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KR960701214A - 항-hiv 모노클론 항체(anti-hiv monoclonal antibody) - Google Patents

항-hiv 모노클론 항체(anti-hiv monoclonal antibody) Download PDF

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Abstract

본 발명은 사람 면역 결핍 바이러스(HIV)의 외피막상에 분자량이 약 1.2 ×105달톤 인 당단백 항원(gp120)의 V3-PND영역의 보존성 영역을 인식하고, 넓은 범위의 각종 HIV변종을 중화시킬 수 있는 임상적 응용에 유용한 모노클론 항체 또는 그의 단편에 관한 것이고, 그로 부터 유래된 키메라성 및 인간화 항체를 제공한다. HIV gp120의 PND 내에 보존성이 높은 GPGP서열을 함유하는 PND-팁 영역을 갖는 복수의 펩티드를 면역원으로서 사용하여, 많은 HIV변종에 대해 중화활성을 갖는 모노클론 항체를 제조할 수 있다. 상기 모노클론 항체의 가변부를 코드하는 유전자 단편 또는 상기 영역의 상보성 결정 영역(CDR)을 사람 항체 유전자로 이식시킴으로써, 임상적 응용에 효과적인 항-HIV 중화 활성을 갖는 키메라성 항체 또는 개변 항체를 수득할 수 있다.

Description

항-HIV 모노클론 항체(ANTI-HIV MONOCLONAL ANTIBODY)
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제3도는 본 발명의 모노클론 항체 C25 및 각종 HIV변종의 감염(세포-유리 바이러스의 감염 및 세포간 감염)을 억제하는 균주-특이성 중화 항체 μ5.5, α64의 활성을 나타낸다.
제18도는 일본에서 HIV -감염된 사람으로 부터 유래된 일정 PND펩티드와 C25항체와의 반응성을, μ5.5 및 α64 항체와 비교하여 나타낸다.
제19도는 C25항체의 H사슬 가변부의 핵산 및 아미노산 서열을 나타낸다.

Claims (20)

