JPS624232A - 止血剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、止血剤に関するものであり、さらに詳しくは
、外傷に伴なう出血、術中あるいは術後の出血、骨性出
血、膀胱出血、抜歯後出血、鼻出血、上部消化管出血、
産婦人科出血、創傷による出血、癒着剥離面や骨断端、
実質臓器の切断面からの出血などのような結紮困難な出
血の止血にも有効に利用しうる止血剤に関するものであ
る。

（従来の技術）（発明が解決しようとする問題点）本発
明に用いられるキチンスポンジについて米国特許第３９
８８４１１号明細書の第８頁第４８行にはキチン成形体
の例としてスポンジが明記れているがその具体的な製造
方法については記されていない。

更に、第１回キチン・キトサン国際会議会報（１９７７
）の第２９６頁から３０５頁にわたる“創傷治癒促進に
おけるキチン・キトサンの応用”中にはキチンスポンジ
の利用が例示されており、その３００頁ｉ１６行〜第２
４行にはセルロースビスコース法と同様な工程で得られ
たキチン溶液に硫酸ナトリウムを混合した後に、硫酸ナ
トリウムを溶出させてスポンジを製造することが記載さ
れているが、その機械的性質等については何も記されて
いない。

一方、従来から有効な外科用止血剤を開発することは各
科領域に於いて大きな課題となっており。

例えばトロンビンを含有させたゼラチンスポンジ（米国
特許２，５５８，３９５号１特公昭３１−４６４４号）
が提案されているが、かかるゼラチンスポンジはゼラチ
ンの変性を行っていないので、止血を必要とする創傷面
、又は手術野に適用した際、出血々液や体液の浸潤を受
けてすみやかに溶解し、スポンジが局所から離脱するだ
けでなく、配合したトロンビンなどの薬剤もその効果を
発揮する前に流出するし、たとえトロンビンによってフ
ィブリン被膜が形成されても、浴出する血液量が多くま
たは創傷面がすれ合う様な場合は、形成したフィブリン
被膜が摩擦力によって離脱することがあり、結局のとこ
ろ完全なる止血作用は期待できない。

従って、外科用止血剤を止血を必要とする創傷面。

又は手術野に適用した際、出血々液や体液の浸潤状態に
於いても一定の形態を保ち、更にはトロンビンによって
形成されたフィブリン被膜が摩擦力によって離脱する事
のない様、創傷面を保護しうる様な外科用止血剤が望ま
れていた。

そのため、特公昭２６−５６４８号、同２６−５６４９
号同２８−２９９５号、同３５−１６４９６号、同４４
−２２８２９号公報および同５４−４１１１１号公報に
は、ゼラチンを蛋白変性剤であるホルマリン等で変性し
たのち発泡させ。

スポンジとし、このスポンジが難溶性である点を利用し
て出血した血液を多孔性スポンジに吸収し。

血液成分中の凝固因子を遊離して止血を促すか。

またはスポンジに含有れた血液凝固剤が創傷面へ徐放さ
れ、止血を促すがごとき止血剤が提案されている。かか
るゼラチンスポンジは、上記の如きフィブリン被膜の離
脱や配合成分の流出といった欠点はないが、出血した血
液や体液によって直ちに湿潤状態になり、かかる湿潤状
態におけるゼラチンスポンジの強度は極めて低く、止血
の際の取扱い性が非常に悪く、型くずれを起こし、一定
の形態を保ち得す、形成されたフィブリン被膜が摩擦力
によって離脱するという欠点があった。このように、止
血用スポンジを使用する場合には、血液や体液により、
湿潤状態となり、従って止血用スポンジは使用に際して
、湿潤状態が低く、取扱い性が非常に悪く、型くずれを
起こし、一定の形態を保ち得ないという問題点をかかえ
ていた。

止血用スポンジは血液などによる湿潤は避けられず、従
って確実に止血するためには、湿潤状態に於いてもスポ
ンジはその形態を保ち、創傷面を保護し得る程度の強度
が必要である。即ち、湿潤時に強度が低下してその形態
を保ち得ないという従来の止血用スポンジの欠点を克服
した製品の開発が待望まれでいた。

（問題点を解決するための手段） 本発明者らは湿潤状態においても強度の優れた性能を有
する止血剤を開発すべく鋭意研究を重ねた結果、１ｇ７
ｍｍ”以上の湿潤強度を有しており。

