[go: up one dir, main page]

CN119031932A - 多特异性分子和免疫检查点抑制剂的组合 - Google Patents

多特异性分子和免疫检查点抑制剂的组合 Download PDF

Info

Publication number
CN119031932A
CN119031932A CN202380027811.8A CN202380027811A CN119031932A CN 119031932 A CN119031932 A CN 119031932A CN 202380027811 A CN202380027811 A CN 202380027811A CN 119031932 A CN119031932 A CN 119031932A
Authority
CN
China
Prior art keywords
amino acid
acid sequence
seq
sequence represented
positions
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202380027811.8A
Other languages
English (en)
Inventor
市川淳也
松井谷津彩香
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Daiichi Sankyo Co Ltd
Original Assignee
Daiichi Sankyo Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Daiichi Sankyo Co Ltd filed Critical Daiichi Sankyo Co Ltd
Publication of CN119031932A publication Critical patent/CN119031932A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2833—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

提供了用于治疗癌症的新型药剂组合。用于治疗和/或预防癌症的药物组合物包含下文[i]中描述的多特异性抗体并且与下文[ii]中描述的化合物组合使用：[i]多特异性抗体或其抗原结合片段；和[ii]免疫检查点抑制剂或化学治疗剂。

Description

多特异性分子和免疫检查点抑制剂的组合
技术领域
本发明涉及包含多特异性分子的药物组合物，该药物组合物与免疫检查点抑制剂等等组合使用，治疗或预防方法等。
背景技术
在癌症治疗中，通过肿瘤的手术切除或者使用抗癌剂或放射的癌细胞杀死可以实现治愈或延长生命效应。然而，使用抗癌剂与各种其他药物的组合尝试许多癌症的治疗，因为单一疗法并非足够有效。抗癌剂的实例包括化疗治疗剂例如多柔比星、卡铂、泰素(taxol)和喜树碱，分子靶向药剂例如伊马替尼、克唑替尼、达沙替尼和拉帕替尼，以及治疗抗癌抗体例如曲妥珠单抗、贝伐珠单抗、西妥昔单抗和雷莫芦单抗。抗癌剂及使用抗癌剂的组合疗法取决于癌症的类型或进展程度以及治疗状态进行确定。
近年来已成为护理标准治疗的免疫检查点抑制剂是抑制免疫系统的抑制剂分子(免疫检查点)且激活抗肿瘤免疫的药物(非专利文献1至3)。例如，抗PD-1抗体纳武单抗(专利文献1)和派姆单抗(专利文献2)，抗PD-L1抗体阿特珠单抗(专利文献3)、度伐利尤单抗(专利文献4)和阿维鲁单抗(专利文献5)，抗CTLA-4抗体伊匹木单抗(专利文献6)、曲美木单抗(专利文献7)、斯巴达珠单抗(专利文献8)和西米普利单抗(专利文献9)，以及抗TIGIT抗体替瑞利尤单抗(专利文献10)和维博利单抗(专利文献11)是已知的免疫检查点抑制剂。已发现在与化疗治疗剂的组合中的免疫检查点抑制剂在一些情况下具有延长生命的效应(非专利文献4)。进一步地，已报道了关于针对癌抗原和CD3的双特异性抗体的组合效应的一些研究(非专利文献5和6)。
然而，当与由抗HLA-A2/NY-ESO抗体和抗CD3抗体构成的双特异性抗体(专利文献12)组合使用时增强抗癌活性的药物基本上不为人知。
引文列表
专利文献
专利文献1：国际公开号WO 2006/121168
专利文献2：国际公开号WO 2008/156712
专利文献3：国际公开号WO 2010/077634
专利文献4：国际公开号WO 2011/066389
专利文献5：国际公开号WO 2013/079174
专利文献6：国际公开号WO 2001/014424
专利文献7：国际公开号WO 2000/037504
专利文献8：国际公开号WO 2015/112900
专利文献9：国际公开号WO 2015/196051
专利文献10：国际公开号WO 2017/053748
专利文献11：国际公开号WO 2016/028656
专利文献12：国际公开号WO 2021/200857
非专利文献
非专利文献1：Menon S.，等人，Cancers(2016)8，106.
非专利文献2：Pardoll DM.，Nat Rev Cancer(2012)12，252-264.
非专利文献3：Wolchok JD.，Cell(2015)162，937.
非专利文献4：Motzer，R.，等人，New England Journal of Medicine.(2021)384：1289-300.
非专利文献5：Deegen P.，等人，Clincal Cancer Research.(2021)27：2928-37.
非专利文献6：Tebernero J.，等人，Journal of Clinical Oncology.(2017)35：15_suppl，3002-3002.
发明概述
技术问题
本发明的一个目的是提供例如由抗HLA-A2/NY-ESO抗体和抗CD3抗体构成的多特异性抗体与另一种药剂的组合，以及待与另一种药剂组合使用的所述抗体或含有该抗体的药物组合物。
本发明的另一个目的是提供用于治疗或预防癌症的由抗HLA-A2/NY-ESO抗体和抗CD3抗体构成的多特异性抗体，或含有该多特异性抗体的药物组合物，其待与另一种药剂组合用于治疗或预防癌症。
本发明的一个进一步替代方面是提供通过施用与另一种药剂组合的由抗HLA-A2/NY-ESO抗体和抗CD3抗体构成的多特异性抗体、或药物组合物用于治疗或预防癌症的方法。
解决问题的方案
本发明人已进行研究以达到上述目的且已因此完成本发明，本发明基于以下发现：具有抗癌活性的由抗HLA-A2/NY-ESO抗体和抗CD3抗体构成的双特异性抗体当与各种抗癌剂(例如，化学治疗剂例如卡铂、紫杉醇和Nab紫杉醇，以及免疫检查点抑制剂例如派姆单抗)组合使用时产生极佳的抗肿瘤效应。
本发明涉及
(1)
用于治疗和/或预防癌症的药物组合物，其包含下述多特异性抗体[i]，该药物组合物与下述化合物[ii]组合使用：
[i]
多特异性抗体，所述多特异性抗体包含：
与HLA/NY-ESO结合的抗体或其抗原结合片段，其包含：
由通过SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3、或由通过其中在位置6处的氨基酸为N的SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1、或由通过其中在位置7处的氨基酸为W和/或在位置8处的氨基酸为K的SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Asp Asn Asn表示的氨基酸序列(图11中从顶部起的第5个序列：图82中的SEQ ID NO:5)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3、或由通过其中在位置2处的氨基酸为A或S的SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
和
与CD3结合的抗体或其抗原结合片段，其包含：
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2、或由通过其中在位置3处的氨基酸为N或S的SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2、或由通过其中在位置2处的氨基酸为G、Q、N、S或A的ArgAsp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3；
[ii]
抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂。
(2)
根据(1)的药物组合物，其中所述多特异性抗体是双特异性抗体。
(3)
根据(1)或(2)的药物组合物，其中与HLA/NY-ESO结合的抗体或其抗原结合片段包含选自下述集合(i)至(v)的CDRH1至CDRH3和CDRL1至CDRL3的一个或两个或更多个集合：
(i)
由通过SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Asp Asn Asn表示的氨基酸序列(图11中从顶部起的第5个序列：图82中的SEQ ID NO:5)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(ii)
由通过SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过其中在位置7处的氨基酸为W的SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Asp Asn Asn表示的氨基酸序列(图11中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:5)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(iii)
由通过SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过其中在位置6处的氨基酸为N的SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Asp Asn Asn表示的氨基酸序列(图11中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:5)组成的轻链CDRL2，和
由通过其中在位置2处的氨基酸为A的SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(iv)
由通过SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Asp Asn Asn表示的氨基酸序列(图11中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:5)组成的轻链CDRL2，和
由通过其中在位置2处的氨基酸为S的SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，和
(v)
由通过SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过其中在位置7处的氨基酸为W和在位置8处的氨基酸为K的SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Asp Asn Asn表示的氨基酸序列(图11中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:5)组成的轻链CDRL2，和
由通过其中在位置2处的氨基酸为A的SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3。
(4)
根据(1)至(3)中任何一个的药物组合物，其中与HLA/NY-ESO结合的抗体或其抗原结合片段包含：由与通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列、或者通过SEQ ID NO:69或SEQ ID NO:70表示的氨基酸序列具有95％或更高序列同一性的氨基酸序列组成的重链可变区，以及由与通过SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:28表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列、或者通过SEQ ID NO:23表示的氨基酸序列具有95％或更高序列同一性的氨基酸序列组成的轻链可变区。
(5)
根据(1)至(4)中任何一个的药物组合物，其中与HLA/NY-ESO结合的抗体或其抗原结合片段包含：
由通过SEQ ID NO:13表示的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:15表示的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:17表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:22表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:25表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:26表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:27表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:28表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:29表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，或
由通过SEQ ID NO:71表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区；和
由通过SEQ ID NO:14表示的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:16表示的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:17表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:22表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:25表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:26表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:27表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:28表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:29表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置161至271的氨基酸序列组成的轻链可变区，或
由通过SEQ ID NO:71表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区。
(6)
根据(1)至(5)中任何一个的药物组合物，其中与HLA/NY-ESO结合的抗体或其抗原结合片段包含：
由通过SEQ ID NO:13表示的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ IDNO:14表示的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:15表示的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ IDNO:16表示的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:17表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:17表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:22表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:22表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:25表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:25表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:26表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:26表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:27表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:27表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:28表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:28表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:29表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:29表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置161至271的氨基酸序列组成的轻链可变区，或
由通过SEQ ID NO:71表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:71表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区。
(7)
根据(1)至(6)中任何一个的药物组合物，其中与HLA/NY-ESO结合的抗体或其抗原结合片段是scFv。
(8)
根据(1)至(7)中任何一个的药物组合物，其中与HLA/NY-ESO结合的抗体或其抗原结合片段是
由通过SEQ ID NO:30表示的氨基酸序列的位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
包含由通过SEQ ID NO:15表示的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQID NO:16表示的氨基酸序列组成的轻链可变区的scFv，
由通过SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:17表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:22表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:25表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:26表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:27表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:28表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:29表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置21至271的氨基酸序列组成的scFv，或
由通过SEQ ID NO:71表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv。
(9)
根据(1)至(8)中任何一个的药物组合物，其中与CD3结合的抗体或其抗原结合片段包含选自下述集合(i)至(x)的CDRH1至CDRH3和CDRL1至CDRL3的一个或两个或更多个集合：
(i)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(ii)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过其中在位置3处的氨基酸为N的SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(iii)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过其中在位置3处的氨基酸为S的SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(iv)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过其中在位置2处的氨基酸为G的Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(v)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过其中在位置2处的氨基酸为Q的Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(vi)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过其中在位置2处的氨基酸为N的Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(vii)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过其中在位置2处的氨基酸为S的Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(viii)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过其中在位置2处的氨基酸为A的Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(ix)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过其中在位置3处的氨基酸为S的SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过其中在位置2处的氨基酸为N的Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3
和
(x)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过其中在位置3处的氨基酸为S的SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过其中在位置2处的氨基酸为S的Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3。
(10)
根据(9)的药物组合物，其中
与CD3结合的抗体或其抗原结合片段包含：
由通过SEQ ID NO:46表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:47表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:51表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:48表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:49表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:50表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置272至389的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置277至394的氨基酸序列组成的重链可变区，或
由通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置277至394的氨基酸序列组成的重链可变区，和
由通过SEQ ID NO:46表示的氨基酸序列的对应于位置135至243的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:47表示的氨基酸序列的对应于位置135至241的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:51表示的氨基酸序列的对应于位置135至243的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:48表示的氨基酸序列的对应于位置135至241的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:49表示的氨基酸序列的对应于位置135至243的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:50表示的氨基酸序列的对应于位置135至243的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置405至511的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置410至516的氨基酸序列组成的轻链可变区，或
由通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置410至516的氨基酸序列组成的轻链可变区。
(11)
根据(8)或(9)的药物组合物，其中
与CD3结合的抗体或其抗原结合片段包含：
由通过SEQ ID NO:46表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:46表示的氨基酸序列的对应于位置135至243的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:47表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:47表示的氨基酸序列的对应于位置135至241的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:51表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:51表示的氨基酸序列的对应于位置135至243的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:48表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:48表示的氨基酸序列的对应于位置135至241的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:49表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:49表示的氨基酸序列的对应于位置135至243的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:50表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:50表示的氨基酸序列的对应于位置135至243的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置272至389的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置405至511的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置277至394的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置410至516的氨基酸序列组成的轻链可变区，或
由通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置277至394的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置410至516的氨基酸序列组成的轻链可变区。
(12)
根据(1)至(11)中任何一个的药物组合物，其中与CD3结合的抗体或其抗原结合片段是scFv。
(13)
根据(1)至(12)中任何一个的药物组合物，其中与CD3结合的抗体或其抗原结合片段是
由通过SEQ ID NO:46表示的氨基酸序列的对应于位置2至243的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:47表示的氨基酸序列的对应于位置2至241的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:51表示的氨基酸序列的对应于位置2至243的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:48表示的氨基酸序列的对应于位置2至241的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:49表示的氨基酸序列的对应于位置2至243的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:50表示的氨基酸序列的对应于位置2至243的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置272至511的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置277至516的氨基酸序列组成的scFv，或
由通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置277至516的氨基酸序列组成的scFv。
(14)
根据(1)至(13)中任何一个的药物组合物，其中所述药物组合物包含：第一多肽，其从N末端朝向C末端按照该次序包含其为scFv的与HLA/NY-ESO结合的抗体或其抗原结合片段、其为scFv的与CD3结合的抗体或其抗原结合片段、以及Fc区(i)；以及包含Fc区(ii)的第二多肽，其中优选地，第一多肽和第二多肽经由Fc区(i)和Fc区(ii)彼此缔合。
(15)
根据(14)的药物组合物，其中所述第一多肽包含通过SEQ ID NO:32表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:34表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:35表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:36表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:37表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:38表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:39表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:40表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:41表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:42表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:43表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ IDNO:33表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:52表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:53表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置21至516的氨基酸序列、或通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置21至516的氨基酸序列。
(16)
根据(14)或(15)的药物组合物，其中所述第一多肽包含通过SEQ ID NO:32、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、33、52、53或54表示的氨基酸序列的对应于位置529至745的氨基酸序列，或者通过SEQ ID NO:55或56表示的氨基酸序列的对应于位置534至750的氨基酸序列。
(17)
根据(14)至(16)中任何一个的药物组合物，其中所述第一多肽由以下组成：通过SEQ ID NO:32表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:34表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:35表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:36表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:37表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:38表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:39表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:40表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:41表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:42表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:43表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:33表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:52表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ IDNO:53表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置20至750的氨基酸序列、或通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置20至750的氨基酸序列。
(18)
根据(14)至(17)中任何一个的药物组合物，其中所述第二多肽包含通过SEQ IDNO:31表示的氨基酸序列的对应于位置20至246的氨基酸序列。
(19)
根据(1)至(13)中任何一个的药物组合物，其中所述药物组合物包含第一多肽、第二多肽和第三多肽，
所述第一多肽从N末端朝向C末端按照该次序包含其为scFv的与HLA/NY-ESO结合的抗体或其抗原结合片段、其为scFv的与CD3特异性结合的抗体或其抗原结合片段、以及Fc区(i)，
所述第二多肽由包含Fc区(ii)的免疫球蛋白重链组成，和
所述第三多肽由免疫球蛋白轻链组成，其中
优选地，第二多肽和第三多肽彼此缔合，和
第一多肽和第二多肽经由其分别的Fc区彼此缔合。
(20)
根据(19)的药物组合物，其中所述第二多肽包含通过SEQ ID NO:44表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置20至242的氨基酸序列。
(21)
根据(19)或(20)的药物组合物，其中所述第三多肽包含通过SEQ ID NO:45表示的氨基酸序列。
(22)
根据(19)至(21)中任何一个的药物组合物，其中所述第一多肽包含通过SEQ IDNO:32表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:34表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:35表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:36表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:37表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:38表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ IDNO:39表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:40表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:41表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:42表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:43表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:33表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ IDNO:52表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:53表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置21至516的氨基酸序列、或通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置21至516的氨基酸序列。
(23)
根据(19)至(22)中任何一个的药物组合物，其中所述第一多肽由以下组成：通过SEQ ID NO:32表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:34表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:35表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:36表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:37表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:38表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:39表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:40表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:41表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:42表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:43表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:33表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:52表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ IDNO:53表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置20至750的氨基酸序列、或通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置20至750的氨基酸序列。
(24)
根据(9)至(11)中任何一个的药物组合物，其中所述药物组合物包含：
第一多肽，其从N末端朝向C末端按照该次序包含其为scFv的与HLA/NY-ESO特异性结合的抗体或其抗原结合片段、与CD3结合的抗体的重链可变区和恒定区CH1、以及免疫球蛋白Fc区(i)；
第二多肽，其包含免疫球蛋白铰链区和Fc区(ii)；和
第三多肽，其包含与CD3结合的抗体的轻链，所述轻链由可变区和恒定区组成，其中
优选地，第一多肽和第二多肽经由Fc区(i)和Fc区(ii)彼此缔合，并且第一多肽在抗体重链可变区和恒定区CH1处与第三多肽缔合。
