KR20170093243A

KR20170093243A - 유동성 지혈 조성물

Info

Publication number: KR20170093243A
Application number: KR1020177019421A
Authority: KR
Inventors: 폴 샌더스; 티모시 미쉘 폴검; 존 제이 배리
Original assignee: 백스터 인터내셔널 인코포레이티드; 박스터 헬쓰케어 에스에이
Priority date: 2014-12-19
Filing date: 2015-12-18
Publication date: 2017-08-14
Also published as: BR112017012946A2; AU2015364375A1; WO2016100861A1; MX2017008054A; EP3233144A1; US20180036338A1; CN107106725A; SG11201704537QA; JP2017538751A; CA2968104A1

Abstract

본 개시내용은 전반적으로 다당류 기재 중합체, 예컨대 아밀로펙틴, 아밀로스, 덱스트린, 말토덱스트린 및 아이코덱스트린, 및 지혈 조성물에서 유용한 가교제로 가교된 이들의 개질 형태를 포함하는 지혈 조성물에 관한 것이다. 본원에 개시된 지혈 조성물을 사용하여 손상을 치료하고 출혈을 지연시키거나 중단시키는 방법 또한 제공된다.

Description

유동성 지혈 조성물{FLOWABLE HEMOSTATIC COMPOSITION}

개시내용의 분야

본 개시내용은 전반적으로 다당류- 또는 전분-기재 중합체, 예를 들어 아밀로펙틴, 아밀로스, 덱스트린, 예컨대 말토덱스트린, 및 이들의 개질 형태를 포함하는 지혈 조성물, 및 대상체에서 출혈의 중단 또는 감소를 위한 용도에 관한 것이다.

배경기술

지혈제 및 실란트는 현재 수술 동안의 출혈을 비롯한 출혈을 중단시키는 보조 도구로서 사용된다. FDA는 수술 또는 상처 부위에서 천연 응고 캐스케이드를 증가시키거나 또는 출혈을 기계적으로 중단시키기 위해 환자에서 사용하기 위한 지혈 매트릭스, 예컨대 플로실(FLOSEAL?, 박스터 인터내셔널(Baxter International))을 승인하였다. 플로실?은 젤라틴 매트릭스 내에 인간 트롬빈을 포함하는 지혈 실란트이다.

타코실(TACHOSIL?, 박스터 인터내셔널)은 응고 인자 피브리노겐 및 트롬빈과 조합된 콜라겐 스폰지 매트릭스이다. 이는 혈액 및 체액에 의해 활성화되어, 상기 스폰지를 조직 표면에 접착시키는 응괴를 형성한다. 수분 이내에 지혈 및 출혈 중단에 이른다.

지혈 조성물의 다른 형태에는 식물 기재 물질, 예컨대 전분을 개질시키기 위해 카르복시메틸 기에 연결된 정제된 식물 전분 (스타치 메디컬(Starch Medical))을 포함하는 지혈 스폰지, 패드 또는 분말이 포함된다. 젤라틴화 감자 전분을 포함하는 지혈 조성물을 개시하는 U.S. 8,623,842 또한 참고한다.

본 개시내용은 개선된 지혈 조성물을 제공한다.

개시내용의 개요

본 개시내용은 지혈 매트릭스로서 사용될 수 있는 유동성 히드로겔 중에 다당류 또는 전분, 예컨대 가교 아밀로펙틴, 말토덱스트린 또는 가교 개질 아밀로펙틴, 말토덱스트린을 포함하는 지혈 조성물을 제공한다. 현재, 환자에서 사용되는 여러 지혈 조성물은 지혈 매트릭스를 제조하기 위해 동물 유래 출발 물질 (예를 들어, 젤라틴)로 구성된다. 본 발명의 조성물은 지혈 매트릭스를 제조하기 위해 비-동물, 식물 기재 다당류/전분 중합체를 사용한다.

다양한 실시양태에서, 본 개시내용은 가교 다당류 또는 전분, 예컨대 아밀로펙틴, 아밀로스, 덱스트린, 예컨대 말토덱스트린 또는 아이코덱스트린, 또는 이들의 가교 개질 형태를 포함하는 지혈 조성물을 제공한다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용은 가교 아밀로펙틴, 아이코덱스트린 또는 말토덱스트린, 또는 가교 개질 아밀로펙틴, 아이코덱스트린 또는 말토덱스트린을 포함하는 지혈 조성물을 제공한다.

다양한 실시양태에서, 지혈 조성물은 유동성 히드로겔이다. 다양한 실시양태에서, 지혈 조성물은 분말화 형태, 분무가능한 형태이거나, 또는 스폰지, 패드, 필름 또는 섬유로 사용된다.

다양한 실시양태에서, 지혈 조성물은 에피클로로히드린, 비스-에폭시프로필에테르, 에틸렌 글리콜-비스-에폭시 프로필 에테르, 나트륨 트리메타포스페이트 (STMP), 아디프산-아세트산 무수물, 옥시염화인, 디에폭시드, 비닐시클로헥센 디옥시드, 부타디엔 디옥시드, 포름알데히드, 글루타르알데히드 및 게니핀으로 이루어진 군으로부터 선택된 가교제를 포함한다.

다양한 실시양태에서, 지혈 조성물은 1종 이상 응혈원을 추가로 포함한다. 예시적인 응혈원에는 이로 제한되는 것은 아니지만, 응고 인자, 예컨대 트롬빈, 피브린, 인자 VIII (FVIII), 인자 VII (FVII), 인자 IX (FIX), 폰 빌브란트(von Willebrand) 인자 (vWF), 인자 II (FII), 인자 V (FV), 인자 X (FX), 인자 XI (FXI), 인자 XII (FXII), 및 인자 XIII (FXIII), 조직 인자, 콜라겐; 지혈약, 예컨대 항-출혈제 및 수렴제; 및 다른 지혈제가 포함된다. 한 실시양태에서, 지혈 조성물은 트롬빈을 추가로 포함한다.

다양한 실시양태에서, 지혈 조성물은 아민, 알데히드, 포스페이트, 포스포네이트, 술페이트, 술포네이트 및 카르복실레이트 기로 이루어진 군으로부터 선택된 관능기를 추가로 포함한다.

다양한 실시양태에서, 지혈 조성물은 응고 캐스케이드를 활성화시키거나 또는 조직으로의 결합을 증진시킨다.

다양한 실시양태에서, 아밀로펙틴, 아밀로스 또는 덱스트린 조성물은 2000 내지 500,000 Da, 10,000 내지 300,000 Da, 20,000 내지 250,000 Da, 50,000 내지 200,000 Da, 75,000 내지 150,000 Da, 10,000 내지 100,000, 25,000 내지 75,000 또는 40,000 내지 60,000 Da을 갖는다.

다양한 실시양태에서, 말토덱스트린은 저분자량, 중간 분자량 또는 고분자량 말토덱스트린으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 저분자량 말토덱스트린은 2,000 Da 미만이다. 한 실시양태에서, 중간 분자량 말토덱스트린은 2,000 내지 45,000 Da이다. 한 실시양태에서, 고분자량 말토덱스트린은 45,000 Da 초과이다. 다양한 실시양태에서, 아이코덱스트린은 13000 내지 19000 Da이다.

