LU87102A1

LU87102A1 - Combinaison iyophilisee ou precipitee de zwitterbn de cephalosporine et de sel

Info

Publication number: LU87102A1
Application number: LU87102A
Authority: LU
Original assignee: Bristol Myers Co
Priority date: 1987-01-09
Filing date: 1988-01-08
Publication date: 1988-08-23
Also published as: JP2568226B2; BE1002114A3; FI875122A; AU8085687A; GB2199746A; FI875122A0; CY1679A; PT86157A; YU2388A; GR871860B; IE872970L; IT8819013A0; HU199686B; GB2199746B; CS265249B2; KR950010154B1; HK5593A; DE3740588A1; CH676202A5; AU606361B2

Description

! 88/B 52 721 . * *

8' ΖΓ~Λ ~JT Q GRAND-DUCHÉ DE LUXEMBOURG

/ » y Monsieur le Ministre du 8 janvier 1988 de l’Économie et des Classes Moyennes _ Service de la Propriété Intellectuelle

Titre délivré---- | ||S LUXEMBOURG

5

Demande de Brevet d’invention -..........................-........................-.........-..............-............................-..........................-...............-..........------------------------------------- < 1) I. Requête

La société dite: BRISTOL-MYERS COMPANY, 345 Park Avenue, ( 2) new-york, N.Y. 10154 (EtatsUnis d'Amérique), représentée par Monsieur Jacques de Muyser, .agissant en -qualité -de ...........mandataire.................................................................... ..............................................................................................- ................................................................ ( 3) déposent)ce huit janvier 1900 quatre-vingt huit .............................. ...... ( 4) à_____________-1..5__________heures, au Ministère de l’Économie et des Classes Moyennes, à Luxembourg: 1. la présente requête pour l’obtention d’un brevet d’invention concernant: _ "Combinaison -lyophilisée -QU--préclpltée de -zwitterbn------------— ( 5) __________________de......céphalosporine et de sel."______________________________________ 2. la description en langue française _____________________de l’invention en trois exemplaires; 3...../.....................................................planches de dessin, en trois exemplaires; 4. la quittance des taxes versées au Bureau de l’Enregistrement à Luxembourg, le .7 janvier 1988 ; 5. la délégation de pouvoir, datée de .Hew....Yoxk ........................ le 4—janvier 1988 î 6. le document d’ayant cause (autorisation); déclarent) en assumant la responsabilité de cette déclaration, que l’(es) inventeur(s) est (sont): ( 6) ............pas......à......mentionner ...( voir-annexe)............................................................................................................................................................

revendique(nt) pour la susdite demande de brevet la priorité d’une (des) demande(s) de ( 7) ............brevet...................................................................................................................déposée(s) en (8) aux Etats-Unis d'Amérique le(9) 9.......janvier.......1987..........................................................................................................................._........................................................................... ......................................

sous le N° (10).......001.945..................................................................................................................................................................................................................... .. ....

au nom de (11) S inventeurs...............................................................................................................................................................................

élit(élisent) domicile pour lui (elle) et, si désigné, pour son mandataire, à Luxembourg .....................................

...........................3.5......boulevard.....Royal....................................................................................................................................................................................................... (12) sollicite(nt) la délivrance d’un brevet d’invention pour l’objet décrit et représenté dans les annexes susmentionnées, avec ajojjmenaent de cette délivrance à ................6...............................................................................................................................................................mois. (13)

Le-rieposant / mandataire:............................................................................................................................................................................................. .............. (14) r /1()() fi f; 0 f f À f I h* Procès-verbal de Dépôt

La susditp den ande de brevet d’invention a été déposée au Ministère de l’Économie et des Classes Moyennes, Service delâJ3ropriété Intellectuelle à Luxembourg, en date du: g j anviâr 1988

Pr. le Ministre de l’Économie et des Classes Moyennes, , à.........1.5......................heures / \ p. d.

\ j Le chef du service de la propriété intellectuelle, ufr I // A 68007__ / · t. ’ ^ ¥ .. EXPLICATIONS RELATIVES AU FORMULAIRE DE DÉPÔT.

(1) s'il y a lieu "Demande de certificat d'addition au brevet principal, à la demande de brevet principal No.........*. .du............(2i inscrire les nom. prénom, profession f' , # e*, adresse du demandeur, lorsque celui-ci est un particulier ou les dénomination sociale, forme juridique, adresse du siège social, lorsque le demandeur est une personne morale - (3 j inscrire f /1 j / » les nom. orénom. adresse du mandataire agréé. conseil en propriété industrielle, muni d’un pouvoir spécial, s’il y a lieu: "représenté oar............agissant en qualité de mandataire** / 88/B 52 721

REVENDICATION DE LA PRIORITE

de la demande de brevet / du modèle d’utilité

3¾ AUX: ETATS UNIS D'AMERIQUE

Du 9 JANVIER 1987__ (No. 001.945) Mémoire Descriptif déposé à l'appui d'une demande de

BREVET D’INVENTION

au

Luxembourg

au nom de : BRISTOL-MYERS COMPANY

NEW-YORK, N.Y. 10154 (Etats Unis d'Amérique) pour : "Combinaison lyophilisée ou précipitée de zwitterion de céphalosporine et de sel." -Λ

Combinaison lyophilisée ou précipitée de zwitterion de céphalosporine et de sel

Domaine technique

La présente invention concerne des compositions de céphalosporine semi-synthétique stables aux températures élevées.

