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KR20170125977A - 응고 인자 및 다중특이적 항체의 조합 요법 - Google Patents

응고 인자 및 다중특이적 항체의 조합 요법 Download PDF

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KR20170125977A
KR20170125977A KR1020177029835A KR20177029835A KR20170125977A KR 20170125977 A KR20170125977 A KR 20170125977A KR 1020177029835 A KR1020177029835 A KR 1020177029835A KR 20177029835 A KR20177029835 A KR 20177029835A KR 20170125977 A KR20170125977 A KR 20170125977A
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에프. 호프만-라 로슈 아게
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Abstract

본 발명은 특정한 혈액 응고(응혈) 인자를 항체와 조합하여 적용하는 것을 포함하는, 출혈성 질환 환자의 치료법에 관한 것이다.

Description

응고 인자 및 다중특이적 항체의 조합 요법
본 발명은 특정한 혈액 응고(응혈) 인자를 항체와 조합하여 적용하는 것을 포함하는, 출혈성 질환 환자의 치료법에 관한 것이다.
응고 시스템
임의의 더 큰 유기체는 산소 및 영양소를 다른 기관에 전달하고 이산화탄소 및 노폐물을 제거하는 혈액 순환 시스템을 보유한다. 그러나 혈액 순환 시스템이 기능을 하기 위해서는, 혈관 손상시 신속하고 효과적으로 폐쇄되어야 한다. 이 기능은 혈액이 혈소판 응집체 및 섬유소 겔을 형성하도록 하여 혈관 손상을 막을 수 있는 복합 기전인 혈액 응고 시스템에 의해 충족된다.
혈액 응고 시스템에 포함된 하나의 기전은 세린 프로테아제의 일종인 응고 인자 캐스케이드로, 이는 순차적으로 활성화되고 궁극적으로 혈액 응고 시스템의 중추 효소인 트롬빈 형성을 야기하게 된다. 트롬빈은 섬유소원을 섬유소로 분열시키고, 떨어져 나간 것을 섬유소 섬유로 중합하여 섬유소 응괴를 형성할 수 있다. 트롬빈은 또한 트롬빈 자체 생성을 촉진하고 교차 결합하여 섬유소 응괴를 안정화하는 트랜스글루타미나제인 FXIII을 활성화하는 활성화 공인자(FV 및 FVIII)이고, 또한 혈액 혈소판의 강력한 활성제이다.
특정한 공인자(FVa 및 FVIIIa, 각각)가 이들의 활성 형태로 존재할 때, 트롬빈 형성에 앞서 응고 인자 캐스케이드 2 단계에서는 매우 가속화된 효소(FXa 및 FIXa)를 포함한다. 전술된 바와 같이, 이들 공인자는 혈장의 억제력을 초과하기에 충분한 양으로 순환할 수 있게 될 때, 트롬빈에 의해 활성화된다(도 1 참조).
출혈
출혈은 응고 캐스케이드의 활성화가 불충분한 경우에 가장 심각하고 중요한 징후 중 하나이며 국소 부위로부터 발생하거나 전신에서 발생할 수 있다. 국소화된 출혈은 병변과 관련될 수 있고 결함이 있는 지혈 기전에 의해 추가로 복잡하게 될 수 있다. 응고는 출혈성 질환에서 불충분하고, 선천성 응고 질환, 후천성 응고 질환, 또는 외상에 의해 유도된 출혈 상태에 의해 야기될 수 있다. 임의의 응고 인자의 선천성 또는 후천성 결핍은 출혈 경향과 관련될 수 있다.
혈액 응고 인자 결핍
응고 인자 결핍은 출혈 문제를 야기할 수 있다. 이러한 결핍은 혈액 희석, 즉, 응고 인자를 함유하지 않는 수용액의 투입 또는 적은 혈소판 수 또는 증가된 응고 활성 및 인자 소모로 인한 혈소판 및/또는 응고 인자의 손실에 기인할 수 있다.
응고 인자 결핍의 또 하나의 이유는 비타민 K 길항제(쿠마딘 또는 관련 화합물)의 적용 때문일 수 있다. 비타민 K 길항제는 응고 인자 FVII, FX, FII 및 FIX의 감마 카복실화를 억제하고, 이들 인자를 응고 과정 동안 비효율적으로 만든다.
응고 인자 결핍의 또 하나의 이유는 선천성 유전적 돌연변이 때문일 수 있고, 이는 기능적으로 결함이 있거나 약화되어 특정한 응고 인자를 생성하지 않는다. 몸에서 대부분의 유전자는 2개 카피(부 및 모 유전자)에서 이용할 수 있다는 사실로 인해, 유전자를 암호화하는 응고 인자의 돌연변이는, 응고 인자의 50% 활성이 전형적으로 환자를 적절하게 지혈하기에 여전히 충분하므로 심각한 출혈 표현형을 야기하지 않는다. 따라서, 보통 선천성 응고 인자 결핍은 2가지 예외, 즉, A형 혈우병 및 B형 혈우병을 제외하고 매우 희귀하다.
A형 및 B형 혈우병
응고 인자 FIX 및 FVIII은 둘 다 X 염색체에서 암호화된다. 남성은 오직 1개의 X 염색체를 갖는다. 따라서, 남성의 이 유전자에서 유전적 반복이 없으므로, FVIII 또는 FIX 유전자에서 돌연변이는 FVIII 또는 FIX 남성에서 출혈성 질환 표현형을 야기할 수 있다.
A형 혈우병(FVIII 결핍)의 유병률은 5,000명의 정상으로 태어난 남성 중 약 1명, 또는 10,000명의 정상 출산마다 1명이다. 인종 차이는 보고되지 않았고, 2012년에 다양한 지역에서 등록된 환자의 수는 일본에서 4,627명, 북미에서 17,482명, 5개 주요 유럽 연합(영국, 프랑스, 독일, 이탈리아 및 스페인)에서 18,461명을 포함하였다.
주요 출혈 부위는 관절내, 근육내, 피하, 구내, 두개내, 위장관내 및 비강내이다. 반복된 관절내 출혈은 A형 혈우병 환자의 건강과 관련된 삶의 질을 감소시키는 주요 인자이므로 관절증 및 보행 장애가 있는 혈우병성 관절증으로 진행될 수 있고, 관절 교체 수술이 필요할 수 있다.
A형 혈우병의 중증도는 혈액에서 내생성 FVIII 활성에 따라 분류된다. FVIII 활성이 1% 미만인 환자들은 질병이 심각하고, FVIII 활성이 1% 내지 5%인 환자는 질병이 중간 정도이고, FVIII 활성이 5% 초과 내지 40% 미만인 환자는 질병이 가볍다. 혈우병이 심각한 환자는 엄격한 FVIII 예방 양생법을 준수하지 않거나 중간 정도 또는 가벼운 질병의 환자들보다 더욱 빈번하게 자연 출혈의 빈도(30 내지 40의 연간 출혈률)가 높아, 1개월에 수차례 출혈 에피소드를 경험하는 FVIII 생성물에 접근하지 않는다.
후천성 혈우병: 후천성 혈우병은 희귀하지만 혈장 응고 인자, 가장 빈번한 인자 VIII(FVIII)이고 잠재적으로 또한 폰 빌레브란트 인자(인자 IX, V, XI, XII 및 XIII에 대한 자가항체(억제제)의 개발에 의해 야기된 잠재적으로 생명을 위협하는 출혈성 질환이다.
응고 인자 결핍의 치료법
응고 인자 결핍의 치료법은 근본적인 질환에 따라 주로 달라진다.
희석 응고 장애에서 모든 응고 인자는 손실된다. 따라서, 보통 환자들은 구조 단백질 섬유소원도 포함하여 모든 응고 인자를 함유하는, 신선하게 동결된 혈장으로 치료된다.
비타민 K 길항제 효과로 인한 출혈은 전형적으로 농축된 비타민 k 의존적 응고 인자 FII, FVII, FX 및 FIX로 치료된다. 이들 농축물을 프로트롬빈 복합 농축물이라 부른다.
단일 인자 결핍은 전형적으로 개별 인자의 적용으로, 예를 들어, A형 혈우형에서는 FVIII 농축물, B형 혈우병에서는 FIX 농축물, FVII 결핍에서 FVII 농축물 등으로 치료된다.
프로트롬빈 복합 농축물을 사용한 치료법은 전형적으로 A형 혈우병 환자에서 응고를 개선하지 않으므로, 이들은 인자 FII, FVII, FX 및 FIX(이들 환자는 FVIII이 부족하기 때문에)에서 정상 농도를 갖는다. 또한, 프로트롬빈 복합 농축물의 사용을 위한 적응증은 비타민 k 의존 인자의 응고 인자 결핍의 역전으로 제한된다.
트롬빈 생성시 단일 응고 인자 활성 효과에 대한 분석은 응고 인자 활성이 대부분 인자에서 약 20% 미만일 때 트롬빈 생성을 손상케 한다는 것을 나타내고, 20 내지 100% 응혈 인자 수준에서 트롬빈 생성시 매우 작은 효과가 발견된다(문헌[Al Dieri R, et al Thromb Haemost. 2002 Oct;88(4):576-82]의 도 1 참조).
응고 인자를 사용하는 응혈촉진성 요법의 영향
혈액 희석에 의해 야기된 출혈은 전형적으로 수술중 또는 수술후, 또는 외상성 출혈 후 발생하는 비교적 희귀한 사건이다. 이러한 상황에서, 환자들은 전형적으로 외과적으로 또는 집중 치료실에서 치료되고, 이때 혈장, 응고 인자 및 다른 약물의 투입이 정기적으로 수행된다.
비타민 k 길항제에 의해 야기된 출혈 또한 비교적 희귀하고 보통 비타민 K 길항제를 일시 중지하거나 비타민 K의 적용에 의해 관리될 수 있다.
그에 반해서, A형 혈우병 환자에서, 출혈성 질환은 만성 질환이므로 종종 예방 요법이 수행된다. 예방 치료 동안 단지 8 내지 19 시간의 FVIII의 짧은 반감기로 인해, 주당 3회 i.v. 투입이 필요하고, 이는 환자에게 번거롭고 삶의 질을 떨어뜨린다. 이러한 i.v. 적용은 특히 A형 혈우병 어린이에게서 번거롭고, 성인과 비교하여 어린이에게서 크고 작은 손상이 매우 자주 발생하기 때문에 예방 치료가 많이 필요하다.
A형 혈우병 환자에게 FVIII으로 행하는 보충 요법의 또 하나의 문제점은, FVIII이 심각한 A형 혈우병 환자에서 외부 단백질이고, 환자의 30% 이하의 상당한 비율이 인자 FVIII에 대한 항체("억제제")를 형성하고, 많은 환자에서 FVIII으로 행하는 요법이 불가능할 수 있다는 점이다(그 이유는, 투입된 FVIII이 이의 항-FVIII 항체에 의해 이들 환자에서 빠르게 비활성화되기 때문이다).
A형 혈우병 환자에서 응고 질환을 치료하기 위한 특정한 치료 전략, 및 억제제, 즉, 활성화된 프로트롬빈 복합 농축물(aPCC, 예를 들어 백스터(Baxter)의 페이바(FEIBA, 등록상표)) 또는 높은 수준의 활성화된 FVIIa(노보 노르디스크(Novo Nordisk)의 노보세븐(Novoseven, 등록상표))의 적용이 존재한다. 2가지 전략은 단점이 있다. 활성화된 응고 인자의 적용으로 인해, 2가지 시약은 혈전 합병증을 야기할 수 있다(예를 들어, 문헌[Baudo et al, Blood 120(2012) 39-46]은 rVIIa 또는 aPCC로 치료된 후천성 혈우병 환자에서 혈전증 비율을 3.6%로 보고함). 또한, 문헌[Bui et al, J Thorac Cardiovasc Surg. 124(2002) 852-854] , 문헌[Chalwin et al., Eur J Cardiothorac Surg. 34(2008) 685-686], 및 문헌[Aledort., J Thromb Haemost. 2(2004) 1700-1708]을 참조한다.
또한, 상기 약제는 FVIII을 함유하지 않고 손실 인자 FVIII 활성을 대체하지 않으므로, 불안정한 지혈 효과를 야기할 수 있다. rFVIIa 생성물은 짧은 혈액 반감기를 가지므로 2 내지 3 시간마다 i.v. 투여가 필요하다. 활성화된 PCC는 출혈이 멈출 때까지 약 12시간 마다 적용된다.
항-인자 IXa /X 다중특이적 항체(" FVIII 모방 항체")
A형 혈우병을 위해 언급된 요법의 한계를 극복하기 위해, FVIII의 기능을 모방한 항-인자 IXa/X 이중특이적 항체가 개발되었다. 이들 항체는 이중특이적이고 FIX/FIXa 결합 부위뿐만 아니라 FX 결합 부위를 함유한다. 이 이중특이적 결합에 의해, 항체는 FIXa 및 FX의 회합을 야기하여, FVIII의 부재시 FIXa의 촉매 효능을 상당히 증가시킨다.
항-인자 IXa/X 다중특이적 항체의 이중특이적 예는 예를 들어 US 2013/0330345에 기재되어 있고, 이는 FIXa의 효소 활성을 5700배 증가시키고, 이는 약 10% 가속시키고, 혈우병이 없는 개인에서 FVIII의 정상 활성에 달한다(도 3 참조)(문헌[Fay PJ. Activation of factor VIII and mechanisms of cofactor action. Blood Rev. 2004 Mar;18(1):1-15]).
A형 혈우병 환자에서 억제제 유무에 따라 항-인자 IXa/X 이중특이적 항체(ACE910)를 사용하여 수행된 임상 및 전임상 연구에서(문헌[A. Muto, et al , Blood, 124(2014) 3165-3171] 참조), 이 전략은 출혈 문제를 예방하는데 매우 효과적인 것으로 볼 수 있다.
A형 혈우병을 치료하는데 상기 항체의 사용은 FVIII의 사용과 비교하여 3가지 뚜렷한 장점이 있다.
항체는 7주의 긴 반감기를 갖고, 이는 FVIII의 반감기와 비교하여 약 40 내지 50 시간 더 길다. 이는 FVIII을 위해 필요한 주당 3회와 비교하여 1개월당 오직 2회 적용으로 예방 치료를 수행하도록 한다.
항체는 s.c. 주사로 제공될 수 있고, 이는 FVIII의 적용을 위해 필요한 i.v. 주사와 비교하여 환자가 사용하기에 훨씬 쉽고 덜 번거롭다. 이는 FVIII 투입 대신에 이들 항체로 치료될 어린이에게 특히 해당된다.
ACE910 및 유사한 항체의 적용은 FVIII에 대한 억제제 형성을 야기하지 않는다.
임상 연구에서 항-인자 IXa/X 이중특이적 항체 ACE910의 뛰어난 효능에 의해 입증된 바와 같이(문헌[Abstracts 56th ASH Annual Meeting Program and Abstracts 691 Safety and Prophylactic Efficacy Profiles of ACE910, a Humanized Bispecific Antibody Mimicking the FVIII Cofactor Function, in Japanese Hemaphilia A Patients Both without and with FVIII Inhibitors]), FIX의 효소 활성을 가속화하는데 항-인자 IXa/X 이중특이적 항체의 활성은 A형 혈우병 환자에서 이 약물의 예방 용도에 충분하다.
전술된 바와 같이, FVIIIa의 부재하에 항-인자 IXa/X 이중특이적 항체의 존재에 의한 FIXa 활성은 FIXa 단독의 활성에 비해 약 5700배 가속되지만, FVIIIa의 존재하에 FIXa 활성에 비해 약 90% 더 약하다. 항-인자 IXa/X 이중특이적 항체에 의한 FIX 활성의 이러한 중간 가속화는 장기간 예방 치료에서 유리하므로, 활성화된 프로트롬빈 복합 농축물 또는 고용량의 활성화된 FVII의 사용과 비교하여 더 낮은 혈전혈성 활성을 야기할 수 있을 가능성이 크다.
미해결 과제
FVIII 모방 항체를 사용한 요법은 A형 혈우병 환자의 예방 치료처럼 사용하는데 효과적으로 보였지만, 특정한 환자에게 이러한 항체가 단독으로 제공된 것보다 높은 응혈촉진 활성이 바람직할 수 있다고 상상할 수 있다. 이는 예를 들어 외상 후 또는 큰 수술 동안과 같은 경우일 수 있다.
한가지 선택사항은 FVIII 모방 항체의 농도를 증가시키는 것일 수 있다. 그러나, 항-인자 IXa/X 이중특이적 항체 ACE910의 훨씬 증가된 농도는 건강한 개인의 FVIIIa 활성이 달성되는 바와 동일한 FIXa 활성을 야기하지 않는다는 것을 나타내었다.
분명히, 이러한 상황에서 FVIII을 적용하는 것을 상상할 수 있다. 이는 FVIII 억제제가 환자에서 작동하지 않을 수 있으므로, 투입된 FVIII을 신속하게 비활성화할 수 있다. 억제제가 없는 환자는 억제제 형성의 위험에 노출될 수 있다.
또 하나의 전략은 또한 활성화된 프로트롬빈 복합 농축물 또는 활성화된 FVII를 적용하도록 할 수 있다. 이는 환자를 이러한 화합물과 관련된 증가된 혈전증 위험에 다시 노출시킬 수 있다.
응고 인자 결핍의 치료법은 보통 손실 응고 인자의 대체에 기초한다. 이 치료법은, 모든 인자가 출혈 및 혈액 희석으로 인해 손실되는 경우, 환자는 전형적으로 신선하게 동결된 혈장(FFP)을 사용하여 모든 인자를 수용하는 걸 의미한다. 비타민 K 의존 인자가 항-비타민 K 요법의 문제로 인해 손실되는 경우, 비타민 의존 인자는 프로트롬빈 복합 농축물을 사용하여 대체된다. FVIII이 손실되는 경우(즉, A형 혈우병에서), FVIII이 투입되고, FIX가 손실되는 경우(즉, B형 혈우병에서), FIX가 주어진다.
A형 혈우병 억제제는 FVIII에 대한 항체가 투입된 인자를 신속하게 비활성화할 수 있다는 사실로 인해 인자 VIII을 대체하도록 하지 않고, 또한 상기 투입은 이의 면역 반응으로 인해 환자에서 억제제 수준의 증가를 야기할 수 있다는 문제가 있다.
여기에서 전형적으로 활성화된 응고 인자는 투입된다(활성화된 프로트롬빈 복합 농축물 또는 다량의 활성화된 FV(ii). 이러한 활성화된 인자는 주요한 공동인자 FVIII이 없어도 응고 시스템 활성화를 회복시킨다. 그러나, 이러한 약물은 상당한 혈전증 위험이 따르고 항상 예측할 수 있고 지속된 지혈 반응을 제공하지 않는다는 점에서 또한 한계가 있다.
FVIII 모방 항체는 A형 혈우병 환자에서 억제제 유무에 따른 잠재적인 응고 활성화를 회복시키는 새로운 전략이다. 이러한 새로운 약물은 FVIII의 효과를 모방하고 FVIII이 없는 상황과 비교하여 FIX의 활성을 약 5,700배 증가시킨다. 그러나, FIXa의 활성은 정상 수준의 FVIIIa를 갖는 생리 활성의 약 10%에 도달한다. FIXa 활성의 이 중간 가속화는 혈전증 위험을 증가시키지 않으면서 지혈 반응에 충분하므로 A형 혈우병 환자의 예방 치료에 최적일 것이다.
그러나, 여전히 특정한 상황에서, 예를 들어 외상 후 또는 큰 수술 동안 FVIII 모방 항체의 응혈촉진 활성을 추가로 가속화할 필요가 있다.
본 발명은 A형 혈우병의 치료에 사용하기 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)를 제공하고, 이때 항체는 응고 인자 IX와 조합하여 사용된다.