다양한 실시양태에서, 지혈 조성물은 활성제 및/또는 첨가제 중 1종 이상을 추가로 포함한다. 본원에서 고려되는 활성제는 질환의 진단, 치유, 완화, 치료 또는 예방에서 약리학적 활성 또는 다른 직접적인 효과를 제공하거나, 또는 사람 또는 동물 신체의 구조 또는 임의의 기능에 영향을 미치는 작용제를 지칭한다. 본원에서 고려되는 첨가제는 활성 성분의 활성화 또는 안정성 또는 지혈 조성물의 또다른 성질을 개선시키거나 촉진시키는 작용을 하는 작용제를 지칭한다. 다양한 실시양태에서, 활성제 또는 첨가제는 다당류, 폴리비닐알콜, 폴리에틸렌이민, 키토산, 알긴산, 푸코이단, 히알루론산, 헤파린, 헤파란, 콘드로이틴 술페이트, 아밀로펙틴, 아밀로스, 크산탄 검, 구아 검, 카라기난, 카르복시메틸 셀룰로스, 카르복시메틸 말토덱스트린, 카르복시메틸 아이코덱스트린, 카르복시메틸 전분, 아가로스, 및 천연 또는 합성 중합체 (예를 들어, 중성, 양이온성, 음이온성, 염기성 또는 산성 중합체)로 이루어진 군으로부터 선택된다.

다양한 실시양태에서, 다당류 또는 전분 중합체, 예컨대 아밀로펙틴, 아밀로스, 덱스트린, 아이코덱스트린 또는 말토덱스트린은 식물 물질, 박테리아, 진균 또는 조류로부터 유래된다. 다양한 실시양태에서, 식물 물질은 옥수수, 대두, 벼, 타피오카, 밀, 찰옥수수 또는 찰벼로 이루어진 군으로부터 선택된다.

다양한 실시양태에서, 지혈 조성물이 분말 형태인 경우, 조성물은 입자가 10 내지 1000 ㎛, 50 내지 800 ㎛, 50 내지 700 ㎛, 150 내지 700 ㎛, 200 내지 700 ㎛, 300 내지 550 ㎛, 및 350 내지 550 ㎛를 갖는 입자 형태이다.

다양한 실시양태에서, 지혈 조성물의 유동성 형태는 50% (w/w) 초과가 100 내지 1000 ㎛의 크기를 갖는 입자, 또는 80% (w/w) 초과가 100 내지 1000 ㎛의 크기를 갖는 입자를 함유한다. 상기 유동성 형태가 가교 생체적합성 중합체를 5 내지 30 % (w/w), 10 내지 25% (w/w), 또는 12 내지 20% (w/w)의 양으로 함유하는 것이 고려된다.

다양한 실시양태에서, 지혈 매트릭스는 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 12 시간, 24 시간, 2 일, 3 일, 5 일, 10 일, 15 일, 20 일, 25 일, 또는 30 일 초과의 분해 시간을 갖는다.

다양한 실시양태에서, 지혈 매트릭스는 400% 내지 1300%, 500% 내지 1100%, 또는 600% 내지 900% 범위 내의 E 팽윤을 갖는다.

다양한 실시양태에서, 지혈 매트릭스는 E 팽윤에 근접하는 Q 팽윤을 갖는다. 어떤 실시양태에서, 높은 Q 팽윤이 유익할 수 있고, E 팽윤에 근접하는 것이 보다 신속히 최대 팽윤에 도달할 수 있는 것으로 고려된다.

지혈 조성물의 안정성 및 효능을 측정하는 다른 파라미터에는 트롬빈 시간 (TT), 프로트롬빈 시간 (PT), 활성화된 부분 트롬보플라틴 시간 (APTT), 피브리노겐 (FIB), 혈소판 인자 4 (PF4); 항응고 파라미터, 예컨대 항트롬빈 III (AT-III); 피브린 용해 파라미터, 예컨대 플라스미노겐 (PLG), 피브린 분해 생성물 (FDP) 및 D-이합체; 혈액 점도 (BV) 및 혈장 점도 (PV)에 대한 검정이 포함된다.

어떤 실시양태에서, 상기 조성물은 환자로의 전달을 위해 시린지 또는 다른 기기에 미리 포장할 때 안정하다. 다양한 실시양태에서, 상기 조성물은 상기 전달 기기 내부 또는 외부에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 일 동안 안정하다. 어떤 실시양태에서, 상기 조성물은 실온에서 유동성 형태로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24 시간 동안 안정하다.

다양한 실시양태에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 지혈 조성물을 손상 부위에 투여하는 것을 포함하는, 상처, 출혈, 훼손된 조직 및 출혈 조직으로 이루어진 군으로부터 선택된 손상을 치료하는 방법을 제공한다.

본원에 기재된 지혈 조성물을 출혈 영역에 적용하는 것을 포함하는, 출혈을 지연시키거나 중단시키는 방법 또한 고려된다.

다양한 실시양태에서, 상기 손상 또는 출혈은 수술 동안에 발생한다.

다양한 실시양태에서, 지혈 조성물은 히드로겔로서, 분말 형태로, 또는 패드, 필름 또는 섬유로서 적용된다. 다양한 실시양태에서, 지혈 조성물은 분말화 형태이고, 상기 조성물을 먼저 액체와 혼합하여 유동성 조성물을 형성한다. 다양한 실시양태에서, 상기 액체는 염수, 물, 완충 용액, 및 단백질 용액으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 단백질 용액이 1종 이상의 응고 인자 또는 천연 또는 합성 응혈원을 포함하는 것이 고려된다.

다양한 실시양태에서, 상기 방법에서 사용되는 지혈 조성물은 수초 또는 수분 이내에 출혈을 중단시킨다. 지혈 조성물이 대상체에서의 출혈을 10, 20, 30, 40, 50 또는 60 초 이내에, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 15 분 이내에 중단시키거나 감소시키는 것이 고려된다.

a) 본원에 기재된 지혈 조성물 및 b) 사용 지침서를 포함하는, 상처, 출혈, 훼손된 조직 및 출혈 조직으로 이루어진 군으로부터 선택된 손상을 치료하기 위한 또는 출혈을 지연시키거나 중단시키기 위한 키트 또한 고려된다.

키트의 다양한 실시양태에서, 지혈 조성물은 건조 형태이고, 상기 키트는 지혈 조성물을 재구성하기 위한 제약상 허용가능한 액체 또는 희석제를 추가로 포함한다.

본원에 기재된 지혈 조성물의 제조 방법 또한 고려된다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용은 에피클로로히드린, 비스-에폭시프로필에테르, 에틸렌 글리콜-비스-에폭시 프로필 에테르, 나트륨 트리메타포스페이트 (STMP), 아디프산-아세트산 무수물, 옥시염화인, 포름알데히드, 디에폭시드, 비닐시클로헥센 디옥시드, 부타디엔 디옥시드, 포름알데히드, 글루타르알데히드 및 게니핀으로 이루어진 군으로부터 선택된 이관능성 가교제로 개질시킬 수 있는 가교 중합체 조성물 (다당류, 천연 또는 합성, 또는 비-탄수화물 기재 중합체, 천연 또는 합성)을 포함하는 지혈 조성물을 제조하는 방법으로서, 수성 또는 유기 또는 이들의 조합 용액, 예컨대 완충 용액 또는 단백질 용액 중에서 0.01:1 내지 20:1 범위의 여러 몰 당량 (중합체:가교제)으로 7.0 내지 14.0의 여러 pH 조건하에 적어도 1 내지 24 시간 동안 0-100℃, 예컨대 4℃, 20℃, 25℃, 37℃, 42℃ 또는 50℃에서 상기 중합체를 상기 가교제와 접촉시키고, 상기 가교 중합체 조성물을 단리시킴으로써 제조하는 방법을 제공한다.

특징의 조합이 본원에서 동일한 문장 또는 문단에 구체적으로 명시되지 않더라도, 본원에 기재된 특징의 모든 조합이 고려된다는 것을 이해해야 한다. 특히, 이는 본원에 기재된 본 발명의 모든 측면에서 개별적으로 또는 단상형으로 분석하기 위해 본원에 개시된 모든 마커를 단독으로 또는 조합하여 사용하는 것을 포함한다.