Arrière-plan de l'invention

Le brevet EUA n° 4.406.899 (Aburaki et al.) décrit le 7-[cc-(2-aminothiazol-4-yl)-<*-(Z)-méthoxyimi-noacétamido]-3-[(1-méthyl-l-pyrrolidinio)-méthyl]-3-céphème-4-carboxylate sous la forme du zwitterion et mentionne des sels d'addition d'acides correspondants et révèle que la forme zwitterionique a un spectre d'activité plus large que la ceftazidime et la céfo-taxime. Le zwitterion y est appelé 7-[(Z)-2-méthoxy-imino-2-(2-aminothiazol-4-yl)acétamido]—3 — [(1-méthyl-1-pyrrolidinium)méthyl]-3-céphème-4-carboxylate.

Kessler et al. mentionnent le sulfate dans "Comparison of a New Cephalosporin, BMY-28142, with Other Broad-Spectrum jâ-Lactam Antibiotics", Antimicro-bial Agents and Chemotherapy, volume 27, n° 2, pages 207-216, février 1985.

La demande de brevet EUA n° 762.235 du 5 août 1985 (Kaplan et al.) décrit différents sels d'addition d'acides.

Le zwitterion et ses sels d'addition d'acides sont stables pendant environ 8 à 16 heures sous forme de compositions injectables en solution aqueuse à 24°C. Le zwitterion, même à l'état de poudre sèche, est instable à la température ambiante et perd 30% ou davantage de son activité par conservation à des températures élevées (par exemple 45eC ou plus) pendant à peine une semaine et doit être conservé à -30eC pour avoir une stabilité adéquate, de sorte qu'il ne peut être considéré comme propre a l'usage dans les conditions / 2 de réfrigération normales, c 'est-à-dire celles existant dans les pharmacies.

Les sels d'addition d'acides précités ont une meilleure stabilité à la température sous forme de poudre sèche que le zwitterion, mais sont trop acides pour une administration intramusculaire ou intraveineuse et doivent être mis en composition avec des bases et/ou agents tampons à un pH de 3,5-6,5 pour une telle utilisation.

Aperçu de l'invention

La Demanderesse a découvert que le solide amorphe formé par lyophilisation ou précipitation par un cosolvant d'une solution aqueuse du zwitterion, c'est-à-dire du zwitterion 7-[oc-( 2-aminothiazol-4-yl ) -a-(z)-méthoxyiminoacétamido]-3-[(1-méthyl-l-pyrroli-dinio)-méthyl]-3-céphème-4-carboxylate, et d'un sel ou d'un mélange de deux ou plusieurs sels choisis dans une classe particulière conserve l'activité antibiotique à large spectre du zwitterion, mais manifeste une stabilité améliorée à la température sous forme de poudre sèche et après dilution à la concentration injectable atteint un pH d'environ 3,5 à environ 7, de sorte qu'il se prête à l'injection intramusculaire ou intraveineuse sans utilisation d'agents tampons ou de bases.

Les sels à utiliser suivant l’invention sont ceux dont le cation est choisi entre sodium, lithium, calcium et magnésium, et dont 1'anion est choisi entre chlorure, bromure et iodure. Les sels sont choisis pour donner un produit amorphe solide dont la stabilité à la température est telle qu'il perd moins d'environ 15-20% de son activité par conservation sous forme de poudre sèche à 45°C pendant 2 à 4 semaines (1 à 2 semaines à 56eC), comme déterminé par dosage HPLC.

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Le rapport molaire du zwitterion au sel dans la solution soumise à la lyophilisation ou à la coprécipitation par un cosolvant s'échelonne d'environ 0,5:1 à environ 2:1.

Les compositions de l'invention comprennent la forme exempte de solvant, de même que la forme solvatée.

Une composition préférée comprend un solide amorphe formé à partir du zwitterion et de chlorure de sodium. Une composition davantage préférée comprend le solide ci-dessus dans lequel le zwitterion et le chlorure de sodium se trouvent dans un rapport molaire de 1:1. Une composition encore davantage préférée comprend la composition décrite ci-dessus d'un rapport molaire de 1:1 formée par lyophilisation d'une solution aqueuse du zwitterion et de chlorure de sodium.

Une autre composition préférée comprend un solide amorphe formé à partir du zwitterion et de chlorure de calcium. Des compositions davantage préférées comprennent le solide ci-dessus dans lequel le zwitterion et le chlorure de calcium se trouvent dans un rapport molaire de 1:0,5 ou 1:1. Des compositions encore davantage préférées comprennent les compositions décrites ci-dessus d'un rapport molaire de 1:0,5 et 1:1 formées par lyophilisation d'une solution aqueuse du zwitterion et de chlorure de calcium.

D'autres compositions préférées comprennent les solides amorphes formés à partir du zwitterion et d'un mélange de chlorure de sodium et de chlorure de calcium.

Une composition hautement préférée comprend un solide amorphe formé du zwitterion, de chlorure de calcium et de chlorure de sodium dans lequel le zwitterion, le chlorure de calcium et le chlorure de sodium se trouvent dans un rapport molaire de (a) 1:0,5:0,5 4 $ * ' ou (b) 1:0,1 - 0,2:0,8-1,0. Le plus avantageusement, un tel solide est formé par lyophilisation d'une solution aqueuse du zwitterion, de chlorure de calcium et de chlorure de sodium.

Une composition hautement préférée comprend un solide amorphe formé, de préférence par lyophilisation, à partir du zwitterion, de chlorure de calcium et de chlorure de sodium, dans lequel le zwitterion, le chlorure de calcium et le chlorure de sodium se trouvent dans un rapport molaire de 1:0,2:1. Ce solide se révèle manifester la meilleure combinaison de stabilité à l'état de poudre sèche et en solution aqueuse et d'acceptabilité pharmaceutique. En particulier, il a une excellente stabilité à l'état de poudre sèche à la température ambiante et aux températures élevées et présente aussi des taux de calcium médicalement acceptables pour l'être humain.