본 발명은 A형 혈우병의 치료에 사용하기 위한 응고 인자 IX를 제공하고, 이때 응고 인자 IX는 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)와 조합하여 사용된다.
본 발명은 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)를 제공하고, 이때 항체는 응고 인자 IX와 조합하여 사용된다.
본 발명은 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 응고 인자 IX를 제공하고, 이때 응고 인자 IX는 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)와 조합하여 사용된다.
본 발명은 A형 혈우병의 치료에 사용하기 위한,
(i) 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함), 및
(ii) 응고 인자 IX
의 조합물을 제공한다.
본 발명은 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한,
(i) 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함), 및
(ii) 응고 인자 IX
의 조합물을 제공한다.
본 발명은 A형 혈우병의 치료용 약제의 제조를 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)의 용도를 제공하고, 이때 응고 인자 IX와 조합하여 치료한다.
본 발명은 A형 혈우병의 치료용 약제의 제조를 위한 응고 인자 IX의 용도를 제공하고, 이때 응고 인자 IX는 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)와 조합하여 사용된다.
본 발명은 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료용 약제의 제조를 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)의 용도를 제공하고, 이때 응고 인자 IX와 조합하여 치료한다.
본 발명은 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료용 약제의 제조를 위한 응고 인자 IX의 용도를 제공하고, 이때 응고 인자 IX는 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)와 조합하여 사용된다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 환자는 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있거나, 응고 인자 VIII의 선천성 또는 후천성 결핍을 앓고 있다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 상기 결핍은 항체, 다른 억제제, 소모 또는 희석에 얻게 된다.
본 발명은,
(a) 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
(b) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
(c) 트롬빈 생성/형성을 가속화하는데 사용하고/하거나;
(d) 트롬빈 생성/형성을 증가시키고 가속화하는데 사용하고/하거나;
(e) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성/형성을 가속화하는데 사용하고/하거나;
(f) 혈액 응고를 향상시키는데 사용하고/하거나;
(g) 섬유소 응괴 형성을 향상시키는데 사용하고/하거나;
(h) 출혈, 출혈을 동반하는 질병, 출혈에 의해 야기된 질병 등을 예방하고/하거나 치료하는,
조합물, 항체 또는 용도를 제공한다.
본 발명은 (a) 증가된 출혈 위험이 존재하는 경우, (b) 수술 또는 다른 외과 과정 동안, 및/또는 (c) 혈관 손상 후, 조합물, 항체 또는 용도를 제공한다.
본 발명의 하나의 실시양태는 또한 (a) 응고 인자 II, (b) 응고 인자 X, (c) 응고 인자 II 및 X, 또는 (d) 응고 인자 II, X 및 VII이 조합하여 사용된, 전술된 조합물, 항체 또는 용도이다.
본 발명의 하나의 실시양태는 응고 인자 IX가 프로트롬빈 복합 농축물(PCC)에 포함된, 전술된 조합물, 항체 또는 용도이다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 상기 프로트롬빈 복합 농축물은 FIX, FII 및 FX를 포함한다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 상기 프로트롬빈 복합 농축물은 FIX, FII, FX 및 FVII를 포함한다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 전술된 항체는 이중특이적이고, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위는 서열번호 105, 106 및 107 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(Q499의 H 쇄 CDR), 및 서열번호 156, 157 및 158 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(L404의 L 쇄 CDR)을 포함하고, 제 2 항원 결합 부위는 서열번호 126, 127 및 128 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(J327의 H 쇄 CDR), 및 서열번호 156, 157 및 158 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(L404의 L 쇄 CDR)을 포함한다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 전술된 항체는 a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, 및 c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)이다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 다중특이적 항체는 혈액 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 혈액 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위를 포함하는 제 1 폴리펩티드, 및 혈액 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 혈액 응고 인자 IX에 결합하는 제 3 항원 결합 부위를 포함하는 제 3 폴리펩티드, 뿐만 아니라 혈액 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 제 2 폴리펩티드, 및 혈액 응고 인자 X에 결합하는 제 4 항원 결합 부위를 포함하는 제 4 폴리펩티드를 포함한다. 하나의 실시양태에서, 상기 다중특이적 항체는 제 1 폴리펩티드 내지 제 4 폴리펩티드를 포함하고, 이때 제 1 폴리펩티드 및 제 3 폴리펩티드는 각각 혈액 응고 인자 IX 또는 활성화된 혈액 응고 인자 IX 각각에 대한 항체의 H 쇄 또는 L 쇄의 항원 결합 부위를 포함하고; 제 2 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드는 각각 혈액 응고 인자 X 각각에 대한 항체의 H 쇄 또는 L 쇄의 항원 결합 부위를 포함한다.
놀랍게도, 본 발명자들은 생리 수준에 따라 응고 인자 IX(단독으로, 또는 X 및/또는 II와 같은, 예를 들어 또한 PCC에 포함된 다른 응고 인자와 조합하여)를 증가시키는 것이 FVIII 모방 항체로 치료된 A형 혈우병 환자의 트롬빈 생성을 상당시 증가시킬 수 있고, 따라서 A형 혈우병의 치료에 유용하다는 것을 밝혔다. 생리 수준에 따라 FIX 수준을 증가시키는 것이 특히 FVIII 결핍 및 A형 혈우병 샘플에서 트롬빈 생성을 증가시킬 수 있다는 것을 예상할 수 없었기에 놀라운 일이다(FIX는 지금까지 FIX 결핍 혈장/B형 혈우병을 앓고 있는 환자에서 트롬빈 생성을 증가시키는 것으로만 알려졌기 때문이다).
트롬빈 생성을 강화하는 것은 응고 시스템에서 다중 효과를 나타내므로, 트롬빈은 응고의 주요 효소이다. 트롬빈은 섬유소원을 섬유소로 분열시켜 섬유소 응괴 형성을 야기하고, 트롬빈은 혈액 혈소판을 활성화한다. 따라서, 트롬빈 생성의 증가는 또한 섬유소 응괴 형성 증가 및 혈소판 활성화를 야기한다. 또한, 규칙적인 트롬빈 형성은 또한 (트롬빈 활성화 섬유소 분해 억제제(TAFI)에 의해) 낮은 섬유소 분해 가능성을 야기한다.
본 발명의 방법의 장점은 다양하다.
FVIII 모방 항체의 응혈촉진 활성을 추가로 연장하도록 한다. 단지 응고 인자가 투입되는 것만으로도, 활성화된 PCC 및 FVIIa에서 활성화된 응고 인자의 적용과 비교하여 혈전증 위험이 낮다. FVIII과 관련된 인자는 없지만, 이 치료에 의해 A형 혈우병 환자에게 FVIII에 대한 자가-항체 형성의 위험이 존재하지 않는다.
따라서, 본 발명에 의한 항-인자 IXa/X 이중특이적 항체(FVIII 모방 항체)의 가치있는 특성, 예컨대 유리한 약동학, FVIII 억제제 환자에서 훌륭한 활성, 우수한 적용 경로(s.c. 대 i.v.)는 약제의 응혈촉진성 효과를 추가로 증가시키는 방식에 의해 추가로 보충된다. 인자 IXa/X 이중특이적 항체를 사용한 지속적인 단일요법 동안, 낮은 트롬빈 생성(FVIII 치료와 비교하여)으로 인해 높은 안전 여유가 달성될 수 있다. 따라서, 본 발명은 수술, 급성 외상 등과 같은 특정한 사건 때문에 (일시적) 증가된 트롬빈 생성에 특히 유용하다. 항체와 조합하여 사용되는 응고 인자 IX의 비교적 짧은 반감기(25시간)(인자 IXa/X 이중특이적 항체 반감기(s.c. 주사 후 약 4 내지 5 주)와 비교하여)로 인해, 증가된 트롬빈 생성 효과는 (장기간 치료 동안 불필요한 혈전증 위험을 야기하지 않고) 전술된 사건에 대하여 특정한 기간으로 제한될 수 있다.
항-FX/FIXa 항체와 비활성화된 응혈 인자의 조합(FIX 단독 또는 1개 또는 여러 개의 인자 VII, X 및 II와 조합)은 환자에게 어떠한 형태의 활성 응고 인자를 첨가하지 않는다. 조직 인자가 혈관 손상 부위에서 방출될 때만, 트롬빈 생성이 발생할 수 있다(본 발명의 조합물의 예시인 도 2 참조).
이에 반해, 활성 응혈 인자를 사용한 요법은 혈관 손상 부위에서 약 3%의 상당한 혈전증 비율을 보이는 응고 과정의 국소화를 방해할 수 있다(문헌[Baudo et al, Blood 120(2012) 39-46]).
따라서, 본 발명은 FVIII 또는 활성화된 응고 인자의 적용에 기초하지 않은 FVIII 모방 항체로 치료된 환자에서 응혈촉진 활성을 증가시킨다.
놀랍게도, 본 발명자들은 샘플이 비타민 K 의존 인자 FIX, 및 추가적으로 예를 들어 FX 및 FII 인자를 이미 정상 수준으로 함유할지라도, 이러한 인자의 적용이 인자 IXa/X 이중특이적 항체로 치료된 A형 혈우병 혈장의 트롬빈 생성(및 이에 따른 응혈촉진 활성)을 증가시킴을 밝혔다. 또한, FIX를 단독으로 적용하는 것은 인자 IXa/X 이중특이적 항체를 함유하는 환자 샘플의 트롬빈 생성을 증가시킨다.
본 발명의 방법의 또 하나의 장점은 적용된 응고 인자(FII, FIX 및 FX)가 순환시(약 65 시간, 약 25 시간, 약 40 시간) FVIIa(2.5 시간) 및 FVIII(12 시간)과 비교하여 비교적 긴 반감기를 갖는다는 점이다.
인자 IXa/X 이중특이적 항체와 응고 인자 FIX, FX 및/또는 FII의 조합물의 또 다른 용도는 또한 응혈촉진성 치료가 필요한 다른 상황, 예컨대 직접적으로 또는 간접적으로 작용하는 항응고제, 응고병증이 있는 환자의 수술, 또는 FVIII 결핍과 관련없는 출혈 문제를 경험하는 환자로 인한 출혈에서 유리할 수 있다.
본 발명의 일 양상은 응고 인자 FIX, 및/또는 FII를 함유하는 조성물이고, 이는 혈장 공여로부터 유도되거나 재조합 단백질 생성물을 사용하여 생성될 수 있다.
본 발명의 하나의 실시양태는 FIX가 항-인자 IXa/X 이중특이적 항체로 치료된 A형 혈우병 환자에게 환자 체중 kg당 10 U 내지 200 U FIX의 양으로 투여되는, 본원에 기재된 조합물, 항체 또는 용도이다. 하나의 실시양태에서 추가적으로, FX는 체중 kg당 10 U 내지 200 U FX, 바람직하게는 50 U 내지 200 U FIX의 양으로 투여된다.
본 발명의 하나의 실시양태는 FIX가 항-인자 IXa/X 이중특이적 항체로 치료된 A형 혈우병 환자에게 환자 체중 kg당 10 U 내지 200 U의 양으로 투여되는 본원에 기재된 조합물, 항체 또는 용도이다. 하나의 실시양태에서 추가적으로, FII는 체중 kg당 10 U 내지 200 U FII의 양으로 투여된다.
본 발명의 하나의 실시양태는 FIX가 항-인자 IXa/X 이중특이적 항체로 치료된 A형 혈우병 환자에게 환자 체중 kg당 10 U 내지 200 U FIX의 양으로 투여되는 본원에 기재된 조합물, 항체 또는 용도이다. 하나의 실시양태에서 추가적으로, FII 및 FX는 체중 kg당 10 U 내지 200 U FII 및 10 U 내지 200 U FX의 양으로 투여된다.
본 발명의 하나의 실시양태는 프로트롬빈 복합물(PCC)이 항-인자 IXa/X 이중특이적 항체로 치료된 A형 혈우병 환자에게 체중 kg당 10 U 내지 200 U PCC의 양으로 투여되는 본원에 기재된 조합물, 항체 또는 용도이다.
도 1은 혈액 응고 시스템의 대표도이다. 도 1은 혈관의 단면도를 나타낸다. 혈관 벽은 항혈전성을 갖는 내피 세포로 덮여 있다. 혈관 손상이 발생하면, 내피 세포 층은 분열되고 내피하 세포는 혈액에 노출된다. 이로 인해 강한 응혈촉진 활성을 갖는 내피하 세포의 막경유 단백질인 조직 인자(TF)가 방출된다. TF는 응혈 인자 FVIIa를 갖는 착체를 형성한 후 FX를 FXa로 및 FIX를 FIXa로 활성화시킨다. TF-FVIIa 착체에 의한 FX의 직접 활성화는 조직 인자 경로 억제제(TFP(i)에 의해 억제되는 반면, 인자 Xa 및 XIa의 활성은 공인자 FV 및 FVIIIdl 이들의 활성 형태로 존재하지 않는 한 느리다. 일단 자유 트롬빈이 형성되면, 이는 FV 및 FVIII을 이들의 활성 형태로 활성화시키고 트롬빈 생성 속도는 매우 촉진된다. 그러나, A형 혈우형에서 FVIII은 손실되므로 트롬빈 생성 속도를 매우 느리게 유지하여 출혈 문제를 야기한다.
도 2는 인자 IX 또는 FX 및/또는 FII와 조합한 인자 IX를 갖는 이중특이적 항-FX/FIXa 항체(Bsab FIX/FX)의 조합된 적용의 대표도를 나타낸다(밑줄은 Bsab FIX/FX의 응혈촉진 활성을 증가시키는 응고 인자이다).
도 3a 내지 3c는 응고 인자 VIII이 결핍된 혈장 샘플에서(응고 인자 VIII의 결핍 또는 기능 저하를 특징으로 하는 질병과 유사한, 예를 들어 A형 혈우병에 대한 모델로서) 트롬빈 생성시 항-FX/FIXa 항체 첨가 효과 대 FVIII 첨과 효과를 비교한다: x-축: 시간[분]; y-축: 트롬빈[nM].
도 3a: FVIII의 첨가는 FVIII이 부족한 샘플과 비교하여 신속한 트롬빈 생성 및 총 7배 이상의 트롬빈 생성을 야기한다.
도 3b: 또한 Bsab FIX/FX의 첨가는 FVIII이 부족한 샘플과 비교하여 3.4배 내지 4.4배 이상으로 트롬빈 생성의 상당한 증가를 야기한다.
도 3c: FVIII 또는 Bsab FIX/FX를 보충한 샘플의 트롬빈 생성을 비교한다.
도 4a 및 4b는 응고 인자 VIII이 결핍된 혈장 샘플에서(응고 인자 VIII의 결핍 또는 기능 저하를 특징으로 하는 질병과 유사한, 예를 들어 A형 혈우병에 대한 모델로서) 트롬빈 생성시 FIX와 조합한 항-FX/FIXa 항체의 효과 대 FVIII과 조합한 항-FX/FIXa 항체의 효과를 비교한다: x-축: 시간[분]; y-축: 트롬빈[nM].
도 4a: Bsab FIX/FX로 처리된 FVIII 결핍 혈장에 대한 FIX의 조합/첨가: Bsab FIX/FX로 처리된 FVIII 결핍 혈장에 FIX(100%)의 첨가는 트롬빈 생성의 상당한 증가를 야기한다. 또한, 도표에서 나타내 바와 같이, 피크까지 시간은 FIX의 첨가에 의해 상당히 단축되고, 즉, 트롬빈 생성이 증가할 뿐 아니라 가속화된다. 도표에서 나타낸 바와 같이, Bsab FIX/FX로 처리된 샘플의 트롬빈 생성 피크 및 피크까지 시간은 둘 다 100% FVIII을 갖는 샘플과 일치한다.
도 4b: Bsab FIX/FX로 처리된 FVIII 결핍 혈장에 대한 FIX를 포함하는 프로트롬빈 복합 농축물(PCC)의 조합/첨가: Bsab FIX/FX로 처리된 FVIII 결핍 혈장에 PCC(1 U/ml)의 첨가는 트롬빈 생성의 상당한 증가를 야기한다. ml당 75 ㎍ Bsab FIX/FX로 처리된 샘플에서, 이는 트롬빈 생성의 94% 증가를 야기한다. ml당 25 ㎍ RO5534262로 처리된 샘플에서, 트롬빈 생성의 90% 증가가 발견되었다. 두 경우에, 트롬빈 생성 피크는 FVIII 보충된 샘플과 비교하여 PCC 첨가된 샘플로 처리된 Bsab FIX/FX와 유사하였다.
본 발명은 A형 혈우병 치료에 사용하기 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)를 제공하고, 이때 항체는 응고 인자 IX와 조합하여 사용된다.
본 발명은 A형 혈우병의 치료에 사용하기 위한 응고 인자 IX를 제공하고, 이때 상기 응고 인자 IX는 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)와 조합하여 사용된다.
본 발명은 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)를 제공하고, 이때 항체는 응고 인자 IX와 조합하여 사용된다.
본 발명은 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 응고 인자 IX를 제공하고, 이때 상기 응고 인자 IX는 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)와 조합하여 사용된다.
본 발명은 A형 혈우병의 치료에 사용하기 위한, (i) 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함), 및 (ii) 응고 인자 IX의 조합물을 제공한다.
본 발명은 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한, (i) 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함), 및 (ii) 응고 인자 IX의 조합물을 제공한다.
본 발명은 A형 혈우병의 치료용 약제의 제조를 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)의 용도를 제공하고, 이때 응고 인자 IX와 조합하여 치료한다.
본 발명은 A형 혈우병의 치료용 약제의 제조를 위한 응고 인자 IX의 용도를 제공하고, 이때 응고 인자 IX는 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)와 조합하여 사용된다.
본 발명은 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료용 약제의 제조를 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)의 용도를 제공하고 이때 응고 인자 IX와 조합하여 치료한다
본 발명은 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료용 약제의 제조를 위한 응고 인자 IX의 용도를 제공하고, 이때 응고 인자 IX는 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)와 조합하여 사용된다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자는 응고 인자 VIII의 선천성 또는 후천성 결핍으로 고통받는다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 결핍은 항체, 다른 억제제, 소모 또는 희석에 의해 얻게 된다.
본 발명은
(a) 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
(b) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
(c) 트롬빈 생성/형성을 가속화하는데 사용하고/하거나;
(d) 트롬빈 생성/형성을 증가시키고 가속화하는데 사용하고/하거나;
(e) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성/형성을 가속화하는데 사용하고/하거나;
(f) 혈액 응고를 향상시키는데 사용하고/하거나;
(g) 섬유소 응괴 형성을 향상시키는데 사용하고/하거나;
(h) 출혈, 출혈을 동반하는 질병, 출혈에 의해 야기된 질병 등의 예방 및/또는 치료를 위한,
전술된 실시양태 중 임의의 하나에 따른 조합물, 항체 또는 용도를 제공한다.
본 발명은 (a) 증가된 출혈 위험이 존재하는 경우, (b) 수술 또는 다른 외과 과정 동안, 및/또는 (c) 혈관 손상 후, 전술된 실시양태 중 임의의 하나에 따른 조합물, 항체 또는 용도를 제공한다.
본 발명의 하나의 실시양태는 또한 (a) 응고 인자 II, (b) 응고 인자 X, (c) 응고 인자 II 및 X, 또는 (d) 응고 인자 II, X 및 VII이 조합하여 사용되는, 전술된 조합물, 항체 또는 용도이다.
