KR830001260B1 - 발효에 의한 l-글루타민 제조방법 - Google Patents
발효에 의한 l-글루타민 제조방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR830001260B1 KR830001260B1 KR1019810002930A KR810002930A KR830001260B1 KR 830001260 B1 KR830001260 B1 KR 830001260B1 KR 1019810002930 A KR1019810002930 A KR 1019810002930A KR 810002930 A KR810002930 A KR 810002930A KR 830001260 B1 KR830001260 B1 KR 830001260B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- glutamine
- fermentation
- leucine
- medium
- strain
- Prior art date
Links
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims description 38
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims description 38
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 title claims description 33
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 title claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 12
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 34
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 claims description 22
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 claims description 10
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 claims description 10
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims description 8
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 7
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 7
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 4
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 3
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 3
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 3
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 3
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 3
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 2
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 235000013882 gravy Nutrition 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BJYJZYFIRKHOFN-UHFFFAOYSA-N 1,2-dimethyl-1-nitrosoguanidine Chemical compound CNC(=N)N(C)N=O BJYJZYFIRKHOFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DEXFNLNNUZKHNO-UHFFFAOYSA-N 6-[3-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperidin-1-yl]-3-oxopropyl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical group C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1CCN(CC1)C(CCC1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1)=O DEXFNLNNUZKHNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 description 1
- COBBNRKBTCBWQP-UHFFFAOYSA-N Graveoline Chemical compound C1=C2OCOC2=CC(C=2N(C3=CC=CC=C3C(=O)C=2)C)=C1 COBBNRKBTCBWQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 201000007930 alcohol dependence Diseases 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003925 brain function Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- YYRMJZQKEFZXMX-UHFFFAOYSA-L calcium bis(dihydrogenphosphate) Chemical compound [Ca+2].OP(O)([O-])=O.OP(O)([O-])=O YYRMJZQKEFZXMX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940095079 dicalcium phosphate anhydrous Drugs 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229910000358 iron sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- RPVIKMSECCYGAB-UHFFFAOYSA-J magnesium;iron(2+);disulfate Chemical compound [Mg+2].[Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O RPVIKMSECCYGAB-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 235000019691 monocalcium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 yuan Chemical compound 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229940047022 zinc sulfate 10 mg Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/14—Glutamic acid; Glutamine
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
내용 없음.
Description
본 발명은 L-로이신 요구성을 갖고 있으며 알라닌에 의해서 생육이 촉진된는 L-글루다민 생산균주를 이용발효에 의한 L-글루타민을 제조함에 있어서, 로이신 발효액(알라닌도 미량축적됨)을 첨가시킨 영양배지에 배양함을 특징으로 하는 발효에 의해 L-글루타민을 제조하는 방법에 관한 것이다. L-글루타민은 아미노산의 일종으로써 영양제 및 소화기궤양치류제, 알콜중독치료제, 뇌기능개선제등 의약용으로 크게 각광을 받고 있는 물질이다.
종전 발효에 의한 L-글루타민의 제조방법은 일본특허공보 소39-7391호에 글루타민 생산균주를 과잉의 질소가 함유되어 있는 배지에 배양하는 방법이, 일본특허공보 소51-15688호에 글루타민산 생산균주를 항생물질이나 계면활성제를 첨가한 배지에 배양하는 방법이, 또는 일본특허공보 소 49-81587호에 설파제 내성균주를 분리하여 배양하는 방법등이 알려져 있다.
그러나 질소과잉의 배지에서는 균주의 정상적인 생육이 불량하므로 다량의 금속염을 첨가시켜 질소과잉에 의한 균의 생육저해작용을 제거시켜야 할뿐 아니라 또한 축적된 글루타민산이나 글루타민이 부산물인 푸로린이나 알지닌 합성계로 전환되어 다량의 L-글루타민 축적이 어려웠다.
또 설파제내성균주를 분리하여 배양할때나 항생물질이나 계면활성제 첨가배양시는 사용균주나 그 균주의 생육조건, 그때그때마다 균주의 생육상태에 따라 약제의 처리시간, 처리농도등의 방법이 상이함으로 인한 공업적으로 문제점이 있는 방법이었다.
