KR20240161968A

KR20240161968A - 다중 특이적 분자와 면역 체크 포인트 저해제의 조합

Info

Publication number: KR20240161968A
Application number: KR1020247034187A
Authority: KR
Inventors: 준야 이치카와; 야츠 아야카 마츠이
Original assignee: 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤
Priority date: 2022-03-16
Filing date: 2023-03-15
Publication date: 2024-11-13
Also published as: CA3255411A1; EP4494655A1; WO2023176881A1; US20250195645A1; CN119031932A; TW202400232A; JPWO2023176881A1

Abstract

새로운 암의 치료를 위한 의약품의 조합을 제공하는 것. 하기 [ii] 에 기재된 화합물을 조합하여 사용되는, 하기 [i] 에 기재된 다중 특이성 항체를 포함하는 암의 치료 및/또는 예방을 위한 의약 조성물 : [i] 다중 특이성 항체 또는 그 항원 결합 단편, [ii] 면역 체크 포인트 저해제 또는 화학 요법제.

Description

다중 특이적 분자와 면역 체크 포인트 저해제의 조합

본 발명은, 면역 체크 포인트 저해제 등과 조합하여 사용되는, 다중 특이적 분자를 포함하는 의약 조성물, 치료 또는 예방 방법 등에 관한 것이다.

암의 치료에서는, 수술에 의한 암 부분의 제거, 항암제나 방사선에 의해 암 세포를 죽임으로써 치유나 연명 효과가 기대된다. 그러나, 많은 암에 대해서는 단독의 항암제 치료만으로는 충분한 효과가 얻어지지 않기 때문에, 여러 가지 약제와의 병용에 의해 치료가 시도되고 있다. 항암제에는 독소루비신, 카보플라틴, 택솔, 혹은 캠토테신 등의 화학 요법제나, 이마티닙, 크리조티닙, 다사티닙, 라파티닙 등의 분자 표적약, 트라스투주맙, 베바시주맙, 세툭시맙, 라무시루맙 등의 암 치료 항체 등이 있고, 암의 종류나 진행도, 치료 상황에 따라, 사용되는 항암제나 그 병용 요법도 결정된다.

최근 표준 치료약이 되고 있는 면역 체크 포인트 저해제는, 면역 억제계를 저해하고, 항종양 면역을 활성화하는 약제이다 (비특허문헌 1 ∼ 3). 면역 체크 포인트 저해제로는, 항 PD-1 항체인, 니볼루맙 (Nivolumab) (특허문헌 1), 펨브롤리주맙 (Pembrolizumab) (특허문헌 2), 항 PD-L1 항체인, 아테졸리주맙 (Atezolizumab) (특허문헌 3), 더발루맙 (Durvalumab) (특허문헌 4), 아벨루맙 (Avelumab) (특허문헌 5), 항 CTLA-4 항체인, 이필리무맙 (Ipilimumab) (특허문헌 6), 트레멜리무맙 (Tremelimumab) (특허문헌 7), 스파르탈리주맙 (Spartalizumab) (특허문헌 8), 세미플리맙 (Cemiplimab) (특허문헌 9), 항 TIGIT 항체인, 티라골루맙 (Tiragolumab) (특허문헌 10), 비보스톨리맙 (Vibostolimab) (특허문헌 11) 등이 알려져 있다. 또 화학 요법제와의 조합에 의해 연명 효과가 확인되고 있는 사례도 있다 (비특허문헌 4). 나아가서는 암 항원과 CD3 을 표적으로 한 이중 특이적 항체의 병용 효과를 검토한 사례도 보고되어 있다 (비특허문헌 5 및 6).

그러나, 항 HLA-A2/NY-ESO 항체, 및 항 CD3 항체로 구성되는 이중 특이적 항체 (특허문헌 12) 와 병용함으로써, 항암 작용이 증강되는 약제에 대해서는 거의 알려져 있지 않다.

국제 공개 제2006/121168호 국제 공개 제2008/156712호 국제 공개 제2010/077634호 국제 공개 제2011/066389호 국제 공개 제2013/079174호 국제 공개 제2001/014424호 국제 공개 제2000/037504호 국제 공개 제2015/112900호 국제 공개 제2015/196051호 국제 공개 제2017/053748호 국제 공개 제2016/028656호 국제 공개 제2021/200857호

Menon S., et al., Cancers (2016) 8, 106. Pardoll DM., Nat Rev Cancer (2012) 12, 252 - 264. Wolchok JD., Cell (2015) 162, 937. Motzer, R., et al., New England Journal of Medicine. (2021) 384 : 1289 - 300. Deegen P., et al., Clincal Cancer Research. (2021) 27 : 2928 - 37. Tebernero J., et al., Journal of Clinical Oncology. (2017) 35 : 15_suppl, 3002 - 3002.

본 발명의 하나의 과제는 항 HLA-A2/NY-ESO 항체, 및 항 CD3 항체로 구성되는 다중 특이적 항체 및 타제의 조합, 그리고, 타제와 조합하여 사용되는, 그 항체 또는 그 항체를 함유하는 의약 조성물 등을 제공하는 것이다.

또, 본 발명의 다른 하나의 과제는, 암의 치료 또는 예방에 사용되는 항 HLA-A2/NY-ESO 항체, 및 항 CD3 항체로 구성되는 다중 특이적 항체 및 타제를 조합하여 암의 치료 또는 예방에 사용되는, 그 항체 또는 그 항체를 함유하는 의약 조성물을 제공하는 것에 있다.

또한, 본 발명의 다른 하나의 과제는, 항 HLA-A2/NY-ESO 항체, 및 항 CD3 항체로 구성되는 다중 특이적 항체와 타제를 조합하여 투여함으로써, 또는 그 조성물을 투여함으로써, 암을 치료 또는 예방하는 방법을 제공하는 것에 있다.

발명자들은 상기 과제를 해결하기 위해서 검토를 실시하여, 항암 활성을 갖는 항 HLA-A2/NY-ESO 항체, 및 항 CD3 항체로 구성되는 이중 특이적 항체에 여러 가지 항암제 (예를 들어, 카보플라틴, 파클리탁셀, Nab 파클리탁셀 등의 화학 요법제나, 펨브롤리주맙 등의 면역 체크 포인트 저해제 등) 를 조합하여 사용함으로써, 우수한 항종양 효과가 얻어지는 것을 알아내어, 본 발명을 완성시켰다.

본 발명은,

(1)

하기 [ii] 에 기재된 화합물을 조합하여 사용되는, 하기 [i] 에 기재된 다중 특이성 항체를 포함하는 암의 치료 및/또는 예방을 위한 의약 조성물 :

[i]

서열 번호 1 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,

서열 번호 2 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,

서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3, 혹은 서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 6 번째의 아미노산이 N 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRH3,

서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1, 혹은 서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 7 번째의 아미노산이 W 및/혹은 8 번째의 아미노산이 K 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,

Asp Asn Asn (도 11 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 5) 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 그리고

서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3, 혹은 서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 A 혹은 S 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3

을 포함하는, HLA/NY-ESO 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편,

그리고,

서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,

서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2 혹은 서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 3 번째의 아미노산이 N 또는 S 인 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,

서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,

서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,

Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2 혹은 Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 G, Q, N, S 또는 A 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 그리고

서열 번호 12 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3

을 포함하는, CD3 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편,

을 포함하는, 다중 특이성 항체 ;

[ii]

면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물, 또는 화학 요법제,

(2)

다중 특이성 항체가 이중 특이성 항체인, (1) 에 기재된 의약 조성물.

(3)

HLA/NY-ESO 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이, 하기 (i) ∼ (v) 의 세트로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 또는 2 개 이상의 세트의 CDRH1 ∼ CDRH3 및 CDRL1 ∼ CDRL3 을 포함하는, (1) 또는 (2) 에 기재된 의약 조성물 :

(i)

서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,

서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,

Asp Asn Asn (도 11 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 5) 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및

서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3

(ii)

서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 7 번째의 아미노산이 W 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,

(iii)

서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 6 번째의 아미노산이 N 인 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,

서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 A 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3,

(iv)

서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 S 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3, 그리고

(v)

서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 7 번째의 아미노산이 W 이고, 8 번째의 아미노산이 K 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,

(4)

HLA/NY-ESO 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이, 서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 69 혹은 서열 번호 70 으로 나타내는 아미노산 서열과 95 ％ 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역, 및 서열 번호 18 혹은 서열 번호 28 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 156 ∼ 266 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 23 으로 나타내는 아미노산 서열과 95 ％ 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는, (1) ∼ (3) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(5)

HLA/NY-ESO 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이,

서열 번호 13 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 15 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 20 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 17 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 19 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 22 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 24 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 25 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 26 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 27 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 28 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 29 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 21 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역, 혹은,

서열 번호 71 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역, 그리고

서열 번호 14 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 16 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 20 으로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 17 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 19 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 22 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 24 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 25 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 26 으로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 27 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 28 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 29 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 21 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 161 번째 ∼ 271 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역, 혹은,

서열 번호 71 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는, (1) 내지 (4) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(6)

서열 번호 13 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 14 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 15 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 16 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 20 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 20 으로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 17 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 17 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 19 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 19 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 22 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 22 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 24 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 24 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 25 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 25 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 26 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 26 으로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 27 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 27 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 28 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 28 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 29 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 29 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 21 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 21 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 161 번째 ∼ 271 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역, 또는

서열 번호 71 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 71 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는, (1) ∼ (5) 기재 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(7)

HLA/NY-ESO 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이 scFv 인, 청구항 1 ∼ 6 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물.

(8)

HLA/NY-ESO 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이,

서열 번호 30 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 15 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 16 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는 scFv,

서열 번호 20 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 17 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 19 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 22 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 24 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 25 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 26 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 27 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 28 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 29 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 21 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 271 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv, 또는

서열 번호 71 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv 인, (1) ∼ (7) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(9)

CD3 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이, 하기 (i) ∼ (X) 의 세트로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 또는 2 개 이상 세트의 CDRH1 ∼ CDRH3 및 CDRL1 ∼ CDRL3 을 포함하는, (1) ∼ (8) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물 :

(i)

서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,

Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및

(ii)

서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 3 번째의 아미노산이 N 인 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,

(iii)

서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 3 번째의 아미노산이 S 인 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,

(iv)

Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 G 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및

(v)

Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 Q 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및

(vi)

Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 N 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및

(vii)

Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 S 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및

서열 번호 12 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3,

(viii)

Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 A 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및

(iX)

그리고

(X)

(10)

CD3 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이,

서열 번호 46 으로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 47 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 51 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 48 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 49 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 50 으로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 272 번째 ∼ 389 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,

서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 277 번째 ∼ 394 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역, 혹은

서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 277 번째 ∼ 394 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역, 그리고,

서열 번호 46 으로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 47 로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 241 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 51 로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 48 로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 241 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 49 로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 50 으로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 405 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 410 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역, 혹은

서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 410 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

을 포함하는, (9) 에 기재된 의약 조성물,

(11)

CD3 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이,

서열 번호 46 으로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 46 으로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 47 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 47 로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 241 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 51 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 51 로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 48 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 48 로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 241 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 49 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 49 로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 50 으로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 50 으로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 272 번째 ∼ 389 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 405 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,

서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 277 번째 ∼ 394 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 410 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역, 또는

서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 277 번째 ∼ 394 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 410 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는, (8) 또는 (9) 에 기재된 의약 조성물,

(12)

CD3 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이 scFv 인, (1) ∼ (11) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(13)

CD3 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이,

서열 번호 46 으로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 47 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 241 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 51 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 48 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 241 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 49 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 50 으로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 272 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,

서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 277 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv, 또는

서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 277 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv 인, (1) ∼ (12) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(14)

N 말단으로부터 C 말단을 향하여, scFv 인 HLA/NY-ESO 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편, scFv 인 CD3 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편 및 Fc 영역 (i) 을 그 순서로 포함하여 이루어지는 제 1 폴리펩티드 ; 그리고, Fc 영역 (ii) 를 포함하는 제 2 폴리펩티드를 포함하고, 바람직하게는, Fc 영역 (i) 과 Fc 영역 (ii) 에 있어서 회합하여 이루어지는, (1) ∼ (13) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(15)

제 1 폴리펩티드가, 서열 번호 32 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 34 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 35 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 36 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 37 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 38 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 39 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 40 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 41 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 42 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 43 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 33 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 52 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 53 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열을 포함하는, (14) 에 기재된 의약 조성물,

(16)

제 1 폴리펩티드가, 서열 번호 32, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 33, 52, 53 혹은 54 로 나타내는 아미노산 서열의 529 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 55 혹은 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 534 번째 ∼ 750 번째의 아미노산 서열을 포함하는, (14) 또는 (15) 에 기재된 의약 조성물,

(17)

제 1 폴리펩티드가, 서열 번호 32 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 34 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 35 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 36 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 37 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 38 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 39 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 40 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 41 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 42 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 43 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 33 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 52 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 53 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 750 번째의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 750 번째의 아미노산 서열로 이루어지는, (14) ∼ (16) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(18)

제 2 폴리펩티드가, 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 246 번째의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는, (14) ∼ (17) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(19)

제 1 폴리펩티드, 제 2 폴리펩티드 및 제 3 폴리펩티드를 포함하고,

제 1 폴리펩티드가, N 말단으로부터 C 말단을 향하여, scFv 인 HLA/NY-ESO 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편, scFv 인 CD3 에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편 및 Fc 영역 (i) 을, 그 순서로 포함하여 이루어지고,

제 2 폴리펩티드가, Fc 영역 (ii) 를 포함하는 면역 글로불린 중사슬로 이루어지고,

제 3 폴리펩티드가 면역 글로불린 경사슬로 이루어지고,

바람직하게는, 제 2 폴리펩티드와 제 3 폴리펩티드가 회합하고 있고,

제 1 폴리펩티드와 제 2 펩티드가, 각각의 Fc 영역에 있어서 회합하고 있는, (1) ∼ (13) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(20)

제 2 폴리펩티드가, 서열 번호 44 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 20 ∼ 242 의 아미노산 서열을 포함하는, (19) 에 기재된 의약 조성물,

(21)

제 3 폴리펩티드가 서열 번호 45 로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는, (19) 또는 (20) 에 기재된 의약 조성물,

(22)

제 1 폴리펩티드가, 서열 번호 32 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 34 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 35 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 36 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 37 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 38 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 39 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 40 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 41 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 42 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 43 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 33 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 52 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 53 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열을 포함하는, (19) ∼ (21) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(23)

제 1 폴리펩티드가, 서열 번호 32 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 34 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 35 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 36 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 37 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 38 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 39 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 40 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 41 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 42 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 43 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열 및 서열 번호 33 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 52 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 53 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 750 번째의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 750 번째의 아미노산 서열로 이루어지는, (19) ∼ (22) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(24)

N 말단으로부터 C 말단을 향하여,

svFv 인 HLA/NY-ESO 에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편, CD3 에 결합하는 항체의 중사슬 가변 영역 및 정상 영역 CH1 그리고 면역 글로불린 Fc 영역 (i) 을 그 순서로 포함하여 이루어지는 제 1 폴리펩티드,

면역 글로불린의 힌지 영역 및 Fc 영역 (ii) 를 포함하여 이루어지는 제 2 폴리펩티드, 그리고,

가변 영역 및 정상 영역으로 이루어지는 CD3 에 결합하는 항체 경사슬을 포함하는 제 3 폴리펩티드를 포함하고,

바람직하게는, 제 1 폴리펩티드와 제 2 폴리펩티드가 Fc 영역 (i) 과 Fc 영역 (ii) 에 있어서 회합하고 있고, 제 1 폴리펩티드가 항체 중사슬의 가변 영역 및 정상 영역 CH1 에 있어서 제 3 폴리펩티드와 회합하여 이루어지는, (9) ∼ (11) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(25)

제 1 폴리펩티드가, 서열 번호 57 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 724 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 60 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 719 번째의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 61 로 나타내는 아미노산 서열 20 번째 ∼ 719 번째의 아미노산 서열을 포함하는, (9) ∼ (11) 및 (24) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(26)

제 2 폴리펩티드가, 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 246 번째의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는, (9) ∼ (11), (24) 및 (25) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(27)

제 3 폴리펩티드가, 서열 번호 58 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 127 번째의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는, (9) ∼ (11) 및 (24) ∼ (26) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(28)

제 3 폴리펩티드가, 서열 번호 58 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 233 번째의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는, (9) ∼ (11) 및 (24) ∼ (27) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(29)

(1) ∼ (28) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물로서, 그 의약 조성물에 포함되는 1 개 또는 2 개 이상의 폴리펩티드가 갖는 아미노산 서열에 있어서, 그 서열의 카르복실 말단으로부터 1 개 또는 2 개의 아미노산이 결실되어 이루어지는, 그 의약 조성물,

(30)

암이, 신장암, 멜라노마, 유극 세포암, 기저 세포암, 결막암, 구강암, 후두암, 인두암, 갑상선암, 폐암 (비소세포 폐암 (선암, 편평 상피암, 대세포암), 소세포 폐암), 유방암, 식도암, 위암, 십이지장암, 소장암, 대장암, 직장암, 충수암, 항문암, 간암, 담낭암, 담관암, 췌장암, 부신암, 방광암, 전립선암, 자궁암, 질암, 지방 육종, 혈관 육종, 연골 육종, 횡문근 육종, 유잉 육종, 골육종, 미분화 다형 육종, 점액형 섬유 육종, 악성 말초성 신경초종, 후복막 육종, 활막 육종, 자궁 육종, 소화관 간질 종양, 평활근 육종, 유상피 육종, B 세포 림프종, T·NK 세포 림프종, 호지킨 림프종, 골수성 백혈병, 림프성 백혈병, 골수 증식성 질환, 골수 이형성 증후군, 다발성 골수종, 정소암 및 난소암으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 또는 2 개 이상인, (1) ∼ (29) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(31)

면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제 후에 투여되는, (1) ∼ (30) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물.

(32)

면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제보다 전에 투여되는, (1) ∼ (30) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(33)

면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제와 동시에 투여되는, (1) ∼ (30) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(34)

면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제를 포함하는, (1) ∼ (30) 및 (33) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(35)

추가적인 1 개 또는 2 개 이상의 의약 및/또는 치료와 조합하여 사용되는, (1) ∼ (34) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(36)

[ii] 에 기재된 화합물이 면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물인, (1) ∼ (35) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(37)

면역 체크 포인트 분자가 PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA-4 및 TIGIT 로 이루어지는 군에서 선택되는, (1) ∼ (36) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(38)

면역 체크 포인트 분자가 PD-1 인, (1) ∼ (37) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(39)

면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물이 니볼루맙 혹은 펨브롤리주맙, 그 항원 결합 단편, 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는 화합물인, (38) 에 기재된 의약 조성물.

(40)

면역 체크 포인트 분자가 PD-L1 인, (1) ∼ (37) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(41)

면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물이 아테졸리주맙, 더발루맙 혹은 아벨루맙, 그 항원 결합 단편, 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는 화합물인, (40) 에 기재된 의약 조성물,

(42)

면역 체크 포인트 분자가 CTLA-4 인, (1) ∼ (37) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(43)

면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물이 이필리무맙, 트레멜리무맙, 스파르탈리주맙 혹은 세미플리맙, 그 항원 결합 단편, 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는 화합물인, (42) 에 기재된 의약 조성물,

(44)

면역 체크 포인트 분자가 TIGIT 인, (1) ∼ (37) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(45)

면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물이 티라골루맙 혹은 비보스톨리맙, 그 항원 결합 단편, 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는 화합물인, (44) 에 기재된 의약 조성물,

(46)

면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물이 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 스파르탈리주맙, 세미플리맙, 아벨루맙, 아테졸리주맙, 더발루맙, 이필리무맙, 또는 트레멜리무맙인, (1) ∼ (36) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(47)

면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물이, 펨브롤리주맙 혹은 펨브롤리주맙의 항원 결합 단편, 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는 화합물인, (1) ∼ (39) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(48)

[ii] 에 기재된 화합물이 화학 요법제인, (1) ∼ (35) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(49)

화학 요법제가 미소관 형성 저해제인, (1) ∼ (35) 및 (48) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(50)

화학 요법제가 탁산계의 미소관 형성 저해제인, (1) ∼ (35), (48) 및 (49) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(51)

화학 요법제가 파클리탁셀, 도세탁셀, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 에리불린, 비노렐빈, 알부민 현탁형 파클리탁셀옥살리플라틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 네다플라틴, 아자시티딘, 데시타빈, 독소루비신, 블레오마이신, 리포소말 독소루비신, 이포스파미드, 시클로포스파미드, 및 다카르바진으로 이루어지는 군에서 선택되는, (1) ∼ (35) 및 (48) ∼ (50) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(52)

화학 요법제가 파클리탁셀 또는 알부민 현탁형 파클리탁셀인, (1) ∼ (35) 및 (48) ∼ (51) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(53)

추가로 멀티키나아제 저해제와 조합하여 사용되는, (1) ∼ (52) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(54)

멀티키나아제 저해제가 소라페닙, 수니티닙, 파조파닙, 레고라페닙, 및 렌바티닙으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 또는 2 개 이상인, (53) 에 기재된 의약 조성물,

(55)

멀티키나아제 저해제가 렌바티닙인, (53) 또는 (54) 에 기재된 의약 조성물,

(56)

[ii] 에 기재된 화합물이, 면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물이고, 바람직하게는, 펨브롤리주맙 혹은 펨브롤리주맙의 항원 결합 단편, 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는 화합물인, (53) ∼ (55) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(57)

면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물이, 펨브롤리주맙 혹은 펨브롤리주맙의 항원 결합 단편, 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는 화합물이고, 멀티키나아제 저해제가 렌바티닙인, (53) ∼ (56) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(58)

화학 요법제가 파클리탁셀, 도세탁셀, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 에리불린, 비노렐빈 및 알부민 현탁형 파클리탁셀로 이루어지는 군에서 선택되는 탁산계의 미소관 형성 저해제인, (1) ∼ (35) 및 (48) ∼ (52) 중 어느 하나에 기재된 의약 조성물,

(59)

암의 치료 및/또는 예방을 위한, (1) ∼ (47) 중 어느 하나에 기재된 [i] 다중 특이성 항체 및 [ii] 면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제,

(60)

암의 치료 및/또는 예방을 위한, (53) ∼ (57) 중 어느 하나에 기재된 [i] 다중 특이성 항체 및 [ii] 면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제, 그리고, 멀티키나아제 저해제,

(61)

(62)

암의 치료 및/또는 예방을 위한 의약 조성물을 조제하기 위한, (53) ∼ (57) 중 어느 하나에 기재된 [i] 다중 특이성 항체 및 [ii] 면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제, 그리고, 멀티키나아제 저해제의 사용,

(63)

(1) ∼ (47) 중 어느 하나에 기재된 [i] 다중 특이성 항체 및 [ii] 면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료 및/또는 예방하는 방법,

(64)

(53) ∼ (57) 중 어느 하나에 기재된 [i] 다중 특이성 항체 및 [ii] 면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제, 그리고, 멀티키나아제 저해제를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료 및/또는 예방하는 방법,

등에 관한 것이다.

본 발명이 제공하는 항체 및 타제의 조합을 사용함으로써 각종 암의 치료 또는 예방이 가능해진다.