(25)
根据(9)至(11)和(24)中任何一个的药物组合物，其中所述第一多肽包含通过SEQID NO:57表示的氨基酸序列的对应于位置20至724的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:60表示的氨基酸序列的对应于位置20至719的氨基酸序列、或通过SEQ ID NO:61表示的氨基酸序列的对应于位置20至719的氨基酸序列。
(26)
根据(9)至(11)、(24)和(25)中任何一个的药物组合物，其中所述第二多肽包含通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置20至246的氨基酸序列。
(27)
根据(9)至(11)和(24)至(26)中任何一个的药物组合物，其中所述第三多肽包含通过SEQ ID NO:58表示的氨基酸序列的对应于位置21至127的氨基酸序列。
(28)
根据(9)至(11)和(24)至(27)中任何一个的药物组合物，其中所述第三多肽包含通过SEQ ID NO:58表示的氨基酸序列的对应于位置21至233的氨基酸序列。
(29)
根据(1)至(28)中任何一个的药物组合物，其中所述药物组合物中包含的一个、两个或更多个多肽的氨基酸序列缺少一个或两个羧基末端氨基酸。
(30)
根据(1)至(29)中任何一个的药物组合物，其中所述癌症是选自以下的一个、两个或更多个成员：肾癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌、结膜癌、口癌、喉癌、咽喉癌、甲状腺癌、肺癌(非小细胞肺癌(腺癌、鳞状细胞癌和大细胞癌)和小细胞肺癌)、乳腺癌、食管癌、胃癌、十二指肠癌、小肠癌、大肠癌、直肠癌、阑尾癌、肛门癌、肝癌、胆囊癌、胆管癌、胰腺癌、肾上腺癌、膀胱癌、前列腺癌、子宫癌、阴道癌、脂肪肉瘤、血管肉瘤、软骨肉瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、未分化多形性肉瘤、粘液纤维肉瘤、恶性周围神经鞘瘤、腹膜后肉瘤、滑膜肉瘤、子宫肉瘤、胃肠道间质瘤、平滑肌肉瘤、上皮样肉瘤、B细胞淋巴瘤、T/NK细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、髓系白血病、淋巴样白血病、骨髓增生性疾病、骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤、睾丸癌和卵巢癌。
(31)
根据(1)至(30)中任何一个的药物组合物，其中所述药物组合物在抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂之后施用。
(32)
根据(1)至(30)中任何一个的药物组合物，其中所述药物组合物在抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂之前施用。
(33)
根据(1)至(30)中任何一个的药物组合物，其中所述药物组合物与抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂同时施用。
(34)
根据(1)至(30)和(33)中任何一个的药物组合物，其中所述药物组合物包含抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂。
(35)
根据(1)至(34)中任何一个的药物组合物，其中所述药物组合物与一种、两种或更多种另外的药剂和/或疗法组合使用。
(36)
根据(1)至(35)中任何一个的药物组合物，其中化合物[ii]是抑制免疫检查点分子的化合物。
(37)
根据(1)至(36)中任何一个的药物组合物，其中所述免疫检查点分子选自PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4和TIGIT。
(38)
根据(1)至(37)中任何一个的药物组合物，其中所述免疫检查点分子是PD-1。
(39)
根据(38)的药物组合物，其中抑制免疫检查点分子的化合物是纳武单抗或派姆单抗、其抗原结合片段或包含其抗原结合片段的化合物。
(40)
根据(1)至(37)中任何一个的药物组合物，其中所述免疫检查点分子是PD-L1。
(41)
根据(40)的药物组合物，其中抑制免疫检查点分子的化合物是阿特珠单抗、度伐利尤单抗或阿维鲁单抗、其抗原结合片段或包含其抗原结合片段的化合物。
(42)
根据(1)至(37)中任何一个的药物组合物，其中所述免疫检查点分子是CTLA-4。
(43)
根据(42)的药物组合物，其中抑制免疫检查点分子的化合物是伊匹木单抗、曲美木单抗、斯巴达珠单抗或西米普利单抗、其抗原结合片段或包含其抗原结合片段的化合物。
(44)
根据(1)至(37)中任何一个的药物组合物，其中所述免疫检查点分子是TIGIT。
(45)
根据(44)的药物组合物，其中抑制免疫检查点分子的化合物是替瑞利尤单抗或维博利单抗、其抗原结合片段或包含其抗原结合片段的化合物。
(46)
根据(1)至(36)中任何一个的药物组合物，其中抑制免疫检查点分子的化合物是派姆单抗、纳武单抗、斯巴达珠单抗、西米普利单抗、阿维鲁单抗、阿特珠单抗、度伐利尤单抗、伊匹木单抗或曲美木单抗。
(47)
根据(1)至(39)中任何一个的药物组合物，其中抑制免疫检查点分子的化合物是派姆单抗、派姆单抗的抗原结合片段或包含其抗原结合片段的化合物。
(48)
根据(1)至(35)中任何一个的药物组合物，其中化合物[ii]是化学治疗剂。
(49)
根据(1)至(35)和(48)中任何一个的药物组合物，其中所述化学治疗剂是微管抑制剂。
(50)
根据(1)至(35)、(48)和(49)中任何一个的药物组合物，其中所述化学治疗剂是基于紫杉烷的微管抑制剂。
(51)
根据(1)至(35)和(48)至(50)中任何一个的药物组合物，其中所述化学治疗剂选自紫杉醇、多西他赛、长春新碱、长春碱、长春地辛、艾日布林、长春瑞滨、白蛋白结合型紫杉醇、奥沙利铂、卡铂、顺铂、奈达铂、氮杂胞苷、地西他滨、多柔比星、博来霉素、多柔比星脂质体、异环磷酰胺、环磷酰胺和达卡巴嗪。
(52)
根据(1)至(35)和(48)至(51)中任何一个的药物组合物，其中所述化学治疗剂是紫杉醇或白蛋白结合型紫杉醇。
(53)
根据(1)至(52)中任何一个的药物组合物，其中所述药物组合物进一步与多激酶抑制剂组合使用。
(54)
根据(53)的药物组合物，其中所述多激酶抑制剂是选自索拉非尼、舒尼替尼、帕唑帕尼、瑞戈非尼和乐伐替尼的一个、两个或更多个成员。
(55)
根据(53)或(54)的药物组合物，其中所述多激酶抑制剂是乐伐替尼。
(56)
根据(53)至(55)中任何一个的药物组合物，其中所述化合物[ii]是抑制免疫检查点分子的化合物，优选派姆单抗、派姆单抗的抗原结合片段或包含其抗原结合片段的化合物。
(57)
根据(53)至(56)中任何一个的药物组合物，其中抑制免疫检查点分子的化合物是派姆单抗、派姆单抗的抗原结合片段或包含其抗原结合片段的化合物，并且所述多激酶抑制剂是乐伐替尼。
(58)
根据(1)至(35)和(48)至(52)中任何一个的药物组合物，其中所述化学治疗剂是选自紫杉醇、多西他赛、长春新碱、长春碱、长春地辛、艾日布林、长春瑞滨和白蛋白结合型紫杉醇的基于紫杉烷的微管抑制剂。
(59)
根据(1)至(47)中任何一个的[i]多特异性抗体和[ii]抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂，其用于治疗和/或预防癌症。
(60)
根据(53)至(57)中任何一个的[i]多特异性抗体和[ii]抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂、以及多激酶抑制剂，其用于治疗和/或预防癌症。
(61)
根据(1)至(47)中任何一个的[i]多特异性抗体和[ii]抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂，其用于治疗和/或预防癌症。
(62)
根据(53)至(57)中任何一个的[i]多特异性抗体和[ii]抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂、以及多激酶抑制剂用于制备用于治疗和/或预防癌症的药物组合物的用途。
(63)
用于治疗和/或预防癌症的方法，其包括施用根据(1)至(47)中任何一个的[i]多特异性抗体和[ii]抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂。
(64)
用于治疗和/或预防癌症的方法，其包括施用根据(53)至(57)中任何一个的[i]多特异性抗体和[ii]抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂、以及多激酶抑制剂等。
发明的有益效果
根据本发明提供的抗体和另一种药剂的组合允许治疗或预防各种癌症。
附图简述
[图1(1)]图1(1)是显示了通过向人T细胞转移模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用紫杉醇、以及组合施用NYZ-1010和紫杉醇实现的抗肿瘤活性的图解。图解中的误差条表示标准差(n＝5)。
[图1(2)]图1(2)是显示了向人T细胞转移模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用紫杉醇、以及组合施用NYZ-1010和紫杉醇后，使用作为基线的在第12天时的肿瘤体积，每个个体小鼠在第31天时的肿瘤体积的百分比变化的图解。
[图2(1)]图2(1)是显示了通过向人T细胞转移模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用Nab紫杉醇、以及组合施用NYZ-1010和Nab紫杉醇实现的抗肿瘤活性的图解。图解中的误差条表示标准差(n＝5)。
[图2(2)]图2(2)是显示了向人T细胞转移模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用Nab紫杉醇、以及组合施用NYZ-1010和Nab紫杉醇后，使用作为基线的在第13天时的肿瘤体积，每个个体小鼠在第38天时的肿瘤体积的百分比变化的图解。
[图3]图3是显示了通过向人T细胞转移模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用派姆单抗、以及组合施用NYZ-1010和派姆单抗实现的抗肿瘤活性的图解。图解中的误差条表示标准差(n＝5)。
[图4]图4是显示了通过向人CD3ε敲入小鼠模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYF-0016、单一施用抗小鼠PD-1抗体、以及组合施用NYF-0016和抗小鼠PD-1抗体实现的抗肿瘤活性的图解。图解中的误差条表示标准差(n＝5)。
[图5]图5是显示了根据本发明可以使用的抗体形式的图解。(5a)scFv：通过接头连接的抗体H链可变区(VH，下文提到的)和抗体L链可变区(VL，下文提到的)(两者均为空心的)的形式。在本发明的实施例中，抗HLA-A2/NY-ESO scFv和抗CD3 scFv用于评估中。(5b)Fab：由VH(空心的)-抗体H链恒定区(CH1：棋盘格)和VL(空心的)-抗体L链恒定区(水平线)组成的形式。在本发明的实施例中，抗HLA-A2/NY-ESO Fab等等用于评估中。(5c)taFv：通过接头连接的两类scFv分子(分别为空心和正阴影线的)的形式。在本发明的实施例中，包含抗HLA-A2/NY-ESO scFv和抗CD3 scFv的taFv用于评估中。(5d)taFv-异二聚体Fc型：其中突变以形成异二聚体的Fc(反阴影线的)缀合至taFv(也被称为第一多肽)的C末端，并且与另一种Fc(实心的：也被称为第二多肽)异源缔合的形式。在本发明的实施例中，使用包含抗HLA-A2/NY-ESO scFv和抗CD3 scFv的taFv-异二聚体Fc。(5e)taFv-Fab-异二聚体Fc型：加入taFv-异二聚体Fc型中的Fab的形式。在本发明的实施例中，使用包含抗HLA-A2/NY-ESOscFv和抗CD3 scFv的taFv、以及HLA-A2/NY-ESO Fab等等获得的taFv-Fab-异二聚体Fc用于评估中。
[图6]图6是显示了根据本发明可以使用的抗体形式的图解。(6a)显示了与taFv-异二聚体Fc型和taFv-Fab-异二聚体Fc型共同的第一多肽。第一多肽从N末端朝向C末端按照该次序包含与人HLA/NY-ESO特异性结合的scFv、与CD3特异性结合的scFv和Fc区(i)。(6b)显示了以taFv-异二聚体Fc型的第二多肽。第二多肽包含铰链区和Fc区(ii)。(6c)显示了以taFv-Fab-异二聚体Fc型的第二多肽。第二多肽包含免疫球蛋白重链，其包含铰链区和Fc区(ii)。(6d)显示了以taFv-Fab-异二聚体Fc型的第三多肽。第三多肽包含免疫球蛋白轻链。
[图7]图7是显示了根据本发明可以使用的抗体形式的图解。(7a)混合型：其中突变以形成异二聚体的Fc(斜线和实心的)加入Fab和scFv各自的C末端，并且这两个Fc分子彼此缔合的形式。在本发明的实施例中，包含抗HLA-A2/NY-ESO Fab和抗CD3 scFv的混合型用于评估中。(7b)双重型：其中突变以形成异二聚体的Fc(分别为反阴影线和实心的)缀合至两类scFv分子各自的C末端，并且这两个Fc分子彼此异源缔合的形式。在本发明的实施例中，包含抗HLA-A2/NY-ESO scFv和抗CD3 scFv的双重型用于评估中。(7c)scFv-Fab-异二聚体Fc型：突变以形成异二聚体的Fc(反阴影线的)缀合至scFv和Fab的C末端并通过接头连接，并且与另一种Fc(实心的)缔合。在本发明的实施例中，包含抗CD3 scFv(正阴影线的)和抗HLA-A2/NY-ESO Fab的scFv-Fab-异二聚体Fc型用于评估中。另外，包含抗HLA-A2/NY-ESOscFv(正阴影线的)和抗CD3 Fab的scFv-Fab-异二聚体Fc型用于评估中。
[图8]图8是显示了根据本发明可以使用的抗体形式的图解。(8a)taFv-异二聚体Fc型：与图5(5d)相同。在这种形式中，将突变以形成异二聚体的Fc(反阴影线的)缀合至taFv的C末端，并且与另一种Fc(实心的)异源缔合。在本发明的实施例中，由抗HLA-A2/NY-ESO scFv和抗CD3 scFv组成的taFv-异二聚体Fc型用于评估中。(8b)taFv(倒转的)-异二聚体Fc型：taFv-异二聚体Fc型中的两个scFv分子的次序关于8(a)逆转。
[图9]图9是显示了根据本发明可以使用的抗体形式的图解。(9a)显示了以taFv(倒转的)-异二聚体Fc型的第一多肽。第一多肽从N末端朝向C末端按照该次序包含与CD3特异性结合的scFv、与人HLA/NY-ESO特异性结合的scFv和Fc区(i)。(9b)显示了以taFv(倒转的)-异二聚体Fc型的第二多肽。第二多肽包含铰链区和Fc区(ii)。
[图10]图10显示了人CD3ε的氨基酸序列。这种序列在NCBI/GenPept中的登录号：NP_000724(NM_000724.1)下注册。
[图11]图11显示了NYA-0001中包含的CDRH1至CDRH3和CDRL1至CDRL3的氨基酸序列(SEQ ID NO:1至4和6；第5个序列为DNN且对应于图82中的SEQ ID NO:5)。
[图12]图12显示了C3E-7085的重链CDRH1至CDRH3和轻链CDRL1至CDRL3的氨基酸序列(SEQ ID NO:7至10和12；第11个序列为RDD且对应于图82中的SEQ ID NO:11)。
[图13]图13显示了NYA-0001的重链可变区的氨基酸序列(SEQ ID NO:13)。
[图14]图14显示了NYA-0001的轻链可变区的氨基酸序列(SEQ ID NO:14)。
[图15]图15显示了NYA-0082的重链可变区的氨基酸序列(SEQ ID NO:15)。
[图16]图16显示了NYA-0082的轻链可变区的氨基酸序列(SEQ ID NO:16)。
[图17]图17显示了NYA-1163的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:17)。这包括信号序列(1-19)、NYA-1163(21-266)和FLAG-His标签(267-292)。
[图18]图18显示了NYA-2023的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:18)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2023(21-266)和FLAG-His标签(267-292)。
[图19]图19显示了NYA-2027的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:19)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2027(21-266)和FLAG-His标签(267-292)。
[图20]图20显示了NYA-1143的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:20)。这包括信号序列(1-19)、NYA-1143(21-266)和FLAG-His标签(267-292)。
[图21]图21显示了NYA-2143的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:21)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2143(21-266)和FLAG-His标签(267-292)。
[图22]图22显示了NYA-2035的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:22)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2035(21-266)和FLAG-His标签(267-292)。
[图23]图23显示了NYA-1143-VL01的氨基酸序列(SEQ ID NO:23)。
[图24]图24显示了NYA-2044的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:24)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2044(21-266)和FLAG-His标签(267-292)。
[图25]图25显示了NYA-2045的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:25)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2045(21-266)和FLAG-His标签(267-292)。
[图26]图26显示了NYA-2047的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:26)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2047(21-266)和FLAG-His标签(267-292)。
[图27]图27显示了NYA-2048的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:27)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2048(21-266)和FLAG-His标签(267-292)
[图28]图28显示了NYA-2060的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:28)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2060(21-266)和FLAG-His标签(267-292)。
[图29]图29显示了NYA-2061的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:29)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2061(21-266)和FLAG-His标签(267-292)。
[图30]图30显示了NYA-0001的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:30)。这包括信号序列(1-19)、NYA-0001(21-266)和FLAG-His标签(267-292)
[图31]图31显示了HC1的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:31)。这包括信号序列(1-19)、铰链(20-29)、CH2(30-139)和CH3(140-246)。
[图32]图32显示了NYF-0016-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:32)。这包括信号序列(1-19)、NYA-1143(21-266)、接头(267-271)、C3E-7085(272-511)、接头(512-513)、铰链(514-528)、CH2(529-638)和CH3(639-745)。
[图33]图33显示了NYF-0019-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:33)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2143(21-266)、接头(267-271)、C3E-7085(272-511)、接头(512-513)、铰链(514-528)、CH2(529-638)和CH3(639-745)。
[图34]图34显示了NYF-0022-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:34)。这包括信号序列(1-19)、NYA-1163(21-266)、接头(267-271)、C3E-7085(272-511)、接头(512-513)、铰链(514-528)、CH2(529-638)和CH3(639-745)。
[图35]图35显示了NYF-0023-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:35)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2023(21-266)、接头(267-271)、C3E-7085(272-511)、接头(512-513)、铰链(514-528)、CH2(529-638)和CH3(639-745)。
[图36]图36显示了NYF-0027-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:36)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2027(21-266)、接头(267-271)、C3E-7085(272-511)、接头(512-513)、铰链(514-528)、CH2(529-638)和CH3(639-745)。
[图37]图37显示了NYF-0035-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:37)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2035(21-266)、接头(267-271)、C3E-7085(272-511)、接头(512-513)、铰链(514-528)、CH2(529-638)和CH3(639-745)。
[图38]图38显示了NYF-0044-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:38)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2044(21-266)、接头(267-271)、C3E-7085(272-511)、接头(512-513)、铰链(514-528)、CH2(529-638)和CH3(639-745)。
[图39]图39显示了NYF-0045-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:39)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2045(21-266)、接头(267-271)、C3E-7085(272-511)、接头(512-513)、铰链(514-528)、CH2(529-638)和CH3(639-745)。
[图40]图40显示了NYF-0047-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:40)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2047(21-266)、接头(267-271)、C3E-7085(272-511)、接头(512-513)、铰链(514-528)、CH2(529-638)和CH3(639-745)。
[图41]图41显示了NYF-0048-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:41)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2048(21-266)、接头(267-271)、C3E-7085(272-511)、接头(512-513)、铰链(514-528)、CH2(529-638)和CH3(639-745)。
[图42]图42显示了NYF-0060-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:42)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2060(21-266)、接头(267-271)、C3E-7085(272-511)、接头(512-513)、铰链(514-528)、CH2(529-638)和CH3(639-745)。
[图43]图43显示了NYF-0061-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:43)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2061(21-266)、接头(267-271)、C3E-7085(272-511)、接头(512-513)、铰链(514-528)、CH2(529-638)和CH3(639-745)。
[图44]图44显示了NYA-0001-Fab-HC1-κ缺失的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:44)。这包括信号序列(1-19)、NYA-0001_VH(20-139)、CH1(140-237)、铰链(238-252)、CH2(253-362)和CH3(363-468)。
[图45]图45显示了NYA-0001-LC的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:45)。这包括信号序列(1-20)、NYA-0001_VL(21-131)和CL(132-237)。
[图46]图46显示了C3E-7034(1-269)的氨基酸序列(SEQ ID NO:46)。这包括scFv(2-241)和FLAG-His标签(244-269)。
[图47]图47显示了C3E-7036(1-267)的氨基酸序列(SEQ ID NO:47)。这包括scFv(2-241)和FLAG-His标签(244-269)。
[图48]图48显示了C3E-7085(1-267)的氨基酸序列(SEQ ID NO:48)。这包括scFv(2-241)和FLAG-His标签(242-267)。
[图49]图49显示了C3E-7088(1-269)的氨基酸序列(SEQ ID NO:49)。这包括scFv(2-243)和FLAG-His标签(244-269)。
[图50]图50显示了C3E-7093(1-269)的氨基酸序列(SEQ ID NO:50)。这包括scFv(2-243)和FLAG-His标签(244-269)。
[图51]图51显示了C3E-7078(1-269)的氨基酸序列(SEQ ID NO:51)。这包括scFv(2-243)和FLAG-His标签(244-269)。
[图52]图52显示了NYF-0014-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:52)。这包括信号序列(1-19)、NYA-0001(21-266)、接头(267-271)、C3E-7085(272-511)、接头(512-513)、铰链(514-528)、CH2(529-638)和CH3(639-745)。
[图53]图53显示了NYF-0082-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:53)。这包括信号序列(1-19)、NYA-0082(21-266)、接头(267-271)、C3E-7085(272-511)、接头(512-513)、铰链(514-528)、CH2(529-638)和CH3(639-745)。
[图54]图54显示了NYF-0083-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:54)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2061(21-266)、接头(267-271)、C3E-7095(272-511)、接头(512-513)、铰链(514-528)、CH2(529-638)和CH3(639-745)。
[图55]图55显示了NYZ-0082-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:55)。这包括信号序列(1-19)、NYA-3061(21-271)、接头(272-276)、C3E-7096(277-516)、接头(517-518)、铰链(519-533)、CH2(534-643)和CH3(644-750)。
[图56]图56显示了NYZ-0083-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:56)。这包括信号序列(1-19)、NYA-3061(21-271)、接头(272-276)、C3E-7097(277-516)、接头(517-518)、铰链(519-533)、CH2(534-643)和CH3(644-750)。
[图57]图57显示了NYZ-1010-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:57)。这包括信号序列(1-19)、NYA-3061(21-271)、接头(272-276)、C3E-7085-VH(277-394)、CH1(395-492)、铰链(493-507)、CH2(508-617)和CH3(618-724)。
[图58]图58显示了C3E-7085-LC的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:58)。这包括信号序列(1-20)、C3E-7085_VL(21-127)和CL(128-233)。
[图59]图59显示了NYA-3061的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:59)。这包括信号序列(1-19)、NYA-3061(21-271)和FLAG-His标签(272-297)。
[图60]图60显示了NYZ-1007-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:60)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2061(21-266)、接头(267-271)、C3E-7085-VH(272-389)、CH1(390-487)、铰链(488-502)、CH2(503-612)和CH3(613-719)。
[图61]图61显示了NYZ-1017-HC2的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:61)。这包括信号序列(1-19)、NYA-2047(21-266)、接头(267-271)、C3E-7085-VH(272-389)、CH1(390-487)、铰链(488-502)、CH2(503-612)和CH3(613-719)。
[图62]图62显示了C3E-7096的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:62)。
[图63]图63显示了C3E-7097的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:63)。
[图64]图64显示了C3E-7098的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:64)。
[图65]图65显示了C3E-7099的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:65)。
[图66]图66显示了NY-ESO的氨基酸序列(SEQ ID NO:66)。
[图67]图67显示了HLA-A*0201(GenBank:ASA47534.1)的截短形式的氨基酸序列(SEQ ID NO:67)。
[图68]图68显示了β2-微球蛋白的氨基酸序列(SEQ ID NO:68)。
[图69]图69显示了NYA-1143-VH02的氨基酸序列(SEQ ID NO:69)。
[图70]图70显示了NYA-1143-VH03的氨基酸序列(SEQ ID NO:70)。
[图71]图71显示了NYA-1154的全长氨基酸序列(SEQ ID NO:71)。这包括信号序列(1-19)、NYA-1154(21-266)和FLAG-His标签(267-292)。
[图72(1)]图72(1)是显示了通过向人T细胞转移模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010，组合施用乐伐替尼和派姆单抗，以及组合施用NYZ-1010、乐伐替尼和派姆单抗实现的抗肿瘤活性的图解。图解中的误差条表示标准差(n＝5)。
[图72(2)]图72(2)是显示了向人T细胞转移模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010，组合施用乐伐替尼和派姆单抗，以及组合施用NYZ-1010、乐伐替尼和派姆单抗后，使用作为基线的在第28天时的肿瘤体积，每个小鼠在第52天时的肿瘤体积的百分比变化的图解。
[图73(1)]图73(1)是显示了通过向BALB/C品系的人CD3ε敲入小鼠模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用抗小鼠PD-1抗体、以及组合施用NYZ-1010和抗小鼠PD-1抗体实现的抗肿瘤活性的图解。图解中的误差条表示标准差(n＝5至10)。
[图73(2)]图73(2)是显示了向BALB/C品系的人CD3ε敲入小鼠模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用抗小鼠PD-1抗体、以及组合施用NYZ-1010和抗小鼠PD-1抗体后每个小鼠的估计肿瘤体积，以及在具有完全消退的小鼠和首次用于实验(naive)的小鼠中的CT26 NY-SCT再攻击后的估计肿瘤体积的图解。
[图74(1)]图74(1)是显示了通过向人T细胞转移模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用度伐利尤单抗、以及组合施用NYZ-1010和度伐利尤单抗实现的抗肿瘤活性的图解。图解中的误差条表示标准差(n＝5)。
[图74(2)]图74(2)是显示了向人T细胞转移模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用度伐利尤单抗、以及组合施用NYZ-1010和度伐利尤单抗后，使用作为基线的在第24天时的肿瘤体积，每个小鼠在第49天时的肿瘤体积的百分比变化的图解。
[图75(1)]图75(1)是显示了通过向BALB/C品系的人CD3ε敲入小鼠模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用抗小鼠PD-L1抗体、以及组合施用NYZ-1010和抗小鼠PD-L1抗体实现的抗肿瘤活性的图解。图解中的误差条表示标准差(n＝5至10)。
[图75(2)]图75(2)是显示了向人CD3ε敲入BALB/C小鼠单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用抗小鼠PD-L1抗体、以及组合施用NYZ-1010和抗小鼠PD-L1抗体后每个小鼠的估计肿瘤体积，以及在具有完全消退的小鼠和首次用于实验的小鼠中的CT26模拟再攻击后的估计肿瘤体积的图解。
[图76(1)]图76(1)是显示了通过向BALB/C品系的人CD3ε敲入小鼠模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用抗小鼠CTLA-4抗体、以及组合施用NYZ-1010和抗小鼠CTLA-4抗体实现的抗肿瘤活性的图解。图解中的误差条表示标准差(n＝5至10)。
[图76(2)]图76(2)是显示了向BALB/C品系的人CD3ε敲入小鼠模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用抗小鼠CTLA-4抗体、以及组合施用NYZ-1010和抗小鼠CTLA-4抗体后每个小鼠的估计肿瘤体积，以及在具有完全消退的小鼠和首次用于实验的小鼠中的CT26 NY-SCT再攻击后的估计肿瘤体积的图解。
[图77(1)]图77(1)是显示了通过向人CD3ε敲入BALB/C小鼠单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用抗小鼠TIGIT抗体、以及组合施用NYZ-1010和抗小鼠TIGIT抗体实现的抗肿瘤活性的图解。图解中的误差条表示标准差(n＝5至10)。
[图77(2)]图77(2)是显示了向BALB/C品系的人CD3ε敲入小鼠模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用抗小鼠TIGIT抗体、以及组合施用NYZ-1010和抗小鼠TIGIT抗体后每个小鼠的估计肿瘤体积，以及在具有完全消退的小鼠和首次用于实验的小鼠中的CT26 NY-SCT再攻击后的估计肿瘤体积的图解。
[图78]图78是显示了通过向人T细胞转移模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用卡铂、以及组合施用NYZ-1010和卡铂实现的抗肿瘤活性的图解。图解中的误差条表示标准差(n＝5)。
[图79(1)]图79(1)是显示了通过向人T细胞转移模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用戈沙妥珠单抗、以及组合施用NYZ-1010和戈沙妥珠单抗实现的抗肿瘤活性的图解。图解中的误差条表示标准差(n＝5)。
[图79(2)]图79(2)是显示了向人T细胞转移模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用戈沙妥珠单抗、以及组合施用NYZ-1010和戈沙妥珠单抗后，使用作为基线的在第6天时的肿瘤体积，每个小鼠在第21天时的肿瘤体积的百分比变化的图解。
[图80(1)]图80(1)是显示了通过向人T细胞转移模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用多柔比星、以及组合施用NYZ-1010和多柔比星实现的抗肿瘤活性的图解。图解中的误差条表示标准差(n＝5)。
[图80(2)]图80(2)是显示了向人T细胞转移模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用多柔比星、以及组合施用NYZ-1010和多柔比星后，使用作为基线的在第40天时的肿瘤体积，每个小鼠在第55天时的肿瘤体积的百分比变化的图解。
[图81(1)]图81(1)是显示了通过向人T细胞转移模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用地西他滨、以及组合施用NYZ-1010和地西他滨实现的抗肿瘤活性的图解。图解中的误差条表示标准差(n＝5)。
[图81(2)]图81(2)是显示了向人T细胞转移模型单一施用Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子NYZ-1010、单一施用地西他滨、以及组合施用NYZ-1010和地西他滨后，使用作为基线的在第7天时的肿瘤体积，每个小鼠在第32天时的肿瘤体积的百分比变化的图解。
[图82]图82显示了于2022年3月16日提交的日本专利申请号2022-041253的序列表。
实施方式的描述
在下文中，本发明将进行详细描述。
1.定义