血液凝固剤が固定化されたキチンスポンジが止血剤とし
て優れていることを見出し１本発明に到達したものであ
る。

すなわち２本発明は血液凝固剤が固定化されたキチンス
ポンジからなり、少なくとも１　ｋｇ／ｍｍ”の湿潤強
度を有することを特徴とする止血剤である。

本発明に於ける湿潤強度とは、止血剤を２０℃に保たれ
た生理食塩水に６０分間浸漬後の引張り強度を、湿潤状
態で引張り試験機を用いて測定し。

得られた測定値（ｇ）を止血剤の断面積（＋ｎｍ２）で
除した値にて表示する。その測定条件は、止血剤の形態
や大きさにより異なるが、たとえば形態がシート状であ
る場合には、１０ｍｍ巾に切断し、湿潤させたのち引張
り初期長５０ｍｍ、引張り速度２ＱＯｍｍ　／ｍｉｎの
測定条件を採用する。測定環境は温度２０℃、相対温度
６０％にて行う。たとえば乾燥時の厚みが８ｍｍのシー
ト状止血剤を１０ｍｍ巾に切断し、２０℃に保たれた生
理食塩水に６０分間浸漬した後、直ちに測定した見かけ
の引張り強度が３００ｇであった場合、その湿潤強度は
３００／　（１０Ｘ８）＝３．７５　（ｇ／ｍｍ２）と
なる。

本発明の止血剤は、少なくとも１ｇ７ｍｍ”、好ましく
は少なくとも３ｇ／ｍｍ２．　さらに好ましくは少なく
とも５ｇ／ｍｍ”の湿潤強度を有することが必要である
。湿潤強度が１ｇ７ｍｍ”未満のものでは止血剤として
十分な機能を発揮しえない。

本発明においてキチンとは、甲殻類、昆虫類の外骨格等
を塩酸処理並びに力性ソーダ処理して蛋白質およびカル
シウム分を分離精製することによって得られるポリ　（
Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン）あるいはそれらの誘
導体をいう。キチンの誘導体としては、アセチルグルコ
サミン基の一部が脱アセチル化したもの、エーテル化物
、エステル化物、カルボキシメチル化物、ヒドロキシエ
チル化物、０−エチル化物等があげられ、好ましい具体
例としてはポリ　〔Ｎ−アセチル−６−〇−（２′−ヒ
ドロキシエチル）−Ｄ−グルコサミンコポリ　〔Ｎ−ア
セチル−６−０−（エチル）−〇−グルコサミン〕等が
あげられる。

本発明の止血剤は、これらのキチンをスポンジ状に成形
し２次いで血液凝固剤を固定することにより得ることが
できる。

キチンスポンジとは乾燥状態で測定された気孔率（Ｘ１
００％；Ｂ：単位重量の多孔性成形体に含まれる細孔の
容積、Ａ：単位重量の多孔性成形体の全容積）が９０％
以上である成形体１例えばシート状、棒状、繊維状等の
湿式成形可能な成形体を意味する。

かかるキチンスポンジは１例えば以下のごとき方法によ
って製造することができる。

精製れたキチンを、公知のキチンの溶剤１例えばジメチ
ルアセトアミドと塩化リチウムの混合物Ｎ−メチルピロ
リドンと塩化リチウムの混合物９トリクロル酢酸とハロ
ゲン化炭化水素の混合物に０゜５〜１５重量％程度の濃
度で溶解してドープを得る。このドープに、常温で固体
である水溶性高分子２例えばポリビニルアルコール、ポ
リエチレングライコール、ポリプロピレングライコール
。

寒天、水溶性デンプン、蛋白質等、好ましくはポリビニ
ルアルコール又は寒天末をドープ中に均一に分散させる
。その際、キチンドープ対水溶性高分子の比率は１１５
〜５／ｌ（重量比）の範囲から選ぶのが好ましい。水溶
性高分子の混合されたキチンドープは、形枠等に流し込
んだり、スリット状グイから押し出す等の方法で好まし
い形状を保たせながら、凝固液にて凝固を行う。凝固液
としては例えば水又はメチルアルコール、エチルアルコ
ール、プロピルアルコール、ブチルアルコール等のアル
コール類、又はアセトン等のケトン類が好ましく用いら
れる。溶剤が十分に除去され、凝固が終了した後、＠置
物は水又は水溶液で処理を行う。一般に水溶性高分子は
低温で、この凝固物中から除去し難いので、６０℃〜１
２５℃の高温での処理が好ましく１時間は３０分以上が
好ましい。処理後の十分に洗浄された成形体は含水率の
高いスポンジ状を呈しており、この状態から乾燥体を得
るには、一般的な常温乾燥を行ってもよいが、凍結乾燥
法が好ましく使用れる。すなわち、水を含んだままで成
形体を約−４０℃の温度で凍結した後１０℃の温度で凍
結乾燥を行うのが好ましい。