도면의 간단한 설명
도 1은 실란트 적용 전후의 출혈을 평가하기 위해 사용된 시각적 출혈 등급을 도시한다.
도 2는 지혈 성공 대 플로실 VH S/D 및 유동성 말토덱스트린의 시간을 도시하는 그래프이다.
도 3은 플로실 VH S/D 및 유동성 말토덱스트린의 지혈 성공 (모든 시점/병변)을 도시한다.

상세한 설명

본 개시내용은 최적화된 지혈 프로파일을 갖는 최종 생성물을 얻도록 중합체의 성질이 변경된 다당류 또는 전분-기재 중합체를 포함하는 지혈 조성물을 제공한다. 예를 들어, 지혈 매트릭스로서 사용하기 위해 분해 시기 및 입자의 팽윤/유체 흡수 및 입자의 다공성을 변경시키도록 상기 중합체를 가교시킨다. 다당류-기재 히드로겔을 수화된/유동성 형태로 사용하거나 또는 건조 분말로서 사용할 수 있다.

달리 정의되지 않는다면, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 기술분야의 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 하기 참고문헌은 통상의 기술자에게 본 개시내용에 사용된 여러 용어들의 일반적인 정의를 제공한다: Singleton et al., DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY (2d Ed. 1994); THE CAMBRIDGE DICTIONARY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY (Walker Ed., 1988); THE GLOSSARY OF GENETICS, 5th Ed., R. Rieger et al. (Eds.), Springer Verlag (1991); 및 Hale & Marham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY (1991).

본 개시내용 및 첨부된 청구항에서 사용된 단수 표현은 문맥상 명백하게 달리 기재되지 않는다면 복수개의 대상 및 단수개의 대상을 포함한다.

본원에 사용된 바와 같이, 달리 명시되지 않는다면 하기 용어들은 그들에게 주어진 의미를 갖는다.

용어 "약" 또는 "대략"은 통상의 기술자에 의해 결정되는 바와 같이 특정한 값에 대한 허용가능한 오차를 의미하고, 이는 상기 값이 측정 또는 결정되는 방법에 일부 의존한다. 어떤 실시양태에서, 용어 "약" 또는 "대략"은 1, 2, 3 또는 4 이내의 표준 편차를 의미한다. 어떤 실시양태에서, 용어 "약" 또는 "대략"은 주어진 값 또는 범위의 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 이내를 의미한다. 용어 "약" 또는 "대략"이 일련의 2개 이상의 수치 값에서 첫번째 수치 값 앞에 있는 경우에는 언제나, 용어 "약" 또는 "대략"이 상기 일련의 수치 값 각각에 적용되는 것으로 이해한다.

"지혈 조성물"은 손상 또는 수술로 인한 출혈을 중단시키거나 감소시키는데 유용한 조성물을 지칭한다. 본 개시내용의 지혈 조성물이 다당류 또는 전분-기재 중합체, 예컨대 아밀로펙틴, 아밀로스 또는 덱스트린, 예컨대 아밀로덱스트린, 시클로덱스트린, 말토덱스트린, 아이코덱스트린, 또는 이들의 개질 변형물을 포함하는 것이 고려된다.

"유동성" 조성물 또는 "히드로겔"은, 시린지 또는 다른 기기를 통해 유동하여 대상체에게 투여될 수 있는 성질을 가진 젤라틴 또는 젤리와 같은 물질, 또는 페이스트와 같은 용액을 생성하기 위해 수성 성분을 함유하는 실질적으로 액체, 약간 점성인 용액, 고체, 반고형 고체, 유사 플라스틱, 또는 플라스틱 구조체를 지칭한다. 유동성 히드로겔은 실온 및 체온에서 액체와 같은 약간 점성인 용액, 또는 페이스트와 같은 용액이다. 다양한 실시양태에서, 유동성 조성물은 대상체에게 투여하기 위해 시린지 또는 다른 기기를 통해 압출될 때 형태를 유지하는 것이다.

진단 또는 치료의 "대상체"는 인간 또는 비-인간 동물, 예컨대 포유류 또는 영장류이다. 포유류의 예에는 이로 제한되는 것은 아니지만, 포유류의 임의의 일원: 인간, 비-인간 영장류, 예컨대 침팬지, 및 다른 유인원 및 원숭이 종; 농장 동물, 예컨대 소, 말, 양, 염소, 돼지; 가축, 예컨대 토끼, 개 및 고양이; 실험 동물, 예컨대 설치류, 예컨대 래트, 마우스 및 기니 피그 등이 포함된다. 비-포유류의 예에는 이로 제한되는 것은 아니지만, 조류, 어류 등이 포함된다. 상기 용어는 특정 연령 및 성별을 나타내지 않는다.

용어 치료제의 "유효량"은 대상체의 건강 상태, 병리학 또는 질환에 대해 또는 진단의 목적을 위해 원하는 결과를 얻는데 충분한 용량을 의미힌다. 원하는 결과는 상기 용량의 수용자에서의 주관적인 또는 객관적인 개선을 포함할 수 있다. "치료 유효량"은 건강상 의도된 유익한 효과를 얻는데 효과적인 작용제의 양을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "지혈제"는 대상체에서 출혈을 지연시키거나 중단시키는데 사용되고/거나 출혈을 중단시키는 응고 캐스케이드를 촉진시킬 수 있는 조성물을 지칭한다. Glick et al., Indian Dermatol Online J. 4(3):172-176, 2013, 및 Sundaram et al., Indian J Urol. 26(3):374-378, 2010에는 다양한 지혈제가 기재되어 있다. 예시적인 지혈제에는 이로 제한되는 것은 아니지만, 염화알루미늄, 황산제2철 (몬셀(Monsel) 용액), 질산은, 염화아연 페이스트, 트롬빈, 젤라틴 (예를 들어, 돼지 젤라틴 및 젤라틴 혼합물), 미세 다공성 다당류 구체, 칼륨 염을 가진 친수성 중합체 (HPPS), 산화된 재생 셀룰로스, 미세섬유성 콜라겐, 아미노카프로산, 아프로티닌, 트라넥삼산, 알기네이트, 미네랄 제올라이트, 시아노아크릴레이트, 키토산 및 카올린이 포함된다.

지혈 조성물

지혈 조성물은 수술 및 상처 치유 분야에서 상이한 조성으로 다양한 중합체를 사용하여 제조되었다. 예를 들어, 게니핀-가교된 생물학적 물질, 예컨대 게니핀-가교된 젤라틴이 이전에 개시되었다 (예를 들어, 미국 특허 번호 6,608,040, EP2181722, WO2008/076407, Bigi et al., Biomaterials 23 (2002), 4827-4832; Yao et al., Mat. Chem. Phys. 83 (2004), 204-208; Turo et al., Int. J. Biol. Macromol. (2011), doi: 10.1016; Chiono et al., J. Materl. Sci.:Mater Med. (2008) 19:889-898 참고). 미국 특허 공보 20130129710에는 지혈 물질에서 게니핀-유형 가교제를 사용하는 유동성 지혈 조성물이 개시되어 있다.

Atyabin et al., Archives of Pharmacal Research 29: 1179-1186, 2006에는 가교 전분 미세구가 개시되어 있다. Satyanarayana et al., Superdisintegrants, Int. J. ChemTech Res 3:1786-1798, 2010에는 2-히드록시메틸렌 가교된 덱스트린의 합성 및 평가가 기재되어 있다. 미국 특허 6,419,957에는 약제의 느린 방출을 위해 매트릭스로서 관능기를 가진 가교된 고 아밀로스 전분이 기재되어 있다. 미국 특허 공보 20100255101, U.S. 2007/0087061, 미국 특허 6,060,461, WO 2008/117300, WO 2009/091549, 및 WO 2009153798 또한 참고한다.