在本发明中，术语“基因”意指包含编码蛋白质的氨基酸的核苷酸序列的核苷酸链或其互补链。“基因”意欲包括例如多核苷酸、寡核苷酸、DNA、mRNA、cDNA和cRNA作为构成编码蛋白质的氨基酸的核苷酸序列的核苷酸链或其互补链。此类基因是单链、双链、或者三链或更多链的核苷酸。“基因”还意欲包括DNA和RNA链的缔合物、一条核苷酸链上的核糖核苷酸(RNA)和脱氧核糖核苷酸(DNA)的混合物、以及包含此类核苷酸链的双链或三链或更多链的核苷酸。在本发明中，碱基序列和核苷酸序列具有相同的含义。
在本发明中，术语“多核苷酸”、“核苷酸链”、“核酸”和“核酸分子”具有相同的含义，并且还意欲包括例如DNA、RNA、探针、寡核苷酸和引物。此类多核苷酸是单链、双链、或者三链或更多链的多核苷酸。“多核苷酸”还意欲包括DNA和RNA链的缔合物、一条多核苷酸链上的核糖核苷酸(RNA)和脱氧核糖核苷酸(DNA)的混合物、以及包含此类多核苷酸链的两条链或者三条或更多条链的缔合物。
在本发明中，术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”具有相同的含义。
在本发明中，术语“抗原”具有与“免疫原”相同的含义。
在本发明中，术语“细胞”包括例如衍生自各个动物的各种细胞、传代培养细胞、原代培养细胞、细胞系、重组细胞和微生物细胞。
在本发明中，术语“抗体”具有与免疫球蛋白相同的含义。然而，用于本发明的抗HLA/NY-ESO抗体的“抗体”意指具有恒定区和可变区的免疫球蛋白。抗体并无特别限制，并且可以是天然免疫球蛋白，或者可以是通过部分或完全合成产生的免疫球蛋白。本发明的抗HLA/NY-ESO抗体包括在下文提到的“分子”中。
在本发明中，术语“NY-ESO肽”意指由NY-ESO-1或LAGE-1的位置157至165的9个氨基酸(SLLMWITQC：SEQ ID NO:1)组成的肽。
在本发明中，术语“HLA-A2/NY-ESO”意指NY-ESO肽和组织相容性白细胞抗原-A2(HLA-A2)的复合物，并且也被称为“HLA/NY-ESO”。
在本发明中，术语“抗HLA-A2/NY-ESO抗体”意指与HLA-A2/NY-ESO结合的抗体，并且换言之，意指识别HLA-A2/NY-ESO的抗体。同样地，术语“抗HLA-A2/NY-ESO scFv”意指与HLA/NY-ESO结合的scFv，并且换言之，意指识别HLA-A2/NY-ESO的scFv。术语“抗HLA-A2/NY-ESO抗体”和“抗HLA-A2/NY-ESO scFv”也分别被称为“抗HLA/NY-ESO抗体”和“抗HLA/NY-ESOscFv”。
四联抗体(quaternary antibody)的基本结构包含两条相同的轻链(L链)和两条相同的重链(H链)。每条轻链通过一个共价二硫键与重链连接。两条重链根据重链的同种型通过一个或多个二硫键彼此连接。轻链和重链各自具有规则间隔的链内二硫键。重链和轻链各自含有显示出非常高程度的氨基酸序列相似性的恒定区和显示出低程度的氨基酸序列相似性的可变区。轻链具有在氨基末端处的可变区(VL)，随后为恒定区(CL)。重链具有在氨基末端处的可变区(VH)，随后为三个恒定区(CH1、CH2和CH3)。VL和VH彼此配对，并且CL与重链的第一恒定区(CH1)对齐。VL和VH对形成单个抗原结合位点。
本发明的抗体的恒定区并无特别限制。优选地，衍生自人抗体的恒定区用于本发明的抗体中，用于治疗或预防人中的疾病。人抗体的重链恒定区的实例可以包括Cγ1、Cγ2、Cγ3、Cγ4、Cμ、Cδ、Cα1、Cα2和Cε。人抗体的轻链恒定区的实例可以包括Cκ和Cλ。
Fab由重链VH随后为CH1以及轻链VL随后为CL构成。VH和VL各自含有互补决定区(CDR)。
Fc(也被称为Fc区)是重链恒定区的羧基末端区域，并且是含有CH2和CH3的二聚体。本发明的Fc可以是具有天然序列的Fc，或可以是含有天然序列中的突变的Fc的突变形式(被称为“突变型Fc”)。在本发明的多特异性分子和双特异性分子中，Fc区优选为突变型Fc，更优选地，一对Fc区能够形成异二聚体。Fc对的实例可以包括如下文提到的第一多肽中包含的Fc(i)和第二多肽中包含的Fc(ii)的组合。Fc区的对并不限于此，只要Fc分子可以彼此缔合(异二聚化)。
突变型Fc的实例包括但不限于WO2013/063702中公开的具有改善稳定性的异多聚体中包含的修饰的Fc区(包括异二聚体Fc区)、包含WO1996/27011中公开的异多聚体中含有的具有“旋钮”和“孔”的IgG抗体衍生的免疫球蛋白CH3区的Fc、WO2009/089004中公开的包含通过用荷电氨基酸取代一个或多个氨基酸残基而包含在静电有利的异二聚体中的CH3结构域的Fc、WO2014/110601中公开的使用构象突变和/或pI(等电点)突变而包含在异二聚体中的异二聚体Fc区、以及WO2010/151792中公开的包含具有缺失或降低与蛋白A结合的修饰的CH3结构域的异二聚体Fc。
可变区由具有极端可变性的区域(称为高变区(HVR))和被高变区中断的相对不变的区域(称为框架区(FR))构成。天然重链可变区和轻链可变区各自含有通过三个高变区连接的四个FR。每条链的高变区通过FR与另一条链的高变区保持紧密接近，并且促成在抗体中的抗原结合位点形成。
已知抗体分子的重链和轻链各自具有三个互补决定区(CDR)。互补决定区也称为高变区。这些区域定位于抗体重链和轻链的可变区中。这些位点具有特别高度可变的一级结构，并且通常在重链和轻链多肽链分别的一级结构上的三个位置处分开。在本发明中，抗体的重链序列的互补决定区从重链氨基酸序列的氨基末端至羧基末端分别被称为CDRH1、CDRH2和CDRH3，并且抗体的轻链序列的互补决定区从轻链氨基酸序列的氨基末端至羧基末端分别被称为CDRL1、CDRL2和CDRL3，这些位点在三维结构上彼此邻近并且决定了对于所结合的抗原的特异性。
在本发明中，CDR的位置和长度按照IMGT(Developmental and ComparativeImmunology 27(2003)55-77)的定义进行确定。
FR是位于CDR残基之外的可变区。每个可变区一般具有4个FR(FR1、FR2、FR3和FR4)。
重链和轻链中包含的CDR和FR从氨基末端朝向羧基末端分别按照FRH1-CDRH1-FRH2-CDRH2-FRH3-CDRH3-FRH4和FRL1-CDRL1-FRL2-CDRL2-FRL3-CDRL3-FRL4的次序排列。
CDR和FR的位置也可以按照本领域众所周知的各种方案，例如基于IMGT以及Kabat、Chothia、AbM、contact等进行确定。
在本发明中，术语“抗体的抗原结合片段”意指包含重链可变区和轻链可变区且具有针对抗原的结合活性的抗体部分。“抗体的抗原结合片段”的实例可以包括但不限于抗原结合片段例如Fab、F(ab')2、scFv、Fab'、Fv和单结构域抗体(sdAb)。抗体的此类抗原结合片段可以通过用酶例如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶处理抗体蛋白质的全长分子而获得，或者可以是使用重组基因在适当的宿主细胞中产生的重组蛋白质。在本发明中，术语“抗体的结合片段”具有与“抗体的抗原结合片段”相同的含义。
在本发明中，抗体与之结合的“位点”，即，由抗体识别的“位点”，意指由抗体结合或识别的肽抗原的部分或抗原的更高级结构的部分。在本发明中，此类位点也被称为表位或抗体结合位点。在本发明中，术语“突变型抗体”意指这样的多肽，其具有通过氨基酸的取代、缺失和/或添加(添加包括插入)(在下文中统称为“突变”)从原始抗体的氨基酸序列衍生的氨基酸序列，并且与本发明的HLA/NY-ESO结合。此类突变型抗体中的突变氨基酸的数目为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、25、30、40或50个。此类突变型抗体也由本发明的“抗体”涵盖。
在本发明中，“一个或几个”中的术语“几个”指2至10个。
在本发明中，术语“多特异性分子”并无特别限制，只要该分子具有能够结合彼此不同的多个表位、和/或能够结合在两个或更多个分子上彼此不同的表位的两个或更多个部分。多特异性分子优选为其中两个或更多个此类部分各自是抗体或其抗原结合片段的“多特异性抗体”，或包含“多特异性抗体”的分子。多特异性抗体可以包含一个或两个或更多个重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，并且可以是具有两类或更多类重链和轻链的全长抗体，即IgG型多特异性抗体，或者可以是由两类或更多类具有VL和VH的抗原结合片段组成的抗体相关分子，例如由Fab、Fab'、Fv、scFv、sdAb等的组合组成或衍生自所述组合的分子(即，串联scFv、双抗体、单链双抗体和三抗体)，尽管多特异性抗体并不限于此。多特异性抗体可以含有没有免疫球蛋白框架的部分。
由本发明的抗HLA/NY-ESO抗体或该抗体的抗原结合片段或者本发明的分子所发挥的活性或性质的实例可以包括生物活性和物理化学性质(也被称为物理性质)，并且可以特异性包括各种生物活性例如细胞毒性活性、ADCC活性和抗肿瘤活性(所有这些都将在下文提到)、针对抗原或表位的结合活性、以及物理性质例如在生产或保存过程中的稳定性和热稳定性。
在本发明中，短语“在严格条件下杂交”意指在涉及以下的条件下杂交：在65℃下在含有5×SSC的溶液中杂交，随后为在65℃下在含有2×SSC-0.1％ SDS的水溶液中洗涤20分钟，在65℃下在含有0.5×SSC-0.1％ SDS的水溶液中洗涤20分钟，以及在65℃下在含有0.2×SSC-0.1％ SDS的水溶液中洗涤20分钟，或者在与其等价的条件下杂交。SSC意指150mM NaCl-15mM柠檬酸钠的水溶液，并且n×SSC意指具有n倍浓度的SSC。
在本发明中，术语“细胞毒性”指以某种方式对细胞造成的某种病理变化，并且不仅意指直接的创伤，还意指对细胞的任何结构或功能损伤，包括DNA切割、碱基二聚体的形成、染色体断裂、在有丝分裂器上的损伤和各种酶活性的降低。在本发明中，术语“细胞毒性活性”意指引起上文提到的细胞毒性的活性。
在本发明中，术语“抗体依赖性细胞毒性活性”，也称“ADCC活性”，意指经由抗体通过NK细胞损伤靶细胞例如肿瘤细胞的效应或活性。
在本发明中，术语“通过T细胞重定向的细胞毒性活性”意指细胞毒性经由包含抗肿瘤抗原抗体和抗HLA/NY-ESO抗体的多特异性分子引起。具体而言，该术语意指抗肿瘤抗原抗体与靶肿瘤细胞结合，而抗HLA/NY-ESO抗体与T细胞结合，使得靶肿瘤细胞和T细胞彼此接近，以诱导T细胞活化介导的细胞毒性。该分子可以包含在药物组合物中。
2.抗原
2-1.HLA/NY-ESO抗原
在本发明中，术语“HLA/NY-ESO”具有与HLA/NY-ESO蛋白相同的含义。
HLA/NY-ESO是HLA-A2、β2-微球蛋白和NY-ESO肽的三元复合物。HLA-A2是HLA的等位基因，并且已知是白种人中最频繁的等位基因。HLA在细胞的内质网中与β2-微球蛋白和自身蛋白的肽片段形成三元复合物，并且在细胞外呈递这种复合物，其依次又接受通过T细胞的TCR(T细胞受体)的识别。NY-ESO肽(SLLMWITQC：SEQ ID NO:66)是由NY-ESO-1或LAGE-1的位置157至165的9个氨基酸组成的肽，并且据报道由HLA-A2呈递。
2-2.CD3抗原
在本发明中，术语“CD3”具有与CD3蛋白相同的含义。CD3作为多分子T细胞受体复合物的一部分在T细胞上表达，并且是5类多肽(γ、δ、ε、ζ和η链；分子量分别为：25000至28000、21000、20000、16000和22000)的复合物。γ、δ、ε、ζ和η链也称为亚基。抗CD3抗体与T细胞结合且从而诱导T细胞活化介导的细胞毒性。许多抗CD3抗体与CD3ε结合。编码人CD3ε的cDNA的核苷酸序列在登录号：NM_000733(NM_000733.3)下注册于NCBI/GenBank，并且人CD3ε的氨基酸序列在登录号：NP_000724(NM_000724.1)下注册于NCBI/GenPept。编码食蟹猴CD3的cDNA的核苷酸序列在登录号：NM_001283615.1下注册于GenBank。人CD3ε的氨基酸序列在图10中进行描述。
2-3.抗原的制备
本发明中使用的每种前述抗原蛋白质(HLA/NY-ESO或CD3)(在下文中，HLA/NY-ESO和CD3也统称为抗原蛋白质)可以通过从动物组织(包括体液)、衍生自组织的细胞或细胞培养物中纯化或分离，基因重组，体外翻译，化学合成等进行制备。抗原蛋白质的cDNA可以通过例如所谓的PCR方法获得，所述PCR方法使用衍生自表达抗原蛋白质的mRNA的器官的cDNA文库作为模板，并且使用能够特异性扩增抗原蛋白质的cDNA的引物，来执行聚合酶链反应(在下文中，被称为"PCR")(Saiki，R.K.，等人，Science(1988)239，487-489)。抗原蛋白质的cDNA包括在严格条件下与如下的多核苷酸杂交的多核苷酸：由与编码在人或大鼠中表达的抗原蛋白质的核苷酸序列互补的核苷酸序列组成，并且编码具有与抗原蛋白质等价的生物活性的蛋白质。另外，抗原蛋白质的cDNA包括由人或大鼠中表达的抗原蛋白质的基因座转录的剪接变体、或在严格条件下与其杂交并且编码具有与抗原蛋白质等价的生物活性的蛋白质的多核苷酸。在编码抗原蛋白质的基因的核苷酸序列中还包括编码蛋白质的核苷酸序列，所述蛋白质由通过一个至几个氨基酸的取代、缺失或添加、或从中已缺失信号序列而衍生自人或大鼠抗原蛋白质的氨基酸序列的氨基酸序列的氨基酸序列组成，并且具有与抗原蛋白质等价的生物活性。在抗原蛋白质中还包括这样的蛋白质，其由通过从人或大鼠抗原蛋白质的基因座转录的剪接变体编码的氨基酸序列，或者通过一个至几个氨基酸的取代、缺失或添加而衍生自氨基酸序列的氨基酸序列组成，并且具有与抗原蛋白质等价的生物活性。
2-4关于抗原蛋白质的结合特异性
本发明的抗HLA/NY-ESO抗体或其抗原结合片段等识别HLA/NY-ESO。换言之，抗HLA/NY-ESO抗体或其抗原结合片段等与HLA/NY-ESO抗原结合。非人动物例如小鼠、大鼠和食蟹猴中存在HLA/NY-ESO是未知的。本发明的多特异性抗体中包含的抗CD3抗体或其抗原结合片段等识别，即结合CD3抗原。此类抗CD3抗体等优选与人CD3和猴CD3结合，并且更优选与人CD3和食蟹猴CD3结合。相比之下，此类优选的抗CD3抗体既不结合大鼠也不结合小鼠CD3。
在本发明中，术语“识别”即“结合”意指并不是非特异性吸附的结合。抗体是否识别，即是否结合靶抗原可以基于例如解离常数(在下文中，被称为“KD”)来评估。本发明的抗体等对于HLA/NY-ESO或CD3的KD值优选为1×10-5M或更低、5×10-6M或更低、2×10-6M或更低、或者1×10-6M或更低。对于HLA/NY-ESO的KD值优选为5×10-7M或更低、2×10-7M或更低、1×10-7M或更低、5×10-8M或更低、2×10-8M或更低、1×10-8M或更低、5×10-9M或更低、或者2×10-9M或更低，更优选为1×10-9M或更低。本发明的具有极佳抗原结合活性的抗HLA/NY-ESO scFv的实例包括NYA-1143、NYA-2023、NYA-2143、NYA-2044、NYA-2045、NYA-2060、NYA-2061和NYA-3061。NYA-1143、NYA-2044、NYA-2045、NYA-2143和NYA-1154并且对于HLA/NY-ESO具有1×10-9M或更低的KD值。在本发明中，抗体与抗原的结合可以通过生物分子相互作用分析系统，例如SPR或BLI、ELISA、或RIA等等进行测定或确定(参见WO2021/200857)。本发明的具有极佳抗原结合特异性的抗HLA/NY-ESO抗体等的实例包括NYA-0001、NYA-1143、NYA-1163、NYA-2023、NYA-2027、NYA-2035、NYA-2044、NYA-2045、NYA-2047、NYA-2048、NYA-2060、NYA-2061、NYA-2143和NYA-3061，其各自为抗HLA/NY-ESO scFv。
3.与HLA/NY-ESO特异性结合的抗体或其结合片段
3-1抗HLA/NY-ESO抗体或其结合片段
本发明提供了识别并结合HLA/NY-ESO的抗体或其结合片段。如上文提到的，HLA/NY-ESO是包含HLA-A2和9聚体NY-ESO肽(SLLMWITQC：SEQ ID NO:66)的复合物。NY-ESO肽是衍生自癌-睾丸抗原NY-ESO-1或LAGE-1(其是细胞内蛋白质)的肽。HLA/NY-ESO在癌细胞表面上表达。本发明的抗HLA/NY-ESO抗体和该抗体的抗原结合片段(在下文中，也被称为本发明的抗体等)可以是单克隆抗体或多克隆抗体。在本发明中，单克隆抗体的同种型并无特别限制，并且实例包括IgG例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，IgM，IgA例如IgA1和IgA2，IgD和IgE。单克隆抗体的同种型和亚类可以通过例如Ouchterlony方法、ELISA或RIA进行确定。本发明的单克隆抗体的实例可以包括衍生自非人动物的抗体(非人动物抗体)、人抗体、嵌合抗体和人源化抗体。优选地，可以使用人抗体来衍生本发明的抗体。抗体的突变体(下文提到的“突变型抗体”)也包括在本发明的抗体内。例如，人突变型抗体也包括在人抗体内。非人动物抗体的实例包括衍生自脊椎动物例如哺乳动物和鸟类的抗体。哺乳动物衍生的抗体的实例可以包括衍生自啮齿类动物的抗体，例如小鼠抗体和大鼠抗体。鸟类衍生的抗体的实例是鸡抗体。嵌合抗体的实例包括但不限于包含与衍生自人抗体(人免疫球蛋白)的恒定区结合衍生自非人动物抗体的可变区的抗体。人源化抗体的实例包括但不限于：通过将非人动物抗体可变区的CDR移植到人抗体(人免疫球蛋白的可变区)中制成的人源化抗体、通过除CDR外还将非人动物抗体框架区序列的一部分移植到人抗体中制成的人源化抗体、和通过将衍生自非人动物抗体的1个或多个氨基酸取代为衍生自人抗体的氨基酸制成的人源化抗体。
抗体可以通过本领域已知的各种方法进行制备。抗体可以通过本领域已知的方法进行制备，所述方法涉及使用杂交瘤、细胞免疫或者基因重组。用于获得选自人抗体文库的噬菌体展示衍生的人抗体的方法也是已知的。在噬菌体展示方法中，例如，人抗体的可变区可以表达为在噬菌体表面上的scFv，并且可以随后选择与抗原结合的噬菌体。基于其与抗原的结合已选择的噬菌体可以经受基因分析，以从而确定编码与抗原结合的人抗体的可变区的DNA序列。如果确定与抗原结合的scFv的DNA序列，则可以制备包含此类序列的表达载体，并且引入允许表达人抗体适当宿主细胞内。因此，可以获得人抗体(WO92/01047，WO92/20791，WO93/06213，WO93/11236，WO93/19172，WO95/01438，WO95/15388，Annu.Rev.Immunol(1994)12，433-455)。因此获得的具有高活性的抗体可以用作先导抗体，并且编码先导抗体的基因可以进行突变，以制备具有更高活性的突变体(下文提到的“突变型抗体”)。
本发明的抗HLA/NY-ESO抗体或其抗原结合片段的重链中包含的CDRH1至CDRH3的优选组合是：由通过SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成的CDRH1，由通过SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列组成的CDRH2，以及由通过SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列、或通过其中在位置6处的氨基酸为N(Asn)的SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列组成的CDRH3。更优选的CDRH1至CDRH3的组合包含于：由通过SEQ ID NO:13表示的氨基酸序列组成的NYA-0001重链可变区、由通过SEQ ID NO:15表示的氨基酸序列组成的NYA-0082重链可变区、由通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的氨基酸21至140组成的NYA-2023重链可变区、由通过SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列的氨基酸21至140组成的NYA-2027重链可变区、由通过SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列的氨基酸21至140组成的NYA-1143重链可变区、由通过SEQ ID NO:17表示的氨基酸序列的氨基酸21至140组成的NYA-1163重链可变区、由通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的氨基酸21至140组成的NYA-2023重链可变区、由通过SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列的氨基酸21至140组成的NYA-2027重链可变区、由通过SEQ ID NO:22表示的氨基酸序列的氨基酸21至140组成的NYA-2035重链可变区、由通过SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列的氨基酸21至140组成的NYA-2044重链可变区、由通过SEQ ID NO:25表示的氨基酸序列的氨基酸21至140组成的NYA-2045重链可变区、由通过SEQ ID NO:26表示的氨基酸序列的氨基酸21至140组成的NYA-2047重链可变区、由通过SEQ ID NO:27表示的氨基酸序列的氨基酸21至140组成的NYA-2048重链可变区、由通过SEQ ID NO:28表示的氨基酸序列的氨基酸21至140组成的NYA-2060重链可变区、由通过SEQ ID NO:53表示的氨基酸序列的氨基酸21至140组成的NYA-2061重链可变区、或由通过SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列的氨基酸21至140组成的NYA-2143重链可变区。CDRH1至CDRH3的组合的进一步的实例包含于由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的氨基酸21至140组成的NYA-3061重链可变区，以及由通过SEQ ID NO:71表示的氨基酸序列的氨基酸21至140组成的NYA-1154重链可变区。
本发明的抗HLA/NY-ESO抗体或其抗原结合片段的轻链中包含的CDRL1至CDRL3的的优选组合是：由通过SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列、或衍生自由通过其中在位置7处的氨基酸为W(Trp)和/或在位置8处的氨基酸为K(Lys)的SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列的氨基酸序列组成的CDRL1，由通过SEQ ID NO:5表示的氨基酸序列组成的CDRL2，以及由通过SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列、或衍生自由通过其中在位置2处的氨基酸为A(Ala)或S(Ser)的SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列的氨基酸序列组成的CDRL3。
CDRL1至CDRL3的更优选组合包含于：由通过SEQ ID NO:14表示的氨基酸序列组成的NYA-0001轻链可变区、由通过SEQ ID NO:16表示的氨基酸序列组成的NYA-0082轻链可变区、由通过SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列的氨基酸156至266组成的NYA-1143轻链可变区、由通过SEQ ID NO:26表示的氨基酸序列的氨基酸156至266组成的NYA-1163轻链可变区、由通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的氨基酸156至266组成的NYA-2023轻链可变区、由通过SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列的氨基酸156至266组成的NYA-2027轻链可变区、由通过SEQ ID NO:22表示的氨基酸序列的氨基酸156至266组成的NYA-2035轻链可变区、由通过SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列的氨基酸156至266组成的NYA-2044轻链可变区、由通过SEQ ID NO:25表示的氨基酸序列的氨基酸156至266组成的NYA-2045轻链可变区、由通过SEQ ID NO:26表示的氨基酸序列的氨基酸156至266组成的NYA-2047轻链可变区、由通过SEQ ID NO:27表示的氨基酸序列的氨基酸156至266组成的NYA-2048轻链可变区、由通过SEQ ID NO:28表示的氨基酸序列的氨基酸156至266组成的NYA-2060轻链可变区、由通过SEQ ID NO:29表示的氨基酸序列的氨基酸156至266组成的NYA-2061轻链可变区、或由通过SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列的氨基酸156至266组成的NYA-2143轻链可变区。CDRL1至CDRL3的更优选组合包含于由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的氨基酸161至271组成的NYA-3061轻链可变区，以及由通过SEQ ID NO:71表示的氨基酸序列的氨基酸156至266组成的NYA-1154轻链可变区。
本发明的抗HLA/NY-ESO抗体或其抗原结合片段的重链中包含的CDRH1至CDRH3和轻链中包含的CDRL1至CDRL3的优选组合是以下的组合：由通过SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成的CDRH1，由通过SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列组成的CDRH2，以及由通过SEQ IDNO:3表示的氨基酸序列、或衍生自通过其中在位置6处的氨基酸为N(Asn)的SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列的氨基酸序列组成的CDRH3，由通过SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列、或衍生自通过其中在位置7处的氨基酸为W(Trp)和/或在位置8处的氨基酸为K(Lys)的SEQ IDNO:4表示的氨基酸序列的氨基酸序列组成的CDRL1，由通过DNN表示的氨基酸序列(图11中从顶部起的第5个序列：图82中的SEQ ID NO:5)组成的CDRL2，以及由通过SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列、或衍生自通过其中在位置2处的氨基酸为A(Ala)或S(Ser)的SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列的氨基酸序列组成的CDRH3。CDRH1至CDRH3和CDRL1至CDRL3的更优选组合包含于：由分别通过SEQ ID NO:13和14表示的氨基酸序列组成的NYA-0001重链可变区和轻链可变区，由分别通过SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列的氨基酸21至140和156至266组成的NYA-1143重链可变区和轻链可变区，由分别通过SEQ ID NO:17表示的氨基酸序列的氨基酸21至140和156至266组成的NYA-1163重链可变区和轻链可变区，由分别通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的氨基酸21至140和156至266组成的NYA-2023重链可变区和轻链可变区，由分别通过SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列的氨基酸21至140和156至266组成的NYA-2027重链可变区和轻链可变区，由分别通过SEQ ID NO:22表示的氨基酸序列的氨基酸21至140和156至266组成的NYA-2035重链可变区和轻链可变区，由分别通过SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列的氨基酸21至140和156至266组成的NYA-2044重链可变区和轻链可变区，由分别通过SEQ ID NO:25表示的氨基酸序列的氨基酸21至140和156至266组成的NYA-2045重链可变区和轻链可变区，由分别通过SEQ ID NO:26表示的氨基酸序列的氨基酸21至140和156至266组成的NYA-2047重链可变区和轻链可变区，由分别通过SEQ ID NO:27表示的氨基酸序列的氨基酸21至140和156至266组成的NYA-2048重链可变区和轻链可变区，由分别通过SEQ ID NO:28表示的氨基酸序列的氨基酸21至140和156至266组成的NYA-2060重链可变区和轻链可变区，由分别通过SEQ ID NO:29表示的氨基酸序列的氨基酸21至140和156至266组成的NYA-2061重链可变区和轻链可变区，或由分别通过SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列的氨基酸21至140和156至266组成的NYA-2143重链可变区和轻链可变区。CDRH1至CDRH3和CDRL1至CDRL3的其他优选组合包含于由分别通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的氨基酸21至140和161至271组成的NYA-3061重链可变区和轻链可变区，以及由分别通过SEQ ID NO:71表示的氨基酸序列的氨基酸21至140和156至266组成的NYA-1154重链可变区和轻链可变区。
本发明的抗HLA/NY-ESO抗体或其抗原结合片段的重链可变区的优选实例包括上文描述的重链CDR和包含组合的此类重链CDR的可变区。更优选的实例包括NYA-0001重链可变区、NYA-0082重链可变区、NYA-1143重链可变区、NYA-1163重链可变区、NYA-2023重链可变区、NYA-2027重链可变区、NYA-2035重链可变区、NYA-2044重链可变区、NYA-2045重链可变区、NYA-2047重链可变区、NYA-2048重链可变区、NYA-2060重链可变区、NYA-2061重链可变区、NYA-2143重链可变区、NYA-3061重链可变区和NYA-1154重链可变区。重链可变区分别的氨基酸序列如上文所述。
本发明的抗HLA/NY-ESO抗体或其抗原结合片段的轻链可变区的优选实例包括上文描述的轻链CDR和包含组合的此类轻链CDR的可变区。更优选的实例包括NYA-0001轻链可变区、NYA-0082轻链可变区、NYA-1143轻链可变区、NYA-1163轻链可变区、NYA-2023轻链可变区、NYA-2027轻链可变区、NYA-2035轻链可变区、NYA-2044轻链可变区、NYA-2045轻链可变区、NYA-2047轻链可变区、NYA-2048轻链可变区、NYA-2060轻链可变区、NYA-2061轻链可变区、NYA-2143轻链可变区、NYA-3061轻链可变区和NYA-1154轻链可变区。轻链可变区分别的氨基酸序列如上文所述。
本发明的抗HLA/NY-ESO抗体或其抗原结合片段的重链可变区和轻链可变区的优选实例包括上文描述的重链和轻链CDR或包含组合的此类CDR的可变区。更优选的实例包括NYA-0001重链可变区和轻链可变区、NYA-0082重链可变区和轻链可变区、NYA-1143重链可变区和轻链可变区、NYA-1163重链可变区和轻链可变区、NYA-2023重链可变区和轻链可变区、NYA-2027重链可变区和轻链可变区、NYA-2035重链可变区和轻链可变区、NYA-2044重链可变区和轻链可变区、NYA-2045重链可变区和轻链可变区、NYA-2047重链可变区和轻链可变区、NYA-2048重链可变区和轻链可变区、NYA-2060重链可变区和轻链可变区、NYA-2061重链可变区和轻链可变区、NYA-2143重链可变区和轻链可变区的组合、NYA-3061重链可变区和轻链可变区的组合、以及NYA-1154重链可变区和轻链可变区的组合。
本发明的抗HLA/NY-ESO抗体或其抗原结合片段的重链的优选实例包括包含上文列出的重链可变区的重链。更优选的实例包括NYA-0001重链、NYA-0082重链、NYA-1143重链、NYA-1163重链、NYA-2023重链、NYA-2027重链、NYA-2035重链、NYA-2044重链、NYA-2045重链、NYA-2047重链、NYA-2048重链、NYA-2060重链、NYA-2061重链、NYA-2143重链、NYA-3061重链和NYA-1154重链。
本发明的抗HLA/NY-ESO抗体或其抗原结合片段的轻链的优选实例包括包含上文列出的轻链可变区的轻链。更优选的实例包括NYA-0001轻链、NYA-0082轻链、NYA-1143轻链、NYA-1163轻链、NYA-2023轻链、NYA-2027轻链、NYA-2035轻链、NYA-2044轻链、NYA-2045轻链、NYA-2047轻链、NYA-2048轻链、NYA-2060轻链、NYA-2061轻链、NYA-2143轻链、NYA-3061轻链和NYA-1154轻链。
本发明的抗HLA/NY-ESO抗体或其抗原结合片段的重链和轻链的优选实例包括分别包含优选的或更优选的重链可变区和轻链可变区的重链和轻链。更优选的实例包括NYA-0001、NYA-1143、NYA-1163、NYA-2023、NYA-2027、NYA-2035、NYA-2044、NYA-2045、NYA-2047、NYA-2048、NYA-2060、NYA-2061、NYA-2143、NYA-3061和NYA-1154的重链和轻链的组合。
抗体的抗原结合片段意指至少维持抗体的功能的抗原结合活性的片段，或其修饰形式。抗体的此类功能的实例一般包括抗原结合活性、调控抗原活性的活性、抗体依赖性细胞毒性活性和补体依赖性细胞毒性活性。本发明的抗体等和包含本发明的抗体等的多特异性分子的功能的实例包括T细胞重定向、T细胞的激活和通过T细胞的激活针对癌细胞的细胞毒性活性。
抗体的抗原结合片段并无特别限制，只要抗体的片段至少维持抗体功能的抗原结合活性。其实例可以包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、包含经由适当接头连接的重链和轻链Fv分子的单链Fv(scFv)和单结构域抗体(sdAb)。包含本发明的抗体的抗原结合片段之外的区域的分子，如在包含接头部分的scFV的情况中，涵盖在本发明的抗体的抗原结合片段中。
本发明的抗体的抗原结合片段还涵盖了通过在其氨基末端和/或羧基末端处缺失一个或几个或更多个氨基酸而衍生自本发明的抗体并维持抗体功能的至少一些的分子。抗体的抗原结合片段的此类修饰形式也由本发明的抗体或其抗原结合片段、或者修饰的抗体或片段(下文描述)涵盖。
根据一个方面，本发明的抗体或其抗原结合片段是scFv。scFv通过经由多肽接头连接抗体的重链可变区和轻链可变区而获得(Pluckthun A.，The Pharmacology ofMonoclonal Antibodies 113，Rosenburg和Moore，编辑Springer Verlag，New York，269-315(1994)；以及Nature Biotechnology(2005)，23，1126-1136)。另外，包含经由多肽接头连接的两个scFv分子的串联scFv可以用作双特异性分子。可替代地，包含三个或更多个scFv分子的三抗体等等可以用作多特异性分子。
对于HLA/NY-ESO特异性的scFv(也被称为“抗HLA/NY-ESO scFv”)的优选实例包括包含上述CDRH1至CDRH3和CDRL1至CDRL3的scFv。更优选的scFv的实例包括包含上文所述的重链可变区和轻链可变区的scFv。再更优选的scFv的实例包括NYA-0001(通过SEQ ID NO:30表示的氨基酸序列的氨基酸位置21至266))、NYA-0082(其包含通过SEQ ID NO:15表示的氨基酸序列和通过SEQ ID NO:16表示的氨基酸序列)、NYA-1143(通过SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列的氨基酸21至266)、NYA-1163(通过SEQ ID NO:17表示的氨基酸序列的氨基酸21至266)、NYA-2023(通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的氨基酸21至266)、NYA-2027(通过SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列的氨基酸21至266)、NYA-2035(通过SEQ ID NO:22表示的氨基酸序列的氨基酸21至266)、NYA-2044(通过SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列的氨基酸1至266)、NYA-2045(通过SEQ ID NO:25表示的氨基酸序列的氨基酸21至266)、NYA-2047(通过SEQ ID NO:26表示的氨基酸序列的氨基酸21至266)、NYA-2048(通过SEQ ID NO:27表示的氨基酸序列的氨基酸21至266)、NYA-2060(通过SEQ ID NO:28表示的氨基酸序列的氨基酸21至266)、NYA-2061(通过SEQ ID NO:29表示的氨基酸序列的氨基酸21至266)、以及NYA-2143(通过SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列的氨基酸21至266)。其进一步的实例可以包括NYA-3061(通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的氨基酸21至271)、以及NYA-1154(通过SEQ ID NO:71表示的氨基酸序列的氨基酸21至266)。
根据一个优选方面，抗HLA/NY-ESO scFv是包含与羧基末端FLAG-His标签融合的scFV(简称为“加上标签的形式”)。加上标签的形式的优选实例可以包括NYA-0001加上标签的形式(SEQ ID NO:30的氨基酸20至292)、NYA-1143加上标签的形式(SEQ ID NO:20的氨基酸20至292)、NYA-1163加上标签的形式(SEQ ID NO:17的氨基酸20至292)、NYA-2023加上标签的形式(SEQ ID NO:18的氨基酸20至292)、NYA-2027加上标签的形式(SEQ ID NO:19的氨基酸20至292)、NYA-2035加上标签的形式(SEQ ID NO:22的氨基酸20至292)、NYA-2044加上标签的形式(SEQ ID NO:24的氨基酸20至292)、NYA-2045加上标签的形式(SEQ ID NO:25的氨基酸20至292)、NYA-2047加上标签的形式(SEQ ID NO:26的氨基酸20至292)、NYA-2048加上标签的形式(SEQ ID NO:27的氨基酸20至292)、NYA-2060加上标签的形式(SEQ ID NO:28的氨基酸20至292)、NYA-2061加上标签的形式(SEQ ID NO:29的氨基酸20至292)、NYA-2143加上标签的形式(SEQ ID NO:21的氨基酸20至292)、NYA-3061的加上标签的形式(通过将SEQ ID NO:22的氨基酸267至292加入SEQ ID NO:56的氨基酸21至271的羧基末端而制备的氨基酸序列)、以及NYA-1154加上标签的形式(SEQ ID NO:71的氨基酸21至292)。
在其中，NYA-2023及其加上标签的形式、NYA-2047及其加上标签的形式、NYA-2048及其加上标签的形式、NYA-2060及其加上标签的形式、以及NYA-2061及其加上标签的形式在Fc缀合型双特异性分子中具有极佳的生物活性、物理性质等等，并且因此更优选。
当抗HLA/NY-ESO scFv及其加上标签的形式在宿主细胞中表达时，可以将信号肽加入其氨基末端。信号肽缀合的抗HLA/NY-ESO scFv加上标签的形式的氨基酸序列的实例可以包括通过以下制备的氨基酸序列：将FLAG-His标签(SEQ ID NO:22的氨基酸267至292)加入SEQ ID NO:30、20、17至19、22、24、25、26至29和21的羧基末端，以及SEQ ID NO:56的氨基酸21至271中。
scFv可以通过噬菌体展示方法(Nature Biotechnology(2005)，23，(9)，第1105-1116页)获得，所述方法涉及允许抗体的可变区在噬菌体表面上作为单链抗体(scFv)表达并选择与抗原结合的噬菌体。其与抗原的结合时选择的噬菌体的基因可以经受分析，使得可以确定编码与抗原结合的人抗体可变区的DNA序列。如果确定抗原结合的scFv的DNA序列，则可以制备包含此类序列的表达载体，引入适当宿主细胞内，并在其中表达。因此，可以获得人抗体(WO92/01047，WO92/20791，WO93/06213，WO93/11236，WO93/19172，WO95/01438，WO95/15388，Annu.Rev.Immunol(1994)12，第433-455页，Nature Biotechnology(2005)23(9)，第1105-1116页)。
本发明的抗体可以包含单个重链可变区且可以不包含轻链序列。称为单结构域抗体(sdAb)或纳米抗体的此类抗体已报道为维持与抗原结合的能力(Muyldemans S.等人，Protein Eng.，(1994)，7(9)，1129-35；以及Hamers-Casterman C.等人，Nature(1993)，363(6428)，446-448)。这些抗体涵盖在根据本发明的抗体的抗原结合片段中。