本発明におけるキチンスポンジとしては、上記のごとく
にして得られたキチンスポンジをアルカリ溶液中で処理
したものであってもよい。アルカリ処理を行うための好
ましい条件は９例えば力性ソーダの５〜６０Ｗ／Ｖ％水
溶液を用い、温度１０〜１２０℃で１分間以上処理する
ものであり、アルカリ処理れたキチンスポンジは２５℃
、２Ｖ／Ｖ％酢酸水溶液に浸漬されたときに溶解しない
ものである。

本発明における血液凝固剤としては、たとえば血液凝固
因子であるフィブリノーゲン、プロトロンビン、組織ト
ロンボプラスチン、カルシウムイオン、プロアクセレリ
ン、プロコンパ−チン、アンチヘモフィリック因子、ク
リスマス因子、スチュアート因子、血漿トロンボプラス
チン前駆体。

ハーゲマン因子、フィブリン安定化因子、プレカリクレ
ン、高分子キニノーゲン、或いはアルギン酸ナトリウム
、塩化第二鉄などがあげられるが。

本発明に於いてはトロンビンが特に好ましく使用される
。トロンビンは１人、牛、豚などの血液より分離れるが
１人に適用する場合にはヒトトロンビンを用いるのが好
ましい。

本発明における血液凝固剤は、前記キチンスポンジに結
合させるか、又は吸着させることにより固定化すること
ができる。血液凝固剤をキチンスポンジに結合させるに
は１例えばＯ，Ｚａｂｏｒｓｋｙ。

Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　Ｅｎｚｙｍｅｓ”ＣＲＣＰｒ
ｅｓｓ（１９７３）に記載れているような従来より公知
の共有結合法やイオン結合法を採用することができるし
、また吸着させるには、同じく物理的吸着法や包括法を
採用することができる。

本発明の止血剤を製造する際には１例えば次のようにし
てキチンスポンジに血液凝固剤を結合させることができ
る。即ち、血液凝固剤がアミノ基やカルボキシル基など
のような共有結合形成能又はイオン結合形成能を持つ官
能基を有する場合にはこれらを含む溶液にて、キチンス
ポンジを処理することにより目的とする結合による固定
化を行うことができる。また、この際キチンスポンジが
血液凝固剤のもつ官能基と共有結合又はイオン結合し得
る官能基を全く有しないか又は少ししか有しない場合に
は予めキチンスポンジにそれらの官能基を化学反応によ
り導入した後、血液凝固剤をかかるキチンスポンジに結
合することができる。

血液凝固剤が官能基を有しない場合には、前述の場合と
同様に化学反応にて官能基導入した後、使用することも
可能であるが、多くの場合このような化学反応にては血
液凝固剤の薬剤としての特性がそこなわれることになる
のでこの方法はこのましく採用されることはない。なお
、共有結合させるｌは、ジシクロへキシルカーポジイミ
ド、１−シクロへキシル−５−（２−モルホリノエチル
）−カーポジイミド−メトーＰ−１−ルエンスルホネ一
トなどの脱水縮合剤を用いるのが好ましい。

又１本発明の止血剤を製造する際には１次のようにして
キチンスポンジに血液凝固剤を物理的吸着法により吸着
することができる。即ち、キチンスポンジを湿潤しうる
溶媒に血液凝固剤を溶解又は懸濁し、この溶液を用いて
キチンスポンジを処理することにより血液凝固剤を物理
的に吸着することができる。この吸着法はいかなる血液
凝固剤にも有効であり１節便でかつ薬剤としての特性が
そこなわれることも少ないので本発明においては好まし
く採用される。

本発明の止血剤を製造するには、前記のごとくキチンス
ポンジに血液凝固剤を結合させるか又は吸着させる方法
の他に、まずスポンジに加工する前のキチンそのものに
血液凝固剤を結合するか又は吸着させ、しかる後にスポ
ンジに加工して製造するものである。