도 1a 는, 인간 T 세포 이입 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, Paclitaxel 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Paclitaxel 의 병용 투여에서의 항종양 활성을 나타낸 도면이다. 도면 중의 에러바는 표준 오차 (n = 5) 를 나타낸다.
도 1b 는 인간 T 세포 이입 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, Paclitaxel 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Paclitaxel 의 병용 투여에서의 Day12 의 종양 체적을 베이스 라인으로 한 각 개체의 Day31 의 종양 체적 변화율을 나타낸 도면이다.
도 2a 는, 인간 T 세포 이입 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, Nab Paclitaxel 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Nab Paclitaxel 의 병용 투여에서의 항종양 활성을 나타낸 도면이다. 도면 중의 에러바는 표준 오차 (n = 5) 를 나타낸다.
도 2b 는 인간 T 세포 이입 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, Nab Paclitaxel 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Nab Paclitaxel 의 병용 투여에서의 Day13 의 종양 체적을 베이스 라인으로 한 각 개체의 Day38 의 종양 체적 변화율을 나타낸 도면이다.
도 3 은, 인간 T 세포 이입 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, Pembrolizumab 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Pembrolizumab 의 병용 투여에서의 항종양 활성을 나타낸 도면이다. 도면 중의 에러바는 표준 오차 (n = 5) 를 나타낸다.
도 4 는, 인간 CD3ε 녹인 마우스 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYF-0016 단독 투여, 항마우스 PD-1 항체 단독 투여, 및 NYF-0016 과 항마우스 PD-1 항체의 병용 투여에서의 항종양 활성을 나타낸 도면이다. 도면 중의 에러바는 표준 오차 (n = 5) 를 나타낸다.
도 5 는, 본 발명에 나타내는 항체의 포맷을 나타낸 도면. (5a) scFv : 항체 H 사슬 가변 영역 (VH, 후술) 및 항체 L 사슬 가변 영역 (VL, 후술) (모두 흰색) 을 링커로 연결한 포맷이다. 본 발명의 실시예에서는 항 HLA-A2/NY-ESO 및 CD3 의 scFv 를 평가에 사용하였다. (5b) Fab : VH (흰색) 와 항체 H 사슬 정상 영역 (CH1 : 체크 무늬) 및 VL (흰색) 과 항체 L 사슬 정상 영역 (가로선) 으로 이루어지는 포맷이다. 본 발명의 실시예에서는 항 HLA-A2/NY-ESO Fab 등을 평가에 사용하였다. (5c) taFv : 2 종류의 scFv (흰색과 우상측 사선) 를 링커로 연결한 포맷이다. 본 발명의 실시예에서는 항 HLA-A2/NY-ESO scFv 와 항 CD3 scFv 를 포함하는 taFv 를 평가에 사용하였다. (5d) taFv-헤테로다이머 Fc 형 : taFv 의 C 말단측에 헤테로다이머를 형성하는 변이를 넣은 Fc (좌상측 사선) 가 부가되고 (제 1 폴리펩티드라고도 한다), 또 하나의 Fc (검은 칠 : 제 2 폴리펩티드라고도 한다) 와 헤테로에 회합한 포맷이다. 본 발명의 실시예에서는 항 HLA-A2/NY-ESO scFv 와 항 CD3 scFv 를 포함하는 taFv-헤테로다이머 Fc 를 평가에 사용하였다. (5e) taFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 : 상기 taFv-헤테로다이머 Fc 형에 Fab 를 부가한 포맷이다. 본 발명의 실시예에서는 항 HLA-A2/NY-ESO scFv 와 항 CD3 scFv 를 포함하는 taFv 및 HLA-A2/NY-ESO Fab 를 사용한 taFv-Fab-헤테로다이머 Fc 등을 평가에 사용하였다.
도 6 은, 본 발명에 나타내는 항체의 포맷을 나타낸 도면. (6a) taFv-헤테로다이머 Fc 형 및 taFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형에 공통인 제 1 폴리펩티드를 나타낸다. 제 1 폴리펩티드는, N 말단으로부터 C 말단을 향하여, 인간 HLA/NY-ESO 에 특이적으로 결합하는 scFv, CD3 에 특이적으로 결합하는 scFv 및 Fc 영역 (i) 을, 그 순서로 포함하여 이루어진다. (6b) taFv-헤테로다이머 Fc 형의 제 2 폴리펩티드를 나타낸다. 제 2 폴리펩티드는, 힌지 영역 및 Fc 영역 (ii) 를 포함하여 이루어진다. (6c) taFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형의 제 2 폴리펩티드를 나타낸다. 제 2 폴리펩티드는, 힌지 영역 및 Fc 영역 (ii) 를 포함하는 면역 글로불린 중사슬을 포함하여 이루어진다. (6d) taFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형의 제 3 폴리펩티드를 나타낸다. 제 3 폴리펩티드는, 면역 글로불린 경사슬을 포함하여 이루어진다.
도 7 은, 본 발명에 포함되는 항체의 포맷을 나타낸 도면. (7a) Hybrid 형 : Fab 및 scFv 각각의 C 말단측에 헤테로다이머를 형성하는 변이를 넣은 Fc (사선 및 검은 칠) 가 부가되고, 2 개의 Fc 가 회합한 포맷이다. 본 발명의 실시예에서는 항 HLA-A2/NY-ESO Fab 와 항 CD3 scFv 를 포함하는 Hybrid 형을 평가에 사용하였다. (7b) Dual 형 : 2 종류의 상이한 scFv 각각의 C 말단측에 헤테로다이머를 형성하는 변이를 넣은 Fc (좌상측 사선 및 검은 칠) 가 부가되고, 2 개의 Fc 헤테로에 회합한 포맷이다. 본 발명의 실시예에서는 항 HLA-A2/NY-ESO scFv 와 항 CD3 scFv 를 포함하는 Dual 형을 평가에 사용하였다. (7c) scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 : scFv 와 Fab 를 링커로 연결한 C 말단측에 헤테로다이머를 형성하는 변이를 넣은 Fc (좌상측 사선) 가 부가되고, 또 하나의 Fc (검은 칠) 와 회합한 포맷이다. 본 발명의 실시예에서는 항 CD3 scFv (우상측 사선) 와 항 HLA-A2/NY-ESO Fab 를 포함하는 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형을 평가에 사용하였다. 또, 항 HLA-A2/NY-ESO scFv (우상측 사선) 와 항 CD3 Fab 를 포함하는 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형도 평가에 사용하였다.
도 8 은, 본 발명에 나타내는 항체의 포맷을 나타낸 도면. (8a) taFv-헤테로다이머 Fc 형 : 도 5 (5d) 에 동일. taFv 의 C 말단측에 헤테로다이머를 형성하는 변이를 넣은 Fc (좌상측 사선) 가 부가되고, 또 하나의 Fc (검은 칠) 와 헤테로에 회합한 포맷이다. 본 발명의 실시예에서는 항 HLA-A2/NY-ESO scFv 와 항 CD3 scFv 로 이루어지는 taFv-헤테로다이머 Fc 형을 평가에 사용하였다. (8b) taFv(inversed)-헤테로다이머 Fc 형 : 상기 taFv-헤테로다이머 Fc 형에 있어서의 2 개의 scFv 의 순서를 바꾼 것.
도 9 는, 본 발명에 나타내는 항체의 포맷을 나타낸 도면. (9a) taFv(inversed)-헤테로다이머 Fc 형의 제 1 폴리펩티드를 나타낸다. 제 1 폴리펩티드는, N 말단으로부터 C 말단을 향하여, CD3 에 특이적으로 결합하는 scFv, 인간 HLA/NY-ESO 에 특이적으로 결합하는 scFv 및 Fc 영역 (i) 을 그 순서로 포함하여 이루어진다. (9b) taFv(inversed)-헤테로다이머 Fc 형의 제 2 폴리펩티드를 나타낸다. 제 2 폴리펩티드는, 힌지 영역 및 Fc 영역 (ii) 를 포함하여 이루어진다.
도 10 은, 인간 CD3ε 의 아미노산 서열. NCBI/GenPept 에 액세션 번호 : NP_000724(NM_000724.1) 로 등록되어 있다.
도 11 은, NYA-0001 에 포함되는 CDRH1 ∼ 3 및 CDRL1 ∼ 3 의 아미노산 서열 (서열 번호 1 ∼ 4 및 6. 5 번째는 DNN 이고 도 82 의 서열 번호 5).
도 12 는, C3E-7085 의 중사슬 CDRH1 ∼ CDRH3 및 경사슬 CDRL1 ∼ CDRL3 의 아미노산 서열 (서열 번호 7 ∼ 10 및 12. 11 번째는 RDD 이고 도 82 의 서열 번호 11).
도 13 은, NYA-0001 의 중사슬 가변 영역의 아미노산 서열 (서열 번호 13).
도 14 는, NYA-0001 의 경사슬 가변 영역의 아미노산 서열 (서열 번호 14).
도 15 는, NYA-0082 의 중사슬 가변 영역의 아미노산 서열 (서열 번호 15).
도 16 은, NYA-0082 의 경사슬 가변 영역의 아미노산 서열 (서열 번호 16).
도 17 은, NYA-1163 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 17). 시그널 서열(1-19), NYA-1163(21-266), FLAG-His 태그(267-292).
도 18 은, NYA-2023 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 18). 시그널 서열(1-19), NYA-2023(21-266), FLAG-His 태그(267-292).
도 19 는, NYA-2027 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 19). 시그널 서열(1-19), NYA-2027(21-266), FLAG-His 태그(267-292).
도 20 은, NYA-1143 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 20). 시그널 서열(1-19), NYA-1143(21-266), FLAG-His 태그(267-292).
도 21 은, NYA-2143 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 21). 시그널 서열(1-19), NYA-2143(21-266), FLAG-His 태그(267-292).
도 22 는, NYA-2035 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 22). 시그널 서열(1-19), NYA-2035(21-266), FLAG-His 태그(267-292).
도 23 은, NYA-1143-VL01 의 아미노산 서열 (서열 번호 23).
도 24 는, NYA-2044 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 24). 시그널 서열(1-19), NYA-2044(21-266), FLAG-His 태그(267-292).
도 25 는, NYA-2045 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 25). 시그널 서열(1-19), NYA-2045(21-266), FLAG-His 태그(267-292).
도 26 은, NYA-2047 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 26). 시그널 서열(1-19), NYA-2047(21-266), FLAG-His 태그(267-292).
도 27 은, NYA-2048 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 27). 시그널 서열(1-19), NYA-2048(21-266), FLAG-His 태그(267-292)
도 28 은, NYA-2060 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 28). 시그널 서열(1-19), NYA-2060(21-266), FLAG-His 태그(267-292).
도 29 는, NYA-2061 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 29). 시그널 서열(1-19), NYA-2061(21-266), FLAG-His 태그(267-292).
도 30 은, NYA-0001 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 30). 시그널 서열(1-19), NYA-0001(21-266), FLAG-His 태그(267-292)
도 31 은, HC1 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 31). 시그널 서열(1-19), Hinge(20-29), CH2(30-139), CH3(140-246).
도 32 는, NYF-0016-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 32). 시그널 서열(1-19), NYA-1143(21-266), linker(267-271), C3E-7085(272-511), linker(512-513), Hinge(514-528), CH2(529-638), CH3(639-745).
도 33 은, NYF-0019-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 33). 시그널 서열(1-19), NYA-2143(21-266), linker(267-271), C3E-7085(272-511), linker(512-513), Hinge(514-528), CH2(529-638), CH3(639-745).
도 34 는, NYF-0022-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 34). 시그널 서열(1-19), NYA-1163(21-266), linker(267-271), C3E-7085(272-511), linker(512-513), Hinge(514-528), CH2(529-638), CH3(639-745).
도 35 는, NYF-0023-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 35). 시그널 서열(1-19), NYA-2023(21-266), linker(267-271), C3E-7085(272-511), linker(512-513), Hinge(514-528), CH2(529-638), CH3(639-745).
도 36 은, NYF-0027-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 36). 시그널 서열(1-19), NYA-2027(21-266), linker(267-271), C3E-7085(272-511), linker(512-513), Hinge(514-528), CH2(529-638), CH3(639-745).
도 37 은, NYF-0035-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 37). 시그널 서열(1-19), NYA-2035(21-266), linker(267-271), C3E-7085(272-511), linker(512-513), Hinge(514-528), CH2(529-638), CH3(639-745).
도 38 은, NYF-0044-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 38). 시그널 서열(1-19), NYA-2044(21-266), linker(267-271), C3E-7085(272-511), linker(512-513), Hinge(514-528), CH2(529-638), CH3(639-745).
도 39 는, NYF-0045-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 39). 시그널 서열(1-19), NYA-2045(21-266), linker(267-271), C3E-7085(272-511), linker(512-513), Hinge(514-528), CH2(529-638), CH3(639-745).
도 40 은, NYF-0047-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 40). 시그널 서열(1-19), NYA-2047(21-266), linker(267-271), C3E-7085(272-511), linker(512-513), Hinge(514-528), CH2(529-638), CH3(639-745).
도 41 은, NYF-0048-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 41). 시그널 서열(1-19), NYA-2048(21-266), linker(267-271), C3E-7085(272-511), linker(512-513), Hinge(514-528), CH2(529-638), CH3(639-745).
도 42 는, NYF-0060-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 42). 시그널 서열(1-19), NYA-2060(21-266), linker(267-271), C3E-7085(272-511), linker(512-513), Hinge(514-528), CH2(529-638), CH3(639-745).
도 43 은, NYF-0061-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 43). 시그널 서열(1-19), NYA-2061(21-266), linker(267-271), C3E-7085(272-511), linker(512-513), Hinge(514-528), CH2(529-638), CH3(639-745).
도 44 는, NYA-0001-Fab-HC1-κ delete 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 44). 시그널 서열(1-19), NYA-0001_VH(20-139), CH1(140-237), Hinge(238-252), CH2(253-362), CH3(363-468).
도 45 는, NYA-0001-LC 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 45). 시그널 서열(1-20), NYA-0001_VL(21-131), CL(132-237).
도 46 은, C3E-7034 의 아미노산 서열 (서열 번호 46). C3E-7034(1-267), scFv(2-241), FLAG-His 태그(242-267).
도 47 은, C3E-7036 의 아미노산 서열 (서열 번호 47). C3E-7036(1-269), FLAG-His 태그(244-269).
도 48 은, C3E-7085 의 아미노산 서열 (서열 번호 48). C3E-7085(1-267), scFv(2-241), FLAG-His 태그(242-267).
도 49 는, C3E-7088 의 아미노산 서열 (서열 번호 49). C3E-7088(1-269), FLAG-His 태그(244-269).
도 50 은, C3E-7093 의 아미노산 서열 (서열 번호 50). C3E-7093(1-269), FLAG-His 태그(244-269).
도 51 은, C3E-7078 의 아미노산 서열 (서열 번호 51). C3E-7078(1-269), FLAG-His 태그(244-269).
도 52 는, NYF-0014-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 52). 시그널 서열(1-19), NYA-0001(21-266), linker(267-271), C3E-7085(272-511), linker(512-513), Hinge(514-528), CH2(529-638), CH3(639-745).
도 53 은, NYF-0082-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 53). 시그널 서열(1-19), NYA-0082(21-266), linker(267-271), C3E-7085(272-511), linker(512-513), Hinge(514-528), CH2(529-638), CH3(639-745).
도 54 는, NYF-0083-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 54). 시그널 서열(1-19), NYA-2061(21-266), linker(267-271), C3E-7095(272-511), linker(512-513), Hinge(514-528), CH2(529-638), CH3(639-745).
도 55 는, NYZ-0082-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 55). 시그널 서열(1-19), NYA-3061(21-271), linker(272-276), C3E-7096(277-516), linker(517-518), Hinge(519-533), CH2(534-643), CH3(644-750).
도 56 은, NYZ-0083-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 56). 시그널 서열(1-19), NYA-3061(21-271), linker(272-276), C3E-7097(277-516), linker(517-518), Hinge(519-533), CH2(534-643), CH3(644-750).
도 57 은, NYZ-1010-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 57). 시그널 서열(1-19), NYA-3061(21-271), linker(272-276), C3E-7085-VH(277-394), CH1(395-492), Hinge(493-507), CH2(508-617), CH3(618-724).
도 58 은, C3E-7085-LC 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 58). 시그널 서열(1-20), C3E-7085_VL(21-127), CL(128-233).
도 59 는, NYA-3061 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 59). 시그널 서열(1-19), NYA-3061(21-271), FLAG-His 태그(272-297).
도 60 은, NYZ-1007-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 60). 시그널 서열(1-19), NYA-2061(21-266), linker(267-271), C3E-7085-VH(272-389), CH1(390-487), Hinge(488-502), CH2(503-612), CH3(613-719).
도 61 은, NYZ-1017-HC2 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 61). 시그널 서열(1-19), NYA-2047(21-266), linker(267-271), C3E-7085-VH(272-389), CH1(390-487), Hinge(488-502), CH2(503-612), CH3(613-719).
도 62 는, C3E-7096 전체 길이 아미노산 서열 (서열 번호 62).
도 63 은, C3E-7097 전체 길이 아미노산 서열 (서열 번호 63).
도 64 는, C3E-7098 전체 길이 아미노산 서열 (서열 번호 64).
도 65 는, C3E-7099 전체 길이 아미노산 서열 (서열 번호 65).
도 66 은, NY-ESO 의 아미노산 서열 (서열 번호 66).
도 67 은, HLA-A*0201 (GenBank : ASA47534.1) 의 트렁케이트체의 아미노산 서열 (서열 번호 67).
도 68 은, β2-마이크로글로불린의 아미노산 서열 (서열 번호 68).
도 69 는, NYA-1143-VH02 의 아미노산 서열 (서열 번호 69).
도 70 은, NYA-1143-VH03 의 아미노산 서열 (서열 번호 70).
도 71 은, NYA-1154 전체 길이의 아미노산 서열 (서열 번호 71). 시그널 서열(1-19), NYA-1154(21-266), FLAG-His 태그(267-292).
도 72a 는, 인간 T 세포 이입 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, lenvatinib 과 Pembrolizumab 병용 투여, 및 NYZ-1010 과 lenvatinib 과 Pembrolizumab 의 병용 투여에서의 항종양 활성을 나타낸 도면이다. 도면 중의 에러바는 표준 오차 (n = 5) 를 나타낸다.
도 72b 는 인간 T 세포 이입 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, lenvatinib 과 Pembrolizumab 병용 투여, 및 NYZ-1010 과 lenvatinib 과 Pembrolizumab 의 병용 투여에서의 Day28 의 종양 체적을 베이스 라인으로 한 각 개체의 Day52 의 종양 체적 변화율을 나타낸 도면이다.
도 73a 는, BALB/C 계통 인간 CD3ε 녹인 마우스 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, 항마우스 PD-1 항체 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 항마우스 PD-1 항체의 병용 투여에서의 항종양 활성을 나타낸 도면이다. 도면 중의 에러바는 표준 오차 (n = 5 ∼ 10) 를 나타낸다.
도 73b 는, BALB/C 계통 인간 CD3ε 녹인 마우스 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, 항마우스 PD-1 항체 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 항마우스 PD-1 항체의 병용 투여에서의 각 개체의 추정 종양 체적, 및 완전 퇴축 마우스와 Naive 마우스에 있어서의, CT26 NY-SCT 재이식 후의 추정 종양 체적을 나타낸 도면이다.
도 74a 는, 인간 T 세포 이입 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, Durvalumab 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Durvalumab 의 병용 투여에서의 항종양 활성을 나타낸 도면이다. 도면 중의 에러바는 표준 오차 (n = 5) 를 나타낸다.
도 74b 는 인간 T 세포 이입 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, Durvalumab 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Durvalumab 의 병용 투여에서의 Day24 의 종양 체적을 베이스 라인으로 한 각 개체의 Day49 의 종양 체적 변화율을 나타낸 도면이다.
도 75a 는, BALB/C 계통 인간 CD3ε 녹인 마우스 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, 항마우스 PD-L1 항체 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 항마우스 PD-L1 항체의 병용 투여에서의 항종양 활성을 나타낸 도면이다. 도면 중의 에러바는 표준 오차 (n = 5 ∼ 10) 를 나타낸다.
도 75b 는, BALB/C 계통 인간 CD3ε 녹인 마우스 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, 항마우스 CTLA-4 항체 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 항마우스 CTLA-4 항체의 병용 투여에서의 각 개체의 추정 종양 체적, 및 완전 퇴축 마우스와 Naive 마우스에 있어서의, CT26 Mock 재이식 후의 추정 종양 체적을 나타낸 도면이다.
도 76a 는, BALB/C 계통 인간 CD3ε 녹인 마우스 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, 항마우스 CTLA-4 항체 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 항마우스 CTLA-4 항체의 병용 투여에서의 항종양 활성을 나타낸 도면이다. 도면 중의 에러바는 표준 오차 (n = 5 ∼ 10) 를 나타낸다.
도 76b 는, BALB/C 계통 인간 CD3ε 녹인 마우스 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, 항마우스 CTLA-4 항체 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 항마우스 CTLA-4 항체의 병용 투여에서의 각 개체의 추정 종양 체적, 및 완전 퇴축 마우스와 Naive 마우스에 있어서의, CT26 NY-SCT 재이식 후의 추정 종양 체적을 나타낸 도면이다.
도 77a 는, BALB/C 계통 인간 CD3ε 녹인 마우스 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, 항마우스 TIGIT 항체 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 항마우스 TIGIT 항체의 병용 투여에서의 항종양 활성을 나타낸 도면이다. 도면 중의 에러바는 표준 오차 (n = 5 ∼ 10) 를 나타낸다.
도 77b 는, BALB/C 계통 인간 CD3ε 녹인 마우스 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, 항마우스 TIGIT 항체 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 항마우스 TIGIT 항체의 병용 투여에서의 각 개체의 추정 종양 체적, 및 완전 퇴축 마우스와 Naive 마우스에 있어서의, CT26 NY-SCT 재이식 후의 추정 종양 체적을 나타낸 도면이다.
도 78 은, 인간 T 세포 이입 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, Carboplatin 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Carboplatin 의 병용 투여에서의 항종양 활성을 나타낸 도면이다. 도면 중의 에러바는 표준 오차 (n = 5) 를 나타낸다.
도 79a 는, 인간 T 세포 이입 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, sacituzumab govitecan-hziy 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 sacituzumab govitecan-hziy 의 병용 투여에서의 항종양 활성을 나타낸 도면이다. 도면 중의 에러바는 표준 오차 (n = 5) 를 나타낸다.
도 79b 는 인간 T 세포 이입 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, sacituzumab govitecan-hziy 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 sacituzumab govitecan-hziy 의 병용 투여에서의 Day6 의 종양 체적을 베이스 라인으로 한 각 개체의 Day21 의 종양 체적 변화율을 나타낸 도면이다.
도 80a 는, 인간 T 세포 이입 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, Doxorubicin 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Doxorubicin 의 병용 투여에서의 항종양 활성을 나타낸 도면이다. 도면 중의 에러바는 표준 오차 (n = 5) 를 나타낸다.
도 80b 는 인간 T 세포 이입 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, Doxorubicin 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Doxorubicin 의 병용 투여에서의 Day40 의 종양 체적을 베이스 라인으로 한 각 개체의 Day55 의 종양 체적 변화율을 나타낸 도면이다.
도 81a 는, 인간 T 세포 이입 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, Decitabine 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Decitabine 의 병용 투여에서의 항종양 활성을 나타낸 도면이다. 도면 중의 에러바는 표준 오차 (n = 5) 를 나타낸다.
도 81b 는 인간 T 세포 이입 모델에 있어서의, Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자, NYZ-1010 단독 투여, Decitabine 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Decitabine 의 병용 투여에서의 Day7 의 종양 체적을 베이스 라인으로 한 각 개체의 Day32 의 종양 체적 변화율을 나타낸 도면이다.
도 82 는, 2022년 3월 16일 출원의 일본 특허출원 2022-041253 의 서열표

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

1. 정의

본 발명에 있어서, 「유전자」 란, 단백질의 아미노산을 코드하는 염기 서열이 포함되는 뉴클레오티드 사슬 또는 그 상보 사슬을 의미하고, 예를 들어, 단백질의 아미노산을 코드하는 염기 서열이 포함되는 뉴클레오티드 사슬 또는 그 상보 사슬인 폴리뉴클레오티드, 올리고뉴클레오티드, DNA, mRNA, cDNA, cRNA 등은 「유전자」 의 의미에 포함된다. 이러한 유전자는 1 본쇄, 2 본쇄 또는 3 본쇄 이상의 뉴클레오티드이고, DNA 사슬과 RNA 사슬의 회합체, 한 개의 뉴클레오티드 사슬 상에 리보뉴클레오티드 (RNA) 와 데옥시리보뉴클레오티드 (DNA) 가 혼재되는 것 및 그러한 뉴클레오티드 사슬을 포함하는 2 본쇄 또는 3 본쇄 이상의 뉴클레오티드도 「유전자」 의 의미에 포함된다. 본 발명에 있어서 염기 서열과 뉴클레오티드 서열은 동일한 의미이다.

본 발명에 있어서, 「폴리뉴클레오티드」, 「뉴클레오티드 사슬」, 「핵산」 및 「핵산 분자」 는 동일한 의미이고, 예를 들어, DNA, RNA, 프로브, 올리고뉴클레오티드, 프라이머 등도 「폴리뉴클레오티드」 의 의미에 포함된다. 이러한 폴리뉴클레오티드는 1 본쇄, 2 본쇄 또는 3 개 이상의 사슬로 이루어지는 폴리뉴클레오티드이고, DNA 사슬과 RNA 사슬의 회합체, 한 개의 폴리뉴클레오티드 사슬 상에 리보뉴클레오티드 (RNA) 와 데옥시리보뉴클레오티드 (DNA) 가 혼재되는 것 및 그러한 폴리뉴클레오티드 사슬을 포함하는 2 본쇄 또는 3 개 이상의 사슬의 회합체도 「폴리뉴클레오티드」 의 의미에 포함된다.

본 발명에 있어서, 「폴리펩티드」, 「펩티드」 및 「단백질」 은 동일한 의미이다.

본 발명에 있어서, 「항원」 을 「면역원」 의 의미로 사용하는 경우가 있다.

본 발명에 있어서, 「세포」 에는, 동물 개체에서 유래하는 각종 세포, 계대 배양 세포, 초대 배양 세포, 세포주, 재조합 세포 및 미생물 등도 포함된다.

본 발명에 있어서, 「항체」 는 면역 글로불린과 동일한 의미이다. 단, 본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체라고 하는 경우의 「항체」 는, 정상 영역과 가변 영역을 갖는 면역 글로불린의 의미로 사용한다. 항체는, 천연의 것인지, 또는 부분적 혹은 완전 합성에 의해 제조된 면역 글로불린인지는 특별히 한정되지 않는다. 본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체는 후술하는 「분자」 에 포함된다.

본 발명에 있어서, 「NY-ESO 펩티드」 란, NY-ESO-1 과 LAGE-1 의 157 번째 내지 165 번째의 9 아미노산으로 이루어지는 펩티드 (SLLMWITQC : 서열 번호 1) 를 의미한다.

본 발명에 있어서, 「HLA-A2/NY-ESO」 란, NY-ESO 펩티드 및 Histocompatibility Leukocyte Antigen-A2(HLA-A2) 의 복합체를 의미하고, 「HLA/NY-ESO」 라고도 표기된다.

본 발명에 있어서, 「항 HLA-A2/NY-ESO 항체」 란, HLA-A2/NY-ESO 에 결합하는 항체, 바꿔 말하면 HLA-A2/NY-ESO 를 인식하는 항체를 의미한다. 동일하게, 「항 HLA-A2/NY-ESO scFv」 란, HLA/NY-ESO 에 결합하는, 바꿔 말하면 HLA-A2/NY-ESO 를 인식하는 scFv 를 의미한다. 「항 HLA-A2/NY-ESO 항체」 및 「항 HLA-A2/NY-ESO scFv」 는, 각각 「항 HLA/NY-ESO 항체」 및 「항 HLA/NY-ESO scFv」 라고도 표기된다.

기본적인 4 사슬 항체의 구조는, 2 개의 동일한 경사슬 (L 사슬), 및 2 개의 동일한 중사슬 (H 사슬) 로 구성된다. 경사슬은 1 개의 공유 디술파이드 결합에 의해 중사슬에 결합한다. 2 개의 중사슬은, 중사슬의 아이소 타입에 따라 1 개 또는 복수의 디술파이드 결합에 의해 서로 결합되어 있다. 각각의 경사슬, 중사슬은 규칙적인 간격을 갖는 사슬 내 디술파이드 결합을 가진다. 중사슬과 경사슬에는, 아미노산 서열이 매우 높은 유사성을 나타내는 정상 영역과 아미노산 서열의 유사성이 낮은 가변 영역이 존재한다. 경사슬은, 정상 영역 (CL) 이 계속되는 가변 영역 (VL) 을 아미노 말단에 갖는다. 중사슬은 3 개의 정상 영역 (CH1/CH2/CH3) 이 계속되는 가변 영역 (VH) 을 아미노 말단에 갖는다. VL 과 VH 는 쌍이 되고, CL 은 중사슬의 제 1 정상 영역 (CH1) 과 나열되어 있다. VL 과 VH 는 쌍이 되고, 단일의 항원 결합 부위를 형성한다.

본 발명의 항체의 정상 영역으로는, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 인간의 질환을 치료 또는 예방하기 위한 본 발명의 항체로는, 바람직하게는 인간 항체의 것이 사용된다. 인간 항체의 중사슬 정상 영역으로는, 예를 들어, Cγ1, Cγ2, Cγ3, Cγ4, Cμ, Cδ, Cα1, Cα2, Cε 등을 들 수 있다. 인간 항체의 경사슬 정상 영역으로는, 예를 들어, Cκ, Cλ 등을 들 수 있다.

Fab 는, 중사슬의 VH 와 그것에 계속되는 CH1, 및 경사슬의 VL 과 그것에 계속되는 CL 로 이루어진다. VH 와 VL 은, 상보성 결정 영역 (CDR) 을 포함한다.

Fc (Fc 영역이라고도 한다) 는, 중사슬의 정상 영역의 카르복실 말단 영역으로서, CH2 와 CH3 을 포함하고, 이량체이다. 본 발명의 Fc 는, 천연의 서열의 Fc 여도 되고, 천연의 서열에 변이가 이루어진 변이형의 Fc (「변이형 Fc」 라고 한다) 여도 되고, 본 발명의 다중 특이성 분자 및 이중 특이성 분자에 있어서, 바람직한 Fc 영역은 변이형 Fc 이고, 보다 바람직하게는 헤테로 2 량체를 형성할 수 있는 1 세트의 Fc 이다. 1 세트의 Fc 로는, 후술하는, 제 1 폴리펩티드에 포함되는 Fc(i) 및 제 2 폴리펩티드에 포함되는 Fc(ii) 의 조합을 들 수 있지만, 1 세트의 Fc 가 회합 (헤테로 2 량체 형성) 할 수 있으면, 그것들에 한정되는 것은 아니다.

변이형 Fc 로는, WO2013/063702 에 개시되는, 향상된 안정성을 갖는 헤테로 다량체에 포함되는 개변 Fc 영역 (헤테로 이량체 Fc 영역을 포함한다), WO1996/27011 에 개시되는, 이종 다량체에 포함되는, 「돌기」 및 「공극」 을 갖는 IgG 항체로부터 유도되는 이뮤노글로불린의 CH3 영역을 포함하는 Fc, WO2009/089004 에 개시되는, 1 이상의 아미노산 잔기를 하전 아미노산으로 치환함으로써 정전적으로 유리한 헤테로 이량체에 포함되는 CH3 도메인을 포함하는 Fc, WO2014/110601 에 개시되는, 입체 구조 변이 및/또는 pI (등전점) 변이를 사용한 이종 이량체에 포함되는 이종 이량체 Fc 영역, WO2010/151792 에 개시되는, 프로테인 A 에 대한 결합을 없애거나 또는 감소시키는 개변을 포함하는 CH3 도메인을 포함하는, 헤테로 이량체의 Fc 등이 예시되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.

가변 영역은, 초가변 영역 (HVR : hypervariable region) 이라고 칭해지는 극도의 가변성을 갖는 영역과, 그 영역에 의해 분리된 프레임워크 영역 (FR : Framework region) 라고 불리는 비교적 불변의 영역으로 이루어진다. 천연의 중사슬과 경사슬의 가변 영역은, 3 개의 초가변 영역에 의해 접속되는 4 개의 FR 을 포함하고, 각 사슬의 초가변 영역은 FR 에 의해 다른 사슬의 초가변 영역과 함께 극근방에 유지되어, 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여하고 있다.

항체 분자의 중사슬 및 경사슬에는 각각 3 개 지점의 상보성 결정 영역 (CDR : Complemetarity determining region) 이 있는 것이 알려져 있다. 상보성 결정 영역은, 초가변 영역이라고도 불리고, 항체의 중사슬 및 경사슬의 가변 영역 내에 있고, 일차 구조의 변이성이 특히 높은 부위이고, 중사슬 및 경사슬의 폴리펩티드 사슬의 일차 구조 상에 있어서, 통상적으로, 각각 3 개 지점으로 분리되어 있다. 본 발명에 있어서는, 항체의 상보성 결정 영역에 대해, 중사슬의 상보성 결정 영역을 중사슬 아미노산 서열의 아미노 말단측으로부터 CDRH1, CDRH2, CDRH3 으로 표기하고, 경사슬의 상보성 결정 영역을 경사슬 아미노산 서열의 아미노 말단측으로부터 CDRL1, CDRL2, CDRL3 으로 표기한다. 이들 부위는 입체 구조 상에서 서로 근접하여, 결합하는 항원에 대한 특이성을 결정하고 있다.

본 발명에 있어서, CDR 의 위치와 길이는, IMGT 의 정의 (Developmental and Comparative Immunology 27 (2003) 55 - 77) 에 의해 결정하였다.

FR 은, CDR 잔기 이외의 가변 영역이다. 가변 영역은, 일반적으로 FR1, FR2, FR3, FR4 의 4 개의 FR 을 갖는다.

중사슬 그리고 경사슬에 포함되는 CDR 과 FR 은, 아미노 말단으로부터 카르복실 말단을 향하여, FRH1-CDRH1-FRH2-CDRH2-FRH3-CDRH3-FRH4, 그리고, FRL1-CDRL1-FRL2-CDRL2-FRL3-CDRL3-FRL4 의 순서로 각각 배치된다.

CDR 과 FR 의 위치는, 당 기술 분야에서 주지된 여러 가지 정의, 예를 들어, IMGT 이외에도, Kabat, Chothia, AbM, contact 등의 정의에 의해 결정할 수도 있다.

본 발명에 있어서, 「항체의 항원 결합 단편」 이란, 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역으로 구성되는, 항원과의 결합 활성을 갖는 항체의 부분 단편을 의미한다. 「항체의 항원 결합 단편」 으로는, 예를 들어, Fab, F(ab')₂, scFv, Fab', Fv, single-domain antibody(sdAb) 등의 항원 결합 단편을 들 수 있지만, 그것들에 한정되는 것은 아니다. 이러한 항체의 항원 결합 단편은, 항체 단백질의 전체 길이 분자를 파파인, 펩신 등의 효소로 처리함으로써 얻어진 것에 더하여, 재조합 유전자를 사용하여 적당한 숙주 세포에 있어서 산생된 재조합 단백질이어도 된다. 본 발명에 있어서, 「항체의 결합 단편」 은 「항체의 항원 결합 단편」 과 동일한 의미이다.

본 발명에 있어서, 항체가 결합하는 「부위」, 즉 항체가 인식하는 「부위」 란, 항체가 결합 또는 인식하는 항원 상의 부분 펩티드 또는 부분 고차 구조를 의미한다. 본 발명에 있어서는, 이러한 부위를 에피토프, 항체의 결합 부위라고도 부른다. 본 발명에 있어서, 「변이 항체」 란, 원래의 항체가 갖는 아미노산 서열에 있어서 아미노산이 치환, 결실, 부가 (부가에는 삽입이 포함된다) (이하, 「변이」 라고 총칭한다) 되어 이루어지는 아미노산 서열을 갖고, 또한 본 발명의 HLA/NY-ESO 에 결합하는 폴리펩티드를 의미한다. 이러한 변이 항체에 있어서의 변이 아미노산의 수는, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 20, 25, 30, 40 또는 50 개이다. 이러한 변이 항체도 본 발명의 「항체」 에 포함된다.

본 발명에 있어서, 「1 또는 수 개」 에 있어서의 「수 개」 란, 2 ∼ 10 개를 가리킨다.