本发明还包括包含经由适当接头连接的抗体的全长重链和轻链序列的单链免疫球蛋白(Lee，H-S，等人，Molecular Immunology(1999)36，61-71；以及Shirrmann，T.等人，mAbs(2010)，2(1)，1-4)。此类单链免疫球蛋白可以进行二聚化，以维持与内在为四聚体的抗体相似的结构和活性。本发明的抗HLA/NY-ESO抗体可以是单链免疫球蛋白。
在本发明的scFv中，重链可变区和轻链可变区可以通过二硫键彼此连接。
本发明的抗HLA/NY-ESO抗体可以是由衍生自多个不同抗体的部分构成的抗体，条件是抗体与HLA/NY-ESO结合。此类抗体的实例包括包含从多个不同抗体中，从重链和/或轻链替换产生的抗体、从全长重链和/或轻链替换产生的抗体、从可变区或恒定区替换产生的抗体、以及从全部或一些CDR替换产生的抗体。嵌合抗体的重链可变区和轻链可变区可以衍生自本发明的不同抗HLA/NY-ESO抗体。在人源化抗体的重链可变区和轻链可变区中，重链CDR1至CDR3和轻链CDR1至CDR3可以衍生自本发明的两个或更多个类型的抗HLA/NY-ESO抗体。在人抗体的重链可变区和轻链可变区中，重链CDR1至CDR3和轻链CDR1至CDR3的组合可以衍生自本发明的两个或更多个类型的抗HLA/NY-ESO抗体的CDR。
本发明的抗HLA/NY-ESO抗体还包括这样的抗体，其包含由多核苷酸中包含的核苷酸序列编码的氨基酸序列并且与HLA/NY-ESO结合，所述多核苷酸在严格条件下与包含编码本发明的抗HLA/NY-ESO抗体中包含的氨基酸序列的核苷酸序列的多核苷酸的互补链杂交。
本发明的抗HLA/NY-ESO抗体或其抗原结合片段可以是这样的抗体或其抗原结合片段，其与根据本发明的抗HLA/NY-ESO抗体的重链可变区中包含的氨基酸序列(优选为通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置21至140的氨基酸序列，通过SEQID NO:69或70表示的氨基酸序列，通过SEQ ID NO:39表示的氨基酸序列，或者通过SEQ IDNO:57、60或61表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置21至140的氨基酸序列)和/或根据本发明的抗HLA/NY-ESO抗体的轻链可变区中包含的氨基酸序列(其优选为通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置156至266的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:28表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置156至266的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:23表示的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:57表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置161至271的氨基酸序列、或者通过SEQ ID NO:60或61表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置156至266的氨基酸序列)或抗原结合片段展示出90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更多同一性。
当根据IMGT之外的方案(例如，Kabat、Chothia、AbM和Contact)确定轻链可变区的位置和长度时，在按照IMGT的方案确定的轻链可变区的氨基酸序列的羧基末端中可以进一步包含一个、两个或更多个氨基酸，例如精氨酸或甘氨酸。具有此类轻链可变区的抗体或其结合片段也由本发明的抗体或其结合片段涵盖。
可以通过将突变引入本发明的抗HLA/NY-ESO抗体的结合片段中，来优化本发明的抗体等与HLA/NY-ESO，特别是人和/或食蟹猴HLA/NY-ESO结合的能力。用于引入突变的方法的具体实例包括使用易错PCR的随机诱变、使用NNK文库的定点氨基酸诱变、使用结构信息的定点诱变及其任何组合。
3-2.抗HLA/NY-ESO抗体的突变体(突变型抗体)
本发明的抗HLA/NY-ESO抗体的突变型抗体优选显示出例如对蛋白质降解或氧化的敏感性降低、维持或改善的生物活性或功能或者此类生物活性或功能的压制降低或改变、改善或调节的与抗原结合的能力、物理化学性质或功能性质。已知蛋白质由于在其表面上存在的特定氨基酸侧链的改变而在其功能或活性方面不同。此类改变的实例包括天冬酰胺侧链的脱酰胺化和天冬氨酸侧链的异构化。为了防止氨基酸侧链中的此类变化从用另一种氨基酸取代一种特定氨基酸而获得的抗体也在本发明的突变型抗体的范围内。
本发明的突变型抗体的实例可以包括包含通过保守氨基酸取代从原始抗体的氨基酸序列衍生的氨基酸序列的抗体。保守氨基酸取代在其中氨基酸与其侧链相关的氨基酸基团中发生。
优选的氨基酸基团如下：酸性基团，包括天冬氨酸和谷氨酸；碱性基团，包括赖氨酸、精氨酸和组氨酸；非极性基团，包括丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸和色氨酸；以及非荷电的极性家族，包括甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸。其它优选的氨基酸基团如下：脂肪族羟基基团，包括丝氨酸和苏氨酸；含酰胺基团，包括天冬酰胺和谷氨酰胺；脂肪族基团，包括丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；以及芳香族基团，包括苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。突变型抗体中的此类氨基酸取代优选不降低原始抗体的抗原结合活性而执行。
本发明的抗HLA/NY-ESO抗体、其抗原结合片段、其突变体(突变型抗体或其抗原结合片段)或本发明的分子还涵盖了：包含通过保守氨基酸取代和/或任何其它突变从本发明的抗体例如NYA-2023的氨基酸序列衍生的氨基酸序列并且与HLA/NY-ESO结合的突变型抗体，其抗原结合片段，和包含其的分子等；嵌合抗体、人源化抗体或人抗体，所述抗体包含具有这样的氨基酸序列的CDR并且与HLA/NY-ESO结合，所述氨基酸序列通过保守氨基酸取代和/或其它突变衍生自本发明的抗体例如NYA-2023的CDRH1至CDRH3和CDRL1至CDRL3中任一个的氨基酸序列，其抗原结合片段，包含其的分子等。
3-3.抗HLA/NY-ESO抗体的结合片段
根据一个方面，本发明提供了本发明的抗HLA/NY-ESO抗体的抗原结合片段(在下文中，简称为“结合片段”)。本发明的抗HLA/NY-ESO抗体的结合片段涵盖了嵌合抗体、人源化抗体或人抗体的结合片段。抗体的结合片段意指在抗体的功能中至少维持抗原结合活性的片段，或其修饰形式。抗体的此类功能的实例一般包括抗原结合活性、调控抗原活性的活性(例如，激动活性)、将抗原内化到细胞内的活性、以及抑制或促进抗原与其相互作用物质之间的相互作用的活性。
抗体的结合片段并无特别限制，条件是其至少维持抗体活性的抗原结合活性。抗体的此类结合片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2、包含经由适当接头连接的Fab轻链的羧基末端和Fab重链的氨基末端的单链Fab(scFab)、Fv、包含经由适当接头连接的重链和轻链Fv分子的单链Fv(scFv)、以及具有单个重链可变区且缺少轻链序列的单结构域抗体(sdAb；也称为纳米抗体)(Muyldemans S.等人，Protein Eng.，(1994)7(9)，1129-35，Hamers-Casterman C.等人，Nature(1993)363(6428)，446-448)。包含本发明的抗体的结合片段之外的区域的分子，诸如包含接头部分的scFab和scFv，在本发明的结合片段的范围内。
3-4.修饰的抗HLA/NY-ESO抗体、其结合片段及其缀合物
本发明提供了修饰的抗体或其结合片段。本发明的修饰的抗体或其结合片段已进行化学或生物修饰。化学修饰的实例包括例如将化学部分与氨基酸骨架缀合，和化学修饰N联或O联碳水化合物链。生物学修饰的实例包括翻译后修饰(例如，N联或O联糖基化、氨基末端或羧基末端区域的加工、脱酰胺化、天冬氨酸异构化或甲硫氨酸氧化)，以及通过原核宿主细胞中表达将甲硫氨酸残基加入氨基末端。本发明的修饰的抗体或其结合片段还包括标记的抗体或其结合片段。标记允许检测或分离抗体或抗原结合片段。可以使用的标记的实例包括酶标记、荧光标记形式或亲和标记。如上所述的本发明的抗体或其结合片段的修饰可用于改善本发明的原始抗体或其原始结合片段的稳定性或血液滞留性、抗原性的降低、抗体或抗原的检测或分离、及其他目的。
化学修饰中包含的化学部分的实例包括水溶性聚合物，例如聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、右旋糖酐和聚乙烯醇。
生物学修饰的实例包括通过酶促处理、细胞处理等等的修饰；通过基因重组与另一种肽例如标签缀合，以及通过使用表达内源或外源糖链修饰酶的宿主细胞制备的产物。
此类修饰可以在抗体或其结合片段中的任意位置或所需位置处进行。可替代地，可以在其中的一个或两个或更多个位置处进行相同或者两种或更多种不同的修饰。
然而，重链序列的缺失或者重链或轻链序列中的修饰很少影响抗体结合抗原的能力及其效应子功能(补体激活、抗体依赖性细胞毒性效应等)。
因此，本发明还涵盖了已进行此类缺失或修饰的抗体。实例包括：通过在重链羧基末端处1或2个氨基酸的缺失而衍生的缺失变体(Journal of Chromatography A；705；129-134(1995))，具有重链的缺失变体的酰胺化形式，所述重链缺少在羧基末端处的2个氨基酸残基(甘氨酸和赖氨酸)，并且进一步包含在羧基末端处的酰胺化的脯氨酸残基(Analytical Biochemistry，360:75-83(2007))，以及在其重链或轻链中具有焦谷氨酰化的氨基末端的谷氨酰胺或谷氨酸残基的修饰抗体(国际公开号WO 2013/147153)(它们统称为“缺失突变体”)。然而，只要维持抗原结合能力和效应子功能，在根据本发明的抗体重链或轻链的羧基末端处包含氨基酸残基的缺失的缺失突变体并不限于上述类型。当根据本发明的抗体包含两条或更多条链(例如重链)时，两条或更多条链(例如重链)可以是选自上述全长重链和缺失突变体的任何一类的重链，或可以是选自其中的任何两类重链的组合。每种缺失突变体的数量比率或缺失突变体的分子数比率可能受到产生根据本发明的抗体的培养哺乳动物细胞类型和培养条件的影响。在一些实例中，作为主要组分的两条重链各自中的一个羧基末端氨基酸残基的缺失可以是根据本发明的抗体的主要特征。
当包含衍生自例如表达载体和/或信号序列的已加入氨基末端和/或羧基末端一个至几个氨基酸(并且部分或整体如上所述进行修饰)时，本发明的抗体或其抗原结合片段(例如，包含在本发明的多特异性抗体中)也包括在本发明的修饰的抗体的或其修饰的抗原结合片段的范围内，只要所需的抗原结合活性得到维持。包含此类修饰的抗体或抗原结合片段的分子也在本发明的多特异性抗体的范围内。
在本发明中，“抗体或其抗原结合片段”还涵盖“修饰的抗体或其抗原结合片段”。包含在本发明的多特异性抗体中的“抗体或其抗原结合片段”涵盖“修饰的抗体或其抗原结合片段”。
本发明的抗体的抗体依赖性细胞毒性活性可以通过调控与抗体结合的糖链的修饰(糖基化、脱岩藻糖基化等)得到增强。例如，国际公开号WO 99/54342、WO 00/61739和WO02/31140公开了调控抗体的糖链修饰的技术，尽管技术并不限于此。
本发明还涵盖了通过前述抗体经由接头与其它分子连接而形成的缀合物(免疫缀合物)。作为实例，与放射性材料或具有药理活性的化合物(药物)缀合的抗体是ADC(抗体-药物缀合物)(Methods Mol Biol.(2013)1045:1-27；Nature Biotechnology(2005)23，第1137-1146页)。
另外，本发明还涵盖了包含与其它功能性多肽连接的抗体的缀合物。此类抗体-肽复合物的实例包括抗体和白蛋白结合多肽的复合物(Protein Eng Des Sel.(2012)(2):81-8)。
修饰的抗体、已经历调控的糖链修饰的抗体和如上所述的缀合物由本发明的抗体涵盖。修饰的抗体的结合片段、已经历调控的糖链修饰的抗体和如上所述的缀合物由本发明的抗体的结合片段涵盖。
4.用于产生抗体的方法
本发明的抗体可以例如通过以下在细胞中作为重组抗体进行生产：将编码重链可变区的DNA或编码轻链可变区的DNA插入表达载体，用该载体转化用于表达的宿主细胞，并且培养宿主细胞。
关于编码抗体的DNA，通过将编码重链可变区的DNA与编码重链恒定区的DNA连接而获得编码重链的DNA，并且通过将编码轻链可变区的DNA与编码轻链恒定区的DNA连接而获得编码轻链的DNA。
本发明的抗HLA/NY-ESO抗体可以通过以下进行生产：将编码重链的DNA和编码轻链的DNA插入表达载体，用该载体转染宿主细胞，并且培养宿主细胞。在该情况下，可以将编码重链的DNA和编码轻链的DNA引入同一表达载体中，并且用该载体转染宿主细胞。或者，可以将编码重链的DNA和编码轻链的DNA插入分开的载体中，并且可以使用两种载体转染宿主细胞。在这方面，可以将编码重链可变区的DNA和编码轻链可变区的DNA插入已预先引入编码重链恒定区的DNA和编码轻链恒定区的DNA的载体中。载体可以含有编码信号肽的DNA，所述信号肽促进抗体从宿主细胞中的分泌。在这种情况下，编码信号肽的DNA与编码抗体的DNA在框内连接。在抗体产生后，可以去除信号肽，以获得作为成熟蛋白质的抗体。
编码重链可变区的DNA、编码轻链可变区的DNA、通过将编码重链可变区的DNA与编码重链恒定区的DNA连接而获得的DNA、或通过将编码轻链可变区的DNA与编码轻链恒定区的DNA连接而获得的DNA，可以可操作地连接到元件例如启动子、增强子和多聚腺苷酸化信号。在此上下文中，术语“可操作地连接”意指元件与DNA连接，以便发挥其功能。
表达载体并无特别限制，只要其能够在宿主例如动物细胞、细菌或酵母细胞中复制。载体的实例包括本领域已知的质粒和噬菌体。用于构建表达载体的载体的实例包括pcDNA(TM)(Thermo Fisher Scientific Inc.)、Flexi(R)载体(Promega Corp.)、pUC19、pUEX2(由Amersham plc制造)、pGEX-4T、pKK233-2(由Pharmacia制造)和pMAM-neo(由Clontech Laboratories，Inc.制造)。原核细胞(例如，大肠杆菌(E.coli)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis))和真核细胞(例如，酵母和动物细胞)两者均可以用作宿主细胞，并且优选使用真核细胞。例如，人胚肾细胞系HEK293细胞或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞可以用作动物细胞。可以通过经由本领域已知的方法将表达载体引入宿主细胞。此类方法的实例包括电穿孔、磷酸钙沉淀法和DEAE-右旋糖酐转染。抗体一旦产生，可以通过使用标准的蛋白质分离和纯化方法进行纯化。例如，可以适当地选择且组合亲和层析、其它层析技术、过滤、超滤、盐析和透析。
5.与HLA/NY-ESO结合的多特异性抗体
本发明的多特异性抗体包含本发明的抗HLA/NY-ESO抗体或其抗原结合片段。本发明的多特异性抗体优选为具有两个或更多个抗原结合位点的多特异性抗体。具体地，多特异性抗体能够结合一个分子上两个或更多个不同表位、或者两个或更多个不同分子上不同的表位，并且包含多个不同的抗原结合片段。此类多特异性抗体包括但不限于IgG型多特异性抗体、具有两类或更多类可变区的多特异性抗体例如串联scFv(taFv)、单链双抗体、抗体片段例如双抗体和三抗体、以及通过共价或非共价键连接的抗体片段。多特异性抗体可以包含Fc。
除本发明的抗HLA/NY-ESO抗体或其抗原结合片段之外，本发明的多特异性抗体还可以包含一种、两种或更多种另外的抗体或抗体的抗原结合片段。另外抗体的抗原结合片段的实例包括Fab、F(ab)'、Fv、scFv和sdAb。
优选地，本发明的多特异性抗体进一步包含抗CD3抗体或其抗原结合片段，并且还与CD3特异性地结合。
本发明的多特异性抗体中包含的抗CD3抗体或其抗原结合片段并无特别限制，只要它是与人CD3结合的抗体或其结合片段。优选地，抗CD3抗体或其抗原结合片段还与非人灵长类动物例如食蟹猴的CD3结合。抗CD3抗体或其抗原结合片段的更优选实例包含由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链可变区CDRH1、由通过SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链可变区CDRH2、由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链可变区CDRH3、由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链可变区CDRL1、由通过RDD表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列：图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链可变区CDRL2、以及由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链可变区CDRL3。
包含上述CDRH1至CDRH3和CDRL1至CDRL3的抗体或其抗原结合片段的更优选实例包括这样的抗体或其抗原结合片段，其包含由通过SEQ ID NO:46表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置2至119的氨基酸序列组成的C3E-7034重链可变区、由通过SEQ ID NO:47表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置2至119的氨基酸序列组成的C3E-7036重链可变区、由通过SEQ ID NO:48表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置2至119的氨基酸序列组成的C3E-7085重链可变区、由通过SEQ ID NO:49表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置2至119的氨基酸序列组成的C3E-7088重链可变区、由通过SEQ ID NO:140表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置2至119的氨基酸序列组成的C3E-7093重链可变区、由通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置272至389的氨基酸序列组成的C3E-7096重链可变区、由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置277至394的氨基酸序列组成的C3E-7096重链可变区、或由通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置277至394的氨基酸序列组成的C3E-7097重链可变区。
包含上述CDRH1至CDRH3和CDRL1至CDRL3的抗体或其抗原结合片段的进一步优选实例包括这样的抗体或其抗原结合片段，其包含由通过SEQ ID NO:46表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置135至243的氨基酸序列组成的C3E-7034轻链可变区、由通过SEQ ID NO:47表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置135至241的氨基酸序列组成的C3E-7036轻链可变区、由通过SEQ ID NO:48表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置135至241的氨基酸序列组成的C3E-7085轻链可变区、由通过SEQ ID NO:49表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置135至243的氨基酸序列组成的C3E-7088轻链可变区、由通过SEQ ID NO:50表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置135至243的氨基酸序列组成的C3E-7093轻链可变区、由通过SEQ IDNO:54表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置405至511的氨基酸序列组成的C3E-7096轻链可变区、由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置410至516的氨基酸序列组成的C3E-7096轻链可变区、或由通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置410至516的氨基酸序列组成的C3E-7097轻链可变区。
包含上述CDRH1至CDRH3和CDRL1至CDRL3的抗体或其抗原结合片段的进一步优选实例可以包括这样的抗体或其抗原结合片段，其包含由SEQ ID NO:46的氨基酸2至119和135至243组成的C3E-7034重链可变区和轻链可变区的组合、由SEQ ID NO:47的氨基酸2至119和135至241组成的C3E-7036重链可变区和轻链可变区的组合、由SEQ ID NO:51的氨基酸2至119和135至243组成的C3E-7038重链可变区和轻链可变区的组合、由SEQ ID NO:48的氨基酸2至119和135至241组成的C3E-7085重链可变区和轻链可变区的组合、由SEQ ID NO:49的氨基酸2至119和135至243组成的C3E-7088重链可变区和轻链可变区的组合、由SEQ IDNO:50的氨基酸2至119和135至243组成的C3E-7093重链可变区和轻链可变区的组合、由SEQID NO:54的氨基酸272至389和405至511组成的C3E-7096重链可变区和轻链可变区的组合、由SEQ ID NO:55的氨基酸277至394和410至516组成的C3E-7096重链可变区和轻链可变区的组合、或由SEQ ID NO:56的氨基酸277至394和410至516组成的C3E-7097重链可变区和轻链可变区的组合。
包含上述CDRH1至CDRH3和CDRL1至CDRL3的抗体或其抗原结合片段的进一步优选实例包括由通过SEQ ID NO:46表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置2至243的氨基酸序列组成的C3E-7034scFv、由通过SEQ ID NO:47表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置2至241的氨基酸序列组成的C3E-7036scFv、由通过SEQ ID NO:51表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置2至243的氨基酸序列组成的C3E-7078scFv、由通过SEQ ID NO:48表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置2至241的氨基酸序列组成的C3E-7085scFv、由通过SEQ ID NO:49表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置2至243的氨基酸序列组成的C3E-7088scFv、由通过SEQ ID NO:50表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置2至243的氨基酸序列组成的C3E-7093scFv、以及包含这些scFv分子中任何一个的抗体和抗体的结合片段。在一个优选方面，对于CD3特异性的scFv(也被称为“抗CD3 scFv”)包括羧基末端处提供的FLAG-His标签(也称为“加上标签的形式”)。加上标签的形式的优选实例包括C3E-7034(SEQ ID NO:46)、C3E-7036(SEQ ID NO:47)、C3E-7085(SEQ ID NO:48)、C3E-7088(SEQ ID NO:49)和C3E-7093(SEQ ID NO:50)，并且更优选C3E-7085。
本发明的多特异性分子的优选实例可以双特异性分子。术语“双特异性”意指能够结合单个分子上的两个不同表位，或者两个或更多个分子上的不同表位。双特异性抗体或抗原结合片段由本发明涵盖。本发明的双特异性分子与HLA/NY-ESO结合，并且进一步与CD3结合。
本发明的双特异性分子的实例包括具有下述结构(形式)的那些双特异性分子。
在双重scFv型双特异性分子中，与不同的各自表位结合的两个scFv分子各自经由接头或无需接头直接与二聚体Fc的链连接。可替代地，与不同的各自表位结合的两类scFv分子分别经由接头与CH和CL连接，并且各自经由接头与二聚体Fc的链进一步连接。在这种双特异性分子中，与scFv分子连接的各Fc被突变以能够与其他Fc异源缔合并形成异二聚体。双重scFv型双特异性分子被称为双重型双特异性分子或简称为双重型(图7(7b))。
在本发明中，例如，可以使用由抗HLA-A2/NY-ESO scFv和抗CD3scFv组成的双重型双特异性分子。
可替代地，本发明的双特异性分子可以是由与不同的各自表位结合的Fab和scFv形成的双特异性分子，使得第一抗体的Fab和第二抗体的scFv分别经由接头各自与二聚体Fc的链连接。在这种双特异性分子中，与Fab或scFv连接的各Fc被突变以能够与其他Fc异源缔合并形成异二聚体。此类双特异性分子被称为混合型双特异性分子或混合型(图7(7a))。在本发明中，例如，可以使用由抗HLA-A2/NY-ESO Fab和抗CD3 scFv组成的混合型。
在双特异性分子中，第一抗体的Fab和第二抗体的scFv可以经由接头与二聚体Fc的一条链连接。在这个实施方案中，Fab可以与Fc连接，并且scFv可以与Fab连接。或者，scFv可以与Fc连接，并且Fab可以与scFv连接。优选地，Fab与Fc连接，并且scFv与Fab连接。Fab和scFv之间的缔合可以经由接头来实现，所述接头能够将scFv与Fab的可变区连接。在这种双特异性分子中，二聚化Fc的每条链被突变以形成异二聚体，其通过接头连接至scFv和Fab。此类双特异性分子被称为scFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性分子或scFv-Fab-异二聚体Fc型(图7(7c))。
在本发明中，例如，可以使用由抗CD3 scFv和抗HLA-A2/NY-ESO Fab组成的scFv-Fab-异二聚体Fc型。
包含通过接头连接的分别第一抗体和第二抗体的两类scFv分子的taFv(图5(5c))也可以经由接头或无需任何接头直接与二聚体Fc的一条链连接。此类双特异性分子被称为taFv-异二聚体Fc型双特异性分子或taFv-异二聚体Fc型(图5(5d))。在这种双特异性分子中，每一Fc被突变以能够异源缔合并形成Fc异二聚体。其中taFv中的第一抗体和第二抗体连接的次序不受限制。当taFv中的第一抗体和第二抗体的连接次序相对第一和第二抗体的设定次序(称为taFv-异二聚体Fc型)逆转时，该双特异性分子被称为taFv(倒转的)-异二聚体Fc型(或称为taFv(倒转的)-Fc型)。
图7(7a)显示了混合型双特异性分子的结构，图7(7b)显示了双重型双特异性抗体的结构，并且图7(7c)显示了scFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性抗体的结构。图5(5a)显示了scFv的结构，图5(5b)显示了Fab的结构，图5(5c)显示了taFv的结构，图5(5d)显示了taFv-异二聚体Fc型双特异性抗体的结构，并且图5(5e)显示了taFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性抗体的结构。图8(8a)显示了taFv-异二聚体Fc型双特异性抗体的结构(其与图5(5d)相同)，图8(8b)显示了taFv(倒转的)-异二聚体Fc型双特异性抗体的结构，图9(9a)显示了taFv(倒转的)-异二聚体Fc型双特异性抗体中包含的第一多肽的结构，并且图9(9b)显示了taFv(倒转的)-异二聚体Fc型双特异性抗体中包含的第二多肽的结构。
在本发明的双特异性抗体中，多个多肽彼此缔合。
在本发明中，例如，抗HLA-A2/NY-ESO scFv和抗CD3 scFv可以用作taFv。优选地，taFv-异二聚体Fc型双特异性抗体包含：(a)第一多肽，其从N末端朝向C末端按照该次序包含与HLA/NY-ESO特异性结合的scFv、与CD3特异性结合的scFv和免疫球蛋白Fc区(i)；以及第二多肽，其包含免疫球蛋白铰链区和Fc区(ii)。更优选地，(b)第一多肽和第二多肽经由Fc区(i)和Fc区(ii)彼此缔合。第一多肽和第二多肽的Fc区可以包含突变用于形成异二聚体。taFv-异二聚体Fc型双特异性抗体的实例显示于图5(5d)中。如图5(5d)中所示的，第一多肽的Fc区(i)与第二多肽(实心的)的Fc区(ii)连接，并因此，第一多肽和第二多肽缔合。图6(6a)显示了第一多肽，并且图6(6b)显示了第二多肽。例如，在图5(5d)中，第一scFv(空心的)是抗HLA-A2/NY-ESO scFv，并且第二scFv(正阴影线的)是抗CD3 scFv。
本发明的更优选的taFv-异二聚体Fc型双特异性抗体中包含的第一多肽包含通过SEQ ID NO:32表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:34表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:35表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:36表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:37表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:38表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:39表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:40表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:41表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:42表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:43表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:33表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:52表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ IDNO:53表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置20至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置20至516的氨基酸序列、或通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置20至516的氨基酸序列。进一步优选的taFv-异二聚体Fc型双特异性分子中包含的第一多肽包含通过SEQ ID NO:32、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、32、52、53或54表示的氨基酸序列的对应于位置529至745的氨基酸序列，或者通过SEQ ID NO:55或56表示的氨基酸序列的对应于位置534至750的氨基酸序列。进一步优选的taFv-异二聚体Fc型双特异性分子中包含的第一多肽由以下组成：通过SEQ ID NO:32表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:34表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:35表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:36表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:37表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:38表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:39表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:40表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:41表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:42表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:43表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:33表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:52表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:53表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、或通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列。可替代地，第一多肽由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置20至750的氨基酸序列、或通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置20至750的氨基酸序列组成。
本发明的优选的taFv-异二聚体Fc型双特异性分子中包含的第二多肽包含人抗体衍生的铰链区和突变型Fc。进一步优选的taFv-异二聚体Fc型双特异性分子中包含的第二多肽包含通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置20至246的氨基酸序列。
在其中，本发明的taFv-异二聚体Fc型双特异性抗体的优选实例可以包括：其中由通过SEQ ID NO:32表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列组成的第一多肽以及由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置21至246的氨基酸序列组成的第二多肽彼此缔合的NYF-0016、其中由通过SEQ ID NO:84表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列组成的第一多肽以及由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置21至246的氨基酸序列组成的第二多肽彼此缔合的NYF-0022、其中由通过SEQ ID NO:35表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列组成的第一多肽以及由通过SEQID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置21至246的氨基酸序列组成的第二多肽彼此缔合的NYF-0023、其中由通过SEQ ID NO:36表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列组成的第一多肽以及由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置21至246的氨基酸序列组成的第二多肽彼此缔合的NYF-0027、其中由通过SEQ ID NO:37表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列组成的第一多肽以及由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置21至246的氨基酸序列组成的第二多肽彼此缔合的NYF-0035、其中由通过SEQ ID NO:38表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列组成的第一多肽以及由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置21至246的氨基酸序列组成的第二多肽彼此缔合的NYF-0044、其中由通过SEQ ID NO:39表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列组成的第一多肽以及由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置21至246的氨基酸序列组成的第二多肽彼此缔合的NYF-0045、其中由通过SEQ IDNO:40表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列组成的第一多肽以及由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置21至246的氨基酸序列组成的第二多肽彼此缔合的NYF-0047、其中由通过SEQ ID NO:41表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列组成的第一多肽以及由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置21至246的氨基酸序列组成的第二多肽彼此缔合的NYF-0048、其中由通过SEQ ID NO:42表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列组成的第一多肽以及由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置21至246的氨基酸序列组成的第二多肽彼此缔合的NYF-0060、其中由通过SEQ ID NO:43表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列组成的第一多肽以及由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置21至246的氨基酸序列组成的第二多肽彼此缔合的NYF-0061、其中由通过SEQ ID NO:33表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列组成的第一多肽以及由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置21至246的氨基酸序列组成的第二多肽彼此缔合的NYF-0019、其中由通过SEQ ID NO:52表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列组成的第一多肽以及由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置21至246的氨基酸序列组成的第二多肽彼此缔合的NYF-0014、以及其中由通过SEQ ID NO:53表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列组成的第一多肽以及由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置21至246的氨基酸序列组成的第二多肽彼此缔合的NYF-0082。本发明的taFv-异二聚体Fc型双特异性抗体的优选实例可以进一步包括其中由通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列组成的第一多肽以及由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置20至246的氨基酸序列组成的第二多肽彼此缔合的NYZ-0038、其中由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置20至750的氨基酸序列组成的第一多肽以及由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置20至246的氨基酸序列组成的第二多肽彼此缔合的NYZ-0082、以及其中由通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置20至750的氨基酸序列组成的第一多肽以及由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置20至246的氨基酸序列组成的第二多肽彼此缔合的NYZ-0083。
