KR20170087950A

KR20170087950A - 혈관성 안 질환을 치료하기 위한 방법 및 제형

Info

Publication number: KR20170087950A
Application number: KR1020177017473A
Authority: KR
Inventors: 로버트 엘. 비티; 크리스틴 에이. 에릭슨; 카렌 더블유. 츄; 스탠리 제이. 위건드; 징타이 차오; 이반 비. 로보프; 사우라브 와드하; 케네스 에스. 그레이엄; 다니엘 딕스
Original assignee: 리제너론 파아마슈티컬스, 인크.
Priority date: 2014-11-25
Filing date: 2015-11-19
Publication date: 2017-07-31
Also published as: BR112017009807A2; IL252159B; MA40306A1; AU2015353838A1; SG11201703609UA; US20160144025A1; US20190117767A1; CA2968522A1; EA201791168A1; EP3224278A1; PH12017500834A1; PE20170900A1; US11071780B2; WO2016085750A1; MA41028A; CL2017001188A1; US20170080086A1; CO2017004715A2; EP3224278A4; IL252159A0

Abstract

본 발명은 안 질환을 치료하거나, 예방하거나, 안 질환의 중증도를 감소시키기 위한 방법을 제공한다. 본 발명의 방법은 안 질환의 치료, 예방 또는 안 질환의 중증도 감소를 필요로 하는 대상체에게 안지오포이에틴-2(Ang-2) 억제제, 예를 들면, 항-Ang-2 항체를 포함하는 치료학적 조성물을 혈과 내피 성장 인자(VEGF) 길항제(예를 들면, 애플리버셉트)와 병용하여 투여함을 포함한다.

Description

혈관성 안 질환을 치료하기 위한 방법 및 제형{METHODS AND FORMULATIONS FOR TREATING VASCULAR EYE DISEASES}

본 발명은, 혈관성 안 질환의 적어도 하나의 증상 또는 징후를 치료하거나 완화시킬 필요가 있는 대상체에게 안지오포이에틴-2(Ang-2) 억제제 및 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 길항제를 포함하는 약제학적 제형을 투여함을 포함하는, 혈관성 안 질환의 적어도 하나의 증상 또는 징후를 치료하거나 완화시키는 방법에 관한 것이다.

혈관성 안 질환은 오늘날 노령 인구에서의 시력 손실의 주요 원인이다. 이들 질환은 망막으로 성장하는 비정상적 '유출성(leaky)' 혈관을 특징으로 한다. 이러한 환자 집단에의 가장 큰 기여인자들 중 두 가지는 당뇨병성 망막병증 및 삼출성 연령-관련 황반 변성화이다.

당뇨병성 망막병증(DR)은 미국에서 시각 장애의 주요 원인이다(Klein et al 1984, Ophthalmology 91:1464-1474, Moss et al 1998, Ophthalmology 105:998-1003). 당뇨병성 망막병증은, 기저막 막 비후(Ruggiero et al 1997, Diabetes Metab. 23:30-42)로 시작하여 결국 혈관 폐색 및 혈관신생을 유도하는 미세혈관 보상부전(decompensation)으로부터 초래된다(Porta et al 2002, Diabetologia. 45:1617-1634). 당뇨병을 갖는 40세 이상 환자의 약 28%가 DR을 갖고, 4.4%가 시력을 위협하는 DR을 갖는 것으로 추정된다(Zhang et al 2010, JAMA. 304: 649-656). 당뇨병성 황반 부종(DME)은 DR의 징후이고, 젊은 성인과 중년 성인에서의 실명의 가장 빈번한 원인이다(Klein et al 1984, Ophthalmology 91:1464-1474; Moss et al 1998, Ophthalmology 105:998-1003).

연령-관련 황반 변성(AMD)은 선진국에서 연령이 50세 이상인 사람들의 중증의 시력 손실의 주요 원인이다. 최근 수년간, 혈관신생 AMD를 갖는 환자에 대한 유의한 시각 회복의 희망을 제공하는 항-혈관신생제의 도입으로 AMD의 치료에서 주요한 진보가 이루어졌다(Keane et al 2012, Surv ophthalmol. 57: 389-414).

혈관 내피 성장 인자(VEGF) 치료요법(예를 들면, 애플리버셉트)은 혈관신생성 AMD 및 DME에 대한 치유 치료의 표준(standard of care treatment)이다. 이들 환자 집단에서의 애플리버셉트의 효능과 안전성은 익히 특성확인되어 있다(Dixon et al 2009, Expert Opin. Investig. Drugs 18: 1573-80). 그러나, AMD에서는 약 95%의 환자가 이들의 시력을 유지했지만, 대략 30%의 환자들만이 1년째에 최대 교정 시력(BCVA)으로 15개 이상의 문자의 개선을 달성하였다. DME에 있어서, 애플리버셉트 및 라니비주맙으로 보여지는 바와 같이 DME로 인한 시력 손실을 갖는 환자의 50% 미만이 1년 및 2년에 걸쳐 15개 이상의 문자 개선을 달성하므로 치료 결과를 개선시킬 가능성도 있다. 또한, 라니비주맙을 이용한 연구에서, 라니비주맙의 매월 치료를 3년간 받은 환자의 7.2% 이하에서 증식성 망막병증의 임상학적 증거가 전개되었고, 환자의 3.2% 이하는 잠재적 시각 장애 치료 양상인 범망막성 광응고법을 필요로 하였다(Brown et al 2013 Ophthalmology 10: 2013-22).

라니비주맙 및 애플리버셉트와 같은 항-VEGF 치료요법의 유리체내(IVT) 전달은 맥락망막 질환에 대한 효능 및 안전성을 입증하였다. 그러나, 혈관 투과성, 혈관신생, 및 기타 혈관 기능이상에 기여하는 다수의 추가의 인자들이 존재한다. 혈관 투과성에 기여하는 가장 중요한 요인들 중 하나는 안지오포이에틴-2(Ang-2)이다. Ang-2는 정상적인 혈관 발달 동안 그리고 성인의 생리학적 또는 병리학적 혈관신생의 과정에서 혈관 내피 세포에 의해 발현된다(Maisonpierre et al　1997, Science 277: 55-60; Holash et al 1999, Science 284: 1994-98). Ang-2의 수용체 Tie-2에 대한 Ang-2의 결합은 정상적 혈관 발달 동안 그리고 병리학적 혈관신생에 의해 특성확인되는 조건 모두에서 혈관신생을 촉진한다. 마우스에서의 Ang-2의 유전적 결실은 정상적인 망막 혈관 발달 및 병리학적 혈관신생 둘 다를 현저하게 억제한다(Hackett et al 2000, J. Cell Physiol. 184: 275-83; Hackett et al 2002, J. Cell Physiol. 192: 182-7, Gale et al 2002, Dev. Cell 3: 411-423). 안지오포이에틴-2(Ang2)를 표적으로 하는 것은 이들 인자 중 어느 하나의 억제를 단독으로 또는 조합으로 지지할 것이고, 항-VEGF 치료요법 단독의 성공을 향상시킬 잠재력을 갖는다.

본 발명의 간략한 요약

본 발명의 한 양상에 따르면, 대상체에서의 혈관성 안 질환 또는 장애의 적어도 하나의 증상 또는 징후를 치료하거나, 예방하거나, 또는 개선하는 방법이 제공된다. 본 발명의 이러한 양상에 따른 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 안지오포이에틴-2(Ang-2) 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함한다. 소정의 실시형태들에서, Ang-2 억제제는 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 길항제와 병용하여 투여된다.

본 발명의 다른 양상에 따르면, 대상체에서의 망막 혈관신생을 억제하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 VEGF 길항제와 병용하여 투여함을 포함한다. 소정의 실시형태들에서, 병용 투여는 Ang-2 억제제 또는 VEGF 길항제 중 어느 하나 단독 투여와 비교하여 적어도 65% 만큼의 망막 혈관 영역의 감소를 초래한다. 몇몇의 실시형태들에서, 망막 혈관신생은 혈관성 안 질환 또는 장애와 관련되어 있다.

다른 양상에서, 본 발명은, 혈관신생과 관련된 안 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서의 망막 혈관신생을 억제하는 방법으로서, 상기 방법은 망막 혈관신생의 억제를 필요로 하는 대상체에게 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 VEGF 길항제와 병용하여 투여함을 포함하는, 혈관신생과 관련된 안 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서의 망막 혈관신생을 억제하는 방법을 제공한다.

본 발명의 다른 양상에 따르면, 안 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서의 혈관 유출을 억제하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 혈관 유출의 억제를 필요로 하는 대상체에게 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 VEGF 길항제와 병용하여 투여함을 포함한다.

관련된 양상에서, 본 발명은 혈관신생과 관련된 안 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서의 혈관 유출을 저지하는 방법으로서, 상기 방법은 혈관 유출의 억제를 필요로 하는 대상체에게 VEGF 길항제의 단일 용량을 투여하고, 이어서, Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 1회 이상의 용량을 투여함을 포함하는, 혈관신생과 관련된 안 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서의 혈관 유출을 억제하는 방법을 제공한다.

몇몇의 실시형태들에서, 혈관 유출은 VEGF 길항제 단독 투여된 대상체와 비교하여 적어도 3주, 3주 초과, 4주 초과, 8주 초과, 또는 10주 초과 동안 억제된다.

다른 양상에서, 본 발명은 맥락막 혈관신생의 억제를 필요로 하는 대상체에게 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 맥락막 혈관신생을 억제하는 방법을 제공한다.

본 발명의 다른 양상에 따르면, 혈관성 안 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서의 빈번한 유리체내 주사의 의존도 및 치료 부담을 감소시키는 방법이 제공된다. 상기 방법은 빈번한 유리체내 주사의 의존도 및 치료 부담의 감소를 필요로 하는 대상체에게 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 치료학적 유효량의 개시 용량을, 이어서, 1회 이상의 2차 용량을 VEGF 길항제와 병용하여 순차적으로 투여함을 포함하고; 여기서, 상기 약제학적 조성물의 투여는 상기 VEGF 길항제 단독 투여된 대상체와 비교하여 9주마다 1회로 감소된다.

소정 실시형태들에서, 본 발명은 혈관성 안 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 혈관성 안 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 항-Ang-2 억제제의 치료학적 유효량 및 VEGF 길항제의 치료학적 유효량을 포함하는 약제학적 조성물의 1회 이상의 용량을 투여함을 포함하는, 혈관성 안 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 소정 실시형태들에서, 상기 방법은 약제학적 조성물의 개시 용량, 이어서, 1회 이상의 2차 용량을 투여함을 포함한다. 소정 실시형태들에서, 각각의 2차 용량은 직전 용량의 1 내지 4주 후에 투여된다. 소정 실시형태들에서, 상기 방법은 상기 대상체에게의 1회 이상의 3차 용량의 투여를 추가로 포함한다. 소정 실시형태들에서, 각각의 3차 용량은 직전 용량의 5 내지 12주 후에 투여된다. 한 실시형태에서, 각각의 2차 용량은 직전 용량의 4주 후에 투여된다. 소정 실시형태들에서, 각각의 3차 용량은 직전 용량의 8주 또는 12주 후에 투여된다. 소정 실시형태들에서, 상기 약제학적 조성물은 약 10mg/mL 내지 약 120mg/mL의 항-Ang-2 억제제를 포함한다. 소정 실시형태들에서, 상기 약제학적 조성물은 약 40mg/mL의 VEGF 길항제를 포함한다. 소정 실시형태들에서, 상기 약제학적 조성물은 약 10mg/mL 내지 약 120mg/mL의 항-Ang-2 억제제 및 약 40mg/mL의 VEGF 길항제를 포함한다. 소정 실시형태들에서, 상기 약제학적 조성물은 대상체에게 유리체내 투여된다. 소정 실시형태들에서, 상기 약제학적 조성물의 각각의 용량은 약 0.5mg 내지 약 6mg의 항-Ang-2 억제제 및 약 2mg의 VEGF 길항제를 포함한다. 한 실시형태에서, 상기 약제학적 조성물의 각각의 용량은 약 3mg의 항-Ang-2 억제제 및 약 2mg의 VEGF 길항제를 포함한다. 한 실시형태에서, 상기 약제학적 조성물의 각각의 용량은 약 6mg의 항-Ang-2 억제제 및 약 2mg의 VEGF 길항제를 포함한다. 한 실시형태에서, 상기 약제학적 조성물의 각각의 용량은 약 3mg의 항-Ang-2 억제제 및 약 2mg의 VEGF 길항제를 포함한다. 한 실시형태에서, 상기 약제학적 조성물의 각각의 용량은 약 6mg의 항-Ang-2 억제제 및 약 2mg의 VEGF 길항제를 포함한다.

소정 실시형태들에서, 상기 안 질환 또는 장애는 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 연령-관련 황반 변성, 망막 혈관신생, 중심성 망막 정맥 폐색, 분지성 망막 정맥 폐색, 폴립상 맥락막 혈관병증, 및 맥락막 혈관신생으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

소정 실시형태들에서, 상기 Ang-2 억제제는 VEGF 길항제와의 공동-제형으로서 투여된다. 소정 실시형태들에서, 상기 Ang-2 억제제는 이를 필요로 하는 대상체에게 단독으로 또는 VEGF 길항제와 병용하여 유리체내 투여된다. 대안의 실시형태들에서, 상기 Ang-2 억제제는 정맥내 또는 피하 투여된다. 소정 실시형태들에서, 상기 Ang-2 억제제는 VEGF 길항제와 병용하여 정맥내 또는 피하 투여되고, 여기서, 상기 VEGF 길항제는 유리체내 투여된다. 소정 실시형태들에서, Ang-2 억제제 및 VEGF 길항제는 국소적으로 또는 안내(예를 들면, 유리체내) 공동-투여된다.

소정 실시형태들에서, 상기 Ang-2 억제제는 이를 필요로 하는 대상체에게 0.05mg 내지 10mg의 용량으로 투여된다. 소정 실시형태들에서, 상기 VEGF 길항제는 이를 필요로 하는 대상체에게 0.01mg 내지 5mg의 용량으로 투여된다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 Ang-2 억제제는 대상체의 체중 kg당 약 1 내지 50mg의 용량으로 투여된다.

소정 실시형태들에서, 상기 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 1회 이상의 2차 용량은 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 1회 이상의 용량은 적어도 2회의 2차 용량의 약제학적 조성물을 포함한다. 소정 실시형태들에서, 각각의 2차 용량은 직전 용량의 1 내지 4주 후에 투여된다.

본 발명의 방법과 관련하여 사용될 수 있는 예시의 Ang-2 억제제로는 예를 들면, Ang-2의 소분자 화학적 억제제, 또는 Ang-2를 표적으로 하는 생물학적 제제가 포함된다. 소정 실시형태들에 따르면, 상기 Ang-2 억제제는 Ang-2 리간드에 결합하여 Tie2 신호전달을 차단하는 항체 또는 항원 결합 단백질이다. 소정 실시형태들에서, 상기 항-Ang-2 항체 또는 항원-결합 단백질은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 경쇄 CDR을 포함한다.

본 발명의 조성물 및 방법에서 Ang-2 억제제와 병용하여 사용될 수 있는 VEGF 길항제로는 항-VEGF 항체(예를 들면, 라니비주맙), 소분자 VEGF 억제제(예를 들면, 수네티닙), 및 VEGF-억제성 융합 단백질("VEGF 트랩")이 포함된다. 본 발명의 치료 방법에서 항-Ang-2 항체와 병용하여 사용될 수 있는 VEGF 길항제의 한 예는 VEGF-억제성 융합 단백질인 애플리버셉트이다(US 7,087,411을 참조한다).

다른 양상에서, 본 발명은 Ang-2 억제제의 치료학적 유효량 및 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 소정 실시형태들에서, 상기 약제학적 조성물은 VEGF 길항제를 추가로 포함한다.

소정 실시형태들에서, 본 발명은 사람을 포함하는 대상체에서의 안 질환 또는 장애의 적어도 증상 또는 징후를 치료하거나 예방하거나 또는 개선하기 위한 의약의 제조시의 본 발명의 항-Ang-2 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 용도를 제공한다.

소정 실시형태들에서, 본 발명은 사람을 포함하는 대상체에서의 안 질환 또는 장애를 치료하기 위한 의약의 제조시의 VEGF 길항제와 함께 본 발명의 Ang-2 억제제의 용도를 제공한다.

본 발명의 다른 양상에 따르면, (i) VEGF 길항제; (ii) Ang-2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편; (iii) 완충제; (iv) 비-이온성 세제; (v) 등장성 제제; 및 (vi) 안정화제를 포함하는, 안정한 액체 약제학적 제형이 제공된다. 한 실시형태에서, (i) VEGF 길항제; (ii) Ang-2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편; (iii) 완충제; (iv) 비-이온성 세제; (v) 등장성 제제; 및 (vi) 안정화제를 포함하는, 안정한 안과(ophthalmic) 제형이 제공된다.

한 실시형태에서, 상기 VEGF 길항제는 5mg/mL ± 0.75mg/mL 내지 약 100mg/mL ± 15mg/mL의 농도로 제공되고, 상기 항-Ang-2 항체는 10 ± 1.5mg/mL 내지 120 ± 18.0mg/mL의 농도로 제공된다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 VEGF 길항제는 10mg/mL ± 1.5mg/mL 내지 80mg/mL ± 12mg/mL, 또는 20mg/mL ± 3.0mg/mL 내지 60mg/mL ± 9.0mg/mL의 농도로 제공된다. 한 실시형태에서, 상기 VEGF 길항제는 40mg/mL ± 6.0mg/mL 또는 약 40mg/mL의 농도로 제공된다. 한 실시형태에서, 상기 항체는 10mg/ml ± 1.5mg/mL 또는 약 10mg/mL의 농도로 제공된다. 다른 실시형태에서, 상기 항체는 20mg/mL ± 3.0mg/mL, 또는 약 20mg/mL의 농도로 제공된다. 다른 실시형태에서, 상기 항체는 60mg/mL ± 9.0mg/mL, 또는 약 60mg/mL의 농도로 제공된다. 다른 실시형태에서, 상기 항체는 120mg/mL ± 18.0mg/mL 또는 약 120mg/mL의 농도로 제공된다.

소정 실시형태들에서, 상기 액체 제형의 pH는 약 pH 5.5 내지 약 pH 6.5이다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 액체 제형의 pH는 pH 6.2 ± 0.3, pH 6.2 ±0.25, pH 6.2 ± 0.2, pH 6.2 ± 0.15, pH 6.2 ± 0.1, pH 6.2 ± 0.05, pH 6.2 ± 0.01, 또는 pH 6.2이다. 한 실시형태에서, 상기 액체 제형의 pH는 pH 6.2 ± 0.3, 또는 약 pH 6.2이다.

한 실시형태에서, 상기 완충제는 인산 나트륨이다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 인산 나트륨은 5mM ± 0.75mM 내지 50mM ± 7.5mM, 5mM ± 0.75mM 내지 40mM ± 6.0mM, 또는 5mM ± 0.75mM 내지 25mM ± 3.75mM의 농도로 존재한다. 한 실시형태에서, 상기 인산 나트륨은 10mM ± 1.5mM 또는 약 10mM의 농도로 존재한다.

몇몇의 실시형태들에서, 상기 비-이온성 세제는 폴리옥시에틸렌 모이어티를 함유하는 비이온성 중합체이다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 비-이온성 세제는 폴리소르베이트 20, 폴록사머 188 및 폴리에틸렌 글리콜 3350 중 임의의 하나 이상이다. 한 실시형태에서, 상기 세제는 폴리소르베이트 20이다. 한 실시형태에서, 상기 세제는 폴리소르베이트 80이다.

소정 실시형태들에서, 상기 비-이온성 세제는 0.005% ± 0.00075% 내지 1% ± 0.15% "중량 대 체적" 또는 "w/v"의 농도로 존재하고, 여기서, 예를 들면, 0.1g/ml = 10%이고 0.01g/ml = 1%이다. 한 실시형태에서, 상기 비-이온성 세제는 폴리소르베이트 20이고, 이는 약 0.01% ± 0.0045% 내지 약 0.05% ± 0.0045% w/v의 농도로 존재한다. 한 실시형태에서, 상기 비-이온성 세제는 폴리소르베이트 20이고, 이는 0.03% ± 0.0045% w/v 또는 약 0.03% w/v의 농도로 존재한다.

몇몇의 실시형태들에서, 상기 등장성 제제는 염화나트륨 또는 염화 칼륨이다. 한 실시형태에서, 상기 등장성 제제는 염화 나트륨이다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 등장성 제제는 10mM ± 1.5mM 내지 75mM ± 11.25mM, 20mM ± 3.0mM 내지 60mM ± 9.0mM, 또는 30mM ± 4.5mM 내지 50mM ± 7.5mM의 농도로의 염화 나트륨이다. 한 실시형태에서, 상기 염화 나트륨은 40mM ± 6.0mM 또는 약 40mM의 농도로 존재한다.

한 실시형태에서, 상기 안정화제는 당이다. 한 실시형태에서, 상기 당은 슈크로스, 만니톨 및 트레할로스로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 한 실시형태에서, 상기 안정화제는 슈크로스이다.

몇몇의 실시형태들에서, 상기 안정화제는 1% ± 0.15% w/v 내지 20% ± 3% w/v의 농도로 존재한다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 안정화제는 1% ± 0.15% w/v 내지 15% ± 2.25% w/v 또는 1% ± 0.15% w/v 내지 10% ± 1.5% w/v의 농도로의 슈크로스이다. 한 실시형태에서, 상기 안정화제는 5% ± 0.15% w/v 또는 약 5% w/v의 농도로의 슈크로스이다. 다른 실시형태에서, 상기 안정화제는 7.5% ± 1.125% w/v 또는 약 7.5% w/v의 농도로의 슈크로스이다. 다른 실시형태에서, 상기 안정화제는 10% ± 1.5% w/v 또는 약 10% w/v의 농도로의 슈크로스이다. 다른 실시형태에서, 상기 안정화제는 12.5% ± 1.875% w/v 또는 약 12.5% w/v의 농도로의 슈크로스이다. 다른 실시형태에서, 상기 안정화제는 15% ± 2.25% w/v 또는 약 15% w/v의 농도로의 슈크로스이다. 다른 실시형태에서, 상기 안정화제는 20% ± 3% w/v 또는 약 20% w/v의 농도로의 슈크로스이다.

한 양상에서, (i) 5 ± 0.75mg/mL 내지 100 ± 15.0mg/mL의 VEGF 길항제; (ii) 5 ± 0.75mg/ml 내지 150 ± 22.5mg/ml의 사람 Ang-2에 특이적으로 결합하는 사람 항체; (iii) 5mM ± 0.75mM 내지 50mM ± 7.5mM의 인산 나트륨; (iv) 0.01% ± 0.0015% 내지 0.1% ± 0.015%(w/v) 폴리소르베이트 20; (v) 10mM ± 1.5mM 내지 100mM ± 15mM의 염화 나트륨; 및 (vi) 1% ± 0.15% 내지 20% ± 3%(w/v)의 슈크로스를 약 5.5 내지 약 6.5의 pH로 포함하는, 안정한 액체 약제학적 제형이 제공된다.

한 실시형태에서, 상기 약제학적 제형은 (i) 40mg/mL ± 6.0mg/mL의 애플리버셉트; (ii) 10 ± 1.5mg/mL의 항-Ang-2 항체; (iii) 10 ± 1.5mM 인산 나트륨; (iv) 0.03% ± 0.0045%(w/v)의 폴리소르베이트 20; (v) 40mM ± 6.0mM의 염화 나트륨; 및 (vi) 5% ± 0.75%(w/v)의 슈크로스를 6.2 ± 0.3의 pH로 포함한다.

한 실시형태에서, 상기 약제학적 제형은 (i) 40mg/mL ± 6.0mg/mL의 애플리버셉트; (ii) 20 ± 3.0mg/mL의 항-Ang-2 항체; (iii) 10 ± 1.5mM의 인산 나트륨; (iv) 0.03% ± 0.0045%(w/v)의 폴리소르베이트 20; (v) 40mM ± 6.0mM의 염화 나트륨; 및 (vi) 5% ± 0.75%(w/v)의 슈크로스를 6.2 ± 0.3의 pH로 포함한다.

한 실시형태에서, 상기 약제학적 제형은 (i) 40mg/mL ± 6.0mg/mL의 애플리버셉트; (ii) 60 ± 9.0mg/mL의 항-Ang-2 항체; (iii) 10 ± 1.5mM의 인산 나트륨; (iv) 0.03% ± 0.0045%(w/v)의 폴리소르베이트 20; (v) 40mM ± 6.0mM의 염화 나트륨; 및 (vi) 5% ± 0.75%(w/v)의 슈크로스를 6.2 ± 0.3의 pH로 포함한다.

한 실시형태에서, 상기 약제학적 제형은 (i) 40mg/mL ± 6.0mg/mL의 애플리버셉트; (ii) 120 ± 18.0mg/mL의 항-Ang-2 항체; (iii) 10 ± 1.5mM의 인산 나트륨; (iv) 0.03% ± 0.0045%(w/v)의 폴리소르베이트 20; (v) 40mM ± 6.0mM의 염화 나트륨; 및 (vi) 5% ± 0.75%(w/v)의 슈크로스를 6.2 ± 0.3의 pH로 포함한다.

한 양상에서, 본 발명의 액체 약제학적 제형은 컨테이너 내에 제공된다. 한 실시형태에서, 상기 컨테이너는 폴리카보네이트 바이알이다. 다른 실시형태에서, 상기 컨테이너는 유리 바이알이다. 한 실시형태에서, 상기 유리 바이알은 플루오로카본-코팅된 부틸 고무 스토퍼(stopper)를 갖는 타입 1 보로실리케이트 유리 바이알이다. 다른 실시형태에서, 상기 컨테이너는 마이크로인퓨저이다. 다른 실시형태에서, 상기 컨테이너는 시린지이다. 특정 실시형태에서, 상기 시린지는 플루오로카톤-코팅된 플런저(plunger)를 포함한다. 한 실시형태에서, 상기 시린지는, 30-G 니들(needle), 플루오로카본-코팅된 부틸 고무 스토퍼 및 라텍스-불포함 비-세포독성 고무 팁 캡(tip cap)이 구비된 약 500 백만분율(parts per billion) 미만의 텅스텐을 함유하는 2mL의 긴 유리 시린지이다. 한 실시형태에서, 상기 시린지는 30-G 얇은 벽 니들(thin wall needle), FLUROTEC-코팅된 4432/50 GRY B2-40 스토퍼, 및 FM 27 고무팁 캡이 구비된 NUOVA OMPI 2mL의 긴 유리 시린지이다. 소정 실시형태들에서, 상기 시린지는 27-G 니들이 구비된 1mL, 2mL 또는 3mL 플라스틱 시린지이다. 한 실시형태에서, 상기 컨테이너는 폴리비닐 클로라이드 IV 백(bag)이다. 다른 실시형태에서, 상기 컨테이너는 폴리올레핀 IV 백이다.

한 양상에서, 본 발명은 선행 양상들 중 임의의 하나의 약제학적 제형을 포함하는 사전-충전된 시린지를 포함한다.