본 발명자들은 글루타민산을 생산하는 코리네박테리움 NO 462를 친주로 변이처리하여 얻은, 로이신을 생육에 요구하며 알라닌에 의해서 생육이 촉진되는 새로운 균주 코리네박테리움 MWM-791012(KFCC-10032)를 이용 발효에 의한 방법으로 L-글루타민을 제조할때 로이신발효액을 첨가하면 배양액내에 고농도의 L-글루타민이 축적되는 것을 알게되어 본 발명을 완성하게 된 것이다.
본 발명을 보다 구체적으로 말하면, 본 발명은 L-로이신요구성이며 알라닌에 의하여 생육이 촉진되는 코리네박테리움속의 변이주 MWM-791012(KFCC-10032)를 이용하여 L-글루타민을 제조할때 별도로 배양한 L-로이신 배양액을 대액량비 1-2%되게 첨가발효시켜 발효종료액내에 L-글루타민의 축적을 현저히 증가시키는 것을 특징으로 하는 것이다.
본 발명에 이용된 균주는 토양에서 분리한 글루타민산을 생산하는 코리네박테리움 NO-462를 친주로 통상의 변이처리 즉, 자외선조사 혹은 NTG(N-메칠-N'-메칠-N-니트로소구아니딘), DES(디에칠설페이트)등의 화학변이유기제를 처리하여 페니실린 농축법이나 리플리카방법등으로 선별된 균주중에 생육에 로이신을 요구하며 알라닌에 의해 생육이 촉진되는 균주 MWM-791012를 분리 이용했다.
본 발명에 이용된 L-로이신 발효액은 다음표 1과 같으며 로이신생산균주를 통상의 L-로이신발효법에 의해서 발효한 배양액을 사용했다.
[표 1]
[로이신 발효액의 제조방법]
코리네박테리움속의 로이신 생산균주를 다음의 배지조성을 갖는 종배지에 접종하여 30℃에서 18시간동안 진탕배양하여 종균배양액으로 한다.
글루코스 6%, 펩톤 1%, 육즙 0.5%, 효모엑기스 1%, 콘스팁리커 0.5%, 염화나트륨 0.25%, 비오틴 100r/
, 요소 0.1%, pH7.0
종균배양액 1
를 다음 조성을 가지는 10
의 주발효배지를 사입한 30
소형 발효조에 접종한다.
글루코스 10%, 유안 3%, 제1인산칼륨 0.1%, 황산마그네슘 0.5g/
, 황산철 20mg/
, 황산망간 20mg/
, 비오틴 50r/
, 치아민염산염 3mg/
, 대두박가수분해물 3%
이 배지를 교반 450rpm, 통기 1vvm, 온도 30℃, pH 6.8-7.0으로 조절하면서 28-34시간 배양한다. 배양도중에 500g/
의 글루코스, 10g/
의 콘스팁리커, 10g/
의 황산암모늄을 함유하는 배지를 추가한다.
배양완료액 내에서의 L-로이신 축적량은 22.6mg/ml였으며, 배양액내의 아미노산의 종류와 그 함량은 다음표 2와 같다.
[표 2]
[로이신 배양액내의 아미노산종류와 그 함량]
글루타민 발효의 배지는 탄소원으로써 포도당, 전분가수분해물, 폐당밀등을 이용할 수 있으며, 질소원으로써는 암모니아가스, 암모니아수, 염화암모늄, 유안, 요소, 인산암모늄, 초산암모늄등이 이용가능하며 천연의 영양원으로써 콘스팁리커(C.S.L), 육즙, L-로이신발효액, 효모엑기스, 펩톤등의 사용이 가능하며, 무기염류로써는 황산마그네슘, 염화아연, 제1인산칼슘, 제2인산칼륨, 황산망간 등이 혼합첨가된 배지면 이용 가능하다. 글루타민 발효의 배양방법은 30℃내외의 온도에서 pH 5.5-7.5로 유지하면서 호기적 조건으로 배양한다. 이와 같은 조건으로 글루타민 발효를 행할때 각 농도별 L-로이신 배양액을 첨가하여 배양한 글루타민 발효액내의 글루타민 축적량은 다음표 3과 같다.