在其中，NYF-0023、NYF-0047、NYF-0048、NYF-0060、NYF-0061、NYZ-0038、NYZ-0082和NYZ-0083特别具有极佳的生物活性、物理性质等等，并且因此是优选的。
第一抗体的taFv可以经由接头或无需接头直接与二聚体Fc的一条链连接，而第一抗体或第二抗体的Fab可以经由接头或无需接头直接与Fc二聚体的另一条链连接。在这种双特异性分子中，并参考图55(e)，在taFv-异二聚体Fc型中的第二多肽的Fc区(ii)(实心的)的N末端提供Fab。此类双特异性分子被称为taFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性分子或taFv-Fab-异二聚体Fc型(图5(5e))。
在本发明中，例如，包含抗HLA-A2/NY-ESO scFv和抗CD3 scFv、以及HLA/NY-ESOFab的taFv可以在taFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性分子中。
taFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性抗体优选包含：(a)第一多肽，其从N末端朝向C末端按照该次序包含与人HLA/NY-ESO特异性结合的scFv、与CD3特异性结合的scFv和免疫球蛋白Fc区(i)；第二多肽，其由包含Fc区(ii)的免疫球蛋白重链组成；以及第三多肽，其由免疫球蛋白轻链组成。更优选地，(b)第二多肽和第三多肽彼此缔合，并且(c)第一多肽和第二多肽经由Fc区(i)和Fc区(ii)彼此缔合。taFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性抗体的实例显示于图5(5e)中。图6(6a)显示了第一多肽，图6(6c)显示了第二多肽，并且图6(6d)显示了第三多肽。如图5(5e)中所示的，由包含Fc区(ii)的免疫球蛋白重链组成的第二多肽的Fc区(ii)(实心的)与第一多肽的Fc区(i)缔合，并且免疫球蛋白轻链进一步与第二多肽连接。在该实施方案中，taFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性分子包含taFc和免疫球蛋白Fc区、以及与其连接的Fab。优选的taFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性分子中包含的第一多肽的氨基酸序列的实例包括通过SEQ ID NO:32表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:34表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ IDNO:35表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:36表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:37表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:38表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:39表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:40表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ IDNO:41表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:42表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:43表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:33表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:52表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:53表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ IDNO:54表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置21至516的氨基酸序列、以及通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置21至516的氨基酸序列。进一步优选的taFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性分子中包含的第一多肽由以下组成：通过SEQ ID NO:32表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:34表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:35表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ IDNO:36表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:37表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:38表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:39表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:40表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:41表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ IDNO:42表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:43表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:33表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:52表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:53表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置21至745的氨基酸序列、通过SEQ IDNO:55表示的氨基酸序列的对应于位置21至750的氨基酸序列、或通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置21至750的氨基酸序列。
本发明的优选的taFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性抗体中包含的第二多肽包含人抗体或人源化抗体重链可变区、CH1区、和铰链区和突变型Fc。进一步优选的taFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性抗体中包含的第二多肽包含通过SEQ ID NO:44表示的氨基酸序列的对应于位置20至242的氨基酸序列。
本发明的优选的taFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性抗体中包含的第三多肽包含人抗体或人源化抗体轻链可变区和恒定区。进一步优选的taFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性抗体中包含的第三多肽包含通过SEQ ID NO:45表示的氨基酸序列的对应于位置21至131的氨基酸序列。
在上文所述优选的taFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性分子中的第二多肽和第三多肽的可变区和CH1区构成Fab。Fab优选为抗HLA/NY-ESO抗体的Fab，例如NYA-0001的Fab。
在本发明中，例如，抗HLA-A2/NY-ESO scFv或抗CD3 scFv、和抗HLA/NY-ESO Fab或抗CD3 Fab可以包含在scFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性分子中。
scFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性分子优选包含：(a)第一多肽，其从N末端朝向C末端按照该次序包含与人HLA/NY-ESO特异性结合的scFv、与CD3特异性结合的抗体的重链可变区和恒定区CH1、以及免疫球蛋白Fc区(i)；第二多肽，其包含免疫球蛋白铰链区和Fc区(ii)；以及第三多肽，其包含由可变区和恒定区组成的抗体轻链。更优选地，(b)第一多肽和第二多肽经由Fc区(i)和Fc区(ii)彼此缔合，并且第一多肽在抗体重链可变区和恒定区CH1处与第三多肽(的抗体轻链)缔合。第一多肽和第二多肽的Fc区可以是野生型，或可以包含能够形成异二聚体突变。scFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性分子的实例显示于图7(7c)中。图7(7c)的右半部分对应于第一多肽和第三多肽，并且左半部分对应于第二多肽。如图7(7c)中所示的，第一多肽的Fc区(i)和第二多肽(实心的)的Fc区(ii)彼此缔合，并且第一多肽和第三多肽彼此结合。例如，在图7(7c)中，scFv(正阴影线的)为抗HLA-A2/NY-ESO scFv，并且Fab(空心、棋盘格和水平线)为抗CD3 Fab。
优选的scFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性抗体中包含的第一多肽中包含的氨基酸序列的实例可以包括通过SEQ ID NO:57表示的氨基酸序列的对应于位置21至394的氨基酸序列，进一步优选其位置20至724的氨基酸序列。
优选的scFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性抗体的第一多肽中包含的氨基酸序列的实例是通过SEQ ID NO:60表示的氨基酸序列的对应于位置21至389的氨基酸序列。更优选地，氨基酸序列对应于位置20至719。
优选的scFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性抗体的第一多肽中包含的氨基酸序列的另一个实例包括通过SEQ ID NO:61表示的氨基酸序列的对应于位置21至389的氨基酸序列，并且更优选地，对应于SEQ ID NO:61的位置20至719的氨基酸序列。
本发明的优选的scFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性抗体中包含的第二多肽包含人抗体衍生的铰链区和突变型Fc。进一步优选的scFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性分子中包含的第二多肽包含通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置20至246的氨基酸序列。
本发明的优选的scFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性抗体中包含的第三多肽包含人抗体衍生的轻链。优选地，第三多肽包含通过SEQ ID NO:58表示的氨基酸序列的对应于位置21至127的氨基酸序列，并且更优选地，对应于SEQ ID NO:58的位置21至233的氨基酸序列。
在其中，本发明的scFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性分子的优选实例包括NYZ-1010，其中由通过SEQ ID NO:57表示的氨基酸序列的对应于位置20至724的氨基酸序列组成的第一多肽、由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置20至246的氨基酸序列组成的第二多肽、以及由通过SEQ ID NO:58表示的氨基酸序列的对应于位置21至233的氨基酸序列组成的第三多肽彼此缔合。
本发明的scFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性分子的优选实例包括NYZ-1007，其中由通过SEQ ID NO:60表示的氨基酸序列的对应于位置20至719的氨基酸序列组成的第一多肽、由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置20至246的氨基酸序列组成的第二多肽、以及由通过SEQ ID NO:58表示的氨基酸序列的对应于位置21至233的氨基酸序列组成的第三多肽彼此缔合。
本发明的scFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性分子的优选实例可以进一步包括NYZ-1017，其中由通过SEQ ID NO:61表示的氨基酸序列的对应于位置20至719的氨基酸序列组成的第一多肽、由通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置20至246的氨基酸序列组成的第二多肽、以及由通过SEQ ID NO:58表示的氨基酸序列的对应于位置21至233的氨基酸序列组成的第三多肽彼此缔合。
本发明的双特异性分子中包含的一条、两条、或者三条或更多条肽可以是上文提到的“缺失突变体”。具体地，所述双特异性分子可以在羧基末端，特别是在衍生自抗体重链的羧基末端处包含一个或两个(或更多个)氨基酸的突变(包括缺失)。例如，作为本发明的优选的scFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性分子的NYZ-1010中包含的第一多肽的氨基酸序列的羧基末端处的氨基酸残基，如SEQ ID NO:57所表示，可以是从缺失一个氨基酸产生的Lys724或Gly723、或羧基末端处包括Lys和Gly的第一多肽的混合物中的任何。类似地，本发明的优选的scFv-Fab-异二聚体Fc型双特异性分子NYZ-1010中包含的第二多肽的氨基酸序列的羧基末端处的氨基酸残基，如SEQ ID NO:84所表示，可以是从缺失一个氨基酸产生的Lys246或Gly723、或羧基末端处包括Lys和Gly的第二多肽的混合物中的任何。
本发明的双特异性分子中包含的scFv和Fab优选衍生自人源化抗体或人抗体，并且双特异性分子中包含的Fc优选衍生自人抗体。
在本发明的双特异性分子中，重链可变区和轻链可变区可以从抗体的氨基末端以该次序连接。或者，轻链可变区和重链可变区可以从抗体的氨基末端以该次序连接。接头可以任选地位于两个可变区之间。在氨基末端侧上的可变区可以任选地包含在氨基末端处的甘氨酸残基。在串联scFv型双特异性分子中，接头、FLAG标签和/或His标签可以任选地在羧基末端侧上的可变区的羧基末端提供。在一个优选方面，例如，重链可变区、第一接头、轻链可变区、第二接头、FLAG标签和His标签可以从氨基末端开始按照该次序连接。
接头的实例包括单链多肽或单链寡肽，或者合成产物例如PEG、核苷酸、糖链和化合物。另外，可以使用本领域已知的任何接头而并无特别限制，只要接头连接两个多肽。
肽接头的长度例如可以是5至30个氨基酸。当双特异性分子含有多个接头时，每个肽接头都可以具有相同的长度或者不同的长度。
肽接头的实例是重复(Gly·Gly·Gly·Gly·Ser)肽。可以对其添加除Gly和Ser外的一个至几个氨基酸残基。
在可以通过本发明的多特异性抗体，特别是双特异性抗体采用的结构(形式)中，优选的是taFv-异二聚体Fc型、taFv-Fab-异二聚体Fc型和scFv-Fab-异二聚体Fc型，并且进一步优选的是taFv-异二聚体Fc型。其中抗HLA/NY-ESO scFv和抗CD3 scFv从N末端朝向C末端按照该次序放置的排列(taFv-异二聚体Fc型)比其中次序逆转的排列(taFv(倒转的)-异二聚体Fc型)更优选。另外，scFv-Fab-异二聚体Fc型也是进一步优选的。
本发明还包括这样的分子，其包含由多核苷酸中包含的核苷酸序列编码的氨基酸序列并且与HLA/NY-ESO结合且优选进一步与CD3结合，所述多核苷酸在严格条件下与包含编码本发明的分子中包含的氨基酸序列的核苷酸序列的多核苷酸的互补链杂交。
本发明还包括这样的分子，其包含与本发明的分子中包含的氨基酸序列具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更多同一性的氨基酸序列，并且与HLA/NY-ESO结合且优选进一步与CD3结合。
本发明的抗体、其结合片段以及包含该抗体或结合片段的多特异性抗体具有极佳生物活性、物理化学性质(在下文中，被称为“物理性质”)、安全性和体内动力学。(a)生物活性或其的指标的实例可以包括抗原结合活性、体外细胞毒性活性和体内抗肿瘤活性。例如，关于HLA/NY-ESO的解离常数(KD值)为100nM或更低或者50nM或更低，优选为20nM或更低或者10nM或更低，更优选为5nM或更低。例如，使用人外周血单核细胞作为效应细胞，针对内源性人NY-ESO表达细胞系U266B1和/或NCI-H1703发挥的细胞毒性活性的EC50值为20nM或更低，优选为10nM或更低，更优选为5nM或更低(体外细胞毒性活性的测量和计算的实例可以包括但不限于WO2021/200857的实施例8中所述的方法)。例如，将以6×107个细胞/mL的人鳞状细胞肺癌细胞系NCI-H1703的0.1mL悬浮液皮下移植到每只NOG小鼠中。四天后，将以3.75×107个细胞/mL的人外周血单核细胞的0.2mL悬浮液移植到尾静脉内。抗体14天后开始施用，并且抗体每周一次施用持续三周，随后肿瘤体积测量。相对于已施用媒介物的对照组的肿瘤生长抑制活性为50％或更高，优选75％或更高，更优选90％或更高(体内抗肿瘤活性可以通过实施例9中所述的方法测定和确定)。(b)生物药剂中包含的杂质可能影响药剂安全性。因此，需要建立合适的程序以设定在生产和储存过程中杂质量的规范并对其进行控制。具体地，HMWS(聚集体)是主要杂质并且涉及免疫原性的风险、药物功效的降低等等。因此，HMWS的严格控制是必需的。为了控制杂质水平的目的，杂质水平的评估应在生产过程中和生产后随时间进行评价(杂质的量是否增加或降低)。可以使用长期稳定性测试来选择保质期较长的抗体。用作用于选择预期用于药物用途的抗体的指标的期望的物理化学性质的其他实例包括耐酸性(压制HMWS形成等)和溶液稳定性(压制HMWS形成等)。指标的其它实例包括经培养通过将编码本发明的抗体或其结合片段、或者包含该抗体或结合片段的分子中包含的氨基酸序列的基因引入适合于抗体生产的宿主细胞、例如Expi293F细胞而获得的重组细胞获得的产物的高产率。具有上文所述的物理化学性质的本发明的优选抗体、其抗原结合片段、以及包含该抗体或结合片段的多特异性抗体处于以下原因是有利的：含有所述抗体、其结合片段或多特异性抗体的溶液可以暴露于酸性条件，并因此，用于生产所述抗体、其结合片段或多特异性抗体的过程，例如通过蛋白A或离子交换层析或病毒灭活，有利于或易于实施；HMWS的形成在溶液维持低水平，并因此，包含所述抗体、其结合片段或多特异性抗体的药剂的生产、配制、分配或保存有利于或易于实施。因此，包含所述抗体、其结合片段或多特异性抗体的药物产品可以高效生产。关于耐酸性，例如，起因于在室温下在pH3.5下的1小时温育所述抗体、其结合片段或多特异性抗体，如通过尺寸排阻层析所测量的HMWS含量为5％或更低，优选为2％或更低，更优选为1％或更低(用于耐酸性评估的HMWS含量可以使用WO2021/200857的实施例19-1中所述的方法确定)。关于溶液稳定性，例如，起因于在25mM组氨酸和5％山梨糖醇(pH 6.0)中以25mg/ml的浓度溶解所述抗体、其结合片段或多特异性抗体并在25℃下保存6天，如通过尺寸排阻层析所测量的HMWS含量为20％或更低，优选为10％或更低(用于溶液稳定性评估的HMWS含量可以使用WO2021/200857的实施例19-2中所述的方法确定)。生产效率或产率可以根据WO2021/200857的实施例20和21中所述的方法测量和确定，但方法不限于此。(c)安全性或安全性的指标的实例包括抗原识别特性和在施用时的观察结果。例如，本发明的抗体等识别野生型NY-ESO肽上的多个氨基酸，但不与具有与野生型NY-ESO肽相似但并非相同的氨基酸序列的同源肽结合，并且具有归于脱靶效应的不良反应的低风险。本发明的抗体等在基于ISPRI网络的免疫原性筛选(EpiVax，Inc)中具有低免疫原性，并且因此预期具有归于抗药物抗体的不良反应例如细胞因子产生的低风险。例如，当如本发明的双特异性抗体中包含的NYF-0023、NYF-0045、NYF-0047、NYF-0048、NYF-0060、NYF-0061、NYZ-0082或NYZ-1010施用于Balb/c小鼠时，既未观察到关于血液中的半衰期的显著问题，也不存在关于重量减轻或其他毒性效应的任何显著问题。另外，当将单一剂量的NYZ-0082或NYZ-1010施用于食蟹猴时，既未观察到关于血液中的半衰期的显著问题，也不存在通过施用所述抗体引起的一般状态、体重、饲料摄取、体温测量和细胞因子的血浆水平中的任何变化。(d)动力学或其指标的实例可以包括血液中的半衰期。例如，当将根据本发明的几种双特异性抗体施用于Balb/c小鼠或食蟹猴时，并未观察到关于血液中的半衰期的显著问题。本发明的抗体、其结合片段和分子具有极佳的生物活性、物理化学性质、安全性和体内动力学，并且因此可以掺入药物组合物中。具有(a)中所述的抗原结合活性和(b)中所述的性质的本发明的抗体或其抗原结合片段的优选实例包括但不限于NYA-1143、NYA-1163、NYA-2023、NYA-2027、NYA-2035、NYA-2044、NYA-2045、NYA-2047、NYA-2048、NYA-2060、NYA-2031、NYA-2047、NYA-2061、NYA-2143和NYA-3061，更优选NYA-2047、NYA-2061、NYA-2143和NYA-3061。具有(a)至(d)中所述的性质的本发明的多特异性抗体的优选实例包括但不限于NYF-0016、NYF-0019、NYF-0022、NYF-0023、NYF-0027、NYF-0035、NYF-0044、NYF-0045、NYF-0047、NYF-0048、NYF-0058、NYF-0060、NYF-0061、NYZ-0038、NYZ-0082、NYZ-0088和NYZ-1010，更优选NYF-0061、NYZ-0038、NYZ-0082、NYZ-0088、NYZ-1007、NYZ-1010和NYZ-1017。
在本发明中，抗体与之结合的“位点”，即，由抗体识别的“位点”，意指由抗体结合或识别的肽抗原的部分或抗原的更高级结构的部分。在本发明中，此类位点也被称为表位或抗体结合位点。由本发明的抗HLA/NY-ESO抗体结合或识别的HLA/NY-ESO上的位点的实例包括HLA/NY-ESO肽中的多个氨基酸和更高级结构的部分。
本发明还涵盖结合与本发明的抗体或其结合片段“相同位点的抗体或其结合片段”。“结合相同位点的抗体”是与由给定抗体识别的抗原分子上的位点结合的另一种抗体。如果第二抗体与由第一抗体结合的抗原分子上的肽抗原的部分或三维结构的部分结合，则第一抗体和第二抗体可以确定为与相同位点结合。当本发明的第一抗体具有上文(a)中所述的抗原结合活性时，结合与第一抗体相同的HLA/NY-ESO上的位点的第二抗体很可能具有与第一抗体相似的活性。此类第二抗体也由本发明涵盖。与本发明的第一抗体竞争结合HLA/NY-ESO的抗体也由本发明涵盖，只要该抗体具有(a)中所述的抗原结合活性。与由本发明的单克隆抗体识别的HLA/NY-ESO上的位点结合的抗体、与本发明的单克隆抗体竞争结合HLA/NY-ESO的抗体及其结合片段优选具有(a)中所述的体外细胞毒性活性和体内抗肿瘤活性以及(b)至(d)中所述的性质中的一种、两种或更多种，优选三种或更多种，并且更优选每一种。
抗体结合位点可以通过本领域技术人员众所周知的方法，例如免疫测定进行确定。例如，通过从其C末端或N末端适当切割抗原的氨基酸序列来制备一系列肽，并且研究抗体对肽片段的反应性以粗略地确定识别位点。然后，合成更短的肽，并且可以研究抗体对这些肽的反应性，以确定结合位点。可替代地，例如，使抗原或抗原片段肽等的氨基酸序列中的特定位点或区域缺失、用另一种氨基酸序列取代或在氨基酸序列中引入突变，并且可以研究抗体对所得到的肽的反应性，以确定结合位点。抗原片段肽可以通过例如基因重组或肽合成进行制备。
当抗体结合或识别抗原的更高级结构的部分时，可以通过使用X射线结构分析鉴定与抗体相邻的抗原上的氨基酸残基来确定关于所述抗体的结合位点。例如，抗体或其片段和抗原或其片段可以彼此结合、结晶并进行结构分析，以鉴定处于与抗体相互作用的合适距离(“相互作用距离”)的抗原上的氨基酸残基。相互作用距离为8埃或更小，优选为6埃或更小，更优选为4埃或更小。具有处于与抗体的此类相互作用距离的一个或多个氨基酸残基可以构成抗体的抗原结合位点(表位)。当存在两个或更多个此类氨基酸残基时，这些氨基酸可以不在一级序列上彼此相邻。
本发明的抗HLA/NY-ESO抗体或其结合片段特异性识别HLA/NY-ESO的氨基酸序列中的多个氨基酸。识别多个氨基酸、与本发明的抗体或其结合片段竞争结合HLA/NY-ESO、或与多个氨基酸具有相互作用距离的抗体或其结合片段也由本发明涵盖。此外，包含此类抗体或其结合片段的多特异性抗体也由本发明涵盖。
本发明的多特异性抗体可以与免疫检查点抑制剂组合使用。
[免疫检查点抑制剂]
在本发明中，“免疫检查点抑制剂”指抑制免疫抑制系统并激活抗肿瘤免疫的药物，并且具有与“抑制免疫检查点分子的化合物”相同的含义。
本发明中使用的免疫检查点抑制剂的优选实例包括但不特别限于抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体和抗TIGIT抗体，并且可以更优选包括抗PD-1抗体和抗PD-L1抗体。在本发明中，“抗PD-1抗体”指与PD-1(程序性细胞死亡-1；CD279；PDCD1)特异性结合的抗体，并且优选指具有降低、抑制和/或干扰起因于PD-1与其结合配偶体PD-L1或PD-L2之间的相互作用的信号转导的效应的抗体。本发明中使用的抗PD-1抗体并无特别限制，只要它的功效和安全性已在临床上得到确认。其优选实例包括纳武单抗(国际公开号WO 2006/121168等)和派姆单抗(国际公开号WO 2008/156712等)。例如，商购可得的用于研究的抗PD-1抗体(例如克隆RMP1-14)可以用于确认在临床前研究中抗PD1抗体和包含本发明的抗HLA-A2/NY-ESO抗体的多特异性抗体的组合效应。在本发明中，“抗PD-L1抗体”指与PD-L1(程序性细胞死亡配体1；CD274；B7-H1)特异性结合的抗体，并且优选指具有降低、抑制和/或干扰起因于PD-L1与其结合配偶体PD-1或B7.1(CD80)之间的相互作用的信号转导的效应的抗体。本发明中使用的抗PD-L1抗体并无特别限制，只要它的功效和安全性已在临床上得到确认。抗PD-L1抗体的优选实例包括阿特珠单抗(国际公开号WO 2010/077634等)、度伐利尤单抗(国际公开号WO 2011/066389等)和阿维鲁单抗(国际公开号WO 2013/079174等)。例如，商购可得的用于研究的抗PD-L1抗体(例如克隆10F.9G2)可以用于确认在临床前研究中抗PD-L1抗体和包含本发明的抗HLA-A2/NY-ESO抗体的多特异性抗体的组合效应。在本发明中，“抗CTLA-4抗体”指与CTLA-4(细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4；CD152)特异性结合的抗体，并且优选指具有降低、抑制和/或干扰起因于CTLA-4与其结合配偶体B7.1(CD80)或B7.2(CD86)之间的相互作用的信号转导的效应的抗体。本发明中使用的抗CTLA-4抗体并无特别限制，只要它的功效和安全性已在临床上得到确认。抗CTLA-4抗体的优选实例包括伊匹木单抗(国际公开号WO 2001/014424等)、曲美木单抗(国际公开号WO 2000/037504等)、斯巴达珠单抗(国际公开号WO 2015/112900等)和西米普利单抗(国际公开号WO 2015/196051等)。例如，商购可得的用于研究的抗CTLA-4抗体(例如克隆9H10)可以用于确认在临床前研究中抗CTLA-4抗体和包含本发明中使用的抗HLA-A2/NY-ESO抗体的多特异性抗体的组合效应。在本发明中，“抗TIGIT抗体”指与TIGIT(具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体)特异性结合的抗体，并且优选指具有降低、抑制和/或干扰起因于TIGIT与其结合配偶体CD155之间的相互作用的信号转导的效应的抗体。本发明中使用的抗TIGIT抗体并无特别限制，只要它的功效和安全性已在临床上得到确认。抗TIGIT抗体的优选实例包括替瑞利尤单抗(国际公开号WO 2017/053748)和维博利单抗(国际公开号WO 2016/028656)。例如，商购可得的用于研究的抗TIGIT抗体(例如克隆1B4)可以用于确认在临床前研究中抗TIGIT抗体和包含本发明的抗HLA-A2/NY-ESO抗体的多特异性抗体的组合效应。
在本发明中，当“免疫检查点抑制剂”为抗体时，该抗体的抗原结合片段也在“抗体”的范围内。在本发明中，与多特异性抗体组合使用的免疫检查点抑制剂可以是上述任何抗体的抗原结合片段，并且该抗原结合片段可以包含其它部分。
[化学治疗剂]
在本发明中，术语“化学治疗剂”意指具有抗癌或抗肿瘤活性的化合物中的化学合成药物。
本发明中使用的化学治疗剂并无特别限制，并且其优选为拓扑异构酶抑制剂、微管抑制剂、含铂药物、DNA去甲基化剂、抗癌抗生素或烷化剂。拓扑异构酶抑制剂的优选实例包括伊立替康、拓扑替康、依托泊苷和具有结合的SN-38的药物缀合物戈沙妥珠单抗，伊立替康的活性代谢物。微管抑制剂的优选实例包括紫杉醇、多西他赛、长春新碱、长春碱、长春地辛、艾日布林、长春瑞滨和白蛋白结合型紫杉醇(Nab紫杉醇)。含铂药物的优选实例可以包括奥沙利铂、卡铂、顺铂和奈达铂。DNA去甲基化剂的优选实例包括氮杂胞苷和地西他滨。抗癌抗生素的优选实例包括多柔比星、博来霉素和多柔比星脂质体。烷化剂的优选实例包括异环磷酰胺、环磷酰胺和达卡巴嗪。然而，与本发明的多特异性抗体组合使用的化学治疗剂并不限于此。
[药剂]
本发明提供了包含与免疫检查点抑制剂或化学治疗剂组合的多特异性分子的药物组合物。本发明还提供了治疗方法，其包括施用与免疫检查点抑制剂或化学治疗剂组合的多特异性分子。
在本发明的药物组合物和治疗方法中，多特异性分子和免疫检查点抑制剂或化学治疗剂可以作为活性成分包含在分开的制剂中，并且同时或在不同的时间进行施用。多特异性分子和免疫检查点抑制剂或化学治疗剂可以作为活性成分包含在单一制剂中，并且同时进行施用。可替代地，根据本发明的多特异性分子可以作为活性成分包含在单一制剂中，并且进行施用用于治疗通过激活抗肿瘤免疫得到改善的疾病。
本发明的药物组合物和治疗方法可以用于治疗癌症，并且优选地，可以用于治疗选自以下的至少一种疾病：肺癌(包括非小细胞肺癌)、尿路上皮癌、大肠癌(也称为结肠直肠癌；包括结肠癌和直肠癌)、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌(也称为胃腺癌)、食管胃结合部腺癌、胃肠道间质瘤、宫颈癌、食管癌、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、子宫内膜癌、子宫癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、骨髓瘤、神经上皮组织肿瘤、神经鞘瘤、头颈癌、皮肤癌、咽癌、胆囊癌、胆管癌、间皮瘤、佩吉特氏病和肉瘤。
本发明的药物组合物可以被选择且用作药物用于癌症的主要治疗。本发明的治疗方法也可以是癌症的主要治疗。因此，所述药物组合物和方法可以延迟癌细胞的生长，抑制其增殖，并进一步破坏癌细胞。这些效应可以允许癌症患者不含由癌症引起的症状或实现癌症患者的QOL的改善，并且通过维持癌症患者的生命获得疗效。即使所述药物组合物和治疗方法不能破坏所有癌细胞，它们也可以通过抑制或控制癌细胞的增殖来实现癌症患者具有改善的QOL，同时实现更长期的存活。本发明的药物组合物可以用作药疗法中的唯一药物，或者本发明的治疗方法可以用作唯一治疗方法。或者，药物组合物或治疗方法可以与作为辅助疗法的另外疗法组合使用，并且可以与外科手术、放射疗法、激素疗法等等进行组合。此外，药物组合物可以用作用于新辅助疗法中的药物，或者治疗方法可以用作新辅助疗法。除如上所述的治疗用途之外，本发明的药物组合物和治疗方法还可以预计具有预防效应，例如小转移性癌细胞的增殖的抑制及其破坏。例如，可以预计在转移过程中抑制且破坏体液中的癌细胞的效应，或者例如在任何组织中植入后立即抑制且破坏小癌细胞的效应。因此，特别是在癌症的手术切除后，可以预计癌症转移的抑制或预防效应。本发明的药物组合物和治疗方法可以作为全身疗法应用于患者或局部应用于癌组织。优选地，本发明的药物组合物施用于哺乳动物，并且更优选施用于人。优选地，在本发明的治疗方法中，待治疗的受试者是哺乳动物并且更优选是人。本发明的药物组合物可以作为含有一种或多种药学上相容的成分的药物组合物进行施用。用于本发明的药物组合物中的合适物质可以从本领域已知的药物添加剂和其它药物组分中选择并且以给定剂量或浓度应用或施用。药物组合物通常含有例如一种或多种药物载体(例如，灭菌液体)。在该背景下，液体包括例如水和油(石油或者动物起源、植物起源或合成起源的油)。油可以是例如花生油、大豆油、矿物油或芝麻油。当药物组合物进行静脉内施用时，水是更通常的载体。水性盐溶液、水性右旋糖溶液和水性甘油溶液也可以用作特别是用于可注射溶液的液体载体。合适的药物赋形剂可以选自本领域已知的那些药物赋形剂。需要时，组合物还可以含有少量润湿剂或乳化剂、或者pH缓冲剂。合适的药物载体的实例在通过E.W.Martin的"Remington's PharmaceuticalSciences"中进行描述。其处方对应于施用形式。
各种递送系统是本领域已知的，并且可以用于施用本发明的药物组合物。施用途径的实例可以包括但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内和皮下途径。施用可以基于例如输注或弹丸注射。根据一个特别优选的实施方案，本发明中使用的多特异性分子和免疫检查点抑制剂或化学治疗剂通过输注进行施用。肠胃外施用是优选的施用途径。在一个通常的实施方案中，药物组合物根据常规程序作为适合于静脉内施用于人的药物组合物提供。用于静脉内施用的组合物通常是无菌和等渗水性缓冲溶液中的溶液。必要时，药物组合物还可以含有增溶剂和用于减轻注射部位处的疼痛的局部麻醉剂(例如利多卡因)。一般而言，这些成分例如单独或以单一剂型作为混合物一起提供，作为安瓿或小袋中通过气密密封进行密封的容器中的干燥或冻干粉末或者无水浓缩物，所述安瓿或小袋指示了活性剂的量。当药物组合物通过输注施用时，它可以例如从含有无菌药物级的水或盐水的输液瓶中进行施用。当药物组合物通过注射进行施用时，可注射无菌水或盐水的安瓿可以这样提供，使得例如成分在施用前进行混合。
本发明的药物组合物可以含有除根据本发明的多特异性分子和免疫检查点抑制剂或化学治疗剂外的用于癌症的治疗剂。本发明的药物组合物可以与用于癌症的另外治疗剂组合施用，并且从而可以加强抗肿瘤效应。本发明的治疗方法可以包括除了本发明的多特异性分子和免疫检查点抑制剂或化学治疗剂之外，还施用用于治疗癌症的治疗剂。用于癌症的另外治疗剂可以与本发明的药物组合物同时、分开或连续地施用于个体，或者它们的施用可以间隔地错开。用于治疗癌症的此类治疗剂的实例可以包括培美曲塞、索拉非尼、依维莫司、坦螺旋霉素和贝伐珠单抗。治疗剂并不限于此，只要其具有抗肿瘤活性。
本发明中使用的分子靶向药物并无特别限制，并且其优选为VEGF抑制剂、FGFR抑制剂或多激酶抑制剂。VEGF抑制剂的优选实例包括贝伐珠单抗、雷莫芦单抗、阿柏西普和阿昔替尼。FGFR抑制剂的优选实例包括佩米替尼和福巴替尼。多激酶抑制剂的优选实例包括索拉非尼、舒尼替尼、帕唑帕尼、瑞戈非尼和乐伐替尼。然而，与本发明的多特异性抗体组合使用的化学治疗剂并不限于此。
此类药物组合物可以配制为具有给定组成和必要纯度的冻干制剂或液体制剂。冻干制剂可以含有本领域中使用的合适的药物添加剂。同样地，液体制剂可以包含液体药剂并进一步包含本领域中使用的各种药物添加剂。
药物组合物的组成和浓度可以取决于施用方法而变。按照对于抗原的亲和力，即对于抗原的解离常数(Kd值)，当亲和力较高(Kd值较低)时，本发明的药物组合物中包含的多特异性分子和免疫检查点抑制剂或化学治疗剂，即使在较小的剂量下也可以发挥药物功效。因此，多特异性分子和免疫检查点抑制剂或化学治疗剂的剂量可以基于对于它们的抗原的亲和力程度进行设定。发明的多特异性分子的每一种和免疫检查点抑制剂或化学治疗剂可以施用于人，例如，以大约0.0001至100mg的剂量。预定剂量可以每1至180天一次进行施用，或者可以以适当的间隔以每天两次、三次、四次或更多次进行施用。
用于施用本发明的多特异性分子的方法可以包括例如每三周一次施用以0.001mg/kg至8mg/kg的量的多特异性分子。施用可以每三周一次(q3w)、每周一次(q1w)、每两周一次(q2w)或每四周一次(q4w)执行。
本发明将参考下文给出的实施例进行具体描述。然而，本发明并不限于这些实施例。这些实施例绝不以限制的方式加以解释。
实施例
在下文中，本发明将参考实施例更详细地进行描述。然而，本发明并不限于所述实施例。
除非另有说明，否则下文描述的实施例中与基因操作相关的程序根据由本领域技术人员使用的实验手册中描述的方法，或者按照指导手册使用商购可得的试剂或试剂盒来执行。
实施例1.Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010)和紫杉醇对人鳞状细胞肺癌细胞系的体内组合作用
人鳞状细胞肺癌细胞系NCI-H1703(ATCC)用含有50％ Matrigel(Corning Inc.)的PBS调整至6×107个细胞/mL的浓度，并且以0.1mL的量皮下移植到NSG小鼠(雌性，4至6周龄)中(第0天)。大约1周后(第6至7天)，使用电子数显卡尺随着时间过去测量每一肿瘤的长轴(mm)和短轴(mm)，并且根据下式计算估计肿瘤体积。
估计肿瘤体积(mm3)＝每个个体的平均估计肿瘤体积：
每个个体的估计肿瘤体积(mm3)＝1/2×[肿瘤长轴]×[肿瘤短轴]×[肿瘤短轴]
在第12天时，基于肿瘤体积的分组以n＝5/组进行。通过用CD3/CD28 Dynabeads(Thermo Fisher Scientific Inc.)刺激人PBMC而增殖的T细胞用PBS调整至5×107个细胞/mL的浓度，并且以0.2mL的量移植到每只小鼠的尾静脉内。三至四小时后，将抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010，0.02mg/kg；通过WO2021/200857中所述的方法进行制备)施用到每只小鼠的尾静脉内。紫杉醇(20mg/kg)进行腹膜内施用。施用在第13和20天时进行。肿瘤生长抑制率(％)根据下式进行计算。
肿瘤生长抑制率(％)＝100-(每组的估计肿瘤体积/媒介物对照的估计肿瘤体积×100)
图1(1)显示了NYZ-1010的单一施用、紫杉醇的单一施用、以及NYZ-1010和紫杉醇的组合施用的结果。肿瘤接种后的31天，TGI在接受NYZ-1010的单一施用组中为79.8％，并且在接受紫杉醇的单一施用组中为74.1％，而它在接受NYZ-1010和紫杉醇的组合组中为99.1％，指示了该组合增强抗肿瘤效应。使用作为基线的在第12天时的肿瘤体积的每个个体小鼠在第31天时的肿瘤体积的百分比变化(距离基线的变化(％))根据下文给出的等式进行计算，并且显示于图1(2)中。表1中还描述了每组距离基线的平均变化(％)。观察到通过NYZ-1010和紫杉醇的肿瘤消退的组合效应。
距离基线的变化(％)＝每个个体的(在第31天时的估计肿瘤体积-在第12天时的估计肿瘤体积)/在第12天时的估计肿瘤体积×100
[表1]
化合物 距离基线的变化(％)
NYZ-1010 101.7(n＝5)
紫杉醇 164.0(n＝5)
NYZ-1010+紫杉醇 -91.1(n＝5)
实施例2.Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010)和Nab紫杉醇对人鳞状细胞肺癌细胞系的体内组合作用
人鳞状细胞肺癌细胞系NCI-H1703(ATCC)用含有50％Matrigel(Corning Inc.)的PBS调整至6×107个细胞/mL的浓度，并且以0.1mL的量皮下移植到NSG小鼠(雌性，4至6周龄)中(第0天)。大约1周后(第6至7天)，使用电子数显卡尺随着时间过去测量每一肿瘤的长轴(mm)和短轴(mm)，并且根据下式计算估计肿瘤体积。
估计肿瘤体积(mm3)＝每个个体的平均估计肿瘤体积：
每个个体的估计肿瘤体积(mm3)＝1/2×[肿瘤长轴]×[肿瘤短轴]×[肿瘤短轴]
在第13天时，基于肿瘤体积的分组以n＝5/组进行。通过用CD3/CD28 Dynabeads(Thermo Fisher Scientific Inc.)刺激人PBMC而增殖的T细胞用PBS调整至5×107个细胞/mL的浓度，并且以0.2mL的量移植到每只小鼠的尾静脉内。三至四小时后，将抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010，0.02mg/kg)施用到每只小鼠的尾静脉内。Nab紫杉醇(20mg/kg)进行腹膜内施用。施用在第13和20天时进行。肿瘤生长抑制率(％)根据下式进行计算。
肿瘤生长抑制率(％)＝100-(每组的估计肿瘤体积/媒介物对照的估计肿瘤体积×100)