한 양상에서, 선행 양상들 중 임의의 하나의 약제학적 조성물, 컨테이너, 및 지침서를 포함하는 키트가 제공된다. 한 실시형태에서, 상기 컨테이너는 사전 충전된 시린지이다. 한 실시형태에서, 상기 컨테이너는 FLUROTEC-코팅된 4432/50 고무 스토퍼가 구비된 보로실리케이트 바이알이다.

본 발명의 다른 실시형태들은 뒤따르는 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용의 검토로부터 명백해질 것이다.

도 1은 본원의 실시예 2에 기술된 바와 같이, 항-Ang-2 항체, VEGF 길항제 또는 항-Ang-2 항체와 VEGF 길항제의 조합물로 치료된 DL-알파-아미노아디프산(DL-알파-AAA)-유도된 망막 혈관신생을 갖는 토끼에서의 유출 영역 변화의 백분율을 보여준다.
도 2는 본원의 실시예 3에 기술된 바와 같이, 하기 치료학적 용법에 따라 VEGF 길항제(VGT)(또는 대조군)로 유리체내(IVT) 치료된 DL-알파-AAA-유도된 망막 혈관신생을 갖는 토끼, 및 항-Ang-2 항체(또는 대조군)로 정맥내 치료된 DL-알파-AAA-유도된 망막 혈관신생을 갖는 토끼에서의 유출 영역 변화의 백분율을 보여준다: (a) 대조군 IVT 및 대조군 IV; (b) VGT IVT 및 대조군 IV; (c) 대조군 IVT 및 항-Ang-2 IV; 및 (d) VGT IVT 및 항-Ang-2 항체 IV.
도 3은 본원의 실시예 5에 기술된 바와 같이, 기저선, 대조군(hFc) 및 항-Ang-2 항체(mAb1) 치료된 그룹의 전체 망막하 병변 크기(A), 신생혈관 체적(B), 및 혈관 밀도(C)의 정량을 보여준다. hFc-치료된 대조군과 비교하면, mAb1-치료된 그룹은 전체 병변 체적의 통계학적으로 유의한 감소(스튜던트 t-검정, p=0.0034), 및 신생혈관 체적 감소(스튜더트 t-검정, p=0.1658)에 대한 경향(26.9%)을 보여주었다. 에러 바(error bar)는 표준 편차를 나타낸다.

본 발명을 기술하기 전에, 본 발명은 특정 방법 및 기술된 실험 조건에 한정되는 것은 아니고 이러한 방법 및 조건은 변할 수 있음이 이해되어야 한다. 또한, 본원에 사용된 용어는 단지 특정 실시형태들을 설명할 목적을 위한 것이고, 한정되는 것으로 의도되는 것은 아니며, 그 이유는 본 발명의 범위는 청구범위에만 한정될 것이기 때문임이 이해되어야 한다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 당해 분야의 숙련가에 의해 일반적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약"은 특정 인용된 수적 값과 관련하여 사용되는 경우 상기 값은 인용된 값으로부터 1% 이하만큼 다를 수 있음을 의미한다. 예를 들면, 본원에 사용된 바와 같이, 표현 "약 100"은 99 및 101 및 이들 사이의 모든 값(예를 들면, 99.1, 99.2, 99.3, 99.4 등)을 포함한다.

본원에 기술된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 재료를 본 발명의 실행에 사용할 수 있지만, 바람직한 방법 및 재료는 하기에 기술된다. 본원에 언급된 모든 출판물은 설명을 위해 그 전문이 인용에 의해 본원에 포함된다.

혈관성 안 질환 또는 장애를 치료하거나 개선하는 방법

본 발명은 대상체에서의 혈관성 안 질환 또는 장애의 적어도 하나의 증상 또는 징후를 치료하거나, 예방하거나, 또는 개선하는 방법을 포함한다. 본 발명의 이러한 양상에 따른 방법은 혈관성 안 질환 또는 장애의 적어도 하나의 증상 또는 징후의 치료, 예방 또는 개선을 필요로 하는 대상체에게 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함한다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 Ang-2 억제제는 피하 또는 정맥내 투여된다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 Ang-2 억제제는 VEGF 길항제와 병용하여 투여된다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 Ang-2 억제제는 VEGF 길항제와 병용하여 유리체내 투여된다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 Ang-2 억제제는 VEGF 길항제와의 단일 병용 투약 제형으로서 투여된다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 Ang-2 억제제는 VEGF 길항제와 병용하여 투여되고, 여기서, 상기 Ang-2 억제제는 정맥내 투여되고 상기 VEGF 길항제는 유리체내 투여된다. 상기 VEGF 길항제는 상기 Ang-2 억제제의 전에, 상기 Ang-2 억제제의 후에, 또는 상기 Ang-2 억제제와 동시에 투여될 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "치료하다" 또는 "치료" 등은 증상을 경감시키거나 증상의 원인을 일시적 또는 영구적으로 제거하거나 또는 신생혈관 안 질환의 증상의 출현을 예방하거나 늦추는 것을 의미한다. 소정 실시형태들에서, 본 발명의 방법은 망막 혈관신생, 혈관신생, 혈관 유출, 중심와(fovea)의 중심의 500㎛ 이내의 망막 비후(retinal thickening), 인접한 망막 비후와 중심와의 중심의 500㎛ 이내의 단단한 황색의 삼출물, 망막 비후의 임의의 부분이 중심와의 중심의 1 디스크 직경 내에 존재하는 적어도 1 디스크 영역의 망막 비후, 흐린 시력, 부유감(floater), 대비(contrast)의 손실, 복시(double vision) 및 궁극적인 시력 손실을 포함하지만 이들에 한정되는 것은 아닌 적어도 하나의 증상 또는 징후를 치료하거나 개선하는데 유용하다. AMD 또는 DME와 같은 혈관성 안 질환을 치료하는 방법과 관련하여, 상기 용어는, 치료의 개시로부터, 환자가 조기 치료 당뇨병성 망막병증 연구(EDTRS) 시력 차트(chart) 상의 하나 이상(예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 그 이상)의 문자의 획득(gain)을 나타냄을 의미한다. 소정 실시형태들에서, 상기 용어는 치료의 개시로부터, 환자에서 15개 이상의 문자의 시력 손실이 예방됨을 의미한다.

본원에 사용되는 용어 "예방하다" 또는 "예방" 등은 혈관성 안 질환의 증상, 징후 또는 합병증의 발달을 예방하는 것을 의미한다. AMD 또는 DME와 같은 혈관성 안 질환을 치료하는 방법과 관련하여, 상기 용어는 치료의 개시로부터, 환자에서 중간 정도 또는 중증의 시력 손실이 예방됨을 의미한다.

본원에서 사용되는 "혈관성 안 질환 또는 장애"는 눈 내의 혈관에 영향을 미치는 안 질환 또는 장애를 말한다. 상기 질환은 비정상적 혈관신생(새로운 혈관의 형성) 또는 혈관의 폐색 또는 차단으로 인해 야기될 수 있다. 본원에 사용되는 상기 용어는 혈관신생과 관련된 안 질환 또는 장애를 포함한다. 상기 용어는 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 연령-관련 황반 변성, 망막 혈관신생, 중심성 망막 정맥 폐색, 분지성 망막 정맥 폐색, 폴립상 맥락막 혈관병증, 및 맥락막 혈관신생으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 안 질환 또는 장애를 포함하지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 소정의 실시형태들에서, 상기 용어 "혈관신생 안 질환 또는 장애"는 용어 "혈관신생과 관련된 안 질환 또는 장애"와 상호교환적으로 사용될 수 있다.

소정 실시형태들에서, 본 발명은 대상체에서의 혈관신생과 관련된 안 질환 또는 장애의 적어도 하나의 증상 또는 징후를 치료하거나, 예방하거나, 또는 개선하는 방법으로서, 상기 질환 또는 장애가 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 연령-관련 황반 변성, 망막 혈관신생, 폴립상 맥락막 혈관병증, 및 맥락막 혈관신생으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 대상체에서의 혈관신생과 관련된 안 질환 또는 장애의 적어도 하나의 증상 또는 징후를 치료하거나, 예방하거나, 또는 개선하는 방법을 포함한다.

본원에서 사용되는 "당뇨병성 황반 부종"(DME)은 당뇨병(1형 또는 2형)을 갖는 사람에게 영향을 미치는 중증의 안 병태를 말한다. 황반 부종은 망막 내의 혈관이 황반으로 유출되고 체액 및 단백질 퇴적물이 눈의 황반(망막의 황색 중심 영역) 상에 또는 황반 하에 수집되어 비후 및 팽윤(부종)을 야기할 때에 발생한다. 팽윤은 황반이 안구 뒤쪽의 망막 중심의 부근에 있기 때문에 사람의 중심 시력을 왜곡시킬 수 있다. DME의 주요 증상은 흐린 시력, 부유감, 대비의 손실, 복시 및 궁극적인 시력 손실을 포함하지만 이들에 한정되는 것은 아니다. DME의 병리학은, 통상적으로 망막 내의 수분 이동을 방지하고, 이로써 망막 조직에 체액이 축적되게 하고 망막 비후의 존재를 가능하게 하는 혈액-망막 장벽의 파괴로 특성확인된다. DME는, 현재 표준화된 차트에서 사람이 읽을 수 있는 최소 글자를 측정하는 시력 검사, 질환의 증후를 확인하기 위한 확장된 안 검사, 광학적 간섭 단층촬영법(OCT: Optical Coherence Tomography) 또는 플루오레세인 혈관 조영법(FA) 및 눈 내부의 압을 측정하는 기구인 안압 측정법으로 이루어진 안 검사 동안 진단된다. 또한, 하기 연구를 수행하여 치료를 결정한다: 광학적 간섭 단층촬영법(OCT), 플루오레세인 혈관 조영법 및 컬러 스테레오 안저 촬영법(color stereo fundus photography). DME는 광범위하게 2개의 주요 범주 - 국소(focal) 및 광범위(diffuse)로 특성확인될 수 있다. 국소 DME는 충분한 황반 혈류를 갖는 황반에서의 개별적이고 명확한 유출이 있는 특정 영역에 의해 특성확인된다. 광범위 DME는 눈의 내부 혈-망막 장벽의 파괴로부터 초래되는 황반 주위의 전체 모세혈관계(capillary bed)의 유출로부터 초래된다. 국소 및 광범위 이외에도, DME는 또한 임상학적으로 유의한 황반 부종(CSMF), 비-CSMF, 및 중심와에 연루되는 중심적 연루를 갖는 CSME(CSME-CI)로의 임상학적 검사 결과에 기초하여 범주분류된다. 본 발명은 상기-언급된 범주의 DME를 치료하는 방법을 포함한다.

본원에서 사용되는 연령-관련 황반 변성(AMD)은 황반으로서 알려져 있는 망막의 작은 중심 부분이 나빠지는 경우의 중증의 안 병태를 말한다. 습윤 형태의 AMD는 황반 밑의 맥락막으로부터의 비정상적 혈관 성장으로 특성확인된다. 이는 맥락막 혈관신생이라고 칭한다. 이들 혈관은 혈액 및 체액을 망막으로 유출시켜 직선을 곡선으로 보이게 하는 시각의 왜곡, 및 맹점(blind spot) 및 중심 시력의 손실을 야기한다. 이들 비정상적 혈관은 결국 상처를 입히고, 이는 중심 시력의 영구적 손실을 유도한다. AMD의 증상으로는 시야의 중심의 어둡고 흐린 영역; 및 감소되거나 변화된 색 인식이 포함된다. AMD는 일상적인 눈 검사에서 검출될 수 있다. 황반 변성의 가장 흔한 초기 증후들 중 하나는 드루젠(drusen) -- 망막 하의 작은 황색 침전물 -- 또는 색소 응괴(pigment clumping)의 존재이다.

본원에 사용되는 표현 "이를 필요로 하는 대상체"는 혈관신생과 관련된 안 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상 또는 징후를 나타내고/나타내거나 혈관신생과 관련된 안 질환 또는 장애로 진단된 사람 또는 비-사람 포유동물을 의미한다. 용어 "이를 필요로 하는 대상체"는 또한 예를 들면, 치료 전에 혈관신생 안 질환의 하나 이상의 징후, 예를 들면, 망막 혈관신생, 혈관신생, 혈관 유출, 중심와의 중심의 500㎛ 이내의 망막 비후, 인접한 망막 비후와 중심와의 중심의 500㎛ 이내의 단단한 황색의 삼출물, 망막 비후의 임의의 부분이 중심와의 중심의 1 디스크 직경 내에 존재하는 적어도 1 디스크 영역의 망막 비후, 흐린 시력, 부유감, 대비의 손실, 복시 및 궁극적인 시력 손실을 나타내는(또는 나타낸) 대상체를 포함할 수 있다.

본 발명의 맥락에서, "이를 필요로 하는 대상체"는 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 연령-관련 황반 변성, 망막 혈관신생, 중심성 망막 정맥 폐색, 분지성 망막 정맥 폐색, 폴립상 맥락막 혈관병증, 및 맥락막 혈관신생으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 혈관성 안 질환 또는 장애를 갖는 사람 또는 비-사람 포유동물도 포함한다.

본 발명의 맥락에서, "이를 필요로 하는 대상체"는 DME 또는 AMD에 보다 민감성이거나 상승된 수준의 DME-관련 또는 AMD-관련 바이오마커를 나타낼 수 있는 집단의 서브세트를 포함할 수 있다. 예를 들면, "이를 필요로 하는 대상체"는 10년 초과 동안 당뇨병을 앓고 있거나, 빈번한 고혈당 수준 또는 높은 공복 혈당 수준을 갖는 대상체를 포함할 수 있다. 소정 실시형태들에서, 상기 용어 "이를 필요로 하는 대상체"는 Ang-2 억제제 및/또는 VEGF 길항제의 투여 전에 또는 Ang-2 억제제 및/또는 VEGF 길항제의 투여 시점에 당뇨병을 갖거나 당뇨병으로 진단된 대상체를 포함할 수 있다. 소정 실시형태들에서, 상기 용어 "이를 필요로 하는 대상체"는 Ang-2 억제제 및/또는 VEGF 길항제의 투여 전에 또는 Ang-2 억제제 및/또는 VEGF 길항제의 투여 시점에 50세 초과인 대상체를 포함한다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 용어 "이를 필요로 하는 대상체"는 흡연자인 대상체 또는 고혈압 또는 고 콜레스테롤을 갖는 대상체를 포함한다.

본 발명은 혈관성 안 질환을 치료하거나, 예방하거나, 혈관성 안 질환의 중증도를 감소시키는 방법으로서, 혈관성 안 질환의 치료, 예방, 또는 혈관성 안 질환의 중증도 감소를 필요로 하는 대상체에게 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물을 치료학적 유효량을 VEGF 길항제와 병용하여 투여함을 포함하고, 상기 약제학적 조성물은 상기 대상체에게 다중 용량으로, 예를 들면, 특정 치료학적 투약 용법의 부분으로서 투여되는, 혈관성 안 질환을 치료하거나, 예방하거나, 혈관성 안 질환의 중증도를 감소시키는 방법을 포함한다. 예를 들면, 상기 치료학적 투약 용법은 상기 대상체에게 상기 약제학적 조성물의 다중 용량을 약 1일마다 1회, 2일마다 1회, 3일마다 1회, 4일마다 1회, 5일마다 1회, 6일마다 1회, 1주마다 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 4주마다 1회, 1개월마다 1회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회, 4개월마다 1회의 빈도로 또는 덜 빈번하게 투여함을 포함할 수 있다. 소정 실시형태들에서, 상기 치료학적 투약 용법은 상기 대상체에게 상기 약제학적 조성물의 다중 용량을 1회마다 1회 또는 1일마다 1회 이상의 빈도로 투여함을 포함할 수 있다.

소정 실시형태들에 따르면, 본 발명의 방법은 대상체에게 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 VEGF 길항제와 병용하여 투여함을 포함한다. 소정 실시형태들에서, 본 발명의 Ang-2 억제제는 황반으로의 유출을 중단시키기 위한 레이저 치료를 포함하는 치료요법과 병용하여 투여할 수 있다. 본원에서 사용되는 어구 "과 병용하여"는 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물이 대상체에게 VEGF 길항제의 투여와 동시에, VEGF 길항제의 투여 직전에 또는 VEGF r길항제의 투여 직후에 투여됨을 의미한다.

또한, 본 발명은 대상체에서의 혈관 유출을 억제하거나 감소시키거나 저지하는 방법도 포함한다. 소정 실시형태들에서, 본 발명의 이러한 양상에 따른 방법은 대상체의 눈에서의 혈관 유출을 감소시키거나 억제하기 위해 상기 대상체에게 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 1회 이상의 용량을 투여함을 포함한다. 소정의 다른 실시형태들에서, 상기 방법은 대상체의 눈에서의 혈관 유출을 감소시키거나 억제하기 위해 상기 대상체에게 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 1회 이상의 용량을 VEGF 길항제와 병용하여 투여함을 포함한다. 소정 실시형태들에서, 혈관 유출은 VEGF 길항제 단독으로 투여된 대상체에서보다 3주 초과, 4주 초과, 8주 초과 또는 10주 초과 동안 억제된다.

소정 실시형태들에 따르면, 본 발명의 방법은 대상체에게 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 VEGF 길항제와 병용하여 투여함을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같은 어구 "와 병용하여"는 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물이 상기 대상체에게 VEGF 길항제의 투여와 동시에, VEGF 길항제의 투여 직전에, 또는 VEGF 길항제의 투여 직후에 투여됨을 의미한다. 소정 실시형태들에서, 상기 VEGF 길항제는 Ang-2 억제제와 공동-제형으로서 투여된다. 관련 실시형태에서, 본 발명은 대상체에게 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 투여하여 VEGF 길항제 단독 투여와 비교하여 보다 큰 치료학적 효과 또는 상승작용적 효과를 제공함을 포함하는 방법을 포함한다. 상기 대상체는 유리체내 투여된 VEGF 길항제의 치료학적 용법을 받는 중일 수 있다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 Ang-2 억제제는 이러한 치료학적 용법에 부가되고, 여기서, VEGF 길항제의 1회 이상의 유리체내 주사가 감소될 수 있거나 연속적인 유리체내 주사들 사이의 지속기간이 증가될 수 있다.

소정 실시형태들에서, 본 발명은 혈관성 안 질환의 치료 방법으로서, 상기 방법은 혈관성 안 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 항-Ang-2 억제제의 치료학적 유효량 및 VEGF 길항제의 치료학적 유효량을 포함하는 약제학적 조성물의 1회 이상의 용량을 투여함을 포함하는, 혈관성 안 질환의 치료 방법을 제공한다. 소정 실시형태들에서, 상기 약제학적 조성물은 상기 대상체에게 유리체내 투여된다. 소정 실시형태들에서, 상기 약제학적 조성물은 약 10mg/mL 내지 약 120mg/mL의 항-Ang-2 억제제 및 약 40mg/mL의 VEGF 길항제를 포함한다. 소정 실시형태들에서, 상기 방법은 약제학적 조성물의 개시 용량, 이어서, 1회 이상의 2차 용량을 투여함을 포함하고, 여기서, 각각의 2차 용량은 직전 용량의 1 내지 4주 후에 투여된다. 소정 실시형태들에서, 상기 약제학적 조성물의 1회 이상의 3차 용량이 투여되고, 여기서, 각각의 3차 용량은 직전 용량의 5 내지 12주 후에 투여된다. 소정 실시형태들에서, 상기 약제학적 조성물의 각각의 용량은 약 0.5 내지 약 6mg의 항-Ang-2 억제제 및 약 2mg의 VEGF 길항제를 포함한다.

소정 실시형태들에서, 본 발명은 혈관성 안 질환을 갖는 대상체에서의 유리체내 주사의 수를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 항-Ang-2 억제제 및 VEGF 길항제를 포함하는 약제학적 조성물을 투여함을 포함하고, 여기서, 상기 유리체내 투여가 항-Ang-2 억제제 또는 VEGF 길항제 단독으로 투여된 대상체와 비교하여 8주마다 1회로 감소되는, 혈관성 안 질환을 갖는 대상체에서의 유리체내 주사의 수를 감소시키는 방법을 제공한다.

본 발명의 방법은 혈관성 안 장애로 진단되었거나 혈관성 안 장애에 걸릴 위험이 있는 환자에서의 혈관성 안 장애를 치료하거나 예방하는데 유용하다. 일반적으로, 본 발명의 방법은 치료 용법 개시("0주"째에 개시 용량 투여됨)의 36주 이내에 예를 들면, 6주의 끝 무렵에, 12주의 끝 무렵에, 18주의 끝 무렵에, 24주 의 끝 무렵 등에 효능을 입증한다. AMD 및 DME와 같은 혈관신생 안 장애를 치료하는 방법의 맥락에서, "효능"은 치료의 개시로부터, 환자가 조기 치료 당뇨병성 망막병증 연구(ETDRS) 시력 차트 상의 10개 이하의 문자의 손실을 나타냄을 의미한다. 소정 실시형태들에서, "효능"은 치료의 개시로부터, EDTRS 시력 차트 상의 하나 이상(예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 그 이상)의 문자의 획득을 의미한다.

안지오포이에틴 -2( Ang -2) 억제제

본원에 사용되는 용어 "Ang-2" 또는 "ANG2"는 일반적으로 Tie2 활성화의 자가분비 길항제로서 공지되어 있는 사람 안지오포이에틴-2를 의미한다. Ang-2는 사이토카인의 효과를 얻기 위해 혈관 내피를 "프라이밍(prime)"하는 것으로 당해 분야에 일반적으로 공지되어 있다. Ang-2는 종양 혈관구조에서 강력하게 발현되고, 일반적으로 다른 사이토카인(즉, 혈관 내피 성장 인자)과 상승작용적으로 작용하여 혈관신생 및 종양 진행을 촉진시키는 것으로 생각된다.

본원에서 사용되는 "Ang-2 억제제"(본원에서 "Ang-2 길항제", "Ang-2 차단제" 등으로서도 언급됨)는 Ang2에 결합하거나 Ang-2와 상호작용하여 Ang-2의 정상 생물학적 신호전달 기능/활성을 억제하거나 약화시키는 임의의 제제이다.

Ang-2 억제제의 범주들의 비-제한적 예로는 소분자 Ang-2 억제제, 항-Ang-2 압타머(aptamer), 펩타이드계 Ang-2 억제제(예를 들면, "펩티바디" 분자), "수용체-바디"(예를 들면, Ang-2 구성성분의 수용체-결합 도메인을 포함하는 조작된 분자), 및 사람 Ang-2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체의 항원-결합 단편이 포함된다. 소정 실시형태들에서, 상기 Ang-2 억제제는 예를 들면, US 특허 출원 공개 제US20110027286호에 개시되어 있는 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 소정 실시형태들에서, 항-Ang-2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(HCVR) 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(LCVR)을 포함한다.

본 발명의 방법은 Ang-2 억제제를 포함하는 치료학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 Ang-2 억제제를 포함하는 치료학적 조성물을 투여함을 포함한다.

항- Ang -2 항체 및 이의 항원-결합 단편

본 발명의 소정 예시 실시형태들에 따르면, Ang-2 억제제는 항-Ang-2 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 본원에 사용되는 용어 "항체"는 디설파이드 결합에 의해 상호-연결된 2개의 중(H)쇄 및 2개의 경(L)쇄인 4개의 폴리펩타이드 쇄들을 포함하는 면역글로불린 분자, 및 이의 다량체(예를 들면, IgM)를 포함한다. 전형적인 항체에서, 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 HCVR 또는 V_H로서 약칭함) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 상기 중쇄 불변 영역은 C_H1, C_H2 및 C_H3인 3개의 도메인을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 LCVR 또는 V_L로서 약칭함) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인(C_L1)을 포함한다. V_H 및 V_L 영역은 프레임워크 영역(FR: framework region)이라고 칭하는 보다 보존된 영역들 사이에 개재된(interspersed) 상보성 결정 영역(CDR: complementarity determining region)이라고 칭하는 초가변성 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 V_H 및 V_L은 아미노-말단으로부터 카복시-말단으로 하기 순서로 배열된 3개의 CDR들 및 4개의 FR들로 이루어진다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 본 발명의 상이한 실시형태들에서, 항-Ang-2 항체(또는 이의 항원-결합부)의 FR은 사람 생식선 서열과 동일할 수 있거나 자연적으로 또는 인위적으로 변형될 수 있다. 아미노산 컨센서스(consensus) 서열은 2개 이상의 CDR들의 사이드-바이-사이드(side-by-side) 분석에 기초하여 정의될 수 있다.

또한, 본원에서 사용되는 용어 "항체"로는 완전 항체 분자의 항원-결합 단편이 포함된다. 본원에서 사용되는 용어 항체의 "항원-결합부" 및 항체의 "항원-결합 단편" 등으로는 임의의 천연 발생, 효소적으로 수득가능한, 합성 또는 유전적으로 조작된, 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는 폴리펩타이드 또는 당단백질이 포함된다. 항체의 항원-결합 단편은 단백질 용해성 분해 또는 항체 가변 및 임의로 불변 도메인을 암호화하는 DNA의 조작 및 발현을 포함하는 재조합 유전자 조작 기술과 같은 임의의 적합한 표준 기술을 이용한 완전 항체 분자로부터 유도될 수 있다. 이러한 DNA는 공지되어 있고/있거나, 예를 들면, 상업적 공급원, DNA 라이브러리(예를 들면, 파지-항체 라이브러리 포함)로부터 쉽게 입수할 수 있거나, 또는 합성될 수 있다. DNA는 서열분석하고 화학적 또는 분자 생물학 기술을 이용함으로써 조작하여, 예를 들면, 1개 이상의 가변 및/또는 불변 도메인을 적합한 입체배치(configuration)로 배열하거나, 또는 코돈을 도입하거나, 시스테인 잔기를 생성하거나, 아미노산 등을 변형시키거나 부가하거나 결실시킬 수 있다.

항원-결합 단편의 비-제한적 예로는 (i) Fab 단편; (ii) F(ab')2 단편; (iii) Fd 단편; (iv) Fv 단편; (v) 단일-쇄 Fv(scFv) 분자; (vi) dAb 단편; 및 (vii) 항체의 초가변성 영역을 모방하는 아미노산 잔기들로 이루어진 최소 인식 단위(예를 들면, CDR3 펩타이드와 같은 단리된 상보성 결정 영역(CDR)) 또는 제약적(constrained) FR3-CDR3-FR4 펩타이드가 포함된다. 다른 조작된 분자들, 예를 들면, 도메인-특이적 항체, 단일 도메인 항체, 도메인-결실된 항체, 키메라 항체, CDR-절편이식된 항체, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니바디, 나노바디(예를 들면, 1가의 나노바디, 2가의 나노바디 등), 소형 모듈 면역약제(SMIP: small modular immunopharmaceutical) 및 상어 가변성 IgNAR 도메인도 본원에 사용되는 표현 "항원-결합 단편" 내에 포함된다.

항체의 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 1개의 가변 도메인을 포함할 것이다. 가변 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성으로 이루어질 수 있고, 일반적으로 1개 이상의 프레임워크 서열과 인접하거나 1개 이상의 프레임워크 서열과의 프레임 내에 적어도 1개의 CDR을 포함할 것이다. V_L 도메인과 관련된 V_H 도메인을 갖는 항원-결합 단편에서, V_H 및 V_L 도메인은 임의의 적합한 배열로 서로에 대해 위치될 수 있다. 예를 들면, 가변 영역은 이량체일 수 있고, V_H-V_H, V_H-V_L 또는 V_L-V_L 이량체를 함유할 수 있다. 대안으로, 항체의 항원-결합 단편은 단량체성 V_H 또는 V_L 도메인을 함유할 수 있다.