本発明の止血剤の製造に際しては、必要に応じて血液凝
固剤と共に抗炎消削・抗菌剤・抗生物質ホルモン剤など
の医薬品、アルブミン・α１−アンチプラスミン、α２
−マクログロブリンなどのプロテアーゼインヒビター、
セルロプラスミン・ハプトグロブリン、コールドインソ
ルブルグロブリンなどの血脩蛋白などをキチンスポンジ
に固定化することができる。アンチプラスミンはフィブ
リン溶解酵素であるプラスミンの阻害剤であり。

従ってプラスミンを阻害することによりフィブリン溶解
性、即ち線溶活性を抑制する。従って血液凝固剤と共に
アンチプラスミンが固定化れた止血剤は、線溶活性を抑
制することによりフィブリンの生成を促進することがで
きる。アンチプラスミンとしては例えば牛の肺臓より抽
出されるアプロチニン、微生物の培養液から分離される
ペプスタチン・ロイペプシン・アンチパイン・キモスタ
チンなどの天然物質、ε−アミノカプロン酸、トラネキ
サチ酸、メシル酸ガベキサートなどがあげられるが、特
にアンチパインが好ましく用いられる。

（実施例） 次に、実施例を示し本発明を更に具体的に説明する。

実施例１．比較例１．比較例２ キチン粉末（共和油脂製）を１００メソシユに粉砕し、
　　ＩＮ−＋１ｃＩにて４°Ｃで１時間処理し、さらに
３％ＮａＯＨ液中で３時間、　　９０〜１００　”ｃで
加熱し、水洗をくりかえし乾燥した。得られたキチンを
室温で、塩化リチウム８重量％を含んだジメチルアセト
アミド溶媒に濃度が２重量％になるように溶解して透明
な液を得たのち、　１４８０メツシユステンレスネツト
にて加圧濾過し、さらに攪拌を行いながら減圧下で脱泡
を行ってキチンドープを得た。このキチンドープ１００
ｇにポリビニルアルコール（ポバールＩＦ　−１７ＯＧ
Ｓ、ユニチカケミカル株式会社製：重合度１７０．ケン
化度９５％以上）５０ｇを添加し、攪拌翼を有したビー
カー中で１時間攪拌して均一な分散液を作成した。

この分散液をガラス板上へ１０ｍｍの厚さで流延し、そ
の後約２５℃の水に浸漬して十分に凝固及び洗浄を行っ
てシートを得た０次いで、このシートを水に浸漬した後
、沸騰状態で５時間処理してシート状キチンスポンジを
得た。このスポンジをオ−トクレーブで１５分間滅菌し
たのち、−４０℃で凍結し、ついで１０℃で凍結乾燥を
１５時間行って、厚さ８ｍｍのキチンスポンジを得た。

このキチンスポンジ（５０ｍｍＸ　７０ｍｍＸ　８ｍｍ
）１枚に１２５ユニット／ｍ１のトロピン〔ヒトトロン
ビンの濃縮乾燥製剤（ミドリ十字製）〕の生理食塩水溶
液２８ｎ＋ｊ！を含有させた後、−４０℃で凍結し、つ
いで１０°Ｃで凍結乾燥を１５時間行ってトロンビンの
固定化されたシート状止血剤を得た。この止血剤の気孔
率は９９．２％であった。

この止血剤を１０ｍｍ巾に切断し、乾燥状態及び生理食
塩水に１時間浸漬した後、東洋ボールドウィン■製ＵＴ
Ｍ−ＩＩ型引張り試験機を用い、引張り初期長５０ｍｍ
、引張速度２００ｍｍ／ｍｉｎ　、温度２０°Ｃ２相対
湿度６０％の条件下で測定した。

比較例１として、前記第１回キチン・キトサン国際会議
会報（１９７７）に記載されている方法にてスポンジを
作製し、ついで実施例１と同様にしてトロンビンを固定
化したものの湿潤強度を実施例１と同様にして測定した
。即ち、キチン粉末（共゛和油脂製）を１００メツシユ
に粉砕し、ＩＮ−Ｈｃｌにて４℃で１時間処理し、さら
ちに３％Ｎ　ａ　Ｏｔｌ液中で３時間、９０〜１００℃
で加熱し、水洗を繰返した。得られたキチン１００ｇを
３００　ｍβの４０　Ｗ／Ｗ％水酸化ナトリウム水溶液
に１１〜１３℃で２時間、０〜５℃で１０時間浸漬しア
ルカリキチンとした。原料重量の約３倍に圧搾し過剰の
水酸化ナトリウム水溶液を除き、ミキサーで粉砕した。