본 개시내용은 지혈 조성물에서 다당류 또는 전분-기재 중합체, 예컨대 아밀로펙틴, 아밀로스 또는 덱스트린, 예컨대 아밀로덱스트린, 시클로덱스트린, 말토덱스트린, 아이코덱스트린, 또는 이들의 유도체 및 단편을 사용하는 것을 고려한다. 아밀로펙틴은 식물에서 발견되는 가용성 다당류인 글루코스의 고도로 분지된 중합체이고, 이는 아밀로스와 함께 전분의 구성성분이다. 전분은 약 70 중량%의 아밀로펙틴으로 제조된다. 아밀로펙틴의 글루코스 단위는 α(1→4) 글리코시드 결합의 선형 방식으로 연결된다. 분지화는 α(1→6) 결합으로 이루어지며, 24 내지 30개의 글루코스마다 발생한다. 아밀로스는 물에 불용성이다. 아밀로스는 α(1→4) 결합 글루코스 분자를 포함하지만, 매우 적은 α(1→6) 결합을 함유한다.

덱스트린은 전분의 가수분해에 의해 생성되는 저분자량 탄수화물의 군이다. 말토덱스트린은 단쇄 전분 당이다. 시클로덱스트린은 특정 박테리아에 의한 전분의 분해에 의해 형성되는 환형 덱스트린이다. 아밀로덱스트린은 알파-1,6 글리코시드 결합의 효소적 가수분해 또는 아밀로펙틴의 탈분지화에 의해 생성될 수 있는 선형 덱스트린 또는 단쇄 아밀로스이다.

본원에서는 가교제, 예컨대 이로 제한되는 것은 아니지만 에피클로로히드린, 비스-에폭시프로필에테르, 에틸렌 글리콜-비스-에폭시 프로필 에테르, 나트륨 트리메타포스페이트 (STMP), 아디프산-아세트산 무수물, 옥시염화인, 포름알데히드, 디에폭시드, 비닐시클로헥센 디옥시드 또는 부타디엔 디옥시드 (특허 WO 2009153798 A1에 기재됨), 포름알데히드/글루타르알데히드 및 게니핀이 고려된다. Atyabi 등의 연구에서, 전분 입자 크기, 팽윤율, 및 입자 내에 함유된 소분자의 방출이 가교제의 유형 및 농도뿐 아니라 가교 시간을 변경시킴으로써 제어될 수 있음이 입증되었다.

어떤 실시양태에서, 응고 캐스케이드의 활성화 및/또는 조직으로의 결합의 증진을 위해 조직 및 체액과 상호작용할 수 있는 아민, 알데히드, 포스페이트, 포스포네이트, 술페이트, 술포네이트, 카르복실레이트와 같은 기를 함유하도록, 가교 이전 또는 이후에 다당류 중합체, 예컨대 아밀로펙틴, 말토덱스트린 또는 아이코덱스트린을 추가로 관능화시킬 수 있다. 이러한 부가된 성질 (예를 들어, 음이온성 또는 양이온성 전하)은 히드로겔에 지혈 성질을 부여하여, 지혈제, 예컨대 트롬빈의 필요를 감소시킬 수 있다. 분말화 또는 유동성 지혈 조성물은 트롬빈과 함께 또는 트롬빈 없이 제제화될 수 있다.

다양한 실시양태에서, 가교 다당류 중합체를 건조시킨다. 건조된 상태에서, 지혈 조성물은 심지어 승온에서도 (예를 들어, 20℃ 초과, 30℃ 초과 또는 심지어 40℃ 초과) 장시간 동안 보관-안정성이다. 건조 조건에는 가교 다당류 중합체, 예컨대 아이코덱스트린 또는 말토덱스트린이 15% (w/w) 미만, 10% 미만, 5% 미만, 또는 1% 미만의 수분 함량을 갖도록 건조시키는 것이 포함된다. 건조된 조성물의 경우, 상기 조성물이 적어도 2 g/g, 적어도 3.5 g/g, 또는 3.75 g/g 또는 그보다 높은 재수화율을 갖는 것이 고려된다. 재수화 보조제 없이 제조된 유사한 분말의 재수화율은 전형적으로 3 미만이고, 재수화율에서의 증가 백분율은 보통 적어도 5%, 적어도 10%, 또는 적어도 25% 또는 그보다 높을 것이다.

또다른 실시양태에서, 수화 용액이 생체적합성 완충제 또는 용액일 수 있는 경우, 생성물은 수화 또는 습윤 상태로 공급된다.

한 실시양태에서, 본 개시내용에 따른 지혈 조성물은 미립자 형태의 가교 다당류 중합체, 예를 들어 과립형 물질을 함유한다. 과립형 물질은 유체 (즉, 제약상 허용가능한 희석제)에 노출시 신속하게 팽윤될 수 있고, 이러한 팽윤된 형태에서 출혈 부위로 적용될 수 있는 유동성 페이스트에 기여할 수 있다. 다당류 중합체, 예를 들어 말토덱스트린 또는 아이코덱스트린은 필름으로서 제공된 다음, 과립형 물질을 형성하도록 분쇄될 수 있다. 이 과립형 물질에 함유된 대부분의 입자 (예를 들어 90% w/w 초과)는 10 내지 1000 ㎛, 50 내지 800 ㎛, 50 내지 700 ㎛, 150 내지 700 ㎛, 200 내지 700 ㎛, 300 내지 550 ㎛, 및 350 내지 550 ㎛의 입자 크기를 갖는다.

다양한 실시양태에서, 지혈 조성물은 액체 흡수성이다. 예를 들어, 액체, 예를 들어 수성 용액 또는 현탁액 (특히 완충제 또는 혈액)과 접촉시, 중합체는 액체를 흡수하고, 수화 정도에 따라 소정의 팽윤을 나타낼 것이다. 상기 물질은 적어도 300 중량%, 약 400 중량% 내지 약 2000 중량%, 약 500 중량% 내지 약 1300 중량%의 물 또는 수성 완충제를 흡수하고, 이는 하위 단위의 개별 입자의 직경 또는 폭에서 예를 들어 대략 50% 내지 대략 500%, 또는 대략 50% 내지 대략 250% 범위의 명목상 증가에 상응한다. 예를 들어, (건조) 과립형 입자가 0.01 mm 내지 1.5 mm, 또는 0.05 mm 내지 1 mm의 바람직한 크기 범위를 갖는 경우, 완전히 수화된 조성물은 (예를 들어, 상처로 투여 후에 또는 수성 완충 용액과의 접촉 후에) 0.05 mm 내지 3 mm, 특히 0.25 mm 내지 1.5 mm의 크기 범위를 가질 수 있다.

본 개시내용의 지혈 조성물의 평형 팽윤은 일반적으로 그의 의도된 용도에 따라 예를 들어 400% 내지 1300%, 500% 내지 1100%, 또는 600% 내지 900%의 범위일 수 있다. 이러한 평형 팽윤은 예를 들어 (가교 중합체의 경우) 가교 정도를 변화시킴으로써 제어될 수 있고, 상기 가교 정도는 가교 조건, 예컨대 가교제의 노출 지속시간, 가교제의 농도, 가교 온도 등을 변화시킴으로서 달성된다. 상이한 평형 팽윤 값을 가진 물질은 상이한 적용에서 상이하게 기능한다. 가교 및 평형 팽윤을 제어하는 능력은 본 발명의 조성물이 다양한 용도에 최적화되는 것을 허용한다. 평형 팽윤 이외에도, 물질을 표적 부위에 전달하기 직전에 물질의 수화를 제어하는 것 또한 중요하다. 물론, 수화와 평형 팽윤은 긴밀하게 관련되어 있다. 0% 수화인 물질은 비-팽윤성이다. 100% 수화인 물질은 그의 평형 물 함량을 가질 것이다. 0% 내지 100%의 수화는 최소량 내지 최대량의 팽윤에 상응할 것이다.

가교 중합체를 제약상 허용가능한 지혈 조성물로 완성하기 위해 제약상 허용가능한 희석제를 사용한다.