Une autre composition hautement préférée comprend un solide amorphe formé, de préférence par lyophilisation, à partir du zwitterion, de chlorure de calcium et de chlorure de sodium, dans lequel le zwitterion, le chlorure de calcium et le chlorure de sodium se trouvent dans un rapport molaire de 1:0,5:0,5. Ce solide se révèle manifester une excellente stabilité tant à l'état de poudre sèche qu'après redissolution.

Le terme "précipitation par un cosolvant" est utilisé ici pour désigner l'addition d'un non solvant à une solution aqueuse du zwitterion et du sel pour les faire coprécipiter.

Le terme "poudre sèche" est utilisé ici pour désigner une teneur en humidité inférieure à 5% en poids.

Le terme "stable à la température" utilisé dans la description des compositions de l'invention indique une stabilité à la température telle que la 5 perte d'activité est de .moins d'environ 15 a 20% par conservation sous forme de poudre sèche à 45°C pendant 2-4 semaines (1-2 semaines à 55°C), comme déterminé par dosage HPLC.

Le terme "sans utilisation d'agents tampons ou de bases" signifie que le solide est redissous dans de l'eau et/ou de la solution physiologique salée stériles sans autres ajustements du pH ambiant à l'aide d'une substance propre à ajuster le pH.

Description détaillée de l'invention

Le zwitterion utilisé pour former les compositions de l'invention répond à la formule de structure suivante : CH3

Le zwitterion est préparé aisément comme décrit dans le brevet EUA n° 4.406.899 (Aburaki et al.).

Des sels convenant pour former les compositions de l'invention sont notamment, par exemple, le chlorure de sodium, le bromure de sodium, l'iodure de sodium, le chlorure de lithium, l'iodure de lithium, le chlorure de calcium, le bromure de calcium, l'iodure de calcium et le chlorure de magnésium.

Le rapport molaire du zwitterion au sel s'échelonne de préférence d'environ 1:1 à environ 2:1 et est plus avantageusement d'environ 1:1.

Après le dépôt de la demande de brevet EUA n° 810.160 le 18 décembre 1985, la Demanderesse a découvert que des compositions appropriées pouvaient être 6 formées à partir de mélanges des sels indiqués,de même qu'à partir des sels eux-mêmes pris isolément. Les propriétés de stabilité de ces compositions se situent entre les stabilités des compositions formées avec les sels distincts utilisés dans le mélange. Ainsi, par exemple, on peut préparer à partir du zwitterion, de chlorure de calcium et de chlorure de sodium un solide qui a des propriétés de stabilité intermédiaires entre celles des compositions zwitterion:NaCl et zwitterion: CaCl2* L'utilisation d'un mélange peut être avantageuse si on désire en substance obtenir les propriétés de stabilité favorables d'un sel, mais pour des raisons physiologiques, réduire la quantité de ce sel dans la forme dosée. Pour préparer des compositions à partir de deux ou plusieurs sels, on utilise simplement les sels en des quantités telles que le rapport molaire total se situe dans l'intervalle indiqué ci-dessus, c'est-à-dire zwitterion: sel = 0,5:1-2:1.

Comme déjà indiqué, une composition préférée de l'invention est formée par lyophilisation d'une solution aqueuse de ce zwitterion et de chlorure de sodium dans un rapport molaire de 1:1. Cette composition a un spectre IR sans différence significative par rapport au zwitterion. Toutefois, elle a un point de décomposition à l'analyse thermique différentielle avec un dégagement de chaleur à environ 197,4eC au lieu de 173,84eC pour le zwitterion, ce qui indique qu'elle comprend un composé différent du zwitterion. Sans être lié par une théorie à propos de ce qui est en fait présent, l'hypothèse avancée est que ce qui est présent est un complexe où Na+ neutralise le COO du zwitterion et Cl~ est neutralisé par le N+ du zwitterion, c'est-à-dire un composé de la formule: 7 Η2ΝΛ^ ^0^3 COONa CH3

Au vu de cette considération théorique, la composition de l'invention formée à partir d'une solution du zwit-terion et de chlorure de sodium dans un rapport molaire de 1:1 est parfois appelée ci-après le complexe zwit-terion:NaCl 1:1, bien que l'existence d'un complexe n'ait pas été prouvée sans équivoque.

Le complexe zwitterion:NaCl 1:1 est très phar-maceutiquement acceptable. Il a une activité antibiotique à large spectre sensiblement égale à celle du zwitterion. Il a une stabilité satisfaisante en solution pendant au moins 24 heures à 25°C (à une concentration de 250 mg/ml de zwitterion dans de l'eau stérile, il y a moins de 10% de perte d'activité,comme déterminé par HPLC), et au contraire du zwitterion, une stabilité satisfaisante à température élevée sous forme de poudre sèche (environ 10% de perte à la conservation à 45°C pendant 4 semaines, comme déterminé par HPLC) et une stabilité exceptionnelle sous forme de poudre sèche aux températures normales de réfrigération (pas de perte en 6 mois à 4eC). Tout au long d'une durée de 24 heures après qu'elle a été redissoute pour donner une composition injectable (c'est-à-dire après redissolution à la concentration injectable), la composition injectable conserve un pH satisfaisant, c'est-à-dire s'échelonnant d'environ 4,2 à environ 6,2 sans utilisation d'agents tampons ou de bases et est quelque peu moins toxique que le zwitterion.