かかるアルカリキチンを分液ロートにとり内部を真空に
してから一２０℃で１０時間放置した。次に５０ｇの二
硫化炭素を内部の真空を利用して注入し、ときどきふり
まぜながら３０℃で１５時間キサントゲン化した。更に
、あらかじめ０℃に冷却した水酸化ナトリウム水溶液に
アルカリ濃度が４．５χ、キチン濃度が５％になる様に
溶解させ、はとんど溶けたら一２０℃に５時間保持して
凍結させ。

次に約３時間かけて０〜５℃まで昇温し溶解させ完全に
均一なキチンビスコース溶液を得た。

かかるキチンビスコース５０ｇに硫酸ナトリウム３０ｇ
を添加し、攪拌翼を有したビーカー中で１時間撹拌して
均一な分散液を作成した。この分散液をガラス板上へ１
０ｍｍの厚さで流延し、その後約２５°Ｃの５％硫酸溶
液に浸漬してキチンを再生させた。次いで、このシート
を脱イオン水にて処理して硫酸ナトリウムを溶出させて
シート状スポンジを得た。このスポンジをオートクレー
ブで１５分間滅菌した後凍結し、ついで１０℃で凍結乾
燥を１５時間行って、厚さ８ｍｍのスポンジを得た。

このスポンジを実施例１と同様の方法にて処理してトロ
ンビこの固定化されたシート状スポンジを得た。このス
ポンジの強度を実施例１と同様にして測定した。

結果は第１表に示す様に、湿潤状態に於ける比較例１の
強度は極めて低く、湿潤状態に於ける取扱い性が非常に
悪く、型くずれを起こし、止血剤としての役割りを果た
し得ていなかった。一方。

本発明によるキチンスポンジより成る止血剤は高い強度
を有し、湿潤状態に於いても取扱い性が良く、一定の型
を保ち、止血剤として最適のものであった。

第　　１　表 実施例２，３ 実施例１と同様にして作成したキチンドープとポリビニ
ルアルコール（ポバール［ＩＦ　−１７０ＧＳ）の分散
液を、先端を切断したΦ４１のプラスチック製注射筒（
実施例２）、あるいは先端を切断したΦ８ｍｍのプラス
チック製注射筒（実施例３）にとり、２５℃の水中に押
出して十分に凝固及び洗浄を行って、ロンド（実施例２
）、フットボール状の球（実施例３）を得た。次いで、
このロンド及び球を水に浸漬した後、沸騰状態で５時間
処理してロンド状キチンスポンジ（実施例２）及びフン
トボール状キチンスポンジ（実施例３）を得た。

このスポンジをオートクレーブで１５分間滅菌した後、
凍結しついで１０℃で凍結乾燥を１５時間行って、Φ３
．５　ｍｍ、　　ｌ　＝　４５ｎｖ＋　（実施例２）、
φ７ｍｍ、　　Ｉ！＝　１３ｍｍ　（実施例３）のキチ
ンスポンジを得た。これらのキチンスポンジ各１個に１
２５ユニット／ｍｌのトロンビン（ヒトトロンビンの濃
縮乾燥製剤〔ミドリ十字製〕）の生理食塩水溶液０．４
　　ｍｌ（実施例２）、及び０．５ｎｌ（実施例３）含
存させた後、−４０℃で凍結し、ついで１０℃で凍結乾
燥を１５時間行って、トロンビンの固定化れたロッド状
止血剤（実施例２．気孔率９９．１％）及びフットボー
ル状止血剤（実施例３．気孔率９９．１％）を得た。

この止血剤を２ＩＩｌｆｆｉの厚さに切断し、乾燥状態
及び２０℃生理食塩水に６０分間浸漬した後、東洋ボー
ルドウィン■製ＵＴＭ−ｎ型引張り試験機を用い、引張
り初期長５ｍｍ、引張り速度２００ｍｍ　／　ｍ　ｉ　
ｎ　。