[표 3]
[글루타민 발효액에 L-로이신 배양액 첨가농도]
주) 발효배지 : 후기실시예 1참조
발효방법 : 후기실시예 1과 동일한 방법
L-로이신 배양액의 첨가방법은 발효초기에 전량을 첨가하거나 혹은 적당량씩 나누어 몇번에 걸쳐 첨가하는 방법, 발효도중에 한꺼번에 첨가하는 방법등이 있다.
이와 같이 로이신 배양액을 첨가하므로써 근루타민의 배지내 축적이 증가하는 원인은 로이신 발효액중의 여러 아미노산 특히, 로이신과 알라닌은 균의 생육에 관여하여 균의 생육을 촉진시키는 작용을 하며 배지내 함유된 그외의 아미노산은 L-글루타민 생합성이외의 아미노산 합성계를 제어시켜 L-글루타민 합성계 활성효율을 최대로 하여주기 때문인 것으로 판단된다.
본 발명자들의 실험결과에 의하면 글루타민 발효배지중 로이신배양액 첨가농도는 1-2%가 가장 적당한 것으로 나타났다. 발효 배양액내에 축적된 글루타민의 회수는 상법에 따라 이온고환수지에 흡착, 용리시켜 얻은 용리액을 에탄올로 결정 분리하여 조결정을 얻었다.
이하 실시예에서 상세히 설명하는 바와 같다.
[실시예 1]
사용균주 : 코리네박테리움 글루타미컴 MWM-791012(KFCC-10032)
종배지 : 포도당 5%, 펩톤 1%, 효모엑기스 1%, 염화나트륨 0.25%, 요소 0.3%, 비오틴 30r/
, PH7.0
발효배지 : 포도당 10%, 염화암모늄 3.5%, 유안 2%, 콘스팁리커(C.S.L) 0.5%, 육즙 0.7%, 제1인산카리 0.2%, 제2인산카리 0.2%, 황산마그네슘 300mg/
, 황산철 20mg/
, 황산망간 20mg/
, 황산아연 10mg/
, 치아민염산염 2mg/
, 요소 0.5%, 로이신배양액 2%, 탄산칼슘 5%(별도 멸균첨가) PH7.2
배양방법 : 상기 종배지 50ml를 500ml 진탕후라스크에 분주하고 상법에 따라 가압 멸균한 후 MWM-791012 균주를 접종하고 30℃에서 24시간 동안 진탕 배양하여 종균배양액으로 하였다. 발효배지 20ml를 500ml 진탕후라스크에 사입하고 120℃에서 10분간 가압멸균한 후 미리 준비한 종균배양액 2ml 접종하여 60시간 배양하였다.
배양조건 : 온도 30℃ 진탕수 120rpm으로 배양한다.
L-글루타민의 축적량 : 배양종료액내 축적된 L-글루타민은 49.9mg/ml였다.
[실시예 2]
실시예 1의 발효배지에서 탄산칼슘을 제외한 배지 2
를 사입하여 멸균한 5
소형 발효조에 종균배양액 200ml를 접종하여 650rpm, 1.5vvm의 조건으로 30℃에서 48시간 배양한다. pH조절은 암모니아수로 6.0-7.0으로 조절한다. 배양종료시 L-글루타민의 축적량은 54.2mg/ml였다. 발효종료액 1
를 균체를 제거한후 상법에 따라 이온교환수지에 글루타민을 흡착분리 정제하여 48.0g의 L-글루타민 조결정을 얻었다.
[실시예 3]
실시예 2의 발효배지 조성중 포도당대신 폐당밀을 포도당으로 10%되게 환산하여 첨가한 발효배지 2
를 5
소형발효조에 사입한 후 120℃에서 15분간 멸균한다. 여기에 종균배양액 200ml를 접종하여 600rpm, 1.5vvm의 조건으로 30℃에서 48시간 배양한다. pH조절은 암모니나수로 6.0-7.0으로 조절한다. 발효종료시 L-글루타민의 축적량은 50.6mg/ml였다.
[실시예 4]
실시예 2의 발효배지 조성중 폐당밀 대신 전분가수분해물을 포도당으로 환산하여 10%되게 첨가한다. 그의 배양방법은 실시예 2와 동일하게 행한다. 발효종료시 L-글루타민의 축적량은 51.3mg/ml였다.
Claims (1)
- L-로이신 요구성이며 알라닌에 의해서 생육이 촉진되는 코리네박테리움속의 변이주 MWM-791012(KFCC-10032)를 이용하여 L-글루타민을 제조함에 있어서, 별도로 배양한 L-로이신 배양액을 대액량비 1-2%되게 첨가하여 발효시켜 발효종료액내에 L-글루타민의 축적을 현저히 증가시키는 것을 특징으로 하는 발효에 의한 L-글루타민 제조방법.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1019810002930A KR830001260B1 (ko) | 1981-08-12 | 1981-08-12 | 발효에 의한 l-글루타민 제조방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1019810002930A KR830001260B1 (ko) | 1981-08-12 | 1981-08-12 | 발효에 의한 l-글루타민 제조방법 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR830001260B1 true KR830001260B1 (ko) | 1983-06-30 |
Family
ID=19221519
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1019810002930A KR830001260B1 (ko) | 1981-08-12 | 1981-08-12 | 발효에 의한 l-글루타민 제조방법 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR830001260B1 (ko) |
-
1981
- 1981-08-12 KR KR1019810002930A patent/KR830001260B1/ko not_active IP Right Cessation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR960016135B1 (ko) | L-이소로이신(l-isoleucine)의 제조법 | |
| US3580810A (en) | Fermentative production of l-threonine | |
| US3865690A (en) | Fermentative production of L-leucine | |
| CN1072721C (zh) | L－亮氨酸的生产方法 | |
| US3871960A (en) | Method of producing l-lysine by fermentation | |
| KR0133853B1 (ko) | L-트레오닌의 제조방법 | |
| US3282794A (en) | Method of producing citrulline by bacterial fermentation | |
| US3329577A (en) | Fermentative preparation of proline | |
| KR830001260B1 (ko) | 발효에 의한 l-글루타민 제조방법 | |
| US3574061A (en) | Process for preparing l-ornithine by fermentation | |
| US4000040A (en) | Method for producing L-aspartic acid by fermentation | |
| GB2161159A (en) | Improved transamination process for producing L-amino acids | |
| US4596775A (en) | Microorganism and its use for the preparation of glutathione | |
| US5368981A (en) | Method for increasing beta-tyrosinase activity in Erwinia herbicola | |
| US3723249A (en) | Method of producing l-arginine by microorganism | |
| US3787288A (en) | Method for preparing alpha-aminobenzylpenicillin | |
| US3258408A (en) | Method of producing xanthosine | |
| US3385762A (en) | Process for the production of l-tryptophan by fermentation | |
| US3582471A (en) | Method of producing threonine by fermentation | |
| US5034319A (en) | Process for producing L-arginine | |
| KR830001259B1 (ko) | 미생물에 의한 l-글루타민의 제조방법 | |
| KR830001258B1 (ko) | 미생물에 의한 l-글루타민의 제조방법 | |
| KR0146493B1 (ko) | 발효법에 의한 l-알라닌의 제조 방법 | |
| KR850001232B1 (ko) | 발효에 의한 l-페닐알라닌의 제조방법 | |
| KR830001261B1 (ko) | 발효에 의한 l-글루타민 제조방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PA0109 | Patent application |
Patent event code: PA01091R01D Comment text: Patent Application Patent event date: 19810812 |
|
| N231 | Notification of change of applicant | ||
| PN2301 | Change of applicant |
Patent event date: 19830120 Comment text: Notification of Change of Applicant Patent event code: PN23011R01D |
|
| PR1002 | Payment of registration fee |
Payment date: 19830310 End annual number: 3 Start annual number: 1 |
|
| G160 | Decision to publish patent application | ||
| PG1605 | Publication of application before grant of patent |
Comment text: Decision on Publication of Application Patent event code: PG16051S01I Patent event date: 19830602 |
|
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| PE0701 | Decision of registration |
Patent event code: PE07011S01D Comment text: Decision to Grant Registration Patent event date: 19830915 |
|
| GRNT | Written decision to grant | ||
| PR0701 | Registration of establishment |
Comment text: Registration of Establishment Patent event date: 19831022 Patent event code: PR07011E01D |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 19851224 Start annual number: 4 End annual number: 9 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 19920210 Year of fee payment: 12 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 19920210 Start annual number: 10 End annual number: 12 |
|
| EXPY | Expiration of term | ||
| PC1801 | Expiration of term |
Termination date: 19961125 Termination category: Others |