕРЖАЩИЕ СТАБИЛИЗИРОВАННЫЕ ТРИМЕРЫ ОБОЛОЧКИ (Env) ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА (ВИЧ), И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
WO2014124301A1 (en) 2013-02-07 2014-08-14 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Self-assembling protein nanostructures
US9624510B2 (en) * 2013-03-01 2017-04-18 The Wistar Institute Adenoviral vectors comprising partial deletions of E3
EP3052132B1 (en) 2013-09-30 2020-07-29 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Antibody therapies for human immunodeficiency virus (hiv)
EP3052518B1 (en) * 2013-10-04 2020-01-08 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Stabilized human immunodeficiency virus (hiv) clade c envelope (env) trimer vaccines and methods of using same
CA2941116A1 (en) * 2014-02-28 2015-09-03 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Replicating recombinant adenovirus vectors, compositions, and methods of use thereof
WO2016037154A1 (en) 2014-09-04 2016-03-10 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Recombinant hiv-1 envelope proteins and their use
PH12017500449B1 (en) 2014-09-26 2022-07-22 Beth Israel Deaconess Medical Ct Inc Methods and compositions for inducing protective immunity against human immunodeficiency virus infection
US9630994B2 (en) 2014-11-03 2017-04-25 University Of Washington Polypeptides for use in self-assembling protein nanostructures
JP6887955B2 (ja) * 2015-03-18 2021-06-16 ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェーＪａｎｓｓｅｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ＆ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ Ｂ．Ｖ． 組換え体発現系のアッセイ
CN108368157B (zh) 2015-12-15 2022-04-15 扬森疫苗与预防公司 人类免疫缺陷病毒抗原、载体、组合物、及其使用方法
EA201892735A1 (ru) 2016-06-16 2019-05-31 Янссен Вэксинс Энд Превеншн Б.В. Состав вакцины против hiv
AU2017318689A1 (en) 2016-09-02 2019-04-11 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Methods for inducing an immune response against human immunodeficiency virus infection in subjects undergoing antiretroviral treatment
MA46230B1 (fr) 2016-09-15 2020-10-28 Janssen Vaccines & Prevention Bv Mutations de protéine d'enveloppe du vih stabilisant la forme trimère
DE102018124348A1 (de) 2018-10-02 2020-04-02 Haver & Boecker Ohg Füllkasten und Verfahren zum Füllen von Gebinden

Also Published As

Publication number Publication date
IL259942A (en) 2018-07-31
US11896663B2 (en) 2024-02-13
EP3964569A1 (en) 2022-03-09
SG10202109457RA (en) 2021-10-28
HRP20211566T1 (hr) 2022-03-04
US10369214B2 (en) 2019-08-06
US20210220468A1 (en) 2021-07-22
PT3390430T (pt) 2019-11-20
DK3390430T3 (da) 2019-11-18
KR20180086207A (ko) 2018-07-30
LT3584252T (lt) 2021-09-27
TW201734210A (zh) 2017-10-01
MA55825A (fr) 2022-03-09
TW202106701A (zh) 2021-02-16
CN108368157B (zh) 2022-04-15
RS62360B1 (sr) 2021-10-29
SMT201900629T1 (it) 2020-01-14
CN108368157A (zh) 2018-08-03
EA201891415A8 (ru) 2019-10-31
HUE055916T2 (hu) 2021-12-28
TWI707039B (zh) 2020-10-11
PL3390430T3 (pl) 2020-03-31
MA47522B1 (fr) 2021-11-30
CY1122705T1 (el) 2021-03-12
EP3584252A1 (en) 2019-12-25
JP2019146574A (ja) 2019-09-05
CA3008542A1 (en) 2017-06-22
AU2019203468B2 (en) 2020-05-21
EP3390430A1 (en) 2018-10-24
BR112018011122A2 (pt) 2018-11-21
US20170165355A1 (en) 2017-06-15
AU2016369326A1 (en) 2018-06-07
ES2753854T3 (es) 2020-04-14
MX2018007198A (es) 2018-08-01
US20190321462A1 (en) 2019-10-24
WO2017102929A1 (en) 2017-06-22
AU2019203468A1 (en) 2019-06-06
TWI792091B (zh) 2023-02-11
LT3390430T (lt) 2019-11-25
PL3584252T3 (pl) 2022-01-10
SI3390430T1 (sl) 2019-12-31
IL259942B (en) 2022-12-01
SI3584252T1 (sl) 2021-11-30
IL259942B2 (en) 2023-04-01
PH12018501047A1 (en) 2018-12-17
MD3390430T2 (ro) 2019-12-31
US10973907B2 (en) 2021-04-13
HRP20191902T1 (hr) 2020-01-24
MA47522A (fr) 2021-05-05
JP2019505188A (ja) 2019-02-28
ME03545B (me) 2020-07-20
MX383507B (es) 2025-03-14
ES2898271T3 (es) 2022-03-04
EP3390430B1 (en) 2019-08-28
RS59447B1 (sr) 2019-11-29
MX2021006931A (es) 2021-07-07
SG11201804411TA (en) 2018-06-28
SMT202100623T1 (it) 2022-01-10
CA3008542C (en) 2020-06-02
EA201891415A1 (ru) 2018-11-30
AU2016369326B2 (en) 2019-02-21
ZA201803978B (en) 2021-05-26
JP6959289B2 (ja) 2021-11-02
DK3584252T3 (da) 2021-11-15
JP6510149B2 (ja) 2019-05-08
MA44059B1 (fr) 2019-11-29
MA44059A (fr) 2018-10-24
CN114686495A (zh) 2022-07-01
CY1125387T1 (el) 2023-03-24
EP3584252B1 (en) 2021-08-25
EA038974B1 (ru) 2021-11-17
HUE045993T2 (hu) 2020-01-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11896663B2 (en) Immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) mutant envelope proteins
US11723970B2 (en) Poxvirus vectors encoding HIV antigens, and methods of use thereof
HK40069171A (en) Human immunodeficiency virus antigens, vectors, compositions, and methods of use thereof
HK40014895B (en) Human immunodeficiency virus antigens, vectors, compositions, and methods of use thereof
HK40014895A (en) Human immunodeficiency virus antigens, vectors, compositions, and methods of use thereof
HK1254876B (en) Human immunodeficiency virus antigens, vectors, compositions, and methods of use thereof
HK1254876A1 (en) Human immunodeficiency virus antigens, vectors, compositions, and methods of use thereof
OA20252A (en) Human immunodeficiency virus antigens, vectors, compositions, and methods of use thereof.
HK40025479B (en) Poxvirus vectors encoding hiv antigens, and methods of use thereof
HK40025479A (en) Poxvirus vectors encoding hiv antigens, and methods of use thereof

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent for invention definitely lapsed due to non-payment of fees