温度２０℃、相対湿度６０％の条件下で測定した結果は
第２表に示した。

第２表 実施例４ 実施例１で用いたポバールＵ　Ｆ　−１７０ＧＳ５０ｇ
にかえて寒天末（和光純薬工業株式会社製）６０ｇを用
いたほかは実施例１と同様にしてトロンビンの固定化さ
れたシート状止血剤（気孔率９８．０％）を得た。

次にこのシート状止血剤の乾燥強度及び湿潤強度を実施
例１と同様にして測定した。

結果を第３表に示した。

第３表 実施例５，６ 実施例１で用いたポバールＵ　Ｐ　−１７０Ｇ３５０ｇ
にかえて寒天末（和光純薬工業株式会社製）６０ｇを用
いたほかは実施例２．３と同様にしてトロンビンの固定
化れたロッド状止血剤（実施例５．気孔率９８．０％）
及びフットボール状止血剤（実施例６゜気孔率９８．０
％）を得た。

この止血剤の乾燥強度及び湿潤強度を実施例２゜３と同
様にして測定した。

結果を第４表に示した。

第４表 実施例７ 溶媒としてジメチルアセトアミドにかえてＮ−メチルピ
ロリドンを用いたほかは実施例１と同様にしてトロンビ
ンの固定化されたシート状止血剤（気孔率９９．０％）
を得た。

次にこのシート状止血剤乾燥強度及び湿潤強度を実施例
１と同様にして測定した。

結果を第５表に示した。

第５表 実施例８．９ 溶媒としてジメチルアセトアミドにかえてＮ−メチルピ
ロリドンを用いたほかは実施例２．３と同様にしてトロ
ンビンの固定化れたロッド状止血剤（実施例８．気孔率
９９．０％）及びフ７）ボール状止血剤（実施例９．気
孔率９９．０％）を得た。

この止血剤の乾燥強度及び湿潤強度を実施例２゜３と同
様にして測定した。

結果を第６表に示した。

第６表 実施例１０ 溶媒としてジメチルアセトアミドにかえてＮ−メチルピ
ロリドンを用い、かつポバールＵＦ−１７０ＧＳ　５０
ｇにかえて寒天末（和光純薬工業株式会社製）６０ｇを
用いたほかは実施例１と同様にしてトロンビンの固定化
されたシート状止血剤（気孔率９８．０％）を得た。

次にこのシート状止血剤の乾燥強度及び湿潤強度を実施
例１と同様にして測定した。

結果を第７表に示した。

第７表 実施例１１．１２ ン容媒としてジメチルアセトアミドにかえてＮ−メチル
ピロリドンを用い、かつポバール口Ｆ−１７０ＧＳ　５
０ｇにかえて寒天末（和光純薬工業株式会社製）６０ｇ
を用いたほかは実施例２．３と同様にしてトロンビンの
固定化されたロンド状止血剤（実施例１１．気孔率９８
％）及びフットボール状止血剤（実施例１２．気孔率９
８％）を得た。

この止血剤の乾燥強度及び湿潤強度を実施例２゜３と同
様にして測定した。

結果を第８表に示した。

第８表 参考例１，２．３ 実施例１．２．３で得た止血剤は各々１個に付き、トロ
ンビンを理論上３５００ユニツト（実施例１）５０ユニ
ツト（実施例２）　、　６２．５ユニツト（実施例３）
含有するものである。これらの形態の異なる３種の止血
剤のトロンビン活性の変化を経日的に測定した結果を第
９表に示した。尚１表中の数値はトロンビンのユニット
数を示すものである。

第９表 尚、トロンビンのユニット数の測定は以下の方法にて行
った。即ち、止血剤の１０倍容量の生理食塩水中にて、
３７℃、２０分間抽出した後９通常のトロンビン時間測
定法にて算出した。

参考例４ 実施例１で製造した止血剤の止血効果についてその構成
成分であるキチンスポンジ、トロンビン及び比較例１で
製造した止血剤を対照として肉眼による判定を行った。

即ち９体重２．０〜２．５　ｋｇの家兎（♀）を用いて
チオペンクール（２４ｍｇ／ｋｇ）で麻酔後、背位の毛
をそり２次に背筋表面に刺傷して出血させるため、虫ピ
ン（市販のもの：長さ３ｃｍ）１０本を直径約８ｍ１１
１になるように束ねた。