소정 실시형태들에서, 항체의 항원-결합 단편은 적어도 1개의 불변 도메인에 공유결합적으로 링크된 적어도 1개의 가변 도메인을 함유할 수 있다. 본 발명의 항체의 항원-결합 단편 내에서 발견될 수 있는 가변 및 불변 도메인의 비제한적 예시의 입체배치로는 (i) V_H-C_H1; (ii) V_H-C_H2; (iii) V_H-C_H3; (iv) V_H-C_H1-C_H2; (v) V_H-C_H1-C_H2-C_H3; (vi) V_H-C_H2-C_H3; (vii) V_H-C_L; (viii) V_L-C_H1; (ix) V_L-C_H2; (x) V_L-C_H3; (xi) V_L-C_H1-C_H2; (xii) V_L-C_H1-C_H2-C_H3; (xiii) V_L-C_H2-C_H3; 및 (xiv) V_L-C_L가 포함된다. 상기 열거된 예시의 입체배치들 중 임의의 입체배치를 포함하는 가변 및 불변 도메인의 임의의 입체배치에서, 가변 및 불변 도메인은 서로 직접적으로 링크될 수 있거나 완전 또는 부분 힌지 또는 링커 영역에 의해 링크될 수 있다. 힌지 영역은 적어도 2개(예를 들면, 5, 10, 15, 20, 40, 60개 또는 그 이상)의 아미노산으로 이루어질 수 있고, 이는 단일 폴리펩타이드 분자에서 인접한 가변 및/또는 불변 도메인 사이의 가요성(flexible) 또는 반-가요성(semi-flexible) 링크를 초래한다. 또한, 본 발명의 항체의 항원-결합 단편은 (예를 들면, 디설파이드 결합(들)에 의한) 서로의 및/또는 1개 이상의 단량체성 V_H 또는 V_L 도메인과의 비-공유결합적 회합시 상기 열거된 가변 및 불변 도메인 입체배치 중 임의의 입체배치의 동종-이량체 또는 이종-이량체(또는 기타 다량체)를 포함할 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "항체"는 다특이적(예를 들면, 이특이적) 항체도 포함한다. 다특이적 항체 또는 항체의 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 2개의 상이한 가변 도메인을 포함할 것이고, 여기서, 각각의 가변 도메인은 별개의 항원에 또는 동일한 항원 상의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 임의의 다특이적 항체 포맷은, 당해 분야에서 이용가능한 일상적 기술을 이용하여 본 발명의 항체 또는 항체의 항원-결합 단편과 관련하여 사용하기 위해 개작될 수 있다. 예를 들면, 본 발명은, 면역글로불린의 한 아암(arm)은 IL-4α 또는 이의 단편에 대해 특이적이고, 면역글로불린의 다른 아암은 제2 치료학적 표적에 대해 특이적이거나 치료학적 모이어티에 접합되는, 이특이적 항체의 사용을 포함하는 방법을 포함한다. 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 예시적 이특이적 포맷으로는, 예를 들면, scFv-기반 또는 디아바디 이특이적 포맷, IgG-scFv 융합, 이원 가변 도메인(DVD)-Ig, 쿼드로마(Quadroma), 놉-인투-홀(knob-into-hole), 통상의 경쇄(예를 들면, 놉-인투-홀을 갖는 통상의 경쇄 등), CrossMab, CrossFab, (SEED) 바디, 류신 지퍼, 듀오바디(Duobody), IgG1/IgG2, 이중 작용성 Fab(DAF)-IgG 및 Mab² 이특이적 포맷이 제한 없이 포함된다(상기 포맷들의 검토를 위해, 예를 들면, 문헌[Klein et al. 2012, mAbs 4:6, 1-11] 및 이에 인용된 참조문헌을 참조한다). 또한, 이특이적 항체는 펩타이드/핵산 접합을 이용하여 작제될 수 있고, 예를 들면, 여기서, 직교 화학 반응성(orthogonal chemical reactivity)을 갖는 비천연 아미노산을 이용하여 부위-특이적 항체-올리고뉴클레오타이드 접합체를 생성시키고, 이어서, 이는 정의된 조성, 원자가 및 기하학을 갖는 다량체성 복합체로 자기-조립한다. (예를 들면, 문헌[Kazane et al., J. Am. Chem . Soc . [Epub : Dec . 4, 2012]]을 참조한다).

본 발명의 방법에서 사용되는 항체는 사람 항체일 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "사람 항체"는 사람 생식선 면역글로불린 서열로부터 유도된 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 그럼에도 불구하고 본 발명의 사람 항체는 예를 들면, CDR 내의, 특히 CDR3 내의 사람 생식선 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않는 아미노산 잔기(예를 들면, 시험관내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이유발에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에서 사용되는 용어 "사람 항체"는 다른 포유동물 종, 예를 들면, 마우스의 생식선으로부터 유도된 CDR 서열이 사람 프레임워크 서열에 절편이식된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다.

본 발명의 방법에서 사용되는 항체는 재조합 사람 항체일 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "재조합 사람 항체"는 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 또는 단리된 모든 사람 항체, 예를 들면, 숙주 세포에 형질감염된 재조합 발현 벡터를 이용하여 발현된 항체(하기에 추가로 기술됨), 재조합, 조합적 사람 항체 라이브러리로부터 단리된 항체(하기에 추가로 기술됨), 사람 면역글로불린 유전자에 대해 유전자이식된 동물(예를 들면, 마우스)로부터 단리된 항체(예를 들면, 문헌[Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295]을 참조한다) 또는 다른 DNA 서열에의 사람 면역글로불린 유전자 서열의 스플라이싱(splicing)을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 또는 단리된 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 재조합 사람 항체는 사람 생식선 면역글로불린 서열로부터 유도된 가변 및 불변 영역을 갖는다. 그러나, 소정 실시형태들에서, 이러한 재조합 사람 항체는 시험관내 돌연변이유발(또는, 사람 Ig 서열에 대해 유전자이식된 동물이 사용되는 경우에는 생체내 체세포 돌연변이유발)되고, 따라서, 재조합 항체의 V_H 및 V_L 영역의 아미노산 서열은, 사람 생식선 V_H 및 V_L 서열로부터 유도되지만 생체내 사람 항체 생식선 레퍼토리 내에 자연적으로 존재할 수 없는 서열이다.

소정 실시형태에 따르면, 본 발명의 약제학적 제형 및 방법에서 사용되는 항체는 Ang-2에 특이적으로 결합한다. 용어 "특이적으로 결합한다" 등은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 생리학적 조건 하에 상대적으로 안정한 항원과의 복합체를 형성함을 의미한다. 항체가 항원에 특이적으로 결합하는지의 여부를 결정하기 위한 방법은 당해 분야에 익히 공지되어 있고, 예를 들면, 평형 투석 및 표면 플라스몬 공명 등이 포함된다. 예를 들면, 본 발명의 맥락에서 사용되는 Ang-2에 "특이적으로 결합하는" 항체로는 표면 플라스몬 공명 검정으로 측정시 약 500nM 미만, 약 300nM 미만, 약 200nM 미만, 약 100nM 미만, 약 90nM 미만, 약 80nM 미만, 약 70nM 미만, 약 60nM 미만, 약 50nM 미만, 약 40nM 미만, 약 30nM 미만, 약 20nM 미만, 약 10nM 미만, 약 5nM 미만, 약 4nM 미만, 약 3nM 미만, 약 2nM 미만, 약 1nM 미만 또는 약 0.5nM 미만의 K_D로 Ang-2 또는 이의 부분에 결합하는 항체가 포함된다. 그러나, 사람 Ang-2에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 다른 항원, 예를 들면, 다른 (비-사람) 종 유래의 Ang-2 분자에 대한 교차-반응성을 가질 수 있다.

본 발명의 소정의 예시 실시형태들에 따르면, 상기 Ang-2 억제제는 중쇄 가변 영역(HCVR), 경쇄 가변 영역(LCVR), 및/또는 US 특허 출원 공개 제US20110027286호에 제시되는 바와 같은 항-Ang-2 항체의 아미노산 서열 중 임의의 서열을 포함하는 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 항-Ang-2 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

소정의 예시 실시형태들에서, 본 발명의 방법의 맥락에서 사용될 수 있는 항-Ang-2 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR)을 포함한다. 소정 실시형태들에 따르면, 항-Ang-2 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 3개의 HCDR(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3) 및 3개의 LCDR(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서, 상기 HCDR1은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 HCDR2는 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 HCDR3은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 LCDR1은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 LCDR2는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 LCDR3은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시형태들에서, 상기 항-Ang-2 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 1을 포함하는 HCVR 및 서열번호 2를 포함하는 LCVR을 포함한다. 소정 실시형태들에서, 본 발명의 방법은 항-Ang-2 항체의 사용을 포함하고, 상기 항체는 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 몇몇의 실시형태들에서, 항-Ang-2 항체는 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 예시의 항체는 네스바쿠맙으로서 공지되어 있는 완전 사람 항-Ang-2 항체이다. 소정의 예시 실시형태들에 따르면, 본 발명의 방법은 네스바쿠맙 또는 이의 생물학적 등가물(bioequivalent)의 사용을 포함한다. 본원에 사용되는 용어 "생물학적 등가물"은, 유사한 실험 조건 하에 동일한 몰 용량으로 단일 용량 또는 다중 용량 투여된 경우 생물학적 등가물의 흡수 속도 및/또는 정도가 네스바쿠맙의 것과 유의한 차이를 나타내지 않는 약제학적 등가물 또는 약제학적 대안물인 항-Ang-2 항체 또는 이의 Ang-2-결합 단백질 또는 단편을 말한다. 본 발명의 맥락에서, 상기 용어는 이들의 안전성, 순도 및/또는 효력(potency)에 있어서 네스바쿠맙과 임상학적으로 유의한 차이를 갖지 않는 Ang-2에 결합하는 항원-결합 단백질을 말한다.

본원의 실시예에 사용되는 비-제한적 예시의 항체는 US 2011/0027286에서와 같이 "H1H685P"로서 나타낸다. 이러한 항체는 서열번호 1/2를 갖는 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍, 및 서열번호 3 - 4 - 5 / 서열번호 6 - 7 - 8로 나타내어지는 HCDR1-HCDR2-HCDR3 / LCDR1-LCDR2-LCDR3 도메인을 포함한다.

사람 Ang-2에 대한 다른 항체는 본원에 인용에 의해 포함되는 특허 출원 공개 US 2010/0166768, US 2011/0065902, 및 WO 2010/077854에 기술되어 있다.

본 발명의 약제학적 제형 내에 함유된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 양은 제형의 원하는 특이적 성질뿐만 아니라 특정 환경 및 이러한 제형이 사용되도록 의도된 목적에 따라 다를 수 있다. 소정 실시형태들에서, 상기 약제학적 제형은 5 ± 0.75mg/mL 내지 150 ± 22.5mg/mL의 항체; 7.5 ± 1.125mg/mL 내지 140 ± 21mg/mL의 항체를 함유할 수 있는 액체 제형이다. 예를 들면, 본 발명의 제형은 약 10mg/mL; 약 20mg/mL; 약 30mg/mL; 약 50mg/mL; 약 60mg/mL; 약 80mg/mL; 약 100mg/mL; 약 120mg/mL; 또는 약 150mg/mL의 사람 Ang-2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함할 수 있다.

VEGF 길항제

본원에서 사용되는 "VEGF 길항제"는, VEGF에 결합하거나 VEGF와 상호작용하고/하거나, VEGF의 수용체(VEGFR1 및 VEGFR2)에의 VEGF의 결합을 억제하고/하거나, VEGF의 생물학적 신호전달 및 활성을 억제하는 임의의 제제이다. VEGF 길항제로는 VEGF와 천연 VEGF 수용체 사이의 상호작용을 간섭하는 분자, 예를 들면, VEGF 또는 VEGF 수용체에 결합하여 VEGF와 VEGF 수용체 사이의 상호작용을 방지하거나 그렇지 않으면 방해하는 분자가 포함된다. 구체적 예시의 VEGF 길항제로는 항-VEGF 항체(예를 들면, 라니비주맙[LUCENTIS®]), 항-VEGF 수용체 항체(예를 들면, 항-VEGFR1 항체, 항-VEGFR2 항체 등), VEGF의 소분자 억제제(예를 들면, 수니티닙) 및 VEGF 수용체-기반 키메라 분자 또는 VEGF-억제성 융합 단백질(본원에서 "VEGF-트랩"으로서도 나타냄)가 포함된다.

VEGF 수용체-기반 키메라 분자로는 VEGFR1(Flt1로서도 나타냄) 및/또는 VEGFR2(Flk1 또는 KDR로서도 나타냄)과 같은 VEGF 수용체의 2개 이상의 면역글로불린(Ig)-유사 도메인을 포함하고, 다량체화 도메인(예를 들면, 2개 이상의 키메라 폴리펩타이드의 다량체화[예를 들면, 이량체화]를 가능하게 하는 Fc 도메인)도 함유할 수 있는 키메라 폴리펩타이드가 포함된다. 예시의 VEGF 수용체-기반 키메라 분자는 VEGFR1R2-FcΔC1(a)로서 나타낸 분자(애플리버셉트로서도 공지되어 있음; 상표명 EYLEA® 하에 시판됨)이다. 소정 실시형태들에서, 애플리버셉트는 서열번호 11의 아미노산 서열에 의해 암호화된다.

본 발명의 약제학적 제형 내에 함유된 VEGF 길항제의 양은 제형의 원하는 특이적 성질뿐만 아니라 특정 환경 및 이러한 제형이 사용되도록 의도된 목적에 따라 다를 수 있다. 소정 실시형태들에서, 상기 약제학적 제형은 5 ± 0.75mg/mL 내지 150 ± 22.5mg/mL의 VEGF 길항제; 10 ± 1.5mg/mL 내지 100 ± 15.0mg/mL의 VEGF 길항제; 20 ± 3mg/mL 내지 80 ± 12mg/mL의 VEGF 길항제; 30 ± 4.5mg/mL 내지 70 ± 10.5mg/mL의 VEGF 길항제 또는 40 ± 6.0mg/mL의 VEGF 길항제를 함유할 수 있는 액체 제형이다. 예를 들면, 본 발명의 제형은 약 20mg/mL; 약 30mg/mL; 약 40mg/mL; 약 50mg/mL; 또는 약 60mg/mL의 VEGF 길항제를 포함할 수 있다.

병용 치료요법

소정 실시형태들에 따르면, 본 발명의 방법은 대상체에게 VEGF 길항제를 항-Ang-2 항체와 병용하여 투여함을 포함한다. 본원에 사용되는 표현 "와 병용하여"는 VEGF 길항제가 항-Ang-2 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 전에, 항-Ang-2 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 후에 또는 항-Ang-2 항체를 포함하는 약제학적 조성물과 동시에 투여됨을 의미한다. 상기 용어 "와 병용하여"는 또한 항-Ang-2 항체 및 VEGF 길항제의 순차적 또는 동시적 투여를 포함한다. 예를 들면, 항-Ang-2 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 "전에" 투여되는 경우, VEGF 길항제는 항-Ang-2 항체를 포함하는 약제학적 조성물 투여의 72시간 초과, 약 72시간, 약 60시간, 약 48시간, 약 36시간, 약 24시간, 약 12시간, 약 10시간, 약 8시간, 약 6시간, 약 4시간, 약 2시간, 약 1시간, 약 30분, 약 15분 또는 약 10분 전에 투여될 수 있다. 항-Ang-2 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 "후에" 투여되는 경우, VEGF 길항제는 항-Ang-2 항체를 포함하는 약제학적 조성물 투여의 약 10분, 약 15분, 약 30분, 약 1시간, 약 2시간, 약 4시간, 약 6시간, 약 8시간, 약 10시간, 약 12시간, 약 24시간, 약 36시간, 약 48시간, 약 60시간, 약 72시간 또는 72시간 초과 후에 투여될 수 있다. 항-Ang-2 항체를 포함하는 약제학적 조성물과의 "동시" 투여는 VEGF 길항제가 대상체에게 항-Ang-2 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 투여의 5분 미만 내에(전에, 후에 또는 동시에) 별개의 투여형(dosage form)으로 투여되거나, 또는 대상체에게 VEGF 길항제 및 항-Ang-2 항체 둘 다를 포함하는 단일 병용 용량 제형으로서 투여됨을 의미한다.

병용 치료요법은 본 발명의 항-Ang-2 항체 및 VEGF 길항제(예를 들면, 애플리버셉트, VEGF-트랩, 예를 들면, US 7,087,411을 참조한다(본원에서 "VEGF-억제성 융합 단백질"로서도 나타냄), 항-VEGF 항체(예를 들면, 라니비주맙), VEGF 수용체의 소분자 키나제 억제제(예를 들면, 수니티닙, 소라페닙 또는 파조파닙) 등을 포함할 수 있다.

본 발명의 방법은 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 연령-관련 황반 변성, 망막 혈관신생, 중심성 망막 정맥 폐색, 분지성 망막 정맥 폐색, 폴립상 맥락막 혈관병증, 및 맥락막 혈관신생으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 안 질환 또는 장애의 적어도 하나의 증상 또는 징후를 치료하거나 개선시키기 위한 추가의 또는 상승작용적 활성을 위해 항-Ang-2 항체를 VEGF 길항제와 병용하여 투여함을 포함한다.

약제학적 조성물 및 제형

본 발명은 대상체에게 Ang-2 억제제를 투여함을 포함하는 방법을 포함하고, 여기서, 상기 Ang-2 억제제는 약제학적 조성물 내에 함유되어 있다. 소정 실시형태들에서, 상기 약제학적 조성물은 VEGF 길항제를 추가로 포함한다. 대안의 실시형태들에서, 상기 Ang-2 억제제 및 상기 VEGF 길항제는 자체의 별개의 약제학적 투약 제형 내에 존재할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물은 적합한 담체, 부형제, 및 적합한 이동, 전달 및 내성 등을 제공하는 기타 제제와 함께 제형화될 수 있다. 모든 약사들에게 알려져 있는 처방집: Remington 's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA에서 다수의 적절한 제형을 찾을 수 있다. 이들 제형으로는 예를 들면, 분말, 페이스트, 연고, 젤리, 왁스, 오일, 지질, 소포를 함유하는 지질(양이온성 또는 음이온성)(예를 들면, LIPOFECTIN™), DNA 접합체, 무수성 흡수 페이스트, 수-중-유 및 유-중-수 에멀젼, 에멀젼 카보왁스(각종 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반-고체 겔, 및 카보왁스를 함유하는 반-고체 혼합물이 포함된다. 또한, 문헌[Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311]을 참조한다.

본원에서 사용되는 표현 "약제학적 제형"은 적어도 하나의 활성 성분(예를 들면, 사람 또는 비-사람 동물에서 생물학적 효과를 발휘할 수 있는 소분자, 거대분자, 화합물 등), 및 활성 성분 또는 하나 이상의 추가의 불활성 성분과 병용하는 경우에 사람 또는 비-사람 동물에의 치료학적 투여에 적합한 적어도 하나의 불활성 성분의 조합물을 의미한다. 본원에 사용되는 용어 "제형"은 달리 구체적으로 나타내지 않는 한 "약제학적 제형"을 의미한다. 본 발명은 적어도 하나의 치료학적 폴리펩타이드를 포함하는 약제학적 제형을 제공한다. 본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 상기 치료학적 폴리펩타이드는, 사람 안지오포이에틴-2(Ang-2) 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 소정의 다른 실시형태들에 따르면, 본 발명은 하나 초과의 치료학적 폴리펩타이드를 포함하는 약제학적 제형을 제공한다. 보다 구체적으로, 본 발명은 (i) 사람 Ang-2에 특이적으로 결합하는 사람 항체; (ii) VEGF 길항제; (iii) 인산 나트륨 완충제; (iv) 비-이온성 계면활성제인 유기 공동-용매; (v) 염화 나트륨과 같은 등장성 제제; 및 (vi) 탄수화물인 열적 안정화제를 포함하는 약제학적 제형을 포함한다. 본 발명 내에 포함되는 특정 예시의 구성성분들 및 제형들은 하기에 상세하게 기술된다.

본 발명의 약제학적 제형 내에 함유된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 양은 제형의 원하는 특이적 성질뿐만 아니라 특정 환경 및 이러한 제형이 사용되도록 의도된 목적에 따라 다를 수 있다. 소정 실시형태들에서, 상기 약제학적 제형은 5 ± 0.75mg/mL 내지 150 ± 22.5mg/mL의 항체; 7.5 ± 1.125mg/mL 내지 140 ± 21mg/mL의 항체; 10 ± 1.5mg/mL 내지 130 ± 19.5mg/mL의 항체; 10 ± 1.5mg/mL의 항체; 20 ± 3mg/mL의 항체; 60 ± 9mg/mL의 항체; 또는 120 ± 18mg/mL의 항체를 함유할 수 있는 액체 제형이다. 예를 들면, 본 발명의 제형은 약 10mg/mL; 약 20mg/mL; 약 40mg/mL; 약 60mg/mL; 약 80mg/mL; 약 100mg/mL; 약 120mg/mL; 또는 약 140mg/mL의 사람 Ang-2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함할 수 있다.

소정 실시형태들에서, 상기 약제학적 제형은 5 ± 0.75mg/mL 내지 100 ± 15mg/mL의 VEGF 길항제를 함유할 수 있는 액체 제형이다. 예를 들면, 본 발명의 제형은 약 5mg/mL; 약 10mg/mL; 약 15mg/mL; 약 20mg/mL; 약 25mg/mL; 약 30mg/mL; 약 35mg/mL; 약 40mg/mL; 약 50mg/mL; 약 60mg/mL; 약 70mg/mL; 약 80mg/mL; 약 90mg/mL; 또는 약 100mg/mL의 VEGF 길항제, 예를 들면, 애플리버셉트를 포함할 수 있다.

소정 실시형태들에서, 상기 약제학적 제형은 약 5mg/mL 내지 약 150mg/mL의 항-Ang-2 항체 및 약 5 내지 100mg/mL의 VEGF 길항제를 포함하는 안정한 액체 공동-제형이다.

본 발명의 약제학적 제형은 하나 이상의 부형제를 포함한다. 본원에 사용되는 용어 "부형제"는 원하는 조도(consistency), 점도 또는 안정화 효과를 제공하기 위해 상기 제형에 첨가되는 임의의 비-치료학적 제제를 의미한다.

소정 실시형태들에서, 본 발명의 약제학적 제형은 적어도 하나의 유기 공동용매를 거친 취급 또는 교반, 예를 들면, 와류(vortexing) 조건 하에 사람 Ang-2 g항체를 안정화시키는 유형 및 양으로 포함한다. 몇몇의 실시형태들에서, "안정화시킨다"가 의미하는 것은 거친 취급 과정에 걸쳐 (몰 기준으로) 항체 총량의 4% 초과의 응집 항체 형성의 방지이다. 몇몇의 실시형태들에서, 거친 취급은 약 60분 또는 약 120분 동안의 항체 및 유기 공동용매를 함유하는 용액의 와류이다.

소정 실시형태들에서, 유기 공동용매는 비-이온성 계면활성제, 예를 들면, 알킬 폴리(에틸렌 옥사이드)이다. 본 발명의 제형에 포함될 수 있는 특정 비-이온성 계면활성제로는 예를 들면, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 28, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 65, 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 81, 및 폴리소르베이트 85와 같은 폴리소르베이트; 폴록사머 181, 폴록사머 188, 폴록사머 407와 같은 폴록사머; 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이 포함된다. 폴리소르베이트 20는 또한 TWEEN 20, 소르비탄 모노라우레이트 및 폴리옥시에틸렌소르비탄 모노라우레이트로서 공지되어 있다. 폴록사머 188은 PLURONIC F68로서도 공지되어 있다.

본 발명의 약제학적 제형 내에 함유된 비-이온성 계면활성제의 양은 제형의 원하는 특이적 성질뿐만 아니라 특정 환경 및 이러한 제형이 사용되도록 의도된 목적에 따라 다를 수 있다. 소정 실시형태들에서, 상기 제형은 0.01% ± 0.0015% 내지 1% ± 0.15%의 계면활성제를 함유할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 제형은 약 0.0085%; 약 0.01%; 약 0.02%; 약 0.03%; 약 0.04%; 약 0.05%; 약 0.06%; 약 0.07%; 약 0.08%; 약 0.09%; 약 0.1%; 약 0.11%; 약 0.12%; 약 0.13%; 약 0.14%; 약 0.15%; 약 0.16%; 약 0.17%; 약 0.18%; 약 0.19%; 약 0.20%; 약 0.21%; 약 0.22%; 약 0.23%, 약 0.24%; 약 0.25%; 약 0.3%; 약 0.4%; 약 0.5%; 약 0.6%; 약 0.7%; 약 0.8%; 약 0.9%; 약 1%; 약 1.1%; 약 1.15%; 또는 약 1.2%의 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80 또는 폴록사머 188을 포함할 수 있다.

본 발명의 약제학적 제형은 또한 열적 스트레스 조건 하에 사람 Ang-2 항체를 안정화시키는 유형 및 양으로 하나 이상의 안정화제를 포함할 수 있다. 몇몇의 실시형태들에서, "안정화시킨다"가 의미하는 것은 항체 및 열적 안정화제를 함유하는 용액이 약 28일 이하 동안 약 45℃로 유지되는 경우에 약 93% 초과의 항체를 본래 입체구조로 유지되는 것이다. 몇몇의 실시형태들에서, "안정화시킨다"가 의미하는 것은 항체 및 열적 안정화제를 함유하는 용액이 약 28일 이하 동안 약 45℃로 유지되는 경우에 약 4% 미만의 항체가 응집되는 것이다. 몇몇의 실시형태들에서, "안정화시킨다"가 의미하는 것은 항체 및 열적 안정화제를 함유하는 용액이 약 28일 이하 동안 약 37℃로 유지되는 경우에 약 96% 초과의 항체를 본래 입체배치로 유지하는 것이다. 몇몇의 실시형태들에서, "안정화시킨다"가 의미하는 것은 항체 및 열적 안정화제를 함유하는 용액이 약 28일 이하 동안 약 37℃로 유지되는 경우에 약 2% 미만의 항체가 응집되는 것이다. 본원에서 사용되는 "본래"는 크기 배제에 의한 항체의 주요 형태를 의미하고, 이는 일반적으로 항체의 온전한 모노머이다.

소정 실시형태들에서, 상기 열적 안정화제는 슈크로스, 소르비톨, 글리세롤, 트레할로스 및 만니톨로부터 선택되는 당 또는 당 알콜, 도는 이들의 임의의 조합물이고, 상기 제형 내에 함유되는 이들의 양은 특정 환경 및 상기 제형이 사용되는 의도된 목적에 따라 다를 수 있다. 소정 실시형태들에서, 상기 제형은 약 1% 내지 약 20%의 당 또는 당 알콜; 약 2% 내지 약 18%의 당 또는 당 알콜; 약 3% 내지 약 15%의 당 또는 당 알콜; 약 4% 내지 약 10%의 당 또는 당 알콜; 또는 약 5%의 당 또는 당 알콜을 함유할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 약제학적 제형은 4% ± 0.6%; 5% ± 0.75%; 6% ± 0.9%; 7% ± 1.05%; 8% ± 1.2%; 9% ± 1.35%; 10% ± 1.5%; 11% ± 1.65%; 12% ± 1.8%; 13% ± 1.95%; 또는 약 14% ± 2.1%의 당 또는 당 알콜(예를 들면, 슈크로스, 트레할로스 또는 만니톨)을 포함할 수 있다.