본 발명의 하나의 실시양태는 응고 인자 IX가 프로트롬빈 복합 농축물(PCC)에 포함되는, 전술된 조합물, 항체 또는 용도이다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 상기 프로트롬빈 복합 농축물은 FIX, FII 및 FX를 포함한다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 상기 프로트롬빈 복합 농축물은 FIX, FII, FX 및 FVII을 포함한다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 전술된 항체는 이중특이적이고, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위는 서열번호 105, 106 및 107 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(Q499의 H 쇄 CDR)), 및 서열번호 156, 157 및 158 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(L404의 L 쇄 CDR)을 포함하고, 제 2 항원 결합 부위는 서열번호 126, 127 및 128 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(J327의 H 쇄 CDR), 및 서열번호 156, 157 및 158 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(L404의 L 쇄 CDR)을 포함한다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 전술된 항체는 a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, 및 c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)이다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 다중특이적 항체는 혈액 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 혈액 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위를 포함하는 제 1 폴리펩티드 및 혈액 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 혈액 응고 인자 IX에 결합하는 제 3 항원 결합 부위를 포함하는 제 3 폴리펩티드, 뿐만 아니라 혈액 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 제 2 폴리펩티드 및 혈액 응고 인자 X에 결합하는 제 4 항원 결합 부위를 포함하는 제 4 폴리펩티드를 포함한다. 하나의 실시양태에, 상기 다중특이적 항체는 제 1 폴리펩티드 내지 제 4 폴리펩티드를 포함하고, 이때 제 1 폴리펩티드 및 제 3 폴리펩티드는 각각 혈액 응고 인자 IX 또는 활성화된 혈액 응고 인자 IX에 대한 항체의 H 쇄 또는 L 쇄 각각의 항원 결합 부위를 포함하고; 제 2 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드는 각각 혈액 응고 인자 X에 대한 항체의 H 쇄 또는 L 쇄 각각의 항원 결합 부위를 포함한다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드의 항원 결합 부위는 하기 (a1) 내지 (a11)로부터 선택된 아미노산 서열 중 임의의 하나로 이루어진 H 쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위, 또는 이와 기능적으로 동등한 항원 결합 부위를 포함하고; 제 2 폴리펩티드의 항원 결합 부위는 하기 (b1) 내지 (b11)로부터 선택된 아미노산 서열 중 임의의 하나로 이루어진 H 쇄 CDR를 포함하는 항원 결합 부위, 또는 이와 기능적으로 동등한 항원 결합 부위를 포함한다: (a1) 서열번호 75, 76 및 77 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q1의 H 쇄 CDR); (a2) 서열번호 78, 79 및 80 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q31의 H 쇄 CDR); (a3) 서열번호 81, 82 및 83 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q64의 H 쇄 CDR); (a4) 서열번호 84, 85 및 86 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q85의 H 쇄 CDR); (a5) 서열번호 87, 88 및 89 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q153의 H 쇄 CDR); (a6) 서열번호 90, 91 및 92 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q354의 H 쇄 CDR); (a7) 서열번호 93, 94 및 95 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q360의 H 쇄 CDR); (a8) 서열번호 96, 97 및 98 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q405의 H 쇄 CDR); (a9) 서열번호 99, 100 및 101 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q458의 H 쇄 CDR); (a10) 서열번호 102, 103 및 104 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q460의 H 쇄 CDR); (a11) 서열번호 105, 106 및 107 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q499의 H 쇄 CDR); (b1) 서열번호 108, 109 및 110 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J232의 H 쇄 CDR); (b2) 서열번호 111, 112 및 113 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J259의 H 쇄 CDR); (b3) 서열번호 114, 115 및 116 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J268의 H 쇄 CDR); (b4) 서열번호 117, 118 및 119 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J300의 H 쇄 CDR); (b5) 서열번호 120, 121 및 122 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J321의 H 쇄 CDR); (b6) 서열번호 123, 124 및 125 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J326의 H 쇄 CDR); (b7) 서열번호 126, 127 및 128 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J327의 H 쇄 CDR); (b8) 서열번호 129, 130 및 131 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J339의 H 쇄 CDR); (b9) 서열번호 132, 133 및 134 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J344의 H 쇄 CDR); (b10) 서열번호 135, 136 및 137 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J346의 H 쇄 CDR); 및 (b11) 서열번호 174, 175 및 176 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J142의 H 쇄 CDR).
본 발명의 하나의 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드의 항원 결합 부위는 하기 (a1) 내지 (a11)로부터 선택된 아미노산 서열 중 임의의 하나로 이루어진 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위, 또는 이에 기능적으로 동등한 항원 결합 부위를 포함하고; 제 2 폴리펩티드의 항원 결합 부위는 하기 (b1) 내지 (b11)로부터 선택된 아미노산 서열 중 임의의 하나로 이루어진 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위, 또는 이에 기능적으로 동등한 항원 결합 부위를 포함한다: (a1) 서열번호 35의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q1의 H 쇄 가변 영역); (a2) 서열번호 36의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q31의 H 쇄 가변 영역); (a3) 서열번호 37의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q1의 H 쇄 가변 영역); (a4) 서열번호 38의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q85의 H 쇄 가변 영역); (a5) 서열번호 39의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q153의 H 쇄 가변 영역); (a6) 서열번호 40의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q354의 H 쇄 가변 영역); (a7) 서열번호 41의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q360의 H 쇄 가변 영역); (a8) 서열번호 42의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q405의 H 쇄 가변 영역); (a9) 서열번호 43의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q458의 H 쇄 가변 영역); (a10) 서열번호 44의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q460의 H 쇄 가변 영역); (a11) 서열번호 45의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q499의 H 쇄 가변 영역); (b1) 서열번호 46의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J232의 H 쇄 가변 영역); (b2) 서열번호 47의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J259의 H 쇄 가변 영역); (b3) 서열번호 48의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J268의 H 쇄 가변 영역); (b4) 서열번호 49의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J300의 H 쇄 가변 영역); (b5) 서열번호 50의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J321의 H 쇄 가변 영역); (b6) 서열번호 51의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J326의 H 쇄 가변 영역); (b7) 서열번호 52의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J327의 H 쇄 가변 영역); (b8) 서열번호 53의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J339의 H 쇄 가변 영역); (b9) 서열번호 54의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J344의 H 쇄 가변 영역); (b10) 서열번호 55의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J346의 H 쇄 가변 영역); 및 (b11) 서열번호 172의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J142의 H 쇄 가변 영역).
본 발명의 하나의 실시양태에서, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드에 포함된 항원 결합 부위는 하기 (c1) 내지 (c10)으로부터 선택된 아미노산 서열 중 임의의 하나로 이루어진 L 쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위, 또는 이에 기능적으로 동등한 항원 결합 부위를 포함한다: (c1) 서열번호 138, 139 및 140 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L2의 L 쇄 CDR); (c2) 서열번호 141, 142 및 143 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L45의 L 쇄 CDR); (c3) 서열번호 144, 145 및 146 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L248의 L 쇄 CDR); (c4) 서열번호 147, 148 및 149 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L324의 L 쇄 CDR); (c5) 서열번호 150, 151 및 152 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L334의 L 쇄 CDR); (c6) 서열번호 153, 154 및 155 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L377의 L 쇄 CDR); (c7) 서열번호 156, 157 및 158 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L404의 L 쇄 CDR); (c8) 서열번호 159, 160 및 161 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L406의 L 쇄 CDR); (c9) 서열번호 137, 138 및 139 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L408의 L 쇄 CDR); 및 (c10) 서열번호 177, 178 및 179 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L180의 L 쇄 CDR).
본 발명의 하나의 실시양태에서, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드에 포함된 항원 결합 부위는 하기 (c1) 내지 (c10)으로부터 선택된 아미노산 서열 중 임의의 하나로 이루어진 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위, 또는 이에 기능적으로 동등한 항원 결합 부위를 포함한다: (c1) 서열번호 56의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L2의 L 쇄 가변 영역); (c2) 서열번호 57의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L45의 L 쇄 가변 영역); (c3) 서열번호 58의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L248의 L 쇄 가변 영역); (c4) 서열번호 59의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L324의 L 쇄 가변 영역); (c5) 서열번호 60의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L334의 L 쇄 가변 영역); (c6) 서열번호 61의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L377의 L 쇄 가변 영역); (c7) 서열번호 62의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L404의 L 쇄 가변 영역); (c8) 서열번호 63의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L406의 L 쇄 가변 영역); (c9) 서열번호 64의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L408의 L 쇄 가변 영역); 및 (c10) 서열번호 173의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L180의 L 쇄 가변 영역).
본 발명의 하나의 실시양태에서, 제 1 및 제 2 폴리펩티드는 항체 H 쇄 불변 영역을 추가로 포함하고, 제 3 및 제 4 폴리펩티드는 항체 L 쇄 불변 영역을 포함한다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 제 1 및 제 2 폴리펩티드는 항체 H 쇄 불변 영역을 포함하고, 제 3 및 제 4 폴리펩티드는 항체 L 쇄 불변 영역을 포함하되, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드는 공통 공유된 L 쇄이다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 제 1 폴리펩티드는 하기 (a1) 내지 (a14)로부터 선택된 임의의 하나의 항체 H 쇄를 포함하고, 제 2 폴리펩티드는 하기 (b1) 내지 (b12)로부터 선택된 임의의 하나의 항체 H 쇄를 포함하고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드는 하기 (c1) 내지 (c10)으로부터 선택된 임의의 하나의 항체 L 쇄를 포함한다: (a1) 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q1-G4k); (a2) 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q31-z7); (a3) 서열번호 3의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q64-z55); (a4) 서열번호 10의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q64-z7); (a5) 서열번호 11의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q85-G4k); (a6) 서열번호 12의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q153-G4k); (a7) 서열번호 13의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q354-z106); (a8) 서열번호 14의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q360-G4k); (a9) 서열번호 15의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q360-z118); (a10) 서열번호 16의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q405-G4k); (a11) 서열번호 17의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q458-z106); (a12) 서열번호 18의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q460-z121); (a13) 서열번호 19의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q499-z118); (a14) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q499-z121); (b1) 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J268-G4h); (b2) 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J321-G4h); (b3) 서열번호 6의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J326-z107); (b4) 서열번호 7의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J344-z107); (b5) 서열번호 21의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J232-G4h); (b6) 서열번호 22의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J259-z107); (b7) 서열번호 23의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J300-z107); (b8) 서열번호 24의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J327-z107); (b9) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J327-z119); (b10) 서열번호 26의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J339-z119); (b11) 서열번호 27의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J346-z107); (b12) 서열번호 170의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J142-G4h); (c1) 서열번호 8의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L2-k); (c2) 서열번호 9의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L45-k); (c3) 서열번호 28의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L248-k); (c4) 서열번호 29의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L324-k); (c5) 서열번호 30의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L334-k); (c6) 서열번호 31의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L377-k); (c7) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L404-k); (c8) 서열번호 33의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L406-k); (c9) 서열번호 34의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L408-k); 및 (c10) 서열번호 171의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L180-k).
본 발명의 하나의 실시양태에서, 전술된 항체는 하기 (a) 내지 (u) 중 임의의 하나의 이중특이적 항체이다: (a) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 9의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q1-G4k/J268-G4h/L45-k); (b) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 9의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q1-G4k/J321-G4h/L45-k); (c) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 6의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 8의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q31-z7/J326-z107/L2-k); (d) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 3의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 7의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 9의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q64-z55/J344-z107/L45-k); (e) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 10의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 6의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 30의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q64-z7/J326-z107/L334-k); (f) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 10의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 7의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 33의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q64-z7/J344-z107/L406-k); (g) 제 1 폴리펩티드기 서열번호 11의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 33의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q85-G4k/J268-G4h/L406-k); (h) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 11의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 30의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q85-G4k/J321-G4h/L334-k); (i) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 12의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 21의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 33의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q153-G4k/J232-G4h/L406-k); (j) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 13의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 22의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 29의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q354-z106/J259-z107/L324-k); (k) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 14의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 21의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 33의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q360-G4k/J232-G4h/L406-k); (l) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 15의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 23의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 30의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q360-z118/J300-z107/L334-k); (m) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 16의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 21의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 28의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q405-G4k/J232-G4h/L248-k); (n) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 17의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 27의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 34의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q458-z106/J346-z107/L408-k); (o) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 18의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 30의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q460-z121/J327-z119/L334-k); (p) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 19의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 24의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 30의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q499-z118/J327-z107/L334-k); (q) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 19의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 24의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 31의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q499-z118/J327-z107/L377-k); (r) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 19의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 27의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 28의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q499-z118/J346-z107/L248-k); (s) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 32의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k); (t) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 26의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 31의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q499-z121/J339-z119/L377-k); 및 (u) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 12의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 170의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 171의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q153-G4k/J142-G4h/L180-k).
본 발명의 하나의 실시양태는 FIX가 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)로 치료된 A형 혈우병 환자에게 체중 kg당 10 U 내지 200 U FIX의 양으로 투여되는, 전술된 조합물, 항체 또는 용도이다. 본 발명의 하나의 실시양태는 추가의 FX가 체중 kg당 10 U 내지 200 U FX의 양으로 투여되는, 전술된 조합물, 항체 또는 용도이다. 본 발명의 하나의 실시양태는 추가의 FII가 체중 kg당 10 U 내지 200 U FII의 양으로 투여되는, 전술된 조합물, 항체 또는 용도이다. 본 발명의 하나의 실시양태는 추가의 FII 및 FX가 체중 kg당 10 U 내지 200 U FII 및 10 U 내지 200 U FX의 양으로 투여되는, 전술된 조합물, 항체 또는 용도이다. 본 발명의 하나의 실시양태는 프로트롬빈 복합물(PCC)을 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)로 치료된 A형 혈우병 환자에게 체중 kg당 10 U 내지 200 U PCC의 양으로 투여되는, 전술된 조합물, 항체 또는 용도이다.
본원에 기재된 다중특이적 항체 및 항원-결합 분자는 2개 이상의 상이한 유형의 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 제 1 항원 결합 부위 및 제 2 항원 결합 부위를 포함한다. 제 1 항원 결합 부위 및 제 2 항원 결합 부위가 FIX 및/또는 FIXa, 및 FX 각각에 결합하는 활성을 갖는 한 특히 제한되지 않는 동안, 항체, 스캐폴드 분자(항체-유사 분자) 또는 펩티드와 같은 항원과 결합할 필요가 있는 부위, 또는 상기 부위를 함유하는 단편을 포함한다. 스캐폴드 분자는 표적 분자에 결합하여 기능을 나타내는 분자이고, 임의의 폴리펩티드는 하나 이상의 표적 항원에 결합할 수 있는 형태적으로 안정한 폴리펩티드로 존재하는 한 사용될 수 있다. 상기 폴리펩티드의 예는 항체 가변 영역, 피브로넥틴(WO 2002/032925), 단백질 A 도메인(WO 1995/001937), LDL 수용체 A 도메인(WO 2004/044011, WO 2005/040229), 안키린(WO 2002/020565), 및 또한 문헌[Nygren et al,. Current Opinion in Structural Biology, 7: 463-469 (1997)]; 및 문헌[Journal of Immunol Methods, 290: 3-28(2004)], 문헌[Binz et al,. Nature Biotech 23: 1257-1266 (2005)], 및 문헌[Hosse et al,. Protein Science 15: 14-27 (2006)]에 기재된 분자를 포함한다. 또한 문헌[Curr Opin Mol Ther. 2010 Aug; 12(4): 487-95] 및 문헌[Drugs. 2008; 68(7): 901-12]에서 언급한 바와 같이, 표적 항원에 결합할 수 있는 펩티드 분자가 사용될 수 있다.
여기서, 다중특이적 항원-결합 분자는 이들이 2가지 이상의 상이한 유형의 항원에 결합할 수 있는 분자인 한 특히 제한되지 않지만, 전술된 항원 결합 부위, 예컨대 항체 및 스캐폴드 분자뿐만 아니라 이들의 단편, 및 핵산 분자 및 펩티드를 포함하는 압타머를 포함하고, 이들은 단일 분자 또는 이의 다합체일 수 있다. 바람직한 다중특이적 항원-결합 분자는 2개 이상의 상이한 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 다중특이적 항체를 포함한다. 본 발명의 FVIII을 기능적으로 대체하는 활성을 갖는 항체의 특히 바람직한 예는 2개의 상이한 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 이중특이적 항체(BsAb)(이들은 또한 이중 특이적 항체로 불릴 수 있음)를 포함한다.
본 발명에서, 용어 "공통 공유된 L 쇄"는 2개 이상의 상이한 H 쇄와 연결하고, 각각의 항원에 대한 결합력을 나타낼 수 있는 L 쇄를 지칭한다. 여기서, 용어 "상이한 H 쇄"는 바람직하게는 상이한 항원에 대한 항체의 H 쇄를 지칭하지만, 이에 제한되지 않고, 또한 아미노산 서열이 서로 상이한 H 쇄를 지칭한다. 공통 공유된 L 쇄는 예를 들어, WO 2006/109592에 기재된 방법에 따라 수득할 수 있다.
본 발명의 다중특이적 항원-결합 분자(바람직하게는 이중특이적 항체)는 2개 이상의 상이한 항원에 대한 특이성을 갖는 항체, 또는 상기 항체의 단편을 포함하는 분자이다. 본 발명의 항체는 특히 제한되지 않지만, 바람직하게는 단클론 항체이다. 본 발명에서 사용된 단클론 항체는 인간, 마우스, 래트, 햄스터, 토끼, 양, 낙타 및 원숭이와 같은 동물로부터 유래된 단클론 항체를 포함할 뿐만 아니라 키메라 항체, 인간화 항체 및 이중특이적 항체처럼 인공적으로 변형된 유전자 재조합 항체를 포함한다.
또한, 본 발명의 다중특이적 항원-결합 분자가 될 항체의 L 쇄는 상이할 수 있지만, 바람직하게는 공통 공유된 L 쇄를 갖는다.
본 발명의 다중특이적 항원-결합 분자는 바람직하게는 유전자 재조합 기법을 사용하여 제조된 재조합 항체이다(예를 들어, 1990년 맥밀란 퍼블리셔스 리미티드(MACMILLAN PUBLISHERS LTD)에 의해 영국에서 출간된 문헌[orrebaeck CAK and Larrick JW, THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODY] 참조). 재조합 항체는, 하이브리도마 또는 항체를 생성하는 항체-생성 세포, 예컨대 감작 림프구로부터 DNA 암호화 항체를 클로닝하고, 이를 적합한 벡터에 삽입한 후, 이를 숙주(숙주 세포)에 도입하여 항체를 생성하여 수득할 수 있다.
또한, 본 발명의 항체는 전체 항체뿐만 아니라 항체 단편 및 저분자량 항체(미니바디), 및 변형된 항체를 포함할 수 있다.
예를 들어, 항체 단편 또는 미니바디는 다이아바디(Db), 선형 항체, 및 단일 쇄 항체(이하에서, scFV로도 나타냄) 분자를 포함한다. 여기서, "Fv" 단편은 완전 항원 인식 부위 및 결합 부위를 포함하는 가장 작은 항체 단편으로 정의된다.
"Fv" 단편은 H 쇄 가변 영역(VH) 및 L 쇄 가변 영역(VL)이 비공유 결합에 의해 강하게 연결된 이량체(VH-VL 이량체)이다. 각각의 가변 영역의 3개의 상보성 결정 영역(CDR)은 서로 결합하여 VH-VL 이량체의 표면에 항원 결합 부위를 형성한다. 6개의 CDR은 항체에 항원 결합 부위를 부여한다. 그러나, 1개의 가변 영역(또는 항원에 특이적인 오직 3개의 CDR을 포함하는 Fv의 절반)은 이의 친화력이 전체 결합 부위의 친화력보다 낮지만 단독으로 항원을 인식하고 항원에 결합할 수 있다.