8

La préparation des compositions de l'invention est décrite ci-après.

Comme indiqué précédemment, un procédé pour préparer les compositions de l'invention est la lyophilisation, dans des conditions aseptiques, d1 une solution aqueuse du zwitterion et de sel. Ceci est exécuté aisément, par exemple, en dissolvant le zwitterion dans de l'eau stérile pour atteindre une concentration s'échelonnant d'environ 100 mg/ml à environ 400 mg/ml, en introduisant ensuite la solution aqueuse du zwitterion dans une cuve munie d'un agitateur et en l'y agitant, en ajoutant ensuite le sel ou le mélange de sels en la quantité du rapport molaire choisi et en poursuivant l'agitation jusqu'à dissolution complète, par exemple pendant environ 15 minutes à environ 1 heure, en filtrant ensuite, par exemple au moyen d'un appareil à filtrer stérilisé, puis en introduisant la solution filtrée dans des ampoules et en disposant celles-ci dans des plateaux de lyophilisation qui sont introduits dans un lyophiliseur, en congelant ensuite de -30°C à -40eC pendant environ 4 heures à environ 16 heures, en établissant ensuite un vide de 10 à 100 millitorrs et en réglant la température de -10°C à -20°C pour 15 à 20 heures et ensuite de 20 à 30eC pour 40 à 60 heures et en condensant le produit sublimé dans un condenseur, par exemple de -40°C à -60°C.

Comme indiqué précédemment, l'autre procédé pour préparer les compositions de l'invention est la coprécipitation par un cosolvant d'une solution aqueuse du zwitterion et du sel. Ceci est exécuté aisément dans des conditions aseptiques, par exemple en formant une solution aqueuse comme indiqué ci-dessus à propos du procédé par lyophilisation, mais, au lieu de lyophiliser, en ajoutant un non solvant pour faire précipiter 9 le complexe zwitterion-sel, puis en séparant le précipité et en le séchant. Normalement, il est indifférent d'ajouter la solution du zwitterion et du sel au non solvant ou d'ajouter le non solvant à la solution du zwitterion et du sel. Le précipité est aisément séparé, par exemple par filtration à l'aide d'un appareil à filtrer sous vide stérilisé. Le séchage est exécuté aisément par séchage sous vide poussé, par exemple de 40 à 60°C. Le non solvant est de préférence l'acétone ou 1 'isopropanol, mais peut être tout non solvant pour le zwitterion et le sel qui est pharmaceutiquement sûr et qui ne réagit avec aucun de ceux-ci.

Les compositions de l'invention sont converties en compositions injectables par dilution avec de l'eau et/ou de la solution physiologique salée stériles donnant une composition d'une concentration sur base de l'activité du zwitterion s'échelonnant d'environ 1 mg/ml à environ 400 mg/ml, comme déterminé par dosage HPLC, et de préférence environ 2,5 mg/ml à environ 250 mg/ml, comme déterminé par dosage HPLC. De préférence, la dilution jusqu'à 250 mg/ml est exécutée au moyen d'eau stérile pour injections, pharmacopée EUA et si une dilution plus poussée est nécessaire, au moyen de chlorure de sodium à 0,9% pour injections, pharmacopée EUA. Pour l'administration intramusculaire ou intraveineuse à l'être humain adulte, une dose totale d'environ 750 à environ 3000 mg par jour en doses réparties est normalement suffisante.

Les compositions de l'invention sont de préférence expédiées et conservées sous forme sèche dans les conditions normales de la réfrigération (par exemple à 4°C) dans lesquelles elles doivent rester actives pour plus de 90% pendant au moins 1-2 ans. Elles sont aisément converties en compositions injectables par redissolution extemporanée, par exemple par l'infirmière 10 ou le médecin.

L'invention est illustrée par les exemples d'application ci-après.

EXEMPLE I

Synthèse et essai du complexe zwitterion:NaCl 1:1

On introduit 800 ml de solution aqueuse contenant 250 g de zwitterion dans un récipient muni d'un agitateur. Tandis que l'agitateur fonctionne à la vitesse moyenne, on ajoute 30,41 g de NaCl pour établir un rapport molaire zwitterion:NaCl de 1:1.

On ajoute de l'eau pour injections,pharmacopée EUA en quantité suffisante pour faire 1 litre. On poursuit l'agitation de la solution ensuite pendant 15 minutes et par après par intervalles de 5 à 10 minutes jusqu'à ce que l'échantillonnage entre les intervalles d'agitation ne révèle aucune quantité significative de particules non dissoutes. On transfère la solution résultante dans un autoclave en acier inoxydable et on le fait passer de celui-ci, sous pression d'azote, par un appareil de stérilisation par filtration muni d'un préfiltre et d'un filtre stérilisant, dans un récipient stérilisé stérile. On introduit ensuite des aliquotes de 4 ml (1 g d'activité du zwitterion) aseptiquement dans des ampoules en verre de 10 ml. Après remplissage, on obture sans serrage les fioles au moyen de bouchons pour lyophilisation. On dispose les fioles ensuite sur des plateaux de lyophilisation qu'on introduit dans un lyophiliseur où on congèle le produit pendant 4 heures de -30eC à -40°C. On règle ensuite le condenseur du lyophiliseur à -60eC + 3eC et on arrête l'unité de congélation. Lorsque la température du condenseur atteint -50°C, on fait fonctionner la pompe à vide. Lorsque le vide atteint 200^tun, on règle la température des plateaux à -13°C+3°C et on maintient cette température pendant 16-18 heures. On règle ensuite la température des 11 plateaux à +25°C et on maintient pendant 48 heures une température de 25°C+2°C. On arrête ensuite le lyophiliseur et on en retire les ampoules. Le produit est un solide amorphe qui se caractérise comme un complexe zwitterion:NaCl 1:1.