다양한 실시양태에서, 제약상 허용가능한 희석제는 수성 용액이고, NaCl, CaCl₂, 아세트산나트륨, 락트산나트륨, 시트르산나트륨, 카프르산나트륨 및 만니톨로 이루어진 군으로부터 선택된 물질을 함유할 수 있다. 예를 들어, 제약상 허용가능한 희석제는 주사용수, 및 서로 독립적으로 50 내지 200 mM NaCl (예를 들어, 150 mM), 10 내지 80 mM CaCl₂ (예를 들어, 40 mM), 1 내지 50 mM 아세트산나트륨 (예를 들어, 20 mM) 및 10% w/w 이하의 만니톨 (예를 들어, 2% w/w)을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 희석제는 또한 재구성된 건조 조성물의 pH가 예를 들어 3.0 내지 10.0의 pH, 6.4 내지 7.5의 pH, 또는 6.9 내지 7.1의 pH로 완충되도록 완충제 또는 완충계를 포함할 수 있다.

어떤 실시양태에서, 제약상 허용가능한 희석제는 10 내지 1000 I.U. 트롬빈/ml, 또는 250 내지 700 I.U. 트롬빈/ml로 트롬빈을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 즉시 사용형 지혈 조성물은 10 내지 100,000 국제 단위 (I.U.), 100 내지 10,000 I.U. 또는 500 내지 5,000 I.U.의 트롬빈을 함유한다. 즉시 사용형 조성물에서 트롬빈 농도는 10 내지 10,000 I.U. 또는 50 내지 5,000 I.U., 또는 100 내지 1,000 I.U./ml의 범위이다. 희석제는 즉시 사용형 조성물에서 목적하는 최종 농도를 달성하기 위한 양으로 사용된다. 트롬빈 제제는 다른 유용한 성분, 예컨대 이온, 완충제, 부형제, 안정화제 등을 함유할 수 있다. 트롬빈 제제가 인간 알부민, 만니톨 또는 이들의 혼합물을 함유하는 것이 고려된다. 바람직한 염은 NaCl 및/또는 CaCl₂이고, 이들 모두 트롬빈에 대해 일반적으로 적용되는 양 및 농도로 (예를 들어, 0.5 내지 1.5 % NaCl (예를 들어, 0.9%) 및/또는 20 내지 80 mM CaCl₂ (예를 들어, 40 mM)) 사용된다.

트롬빈 (또는 임의의 다른 응고 유도제, 예컨대 뱀독, 혈소판 활성화제, 펩티드를 활성화시키는 트롬빈 수용체, 및 피브리노겐 침전제)은 인간 또는 동물에 사용하기에 적합한 (즉, 제약상 허용가능한) 임의의 제제로부터 유래될 수 있다. 트롬빈의 적합한 공급원에는 인간 또는 소 혈액, 혈장 또는 혈청 (다른 동물 공급원의 트롬빈은 면역 부작용이 예상되지 않는 경우에 적용될 수 있음) 및 재조합 기원의 트롬빈 (예를 들어, 인간 재조합 트롬빈)이 포함되고, 자가 조직 인간 트롬빈이 일부 적용을 위해 바람직할 수 있다.

희석제는 바람직하게는 예를 들어 3.0 내지 10.0 pH의 완충제 또는 완충계를 포함한다.

다양한 실시양태에서, 본 개시내용은 가교 생체적합성 중합체를 5 내지 30 % (w/w), 10 내지 25% (w/w), 또는 12 내지 20% (w/w)의 양으로 함유하는 페이스트 형태로 존재하는, 지혈 (출혈의 제어)에 사용하기에 적합한 미립자 형태로 본원에서 고려되는 다당류 중합체, 예컨대 아밀로펙틴 또는 덱스트린을 포함하는 지혈 조성물을 제공한다. 추가의 실시양태에서, 본원에 기재된 가교 중합체, 예를 들어 아밀로펙틴 또는 덱스트린은 15.0 내지 19.5% (w/w) (= 건조 젤라틴의 중량/최종 조성물의 중량), 16.0 내지 19.5% (w/w), 16.5 내지 19.5% (w/w), 17.0 내지 18.5% (w/w) 또는 7.5 내지 18.5% (w/w), 16.5 내지 19.0% (w/w) 또는 16.8 내지 17.8% (w/w), 또는 16.5 내지 17.5% (w/w)의 양으로 존재하고, 상기 조성물은 임의적으로 압출 증진제, 예컨대 알부민을 포함한다. 예를 들어, 압출 증진제가 알부민 (예를 들어, 인간 혈청 알부민)인 경우, 이는 0.5 내지 5.0% (w/w) (= 압출 증진제의 중량/최종 조성물의 중량), 1.0 내지 5.0 % (w/w), 2.0 내지 4.5% (w/w), 1.5 내지 5.0% (w/w) 또는 약 1.5% (w/w)의 양으로 제공된다.

다양한 실시양태에서, 본 개시내용은 상처, 출혈, 훼손된 조직, 출혈 조직 및/또는 골 결함으로 이루어진 군으로부터 선택된 손상의 치료에 사용하기 위한 지혈 조성물에 관한 것이다.

다양한 실시양태에서, 본 개시내용은 본 발명에 따른 지혈 조성물을 손상 부위에 투여하는 것을 포함하는, 상처, 출혈, 훼손된 조직 및/또는 출혈 조직으로 이루어진 군으로부터 선택된 손상을 치료하는 방법을 제공한다.

본 개시내용은 또한 지혈 조성물을 표적 부위에 전달하는 것을 포함하는, 본 발명에 따른 지혈 조성물을 환자 신체의 표적 부위로 전달하는 방법을 제공한다. 어떤 실시양태에서, 건조 조성물을 표적 부위에 직접 적용할 수 있지만 (임의적으로 필요에 따라 표적 부위에서 제약상 허용가능한 희석제와 접촉시킬 수 있음), 습윤된 형태, 특히 히드로겔 형태의 유동성 지혈 조성물을 수득하기 위해, 표적 부위에 투여하기 전에 건조 지혈 조성물을 제약상 허용가능한 희석제와 접촉시키는 것이 고려된다.

본원에서 고려되는 희석제는 다른 성분, 예컨대 부형제를 추가로 함유할 수 있다. "부형제"는 예를 들어 트롬빈이 보관시에 그의 화학적 안정성 및 생물학적 활성을 보유하는 것을 보장하기 위해 (또는 살균을 위해 (예를 들어, 방사선 조사에 의해)), 또는 미적 이유로, 예를 들어 색상을 위해 용액에 첨가되는 불활성 물질이다. 부형제에는 단백질, 예를 들어 인간 알부민; 탄수화물, 예를 들어 만니톨; 중합체, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 (PEG); 및 아세트산나트륨이 포함된다. 재구성된 생성물을 위해 고려되는 인간 알부민의 농도는 0.1 내지 100 mg/ml 또는 1 내지 10 mg/ml이다. 만니톨 농도는 0.5 내지 500 mg/ml 또는 10 내지 50 mg/ml의 농도 범위일 수 있다. PEG 농도는 0.5 내지 500 mg/ml 또는 10 내지 50 mg/ml의 농도 범위일 수 있다. PEG 평균 분자량은 500 내지 20,000의 범위일 수 있다. 아세트산나트륨 농도는 1 내지 10 mg/ml 또는 2 내지 5 mg/ml의 범위이다.

한 실시양태에서, 최종 용기는 살균 방사선에 노출시 중합체의 개질을 억제하는데 유효한 양의 안정화제, 바람직하게는 아스코르브산, 아스코르브산나트륨, 아스코르브산의 다른 염, 또는 항산화제를 추가로 함유한다.