Fab 단편(F(ab)로도 불림)은 L 쇄 불변 영역 및 H 쇄 불변 영역(CH1)을 추가로 포함한다. 항체의 힌지 영역으로부터 하나 이상의 시스테인을 포함하는 Fab' 단편은 H 쇄 CH1 영역의 카복실 말단으로부터 유도된 여러 잔기를 추가로 포함하는 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 이의 불변 영역의 하나 이상의 시스테인 잔기가 자유 티올 기를 포함하는 Fab'을 지칭한다. F(ab') 단편은 F(ab')2 펩신 소화의 힌지 영역에서 시스테인 잔기 사이에 다이설파이드 결합을 절단하여 생성된다. 다른 화학적으로 결합된 항체 단편은 또한 당업자에게 공지되어 있다.
다이아바디는 유전자 융합에 의해 구축된 2가 미니바디이다(문헌[Holliger, P. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448(1993)]; EP 404,097; WO 93/11161). 다이아바디는 2개의 폴리펩티드 쇄로 구성된 이량체이고, 각각의 폴리펩티드 쇄는 동일한 쇄 내에서 이들 2개의 도메인의 회합을 막기에 충분히 짧은 연결기, 예를 들어 바람직하게는 2 내지 12개 아미노산, 더욱 바람직하게는 3 내지 10개 아미노산, 특히 약 5개 아미노산의 연결기로 연결된 L 쇄 가변 영역(VL) 및 H 쇄 가변 영역(VH)을 포함한다. 동일한 폴리펩티드에서 암호화된 VL과 VH 사이에 연결기는 단일 쇄 가변 영역 단편을 형성하기에 너무 짧기 때문에 폴리펩티드 쇄는 이량체를 형성한다. 따라서, 다이아바디는 2개의 항원 결합 부위를 포함한다.
단일-쇄 항체 또는 scFv 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 영역을 포함하고, 이들 영역은 단일 폴리펩티드 쇄에 존재한다. 일반적으로, Fv 폴리펩티드는 VH와 VL 영역 사이에 폴리펩티드 연결기를 추가로 포함하고, 이는 scFv가 항원 결합에 필요한 구조를 형성하게 한다(scFv에 대한 리뷰를 위해, 문헌[Pluckthun "The Pharmacology of Monoclonal Antibody" Vol. 113(Rosenburg and Moore ed.(Springer Verlag, New York) pp.269-315, 1994] 참조). 본 발명의 맥락에서, 연결기는 이들의 말단에서 연결된 항체 가변 영역의 발현을 억제하지 않는 한 특히 제한되지 않는다.
IgG-형 이중특이적 항체는 IgG 항체를 생성하는 2 종류의 하이브리도마를 융합하여 생성된 하이브리드 하이브리도마(쿼드로마)로부터 분비될 수 있다(문헌[Milstein C et al. Nature 1983, 305: 537-540]). 이들은 또한 2 종류의 해당 IgG를 구성하는 L 쇄 및 H 쇄 유전자를 취하고(총 4 종류의 유전자) 이들을 세포에 도입하여 유전자를 공발현시켜 분비될 수 있다.
이 경우에, 적합한 아미노산 치환기를 H 쇄의 CH3 영역에 도입하여, H 쇄의 이종 조합을 갖는 IgG가 우선적으로 분비될 수 있다(문헌[Ridgway JB et al. Protein Engineering 1996, 9: 617-621]; 문헌[Merchant AM et al. Nature Biotechnology 1998, 16: 677-681]; WO 2006/106905; 문헌[Davis JH et al. Protein Eng Des Sel. 2010, 4: 195-202]).
L 쇄에 관하여, L 쇄 가변 영역의 다양성은 H 쇄 가변 영역의 다양성보다 낮기 때문에, 2개의 H 쇄에 결합력을 부여할 수 있는 공통 공유된 L 쇄를 얻을 수 있다. 본 발명의 항체는 공통 공유된 L 쇄를 포함한다. 이중특이적 IgG는 공통 공유된 L 쇄 및 2개의 H 쇄의 유전자를 세포에 도입하여 효율적으로 발현될 수 있다.
이중특이적 항체는 화학적으로 교차결합하는 Fab'에 의해 생성될 수 있다. 이중특이적 F(ab')2는 예를 들어 항체로부터 Fab'을 제조하고, 이를 사용하여 오르토-페닐렌다이-말레이미드(o-ODM)로 말레이미드화 Fab'를 생성한 후, 이를 또 다른 항체로부터 제조된 Fab'과 반응시켜 상이한 항체로부터 유도된 Fab'을 교차결합시킴으로써 생성될 수 있다(문헌[Keler T et al. Cancer Research 1997, 57: 4008-4014]). Fab'-티오니트로벤조산(TNB) 유도체 및 항체 단편, 예컨대 Fab'-티올(SH)을 화학적으로 연결하는 방법이 또한 공지되어 있다(문헌[Brennan M et al. Science 1985, 229: 81-83]).
화학적 교차결합 대신에, Fos 및 Jun으로부터 유도된 류신 지퍼(leucine zipper)가 또한 사용될 수 있다. Fos 및 Jun이 호모이량체를 형성할지라도, Fos 및 Jun에 의해 헤테로이량체의 우선적인 형성이 이용된다. Fos 류신 지퍼가 첨가된 Fab', 및 Jun 류신 지퍼가 첨가된 또 다른 Fab'은 발현되고 제조된다. 온화한 조건하에 감소된 단량체 Fab'-Fos 및 Fab'-Jun을 혼합하고 반응시켜 이중특이적 F(ab')2를 형성한다(문헌[Kostelny SA et al. J. of Immunology, 1992, 148: 1547-53]). 이 방법은 Fab'뿐만 아니라 scFv, Fv 등도 적용할 수 있다.
더욱이, sc(Fv)2, 예컨대 IgG-scFv(문헌[Protein Eng Des Sel. 2010 Apr; 23(4): 221-8]) 및 BiTE(문헌[Drug Discov Today 2005 Sep 15; 10(18): 1237-44]), DVD-Ig(문헌[Nat Biotechnol. 2007 Nov; 25(11): 1290-7. Epub 2007 Oct 14] 및 문헌[MAbs. 2009 Jul; 1(4): 339-47. Epub 2009 Jul 10])를 비롯한 이중특이적 항체, 및 또한 투인원(two-in-one) 항체(문헌[Science. 2009 Mar 20; 323(5921): 1610-4]; 및 문헌[Immunotherapy 2009 Sep; 1(5): 749-51]), 트라이-Fab, 탠덤 scFv, 및 다이아바디를 비롯한 다른 것(문헌[IDrugs 2010, 13: 698-700])도 공지되어 있다(문헌[MAbs. 2009 November; 1(6): 539-547]). 또한, scFv-Fc 및 스캐폴드-Fc와 같은 분자 형태를 사용했을 때조차도, Fc의 이종 조합을 우선적으로 분비함으로써 이중특이적 항체를 효율적으로 생성할 수 있다(문헌[Ridgway JB et al., Protein Engineering 1996, 9: 617-621]; 문헌[Merchant AM et al. Nature Biotechnology 1998, 16: 677-681]; WO 2006/106905; 및 문헌[Davis JH et al., Protein Eng Des Sel. 2010, 4: 195-202]).
이중특이적 항체는 또한 다이아바디를 사용하여 생성될 수 있다. 이중특이적 다이아바디는 2개의 교차혼합 scFv 단편의 헤테로이량체이다. 더욱 구체적으로, 약 5개 잔기의 비교적 짧은 연결기를 사용하여, 2 종류의 항체(A 및 B)로부터 유도된 VH 및 VL을 연결하여 제조된 VH(A)-VL(B) 및 VH(B)-VL(A)를 사용하여 헤테로이량체를 형성함으로써 이중특이적 다이아바디를 제조한다(문헌[Holliger P et al. Proc Natl. Acad. Sci. USA 1993, 90: 6444-6448]).
바람직한 구조는 2개의 scFv를 약 15개 잔기를 포함하는 유연하고 비교적 긴 연결기로 연결하고(단일 쇄 다이아바디: 문헌[Kipriyanov SM et al. J. of Molecular Biology. 1999, 293: 41-56]), 적절한 아미노산 치환을 수행하여 달성할 수 있다(놉-인투-홀(knobs-into-holes): 문헌[Zhu Z et al. Protein Science. 1997, 6: 781-788]; VH/VL 계면 조작: 문헌[Igawa T et al. Protein Eng Des Sel. 2010, 8: 667-77]).
2개 유형의 scFv를 약 15개 잔기를 포함하는 유연하고 비교적 긴 연결기로 연결하여 생성될 수 있는 sc(Fv)2는 또한 이중특이적 항체일 수 있다(문헌[Mallender WD et al. J. of Biological Chemistry, 1994, 269: 199-206]).
변형된 항체의 예는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 다양한 분자에 연결된 항체를 포함한다. 본 발명의 항체는 상기 변형된 항체를 포함한다. 본 발명의 맥락에서, 변형된 항체가 연결된 기질은 제한되지 않는다. 상기 변형된 항체는 화학적으로 변형시켜 수득한 항체에 의해 수득할 수 있다. 상기 방법은 당해 분야에 잘 수립되어 있다.
본 발명의 항체는 인간 항체, 마우스 항체, 래트 항체 등을 포함하고, 이들의 기원은 제한되지 않는다. 이들은 또한 유전적으로 변형된 항체, 예컨대 키메라 또는 인간화 항체일 수 있다.
인간 항체를 수득하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 인간 항체 유전자의 전체 레퍼토리를 갖는 형질전환 동물을 목적한 항원으로 면역시켜 목적한 인간 항체를 수득할 수 있다(WO 93/12227, WO 92/03918, WO 94/02602, WO 94/25585, WO 96/34096, 및 WO 96/33735 참조).
유전적으로 변형된 항체는 또한 공지된 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 구체적으로, 예를 들어 키메라 항체는 면역시킨 동물 항체의 H 쇄 및 L 쇄 가변 영역, 및 인간 항체의 H 쇄 및 L 쇄 불변 영역을 포함할 수 있다. 키메라 항체는 면역시킨 동물로부터 유도된 항체의 가변 영역을 암호화하는 DNA를 인간 항체의 불변 영역을 암호화하는 DNA와 연결하고, 이를 발현 벡터에 삽입한 후 이를 숙주 세포에 도입하여 항체를 제조하는 단계에 의해 수득할 수 있다.
인간화 항체는 종종 "재성형된" 인간 항체로 지칭되는 변형된 항체이다. 인간화 항체는 면역시킨 동물로부터 유도된 항체의 CDR을 인간 항체의 상보성 결정 영역에 전달하여 구축된다. 상기 목적을 위한 통상의 유전적 재조합 기법은 공지되어 있다(EP 239400; WO 96/02576; 문헌[Sato K et al., Cancer Research 1993, 53: 851-856]; WO 99/51743 참조).
본 발명의 다중특이적 항원-결합 분자는 FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하고, FVIII의 공인자 기능을 기능적으로 대신하고, 분자가 FVIII을 기능적으로 대신하는 이중특이적 항체로 알려진 hA69-KQ/hB26-PF/hAL-AQ(WO 2006/109592에 기재됨)에 비해 높은 FXa 생성-촉진 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 것이다. 더욱이, 본 발명의 항체는 보통 항-FIXa 항체의 가변 영역 및 항-FX 항체의 가변 영역을 포함하는 구조를 갖는다.
본 발명의 다중특이적 항원-결합 분자는 FIX 및/또는 FIXa를 인식하는 제 1 항원 결합 부위 및 FX를 인식하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 FVIII을 기능적으로 대신하고, FVIII의 기능을 대신하는 기능은 서열번호 165 및 166으로 이루어진 H 쇄, 및 서열번호 167로 이루어진 공통 공유된 L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(hA69-KQ/hB26-PF/hAL-AQ)의 활성에 비해 높은 FXa 생성-촉진 활성에 의해 야기된다.
본 발명의 다중특이적 항원-결합 분자는 FIX 및/또는 FIXa를 인식하는 항원 결합 부위를 포함하는 제 1 폴리펩티드 및 제 3 폴리펩티드, 및 FX를 인식하는 항원 결합 부위를 포함하는 제 2 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드를 포함한다. 제 1 폴리펩티드 및 제 3 폴리펩티드, 및 제 2 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드는 각각 항체 H 쇄의 항원 결합 부위 및 항체 L 쇄의 항원 결합 부위를 포함한다.
예를 들어, 본 발명의 다중특이적 항원-결합 분자에서, 제 1 폴리펩티드 및 제 3 폴리펩티드는 FIX 또는 FIXa에 대한 항체의 H 쇄 및 L 쇄 각각의 항원 결합 부위를 포함하고; 제 2 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드는 FX에 대한 항체의 H 쇄 및 L 쇄 각각의 항원 결합 부위를 포함한다.
동시에, 제 1 폴리펩티드 및 제 3 폴리펩티드, 및 제 2 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드에 포함된 항체 L 쇄의 항원 결합 부위는 공통 공유된 L 쇄일 수 있다.
본 발명에서 항체 L 쇄의 항원 결합 부위를 포함하는 폴리펩티드는 바람직하게는 FIX, FIXa 및/또는 FX에 결합하는 항체 L 쇄의 서열의 전부 또는 일부를 포함하는 폴리펩티드이다.
본 발명에서, 어구 "FVIII을 기능적으로 대신하는"은 FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하고, FX의 활성화를 촉진함(FXa 생성을 촉진함)을 의미한다.
본 발명에서, "FXa 생성-촉진 활성"은 본 발명의 다중특이적 항원-결합 분자를, 예를 들어 FXIa(FIX 활성화 효소), FIX, FX, F 합성 기질 S-2222(FXa의 합성 기질), 및 인지질을 포함하는 측정 시스템을 사용하여 평가함으로써 확인할 수 있다. 이 측정 시스템은 A형 혈우병 경우에 질병 심각도와 임상 증상 사이에 연관성을 나타낸다(문헌[Rosen S Andersson M, Blomback M et al. Clinical applications of a chromogenic substrate method for determination of FVIII activity. Thromb Haemost 1985, 54: 811-23]). 즉, 본 측정 시스템에서, 높은 FXa 생성-촉진 활성을 나타내는 시험 기질은 A형 혈우병에서 출혈 에피소드에 대하여 더 나은 지혈 효과를 나타내는 것으로 기대된다. 이러한 결과와 함께, FVIII을 기능적으로 대신하는 활성을 갖는 다중특이적 항원-결합 분자가 hA69-KQ/hB26-PF/hAL-AQ보다 높은 활성을 갖는 분자인 경우, 이는 훌륭한 혈액 응고-촉진 활성을 수득할 수 있고, 훌륭한 효과는 출혈, 출혈을 수반하는 질병, 또는 출혈에 의해 야기된 질병을 예방하고/하거나 치료하기 위한 약학 성분으로 수득할 수 있다. 전술된 약학 성분과 같은 훌륭한 효과를 수득하기 위해, 예를 들어 US 2013/0330345의 실시예 2에 기재된 조건하에 측정된 FXa 생성-촉진 활성은 바람직하게는 hA69-KQ/hB26-PF/hAL-AQ의 활성보다 크고, 특히, 상기 활성은 더욱 바람직하게는 Q153-G4k/J142-G4h/L180-k의 활성과 동일하거나 이보다 크다. 여기서, "FXa 생성-촉진 활성"은 항체 용액에서 20 분에 걸친 흡광도 변화에서 용매에서 20 분에 걸친 흡광도 변화를 차감하여 수득된 값이다.
본 발명의 바람직한 실시양태는 FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 FVIII을 기능적으로 대신하는 다중특이적 항체이다.
본 발명의 전술된 다중특이적 항체는 바람직하게는 항-FIX/FIXa 항체의 H 쇄 CDR 또는 이와 기능적으로 동일한 CDR, 및 항-FX 항체의 H 쇄 CDR 또는 이와 기능적으로 동일한 CDR을 포함하는 항체이다.
본 발명의 일 양상에서, 다중특이적 항체와 FIX의 조합물시, FIX, FII, FVII 및 FX를 포함하는 프로트롬빈 복합 농축물(4-성분 PCC), 또는 단지 또는 주로 FIX, FII 및 FX를 함유하는 프로트롬빈 복합 농축물(3-성분 PCC)이 사용될 수 있다. 3-성분 PCC는 FVII의 결핍으로 인해, 이의 활성 형태 FVIIa와 경쟁할 수 있는 본 발명의 조합물에 대한 하나의 바람직한 실시양태이다. 본 발명의 또 하나의 양상. 다중특이적 항체와 조합하는 FIX 이외에, FII, FX, 또는 FII 및 FX가 또한 제조된 제제 혼합물로서 사용될 수 있다. 전술된 단백질 이외에, 또한 구조적 단백질 섬유소원, 또는 항섬유소용해제, 예컨대 트라넥삼산 또는 아프로티닌이 첨가될 수 있다.
혈액 응고 인자는 자이모겐(예를 들어 FIX)처럼 또는 활성화된 형태(예를 들어 FIXa)처럼 이들의 비활성 전구체 형태로 존재할 수 있다. 자이모겐은 활성 효소가 되기 위한 생화학적 변화(예컨대 활성 부위를 보여주는 가수분해 반응, 활성 부위를 보이기 위한 배열의 변화)가 필요하다. 생화학적 변화는 보통 전구체 효소의 특정한 부분이 이를 활성화시키기 위해 절단되는 라이소좀에서 발생한다. 활성화된 혈액 응고 인자는 전형적으로 예를 들어 FIXa, FXa 등으로 축약된다. 예를 들어 응고 인자 IX의 활성화 기작은 문헌[Biol Chem. 2009 May-Jun; 390(5-6):391-400]에 기재되어 있다.
본원에 사용된 용어 "혈액 응고 인자", "응고 인자" 또는 "(혈액) 응고 인자", 또는 각각의 혈액 응고 인자 수 앞에 "F"로만 약칭된 형태(예를 들어 FVIII, FIX, FX 등)는 상호교환할 수 있고 인간 응고 시스템의 각각의 인간 혈액 응고 인자를 지칭한다. 이들의 활성화된 형태에서, 예를 들어 FVIIIa, FIXa, FXa 등으로 약칭된다. 이들의 비활성화된 형태에서, FVIII, FIX, FX 등으로 약칭된다.
"응고 인자 IX"(FIX)는 비활성 전구체이다. 단일 펩티드를 제거한 후, (접촉 경로의) 인자 XIa 또는 (조직 인자 경로의) 인자 VIIa를 절단하여 다이설파이드 결합에 의해 연결된 쇄를 2-쇄 형태로 생성한다(문헌[Di Scipio RG, et al, J. Clin. Invest. 61(1978) 1528-38]; 문헌[Taran LD Biochemistry Mosc. 62(1997) 685-93]). Ca2 +, 막 인지질 및 인자 VIII 공인자의 존재하에, 인자 IXa로 활성화된 경우, 인자 X에서 1개 아르기닌-이소류신을 가수분해하여 인자 Xa를 형성한다. 따라서, 본원에 사용된 용어 "응고 인자 IX"("FIX")는 비활성화된 응고 인자 IX를 지칭한다.
인자 IX의 결핍은 크리스마스병(혈우병 B)을 야기한다(문헌[Biggs, R; et al British Medical Journal 2(4799) 1952 1378-82]). 인자 IX의 돌연변이는 100개 이상 기재되어 있고, 이중 일부는 증상을 야기하지 않지만, 대부분은 상당한 출혈성 질환을 야기한다. 원래의 크리스마스병 돌연변이는 크리스마스 DNA 서열확인에 의해 확인되었고, 이는 시스테인이 세린으로 변경된 돌연변이를 나타낸다(문헌[Taylor, S. A.; et al, Thrombosis and haemostasis 67(1992) 63-65]). 재조합 인자 IX는 크리스마스병을 치료하는데 사용되고, "베네픽스(BeneFIX, 등록상표)" "알프롤릭스(Alprolix, 등록상표)", 및 "릭수비스(Rixubis, 등록상표)"로 시판중이다(모두 재조합 인자 IX 제품의 상품명). 인자 IX의 일부 희귀한 돌연변이는 상승된 응혈 활성에서 야기하고, 응혈 질병, 예컨대 심정맥 혈전증을 초래할 수 있다(문헌[Simioni P, et al, N. Engl. J. Med. 361(2009) 1671-5]).