소정 실시형태들에서, 본 발명의 약제학적 제형은 등장성 제제, 예를 들면, 염화 나트륨 또는 염화 칼륨을 포함한다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 등장성 제제는 염화 나트륨이다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 염화 나트륨은 5mM ± 0.75mM 내지 100mM ± 15.0mM; 10mM ± 1.5mM 내지 50mM ± 7.5mM; 40mM ± 6.0mM; 또는 약 40mM의 농도로 존재한다.

본 발명의 약제학적 제형은 또한 안정한 pH를 유지하도록 작용하고 사람 Ang-2 항체를 안정화시키도록 보조하는 완충제 또는 완충제 시스템을 포함할 수 있다. 몇몇의 실시형태들에서, "안정화시킨다"가 의미하는 것은 항체 및 완충제를 함유하는 용액이 약 28일 이하 동안 약 45℃로 유지되는 경우에 약 5% ± 0.5% 미만 또는 약 4.3% 이하의 항체가 응집되는 것이다. 몇몇의 실시형태들에서, "안정화시킨다"가 의미하는 것은 항체 및 완충제를 함유하는 용액이 약 28일 이하 동안 약 45℃로 유지되는 경우에 적어도 92% ± 0.5%의 항체가 크기 배제 크로마토그래피에 의해 측정시 이의 본래 입체구조로 존재하는 것이다. "본래" 또는 "본래 입체구조"가 의미하는 것은 응집되지 않거나 분해되지 않은 항체 분획이다. 이는 일반적으로 항체 실체(entity)의 상대적 크기를 측정하는 검정, 예를 들면, 크기 배제 크로마토그래피 검정에 의해 결정된다. 응집되지 않고 분해되지 않은 항체는 본래 항체와 동일한 분획에 용출되고, 일반적으로 주요 용출 분획이다. 응집된 항체는 본래 항체보다 더 큰 크기를 나타내는 분획에 용출된다. 분해된 항체는 본래 항체보다 더 작은 크기를 나타내는 분획에 용출된다.

몇몇의 실시형태들에서, "안정화시킨다"가 의미하는 것은 항체 및 완충제를 함유하는 용액이 약 28일 이하 동안 약 45℃로 유지되는 경우에 양이온 교환 크로마토그래피에 의해 측정시 적어도 52% ± 0.5%의 항체가 이의 주요 전하 형태(main charge form)로 존재하는 것이다. "주요 전하" 또는 "주요 전하 형태"가 의미하는 것은 주요 피크에서 이온 교환 수지로부터 용출되는 항체의 분획이고, 이는 일반적으로 한 면에서는 보다 "염기성"인 피크 및 다른 면에서는 보다 "산성"인 피크에 의해 플랭킹된다(flanked).

본 발명의 약제학적 제형은 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 가질 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 제형은 약 5.5; 약 5.6; 약 5.7; 약 5.8; 약 5.9; 약 6.0; 약 6.1; 약 6.2; 약 6.3; 약 6.4; 또는 약 6.5의 pH를 가질 수 있다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 pH는 6.2 ± 0.3; 6.2 ± 0.2; 6.2 ± 0.1; 약 6.2; 또는 6.2이다.

몇몇의 실시형태들에서, 완충제 또는 완충제 시스템은 pH 5.5 내지 7.4 범위와 완전하게 또는 부분적으로 겹치는 완충 범위를 갖는 적어도 하나의 완충제를 포함한다. 한 실시형태에서, 상기 완충제는 약 6.2 ± 0.5의 pKa를 갖는다. 소정 실시형태들에서, 상기 완충제는 인산 나트륨 완충제를 포함한다. 소정 실시형태들에서, 상기 인산 나트륨은 5mM ± 0.75mM 내지 15mM ± 2.25mM; 6mM ± 0.9mM 내지 14mM ± 2.1mM; 7mM ± 1.05mM 내지 13mM ± 1.95mM; 8mM ± 1.2mM 내지 12mM ± 1.8mM; 9mM ± 1.35mM 내지 11mM ± 1.65mM; 10mM ± 1.5mM; 또는 약 10mM의 농도로 존재한다. 소정 실시형태들에서, 상기 완충제 시스템은 인산 나트륨을 6.2 ± 0.3 또는 6.1 ± 0.3의 pH에서 10mM ± 1.5mM로 포함한다.

본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 VEGF 길항제를 포함하는 예시의 제형은 예를 들면, 문헌[US 특허 7,531,173 및 7,608,261]에 개시되어 있다. 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 항-Ang-2 항체를 포함하는 예시의 약제학적 조성물은 예를 들면, 문헌[US 특허 출원 공개 제20130186797호]에 개시되어 있다.

약제학적 제형의 안정성

본 발명의 약제학적 제형은 전형적으로 높은 수준의 안정성을 나타낸다. 상기 약제학적 제형과 관련하여 본원에 사용되는 용어 "안정한"은 상기 약제학적 제형 내의 항체가 정의된 조건 하의 보관 후 허용가능한 정도의 화학적 구조 또는 생물학적 기능을 보유함을 의미한다. 제형은, 제형에 함유된 항체가 정의된 양의 시간 동안의 보관 후 제형의 화학적 구조 또는 생물학적 기능의 100를 유지하지 않을지라도 안정할 수 있다. 소정 환경 하에, 정의된 양의 시간 동안의 보관 후 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99%의 항체 구조 또는 기능의 유지는 "안정한" 것으로서 간주될 수 있다.

안정성은 그 중에서도 정의된 온도에서 정의된 양의 시간 동안의 보관 후 제형 내에 보유하는 본래 항체의 백분율을 측정함으로써 측정될 수 있다. 본래 항체의 백분율은 그 중에서도 크기 배제 크로마토그래피(예를 들면, 크기 배제 고성능 또는 초고성능 액체 크로마토그래피[SE-HPLC 또는 SE-UPLC])에 의해 측정될 수 있어, 본래는 응집되지 않고 분해되지 않음을 의미한다. 본원에서 사용되는 어구 "허용가능한 정도의 안정성"은 주어진 온도에서 정의된 양의 시간 동안의 보관 후 상기 제형 내에서 적어도 90%의 본래 형태의 항체가 검출될 수 있음을 의미한다. 소정 실시형태들에서, 정의된 온도에서 정의된 양의 시간 동안의 보관 후 상기 제형에서 적어도 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 본래 형태의 항체가 검출될 수 있다. 정의된 양의 시간 후 안정성이 측정되는 정의된 양의 시간은 적어도 14일, 적어도 28일, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 적어도 24개월, 또는 그 이상일 수 있다. 안정성을 평가할 때 상기 약제학적 제형이 보관될 수 있는 정의된 온도는 약 -80℃ 내지 약 45℃의 임의의 온도, 예를 들면, 약 -80℃, 약 -30℃, 약 -20℃, 약 0℃, 약 4 내지 8℃, 약 5℃, 약 25℃, 약 35℃, 약 37℃ 또는 약 45℃에서의 보관일 수 있다. 예를 들면, 약제학적 제형은 5℃에서의 9개월의 보관 후 SE-HPLC 또는 SE-UPLC에 의해 약 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5%, 99% 또는 99.5% 초과의 본래 항체가 검출되는 경우에 안정한 것으로 간주될 수 있다. 또한, 약제학적 제형은 25℃에서의 6개월의 보관 후 SE-HPLC 또는 SE-UPLC에 의해 약 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5%, 99% 또는 99.5% 초과의 본래 항체가 검출되는 경우에 안정한 것으로 간주될 수 있다. 또한, 약제학적 제형은 37℃에서의 28일의 보관 후 SE-HPLC 또는 SE-UPLC에 의해 약 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5%, 99% 또는 99.5% 초과의 본래 항체가 검출되는 경우에 안정한 것으로 간주될 수 있다. 또한, 약제학적 제형은 45℃에서의 28일의 보관 후 SE-HPLC 또는 SE-UPLC에 의해 약 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 초과의 본래 항체가 검출되는 경우에 안정한 것으로 간주될 수 있다. 또한, 약제학적 제형은 -20℃에서의 6개월의 보관 후 SE-HPLC 또는 SE-UPLC에 의해 약 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5%, 99% 또는 99.5% 초과의 본래 항체가 검출되는 경우에 안정한 것으로 간주될 수 있다. 또한, 약제학적 제형은 -30℃에서의 6개월의 보관 후 SE-HPLC 또는 SE-UPLC에 의해 약 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5%, 99% 또는 99.5% 초과의 본래 항체가 검출되는 경우에 안정한 것으로 간주될 수 있다. 또한, 약제학적 제형은 -80℃에서의 6개월의 보관 후 SE-HPLC 또는 SE-UPLC에 의해 약 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5%, 99% 또는 99.5% 초과의 본래 항체가 검출되는 경우에 안정한 것으로 간주될 수 있다.

안정성은 그 중에서도 정의된 온도에서 정의된 양의 시간 동안의 보관 후 제형 내에 응집체를 형성하는 항체의 백분율을 측정함으로써 측정될 수 있고, 여기서, 안정성은 형성된 응집체의 백분율에 반비례한다. 응집된 항체의 백분율은 그 중에서도 크기 배제 크로마토그래피(예를 들면, 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피[SE-HPLC])에 의해 측정될 수 있다. 본원에서 사용되는 어구 "허용가능한 정도의 안정성"은 주어진 온도에서 정의된 양의 시간 동안의 보관 후 최대 6%의 항체가 상기 제형 내에서 검출된 응집된 형태로 존재함을 의미한다. 소정 실시형태들에서, 허용가능한 정도의 안정성은 주어진 온도에서 정의된 양의 시간 동안의 보관 후 최대 약 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1%의 항체가 상기 제형 내에서 응집체로 검출될 수 있음을 의미한다. 정의된 양의 시간 후 안정성이 측정되는 정의된 양의 시간은 적어도 2주, 적어도 28일, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 적어도 24개월 또는 그 이상일 수 있다. 안정성을 평가할 때에 약제학적 제형이 보관될 수 있는 온도는 약 -80℃ 내지 약 45℃의 임의의 온도, 예를 들면, 약 -80℃, 약 -30℃, 약 -20℃, 약 0℃, 약 4 내지 8℃, 약 5℃, 약 25℃, 약 35℃, 약 37℃ 또는 약 45℃에서의 보관일 수 있다. 예를 들면, 약제학적 제형은 5℃에서 9개월의 보관 후 약 2%, 1.75%, 1.5%. 1.25%, 1%, 0.75%, 0.5%, 0.25% 또는 0.1% 미만의 항체가 응집된 형태로 검출되는 경우에 안정한 것으로 간주될 수 있다. 또한, 약제학적 제형은 25℃에서 6개월의 보관 후 약 2%, 1.75%, 1.5%, 1.25%, 1%, 0.75%, 0.5%, 0.25% 또는 0.1% 미만의 항체가 응집된 형태로 검출되는 경우에 안정한 것으로 간주될 수 있다. 또한, 약제학적 제형은 45℃에서 28일의 보관 후 약 4%, 3.5%, 3%, 2.5%, 2%, 1.5%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만의 항체가 응집된 형태로 검출되는 경우에 안정한 것으로 간주될 수 있다. 또한, 약제학적 제형은 -20℃, -30℃ 또는 -80℃에서 3개월의 보관 후 약 2%, 1.9%, 1.8%. 1.7%, 1.6%, 1.5%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만의 항체가 응집된 형태로 검출되는 경우에 안정한 것으로 간주될 수 있다.

안정성은 그 중에서도 항체의 주요 분획("주요 전하 형태")에서보다 이온 교환 동안 더 산성인 분획("산성 형태")으로 이동하는 항체의 백분율을 측정함으로써 측정될 수 있고, 여기서, 안정성은 산성 형태의 항체 분획에 반비례한다. 이론에 얽매이지 않으면서, 항체의 탈아미드화는 상기 항체를 보다 음으로 하전되게 하고, 따라서, 비-탈아미드화된 항체에 비하여 더 산성이 되게 할 수 있다(예를 들면, 문헌[Robinson, N., Protein Deamidation, PNAS, April 16, 2002, 99(8):5283-5288]을 참조한다). "산성화된" 항체의 백분율은 이온 교환 크로마토그래피(예를 들면, 양이온 교환 고성능 액체 크로마토그래피[CEX-HPLC])에 의해 측정될 수 있다. 본원에서 사용되는 어구 "허용가능한 정도의 안정성"은 정의된 온도에서 정의된 양의 시간 동안의 보관 후 최대 52%의 항체가 상기 제형에서 검출된 보다 산성인 형태로 존재함을 의미한다. 소정 실시형태들에서, 허용가능한 정도의 안정성은 주어진 온도에서 정의된 양의 시간 동안의 보관 후 최대 약 52%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 29%, 28%, 27%, 26%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1%의 항체가 상기 제형에서 산성 형태로 검출될 수 있음을 의미한다. 정의된 양의 시간 후 안정성이 측정되는 정의된 양의 시간은 적어도 2주, 적어도 28일, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 적어도 24개월 또는 그 이상일 수 있다. 안정성을 평가할 때 약제학적 제형이 보관될 수 있는 온도는 약 -80℃ 내지 약 45℃의 임의의 온도, 예를 들면, 약 -80℃, 약 -30℃, 약 -20℃, 약 0℃, 약 4 내지 8℃, 약 5℃, 약 25℃ 또는 약 45℃에서의 보관일 수 있다. 예를 들면, 약제학적 제형은 -80℃, -30℃, 또는 -20℃에서의 3개월의 보관 후 약 29%, 28%, 27%, 26%, 25%, 24%, 23%, 22%, 21%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만의 항체가 보다 산성인 형태로 존재하는 경우 안정한 것으로 간주될 수 있다. 또한, 약제학적 제형은 5℃에서의 9개월의 보관 후 약 28%, 27%, 26%, 25%, 24%, 23%, 22%, 21%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만의 항체가 보다 산성인 형태로 존재하는 경우 안정한 것으로 간주될 수 있다. 또한, 약제학적 제형은 25℃에서의 28일의 보관 후 약 30%, 29%, 28%, 27%, 26%, 25%, 24%, 23%, 22%, 21%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만의 항체가 보다 산성인 형태로 존재하는 경우 안정한 것으로 간주될 수 있다. 또한, 약제학적 제형은 25℃에서의 28일의 보관 후 약 30%, 29%, 28%, 27%, 26%, 25%, 24%, 23%, 22%, 21%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만의 항체가 보다 산성인 형태로 존재하는 경우 안정한 것으로 간주될 수 있다. 또한, 약제학적 제형은 37℃에서의 28일의 보관 후 약 37%, 36%, 35%, 34%, 33%, 32%, 31%, 30%, 29%, 28%, 27%, 26%, 25%, 24%, 23%, 22%, 21%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만의 항체가 보다 산성인 형태로 존재하는 경우 안정한 것으로 간주될 수 있다. 또한, 약제학적 제형은 45℃에서의 28일의 보관 후 약 52%, 51%, 50%, 49%, 48%, 47%, 46%, 45%, 44%, 43%, 42%, 41%, 40%, 39%, 38%, 37%, 36%, 35%, 34%, 33%, 32%, 31%, 30%, 29%, 28%, 27%, 26%, 25%, 24%, 23%, 22%, 21%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만의 항체가 보다 산성인 형태로 검출될 수 있는 경우 안정한 것으로 간주될 수 있다.

또한, 항체의 표적에 대한 항체의 결합 친화도를 측정하는 것을 이용하여 안정성을 평가할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 제형은 -80℃, -30℃, -20℃, 5℃, 25℃, 37℃, 45℃ 등에서 정의된 양의 시간(예를 들면, 14일 내지 6개월) 동안의 보관 후, 상기 제형 내에 함유된 항-Ang-2 항체가, 상기 보관 전의 항체의 결합 친화도의 적어도 84%, 90%, 95% 또는 그 이상인 친화도로 Ang-2에 결합하는 경우 안정한 것으로 간주될 수 있다. 결합 친화도는 임의의 방법, 예를 들면, ELISA 또는 플라스몬 공명과 같은 임의의 방법에 의해 측정할 수 있다. 생물학적 활성은 Ang-2 활성 검정에 의해, 예를 들면, Ang-2를 발현하는 세포를 항 Ang-2 항체를 포함하는 제형과 접촉시킴으로써 측정할 수 있다. 이러한 세포에 대한 항체의 결합은 FACS 분석을 통해 직접 측정할 수 있다. 대안으로, Ang-2 시스템의 다운스트림 활성은 항체의 존재시에 측정하여, 항체의 부재시의 Ang-2 시스템의 활성과 비교할 수 있다. 몇몇의 실시형태들에서, Ang-2는 세포에 대해 내인성(endogenous)일 수 있다. 다른 실시형태들에서, Ang-2는 세포에서 이소성 발현(즉, 이종 발현)될 수 있다.

제형에서의 항체의 안정성을 평가하는 추가의 방법들은 하기 제시된 실시예에서 입증된다.

컨테이너 및 투여 방법

각종 전달 시스템들이 공지되어 있고, 이들은 본 발명의 약제학적 조성물을 투여하기 위해 사용할 수 있고, 예를 들면, 리포솜 내의 캡슐화, 미립자, 미세캡슐, 돌연변이체 바이러스를 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체 매개된 세포내이입(endocytosis)이다(예를 들면, 문헌[Wu et al., 1987, J. Biol. Chem. 262: 4429-4432]을 참조한다). 투여 방법으로는 피부내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비내, 경막외 및 경구 경로가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 조성물(들)은 임의의 편리한 경로에 의해, 예를 들면, 주입 또는 볼루스(bolus) 주사에 의해, 상피 또는 점막 내벽(예를 들면, 구강 점막, 직장 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여할 수 있고, 다른 생물학적 활성 제제와 함께 투여할 수 있다.

안 장애의 치료를 위해, 본 발명의 약제학적 조성물은 예를 들면, 점안제, 결막하 주사, 결막하 이식물(implant), 유리체내 주사, 유리체내 이식물, 서브-테논(sub-Tenon) 주사 또는 서브-테논 이식물에 의해 투여될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 표준 니들 및 시린지로 피하 또는 정맥내 전달될 수 있다. 또한, 피하 전달에 관해서, 본 발명의 약제학적 조성물을 전달하는데 있어서 펜 전달 장치가 용이한 적용을 갖는다. 이러한 펜 전달 장치는 재사용할 수 있거나 일회용일 수 있다. 재사용할 수 있는 펜 전달 장치는 일반적으로 약제학적 조성물을 함유하는 교체가능한 카트리지를 이용한다. 일단 카트리지 내의 약제학적 조성물이 전부 투여되어 카트리지가 비워지면, 빈 카트리지는 쉽게 폐기할 수 있고, 약제학적 조성물을 함유하는 새로운 카트리지로 교체할 수 있다. 이어서, 펜 전달 장치를 재사용할 수 있다. 일회용 펜 전달 장치에서는 교체가능한 카트리지가 없다. 반대로, 일회용 펜 전달 장치는 장치 내의 저장소에 보관된 약제학적 조성물이 사전 충전된다. 일단 저장소의 약제학적 조성물이 비워지면, 전체 장치를 폐기한다.

소정 상황에서, 약제학적 조성물은 제어된 방출 시스템으로 전달할 수 있다. 한 실시형태에서, 펌프를 사용할 수 있다. 다른 실시형태에서, 중합체성 재료를 사용할 수 있고; 문헌[Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida]을 참조한다. 또 다른 실시형태에서, 제어된 방출 시스템은 조성물의 표적 부근에 위치될 수 있고, 따라서 전신 용량의 분획만이 요구될 수 있다(예를 들면, 문헌[Goodson, 1984, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138]을 참조한다). 다른 제어된 방출 시스템은 문헌[Langer, 1990, Science 249:1527-1533]의 검토에서 논의된다.

주사가능한 조제는 정맥내, 피하, 피내 및 근육내 주사, 점적 주입 등을 위한 투여형을 포함할 수 있다. 이들 주사가능한 조제는 공지의 방법에 의해 조제될 수 있다. 예를 들면, 주사가능한 조제는 예를 들면, 종래 주사를 위해 사용되는 멸균 수성 매질 또는 유성 매질 중에 상기 기술된 항체 또는 이의 염을 현탁시키거나 유화시킴으로써 조제될 수 있다. 주사용 수성 매질로서, 예를 들면, 생리학적 염수, 글루코스 및 기타 보조제 등을 함유하는 등장성 용액이 있고, 이는 적절한 가용화제, 예를 들면, 알콜(예를 들면, 에탄올), 폴리알콜(예를 들면, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜), 비이온성 계면활성제[예를 들면, 폴리소르베이트 80, HCO-50(수소첨가된 피마자유의 폴리옥시에틸렌(50mol) 부가물)] 등과 병용하여 사용할 수 있다. 유성 매질로서, 예를 들면, 참깨유, 대두유 등이 사용될 수 있고, 이는 가용화제, 예를 들면, 벤질 벤조에이트, 벤질 알콜 등과 병용하여 사용될 수 있다. 이로써 조제된 주사는 적절한 앰플에 충전되는 것이 바람직하다.

유리하게, 경구 또는 비경구 용도의 약제학적 조성물은 활성 성분의 용량에 맞추어 적합한 단위 용량의 투여형으로 조제한다. 이러한 단위 용량의 투여형으로는 예를 들면, 정제, 환제, 캡슐제, 주사제(앰플), 좌제 등이 포함된다.

본 발명의 약제학적 제형은 의약 및 다른 치료학적 조성물의 보관 또는 투여에 적합한 임의의 컨테이너 내에 함유될 수 있다. 예를 들면, 약제학적 제형은 정의된 체적을 갖는 밀봉 및 멸균된 플라스틱 또는 유리 컨테이너, 예를 들면, 바이알, 앰플, 시린지, 카트리지, 보틀 또는 IV 백 내에 함유될 수 있다. 예를 들면, 투명 및 불투명(예를 들면, 갈색) 유리 또는 플라스틱 바이알을 포함하는 상이한 유형의 바이알을 사용하여 본 발명의 제형을 함유할 수 있다. 유사하게, 임의의 유형의 시린지를 사용하여 본 발명의 약제학적 제형을 함유하거나 투여할 수 있다.

본 발명의 약제학적 제형은 "표준 텅스텐" 시린지 또는 "저 텅스텐" 시린지 내에 함유될 수 있다. 당해 분야 숙련가에 의해 이해될 것인 바와 같이, 유리 시린지의 제조 프로세스는 일반적으로 유리를 관통하는 기능을 함으로써 구멍으로부터 액체가 흘러나와 시린지로부터 방출되는 구멍을 생성하는 뜨거운 텅스텐 막대의 사용을 포함한다. 이러한 프로세스는 시린지 내부 표면 상의 미량의 텅스텐 침전을 초래한다. 후속적 세척 및 다른 프로세싱 단계를 사용하여 시린지 내의 텅스테의 양을 감소시킬 수 있다. 본원에 사용되는 용어 "표준 텅스텐"은 시린지가 500 백만분율 이상의 텅스텐을 함유함을 의미한다. 용어 "저 텅스텐"은 시린지가 500ppb 미만의 텅스텐을 함유함을 의미한다. 예를 들면, 본 발명에 따른 저 텅스텐 시린지는 약 490, 480, 470, 460, 450, 440, 430, 420, 410, 390, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10ppb 미만 또는 그 이하의 텅스텐을 함유할 수 있다.

시린지에 사용되는 고무 플런저 및 바이알의 개구를 닫는데 사용되는 고무 스토퍼는 시린지 또는 바이알의 의약 내용물의 오염을 방지하기 위해 또는 이들의 안정성을 보존하기 위해서 코팅될 수 있다. 따라서, 소정 실시형태들에 따른 본 발명의 약제학적 제형은 코팅된 플런저를 포함하는 시린지 내에 또는 코팅된 고무 스토퍼로 밀봉된 바이알 내에 함유될 수 있다. 예를 들면, 플런저 또는 스토퍼는 플루오로카본 필름으로 코팅될 수 있다. 본 발명의 약제학적 제형을 함유하는 바이알 및 시린지와의 사용에 적합한 코팅된 스토퍼 또는 플런저의 예는 예를 들면, 그 전문이 본원에 인용에 의해 포함되는 U.S. 특허 제4,997,423호; 제5,908,686호; 제6,286,699호; 제6,645,635호; 및 제7,226,554호에 언급된다. 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 특정 예시의 코팅된 고무 스토퍼 및 플런저는 West Pharmaceutical Services, Inc. (Lionville, PA)로부터 입수가능한 상표명 "FluroTec®" 하에 상업적으로 입수가능하다. FluroTec®은 약물 제품이 고무 표면에 부착되는 것을 최소화하거나 방지하는데 사용된 플루오로카본 코팅의 한 예이다.

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 약제학적 제형은 플루오로카톤-코팅된 플런저를 포함하는 저 텅스텐 시린지 내에 함유될 수 있다.

상기 약제학적 제형은 환자에게 비경구 경로, 예를 들면, 주사(예를 들면, 피하, 정맥, 근육내, 복강내 등) 또는 경피, 점막, 비강, 폐 또는 경구 투여에 의해 투여될 수 있다. 다수의 재사용가능한 펜 또는 오토인젝터(autoinjector) 전달 장치가 본 발명의 약제학적 제형을 피하 전달하기 위해 사용될 수 있다. 그 예로는 AUTOPEN™(Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK), DISETRONIC™ 펜(Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Switzerland), HUMALOG MIX 75/25™ 펜, HUMALOG™ 펜, HUMALIN 70/30™ 펜(Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ I, II 및 III(Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), NOVOPEN JUNIOR™(Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), BD™ 펜(Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™, 및 OPTICLIK™(sanofi-aventis, Frankfurt, Germany)가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물의 피하 전달에의 적용을 갖는 일회용 펜 또는 오토인젝터 전달 장치의 예로는 SOLOSTAR™ 펜(sanofi-aventis), FLEXPEN™(Novo Nordisk), 및 KWIKPEN™(Eli Lilly), SURECLICKTM 오토인젝터(Amgen, Thousand Oaks, CA), PENLETTM(Haselmeier, Stuttgart, Germany), EPIPEN(Dey, L.P.), 및 HUMIRATM 펜(Abbott Labs, Abbott Park, IL)이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 약제학적 제형을 전달하기 위한 미세주입기(microinfusor)의 사용은 또한 본원에서 고려된다. 본원에 사용되는 용어 "미세주입기"는 연장된 기간의 시간(예를 들면, 약 10, 15, 20, 25, 30분 또는 그 이상)에 걸쳐 대량의 체적(예를 들면, 약 2.5mL 이상)의 치료학적 제형을 서서히 투여하도록 고안된 피하 전달 장치를 의미한다. 예를 들면, U.S. 6,629,949; US 6,659,982; 및 문헌[Meehan et al., J. Controlled Release 46:107-116 (1996)]을 참조한다. 미세주입기는 고농도(예를 들면, 약 100, 125, 150, 175, 200mg/mL 또는 그 이상) 또는 점성 용액 내에 함유된 대 용량의 치료학적 단백질의 전달에 특히 유용하다.