다양한 실시양태에서, 본 발명의 지혈 조성물의 즉시 사용형은 희석제를 제공한 다음에, 환자에게 바로 적용될 수 있다. 지혈 조성물의 즉시 사용형을 환자에게 투여하거나 환자와 접촉시키는 방법 또한 고려되며, 여기서 지혈 조성물은 제1 시린지에 제공되고, 재구성을 위한 희석제는 제2 시린지에 제공되며, 제1 및 제2 시린지는 서로 연결되어 있고, 제1 시린지에 유체를 넣어 지혈 조성물의 유동성 형태를 생성하고, 임의적으로 지혈 조성물의 유동성 형태를 제2 시린지에 적어도 한번 다시 넣는다. 이 공정 ("스워싱(swooshing)"으로도 지칭됨)은 예를 들어 수술 동안의 응급 상황에서 단시간 내에 용이하고 효율적으로 또한 제조될 수 있는 본 개시내용에 따른 조성물의 적합한 즉시 사용형을 제공한다. 본원에 제공된 지혈 조성물의 이 유동성 형태는 구체적으로 상처, 출혈, 훼손된 조직, 출혈 조직 및/또는 골 결함으로 이루어진 군으로부터 선택된 손상의 치료에 사용하기에 적합하다. 다양한 실시양태에서, 즉시 사용형 제제는 히드로겔로서 존재하거나 제공된다.

안정성의 이유로, 이러한 생성물 (뿐만 아니라 본 개시내용에 따른 생성물)은 일부 실시양태에서 최종 용기 중에서 건조 형태로 제공되고, 사용 직전에 습윤화제 또는 용매화제 (현탁액)의 첨가를 필요로 하는 즉시 사용형 (보통 히드로겔, 현탁액 또는 용액의 형태임)으로 전환된다.

다양한 실시양태에서, 지혈 조성물의 유동성 형태는 50% (w/w) 초과가 100 내지 1000 ㎛의 크기를 갖는 입자, 또는 80% (w/w) 초과가 100 내지 1000 ㎛의 크기를 갖는 입자를 함유한다. 유동성 형태가 가교 아밀로펙틴 또는 덱스트린을 5 내지 30 % (w/w), 10 내지 25% (w/w), 또는 12 내지 20% (w/w)의 양으로 함유하는 것이 고려된다.

본 개시내용에 따른 지혈 가교 다당류 중합체, 예컨대 아밀로펙틴 또는 덱스트린은 (상처에 적용시) 혈액 흐름에 대한 장벽을 형성할 수 있는 효율적인 매트릭스를 형성한다. 구체적으로, 지혈 중합체의 팽윤 성질은 출혈 및 재출혈 과정에 대한 효과적인 기계적 장벽을 만들 수 있다.

추가의 성분이 본 발명에 따른 지혈 조성물에 존재할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 본 발명에 따른 지혈 조성물은 항피브린용해제, 응혈원, 혈소판 활성화제, 항생제, 혈관수축제, 염료, 성장 인자, 골 형성 단백질 및 진통제로 이루어진 군으로부터 선택된 물질 중 1종 이상을 추가로 포함할 수 있다.

본 개시내용은 또한 브러쉬형(brushed) 최종 용기에 제공된다. 이 완성된 용기는 본 발명에 따른 지혈 조성물을 살균되고 보관-안정하며 시판가능한 형태로 함유한다. 최종 용기는 제약상 투여 화합물을 하우징 (및 보관)하는데 적합한 임의의 용기일 수 있다. 시린지, 바이알, 튜브 등이 사용되지만, 본 발명에 따른 지혈 조성물을 시린지에 제공하는 것이 바람직하다. 의료 행위에서 시린지의 취급상 이점 때문에, 시린지는 선행 기술에 개시된 지혈 조성물을 위한 바람직한 투여 수단이었다. 이어서, 상기 조성물을 (필요에 따라 재구성한 후에) 바람직하게는 시린지의 특정 니들을 통해 또는 적합한 카테터를 통해 적용할 수 있다. 재구성된 지혈 조성물 (히드로겔을 형성하기 위해 재구성됨)은 또한 다양한 다른 수단에 의해, 예를 들어 스패튤라, 브러쉬, 분무기, 수동 가압, 또는 임의의 다른 전형적인 기술에 의해 적용할 수 있다. 유동성 지혈 조성물을 내시경 (복강경)에 의해 환자에게 투여하는 것이 고려된다. 다양한 실시양태에서, 물질의 비즈, 층 또는 유사한 부분을 형성하기 위해 재구성된 조성물을 구멍, 천공, 니들, 튜브 또는 다른 통로를 통해 압출시킬 수 있는 시린지 또는 유사한 어플리케이터를 사용하여 지혈 조성물을 적용한다. 상기 조성물의 기계적 붕괴는 전형적으로 0.01 mm 내지 5.0 mm, 바람직하게는 0.5 mm 내지 2.5 mm 범위의 크기를 갖는 시린지 또는 다른 어플리케이터의 구멍을 통해 압출시킴으로써 수행될 수 있다.

본 발명의 또다른 측면은 본 발명에 따른 공정에 의해 제조된 지혈 조성물을 제약상 허용가능한 희석제와 접촉시키는 것을 포함하는, 즉시 사용형 지혈 조성물을 제공하는 방법에 관한 것이다.

키트

상기 방법을 수행하는데 유용한 지혈 조성물을 포함하는 키트 또한 본원에서 고려된다. 키트는 본 개시내용에 따른 지혈 조성물 및 사용 지침서를 포함한다.

구체적으로 지혈 조성물이 건조 형태로 함유되는 경우, 키트가 지혈 조성물의 재구성을 위한 제약상 허용가능한 희석제를 추가로 포함하는 것이 고려된다. 키트의 추가의 성분은 1종 이상의 투여 기기, 예컨대 시린지, 카테터, 브래쉬(brash) 등 (조성물이 기기에 아직 제공되지 않은 경우) 또는 의료 행위 (수술)에 사용하는데 필요한 다른 부품, 예컨대 대용 니들 또는 카테터, 여분의 바이알 또는 추가의 상처 커버 수단일 수 있다. 다양한 실시양태에서, 본원의 키트는 건조하고 안정한 지혈 조성물을 하우징하는 시린지 및 희석제를 함유하는 (또는 또다른 희석제 용기로부터 희석제를 취하도록 제공된) 시린지를 포함한다. 키트가 조성물을 혼합 또는 "스워싱"하는데 유용한 연동 시린지를 포함하는 것 또한 고려된다.

본 발명의 추가의 측면 및 상세한 내용은 하기 실시예로부터 명백할 것이고, 하기 실시예는 제한하는 것이 아니라 설명하기 위한 것으로 의도된다.

실시예

실시예 1 - 유동성 지혈 매트릭스의 제조

저분자량 (<2,000 Da), 중간 분자량 (20 kDa), 및 고분자량 (>45,000 Da) 말토덱스트린 (아이코덱스트린) 출발 물질을 사용하여 일련의 가교 말토덱스트린을 제조하였다. 가교제 (에피클로로히드린) 및 말토덱스트린 기재의 비율, 반응 온도를 달리하여, 계면활성제를 첨가하거나 첨가하지 않고, 수성 또는 비-수성 매질 중에서, 교반된 조건 또는 정적 조건하에, 및 합성 후 가공 (세척, 분쇄, 건조)을 이용하여 제조하였다. 히드로겔의 친수성 (팽윤)은 0.9% 염수 중에서 24 시간 동안 인큐베이션한 후에 그들의 물 흡수 (평형 팽윤)를 측정하여 평가하였고, 그의 팽윤 중량을 측정하였다. 이어서, 샘플을 120℃에서 2 시간 동안 건조시키고, 그의 건조 중량을 측정하였다. 중량차를 이용하여 % 평형 팽윤 (E-팽윤)을 계산하였다. 아이코덱스트린을 사용하여 제조한 히드로겔은 120 내지 900% 범위의 E 팽윤 및 30 초에서 120 내지 350 범위의 Q 팽윤을 가졌다. 반응 시간은 대략 22 내지 23 분이었다. 고분자량 아이코덱스트린을 사용하여 제조한 히드로겔은 450 내지 1200% 범위의 E 팽윤을 나타내었다. 반응 시간은 대략 16 분이었다.