FIX는 415개 아미노산 길이의 단일 폴리펩티드 쇄로 합성된다. FIX는 (1) 도메인을 함유하는 감마-카복시글루탐산("Gla 도메인"), (2) 및 (3) 2개의 표피 성장 인자-유사 도메인("EGF-1 도메인", "EGF-2 도메인"), (4) 활성화 펩티드 영역("AP 영역"), 및 (5) 세린 프로테아제 도메인으로 이루어진 비활성 전구체 분자로서 혈액에 존재한다. FIX는 세포질 그물 및 골지체를 통해 전달되는 동안 대규모 번역후 변형을 진행한다: 신호 서열의 제거; Gla 도메인에서 간 미세소체 효소인 비타민 K 의존적 감마-글루탐일 카복실라제에 의해 12개 Glu 잔기의 감마-카복실화; AP 영역에서 N-157 및 N-167의 N-글리코실화; Gla 도메인에서 S-53 및 S-61, 및 AP 영역에서 T-159, T-169, T-172 및 T-179의 O-글리코실화; EGF-1 도메인에서 Asp-64에서 베타-하이드록실화; AP 영역에서, Tyr-155의 황산화 및 Ser-158의 인산화.
B형 혈우병에서, FIX의 양 또는 기능이 부족하다. 이 질병은 인간 혈장 유도된 제제(pdFIX) 또는 재조합 응고 인자 IX(rFIX)의 투여로 이루어진 대체 요법에 의해 성공적으로 치료된다. 혈장 유도된 제품은 프로트롬빈 복합 농축물(과거에 B형 혈우병의 치료를 위해 사용되었음) 또는 정제된 FIX 농축물(주로 친화력 정제된 인자 IX)이다. rFIX는 번역후 변형에 대하여 광범위하게 특성 규명하였다. pdFIX가 약간 다를지라도, 특이적 활성 및 약리 효과성은 필적할만하다.
pdFIX와 CHO 유도된 rFIX 사이에 생화학 비교는 형광성, 원편광 이색성 또는 분석용 초원심분리에 의해 측정된 분간하기 어려운 2차/3차 구조를 나타낸다. 번역후 변형에서 사소한 차이를 검출하였다. 반면에 pdFIX에서는 Gla 도메인에서 모든 12개 Glu 잔기가 차지하고(즉, Gla로 형질변형됨), 12개 부위 중 10개만이 rFIX에서 완전히 차지하였다(각각 Gla-40, 또는 Gla-40 및 Gla-36의 "카복실화부족"). N-연결된 글리칸은 완전히 시알릴화되고 pdFIX에서 높은 이질성(그러나, 이는 또한 pdFIX가 다양한 혈장 기증에 의한 혈장 풀(pool)로부터 제조된 사실에 기인할 수 있음); rFIX에서 낮은 이질성 및 종종 불완전한 시알릴화를 나타낸다. Ser-53은 rFIX에서 Xyl-Xyl-Gic-글리코실화된 반면, pdFIX에서 Ser-53은 추가의 Xyl-Glc-글리코실화를 함유한다(Ser-61은 2가지 형태에서 NeuAc-Gal-GlcNAc-Fuc-를 함유함). CHO 세포로부터 rFIX는 시알산 알파(2-3)-갈락토스 기로 캡핑된 탄수화물로 글리코시화를 나타내는 반면(CHO 세포는 알파(2-6)-시알릴트랜스퍼라제가 부족함), pdFIX는 말단 시알산 알파(2-6)-갈락토스 잔기를 함유한다. rFIX를 발현하기 위한 인간 숙주 세포(예컨대 HEK 293 세포)는 알파(2-3)- 및 알파(2-6)-시알릴트랜스퍼라제를 함유하고; 따라서 HEK 293 유도된 rFIX는 이 양상에서 시판중인 CHO-유도된 rFIX와 상이하다(문헌[White et al., Thromb. Haemost. 78(1)(1997), 261-265]; 문헌[Bond et al., Sem.Hematol. 35(2)(1998), Suppl.2, 11-17]; 문헌[Bebgie et al., Thromb. Haemost. 94(2005), 1138-1147]).
AP 영역에서 Ser-155의 낮은 인산화 정도 및 Tyr-158의 낮은 황산화 정도가 rFIX의 생체내 회복을 낮추는 원인인지를 추측하였다(52.61 ± 12.36%에 비해 rFIX를 단클론 항체로 정제된 pdFIX의 경우 37.81 ± 14.0%, 문헌[White et al.(1997)]). 문헌[Griffith et al,. J. Thromb. Haemost. 5(2007), Suppl. 2: P-M-043]에 N-글리칸 시알릴화가 rFIX의 생체내 회복에 중요함이 기록되어 있다. WO 2007/101681 A1에서, 25% 이상 내지 98% 미만의 완전히 인산화되고 황산화된 rFIX를 포함하는, 개선된 생체내 회복을 갖는 rFIX 생성물을 제공하였다.
CHO 발현된 rFIX 및 면역정제된 pdFIX의 제거 반감기를 비교할 수 있다(각각 18.10 ± 5.10 시간 및 17.66 ± 5.31 시간, 문헌[White et al., 1997]). AP 영역의 결실에 대한 보고에 기초하여(del(155-177) 돌연변이체는 야생형 형태와 비교하여 말단 대사 반감기가 45% 증가하였음을 나타냄, 문헌[Bebgie et al.(2005)]), 창(Chang) 등은 FIX를 뉴로아미니다제 및 N- 및 O-글리카나제로 처리하여 N- 및 O-연결된 탄수화물을 둘 다 제거하였다(문헌[Chang et al., J. Thromb. Haemost. 5(2007), Suppl.2: O-M-088]). 탈글리코실화된 FIX는 처리되지 않은 FIX보다 회복이 상당히 낮아졌지만, 탈글리코실화된 형태의 회복은 rFIX 및 pdFIX에서 통계적으로 상이하지 않았다. 따라서, 이 결과는 글리코실화가 FIX의 회복을 결정하는 주요한 역할을 함을 시사하는 것으로 결론내렸다. 또한, 생체내 회복시 황산화/인산화의 역할이 "비교적 사소한" 역할을 하는 것으로 결론내렸다. 상기 창의 문헌에서 rFIX 및 pdFIX의 탈글리코실화된 형태에 대하여 반감기 또는 활성 데이터는 보고되지 않았다.
임상 연구에서, rFIX는 안전하고 효과적인 것으로 나타났지만, pdFLX보다 20 내지 50% 더 많은 용량이 성공적인 치료를 위해 필요하다. 이는 전임상 및 임삼 연구로부터 수집된 약동학 데이터에 의해 입증된 바와 같이, pdFIX(전술됨)의 경우 생체내 회복보다 CHO 유도된 rFIX의 경우 생체내 회복이 30 내지 50% 더 낮기 때문이고, pdFIX 및 rFIX는 B형 혈우병 환자에서 임상 연구 및 상이한 동물 모델과 비교하였다. 그러나, rFIX의 순환 반감기는 pdFIX 제제와 구별할 수 없다.
FIX 약물을 개선하기 위해, 예를 들어 (rFIX에 대하여) 증가된 mRNA 생성, 콜라겐 IV에 대하여 감소된 결합, 특이적 활성의 증가, pdFIX와 더 유사한 rFIX를 제조하여 회수율을 개선하기 위한 다양한 시도를 하였고(문헌[Pipe, Sem.Thromb.Hemost. 30(2)(2004), 227-237]; WO 2007/101681 A1); (pdFIXd에 대하여) 농축 및 특이적 정제(US 5,639,857 A)를 시도하였다. 그러나, 여전히 성공적인 치료를 위해 통상의 FIX 제제보다 더 적은 용량으로 투여하거나 더 긴 시간 간격으로 투여될 수 있는 개선된 FIX 제제가 강력히 요구되고 있다. 반면에 종래 기술에서 대부분의 전략은 회수율을 개선하고 FIX 활성을 증가시키는데 전념하고, 단백질의 반감기를 연장하려는 목적 전략은 드물고 이는 주로 rFIX 및 pdFIX의 반감기가 동일하기 때문이다. 이는 주로 화학적 변형 또는 돌연변이에 대한(심지어 적은) FIX 단백질의 공지된 감광도 및 인간 단백질에 돌연변이를 도입하는 잠재적인 면역학적 효과 때문이다(문헌[Bebgie et al.(2005); Kaufman, Thromb. Haemost. 79(1998), 1068-1079]; 문헌[Hansson et al., J Thromb. Haemost. 3(2005), 2633-2648]; 문헌[Wojcik et al., Biochem.J. 323(1997), 629-636]).
본원에 사용된 용어 "응고 인자 IX"(FIX)는 혈액 응고 인자 IX의 전형적인 특징을 갖는 임의의 형태의 인자 IX이다. FIX는 혈장으로부터의 FIX(pdFIX), 및 FIX 결핍에 의해 야기된 환자(예를 들어 B형 혈우병)에서 출혈성 질환을 치료할 수 있는 임의의 형태의 rFIX를 포함한다. FIX는 GIa 도메인, 2개의 EGF 도메인(EGF-1 및 EGF-2), AP 영역 및 세린 프로테아제 도메인으로 구성된다. 본 발명에 따른 FIX는 인간 pdFIX 및 인간 rFIX처럼 동일한 아미노산 서열 또는 이의 모든 기능적인 변경, 즉, (아미노산 서열 및 번역 후 변형 둘 다에서) 비교가능하거나 개선된 FIX의 생체내 활성을 제공하는 변경을 갖는다. 동물에서 각각의 FIX 관련된 출혈성 질환을 치유하기 위해, 상응하는 FIX 서열을 적용할 수 있거나 관련된 동물 종에서 충분하게 교차-활성을 나타내는 그러한 FIX를 형성할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 FIX는 생체내에서 단백질의 적절한 기능에 필요한 모든 번역후 변형을 나타낸다. 많은 문헌에서 FIX의 기능적인 형태, 예를 들어 위치 148에서 천연 발생 Ala/Thr 교환을 기재하고 있고; 본 발명에 따른 수계 친수성 중합체에 공유 결합할 수 있는 적합한 FIX 분자는 예를 들어, 문헌[White et al.(1997)]; 문헌[Pipe (2004)]; WO 2007/101681 A1; US 5,639,857 A; 문헌[Bebgie et al.(2005)]; 문헌[Kaufman (1998)]; 문헌[Hansson et al.(2005)], 문헌[Wojcik et al.(1997)]에 기재되어 있다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 FIX는 재조합으로 생성된 FIX이다. 용어 "재조합"은 FIX와 관련하여 사용될 때, 이종 또는 비천연 발생 핵산 또는 단백질을 숙주 세포에 도입하거나, 숙주 세포에서 네이티브 핵산 또는 단백질은 개조하여 생성된 FIX를 나타낸다. 따라서, 예를 들어, 재조합 세포는 세포의 네이티브(비재조합) 형태 내에서 찾을 수 없는 유전자를 발현하거나, 야생형 유전자 및 세포의 게놈에서 네이티브 위치에 존재하지 않는 변이체 유전자를 발현하거나, 발현되거나 전혀 발현되지 않은 조건하에 달리 이상하게 발현된 네이티브 유전자를 발현한다. 용어 "생물학적으로 제조된" FIX는, FIX가 상기 유기체 또는 세포로부터 단리된 후 추가의 화학적 변형없이(상기 유기체 또는 세포에 의해 이행할 수 없음) 유기체 또는 세포에 의해 생성되는 모든 FIX 형태를 포괄한다.
시판중인 재조합 인자 IX 생성물은 "베네픽스(등록상표)", "알프롤릭스(등록상표)(길어진 반감기를 갖는 재조합 인자 IX Fc 융합 단백질)" 및 "릭수비스(등록상표)"(모두 재조합 인자 IX 제품 베네픽스(상표)에 대한 상표명)를 포함한다.
시판중인 재조합 인자 IX 제품은 종종 안정하게 형질감염된 중국 햄스터 난소(CHO) 세포를 사용하여 제조된다. CHO 세포는 글리코실화 및 다른 번역후 변형 능력을 제공한다. 이러한 세포와 함께, 대규모 현탁 배양은 동물- 또는 인간-유도된 원료의 첨가 없이 유지될 수 있다. 이러한 시판중인 제품 중 하나의 제조시(상표명 베네픽스(상표)로 판매중임), rFIX는 엔도펩티다제 PACE/푸린과 함께 공발현되고 다중 여과 및 크로마토그래피 단계를 통해 주로 정제된다.
용어 "이종"은 핵산의 비율과 관련하여 사용될 때, 핵산이 자연에서 서로 동일한 관계에서 발견될 수 없는 2개 이상의 서열을 포함하는 것을 나타낸다. 일 예에서, 이 용어는 게놈에서 이의 네이티브 위치에 존재하지 않는 핵산을 지칭한다. 또 하나의 예에서, 새로운 기능성 핵산을 생성하기 위해 정렬된 관련되지 않은 유전자로부터 2개 이상의 서열, 예를 들어 1개 공급원으로부터 프로모터 및 또 하나의 공급원으로부터 암호화 영역을 갖는 핵산을 재조합적으로 생성한다. 유사하게, 이종 단백질은, 자연에서 서로 동일한 관계에서 발견되지 않은 2개 이상의 서열을 포함하는 단백질(예를 들어, 융합 단백질), 또는 이종 핵산으로부터 유도된 단백질을 나타낸다.
이로 인해, FIX의 임의의 생물학적으로 활성인 유도체는 FIX의 질적으로 동일한 기능 및/또는 생물학적 특성, 예컨대 결합 특성, 및/또는 동일한 구조적 기초, 예컨대 펩티드 백본을 갖는 FIX의 임의의 유도체를 포함하여 변형될 수 있다. 상기 폴리펩티드의 생물학적 활성을 없애지 않는(즉, 활성을 야생형 형태(=100%)의 10% 미만, 또는 심지어 5% 미만으로 줄이는) FIX의 폴리펩티드 서열의 아미노산의 작은 결실, 부가 및/또는 치환은 특히 개선된 특이적 활성(야생형 형태의 활성을 100% 초과)을 갖는 생물학적으로 활성인 유도체로서 본원에 또한 포함된다. 본 발명에 따른 FIX는 임의의 척추동물, 예를 들어 포유동물로부터 유도될 수 있다. 본 발명의 일 특이적 예에서, FIX는 인간 FIX이다. 본 발명에 따른 FIX는 당해 분야에 공지된 임의의 방법으로 제조될 수 있다. 이는 예를 들어 RNA의 역 전사 및/또는 DNA의 증폭을 통해서 유전적 조작함으로써 재조합 DNA의 생성을 위해 당해 분야에 공지된 임의의 방법을 포함할 수 있다. 추가적으로, FIX를 암호화하는 재조합 DNA, 예를 들어 플라스미드는 또한 플라스미드로 성공적으로 형질감염된 세포를 선택하기 위한 선택 마커를 암호화하는 DNA 서열을 함유할 수 있다. 본 발명의 예에서, 상기 플라스미드는 또한 선택 마커에 대하여, 예를 들어 항생제 G418에 대해 내성 유전자, 예를 들어 G418에 내성을 부여하는 네오 내성 유전자를 전달함으로써 내성을 부여할 수 있다.
rFIX의 제조는 예를 들어 전기천공법 또는 미세투입법을 통한 형질감염에 의해 재조합 DNA를 진핵 세포로 도입하기 위한 당해 분야에 공지된 임의의 방법을 포함할 수 있다. 예를 들어, 인간 FIX의 재조합 발현은 강한 프로모터와 같은 하나 이상의 조절 서열의 제어하에 인간 FIX 암호화 DNA서열을 함유하는 발현 플라스미드를 적절한 형질감염 방법에 의해 적합한 숙주 세포주로 도입하여 게놈에 안정하게 통합된 도입된 서열을 갖는 세포를 야기함으로써 달성될 수 있다. 칼슘-포스페이트 동시-침전 방법은 본 발명에 따라 사용될 수 있는 형질감염 방법의 예이다.
본 발명의 범주 내에서 용어 "아미노산"은 모든 천연 발생 L.알파.-아미노산을 포함하는 것을 의미한다. 천연 발생 아미노산에 대한 1 글자 및 3 글자 약어가 본원에 사용된다(문헌[Lehninger, Biochemistry, 2d ed., Worth Publishers, New York, 1995: 71-92]).
본원에 사용된 용어 "응고 인자 II"(FII, 프로트롬빈)는 혈액 응고 인자 II의 전형적인 특징을 갖는 인자 II 분자의 임의의 형태를 지칭한다. 혈액 응고 인자 II는 프로트롬빈으로도 공지된 자이모겐이고 단백질 분해로 분열하여 응고 캐스케이드에서 트롬빈으로도 공지된 활성화된 혈액 응고 인자 II(FIIa)를 형성하고, 이는 궁극적으로 혈액 손실 감소를 야기한다. 트롬빈은 가용성 섬유소원을 피브린의 불용성 가닥으로 전환할 뿐만 아니라 많은 다른 응고-관련 반응을 촉매화하는 세린 프로테아제로서 작용한다.
"프로트롬빈 복합 농축물"[PCC, 그 중에서도 상표명 베리플렉스(Beriplex, 등록상표), 옥타플렉스(Octaplex, 등록상표), 크센트라(Kcentra, 등록상표), 코팩트(Cofact, 등록상표)]은 신선하게 동결된 인간 혈장으로부터 제조된, 혈액 응고 인자 II, VII, IX 및 X, 뿐만 아니라 단백질 C 및 S의 조합물이다. 이는 응고를 촉진하는 신속한 작용이 필요한 출혈이 (예를 들어, 뇌 또는 장에서) 발생했을 때 경구 항응고 요법의 효과를 역전시키는데 사용된다. 이는 주사용 용액을 위해 분말 및 용매로서 사용할 수 있다.
에포님 스투어트-파워(eponym Stuart-Prower) 인자 또는 프로트롬비나제, 트롬보키나제 또는 트롬보플라스틴으로도 공지된 "응고 인자 X"는 응고 캐스케이드의 효소이다. 본원에 사용된 용어 "응고 인자 X"(FX)는 혈액 응고 인자 X의 전형적인 특징을 갖는 인자 X 분자의 임의의 형태일 수 있다. 인자 X는 간에서 합성되고 이의 합성을 위해 비타민 K가 필요하다. 인자 X는 인자 IX(이의 공인자, 내인성 Xase로 공지된 착제에서 인자 VI(ii) 및 인자 VII 둘 다에 의해 이의 공인자, 조직 인자(외인성 Xase로 공지된 착제)로 인자 Xa를 활성화시킨다. 이는 2개 장소(arg-thr, 이어서 arg-ile 결합)에서 프로트롬빈을 절단하여 활성 트롬빈을 수득함으로써 작용한다. 이 과정은 인자 Xa가 프로트롬비나제 착체에서 활성화된 공인자 V와 착체화 될 때 극대화된다. 인자 Xa는 단백질 Z-의존적 프로테아제 억제제(ZP(i), 세린 프로테아제 억제제(세르핀)에 의해 비활성화된다. 인자 Xa에 대한 이 단백질의 친화력은 단백질 Z의 존재에 의해 1000배 증가하는 반면, 이는 인자 XI의 비활성화를 위해 단백질 Z를 필요로 하지 않는다. 단백질 Z의 결합은 인자 Xa 활성 및 혈전증 경향을 증가시킨다. 인자 X의 반감기는 40 내지 45 시간이다. 인자 X는 신선하게 동결된 혈장의 일부 및 프로트롬빈 착체 및 프로트롬빈 복합 농축물이다. 시판중인 농축물은 씨에스엘 베링(CSL Behring)에서 제조된 인자 X P 베링이다. 바이오 프로덕츠 래보래토리(Bio Products Laboratory)는 현재 고순도 인자 X를 개발중이다.