又、背筋に突刺した際、深さが５〜６ｍｍになるように
針の長さを調節した。かかる刺傷器を用いて背筋表面に
３回同一場所を突刺し出血させた。出血後、刺傷部に実
施例１にて得られた止血剤（１５ｍｍＸ１５ｍｍＸ　８
ｎ＋ｍ）　＋　キチンスポンジ（１５ｍｍ　Ｘ　１５ｍ
ｍＸ８＋ｎｍ）及び比較例１にて得られた止血剤（１５
ｍｍＸ　１５ｍｍ　Ｘ　８　ｍｍ）を置いた。本発明の
止血剤（１５ｎａ＋Ｘ　１５ｍｍ　Ｘ　８　ｍｍ）に含
有されるトロンビンは１８０単位であるので、対照とな
る粉末トロンビンは１８０単位を刺傷部にふりかけた。

家兎個体差を除く目的で同一家兎について同時に実施例
１にて得られた止血剤処置、比較例１にて得られた止血
剤処置。

キチンスポンジ処置、トロンビン処置及び無処置の５処
置を行い、又背筋の刺傷箇所の差による偏差を除く目的
で５処置の位置関係を家兎側に変更した。次に、刺傷面
に実施例１にて得られた止血剤、比較例１にて得られた
止血剤、キチンスポンジ及び粉末トロンビンを置き、５
分後に実施例１にて得られた止血剤、比較例１にて得ら
れた止血剤、キチンスポンジを取除き（但し、粉末トロ
ンビンはそのまま）血餅形成の程度により実施例１にて
得られた止血剤、比較例１にて得られた止血剤、キチン
スポンジ、粉末トロンビンの止血状態を無処置対照と比
較した。刺傷部の状態は実施例１にて得られた止血剤、
キチンスポンジについては刺傷部にあてることによる止
血作用が認められた。

比較例１にて得られた止血剤は、出血した血液により湿
潤状態となり、止血剤を刺傷部へ固定するために圧迫を
加えた際、止血剤はつぶれていくつかの断片となり、形
成したフィブリン被膜は離脱し、更にばかがる止血剤は
刺傷部を保護し得なかった。

粉末トロンビンは刺傷部にふりかけるだけでは直ちに止
血に認められず、トロンビンの流失がときにみられ、出
血はしばらく続いた。５分後の刺傷部の状態は実施例１
にて得られた止血剤では刺傷部に血餅が形成され、かか
る止血剤を除いても出血は認められなかった。比較例１
にて得られた止血剤では、断片となったかかる止血剤の
いくつかは、刺傷部から離脱しており、血餅形成は、刺
傷部の一部分にした認められなかった。

キチンスポンジでは血餅は形成れず、スポンジ中へ出血
した血液がほとんど吸収れていた。キチンスポンジを除
くと、わずかな出血が認められた。

粉末トロンビンでは流出する血液に流されて効果が少な
かった。

参考例５ 実施例１で製造した止血剤の止血効果についてその構成
成分であるキチンスポンジ及びトロンビンを対照として
出血量による判定を行った。実施例２の場合と同様に、
刺傷部に本発明の止血剤。

キチンスポンジ、粉末トロンビン処置を行い、止血剤、
キチンスポンジが吸収した血液量と止血剤。

粉末トロンビンにより形成された血餅を合わせて出血量
をシアンメトヘモグロビン法により測定した。

即ち、あらかじめ試験管にＶａｎ　Ｋａｍｐｅｎ　　反
応液（シアンカリウム０．０５ｇ、フェリシアン化カリ
ウム０．２０ｇ、５ｔｅｒｏｘ−ＳＲ０，５ｍ＃を１／
３０Ｍ−リン酸緩衝液（ｐＨ７，２）に溶解して１００
ｍ　Ｉｔとしたもの）を５ｍｌ入れておき、血液を吸収
した止血剤及び止血剤によって形成された血餅をピンセ
ットで集め試験管に入れて溶かした。同様に、血液を吸
収したキチンスポンジ、粉末トロンビンで形成れた血餅
を試験管に入れて溶かした。５分間放置後１分光光度計
により５４０１の吸光度を測定して血液量を求めた。尚
、無処置対照は流出する血液をＶａｎＫａｎｐｅｎ反応
液を入れた試験管に採取し測定した。

結果は第１０表に示す如くであった。

第１０表　出血量（ｇ　／ｄｉ　） ここで（無処置出血量−止血剤出血量）、（無処置出血
量−キチンスポンジ出血量）、（無処置出血量−粉末ト
ロンビン出血量）、をそれぞれ止血剤、キチンスポンジ
、粉末トロンビンの止血効果とすると、かかる止血効果
は止血剤〉キチンスポンジ〉粉末トロンビンの順序であ
り、止血剤の効果はキチンスポンジの効果と粉末トロン
ビンの効果の和よりも太き（、かかる構成成分の相乗効
果が認められた。

参考例６ 実施例１で製造した止血剤について、労働安全衛生法に
従い、微生物を用いた変異原試験を行った。その結果、
使用した全ての菌株で代謝活性の有無にかかわらず陰性
であった。

参考例７ 実施例１で製造した止血剤について、動物体内での組織
吸収性を検討した。

即ち１体ｆｆ１２．０〜２．５　ｋｇの家兎１０羽（♀
）を用いてチオベンタール（２４ｍｇ／ｋｇ）で麻酔後
、止血剤（１０ｍｍ　Ｘ１０ｎ＋＋ｎＸ　８ｍｍ）を背
筋に埋込んだ。しかる後、縫合（３０日後に切開したと
ころ、８羽では止血剤は分解吸収れていた。又、残り２
羽の場合にもほとんど分解されており、キチンスポンジ
のわずかな痕跡を認めるに過ぎなかった。

参考例８ 実施例１で製造した止血剤について、マウスに於ける急
性毒性試験を行った。

即ち１体重１５〜１７ｇのＤＤＹ系両性マウス１用量１
０匹を用いた。かかるマウスは室温２０±２℃。

湿度６０±２％の恒温恒温下に於いて固型飼料（Ｃ１ｅ
ａ　ＣＡ−１）と水とを自由に与えて飼育したものであ
る。まず、検体を滅菌生理食塩水に浮遊せしめ、ホモジ
ナイザーにてホモジナイズ（１５，０００ｒｐｍ、　２
ｍ１ｎ　）　Ｌ／、試験液とした。試験液の用量はマウ
ス体重１ピ当たり０．１ｍ７！となる様に調整して皮下
注射した。薬物投与後、マウスは個々に収容して３時間
は連続的に、その後１時間毎に１２時間かかるマウスの
挙動変化を観察した。この間。

飼料及び水は与えなかった。しかる後、薬物投与後２４
．４８及び７２時間目にかかるマウスの挙動を観察する
と共に、７２時間後のＬＤＳＯを求めた。止血剤２．０
００ｍｇ／　ｋｇの皮下注射では、マウスの一般症状に
有意な変化は認められなかった。しかし、　　３，００
０ｍｇ／　ｋｇでは投与４時間を経る頃から軽度に立毛
と自発運動の減少を示したが、雌雄とも数時間後には金
側回復した。５，０００及び７．０００ｍｇ　／ｋｇ増
用量では、雌雄とも投与後２時間経過後より全身立毛が
見られ、自発運動の減少と軽度の不規則呼吸が現れた。

しかし、中毒症状は５時間後より回復に転じ、２４時間
後には金側正常に回復し７２時間後に於いても死亡例は
１例も認められなかった （発明の効果） 本発明の止血剤はＩｇ／ｍｍ”以上の湿潤強度を有する
ものであり、従来より知られていたスボンゼルやゲラト
ロンビンに比べ各科領域に於ける止血に対し極めて実用
性に冨んだ止血剤となった。

特に外傷に伴う出血、術中あるいは術後の出血。

骨性出血、膀胱出血、抜歯出血、鼻出血、上部消化管出
血、産婦人科出血、創傷による出血、癒着剥離面や骨断
端、実質臓器の切断面からの出血などのような結紮困難
な出血の止血に対してめざましい効果を発揮するもので
ある。又８止血後かかるキチンスポンジは除去する必要
がなく、薬理作用としては創傷の表面に強く付着し、フ
ィブリンとほぼ同等の止血効果を表す。更には、かかる
止血剤は組織内や体腔内に包埋した場合、約１カ月以内
に生分解が起こり、吸収されるものである。

更には、原料となるキチンは従来よりその治癒効果がし
られており、傷口の治癒促進に期待が寄せられている

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）血液凝固剤が固定化されたキチンスポンジからな
   り、少なくとも１ｇ／ｍｍ＾２の湿潤強度を有すること
   を特徴とする止血剤。