가교 말토덱스트린 0092-120A를 막자사발 및 막자를 이용하여 분쇄한 다음, 0.5 mm 체를 통해 체질하였다. 체질한 물질을 유동성 지혈 매트릭스로서 평가하였다. 5 mL 시린지에 0.8 그램의 분쇄된 물질을 실은 다음, 3.8 mL의 물을 함유하는 또다른 시린지에 연결하였다. 시린지들을 약 20 회 앞뒤로 스워싱하여 분말을 수화시킨 다음, 수화된 물질을 압출시키기 전에 약 30 초 동안 그대로 두었다. 압출시에 플로실 VH/SD 지혈 매트릭스와 필적할 만한 점조도를 가진 히드로겔이 관찰되었다.

실시예 2 - 지혈 조성물을 사용하여 지혈을 평가하는 방법

본원의 지혈 조성물의 지혈 능력을 관련 기술분야에 공지된 몇몇 검정을 이용하여 측정할 수 있다.

관련 기술분야에 기재된 바와 같이 혈전탄성묘사법 (TEG)을 수행하였다. 예를 들어, 소프트웨어로서 TEG 분석 소프트웨어 (TAS)를 사용하는 TEG? 5000 트롬보엘라스토그래피(Thromboelastography?) 지혈 시스템을 이용하였다. 간략히, 0.125 g의 시험 물품을 500 IU/ml 트롬빈 및 40 mM CaCl2를 함유하는 625 ㎕의 트롬빈 모액으로 재구성한 다음, 5 분 동안 정치하였다. 대략 150 ㎕ 또는 150 mg의 재구성된 시험 물품을 TEG 컵에 옮기고, 이를 상기 장비에 넣었다. 즉시, 5 U/ml의 헤파린으로 항응고된 210 ㎕의 혈액을 상기 컵에 첨가하고 신속히 혼합하였다. 이어서, TEG를 작동시키고, 전형적으로 20 분 동안 데이타를 수집하였다. 진폭 (A) 및 최대 진폭 (MA) 값을 이용하여, 생성물 성능을 평가하고 참고 표준과 비교하였다. >50 mm의 A 및 MA 값, 및 >1의 A/MA 값이 양호한 지혈 활성 및 강력한 응괴 형성의 예측 변수이다.

관련 기술분야에 기재된 바와 같이 압출력 (EF)을 측정하였다 (예를 들어, US 20130129710 참고). 웅형 루어 락 시스템(Luer lock system) (0.482 인치의 내경을 가진 실린더형 바디를 가짐)을 가지며 표준 6.35 cm 전달 팁이 부착되어 있는 5 cc 시린지에 대해 압출력 값을 측정함으로써 EF 분석을 수행하였다. 간략히, 0.80 g 시험 물품을 5.0 ml 매트릭스 시린지 (상기 기재됨)로 옮겼다. 4.0 ml 트롬빈/CaCl₂ 모액 (500 IU/ml 트롬빈 및 40 mM CaCl2 및 대략 50 mg/ml 알부민을 함유함)을 자형 루어 락 시스템을 가진 5.0 ml 표준 시린지에 실었다. 2개의 시린지를 연결하고, 시험 물품을 신속하게 20 회 재구성한 다음, 분석하기 전에 30 ± 3 분 동안 정치시켰다. 이어서, 서로 연결된 시린지를 2회 더 "스워싱"하고, 재구성된 샘플을 함유하는 웅형 루어 락 시스템을 가진 시린지에 어플리케이터 팁을 장착하고, MTS 인사이트(INSIGHT™) 전기기계 포스 게이지에 삽입하였다. 상기 샘플을 250 mm/분의 설정 압축 속도에서 압출시키고, 전체 샘플 압출에 대해 측정된 그의 평균 압출력을 기록하였다.

콜라게나제 검정은 생체내 잔류 시간의 지표인 세포 용해 시간을 측정하는데 유용하다. 검정을 위해, 0.08 g의 시험 및 대조군 샘플을 30 분 동안 37℃에서 회전 혼합기에서 2 ml의 PBS 완충제와 함께 인큐베이션하였다. 그 후, 샘플들을 에펜도르프(Eppendorf) 원심분리기에서 14000 rpm에서 5 분 동안 실온에서 원심분리하였다. 상청액을 폐기하고, 침전물을 0.111 U/ml 콜라게나제를 함유하는 1.2 ml PBS 완충제 중에 재현탁시켰다. 참고 샘플은 1.2 ml PBS 완충제와 함께 (콜라게나제를 첨가하지 않고) 인큐베이션하였다. 샘플들을 37℃에서 회전 혼합기에서 인큐베이션하고, 규정된 정치 시간 후에 상청액을 흡입해 내고, 칭량하고, 단백질 측정을 위해 (BCA 시험) 수집하였고, 샘플들을 콜라게나제를 함유하는 1.2 ml의 PBS 완충제로 재충전하였다. 용해 시간은 시간이 지남에 따라 상청액으로 방출되는 분해된 단백질의 함량을 측정함으로써 결정할 수 있다. 이 검정에서 시험 물품의 추정된 90% 용해 시간을 측정하는 것은 히드로겔의 잠재적인 생체내 잔류 시간에 대한 간접적인 추정치이다.

실시예 3 - 유동성 지혈제의 생체내 평가

물질 및 방법: 이 연구를 위해, 정중선 개복을 수행한 다음, 전기 소작에 의해 수술 절개부로부터의 출혈을 중단시켰다. 간을 노출시키고, 간엽을 단리하였다. 10 mm 직경의 펀치 생검을 사용하여, 코어 조직을 제거한 채로 대략 5 mm 깊이로 일련의 2개의 전체가 아닌 두께의 병변을 생성하였다. 상기 병변에 대해 미리 칭량한 거즈를 사용하여 각각의 병변으로부터 흐르는 혈액을 6 초 동안 수집하는 것을 포함하는 처치 전 출혈 평가를 수행하였다.

시험 물품 (즉, 유동성 지혈 조성물)을 무작위하여, 병변 생성 이전의 처치에 대해 알지 못하는 외과의에게 제시하였다. 대략 1.0 ml의 할당된 지혈 시험 물품을 병변에 국소 적용하였다. 염수로 습윤된 거즈를 사용하여 시험 물품이 그들의 지정된 병변에 근접하도록 하였고, 타이머를 작동시켰다. 근접하여 있는 염수로 습윤된 거즈를 2 분 후에 제거하였다.

거즈를 제거한 직후에 (시점 0) 및 그 후 2, 3, 5, 7 및 10 분에 각각의 병변으로부터 출혈 정도를 평가하였으며, 이는 적용 후 2, 4, 5, 7, 9, 및 12 분에 해당하였다.

미리 정의된 등급 시스템 (도 1)을 이용하여 정성적인 처치 후 출혈 평가를 수행하였고, 성공적인 지혈은 ≤1의 출혈 등급으로 정의되었다. 혈액으로 포화되었지만 활동성 출혈이 없는 시험 물품은 출혈 등급이 0이었다. 5 분 평가 후에 염수를 사용하여 병변으로부터 과잉의 시험 물품에 관주시켰다. 다수개의 간엽에서 상기 절차를 반복 수행하였다. 1명의 외과의가 생성하고, 처치하고, 관찰 평가를 수행하였다.