인자 VII(혈액-응고 인자 V(ii)는 응고 캐스케이드에서 혈액을 응고시킬 수 있는 단백질 중 하나이다. 이는 세린 프로테아제 부류의 효소이다. 본원에 사용된 용어 "응고 인자 VII"(FV(ii)는 혈액 응고 인자 VII의 전형적인 특징을 갖는 인자 VII 분자의 임의의 형태일 수 있다. 이의 활성화된 형태 인간 인자 VIIa의 재조합 형태(eptacog 알파[활성화됨], 노보세븐(NovoSeven))는 혈우병 환자에서 제어되지 않은 출혈의 치료를 위해 승인되었다. 심각한 제어할 수 없는 출혈에 사용될 때 안정성 우려가 있었다.
인자 VII(FV(ii)의 주요 역할은 조직 인자와 함께 응고 과정을 시작하는 것이다(TF/응고 인자 III/ FI(ii). 조직 인자는 혈관의 외부에서 발견된다(보통 혈류에 노출되지 않음). 혈관이 손상되면, 조직 인자는 혈액 및 순환 인자 VII에 노출된다. 일단 TF에 결합되면, FVII는 상이한 프로테아제, 특히 트롬빈(인자 IIa), 인자 Xa, IXa, XIIa, 및 FVIIa-TF 착체 자체에 의해 FVIIa로 활성화된다. 인자 VIIa와 TF의 착체는 인자 IX 및 인자 X가 활성 프로테아제인 인자 IXa 및 인자 Xa로 각각 전환하도록 촉매화한다(문헌[Wajima T, et al, Clin Pharmacol Ther 86(2009). 290-8]). 인자의 작용은 조직 인자 경로 억제제(TFP(i)에 의해 지연되고, 이는 응고의 개시 직후 거의 방출된다. 인자 VII은 비타민 K 의존적이고, 이는 간에서 생성된다. 와파린 또는 유사한 항응고제의 사용은 FVII의 간 합성을 감소시킨다.
본원에 사용된 용어 "-에 결합하다", "인식하다", "-에 특이적으로 결합하다" 또는 "항-"은 상호교환적이고 다중특이적 항체, 또는 항체가 표적시 진단제 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화력을 갖는 각각의 항원에 결합할 수 있는 이의 항원 결합 부위를 지칭한다. 바람직하게는, 본원에 기재된 다중특이적 항체는 이중특이적이고 제 1 항원으로서 FIX 및/또는 FIXa(FIX의 활성화된 형태), 및 제2 항원으로서 FX에 각각 결합한다. 일 실시양태에서, 연관되지 않은 비-FIX, 비-FIXa, 비-FX 단백질에 대한 항-Bsab FIX/FX 항체의 결합 정도는 예를 들어 방사선 면역 어세이(RIA)에 의해 측정된 바와 같이 FIX, FIXa, FX 각각에 대한 항체의 결합의 약 10% 미만이다..
본원에 사용된 용어 "항원 결합 부위"는 리간드가 실제로 결합하는 항체 분자의 영역을 나타낸다. 용어 "항원 결합 부위"는 항체 중쇄 가변 도메인(VH) 및/또는 항체 경쇄 가변 도메인(VL), 또는 VH/VL 쌍을 포함하고, 전체 항체 또는 항체 단편, 예컨대 단일 쇄 Fv, VH 도메인 및/또는 VL 도메인, Fab, 또는 (Fab)2로부터 유도될 수 있다. 본 발명의 실시양태에서, 각각의 항원 결합 부위는 항체 중쇄 가변 도메인(VH) 및/또는 항체 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하고, 바람직하게는 항체 경쇄 가변 도메인(VL) 및 항체 중쇄 가변 도메인(VH)으로 구성된 쌍으로 형성되되, 상기 항체 경쇄 가변 도메인(VL)은 바람직하게는 공통 공유된 L 쇄의 일부이다.
용어 "이때 응고 인자 IX와 조합하여 치료한다"는 관련된 질환을 (a) 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체, 및 (b) 응고 인자 IX로 조합 치료함을 지칭한다. 조합 치료는 동시에 또는 순차적일 수 있고, 이때 바람직하게는 2개(또는 모든) 활성제가 이들의 생물학적 활성을 동시에 발휘하는 시간이다. 상기 다중특이적 항체 및 FIX는 동시에 또는 순차적으로(예를 들어 연속 투입을 통해 정맥내로) 동시투여된다.
본원에 기재된 다중특이적 항원-결합 분자는 2개 이상의 상이한 유형의 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 제 1 항원 결합 부위 및 제 2 항원 결합 부위를 포함한다. 제 1 항원 결합 부위 및 제 2 항원 결합 부위가 FIX 및/또는 FIXa, 및 FX에 각각 결합하는 한 특히 제한되지 않으면, 이의 예는 항원과 결합하는데 필요한 부위, 예컨대 항체, 스캐폴드 분자(항체-유사 분자) 또는 펩티드, 상기 부위를 함유하는 단편을 포함한다. 스캐폴드 분자는 표적 분자에 결합하여 기능을 나타내는 분자이고, 임의의 폴리펩티드가 하나 이상의 표적 항원에 결합할 수 있는 형태적으로 안정한 폴리펩티드로 존재하는 한 임의의 폴리펩티드가 사용될 수 있다. 상기 폴리펩티드의 예는 항체 가변 영역, 피브로넥틴(WO 2002/032925), 단백질 A 도메인(WO 1995/001937), LDL 수용체 A 도메인(WO 2004/044011, WO 2005/040229), 안키린(WO 2002/020565) 등, 및 또한 문헌[Nygren et al,. Current Opinion in Structural Biology, 7: 463-469(1997)]; 및 문헌[Journal of Immunol Methods, 290: 3-28(2004)], 문헌[Binz et al., Nature Biotech 23: 1257-1266(2005)], 및 문헌[Hosse et al., Protein Science 15: 14-27(2006)]에 기재된 분자를 포함한다. 더욱이, 문헌[Curr Opin Mol Ther. 2010 Aug; 12(4): 487-95] 및 문헌[Drugs. 2008; 68(7): 901-12]에 언급된 바와 같이, 표적 항원에 결합할 수 있는 펩티드 분자를 사용할 수 있다.
여기서, 다중특이적 항원-결합 분자는 2개 이상의 상이한 유형의 항원에 결합할 수 있는 분자인 한 특히 제한되지 않지만, 예는 전술된 항원 결합 부위를 함유하는 폴리펩티드, 예컨대 항체 및 스캐폴드 분자뿐만 아니라 이의 단편, 및 핵산 문자 및 펩티드를 포함하는 압타머를 포함하고, 이들은 단일 분자 또는 이의 다합체일 수 있다. 바람직한 다중특이적 항원-결합 분자는 2개 이상의 상이한 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 다중특이적 항체를 포함한다. 본 발명의 FVIII을 기능적으로 치환하는 활성을 갖는 항체의 특히 바람직한 예는 2개의 상이한 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 이중특이적 항체(BsAb)를 포함한다(이는 이중 특이적 항체로도 불릴 수 있음).
본 발명에서, 용어 "공통 공유된 L 쇄"는 항체의 2개 이상 상이한 H 쇄(중쇄)와 연결할 수 있고, 각각의 항원에 결합력을 나타내는 항체의 L 쇄(경쇄)를 지칭한다. 여기서, 용어 "상이한 H 쇄"는 바람직하게는 상이한 항원에 대한 항체의 H 쇄를 지칭하지만, 이에 제한되지 않고, 또한 아미노산 서열이 서로 상이한 H 쇄를 지칭한다. 공통 공유된 L 쇄는 예를 들어 WO 2006/109592에 기재된 방법에 따라 수득할 수 있다.
본 발명의 다중특이적 항원-결합 분자(바람직하게는 이중특이적 항체)는 2개 이상의 상이한 항원에 특이성을 갖는 항체, 또는 상기 항체의 단편을 포함하는 분자이다. 본 발명의 항체는 특히 제한되지만, 바람직하게는 단클론 항체이다. 본 발명에 사용된 단클론 항체는 동물, 예컨대 인간, 마우스, 래트, 햄스터, 토끼, 양, 낙타 및 원숭이로부터 유도된 단클론 항체를 포함할 뿐만 아니라, 인공적으로 변형된 유전자 재조합 항체, 예컨대 키메라 항체, 인간화 항체 및 이중특이적 항체를 포함한다.
또한, 본 발명의 다중특이적 항원-결합 분자가 될 항체의 L 쇄는 상이할 수 있지만, 바람직하게는 공통 공유된 L 쇄를 갖는다.
본 발명의 다중특이적 항원-결합 분자는 바람직하게는 유전적 재조합 기술을 사용하여 제조된 재조합 항체이다(예를 들어, 문헌[Borrebaeck CAK and Larrick JW, THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODY, Published in the United Kingdom by MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990] 참조). 재조합 항체는 하이브리도마 또는 항체-생성 세포, 예컨대 항체를 생성하는 감작화된 림프구로부터 항체를 암호화하는 DNA를 클로닝하고, 이들을 적합한 벡터로 삽입한 후 숙주(숙주 세포)에 도입하여 항체를 생성하여 수득할 수 있다.
또한, 본 발명의 항체는 전체 항체뿐만 아니라 항체 단편 및 저분자량 항체(미니바디), 및 변형된 항체를 포함할 수 있다.
본 발명의 다중특이적 항원-결합 분자는 FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하는 것이고, FVIII의 공인자 기능을 기능적으로 대신하고, FVIII을 기능적으로 대신하는 이중특이적 항체로서 공지되어 있는 hA69-KQ/hB26-PF/hAL-AQ(WO 2006/109592에 기재됨)에 비해 더 높은 FXa 생성-촉진 활성이 있는 것으로 특성 규명된다. 또한, 본 발명의 항체는 보통 항-FIXa 항체의 가변 영역 및 항-FX 항체의 가변 영역을 포함하는 구조를 갖는다.
더욱 구체적으로, 본 발명은 FVIII을 기능적으로 대신하는, FIX 및/또는 FIXa를 인식하는 제 1 항원 결합 부위 및 FX를 인식하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항원-결합 분자를 제공하고, 이때 FVIII의 기능을 대신하는 기능은 서열번호 165 및 166으로 이루어진 H 쇄, 및 서열번호 167로 이루어진 공통 공유된 L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(hA69-KQ/hB26-PF/hAL-AQ)의 활성에 비해 더 높은 FXa 생성-촉진 활성에 의해 야기된다.
본 발명의 다중특이적 항원-결합 분자는 FIX 및/또는 FIXa를 인식하는 항원 결합 부위를 포함하는 제 1 폴리펩티드 및 제 3 폴리펩티드, 및 FX를 인식하는 항원 결합 부위를 포함하는 제 2 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드를 포함한다. 제 1 폴리펩티드 및 제 3 폴리펩티드, 및 제 2 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드는 각각 항체 H 쇄의 항원 결합 부위 및 항체 L 쇄의 항원 결합 부위를 포함한다.
예를 들어, 본 발명의 다중특이적 항원-결합 분자에서, 제 1 폴리펩티드 및 제 3 폴리펩티드는 FIX 또는 FIXa에 대한 항체 각각의 H 쇄 및 L 쇄의 항원 결합 부위를 포함하고; 제 2 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드는 FX에 대한 항체 각각의 H 쇄 및 L 쇄의 항원 결합 부위를 포함한다.
동시에, 제 1 폴리펩티드 및 제 3 폴리펩티드, 및 제 2 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드에 포함된 항체 L 쇄의 항원 결합 부위는 공통 공유된 L 쇄일 수 있다.
본 발명에서 항체 L 쇄의 항원 결합 부위를 포함하는 폴리펩티드는 바람직하게는 FIX, FIXa 및/또는 FX에 결합하는 항체 L 쇄의 서열의 전부 또는 일부를 포함하는 폴리펩티드이다.
본 발명에서, 어구 "FVIII을 기능적으로 대신하는"은 FIX 및/또는 FIXa, 및 FX를 인식하고, FX의 활성화를 촉진함(FXa 생성을 촉진함)을 의미한다.
본 발명에서, "FXa 생성-촉진 활성"은 예를 들어 FXIa(FIX 활성화 촉매), FIX, FX, F 합성 기질 S-2222(FXa의 합성 기질), 및 인지질을 포함하는 측정 시스템을 사용하여 본 발명의 다중특이적 항원-결합 분자를 평가하여 확인할 수 있다. 이 측정 시스템은 A형 혈우병 경우에 증상의 중증도와 임상 증상 사이에 연관성을 나타낸다(문헌[Rosen S Andersson M, Blomback M et al. Clinical applications of a chromogenic substrate method for determination of FVIII Activity. Thromb Haemost 1985, 54: 811-23]). 즉, 본 측정 시스템에서, 높은 FXa 생성-촉진 활성을 나타내는 시험 기질은 A형 혈우병에서 출혈 에피소드에 대하여 더 나은 지혈 효과를 나타내는 것으로 예상된다. 이러한 결과와 함께, FVIII를 기능적으로 대신하는 활성을 갖는 다중특이적 항원-결합 분자가 hA69-KQ/hB26-PF/hAL-AQ보다 더 높은 활성을 갖는 분자인 경우, 뛰어난 혈액 응고-촉진 활성을 수득할 수 있고, 뛰어난 효과는 출혈, 출혈을 수반하는 질병, 또는 출혈에 의해 야기된 질병을 예방하고/하거나 치료하기 위한 약학 성분으로서 수득할 수 있다. 전술된 약학 성분과 같은 뛰어난 효과를 수득하기 위해, 예를 들어 US 2013/0330345의 실시예 2에 기재된 조건하에 측정된 FXa 생성-촉진 활성은 바람직하게는 hA69-KQ/hB26-PF/hAL-AQ의 활성보다 높고, 특히 상기 활성은 더욱 바람직하게는 Q153-G4k/J142-G4h/L180-k의 활성과 동일하거나 이보다 높다. 여기서, "FXa 생성-촉진 활성"은 항체 용액에서 20 분에 흡광도 변화로부터 용매에서 20 분에 흡광도 변화를 차감하여 수득된 값이다(또한 US 2013/0330345 참조).
항체의 일 실시양태에서, 본 발명의 조합물 또는 용도는, 본 발명에 사용된 항체가 인자 FVIII을 기능적으로 대신하므로, 이 공인자의 활성(기능)에서 감소를 초래하는 질병에 대한 효과적인 약학 제제가 되는 것으로 예상된다. 전술된 질병의 예는 출혈, 출혈을 동반하는 질병, 또는 출혈에 의해 야기된 질병을 포함한다. 특히, 혈우병에서 훌륭한 치료 효과를 가질 수 있고, 여기서 출혈성 질환은 FVIII/FVIIIa 기능의 결핍 또는 감소에 의해 야기된다. 혈우병 중에서, A형 혈우병에 대한 뛰어난 치료제가 되는 것으로 예상되고, 여기서 출혈성 질환은 FVIII/FVIIIa 기능의 유전적 결핍 또는 감소에 의해 야기된다.
본 발명의 맥락에서, 출혈, 출혈을 동반하는 질병, 및/또는 출혈에 의해 야기된 질병은 바람직하게는 FVIII 및/또는 활성화된 응고 인자 VIII(FVIIIa)의 활성에서 감소 또는 결핍으로 인해 발달하고/하거나 진행하는 질병을 지칭한다. 상기 질병은 전술된 A형 혈우병, FVIII/FVIIIa에 대한 억제제를 나타내는 질병, 후천성 혈우병, 빌러브란트씨 병 등을 포함하지만 특히 이에 제한되지 않는다.
하기에서 본 발명의 실시양태를 열거하였다.
1. A형 혈우병의 치료에 사용하기 위한, (비활성된) IX 응고 인자 IX와 조합하여 사용되는, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함).
2. A형 혈우병의 치료에 사용하기 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)와 조합하여 사용되는 (비활성화된) 응고 인자 IX.
3. 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한, (비활성화된) 응고 인자 IX와 조합하여 사용되는, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함).
4. 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)와 조합하여 사용되는 (비활성화된) 응고 인자 IX.
5. A형 혈우병의 치료에 사용하기 위한, (i) 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함), 및 (ii) (비활성화된) 응고 인자 IX의 조합물.
6. 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한, (i) 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함), 및 (ii) (비활성화된) 응고 인자 IX의 조합물.
7. A형 혈우병의 치료용 약제의 제조를 위한, (비활성화된) 응고 인자 IX와 조합하여 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)의 용도.
8. A형 혈우병의 치료용 약제의 제조를 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)와 조합하여 사용되는 (비활성화된) 응고 인자 IX의 용도.
9. 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료용 약제의 제조를 위한, (비활성화된) 응고 인자 IX와 조합하여 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)의 용도.
10. 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료용 약제의 제조를 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)와 조합하여 사용되는 (비활성화된) 응고 인자 IX의 용도.
11. 환자가 응고 인자 VIII의 선천성 또는 후천성 결핍을 앓고 있는, 실시양태 3, 4, 6, 9 또는 10에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
12. 결핍이 항체, 다른 억제제, 소모 또는 희석에 의해 얻어지는, 실시양태 11에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
13. (a) 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
(b) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
(c) 트롬빈 생성/형성을 가속화하는데 사용하고/하거나;
d) 트롬빈 생성/형성을 증가시키고 가속화하는데 사용하고/하거나;
e) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성/형성을 가속화하는데 사용하고/하거나;
(f) 혈액 응고를 향상시키는데 사용하고/하거나;
(g) 섬유소 응괴 형성을 향상시키는데 사용하고/하거나;
(h) 출혈, 출혈을 동반하는 질병, 출혈에 의해 야기된 질병 등을 예방하고/하거나 치료하기 위한,
실시양태 1 내지 12 중 어느 한 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
14. (a) 증가된 출혈 위험이 존재하는 경우, (b) 수술 또는 다른 외과 과정 중에, 및/또는 (c) 혈관 손상 후, 실시양태 1 내지 13 중 어느 한 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
15. 또한 (a) 응고 인자 II, (b) 응고 인자 X, (c) 응고 인자 II 및 X, 또는 (d) 응고 인자 II, X 및 VII이 조합하여 사용되는 실시양태 1 내지 14 중 어느 한 실시양태에 다른 조합물, 항체 또는 용도.