Analyse pour ci9H24N6°5S2C^a : calculé, % C H N S H2O (KF) Na (cendres Cl sulfatées) 42,34; 4,49; 15,59; 11,90; néant; 4,27; 6,58 trouvé (corrigé pour f^O) , % C H N s H2° Na (cendres Cl sulfatées) 41,96; 4,57; 14,73; 12,28; 1,80; 3,15; 6,85

On n'observe aucune différence significative du spectre IR entre le produit de l'invention et le zwitterion. Toutefois, le point de décomposition à l'analyse thermique différentielle se traduit par un pic exothermique à 197,4°C notablement différent de celui du zwitterion (173,84°C), ce qui indique que le produit de l'invention est un composé différent du zwitterion.

On obtient essentiellement le même produit en ajoutant 10-20 volumes d'isopropanol dans le récipient stérilisé propre contenant la solution aqueuse du zwitterion et de chlorure de sodium pour former un précipité, en séparant le précipité par filtration sous vide, en lavant le précipité à 11isopropanol et en le séchant sous vide poussé pour obtenir le produit sous forme sensiblement sèche.

Pour évaluer l'activité à large spectre du produit de l'invention, on détermine les concentrations minimales inhibitrices (CMI) du produit de l'invention et du zwitterion suivant le procédé de dilution en série de raison deux dans de 1'agar de Mueller-Hinton, ce 12 qui donne les résultats présentés au tableau 1 ci-après (où le N° Bristol A indique une souche particulière du micro-organisme): TABLEAU 1

Valeurs de CMI (mg/ml) N° Bristol Zwit- Complexe A terion zwitterion: _ _ NaCl 1:1 1. S. pneumoniae A9585 0,016 0,016 2. S. pyogenes A9604 0,008 0,008 3. S. faecalis A20688 16 16 4. S. aureus A9537 0,5 0,5 5. S. aureus/+50% sérum A9537s 1 1 6. S. aureus/Pen. Res. A9606 1 1 7. S. aureus/Meth. Res.

28 eC A20699 >125 125 8. E. coli A15119 0,016 0,016 9. E. coli A20341-1 0,016 0,03 10. K. pneumoniae A9664 0,016 0,06 11. K. pneumoniae A20468 0,5 1 12. E. cloacae A9659 0,016 0,016 13. E. cloacae A9656 0,03 0,06 14. P. mirabilis A9900 0,008 0,016 15. P. vulgaris A21559 0,03 0,03 16. M. morganii A15153 0,008 0,016 17. P. rettgeri A22424 0,13 0,25 18.S. marcescens A20019 0,03 0,03 19. Ps. aeruginosa A9843a 0,5 1 20. Ps. aeruginosa/Carb.

Res. A21628 2 2

Les résultats ci-dessus indiquent que le produit formé suivant l'invention, c'est-à-dire le complexe zwit-terion:NaCl 1:1,a une activité microbiologique sensiblement équivalente en comparaison du zwitterion.

Le zwitterion a été décrit par Aburaki et al. dans le brevet EUA n° 4.406.899 comme ayant une activité 13 à large spectre en comparaison de la ceftazidime et de la céfotaxime.

La toxicité du complexe zwitterion:NaCl 1:1 se détermine par administration à des rats Sprague-Dawley par injection intraveineuse unique. La DL,-q déduite des résultats combinés de deux études est de 796 mg/kg avec des limites de fiabilité à 95% de 759 et 832 mg/kg. Elle se compare à la DL^-g de 669 mg/kg avec des limites de fiabilité à 95% de 618 et 732 mg/kg pour le zwitterion. Les courbes de réponse sont parallèles, mais le rapport des activités indique que le produit de l'invention est un peu moins toxique que le zwitterion.

On détermine les stabilités à température élevée en conservant le complexe zwitterion:NaCl 1:1 et le zwitterion sous forme de poudre sèche et en déterminant les pertes d'activité par HPLC. Les pertes d'activité sont données au tableau 2 ci-après. La mention d'un intervalle indique les valeurs extrêmes lors de plusieurs essais.

14 TABLEAU 2

Stabilités à l'état sec

Perte %_

Température Durée Zwitterion Complexe zwitterion: _ _ _ NaCl 1:1 4°C 1 mois 0-1% 6 mois néant 25°C 1 mois 1-5% 5 semaines 3,0 18 semaines 6-10% 37eC 1 mois 9-12,9 5 semaines 6,0 12 semaines 12,6 4 mois 9-18,0 45eC 1 semaine 34,1 5,6 2 semaines 8,3 4 semaines 71 10,7 56eC 1 semaine 49,6 12 2 semaines 16 4 semaines 20 70°C 1 jour 34,4 12,7-23,0 2 jours 46,2 21,7 3 jours 55,2 34,0 100°C 1 jour 100 92

Les stabilités en solution aqueuse du complexe zwitterion:NaCl 1:1 se déterminent par redissolution à diverses concentrations et par conservation à 25°C pendant les durées indiquées. La redissolution jusqu'à 250 mg/ml (valeur nominale) est faite avec de l'eau stérile pour injections, pharmacopée EUA.

Une dilution plus poussée est faite avec du NaCl aqueux à 0,9%. Le tableau 3 ci-après présente les résultats où un intervalle indique les valeurs extrêmes lors de plusieurs essais.