  1. 사람 면역 결핍 바이러스(HIV)의 외피막상에 분자량이 약 1.2 ×105달톤 인 당단백 항원(gp120)의 제3가변부(V3)에 주요 중화영역(PND) 내에 아미노산 서열 : Xa1-G1y-Pro-Xa2-Arg-Xa3[식중, Xal은, Ala, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Tyr 이고; Xa2는 Gly, Ala이고; Xa3은 Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr이다]에 의해 정의되는 영역을 갖는 HIV를 중화시킬 수 있는 모노클론 항체, 또는 그의 단편.
  2. 제1항에 있어서, 상기 주요 중화 영역(PND) 내에 아미노산 서열 : Xaa-Gly-Pro-Gly-Arg-Ala[식중, Xaa는 Ala, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Tyr 이다.]; Ile-Gly-Pro-Arg-Xaa [식중, Xaa 는 Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr이다]; Val-Gly-Pro-Gly-Arg-Thr; Val -Gly-Pro-Gly-Arg-Ser; 또는 Ile-Gly-Pro-Ala-Arg-Ala에 의해 정의되는 영역을 갖는 HIV를 중화시킬 수 있는 모노클론 항체. 또는 그의 단편.
  3. 제1항 또는 제3항에 있어서, H사슬 가변부의 상보성 결정 영역(CDR1 내지 CDR3)의 아미노산 서열이 하기의 서열 : CDR1 : Asn Ser Trp Ile Gly, CDR2 : Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe Lys Gly, CDR3 : Gly Ile Pro Gly Tyr Ala Met Asp Tyr을 갖는 모노클론 항체 또는 그의 단편.
  4. 제3항에 있어서, H사슬 가변부의 아미노산 서열이 서열표서열 번호 : 1에 나타난 바와 같은 아미노산 서열인 모노클론 항체 또는 그의 단편.
  5. 제1항 내지 제2항에 있어서, L사슬 가변부의 상보성 결정 영역(CDR1 내지 CDR3)의 아미노산 서열이 하기의 서열 : CDR1 : Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asp Gin Lys Asn Tyr Leu Thr, CDR2 : Trp Ala Ser Thr Gly Glu Ser, CDR3 : Gin Aan Asp Tyr Ser Tyr Pro Trp Thr을 갖는 모노클론 항체 또는 그의 단면.
  6. 제5항에 있어서, L사슬 가변부의 아미노산 서열이 서열포서열 번호 : 3에 나타난 바와 같은 아미노산 같은 아미노산 서열인 모노클론 항체 또는 그의 단편.
  7. 제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 있어서, 공업기술원 생명공학 공업기술 연구소에 수탁 번호 FERM BP-4561로 기탁되어 있는 하이브리도마에 의해 제조되는 모노클론 항체 또는 그의 단편.
  8. Gly-Pro-Gly-Arg 서열을 포함하는 펩티드로 일차 면역하고, Gly-Pro-Gly-Arg서열을 포함하는 다른 펩티드로 2차 면역 및 이하 추가 면역시켜 수득한 비장 세포를, 세포 융합 물질로서, 사용하여 세포 융합을 수행하는 것을 특징으로 하는, 사람 면역결핍 바이러스(HIV)의 외피막상에 분자량이 약 1.2 ×105달톤 인 당단백 항원(gp120)의 제3가변부(V3)에 주요 중화 영역(PND) 내에 아미노산 서열 : Xal-Gly-Pro-Xa2-Arg-xA3 [식중, Xal은, Ala, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Tyr이고; Xa2는 Gly, Ala이고; Xa3은 Ala, Cys, Asp, Glu, Gly His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser Thr, Val, Trp, Tyr이다]에 의해 정의되는 영역을 갖는 HIV를 중화시킬 수 있는 모노클론 항체, 또는 그의 단편의 제조 방법.
  9. 사람 면역결핍 바이러스(HIV)의 외치막상에 분자량이 약 1.2 ×105달톤 인 당단백 항원(gp120)의 제3가변부(V3)에 주요 중화영역(PND)내에 아미노산 서열 : Xal-Gly- Pro-Xa2-Arg-Xa3 [식중,Xal은, Ala, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Tyr이고 ; Xa2는 Gly, Ala이고; Xa3은 Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr이다]에 의해 정의되는 영역을 갖는 HIV를 중화시킬 수 있으며; 최소한 가변부의 상보성 결정 영역이 마우스 항체로 부터 유래되고 남아있는 영역은 사람 항체로 부터 유래되는 재조합 항- HIV항체의 H사슬.
  10. 제9항에 있어서, 상기 PND 내에 아미노산 서열 : Xaa-Gly-Pro-Gly-Arg-Ala[식중, Xaa는 Ala, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Tyr 이다]; Ile-Gly-Pro-Gly-Arg-Xaa [식중, Xaa는 Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr이다]; Val -Gly-Pro-Gly-Arg-Thr; Val-Gly-Pro-Gly-Arg-Ser; 또는 Ile-Gly-Pro-Ala-Arg-Ala에 의해 정의되는 영역을 갖는 HIV를 중화시킬 수 있는, 재조합 형-HIV항체의 H사슬.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서, H사슬 가변부의 상보성 결정 영역(CDR1 내지 CDR3)의 아미노산 서열이 하기의 서열; CDR1 : Asn Ser Trp Ile Gly, CDR2 : Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe Lys Gly, CDR3 : Gly Ile Pro Gly Tyr Ala Met Asp Tyr 을 갖는 재조합 항-HIV항체의 H사슬.
  12. 제11항에 있어서, 키메라성 항체의 H사슬이며, H사슬 가변부의 아미노산 서열이 서열표 서열 번호 : 1에 기재된 바와 같은 아미노산 순위 1∼118의 아미노산 서열인 재조합 항-HIV항체의 H사슬.
  13. 제11항에 있어서, 인간화 항체의 H사슬이며, H사슬 가변부의 아미노산 서열이 서열표 서열 번호 : 2에 기재된 바와 같은 아미노산 순위 1∼118의 아미노산 서열인 재조합 항-HIV항체의 H사슬.
  14. 사람 면역 결핍 바이러스(HIV)의 외피막상에 분자량이 약 1.2 ×105달톤 인 당단백 항원(gp120)의 제3가변부(V3)에 주요 중화영역(PND) 내에 아미노산 서열 : Xal-Gly-Pro-Xa2-Arg-Xa3 [식중, Xal은, Ala, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Tyr이고; Xa2는 Gly, Ala이고; Xa3은 Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr이다]에 의해 정의되는 영역을 갖는 HIV를 중화시킬 수 있으며; 최소한 가변부의 상보성 결정 영역은 마우스 항체로 부터 유래되고 남아있는 영역은 사람 항체로 부터 유래되는 재조합 항-HIV항체의 L사슬.
  15. 제14항에 있어서, 상기 PND 내에 아미노산 서열 : Xaa-Gly-Pro-Gly-Arg-Ala [식중, Xaa는 Ala, Ile, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Ser, Thr, Val, Tyr이다.]; Ile-Gly-Pro-Gly-Arg-Xaa [식중, Xaa는 Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr이다]; Val-Gly-Pro-Gly-Arg-Thr; Val-Gly-Pro-Gly-Arg-Ser; 또는 Ile-Gly-Pro-Ala-Arg-Ala에 의해 정의되는 영역을 갖는 HIV를 중화시킬 수 있는, 재조합 항-HIV항체의 L사슬.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, H사슬 가변부의 상보성 결정 영역(CDR1 내지 CDR3)의 아미노산 서열이 하기의 서열 : CDR1 : Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asp Gin Lys Asn Tyr Leu Thr, CDR2 : Trp Ala Ser Thr Gly Glu Ser, DCR3 : Gin Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Trp Thr을 갖는 재조합 항-HIV항체의 H사슬.
  17. 제16항에 있어서, 카메라성 항체의 L사슬이며, 가변부의 아미노산 서열이 서열표 서열 번호 : 3에 기재된 바와 같은 아미노산 순위 1∼113의 아미노산 서열인 재조합 항-HIV항체의ㅡ L사슬.
  18. 제9항에서 청구된 재조합 항-HIV항체의 H사슬 및 제14항에 청구된 재조합 항-HIV 항체의 L사슬을 포함하는 재조합 항-HIV항체.
  19. 제9항에서 청구된 재조합 항-HIV항체의 H사슬 및 제14항에 청구된 재조합 항-HIV 항체의 L사슬을 포함하는 재조합 항-HIV항체.
  20. 제19항에서 청구된 재조합 항-HIV항체를 발현할 수 있는 발현 벡터의 구축, 동물 세포내에서 상기 발현백터의 발현, 및 상기 항체의 수합을 포함하는 것을 특징으로 하는 항-HIV항체의 제조방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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