16. 응고 인자 IX가 프로트롬빈 복합 농축물(PCC)에 포함되는, 실시양태 1 내지 15 중 어느 한 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
17. 프로트롬빈 복합 농축물이 FIX, FII 및 FX를 포함하는 실시양태 16에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
18. 프로트롬빈 복합 농축물이 FIX, FII, FX 및 FVII을 포함하는 실시양태 16에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
19. 항체가 이중특이적이고; 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위가 서열번호 105, 106 및 107의 H 쇄의 각각의 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(Q499의 H 쇄 CDR), 및 서열번호 156, 157 및 158의 L 쇄의 각각의 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(L404의 L 쇄 CDR)을 포함하고; 제 2 항원 결합 부위가 서열번호 126, 127 및 128의 H 쇄의 각각의 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(J327의 H 쇄 CDR), 및 서열번호 156, 157 및 158의 L 쇄의 각각의 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(L404의 L 쇄 CDR)을 포함하는, 실시양태 1 내지 18 중 어느 한 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
20. 항체가 a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, 및 c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)인 실시양태 1 내지 19 중 어느 한 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
21. 항체가 혈액 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 혈액 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위를 포함하는 제 1 폴리펩티드 및 혈액 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 혈액 응고 인자 IX에 결합하는 제 3 항원 결합 부위를 포함하는 제 3 폴리펩티드, 뿐만 아니라 혈액 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 제 2 폴리펩티드 및 혈액 응고 인자 X에 결합하는 제 4 항원 결합 부위를 포함하는 제 4 폴리펩티드를 포함하는, 실시양태 1 내지 18 중 어느 한 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
22. 제 1 폴리펩티드 및 제 3 폴리펩티드가 각각 혈액 응고 인자 IX 또는 활성화된 혈액 응고 인자 IX에 대한 항체의 H 쇄 또는 L 쇄 각각의 항원 결합 부위를 포함하고; 제 2 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 각각 혈액 응고 인자 X에 대한 항체의 H 쇄 또는 L 쇄 각각의 항원 결합 부위를 포함하는, 실시양태 21에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
23. 제 1 폴리펩티드의 항원 결합 부위가 하기 (a1) 내지 (a11)로부터 선택된 아미노산 서열 중 임의의 하나로 이루어진 H 쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위, 또는 이에 기능적으로 동등한 항원 결합 부위를 포함하고, 제 2 폴리펩티드의 항원 결합 부위가 하기 (b1) 내지 (b11)로부터 선택된 아미노산 서열 중 임의의 하나로 이루어진 H 쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위, 또는 이에 기능적으로 당량인 항원 결합 부위를 포함하는, 실시양태 21 또는 22 중 어느 하나의 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도:
(a1) 서열번호 75, 76 및 77 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q1의 H 쇄 CDR); (a2) 서열번호 78, 79 및 80 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q31의 H 쇄 CDR); (a3) 서열번호 81, 82 및 83 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q64의 H 쇄 CDR); (a4) 서열번호 84, 85 및 86 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q85의 H 쇄 CDR); (a5) 서열번호 87, 88 및 89 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q1의 H 쇄 CDR53); (a6) 서열번호 90, 91 및 92 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q354의 H 쇄 CDR); (a7) 서열번호 93, 94 및 95 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q360의 H 쇄 CDR); (a8) 서열번호 96, 97 및 98 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q405의 H 쇄 CDR); (a9) 서열번호 99, 100 및 101 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q458의 H 쇄 CDR); (a10) 서열번호 102, 103 및 104 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q460의 H 쇄 CDR); (a11) 서열번호 105, 106 및 107 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q499의 H 쇄 CDR); (b1) 서열번호 108, 109 및 110 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J232의 H 쇄 CDR); (b2) 서열번호 111, 112 및 113 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J259의 H 쇄 CDR); (b3) 서열번호 114, 115 및 116 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J268의 H 쇄 CDR); (b4) 서열번호 117, 118 및 119 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J300의 H 쇄 CDR); (b5) 서열번호 120, 121 및 122 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J321의 H 쇄 CDR); (b6) 서열번호 123, 124 및 125 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J326의 H 쇄 CDR); (b7) 서열번호 126, 127 및 128 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J327의 H 쇄 CDR); (b8) 서열번호 129, 130 및 131 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J339의 H 쇄 CDR); (b9) 서열번호 132, 133 및 134 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J344의 H 쇄 CDR); (b10) 서열번호 135, 136 및 137 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J346의 H 쇄 CDR); 및 (b11) 서열번호 174, 175 및 176 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J142의 H 쇄 CDR).
24. 제 1 폴리펩티드의 항원 결합 부위가 하기 (a1) 내지 (a11)로부터 선택된 아미노산 서열 중 임의의 하나로 이루어진 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위, 또는 이에 기능적으로 당량인 항원 결합 부위를 포함하고, 제 2 폴리펩티드의 항원 결합 부위가 하기 (b1) 내지 (b11)로부터 선택된 아미노산 서열 중 임의의 하나로 이루어진 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위, 또는 이에 기능적으로 당량인 항원 결합 부위를 포함하는, 실시양태 21 내지 23 중 어느 하나의 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도:
(a1) 서열번호 35의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q1의 H 쇄 가변 영역); (a2) 서열번호 36의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q31의 H 쇄 가변 영역); (a3) 서열번호 37의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q1의 H 쇄 가변 영역); (a4) 서열번호 38의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q85의 H 쇄 가변 영역); (a5) 서열번호 39의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q153의 H 쇄 가변 영역); (a6) 서열번호 40의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q354의 H 쇄 가변 영역); (a7) 서열번호 41의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q360의 H 쇄 가변 영역); (a8) 서열번호 42의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q405의 H 쇄 가변 영역); (a9) 서열번호 43의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q458의 H 쇄 가변 영역); (a10) 서열번호 44의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q460의 H 쇄 가변 영역); (a11) 서열번호 45의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(Q499의 H 쇄 가변 영역); (b1) 서열번호 46의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J232의 H 쇄 가변 영역); (b2) 서열번호 47의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J259의 H 쇄 가변 영역); (b3) 서열번호 48의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J268의 H 쇄 가변 영역); (b4) 서열번호 49의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J300의 H 쇄 가변 영역); (b5) 서열번호 50의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J321의 H 쇄 가변 영역); (b6) 서열번호 51의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J326의 H 쇄 가변 영역); (b7) 서열번호 52의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J327의 H 쇄 가변 영역); (b8) 서열번호 53의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J339의 H 쇄 가변 영역); (b9) 서열번호 54의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(H 쇄 가변 영역 of J344); (b10) 서열번호 55의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J346의 H 쇄 가변 영역); 및 (b11) 서열번호 172의 H 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(J142의 H 쇄 가변 영역).
25. 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드에 포함된 항원 결합 부위가 하기 (c1) 내지 (c10)으로부터 선택된 아미노산 서열 중 임의의 하나로 이루어진 L 쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위, 또는 이에 기능적으로 당량인 항원 결합 부위를 포함하는, 실시양태 21 내지 24 중 어느 하나의 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도:
(c1) 서열번호 138, 139 및 140 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L2의 L 쇄 CDR); (c2) 서열번호 141, 142 및 143 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L45의 L 쇄 CDR); (c3) 서열번호 144, 145 및 146 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L248의 L 쇄 CDR); (c4) 서열번호 147, 148 및 149 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L324의 L 쇄 CDR); (c5) 서열번호 150, 151 및 152 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L334의 L 쇄 CDR); (c6) 서열번호 153, 154 및 155 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L377의 L 쇄 CDR); (c7) 서열번호 156, 157 및 158 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L404의 L 쇄 CDR); (c8) 서열번호 159, 160 및 161 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L406의 L 쇄 CDR); (c9) 서열번호 137, 138 및 139 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L408의 L 쇄 CDR); 및 (c10) 서열번호 177, 178 및 179 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L180의 L 쇄 CDR).
26. 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드에 포함된 항원 결합 부위가 하기 (c1) 내지 (c10)으로부터 선택된 아미노산 서열 중 임의의 하나로 이루어진 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위, 또는 이에 기능적으로 당량인 항원 결합 부위를 포함하는, 실시양태 21 내지 25 중 어느 하나의 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도:
(c1) 서열번호 56의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L2의 L 쇄 가변 영역); (c2) 서열번호 57의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L45의 L 쇄 가변 영역); (c3) 서열번호 58의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L248의 L 쇄 가변 영역); (c4) 서열번호 59의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L324의 L 쇄 가변 영역); (c5) 서열번호 60의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L334의 L 쇄 가변 영역); (c6) 서열번호 61의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L377의 L 쇄 가변 영역); (c7) 서열번호 62의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L404의 L 쇄 가변 영역); (c8) 서열번호 63의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L406의 L 쇄 가변 영역); (c9) 서열번호 64의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L408의 L 쇄 가변 영역); 및 (c10) 서열번호 173의 L 쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 부위(L180의 L 쇄 가변 영역).
27. 제 1 및 제 2 폴리펩티드가 항체 H 쇄 불변 영역을 추가로 포함하고, 제 3 및 제 4 폴리펩티드가 항체 L 쇄 불변 영역을 포함하는, 실시양태 21 내지 26 중 어느 하나의 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
28. 제 1 및 제 2 폴리펩티드가 항체 H 쇄 불변 영역을 포함하고, 제 3 및 제 4 폴리펩티드가 항체 L 쇄 불변 영역을 포함하되, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 공통 공유된 L 쇄인, 실시양태 21 내지 26 중 어느 하나의 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
29. 제 1 폴리펩티드가 하기 (a1) 내지 (a14)로부터 선택된 임의의 하나의 항체 H 쇄를 포함하고, 제 2 폴리펩티드가 하기 (b1) 내지 (b12)로부터 선택된 임의의 하나의 항체 H 쇄를 포함하고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 하기 (c1) 내지 (c10)으로부터 선택된 임의의 하나의 항체 L 쇄를 포함하는, 실시양태 21 내지 28 중 어느 하나의 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도:
(a1) 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q1-G4k); (a2) 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q31-z7); (a3) 서열번호 3의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q64-z55); (a4) 서열번호 10의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q64-z7); (a5) 서열번호 11의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q85-G4k); (a6) 서열번호 12의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q153-G4k); (a7) 서열번호 13의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q354-z106); (a8) 서열번호 14의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q360-G4k); (a9) 서열번호 15의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q360-z118); (a10) 서열번호 16의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q405-G4k); (a11) 서열번호 17의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q458-z106); (a12) 서열번호 18의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q460-z121); (a13) 서열번호 19의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q499-z118); (a14) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(Q499-z121); (b1) 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J268-G4h); (b2) 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J321-G4h); (b3) 서열번호 6의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J326-z107); (b4) 서열번호 7의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J344-z107); (b5) 서열번호 21의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J232-G4h); (b6) 서열번호 22의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J259-z107); (b7) 서열번호 23의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J300-z107); (b8) 서열번호 24의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J327-z107); (b9) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J327-z119); (b10) 서열번호 26의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J339-z119); (b11) 서열번호 27의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J346-z107); (b12) 서열번호 170의 아미노산 서열로 이루어진 항체 H 쇄(J142-G4h); (c1) 서열번호 8의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L2-k); (c2) 서열번호 9의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L45-k); (c3) 서열번호 28의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L248-k); (c4) 서열번호 29의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L324-k); (c5) 서열번호 30의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L334-k); (c6) 서열번호 31의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L377-k); (c7) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄; (c8) 서열번호 33의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L406-k); (c9) 서열번호 34의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L408-k); 및 (c10) 서열번호 171의 아미노산 서열로 이루어진 항체 L 쇄(L180-k).
30. 항체가 하기 (a) 내지 (u) 중 어느 하나의 이중특이적 항체인, 실시양태 28에 따른 조합물, 항체 또는 용도:
(a) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 9의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q1-G4k/J268-G4h/L45-k); (b) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 9의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q1-G4k/J321-G4h/L45-k); (c) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 6의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 8의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q31-z7/J326-z107/L2-k); (d) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 3의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 7의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 9의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q64-z55/J344-z107/L45-k); (e) 제 1 폴리펩티드가 열번호 10의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 6의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 30의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q64-z7/J326-z107/L334-k); (f) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 10의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 7의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 33의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q64-z7/J344-z107/L406-k); (g) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 11의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 33의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q85-G4k/J268-G4h/L406-k); (h) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 11의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 30의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q85-G4k/J321-G4h/L334-k); (i) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 12의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 21의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 33의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q153-G4k/J232-G4h/L406-k); (j) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 13의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 22의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 29의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q354-z106/J259-z107/L324-k); (k) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 14의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 21의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 33의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q360-G4k/J232-G4h/L406-k); (l) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 15의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 23의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 30의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q360-z118/J300-z107/L334-k); (m) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 16의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 21의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 28의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q405-G4k/J232-G4h/L248-k) (n) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 17의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 27의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 34의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q458-z106/J346-z107/L408-k); (o) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 18의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 30의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q460-z121/J327-z119/L334-k); (p) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 19의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 24의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 30의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q499-z118/J327-z107/L334-k); (q) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 19의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 24의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 31의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q499-z118/J327-z107/L377-k); (r) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 19의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 27의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 28의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q499-z118/J346-z107/L248-k); (s) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 32의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k); (t) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 26의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 31의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q499-z121/J339-z119/L377-k); 및 (u) 제 1 폴리펩티드가 서열번호 12의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드가 서열번호 170의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드가 서열번호 171의 공통 공유된 L 쇄인 이중특이적 항체(Q153-G4k/J142-G4h/L180-k).
31. FIX를 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)로 치료된 A형 혈우병 환자에게 체중 kg당 10 U 내지 200 U FIX의 양으로 투여하는, 실시양태 1 내지 30 중 어느 하나의 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
32. FX를 체중 kg당 10 U 내지 200 U FX의 양으로 추가로 투여하는, 실시양태 31에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
33. FII를 체중 kg당 10 U 내지 200 U FII의 양으로 추가로 투여하는, 실시양태 31에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
34. FII 및 FX를 체중 kg당 10 U 내지 200 U FII 및 10 U 내지 200 U FX의 양으로 추가로 투여하는, 실시양태 31에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
35. 프로트롬빈 착체(PCC)를 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)로 치료된 A형 혈우병 환자에게 체중 kg당 10 U 내지 200 U PCC의 양으로 투여하는, 실시양태 1 내지 34 중 어느 하나의 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
36. 다중특이적 항체 및 FIX를 동시에 공투여하는, 실시양태 1 내지 35 중 어느 하나의 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
37. 다중특이적 항체 및 FIX를 순차적으로 공투여하는, 실시양태 1 내지 36 중 어느 하나의 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
38. A형 혈우병 환자를 치료하는 방법으로,
(a) 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함) 및 (b) 응고 인자 IX를 상기 치료가 필요한 환자에게 효과량으로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
39. 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자를 치료하는 방법으로,
(a) 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함) 및 (b) 응고 인자 IX를 상기 치료가 필요한 환자에게 효과량으로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
40. 환자가 응고 인자 VIII의 선천성 또는 후천성 결핍을 앓고 있는, 실시양태 39에 따른 방법.
41. 결핍을 항체, 다른 억제제, 소모 또는 희석에 의해 얻어지는, 실시양태 40에 따른 방법.
42. 출혈, 출혈을 동반하는 질병, 출혈에 의해 야기된 질병 등을 앓고 있는(예를 들어 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하, 예를 들어, A형 혈우병을 앓고 있는) 환자에서
(a) 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
(b) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
(c) 트롬빈 생성/형성을 가속화하는데 사용하고/하거나;
(d) 트롬빈 생성/형성을 증가시키고 가속화하는데 사용하고/하거나;
(e) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성/형성을 가속화하는데 사용하고/하거나;
(f) 혈액 응고를 향상시키는데 사용하고/하거나;
(g) 섬유소 응괴 형성을 향상시키는데 사용하고/하거나;
(h) 출혈, 출혈을 동반하는 질병, 출혈에 의해 야기된 질병 등을 예방하고/하거나 치료하기 위한 방법으로,
응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함) 및 (b) (비활성화된) 응고 인자 IX를 상기 환자에게 효과량으로 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
43. (a) 증가된 출혈 위험이 존재하는 경우, (b) 수술 또는 다른 외과 과정 중, 및/또는 (c) 혈관 손상 후, 실시양태 1 내지 42 중 어느 하나의 실시양태에 따른 방법.
44. 또한 (a) 응고 인자 II, (b) 응고 인자 X, (c) 응고 인자 II 및 X, 또는 (d) 응고 인자 II, X 및 VII가 조합하여 사용되는, 실시양태 1 내지 43 중 어느 하나의 실시양태에 따른 방법.
45. 응고 인자 IX가 프로트롬빈 복합 농축물(PCC)에 포함되는, 실시양태 1 내지 44 중 어느 하나의 실시양태에 따른 방법.
46. 프로트롬빈 복합 농축물이 FIX, FII 및 FX를 포함하는, 실시양태 45에 따른 방법.
47. 프로트롬빈 복합 농축물이 FIX, FII, FX 및 FVII를 포함하는, 실시양태 45에 따른 방법.
48. 항체가 이중특이적이고, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위가 서열번호 105, 106 및 107 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(Q499의 H 쇄 CDR), 및 서열번호 156, 157 및 158 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(L404의 L 쇄 CDR)을 포함하고, 제 2 항원 결합 부위가 서열번호 126, 127 및 128 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(J327의 H 쇄 CDR), 및 서열번호 156, 157 및 158 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(L404의 L 쇄 CDR)을 포함하는, 실시양태 1 내지 47 중 어느 하나의 실시양태에 따른 방법.
49. 항체가 (a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, (b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, 및 (c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)인, 실시양태 1 내지 48 중 어느 하나의 실시양태에 따른 방법.
50. 다중특이적 항체 및 FIX가 동시에 공투여되는, 실시양태 1 내지 49 중 어느 하나의 실시양태에 따른 방법.
51. 다중특이적 항체 및 FIX가 순차적으로 공투여되는, 실시양태 1 내지 50 중 어느 하나의 실시양태에 따른 방법.
하기에 본 발명의 일부 바람직한 실시양태를 열거하였다.
1. A형 혈우병의 치료에 사용하기 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하되, 항체가 (a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, (b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄 및 (c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)이고 (비활성화된) 응고 인자 IX와 조합하여 사용되는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함).
2. A형 혈우병의 치료에 사용하기 위한 (비활성화된) 응고 인자 IX로, 상기 응고 인자 IX가 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)와 함께 사용되고, 상기 항체가 (a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, (b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄 및 (c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)인, (비활성화된) 응고 인자 IX.
3. 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)로, 상기 항체가 (a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, (b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄 및 (c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)이고 (비활성화된) 응고 인자 IX와 조합하여 사용되는, 항체.
4. 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한 (비활성화된) 응고 인자 IX로, 상기 응고 인자 IX가 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)와 함께 사용되고, 상기 항체가 (a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, (b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄 및 (c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)인 응고 인자 IX.
5. A형 혈우병의 치료에 사용하기 위한, (i) 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하고, (a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, (b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄 및 (c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)인, 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함), 및 (ii) (비활성화된) 응고 인자 IX의 조합물.
6. 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한, (i) 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하고, (a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, (b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄 및 (c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)인, 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함), 및 (ii) (비활성화된) 응고 인자 IX의 조합물.
7. 응고 인자 IX와 조합하여 A형 혈우병의 치료용 약제의 제조를 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하고, (a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, (b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄 및 (c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)인 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)의 용도.
8. A형 혈우병의 치료용 약제의 제조를 위한 (비활성화된) 응고 인자 IX의 용도로, 상기 응고 인자 IX를 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하고, (a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, (b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄 및 (c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)인 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)와 조합하여 사용하는 용도.
9. (비활성화된) 응고 인자 IX와 조합하여 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료용 약제의 제조를 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하고, (a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, (b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄 및 (c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)인 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)의 용도.
10. 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료용 약제의 제조를 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하고, (a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, (b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄 및 (c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)인 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)와 조합하여 사용된 (비활성화된) 응고 인자 IX의 용도.
11. (비활성화된) 응고 인자 IX와 조합하여,
(a) 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
(b) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
(c) 트롬빈 생성/형성을 촉진하는데 사용하고/하거나;
(d) 트롬빈 생성/형성을 증가시키고 가속화하는데 사용하고/하거나;
(e) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성/형성을 가속화하는데 사용하고/하거나;
(f) 혈액 응고를 향상시키는데 사용하고/하거나;
(g) 섬유소 응괴 형성을 향상시키는데 사용하고/하거나;
(h) 출혈, 출혈을 동반하는 질병, 출혈에 의해 야기된 질병 등을 예방하고/하거나 치료하기 위한,
응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하고, (a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, (b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄 및 (c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)인 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함).