한 실시형태에서, 상기 약제학적 제형은 IV 드립을 통해 투여되어 상기 제형은 생리학적으로 허용되는 용액을 함유하는 IV 백에서 희석되도록 한다. 한 실시형태에서, 약제학적 조성물은 정맥 주입 백 내의 멸균 조제로 구성되어 약물 제품의 단일 용량이 100mL, 250mL(또는 정맥 드립 전달에 적합한 기타 유사량)의 생리학적 완충액(예를 들면, 0.9% 염수)에 희석되도록 한다. 몇몇의 실시형태들에서, 주입 백은 염화 폴리비닐(예를 들면, VIAFLEX, Baxter, Deerfield, Illinois)로 이루어진다. 몇몇의 실시형태들에서, 주입 백은 폴리올레핀(EXCEL IV 백, Braun Medical Inc., Bethlehem, Pennsylvania)으로 이루어진다.

소정 실시형태들에서, 10mg/mL 내지 120mg/mL의 항-Ang-2 항체를 포함하는 액체 제형은 사전충전된 시린지 내에 포함되고, 대략 100μL 이하의 체적으로 유리체내 투여된다. 소정 실시형태들에서, 10mg/mL 내지 120mg/mL의 항-Ang-2 항체 및 10mg/mL 내지 100mg/mL의 애플리버셉트를 포함하는 액체 제형은 사전충전된 시린지 내에 포함되고, 대략 100μL 이하의 체적으로 유리체내 투여된다. 소정 실시형태들에서, 10mg/mL 내지 120mg/mL의 항-Ang-2 항체 및 10mg/mL 내지 100mg/mL의 애플리버셉트를 포함하는 액체 제형은 사전충전된 시린지 내에 포함되고, 대략 500μL 이하의 체적으로 유리체내 투여된다. 소정 실시형태들에서, 60mg/mL 내지 120mg/mL의 항-Ang-2 항체 및 약 40mg/mL의 애플리버셉트를 포함하는 액체 제형은 사전충전된 시린지 내에 포함되고, 대략 500μL 이하의 체적으로 유리체내 투여된다. 한 실시형태에서, 상기 시린지는 30-게이지의 얇은 벽 니들, 플루오로카본 코팅된 고무 플런저 및 고무 니들 쉴드(shield)가 구비된 2mL의 긴 유리 시린지이다. 한 실시형태에서, 상기 시린지는 30-게이지의 얇은 벽 니들, 플루오로카본 코팅된 고무 플런저 및 고무 니들 쉴드가 구비된 1mL의 긴 유리 시린지이다.

투여 용법

본 발명의 대상체에게 항-Ang-2 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 약 1주마다 4회, 1주마다 2회, 1주마다 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 4주마다 1회, 5주마다 1회, 6주마다 1회, 8주마다 1회, 12주마다 1회의 투약 빈도로 또는 치료학적 반응이 달성되는 한 덜 빈번하게 투여함을 포함하는 방법을 포함한다. 소정 실시형태들에서, 상기 방법은 VEGF 길항제와 병용하여 항-Ang-2 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 약 1주마다 4회, 1주마다 2회, 1주마다 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 4주마다 1회, 5주마다 1회, 6주마다 1회, 8주마다 1회, 9주마다 1회, 12주마다 1회, 또는 치료학적 반응이 달성되는 한 덜 빈번하게 투여하는 것을 포함한다.

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 항-Ang-2 항체의 다중 용량은 대상체에게 정의된 시간 과정에 걸쳐 투여될 수 있다. 본 발명의 이러한 양상에 따른 방법은 대상체에게 항-Ang-2 항체의 다중 용량을 순차적으로 투여함을 포함한다. 본원에 사용되는 "순차적으로 투여함"은 항-Ang-2 항체의 각각의 용량이 대상체에게 상이한 시점에, 예를 들면, 소정 간격(예를 들면, 시간, 일, 주 또는 개월)만큼 떨어진 다른 날에 투여됨을 의미한다. 본 발명은 환자에게 항-Ang-2 항체의 단일 개시 용량, 이어서, 항-Ang-2 항체의 1회 이상의 2차 용량, 및 이어서 임의로 항-Ang-2 항체의 1회 이상의 3차 용량을 순차적으로 투여함을 포함하는 방법을 포함한다.

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 항-Ang-2 항체 및 VEGF 길항제를 포함하는 공동-제형의 다중 용량은 대상체에게 정의된 시간 과정에 걸쳐 투여될 수 있다. 본 발명의 이러한 양상에 따른 방법은 대상체에게 항-Ang-2 항체 및 VEGF 길항제를 포함하는 공동-제형의 다중 용량을 순차적으로 투여함을 포함한다. 본원에 사용되는 "순차적으로 투여함"은 항-Ang-2 항체의 각각의 용량이 대상체에게 VEGF 길항제와 병용하여 상이한 시점에, 예를 들면, 소정 간격(예를 들면, 시간, 일, 주 또는 개월)만큼 떨어진 다른 날에 투여됨을 의미한다. 본 발명은 환자에게 항-Ang-2 항체 및 VEGF 길항제를 포함하는 공동-제형의 단일 개시 용량, 이어서, 공동-제형화된 항-Ang-2 항체 및 VEGF 길항제의 1회 이상의 2차 용량, 이어서 임의로 공동-제형화된 항-Ang-2 항체 및 VEGF 길항제의 1회 이상의 3차 용량을 순차적으로 투여함을 포함하는 방법을 포함한다.

용어 "개시 용량", "2차 용량" 및 "3차 용량"은 투여의 시간적 순서를 말한다. 따라서, "개시 용량"은 치료 용법을 시작할 때에 투여되는 용량(또한 "기저선 용량"으로서도 나타냄)이고; "2차 용량"은 개시 용량 후 투여되는 용량이고; "3차 용량"은 2차 용량 후 투여되는 용량이다. 개시, 2차 및 3차 용량은 모두 동량의 항-Ang-2 항체(또는 항-Ang-2 항체 및 VEGF 길항제를 포함하는 공동-제형)를 함유할 수 있지만, 일반적으로 투여 빈도의 관점에서 서로 상이할 수 있다. 그러나, 소정 실시형태들에서, 개시, 2차 및/또는 3차 용량에 함유된 양은 치료 과정 동안 서로 다르다(예를 들면, 적절하게 상향 또는 하향 조정된다). 소정 실시형태들에서, 1회 이상(예를 들면, 1, 2, 3, 4 또는 5회)의 용량이 치료 용법을 시작할 때에 "부하 용량(loading dose)"로서 투여되고, 이어서, 덜 빈번한 기준으로 투여되는 후속적 용량(예를 들면, "유지 용량(maintenance dose)")이 투여된다. 예를 들면, 항-Ang-2 항체(또는 항-Ang-2 항체 및 VEGF 길항제를 포함하는 공동-제형)는 안 질환 또는 장애를 갖는 환자에게 약 6mg의 부하 용량으로, 이어서, 약 0.5mg 내지 약 10mg의 1회 이상의 유지 용량으로 투여될 수 있다.

본 발명의 한 예시적 실시형태에서, 각각의 2차 및/또는 3차 용량은 직전 용량의 1 내지 14(예를 들면, 1, 1½, 2, 2½, 3, 3½, 4, 4½, 5, 5½, 6, 6½, 7, 7½, 8, 8½, 9, 9½, 10, 10½, 11, 11½, 12, 12½, 13, 13½, 14, 14½, 또는 그 이상)주 후에 투여된다. 본원에 사용되는 어구 "직전 용량"은 다중 투여의 순서에 있어서 개재(intervening) 용량이 없는 순서에서 바로 다음 용량의 투여 전에 환자에게 투여되는 항-Ang-2 항체(또는 항-Ang-2 항체 및 VEGF 길항제를 포함하는 공동-제형)의 용량을 의미한다.

본 발명의 이러한 양상에 따른 방법은 환자에게 항-Ang-2 항체(또는 항-Ang-2 항체 및 VEGF 길항제를 포함하는 공동-제형)의 임의의 수의 2차 및/또는 3차 용량을 투여함을 포함할 수 있다. 예를 들면, 소정 실시형태들에서, 단지 단일 2차 용량만이 환자에게 투여된다. 다른 실시형태들에서, 2회 이상(예를 들면, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8회 또는 그 이상)의 2차 용량이 환자에게 투여된다. 유사하게, 소정 실시형태들에서, 단지 단일 3차 용량만이 환자에게 투여된다. 다른 실시형태들에서, 2회 이상(예를 들면, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8회 또는 그 이상)의 3차 용량이 환자에게 투여된다.

다중 2차 용량을 포함하는 실시형태들에서, 각각의 2차 용량은 다른 2차 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 각각의 2차 용량은 환자에게 직전 용량의 1 내지 2주 후에 투여될 수 있다. 유사하게, 다중 3차 용량을 포함하는 실시형태들에서, 각각의 3차 용량은 다른 3차 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 각각의 3차 용량은 환자에게 직전 용량의 2 내지 4주 후에 투여될 수 있다. 대안으로, 2차 및/또는 3차 용량이 환자에게 투여되는 빈도는 치료 용법의 과정에 걸쳐 다를 수 있다. 또한, 투여 빈도는 또한 치료 과정 동안 임상학적 검사 후 개별 환자의 요구에 따라 의사가 조정할 수 있다.

본 발명은 DME 또는 AMD를 치료하기 위해 환자에게 항-Ang-2 항체를 VEGF 길항제와 병용하여 순차적으로 투여함을 포함하는 방법을 포함한다. 몇몇의 실시형태들에서, 본 발명의 방법은 항-Ang-2 항체의 1회 이상의 용량, 이어서, VEGF 길항제의 1회 이상의 용량을 투여함을 포함한다. 소정 실시형태들에서, 본 발명의 방법은 VEGF 길항제의 단일 용량, 이어서, 항-Ang-2 항체의 1회 이상의 용량을 투여함을 포함한다. 몇몇의 실시형태들에서, 약 0.05mg 내지 약 2mg의 VEGF 길항제의 1회 이상의 용량이 투여되고, 이어서, 약 0.05mg 내지 약 10mg의 Ang-2 억제제의 1회 이상의 용량이 투여될 수 있다. 한 실시형태에서, DME 또는 AMD(예를 들면, 혈관신생 억제)와 관련된 하나 이상의 병태를 치료하거나, 경감시키거나, 감소시키거나 또는 개선하기 위해, 대상체의 체중 kg당 약 1mg 내지 약 15mg의 항-Ang-2 항체의 1회 이상을 용량이 투여될 수 있고, 그 후 VEGF 길항제의 1회 이상의 용량이 투여될 수 있다. 몇몇의 실시형태들에서, 항-Ang-2 항체는 1회 이상의 용량으로 투여되어 하나 이상의 파라미터(예를 들면, 망막 비후, 시력)의 개선을 초래하고, 이어서, VEGF 길항제(예를 들면, 애플리버셉트)를 투여하여 재발을 예방하거나 추가의 활성을 갖도록 한다. 본 발명의 대안의 실시형태들은 항-Ang-2 항체 및 VEGF r길항제의 동시적 투여에 관한 것이고, 이는 항-Ang-2 항체에 비해 유사하거나 상이한 빈도로 별개의 용량으로 투여된다. 몇몇의 실시형태들에서, 상기 VEGF 길항제는 항-Ang-2 항체의 전에, 항-Ang-2 항체의 후에, 또는 항-Ang-2 항체와 동시에 투여된다. 소정 실시형태들에서, VEGF 길항제는 항-Ang-2 항체와의 단일 용량 제형으로서 투여된다.

용량

본 발명의 방법에 따라 대상체에게 투여된 Ang-2 억제제(예를 들면, 항-Ang-2 항체)의 양은 일반적으로 치료학적 유효량이다. 본원에서 사용되는 어구 "치료학적 유효량"은 하기 중 하나 이상을 초래하는 Ang-2 억제제의 양을 의미한다: (a) 망막 혈관 유출의 중증도 감소; (b) 망막 또는 맥락막 혈관신생 영역의 감소; (c) 중심성 망막 비후의 변화; (d) 눈에서의 혈관 유출 저지의 지속기간의 증가; 및 (e) 혈관신생과 관련된 안 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서의 유리체내 주사 수의 감소.

항-Ang-2 항체의 경우, 치료학적 유효량은 약 0.05mg 내지 약 100mg, 예를 들면, 약 0.05mg, 약 0.1mg, 약 1.0mg, 약 1.5mg, 약 2.0mg, 약 10mg, 약 20mg, 약 30mg, 약 40mg, 약 50mg, 약 60mg, 약 70mg, 약 80mg, 약 90mg, 또는 약 100mg의 항-Ang-2 항체일 수 있다. 소정 실시형태들에서, 0.5mg, 1.0mg, 3.0mg 또는 6.0mg의 항-Ang-2 항체가 투여된다.

개별 용량 내에 함유된 Ang-2 억제제의 양은 환자 체중 kg당 항체 mg의 단위(즉, mg/kg)로 표현될 수 있다. 예를 들면, Ang-2 억제제는 환자에게 환자 체중 kg당 약 0.0001 내지 약 100mg의 용량으로 투여될 수 있다.

소정 실시형태들에서, 0.5mg, 1.0mg, 3.0mg 또는 6.0mg의 항-Ang-2 항체는 0.05mg 내지 약 10mg의 VEGF 길항제(예를 들면, 애플리버셉트)와 병용하여 투여된다.

실시예

하기 실시예는 당해 분야 숙련가들에게 본 발명의 방법 및 조성물을 제조하고 사용하는 방법의 완전한 개시 및 상세한 설명을 제공하기 위해 제시되고, 본 발명자들이 이들의 발명으로서 간주하는 것의 범위를 한정하도록 의도되지 않는다. 사용된 수(예를 들면, 양, 온도 등)에 관한 정확성을 확보하기 위한 노력이 이루어졌지만, 소정의 실험적 오차 및 편차는 고려되어야만 한다. 달리 나타내지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이고, 온도는 ℃이고, 압력은 대기압이거나 대기압 부근이다.

실시예 1: 마우스에서의 혈관신생 발병에 대한 애플리버셉트( VEGF 트랩) 및 항-Ang2 항체를 이용한 VEGF 및 Ang2의 병용 억제 효과

도입: VEGF는 정상 및 병리학적 혈관신생에서의 혈관신생의 주요 조절인자이다. 그러나, 다른 성장 인자도 혈관신생에 관여하고, 항-VEGF 치료요법에 대한 혈관 내성을 매개할 수 있다. 안지오포이에틴-2(Ang-2)는 맥락-의존적(context-dependent) 방식으로 각종 환경에서의 혈관 성장 및 퇴행에 관여하는 것으로 밝혀졌다. 이러한 연구에서, 본 발명자들은 애플리버셉트만을 사용하여 그리고 항-Ang-2 항체와 Ang2 억제를 병용하여 정상 망막 혈관 발달(RVD) 모델에서 혈관 성장 및 퇴행에 대한 VEGF 차단 효과를 시험하였다.

사람 항-Ang-2 항체는 US 특허 출원 공개 제US20110027286호에 기술된 바와 같이 생성되었다. 본 실시예 및 하기 실시예들에서 사용되는 예시의 항-Ang-2 항체는 서열번호 1/2의 HCVR/LCVR을 갖는 H1H685로서 명명된 사람 항-Ang-2 항체(본원에서 "mAb1"로서도 나타냄)이다.

제1 실험에서, 항-Ang-2 항체는 단독으로 또는 애플리버셉트와 병용하여 유리체내 투여되었다.

방법: 정상 C57Bl/6 마우스 새끼를 출생 4일(P4) 내지 P6 후에 애플리버셉트 및 항-Ang2 항체를 이용하여 개별적으로 또는 병용하여 치료하였다. P4일에 새끼에게 5㎍의 대조군 단백질(hFc), 5㎍의 mAb1(항-Ang2 항체) 또는 1.25㎍의 애플리버셉트를 단일 제제로서 또는 애플리버셉트 및 mAb1 둘 다의 혼합물로서 IVT 주사하였다. 새끼는 P6일에 인도적으로 안락사시켰고, 눈을 제거하여 4% 파라포름알데하이드에 고정화였다. 이어서, 망막을 절개하였고, FITC 표지된 GS 렉틴 I으로 (혈관 내피 세포에 대해) 염색하였다.

결과: P4를 mAb1을 이용한 치료 시작점으로서 선택하여 RVD에 대한 Ang2 및/또는 VEGF 억제의 효과를 평가하였다. mAb1 또는 애플리버셉트의 투여는 hFc 치료된 대조군에 비하여 표피의 망막 혈관구조 성장을 감소시켰다. 구체적으로, mAb1 및 애플리버셉트는 hFc 대조군에 비하여 망막의 평균 혈관구조화된 영역을 각각 17% 및 36%로 감소시켰고, 한편, mAb1 및 애플리버셉트 둘 다를 이용한 병용 치료는 혈관 영역을 72%만큼 감소시켰고, 이는 (P4에서의 망막 혈관 영역과 비교하여) 치료 기간에 걸친 망막 혈관 발달의 완전한 정지를 나타낸다. mAb1 및 애플리버셉트는 또한 hFc 대조군과 비교하여 평균 혈관 길이를 각각 23% 및 22% 감소시켰다. mAb1 및 애플리버셉트를 이용한 병용 치료는 유의한 상승작용 효과를 가졌고, 이는 총 혈관 길이의 77%의 현저한 감소를 유도하였다. 총 혈관 길이는 심지어 P4 망막과 비교하여 병용 치료된 샘플에서 25% 더 작았다.

제2 실험에서, 이용된 mAb1(25mg/kg, 피하[SC]) 및 애플리버셉트(25mg/kg, SC)의 용량은 각각의 약물이 단일 제제로서 사용된 경우 망막 혈관신생의 최대 저지를 수득하는데 요구되는 최소 용량을 초과하였다. P3에 대한 mAb1 또는 애플리버셉트 중 어느 하나의 투여는 hFc 대조군에 비하여 P6에서 측정된 망막의 평균 혈관구조화된 영역을 각각 36% 및 42%만큼 유의하게 감소시켰다. 또한, 상기 망막의 평균 혈관구조화된 영역은 어느 한 제제 단독으로 치료된 동물과 비교하여 mAb1 및 애플리버셉트 둘 다를 이용하여 치료된 동물에서 유의하게 더 작았고, 68% 감소되었으며, 이는 치료 기간에 걸친 망막 혈관 발달의 거의 완전한 정지를 나타낸다.

결론: Ang2 및 VEGF-A의 병용된 약리학적 억제는 Ang2 또는 VEGF-A 차단제 단독 투여보다 발달성 망막 혈관신생에 대해 더 큰 효과를 가져, Ang2 및 VEGf-A 둘 다의 억제는 치료 기간 동안 망막 혈관 발달의 거의 완전한 정지 및 P4에서의 초기 치료 병태에 비하여 부분적 혈관 퇴행을 초래하게 되었다.

실시예 2: 토끼 눈에서의 DL-알파- 아미노아디프산 (DL-알파-AAA)-유도된 망막 혈관신생(RNV)에 대한 공동-제형화된 mAb1 및 애플리버셉트의 IVT 주사의 효과

신경아교세포 독소 DL-알파-AAA는 망막 뮬러(Muller) 세포와 성상세포를 표적으로 하고, 혈관신생 및 적어도 12개월 지속되는 만성 혈관 누출을 유도한다(Kato et al 1993, Neuroscience 57: 473). 본 연구의 목적은 DL-알파-AAA에 의해 유도된 RNV에 대한 공동-제형화된 항-Ang2 및 애플리버셉트의 IVT 주사의 효과를 평가하는 것이었다.

방법: 수컷 뉴질랜드 흰 토끼(> 2kg 체중)에게 RNV를 유도하기 위해 DL-알파-AAA를 단일 유리체내 주사로 치료하였다. 유출을 모니터링하였고 플루오레세인 혈관조영술(FA)을 사용하여 비-침습적으로 정량되었다. 병리학적 혈관구조 및 상대적으로 변하지 않는 유출 영역이 주사 후 13주에 걸쳐 확립되었다. 질환이 확립되면, 대상체는 하기에 나타낸 바와 같이 치료를 위해 3개의 그룹으로 나누었다:

그룹 I: 125㎍/50㎕의 애플리버셉트 IVT

그룹 II: 500㎍/50㎕의 mAb1 IVT

그룹 III: 공동-제형화된 125㎍ 애플리버셉트 및 500㎍ mAb1/50㎕, IVT

치료 그룹들의 균형을 맞추기 위해 제1 치료 전에 기저선 실험을 수행하였다. 후속 실험은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 및 8주 후-IVT 치료에 대해 수행하였다. 플루오레세인 혈관 조영술(FA) 분석 후 Adobe Photoshop을 사용하여 유출 영역을 정량화하였다. 형광성 제제를 정맥내 투여하여 혈관 유출을 모니터링하였고, 광파를 사용하는 광학적 간섭 단층촬영법을 사용하여 망막 구조를 모니터링하였다.

결과: 도 1에 나타낸 바와 같이, 유출은 애플리버셉트-치료된 대상체에서 3주째에 유출이 다시 시작되는 것으로 밝혀졌지만, mAb1 및 애플리버셉트로 치료된 대상체에서는 유출 영역이 8주째까지 변하지 않았다. 애플리버셉트 및 mAb1의 공동-치료는 애플리버셉트 단독의 단일 IVT 주입과 비교하여 항-유출 효과의 지속기간을 유의하게 3배까지 향상시킬 수 있다.

실시예 3: 토끼 눈에서의 DL-AAA 유도된 망막 혈관신생 유출에 대한 mAb1 단독의 전신 투여 또는 VEGF 트랩-눈 IVT와의 공동-치료

본 연구의 목적은 DL-알파-AAA에 의해 유도된 RNV에 대한 항-Ang2 항체 및 애플리버셉트의 공동-치료 효과를 평가하는 것이었고, 여기서, 애플리버셉트의 유리체내 투여에 mAb1의 전신 투여가 이어졌다. 이러한 연구의 이론적 근거는 애플리버셉트의 초기 IVT 주사로 장기간에 걸쳐 유출 억제를 저지를 시도하고 유지하고 항-Ang 2 항체의 2주(q2w)마다 1회의 전신 주사로의 후속조치(follow up)하는 것이었다.

실시예 2에 개시된 바와 같이, DL-알파-AAA의 단일 유리체내 주사로 수컷 뉴질랜드 토끼에서 망막 혈관신생을 유도하였다. 유도 10주 후에 안정한 망막 혈관신생 및 혈관 유출이 확립되었다. 질환 확립 10주 후, 대상체를 균형잡힌 유출 중증도를 갖는 4개의 그룹으로 나누었고, 치료제를 하기에 나타낸 바와 같이 투여하였다:

그룹 1: 대조군 42㎍/50㎕, IVT 및 대조군 5mg/kg, IV, q2w

그룹 2: 대조군 42㎍/50㎕, IVT 및 mAb1(항-Ang2 ab) 15mg/kg, IV, q2w

그룹 3: 애플리버셉트 125㎍/50㎕, IVT 및 대조군 5mg/kg, IV, q2w

그룹 4: 애플리버셉트 125㎍/50㎕, IVT 및 mAb1(a-Ang2) 15mg/kg, IV, q2w

플루오레세인 혈관 조영술(FA)에 의한 유출 영역의 분석; 1차 치료 전의 기저선 플루오레세인 혈관 조영술(FA) 및 OCT(광학 간섭 단층촬영법); IV 치료 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 및 14주 후에 FA 및 OCT 후속 조치

도 2에 나타낸 바와 같이, 애플리버셉트-치료된 눈에서는 2주 내에 유출이 존재하지 않았다. 유출은 애플리버셉트 치료 단독을 이용하여 4주째에 다시 시작되는 것으로 밝혀졌다. 그러나, 애플리버셉트 및 mAb1의 병용으로 치료된 대상체에서는 10주째까지 유출이 존재하지 않았다. 공동-치료된 대상체에서 유출의 처음 재시작(return)은 12주에 나타났다.

실시예 4: 토끼 눈에서의 DL-알파-AAA 유도된 RNV 및 혈관 유출에 대한 애플 리버셉트의 IVT 주사

이러한 연구는 토끼 눈에서의 DL-알파-AAA 유도된 망막 혈관신생(RNV) 및 혈관 유출에 대한 IVT 애플리셉트 단독 치료요법의 효과에 대한 용량-범위 연구이다. 실시예 2에 개시된 바와 같이, DL-알파-AAA를 사용하여 토끼의 눈에서 RNV를 유도하였다. RNV 및 혈관 유출의 확립시, 대상체를 애플리버셉트(50mcg, 125mcg, 250mcg, 및 500mcg)의 4개 용량으로 치료하였다. 망막 혈관 유출은 IVT-후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10 및 12주째에 후속조치 시점에서 FA(본 명세서의 다른 곳에서 개시됨)에 의해 모니터링 및 정량되었다.

치료 부재 하에, FA는 망막 NV 및 혈관 유출이 10주 내지 22주에 일정하게 유지됨을 보여주었다. 표 1은 치료 후 유출 재발의 평균 시간을 보여주고, 여기서, "제1 유출 재발" = 완전 재발이 아닌 임의의 유출의 재발에 관한 시간이다.

500mcg의 애플리버셉트는 1주 이내에 망막 NV 유출을 차단하였고, 치료 후 12주까지는 유출이 재개되지 않았다. 따라서, 애플리버셉트 치료는 혈관 유출의 저지 및 혈관신생의 부분적 퇴행을 유도한다. 혈관 유출은 재발생하지만 저지의 기간은 용량에 의존적이다.

실시예 5: 항- Ang -2 항체의 전신 투여는 래트에서의 Matrigel -유도된 맥락막 혈관신생(CNV)을 억제한다

도입: Ang2는 티로신 키나제 수용체 Tie-2에 대한 리간드이고, 다양한 생리학적 및 병태생리학적 조건에서 혈관을 발달시키는 혈관 내피에서 그리고 활성 성장 또는 재형성(remodeling)을 경험하는 혈관에서 광범위하게 발현된다. mAb1은 Ang-2에 대한 사람 모노클로날 중화 항체이다. 당해 연구는 맥락막 혈관신생(CNV)의 래트 모델을 이용하여 CNV에 대한 Ang-2의 mAb1-매개된 약리학적 억제의 억제 효과를 평가하였다.