图2(1)显示了NYZ-1010的单一施用、Nab紫杉醇的单一施用、以及NYZ-1010和Nab紫杉醇的组合施用的结果。肿瘤接种后的38天，TGI在接受NYZ-1010的单一施用组中为55.4％，并且在接受Nab紫杉醇的单一施用组中为86.3％，而它在接受NYZ-1010和Nab紫杉醇的组合组中为100％，指示了该组合增强抗肿瘤效应。特别地，在第38天时在接受NYZ-1010和Nab紫杉醇的组合组中5只小鼠的每一只中都观察到肿瘤的完全消失。使用作为基线的在第13天时的肿瘤体积的每个个体小鼠在第38天时的肿瘤体积的百分比变化(距离基线的变化(％))根据下文给出的等式进行计算，并且显示于图2(2)中。表2中还描述了每组中的距离基线的平均变化(％)。观察到通过NYZ-1010和Nab紫杉醇的肿瘤消退的组合效应。
距离基线的变化(％)＝每个个体的(在第38天时的估计肿瘤体积-在第13天时的估计肿瘤体积)/在第13天时的估计肿瘤体积×100
[表2]
化合物 距离基线的变化(％)
NYZ-1010 389.1(n＝5)
Nab紫杉醇 47.8(n＝5)
NYZ-1010+Nab紫杉醇 -100.0(n＝5)
实施例3.Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010)和抗PD-1抗体派姆单抗对人肺腺癌细胞系的体内组合作用
人肺腺癌细胞系NCI-H522(ATCC)用含有50％Matrigel(Corning Inc.)的PBS调整至5×107个细胞/mL的浓度，并且以0.1mL的量皮下移植到NSG小鼠(雌性，4至6周龄)中(第0天)。大约2周后，使用电子数显卡尺随着时间过去测量每一肿瘤的长轴(mm)和短轴(mm)，并且根据下式计算估计肿瘤体积。
估计肿瘤体积(mm3)＝每个个体的平均估计肿瘤体积：
每个个体的估计肿瘤体积(mm3)＝1/2×[肿瘤长轴]×[肿瘤短轴]×[肿瘤短轴]
在第25天时，基于肿瘤体积的分组以n＝5/组进行。通过用CD3/CD28 Dynabeads(Thermo Fisher Scientific Inc.)刺激人PBMC而增殖的T细胞用PBS调整至5×107个细胞/mL的浓度，并且以0.2mL的量移植到每只小鼠的尾静脉内。三至四小时后，将抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010，0.01mg/kg)施用到每只小鼠的尾静脉内。将派姆单抗(Merck KGaA，10mg/kg)施用到每只小鼠的尾静脉内。施用在第25、32和39天时(NYZ-1010)，或在第28、32、35、39和42天时(派姆单抗)进行。肿瘤生长抑制率(％)根据下式进行计算。
肿瘤生长抑制率(％)＝100-(每组的估计肿瘤体积/媒介物对照的估计肿瘤体积×100)
图3显示了NYZ-1010的单一施用、派姆单抗的单一施用、以及NYZ-1010和派姆单抗的组合施用的结果。肿瘤接种后的53天，TGI在接受NYZ-1010的单一施用组中为50.5％，并且在接受派姆单抗的单一施用组中为3.1％，而它在接受NYZ-1010和派姆单抗的组合组中为79.0％，指示了该组合提供了增强的抗肿瘤效应。
实施例4.人CD3ε敲入小鼠的制备
抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子与人CD3ε结合，但并不与啮齿类动物CD3ε交叉反应。相应地，为了允许在体内评估抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子，制备了人CD3ε敲入小鼠。载体通过将CRISPR-Cas9和待由抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子结合的人CD3ε序列敲入小鼠CD3ε进行制备，并且通过显微注射引入C57BL/6J小鼠的受精卵中。显微注射后，将受精卵移植到雌性小鼠的输卵管或子宫中，并且所得的幼仔的尾部组织进行活组织检查，随后为PCR和序列分析。选择具有目的突变的个体小鼠并且用于后续实验。
实施例5.使用人CD3ε敲入小鼠的Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYF-0016)和抗小鼠PD-1抗体的体内组合效应
使用逆转录病毒载体将编码HLA-A2、NY-ESO和β2M单链三聚体(缩写为NY-SCT)的基因引入通过美国国家癌症研究所(National Cancer Institute)提供的小鼠大肠癌细胞系MC-38中。该细胞在细胞膜上表达HLA-A2/NY-ESO。所得的MC-38NY-SCT细胞用PBS(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corp.)调整至8×106个细胞/mL的浓度，并且以0.1mL的量皮下移植到如实施例4中制备的每只人CD3ε敲入小鼠(雌性，6至7周龄)中(第0天)。从第7天开始，使用电子数显卡尺随着时间过去测量肿瘤的长轴(mm)和短轴(mm)，并且根据下式计算估计肿瘤体积。
估计肿瘤体积(mm3)＝每个个体的平均估计肿瘤体积：
每个个体的估计肿瘤体积(mm3)＝1/2×[肿瘤长轴]×[肿瘤短轴]×[肿瘤短轴]
在第7天时，基于肿瘤体积的分组以n＝5/组进行。将抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYF-0016，5mg/kg；通过WO2021/200857中所述的方法进行制备)施用到每只小鼠的尾静脉内。将抗小鼠PD-1抗体(克隆RMP1-14，Bio X Cell，5mg/kg)施用到每只小鼠的尾静脉内。施用在第7和10天时进行。肿瘤生长抑制率(％)根据下式进行计算。
肿瘤生长抑制率(％)＝100-(每组的估计肿瘤体积/媒介物对照的估计肿瘤体积×100)
图4显示了NYF-0016的单一施用、抗小鼠PD-1抗体的单一施用、以及NYF-0016和抗小鼠PD-1抗体的组合施用的结果。肿瘤接种后的17天，TGI在接受NYF-0016的单一施用组中为31.5％，并且在接受抗小鼠PD-1抗体的单一施用组中为35.3％，而它在接受NYF-0016和抗小鼠PD-1抗体的组合组中为57.5％，指示了该组合提供了增强的抗肿瘤效应。
实施例6.Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010)、抗PD-1抗体派姆单抗和多激酶抑制剂乐伐替尼对人肺腺癌细胞系的体内组合作用
人肺腺癌细胞系NCI-H522(ATCC)用含有50％ Matrigel(Corning Inc.)的PBS调整至5×107个细胞/mL的浓度，并且以0.1mL的量皮下移植到NSG小鼠(雌性，4至6周龄)中(第0天)。大约3周后，使用电子数显卡尺随着时间过去测量每一肿瘤的长轴(mm)和短轴(mm)，并且根据下式计算估计肿瘤体积。
估计肿瘤体积(mm3)＝每个个体的平均估计肿瘤体积：
每个个体的估计肿瘤体积(mm3)＝1/2×[肿瘤长轴]×[肿瘤短轴]×[肿瘤短轴]
在第28天时，基于肿瘤体积的分组以n＝5/组进行。通过用CD3/CD28 Dynabeads(Thermo Fisher Scientific Inc.)刺激人PBMC而增殖的T细胞用PBS调整至5×107个细胞/mL的浓度，并且以0.2mL的量移植到每只小鼠的尾静脉内。三至四小时后，将抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010，0.01mg/kg)施用到每只小鼠的尾静脉内。派姆单抗(Merck KGaA，10mg/kg)进行腹膜内施用，并且乐伐替尼(30mpk)进行经口施用。施用在第28、35和42天时(NYZ-1010)，在第32、39和46天时(派姆单抗)，或者第28至32天每天一次、第35至39天每天一次以及第42至36天每天一次(乐伐替尼)进行。肿瘤生长抑制率(％)根据下式进行计算。
肿瘤生长抑制率(％)＝100-(每组的估计肿瘤体积/媒介物对照的估计肿瘤体积×100)
图72(1)显示了NYZ-1010的单一施用，乐伐替尼和派姆单抗的组合施用，以及NYZ-1010、乐伐替尼和派姆单抗的组合施用的结果。接种后的52天，TGI在接受NYZ-1010的单一施用组中为51.4％，并且在接受乐伐替尼和派姆单抗的组合施用组中为50.6％，而它在接受NYZ-1010、乐伐替尼和派姆单抗的组合组中为84.1％，指示了三种药剂的组合提供了增强的抗肿瘤效应。使用作为基线的在第28天时的肿瘤体积的每个个体小鼠在第52天时的肿瘤体积的百分比变化(距离基线的变化(％))根据下文给出的等式进行计算，并且显示于图72(2)中。表3中还描述了每组距离基线的平均变化(％)。观察到NYZ-1010、乐伐替尼和派姆单抗对肿瘤消退的组合效应。
距离基线的变化(％)＝每个个体的(在第52天时的估计肿瘤体积–在第28天时的估计肿瘤体积)/在第28天时的估计肿瘤体积×100
[表3]
化合物 距离基线的变化(％)
NYZ-1010 68.4(n＝5)
乐伐替尼+派姆单抗 66.3(n＝5)
NYZ-1010+乐伐替尼+派姆单抗 -46.8(n＝5)
实施例7.人CD3ε敲入BALB/C小鼠的制备
将实施例4中制备的C57BL/6J小鼠品系的人CD3ε敲入小鼠与BALB/C品系的小鼠回交，以制备BALB/C品系的人CD3ε敲入小鼠。使所得的幼仔的尾部组织经受PCR和序列分析。选择具有高纯合取代率的个体小鼠，培育且用于后续实验。
实施例8.使用BALB/C品系的人CD3ε敲入小鼠的Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010)和抗小鼠PD-1抗体的体内组合效应
使用逆转录病毒载体将编码HLA-A2、NY-ESO和β2M单链三聚体(缩写为NY-SCT)的基因引入通过ATCC提供的小鼠大肠癌细胞系CT26.WT中。所得的CT26 NY-SCT细胞在细胞膜上表达HLA-A2/NY-ESO。CT26 NY-SCT细胞用PBS(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corp.)调整至1×107个细胞/mL的浓度，并且以0.1mL的量皮下移植到实施例7中制备的BALB/C品系的每只人CD3ε敲入小鼠(雌性，7至9周龄)中(第0天)。从第8天开始，使用电子数显卡尺随着时间过去测量每一肿瘤的长轴(mm)和短轴(mm)，并且根据下式计算估计肿瘤体积。
估计肿瘤体积(mm3)＝每个个体的平均估计肿瘤体积：
每个个体的估计肿瘤体积(mm3)＝1/2×[肿瘤长轴]×[肿瘤短轴]×[肿瘤短轴]
在第8天时，基于肿瘤体积的分组以n＝5至10/组进行。将抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010，5mg/kg)施用到每只小鼠的尾静脉内。抗小鼠PD-1抗体(克隆RMP1-14，Bio X Cell，5mg/kg)进行腹膜内施用。施用在第8天时进行。肿瘤生长抑制率(％)根据下式进行计算。
肿瘤生长抑制率(％)＝100-(每组的估计肿瘤体积/媒介物对照的估计肿瘤体积×100)
图73(1)显示了NYZ-1010的单一施用、抗小鼠PD-1抗体的单一施用、以及NYZ-1010和抗小鼠PD-1抗体的组合施用的结果。肿瘤接种后的21天，TGI在接受NYZ-1010的单一施用组中为70.8％，并且在接受抗小鼠PD-1抗体的单一施用组中为38.0％，而它在接受NYZ-1010和抗小鼠PD-1抗体的组合组中为84.8％，指示了该组合提供了增强的抗肿瘤效应。
如根据图73(2)可见的，在每个单一施用组中，肿瘤残留，并且药物功效是有限的(灰色实线和细虚线)。相比之下，在接受NYZ-1010和抗小鼠PD-1抗体的组合组中，10只小鼠中的3只，观察到0mm3的估计肿瘤体积。这些小鼠维持完全消退(具有实心圆的实线)。具有完全消退的小鼠用CT26 NY-SCT进行再攻击，或将这些细胞移植到没有经受先前肿瘤移植的BALB/C品系的人CD3ε敲入小鼠(在下文中，被称为首次用于实验的小鼠，雌性，7至9周龄)。CT26 NY-SCT细胞用PBS(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corp.)调整至1×107个细胞/mL的浓度，并且以0.1mL的量进行皮下移植(第59天)。在首次用于实验的小鼠中，肿瘤植入并生长(粗虚线)。在具有通过NYZ-1010和抗小鼠PD-1抗体的组合达到的完全消退的小鼠中，肿瘤并未植入，并且维持完全消退(具有实心圆的实线)，指示了已建立针对肿瘤细胞的免疫记忆。
实施例9.Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010)和抗PD-L1抗体度伐利尤单抗对人肺腺癌细胞系的体内组合作用
人肺腺癌细胞系NCI-H522(ATCC)用含有50％ Matrigel(Corning Inc.)的PBS调整至5×107个细胞/mL，并且以0.1mL的量皮下移植到NSG小鼠(雌性，4至6周龄)中(第0天)。大约1周后(第6至7天)，使用电子数显卡尺随着时间过去测量每一肿瘤的长轴(mm)和短轴(mm)，并且根据下式计算估计肿瘤体积。
估计肿瘤体积(mm3)＝每个个体的平均估计肿瘤体积：
每个个体的估计肿瘤体积(mm3)＝1/2×[肿瘤长轴]×[肿瘤短轴]×[肿瘤短轴]
在第24天时，基于肿瘤体积的分组以n＝5/组进行。在第25天时，通过用CD3/CD28Dynabeads(Thermo Fisher Scientific Inc.)刺激人PBMC而增殖的T细胞用PBS调整至5×107个细胞/mL的浓度，并且以0.2mL的量移植到每只小鼠的尾静脉内。三至四小时后，将抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010，0.02mg/kg)施用到每只小鼠的尾静脉内。度伐利尤单抗(AstraZeneca K.K.，10mg/kg)进行腹膜内施用。施用在第25和32天时(NYZ-1010)，或在第28、32、35和39天时(度伐利尤单抗)进行。肿瘤生长抑制率(％)和距离基线的变化(％)根据下文给出的等式进行计算。
肿瘤生长抑制率(％)＝100-(每组的估计肿瘤体积/媒介物对照的估计肿瘤体积×100)
图74(1)显示了NYZ-1010的单一施用、度伐利尤单抗的单一施用、以及NYZ-1010和度伐利尤单抗的组合施用的结果。接种后的49天，TGI在接受NYZ-1010的单一施用组中为67.7％，并且在接受度伐利尤单抗的单一施用组中为-0.8％，而它在接受NYZ-1010和度伐利尤单抗的组合组中为92.5％，指示了这种组合提供了增强的抗肿瘤效应。使用作为基线的在第24天时的肿瘤体积的每个个体小鼠在第49天时的肿瘤体积的百分比变化(距离基线的变化(％))根据下文给出的等式进行计算，并且显示于图74(2)中。表4中还描述了每组中的距离基线的平均变化(％)。观察到NYZ-1010和度伐利尤单抗的肿瘤消退的强组合效应。
距离基线的变化(％)＝每个个体的(在第49天时的估计肿瘤体积-在第24天时的估计肿瘤体积)/在第24天时的估计肿瘤体积×100
[表4]
化合物 距离基线的变化(％)
NYZ-1010 -3.1(n＝5)
度伐利尤单抗 204.7(n＝5)
NYZ-1010+度伐利尤单抗 -76.9(n＝5)
实施例10.使用BALB/C品系的人CD3ε敲入小鼠的Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010)和抗小鼠PD-L1抗体的体内组合效应
实施例8中制备的CT26 NY-SCT细胞用PBS(FUJIFILM Wako Pure ChemicalCorp.)调整至1×107个细胞/mL的浓度，并且以0.1mL的量皮下移植到如实施例7中制备的BALB/C品系的人CD3ε敲入小鼠(雌性，6周龄或以上)(第0天)。从第8天开始，使用电子数显卡尺随着时间过去测量肿瘤的长轴(mm)和短轴(mm)，并且根据下述表达式计算估计肿瘤体积。
估计肿瘤体积(mm3)＝每个个体的平均估计肿瘤体积：
每个个体的估计肿瘤体积(mm3)＝1/2×[肿瘤长轴]×[肿瘤短轴]×[肿瘤短轴]
在第8天时，基于肿瘤体积的分组以n＝5至10/组进行。将抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010，5mg/kg)施用到每只小鼠的尾静脉内。抗小鼠PD-L1抗体(克隆10F.9G2，Bio X Cell，5mg/kg)腹膜内施用。施用在第8天时进行。肿瘤生长抑制率(％)根据下式进行计算。
肿瘤生长抑制率(％)＝100-(每组的估计肿瘤体积/媒介物对照的估计肿瘤体积×100)
图75(1)显示了NYZ-1010的单一施用、抗小鼠PD-L1抗体的单一施用、以及NYZ-1010和抗小鼠PD-L1抗体的组合施用的结果。接种后的21天，TGI在接受NYZ-1010的单一施用组中为68.7％，并且在接受抗小鼠PD-L1抗体的单一施用组中为36.4％，而它在接受NYZ-1010和抗小鼠PD-L1抗体的组合组中为77.4％，指示了该组合提供了增强的抗肿瘤效应。
如根据图75(2)可见的，在每个单一施用组中，肿瘤残留，并且药物功效是有限的(灰色实线和细虚线)。相比之下，在接受NYZ-1010和抗小鼠PD-L1抗体的组合组中，10只小鼠的2只中观察到0mm3的估计肿瘤体积。这些小鼠维持完全消退(具有实心圆的实线)。具有完全消退的小鼠用仅携带逆转录病毒载体的CT26.WT细胞(在下文中，被称为CT26模拟)进行再攻击，或将这些细胞移植到首次用于实验的小鼠(雌性，15至17周龄)中。CT26模拟细胞用PBS(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corp.)调整至1×107个细胞/mL的浓度，并且以0.1mL的量进行皮下移植(第64天)。在首次用于实验的小鼠中，肿瘤植入并生长(粗虚线)。在具有通过NYZ-1010和抗小鼠PD-L1抗体达到的完全消退的小鼠中，肿瘤并未植入，并且维持完全消退(具有实心圆的实线)，指示了已建立针对肿瘤细胞的免疫记忆。
实施例11.使用BALB/C品系的人CD3ε敲入小鼠的Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010)和抗小鼠CTLA-4抗体的体内组合效应
实施例8中制备的CT26 NY-SCT细胞用PBS(FUJIFILM Wako Pure ChemicalCorp.)调整至1×107个细胞/mL的浓度，并且以0.1mL的量皮下移植到实施例7中制备的BALB/C品系的人CD3ε敲入小鼠(雌性，7至9周龄)中(第0天)。从第8天开始，使用电子数显卡尺随着时间过去测量每一肿瘤的长轴(mm)和短轴(mm)，并且根据下式计算估计肿瘤体积。
估计肿瘤体积(mm3)＝每个个体的平均估计肿瘤体积：
每个个体的估计肿瘤体积(mm3)＝1/2×[肿瘤长轴]×[肿瘤短轴]×[肿瘤短轴]
在第8天时，基于肿瘤体积的分组以n＝5至10/组进行。将抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010，5mg/kg)施用到每只小鼠的尾静脉内。抗小鼠CTLA-4抗体(克隆9D9，Bio X Cell，5mg/kg)腹膜内施用。施用在第8天时进行。肿瘤生长抑制率(％)根据下式进行计算。
肿瘤生长抑制率(％)＝100-(每组的估计肿瘤体积/媒介物对照的估计肿瘤体积×100)
图76(1)显示了NYZ-1010的单一施用、抗小鼠CTLA-4抗体的单一施用、以及NYZ-1010和抗小鼠CTLA-4抗体的组合施用的结果。接种后的21天，TGI在接受NYZ-1010的单一施用组中为70.8％，并且在接受抗小鼠CTLA-4抗体的单一施用组中为12.1％，而它在接受NYZ-1010和抗小鼠CTLA-4抗体的组合组中为80.4％，指示了该组合提供了增强的抗肿瘤效应。
如根据图76(2)可见的，在每个单一施用组中，肿瘤残留，并且药物功效是有限的(灰色实线和细虚线)。相比之下，在接受NYZ-1010和抗小鼠CTLA-4抗体的组合组中，10只小鼠中的1只中观察到0mm3的估计肿瘤体积。这只小鼠维持完全消退(具有实心圆的实线)。具有完全消退的小鼠用CT26 NY-SCT细胞进行再攻击，或将这些细胞移植到首次用于实验的小鼠(雌性，7至9周龄)中。CT26 NY-SCT细胞用PBS(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corp.)调整至1×107个细胞/mL的浓度，并且以0.1mL的量进行皮下移植(第59天)。在首次用于实验的小鼠中，肿瘤植入并生长(粗虚线)。在具有通过NYZ-1010和抗小鼠CTLA-4抗体达到的完全消退的小鼠中，肿瘤并未植入，并且维持完全消退(具有实心圆的实线)，指示了已建立针对肿瘤细胞的免疫记忆。
实施例12.使用人CD3ε敲入小鼠的Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010)和抗小鼠TIGIT抗体的体内组合效应
实施例8中制备的CT26 NY-SCT细胞用PBS(FUJIFILM Wako Pure ChemicalCorp.)调整至1×107个细胞/mL的浓度，并且以0.1mL的量皮下移植到实施例7中制备的BALB/C品系的人CD3ε敲入小鼠(雌性，7至9周龄)中(第0天)。从第8天开始，使用电子数显卡尺随着时间过去测量每一肿瘤的长轴(mm)和短轴(mm)，并且根据下式计算估计肿瘤体积。
估计肿瘤体积(mm3)＝每个个体的平均估计肿瘤体积：
每个个体的估计肿瘤体积(mm3)＝1/2×[肿瘤长轴]×[肿瘤短轴]×[肿瘤短轴]
在第8天时，基于肿瘤体积的分组以n＝5至10/组进行。将抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010，5mg/kg)施用到每只小鼠的尾静脉内。抗小鼠TIGIT抗体(克隆1B4，Absolute Antibody，5mg/kg)腹膜内施用。施用在第8天时进行。肿瘤生长抑制率(％)根据下式进行计算。
肿瘤生长抑制率(％)＝100-(每组的估计肿瘤体积/媒介物对照的估计肿瘤体积×100)
图77(1)显示了NYZ-1010的单一施用、抗小鼠TIGIT抗体的单一施用、以及NYZ-1010和抗小鼠TIGIT抗体的组合施用的结果。肿瘤接种后的24天，TGI在接受NYZ-1010的单一施用组中为55.5％，并且在接受抗小鼠TIGIT抗体的单一施用组中为-1.2％，而它在接受NYZ-1010和抗小鼠TIGIT抗体的组合组中为78.3％，指示了该组合提供了增强的抗肿瘤效应。
如根据图77(2)可见的，在每个单一施用组中，肿瘤残留，并且药物功效是有限的(灰色实线和细虚线)。相比之下，在组合组中，10只小鼠中的2只中观察到0mm3的估计肿瘤体积。这些小鼠维持完全消退(具有实心圆的实线)。具有完全消退的小鼠用CT26 NY-SCT细胞进行再攻击，或将这些细胞移植到首次用于实验的小鼠(雌性，15至17周龄)。CT26 NY-SCT细胞用PBS(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corp.)调整至1×107个细胞/mL的浓度，并且以0.1mL的量进行皮下移植(第58天)。在首次用于实验的小鼠中，肿瘤植入并生长(粗虚线)。在具有通过NYZ-1010和抗小鼠TIGIT抗体达到的完全消退的小鼠中，肿瘤并未植入，并且维持完全消退(具有实心圆的实线)，指示已建立了针对肿瘤细胞的免疫记忆。
实施例13.Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010)和卡铂对人鳞状细胞肺癌细胞系的体内组合作用
人鳞状细胞肺癌细胞系NCI-H1703(ATCC)用含有50％ Matrigel(Corning Inc.)的PBS调整至6×107个细胞/mL的浓度，并且以0.1mL的量皮下移植到NSG小鼠(雌性，4至6周龄)中(第0天)。大约1周后(第6至7天)，使用电子数显卡尺随着时间过去测量每一肿瘤的长轴(mm)和短轴(mm)，并且根据下式计算估计肿瘤体积。
估计肿瘤体积(mm3)＝每个个体的平均估计肿瘤体积：
每个个体的估计肿瘤体积(mm3)＝1/2×[肿瘤长轴]×[肿瘤短轴]×[肿瘤短轴]
在第14天时，基于肿瘤体积的分组以n＝5/组进行。通过用CD3/CD28 Dynabeads(Thermo Fisher Scientific Inc.)刺激人PBMC而增殖的T细胞用PBS调整至5×107个细胞/mL的浓度，并且以0.2mL的量移植到每只小鼠的尾静脉内。三至四小时后，将抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010，0.02mg/kg)施用到每只小鼠的尾静脉内。卡铂(Tokyo Chemical Industry Co.，Ltd.，50mg/kg)进行腹膜内施用。施用在第14和21天时进行。肿瘤生长抑制率(％)根据下文给出的等式进行计算。
肿瘤生长抑制率(％)＝100-(每组的估计肿瘤体积/媒介物对照的估计肿瘤体积×100)
图78显示了NYZ-1010的单一施用、卡铂的单一施用、以及NYZ-1010和卡铂的组合施用的结果。接种后的34天，TGI在接受NYZ-1010的单一施用组中为47.2％，并且在接受卡铂的单一施用组中为15.0％，而它在接受NYZ-1010和卡铂的组合组中为61.6％，指示了该组合提供了增强的抗肿瘤效应。
实施例14.Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010)和戈沙妥珠单抗对人食管癌细胞系的体内组合作用
人食管癌细胞系OE-19(DSMZ)用含有50％ Matrigel(Corning Inc.)的PBS调整至5×107个细胞/mL的浓度，并且以0.1mL的量皮下移植到NSG小鼠(雌性，4至6周龄)中(第0天)。大约1周后(第6至7天)，使用电子数显卡尺随着时间过去测量每一肿瘤的长轴(mm)和短轴(mm)，并且根据下式计算估计肿瘤体积。
估计肿瘤体积(mm3)＝每个个体的平均估计肿瘤体积：
每个个体的估计肿瘤体积(mm3)＝1/2×[肿瘤长轴]×[肿瘤短轴]×[肿瘤短轴]
在第6天时，基于肿瘤体积的分组以n＝5/组进行。将戈沙妥珠单抗(25mg/kg)施用到每只小鼠的尾静脉内。在第7天时，通过用CD3/CD28 Dynabeads(Thermo FisherScientific Inc.)刺激人PBMC而增殖的T细胞用PBS调整至5×107个细胞/mL的浓度，并且以0.2mL的量移植到每只小鼠的尾静脉内。三至四小时后，将抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010，0.01mg/kg)施用到每只小鼠的尾静脉内。施用在第7天时(NYZ-1010)或第6和13天时(戈沙妥珠单抗)进行。肿瘤生长抑制率(％)和距离基线的变化(％)根据下文给出的表达式进行计算。
肿瘤生长抑制率(％)＝100-(每组的估计肿瘤体积/媒介物对照的估计肿瘤体积×100)
图79(1)显示了NYZ-1010的单一施用、戈沙妥珠单抗的单一施用、以及NYZ-1010和戈沙妥珠单抗的组合施用的结果。接种后的21天，TGI在接受NYZ-1010的单一施用组中为79.9％，并且在接受戈沙妥珠单抗的单一施用组中为35.4％，而它在接受NYZ-1010和戈沙妥珠单抗的组合组中为96.7％，指示了该组合提供了增强的抗肿瘤效应。使用作为基线的在第6天时的肿瘤体积的每个个体小鼠在第21天时的肿瘤体积的百分比变化(距离基线的变化(％))根据下文给出的等式进行计算，并且显示于图79(2)中。表5中还描述了每组距离基线的平均变化(％)。观察到通过NYZ-1010和戈沙妥珠单抗的肿瘤消退的组合效应。
距离基线的变化(％)＝(在第21天时的估计肿瘤体积–在第6天时的估计肿瘤体积)/在第6天时的估计肿瘤体积×100
[表5]
化合物 距离基线的变化(％)
NYZ-1010 252.7(n＝5)
戈沙妥珠单抗 1027.8(n＝5)
NYZ-1010+戈沙妥珠单抗 -40.9(n＝5)
实施例15.Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010)和多柔比星对人滑膜肉瘤细胞系的体内组合作用
人滑膜肉瘤细胞系SW982(ATCC)用含有50％Matrigel(Corning Inc.)的PBS调整至5×107个细胞/mL的浓度，并且以0.1mL的量皮下移植到NSG小鼠(雌性，4至6周龄)中(第0天)。大约1周后(第6至7天)，使用电子数显卡尺随着时间过去测量肿瘤的长轴(mm)和短轴(mm)，并且根据下式计算估计肿瘤体积。
估计肿瘤体积(mm3)＝每个个体的平均估计肿瘤体积：
每个个体的估计肿瘤体积(mm3)＝1/2×[肿瘤长轴]×[肿瘤短轴]×[肿瘤短轴]
在第40天时，基于肿瘤体积的分组以n＝5/组进行。将多柔比星(Sandoz K.K.，2.5mg/kg)施用到每只小鼠的尾静脉内。在第41天时，通过用CD3/CD28 Dynabeads(ThermoFisher Scientific Inc.)刺激人PBMC而增殖的T细胞用PBS调整至5×107个细胞/mL的浓度，并且以0.2mL的量移植到每只小鼠的尾静脉内。三至四小时后，将抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010，0.01mg/kg)施用到每只小鼠的尾静脉内。施用在第41天时(NYZ-1010)或第40和47天时(多柔比星)进行。肿瘤生长抑制率(％)和距离基线的变化(％)根据下文给出的表达式进行计算。
肿瘤生长抑制率(％)＝100-(每组的估计肿瘤体积/媒介物对照的估计肿瘤体积×100)
图80(1)显示了YZ-1010的单一施用、多柔比星的单一施用、以及NYZ-1010和多柔比星的组合施用的结果。接种后的55天，TGI在接受NYZ-1010的单一施用组中为71.8％，并且在接受多柔比星的单一施用组中为25.6％，而它在接受NYZ-1010和多柔比星的组合组中为90.2％，指示了该组合提供了增强的抗肿瘤效应。使用作为基线的在第40天时的肿瘤体积的每个个体小鼠在第55天时的肿瘤体积的百分比变化(距离基线的变化(％))根据下文给出的等式进行计算，并且显示于图80(2)中。表6中还描述了每组中的距离基线的平均变化(％)。观察到通过NYZ-1010和多柔比星的肿瘤消退的组合效应。
距离基线的变化(％)＝(在第55天时的估计肿瘤体积一在第40天时的估计肿瘤体积)/在第40天时的估计肿瘤体积×100
[表6]
化合物 距离基线的变化(％)
NYZ-1010 37.1(n＝5)
多柔比星 214.1(n＝5)
NYZ-1010+多柔比星 -48.2(n＝5)
实施例16.Fc缀合型抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010)和地西他滨对人鳞状细胞肺癌细胞系的体内组合作用
人鳞状细胞肺癌细胞系NCI-H1703(ATCC)用含有50％Matrigel(Corning Inc.)的PBS调整至6×107个细胞/mL的浓度，并且以0.1mL的量皮下移植到NSG小鼠(雌性，4至6周龄)中(第0天)。大约1周后(第6至7天)，使用电子数显卡尺随着时间过去测量每一肿瘤的长轴(mm)和短轴(mm)，并且根据下式计算估计肿瘤体积。
估计肿瘤体积(mm3)＝每个个体的平均估计肿瘤体积：
每个个体的估计肿瘤体积(mm3)＝1/2×[肿瘤长轴]×[肿瘤短轴]×[肿瘤短轴]
在第7天时，基于肿瘤体积的分组以n＝5/组进行。将地西他滨(Tokyo ChemicalIndustry Co.，Ltd.，3mg/kg)施用到每只小鼠的尾静脉内。在第14天时，通过用CD3/CD28Dynabeads(Thermo Fisher Scientific Inc.)刺激人PBMC而增殖的T细胞用PBS调整至5×107个细胞/mL的浓度，并且以0.2mL的量移植到每只小鼠的尾静脉内。三至四小时后，将抗HLA-A2/NY-ESO-抗CD3双特异性分子(NYZ-1010，0.02mg/kg)施用到每只小鼠的尾静脉内。施用在第14和21天时(NYZ-1010)或在第7天、第9和11天时(地西他滨)进行。肿瘤生长抑制率(％)和距离基线的变化(％)根据下文给出的等式进行计算。
肿瘤生长抑制率(％)＝100-(每组的估计肿瘤体积/媒介物对照的估计肿瘤体积×100)
距离基线的变化(％)＝(在第32天时的估计肿瘤体积-在第7天时的估计肿瘤体积)/在第7天时的估计肿瘤体积×100
图81(1)显示了NYZ-1010的单一施用、地西他滨的单一施用、以及NYZ-1010和地西他滨的组合施用的结果。接种后的32天，TGI在接受NYZ-1010的单一施用组中为68.0％，并且在接受地西他滨的单一施用组中为46.7％，而它在接受NYZ-1010和地西他滨的组合组中为93.0％，指示了该组合提供了增强的抗肿瘤效应。使用作为基线的在第7天时的肿瘤体积的每个个体小鼠在第32天时的肿瘤体积的百分比变化(距离基线的变化(％))根据上文给出的等式进行计算，并且显示于图81(2)中。表7中还描述了每组中的距离基线的平均变化(％)。
[表7]
化合物 距离基线的变化(％)
NYZ-1010 531.3(n＝5)
地西他滨 947.6(n＝5)
NYZ-1010+地西他滨 38.0(n＝5)
工业实用性
通过本发明提供的抗体和另一种药剂的组合允许治疗或预防各种癌症。
序列表自由文本
SEQ ID NO：1：NYA-0001中包含的CDRH1的氨基酸序列
SEQ ID NO：2：NYA-0001中包含的CDRH2的氨基酸序列
SEQ ID NO：3：缺失(2022年3月16日提交的日本专利申请号2022-041253中的SEQID NO：3表示NYA-0001中包含的CDRH3的氨基酸序列)
SEQ ID NO：4：NYA-0001中包含的CDRL1的氨基酸序列
SEQ ID NO：5：NYA-0001中包含的CDRL2的氨基酸序列
SEQ ID NO：6：NYA-0001中包含的CDRL3的氨基酸序列
SEQ ID NO：7：C3E-7085的重链CDRH1的氨基酸序列
SEQ ID NO:8：C3E-7085的重链CDRH2的氨基酸序列
SEQ ID NO:9：C3E-7085的重链CDRH3的氨基酸序列
SEQ ID NO:10：C3E-7085的轻链CDRL1的氨基酸序列
SEQ ID NO:11：缺失(2022年3月16日提交的优先权申请中的SEQ ID NO:11表示C3E-7085的轻链CDRL2的氨基酸序列)
SEQ ID NO:12：C3E-7085的轻链CDRL3的氨基酸序列
SEQ ID NO:13：NYA-0001的重链可变区的氨基酸序列
SEQ ID NO:14：NYA-0001的轻链可变区的氨基酸序列
SEQ ID NO:15：NYA-0082的重链可变区的氨基酸序列
SEQ ID NO:16：NYA-0082的轻链可变区的氨基酸序列
SEQ ID NO:17：NYA-1163的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:18：NYA-2023的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:19：NYA-2027的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:20：NYA-1143的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:21：NYA-2143的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:22：NYA-2035的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:23：NYA-1143-VL01的氨基酸序列
SEQ ID NO:24：NYA-2044的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:25：NYA-2045的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:26：NYA-2047的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:27：NYA-2048的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:28：NYA-2060的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:29：NYA-2061的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:30：NYA-0001的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:31：HC1的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:32：NYF-0016-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:33：NYF-0019-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:34：NYF-0022-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:35：NYF-0023-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:36：NYF-0027-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:37：NYF-0035-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:38：NYF-0044-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:39：NYF-0045-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:40：NYF-0047-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:41：NYF-0048-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:42：NYF-0060-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:43：NYF-0061-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:44：NYA-0001-Fab-HC1-κ缺失的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:45：NYA-0001-LC的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:46：C3E-7034的氨基酸序列
SEQ ID NO:47：C3E-7036的氨基酸序列
SEQ ID NO:48：C3E-7085的氨基酸序列
SEQ ID NO:49：C3E-7088的氨基酸序列
SEQ ID NO:50：C3E-7093的氨基酸序列
SEQ ID NO:51：C3E-7078的氨基酸序列
SEQ ID NO:52：NYF-0014-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:53：NYF-0082-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:54：NYF-0083-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:55：NYZ-0082-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:56：NYZ-0083-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:57：NYZ-1010-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:58：C3E-7085-LC的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:59：C3E-7085scFv的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:60：NYZ-1007-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:61：NYZ-1017-HC2的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:62：C3E-7096的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:63：C3E-7097的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:64：C3E-7098的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:65：C3E-7099的全长氨基酸序列
SEQ ID NO:66：NY-ESO的氨基酸序列
SEQ ID NO:67：HLA-A*0201(GenBank：ASA47534.1)的截短形式的氨基酸序列
SEQ ID NO:68：β2-微球蛋白的氨基酸序列
SEQ ID NO:69：NYA-1143-VH02的氨基酸序列
SEQ ID NO:70：NYA-1143-VH03的氨基酸序列
SEQ ID NO:71：NYA-1154的全长氨基酸序列。