12. 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하고, (a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, (b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄 및 (c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)인 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)와 조합하여,
(a) 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
(b) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
(c) 트롬빈 생성/형성을 촉진하는데 사용하고/하거나;
(d) 트롬빈 생성/형성을 증가시키고 가속화하는데 사용하고/하거나;
(e) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성/형성을 가속화하는데 사용하고/하거나;
(f) 혈액 응고를 향상시키는데 사용하고/하거나;
(g) 섬유소 응괴 형성을 향상시키는데 사용하고/하거나;
(h) 출혈, 출혈을 동반하는 질병, 출혈에 의해 야기된 질병 등을 예방하고/하거나 치료하기 위한, (비활성화된) 응고 인자 IX.
13. (a) 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
(b) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
(c) 트롬빈 생성/형성을 촉진하는데 사용하고/하거나;
(d) 트롬빈 생성/형성을 증가시키고 가속화하는데 사용하고/하거나;
(e) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성/형성을 가속화하는데 사용하고/하거나;
(f) 혈액 응고를 향상시키는데 사용하고/하거나;
(g) 섬유소 응괴 형성을 향상시키는데 사용하고/하거나;
(h) 출혈, 출혈을 동반하는 질병, 출혈에 의해 야기된 질병 등을 예방하고/하거나 치료하기 위한,
(i) 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하고, (a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, (b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄 및 (c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)인 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함), 및 (ii) (비활성화된) 응고 인자 IX의 조합물.
14. (비활성화된) 응고 인자 IX와 조합하여,
(a) 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
(b) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
(c) 트롬빈 생성/형성을 촉진하는데 사용하고/하거나;
(d) 트롬빈 생성/형성을 증가시키고 가속화하는데 사용하고/하거나;
(e) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성/형성을 가속화하는데 사용하고/하거나;
(f) 혈액 응고를 향상시키는데 사용하고/하거나;
(g) 섬유소 응괴 형성을 향상시키는데 사용하고/하거나;
(h) 출혈, 출혈을 동반하는 질병, 출혈에 의해 야기된 질병 등을 예방하고/하거나 치료하기 위한 약제의 제조를 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하고, (a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, (b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄 및 (c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)인 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)의 용도.
15. 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하고 (a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, (b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, 및 (c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)인 다중특이적 항체(혈액 응고 인자 VIII을 기능적으로 대체함)와 함께
(a) 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
(b) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
(c) 트롬빈 생성/형성을 촉진하는데 사용하고/하거나;
(d) 트롬빈 생성/형성을 증가시키고 가속화하는데 사용하고/하거나;
(e) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성/형성을 가속화하는데 사용하고/하거나;
(f) 혈액 응고를 향상시키는데 사용하고/하거나;
(g) 섬유소 응괴 형성을 향상시키는데 사용하고/하거나;
(h) 출혈, 출혈을 동반하는 질병, 출혈에 의해 야기된 질병 등을 예방하고/하거나 치료하기 위한, 약제의 제조를 위한 (비활성화된) 응고 인자 IX의 용도.
16. 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하기 위한, 실시양태 11 내지 15 중 어느 하나의 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
17. 트롬빈 생성을 촉진하는데 사용하기 위한, 실시양태 11 내지 15 중 어느 하나의 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
18. 다중특이적 항체 및 FIX를 동시에 공투여하는, 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나의 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
19. 다중특이적 항체 및 FIX를 순차적으로 공투여하는, 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나의 실시양태에 따른 조합물, 항체 또는 용도.
하기 실시예 및 도면은 본 발명의 이해를 돕기 위해 제공되고, 이의 범주는 첨부된 청구범위 내에 포함된다. 본 발명의 취지를 벗어나지 않고 제시된 과정에서 변형될 수 있음이 이해된다.
실험 과정
실시예 1
FVIII 결핍 혈장에서 트롬빈 생성
FVIII이 결핍된 혈장 샘플(FVIII 결핍 혈장, 시멘스(Siemens))(그러나, 비활성화된 FIX, FX 및 FII의 정상 수준을 함유함)을 응고 인자 VIII의 결핍 또는 기능 저하 모델로(특히, A형 혈우병 환자 샘플 모델로) 사용하였다.
US 2013/0330345에 기재된 바와 같고 하기에 Bsab FIX/FX로 약칭된, 인자 IX에 결합하고 인자 X에 결합하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)(서열번호 20, 25 및 32의 아미노산 서열을 포함함)를, Bsab FIX/FX의 임상적으로 적용된 농도와 유사한 25, 50, 75 또는 100 ㎍/ml의 농도에서 혈장 샘플에 찔러 넣었다. Bsab FIX/FX(Q499-z121/J327-z119/L404-k)는 US 2013/0330345에 상세하게 기재되어 있고 혈액 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 혈액 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위를 포함하는 제 1 폴리펩티드, 및 혈액 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 혈액 응고 인자 IX에 결합하는 제 3 항원 결합 부위를 포함하는 제 3 폴리펩티드, 뿐만 아니라 혈액 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 제 2 폴리펩티드, 및 혈액 응고 인자 X에 결합하는 제 4 항원 결합 부위를 포함하는 제 4 폴리펩티드를 포함하고, 이때 제 1 폴리펩티드는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 H 쇄이고, 제 2 폴리펩티드는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 H 쇄이고, 제 3 폴리펩티드 및 제 4 폴리펩티드는 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 공통 공유된 L 쇄이다.
또한, 재조합 FIX(베네픽스(등록상표))((비활성화된) FIX)를 실험의 일부로 시험관내에 첨가하였다. 다르게는, FIX(비활성화된 형태)를 포함하는 시판중인 프로트롬빈 복합 농축물(PCC)을 1 U/ml(옥타플렉스(등록상표))의 농도로 시험관내에서 첨가하였다. 옥타플렉스는 응고 인자 II(220 내지 760IU), VII(180 내지 480IU), IX(500IU) 및 X(360 내지 600IU)을 함유하는 풀링된 혈장 응고 인자 농축물이다. 이는 또한 단백질 C, 단백질 S, 알부민, 헤파린 및 나트륨 시트레이트를 함유한다. PCC가 소량의 헤파린을 함유하기 때문에(이는 이들의 활성의 시험관내 평가를 방해할 수 있음), PCC를 헤파니라제 용액(헵자임(Hepzyme), 시멘스)(시험관내에서 헤파린을 분해하는 효소)에서 15 분 동안 항온처리하였다.
대조군 재조합 FVIII(애드베이트(Advate), 백스터)을 100%의 농도로 FVIII 결핍 혈장에 첨가하였다.
Bsab 인자 IX/인자 X의 희석액을 4% 젤라틴 용액(겔라푸살)에서 제조하였다.
기질의 시험된 조합
FVIII Φ
FVIII Φ +100% FVIII
FVIII Φ +100 ㎍/ml Bsab FIX/FX
FVIII Φ +75 ㎍/ml Bsab FIX/FX
FVIII Φ +50 ㎍/ml Bsab FIX/FX
FVIII Φ +25 ㎍/ml Bsab FIX/FX
FVIII Φ +100% FVIII +100% FIX
FVIII Φ +100 ㎍/ml Bsab FIX/FX +100% FIX
FVIII Φ +75 ㎍/ml Bsab FIX/FX +100% FIX
FVIII Φ +50 ㎍/ml Bsab FIX/FX +100% FIX
FVIII Φ +25 ㎍/ml Bsab FIX/FX +100% FIX
FVIII Φ +100% FVIII +1U PCC /ml
FVIII Φ +100 ㎍/ml Bsab FIX/FX +1U PCC /ml
FVIII Φ +75 ㎍/ml Bsab FIX/FX +1U PCC /ml
FVIII Φ +25 ㎍/ml Bsab FIX/FX +1U PCC /ml
FVIII Φ = FVIII 결핍 혈장
소량의 조직 인자로 응고를 활성화한 후 형광원 기질에 의해 트롬빈 생성을 계속 측정하였다("PPP 로우 시약", 네덜란드 소재의 트롬비노스코프(Thrombinoscope)에 의한 기기 및 모든 시약).
트롬빈 생성 방법의 설명
트롬빈 생성은 트롬비노스코프(BV, Maastricht, The Netherlands)의 교정 자동화 트롬보그램(CAT) 방법을 사용하여 생물 혈장에서 측정할 수 있다. 간단히 말해, 트롬빈 생성은 1 pM 조직 인자(TF), 인지질 및 칼슘 이온(Ca2 +)을 첨가하여 응고의 외인성 경로를 통해 촉발된다. 트롬빈 생성의 실시간 분석을 위해 저 친화력 형광원 기질을 첨가하였다. 기질 고갈, 샘플 색 및 내부 필터 효과에 대하여 교정하기 위해 혈장 샘플을 공지된 트롬빈 교정기에서 교정하였다. 써모 플루오로스칸(Thermo Fluoroskan)으로 형광을 판독하였다. 측정된 형광 신호로부터 트롬빈 활성을 계산하였다. 나타낸 곡선은 시간(x-축, 초)에 대한 자유 트롬빈 활성(y-축, nM 트롬빈)을 나타낸다.
대조군 측정: FVIII 결핍 혈장 및 FVIII 결핍 혈장 + 100% FVIII
FVIII 결핍 혈장 단독의 분석은 예상했던 매우 약한 트롬빈 생성을 입증하였다. 이는 A형 혈우병 환자에서 출혈성 질환의 생리적인 이유를 나타낸다.
도 3a에서, FVIII의 첨가는 FVIII이 부족한 샘플과 비교하여 신속한 트롬빈 생성 및 총 7배 증가한 트롬빈 생성을 야기하였다.
Bsab FIX / FX 의 첨가
또한, Bsab FIX/FX의 첨가는 트롬빈 생성을 FVIII이 부족한 샘플의 트롬빈 생성보다 3.4 내지 4.4배 유의미하게 증가시켰다. 상기 결과를 도 3b에 나타냈다.
Bsab FIX / FX 의 활성과 FVIII 결핍 혈장 샘플의 트롬빈 생성시 FVIII 의 활성의 비교
샘플에 FVIII 또는 Bsab FIX/FX의 보충하였을 때 트롬빈 생성을 비교하였고, 유의미하게 더 많은 트롬빈이 FVIII을 사용하여 형성되고, 또한 피크까지 시간 트롬빈 생성을 Bsab FIX/FX에 비해 FVIII으로 더 짧아졌다(도 3c 참조).
Bsab FIX / FX 처리된 FVIII 결핍 혈장에 FIX 첨가
FIX(100%)를 Bsab FIX/FX로 처리된 FVIII 결핍 혈장에 첨가하여 트롬빈 생성의 상당한 증가를 야기하였다(도 4a 및 표 2 참조).
Bsab FIX/FX(75 ㎍/ml)를 갖는 샘플에서 이는 트롬빈 생성을 2배로 향상시켰다. Bsab FIX/FX(50 ㎍/ml)를 갖는 샘플에서 트롬빈 생성은 75% 증가하였다. Bsab FIX/FX(25 ㎍/ml)를 갖는 샘플에서 트롬빈 생성은 50% 증가하였다(도... 참조).
또한, 피크까지 시간은 FIX를 첨가하여 상당히 짧아졌고, 즉, 트롬빈 생성이 증가했을 뿐만 아니라 가속화되었다.
도 4a 및 표 2에 나타낸 바와 같이, Bsab FIX/FX로 처리된 샘플의 트로빈 생성 피크뿐만 아니라 피크까지 시간은 둘 다 100% FVIII를 갖는 샘플과 일치하였다.
Bsab FIX / FX 처리된 FVIII 결핍 혈장에 프로트롬빈 복합 농축물 ( PCC ) 첨가
Bsab FIX/FX로 처리된 FVIII 결핍 혈장에 PCC(1 U/ml)의 첨가는 트롬빈 생성의 상당한 증가를 야기한다.
Bsab FIX/FX(75 ㎍/ml)를 갖는 샘플에서 트롬빈 생성은 94% 증가하였다. RO5534262(25 ㎍/ml)를 갖는 샘플에서 트롬빈 생성은 90% 증가하였다. 두 경우에, 트롬빈 생성 피크는 FVIII 보충된 샘플과 비교하여 PCC가 첨가되고 Bsab FIX/FX 처리된 샘플과 유사하였다(도 4b 및 표 2 참조).
결과: FVIII 결핍 혈장에서 기질의 시험된 조합에 의해 유도된/증가된 트롬빈 생성
피크 높이(nM) 피크까지 시간(분)
FVIII Φ 34 14.0
FVIII Φ +100% FVIII 238 5.7
FVIII Φ +100 ㎍/ml Bsab FIX/FX 152 10.0
FVIII Φ +75 ㎍/ml Bsab FIX/FX 124 11.0
FVIII Φ +50 ㎍/ml Bsab FIX/FX 119 11.5
FVIII Φ +25 ㎍/ml Bsab FIX/FX 117 12.0
FVIII Φ +100 ㎍/ml Bsab FIX/FX +100% FIX 272 5.5
FVIII Φ +75 ㎍/ml Bsab FIX/FX +100% FIX 247 6.3
FVIII Φ +50 ㎍/ml Bsab FIX/FX +100% FIX 208 6.7
FVIII Φ +25 ㎍/ml Bsab FIX/FX +100% FIX 176 7.5
FVIII Φ +100 ㎍/ml Bsab FIX/FX +1U PCC /ml 361 10.7
FVIII Φ +75 ㎍/ml Bsab FIX/FX +1U PCC /ml 240 11.0
FVIII Φ +25 ㎍/ml Bsab FIX/FX +1U PCC /ml 223 12.0
Bsab FIX/FX(100 ㎍/ml) 및 심지어 100% FIX 또는 1 U PCC/ml을 사용하여, ml 당 트롬빈 생성은 100% FVIII이 있는 트롬빈 생성을 초과하여 달성될 수 있다. 이는 큰 출혈 문제의 경우, 예를 들어 외상후 또는 큰 수술시 바람직할 수 있다.
실험 데이타 요약
상기 실험 데이타는 FIX 또는 PCC를 Bsab FIX/FX(Q499-z121/J327-z119/L404-k)로 처리된 혈장 샘플에 첨가하면 샘플에서 트롬빈 생성의 상당한 증가를 야기함을 나타낸다.
<110> F.Hoffmann La-Roche AG <120> Combination therapy with coagulation factors and multispecific antibodies <130> P32729-WO <140> PCT/EP2016/057662 <141> 2016-04-07 <150> EP15164045.5 <151> 2015-04-17 <160> 179 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> artificial sequence <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr 20 25 30 Asp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Pro Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Arg His Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Ala Gly His Asn Leu Gly Ala Gly Trp Tyr Phe Asp Phe 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser 130 135 140 Thr 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<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 169 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 170 <211> 444 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> artificial sequence <400> 170 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asn 20 25 30 Asn Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Thr Arg Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Glu Glu Phe 50 55 60 Gln Asp Arg Val Thr Met Thr Ile Asp Lys Ser Thr Gly Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu 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Claims (22)

  1. A형 혈우병의 치료에 사용하기 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하고 (비활성화된) 응고 인자 IX와 조합하여 사용되는 다중특이적 항체.
  2. A형 혈우병의 치료에 사용하기 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체와 조합하여 사용되는 (비활성화된) 응고 인자 IX.
  3. 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하고 (비활성화된) 응고 인자 IX와 조합하여 사용되는 다중특이적 항체.
  4. 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체와 조합하여 사용되는 (비활성화된) 응고 인자 IX.
  5. A형 혈우병의 치료에 사용하기 위한,
    (i) 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체, 및
    (ii) (비활성화된) 응고 인자 IX
    의 조합물.
  6. 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료에 사용하기 위한,
    (i) 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체, 및
    (ii) (비활성화된) 응고 인자 IX
    의 조합물.
  7. (비활성화된) 응고 인자 IX와 조합하여 A형 혈우병의 치료용 약제의 제조를 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체의 용도.
  8. 응고 인자 IX가 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체와 조합하여 사용된, A형 혈우병의 치료용 약제의 제조를 위한 (비활성화된) 응고 인자 IX의 용도.
  9. (비활성화된) 응고 인자 IX와 조합하여 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료용 약제의 제조를 위한, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체의 용도.
  10. 응고 인자 IX가 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위 및 응고 인자 X에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 다중특이적 항체와 조합하여 사용되는, 응고 인자 VIII의 (a) 결핍 또는 (b) 기능 저하를 앓고 있는 환자의 치료용 약제의 제조를 위한 (비활성화된) 응고 인자 IX의 용도.
  11. 제 3 항, 제 4 항, 제 6 항, 제 9 항 및 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    환자가 응고 인자 VIII의 선천성 또는 후천성 결핍을 앓고 있는 조합물, 항체 또는 용도.
  12. 제 11 항에 있어서,
    결핍이 항체, 다른 억제제, 소모 또는 희석에 의해 얻어지는, 조합물, 항체 또는 용도.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
    (b) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성을 증가시키는데 사용하고/하거나;
    (c) 트롬빈 생성/형성을 가속화하는데 사용하고/하거나;
    (d) 트롬빈 생성/형성을 증가시키고 가속화하는데 사용하고/하거나;
    (e) 혈관 손상 부위에서/조직 인자 방출 부위에서 트롬빈 생성/형성을 가속화하는데 사용하고/하거나;
    (f) 혈액 응고를 향상시키는데 사용하고/하거나;
    (g) 섬유소 응괴 형성을 향상시키는데 사용하고/하거나;
    (h) 출혈, 출혈을 동반하는 질병, 출혈에 의해 야기된 질병 등을 예방하고/하거나 치료하기 위한,
    조합물, 항체 또는 용도.
  14. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 증가된 출혈 위험이 존재하는 경우;
    (b) 수술 또는 다른 외과 과정 동안; 및/또는
    (c) 혈관 손상 후
    조합물, 항체 또는 용도.
  15. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 응고 인자 II;
    (b) 응고 인자 X;
    (c) 응고 인자 II 및 X; 또는
    (d) 응고 인자 II, X 및 VII
    이 또한 조합으로 사용되는, 조합물, 항체 또는 용도.
  16. 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (비활성화된) 응고 인자 IX가 프로트롬빈 복합 농축물(PCC)에 포함되는, 조합물, 항체 또는 용도.
  17. 제 16 항에 있어서,
    프로트롬빈 복합 농축물이 FIX, FII 및 FX를 포함하는, 조합물, 항체 또는 용도.
  18. 제 16 항에 있어서,
    프로트롬빈 복합 농축물이 FIX, FII, FX 및 FVII를 포함하는, 조합물, 항체 또는 용도.
  19. 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체가 이중특이적이고, 응고 인자 IX 및/또는 활성화된 응고 인자 IX에 결합하는 제 1 항원 결합 부위가 서열번호 105, 106 및 107 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(Q499의 H 쇄 CDR), 및 서열번호 156, 157 및 158 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(L404의 L 쇄 CDR)을 포함하고, 제 2 항원 결합 부위가 서열번호 126, 127 및 128 각각의 H 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(J327의 H 쇄 CDR), 및 서열번호 156, 157 및 158 각각의 L 쇄 CDR1, 2 및 3 아미노산 서열(L404의 L 쇄 CDR)을 포함하는, 조합물, 항체 또는 용도.
  20. 제 1 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서,
    항체가 (a) 서열번호 20의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, (b) 서열번호 25의 아미노산 서열로 이루어진 H 쇄, 및 (c) 서열번호 32의 아미노산 서열로 이루어진 (공통 공유된) L 쇄를 포함하는 이중특이적 항체(Q499-z121/J327-z119/L404-k)인, 조합물, 항체 또는 용도.
  21. 제 1 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서,
    다중특이적 항체 및 FIX가 동시에 공-투여되는, 조합물, 항체 또는 용도.
  22. 제 1 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서,
    다중특이적 항체 및 FIX가 순차적으로 공-투여되는, 조합물, 항체 또는 용도.
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