방법: CNV는 0일째에 Matrigel의 망막하 주사에 의해 스프라그 돌리(Sprague Dawley)(SD) 래트에서 유도되었다. 한 그룹의 동물(동물: N = 4-6, 눈: N = 8-12)을 이용하여 기저선을 확립하였고 CNV 유도 후 10일째에 동물들에 염료 [1,1'-디옥타데실 -3,3,3',3'-테트라메틸린도카보시아닌 퍼클로레이트(DiI)]를 관류시켜 혈관을 염색하였다. 다른 동물을 2개의 그룹(동물: N = 5-6, 눈: 각각의 그룹에서 N = 10-12)으로 나누었고, 각각 10, 13 및 16일째에 25mg/kg의 mAb1 또는 mAb1에 대해 동량으로의 6.5mg/kg의 hFc의 피하 주사에 의한 차폐된(masked) 용액으로 치료하였고, 이어서, 20일째에 혈관을 염색하기 위해 DiI로 관류시켰다. 하기 식을 이용하여 전체 병변에 걸친 망막하 병변 및 CNV 혈관 체적을 50㎛ 단면으로부터 정량하였다:

여기서, V: 전체 병변 체적;

T: 절편 두께;

A: 각각의 절편 상의 병변 또는 혈관 영역

2개의 동일한 실험으로부터의 결과를 3개의 그룹 사이의 병변 체적, 혈관 체적 및 혈관 밀도 비교를 위해 합하였다. 양방향(two-tailed) 스튜던트 t-검정을 사용하여 mAb1 대 대조군으로 치료된 그룹들 사이의 병변 체적, 혈관 체적 및 혈관 밀도의 차이를 비교하였다. 래트 혈청 중의 기능성 mAb1의 농도 및 항-mAb1 항체의 수준을 직접적 효소 링크된 면역흡착 검정법(ELISA)을 사용하여 측정하였다.

결과: SD 래트에의 mAb1(25mg/kg)의 전신 투여는 hFc-치료된 대조군(도 3)과 비교하여 전체 병변 체적 및 혈관 체적의 저지를 생성하였다. 대조군 치료된 그룹에서, 망막하 병변 체적, 신생혈관 체적 및 신생혈관 밀도는 10일째의 기저선에 비하여 각각 20일째에 28.2%, 62.5% 및 28.6%로 증가하였다. mAb1 치료된 그룹은 hFc 치료된 그룹과 비교하여 전체 병변 체적의 26.5% 감소 및 혈관 체적의 26.9% 감소를 보여주었지만, 혈관 밀도는 hFc 치료된 그룹(도 3)과 비교하여 변화되지 않았다. hFc-치료된 대조군과 비교하여, mAb1 치료된 그룹은 전체 병변 체적의 통계학적으로 유의한 감소(스튜던트 t-검정 p=0.0034) 및 신생혈관 체적 감소에 대한 경향(26.9%)을 보여주었지만, 이러한 경향은 통계학적 유의성을 달성하지 않았고(스튜던트 t-검정, p=0.1658), 이는 그룹 내의 편차로 인한 것일 수 있다. 래트 혈청 샘플에서의 기능적 mAb1 및 항-mAb1 항체의 생물분석학적(bioanalytical) 분석은 종료일(20일)에 mAb1-치료된 동물에서 측정가능한 농도의 기능적 mAb1를 504±107㎍/mL의 수준으로 보여주었다(표 2). 개별 항-mAb1 반응은 음성이었다.

결론: SD 래트에서 Matrigel 유도된 CNV에서 Ang2에 대한 중화 사람 모노클로날 항체인 mAb1의 영향을 평가하였다. 그 결과는 mAb1을 이용한 전신(피하) 치료가 래트의 Matrigel 유도된 CNV 병변을 유의하게 억제할 수 있음을 나타낸다. 따라서, 이러한 실시예는 혈관성 안 질환을 치료하기 위한 전신 단일 치료요법으로서 Ang-2 억제제(예를 들면, mAb1)의 사용에 대한 추가적 지지를 제공한다.

실시예 6: 항- Ang -2 항체를 포함하는 제형

제형 개발 활동은 단백질의 안정성을 향상시키는 부형제를 확인하기 위한 항-Ang-2 항체의 액체 제형에서의 완충제, 유기 공동-용매 및 열적 안정화제의 스크리닝을 포함하였다. 또한, 최대 단백질 안정성을 위한 최적의 pH를 결정하기 위해 완충제 조건을 조사하였다. 이들 연구로부터 생성된 결과를 사용하여 임상학적 용도에 적합한 안정한 액체 제형을 개발하였다. 항-Ang-2 항체는 미국 특허 출원 공개 US20110027286에서 H1H685로서 명명되고 서열번호 1/2의 HCVR/LCVR을 갖는 사람 항-Ang-2 항체이다(본원에서 "mAb1"로서도 언급된다).

항-Ang-2 항체를 4개의 농도로 제형화하였다:

(i) 10mg/mL ± 1.5mg/mL,

(ii) 20mg/mL ± 3.0mg/mL,

(iii) 60mg/mL ± 9.0mg/mL, 및

(iv) 120mg/mL ± 18.0mg/mL.

각종 실시형태들에서, 항-Ang-2 항체는 물 중의 10 ± 1.5mM의 인산 나트륨(pH 6.2 ± 0.3), 0.03% ± 0.0045%의 폴리소르베이트 20, 40mM ± 6.0mM의 염화 나트륨, 및 5% ± 0.75%의 슈크로스로 제형화된다.

제형화된 약물 물질 및 약물 제품의 안정성은 하기 검정들을 이용하여 평가하였다:

육안 검사에 의한 색 및 외형; pH; 405nm에서의 광학 밀도의 증가에 의해 측정되는 탁도; 미세유동 영상화(MFI)에 의한 현미경 없이 보이지 않는(subvisible) 미립자 분석; RP-HPLC에 의한 단백질 농도; 크기 배제 초고성능 액체 크로마토그래피(SE-UPLC)에 의한 순도; 환원 및 비-환원 SDS-PAGE; 양이온 교환 UPLC에 의한 하전된 변이체 분석; 생물학적 검정에 의한 효력. 추가의 상세한 설명은 실시예 8에 기술된다.

안정성 연구는 10 mg/mL의 mAb1 및 120mg/mL의 mAb1 FDS의 조사 로트의 보관, 가속화(보관 조건 초과의 온도) 및 스트레스(교반 및 동결 및 해동) 안정성을 측정하기 위해 개시하였다. 이들 조건은 임상학적 DP를 제조하는데 사용된 FDS의 단백질 농도를 포함하도록 선택되었다. 가속화 및 스트레스 조건 하의 FDS의 조사 로트 평가는 FDS에 대해 DP의 제조 동안에 발생할 수 있는 스트레스를 초과하도록 그리고 mAb1 FDS의 분해 경로를 설명하도록 고안된 다양한 시험을 실시함으로써 수행하였다. FDS는 5mL 폴리카보네이트 바이알에 충전하였다.

약물 물질의 조사 안정성은 표 3 및 표 4에 나타낸 바와 같이 연구하였다:

안정성 연구의 결과는 하기 표 5 내지 표 14에 요약된다.

mAb1 약물 제품에 대한 조사 안정성 연구는 표 15 및 표 16에 나타낸 바와 같이 수행하였다:

약물 제품에 대한 안정성 연구의 결과는 표 17 내지 표 22에 요약된다:

안정성 연구의 결과는 하기를 나타냈다:

10mg/mL의 mAb1의 제형화된 약물 물질(FDS)은 -20℃ 이하에서 적어도 12개월 동안 보관하는 경우에 안정하다.

FDS 120mg/mL mAb1은 -20℃ 이하에서 적어도 12개월 동안 보관하는 경우에 안정하다.

FDS 10mg/mL mAb1은 5℃에서의 인큐베이션 56일 후에 물리적으로 그리고 화학적으로 안정하였고, 5℃에서 56일 동안 또는 25℃/60% 상대 습도(RH) 및 40℃/75% RH에서 28일 동안 인큐베이션한 경우에 효력을 유지하였다.

FDS 120mg/mL mAb1은 5℃에서의 인큐베이션 56일 후에 물리적으로 그리고 화학적으로 안정하였고, 5℃에서 56일 동안 또는 25℃/60% 상대 습도(RH) 및 40℃/75% RH에서 28일 동안 인큐베이션한 경우에 효력을 유지하였다.

10mg/mL mAb1 FDS는 120분 동안 교반한 경우(주위 온도에서 와류교반함) 또는 8회의 냉동/해동 사이클을 행한 경우(-30℃에서 냉동하고 실온에서 해동함)에 물리적으로 그리고 화학적으로 안정하였다. 모니터링된 속성들 중 어느 속성에서도 물리적 또는 화학적 안정성의 주목할만한 변화는 존재하지 않았다. mAb1은 10mg/mL mAb1 FDS를 120분 동안 교반한 경우(주위 온도에서 와류교반함) 또는 8회의 냉동/해동 사이클을 행한 경우(-30℃에서 냉동하고 실온에서 해동함)에 효력을 유지하였다.

120mg/mL mAb1 FDS는 120분 동안 교반한 경우(주위 온도에서 와류교반함) 또는 8회의 냉동/해동 사이클을 행한 경우(-30℃에서 냉동하고 실온에서 해동함)에 물리적으로 그리고 화학적으로 안정하였다. 모니터링된 속성들 중 어느 속성에서도 물리적 또는 화학적 안정성의 주목할만한 변화는 존재하지 않았다. mAb1은 120mg/mL mAb1 FDS를 120분 동안 교반한 경우(주위 온도에서 와류교반함) 또는 8회의 냉동/해동 사이클을 행한 경우(-30℃에서 냉동하고 실온에서 해동함)에 효력을 유지하였다.

약물 제품(DP) 10mg/mL mAb1은 2 내지 8℃에서 적어도 9개월 동안 보관한 경우에 안정하다.

DP 120mg/mL mAb1은 2 내지 8℃에서 적어도 9개월 동안 보관한 경우에 안정하다.

실시예 7: 항- Ang -2 항체 및 VEGF 길항제를 포함하는 공동-제형

공동-제형 개발 활동은 단백질의 안정성을 향상시키는 부형제를 확인하기 위한 VEGF 길항제 및 항-Ang-2 항체의 액체 제형에서의 완충제, 유기 공동-용매 및 열적 안정화제의 스크리닝을 포함하였다. 또한, 최대 단백질 안정성을 위한 최적의 pH를 결정하기 위해 완충제 조건을 조사하였다. 이들 연구로부터 생성된 결과를 사용하여 임상학적 용도에 적합한 안정한 액체 공동-제형을 개발하였다. VEGF 길항제는 서열번호 11의 아미노산 27 내지 457로 이루어진 2개의 폴리펩타이드들의 이량체로 이루어진다(본원에서 애플리버셉트로서도 언급됨). 항-Ang-2 항체는 미국 특허 출원 공개 US20110027286에서 H1H685로서 명명되고 서열번호 1/2의 HCVR/LCVR을 갖는 사람 항-Ang-2 항체이다(본원에서 "mAb1"로서도 언급된다). VEGF 길항제는 4개의 농도로 항-Ang-2 항체와 공동-제형화하였다:

(i) 40mg/mL ± 6.0mg/mL의 애플리버셉트와 10mg/mL ± 1.5mg/mL의 mAb1,

(ii) 40mg/mL ± 6.0mg/mL의 애플리버셉트와 20mg/mL ± 3.0mg/mL의 mAb1,

(iii) 40mg/mL ± 6.0mg/mL의 애플리버셉트와 60mg/mL ± 9.0mg/mL의 mAb1, 및

(iv) 40mg/mL ± 6.0mg/mL의 애플리버셉트와 120mg/mL ± 18.0mg/mL의 mAb1.

각종 실시형태들에서, 항-Ang-2 항체 및 VEGF 길항제는 물 중의 10 ± 1.5mM의 인산 나트륨(pH 6.2 ± 0.3), 0.03% ± 0.0045%의 폴리소르베이트 20, 40mM ± 6.0mM의 염화 나트륨, 및 5% ± 0.75%의 슈크로스로 공동-제형화된다.

제형화된 약물 물질 및 약물 제품의 안정성은 본원의 실시예 8에 기술된 검정을 이용하여 평가하였다. 제형화된 약물 물질 및 약물 제품에 대해 영상화된 모세관 등전점 포커싱(iCIEF: imaged capillary isoelectric focusing)을 사용하여 전하 변이체 분석을 수행하였다.

안정성 연구는 10mg/mL:40mg/mL 및 120mg/mL:40mg/mL(mAb1:애플리버셉트) FDS의 조사 로트의 보관, 가속화(보관 조건 초과의 온도) 및 스트레스(교반 및 동결 및 해동) 안정성을 측정하기 위해 개시하였다. 이들 조건은 임상학적 DP를 제조하는데 사용된 FDS의 단백질 농도를 포함하도록 선택되었다. 가속화 및 스트레스 조건 하의 FDS의 조사 로트 평가는 FDS에 대해 DP의 제조 동안에 발생할 수 있는 스트레스를 초과하도록 그리고 mAb1:애플리버셉트 FDS의 분해 경로를 설명하도록 고안된 다양한 시험을 실시함으로써 수행하였다. FDS는 5mL 폴리카보네이트 바이알에 충전하였다.

공동-제형화된 약물 물질에 관한 조사 안정성은 표 23 및 표 24에 나타낸 바와 같이 연구되었다:

공동-제형화된 약물 물질에 관한 안정성 결과는 하기 표 25 내지 표 34에 요약된다:

공동-제형화된 약물 제품의 안정성은 표 35 및 표 36에 나타낸 바와 같이 연구되었다:

공동-제형화된 약물 제품에 관한 안정성 결과는 하기 표 37 내지 표 42에 요약된다.

안정성 연구의 결과는 하기를 나타냈다:

제형화된 약물 물질(FDS) 10:40mg/mL mAb1:애플리버셉트는 -20℃ 이하에서 적어도 12개월 동안 보관하는 경우에 안정하다.

FDS 120:40mg/mL mAb1:애플리버셉트는 -20℃ 이하에서 적어도 12개월 동안 보관하는 경우에 안정하다.

10mg/mL:40mg/mL mAb1:애플리버셉트 FDS는 5℃에서의 인큐베이션 56일 또는 25℃/60% RH에서 인큐베이션 28일 후에 물리적으로 그리고 화학적으로 안정하였다. 모니터링된 속성들 중 어느 속성에서도 물리적 또는 화학적 안정성의 주목할만한 변화는 존재하지 않았다. mAb1 및 애플리버셉트 둘 다는 10mg/mL:40mg/mL FDS를 5℃에서 56일 동안 또는 25℃/60% RH에서 28일 동안 인큐베이션한 경우에 효력을 유지하였다.

120mg/mL:40mg/mL mAb1:애플리버셉트 FDS는 5℃에서의 인큐베이션 56일 후에 물리적으로 그리고 화학적으로 안정하였다. 모니터링된 속성들 중 어느 속성에서도 물리적 또는 화학적 안정성의 주목할만한 변화는 존재하지 않았다. 120mg/mL:40mg/mL mAb1:애플리버셉트 FDS는 25℃/60% RH에서의 인큐베이션 28일 후에 물리적으로 안정하였다. 다른 모니터링된 속성들 중 어느 속성에서도 물리적 또는 화학적 안정성의 주목할만한 변화는 존재하지 않았다. mAb1 및 애플리버셉트 둘 다는 120mg/mL:40mg/mL FDS를 5℃에서 56일 동안 또는 25℃/60% RH에서 28일 동안 인큐베이션한 경우에 효력을 유지하였다.

10mg/mL:40mg/mL mAb1:애플리버셉트 FDS는 120분 동안 교반한 경우(주위 온도에서 와류 교반함) 또는 8회의 냉동/해동 사이클을 행한 경우(-30℃에서 냉동하고 실온에서 해동함)에 물리적으로 그리고 화학적으로 안정하였다. 모니터링된 속성들 중 어느 속성에서도 물리적 또는 화학적 안정성의 주목할만한 변화는 검출되지 않았다. mAb1 및 애플리버셉트는 10mg/mL:40mg/mL FDS를 120분 동안 교반한 경우(주위 온도에서 와류교반함) 또는 8회의 냉동/해동 사이클을 행한 경우(-30℃에서 냉동하고 실온에서 해동함)에 효력을 유지하였다.

10mg/mL:40mg/mL mAb1:애플리버셉트 FDS는 60분 동안 교반한 경우(주위 온도에서 와류 교반함) 또는 8회의 냉동/해동 사이클을 행한 경우(-30℃에서 냉동하고 실온에서 해동함)에 물리적으로 그리고 화학적으로 안정하였다. 모니터링된 속성들 중 어느 속성에서도 물리적 또는 화학적 안정성의 주목할만한 변화는 검출되지 않았다. FDS가 120분 동안 교반된 경우(주위 온도에서 와류 교반함) 고분자량 종의 0.9% 증가가 관찰되었지만(SE-UPLC), 다른 모니터링된 속성들 중 어느 속성에서도 주목할만한 변화는 검출되지 않았다. 120분의 와류 교반은 극한 스트레스이고, 교반은 제조 프로세스 동안 120mg/mL:40mg/mL mAb1:애플리버셉트 FDS에 대해 최소화될 것이다. mAb1 및 애플리버셉트는 10mg/mL:40mg/mL mAb1:애플리버셉트 FDS를 120분 동안 교반한 경우(주위 온도에서 와류교반함) 또는 8회의 냉동/해동 사이클을 행한 경우(-30℃에서 냉동하고 실온에서 해동함)에 효력을 유지하였다.

약물 제품(DP) 10:40mg/mL mAb1:애플리버셉트는 2 내지 8℃에서 적어도 9개월 동안 보관한 경우에 안정하다.

DP 120:40mg/mL mAb1:애플리버셉트는 2 내지 8℃에서 적어도 9개월 동안 보관한 경우에 안정하다.

실시예 8: 제형의 안정성을 평가하는데 사용되는 방법

mAb1 및 mAb1:애플리버셉트 FDS 및 DP의 조사 안정성은 하기 검정을 이용하여 평가하였다: 육안 검사에 의한 색 및 외형; pH; 405nm에서의 광학 밀도(OD)의 증가에 의해 측정되는 탁도; 미세유동 영상화(MFI)에 의한 현미경 없이 보이지 않는(subvisible) 미립자 분석; 역상 고성능 액체 크로마토그래피(RP-HPLC)에 의한 단백질 농도.

순도는 하기 검정에 의해 평가하였다: 크기 배제 초고성능 액체 크로마토그래피(SE-UPLC); 환원 및 비-환원 나트륨 도데실 설페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE).

전하 변이체 분석은 하기 검정에 의해 평가하였다: mAb1 FDS 및 DP에 대해 양이온 교환 UPLC(CEX-UPLC); mAb1 및 mAb1:애플리버셉트 FDS 및 DP에 대해 영상화된 모세관 등전점 포커싱(iCIEF).

효력은 mAb1 제형 중의 mAb1에 대해; 그리고 mAb1:애플리버셉트 제형 중의 mAb1 및 애플리버셉트 둘 다에 대해 수행된 생물학적 검정에 의해 평가하였다. 각각의 샘플의 상대적 효력은 생물학적 검정을 이용하여 측정하고, (IC₅₀ 참조 샘플/IC₅₀ 샘플)*100%으로서 정의된다. 보관 안정성 샘플의 측정된 효력은 참조 표준의 측정된 효력의 50 내지 150% 이내여야만 한다.

제형의 물리적 안정성은 색, 외형, pH, 탁도 및 단백질 농도와 같은 특성을 말한다. 용액 중의 눈에 보이는 미립자의 존재는 육안 검사에 의해 검출될 수 있다. 용액은 투명 내지 약간 유백색이고, 근본적으로 눈에 보이는 미립자가 없고, 무색 내지 옅은 황색인 경우에 육안 검사를 통과한다. 405nm에서의 OD 증가로 측정되는 탁도는 또한 용액 중의 미립자를 검출하는데 사용될 수 있다. 405nm에서의 OD 증가는 미립자의 존재, 유백색성의 증가 또는 시험편의 색상 변화를 나타낼 수 있다. MFI는 크기가 2μm 이상인 눈에 보이지 않는 미립자를 측정하는데 사용된다. 단백질 농도는 RP-HPLC 검정에 의해 측정되고 출발 물질에 대한 단백질 회복 백분율로서 보고된다. RP-HPLC 검정에서, 단일 mAb1 피크는 역상 컬럼으로부터의 용출 후 단일 애플리버셉트 피크로부터 해상된다. mAb1 농도는 mAb1 피크 면적을 mAb1 표준을 사용하여 생성된 캘리브레이션 곡선과 비교함으로써 결정되고, 애플리버셉트 농도는 애플리버셉트 피크 면적을 애플리버셉트 표준을 사용하여 생성된 캘리브레이션 곡선과 비교함으로써 결정된다. 회복 백분율은 각각 출발 mAb1 또는 애플리버셉트 농도에 대한 측정된 mAb1 또는 애플리버셉트 농도를 기준으로 계산된다.

화학적 안정성은 단백질의 공유결합적으로 변형된 형태(예를 들면, 공유결합적 응집체, 절단 생성물 또는 전하 변이체 형태) 및 비-공유결합적으로 변형된 형태(예를 들면, 비-공유결합적 응집체)의 형성을 말한다. 보다 고분자량 및 보다 저분자량 분해 생성물은 SE-UPLC 및 SDS PAGE 방법을 이용하여 본래 분자량 생성물로부터 분리될 수 있다. SE-UPLC 방법에서의 분해된 mAb1의 백분율은 모든 mAb1 피크의 전체 면적에 대한 모든 비-본래 피크의 면적의 비로부터 계산된다. 비-환원 및 환원 SDS-PAGE에 의한 mAb1 순도는 모든 밴드의 총 강도에 대한 주요 밴드 강도의 비로부터 계산된다. mAb1의 전하 변이체 형태는 iCIEF 및 CEX-UPLC를 이용하여 해상된다. 이들 방법에서, 주요 피크의 것보다 더 낮은 pI에 대해 포커싱된 피크는 "산성" 피크로 표시하고, 반면, 주요 피크의 것보다 더 높은 pI에 대해 포커싱된 피크는 "염기성" 피크로 표시한다.

mAb1:애플리버셉트 제형은 총 분자량 순도(본래 mAb1 + 본래 애플리버셉트)를 이용하여 SE-UPLC에 의해 특성확인되고(즉, mAb1 및 애플리버셉트의 분자량 순도는 개별적으로 측정되지 않을 것이다), 그 이유는 mAb1 및 애플리버셉트 본래 종은 서로 완전히 해상될 수 없기 때문이다. 유사하게, mAb1:애플리버셉트 제형은 총 HMW 종(mAb1 HMW + 애플리버셉트 HMW) 및 총 LMW 종(mAb1 LMW + 애플리버셉트 LMW)을 이용하여 특성확인될 것이고, 그 이유는 mAb1 HMW 종은 애플리버셉트 HMW 종으로부터 해상될 수 없고 mAb1 LMW 종은 애플리버셉트 LMW 종으로부터 해상될 수 없기 때문이다.

SE-UPLC 방법을 이용하여 측정되는 mAb1:애플리버셉트 중의 총 HMW 종 또는 종 LMW 종의 백분율은 각각 모든 mAb1:애플리버셉트 피크의 총 면적에 대한 총 HMW 종 또는 총 LMW 종의 면적의 비로부터 계산된다. 비-환원 및 환원 SDS-PAGE에 의한 순도는 모든 밴드의 총 강도에 대한 (애플리버셉트 주요 밴드 + mAb1 주요 밴드) 강도의 비로부터 계산된다. 애플리버셉트는 높은 수준의 시알산을 함유하는 고도로 글리코실화된 단백질이다. 애플리버셉트에 대한 복잡한 전하 분포의 결과로서 CEX-UPLC 방법은 모든 전하 변이체 형태를 분리하기에 충분한 분해능을 갖지 않았고, 따라서, mAb1:애플리버셉트 샘플에 대한 전하 변이체 프로파일의 변화를 검정하는데 사용되지 않았다. mAb1:애플리버셉트 내에 공동-제형화된 mAb1 및 애플리버셉트의 전하 변이체 형태는 iCIEF만을 사용하여 해상되었다.

mAb1에 대해, 주요 피크의 것보다 더 낮은 pI에 대해 포커싱된 피크는 "산성" 피크로 표시하고, 반면, 주요 피크의 것보다 더 높은 pI에 대해 포커싱된 피크는 "염기성" 피크로 표시한다. 애플리버셉트에 대해, 피크 3 내지 피크 8은 주요 피크이고 "주요" 피크로 표시한다. 피크 3의 것보다 더 낮은 pI에 대해 포커싱된 애플리버셉트 피크는 "산성" 피크로 표시하고, 반면, 피크 8의 것보다 더 높은 pI에 대해 포커싱된 피크는 "염기성" 피크로 표시한다.

실시예 9: mAb1 , mAb1 : 애플리버셉트 및 애플리버셉트 제형의 보관 안정성 비교

10mg/mL mAb1, 120mg/mL mAb1, 및 40mg/mL 애플리버셉트의 조사 제형의 보관 안정성을 평가하는 연구로부터의 SE-UPLC 결과를 mAb1:애플리버셉트(10mg/mL:40mg/mL) 및 (120mg/mL:40mg/mL) 공동-제형으로부터의 결과와 비교하였다. 이러한 평가를 수행하여, 공동-제형화 mAb1 및 애플리버셉트가, mAb1 및 애플리버셉트의 개별적으로 제형화된 용액(단일-제형)에 비교하는 경우에 형성된 고분자량 종의 상대적 양의 차이를 초래하였는지를 측정하였다. 공동-제형과 등가의 조건 하에 인큐베이션된 단일-제형으로부터의 SE-UPLC 결과를 사용하여 동일한 농도의 각각의 단백질을 함유하는 공동-제형에 대한 HMW 종 %의 이론적 증가를 계산하였다. HMW의 이론적 증가를 실제 공동-제형화된 약물 제품을 5℃에서 인큐베이션 한 경우에 관찰된 HMW 증가에 대해 비교하였다. 이들 연구에 사용된 DS 로트는 임상학적 용도로 제조된 DS를 대표한다.

10mg/mL mAb1 단독, 40mg/mL 애플리버셉트 단독 및 mAb1:애플리버셉트(10mg/mL:40mg/mL) 공동 제형을 함유하는 5℃에서 보관된 제형에 대한 SE-UPLC 결과의 요약은 하기와 같다: 5℃에서 9개월 보관 후, 10mg/mL mAb1 제형 중의 HMW 함량은 증가하지 않았다. 동일한 평가 기간 동안 40mg/mL 애플리버셉트 제형 중의 HMW %는 0.4% 증가했다. 10mg/mL mAb1 및 40mg/mL 애플리버셉트 제형의 결과에 기초하여 0.4% HMW 종의 증가는 mAb1:애플리버셉트(10mg/mL:40mg/mL) 공동-제형에서 9개월 평가 기간 동안 발생하는 것으로 예측되었다. 9개월 평가 기간 동안 mAb1:애플리버셉트(10mg/mL:40mg/mL) DP에 대해 총 HMW 종의 0.4% 증가가 관찰되었다. 계산된 HMW % 증가와 관찰된 HMW % 증가 사이의 일치는 5℃에서 9개월 동안 mAb1:애플리버셉트(10mg/mL:40mg/mL) DP로서의 mAb1 및 애플리버셉트의 보관이 개별적으로 제형화된 약물 제품에 대해 관찰된 증가에 비하여 HMW 형태의 생성을 증가시키지 않았다는 것을 시사한다.