15 TABLEAU 3

Stabilité en solution aqueuse

Concentration Temps % restants pH

(mg/ml) (heures) _ _ 250 0 5,04-5,22 3 100-102 5,03-5,24 6 100-101 5,03-5,24 24 92,7-96,0 5,14-5,39 50 0 5,0-5,17 3 99,4 5,07-5,31 6 97-99,4 5,06-5,31 24 93,2-94,7 5,30-5,60 10 0 4,94-5,12 3 99,5-100,1 5,05-5,34 6 99,3-99,4 5,11-5,47 24 95,2-97,0 5,44-5,78 2,5 0 5,00-5,19 3 100,0 5,28-5,66 6 99,6-100,0 5,47-5,92 24 96,2-96,8 5,87-6,18

Les résultats de stabilité indiquent une stabilité satisfaisante en solution aqueuse pendant au moins 24 heures à 25eC (température ambiante).

EXEMPLE II

Synthèse et essai d'une composition de zwitterion et de chlorure de calcium

On dissout 4,6 g du zwitterion dans 14 ml d'eau pour injections contenant 950 mg de CaC^ (1 équivalent molaire).

On fait passer la solution résultante à travers un filtre stérile de Q,22jjjsn.

On ajoute le filtrat, dans des conditions aseptiques, sous agitation rapide et en 5 minutes, à 400 ml d'éthanol absolu. Il se forme un précipité amorphe. On agite le mélange pendant 0,5 heure.

On sépare les solides par filtration sous vide et on les lave avec 40 ml d'éthanol qu'on ajoute au filtrat (lequel est appelé çi-après filtrat A).

16

On disperse les solides humectés d'éthanol dans 100 ml d'éthanol absolu pendant 0,5 heure. On sépare les solides amorphes résultants par filtration sous vide, on les lave avec 20 ml d'éthanol, puis 50 ml d'éther et on les sèche ensuite sous vide poussé à 50 °C pendant 4 heures pour obtenir 2,2 g de produit contenant le zwitterion et le CaC^ dans un rapport molaire d'environ 2:1.

Analyse pour ci9H24N6°5S2 (C^CsJq calculé, % C H N S Cl (en cendres) 42,56; 4,51; 15,68; 11,96; 6,6 ; 3,73 trouvé, % C H « S Cl H2°<KF) 38,4; 4,85; 13,76; 8,82; 5,44; 3,59 7,79 trouvé (base sèche), % 0 N S Cl (en cendres) 41,65; 14,92; 9,57; 5,9; 3,89

On concentre le filtrat A ci-dessus sous vide à 35°C jusqu'à 30 ml. On obtient des microparticules très denses d'aspect cubique ne manifestant pas de biréfringence.

On sépare les solides denses par filtration sous vide, on les lave avec 15 ml d'éthanol absolu, puis avec 20 ml d'éther et on les sèche comme ci-dessus pour recueillir 2,0 g d'un produit solide amorphe présentant un rapport molaire du zwitterion au CaC^ d'environ 1,5:1 (sesqui-zwitterion).

Analyse pour (ci9H24N6°5S2^1 5CaC12: calculé, % CH N S Cl Ca (en cendres) 41,1; 4,5 ; 14,7; 10,8 ; 8,33; 4,8 trouvé, % C H N S Cl Ca (en cendres) 37,35; 5,17; 12,37; 10,24; 7,84; 4,47 17 H20 (KF), 3,24%; éthanol %, 0,5 mole, trouvé (base exempte de i^O et alcool) C H N S Cl Ca (en cendres) 40,01; 4,88; 13,3; 10,57; 8,3; 4,7

Les complexes soluble et insoluble dans l'éthanol n'accusent pas de différence significative en HPLC ni du spectre ÜV par comparaison avec le zwit-terion.

Pour l'évaluation de l'activité à large spectre du produit de l'invention, on détermine les concentrations minimales inhibitrices (CMI) du produit zwitterion:CaCl2 d'un rapport molaire de 1,5:1 et aussi du zwitterion par le procédé de dilution en série de raison deux dans de l'agar de Mueller-Hinton dont les résultats sont donnés au tableau 4 ci-après , où le Ne Bristol A indique une souche particulière du micro-organisme : 18 TABLEAU 4

Valeurs de CMI (rog/ml)

Ne Bristol Zwit- Produit zwit-A terion teriomCaC^ d1 un rapport _ _ molaire 1,5:1 1. S. pneumoniae A9585 0,06 0,016 2. S. pyogenes A9604 0,016 0,016 3. S. faecalis A20688 16 16 4. S. aureus A9537 1 1 5. S. aureus/+50% sérum A9537s 0,5 0,5 6. S. aureus/Pen. Res. A9606 1 1 7. S. aureus/(Meth.Res.) 28 °C A20699 125 63 8. E. coli A15119 0,016 0,016 9. E. coli A20341-1 0,03 0,016 10. K. pneumoniae A9664 0,03 0,03 11. K. pneumoniae A20468 1 1 12. E. cloacae A9659 0,016 0,016 13. E. cloacae A9656 0,13 0,25 14. P. mirabilis A9900 0,008 0,008 15. P. vulgaris A21559 0,03 0,03 16. M. morganii A15153 0,008 0,008 17. P. rettgeri A22424 0,03 0,03 18.S. marcescens A20019 0,03 0,016 19. P. aeruginosa A9843a 0,5 0,5 20. P. aeruginosa/Carb.