시험 물품 분말을 5 mL 시린지에 분배하고 (0.8 g/시린지), 유동성 말토덱스트린으로 재지정하여, 돼지 간 펀치 모델에서 평가하였다. 사용된 대조군 조성물은 10 mL 키트 크기를 갖는 플로실 VH S/D이었다. 0.9% 염수 중에 500 I.U./ml 트롬빈을 함유하는 용액을 제조하여, 각각의 시험 물품 (3 mL/시린지)을 재구성하는데 사용하였다.

각각의 시험 물품 샘플을 시린지들 사이에서 20 회 통과시킴으로써 ("스워싱") 신속히 혼합하였고, 제조 후 5 분 내지 60 분에 병변에 적용하였다. 1 밀리리터 분취량의 재구성된 시험 물품을 3 mL 부피의 개별 시린지에 분배하였다. 이어서, 이들 3 mL 개별 시린지를 사용하여 간 펀치 병변에 시험 물품을 적용하였다.

비교예로서, 플로실 VH S/D의 생체내 평가를 돼지 간 펀치 생검 모델을 사용하여 또한 수행하였다. 압축물을 IFU에 따라 제조하여, 제조 후 5 분 내지 60 분에 병변에 적용하였다. 1 밀리리터 분취량의 재구성된 플로실 매트릭스를 3 mL 부피의 개별 시린지에 분배하였다. 이어서, 이들 3 mL 개별 시린지를 사용하여, 다양한 시점에서 시험 물품을 간 펀치 병변에 적용하였다.

결과: 유동성 말토덱스트린 및 플로실 VH S/D의 생체내 평가를 하루에 1 마리의 동물씩 4 마리의 동물에서 돼지 간 펀치 생검 모델을 사용하여 수행하였다. 결과를 표 1 및 도 2 및 3에 나타내었다. 2개의 샘플 군 (유동성 말토덱스트린 및 플로실 VH S/D)에 대한 적용 전 출혈률을 표 1에 나타내었다. 처치 전 출혈률이 처치군에 걸쳐 유사하였고, 이는 플로실 및 유동성 시에라(Sierra)가 비슷한 간 병변에 투여되었음을 나타낸다.

<표 1. 적용 전 출혈률 (mL/분)의 요약>

도 2에 나타낸 데이터는 지혈 평가 동안의 다양한 시점에서 유동성 말토덱스트린으로 처치된 병변의 78.1 - 90.6%에서의 지혈 성공을 입증한다 (플로실 VH S/D의 경우 74.2 - 96.8%). 모든 병변에서, 플로실 VH S/D 처치에서는 186 중 161 시점에서 지혈 성공 (86.6±8.0%)을 달성한 것에 비해, 유동성 말토덱스트린 처치는 192 중 157 시점에서 지혈 성공 (81.8±4.6%)을 달성하였다 (도 3). 실시예 1에 따라 제조된 유동성 말토덱스트린은 전반적으로 플로실 VH S/D에 필적할 만한 지혈 성공 및 출혈 감소를 달성하였다.

통상의 기술자라면 상기 예시적인 실시예에 기재된 바와 같이 본 발명의 수많은 변형 및 변경이 일어남을 예상한다. 결과적으로, 본 발명에서는 첨부된 청구항에서만 그러한 제한이 있어야 한다.

Claims

가교 아밀로펙틴, 아이코덱스트린 또는 말토덱스트린, 또는 가교 개질 아밀로펙틴, 아이코덱스트린 또는 말토덱스트린을 포함하는 지혈 조성물.
제1항에 있어서, 유동성 히드로겔인 지혈 조성물.
제1항에 있어서, 분말화 형태인 지혈 조성물.
제1항에 있어서, 분무가능한 형태인 지혈 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 응혈원, 혈액 응고 인자, 지혈약, 수렴제 및 다른 지혈제로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 작용제를 추가로 포함하는 지혈 조성물.
제5항에 있어서, 상기 응혈원이 트롬빈인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아밀로펙틴, 아이코덱스트린 또는 말토덱스트린이 아민, 알데히드, 포스페이트, 포스포네이트, 술페이트, 술포네이트 및 카르복실레이트 기로 이루어진 군으로부터 선택된 관능기를 추가로 포함하는 것인 지혈 조성물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 응고 캐스케이드를 활성화시키거나 또는 조직으로의 결합을 증진시키는 지혈 조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 가교 조성물이 에피클로로히드린, 비스-에폭시프로필에테르, 에틸렌 글리콜-비스-에폭시 프로필 에테르, 나트륨 트리메타포스페이트 (STMP), 아디프산-아세트산 무수물, 옥시염화인, 포름알데히드, 디에폭시드, 비닐시클로헥센 디옥시드, 부타디엔 디옥시드, 포름알데히드, 글루타르알데히드 및 게니핀으로 이루어진 군으로부터 선택된 가교제를 포함하는 것인 지혈 조성물.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 말토덱스트린이 저분자량, 중간 분자량 또는 고분자량 말토덱스트린으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 지혈 조성물.
제10항에 있어서, 상기 저분자량 말토덱스트린이 2,000 Da 미만인 지혈 조성물.
제10항에 있어서, 상기 중간 분자량 말토덱스트린이 2,000 내지 45,000 Da인 지혈 조성물.
제10항에 있어서, 상기 고분자량 말토덱스트린이 45,000 Da 초과인 지혈 조성물.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 다당류, 폴리비닐알콜, 폴리에틸렌이민, 키토산, 알긴산, 푸코이단, 히알루론산, 헤파린, 헤파란, 콘드로이틴 술페이트, 아밀로펙틴, 아밀로스, 크산탄 검, 구아 검, 카라기난, 카르복시메틸 셀룰로스, 카르복시메틸 말토덱스트린, 카르복시메틸 아이코덱스트린, 카르복시메틸 전분, 아가로스, 및 천연 또는 합성 중합체로 이루어진 군으로부터 선택된 첨가제 또는 활성제 중 1종 이상을 추가로 포함하는 지혈 조성물.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아밀로펙틴, 아이코덱스트린 또는 말토덱스트린이 식물 물질, 박테리아, 진균 또는 조류로부터 유래된 것인 지혈 조성물.
제15항에 있어서, 상기 식물 물질이 옥수수, 대두, 벼, 타피오카, 밀, 찰옥수수 및 찰벼로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 지혈 조성물.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 따른 지혈 조성물을 손상 부위에 투여하는 것을 포함하는, 상처, 출혈, 훼손된 조직 및 출혈 조직으로 이루어진 군으로부터 선택된 손상을 치료하는 방법.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 따른 지혈 조성물을 출혈 영역에 적용하는 것을 포함하는, 출혈을 지연시키거나 중단시키는 방법.
제17항 또는 제18항에 있어서, 상기 손상 또는 출혈이 수술 동안에 발생하는 것인 방법.
제17항 또는 제18항에 있어서, 상기 조성물을 분말 형태로 적용하는 것인 방법.
제17항 또는 제18항에 있어서, 상기 조성물이 스폰지, 패드, 필름 또는 섬유로 사용되는 것인 방법.
제17항 또는 제18항에 있어서, 상기 조성물이 분말화 형태이고, 상기 조성물을 먼저 액체와 혼합하여 유동성 조성물을 형성하는 것인 방법.
제22항에 있어서, 상기 액체가 염수, 물, 완충 용액 및 단백질 용액으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
제18항에 있어서, 상기 조성물이 수초 또는 수분 이내에 출혈을 중단시키는 것인 방법.
a) 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 따른 지혈 조성물 및 b) 사용 지침서를 포함하는, 상처, 출혈, 훼손된 조직 및 출혈 조직으로 이루어진 군으로부터 선택된 손상을 치료하기 위한 또는 출혈을 지연시키거나 중단시키기 위한 키트.
제25항에 있어서, 상기 지혈 조성물이 건조 형태이고, 상기 키트가 지혈 조성물을 재구성하기 위한 제약상 허용가능한 희석제를 추가로 포함하는 키트.