본 발명에 있어서, 「다중 특이성 분자」 란, 복수의 서로 상이한 에피토프, 및/또는 2 개 이상의 분자 상의 서로 상이한 에피토프에 결합하는 것이 가능한 2 개 또는 그 이상의 부분을 포함하는 분자이면 특별히 한정되지 않고, 바람직하게는, 이러한 부분 중 2 개 또는 그 이상이 각각 항체 또는 그 항원 결합 단편인 「다중 특이적 항체」 이거나 또는 「다중 특이적 항체」 를 포함하는 분자이다. 다중 특이적 항체에는, 1 종 또는 2 종 이상의 중사슬 가변 영역 (VH) 및/또는 경사슬 가변 영역 (VL) 이 포함되어도 되고, 상이한 2 종류 이상의 중사슬 및 경사슬을 갖는 완전 길이 항체 즉 IgG 형 다중 특이적 항체여도 되고, 2 종류 이상의 VL 및 VH 를 갖는 항원 결합 단편으로 이루어지는 항체 관련 분자, 예를 들어, Fab, Fab', Fv, scFv, sdAb 등을 조합하여서 이루어지거나 또는 그것들로부터 파생하여 이루어지는 분자 (tandem scFv, 다이아바디, 1 본쇄 다이아바디, 트리아바디 등) 여도 되지만, 그것들에 한정되지 않는다. 다중 특이적 항체에는, 면역 글로불린 골격을 갖지 않는 부분이 포함되어 있어도 된다.

본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편, 혹은, 본 발명의 분자가 발휘하는 활성·성질로는, 예를 들어, 생물학적 활성, 물리 화학적 성질 (물성이라고도 한다) 등을 들 수 있고, 구체적으로는, 세포 상해 활성, ADCC 활성, 항종양 활성 (모두 후술) 등의 각종 생물 활성, 항원이나 에피토프에 대한 결합 활성, 제조나 보존시에 있어서의 안정성, 열안정성 등의 물성을 들 수 있다.

본 발명에 있어서, 「스트린젠트한 조건하에서 하이브리다이즈한다」 란, 5 × SSC 를 포함하는 용액 중에서 65 ℃ 에서 하이브리다이제이션을 실시하고, 이어서 2 × SSC - 0.1 ％ SDS 를 포함하는 수용액 중에서 65 ℃ 에서 20 분간, 0.5 × SSC - 0.1 ％ SDS 를 포함하는 수용액 중에서 65 ℃ 에서 20 분간, 그리고, 0.2 × SSC - 0.1 ％ SDS 를 포함하는 수용액 중에서 65 ℃ 에서 20 분간, 각각 세정하는 조건 또는 그것과 동등한 조건에서 하이브리다이즈하는 것을 의미한다. SSC 란 150 mMNaCl - 15 mM 시트르산나트륨의 수용액이고, n × SSC 는 n 배 농도의 SSC 를 의미한다.

본 발명에 있어서 「세포 상해」 란, 어떠한 형태로, 세포에 병리적인 변화를 가져오는 것을 가리키고, 직접적인 외상에 머무르지 않고, DNA 의 절단이나 염기의 이량체의 형성, 염색체의 절단, 세포 분열 장치의 손상, 각종 효소 활성의 저하 등 모든 세포의 구조나 기능 상의 손상을 의미한다. 본 발명에 있어서 「세포 상해 활성」 이란 상기 세포 상해를 일으키는 것을 의미한다.

본 발명에 있어서 「항체 의존성 세포 상해 활성」 이란, 「antibody dependent cellular cytotoxicity (ADCC) 활성」 을 가리키고, NK 세포가 항체를 통하여 종양 세포 등의 표적 세포를 상해하는 작용 활성을 의미한다.

본 발명에 있어서 「T 세포 리다이렉션에 의한 세포 상해 활성」 이란 항종양 항원 항체와 항 HLA/NY-ESO 항체를 포함하는 다중 특이적인 분자를 통하여 상기 세포 상해를 일으키는 것을 의미한다. 즉 항종양 항원 항체가 표적 종양 세포와 결합하여, 항 HLA/NY-ESO 항체가 T 세포에 결합함으로써 표적 종양 세포와 T 세포의 거리를 가깝게 하여, T 세포 활성화를 통하여 세포 상해를 유도하는 것을 의미한다. 그 분자는, 의약 조성물에 포함시킬 수 있다.

2. 항원

2-1. HLA/NY-ESO 항원

본 발명에 있어서, 「HLA/NY-ESO」 는, HLA/NY-ESO 단백질과 동일한 의미로 사용된다.

HLA/NY-ESO 는, HLA-A2, β2-Microglobulin, NY-ESO 펩티드의 삼자 복합체이다. HLA-A2 는 HLA 의 알렐의 1 종이고, Caucasian 에서 가장 빈도가 높은 알렐로서 알려진다. HLA 는, 세포의 소포체 내에서 β2-microglobulin 과 자기 단백의 펩티드 단편의 삼자 복합체를 형성하여 세포외에 제시하고, T 세포의 TCR (T Cell Receptor) 에 인식을 받는다. NY-ESO 펩티드 (SLLMWITQC : 서열 번호 66) 는, NY-ESO-1, LAGE-1 의 157 번째 내지 165 번째의 9 아미노산으로 이루어지는 펩티드이고, HLA-A2 에 제시되는 것이 보고되어 있다.

2-2. CD3 항원

본 발명에 있어서, 「CD3」 은, CD3 단백질과 동일한 의미로 사용되고 있다. CD3 은, 다분자 T 세포 리셉터 복합체의 일부분으로서 T 세포 상에 발현되고, γ 사슬, δ 사슬, ε 사슬, ζ 사슬, η 사슬의 5 종류의 폴리펩티드 (분자량은 순서대로 25000 - 28000, 21000, 20000, 16000, 22000) 의 복합체이다. CD3 복합체로는, γ, δ, ε, ζ, η 사슬을 들 수 있다. 이들은 서브 유닛이라고도 칭해진다. 항 CD3 항체가 T 세포에 결합함으로써, T 세포 활성화를 통하여 세포 상해를 유도한다. 많은 항 CD3 항체는, CD3ε 에 결합한다. 인간 CD3ε 을 코드하는 cDNA 의 뉴클레오티드 서열은, NCBI/GenBank 에 액세션 번호 : NM_000733(NM_000733.3) 으로, 인간 CD3ε 의 아미노산 서열은 NCBI/GenPept 에 액세션 번호 : NP_000724(NM_000724.1) 으로, 각각 등록되어 있다. 필리핀원숭이 CD3 을 코드하는 cDNA 의 뉴클레오티드 서열은, GenBank 에 액세션 번호 : NM_001283615.1 로 등록되어 있다. 인간 CD3ε 의 아미노산 서열은 도 10 에 기재되어 있다.

2-3. 항원의 조제

본 발명에서 사용하는 상기 서술한 항원 단백질 ; HLA/NY-ESO, CD3 (이하, HLA/NY-ESO, CD3 을 합쳐서, 그 항원 단백질이라고도 기재한다) 은, 동물 조직 (체액을 포함한다), 그 조직 유래의 세포 혹은 그 세포 배양물로부터의 정제 및 단리, 유전자 재조합, 인비트로 번역, 화학 합성 등에 의해 조제할 수 있다. 그 항원 단백질의 cDNA 는, 예를 들어, 그 항원 단백질의 mRNA 를 발현하고 있는 장기의 cDNA 라이브러리를 주형으로 하여, 그 항원 단백질의 cDNA 를 특이적으로 증폭시키는 프라이머를 사용하여 폴리메라아제 연쇄 반응 (이하 「PCR」 이라고 한다) (Saiki, R. K., et al., Science(1988) 239, 487 - 49) 을 실시하는, 이른바 PCR 법에 의해 취득할 수 있다. 인간 또는 래트에게 발현하고 있는 그 항원 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열과 상보적인 뉴클레오티드 서열로 이루어지는 폴리뉴클레오티드와 스트린젠트한 조건에서 하이브리다이즈하고, 또한, 그 항원 단백질과 동등한 생물 활성을 갖는 단백질을 코드하는 폴리뉴클레오티드도, 그 항원 단백질의 cDNA 에 포함된다. 또한, 인간 또는 래트에게 발현하고 있는 그 항원 단백질 유전자좌로부터 전사되는 스플라이싱 배리언트 또는 이것에 스트린젠트한 조건에서 하이브리다이즈하는 폴리뉴클레오티드로서, 또한, 그 항원 단백질과 동등한 생물 활성을 갖는 단백질을 코드하는 폴리뉴클레오티드도, 그 항원 단백질의 cDNA 에 포함된다. 인간 또는 래트의 그 항원 단백질의 아미노산 서열, 또는 이들 서열로부터 시그널 서열이 제외된 아미노산 서열에 있어서, 1 내지 수 개의 아미노산이, 치환, 결실 또는 부가된 아미노산 서열로 이루어지고, 그 항원 단백질과 동등한 생물 활성을 갖는 단백질을 코드하는 뉴클레오티드 서열도, 그 항원 단백질 유전자의 뉴클레오티드 서열에 포함된다. 인간 또는 래트의 그 항원 단백질의 유전자좌로부터 전사되는 스플라이싱 배리언트에 코드되는 아미노산 서열 또는 그 아미노산 서열에 있어서, 1 또는 수 개의 아미노산이, 치환, 결실 또는 부가된 아미노산 서열로 이루어지고, 또한, 그 항원 단백질과 동등한 생물 활성을 갖는 단백질도, 그 항원 단백질에 포함된다.

2-4 항원 단백질에 대한 결합 특이성

본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체 및 그 항원 결합 단편 등은, HLA/NY-ESO 를 인식한다. 즉, HLA/NY-ESO 항원에 결합한다. HLA/NY-ESO 는, 마우스, 래트, 필리핀원숭이 등의 비인간 동물에 있어서의 존재는 알려져 있지 않다. 본 발명의 다중 특이적 항체에 포함되는 항 CD3 항체 및 그 결합 단편 등은, CD3 항원을 인식, 즉, 결합한다. 이러한 항 CD3 항체 등은, 바람직하게는, 인간 CD3, 원숭이 CD3 등에 결합하고, 보다 바람직하게는, 인간 CD3 및 필리핀원숭이 CD3 에 결합한다. 한편, 이러한 바람직한 항 CD3 항체는, 래트 및/또는 마우스의 CD3 에는 결합하지 않는다.

본 발명에 있어서 「인식」, 즉 「결합」 이란, 비특이적인 흡착이 아닌 결합을 의미한다. 인식하고 있는지의 여부, 즉, 결합하고 있는지 여부의 판정 기준으로는, 예를 들어, 해리 정수 (Dissociation Constant : 이하, 「KD 라고 한다」) 를 들 수 있다. 본 발명의 바람직한 항체 등의 HLA/NY-ESO 또는 CD3 에 대한 KD 값은, 1 × 10^-5 M 이하, 5 × 10^-6 M 이하, 2 × 10^-6 M 이하, 1 × 10^-6 M 이하이고, HLA/NY-ESO 에 대한 바람직한 KD 값은, 5 × 10^-7 M 이하, 2 × 10^-7 M 이하, 1 × 10^-7 M 이하, 5 × 10^-8 M 이하, 2 × 10^-8 M 이하, 1 × 10^-8 M 이하, 5 × 10^-9 M 이하, 또는 2 × 10^-9 M 이하이고, 보다 바람직하게는 1 × 10^-9 M 이하이다. 우수한 항원 결합 활성을 갖는 본 발명의 항 HLA/NY-ESO scFv 로서, NYA-1143, NYA-2023, NYA-2143, NYA-2044, NYA-2045, NYA-2060, NYA-2061, NYA-3061 을 예시할 수 있고, NYA-1143, NYA-2044, NYA-2045, NYA-2143 및 NYA-1154 등의 HLA/NY-ESO 에 대한 KD 값은 1 × 10^-9 M 이하이다. 본 발명에 있어서의 항원과 항체의 결합은, SPR 법, BLI 법 등의 생체 분자간 상호 작용 해석 시스템, 혹은 ELISA 법, RIA 법 등에 의해 측정 또는 판정할 수 있다 (WO2021/200857 참조). 본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체 등 중, 우수한 항원 결합 특이성을 갖는 것으로서, 항 HLA/NY-ESO scFv 인 NYA-0001, NYA-1143, NYA-1163, NYA-2023, NYA-2027, NYA-2035, NYA-2044, NYA-2045, NYA-2047, NYA-2048, NYA-2060, NYA-2061, NYA-2143 및 NYA-3061 을 예시할 수 있다.

3. HLA/NY-ESO 에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 결합 단편

3-1 항 HLA/NY-ESO 또는 그 결합 단편

본 발명은, HLA/NY-ESO 를 인식하여 결합하는 항체 또는 그 결합 단편을 제공한다. 전술한 바와 같이, HLA/NY-ESO 는, HLA-A2 와 9mer 의 NY-ESO 펩티드 (SLLMWITQC : 서열 번호 66) 를 포함하는 복합체이다. NY-ESO 펩티드는, 세포내 단백질이고 Cancer-Testis 항원인 NY-ESO-1 또는 LAGE-1 유래의 펩티드이다. HLA/NY-ESO 는, 암세포 표면에 제시된다. 본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체 및 그 항체의 항원 결합 단편 (이하, 본 발명의 항체 등이라고도 기재한다) 은, 모노클로날 항체 및 폴리클로날 항체 중 어느 것이어도 된다. 본 발명의 모노클로날 항체의 아이소타입은, 특별히 한정되는 것은 아니며, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 등의 IgG, IgM, IgA1, IgA2 등의 IgA, IgD, Ig 등을 들 수 있다. 모노클로날 항체의 아이소타입 및 서브클래스는, 예를 들어, 옥털로니법, ELISA 법, RIA 법 등으로 결정할 수 있다. 본 발명의 모노클로날 항체로는, 비인간 동물 유래의 항체 (비인간 동물 항체), 인간 항체, 키메라화 항체 (「키메라 항체」 라고도 한다), 인간화 항체 등을 들 수 있고, 바람직하게는 인간 항체를 사용할 수 있다. 본 발명의 항체의 범위에는, 항체의 변이체 (후술하는 「변이 항체」) 도 포함되고, 예를 들어, 인간 항체의 범위에는, 인간 변이 항체도 포함된다. 비인간 동물 항체로는, 포유류, 조류 등의 척추 동물에서 유래하는 항체 등을 들 수 있다. 포유류 유래의 항체로는, 마우스 항체, 래트 항체 등의 설치류 유래의 항체 등을 들 수 있다. 조류 유래의 항체로는, 닭 항체 등을 들 수 있다. 키메라화 항체로는, 비인간 동물 항체 유래의 가변 영역과 인간 항체 (인간 면역 글로불린) 정상 영역을 결합하여 이루어지는 항체 등을 들 수 있지만, 그것들에 한정되는 것은 아니다. 인간화 항체로는, 비인간 동물 항체의 가변 영역 중의 CDR 을 인간 항체 (인간 면역 글로불린의 가변 영역) 에 이식한 것, CDR 에 더하여 비인간 동물 항체의 프레임워크 영역의 서열도 일부 인간 항체에 이식한 것, 그들 중 어느 비인간 동물 항체 유래의 1 개 또는 2 개 이상의 아미노산을 인간형의 아미노산으로 치환된 것 등을 들 수 있지만, 그것들에 한정되는 것은 아니다.

항체는, 공지된 여러 가지 방법으로 제조할 수 있다. 공지된 방법으로서, 하이브리도마를 사용하는 방법이나 세포 면역법 등에 의해 제조하고, 유전자 재조합의 수법에 의해 제조할 수 있다. 또, 인간 항체 라이브러리에서 선별한 파지 디스플레이 유래의 인간 항체를 취득하는 방법도 알려져 있다. 예를 들어, 인간 항체의 가변 영역을 scFv 로서 파지 표면에 발현시켜, 항원에 결합하는 파지를 선택하는 파지 디스플레이법을 사용할 수 있다. 항원에 결합함으로써 선택된 파지의 유전자를 해석함으로써, 항원에 결합하는 인간 항체의 가변 영역을 코드하는 DNA 서열을 결정할 수 있다. 항원에 결합하는 scFv 의 DNA 서열이 분명해지면, 당해 서열을 갖는 발현 벡터를 제조하고, 적당한 숙주에 도입하여 발현시킴으로써 인간 항체를 취득할 수 있다 (WO92/01047, WO92/20791, WO93/06213, WO93/11236, WO93/19172, WO95/01438, WO95/15388, Annu. Rev. Immunol (1994)12, 433 - 455). 이와 같이 하여 얻어진 고활성을 갖는 항체를 리드 항체로서 사용하고, 그 리드 항체를 코드하는 유전자를 변이시켜, 보다 고활성의 변이체 (후술하는 「변이 항체」) 를 제조할 수도 있다.

본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체 또는 그 항원 결합 단편의 중사슬에 포함되는 CDRH1 ∼ CDRH3 으로는, 바람직하게는, 서열 번호 1 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 2 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 그리고, 서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열, 혹은, 서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열에 있어서 6 번째의 아미노산이 N(Asn) 인 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3 의 조합을 들 수 있다. 보다 바람직하게는, 서열 번호 13 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 NYA-0001 중사슬 가변 영역, 서열 번호 15 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 NYA-0082 중사슬 가변 영역, 서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 으로 이루어지는 NYA-2023 중사슬 가변 영역, 서열 번호 19 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 으로 이루어지는 NYA-2027 중사슬 가변 영역, 서열 번호 20 으로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 으로 이루어지는 NYA-1143 중사슬 가변 영역, 서열 번호 17 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 으로 이루어지는 NYA-1163 중사슬 가변 영역, 서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 으로 이루어지는 NYA-2023 중사슬 가변 영역, 서열 번호 19 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 으로 이루어지는 NYA-2027 중사슬 가변 영역, 서열 번호 22 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 으로 이루어지는 NYA-2035 중사슬 가변 영역, 서열 번호 24 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 으로 이루어지는 NYA-2044 중사슬 가변 영역, 서열 번호 25 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 으로 이루어지는 NYA-2045 중사슬 가변 영역, 서열 번호 26 으로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 으로 이루어지는 NYA-2047 중사슬 가변 영역, 서열 번호 27 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 으로 이루어지는 NYA-2048 중사슬 가변 영역, 서열 번호 28 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 으로 이루어지는 NYA-2060 중사슬 가변 영역, 서열 번호 53 으로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 으로 이루어지는 NYA-2061 중사슬 가변 영역, 또는 서열 번호 21 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 으로 이루어지는 NYA-2143 중사슬 가변 영역에 포함되는 CDRH1 ∼ CDRH3 의 조합을 들 수 있다. 또한, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 으로 이루어지는 NYA-3061 중사슬 가변 영역에 포함되는 CDRH1 ∼ CDRH3 의 조합, 및 서열 번호 71 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 으로 이루어지는 NYA-1154 중사슬 가변 영역에 포함되는 CDRH1 ∼ CDRH3 의 조합을 들 수 있다.

본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체 또는 그 항원 결합 단편의 경사슬에 포함되는 CDRL1 ∼ CDRL3 으로는, 바람직하게는, 서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열, 혹은, 서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서 7 번째의 아미노산이 W(Trp) 및/혹은 8 번째의 아미노산이 K(Lys) 인 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, 서열 번호 5 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 그리고, 서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열, 혹은, 서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열에 있어서 2 번째의 아미노산이 A(Ala) 혹은 S(Ser) 인 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 의 조합을 들 수 있다.

보다 바람직하게는, 서열 번호 14 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 NYA-0001 경사슬 가변 영역, 서열 번호 16 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 NYA-0082 경사슬 가변 영역, 서열 번호 20 으로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-1143 경사슬 가변 영역, 서열 번호 26 으로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-1163 경사슬 가변 영역, 서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2023 경사슬 가변 영역, 서열 번호 19 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2027 경사슬 가변 영역, 서열 번호 22 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2035 경사슬 가변 영역, 서열 번호 24 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2044 경사슬 가변 영역, 서열 번호 25 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2045 경사슬 가변 영역, 서열 번호 26 으로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2047 경사슬 가변 영역, 서열 번호 27 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2048 경사슬 가변 영역, 서열 번호 28 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2060 경사슬 가변 영역, 서열 번호 29 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2061 경사슬 가변 영역, 또는 서열 번호 21 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2143 경사슬 가변 영역에 포함되는 CDRL1 ∼ CDRL3 의 조합을 들 수 있다. 또한, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 161 ∼ 271 로 이루어지는 NYA-3061 경사슬 가변 영역에 포함되는 CDRL1 ∼ CDRL3 의 조합, 및 서열 번호 71 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-1154 경사슬 가변 영역에 포함되는 CDRL1 ∼ CDRL3 의 조합을 들 수 있다.

본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체 또는 그 항원 결합 단편의 중사슬에 포함되는 CDRH1 ∼ CDRH3 및 경사슬에 포함되는 CDRL1 ∼ CDRL3 으로는, 바람직하게는, 서열 번호 1 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH1, 서열 번호 2 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRH2, 서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열, 혹은, 서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열에 있어서 6 번째의 아미노산이 N(Asn) 인 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3, 서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열, 혹은, 서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서 7 번째의 아미노산이 W(Trp) 및/혹은 8 번째의 아미노산이 K(Lys) 인 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL1, DNN (도 11 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 5) 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL2, 그리고, 서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열, 혹은, 서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열에 있어서 2 번째의 아미노산이 A(Ala) 혹은 S(Ser) 인 아미노산 서열로 이루어지는 CDRL3 의 조합을 들 수 있다. 보다 바람직하게는, 서열 번호 13 및 14 로 각각 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 NYA-0001 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, 서열 번호 20 으로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 및 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-1143 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, 서열 번호 17 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 및 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-1163 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, 서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 및 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2023 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, 서열 번호 19 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 및 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2027 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, 서열 번호 22 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 및 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2035 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, 서열 번호 24 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 및 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2044 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, 서열 번호 25 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 및 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2045 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, 서열 번호 26 으로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 및 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2047 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, 서열 번호 27 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 및 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2048 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, 서열 번호 28 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 및 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2060 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, 서열 번호 29 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 및 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2061 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, 또는 서열 번호 21 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 및 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-2143 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역에, 각각 포함되는 CDRH1 ∼ CDRH3 및 CDRL1 ∼ CDRL3 의 조합을 들 수 있다. 또한, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 및 161 ∼ 271 로 이루어지는 NYA-3061 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역에, 각각 포함되는 CDRH1 ∼ CDRH3 및 CDRL1 ∼ CDRL3 의 조합, 및 서열 번호 71 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 및 156 ∼ 266 으로 이루어지는 NYA-1154 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역에 포함되는 CDRH1 ∼ CDRH3 및 CDRL1 ∼ CDRL3 의 조합을 들 수 있다.

본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체 또는 그 항원 결합 단편의 중사슬 가변 영역으로는, 상기 중사슬 CDR 또는 그들의 조합을 포함하는 것을, 바람직한 예로서 들 수 있고, 보다 바람직하게는, NYA-0001 중사슬 가변 영역, NYA-0082 중사슬 가변 영역, NYA-1143 중사슬 가변 영역, NYA-1163 중사슬 가변 영역, NYA-2023 중사슬 가변 영역, NYA-2027 중사슬 가변 영역, NYA-2035 중사슬 가변 영역, NYA-2044 중사슬 가변 영역, NYA-2045 중사슬 가변 영역, NYA-2047 중사슬 가변 영역, NYA-2048 중사슬 가변 영역, NYA-2060 중사슬 가변 영역, NYA-2061 중사슬 가변 영역, NYA-2143 중사슬 가변 영역, NYA-3061 중사슬 가변 영역, 및 NYA-1154 중사슬 가변 영역을 예시할 수 있다. 각각의 중사슬 가변 영역의 아미노산 서열은 상기와 같다.

본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체 또는 그 항원 결합 단편의 경사슬 가변 영역으로는, 상기 경사슬 CDR 또는 그들의 조합을 포함하는 것을, 바람직한 예로서 들 수 있고, 보다 바람직하게는, NYA-0001 경사슬 가변 영역, NYA-0082 경사슬 가변 영역, NYA-1143 경사슬 가변 영역, NYA-1163 경사슬 가변 영역, NYA-2023 경사슬 가변 영역, NYA-2027 경사슬 가변 영역, NYA-2035 경사슬 가변 영역, NYA-2044 경사슬 가변 영역, NYA-2045 경사슬 가변 영역, NYA-2047 경사슬 가변 영역, NYA-2048 경사슬 가변 영역, NYA-2060 경사슬 가변 영역, NYA-2061 경사슬 가변 영역, NYA-2143 경사슬 가변 영역, NYA-3061 경사슬 가변 영역, 및 NYA-1154 경사슬 가변 영역을 예시할 수 있다. 각각의 경사슬 가변 영역의 아미노산 서열은 상기와 같다.

본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체 또는 그 항원 결합 단편의 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역으로는, 상기 중사슬 및 경사슬의 CDR 또는 그들의 조합을 포함하는 것을, 바람직한 예로서 들 수 있고, 보다 바람직하게는, NYA-0001 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, NYA-0082 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, NYA-1143 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, NYA-1163 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, NYA-2023 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, NYA-2027 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, NYA-2035 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, NYA-2044 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, NYA-2045 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, NYA-2047 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, NYA-2048 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, NYA-2060 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, NYA-2061 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역, NYA-2143 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역의 조합, NYA-3061 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역의 조합, 및 NYA-1154 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역의 조합을 예시할 수 있다.

본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체 또는 그 항원 결합 단편의 중사슬로는, 상기 바람직한 또는 보다 바람직한 중사슬 가변 영역을 포함하는 것을, 바람직한 예로서 들 수 있고, 보다 바람직하게는, NYA-0001 중사슬, NYA-0082 중사슬, NYA-1143 중사슬, NYA-1163 중사슬, NYA-2023 중사슬, NYA-2027 중사슬, NYA-2035 중사슬, NYA-2044 중사슬, NYA-2045 중사슬, NYA-2047 중사슬, NYA-2048 중사슬, NYA-2060 중사슬, NYA-2061 중사슬, NYA-2143 중사슬, NYA-3061 중사슬, 및 NYA-1154 중사슬을 예시할 수 있다.

본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체 또는 그 항원 결합 단편의 경사슬로는, 상기 바람직한 또는 보다 바람직한 경사슬 가변 영역을 포함하는 것을, 바람직한 예로서 들 수 있고, 보다 바람직하게는, NYA-0001 경사슬, NYA-0082 경사슬, NYA-1143 경사슬, NYA-1163 경사슬, NYA-2023 경사슬, NYA-2027 경사슬, NYA-2035 경사슬, NYA-2044 경사슬, NYA-2045 경사슬, NYA-2047 경사슬, NYA-2048 경사슬, NYA-2060 경사슬, NYA-2061 경사슬, NYA-2143 경사슬, NYA-3061 경사슬, 및 NYA-1154 경사슬을 예시할 수 있다.

본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체 또는 그 항원 결합 단편의 중사슬 및 경사슬로는, 상기 바람직한 또는 보다 바람직한 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역을 각각 포함하는 것을, 바람직한 예로서 들 수 있고, 보다 바람직하게는, NYA-0001, NYA-1143, NYA-1163, NYA-2023, NYA-2027, NYA-2035, NYA-2044, NYA-2045, NYA-2047, NYA-2048, NYA-2060, NYA-2061, NYA-2143, NYA-3061, 및 NYA-1154 의 중사슬 및 경사슬의 조합을 예시할 수 있다.

항체의 항원 결합 단편이란, 그 항체가 갖는 기능 중 적어도 항원 결합성을 유지하는 단편 또는 그 수식물을 의미한다. 이러한 항체의 기능으로는, 일반적으로는, 항원 결합 활성, 항원의 활성을 조절하는 활성, 항체 의존성 세포 상해 활성 및 보체 의존성 세포 상해 활성 등을 들 수 있다. 본 발명의 항체 등 및 본 발명의 항체 등을 포함하는 다중 특이적인 분자로 한 경우의 기능으로는, 예를 들어 T 세포의 리다이렉션, T 세포의 활성화, T 세포를 활성화하는 것에 의한 암세포의 세포 상해 활성을 들 수 있다.

항체의 항원 결합 단편으로는, 그 항체가 갖는 활성 중 적어도 항원 결합성을 유지하고 있는 그 항체의 단편이면 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, Fab, Fab', F(ab')₂, Fv, 중사슬 및 경사슬의 Fv 를 적당한 링커로 연결시킨 1 본쇄 Fv(scFv), 단일 도메인 항체 (sdAb) 등을 들 수 있지만, 그것들에 한정되는 것은 아니다. 링커 부분을 보유하는 scFv 와 같이, 본 발명의 항체의 항원 결합 단편 이외의 부분을 포함하는 분자도, 본 발명의 항체의 항원 결합 단편의 의미에 포함된다.

항체 단백질의 아미노 말단 및/또는 카르복실 말단의 아미노산이 1 혹은 수 개 또는 그 이상을 결실하여 이루어지고, 또한 그 항체가 갖는 기능의 적어도 일부를 유지하고 있는 분자도, 항체의 항원 결합 단편의 의미에 포함된다. 그러한 항체의 항원 결합 단편의 수식체도, 본 발명의 항체 혹은 그 항원 결합 단편, 또는 그 수식체 (후술) 에 포함된다.

본 발명의 항체 또는 그 항원 결합 단편의 하나의 양태는 scFv 이다. scFv 는, 항체의 중사슬 가변 영역과 경사슬 가변 영역을 폴리펩티드의 링커로 연결함으로써 얻어진다 (Pluckthun A. The Pharmacology of Monoclonal Antibodies113, Rosenburg 및 Moore 편, Springer Verlag, New York, 269 - 315(1994), Nature Biotechnology (2005), 23, 1126 - 1136). 또, 2 개의 scFv 를 폴리펩티드 링커로 결합시켜 제조되는 탠덤 scFv 도 이중 특이성 분자로서 사용할 수 있다. 또한 3 개 이상의 scFv 로 이루어지는 트리아바디 등도 다중 특이성 분자로서 사용할 수 있다.

HLA/NY-ESO 에 특이적인 scFv (「항 HLA/NY-ESO scFv」 라고도 불린다) 로는, 바람직하게는 상기 CDRH1 ∼ CDRH3 및 CDRL1 ∼ CDRL3 을 포함하는 것, 보다 바람직하게는 상기 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역을 포함하는 것, 보다 한층 바람직하게는 NYA-0001 (서열 번호 30) 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 266), NYA-0082 (서열 번호 15 로 나타내는 아미노산 서열 및 서열 번호 16 으로 나타내는 아미노산 서열을 포함한다), NYA-1143 (서열 번호 20 으로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 266), NYA-1163 (서열 번호 17 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 266), NYA-2023 (서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 266), NYA-2027 (서열 번호 19 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 266), NYA-2035 (서열 번호 22 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 266), NYA-2044 (서열 번호 24 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 266), NYA-2045 (서열 번호 25 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 266), NYA-2047 (서열 번호 26 으로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 266), NYA-2048 (서열 번호 27 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 266), NYA-2060 (서열 번호 28 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 266), NYA-2061 (서열 번호 29 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 266), 및 NYA-2143 (서열 번호 21 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 266) 을 각각 예시할 수 있다. 또한, NYA-3061 (서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 271), 및 NYA-1154 (서열 번호 71 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 266) 를 예시할 수 있다.