Res. A21628 2 2

Les stabilités aux températures élevées se déterminent en conservant le produit zwitterion:CaCl2 d'un rapport molaire de 1,5:1 et le zwitterion sous forme de poudre sèche et en mesurant les pertes d'activité par HPLC. Les pertes d'activité sont indiquées au tableau 5 ci-après. Au tableau 5, la mention d'un intervalle indique les valeurs extrêmes lors de plusieurs essais.

19 TABLEAU 5

Stabilités à l'état sec

Perte %

Température Durée Zwitterion Produit zwit- terioniCaC^ d'un rapport _ _ _ molaire 1,5:1 37eC 2 mois 3,5 45eC 1 semaine 34,1 0,4-0 2 semaines 3,2-5,7 4 semaines 71 56°C 1 semaine 49,6 0-5,3 2 semaines 1,7-6,6 4 semaines 13,7 70 eC 1 jour 34,4 2 jours 46,2 3 jours 55,2 2,2-6,5 100°C 1 jour 100 20-30,0

EXEMPLE III

Essais d'autres compositions

On détermine les stabilités à température élevée en conservant les produits zwitterion: sel d'un rapport molaire de 1:1 et le zwitterion sous forme de poudre sèche et en mesurant les pertes d'activité par HPLC. Les pertes d'activité sont indiquées aux tableaux 6 et 7 ci-après. Dans les tableaux 6 et 7, la mention d'un intervalle indique les valeurs extrêmes lors de plusieurs essais.

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Les produits contenant les sels ci-après dans un rapport molaire de 1:1 accusent des pertes d'activité de plus de 15-20% par conservation à 45eC pendant 2-4 semaines et 1-2 semaines à 56°C et ne sont donc pas considérés comme entrant dans le cadre de l'invention: NaF, NaH2P04, NaHCC>3, NaPC>2H2, H0CH2CH2S03Na, KC1, LiF et FeCl^

EXEMPLE IV

Compositions contenant des mélanges de sels

On prépare diverses compositions lyophilisées formées du zwitterion et de mélanges de NaCl et de CaCl2 et on détermine leurs stabilités à la température comme dans les exemples 1-3. Le tableau 8 ci-après indique l'activité restante d'après dosage HPLC de ces compositions, par comparaison avec des compositions formées avec des sels uniques.

TABLEAU 8 23

Stabilités à l'état sec

Compositions Activité restante, %

Temps/ Zwitterion Zwitterion :NaCl

Température pH 5,1 1:1 _ _ pH 4,9 lj - 70°C 66 85,2 3j - 70 °C 54 76,6 lse - 56°C 45-58 81,9 2se - 56 °C 39-43 73,9 4se - 56 °C — 67,7 8se - 56 °C — 55,9 lse - 45 °C 70 91,7 2se - 45°C 49 87,5 4se - 45eC 39 84,2 8se - 45 °C — 76,2 13se - 45 °C — 67,4 4se - 37°C 69 90,4 8se - 37°C — 85,4 13se - 37eC — 80,9 13se - 25°C 93,7 se = semaine j = jour 24

Compositions Activité restante, %

Temps/ Zwitterion:CaCl_ Zwitterion:CaCl~

Température 1:1 1:0,5 _ _pH 4,9_ pH 4,6_ lj - 70°C 94,2 88,7 3j - 70°C 88,8 80,8 lse - 56 °C 92,3 86,6 2se - 56°C 86,9 78,4 4se - 56°C 84,4 71,5 8se - 56°C 79,0 62,5 lse - 45°C 96,2 94,3 2se - 45 °C 93,0 89,2 4se - 45°C 92,9 85,8 8se - 45°C 88,9 80,4 13se - 45°C 86,3 75,3 4se - 37°C 95,2 92,0 8se - 37°C 93,5 87,3 13se - 37°C 91,1 85,8 13se - 25eC 96,4 95,6 se = semaine j = jour 25

Compositions Activité restante, %

Temps/ Zwitterion:CaCl^:NaCl Zwitterion:NaCl:CaCl^

Température 1:0,5:0,5 1:0,8:0,2 _ _pH 5,1_ _pH 4,9_ lj - 70eC 94,7 91,4 3j - 70eC 88,8 82,8 lse - 56 °C 93,3 89,0 2se - 56 °C 88,5 84,0 4se - 56 °C 82,6 76,3 8se - 56 °C 74,2 67,2 lse - 45 °C 98,1 95,8 2se - 45 °C 95,4 93,3 4se - 45 °C 91,3 88,9 8se - 45°C 88,6 83,3 13se - 45 eC 85,3 79,3 4se - 37eC 95,6 93,8 8se - 37°C 92,6 90,6 13se - 37eC 91,1 87,3 13se - 25°C 97,4 96,7 se = semaine j = jour 26

Compositions Activité restante, %

Temps / Zwitterion:NaCl:CaCl2 Zwitterion:NaCl:CaCl2

Température 1:0,8:0,2 1:1:0,2 _ _pH 4,9_ _pH 4,6_ lj - 70eC 91,0 91,6 3j - 70eC 82,4 83,0 lse - 56°C 88,7 89,8 2se - 56eC 83,2 84,9 4se - 56eC 77,4 78,4 8se - 56°C 68,0 69,7 lse - 45°C 95,4 93,7 2se - 45°C 92,2 93,5 4se - 45 °C 88,9 89,8 8se - 45°C 83,7 83,4 13se - 45 °C 81,2 80,3 4se - 37°C 94,4 94,5 8se - 37eC 90,9 90,6 13se - 37°C 90,3 90,1 13se - 25°C 97,9 97,2 se = semaine j = jour

Bien que divers modes et détails de réalisation aient été décrits pour illustrer l'invention, il va de soi que celle-ci est susceptible de nombreuses variantes et modifications sans sortir de son cadre.