120mg/mL mAb1 단독, 40mg/mL 애플리버셉트 단독 및 mAb1:애플리버셉트(120mg/mL:40mg/mL) 공동 제형을 함유하는 5℃에서 보관된 제형에 대한 SE-UPLC 결과의 요약은 하기와 같다: 5℃에서 9개월 보관 후, 120mg/mL mAb1 제형 및 40mg/mL 애플리버셉트 제형 중의 HMW 함량은 각각 0.5% 및 0.4% 증가하였다. 120mg/mL mAb1 및 40mg/mL 애플리버셉트 제형의 결과에 기초하여 0.9% HMW 종의 증가는 mAb1:애플리버셉트(120mg/mL:40mg/mL) 공동-제형에서 9개월 평가 기간 동안 발생하는 것으로 예측되었다. 이러한 이론적 결과는 5℃에서의 보관 9개월 동안 mAb1:애플리버셉트(120mg/mL:40mg/mL) DP에 대해 관찰된 총 HMW 종의 1.0% 증가와 비슷하였다. 계산된 HMW % 증가와 실제 HMW % 증가 사이의 근접한 일치는 5℃에서 9개월 동안 mAb1:애플리버셉트(120mg/mL:40mg/mL) DP로서의 mAb1 및 애플리버셉트의 보관이 개별적으로 제형화된 약물 제품에 대해 관찰된 증가에 비하여 HMW 형태의 생성을 증가시키지 않았다는 것을 시사한다.

실시예 10: 혈관신생 AMD 또는 DME 중 어느 하나를 갖는 환자에서의 애플리 버셉트와 병용하여 유리체내(IVT) 투여된 mAb1의 임상학적 시험

이러한 연구는 혈관신생 AMD 및 DME를 갖는 환자에서의 mAb1 단독 또는 애플리버셉트와의 병용 IVT 투여의 안전성, 내약성(tolerability), 및 효능을 평가하기 위해 고안된 I상, 개방-표지, 용량 단계적 상승 임상학적 연구이다.

이 연구의 주요 목적은 혈관신생 AMD를 갖는 환자에서 그리고 DME를 갖는 환자에서 개별적으로 IVT mAb1 및 애플리버셉트 및 IVT mAb1의 안전성과 내약성을 조사하는 것이다.

이 연구의 2차적 목적은 (i) mAb1과 애플리버셉트의 IVT 주사 후 mAb1 및 애플리버셉트의 전신 약동학(PK)을 특성확인하고; (ii) IVT 주사 후 항-mAb1 항체 및 항-애플리버셉트 항체의 존재를 특성확인하기 위한 것이다.

1차 종점은 IVT mAb1 항체 단독으로 또는 IVT 공동-제형화된 mAb1 및 애플리버셉트로 치료된 환자에서의 24주에 걸친 안구 및 전신성 치료-발생 유해 사례(TEAE: treatment-emergent adverse event)의 발생률 및 중증도이다.

2차 종점은 공동-제형의 IVT 주사 후 (i) 약동학; 및 (ii) 항-약물 항체(ADA)의 발달이다.

탐색적 종점은 (1) 기준선으로부터의 BCVA의 변화; (2) 12주 및 24주째에 (OCT에 의해 측정된) 기저선으로부터의 중심성 망막 두께의 변화; (3) 12주 내지 20주까지 PRN 애플리버셉트 주사의 수이다.

AMD 환자의 경우에만 (ⅰ) 12주 및 24주째에 (FA에 의해 측정된) 기저선으로부터 CNV 면적이 변화하고; (ii) 12주 및 24주째에 (FA에 의해 측정된) 기저선으로부터 총 병변 면적이 변화하고; (iii) 12주 및 24주째에 (FA에 의해 측정된) 기저선으로부터 유출 면적이 변화한다.

DME 환자의 경우에만 12주 및 24주째에 (FP에 의해 측정된) 기저선으로부터DRSS가 변화한다.

연구 고안에 대한 이론적 근거

항-VEGF 치료요법(예를 들면, 애플리버셉트)은 혈관신생 AMD 및 DME에 대한 치유 치료의 표준이다. 혈관신생 안 질환에서 VEGF 및 안지오포이에틴-2(Ang-2) 경로 둘 다를 표적으로 하는 것은 항-VEGF 단독 치료요법으로 치료하는 것보다 부가적인 효능을 초래할 수 있고, 또한 더 긴 치료 간격을 초래하는 더 긴 작용의 지속기간을 제공할 가능성을 갖는다. 토끼에서의 DL-AAA에 의해 유도된 망막 혈관신생 및 만성 혈관 유출의 전임상학적 모델에서, IVT 애플리버셉트(125μg/50μl)를 이용한 정맥내(IV) mAb1(15mg/kg)로의 치료는 애플리버셉트 단독으로의 단지 3주와 비교하여 8주 동안 혈관 유출의 저지를 초래하였다(실시예 2의 상세설명 참조).

다른 연구에서, 망막 혈관 발달에 대한 mAb1의 영향을 애플리버셉트의 영향과 또는 mAb1 및 애플리버셉트 둘 다를 이용한 치료와 비교하였다. 이러한 실험에서 사용된 mAb1(25mg/kg, 피하[SC]) 및 애플리버셉트(25mg/kg, SC)의 용량은 각각의 약물을 단일 제제로서 사용하는 경우 망막 혈관신생의 최대 저지를 수득하는데 요구되는 최소 용량을 초과하였다. P3에 대한 mAb1 또는 애플리버셉트 중 어느 하나의 투여는 hFc 대조군에 비하여 P6에서 측정된 망막의 평균 혈관화 영역을 각각 36% 및 42%만큼 유의하게 감소시켰다. 또한, 망막의 평균 혈관화 영역은 68%만큼 감소된 어느 한 제제 단독으로 치료된 동물과 비교하여 mAb1 및 애플리버셉트 둘 다로 치료된 동물에서 유의하게 더 작았고, 이는 치료 기간 동안 망막 혈관 발달의 거의 완전히 저지함을 나타냈다(실시예 3의 상세설명 참조).

용량 선택을 위한 이론적 근거

출발 용량은 연구 눈에서 IVT 주사를 통해 투여된 0.5mg mAb1:2mg 애플리버셉트의 공동-제형으로 구성된다. 2mg 용량의 애플리버셉트는 습식 AMD 및 중심성 망막 정맥 폐쇄의 치료를 위해 현재 승인되어 판매되는 것과 동일하다.

0.5mg:2mg 용량의 공동-제형은 Good Laboratory Practice 독성학 연구에서 사이노몰거스 원숭이에게 양방향으로 IVT를 투여한 최저 용량의 절반이다. 2mg의 애플리버셉트와 병용한 6mg의 mAb1 이하의 용량 그리고 mAb1 단독의 6mg의 용량은 원숭이에서의 내성이 우수하였다.

생물학적 관점으로부터 이러한 출발 용량에 관한 이론적 근거는 토끼 눈에서의 혈관신생을 위한 DL-AAA 모델에 기초한다. 이 모델에서, IVT 애플리버셉트(0.125mg) 및 mAb1(0.5mg)의 공동-제형은 애플리버셉트 단일 치료요법과 비교하여 항-유출 효과의 지속기간을 3주 내지 8주까지 유의하게 증가시켰다. 사람 눈(토끼 눈보다 대략 4배 더 큼)에 외삽하는 것은 0.5mg 내지 0.6mg의 범위의 용량이 생물학적 활성을 나타낼 것으로 예상될 수 있다. 따라서 0.5mg의 초기 용량은 약리학적 관점에서 합리적이다(실시예 2 참조). 사람 유리체강(vitreous cavity)의 체적이 원숭이 유리체강의 것보다 대략 4배인 점을 고려하면, 초기 출발 용량은 원숭이 연구에서 실질적으로 최저 용량보다 8배, 계획된 최고 용량보다 약 48배 더 낮다. 따라서, 원숭이 IVT 연구에서 사용된 최저 용량은 제안된 임상학적 출발 용량에 대한 적당한 안전성 마진을 제공한다.

연구 고안

이 연구는 스크리닝 기간(-21일 내지 -1일), 기저선 방문(1일), 치료 기간(1 일 내지 57일), 추적 관찰(85일 내지 141일) 및 연구 방문의 종료[169일(24주)]로 이루어진다. 1일/기저선에서 적격 환자는 연구 약물의 제1 용량을 투여받기 전에 안전성 평가를 받는다.

1일째, 29일째 및 57일째에, 환자는 공동-제형(mAb1 및 애플리버셉트) 또는 mAb1 단독의 주사를 총 3회 용량으로 투여받는다. 초기 코호트는 0.5mg:2mg의 공동-제형을 투여받는다. 공동-제형 및 mAb1 단독의 계획된 투여는 표 43에 요약된다. 최대 내약 용량(MTD)이 결정되면, 단독으로 제공된 mAb1의 용량은 mAb1 및 애플리버셉트의 공동-제형 내의 투여된 mAb1의 최대 용량에 상응할 것이다.

연구 약물의 마지막 용량은 8주째에 투여한다. 유리체내 애플리버셉트 주사(2mg)는 연구 눈에 대해 12주째에 시작하여 모든 환자에게 20주까지 이용가능하다. 12주째에 애플리버셉트를 투여받는 환자는 매달 주사까지의 가능성으로 계속해서 애플리버셉트 치료를 받을 것이다.

연구 방문시에 환자를 안 및 전신 안전성(안 검사, 실험실 평가 등을 포함) 및 효능(광학적 간섭 단층촬영법[OCT], 플루오레세인 혈관조영술[FA]/안저 촬영법[FP], 안저 자가형광성[FAF] 및 4-미터 조기 치료 당뇨병성 망막병증 연구[ETDRS] 프로토콜을 이용한 BCVA)을 평가하고, 이는 24주(연구 종료)에 이어진다.

연구 눈/동급 눈(fellow eye) 선택: 환자당 한쪽 눈만이 연구에 등록된다. 등록된 눈은 연구 눈으로서 지정될 것이다. 다른 눈은 동급 눈으로서 간주된다.

양쪽 눈에서 적격성 기준을 만족하는 환자의 경우, BCVA가 보다 나쁜 눈을 연구 눈으로서 선택하였다. 양쪽 눈의 BCVA가 동일한 경우, 매체가 가장 클리어한 눈을 연구 눈으로서 선택하였다. 양쪽 눈의 수정체 매체가 선명도가 유사한 경우, 환자의 (확인가능한 경우) 비-우세한 눈(non-dominant eye)을 연구 눈으로서 선택한다. 어느 눈도 우세하지 않은 경우, 우측 눈을 연구 눈으로서 지정한다.

연구 코호트

약 20 내지 40 명의 환자가 이 용량 단계적 상승 연구에 등록된다. 4개의 순차적 상승 용량 코호트가 공동-제형화된 mAb1 및 애플리버셉트(0.5mg:2mg, 1mg:2mg, 3mg:2mg, 6mg:2mg)에 대해 계획되고, 1 코호트는 mAb1 단독으로 계획된다(6mg). 각각의 용량 코호트는 처음에는 4명의 환자, 2명의 DME와 2명의 AMD로 구성된다. 1 용량 제한 독성(DLT)이 발생하면 코호트는 2명의 추가 DME 환자 및/또는 2명의 추가 AMD 환자를 포함하도록 확장될 수 있다. 코호트 4와 5는 코호트 4에 도달하면 병행할 수 있다.

용량 단계적 상승 및 연구 정지 규칙

다음의 보다 높은 용량 수준으로의 공동-제형화된 mAb1 및 애플리버셉트의 단계적 상승 결정은 AMD와 DME 환자 둘 다의 안전성 및 내약성 정보에 기초하여 진행중인 코호트에서 평가하고 검토한 것이다. 단계적 상승에 대한 결정은 코호트(AMD 및 DME 둘 다)의 마지막 환자가 연구 의약의 첫 용량을 받은 후 적어도 1주 동안 관찰된 후에 발생할 수 있다. MTD가 확인되지 않으면 mAb1 단독 코호트는 MTD 또는 최고 용량(6mg)으로 등록될 것이다. MTD가 확인되지 않으면, 이 코호트의 등록은 6mg:2mg mAb1:애플리버셉트 공동-제형 코호트와 동시에 이루어질 것이다.

DLT가 관찰되면, 코호트의 확장이 고려될 수 있다. 코호트의 확장은 2명의 추가의 AMD 환자 및/또는 2명의 추가의 DME 환자를 포함할 수 있다. DLT 사건 후 각각의 코호트에서 환자의 수를 4명 초과로 증가시키기 위한 이론적 근거는 노출 동안 연구와 관련된 실제 DLT 사건으로부터 IVT 주사로 돌발적으로 발생하는 것으로 알려져 있는 소정 AE(예를 들면, 초민감성 반응 또는 중간정도 내지 중증의 안내 염증)를 구별하는 능력을 향상시키기 위한 것이다. 코호트 확장은 자동적으로 수행되지 않을 것이다. 대신에, 공동-제형의 다음의 보다 높은 용량으로의 용량 단계적 상승 또는 코호트 확장이 발생할 것인지를 결정하기 위해 임의의 잠재적 DLT의 임상학적 유의성을 판정하기 위한 발견이 논의될 것이다.

모든 환자들은 공동-제형화된 mAb1 및 애플리버셉트를 투여받은 후 다음의 용량 코호트에의 등록을 개시하기 전에 적어도 7일 동안 관찰된다(그렇지만, 다음의 용량 코호트에 대한 스크리닝은 현재 용량이 안전하다는 것을 확인하기 전에 시작할 수 있다). 코호트에 등록된 초기 4명의 환자 모두가 8일째(7회 방문)에 안전성 평가를 완료하고 데이터가 검토되면 다음 용량 코호트로의 단계적 상승이 발생할 것이다. 용량 단계적 상승 및 정치 규칙에 대해서는 표 44를 참조한다.

2명 이상의 DLT가 관찰되면, 안전성 검토가 수행될 때까지 투약을 정지할 것이다. 안전성 검토의 결과는 계획된 대로 연구를 계속하거나, 현재 용량 코호트를 확장시키거나, 또는 현재 용량으로의 투약을 정지하는 것에 대한 결정일 것이다. 이러한 경우, 관찰된 독성은 용량-제한적인 것으로 간주될 것이고, 투여된 최고 용량 미만의 용량은 MTD로서 간주될 것이다. 1 등급 4 AE 또는 등급 4 중증의 유해 사건(SAE)가 임의의 코호트(본래 투약 코호트 또는 확장 코호트)에서 관찰되는 경우, 투약을 정지할 것이고, 추가의 투약의 고려하기 전에 종합적인 안전성 검토가 수행될 것이다.

용량-제한 독성

DLT는 하기와 같이 정의된다: 안구 독성 등급 스케일에 의해 측정되는 등급 2 또는 3 안구 독성 또는 식약청(FDA) September 2007 Guidance for Industry, Toxicity Grading Scale for Healthy Adult and Adolescent Volunteers Enrolled in Preventive Vaccine Clinical Trials의 등급 3 또는 4 독성.

최대 내성 용량

MTD는 2개 이상의 DLT의 발생으로 인해 투약이 중단되는 수준 바로 아래의 용량 수준으로 정의된다. 연구가 DLT의 발생으로 중단되지 않으면 MTD가 결정되지 않은 것으로 간주될 것이다.

연구 집단

표적 집단은 혈관신생 AMD를 갖는 50세 이상의 남성 및 여성 또는 중심성 연루를 갖는 임상학적으로 유의한 DME를 갖는 18세 이상의 남성 및 여성이다.

포함 기준: 환자는 연구에 포함되기 위해서는 다음 기준을 충족시켜야 한다: (1) AMD를 갖는 환자의 경우: 조사자에 의해 결정되는 바와 같이 연구 눈에서 FA 또는 OCT에 의해 입증되는 중심와에 영향을 미치는 중심와 주변 병변을 포함하는 AMD에 속발성인 활성 중심와 아래 맥락막 혈관신생(CNV), 및 b. 50세 이상의 남성 또는 여성. DME를 갖는 환자의 경우: c. 중심성 연루(스펙트럼 도메인 OCT 상의 중심 하위 분야의 300㎛ 이상)를 갖는 임상학적으로 유의한 DME를 갖는 환자; 및 d. 18세 이상의 남성 또는 여성. (2) 병원 방문 및 연구-관련 절차를 준수할 수 있는 환자; 및 (3) 서명된 정보에 근거한 동의서를 제공한다.

배제 기준: 하기 기준 중 어느 하나를 충족시키는 환자는 연구로부터 배제된다: (1) (a) 혈관신생 AMD를 갖는 환자의 경우: 어느 한쪽 눈에서의 AMD 이외의 다른 임의의 원인으로 인한 CNV의 증거; 어느 한쪽 눈에서의 DR 또는 DME의 증거; (b) DME를 갖는 환자의 경우: 어느 한쪽 눈에서의 임의의 원인으로 인한 혈관신생 AMD 또는 CNV의 증거; (2) 어느 한쪽 눈에서의 사전의 애플리버셉트; (3) IVT 베바시주맙, 라니비주맙, 또는 페갑타닙 나트륨을 1일 8주 이내에 연구 눈에 투여하거나 본 연구에서 약물의 투여를 불가능하게 할 수 있는 이전의 치료들 중 어느 하나를 갖는 AE; (4) 안지오포이에틴 억제제를 이용한 이전의 임의의 치료; (5) 이전의 임의의 전신 (IV) 항-VEGF 투여; (6) 연구 눈에서의 유리체망막 수술 병력; (7) 스크리닝 방문 3개월 이내에 연구 눈에서 망막 레이저 광응고술 또는 황반 레이저 광응고술을 시행함; (8) 스크리닝 4개월 내의 연구 눈에서의 안내 또는 안주위 코르티코스테로이드의 이전의 사용; (9) 스크리닝/기저선에서 연구 눈의 25mm Hg 이상의 안내 압력(IOP); (10) 스크리닝/기저선에서 어느 한쪽 눈에서의 감염성 안검염, 각막염, 공막염 또는 결막염; (11) 스크리닝 방문의 3개월 내의 어느 한쪽 눈에서의 임의의 안내 염증/감염; (12) 현재 홍채 혈관신생, 유리체 출혈, 또는 견인성 망막 박리가 연구 눈에서 스크리닝 방문시에 보임; (13) 매체 불투명도, 플루오레세인 염료에 대한 알레르기 또는 스크리닝/기저선에서의 정맥 접근 부족으로 인해 CNV를 기록하기 위한 사진, FA 또는 OCT를 얻을 수 없음; (14) 조사자의 의견으로 통제되지 않는 진성 당뇨병; (15) 제어되지 않은 혈압( 환자가 앉아있는 동안 수축기> 160 mmHg 또는 이완기 >95mmHg로 정의됨); (16) 1일부터 180일 이내에 뇌혈관 사고 또는 심근 경색의 병력; (17) 신부전, 투석 또는 신장 이식의 병력; (18) 독시사이클린 또는 유사한 화합물(즉, 테트라사이클린)에 대한 알려진 민감도; (19) 연구 제형 중의 임의의 화합물에 대한 알려진 민감도; (20) 임신 또는 모유 수유중인 여성; 및 (21) 연구 동안 적절한 피임법을 실행하지 않는 성적으로 활동적인 남성 또는 가임 잠재력이 있는 여성(적절한 피임법은 스크리닝 전에 2회 이상의 생리 주기 동안 경구 피임약이나 다른 처방약 피임약의 안정적인 사용, 자궁내 장치, 양측의 난관 결찰, 정관 수술, 콘돔 + 피임 스폰지, 거품 또는 젤리 또는 다이어프램 + 피임 스폰지, 거품 또는 젤리를 포함함).

연구 치료

조사 및 참조 치료

공동-제형화된 mAb1과 애플리버셉트는 mAb1(항-Ang2 항체)와 애플리버셉트로 구성된 약물 제품이다. IVT 투여를 위해 멸균된 단일-사용 2mL 유리 바이알 중의 수성 용액으로서 본 연구에 공급될 것이다(용량 단계적 상승시 점차적으로 보다 높은 용량에 사용되는 점차적으로 보다 높은 농도로): 10:40mg/mL, 20:40mg/mL; 60:40mg/mL; 및 120:40mg/mL(mAb1:애플리버셉트).

mAb1 단독 약물 제품도 IVT 투여용 멸균 단일-사용 2mL 유리 바이알 내의 수성 용액으로서 120mg/mL의 농도로 본 연구에 공급된다.

공동-제형 및 mAb1은 IVT 주사를 통해 전달되고, 주사 체적은 50μl(0.05cc)일 것이다. 최소 인출가능 함량은 0.050ml일 것이다. 각각의 바이알은 0.3mL의 mAb1을 인출할 수 있는 체적을 함유한다.

환자에게 3회 용량의 연구 약물이 제공될 것이다. 연구 약물은 1일, 29일, 및 57일째에 조사자 또는 다른 적격 연구자에 의해 투여된다. 환자는 등록되어 하기 공동-제형 또는 mAb1 치료 용법 중 하나를 투여받는다:

코호트 1: 0.5mg:2mg(mAb1:애플리버셉트)

코호트 2: 1mg:2mg(mAb1:애플리버셉트)

코호트 3: 3mg:2mg(mAb1:애플리버셉트)

코호트 4: 6mg:2mg(mAb1:애플리버셉트)

코호트 5: 6mg(mAb1 단독)

배경 치료

연구 눈 치료: 유리체내 애플리버셉트 주사는 멸균 밀봉 바이알 중에 40mg/mL의 농도로 50uL로 시린지를 조제하기에 충분한 체적으로 공급된다. 12주에 시작하여 (20주까지 지속), 환자는 아래 열거된 재-치료 기준 중 하나가 충족되면 매달 애플리버셉트 치료(2mg)를 받을 수 있을 것이다: (1) 가장 낮은 이전 측정과 비교하여 OCT에서 중심성 망막 두께가 50μm 초과로 증가한다. (2) OCT에서 낭성 망막 변화나 망막하 체액이 새롭게 또는 지속적으로 발생하거나 OCT의 중앙부 부종이 지속된다. (3) OCT의 중앙 하위필드에서 망막 두께의 증가와 함께 최고의 이전 측정치에서 5개 이상의 문자 손실. (4) 현재와 가장 최근 방문사이의 5개 이상의 문자의 BCVA 개선.

동급 눈 치료: 4주째, 애플리버셉트(2mg)를 스크리닝시 동급 눈에서 AMD 또는 DME를 갖는 환자에게, 또는 시험 동안 AMD 또는 DME로 진단받은 환자에게 제공될 것 이다. 동급 눈은 시험 동안 안전성에 대해 평가될 것이지만, 연구 눈으로 간주되지 않을 것이다. 환자의 동급 눈은 조사자의 재량에 따라 연구의 눈 치료와 동일한 날에 치료를 받을 수 있다. 모든 동급 눈 치료는 동급 눈을 위한 절차로서 전자 사례 보고서 양식(CRF)에 기록되어야 한다.

동급 눈에 대한 치료를 받은 환자는 연구로부터 철회되도록 요구되지 않을 것이다. 동급 눈에 대한 연구 평가 및 모든 AE는 수집될 것이다.

금지 의약

연구 눈: 환자들은 이러한 프로토콜에서 구체화된 바와 같이 IVT 공동-제형 또는 IVT mAb1, 및 필요에 따라 애플리버셉트를 이용한 이들의 할당된 연구 치료 이외에 연구 눈에 AMD 또는 DME 치료를 위한 임의의 표준 또는 조사 제제를 투여받지 않을 수 있다. 이로는 연구 눈에 혈관신생 AMD 또는 DME를 치료할 의도로 국소적으로(예를 들면, IVT, 국부, 공막주위 또는 안와주위 경로) 투여된 의약 및 전신 투여된 의약이 포함된다.

동급 눈: 4주째에 출발하여, 동급 눈이 황반의 중심에 연루되거나 위협하는 DME 또는 혈관신생 AMD를 갖는 경우, 애플리버셉트(2mg)를 투여할 수 있다. 동급 눈에서의 다른 병태는 승인된 치료요법으로 치료될 수 있지만, 이들은 국소적으로 투여되어야만 한다.

비-안구 전신적: 연구 눈 또는 동급 눈의 혈관신생 AMD 및 DME에 대한 비-안구 (전신) 표준 또는 조사 치료는 허용되지 않는다. 연구 동안 전신적인 항-혈관신생 제제는 허용되지 않는다.

연구 절차

안전성과 내약성은 TEAE, 신체 검사, 생체 신호, 심전도(ECG) 및 임상 평가(혈액학, 혈액 화학 및 소변 검사)의 모니터링/평가를 통해 평가된다. 안구 안전성은 안과 검사(슬릿 램프, 간접 안검내시경, 안내 안압[IOP], 스펙트럼 도메인 OCT, BCVA, FAF 및 FP 및 FA로부터의 정보)에 의해 평가된다. 애플리버셉트에 대한 mAb1 및 혈장 PK 샘플을 평가하기 위해 혈청 샘플을 수집할 것이다. ADA 반응을 평가하기 위한 혈정 샘플을 수집할 것이다.

최고 교정 시력: 연구 눈 및 동급 눈의 시각 기능은 스크리닝, 기저선, 및 치료 1, 4, 6, 8, 12, 16, 20 및 24주 후에 각각의 연구 방문시에 4M ETDRS 프로토콜(조기 치료 당뇨병성 망막병증 연구 그룹: The Early Treatment Diabetic Retinopathy Study Group)을 이용하여 4미터에서 평가하였다.

플루오레세인 혈관조영술/ 안저 촬영법(FA/ FP ): 연구 눈 및 동급 눈의 망막 혈관구조의 해부학적 상태는 스크리닝, 기저선, 및 치료 1, 4, 6, 8, 12, 16, 20 및 24주 후에 각각의 연구 방문 시점에 검안경 실험, FA 및 FP에 의해 평가하였다. 최소한 하기 변수에 대한 정보를 수집할 것이다:

AMD만의 경우: 총 병변 영역, CNV 영역, 전형적인 CNV 영역, 및 플루오레세인 유출 영역.

DME만의 경우: 당뇨병성 망막병증 중증도 스코어(DRSS).

입증된 촬영자는 상기 열거된 시점에 양쪽 눈에서 FA 및 FP를 수행할 것이다. 안저 화상 및 혈관조영 화상을 독립적인 판독 센터에 전송한다. 연구 눈은 수송 눈(transit eye)일 것이다. 모든 FA 및 FP를 소스 문서의 일부로서 사이트에 보관할 것이다.

스펙트럼 도메인 광학 간섭 단층촬영법: 망막 및 병변 특성은 스크리닝, 기저선, 및 치료 1, 4, 6, 8, 12, 16, 20 및 24주 후에 각각의 연구 방문 시점에 스펙트럼 도메인 OCT를 이용하여 평가한다.

연구 눈 및 동급 눈에 대해 스펙트럼 도메인 OCT를 이용하여 OCT 기술자에 의해 연구소에서 화상을 포획하고 전송한다. 광학 간섭 단층촬영 화상을 독립적인 판독 센터에 전송하고, 여기서, 연구 눈에 대한 화상을 판독할 것이다. 모든 OCT는 소스 문서의 일부로서 연구소에 전자적으로 보관될 것이다. 광학 간섭 단층촬영 기술자는 화상 획득의 지속성 및 품질을 확보하는 것이 판독 센터에 의해 증명될 것이고, 환자의 공동-제형의 용량 수준에 대해 맹검될 것이다.