항 HLA/NY-ESO scFv 의 바람직한 양태에는 카르복실 말단측에 FLAG-His 태그가 융합한 것 (간단히 「태그 부가체」 라고도 불린다) 이 포함된다. 바람직한 태그 부가체로는, NYA-0001 태그 부가체 (서열 번호 30 의 아미노산 번호 20 ∼ 292), NYA-1143 태그 부가체 (서열 번호 20 의 아미노산 번호 20 ∼ 292), NYA-1163 태그 부가체 (서열 번호 17 의 아미노산 번호 20 ∼ 292), NYA-2023 태그 부가체 (서열 번호 18 의 아미노산 번호 20 ∼ 292), NYA-2027 태그 부가체 (서열 번호 19 의 아미노산 번호 20 ∼ 292), NYA-2035 태그 부가체 (서열 번호 22 의 아미노산 번호 20 ∼ 292), NYA-2044 태그 부가체 (서열 번호 24 의 아미노산 번호 20 ∼ 292), NYA-2045 태그 부가체 (서열 번호 25 의 아미노산 번호 20 ∼ 292), NYA-2047 태그 부가체 (서열 번호 26 의 아미노산 번호 20 ∼ 292), NYA-2048 태그 부가체 (서열 번호 27 의 아미노산 번호 20 ∼ 292), NYA-2060 태그 부가체 (서열 번호 28 의 아미노산 번호 20 ∼ 292), NYA-2061 태그 부가체 (서열 번호 29 의 아미노산 번호 20 ∼ 292), NYA-2143 태그 부가체 (서열 번호 21 의 아미노산 번호 20 ∼ 292), NYA-3061FLAG-His 태그 부가체 (서열 번호 56 의 아미노산 번호 21 ∼ 271 의 카르복실 말단에 서열 번호 22 의 아미노산 번호 267 ∼ 292 가 부가되어 이루어지는 아미노산 서열), 및 NYA-1154 태그 부가체 (서열 번호 71 의 아미노산 번호 21 ∼ 292) 를 들 수 있다.

그들 중, NYA-2023 및 그 태그 부가체, NYA-2047 및 그 태그 부가체, NYA-2048 및 그 태그 부가체, NYA-2060 및 그 태그 부가체, 그리고, NYA-2061 및 그 태그 부가체는, Fc 부가형 이중 특이성 분자에 있어서, 우수한 생물 활성, 물성 등을 갖고, 보다 바람직하다.

또, 항 HLA/NY-ESO scFv 및 그 태그 부가체를 숙주 세포에 있어서 발현시키는 경우, 그 아미노 말단에 시그널 펩티드를 부가시킬 수 있다. 시그널 펩티드가 부가한 항 HLA/NY-ESO scFv 태그 부가체의 아미노산 서열로는, 서열 번호 30, 20, 17 ∼ 19, 22, 24, 25, 26 ∼ 29, 21, 및 서열 번호 56 의 아미노산 번호 21 ∼ 271 의 카르복실 말단에 FLAG-His 태그 (서열 번호 22 의 아미노산 번호 267 ∼ 292) 가 부가되어 이루어지는 아미노산 서열을 들 수 있다.

scFv 는, 항체의 가변 영역을 1 본쇄 항체 (scFv) 로서 파지 표면에 발현시키고, 항원에 결합하는 파지를 선택하는 파지 디스플레이법 (Nature Biotechnology (2005), 23, (9), p.1105 - 1116) 에 의해 취득할 수 있다. 항원에 결합함으로써 선택된 파지의 유전자를 해석함으로써, 항원에 결합하는 인간 항체의 가변 영역을 코드하는 DNA 서열을 결정할 수 있다. 항원에 결합하는 scFv 의 DNA 서열이 분명해지면, 당해 서열을 갖는 발현 벡터를 제조하고, 적당한 숙주에 도입하여 발현시킴으로써 인간 항체를 취득할 수 있다 (WO92/01047, WO92/20791, WO93/06213, WO93/11236, WO93/19172, WO95/01438, WO95/15388, Annu. Rev. Immunol (1994)12, p.433 - 455, Nature Biotechnology (2005)23(9), p.1105 - 1116).

본 발명의 항체는, 단일의 중사슬 가변 영역을 갖고, 경사슬 서열을 갖지 않는 항체여도 된다. 이와 같은 항체는, 단일 도메인 항체 (single domain antibody : sdAb) 또는 나노바디 (nanobody) 라고 불리고 있고, 항원 결합능이 유지되어 있는 것이 보고되어 있다 (Muyldemans S. et. al., Protein Eng., (1994)7(9), 1129 - 35, Hamers-Casterman C. et. al., Nature (1993)363(6428), 446 - 448). 이들 항체도, 본 발명에 있어서의 항체의 항원 결합 단편의 의미에 포함된다.

또, 본 발명에는, 항체의 중사슬 및 경사슬의 전체 길이 서열을 적절한 링커를 사용하여 연결한 1 본쇄 이뮤노글로불린 (single chain immunoglobulin) 이 포함된다 (Lee, H - S, et. al., Molecular Immunology (1999)36, 61 - 71 ; Shirrmann, T. et. al., mAbs (2010), 2(1), 1 - 4). 이와 같은 1 본쇄 이뮤노글로불린은 이량체화함으로써, 본래는 사량체인 항체와 유사한 구조와 활성을 유지하는 것이 가능하다. 본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체는, 1 본쇄 이뮤노글로불린이어도 된다.

본 발명의 scFv 에 있어서, 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역이 디술파이드 결합하고 있어도 된다.

본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체는, HLA/NY-ESO 에 결합하면, 복수의 상이한 항체에서 유래하는 부분으로 구성되는 항체여도 되고, 예를 들어, 복수의 상이한 항체 사이에 중사슬 및/또는 경사슬을 교환한 것, 중사슬 및/또는 경사슬의 전체 길이를 교환한 것, 가변 영역만 또는 정상 영역만을 교환한 것, CDR 의 전부 또는 일부만을 교환한 것 등을 들 수 있다. 키메라화 항체의 중사슬 가변 영역과 경사슬 가변 영역은, 상이한 본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체에서 유래해도 된다. 인간화 항체의 중사슬 및 경사슬의 가변 영역 중의 중사슬 CDR1 내지 중사슬 CDR3 그리고 경사슬 CDR1 내지 경사슬 CDR3 은, 2 종 또는 그 이상의 본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체에서 유래해도 된다. 인간 항체의 중사슬 및 경사슬의 가변 영역 중의 중사슬 CDR1 내지 중사슬 CDR3 그리고 경사슬 CDR1 내지 경사슬 CDR3 은, 2 종 또는 그 이상의 본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체가 갖는 CDR 의 조합이어도 된다.

본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체에는, 본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체에 포함되는 아미노산 서열을 코드하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드의 상보 사슬과 스트린젠트한 조건하에서 하이브리다이즈하는 폴리뉴클레오티드에 포함되는 뉴클레오티드 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한, HLA/NY-ESO 에 결합하는 항체도 포함된다.

본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체 또는 그 항원 결합 단편의 중사슬 가변 영역에 포함되는 아미노산 서열 (바람직하게는, 서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 의 아미노산 서열, 서열 번호 69 또는 서열 번호 70 으로 나타내는 아미노산 서열, 서열 번호 39 로 나타내는 아미노산 서열, 또는 서열 번호 57, 서열 번호 60 혹은 서열 번호 61 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 의 아미노산 서열), 및/또는 경사슬 가변 영역에 포함되는 아미노산 서열 (바람직하게는, 서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 156 ∼ 266 의 아미노산 서열, 서열 번호 28 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 156 ∼ 266 의 아미노산 서열, 서열 번호 23 으로 나타내는 아미노산 서열, 서열 번호 57 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 161 ∼ 271 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 60 혹은 서열 번호 61 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 156 ∼ 266 의 아미노산 서열) 과, 90 ％, 91 ％, 92 ％, 93 ％, 94 ％, 95 ％, 96 ％, 97 ％, 98 ％, 또는 99 ％ 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 또한 HLA/NY-ESO 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이어도 된다.

경사슬 가변 영역의 위치와 길이는, IMGT 의 정의에 의해 결정하는 경우와 비교하여, IMGT 와는 상이한 정의 (예를 들어, Kabat, Chothia, AbM, contact 등) 를 사용하여 결정한 경우, IMGT 의 정의에 의해 결정한 그 경사슬 가변 영역 아미노산 서열의 카르복실 말단에, 추가로, 1 개 또는 2 개 이상의 아미노산, 예를 들어, 아르기닌이나 글리신이 포함되는 경우가 있다. 이와 같은 경사슬 가변 영역을 갖는 항체 또는 그 결합 단편도 본 발명의 항체 또는 그 결합 단편에 포함된다.

본 발명의 항체 등으로는, 본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체의 결합 단편에 변이를 도입하여, HLA/NY-ESO, 특히 인간 및/또는 필리핀원숭이의 HLA/NY-ESO 에 대한 결합능을 최적화시킨 것이어도 된다. 변이를 도입하는 구체적인 방법으로서, 에러프론 PCR 법을 사용한 랜덤 돌연변이 유발법, NNK 라이브러리를 사용한 부위 특이적 아미노산 변이 도입, 구조 정보를 이용한 부위 특이적 변이 도입, 및 그것들 조합을 들 수 있다.

3-2. 항 HLA/NY-ESO 항체의 변이체 (변이 항체)

본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체의 변이 항체에는, 바람직하게는, 단백질의 분해 혹은 산화에 대한 감수성의 저하, 생물 활성이나 기능의 유지, 개선 혹은 저하나 변화의 억제, 항원 결합능의 개선 혹은 조절, 또는 물리 화학적 성질 혹은 기능적 성질의 부여 등이 이루어질 수 있다. 단백질은, 그 표면에 있는 특정한 아미노산 측사슬이 변화하여 당해 단백질의 기능이나 활성이 변화하는 것이 알려지고, 그러한 예에는, 아스파라긴 측사슬의 탈아미드화, 아스파르트산 측사슬의 이성화 등이 포함된다. 그러한 아미노산 측사슬의 변화를 방지하기 위해 다른 아미노산으로 치환한 것도, 본 발명의 변이 항체의 범위에 포함된다.

본 발명의 변이 항체의 예로서, 항체가 갖는 아미노산 서열에 있어서 보존적 아미노산 치환되어 이루어지는 아미노산 서열을 갖는 항체를 들 수 있다. 보존적 아미노산 치환이란, 아미노산 측사슬에 관련이 있는 아미노산 그룹 내에서 발생하는 치환이다.

바람직한 아미노산 그룹은, 이하와 같다 : 산성 그룹 = 아스파르트산, 글루탐산 ; 염기성 그룹 = 리신, 아르기닌, 히스티딘 ; 비극성 그룹 = 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판 ; 및 비대전 극성 패밀리 = 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 세린, 트레오닌, 티로신. 다른 바람직한 아미노산 그룹은 다음과 같다 : 지방족 하이드록시 그룹 = 세린 및 트레오닌 ; 아미드 함유 그룹 = 아스파라긴 및 글루타민 ; 지방족 그룹 = 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신 ; 그리고 방향족 그룹 = 페닐알라닌, 트립토판 및 티로신. 이러한 변이 항체에 있어서의 아미노산 치환은, 원래의 항체가 갖는 항원 결합 활성을 저하시키지 않는 범위에서 실시하는 것이 바람직하다.

NYA-2023 등의 본 발명의 항체가 갖는 아미노산 서열에 있어서 보존적 아미노산 치환 및/또는 그 밖의 변이가 이루어진 아미노산 서열을 갖고, 또한, HLA/NY-ESO 에 결합하는 변이 항체, 그들의 항원 결합 단편, 그것들을 포함하는 분자 등 ; NYA-2023 등을 포함하는 본 발명의 항체 유래의 CDRH1 내지 CDRH3 및 CDRL1 내지 CDRL3 중 어느 아미노산 서열에 있어서 보존적 아미노산 치환 및/또는 그 밖의 변이가 이루어진 아미노산 서열을 갖고, 또한, HLA/NY-ESO 에 결합하는 그 CDR 을 포함하는 키메라화 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 그들의 항원 결합 단편, 그것들을 포함하는 분자 등도 본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체, 그 항원 결합 단편, 그 변이체 (변이 항체 또는 그 항원 결합 단편), 또는 본 발명의 분자에 포함된다.

3-3. 항 HLA/NY-ESO 항체의 결합 단편

본 발명의 하나의 양태로서, 본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체의 항원 결합 단편 (이하, 간단히 「결합 단편」 이라고 한다) 을 제공한다. 본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체의 결합 단편에는, 키메라화 항체, 인간화 항체, 또는 인간 항체의 결합 단편이 포함된다. 항체의 결합 단편이란, 그 항체가 갖는 기능 중 적어도 항원 결합성을 유지하는 단편 또는 그 수식물을 의미한다. 이러한 항체의 기능으로는, 일반적으로는, 항원 결합 활성, 항원의 활성을 조절하는 활성 (예를 들어 아고니스트 활성), 항원을 세포내에 내재화시키는 활성, 항원과 상호 작용하는 물질과의 상호 작용을 저해 혹은 촉진하는 활성 등을 들 수 있다.

항체의 결합 단편으로는, 그 항체가 갖는 활성 중 적어도 항원 결합성을 유지하고 있는 그 항체의 단편이면 특별히 한정되지 않는다. 이와 같은 항체의 결합 단편으로서 예를 들어, Fab, Fab', F(ab')₂Fab 경사슬의 카르복실 말단과 Fab 중사슬의 아미노 말단이 적당한 링커로 연결된 1 본쇄 Fab(scFab), Fv, 중사슬 및 경사슬의 Fv 가 적당한 링커로 연결된 1 본쇄 Fv(scFv), 단일의 중사슬 가변 영역을 갖고 경사슬 서열을 갖지 않는 단일 도메인 항체 (sdAb), 또는 나노바디 (nanobody) 라고도 불린다. (Muyldemans S. et. al., Protein Eng., (1994) 7(9), 1129 - 35, Hamers-Casterman C. et. al., Nature(1993)363(6428), 446 - 448)] 등을 들 수 있지만, 그것들에 한정되는 것은 아니다. 링커 부분을 보유하는 scFab, scFv 와 같이, 본 발명의 항체의 결합 단편 이외의 부분을 포함하는 분자도, 본 발명의 항체의 결합 단편의 의미에 포함된다.

3-4. 항 HLA/NY-ESO 항체 또는 그 결합 단편의 수식체, 복합체

본 발명은, 항체 또는 그 결합 단편의 수식체를 제공한다. 본 발명의 항체 또는 그 결합 단편의 수식체란, 본 발명의 항체 또는 그 결합 단편에 화학적 또는 생물학적인 수식이 실시되어서 이루어지는 것을 의미한다. 화학적인 수식체에는, 아미노산 골격에 대한 화학 부분의 결합, N-결합 또는 O-결합 탄수화물 사슬의 화학 수식체 등이 포함된다. 생물학적인 수식체에는, 번역 후 수식 (예를 들어, N-결합 또는 O-결합에 대한 당사슬 부가, 아미노 말단 영역 또는 카르복실 말단 영역의 프로세싱, 탈아미드화, 아스파르트산의 이성화, 메티오닌의 산화) 된 것, 원핵 생물 숙주 세포를 사용하여 발현시킴으로써 아미노 말단에 메티오닌 잔기가 부가된 것 등이 포함된다. 또, 본 발명의 항체 또는 항원의 검출 또는 단리를 가능하게 하기 위해서 표지된 것, 예를 들어, 효소 표지체, 형광 표지체, 어피니티 표지체도 이러한 수식물의 의미에 포함된다. 이와 같은 본 발명의 항체 또는 그 결합 단편의 수식물은, 원래의 본 발명의 항체 또는 그 결합 단편의 안정성 및 혈중 체류성의 개선, 항원성의 저감, 이러한 항체 또는 항원의 검출 또는 단리 등에 유용하다.

화학적 수식체에 포함되는 화학 부분으로는, 폴리에틸렌글리콜 (PEG), 에틸렌글리콜/프로필렌글리콜 코폴리머, 카르복시메틸셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐알코올 등의 수용성 폴리머를 예시할 수 있다.

생물학적인 수식물로는, 효소 처리나 세포 처리 등에 의해 수식이 실시된 것, 유전자 재조합에 의해 태그 등 다른 펩티드가 부가된 융합체, 그리고 내인성 또는 외래성의 당사슬 수식 효소를 발현하는 세포를 숙주로서 조제된 것 등을 들 수 있다.

이러한 수식은, 항체 또는 그 결합 단편에 있어서의 임의의 위치에, 또는 원하는 위치에 있어서 실시되어도 되고, 1 개 또는 2 개 이상의 위치에 동일 또는 2 종 이상의 상이한 수식이 이루어져도 된다.

그러나, 이들 중사슬 서열의 결실, 혹은, 중사슬 또는 경사슬 서열의 수식은, 항체의 항원 결합능 및 이펙터 기능 (보체의 활성화나 항체 의존성 세포 상해 작용 등) 에는 그다지 영향을 미치지 않는다.

따라서, 본 발명에는 당해 결실 또는 수식을 받은 항체도 포함된다. 예를 들어, 중사슬 카르복실 말단에 있어서 1 또는 2 개의 아미노산이 결실된 결실체 (Journal of Chromatography A ; 705 ; 129 - 134(1995)), 중사슬 카르복실 말단의 글리신, 리신의 2 아미노산 잔기가 결실되어, 새롭게 카르복실 말단에 위치하는 프롤린 잔기가 아미드화된 당해 결실체 (Analytical Biochemistry, 360 : 75 - 83(2007)), 항체의 중사슬 또는 경사슬의 아미노 말단의 글루타민 또는 글루탐산 잔기가 피로글루타밀화 수식된 항체 (국제 특허공개 WO2013/147153 호) 등을 들 수 있다 (그것들을 합쳐서 「결실체」 라고 부른다). 단, 항원 결합능 및 이펙터 기능이 유지되고 있는 한, 본 발명에 관련된 항체의 중사슬 및 경사슬의 카르복실 말단의 결실체는 상기의 종류에 한정되지 않는다. 본 발명에 관련된 항체가 2 개 이상의 사슬 (예를 들어 중사슬) 을 포함하는 경우, 당해 2 개 이상의 사슬 (예를 들어 중사슬) 은, 완전 길이 및 상기의 결실체로 이루어지는 군에서 선택되는 중사슬 중 어느 1 종이어도 되고, 어느 2 종을 조합한 것이어도 된다. 각 결실체의 양비 또는 분자수비는 본 발명에 관련된 항체를 산생하는 포유류 배양 세포의 종류 및 배양 조건에 영향을 받을 수 있지만, 본 발명에 관련된 항체의 주성분으로는 2 개의 중사슬의 쌍방에서 카르복실 말단의 1 개의 아미노산 잔기가 결실되어 있는 경우를 들 수 있다.

또한, 본 발명의 항체 또는 그 항원 결합 단편 (본 발명의 다중 특이적 항체에 포함되는 것 등) 에, 발현 벡터 및/또는 시그널 서열 등에서 유래하는 1 내지 수 개의 아미노산이 아미노 말단 및/또는 카르복실 말단에 부가되어 (또한 그 일부 또는 전부가 상기와 같이 수식되어) 있어도, 원하는 항원 결합 활성이 유지되어 있으면, 본 발명의 항체의 수식체 또는 그 항원 결합 단편의 수식체의 범위에 포함되고, 그러한 항체 또는 항원 결합 단편의 수식체를 포함하는 다중 특이적 항체도 본 발명의 범위에 포함된다.

본 발명에 있어서 「항체 또는 그 결합 단편」 은 「항체 또는 그 항원 결합 단편의 수식체」 도 그 의미에 포함하는 것이다. 또, 본 발명의 다중 특이적 항체에 포함되는 「항체 또는 그 항원 결합 단편」 은 이러한 「항체 또는 그 항원 결합 단편의 수식체」 도 그 의미에 포함하는 것이다.

또, 본 발명의 항체에 결합하고 있는 당사슬 수식을 조절하는 것 (글리코실화, 탈푸코오스화 등) 에 의해, 항체 의존성 세포 상해 활성을 증강시키는 것이 가능하다. 항체의 당사슬 수식의 조절 기술로는, 국제 특허공개 WO99/54342호, WO00/61739호, WO02/31140호 등이 알려져 있지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에는, 상기 서술한 항체와 다른 분자가 링커로 연결된 복합체 (Immunoconjugate) 도 포함된다. 그 항체가 방사성 물질이나 약리 작용을 갖는 화합물 (약물) 과 결합하고 있는 항체-약물 복합체의 예로는, ADC (Antibody-Drug Conjugate) 를 들 수 있다 ((Methods Mol Biol.(2013)1045 : 1 - 27 ; Nature Biotechnology(2005)23, p.1137 - 1146).

또한 본 발명에는, 이들 항체와 다른 기능성 폴리펩티드를 연결된 복합체도 포함된다. 이와 같은 항체-펩티드 복합체의 예로는, 그 항체가 알부민 결합 폴리펩티드와 복합체를 들 수 있다 (Protein Eng Des Sel. (2012) (2) : 81 - 8).

상기 서술한 항체의 수식체, 당사슬 수식이 조절된 항체, 복합체는, 본 발명의 항체에 포함되고, 상기 서술한 항체의 수식체, 당사슬 수식이 조절된 항체, 복합체의 결합 단편은, 본 발명의 항체의 결합 단편에 포함된다.

4. 항체의 산생 방법

본 발명의 항체는, 예를 들어, 중사슬 가변 영역을 코드하는 DNA 또는 경사슬 가변 영역을 코드하는 DNA 를 발현 벡터에 삽입하고, 발현용의 숙주 세포를 그 벡터로 형질 전환하고, 숙주 세포를 배양함으로써, 리콤비넌트 항체로서 세포에 산생시킬 수 있다.

항체를 코드하는 DNA 는, 중사슬 가변 영역을 코드하는 DNA 와 중사슬 정상 영역을 코드하는 DNA 를 연결함으로써 중사슬을 코드하는 DNA 가 얻어지고, 또한 경사슬 가변 영역을 코드하는 DNA 와 경사슬 정상 영역을 코드하는 DNA 를 연결함으로써 경사슬을 코드하는 DNA 가 얻어진다.

본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체는, 상기의 중사슬을 코드하는 DNA 및 경사슬을 코드하는 DNA 를 발현 벡터에 삽입하고, 숙주 세포를 그 벡터로 형질 전환하고, 그 숙주 세포를 배양하여 산생시킬 수 있다. 이 때, 상기의 중사슬을 코드하는 DNA 및 경사슬을 코드하는 DNA 를 동일한 발현 벡터에 도입하고, 그 벡터를 사용하여 숙주 세포를 형질 전환해도 되고, 중사슬을 코드하는 DNA 와 경사슬을 코드하는 DNA 를 각각의 벡터에 삽입하고, 2 개의 벡터를 사용하여 숙주 세포를 형질 전환해도 된다. 이 때, 중사슬 정상 영역을 코드하는 DNA 및 경사슬 정상 영역을 코드하는 DNA 를 미리 도입한 벡터에 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역을 코드하는 DNA 를 도입해도 된다. 또, 그 벡터는 숙주 세포로부터의 항체의 분비를 촉진하는 시그널 펩티드를 코드하는 DNA 를 포함하고 있어도 되고, 이 경우, 시그널 펩티드를 코드하는 DNA 와 항체를 코드하는 DNA 를 인프레임으로 연결해 둔다. 항체가 산생된 후에 시그널 펩티드를 제거함으로써, 항체를 성숙 단백질로서 얻을 수 있다.

이 때, 중사슬 가변 영역을 코드하는 DNA, 경사슬 가변 영역을 코드하는 DNA, 중사슬 가변 영역을 코드하는 DNA 및 중사슬 정상 영역을 코드하는 DNA 를 연결한 DNA, 경사슬 가변 영역을 코드하는 DNA 와 경사슬 정상 영역을 코드하는 DNA 를 연결한 DNA 를 프로모터, 인핸서, 폴리아데닐화 시그널 등의 엘리먼트와 기능적으로 연결해도 된다. 여기서 기능적으로 연결이란, 엘리먼트가 그 기능을 하도록 연결하는 것을 말한다.

발현 벡터는, 동물 세포, 세균, 효모 등의 숙주 중에서 복제 가능한 것이면 특별히 한정되지 않고, 예를 들어, 공지된 플라스미드, 파지 등을 들 수 있다. 발현 벡터의 구축에 사용되는 벡터로는, 예를 들어, pcDNA (상표) (ThermoFisher SCIENTIFIC 사), Flexi (등록상표) 벡터 (프로메가사), pUC19, pUEX2 (아머샴사 제조), pGEX-4T, pKK233-2 (파마시아사 제조), pMAM-neo (클론텍사 제조) 등을 들 수 있다. 숙주 세포로는, 대장균, 고초균 등의 원핵 세포도 효모, 동물 세포 등의 진핵 세포도 사용할 수 있지만, 진핵 세포를 사용하는 것이 바람직하다. 예를 들어, 동물 세포로서, 인간 태아 신세포주인 HEK293 세포, 차이니즈·햄스터·난소 (CHO) 세포 등을 사용하면 된다. 발현 벡터는 공지된 방법으로 숙주 세포에 도입하여, 숙주 세포를 형질 전환하면 된다. 예를 들어, 일렉트로포레이션법, 인산칼슘 침전법, DEAE-덱스트란 트랜스펙션법 등을 들 수 있다. 산생된 항체는, 통상적인 단백질에서 사용되고 있는 분리, 정제 방법을 사용하여 정제할 수 있다. 예를 들어, 어피니티·크로마토그래피, 그 밖의 크로마토그래피, 필터, 한외 여과, 염석, 투석 등을 적절히 선택하여, 조합하면 된다.

5. HLA/NY-ESO 에 결합하는 다중 특이적 항체

본 발명의 다중 특이적 항체는, 본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체 또는 그 항원 결합 단편을 포함한다. 본 발명의 다중 특이적 항체는, 바람직하게는, 2 이상의 항원 결합 부위를 갖는 다중 특이적 항체이다. 즉, 1 개의 분자 상의 2 개 이상의 서로 상이한 에피토프 또는 2 개 이상의 분자 상의 서로 상이한 에피토프에 결합하는 것이 가능한 다중 특이적 항체이고, 복수의 서로 상이한 항원 결합 단편을 감싼다. 이와 같은 다중 특이적 항체에는, IgG 형 다중 특이적 항체, 2 종류 이상의 가변 영역을 갖는 다중 특이적 항체, 예를 들어 탠덤 scFv(taFv), 1 본쇄 다이아바디, 다이아바디 및 트리아바디와 같은 항체 단편, 공유 결합 또는 비공유 결합하여 연결되어 있는 항체 단편을 포함하지만, 이들에 한정되지 않는다. 다중 특이적 항체는 Fc 를 포함하고 있어도 된다.

본 발명의 다중 특이적 항체는, 본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체 또는 그 항원 결합 단편에 더하여, 1 개 또는 2 개 이상의 추가적인 항체 또는 그 항체의 항원 결합 단편을 포함해도 된다. 추가적인 항체의 항원 결합 단편으로는, 예를 들어, Fab, F(ab)', Fv, scFv, sdAb 를 들 수 있다.

본 발명의 바람직한 다중 특이적 항체는, 추가로, 항 CD3 항체 또는 그 항원 결합 단편을 포함하고, CD3 에도 특이적으로 결합한다.

본 발명의 다중 특이적 항체에 포함되는 항 CD3 항체 또는 그 항원 결합 단편은, 인간 CD3 에 결합하는 항체 또는 그 결합 단편이면 특별히 한정되는 것은 아니지만, 바람직하게는 필리핀원숭이 등의 비인간 영장류의 CD3 에도 결합한다. 보다 바람직한 항 CD3 항체 또는 그 항원 결합 단편으로는, 서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 CDRH1, 서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 CDRH2, 서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 CDRH3, 서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역 CDRL1, RDD (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역 CDRL2, 및 서열 번호 12 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역 CDRL3 을 포함하여 이루어지는 항체 또는 그 항원 결합 단편을 예시할 수 있다.

그 CDRH1 ∼ CDRH3 및 CDRL1 ∼ CDRL3 을 포함하는 보다 바람직한 항체 또는 그 항원 결합 단편으로는, 서열 번호 46 으로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 2 ∼ 119 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7034 중사슬 가변 영역, 서열 번호 47 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 2 ∼ 119 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7036 중사슬 가변 영역, 서열 번호 48 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 2 ∼ 119 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7085 중사슬 가변 영역, 서열 번호 49 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 2 ∼ 119 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7088 중사슬 가변 영역, 서열 번호 140 으로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 2 ∼ 119 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7093 중사슬 가변 영역, 서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 272 ∼ 389 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7096 중사슬 가변 영역, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 277 ∼ 394 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7096 중사슬 가변 영역, 서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 277 ∼ 394 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7097 중사슬 가변 영역을 포함하여 이루어지는 항체 또는 그 항원 결합 단편을 예시할 수 있다.

또, 그 CDRH1 ∼ CDRH3 및 CDRL1 ∼ CDRL3 을 포함하는 보다 바람직한 항체 또는 그 항원 결합 단편으로는, 서열 번호 46 으로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 135 ∼ 243 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7034 경사슬 가변 영역, 서열 번호 47 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 135 ∼ 241 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7036 경사슬 가변 영역, 서열 번호 48 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 135 ∼ 241 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7085 경사슬 가변 영역, 서열 번호 49 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 135 ∼ 243 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7088 경사슬 가변 영역, 서열 번호 50 으로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 135 ∼ 243 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7093 경사슬 가변 영역, 서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 405 ∼ 511 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7096 경사슬 가변 영역, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 410 ∼ 516 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7096 경사슬 가변 영역, 서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 410 ∼ 516 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7097 경사슬 가변 영역을 포함하여 이루어지는 항체 또는 그 항원 결합 단편을 예시할 수 있다.

또, 그 CDRH1 ∼ CDRH3 및 CDRL1 ∼ CDRL3 을 포함하는 보다 바람직한 항체 또는 그 항원 결합 단편으로는, 서열 번호 46 으로 나타내는 아미노산 번호 2 ∼ 119 및 135 ∼ 243 으로 이루어지는 C3E-7034 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역의 조합, 서열 번호 47 로 나타내는 아미노산 번호 2 ∼ 119 및 135 ∼ 241 로 이루어지는 C3E-7036 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역의 조합, 서열 번호 51 로 나타내는 아미노산 번호 2 ∼ 119 및 135 ∼ 243 으로 이루어지는 C3E-7078 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역의 조합, 서열 번호 48 로 나타내는 아미노산 번호 2 ∼ 119 및 135 ∼ 241 로 이루어지는 C3E-7085 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역의 조합, 서열 번호 49 로 나타내는 아미노산 번호 2 ∼ 119 및 135 ∼ 243 으로 이루어지는 C3E-7088 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역의 조합, 서열 번호 50 으로 나타내는 아미노산 번호 2 ∼ 119 및 135 ∼ 243 으로 이루어지는 C3E-7093 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역의 조합, 서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 번호 272 ∼ 389 및 405 ∼ 511 로 이루어지는 C3E-7096 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역의 조합, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 번호 277 ∼ 394 및 410 ∼ 516 으로 이루어지는 C3E-7096 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역의 조합, 서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 번호 277 ∼ 394 및 410 ∼ 516 으로 이루어지는 C3E-7097 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역의 조합을 포함하여 이루어지는 항체 또는 그 항원 결합 단편을 예시할 수 있다.

또한, 그 CDRH1 ∼ CDRH3 및 CDRL1 ∼ CDRL3 을 포함하는 보다 바람직한 항체 또는 그 항원 결합 단편으로는, 서열 번호 46 으로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 2 ∼ 243 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7034scFv, 서열 번호 47 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 2 ∼ 241 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7036scFv, 서열 번호 51 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 2 ∼ 243 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7078scFv, 서열 번호 48 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 2 ∼ 241 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7085scFv, 서열 번호 49 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 2 ∼ 243 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7088scFv, 서열 번호 50 으로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 2 ∼ 243 의 아미노산 서열로 이루어지는 C3E-7093scFv, 및 그들의 scFv 중 어느 하나를 포함하는 항체 또는 항체의 결합 단편 등을 예시할 수 있다. CD3 에 특이적인 scFv (「항 CD3 scFv」 라고도 불린다) 의 바람직한 양태에는 카르복실 말단측에 FLAG-His 태그를 부가한 것 (간단히 「태그 부가체」 라고도 불린다) 이 포함된다. 바람직한 태그 부가체로는, C3E-7034 (서열 번호 46), C3E-7036 (서열 번호 47), C3E-7085 (서열 번호 48), C3E-7088 (서열 번호 49) 및 C3E-7093 (서열 번호 50) 을 예시할 수 있고, 보다 바람직하게는 C3E-7085 를 들 수 있다.

본 발명의 다중 특이성 분자의 바람직한 예로서, 이중 특이성 분자를 들 수 있다. 「이중 특이성」 이란, 동일 분자의 2 개의 서로 상이한 에피토프 또는 2 개 분자 상의 서로 상이한 에피토프에 결합하는 것이 가능한 것을 의미하고, 이와 같은 이중 특이성을 갖는 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 본 발명의 이중 특이성 분자는, HLA/NY-ESO 에 결합하고, 또한 CD3 에 결합한다.

본 발명의 이중 특이성 분자로서 이하의 구조 (포맷) 를 갖는 것을 들 수 있다.

Dual scFv 형의 이중 특이성 분자에서는, 상이한 에피토프에 결합하는 2 종의 scFv 가, 이량체의 Fc 의 일방과 각각 링커로 연결되거나 또는 링커 없이 직접 결합되어 있다. 혹은, 상이한 에피토프에 결합하는 2 종류의 scFv 가 각각 CH, CL 에 링커로 연결되고, 또한 이량체의 Fc 의 일방과 각각 링커로 연결되어 있다. 그 이중 특이성 분자는, 2 종류의 상이한 scFv 각각의 하류에 헤테로다이머를 형성하는 변이를 넣은 Fc 가 헤테로에 회합한 포맷이다. Dual scFv 형의 이중 특이성 분자를, Dual 형 이중 특이성 분자, 또는 간단히 Dual 형이라고 부른다 (도 7(7b)).

본 발명에 있어서는, 예를 들어, 항 HLA-A2/NY-ESO scFv 와 항 CD3scFv 로 이루어지는 Dual 형 이중 특이성 분자를 사용하면 된다.

혹은, 본 발명의 이중 특이성 분자로서, 상이한 에피토프에 결합하는 Fab 와 scFv 가, 이량체의 Fc 의 일방에 제 1 항체의 Fab, 다른 일방에 제 2 항체의 scFv 를, 링커를 통하여 결합시킨 이중 특이성 분자여도 된다. 그 이중 특이성 분자는, Fab 및 scFv 의 각각 하류에 헤테로다이머를 형성하는 변이를 넣은 Fc 가 헤테로에 회합한 포맷이다. 이와 같은 이중 특이성 분자를, Hybrid 형 이중 특이성 분자, 또는 Hybrid 형이라고 부른다 (도 7(7a)). 본 발명에 있어서는, 예를 들어, 항 HLA-A2/NY-ESO Fab 와 항 CD3scFv 로 이루어지는 Hybrid 형을 사용할 수 있다.

또한, 이량체의 Fc 의 일방에 제 1 항체의 Fab 와 제 2 항체의 scFv 를, 링커를 통하여 결합시킨 이중 특이성 분자여도 된다. 이 경우, Fc 에 Fab 를 결합시키고, 그 Fab 에 scFv 를 결합시켜도 되고, Fc 에 scFv 를 결합시키고, 그 scFv 에 Fab 를 결합시켜도 된다. 바람직하게는, Fab 를 결합시키고, 그 Fab 에 scFv 를 결합시킨다. Fab 와 scFv 의 결합은, Fab 의 가변 영역에 링커를 통하여 scFv 를 결합시키면 된다. 그 이중 특이성 분자는, scFv 와 Fab 를 링커로 연결한 하류에 헤테로다이머를 형성하는 변이를 넣은 Fc 가 회합한 포맷이다. 이와 같은 이중 특이성 분자를 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자 또는 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형이라고 부른다 (도 7(7c)).

본 발명에 있어서는, 예를 들어, 항 CD3scFv 와 항 HLA-A2/NY-ESO Fab 로 이루어지는 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형을 사용하면 된다.

또한, 제 1 항체와 제 2 항체의 2 종류의 scFv 를 링커로 연결한 포맷을 갖는 taFv (도 5(5c)) 를, 이량체의 Fc 의 일방에 링커를 개재하거나 또는 링커를 개재하지 않고 직접 결합시켜도 된다. 이와 같은 이중 특이성 분자를 taFv-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자 또는 taFv-헤테로다이머 Fc 형이라고 부른다 (도 5(5d)). 그 이중 특이성 분자는, taFv 의 하류에 헤테로다이머를 형성하는 변이를 넣은 Fc 가 헤테로에 회합한 포맷이다. taFv 에 있어서의 제 1 항체와 제 2 항체의 연결 순서는 한정되지 않지만, taFv 에 있어서의 제 1 항체와 제 2 항체의 연결 순서를 반대로 한 경우, 최초의 이중 특이성 분자를 taFv-헤테로다이머 Fc 형이라고 부르는 데에 반하여, taFv(inversed)-헤테로다이머 Fc 형 (taFv(inversed)-Fc 형이라고도 한다) 이라고 부른다.

도 7(7a) 에 Hybrid 형 이중 특이성 분자, 도 7(7b) 에 Dual 형 이중 특이적 항체, 도 7(7c) 에 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체의 구조를 나타낸다. 또, 도 5(5a) 에 scFv, 도 5(5b) 에 Fab, 도 5(5c) 에 taFv, 도 5(5d) 에 taFv-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체, 도 5(5e) 에 taFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체의 구조를 나타낸다. 또한, 도 8(8a) 에 taFv-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체 (도 5(5d) 에 동일), 도 8(8b) 에 taFv(inversed)-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체, 도 9(9a) 에 taFv(inversed)-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체에 포함되는 제 1 폴리펩티드, 도 9(9b) 에 taFv(inversed)-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체에 포함되는 제 2 폴리펩티드의 구조를 나타낸다.

본 발명의 이중 특이적 항체는, 복수의 폴리펩티드가 회합한 구조를 가지고 있다.

본 발명에 있어서는, 예를 들어, taFv 로는, 항 HLA-A2/NY-ESOscFv 와 항 CD3scFv 의 taFv 를 사용하면 된다. taFv-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체는, 바람직하게는, (a) N 말단으로부터 C 말단을 향하여, HLA/NY-ESO 에 특이적으로 결합하는 scFv, CD3 에 특이적으로 결합하는 scFv 및 면역 글로불린 Fc 영역 (i) 을 그 순서로 포함하여 이루어지는 제 1 폴리펩티드와, 면역 글로불린의 힌지 영역 및 Fc 영역 (ii) 를 포함하여 이루어지는 제 2 폴리펩티드를 포함하고, 보다 바람직하게는, (b) 제 1 폴리펩티드와 제 2 폴리펩티드가 Fc 영역 (i) 과 Fc 영역 (ii) 에 있어서 회합하여 이루어진다. 제 1 폴리펩티드 및 제 2 폴리펩티드의 Fc 영역은, 헤테로다이머를 형성하기 위한 변이를 포함해도 된다. taFv-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체의 예를 도 5(5d) 에 나타낸다. 도 5(5d) 에 나타내는 바와 같이, 제 1 폴리펩티드의 Fc 영역 (i) 부분과 검은 칠로 나타내는 제 2 폴리펩티드의 Fc 영역 (ii) 부분이 결합하여, 제 1 폴리펩티드와 제 2 폴리펩티드가 회합하고 있다. 도 6(6a) 가 제 1 폴리펩티드를 나타내고, 도 6(6b) 가 제 2 폴리펩티드를 나타낸다. 예를 들어, 도 5(5d) 에 있어서, 백색으로 나타낸 scFv 가 항 HLA-A2/NY-ESO scFv 이고, 우상측 사선으로 나타낸 scFv 가 항 CD3 scFv 이다.

본 발명의 보다 바람직한 taFv-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체에 포함되는 제 1 폴리펩티드는, 서열 번호 32 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 34 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 35 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 36 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 37 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 38 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 39 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 40 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 41 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 42 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 43 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 33 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 52 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 53 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열을 포함하고, 보다 한층 바람직한 taFv-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자에 포함되는 제 1 폴리펩티드는, 서열 번호 32, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 32, 52, 53 은 54 로 나타내는 아미노산 서열의 529 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 혹은 서열 번호 55 또는 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 534 번째 ∼ 750 번째의 아미노산 서열을 포함하고, 더욱 더 바람직한 taFv-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자에 포함되는 제 1 폴리펩티드는, 서열 번호 32 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 34 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 35 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 36 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 37 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 38 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 39 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 40 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 41 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 42 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 43 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 33 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열), 서열 번호 52 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 53 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열 또는 서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열로 이루어진다. 혹은, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 750 번째의 아미노산 서열 또는 서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 750 번째의 아미노산 서열로 이루어진다.

본 발명의 바람직한 taFv-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자에 포함되는 제 2 폴리펩티드는, 인간 항체 유래의 힌지 영역 및 변이형 Fc 를 포함하여 이루어지고, 보다 한층 바람직한 taFv-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자에 포함되는 제 2 폴리펩티드는, 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 246 번째의 아미노산 서열을 포함하여 이루어진다.

이들 중, 서열 번호 32 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드 및 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYF-0016, 서열 번호 84 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드 및 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYF-0022, 서열 번호 35 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드 및 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYF-0023, 서열 번호 36 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드 및 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYF-0027, 서열 번호 37 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드 및 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYF-0035, 서열 번호 38 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드 및 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYF-0044, 서열 번호 39 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드 및 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYF-0045, 서열 번호 40 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드 및 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYF-0047, 서열 번호 41 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드 및 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYF-0048, 서열 번호 42 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드 및 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYF-0060, 서열 번호 43 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드 및 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYF-0061, 서열 번호 33 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드 및 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYF-0019, 서열 번호 52 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드 및 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYF-0014, 그리고, 서열 번호 53 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드 및 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYF-0082 를, 본 발명의 바람직한 taFv-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체로서 예시할 수 있다. 또한, 서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드 및 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYZ-0038, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 750 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드 및 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYZ-0082, 서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 750 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드 및 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYZ-0083 을, 본 발명의 바람직한 taFv-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체로서 예시할 수 있다.

그들 중, NYF-0023, NYF-0047, NYF-0048, NYF-0060, NYF-0061, NYZ-0038, NYZ-0082, 및 NYZ-0083 은, 특히 우수한 생물 활성, 물성 등을 갖고, 바람직하다.

또한, 이량체의 Fc 의 일방에 제 1 항체의 taFv 를, 링커를 개재할지 또는 링커를 개재하지 않고 직접 결합시키고, 다른 일방의 Fc 에 제 1 항체 혹은 제 2 항체의 Fab 를, 링커를 개재할지 또는 링커를 개재하지 않고 직접 결합시켜도 된다. 그 이중 특이성 분자는, taFv-헤테로다이머 Fc 형의 제 2 폴리펩티드의 Fc 영역 (ii) (검은 칠) 측의 상류에 Fab 를 부가한 포맷이다. 이와 같은 이중 특이성 분자를 taFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자 또는 taFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형이라고 부른다 (도 5(5e)).

본 발명에 있어서는, taFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자에 포함되는 taFv 로는, 예를 들어, 항 HLA-A2/NY-ESO scFv 와 항 CD3scFv 의 taFv 를 사용하면 되고, Fab 로는, 예를 들어, HLA/NY-ESO Fab 를 사용하면 된다.

taFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체는, 바람직하게는, (a) N 말단으로부터 C 말단을 향하여, 인간 HLA/NY-ESO 에 특이적으로 결합하는 scFv, CD3 에 특이적으로 결합하는 scFv 및 면역 글로불린 Fc 영역 (i) 을 그 순서로 포함하여 이루어지는 제 1 폴리펩티드, Fc 영역 (ii) 를 포함하는 면역 글로불린 중사슬로 이루어지는 제 2 폴리펩티드, 및 면역 글로불린 경사슬로 이루어지는 제 3 폴리펩티드를 포함하고, 보다 바람직하게는, (b) 제 2 폴리펩티드와 제 3 폴리펩티드가 회합하고 있고, (c) 제 1 폴리펩티드와 제 2 폴리펩티드가 Fc 영역 (i) 과 Fc 영역 (ii) 에 있어서 회합하여 이루어진다. taFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체의 예를 도 5(5e) 에 나타내고, 제 1 폴리펩티드를 도 6(6a) 에 나타내고, 제 2 폴리펩티드를 도 6(6c) 에 나타내고, 제 3 폴리펩티드를 도 6(6d) 에 나타낸다. 도 5(5e) 에 나타내는 바와 같이, 제 1 폴리펩티드의 Fc 영역 (i) 부분과 검은 칠로 나타내는 Fc 영역 (ii) 를 포함하는 면역 글로불린 중사슬로 이루어지는 제 2 폴리펩티드가 제 1 폴리펩티드의 Fc 영역 (i) 부분과 제 2 폴리펩티드의 Fc 영역 (ii) 부분에서 결합하고, 또한, 제 2 폴리펩티드에 면역 글로불린 경사슬이 결합하고 있다. 이러한 바람직한 taFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자는, taFv 및 면역 글로불린의 Fc 영역을 포함하는 taFv-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자에, Fab 가 결합하여 이루어진다고 할 수도 있다. 바람직한 taFv-Fab 헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자에 포함되는 제 1 폴리펩티드에 포함되는 아미노산 서열로는, 서열 번호 32 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 34 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 35 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 36 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 37 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 38 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 39 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 40 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 41 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 42 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 43 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 33 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 52 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 53 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열, 및 서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열을 예시할 수 있고, 더욱 바람직한 taFv-Fab 헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자에 포함되는 제 1 폴리펩티드는, 서열 번호 32 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 34 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 35 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 36 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 37 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 38 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 39 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 40 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 41 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 42 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 43 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열 및 서열 번호 33 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 52 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 53 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 750 번째의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 750 번째의 아미노산 서열로 이루어진다.

본 발명의 바람직한 taFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체에 포함되는 제 2 폴리펩티드는, 인간 항체 또는 인간화 항체 중사슬의 가변 영역, CH1 영역 및 힌지 영역, 그리고 변이형 Fc 를 포함하여 이루어지고, 보다 바람직한 taFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체에 포함되는 제 2 폴리펩티드는, 서열 번호 44 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 242 번째의 아미노산 서열을 포함하여 이루어진다.

본 발명의 바람직한 taFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체에 포함되는 제 3 폴리펩티드는, 인간 항체 또는 인간화 항체 경사슬의 가변 영역 및 정상 영역을 포함하여 이루어지고, 보다 바람직한 taFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자에 포함되는 제 3 폴리펩티드는, 서열 번호 45 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 131 번째를 포함하여 이루어진다.

이러한 바람직한 taFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자에 포함되는 제 2 폴리펩티드 중 가변 영역 및 CH1 영역 그리고 제 3 폴리펩티드는 Fab 를 구성하고, 바람직한 Fab 는 항 HLA/NY-ESO 항체의 Fab 이고, 예를 들어, NYA-0001 의 Fab 이다.

본 발명에 있어서는, scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체에 포함되는 scFv 로는, 예를 들어, 항 HLA-A2/NY-ESO scFv 또는 항 CD3scFv 를 사용하면 되고, Fab 로는, 예를 들어, HLA/NY-ESO Fab 또는 항 CD3 Fab 를 사용하면 된다.

scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자는, 바람직하게는, (a) N 말단으로부터 C 말단을 향하여, 인간 HLA/NY-ESO 에 특이적으로 결합하는 scFv, CD3 에 특이적으로 결합하는 항체 중사슬의 가변 영역 및 정상 영역 CH1 그리고 면역 글로불린 Fc 영역 (i) 을 그 순서로 포함하여 이루어지는 제 1 폴리펩티드, 면역 글로불린의 힌지 영역 및 Fc 영역 (ii) 를 포함하여 이루어지는 제 2 폴리펩티드, 그리고, 가변 영역 및 정상 영역으로 이루어지는 항체 경사슬을 포함하는 제 3 폴리펩티드를 포함하고, 보다 바람직하게는, (b) 제 1 폴리펩티드와 제 2 폴리펩티드가 Fc 영역 (i) 과 Fc 영역 (ii) 에 있어서 회합하고, 제 1 폴리펩티드가 항체 중사슬의 가변 영역 및 정상 영역 CH1 에 있어서 제 3 폴리펩티드 (의 항체 경사슬) 와 회합하여 이루어진다. 제 1 폴리펩티드 및 제 2 폴리펩티드의 Fc 영역은, 야생형이어도 되고, 헤테로다이머를 형성하는 변이를 포함하고 있어도 된다. scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자의 예를 도 7(7c) 에 나타낸다. 도 7(7c) 의 우측 절반이 제 1 폴리펩티드 및 제 3 폴리펩티드이고, 좌측 절반이 제 2 폴리펩티드이다. 도 7(7c) 에 나타내는 바와 같이, 제 1 폴리펩티드의 Fc 영역 (i) 부분과 검은 칠로 나타내는 제 2 폴리펩티드의 Fc 영역 (ii) 부분이 회합하고, 제 1 폴리펩티드와 제 3 폴리펩티드가 회합하고 있다. 예를 들어, 도 7(7c) 에 있어서, 우상측 사선으로 나타낸 scFv 가 항 HLA-A2/NY-ESO scFv 이고, 백색 및 체크 무늬 및 가로선으로 나타낸 Fab 가 항 CD3 Fab 이다.

바람직한 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체에 포함되는 제 1 폴리펩티드에 포함되는 아미노산 서열로는, 서열 번호 57 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 394 번째의 아미노산 서열을, 더욱 바람직하게는 20 번째 ∼ 724 번째의 아미노산 서열을, 각각 예시할 수 있다.

또, 바람직한 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체에 포함되는 제 1 폴리펩티드에 포함되는 다른 아미노산 서열로는, 서열 번호 60 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 389 번째의 아미노산 서열을, 더욱 바람직하게는 20 번째 ∼ 719 번째의 아미노산 서열을, 각각 예시할 수 있다.

또한, 바람직한 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체에 포함되는 제 1 폴리펩티드에 포함되는 다른 아미노산 서열로는, 서열 번호 61 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 389 번째의 아미노산 서열을, 더욱 바람직하게는 20 번째 ∼ 719 번째의 아미노산 서열을, 각각 예시할 수 있다.

본 발명의 바람직한 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이적 항체에 포함되는 제 2 폴리펩티드는, 인간 항체 유래의 힌지 영역 및 변이형 Fc 를 포함하여 이루어지고, 보다 한층 바람직한 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자에 포함되는 제 2 폴리펩티드는, 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 246 번째의 아미노산 서열을 포함하여 이루어진다.

본 발명의 바람직한 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자에 포함되는 제 3 폴리펩티드는, 인간 항체 유래의 경사슬을 포함하여 이루어지고, 보다 바람직한 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자에 포함되는 제 3 폴리펩티드로는, 서열 번호 58 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 127 번째의 아미노산 서열, 보다 한층 바람직하게는 21 번째 ∼ 233 번째의 아미노산 서열을, 각각 예시할 수 있다.

이들 중, 서열 번호 57 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 724 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드, 서열 번호 3 1 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드, 및 서열 번호 58 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 233 번째로 이루어지는 제 3 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYZ-1010 을, 본 발명의 바람직한 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자로서 예시할 수 있다.

또, 서열 번호 60 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 719 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드, 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드, 및 서열 번호 58 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 233 번째로 이루어지는 제 3 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYZ-1007 도, 본 발명의 바람직한 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자로서 예시할 수 있다.

또한, 서열 번호 61 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 719 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 제 1 폴리펩티드, 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 246 번째로 이루어지는 제 2 폴리펩티드, 및 서열 번호 58 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 233 번째로 이루어지는 제 3 폴리펩티드가 회합하여 이루어지는 NYZ-1017 도, 본 발명의 바람직한 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자로서 예시할 수 있다.

본 발명의 이중 특이성 분자에 포함되는 1 개, 2 개 또는 3 개 이상의 펩티드는, 전술한 「결실체」 여도 되고, 즉, 그 카르복실 말단, 특히 항체 중사슬에서 유래하는 카르복실 말단에 있어서, 1 또는 2 개 (또는 그 이상) 의 아미노산이 변이 (결실을 포함한다) 되어 있어도 된다. 예를 들어, 본 발명의 바람직한 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자의 하나인 NYZ-1010 에 포함되는 제 1 폴리펩티드가 갖는 아미노산 서열의 카르복실 말단은, 서열 번호 57 의 724 번째 Lys, 1 아미노산이 결실되어 이루어지는 723 번째 Gly, 그것들을 포함하는 혼합물 중 어느 것이어도 된다. 동일하게, 본 발명의 바람직한 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 이중 특이성 분자에 포함되는 제 2 폴리펩티드가 갖는 아미노산 서열의 카르복실 말단은, 서열 번호 84 의 246 번째 Lys, 1 아미노산이 결실되어 이루어지는 245 번째 Gly, 그것들을 포함하는 혼합물 중 어느 것이어도 된다.

본 발명의 이중 특이성 분자에 포함되는 scFv 및 Fab 는, 바람직하게는, 인간화 항체 또는 인간 항체의 scFv 및 Fab 이고, Fc 는, 바람직하게는, 인간 항체의 Fc 이다.

본 발명의 이중 특이성 분자에 포함되는 가변 영역에 있어서는, 항체의 아미노 말단측으로부터 중사슬 가변 영역, 경사슬 가변 영역의 순서로 결합하고 있어도 되거나, 혹은, 경사슬 가변 영역, 중사슬 가변 영역의 순서로 결합하고 있어도 된다. 양 가변 영역 사이에, 링커를 가지고 있어도 된다 (임의로). 또, 아미노 말단측의 가변 영역의 아미노 말단에 글리신 잔기를 가지고 있어도 된다 (임의로). 탠덤 scFv 형의 이중 특이성 분자에서는, 카르복실 말단측의 가변 영역의 카르복실 말단에, 링커, FLAG 태그, 및/또는 His 태그가 결합하고 있어도 된다 (임의로). 바람직한 양태의 하나로서, 아미노 말단으로부터, 중사슬 가변 영역, 제 1 링커, 경사슬 가변 영역, 제 2 링커, FLAG 태그, 및 His 태그의 순서로 결합한 것을 예시할 수 있다.

링커는, 1 본쇄 폴리펩티드 또는 1 본쇄 올리고펩티드, 혹은, PEG, 뉴클레오티드, 당사슬, 화합물 등의 합성품도 포함된다. 그 밖에, 2 개의 폴리펩티드를 결합하는 것이면 특별히 한정되지 않고, 공지된 링커를 사용하는 것이 가능하다.

링커의 길이로는, 예를 들어, 펩티드 링커의 경우 5 ∼ 30 아미노산이다. 이중 특이성 분자에 복수의 링커가 포함되는 경우, 모두 동일한 길이의 펩티드 링커를 사용해도 되고, 상이한 길이의 펩티드 링커를 사용해도 된다.

펩티드 링커로는, 예를 들어, (Gly·Gly·Gly·Gly·Ser) 의 반복이 예시되지만, 이들에 1 ∼ 수 개의 Gly, Ser 과는 상이한 아미노산 잔기가 부가되어 있어도 된다.

상기 서술한 바와 같은, 본 발명의 다중 특이성 항체, 특히 이중 특이성 항체가 취할 수 있는 구조 (포맷) 중, 바람직한 것은, taFv-헤테로다이머 Fc 형, taFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형 및 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형이고, 보다 바람직한 것은 taFv-헤테로다이머 Fc 형이고, N 말단으로부터 C 말단을 향하여, 항 HLA/NY-ESO scFv, 항 CD3 scFv 의 순서로 위치하고 있는 형 (taFv-헤테로다이머 Fc 형) 은, 그 반대에 위치하고 있는 형 (taFv(inversed)-헤테로다이머 Fc 형) 에 비해 보다 한층 바람직하다. 또, 다른 보다 바람직한 것은 scFv-Fab-헤테로다이머 Fc 형이다.

본 발명에는, 본 발명의 분자에 포함되는 아미노산 서열을 코드하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드의 상보 사슬과 스트린젠트한 조건하에서 하이브리다이즈하는 폴리뉴클레오티드에 포함되는 뉴클레오티드 서열에 의해 코드되는 아미노산 서열을 포함하고, 또한, HLA/NY-ESO 에 결합하고, 바람직하게는 추가로 CD3 에도 결합하는 분자도 포함된다.

본 발명에는, 본 발명의 분자에 포함되는 아미노산 서열과 90 ％, 91 ％, 92 ％, 93 ％, 94 ％, 95 ％, 96 ％, 97 ％, 98 ％, 또는 99 ％ 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 또한, HLA/NY-ESO 에 결합하고, 바람직하게는 추가로 CD3 에도 결합하는 분자도 포함된다.

본 발명의 항체, 그 결합 단편 및 그것들을 포함하는 다중 특이성 항체는, 우수한 생물학적 활성, 물리 화학적 성질 (이하 「물성」 이라고 한다.), 안전성, 체내 동태 등의 성질을 구비하고 있다. (a) 생물학적 활성 또는 그 지표로는, 항원 결합 활성, in vitro 세포 상해 활성, in vivo 항종양 활성 등을 예시할 수 있다. 예를 들어, HLA/NY-ESO 에 대한 해리 정수 (KD 값) 는, 100 nM 이하 또는 50 nM 이하, 바람직하게는 20 nM 이하 또는 10 nM 이하, 보다 바람직하게는 5 nM 이하이다. 또, 예를 들어, 내인성 인간 NY-ESO 발현 세포주인 U266B1 및/또는 NCI-H1703 에 대해, 인간 말초혈 단핵 세포를 이펙터 세포로서 사용하여 발휘되는 세포 상해 활성의 EC₅₀ 값은 20 nM 이하, 바람직하게는 10 nM 이하, 보다 바람직하게는 5 nM 이하이다 (in vitro 세포 상해 활성의 측정 및 산출로는, WO2021/200857 의 실시예 8 에 기재된 방법을 예시할 수 있지만, 그것에 한정되지 않는다). 또한, 예를 들어, 인간 편평 상피 폐암 세포주 NCI-H1703 의 6 × 10⁷ 세포/mL 현탁액을 NOG 마우스의 피하에 0.1 mL 이식하고, 4 일 후 인간 말초혈 단핵 세포의 3.75 × 10⁷ 세포/mL 현탁액을 0.2 mL 미정맥내 이식하고, 14 일 후부터 주 1 회, 항체를 3 회 투여 후 종양의 체적을 측정했을 때의, 용매를 투여한 대조군에 대한 종양 증식 저해 활성은, 50 ％ 이상, 바람직하게는 75 ％ 이상, 보다 바람직하게는 90 ％ 이상이다 (in vivo 항종양 활성의 측정 및 산출로는, 실시예 9 에 기재된 방법을 예시할 수 있지만, 그것에 한정되지 않는다). (b) 바이오 의약품에 포함되는 불순물은, 의약품의 안전성에 관여하기 때문에, 제조시 및 보존 중에서의 증가의 유무를 적절히 규격 설정하여 관리하는 것이 요구되고 있다. 그 중에서도 HMWS (응집물) 는, 주요한 불순물의 하나이고, 면역원성 리스크나 약효의 저하 등에도 관여하기 때문에, 특히 엄중하게 관리해야 할 항목이다. 불순물의 관리는 제조시 뿐만 아니라, 제조 공정 중이나 제조 후의 경시적인 안정성 (증가의 유무) 도 포함하여 평가를 실시할 필요가 있다. 장기 중정성 시험의 결과에 기초하여 의약품의 유효 기간이 설정되기 때문에, 경시적으로 안정적인 항체쪽이 보다 긴 유효 기간을 설정할 수 있다. 따라서 바이오 의약품을 목표로 하여 바람직한 항체를 선발할 때의 지표가 되는, 본 발명에 있어서의 물리 화학적 성질로는, 내산성 (HMWS 생성 억제 등), 용액 안정성 (HMWS 생성 억제 등) 을 들 수 있다. 또 다른 지표로는, 본 발명의 항체 혹은 그 결합 단편 또는 그것들을 포함하는 분자의 산생에 적합한 숙주 세포, 예를 들어, Expi293F 세포에 그것들에 포함되는 아미노산 서열을 코드하는 유전자를 도입하여 얻어지는 재조합 세포의 배양물에 있어서의 수량이 많고, 수율이 높은 것 등을 예시할 수 있다. 그들의 물리 화학적 성질 특징을 갖는 본 발명의 바람직한 항체, 그 항원 결합 단편, 및 그것들을 함유하는 다중 특이성 항체는 : 그들의 용액을 산성 조건하에 노출시키는 것이 가능해지고, 그들의 제조, 예를 들어, 프로테인 A, 이온 교환 등의 크로마토그래피, 바이러스 불활성화 등의 공정의 실시가 가능 또는 용이해진다 ; 그것들을 용액으로 해도 HMWS 의 생성이 낮게 억제되므로, 그들의 제조, 제제화, 그것들을 포함하는 의약품의 유통이나 보존 등의 실시가 가능 또는 용이해진다 ; 그것들을 효율적으로 생산하는 것이 가능해진다. 내산성에 대해, 예를 들어, pH 3.5, 실온, 1 시간 보온하고, 이어서 사이즈 배제 크로마토그래피에 의해 HMWS 를 측정하여 산출되는 발생하는 HMWS 의 함유량은 5 ％ 이하, 바람직하게는 2 ％ 이하, 보다 바람직하게는 1 ％ 이하이다 (내산성 평가를 위한 HMWS 함유량의 측정 및 산출로는, WO2021/200857 의 실시예 19 - 1 에 기재된 방법을 예시할 수 있지만, 그것에 한정되지 않는다). 용액 안정성에 대해, 예를 들어, 25 mM 히스티딘 및 5 ％ 소르비톨로 이루어지는 pH 6.0 에 농도 25 mg/ml 가 되도록 용해시키고, 25 ℃, 6 일간 보존하고, 이어서 사이즈 배제 크로마토그래피에 의해 HMWS 를 측정하여 산출되는 HMWS 의 함유량은 20 ％ 이하, 바람직하게는 10 ％ 이하이다 (용액 안정성 평가를 위한 HMWS 함유량의 측정 및 산출로는, WO2021/200857 의 실시예 19 - 2 에 기재된 방법을 예시할 수 있지만, 그것에 한정되지 않는다). 생산 효율 또는 수율의 측정 및 산출로는, WO2021/200857 의 실시예 20 및 21 에 기재된 방법을 예시할 수 있지만, 그것에 한정되지 않는다. (c) 안전성 또는 그 지표로는, 항원 인식 특성, 투여시의 소견 등을 예시할 수 있다. 예를 들어, 야생형 NY-ESO 펩티드 상의 복수의 아미노산을 인식하고, 야생형 NY-ESO 펩티드에 유사하지만 동일하지 않은 아미노산 서열을 갖는 상동성 펩티드에는 결합하지 않아, 오프타깃 효과에서 기인하는 부작용 리스크가 낮다. 또, ISPRI 웹 베이스 면역원성 스크리닝 (EpiVax, Inc) 에 있어서 면역원성이 낮고, 항항체에서 기인하는 사이토카인 산생 등의 부작용 리스크가 낮은 것을 예측할 수 있다. 또, 예를 들어, 본 발명의 이중 특이성 항체에 포함되는 NYF-0023, NYF-0045, NYF-0047, NYF-0048, NYF-0060, NYF-0061, NYZ-0082, 또는 NYZ-1010 을 Balb/c 마우스에 투여한 결과, 혈중 반감기에는 문제가 되는 소견은 확인되지 않고, 체중 감소, 그 밖의 현저한 독성 소견도 확인되지 않았다. 또, NYZ-0082, 또는 NYZ-1010 을 필리핀원숭이에 단회 투여한 결과, 혈중 반감기에는 문제가 되는 소견은 확인되지 않고, 일반 상태, 체중, 섭이량, 체온 측정, 및 혈장 중 사이토카인량에 대해 투여에서 기인하는 변화는 확인되지 않았다. (d) 동태 또는 그 지표로는, 혈중 반감기 등을 예시할 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 있어서 취득한 수 개의 이중 특이성 항체를 Balb/c 마우스, 또는 필리핀원숭이에 투여한 결과, 혈중 반감기에는 문제가 되는 소견은 확인되지 않았다. 이와 같은, 우수한 생물학적 활성, 물리 화학적 성질, 안전성, 체내 동태 등의 성질을 구비하는 본 발명의 항체, 그 결합 단편 및 분자는, 의약 조성물에 바람직하게 함유시킬 수 있다. (a) 에 기재된 항원 결합 활성 및 (b) 에 기재된 여러 성질을 갖는 본 발명의 바람직한 항체 또는 그 항원 결합 단편으로는, NYA-1143, NYA-1163, NYA-2023, NYA-2027, NYA-2035, NYA-2044, NYA-2045, NYA-2047, NYA-2048, NYA-2060, NYA-2031, NYA-2047, NYA-2061, NYA-2143 및 NYA-3061 을, 보다 바람직하게는 NYA-2047, NYA-2061, NYA-2143 및 NYA-3061 을, 각각 예시할 수 있지만, 그것들에 한정되지 않는다. 또, (a) ∼ (d) 에 기재된 성질을 갖는 본 발명의 바람직한 다중 특이성 항체로는, NYF-0016, NYF-0019, NYF-0022, NYF-0023, NYF-0027, NYF-0035, NYF-0044, NYF-0045, NYF-0047, NYF-0048, NYF-0058, NYF-0060, NYF-0061, NYZ-0038, NYZ-0082, NYZ-0088 및 NYZ-1010 을, 보다 바람직하게는, NYF-0061, NYZ-0038, NYZ-0082, NYZ-0088, NYZ-1007, NYZ-1010, NYZ-1017 을, 각각 예시할 수 있지만, 그것들에 한정되지 않는다.

본 발명에 있어서, 항체가 결합하는 「부위」, 즉 항체가 인식하는 「부위」 란, 항체가 결합 또는 인식하는 항원 상의 부분 펩티드 또는 부분 고차 구조를 의미한다. 본 발명에 있어서는, 이러한 부위를 에피토프, 항체의 결합 부위라고도 부른다. 본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체가 결합 또는 인식하는 HLA/NY-ESO 상의 부위로는, HLA/NY-ESO 펩티드 중의 복수의 아미노산, 부분 고차 구조 등을 예시할 수 있다.

본 발명의 항체 또는 결합 단편과 「동일한 부위에 결합하는 항체 또는 그 결합 단편」 도 본 발명에 포함된다. 어느 항체와 「동일한 부위에 결합하는 항체」 란, 그 항체가 인식하는 항원 분자 상의 부위에 결합하는 다른 항체를 의미한다. 제 1 항체가 결합하는 항원 분자 상의 부분 펩티드 또는 부분 입체 구조에 제 2 항체가 결합하면, 제 1 항체와 제 2 항체는 동일한 부위에 결합한다고 판정할 수 있다. 본 발명의 제 1 항체가 상기 (a) 에 기재된 항원 결합 활성을 갖는 경우, HLA/NY-ESO상의 동일한 부위에 결합하는 제 2 항체는, 동일한 활성을 가질 개연성이 매우 높고, 이러한 제 2 항체도 본 발명에 포함된다. 또, HLA/NY-ESO 에 대한 결합에 있어서 본 발명의 제 1 항체와 경합하는 항체도, (a) 에 기재된 항원 결합 활성을 가지고 있으면, 본 발명에 포함된다. 그러한 본 발명의 모노클로날 항체가 인식하는 HLA/NY-ESO 상의 부위에 결합하는 항체, HLA/NY-ESO 에 대한 결합에 있어서 본 발명의 모노클로날 항체와 경합하는 항체, 및 그들의 결합 단편은, 바람직하게는, (a) 에 기재된 in vitro 세포 상해 활성 및 in vivo 항종양 활성 그리고 (b) ∼ (d) 에 기재된 성질 중 1 개 또는 2 개 이상, 보다 바람직하게는 그들의 3 개 이상, 최적으로는 모두를 갖는다.

항체의 결합 부위는, 면역 어세이법 등 당업자에게 주지된 방법에 의해 결정할 수 있다. 예를 들어, 항원의 아미노산 서열을 C 말 또는 N 말부터 적절히 깎아서 이루어지는 일련의 펩티드를 제조하고, 그것들에 대한 항체의 반응성을 검토하고, 대략적인 인식 부위를 결정한 후에, 또한 짧은 펩티드를 합성하여 그들의 펩티드에 대한 항체의 반응성을 검토함으로써, 결합 부위를 결정할 수 있다. 또는 예를 들어, 항원 혹은 항원 단편 펩티드 등의 아미노산 서열 중, 특정한 부위나 영역을 삭제 혹은 다른 아미노산 서열로 치환 혹은 아미노산 서열에 변이를 도입하고, 그들의 펩티드에 대한 항체의 반응성을 검토함으로써, 결합 부위를 결정할 수 있다. 항원 단편 펩티드는, 유전자 재조합, 펩티드 합성 등의 기술을 사용하여 조제할 수 있다.

항체가 항원의 부분 고차 구조에 결합 또는 인식하고 있는 경우, 이러한 항체의 결합 부위는, X 선 구조 해석을 사용하여, 당해 항체에 인접하는 항원 상의 아미노산 잔기를 특정함으로써 결정할 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 그 단편 및 항원 또는 그 단편을 결합시켜 결정화하고, 구조 해석을 실시함으로써, 항체와 상호 작용 거리를 갖는 항원 상의 아미노산 잔기를 특정할 수 있다. 상호 작용 거리는 8 Å 이하이고, 바람직하게는 6 Å 이하이고, 보다 바람직하게는 4 Å 이하이다. 그러한 항체와의 상호 작용 거리를 갖는 아미노산 잔기는 1 개 또는 그 이상에서 항체의 항원 결합 부위 (에피토프) 를 구성할 수 있다. 이러한 아미노산 잔기가 2 개 이상인 경우, 각 아미노산은 일차 서열 상에서 서로 인접하고 있지 않아도 된다.

본 발명의 항 HLA/NY-ESO 항체 또는 그 결합 단편은, HLA/NY-ESO 의 아미노산 서열 중에 존재하는 복수의 아미노산을 특이적으로 인식한다. 그것들 복수의 아미노산을 인식하거나, HLA/NY-ESO 에 대한 결합에 있어서 본 발명의 항체 또는 그 결합 단편과 경합하거나, 또는 그것들 복수의 아미노산과 상호 작용 거리를 갖는 항체 또는 그 결합 단편도, 본 발명에 포함된다. 또한, 그러한 항체 또는 그 결합 단편을 포함하는 다중 특이성 항체도, 본 발명에 포함된다.

본 발명의 다중 특이성 항체는, 면역 체크 포인트 저해제와 조합하여 사용할 수 있다.

[면역 체크 포인트 저해제]

본 발명에 있어서 「면역 체크 포인트 저해제」 란, 면역 억제계를 저해하고, 종양 면역을 활성화하는 약제를 나타내고, 「면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물」 과 동일한 의미이다.

본 발명에 있어서 사용되는 면역 체크 포인트 저해제는, 특별히 제한은 없지만, 바람직하게는, 항 PD-1 항체, 항 PD-L1 항체, 항 CTLA-4 항체, 및 항 TIGIT 항체를 들 수 있고, 보다 바람직하게는, 항 PD-1 항체, 및 항 PD-L1 항체를 들 수 있다. 본 발명에 있어서 「항 PD-1 항체」 란, PD-1 (Programmed cell death-1 ; CD279 ; PDCD1) 에 특이적으로 결합하는 항체를 나타내고, 바람직하게는, PD-1 과, 그 결합 상대인, PD-L1 이나 PD-L2 의 상호 작용으로부터 발생하는 시그널 전달을 저감, 저해, 및/또는 간섭하는 작용을 갖는 항체를 나타낸다. 본 발명에 있어서 사용되는 항 PD-1 항체로는, 임상에서의 유효성과 안전성이 확인되고 있으면 특별히 제한은 없지만, 바람직하게는, 니볼루맙 (Nivolumab) (국제 공개 제2006/121168호 등), 및 펨브롤리주맙 (Pembrolizumab) (국제 공개 제2008/156712호 등) 을 예시할 수 있다. 또, 본 발명에 있어서 사용되는 항 HLA-A2/NY-ESO 항체를 포함하는 다중 특이성 항체와의 병용 효과를 전임상 연구에 있어서 확인할 목적으로, 시판되는 연구용 항 PD-1 항체 (예 : clone RMP1-14) 등을 사용할 수도 있다. 본 발명에 있어서 「항 PD-L1 항체」 란, PD-L1 (Programmed cell death ligand 1 ; CD274 ; B7-H1) 에 특이적으로 결합하는 항체를 나타내고, 바람직하게는, PD-L1 과, 그 결합 상대인, PD-1 이나 B7.1(CD80) 과의 상호 작용으로부터 발생하는 시그널 전달을 저감, 저해, 및/또는 간섭하는 작용을 갖는 항체를 나타낸다. 본 발명에 있어서 사용되는 항 PD-L1 항체로는, 임상에서의 유효성과 안전성이 확인되고 있으면 특별히 제한은 없지만, 바람직하게는, 아테졸리주맙 (Atezolizumab) (국제 공개 제2010/077634호 등), 더발루맙 (Durvalumab) (국제 공개 제2011/066389호 등), 및 아벨루맙 (Avelumab) (국제 공개 제2013/079174호 등) 을 예시할 수 있다. 또, 본 발명에 있어서 사용되는 항 HLA-A2/NY-ESO 항체를 포함하는 다중 특이성 항체와의 병용 효과를 전임상 연구에 있어서 확인할 목적으로, 시판되는 연구용 항 PD-L1 항체 (예 : clone 10F.9G2) 등을 사용할 수도 있다. 본 발명에 있어서 「항 CTLA-4 항체」 란, CTLA-4 (Cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4 ; CD152) 에 특이적으로 결합하는 항체를 나타내고, 바람직하게는, CTLA-4 와, 그 결합 상대인, B7.1(CD80) 이나 B7.2(CD86) 의 상호 작용으로부터 발생하는 시그널 전달을 저감, 저해, 및/또는 간섭하는 작용을 갖는 항체를 나타낸다. 본 발명에 있어서 사용되는 항 CTLA-4 항체로는, 임상에서의 유효성과 안전성이 확인되고 있으면 특별히 제한은 없지만, 바람직하게는, 이필리무맙 (Ipilimumab) (국제 공개 제2001/014424호 등), 트레멜리무맙 (Tremelimumab) (국제 공개 제2000/037504호 등), 스파르탈리주맙 (Spartalizumab) (국제 공개 제2015/112900호 등), 세미플리맙 (Cemiplimab) (국제 공개 제2015/196051호 등) 을 예시할 수 있다. 또, 본 발명에 있어서 사용되는 항 HLA-A2/NY-ESO 항체를 포함하는 다중 특이성 항체와의 병용 효과를 전임상 연구에 있어서 확인할 목적으로, 시판되는 연구용 항 CTLA-4 항체 (예 : clone 9H10) 등을 사용할 수도 있다. 본 발명에 있어서 「항 TIGIT 항체」 란, TIGIT (T cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains) 에 특이적으로 결합하는 항체를 나타내고, 바람직하게는, TIGIT 와, 그 결합 상대인, CD155 와의 상호 작용으로부터 발생하는 시그널 전달을 저감, 저해, 및/또는 간섭하는 작용을 갖는 항체를 나타낸다. 본 발명에 있어서 사용되는 항 TIGIT 항체로는, 임상에서의 유효성과 안전성이 확인되고 있으면 특별히 제한은 없지만, 바람직하게는, 티라골루맙 (Tiragolumab) (국제 공개 제2017/053748호), 비보스톨리맙 (Vibostolimab) (국제 공개 제2016/028656호) 을 예시할 수 있다. 또, 본 발명에 있어서 사용되는 항 HLA-A2/NY-ESO 항체를 포함하는 다중 특이성 항체와의 병용 효과를 전임상 연구에 있어서 확인할 목적으로, 시판되는 연구용 항 TIGIT 항체 (예 : clone 1B4) 등을 사용할 수도 있다.

본 발명에 있어서 「면역 체크 포인트 저해제」 가 항체인 경우, 당해 항체의 항원 결합 단편도 「항체」 의 범위에 포함된다. 본 발명에 있어서, 다중 특이성 항체와 조합하여 사용되는 면역 체크 포인트 저해제는 상기 어느 항체의 항원 결합 단편이어도 되고, 당해 항원 결합 단편은 다른 부분을 포함하고 있어도 된다.

[화학 요법제]

본 발명에 있어서 「화학 요법제」 란, 항암, 항종양 활성을 갖는 화합물 중 화학적으로 합성된 약제를 의미한다.

본 발명에 있어서 사용되는 화학 요법제는, 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는, 토포이소머라아제 저해제, 미소관 저해제, 플라티나 제제, DNA 탈메틸화제, 항암성 항생 물질, 및 알킬화제이고 토포이소머라아제 저해제의 바람직한 예로는, 이리노테칸, 토포테칸, 에토포시드나, 약물 복합체로서 이리노테칸의 활성 대사물인 SN-38 을 결합시킨 사시투주맙 고비테칸 등을 들 수 있다. 미소관 저해제의 바람직한 예로는, 파클리탁셀, 도세탁셀, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 에리불린, 비노렐빈, 알부민 현탁형 파클리탁셀 (Nab 파클리탁셀) 등을 들 수 있다. 플라티나 제제의 바람직한 예로는, 옥살리플라틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 네다플라틴 등을 들 수 있다. DNA 탈메틸화제의 바람직한 예로는, 아자시티딘, 데시타빈 등을 들 수 있다. 항암성 항생 물질의 바람직한 예로는, 독소루비신, 블레오마이신, 리포소말 독소루비신 등을 들 수 있다. 알킬화제의 바람직한 예로는, 이포스파미드, 시클로포스파미드, 다카르바진 등을 들 수 있다. 단, 본 발명의 다중 특이성 항체와 조합하여 사용되는 화학 요법제는 이들에 한정되는 것은 아니다.

[의약]

본 발명은, 다중 특이성 분자와 면역 체크 포인트 저해제 또는 화학 요법제가 조합되어 이루어지는 의약 조성물 및 치료 방법을 제공한다.

본 발명의 의약 조성물 및 치료 방법은, 다중 특이성 분자와, 면역 체크 포인트 저해제 또는 화학 요법제가, 각각 다른 제제에 유효 성분으로서 함유되고, 동시에 또는 상이한 시간에 투여되는 것을 특징으로 하는 것이어도 되고, 다중 특이성 분자와, 면역 체크 포인트 저해제 또는 화학 요법제가, 단일의 제제에 유효 성분으로서 함유되어, 투여되는 것을 특징으로 하는 것이어도 된다. 또, 항종양 면역을 활성화하는 작용에 의해 개선되는 질환의 치료용으로, 본 발명에 관련된 다중 특이성 분자가 단일의 제제에 유효 성분으로서 함유되어, 투여되는 것이어도 된다.

본 발명의 의약 조성물 및 치료 방법은, 암의 치료를 위해서 사용할 수 있고, 바람직하게는, 폐암 (비소세포 폐암을 포함한다), 요로 상피암, 대장암 (결장 직장암이라고 부르는 경우도 있고, 결장암 및 직장암을 포함한다), 전립선암, 난소암, 췌장암, 유방암, 방광암, 위암 (위선암이라고 부르는 경우도 있다), 위식도 접합부 선암, 위장 간질 종양, 자궁 경부암, 식도암, 편평 상피암, 복막암, 간장암, 간세포암, 자궁 내막암, 자궁암, 타액선암, 신장암, 외음부암, 갑상선암, 음경암, 백혈병, 악성 림프종, 형질 세포종, 골수종, 신경 상피 조직성 종양, 신경초성 종양, 두경부암, 피부암, 인두암, 담낭암, 담관암, 중피종, 파제트병, 및 육종으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 질환의 치료를 위해서 사용할 수 있다.

본 발명의 의약 조성물 및 치료 방법은, 암의 주요한 치료법인 약물 요법을 위한 약제로서 선택하여 사용할 수 있고, 그 결과로서, 암세포의 성장을 늦추고, 증식을 억제하고, 나아가서는 암세포를 파괴할 수 있다. 이들의 작용에 의해, 암환자에게 있어서, 암에 의한 증상으로부터의 해방이나, QOL 의 개선을 달성할 수 있어, 암환자의 생명을 유지하여 치료 효과가 달성된다. 암세포의 파괴에는 이르지 않는 경우에도, 암세포의 증식의 억제나 컨트롤에 의해 암환자에 있어서 보다 높은 QOL 을 달성하면서 보다 장기의 생존을 달성시킬 수 있다. 이와 같은 약물 요법에 있어서의 약물 단독으로의 사용 외에, 본 발명의 의약 조성물 및 치료 방법은, 아쥬반트 요법에 있어서 다른 요법과 조합하는 약제로서도 사용할 수 있고, 외과 수술이나, 방사선 요법, 호르몬 요법 등과 조합할 수 있다. 나아가서는 네오아쥬반트 요법에 있어서의 약물 요법의 약제로서 사용할 수도 있다. 이상과 같은 치료적 사용 외에, 본 발명의 의약 조성물 및 치료 방법은, 미세한 전이 암세포의 증식을 억제하고, 나아가서는 파괴한다는 예방 효과도 기대할 수 있다. 예를 들어, 전이 과정에서 체액 중에 있는 암세포를 억제하고 파괴하는 효과나, 어느 조직에 착상된 직후의 미세한 암세포에 대한 억제, 파괴 등의 효과를 기대할 수 있다. 따라서, 특히 외과적인 암의 제거 후에 있어서의 암 전이의 억제, 예방 효과를 기대할 수 있다. 본 발명의 의약 조성물 및 치료 방법은, 환자에 대해서는 전신 요법으로서 적용하는 것 외에, 암 조직에 국소적으로 적용하여 치료 효과를 기대할 수 있다. 본 발명의 의약 조성물 및 치료 방법은, 포유 동물에 대해 바람직하게 사용할 수 있지만, 보다 바람직하게는 인간에 대해 사용할 수 있다. 본 발명의 의약 조성물은, 1 종 이상의 약학적으로 적합성의 성분을 포함하는 약학적 조성물로서 투여될 수 있다. 본 발명의 의약 조성물에 있어서 사용되는 물질로는, 투여량이나 투여 농도에 있어서, 이 분야에 있어서 통상적으로 사용되는 제제 첨가물 그 외에서 적절히 선택하여 적용할 수 있다. 예를 들어, 상기 약학적 조성물은, 대표적으로는, 1 종 이상의 약학적 캐리어 (예를 들어, 멸균한 액체) 를 포함한다. 여기서 액체에는, 예를 들어, 물 및 오일 (석유, 동물 기원, 식물 기원, 또는 합성 기원의 오일) 이 포함된다. 오일, 예를 들어, 낙화생유, 대두유, 광유, 참깨유 등이어도 된다. 물은, 상기 약학적 조성물이 정맥내 투여되는 경우에, 보다 대표적인 캐리어이다. 식염수 용액, 그리고 덱스트로오스 수용액 및 글리세롤 수용액도 또한, 액체 캐리어로서 특히, 주사용 용액을 위해서 사용될 수 있다. 적절한 약학적 부형제는, 이 분야에서 공지된 것에서 적절히 선택할 수 있다. 상기 조성물은 또, 원한다면, 미량의 습윤제 혹은 유화제, 또는 pH 완충화제를 포함할 수 있다. 적절한 약학적 캐리어의 예는, E. W. Martin 에 의한 「Remington's Pharmaceutical Sciences」 에 기재된다. 그 처방은, 투여의 양태에 대응한다.

여러 가지 송달 시스템이 공지이고, 본 발명의 의약 조성물을 투여하기 위해서 사용될 수 있다. 도입 경로로는, 피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 및 피하의 경로를 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다. 투여는, 예를 들어, 주입 또는 볼러스 주사에 의한 것일 수 있다. 특정한 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명에 있어서 사용되는 다중 특이적 분자 및 면역 체크 포인트 저해제 또는 화학 요법제의 투여는, 주입에 의한 것이다. 비경구적 투여는, 바람직한 투여 경로이다. 대표적 실시형태에 있어서, 상기 의약 조성물은, 인간에 대한 정맥내 투여에 적합한 약학적 조성물로서, 상습적 순서에 따라서 처방된다. 대표적으로는, 정맥내 투여를 위한 조성물은, 멸균의 등장성의 수성 완충액 중의 용액이다. 필요한 경우, 상기 약학적 조성물은 또, 가용화제 및 주사 부위에서의 동통을 완화시키기 위한 국소 마취제 (예를 들어, 리그노카인) 를 포함할 수 있다. 일반적으로, 상기 성분은, 예를 들어, 활성제의 양을 나타내는 앰플 또는 사셰 등에 밀봉하여 시일된 용기 중의 건조 동결 건조 분말 또는 무수의 농축물로서, 별개로, 또는 단위 제형 중에서 함께 혼합하여, 중 어느 것으로 공급된다. 상기 약학적 조성물이 주입에 의해 투여되는 형태의 경우, 그것은, 예를 들어, 멸균의 제약 그레이드의 물 또는 식염수를 포함하는 주입 보틀로 투약될 수 있다. 상기 약학적 조성물이 주사에 의해 투여되는 경우, 주사용 멸균수 또는 식염수의 앰플은, 예를 들어, 상기 성분이 투여 전에 혼합될 수 있도록, 제공될 수 있다.

본 발명의 의약 조성물 및 치료 방법은, 본 발명에 관련된 다중 특이성 분자 및 면역 체크 포인트 저해제 또는 화학 요법제 화학 요법제 이외의 암 치료제를 포함하고 있어도 된다. 본 발명의 의약 조성물 및 치료 방법은, 다른 암 치료제와 병용하여 투여할 수도 있고, 이로써 항종양 효과를 증강시킬 수 있다. 이와 같은 목적으로 사용되는 다른 암 치료제는, 본 발명의 의약 조성물과 동시에, 따로 따로, 혹은 연속해서 개체에 투여되어도 되고, 각각의 투여 간격을 바꾸어 투여되어도 된다. 이와 같은 암 치료제로서, 페메트렉시드 (Pemetrexed), 소라페닙 (Sorafenib), 에베로리무스 (Everolims), 타네스피마이신 (Tanespimycin), 베바시주맙 (Bevacizumab)) 등을 들 수 있지만, 항종양 활성을 갖는 약제이면 한정되지는 않는다.

본 발명에 있어서 사용되는 분자 표적약은, 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는, VEGF 저해제, FGFR 저해제, 및 멀티키나아제 저해제이고 VEGF 저해제의 바람직한 예로는, 베바시주맙, 라무시루맙, 잘트랩, 액시티닙 등을 예시할 수 있다. FGFR 저해제의 바람직한 예로는, 페미가티닙, 푸티바티닙 등을 예시할 수 있다. 멀티키나아제 저해제의 바람직한 예로는, 소라페닙, 수니티닙, 파조파닙, 레고라페닙, 렌바티닙 등을 예시할 수 있다. 단, 본 발명의 다중 특이성 항체와 조합하여 사용되는 화학 요법제는 이들에 한정되는 것은 아니다.

이와 같은 의약 조성물은, 선택된 조성과 필요한 순도를 갖는 제제로서, 동결 건조 제제 혹은 액상 제제로서 제제화할 수 있다. 동결 건조 제제로서 제제화할 때에는, 이 분야에 있어서 사용되는 적당한 제제 첨가물이 포함되는 제제여도 된다. 또 액제에 있어서도 동일하게 하여, 이 분야에 있어서 사용되는 각종 제제 첨가물을 포함하는 액상 제제로서 제제화할 수 있다.

의약 조성물의 조성 및 농도는 투여 방법에 따라서도 변화하지만, 본 발명의 의약 조성물에 포함되는 다중 특이성 분자 및 면역 체크 포인트 저해제 또는 화학 요법제는, 항원에 대한 친화성, 즉, 항원에 대한 해리 정수 (Kd 값) 의 점에 있어서, 친화성이 높을 (Kd 값이 낮을) 수록, 소량의 투여량이어도 약효를 발휘시킬 수 있다. 따라서, 다중 특이성 분자 및 면역 체크 포인트 저해제 또는 화학 요법제의 투여량은, 항원과의 친화성의 상황에 기초하여 설정할 수도 있다. 본 발명의 다중 특이성 분자 및 면역 체크 포인트 저해제 또는 화학 요법제를 인간에 대해 투여할 때에는, 예를 들어, 0.0001 mg ∼ 100 mg 이다. 소정의 투여량은 1 ∼ 180 일에 1 회 투여해도 되고, 1 일당 2 회, 3 회, 4 회 또는 그 이상의 분할 투여로 하여 적당한 간격으로 투여해도 된다.

본 발명의 다중 특이성 분자의 경우, 투여 방법으로서 예를 들어, 0.001 mg/㎏ ∼ 8 mg/㎏ 을 3 주에 1 번 투여하는 방법을 들 수 있다. 또, 투여는 3 주에 1 번 (q3w) 이면 되지만, 1 주에 1 번 (q1w), 2 주에 1 번 (q2w), 또는 4 주에 1 번 (q4w) 이어도 된다.

이하에 나타내는 예에 의해 본 발명을 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이들에 한정되는 것은 아니다. 또, 이들은 어떠한 의미에 있어서도 한정적으로 해석되는 것은 아니다.

실시예

이하, 실시예에 있어서 본 발명을 더욱 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이들에 한정되지 않는다.

또한, 하기 실시예에 있어서 유전자 조작에 관한 각 조작은 특별히 명시가 없는 한, 당업자가 사용하는 실험서에 기재된 방법에 의해 실시하거나, 또는 시판되는 시약이나 키트를 사용하는 경우에는 시판품의 지시서에 따라서 실시하였다.

실시예 1. 인간 편평 상피 폐암 세포주에 대한 Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010) 와 Paclitaxel 의 in vivo 병용 효과

인간 편평 상피 폐암 세포주 NCI-H1703 (ATCC) 을 50 ％ Matrigel (CORNING 사) 함유 PBS 로 6 × 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, NSG 마우스 (자성, 4 ∼ 6 주령) 의 피하에 0.1 mL 이식하였다 (Day 0). 약 1 주일 후 (Day 6 ∼ 7) 부터 경시적으로 종양의 장경 (㎜) 및 단경 (㎜) 을 전자 디지털 버니어 캘리퍼스로 계측하고, 이하에 나타내는 계산식에 의해 추정 종양 체적을 산출하였다.

Estimated Tumor Volume (㎣) = 각 개체의 추정 종양 체적의 평균값 :

각 개체의 추정 종양 체적 (㎣) = 1/2 × [종양 장경] × [종양 단경] × [종양 단경]

Day 12 에 각 군 n = 5 가 되도록 종양 체적에 의한 군 나누기를 실시하고, 인간 PBMC 를 CD3/CD28 Dynabeads (ThermoFisher 사) 에 의해 자극하여 증식시킨 T 세포를 PBS 로 5 × 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, 0.2 mL 미정맥내 이식하였다. 3 - 4 시간 후에 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010, 0.02 mg/㎏ : WO2021/200857 에 기재된 방법에 의해 조제하였다.) 를 미정맥내 투여하였다. 또 Paclitaxel (20 mg/㎏) 을 복강내 투여하였다. 투여는 Day 13, Day 20 에 실시하였다. Tumor Growth Inhibition (％) 은 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하였다.

Tumor Growth Inhibition (％) = 100 - (각 군의 Estimated Tumor Volume/Vehicle Control 의 Estimated Tumor Volume × 100)

NYZ-1010 단독 투여, Paclitaxel 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Paclitaxel 병용 투여의 결과를 도 1a 에 나타냈다. 이식 31 일 후에 있어서의 TGI 는, NYZ-1010 단독 투여군에서 79.8 ％, Paclitaxel 단독 투여군에서 74.1 ％ 였던 데에 반하여, NYZ-1010 과 Paclitaxel 병용군에서는 99.1 ％ 이고, 병용에 의해 항종양 효과가 증강되는 것이 나타났다. 또 Day 12 의 종양 체적을 베이스 라인으로 한 각 개체의 Day 31 의 종양 체적의 변화율 Change from baseline (％) 을 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하고, 도 1b 에 나타냈다. 또 각 군의 Change from baseline (％) 평균값을 표 1 에 기재하였다. NYZ-1010 과 Paclitaxel 의 병용에 의한 종양 퇴축 효과가 나타났다.

Change from baseline (％) = 각 개체의 (Day 31 에 있어서의 Estimated Tumor Volume - Day 12 에 있어서의 Estimated Tumor Volume)/Day 12 에 있어서의 Estimated Tumor Volume × 100

실시예 2. 인간 편평 상피 폐암 세포주에 대한 Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010) 와 Nab Paclitaxel 의 in vivo 병용 효과

Estimated Tumor Volume (㎣) = 각 개체의 추정 종양 체적의 평균값 : 각 개체의 추정 종양 체적 (㎣) = 1/2 × [종양 장경] × [종양 단경] × [종양 단경]

Day 13 에 각 군 n = 5 가 되도록 종양 체적에 의한 군 나누기를 실시하고, 인간 PBMC 를 CD3/CD28 Dynabeads (ThermoFisher 사) 에 의해 자극하여 증식시킨 T 세포를 PBS 로 5 × 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, 0.2 mL 미정맥내 이식하였다. 3 - 4 시간 후에 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010, 0.02 mg/㎏) 를 미정맥내 투여하였다. 또 Nab Paclitaxel (20 mg/㎏) 을 복강내 투여하였다. 투여는 Day 13, Day 20 에 실시하였다. Tumor Growth Inhibition (％) 은 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하였다.

NYZ-1010 단독 투여, Nab Paclitaxel 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Nab Paclitaxel 병용 투여의 결과를 도 2a 에 나타냈다. 이식 38 일 후에 있어서의 TGI 는, NYZ-1010 단독 투여군에서 55.4 ％, Nab Paclitaxel 단독 투여군에서 86.3 ％ 였던 데에 반하여, NYZ-1010 과 Nab Paclitaxel 병용군에서는 100 ％ 이고, 병용에 의해 항종양 효과가 증강되는 것이 나타났다. 특히 Nab Paclitaxel 과의 병용에서는, 38 일에 있어서 5 예 중 5 예에 종양의 완전 소실이 확인되었다. 또 Day 13 의 종양 체적을 베이스 라인으로 한 각 개체의 Day 38 의 종양 체적의 변화율 Change from baseline (％) 을 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하고, 도 1b 에 나타냈다. 또 각 군의 Change from baseline (％) 평균값을 표 2 에 기재하였다. NYZ-1010 과 Nab Paclitaxel 의 병용에 의한 종양 퇴축 효과가 나타났다.

Change from baseline (％) = 각 개체의 (Day 38 에 있어서의 Estimated Tumor Volume - Day 13 에 있어서의 Estimated Tumor Volume)/Day 13 에 있어서의 Estimated Tumor Volume × 100

실시예 3. 인간 폐선암 세포주에 대한 Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010) 와 항 PD-1 항체 Pembrolizumab 의 in vivo 병용 효과

인간 폐선암 세포주 NCI-H522 (ATCC) 를 50 ％ Matrigel (CORNING 사) 함유 PBS 로 5 × 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, NSG 마우스 (자성, 4 ∼ 6 주령) 의 피하에 0.1 mL 이식하였다 (Day 0). 약 2 주일 후부터 경시적으로 종양의 장경 (㎜) 및 단경 (㎜) 을 전자 디지털 버니어 캘리퍼스로 계측하고, 이하에 나타내는 계산식에 의해 추정 종양 체적을 산출하였다.

Day 25 에 각 군 n = 5 가 되도록 종양 체적에 의한 군 나누기를 실시하고, 인간 PBMC 를 CD3/CD28 Dynabeads (ThermoFisher 사) 에 의해 자극하여 증식시킨 T 세포를 PBS 로 5 × 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, 0.2 mL 미정맥내 이식하였다. 3 - 4 시간 후에 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010, 0.01 mg/㎏) 를 미정맥내 투여하였다. 또 Pembrolizumab (Merck 사, 10 mg/㎏) 을 미정맥내 투여하였다. 투여는 Day 25, Day 32, Day 39 (NYZ-1010), 혹은 Day 28, Day 32, Day 35, Day 39, Day 42 (Pembrolizumab) 에 실시하였다. Tumor Growth Inhibition (％) 은 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하였다.

NYZ-1010 단독 투여, Pembrolizumab 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Pembrolizumab 병용 투여의 결과를 도 3 에 나타냈다. 이식 53 일 후에 있어서의 TGI 는, NYZ-1010 단독 투여군에서 50.5 ％, Pembrolizumab 단독 투여군에서 3.1 ％ 였던 데에 반하여, NYZ-1010 과 Pembrolizumab 병용군에서는 79.0 ％ 이고, 병용에 의해 항종양 효과가 증강되는 것이 나타났다.

실시예 4. 인간 CD3ε 녹인 마우스의 제조

항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자는 인간 CD3ε 에는 결합하지만, 설치류의 CD3ε 에는 교차하지 않는다. 그래서 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자의 in vivo 에서의 평가를 가능하게 하기 위해, 인간 CD3ε 녹인 마우스를 제조하였다. 마우스 CD3ε 에 CRISPR-Cas9 와 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자가 결합하는 인간 CD3ε 서열을 녹인한 벡터를 제조하고, 마이크로인젝션법으로 C57BL/6J 마우스의 수정란에 도입하였다. 인젝션 후의 수정란을 암컷 마우스의 난관 혹은 자궁에 이식하고, 얻어진 산자 (産仔) 의 꼬리부 조직을 생검하여 PCR 및 시퀀스 해석을 실시하였다. 목적으로 하는 변이를 갖는 개체를 선별하고, 이후의 실험에 제공하였다.

실시예 5. 인간 CD3ε 녹인 마우스를 사용한 Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYF-0016) 와 항마우스 PD-1 항체의 in vivo 병용 효과

National Cancer Institute 사로부터 도입한 마우스 대장암 세포주 MC-38 에 레트로바이러스 벡터를 사용하여 HLA-A2, NY-ESO, β2 M Single Chain Trimer (NY-SCT 로 약기) 를 도입한 MC-38 NY-SCT 세포를 사용하였다. 이 세포는 세포막 상에 HLA-A2/NY-ESO 를 발현하고 있다. MC-38 NY-SCT 를 PBS (Wako 사) 로 8 × 10⁶ 세포/mL 가 되도록 조제하고, 실시예 4 에서 제조한 인간 CD3ε 녹인 마우스 (자성, 6 ∼ 7 주령) 의 피하에 0.1 mL 이식하였다 (Day 0). Day 7 부터 경시적으로 종양의 장경 (㎜) 및 단경 (㎜) 을 전자 디지털 버니어 캘리퍼스로 계측하고, 이하에 나타내는 계산식에 의해 추정 종양 체적을 산출하였다.

Day 7 에 각 군 n = 5 가 되도록 종양 체적에 의한 군 나누기를 실시하고, 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYF-0016, 5 mg/㎏ : WO2021/200857 에 기재된 방법에 의해 조제하였다.) 를 미정맥내 투여하였다. 또 항마우스 PD-1 항체 (clone RMP1-14, Bio X Cell 사, 5 mg/㎏) 를 미정맥내 투여하였다. 투여는 Day 7, Day 10 에 실시하였다. Tumor Growth Inhibition (％) 은 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하였다.

NYF-0016 단독 투여, 항마우스 PD-1 항체 단독 투여, 및 NYF-0016 과 항마우스 PD-1 항체 병용 투여의 결과를 도 4 에 나타냈다. 이식 17 일 후에 있어서의 TGI 는, NYF-0016 단독 투여군에서 31.5 ％, 항마우스 PD-1 항체 단독 투여군에서 35.3 ％ 였던 데에 반하여, NYF-0016 과 항마우스 PD-1 항체 병용군에서는 57.5 ％ 이고, 병용에 의해 항종양 효과가 증강되는 것이 나타났다.

실시예 6. 인간 폐선암 세포주에 대한 Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010) 와 항 PD-1 항체 Pembrolizumab 및 멀티키나아제 저해제 lenvatinib 의 in vivo 병용 효과

인간 폐선암 세포주 NCI-H522 (ATCC) 를 50 ％ Matrigel (CORNING 사) 함유 PBS 로 5 × 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, NSG 마우스 (자성, 4 ∼ 6 주령) 의 피하에 0.1 mL 이식하였다 (Day 0). 약 3 주일 후부터 경시적으로 종양의 장경 (㎜) 및 단경 (㎜) 을 전자 디지털 버니어 캘리퍼스로 계측하고, 이하에 나타내는 계산식에 의해 추정 종양 체적을 산출하였다.

Day 28 에 각 군 n = 5 가 되도록 종양 체적에 의한 군 나누기를 실시하고, 인간 PBMC 를 CD3/CD28 Dynabeads (ThermoFisher 사) 에 의해 자극하여 증식시킨 T 세포를 PBS 로 5 × 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, 0.2 mL 미정맥내 이식하였다. 3 - 4 시간 후에 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010, 0.01 mg/㎏) 를 미정맥내 투여하였다. 또 Pembrolizumab (Merck 사, 10 mg/㎏) 을 복강내 투여, lenvatinib (30 mpk) 을 경구 투여하였다. 투여는 Day 28, Day 35, Day 42 (NYZ-1010), Day 32, Day 39, Day 46 (Pembrolizumab), 혹은 Day 28 에서 Day 32 까지 1 일 1 회, Day 35 에서 Day 39 까지 1 일 1 회, Day 42 에서 Day 36 까지 1 일 1 회 (lenvatinib) 로 실시하였다. Tumor Growth Inhibition (％) 은 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하였다.

NYZ-1010 단독 투여, lenvatinib 과 Pembrolizumab 병용 투여, 및 NYZ-1010 과 lenvatinib 과 Pembrolizumab 병용 투여의 결과를 도 72a 에 나타냈다. 이식 52 일 후에 있어서의 TGI 는, NYZ-1010 단독 투여군에서 51.4 ％, lenvatinib 과 Pembrolizumab 병용 투여군에서 50.6 ％ 였던 데에 반하여, NYZ-1010 과 lenvatinib 과 Pembrolizumab 병용군에서는 84.1 ％ 가 되고, 3 제 병용에 의해 항종양 효과가 증강되는 것이 나타났다. 또, Day 28 의 종양 체적을 베이스 라인으로 한 각 개체의 Day 52 의 종양 체적의 변화율 Change from baseline (％) 을 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하고, 도 72b 에 나타냈다. 각 군의 Change from baseline (％) 평균값을 표 3 에 기재하였다. NYZ-1010 과 lenvatinib, Pembrolizumab 의 병용에 의한 종양 퇴축 효과가 나타났다.

Change from baseline (％) = 각 개체의 (Day 52 에 있어서의 Estimated Tumor Volume - Day 28 에 있어서의 Estimated Tumor Volume)/Day 28 에 있어서의 Estimated Tumor Volume × 100

실시예 7. BALB/C 계통 인간 CD3ε 녹인 마우스의 제조

실시예 4 에서 제조한 C57BL/6J 마우스 계통의 인간 CD3ε 녹인 마우스를 BALB/C 계통과 역교배하여, BALB/C 계통 인간 CD3ε 녹인 마우스를 제조하였다. 얻어진 산자의 꼬리부 조직을 PCR 및 시퀀스 해석을 실시하였다. 호모 치환율이 높은 개체를 선별하여 번식시키고, 이후의 실험에 제공하였다.

실시예 8. BALB/C 계통 인간 CD3ε 녹인 마우스를 사용한 Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010) 와 항마우스 PD-1 항체의 in vivo 병용 효과

ATCC 사로부터 도입한 마우스 대장암 세포주 CT26.WT 에 레트로바이러스 벡터를 사용하여 HLA-A2, NY-ESO, β2 M Single Chain Trimer (NY-SCT 로 약기) 를 도입한 CT26 NY-SCT 세포를 사용하였다. 이 세포는 세포막 상에 HLA-A2/NY-ESO 를 발현하고 있다. CT26 NY-SCT 를 PBS (Wako 사) 로 1 × 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, 실시예 7 에서 제조한 BALB/C 계통 인간 CD3ε 녹인 마우스 (자성, 7 ∼ 9 주령) 의 피하에 0.1 mL 이식하였다 (Day 0). Day 8 부터 경시적으로 종양의 장경 (㎜) 및 단경 (㎜) 을 전자 디지털 버니어 캘리퍼스로 계측하고, 이하에 나타내는 계산식에 의해 추정 종양 체적을 산출하였다.

Day 8 에 각 군 n = 5 ∼ 10 이 되도록 종양 체적에 의한 군 나누기를 실시하고, 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010, 5 mg/㎏) 를 미정맥내 투여하였다. 또 항마우스 PD-1 항체 (clone RMP1-14, Bio X Cell 사, 5 mg/㎏) 를 복강내 투여하였다. 투여는 Day 8 에 실시하였다. Tumor Growth Inhibition (％) 은 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하였다.

NYZ-1010 단독 투여, 항마우스 PD-1 항체 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 항마우스 PD-1 항체 병용 투여의 결과를 도 73a 에 나타냈다. 이식 21 일 후에 있어서의 TGI 는, NYZ-1010 단독 투여군에서 70.8 ％, 항마우스 PD-1 항체 단독 투여군에서 38.0 ％ 였던 데에 반하여, NYZ-1010 과 항마우스 PD-1 항체 병용군에서는 84.8 ％ 이고, 병용에 의해 항종양 효과가 증강되는 것이 나타났다.

도 73b. 각 단독 투여군에서는 종양이 잔존하고, 약효가 한정적이었던 (각각 회색의 실선과 미세한 파선) 데에 반하여, NYZ-1010 과 항마우스 PD-1 항체 병용군 10 예 중 3 예의 추정 종양 체적은 0 ㎣ 을 나타내고, 그 후에도 완전 퇴축을 유지하였다 (검은 동그라미, 실선). CT26 NY-SCT 를 완전 퇴축 마우스에 재이식, 혹은 종양 이식 경험이 없는 BALB/C 계통 인간 CD3ε 녹인 마우스 (이하, Naive 마우스로 표기, 자성, 7 ∼ 9 주령) 에 이식하였다. CT26 NY-SCT 는 PBS (Wako 사) 로 1 × 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, 피하에 0.1 mL 이식하였다 (Day 59). Naive 마우스에서는 종양이 생착되어 증식했지만 (거친 파선), 완전 퇴축 마우스에서는 종양이 생착되지 않고, NYZ-1010 과 항마우스 PD-1 항체에 의한 완전 퇴축이 유지되어 (검은 동그라미, 실선), 종양 세포에 대한 면역 기억이 성립한 것이 나타났다.

실시예 9. 인간 폐선암 세포주에 대한 Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010) 와 항 PD-L1 항체 Durvalumab 의 in vivo 병용 효과

인간 폐선암 세포주 NCI-H522 (ATCC) 를 50 ％ Matrigel (CORNING 사) 함유 PBS 로 5 × 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, NSG 마우스 (자성, 4 ∼ 6 주령) 의 피하에 0.1 mL 이식하였다 (Day 0). 약 1 주일 후 (Day 6 ∼ 7) 부터 경시적으로 종양의 장경 (㎜) 및 단경 (㎜) 을 전자 디지털 버니어 캘리퍼스로 계측하고, 이하에 나타내는 계산식에 의해 추정 종양 체적을 산출하였다.

Day 24 에 각 군 n = 5 가 되도록 종양 체적에 의한 군 나누기를 실시하였다. Day 25 에 인간 PBMC 를 CD3/CD28 Dynabeads (ThermoFisher 사) 에 의해 자극하여 증식시킨 T 세포를 PBS 로 5 x 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, 0.2 mL 미정맥내 이식하였다. 3 - 4 시간 후에 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010, 0.02 mg/㎏) 를 미정맥내 투여하였다. 또 Durvalumab (AstraZeneca 사, 10 mg/㎏) 은 복강내 투여하였다. 투여는 Day 25, Day 32 (NYZ-1010), 혹은 Day 28, Day 32, Day 35, Day 39 (Durvalumab) 에 실시하였다. Tumor Growth Inhibition (％), 및 Change from baseline (％) 은 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하였다.

NYZ-1010 단독 투여, Durvalumab 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Durvalumab 병용 투여의 결과를 도 74a 에 나타냈다. 이식 49 일 후에 있어서의 TGI 는, NYZ-1010 단독 투여군에서 67.7 ％, Durvalumab 단독 투여군에서 -0.8 ％ 였던 데에 반하여, NYZ-1010 과 Durvalumab 병용군에서는 92.5 ％ 이고, 병용에 의해 항종양 효과가 증강되는 것이 나타났다. 또 Day 24 의 종양 체적을 베이스 라인으로 한 각 개체의 Day 49 의 종양 체적의 변화율 Change from baseline (％) 을 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하고, 도 74b 에 나타냈다. 또 각 군의 Change from baseline (％) 평균값을 표 4 에 기재하였다. NYZ-1010 과 Durvalumab 의 병용에 의한 강한 종양 퇴축 효과가 나타났다.

Change from baseline (％) = 각 개체의 (Day 49 에 있어서의 Estimated Tumor Volume - Day 24 에 있어서의 Estimated Tumor Volume)/Day 24 에 있어서의 Estimated Tumor Volume × 100

실시예 10. BALB/C 계통 인간 CD3ε 녹인 마우스를 사용한 Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010) 와 항마우스 PD-L1 항체의 in vivo 병용 효과

실시예 8 에서 제조한 CT26 NY-SCT 를 PBS (Wako 사) 로 1 × 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, 실시예 7 에서 제조한 BALB/C 계통 인간 CD3ε 녹인 마우스 (자성, 6 ∼ 주령) 의 피하에 0.1 mL 이식하였다 (Day 0). Day 8 부터 경시적으로 종양의 장경 (㎜) 및 단경 (㎜) 을 전자 디지털 버니어 캘리퍼스로 계측하고, 이하에 나타내는 계산식에 의해 추정 종양 체적을 산출하였다.

Day 8 에 각 군 n = 5 ∼ 10 이 되도록 종양 체적에 의한 군 나누기를 실시하고, 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010, 5 mg/㎏) 를 미정맥내 투여하였다. 또 항마우스 PD-L1 항체 (clone 10F.9G2, Bio X Cell 사, 5 mg/㎏) 를 복강내 투여하였다. 투여는 Day 8 에 실시하였다. Tumor Growth Inhibition (％) 은 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하였다.

NYZ-1010 단독 투여, 항마우스 PD-L1 항체 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 항마우스 PD-L1 항체 병용 투여의 결과를 도 75a 에 나타냈다. 이식 21 일 후에 있어서의 TGI 는, NYZ-1010 단독 투여군에서 68.7 ％, 항마우스 PD-L1 항체 단독 투여군에서 36.4 ％ 였던 데에 반하여, NYZ-1010 과 항마우스 PD-L1 항체 병용군에서는 77.4 ％ 이고, 병용에 의해 항종양 효과가 증강되는 것이 나타났다.

도 75b. 각 단독 투여군에서는 종양이 잔존하고, 약효가 한정적인 (각각 회색의 실선과 미세한 파선) 데에 반하여, NYZ-1010 과 항마우스 PD-L1 항체 병용군 10 예 중 2 예의 추정 종양 체적은 0 ㎣ 을 나타내고, 그 후에도 완전 퇴축을 유지하였다 (검은 동그라미, 실선). 레트로바이러스 벡터만을 도입한 CT26.WT (이하, CT26 Mock 로 표기) 를 완전 퇴축 마우스에 재이식, 및 Naive 마우스 (자성, 15 ∼ 17 주령) 에 이식하였다. CT26 Mock 는 PBS (Wako 사) 로 1 × 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, 피하에 0.1 mL 이식하였다 (Day 64). Naive 마우스에서는 종양이 생착되어 증식했지만 (거친 파선), 완전 퇴축 마우스에서는 종양이 생착되지 않고, NYZ-1010 과 항마우스 PD-L1 항체에 의한 완전 퇴축이 유지되어 (검은 동그라미, 실선), 종양 세포에 대한 면역 기억이 성립한 것이 나타났다.

실시예 11. BALB/C 계통 인간 CD3ε 녹인 마우스를 사용한 Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010) 와 항마우스 CTLA-4 항체의 in vivo 병용 효과

실시예 8 에서 제조한 CT26 NY-SCT 를 PBS (Wako 사) 로 1 × 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, 실시예 7 에서 제조한 BALB/C 계통 인간 CD3ε 녹인 마우스 (자성, 7 ∼ 9 주령) 의 피하에 0.1 mL 이식하였다 (Day 0). Day 8 부터 경시적으로 종양의 장경 (㎜) 및 단경 (㎜) 을 전자 디지털 버니어 캘리퍼스로 계측하고, 이하에 나타내는 계산식에 의해 추정 종양 체적을 산출하였다.

Day 8 에 각 군 n = 5 ∼ 10 이 되도록 종양 체적에 의한 군 나누기를 실시하고, 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010, 5 mg/㎏) 를 미정맥내 투여하였다. 또 항마우스 CTLA-4 항체 (clone 9D9, Bio X Cell 사, 5 mg/㎏) 를 복강내 투여하였다. 투여는 Day 8 에 실시하였다. Tumor Growth Inhibition (％) 은 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하였다.

NYZ-1010 단독 투여, 항마우스 CTLA-4 항체 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 항마우스 CTLA-4 항체 병용 투여의 결과를 도 76a 에 나타냈다. 이식 21 일 후에 있어서의 TGI 는, NYZ-1010 단독 투여군에서 70.8 ％, 항마우스 CTLA-4 항체 단독 투여군에서 12.1 ％ 였던 데에 반하여, NYZ-1010 과 항마우스 CTLA-4 항체 병용군에서는 80.4 ％ 이고, 병용에 의해 항종양 효과가 증강되는 것이 나타났다.

도 76b. 각 단독 투여군에서는 종양이 잔존하고, 약효가 한정적이었던 (각각 회색의 실선과 미세한 파선) 데에 반하여, NYZ-1010 과 항마우스 CTLA-4 항체 병용군 10 예 중 1 예의 추정 종양 체적은 0 ㎣ 을 나타내고, 그 후에도 완전 퇴축을 유지하였다 (검은 동그라미, 실선). CT26 NY-SCT 를 완전 퇴축 마우스에 재이식, 및 Naive 마우스 (자성, 7 ∼ 9 주령) 에 이식하였다. CT26 NY-SCT 는 PBS (Wako 사) 로 1 × 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, 피하에 0.1 mL 이식하였다 (Day 59). Naive 마우스에서는 종양이 생착되어 증식했지만 (거친 파선), 완전 퇴축 마우스에서는 종양이 생착되지 않고, NYZ-1010 과 항마우스 CTLA-4 항체에 의한 완전 퇴축이 유지되어 (검은 동그라미, 실선), 종양 세포에 대한 면역 기억이 성립한 것이 나타났다.

실시예 12. 인간 CD3ε 녹인 마우스를 사용한 Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010) 와 항마우스 TIGIT 항체의 in vivo 병용 효과

Day 8 에 각 군 n = 5 ∼ 10 이 되도록 종양 체적에 의한 군 나누기를 실시하고, 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010, 5 mg/㎏) 를 미정맥내 투여하였다. 또 항마우스 TIGIT 항체 (clone 1B4, Absolute Antibody 사, 5 mg/㎏) 를 복강내 투여하였다. 투여는 Day 8 에 실시하였다. Tumor Growth Inhibition (％) 은 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하였다.

NYZ-1010 단독 투여, 항마우스 TIGIT 항체 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 항마우스 TIGIT 항체 병용 투여의 결과를 도 77a 에 나타냈다. 이식 24 일 후에 있어서의 TGI 는, NYZ-1010 단독 투여군에서 55.5 ％, 항마우스 TIGIT 항체 단독 투여군에서 -1.2 ％ 였던 데에 반하여, NYZ-1010 과 항마우스 TIGIT 항체 병용군에서는 78.3 ％ 이고, 병용에 의해 항종양 효과가 증강되는 것이 나타났다.

도 77b. 각 단독 투여군에서는 종양이 잔존하고, 약효가 한정적인 (각각 회색의 실선과 미세한 파선) 데에 반하여, 병용군 10 예 중 2 예의 추정 종양 체적은 0 ㎣ 을 나타내고, 그 후에도 완전 퇴축을 유지하였다 (검은 동그라미, 실선). CT26 NY-SCT 를 완전 퇴축 마우스에 재이식, 및 Naive 마우스 (자성, 15 ∼ 17 주령) 에 이식하였다. CT26 NY-SCT 는 PBS (Wako 사) 로 1 × 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, 피하에 0.1 mL 이식하였다 (Day 58). Naive 마우스에서는 종양이 생착되어 증식했지만 (거친 파선), 완전 퇴축 마우스에서는 종양이 생착되지 않고, NYZ-1010 과 항마우스 TIGIT 항체에 의한 완전 퇴축이 유지되어 (검은 동그라미, 실선), 종양 세포에 대한 면역 기억이 성립한 것이 나타났다.

실시예 13. 인간 편평 상피 폐암 세포주에 대한 Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010) 와 Carboplatin 의 in vivo 병용 효과

인간 편평 상피 폐암 세포주 NCI-H1703 (ATCC) 를 50 ％ Matrigel (CORNING 사) 함유 PBS 로 6 × 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, NSG 마우스 (자성, 4 ∼ 6 주령) 의 피하에 0.1 mL 이식하였다 (Day 0). 약 1 주일 후 (Day 6 ∼ 7) 부터 경시적으로 종양의 장경 (㎜) 및 단경 (㎜) 을 전자 디지털 버니어 캘리퍼스로 계측하고, 이하에 나타내는 계산식에 의해 추정 종양 체적을 산출하였다.

Day 14 에 각 군 n = 5 가 되도록 종양 체적에 의한 군 나누기를 실시하고, 인간 PBMC 를 CD3/CD28 Dynabeads (ThermoFisher 사) 에 의해 자극하여 증식시킨 T 세포를 PBS 로 5 x 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, 0.2 mL 미정맥내 이식하였다. 3 - 4 시간 후에 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010, 0.02 mg/㎏) 를 미정맥내 투여하였다. 또 Carboplatin (TCI 사, 50 mg/㎏) 은 복강내 투여하였다. 투여는 Day 14, Day 21 에 실시하였다. Tumor Growth Inhibition (％), 및 Change from baseline (％) 은 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하였다.

NYZ-1010 단독 투여, Carboplatin 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Carboplatin 병용 투여의 결과를 도 78 에 나타냈다. 이식 34 일 후에 있어서의 TGI 는, NYZ-1010 단독 투여군에서 47.2 ％, Carboplatin 단독 투여군에서 15.0 ％ 였던 데에 반하여, NYZ-1010 과 Carboplatin 병용군에서는 61.6 ％ 이고, 병용에 의해 항종양 효과가 증강되는 것이 나타났다.

실시예 14. 인간 식도암 세포주에 대한 Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010) 와 sacituzumab govitecan-hziy 의 in vivo 병용 효과

인간 식도암 세포주 OE-19 (DSMZ) 를 50 ％ Matrigel (CORNING 사) 함유 PBS 로 5 × 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, NSG 마우스 (자성, 4 ∼ 6 주령) 의 피하에 0.1 mL 이식하였다 (Day 0). 약 1 주일 후 (Day 6 ∼ 7) 부터 경시적으로 종양의 장경 (㎜) 및 단경 (㎜) 을 전자 디지털 버니어 캘리퍼스로 계측하고, 이하에 나타내는 계산식에 의해 추정 종양 체적을 산출하였다.