Claims

1 -Composition antibiotique à large spectre stable à la température qui, après dilution jusqu'à une concentration injectable,atteint un pH d'environ 3,5 à environ 7 sans utilisation d'agents tampons ou de bases, caractérisée en ce qu'elle consiste essentiellement en (a) le solide amorphe formé par lyophilisation ou précipitation par un cosolvant d'une solution aqueuse (i) du zwitterion 7-[oc-( 2-aminothiazol-4-yl )-oc-( Z ) -méthoximinoacétamido]-3-[(1-méthyl-l-pyrrolidinio)-méthyl]-3-céphème-4-carboxylate et (ii) d'un sel ou d'un mélange de deux ou plusieurs sels dont le ou les cations est ou sont choisis entre sodium, lithium, calcium et magnésium et dont le ou les anions sont choisis entre chlorure, bromure et iodure, le rapport molaire du zwitterion au sel total de la solution s'échelonnant d'environ 0,5:1 à environ 2:1 ou (b) ses solvatés.

2. Composition antibiotique suivant la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend un sel dont le cation est choisi parmi sodium, lithium, calcium et magnésium et dont l'anion est choisi parmi chlorure, bromure et iodure.

3. Composition antibiotique suivant la revendication 2, caractérisée en ce que le rapport molaire du zwitterion au sel est d'environ 1:1-2:1.

4. Composition antibiotique suivant l'une quelconque des revendications 2 et 3, caractérisée en ce que le cation est le cation sodium.

5. Composition antibiotique suivant l’une quelconque des revendications 2 à 4, caractérisée en ce que l'anion est l'anion chlorure.

6. Composition antibiotique suivant l'une quelconque des revendications 2 et 3, caractérisée en ce que le sel est choisi entre le chlorure de sodium, le bromure de sodium, 1'iodure de sodium, le chlorure 28 de lithium, l'iodure de lithium, le chlorure de calcium, le bromure de calcium, l'iodure de calcium et le chlorure de magnésium.

7. Composition antibiotique suivant l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que le solide amorphe est formé par lyophilisation.

8. Composition antibiotique suivant la revendication 6, caractérisée en ce que le sel est le chlorure de sodium.

9. Composition antibiotique suivant la revendication 8, caractérisée en ce que le rapport molaire du zwitterion au sel est d'environ 1:1.

10. Composition antibiotique suivant la re-venication 9, caractérisée en ce que le solide amorphe est formé par lyophilisation.

11. Composition antibiotique suivant l'une quelconque des revendications 9 et 10, caractérisée en ce qu'elle a un point de décomposition à l'analyse thermique différentielle avec un dégagement de chaleur à environ 197,4°C.

12. Composition antibiotique suivant la revendication 6, caractérisée en ce que le sel est le chlorure de calcium.

13. Composition antibiotique suivant la revendication 12, caractérisée en ce que le rapport molaire du zwitterion au sel est d'environ 1:0,5.

14. Composition antibiotique suivant la revendication 12, caractérisée en ce que le rapport molaire du zwitterion au sel est d'environ 1:1.

15. Composition antibiotique suivant l'une quelconque des revendications 12 à 14, caractérisée en ce que le solide amorphe est formé par lyophilisation.

16. Composition antibiotique suivant la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend un mélange de deux ou plusieurs sels dont les cations sont <1 » 29 • t choisis entre sodium, lithium, calcium et magnésium et dont les anions sont choisis entre chlorure, bromure et iodure.

17. Composition antibiotique suivant la revendication 16, caractérisée en ce que le rapport molaire du zwitterion au sel est d'environ 1:1-2:1.

18. Composition antibiotique suivant l'une quelconque des revendications 16 et 17, caractérisée en ce que le mélange de sels est choisi entre le chlorure de sodium, le bromure de sodium, 1'iodure de sodium, le chlorure de lithium, 1'iodure de lithium, le chlorure de calcium, le bromure de calcium, l'iodure de calcium et le chlorure de magnésium.

19. Composition antibiotique suivant l'une quelconque des revendications 16 à 18, caractérisée en ce que le solide amorphe est formé par lyophilisation.

20. Composition antibiotique suivant la revendication 18, caractérisée en ce que le mélange de sels est un mélange de chlorure de chlorure de sodium et de chlorure de calcium, le rapport molaire entre le zwitterion, le chlorure de calcium et le chlorure de sodium de la solution étant d'environ 1:0,5:0,5.

21. Composition antibiotique suivant la revendication 18, caractérisée en ce que le mélange de sels est un mélange de chlorure de sodium et de chlorure de calcium, le rapport molaire entre le zwitterion, le chlorure de calcium et le chlorure de sodium de la solution étant d'environ 1:0,1-0,2:0,8-1,0.

22. Composition antibiotique suivant la revendication 21, caractérisée en ce que le rapport molaire entre le zwitterion, le chlorure de calcium et le chlorure de sodium est 1:0,1-0,2:1,0.

23. Composition antibiotique suivant la revendication 21, caractérisée en ce que le rapport molaire entre le aiitterion, le chlorure de calcium et ‘ * * * » 30 le chlorure de sodium est 1:0,1-0,2:0,8-0,9.

24. Composition antibiotique suivant la revendication 21, caractérisée en ce que le rapport molaire entre le zwitterion, le chlorure de calcium et le chlorure de sodium est 1:0,2:1.

25. Composition antibiotique suivant l'une quelconque des revendications 21 à 24, caractérisée en ce que le solide amorphe est formé par lyophilisation.