Claims (64)

1.一种用于治疗和/或预防癌症的药物组合物，其包含下述多特异性抗体[i]，所述药物组合物与下述化合物[ii]组合使用：
[i]
多特异性抗体，所述多特异性抗体包含：
与HLA/NY-ESO结合的抗体或其抗原结合片段，其包含：
由通过SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3、或由通过其中在位置6处的氨基酸为N的SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1、或由通过其中在位置7处的氨基酸为W和/或在位置8处的氨基酸为K的SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Asp Asn Asn表示的氨基酸序列(图11中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQID NO:5)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3、或由通过其中在位置2处的氨基酸为A或S的SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
和
与CD3结合的抗体或其抗原结合片段，其包含：
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2、或由通过其中在位置3处的氨基酸为N或S的SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列：图82中的SEQID NO:11)组成的轻链CDRL2、或由通过其中在位置2处的氨基酸为G、Q、N、S或A的Arg AspAsp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列：图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3；
[ii]
抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述多特异性抗体是双特异性抗体。
3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其中与HLA/NY-ESO结合的抗体或其抗原结合片段包含选自下述集合(i)至(v)的CDRH1至CDRH3和CDRL1至CDRL3的一个或两个或更多个集合：
(i)
由通过SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Asp Asn Asn表示的氨基酸序列(图11中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQID NO:5)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(ii)
由通过SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过其中在位置7处的氨基酸为W的SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Asp Asn Asn表示的氨基酸序列(图11中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQID NO:5)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(iii)
由通过SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过其中在位置6处的氨基酸为N的SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Asp Asn Asn表示的氨基酸序列(图11中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQID NO:5)组成的轻链CDRL2，和
由通过其中在位置2处的氨基酸为A的SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(iv)
由通过SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Asp Asn Asn表示的氨基酸序列(图11中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQID NO:5)组成的轻链CDRL2，和
由通过其中在位置2处的氨基酸为S的SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，和
(v)
由通过SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:2表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:3表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过其中在位置7处的氨基酸为W和在位置8处的氨基酸为K的SEQ ID NO:4表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Asp Asn Asn表示的氨基酸序列(图11中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQID NO:5)组成的轻链CDRL2，和
由通过其中在位置2处的氨基酸为A的SEQ ID NO:6表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中与HLA/NY-ESO结合的抗体或其抗原结合片段包含：由与通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置21至140的氨基酸序列、或者通过SEQ ID NO:69或SEQ ID NO:70表示的氨基酸序列具有95％或更高序列同一性的氨基酸序列组成的重链可变区，以及由与通过SEQ ID NO:18或SEQ IDNO:28表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置156至266的氨基酸序列、或者通过SEQ IDNO:23表示的氨基酸序列具有95％或更高序列同一性的氨基酸序列组成的轻链可变区。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的药物组合物，其中与HLA/NY-ESO结合的抗体或其抗原结合片段包含：
由通过SEQ ID NO:13表示的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:15表示的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:17表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:22表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:25表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:26表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:27表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:28表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:29表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，或
由通过SEQ ID NO:71表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区，和
由通过SEQ ID NO:14表示的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:16表示的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:17表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:22表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:25表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:26表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:27表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:28表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:29表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置161至271的氨基酸序列组成的轻链可变区，或
由通过SEQ ID NO:71表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的药物组合物，其中与HLA/NY-ESO结合的抗体或其抗原结合片段包含：
由通过SEQ ID NO:13表示的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:14表示的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:15表示的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:16表示的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列的位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:17表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:17表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:22表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:22表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:25表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:25表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:26表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:26表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:27表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:27表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:28表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:28表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:29表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:29表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置161至271的氨基酸序列组成的轻链可变区，或
由通过SEQ ID NO:71表示的氨基酸序列的对应于位置21至140的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:71表示的氨基酸序列的对应于位置156至266的氨基酸序列组成的轻链可变区。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的药物组合物，其中与HLA/NY-ESO结合的抗体或其抗原结合片段是scFv。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的药物组合物，其中与HLA/NY-ESO结合的抗体或其抗原结合片段是
由通过SEQ ID NO:30表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
包含由通过SEQ ID NO:15表示的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ IDNO:16表示的氨基酸序列组成的轻链可变区的scFv，
由通过SEQ ID NO:20表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:17表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:18表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:19表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:22表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:24表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:25表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:26表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:27表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:28表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:29表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:21表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置21至271的氨基酸序列组成的scFv，或
由通过SEQ ID NO:71表示的氨基酸序列的对应于位置21至266的氨基酸序列组成的scFv。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的药物组合物，其中与CD3结合的抗体或其抗原结合片段包含选自下述集合(i)至(x)的CDRH1至CDRH3和CDRL1至CDRL3的一个或两个或更多个集合：
(i)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(ii)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过其中在位置3处的氨基酸为N的SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(iii)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过其中在位置3处的氨基酸为S的SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(iv)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过其中在位置2处的氨基酸为G的Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(v)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过其中在位置2处的氨基酸为Q的Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(vi)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过其中在位置2处的氨基酸为N的Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(vii)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过其中在位置2处的氨基酸为S的Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(viii)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过其中在位置2处的氨基酸为A的Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3，
(ix)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过其中在位置3处的氨基酸为S的SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过其中在位置2处的氨基酸为N的Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列；图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3
和
(x)
由通过SEQ ID NO:7表示的氨基酸序列组成的重链CDRH1，
由通过其中在位置3处的氨基酸为S的SEQ ID NO:8表示的氨基酸序列组成的重链CDRH2，
由通过SEQ ID NO:9表示的氨基酸序列组成的重链CDRH3，
由通过SEQ ID NO:10表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL1，
由通过其中在位置2处的氨基酸为S的Arg Asp Asp表示的氨基酸序列(图12中从顶部起的第5个序列：图82中的SEQ ID NO:11)组成的轻链CDRL2，和
由通过SEQ ID NO:12表示的氨基酸序列组成的轻链CDRL3。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中
与CD3结合的抗体或其抗原结合片段包含：
由通过SEQ ID NO:46表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:47表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:51表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:48表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:49表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:50表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置272至389的氨基酸序列组成的重链可变区，
由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置277至394的氨基酸序列组成的重链可变区，或
由通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置277至394的氨基酸序列组成的重链可变区，和
由通过SEQ ID NO:46表示的氨基酸序列的对应于位置135至243的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:47表示的氨基酸序列的对应于位置135至241的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:51表示的氨基酸序列的对应于位置135至243的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:48表示的氨基酸序列的对应于位置135至241的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:49表示的氨基酸序列的对应于位置135至243的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:50表示的氨基酸序列的对应于位置135至243的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置405至511的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置410至516的氨基酸序列组成的轻链可变区，或
由通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置410至516的氨基酸序列组成的轻链可变区。
11.根据权利要求8或9所述的药物组合物，其中
与CD3结合的抗体或其抗原结合片段包含：
由通过SEQ ID NO:46表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:46表示的氨基酸序列的对应于位置135至243的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:47表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:47表示的氨基酸序列的对应于位置135至241的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:51表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:51表示的氨基酸序列的对应于位置135至243的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:48表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:48表示的氨基酸序列的对应于位置135至241的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:49表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:49表示的氨基酸序列的对应于位置135至243的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:50表示的氨基酸序列的对应于位置2至119的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:50表示的氨基酸序列的对应于位置135至243的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置272至389的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置405至511的氨基酸序列组成的轻链可变区，
由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置277至394的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置410至516的氨基酸序列组成的轻链可变区，或
由通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置277至394的氨基酸序列组成的重链可变区、以及由通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置410至516的氨基酸序列组成的轻链可变区。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的药物组合物，其中与CD3结合的抗体或其抗原结合片段是scFv。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的药物组合物，其中与CD3结合的抗体或其抗原结合片段是
由通过SEQ ID NO:46表示的氨基酸序列的对应于位置2至243的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:47表示的氨基酸序列的对应于位置2至241的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:51表示的氨基酸序列的对应于位置2至243的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:48表示的氨基酸序列的对应于位置2至241的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:49表示的氨基酸序列的对应于位置2至243的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:50表示的氨基酸序列的对应于位置2至243的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置272至511的氨基酸序列组成的scFv，
由通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置277至516的氨基酸序列组成的scFv，或
由通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置277至516的氨基酸序列组成的scFv。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含：第一多肽，其从N末端朝向C末端按照呈现的次序包含其为scFv的与HLA/NY-ESO结合的抗体或其抗原结合片段、其为scFv的与CD3结合的抗体或其抗原结合片段、以及Fc区(i)；以及包含Fc区(ii)的第二多肽，其中优选地，第一多肽和第二多肽经由Fc区(i)和Fc区(ii)彼此连接。
15.根据权利要求14所述的药物组合物，其中所述第一多肽包含通过SEQ ID NO:32表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:34表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:35表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:36表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:37表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:38表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:39表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:40表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:41表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:42表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:43表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:33表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:52表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:53表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置21至516的氨基酸序列、或通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置21至516的氨基酸序列。
16.根据权利要求14或15所述的药物组合物，其中所述第一多肽包含通过SEQ ID NO:32、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、33、52、53或54表示的氨基酸序列的对应于位置529至745的氨基酸序列，或者通过SEQ ID NO:55或56表示的氨基酸序列的对应于位置534至750的氨基酸序列。
17.根据权利要求14至16中任一项所述的药物组合物，其中所述第一多肽由以下组成：通过SEQ ID NO:32表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ IDNO:34表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:35表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:36表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:37表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:38表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:39表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ IDNO:40表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:41表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:42表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:43表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:33表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:52表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ IDNO:53表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置20至750的氨基酸序列、或通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置20至750的氨基酸序列。
18.根据权利要求14至17中任一项所述的药物组合物，其中所述第二多肽包含通过SEQID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置20至246的氨基酸序列。
19.根据权利要求1至13中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含第一多肽、第二多肽和第三多肽，
所述第一多肽从N末端朝向C末端按照该次序包含其为scFv的与HLA/NY-ESO结合的抗体或其抗原结合片段、其为scFv的与CD3特异性结合的抗体或其抗原结合片段、以及Fc区(i)，
所述第二多肽由包含Fc区(ii)的免疫球蛋白重链组成，和
所述第三多肽由免疫球蛋白轻链组成，其中
优选地，所述第二多肽和所述第三多肽彼此缔合，和
所述第一多肽和所述第二多肽经由其分别的Fc区彼此缔合。
20.根据权利要求19所述的药物组合物，其中所述第二多肽包含通过SEQ ID NO:44表示的氨基酸序列的对应于氨基酸位置20至242的氨基酸序列。
21.根据权利要求19或20所述的药物组合物，其中所述第三多肽包含通过SEQ ID NO:45表示的氨基酸序列。
22.根据权利要求19至21中任一项所述的药物组合物，其中所述第一多肽包含通过SEQID NO:32表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:34表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:35表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:36表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:37表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:38表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:39表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:40表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:41表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:42表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:43表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:33表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:52表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:53表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置21至511的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置21至516的氨基酸序列、或通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置21至516的氨基酸序列。
23.根据权利要求19至22中任一项所述的药物组合物，其中所述第一多肽由以下组成：通过SEQ ID NO:32表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ IDNO:34表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:35表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:36表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:37表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:38表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:39表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ IDNO:40表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:41表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:42表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:43表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:33表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:52表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ IDNO:53表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:54表示的氨基酸序列的对应于位置20至745的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:55表示的氨基酸序列的对应于位置20至750的氨基酸序列、或通过SEQ ID NO:56表示的氨基酸序列的对应于位置20至750的氨基酸序列。
24.根据权利要求9至11中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含：
第一多肽，其从N末端朝向C末端按照该次序包含其为scFv的与HLA/NY-ESO特异性结合的抗体或其抗原结合片段、与CD3结合的抗体的重链可变区和恒定区CH1、以及免疫球蛋白Fc区(i)；
第二多肽，其包含免疫球蛋白铰链区和Fc区(ii)；和
第三多肽，其包含与CD3结合的抗体的轻链，所述轻链由可变区和恒定区组成，其中
优选地，所述第一多肽和所述第二多肽经由Fc区(i)和Fc区(ii)彼此缔合，并且所述第一多肽在抗体重链可变区和恒定区CH1处与所述第三多肽缔合。
25.根据权利要求9至11和24中任一项所述的药物组合物，其中所述第一多肽包含通过SEQ ID NO:57表示的氨基酸序列的对应于位置20至724的氨基酸序列、通过SEQ ID NO:60表示的氨基酸序列的对应于位置20至719的氨基酸序列、或通过SEQ ID NO:61表示的氨基酸序列的对应于位置20至719的氨基酸序列。
26.根据权利要求9至11、24和25中任一项所述的药物组合物，其中所述第二多肽包含通过SEQ ID NO:31表示的氨基酸序列的对应于位置20至246的氨基酸序列。
27.根据权利要求9至11和24至26中任一项所述的药物组合物，其中所述第三多肽包含通过SEQ ID NO:58表示的氨基酸序列的对应于位置21至127的氨基酸序列。
28.根据权利要求9至11和24至27中任一项所述的药物组合物，其中所述第三多肽包含通过SEQ ID NO:58所表示的氨基酸序列的对应于位置21至233的氨基酸序列。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物中包含的一个或两个或更多个多肽的氨基酸序列缺少一个或两个羧基末端氨基酸。
30.根据权利要求1至29中任一项所述的药物组合物，其中所述癌症是选自以下的一个、两个或更多个成员：肾癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、基底细胞癌、结膜癌、口癌、喉癌、咽喉癌、甲状腺癌、肺癌(非小细胞肺癌(腺癌、鳞状细胞癌和大细胞癌)和小细胞肺癌)、乳腺癌、食管癌、胃癌、十二指肠癌、小肠癌、大肠癌、直肠癌、阑尾癌、肛门癌、肝癌、胆囊癌、胆管癌、胰腺癌、肾上腺癌、膀胱癌、前列腺癌、子宫癌、阴道癌、脂肪肉瘤、血管肉瘤、软骨肉瘤、横纹肌肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、未分化多形性肉瘤、粘液纤维肉瘤、恶性周围神经鞘瘤、腹膜后肉瘤、滑膜肉瘤、子宫肉瘤、胃肠道间质瘤、平滑肌肉瘤、上皮样肉瘤、B细胞淋巴瘤、T/NK细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、髓系白血病、淋巴样白血病、骨髓增生性疾病、骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤、睾丸癌和卵巢癌。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物在抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂之后施用。
32.根据权利要求1至30中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物在抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂之前施用。
33.根据权利要求1至30中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物与抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂同时施用。
34.根据权利要求1至30和33中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂。
35.根据权利要求1至34中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物与一种、两种或更多种另外的药剂和/或疗法组合使用。
36.根据权利要求1至35中任一项所述的药物组合物，其中化合物[ii]是抑制免疫检查点分子的化合物。
37.根据权利要求1至36中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫检查点分子选自PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4和TIGIT。
38.根据权利要求1至37中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫检查点分子是PD-1。
39.根据权利要求38所述的药物组合物，其中抑制免疫检查点分子的化合物是纳武单抗或派姆单抗、其抗原结合片段或包含其抗原结合片段的化合物。
40.根据权利要求1至37中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫检查点分子是PD-L1。
41.根据权利要求40所述的药物组合物，其中抑制免疫检查点分子的化合物是阿特珠单抗、度伐利尤单抗或阿维鲁单抗、其抗原结合片段或包含其抗原结合片段的化合物。
42.根据权利要求1至37中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫检查点分子是CTLA-4。
43.根据权利要求42所述的药物组合物，其中抑制免疫检查点分子的化合物是伊匹木单抗、曲美木单抗、斯巴达珠单抗或西米普利单抗、其抗原结合片段或包含其抗原结合片段的化合物。
44.根据权利要求1至37中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫检查点分子是TIGIT。
45.根据权利要求44所述的药物组合物，其中抑制免疫检查点分子的化合物是替瑞利尤单抗或维博利单抗、其抗原结合片段或包含其抗原结合片段的化合物。
46.根据权利要求1至36中任一项所述的药物组合物，其中抑制免疫检查点分子的化合物是派姆单抗、纳武单抗、斯巴达珠单抗、西米普利单抗、阿维鲁单抗、阿特珠单抗、度伐利尤单抗、伊匹木单抗或曲美木单抗。
47.根据权利要求1至39中任一项所述的药物组合物，其中抑制免疫检查点分子的化合物是派姆单抗、派姆单抗的抗原结合片段或包含其抗原结合片段的化合物。
48.根据权利要求1至35中任一项所述的药物组合物，其中所述化合物[ii]是化学治疗剂。
49.根据权利要求1至35和48中任一项所述的药物组合物，其中所述化学治疗剂是微管抑制剂。
50.根据权利要求1至35、48和49中任一项所述的药物组合物，其中所述化学治疗剂是基于紫杉烷的微管抑制剂。
51.根据权利要求1至35和48至50中任一项所述的药物组合物，其中所述化学治疗剂选自紫杉醇、多西他赛、长春新碱、长春碱、长春地辛、艾日布林、长春瑞滨、白蛋白结合型紫杉醇、奥沙利铂、卡铂、顺铂、奈达铂、氮杂胞苷、地西他滨、多柔比星、博来霉素、多柔比星脂质体、异环磷酰胺、环磷酰胺和达卡巴嗪。
52.根据权利要求1至35和48至51中任一项所述的药物组合物，其中所述化学治疗剂是紫杉醇或白蛋白结合型紫杉醇。
53.根据权利要求1至52中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物进一步与多激酶抑制剂组合使用。
54.根据权利要求53所述的药物组合物，其中所述多激酶抑制剂是选自索拉非尼、舒尼替尼、帕唑帕尼、瑞戈非尼和乐伐替尼的一个、两个或更多个成员。
55.根据权利要求53或54所述的药物组合物，其中所述多激酶抑制剂是乐伐替尼。
56.根据权利要求53至55中任一项所述的药物组合物，其中所述化合物[ii]是抑制免疫检查点分子的化合物，优选派姆单抗、派姆单抗的抗原结合片段或包含其抗原结合片段的化合物。
57.根据权利要求53至56中任一项所述的药物组合物，其中抑制免疫检查点分子的化合物是派姆单抗、派姆单抗的抗原结合片段或包含其抗原结合片段的化合物，并且所述多激酶抑制剂是乐伐替尼。
58.根据权利要求1至35和48至52中任一项所述的药物组合物，其中所述化学治疗剂是选自紫杉醇、多西他赛、长春新碱、长春碱、长春地辛、艾日布林、长春瑞滨和白蛋白结合型紫杉醇的基于紫杉烷的微管抑制剂。
59.根据权利要求1至47中任一项所述的[i]多特异性抗体和[ii]抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂，其用于治疗和/或预防癌症。
60.根据权利要求53至57中任一项所述的[i]多特异性抗体和[ii]抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂、以及多激酶抑制剂，其用于治疗和/或预防癌症。
61.根据权利要求1至47中任一项所述的[i]多特异性抗体和[ii]抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂，其用于治疗和/或预防癌症。
62.根据权利要求53至57中任一项所述的[i]多特异性抗体和[ii]抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂、以及多激酶抑制剂用于制备用于治疗和/或预防癌症的药物组合物的用途。
63.一种用于治疗和/或预防癌症的方法，其包括施用根据权利要求1至47中任一项所述的[i]多特异性抗体和[ii]抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂。
64.一种用于治疗和/或预防癌症的方法，其包括施用根据权利要求53至57中任一项所述的[i]多特异性抗体和[ii]抑制免疫检查点分子的化合物或化学治疗剂、以及多激酶抑制剂。
CN202380027811.8A 2022-03-16 2023-03-15 多特异性分子和免疫检查点抑制剂的组合 Pending CN119031932A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2022-041253 2022-03-16
JP2022041253 2022-03-16
PCT/JP2023/010071 WO2023176881A1 (ja) 2022-03-16 2023-03-15 多重特異的分子と免疫チェックポイント阻害剤の組み合わせ