Day 6 에 각 군 n = 5 가 되도록 종양 체적에 의한 군 나누기를 실시하고, sacituzumab govitecan-hziy (25 mg/㎏) 를 미정맥내 투여하였다. Day 7 에 인간 PBMC 를 CD3/CD28 Dynabeads (ThermoFisher 사) 에 의해 자극하여 증식시킨 T 세포를 PBS 로 5 x 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, 0.2 mL 미정맥내 이식하였다. 3 - 4 시간 후에 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010, 0.01 mg/㎏) 를 미정맥내 투여하였다. 투여는 Day 7 (NYZ-1010), 혹은 Day 6, Day 13 (sacituzumab govitecan-hziy) 에 실시하였다. Tumor Growth Inhibition (％), 및 Change from baseline (％) 은 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하였다.

NYZ-1010 단독 투여, sacituzumab govitecan-hziy 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 sacituzumab govitecan-hziy 병용 투여의 결과를 도 79a 에 나타냈다. 이식 21 일 후에 있어서의 TGI 는, NYZ-1010 단독 투여군에서 79.9 ％, sacituzumab govitecan-hziy 단독 투여군에서 35.4 ％ 였던 데에 반하여, NYZ-1010 과 sacituzumab govitecan-hziy 병용군에서는 96.7 ％ 이고, 병용에 의해 항종양 효과가 증강되는 것이 나타났다. 또 Day 6 의 종양 체적을 베이스 라인으로 한 각 개체의 Day 21 의 종양 체적의 변화율 Change from baseline (％) 을 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하고, 도 79b 에 나타냈다. 또 각 군의 Change from baseline (％) 평균값을 표 5 에 기재하였다. NYZ-1010 과 sacituzumab govitecan-hziy 의 병용에 의한 종양 퇴축 효과가 나타났다.

Change from baseline (％) = (Day 21 에 있어서의 Estimated Tumor Volume - Day 6 에 있어서의 Estimated Tumor Volume)/Day 6 에 있어서의 Estimated Tumor Volume × 100

실시예 15. 인간 폐선암 세포주에 대한 Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010) 와 Doxorubicin 의 in vivo 병용 효과

인간 활막 육종 세포주 SW982 (ATCC) 를 50 ％ Matrigel (CORNING 사) 함유 PBS 로 5 × 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, NSG 마우스 (자성, 4 ∼ 6 주령) 의 피하에 0.1 mL 이식하였다 (Day 0). 약 1 주일 후 (Day 6 ∼ 7) 부터 경시적으로 종양의 장경 (㎜) 및 단경 (㎜) 을 전자 디지털 버니어 캘리퍼스로 계측하고, 이하에 나타내는 계산식에 의해 추정 종양 체적을 산출하였다.

Day 40 에 각 군 n = 5 가 되도록 종양 체적에 의한 군 나누기를 실시하고, Doxorubicin (산도즈사, 2.5 mg/㎏) 을 미정맥내 투여하였다. Day 41 에 인간 PBMC 를 CD3/CD28 Dynabeads (ThermoFisher 사) 에 의해 자극하여 증식시킨 T 세포를 PBS 로 5 x 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, 0.2 mL 미정맥내 이식하였다. 3 - 4 시간 후에 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010, 0.01 mg/㎏) 를 미정맥내 투여하였다. 투여는 Day 41 (NYZ-1010), 혹은 Day 40, Day 47 (Doxorubicin) 에 실시하였다. Tumor Growth Inhibition (％), 및 Change from baseline (％) 은 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하였다.

NYZ-1010 단독 투여, Doxorubicin 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Doxorubicin 병용 투여의 결과를 도 80a 에 나타냈다. 이식 55 일 후에 있어서의 TGI 는, NYZ-1010 단독 투여군에서 71.8 ％, Doxorubicin 단독 투여군에서 25.6 ％ 였던 데에 반하여, NYZ-1010 과 Doxorubicin 병용군에서는 90.2 ％ 이고, 병용에 의해 항종양 효과가 증강되는 것이 나타났다. 또 Day 40 의 종양 체적을 베이스 라인으로 한 각 개체의 Day 55 의 종양 체적의 변화율 Change from baseline (％) 을 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하고, 도 80b 에 나타냈다. 또 각 군의 Change from baseline (％) 평균값을 표 6 에 기재하였다. NYZ-1010 과 Doxorubicin 의 병용에 의한 종양 퇴축 효과가 나타났다.

Change from baseline (％) = (Day 55 에 있어서의 Estimated Tumor Volume-Day 40 에 있어서의 Estimated Tumor Volume)/Day 40 에 있어서의 Estimated Tumor Volume × 100

실시예 16. 인간 편평 상피 폐암 세포주에 대한 Fc 부가형 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010) 와 Decitabine 의 in vivo 병용 효과

Day 7 에 각 군 n = 5 가 되도록 종양 체적에 의한 군 나누기를 실시하고, Decitabine (도쿄 화성 공업 주식회사, 3 mg/㎏) 을 미정맥내 투여하였다. Day 14 에 인간 PBMC 를 CD3/CD28 Dynabeads (ThermoFisher 사) 에 의해 자극하여 증식시킨 T 세포를 PBS 로 5 x 10⁷ 세포/mL 가 되도록 조제하고, 0.2 mL 미정맥내 이식하였다. 3 - 4 시간 후에 항 HLA-A2/NY-ESO-항 CD3 이중 특이성 분자 (NYZ-1010, 0.02 mg/㎏) 를 미정맥내 투여하였다. 투여는 Day 14, Day 21 (NYZ-1010), 혹은 Day 7, Day 9, Day 11 (Decitabine) 에 실시하였다. Tumor Growth Inhibition (％), 및 Change from baseline (％) 은 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하였다.

Change from baseline (％) = (Day 32 에 있어서의 Estimated Tumor Volume - Day 7 에 있어서의 Estimated Tumor Volume)/Day 7 에 있어서의 Estimated Tumor Volume × 100

NYZ-1010 단독 투여, Decitabine 단독 투여, 및 NYZ-1010 과 Decitabine 병용 투여의 결과를 도 81a 에 나타냈다. 이식 32 일 후에 있어서의 TGI 는, NYZ-1010 단독 투여군에서 68.0 ％, Decitabine 단독 투여군에서 46.7 ％ 였던 데에 반하여, NYZ-1010 과 Decitabine 병용군에서는 93.0 ％ 이고, 병용에 의해 항종양 효과가 증강되는 것이 나타났다.

또 Day 7 의 종양 체적을 베이스 라인으로 한 각 개체의 Day 32 의 종양 체적의 변화율 Change from baseline (％) 을 이하에 나타내는 계산식에 의해 산출하고, 도 81b 에 나타냈다. 또 각 군의 Change from baseline (％) 평균값을 표 7 에 기재하였다.

산업상 이용가능성

본 발명이 제공하는 항체와 타제의 조합에 의해 각종 암의 치료 또는 예방이 가능해진다.

서열표 프리 텍스트

서열 번호 1 : NYA-0001 에 포함되는 CDRH1 의 아미노산 서열

서열 번호 2 : NYA-0001 에 포함되는 CDRH2 의 아미노산 서열

서열 번호 3 : 결번 (2022년 3월 16일 출원한 일본 특허출원 2022-041253 의 서열 번호 3 은 NYA-0001 에 포함되는 CDRH3 의 아미노산 서열이었다)

서열 번호 4 : NYA-0001 에 포함되는 CDRL1 의 아미노산 서열

서열 번호 5 : NYA-0001 에 포함되는 CDRL2 의 아미노산 서열

서열 번호 6 : NYA-0001 에 포함되는 CDRL3 의 아미노산 서열

서열 번호 7 : C3E-7085 의 중사슬 CDR1 의 아미노산 서열

서열 번호 8 : C3E-7085 의 중사슬 CDR3 의 아미노산 서열

서열 번호 9 : C3E-7085 의 중사슬 CDR4 의 아미노산 서열

서열 번호 10 : C3E-7085 의 경사슬 CDR1 의 아미노산 서열

서열 번호 11 : 결번 (2022년 3월 16일 출원의 우선권의 서열 번호 11 은 C3E-7085 의 경사슬 CDR2 의 아미노산 서열이었다)

서열 번호 12 : C3E-7085 의 경사슬 CDR3 의 아미노산 서열

서열 번호 13 : NYA-0001 의 중사슬 가변 영역의 아미노산 서열

서열 번호 14 : NYA-0001 의 경사슬 가변 영역의 아미노산 서열

서열 번호 15 : NYA-0082 의 중사슬 가변 영역의 아미노산 서열

서열 번호 16 : NYA-0082 의 경사슬 가변 영역의 아미노산 서열

서열 번호 17 : NYA-1163 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 18 : NYA-2023 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 19 : NYA-2027 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 20 : NYA-1143 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 21 : NYA-1143 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 22 : NYA-2143 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 23 : NYA-1143-VL01 의 아미노산 서열

서열 번호 24 : NYA-2044 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 25 : NYA-2045 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 26 : NYA-2047 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 27 : NYA-2048 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 28 : NYA-2060 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 29 : NYA-2061 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 30 : NYA-0001 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 31 : HC1 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 32 : NYF-0016-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 33 : NYF-0019-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 34 : NYF-0022-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 35 : NYF-0023-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 36 : NYF-0027-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 37 : NYF-0035-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 38 : NYF-0044-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 39 : NYF-0045-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 40 : NYF-0047-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 41 : NYF-0048-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 42 : NYF-0060-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 43 : NYF-0061-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 44 : NYA-0001-Fab-HC1-κ delete 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 45 : NYA-0001-LC 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 46 : C3E-7034 의 아미노산 서열

서열 번호 47 : C3E-7036 의 아미노산 서열

서열 번호 48 : C3E-7085 의 아미노산 서열

서열 번호 49 : C3E-7088 의 아미노산 서열

서열 번호 50 : C3E-7093 의 아미노산 서열

서열 번호 51 : C3E-7078 의 아미노산 서열

서열 번호 52 : NYF-0014-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 53 : NYF-0082-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 54 : NYF-0083-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 55 : NYZ-0082-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 56 : NYZ-0083-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 57 : NYZ-1010-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 58 : C3E-7085-LC 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 59 : C3E-7085 scFv 전체 길이 아미노산 서열

서열 번호 60 : NYZ-1007-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 61 : NYZ-1017-HC2 전체 길이의 아미노산 서열

서열 번호 62 : C3E-7096 전체 길이 아미노산 서열

서열 번호 63 : C3E-7097 전체 길이 아미노산 서열

서열 번호 64 : C3E-7098 전체 길이 아미노산 서열

서열 번호 65 : C3E-7099 전체 길이 아미노산 서열

서열 번호 66 : NY-ESO 의 아미노산 서열

서열 번호 67 : HLA-A*0201 (GenBank : ASA47534.1) 의 트렁케이트체의 아미노산 서열

서열 번호 68 : β2-마이크로글로불린의 아미노산 서열

서열 번호 69 : NYA-1143-VH02 의 아미노산 서열

서열 번호 70 : NYA-1143-VH03 의 아미노산 서열

서열 번호 71 : NYA-1154 전체 길이의 아미노산 서열

서열목록 전자파일 첨부

Claims

하기 [ii] 에 기재된 화합물을 조합하여 사용되는, 하기 [i] 에 기재된 다중 특이성 항체를 포함하는 암의 치료 및/또는 예방을 위한 의약 조성물 :
[i]
서열 번호 1 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,
서열 번호 2 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,
서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3, 혹은 서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 6 번째의 아미노산이 N 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRH3,
서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1, 혹은 서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 7 번째의 아미노산이 W 및/혹은 8 번째의 아미노산이 K 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,
Asp Asn Asn (도 11 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 5) 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 그리고
서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3, 혹은 서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 A 혹은 S 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3
을 포함하는, HLA/NY-ESO 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편,
그리고,
서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,
서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2 혹은 서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 3 번째의 아미노산이 N 또는 S 인 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,
서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,
서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,
Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2 혹은 Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 G, Q, N, S 또는 A 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 그리고
서열 번호 12 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3
을 포함하는, CD3 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편,
을 포함하는, 다중 특이성 항체 ;
[ii]
면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물, 또는 화학 요법제.
제 1 항에 있어서,
다중 특이성 항체가 이중 특이성 항체인, 의약 조성물.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
HLA/NY-ESO 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이, 하기 (i) ∼ (v) 의 세트로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 또는 2 개 이상 세트의 CDRH1 ∼ CDRH3 및 CDRL1 ∼ CDRL3 을 포함하는, 의약 조성물 :
(i)
서열 번호 1 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,
서열 번호 2 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,
서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,
서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,
Asp Asn Asn (도 11 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 5) 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및
서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3
(ii)
서열 번호 1 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,
서열 번호 2 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,
서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,
서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 7 번째의 아미노산이 W 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,
Asp Asn Asn (도 11 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 5) 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및
서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3
(iii)
서열 번호 1 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,
서열 번호 2 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,
서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 6 번째의 아미노산이 N 인 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,
서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,
Asp Asn Asn (도 11 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 5) 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및
서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 A 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3,
(iv)
서열 번호 1 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,
서열 번호 2 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,
서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,
서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,
Asp Asn Asn (도 11 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 5) 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및
서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 S 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3, 그리고
(v)
서열 번호 1 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,
서열 번호 2 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,
서열 번호 3 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,
서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 7 번째의 아미노산이 W 이고, 8 번째의 아미노산이 K 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,
Asp Asn Asn (도 11 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 5) 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및
서열 번호 6 으로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 A 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
HLA/NY-ESO 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이, 서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 21 ∼ 140 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 69 혹은 서열 번호 70 으로 나타내는 아미노산 서열과 95 ％ 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역, 및 서열 번호 18 혹은 서열 번호 28 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 156 ∼ 266 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 23 으로 나타내는 아미노산 서열과 95 ％ 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
HLA/NY-ESO 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이,
서열 번호 13 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역
서열 번호 15 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 20 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 17 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 19 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 22 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 24 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 25 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 26 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 27 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 28 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 29 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 21 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역, 혹은,
서열 번호 71 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역, 그리고
서열 번호 14 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 16 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 20 으로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 17 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 19 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 22 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 24 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 25 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 26 으로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 27 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 28 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 29 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 21 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 161 번째 ∼ 271 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역, 혹은,
서열 번호 71 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
서열 번호 13 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 14 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 15 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 16 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 20 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 20 으로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 17 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 17 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 19 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 19 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 22 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 22 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 24 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 24 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 25 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 25 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 26 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 26 으로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 27 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 27 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 28 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 28 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 29 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 29 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 21 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 21 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 161 번째 ∼ 271 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역, 또는
서열 번호 71 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 140 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 71 로 나타내는 아미노산 서열의 156 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
HLA/NY-ESO 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이 scFv 인, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
HLA/NY-ESO 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이,
서열 번호 30 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 15 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 16 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는 scFv,
서열 번호 20 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 17 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 18 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 19 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 22 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 24 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 25 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 26 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 27 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 28 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 29 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 21 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 271 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv, 또는
서열 번호 71 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 266 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv 인, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
CD3 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이, 하기 (i) ∼ (X) 의 세트로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 또는 2 개 이상 세트의 CDRH1 ∼ CDRH3 및 CDRL1 ∼ CDRL3 을 포함하는, 의약 조성물 :
(i)
서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,
서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,
서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,
서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,
Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및
서열 번호 12 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3
(ii)
서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,
서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 3 번째의 아미노산이 N 인 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,
서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,
서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,
Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및
서열 번호 12 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3
(iii)
서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,
서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 3 번째의 아미노산이 S 인 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,
서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,
서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,
Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및
서열 번호 12 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3
(iv)
서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,
서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,
서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,
서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,
Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 G 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및
서열 번호 12 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3
(v)
서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,
서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,
서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,
서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,
Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 Q 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및
서열 번호 12 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3
(vi)
서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,
서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,
서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,
서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,
Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 N 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및
서열 번호 12 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3
(vii)
서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,
서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,
서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,
서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,
Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 S 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및
서열 번호 12 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3,
(viii)
서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,
서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,
서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,
서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,
Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 A 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및
서열 번호 12 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3,
(iX)
서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,
서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 3 번째의 아미노산이 S 인 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,
서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,
서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,
Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 N 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및
서열 번호 12 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3
그리고
(X)
서열 번호 7 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH1,
서열 번호 8 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 3 번째의 아미노산이 S 인 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH2,
서열 번호 9 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 CDRH3,
서열 번호 10 으로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL1,
Arg Asp Asp (도 12 의 위에서부터 5 번째의 서열 : 도 82 의 서열 번호 11) 로 나타내는 아미노산 서열에 있어서, 2 번째의 아미노산이 S 인 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL2, 및
서열 번호 12 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 CDRL3.
제 9 항에 있어서,
CD3 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이,
서열 번호 46 으로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 47 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 51 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 48 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 49 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 50 으로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 272 번째 ∼ 389 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역,
서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 277 번째 ∼ 394 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역, 혹은
서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 277 번째 ∼ 394 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역, 그리고,
서열 번호 46 으로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 47 로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 241 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 51 로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 48 로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 241 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 49 로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 50 으로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 405 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 410 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역, 혹은
서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 410 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
을 포함하는, 의약 조성물.
제 8 항 또는 제 9 항에 있어서,
CD3 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이,
서열 번호 46 으로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 46 으로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 47 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 47 로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 241 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 51 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 51 로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 48 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 48 로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 241 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 49 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 49 로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 50 으로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 119 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 50 으로 나타내는 아미노산 서열의 135 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 272 번째 ∼ 389 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 405 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역,
서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 277 번째 ∼ 394 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 410 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역, 또는
서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 277 번째 ∼ 394 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 중사슬 가변 영역 및 서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 410 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 경사슬 가변 영역을 포함하는, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
CD3 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이 scFv 인, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
CD3 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편이,
서열 번호 46 으로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 47 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 241 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 51 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 48 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 241 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 49 로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 50 으로 나타내는 아미노산 서열의 2 번째 ∼ 243 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 272 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv,
서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 277 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv, 또는
서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 277 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 scFv 인, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
N 말단으로부터 C 말단을 향하여, scFv 인 HLA/NY-ESO 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편, scFv 인 CD3 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편 및 Fc 영역 (i) 을 그 순서로 포함하여 이루어지는 제 1 폴리펩티드 ; 그리고, Fc 영역 (ii) 를 포함하는 제 2 폴리펩티드를 포함하고, 바람직하게는, Fc 영역 (i) 과 Fc 영역 (ii) 에 있어서 회합하여 이루어지는, 의약 조성물.
제 14 항에 있어서,
제 1 폴리펩티드가, 서열 번호 32 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 34 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 35 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 36 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 37 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 38 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 39 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 40 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 41 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 42 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 43 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 33 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 52 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 53 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열을 포함하는, 의약 조성물.
제 14 항 또는 제 15 항에 있어서,
제 1 폴리펩티드가, 서열 번호 32, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 33, 52, 53 혹은 54 로 나타내는 아미노산 서열의 529 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 55 혹은 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 534 번째 ∼ 750 번째의 아미노산 서열을 포함하는, 의약 조성물.
제 14 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
제 1 폴리펩티드가, 서열 번호 32 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 34 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 35 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 36 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 37 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 38 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 39 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 40 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 41 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 42 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 43 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 33 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 52 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 53 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 750 번째의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 750 번째의 아미노산 서열로 이루어지는, 의약 조성물.
제 14 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,
제 2 폴리펩티드가, 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 246 번째의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
제 1 폴리펩티드, 제 2 폴리펩티드 및 제 3 폴리펩티드를 포함하고,
제 1 폴리펩티드가, N 말단으로부터 C 말단을 향하여, scFv 인 HLA/NY-ESO 에 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편, scFv 인 CD3 에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편 및 Fc 영역 (i) 을, 그 순서로 포함하여 이루어지고,
제 2 폴리펩티드가, Fc 영역 (ii) 를 포함하는 면역 글로불린 중사슬로 이루어지고,
제 3 폴리펩티드가 면역 글로불린 경사슬로 이루어지고,
바람직하게는, 제 2 폴리펩티드와 제 3 폴리펩티드가 회합하고 있고,
제 1 폴리펩티드와 제 2 펩티드가, 각각의 Fc 영역에 있어서 회합하고 있는, 의약 조성물.
제 19 항에 있어서,
제 2 폴리펩티드가, 서열 번호 44 로 나타내는 아미노산 서열의 아미노산 번호 20 ∼ 242 의 아미노산 서열을 포함하는, 의약 조성물.
제 19 항 또는 제 20 항에 있어서,
제 3 폴리펩티드가 서열 번호 45 로 나타내는 아미노산 서열을 포함하는, 의약 조성물.
제 19 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항에 있어서,
제 1 폴리펩티드가, 서열 번호 32 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 34 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 35 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 36 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 37 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 38 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 39 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 40 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 41 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 42 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 43 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 33 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 52 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 53 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 511 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 516 번째의 아미노산 서열을 포함하는, 의약 조성물.
제 19 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서,
제 1 폴리펩티드가, 서열 번호 32 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 34 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 35 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 36 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 37 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 38 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 39 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 40 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 41 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 42 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 43 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열 및 서열 번호 33 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 52 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 53 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 54 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 745 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 55 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 750 번째의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 56 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 750 번째의 아미노산 서열로 이루어지는, 의약 조성물.
제 9 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
N 말단으로부터 C 말단을 향하여,
scFv 인 HLA/NY-ESO 에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그 항원 결합 단편, CD3 에 결합하는 항체의 중사슬 가변 영역 및 정상 영역 CH1 그리고 면역 글로불린 Fc 영역 (i) 을 그 순서로 포함하여 이루어지는 제 1 폴리펩티드,
면역 글로불린의 힌지 영역 및 Fc 영역 (ii) 를 포함하여 이루어지는 제 2 폴리펩티드, 그리고,
가변 영역 및 정상 영역으로 이루어지는 CD3 에 결합하는 항체 경사슬을 포함하는 제 3 폴리펩티드를 포함하고,
바람직하게는, 제 1 폴리펩티드와 제 2 폴리펩티드가 Fc 영역 (i) 과 Fc 영역 (ii) 에 있어서 회합하고 있고, 제 1 폴리펩티드가 항체 중사슬의 가변 영역 및 정상 영역 CH1 에 있어서 제 3 폴리펩티드와 회합하여 이루어지는, 의약 조성물.
제 9 항 내지 제 11 항 및 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
제 1 폴리펩티드가, 서열 번호 57 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 724 번째의 아미노산 서열, 서열 번호 60 으로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 719 번째의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 61 로 나타내는 아미노산 서열 20 번째 ∼ 719 번째의 아미노산 서열을 포함하는, 의약 조성물.
제 9 항 내지 제 11 항, 제 24 항 및 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서,
제 2 폴리펩티드가, 서열 번호 31 로 나타내는 아미노산 서열의 20 번째 ∼ 246 번째의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는, 의약 조성물.
제 9 항 내지 제 11 항 및 제 24 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서,
제 3 폴리펩티드가, 서열 번호 58 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 127 번째의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는, 의약 조성물.
제 9 항 내지 제 11 항 및 제 24 항 및 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서,
제 3 폴리펩티드가, 서열 번호 58 로 나타내는 아미노산 서열의 21 번째 ∼ 233 번째의 아미노산 서열을 포함하여 이루어지는, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 28 항 중 어느 한 항에 기재된 의약 조성물로서, 그 의약 조성물에 포함되는 1 개 또는 2 개 이상의 폴리펩티드가 갖는 아미노산 서열에 있어서, 그 서열의 카르복실 말단으로부터 1 개 또는 2 개의 아미노산이 결실되어 이루어지는, 그 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 있어서,
암이, 신장암, 멜라노마, 유극 세포암, 기저 세포암, 결막암, 구강암, 후두암, 인두암, 갑상선암, 폐암 (비소세포 폐암 (선암, 편평 상피암, 대세포암), 소세포 폐암), 유방암, 식도암, 위암, 십이지장암, 소장암, 대장암, 직장암, 충수암, 항문암, 간암, 담낭암, 담관암, 췌장암, 부신암, 방광암, 전립선암, 자궁암, 질암, 지방 육종, 혈관 육종, 연골 육종, 횡문근 육종, 유잉 육종, 골육종, 미분화 다형 육종, 점액형 섬유 육종, 악성 말초성 신경초종, 후복막 육종, 활막 육종, 자궁 육종, 소화관 간질 종양, 평활근 육종, 유상피 육종, B 세포 림프종, T·NK 세포 림프종, 호지킨 림프종, 골수성 백혈병, 림프성 백혈병, 골수 증식성 질환, 골수 이형성 증후군, 다발성 골수종, 정소암 및 난소암으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 또는 2 개 이상인, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서,
면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제 후에 투여되는, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서,
면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제보다 전에 투여되는, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서,
면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제와 동시에 투여되는, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 30 항 및 제 33 항 중 어느 한 항에 있어서,
면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제를 포함하는, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항에 있어서,
추가적인 1 개 또는 2 개 이상의 의약 및/또는 치료와 조합하여 사용되는, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항에 있어서,
[ii] 에 기재된 화합물이 면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물인, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 36 항 중 어느 한 항에 있어서,
면역 체크 포인트 분자가 PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA-4 및 TIGIT 로 이루어지는 군에서 선택되는, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 있어서,
면역 체크 포인트 분자가 PD-1 인, 의약 조성물.
제 38 항에 있어서,
면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물이 니볼루맙 혹은 펨브롤리주맙, 그 항원 결합 단편, 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는 화합물인, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 있어서,
면역 체크 포인트 분자가 PD-L1 인, 의약 조성물.
제 40 항에 있어서,
면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물이 아테졸리주맙, 더발루맙 혹은 아벨루맙, 그 항원 결합 단편, 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는 화합물인, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 있어서,
면역 체크 포인트 분자가 CTLA-4 인, 의약 조성물.
제 42 항에 있어서,
면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물이 이필리무맙, 트레멜리무맙, 스파르탈리주맙 혹은 세미플리맙, 그 항원 결합 단편, 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는 화합물인, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 37 항 중 어느 한 항에 있어서,
면역 체크 포인트 분자가 TIGIT 인, 의약 조성물.
제 44 항에 있어서.
면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물이 티라골루맙 혹은 비보스톨리맙, 그 항원 결합 단편, 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는 화합물인, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 36 항 중 어느 한 항에 있어서,
면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물이 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 스파르탈리주맙, 세미플리맙, 아벨루맙, 아테졸리주맙, 더발루맙, 이필리무맙, 또는 트레멜리무맙인, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 39 항 중 어느 한 항에 있어서,
면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물이, 펨브롤리주맙 혹은 펨브롤리주맙의 항원 결합 단편, 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는 화합물인, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항에 있어서,
[ii] 에 기재된 화합물이 화학 요법제인, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 35 항 및 제 48 항 중 어느 한 항에 있어서,
화학 요법제가 미소관 형성 저해제인, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 35 항, 제 48 항 및 제 49 항 중 어느 한 항에 있어서,
화학 요법제가 탁산계의 미소관 형성 저해제인, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 35 항 및 제 48 항 내지 제 50 항 중 어느 한 항에 있어서,
화학 요법제가 파클리탁셀, 도세탁셀, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 에리불린, 비노렐빈, 알부민 현탁형 파클리탁셀옥살리플라틴, 카보플라틴, 시스플라틴, 네다플라틴, 아자시티딘, 데시타빈, 독소루비신, 블레오마이신, 리포소말 독소루비신, 이포스파미드, 시클로포스파미드, 및 다카르바진으로 이루어지는 군에서 선택되는, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 35 항 및 제 48 항 내지 제 51 항 중 어느 한 항에 있어서,
화학 요법제가 파클리탁셀 또는 알부민 현탁형 파클리탁셀인, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 52 항 중 어느 한 항에 있어서,
추가로 멀티키나아제 저해제와 조합하여 사용되는, 의약 조성물.
제 53 항에 있어서,
멀티키나아제 저해제가 소라페닙, 수니티닙, 파조파닙, 레고라페닙, 및 렌바티닙으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 개 또는 2 개 이상인, 의약 조성물.
제 53 항 또는 제 54 항에 있어서,
멀티키나아제 저해제가, 렌바티닙인, 의약 조성물.
제 53 항 내지 제 55 항 중 어느 한 항에 있어서,
[ii] 에 기재된 화합물이, 면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물이고, 바람직하게는, 펨브롤리주맙 혹은 펨브롤리주맙의 항원 결합 단편, 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는 화합물인, 의약 조성물.
제 53 항 내지 제 56 항 중 어느 한 항에 있어서,
면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물이, 펨브롤리주맙 혹은 펨브롤리주맙의 항원 결합 단편, 또는 그 항원 결합 단편을 포함하는 화합물이고, 멀티키나아제 저해제가, 렌바티닙인, 의약 조성물.
제 1 항 내지 제 35 항 및 제 48 항 내지 제 52 항 중 어느 한 항에 있어서,
화학 요법제가 파클리탁셀, 도세탁셀, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 에리불린, 비노렐빈 및 알부민 현탁형 파클리탁셀로 이루어지는 군에서 선택되는 탁산계의 미소관 형성 저해제인, 의약 조성물.
암의 치료 및/또는 예방을 위한, 제 1 항 내지 제 47 항 중 어느 한 항에 기재된 [i] 다중 특이성 항체 및 [ii] 면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제.
암의 치료 및/또는 예방을 위한, 제 53 항 내지 제 57 항 중 어느 한 항에 기재된 [i] 다중 특이성 항체 및 [ii] 면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제, 그리고, 멀티키나아제 저해제.
암의 치료 및/또는 예방을 위한, 제 1 항 내지 제 47 항 중 어느 한 항에 기재된 [i] 다중 특이성 항체 및 [ii] 면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제.
암의 치료 및/또는 예방을 위한 의약 조성물을 조제하기 위한, 제 53 항 내지 제 57 항 중 어느 한 항에 기재된 [i] 다중 특이성 항체 및 [ii] 면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제, 그리고, 멀티키나아제 저해제의 사용.
제 1 항 내지 제 47 항 중 어느 한 항에 기재된 [i] 다중 특이성 항체 및 [ii] 면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료 및/또는 예방하는 방법.
제 53 항 내지 제 57 항 중 어느 한 항에 기재된 [i] 다중 특이성 항체 및 [ii] 면역 체크 포인트 분자를 저해하는 화합물 또는 화학 요법제, 그리고, 멀티키나아제 저해제를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료 및/또는 예방하는 방법.