안저 자가형광성: 또한 자가형광성을 이용하여 망막의 해부학적 특성을 평가한다. 입증된 촬영자는 스크리닝, 기저선, 및 치료 1, 4, 6, 8, 12, 16, 20 및 24주 후에 각각의 연구 방문 시점에 FAF를 수행할 것이다. 화상을 독립적 판독 센터에 전송할 것이다. 모든 화상은 소스 문서의 일부로서 사이트에 보관될 것이다.

안내 압력: 연구 눈의 안내 압력(IOP)은 각각의 연구 방문시에 골드만(Goldmann) 압평 안압계 또는 Tono-pen^TM을 이용하여 측정한다. 연구에 걸쳐 각각의 환자에서 IOP 측정의 동일한 방법을 이용하여야만 한다. 애플리버셉트 치료가 제공되는 방문시, IOP는 치료 전에(양방) 그리고 치료 대략 30분 후(연구 눈만) 측정되어야만 한다.

슬릿 램프 검사: 전방 분절 및 전방 유리체는 스크리닝, 기저선, 및 치료 1, 4, 6, 8, 12, 16, 20 및 24주 후에 각각의 연구 방문 시점에 슬릿 램프를 사용하여 검사한다. 두 눈을 검사한다. 안저 검사는 간접 검안경 검사에 의해서도 수행된다.

전방 챔버 플레어(flare)와 세포가 채점된다. 전방 챔버에서의 세포 반응의 강도는 1 x 3mm 고출력 빔에서 볼 수있는 염증 세포의 수에 따라 45° 내지 60° 각도에서 완전 강도로 채점된다. 또한, 유리체 염증 반응이 채점된다.

간접 검안경: 간접 검안경은 스크리닝, 기저선, 및 치료 1, 4, 6, 8, 12, 16, 20 및 24주 후에 각각의 연구 방문 시점에 수행된다. 연구 약물이 투여되는 날에 연구 약물 투여 직후 연구 눈에서 그리고 투약 전 양측에서 수행될 것이다. 적절한 렌즈와 광학 장치, 즉, 주변 장치용 헤드 장착형 또는 휴대용 검안경과 중심 안저용 슬릿 램프가 사용된다. 동공이 확대되고, 안저의 검사는 양쪽 눈에서 이루어진다.

안전성 비-안구: 체온, 앉은 상태의 혈압, 맥박, 및 호흡을 포함하는 생체 신호를 수집하고, 완전하고 철저한 신체 검사, 표준 12-리드 ECG 및 혈액학, 화학, 뇨분석 및 임신 검사를 위한 표준 실험실 검사를 스크리닝, 기저선, 및 치료 1, 4, 6, 8, 12, 16, 20 및 24주 후에 각각의 연구 방문 시점에 투약전에 수행할 것이다.

안전성

안전성 및 내약성은 치료-발생 유해 사건(TEAE), 신체 검사, 생체 신호, 심전도(ECG) 및 임상 평가(혈액학, 혈액 화학 및 소변 검사)의 모니터링/평가를 통해 평가된다.

유해 사건(AE)은 연구 약물과 인과 관계를 가질 수도 있고 가지지 않을 수도있는 연구 약물을 투여한 환자에서의 임의의 뜻밖의 의학적 사건이다. 따라서, AE는 연구 약물과 관련된 것으로 간주되는지의 여부에 관계없이 임의의 바람직하지 못하고 의도하지 않은 증후(비정상적 실험실 발견 포함), 증상, 또는 연구 약물의 사용과 일시적으로 관련된 질환이다.

중증의 유해 사건(SAE)은 임의의 용량으로 사망을 초래하거나, 생명을 위협하거나, 환자 입원을 필요로 하거나 지속적인 입원의 연장을 초래하거나, 영구적 또는 중대한 장애/불구를 초래하거나, 선천성 기형/출생 결함이 있는 임의의 뜻밖의 의학적 사건 및/또는 중요한 의학적 사건이다. 중증의 시력을 위협하는 안구 AE에 대한 기준은 하기와 같다: (1) AE는 (BCVA의 가장 최근 평가와 비교하여) 30개 초과의 문자의 BCVA를 감소시킨다. (2) AE는 VA의 감소를 가벼운 지각 수준 이하로 저하시킨다. (3) AE는 영구적인 시력 손실을 방지하기 위해 외과적 개입(예를 들면, 유리체 탭 또는 항 감염제의 IVT 주사, 레이저 또는 기체를 이용한 망막 냉동고정술을 이용한 생검)이 필요로 한다. (4) AE는 심각한 안내 염증(즉, 4 + 전방 챔버 세포/플레어 또는 4 + 유리체염)과 관련이 있다. (5) 조사자의 견해로, AE는 영구적 시력 손실을 방지하기 위해 의학적 개입을 필요로 할 수 있다.

결과

안전성 결과의 예비 분석은 바람직한 안전성 프로파일을 갖는 AMD 및 DME 환자 둘 다에서 공동-제형의 내성이 우수하였음을 나타냈다.

표 45 및 표 46은 각각 AMD 및 DME를 갖는 환자의 기저선 인구통계학을 보여준다.

AMD 및 DME 환자의 기저선 특성은 각각 표 47 및 표 48에 요약된다.

(12주째)까지의 결과는 모든 용량 수준에서 시력(20개 이상의 문자의 시력 증가) 및 망막 형태(중심 하위분야 두께 감소)의 개선을 입증한다. 효과의 지속기간은 보다 높은 용약에서 연장되었다(3mg:2mg 및 6mg:2mg 용량의 경우).

치료 후 24주째에, AMD 또는 DME를 갖는 환자의 시력 증가가 유지되거나 개선될 것으로 기대된다.

본 발명은 본원에 기재된 특정 실시형태에 의해 그 범위를 한정하는 것은 아니다. 실제로 본원에 기재된 것 이외에 본 발명의 각종 변형은 상기 설명 및 첨부된 도면으로부터 당해 분야 숙련가에게 명백할 것이다. 이러한 변형은 첨부된 특허청구범위의 범위 내가 되도록 의도된다.

SEQUENCE LISTING <110> REGENERON PHARMACEUTICALS, INC. <120> METHODS AND FORMULATIONS FOR TREATING VASCULAR EYE DISEASES <130> 10112WO01 <150> US 62/084,003 <151> 2014-11-25 <150> US 62/147,232 <151> 2015-04-14 <150> US 14/943,490 <151> 2015-11-17 <160> 11 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Gly Pro Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Leu Ile Thr Phe Gly Gly Leu Ile Ala Pro Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 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Claims

혈관성 안 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 안지오포이에틴-2(Ang-2) 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 유리체내 투여함을 포함하는, 혈관성 안 질환 또는 장애의 치료 방법.
제1항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 길항제를 추가로 포함하는, 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 10 내지 120mg/mL의 Ang-2 억제제를 포함하는, 방법.
제3항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 10mg/mL, 20mg/mL, 60mg/mL 또는 120mg/mL의 Ang-2 억제제를 포함하는, 방법.
제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 40mg/mL의 상기 VEGF 길항제를 포함하는, 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 치료를 필요로 하는 대상체에게 0.5mg 내지 10mg의 용량으로 투여되는, 방법.
제2항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VEGF 길항제가 치료를 필요로 하는 대상체에게 50㎍ 내지 5mg의 용량으로 투여되는, 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안 질환 또는 장애는 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 연령-관련 황반 변성, 망막 혈관신생, 중심성 망막 정맥 폐색, 분지성 망막 정맥 폐색, 폴립상 맥락막 혈관병증, 및 맥락막 혈관신생으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안 질환 또는 장애가 연령-관련 황반 변성인, 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안 질환 또는 장애가 당뇨병성 황반 부종인, 방법.
망막 혈관 신생의 억제를 필요로 하는 대상체에게 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 VEGF 길항제와 병용하여 투여함을 포함하는, 망막 혈관신생을 억제하는 방법.
제11항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 VEGF 길항제와 병용하여 유리체내 투여되는, 방법.
제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 약 1 내지 10㎍의 용량으로 투여되는, 방법.
제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VEGF 길항제가 약 1 내지 10㎍의 용량으로 투여되는, 방법.
제11항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 VEGF 길항제와 병용하여 피하 투여되는, 방법.
제15항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 대상체의 체중 kg당 5 내지 30mg의 용량으로 투여되는, 방법.
제15항 또는 제16항에 있어서, 상기 VEGF 길항제가 대상체의 체중 kg당 5 내지 30mg의 용량으로 투여되는, 방법.
제11항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 병용 치료가 Ang-2 억제제 또는 VEGF 길항제의 단독 투여와 비교하여 적어도 65%만큼 혈관 영역(vascular area)을 감소시키는, 방법.
제11항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 망막 혈관신생이 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 연령-관련 황반 변성, 망막 혈관신생, 중심성 망막 정맥 폐색, 분지성 망막 정맥 폐색, 폴립상 맥락막 혈관병증, 및 맥락막 혈관신생으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 안 질환 또는 장애와 관련되어 있는, 방법.
망막 혈관신생의 억제를 필요로 하는 대상체에게 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 VEGF 길항제와 병용하여 투여함을 포함하는, 망막 혈관신생을 억제하는 방법.
제20항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 VEGF 길항제와 병용하여 유리체내 투여되는, 방법.
제21항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 0.1 내지 10.0mg의 용량으로 투여되고, 상기 VEGF 길항제가 약 0.1mg 내지 5mg의 용량으로 투여되는, 방법.
제20항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 대상체의 체중 kg당 15mg의 용량으로 2주마다 1회 정맥내 투여되는, 방법.
제23항에 있어서, 상기 VEGF 길항제가 0.1 내지 5mg의 용량으로 유리체내 투여되는, 방법.
제20항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 망막 혈관신생이 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 연령-관련 황반 변성, 중심성 망막 정맥 폐색 및 분지성 망막 정맥 폐색으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 안 질환 또는 장애와 관련되어 있는, 방법.
혈관 유출의 억제를 필요로 하는 대상체에게 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 VEGF 길항제와 병용하여 투여함을 포함하는, 혈관 유출을 억제하는 방법.
제26항에 있어서, 상기 혈관 유출이 VEGF 길항제 단독 투여된 대상체와 비교하여 적어도 3주 동안 억제되는, 방법.
제27항에 있어서, 상기 혈관 유출이 VEGF 길항제 단독 투여된 대상체와 비교하여 3주 초과 동안 억제되는, 방법.
제26항 또는 제28항에 있어서, 상기 혈관 유출이 VEGF 길항제 단독 투여된 대상체와 비교하여 적어도 8주 동안 억제되는, 방법.
제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈관 유출이 VEGF 길항제 단독 투여된 대상체와 비교하여 적어도 10주 동안 억제되는, 방법.
제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 대상체의 체중 kg당 약 5 내지 50mg의 용량으로 0.05 내지 2mg의 VEGF 길항제와 병용하여 투여되는, 방법.
제31항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 대상체의 체중 kg당 약 15mg의 용량으로 125㎍의 VEGF 길항제와 병용하여 투여되는, 방법.
제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 정맥내 또는 피하 투여되는, 방법.
제26항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VEGF 길항제가 유리체내 투여되는, 방법.
제26항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 VEGF 길항제와 병용하여 유리체내 투여되는, 방법.
제35항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 약 125㎍의 VEGF 길항제와 병용하여 약 500㎍의 용량으로 투여되는, 방법.
제26항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈관 유출이 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 연령-관련 황반 변성, 망막 혈관신생, 중심성 망막 정맥 폐색, 분지성 망막 정맥 폐색, 폴립상 맥락막 혈관병증, 및 맥락막 혈관신생으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 안 질환 또는 장애와 관련되어 있는, 방법.
제26항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈관 유출이 망막 혈관신생과 관련되어 있는, 방법.
안 질환을 갖는 대상체에서의 혈관 유출을 억제하는 방법으로서, 상기 방법은 혈관 유출의 억제를 필요로 하는 대상체에게 VEGF 길항제의 단일 용량을 투여하고, 이어서, Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 1회 이상의 용량을 투여함을 포함하는, 안 질환을 갖는 대상체에서의 혈관 유출을 억제하는 방법.
제39항에 있어서, 상기 VEGF 길항제가 100 내지 500㎍의 용량으로 투여되는, 방법.
제39항 또는 제40항에 있어서, 상기 VEGF 길항제가 유리체내 투여되는, 방법.
제39항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 정맥내 또는 피하 투여되는, 방법.
제39항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제의 1회 이상의 용량이 2주마다 1회 투여되는, 방법.
제39항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제의 1회 이상의 용량이 각각 대상체의 체중 kg당 15mg을 포함하는, 방법.
제39항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈관 유출이 VEGF 길항제 단독으로 투여된 대상체와 비교하여 적어도 4주 동안 억제되는, 방법.
제45항에 있어서, 상기 혈관 유출이 VEGF 길항제 단독으로 투여된 대상체와 비교하여 4주 초과로 억제되는, 방법.
제45항에 있어서, 상기 혈관 유출이 VEGF 길항제 단독으로 투여된 대상체와 비교하여 적어도 8주 동안 억제되는, 방법.
제47항에 있어서, 상기 혈관 유출이 VEGF 길항제 단독으로 투여된 대상체와 비교하여 적어도 10주 동안 억제되는, 방법.
제39항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈관 유출이 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 연령-관련 황반 변성, 망막 혈관신생, 중심성 망막 정맥 폐색, 분지성 망막 정맥 폐색, 폴립상 맥락막 혈관병증, 및 맥락막 혈관신생으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 안 질환 또는 장애와 관련되어 있는, 방법.
제39항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈관 유출이 망막 혈관신생과 관련되어 있는, 방법.
안 질환을 갖는 대상체에게 투여되는 유리체내 주사의 수를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은, 투여되는 유리체내 주사의 수의 감소를 필요로 하는 대상체에게 Ang-2 억제제의 치료학적 유효량을 포함하는 약제학적 조성물의 1차 개시 용량을, 이어서, 1회 이상의 2차 용량을 VEGF 길항제와 병용하여 순차적으로 투여함을 포함하고, 여기서, 상기 VEGF 길항제의 유리체내 투여는 VEGF 길항제 단독으로 투여된 대상체와 비교하여 9주마다 1회로 감소되는, 안 질환을 갖는 대상체에게 투여되는 유리체내 주사의 수를 감소시키는 방법.
제51항에 있어서, 상기 1회 이상의 2차 용량이 상기 약제학적 조성물의 2 내지 10회 용량을 포함하는, 방법.
제52항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 적어도 2회의 2차 용량이 상기 대상체에게 투여되고, 여기서, 각각의 2차 용량이 직전 용량의 1 내지 4주 후에 투여되는, 방법.
제51항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 개시 용량 및 1회 이상의 2차 용량이 각각 약 0.5 내지 10mg의 Ang-2 억제제를 포함하는, 방법.
제51항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 정맥내 또는 피하 투여되는, 방법.
제51항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VEGF 길항제가 약 1 내지 5mg의 용량으로 투여되는, 방법.
제51항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안 질환이 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 연령-관련 황반 변성, 망막 혈관신생, 및 맥락막 혈관신생으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
맥락막 혈관신생의 억제를 필요로 하는 대상체에게 Ang-2 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하는, 맥락막 혈관신생을 억제하는 방법.
제58항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 대상체의 체중 kg당 약 10 내지 50mg의 용량으로 피하 투여되는, 방법.
제59항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 대상체의 체중 kg당 25mg의 용량으로 투여되는, 방법.
제58항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 맥락막 혈관신생이 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 연령-관련 황반 변성, 중심성 망막 정맥 폐색, 분지성 망막 정맥 폐색, 및 폴립상 맥락막 혈관병증으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 안 질환 또는 장애와 관련되어 있는, 방법.
제1항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 항-Ang-2 항체 또는 이의 항원 결합 단편인, 방법.
제62항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편이 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함하는, 방법.
제63항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편이 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1(HCDR1), 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 HCDR2, 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 HCDR3, 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1(LCDR1), 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 LCDR2, 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 LCDR3을 포함하는, 방법.
제64항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 HCVR 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 포함하는, 방법.
제2항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VEGF 길항제가 VEGF 수용체-기반 키메라 분자(VEGF 트랩)를 포함하는, 방법.
제66항에 있어서, 상기 VEGF 트랩이 VEGFR1의 1개 이상의 면역글로불린(Ig)-유사 도메인, VEGFR2의 1개 이상의 Ig-유사 도메인, 및 다량체화 도메인을 포함하는, 방법.
제67항에 있어서, 상기 VEGF 트랩이 VEGFR1의 Ig-유사 도메인 2, VEGFR2의 Ig-유사 도메인 3, 및 다량체화 도메인을 포함하는, 방법.
제66항에 있어서, 상기 VEGF 트랩이 애플리버셉트인, 방법.
제2항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VEGF 길항제가 서열번호 11의 아미노산 27 내지 457로 이루어진 2개의 폴리펩타이드들의 이량체로 이루어진, 방법.
(i) 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 길항제; (ii) 사람 안지오포이에틴-2(hAng-2)에 특이적으로 결합하는 항체; (iii) 6.2 ± 0.3의 pH의 완충제; (iv) 비-이온성 세제; (v) 등장성 제제; 및 (vi) 안정화제를 포함하는 안정한 액체 제형으로서, 상기 VEGF 길항제는 서열번호 11의 아미노산 27 내지 457로 이루어진 2개의 폴리펩타이드들의 이량체로 이루어진, 안정한 액체 제형.
제71항에 있어서, 상기 항체가 3개의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3)[여기서, HCDR1은 서열번호 3을 갖고, HCDR2는 서열번호 4를 갖고, HCDR3은 서열번호 5를 갖는다], 및 3개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)[여기서, LCDR1은 서열번호 6을 갖고, LCDR2는 서열번호 7을 갖고, LCDR3은 서열번호 8을 갖는다]을 포함하는, 제형.
제71항 또는 제72항에 있어서, 상기 항체가 서열번호 1의 중쇄 가변 영역(HCVR) 및 서열번호 2의 경쇄 가변 영역(LCVR)을 포함하는, 제형.
제73항에 있어서, 상기 VEGF 길항제 농도가 약 40mg/mL ± 1.5mg/mL인, 제형.
제74항에 있어서, 약 10 내지 120mg/mL의 상기 항체를 포함하는, 제형.
제75항에 있어서, 상기 항체를 10mg/mL, 20mg/mL, 60mg/mL 및 120mg/mL로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 농도로 포함하는, 제형.
제71항에 있어서, 약 5 내지 100mg/mL의 VEGF 길항제; 약 10 내지 120mg/mL의 항-Ang-2 항체; 약 5 내지 50mM의 인산 나트륨, pH 약 6.2; 약 0.01 내지 0.1%(w/v)의 폴리소르베이트; 약 10 내지 50mM의 염화 나트륨; 및 약 1 내지 20%(w/v)의 슈크로스를 포함하는, 제형.
제77항에 있어서, 상기 항체를 10mg/ml, 20mg/ml, 60mg/ml 및 120mg/ml로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 농도로 포함하는, 제형.
제76항에 있어서, 상기 완충제가 인산 나트륨인, 제형.
제79항에 있어서, 상기 인산 나트륨 농도가 10mM ± 1.5mM인, 제형.
제76항에 있어서, 상기 비-이온성 세제가 폴리소르베이트 20인, 제형.
제81항에 있어서, 상기 폴리소르베이트 20 농도가 약 0.03% w/v ± 0.0045%인, 제형.
제76항에 있어서, 상기 등장성 제제가 염화 나트륨인, 제형.
제83항에 있어서, 상기 염화 나트륨 농도가 약 40mM ± 6.0mM인, 제형.
제76항에 있어서, 상기 안정화제가 슈크로스인, 제형.
제85항에 있어서, 상기 슈크로스 농도가 약 5% ± 0.75%(w/v)인, 제형.
제71항에 있어서, 상기 VEGF 길항제 농도가 40mg/mL ± 6.0mg/mL이고, 상기 항체 농도가 10mg/mL ± 1.5mg/mL이고, 상기 완충제가 10mM ± 1.5mM의 인산 나트륨, pH 6.2 ± 0.3이고, 상기 비-이온성 세제가 0.03% w/v ± 0.0045%의 폴리소르베이트 20이고, 상기 등장성 제제가 40mM의 염화 나트륨이고, 상기 안정화제가 5% w/v ± 1.5%의 슈크로스인, 제형.
제71항에 있어서, 상기 VEGF 길항제 농도가 40mg/mL ± 6.0mg/mL이고, 상기 항체 농도가 20mg/mL ± 3.0mg/mL이고, 상기 완충제가 10mM ± 1.5mM의 인산 나트륨, pH 6.2 ± 0.3이고, 상기 비-이온성 세제가 0.03% w/v ± 0.0045%의 폴리소르베이트 20이고, 상기 등장성 제제가 40mM의 염화 나트륨이고, 상기 안정화제가 5% w/v ± 1.5%의 슈크로스인, 제형.
제71항에 있어서, 상기 VEGF 길항제 농도가 40mg/mL ± 6.0mg/mL이고, 상기 항체 농도가 60mg/mL ± 9.0mg/mL이고, 상기 완충제가 10mM ± 1.5mM의 인산 나트륨, pH 6.2 ± 0.3이고, 상기 비-이온성 세제가 0.03% w/v ± 0.0045%의 폴리소르베이트 20이고, 상기 등장성 제제가 40mM의 염화 나트륨이고, 상기 안정화제가 5% w/v ± 1.5%의 슈크로스인, 제형.
제71항에 있어서, 상기 VEGF 길항제 농도가 40mg/mL ± 6.0mg/mL이고, 상기 항체 농도가 120mg/mL ± 18.0mg/mL이고, 상기 완충제가 10mM ± 1.5mM의 인산 나트륨, pH 6.2 ± 0.3이고, 상기 비-이온성 세제가 0.03% w/v ± 0.0045%의 폴리소르베이트 20이고, 상기 등장성 제제가 40mM의 염화 나트륨이고, 상기 안정화제가 5% w/v ± 1.5%의 슈크로스인, 제형.
혈관성 안 질환 또는 장애를 치료하거나 개선하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 혈관성 안 질환 또는 장애의 치료 또는 개선을 필요로 하는 대상체에게 제71항 내지 제90항 중 어느 한 항의 제형을 투여함을 포함하는, 혈관성 안 질환 또는 장애를 치료하거나 개선하기 위한 방법.
제91항에 있어서, 상기 안 질환 또는 장애가 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 연령-관련 황반 변성, 망막 혈관신생, 중심성 망막 정맥 폐색, 분지성 망막 정맥 폐색, 폴립상 맥락막 혈관병증, 및 맥락막 혈관신생으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
혈관성 안 질환의 치료 방법으로서, 상기 방법은 혈관성 안 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 항-Ang-2 억제제 및 VEGF 길항제의 치료학적 유효량을 포함하는 약제학적 조성물의 1회 이상의 용량을 순차적으로 투여함을 포함하는, 혈관성 안 질환의 치료 방법.
제93항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 10mg/mL 내지 약 120mg/mL의 항-Ang-2 억제제를 포함하는, 방법.
제93항 또는 제94항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 40mg/mL의 VEGF 길항제를 포함하는, 방법.
제93항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 약 10mg/mL 내지 약 120mg/mL의 항-Ang-2 억제제 및 약 40mg/mL의 VEGF 길항제를 포함하는, 방법.
제93항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 10mg/mL의 항-Ang-2 억제제 및 40mg/mL의 VEGF 길항제를 포함하는, 방법.
제93항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 20mg/mL의 항-Ang-2 억제제 및 40mg/mL의 VEGF 길항제를 포함하는, 방법.
제93항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 60mg/mL의 항-Ang-2 억제제 및 40mg/mL의 VEGF 길항제를 포함하는, 방법.
제93항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 120mg/mL의 항-Ang-2 억제제 및 40mg/mL의 VEGF 길항제를 포함하는, 방법.
제93항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에게 상기 약제학적 조성물의 개시 용량을 투여하고; 이어서, 상기 대상체에게 상기 약제학적 조성물의 1회 이상의 2차 용량을 투여함을 포함하고, 여기서, 각각의 2차 용량은 직전 용량의 1 내지 4주 후에 투여되는, 방법.
제101항에 있어서, 적어도 2회의 2차 용량이 상기 대상체에게 투여되고, 각각의 2차 용량이 직전 용량의 4주 후에 투여되는, 방법.
제102항에 있어서, 상기 대상체에게 상기 약제학적 조성물의 1회 이상의 3차 용량을 투여함을 추가로 포함하고, 여기서, 각각의 3차 용량은 직전 용량의 5 내지 12주 후에 투여되는, 방법.
제103항에 있어서, 각각의 3차 용량이 직전 용량의 8주 후에 투여되는, 방법.
제101항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 각각의 용량이 약 0.5mg 내지 약 10mg의 항-Ang-2 억제제 및 약 2mg의 VEGF 길항제를 포함하는, 방법.
제105항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 각각의 용량이 10mg/mL의 항-Ang-2 억제제 및 40mg/mL의 VEGF 길항제를 포함하는, 방법.
제105항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 각각의 용량이 20mg/mL의 항-Ang-2 억제제 및 40mg/mL의 VEGF 길항제를 포함하는, 방법.
제105항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 각각의 용량이 60mg/mL의 항-Ang-2 억제제 및 40mg/mL의 VEGF 길항제를 포함하는, 방법.
제105항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 각각의 용량이 120mg/mL의 항-Ang-2 억제제 및 40mg/mL의 VEGF 길항제를 포함하는, 방법.
제93항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 각각의 용량이 상기 대상체에게 유리체내 투여되는, 방법.
제93항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈관성 안 질환이 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 연령-관련 황반 변성, 중심성 망막 정맥 폐색, 분지성 망막 정맥 폐색, 및 폴립상 맥락막 혈관병증으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
제111항에 있어서, 상기 혈관성 안 질환이 연령-관련 황반 변성인, 방법.
제111항에 있어서, 상기 혈관성 안 질환이 당뇨병성 황반 부종인, 방법.
제93항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Ang-2 억제제가 항-Ang-2 항체 또는 이의 항원 결합 단편인, 방법.
제114항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편이 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(HCVR)의 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(LCVR)의 CDR을 포함하는, 방법.
제114항 또는 제115항에 있어서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편이 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1(HCDR1), 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 HCDR2, 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는 HCDR3, 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1(LCDR1), 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는 LCDR2, 및 서열번호 8의 아미노산 서열을 갖는 LCDR3을 포함하는, 방법.
제116항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 HCVR 및 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 포함하는, 방법.
제93항 내지 제117항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VEGF 길항제가 VEGF 수용체-기반 키메라 분자(VEGF 트랩)를 포함하는, 방법.
제118항에 있어서, 상기 VEGF 트랩이 VEGFR1의 1개 이상의 면역글로불린(Ig)-유사 도메인, VEGFR2의 1개 이상의 Ig-유사 도메인, 및 다량체화 도메인을 포함하는, 방법.
제119항에 있어서, 상기 VEGF 트랩이 VEGFR1의 Ig-유사 도메인 2, VEGFR2의 Ig-유사 도메인 3, 및 다량체화 도메인을 포함하는, 방법.
제120항에 있어서, 상기 VEGF 트랩이 애플리버셉트인, 방법.
제93항 내지 제121항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VEGF 길항제가 서열번호 11의 아미노산 27 내지 457로 이루어진 2개의 폴리펩타이드들의 이량체로 이루어진, 방법.