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN119031932A true CN119031932A (zh) 2024-11-26

Family

ID=88023912

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202380027811.8A Pending CN119031932A (zh) 2022-03-16 2023-03-15 多特异性分子和免疫检查点抑制剂的组合

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20250195645A1 (zh)
EP (1) EP4494655A1 (zh)
JP (1) JPWO2023176881A1 (zh)
KR (1) KR20240161968A (zh)
CN (1) CN119031932A (zh)
TW (1) TW202400232A (zh)
WO (1) WO2023176881A1 (zh)

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
DK0585287T3 (da) 1990-07-10 2000-04-17 Cambridge Antibody Tech Fremgangsmåde til fremstilling af specifikke bindingsparelementer
CA2119930C (en) 1991-09-23 2002-10-01 Hendricus R. J. M. Hoogenboom Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
PT1024191E (pt) 1991-12-02 2008-12-22 Medical Res Council Produção de auto-anticorpos a partir de reportórios de segmentos de anticorpo e exibidos em fagos
DE69333823T2 (de) 1992-03-24 2006-05-04 Cambridge Antibody Technology Ltd., Melbourn Verfahren zur herstellung von gliedern von spezifischen bindungspaaren
GB9313509D0 (en) 1993-06-30 1993-08-11 Medical Res Council Chemisynthetic libraries
JPH09506508A (ja) 1993-12-03 1997-06-30 メディカル リサーチ カウンシル 組換え結合タンパク質およびペプチド
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6602684B1 (en) 1998-04-20 2003-08-05 Glycart Biotechnology Ag Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity
KR100856446B1 (ko) 1998-12-23 2008-09-04 화이자 인크. Ｃｔｌａ－４에 대한 인간 단일클론 항체
EP2275540B1 (en) 1999-04-09 2016-03-23 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
JP4093757B2 (ja) 1999-08-24 2008-06-04 メダレックス， インコーポレイテッド ヒトｃｔｌａ−４抗体およびその使用
WO2002031140A1 (fr) 2000-10-06 2002-04-18 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cellules produisant des compositions d'anticorps
CA2607147C (en) 2005-05-09 2018-07-17 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
US8354509B2 (en) 2007-06-18 2013-01-15 Msd Oss B.V. Antibodies to human programmed death receptor PD-1
EP3663318A1 (en) 2008-01-07 2020-06-10 Amgen Inc. Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects
RU2636023C2 (ru) 2008-12-09 2017-11-17 Дженентек, Инк. Антитела к pd-l1 и их применение для усиления функции т-клеток
MX342623B (es) 2009-06-26 2016-10-06 Regeneron Pharma Anticuerpos biespecificos facilmente aislados con formato de inmunoglobulina original.
KR101790767B1 (ko) 2009-11-24 2017-10-26 메디뮨 리미티드 Ｂ７―ｈ１에 대한 표적화된 결합 물질
ES2899956T3 (es) 2011-11-04 2022-03-15 Zymeworks Inc Diseño de anticuerpo heterodimérico estable con mutaciones en el dominio Fc
HUE051954T2 (hu) 2011-11-28 2021-03-29 Merck Patent Gmbh ANTI-PD-L1 ellenanyagok és alkalmazásaik
WO2013147153A1 (ja) 2012-03-29 2013-10-03 株式会社未来創薬研究所 抗ｌａｍｐ５抗体およびその利用
US10738132B2 (en) 2013-01-14 2020-08-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
SG11201609638RA (en) 2014-06-19 2016-12-29 Regeneron Pharma Non-human animals having a humanized programmed cell death 1 gene
CR20170060A (es) 2014-08-19 2017-04-18 Merck Sharp & Dohme Anticuerpos anti tigit
IL319106A (en) 2015-09-25 2025-04-01 Genentech Inc Anti-TIGIT antibodies and methods of use
TW202504917A (zh) * 2018-06-21 2025-02-01 美商再生元醫藥公司 用雙特異性抗CD3xMUC16抗體及抗PD-1抗體治療癌症之方法
TWI865753B (zh) 2020-03-30 2024-12-11 國立大學法人三重大學 雙特異性抗體及其製造方法
JP6808261B1 (ja) 2020-08-31 2021-01-06 日本ノーディッグテクノロジー株式会社 更生管の高さ調整装置及び既設管の更生方法

Also Published As

Publication number Publication date
KR20240161968A (ko) 2024-11-13
EP4494655A1 (en) 2025-01-22
WO2023176881A1 (ja) 2023-09-21
TW202400232A (zh) 2024-01-01
JPWO2023176881A1 (zh) 2023-09-21
US20250195645A1 (en) 2025-06-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113227146B (zh) 密蛋白18.2结合部分和其用途
JP7296367B2 (ja) 二重特異性組換えタンパク質およびその応用
CN112424441B (zh) 抗cd24组合物及其用途
TW202016135A (zh) Ｐｓｍａ結合劑及其用途
CN113286634A (zh) 对gucy2c特异性的抗体及其用途
WO2022100590A1 (zh) 针对密蛋白18a2的adcc增强型人源化抗体及其应用
CN112566937A (zh) 对cd3特异性的抗体及其用途
WO2022100613A1 (zh) 针对密蛋白18a2和cd3的双特异性抗体及其应用
JP2023524102A (ja) Ａｂｃｂ５に特異的な抗体およびその使用
JP2024528682A (ja) 薬物組成物及び用途
CA3121945A1 (en) Rank antagonists and uses therefor
TW202246323A (zh) 抗ｃｌａｕｄｉｎ—６之抗體及其用途
WO2023143535A1 (zh) 一种靶向il-18bp的抗体及其应用
AU2022337286A1 (en) Bispecific binding proteins that bind cd137 and a tumor associated antigen
US20230134183A1 (en) Cldn18.2-targeting antibody, bispecific antibody and use thereof
WO2022223048A1 (en) Tim-3-targetting antibodies and uses thereof
US20250195645A1 (en) Combination of multispecific molecule and immune checkpoint inhibitor
CN114630679A (zh) 抗garp抗体和免疫调节剂的组合
TW202305005A (zh) 抗ｓｉｇｌｅｃ組合物及其用途
CN118234511A (zh) 与cd137和肿瘤相关抗原结合的双特异性结合蛋白
HK40060091A (zh) 對gucy2c特異性的抗體及其用途
EA047760B1 (ru) Группы, связывающие клаудин 18.2, и их использование
HK40046552A (zh) 對cd3特異性的抗體及其用途
HK1210186A1 (zh) 抗h7cr抗体

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination