KR20170044739A - 안정한 항-ｉｌ-4ｒ-알파 항체 제형 - Google Patents

Abstract

본 발명은 안정한 저점도 항체 제형에 관한 것이며, 여기서, 제형은 고농도의 항-IL4R 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 일반적으로, 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 특이적으로 결합하는 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체 또는 그의 단편; 약 50 mM 내지 약 400 mM의 점도 조절제; 약 0.002% 내지 약 0.2%의 비이온성 계면활성제; 및 제형 완충제를 포함하는 안정한 항체 제형에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 제형 완충제에는 본질적으로 인산염이 없다. 일부 구현예에서, 본 발명은 용기, 투여형 및/또는 키트에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 안정한 항체 제형의 제조 및 이용 방법에 관한 것이다.

Description

안정한 항-ＩＬ-4Ｒ-알파 항체 제형{STABLE ANTI-IL-4R-ALPHA ANTIBODY FORMULATION}

본 출원은 2014년 9월 3일에 출원된 미국 특허 가출원 제62/045,338호의 이익을 주장하며, 그 개시내용 전문은 본원에 참조로 포함된다.

본 출원은 2013년 5월 13일에 생성되고, 214 킬로바이트의 크기를 갖는 시험 파일 명칭 "IL4R300P1"로서 EFS-Web을 통해 본원과 함께 제출된 서열 목록을 참고로 포함한다.

발명의 배경

기술 분야

본 발명은 안정한 저점도 항체 제형에 관한 것이며, 여기서, 제형은 고농도의 항-IL4R 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 일반적으로 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 특이적으로 결합하는 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체 또는 그의 단편, 약 50 mM 내지 약 400 mM의 점도 조절제; 약 0.002% 내지 약 0.2%의 비이온성 계면활성제; 및 제형 완충제를 포함하는 안정한 항체 제형에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 제형 완충제는 본질적으로 인산염이 없다. 일부 구현예에서, 본 발명은 용기, 투여형 및/또는 키트에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 안정한 항체 제형의 제조 및 이용 방법에 관한 것이다.

항체는 그들의 표적 인식 특이성에 의해 전신 투여 후에 고도로 선택적인 결과를 생성하기 때문에, 다양한 질병 및 질환의 치료에 사용되어 왔다. 항체가 계속 효율적이기 위해, 항체는 그들의 제조, 정제, 수송 및 보관 동안 그들의 생물학적 활성을 유지해야 한다. 다량의 고도로 정제된 모노클로널 항체가 생성되도록 하기 위해 신규한 제조 및 정제 기술이 개발되어 왔다. 그러나, 수송 및 보관을 위해 이들 항체를 안정화시켜야 한다는 과제가 여전히 존재하고, 투여에 적합한 투여형으로 항체를 제공하기 위해 훨씬 더 많은 과제가 존재한다.

변성, 응집, 오염 및 입자 형성은 항체의 제형 및 보관에 있어서 상당한 장애물일 수 있다. 항체의 고도의 다양성으로 인해 모든 항체의 보관에 적합한 보편적인 제형 또는 조건은 존재하지 않는다. 한 항체의 최적의 제형은 종종 그 항체에 특이적이다. 또한, 항체 제형은 항체의 농도 및/또는 요망되는 물리적 특성, 예를 들어, 항체 제형의 점도에 따라 특정 항체에 추가로 맞춤화될 필요가 있을 수 있다. 항체 보관 제형은 종종 상업용 항체를 위한 연구 및 개발 공정의 유의미한 부분이다. 따라서, 수송 및 보관과 관련된 과제를 극복할 수 있는 안정한 수성 항체 제형을 제공할 필요가 있다.

본원의 참고문헌의 인용 또는 논의는 이러한 참고문헌이 본 발명의 종래기술이라는 것을 인정하는 취지로서 해석되어서는 안 된다.

발명의 요약

본 발명은 안정한 저점도 항체 제형에 관한 것이며, 여기서, 제형은 고농도의 항-IL4R 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 일반적으로 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 특이적으로 결합하는 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체 또는 그의 단편, 약 50 mM 내지 약 400 mM의 점도 조절제; 약 0.002% 내지 약 0.2%의 비이온성 계면활성제; 및 제형 완충제를 포함하는 안정한 항체 제형에 관한 것이다.

일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 안정한 항체 제형에 관한 것이다:

인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 특이적으로 결합하는 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체 또는 그의 단편으로서,

(I) 항체가 CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, CDR의 세트가 참조 CDR 세트로부터 10개 이하의 아미노산 치환을 갖고, 참조 CDR 세트에서:

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 193을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 194를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 195를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 198을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 199를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 200을 갖거나;

(II)

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 363을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 364를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 365를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 368을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 369를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 370을 갖거나;

또는

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 233을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 234를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 235를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 238을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 239를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 240을 갖거나;

(III) 항체가 VH 도메인을 포함하고,

i. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖거나;

ii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖거나;

iii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고;

VH 도메인이 표준 카바트(Kabat) 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85; 또는

HFW4 내의 105, 108, 113에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

(IV) 항체가 VL 도메인을 포함하고,

i. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;

ii. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나;

iii. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;

VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

또는

(V) 항체 또는 그의 단편이 VH 및 VL 도메인을 포함하고,

i. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;

ii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나; 또는

iii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;

VH 도메인 및 VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85;

HFW4 내의 105, 108, 113;

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

(I) 내지 (V) 중 임의의 조합인 항체 또는 그의 단편; 및 약 50 mM 내지 약 400 mM의 점도 조절제; 약 0.002% 내지 약 0.2%의 비이온성 계면활성제; 및 제형 완충제.

일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 안정한 항체 제형에 관한 것이다:

인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 특이적으로 결합하는 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체 또는 그의 단편으로서,

(I) 항체가 CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, CDR의 세트가 참조 CDR 세트로부터 10개 이하의 아미노산 치환을 갖고, 참조 CDR 세트에서:

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 193을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 194를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 195를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 198을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 199를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 200을 갖거나;

(II)

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 363을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 364를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 365를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 368을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 369를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 370을 갖거나;

또는

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 233을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 234를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 235를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 238을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 239를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 240을 갖거나;

(III) 항체가 VH 도메인을 포함하고,

i. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖거나;

ii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖거나;

iii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고;

VH 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85; 또는

HFW4 내의 105, 108, 113에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

(IV) 항체가 VL 도메인을 포함하고,

i. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;

ii. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나;

iii. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;

VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

또는

(V) 항체 또는 그의 단편이 VH 및 VL 도메인을 포함하고,

i. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;

ii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나; 또는

iii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;

VH 도메인 및 VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85;

HFW4 내의 105, 108, 113;

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

(I) 내지 (V) 중 임의의 조합인 항체 또는 그의 단편; 및 약 50 mM 내지 약 400 mM의 아르기닌; 약 0.002% 내지 약 0.2%의 폴리소르베이트 80; 및 약 10 내지 약 40 mM의 L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드.

일부 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 안정한 항체 제형에 관한 것이다:

인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 특이적으로 결합하는 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체 또는 그의 단편으로서,

(I) 항체가 CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, CDR의 세트가 참조 CDR 세트로부터 10개 이하의 아미노산 치환을 갖고, 참조 CDR 세트에서:

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 193을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 194를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 195를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 198을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 199를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 200을 갖거나;

(II)

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 363을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 364를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 365를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 368을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 369를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 370을 갖거나;

또는

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 233을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 234를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 235를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 238을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 239를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 240을 갖거나;

(III) 항체가 VH 도메인을 포함하고,

i. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖거나;

ii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖거나;

iii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고;

VH 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85; 또는

HFW4 내의 105, 108, 113에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

(IV) 항체가 VL 도메인을 포함하고,

i. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;

ii. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나;

iii. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;

VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

또는

(V) 항체 또는 그의 단편이 VH 및 VL 도메인을 포함하고,

i. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;

ii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나; 또는

iii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;

VH 도메인 및 VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85;

HFW4 내의 105, 108, 113;

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

(I) 내지 (V) 중 임의의 조합인 항체 또는 그의 단편; 및 약 190 mM의 아르기닌; 약 0.04%의 폴리소르베이트 80; 및 약 25 mM의 L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드.

일부 구현예에서, 본 발명은 적합한 용기 내의 본원에 기재된 항체 제형 중 임의의 것을 포함하는 인간으로의 비경구 투여에 적합한 약제학적 단위 투여형에 관한 것이다.

일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 항체 제형을 포함하는 키트, 본원에 기재된 바와 같은 용기, 본원에 기재된 바와 같은 단위 투여형 또는 본원에 기재된 바와 같은 사전-충전된 주사기에 관한 것이다.

일부 구현예에서, 본 발명은 안정한 수성 항체 제형의 제조 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 하기의 단계를 포함한다:

A. 항체를 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 특이적으로 결합하는 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체 또는 그의 단편으로 정제하는 단계로서,

(I) 항체가 CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, CDR의 세트가 참조 CDR 세트로부터 10개 이하의 아미노산 치환을 갖고, 참조 CDR 세트에서:

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 193을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 194를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 195를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 198을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 199를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 200을 갖거나;

(II)

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 363을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 364를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 365를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 368을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 369를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 370을 갖거나;

또는

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 233을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 234를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 235를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 238을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 239를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 240을 갖거나;

(III) 항체가 VH 도메인을 포함하고,

VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖거나;

VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖거나;

VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고;

VH 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85; 또는

HFW4 내의 105, 108, 113에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

(IV) 항체가 VL 도메인을 포함하고,

VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;

VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나;

VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;

VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

또는

(V) 항체 또는 그의 단편이 VH 및 VL 도메인을 포함하고,

i. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;

ii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나; 또는

iii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;

VH 도메인 및 VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85;

HFW4 내의 105, 108, 113;

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

(I) 내지 (V) 중 임의의 조합인 단계; 및

B. 단리된 항체를 안정화 제형에 배치하여, 안정한 수성 항체 제형을 형성하는 단계로서, 생성된 안정한 수성 항체 제형이

i. 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체;

ii. 약 50 mM 내지 약 400 mM의 점도 조절제;

iii. 약 0.002% 내지 약 0.2%의 비이온성 계면활성제; 및

iv. 제형 완충제를 포함하는 단계.

일부 구현예에서, 본 발명은 대상체에서의 폐 질병 또는 장애, 또는 염증성 피부 장애의 치료 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 치료적 유효량의 본원에 기재된 항체 제형 중 임의의 것을 투여하는 단계를 포함한다.

본 발명을 예시하기 위한 목적으로, 본 발명의 특정 구현예가 도면에 도시되어 있다. 그러나, 본 발명은 도면에 도시된 구현예의 정확한 배치 및 수단으로 한정되지 않는다.
도 1은 이온성 부형제, 예를 들어, 아르기닌-HCL 또는 염화나트륨의 첨가가 23℃에서 항-IL4R 항체의 점도를 10 cP 미만으로 감소시키는 것을 보여준다.
도 2는 25 mM 히스티딘/히스티딘-HCL, 190 mM 아르기닌-HCL, pH 6을 함유하는 제형 중 대략 150 ㎎/㎖의 비-교반된 항-hIL-4Rα의 사진이다.
도 3은 25 mM 히스티딘/히스티딘-HCL, 190 mM 아르기닌-HCL, pH 6을 함유하는 제형 중 대략 150 ㎎/㎖의 교반된 항-hIL-4Rα의 사진이다.
도 4는 25 mM 히스티딘/히스티딘-HCL, 190 mM 아르기닌-HCL, pH 6, 0.01% 폴리소르베이트 80을 함유하는 제형 중 대략 150 ㎎/㎖의 교반된 항-hIL-4Rα의 사진이다.
도 5는 25 mM 히스티딘/히스티딘-HCL, 190 mM 아르기닌-HCL, pH 6을 함유하는 제형 중 대략 150 ㎎/㎖의 항-hIL-4Rα의 사진이다. 이러한 시료를 동결 해동으로 처리하지 않았다.
도 6은 25 mM 히스티딘/히스티딘-HCL, 190 mM 아르기닌-HCL, pH 6을 함유하는 제형 중 대략 150 ㎎/㎖의 항-hIL-4Rα의 사진이다. 이러한 시료를 5회의 동결 해동으로 처리하였다.
도 7은 25 mM 히스티딘/히스티딘-HCL, 190 mM 아르기닌-HCL, pH 6, 0.01% 폴리소르베이트 80을 함유하는 제형 중 대략 150 ㎎/㎖의 항-hIL-4Rα의 사진이다. 이러한 시료를 5회의 동결 해동으로 처리하였다.
도 8은 (i) pH 5.5, (ii) pH 6.0 또는 (iii) pH 6.5에서의 항-IL4R 항체 제형에 대한 40℃에서의 총 피크 면적 흡광도(HPSEC) 대 시간의 산점도이다.
도 9는 (i) 2 내지 8℃, (ii) 25℃ 또는 (iii) 40℃에서 보관된 항-IL4R 항체 제형에 대한 총 피크 면적 흡광도(HPSEC) 대 시간의 산점도이다.
도 10은 (i) pH 5.5, (ii) pH 6 또는 (iii) pH 6.5에서의 항-IL4R 항체 제형에 대한 40℃에서 8주 후의 총 피크 면적 감소 백분율 대 T_m1의 산점도이다.
도 11은 (i) 2 내지 8℃, (ii) 25℃ 또는 (iii) 35℃ 또는 (iv) 40℃에서 4주 동안 보관된 항-IL4R 항체 제형에 대한 10 μM 이상의 입자의 개수/㎖ 대 희석제에 대한 컬럼 차트이다.
도 12는 40℃에서 4주 동안 보관된 항-IL4R 항체 제형에 대한 10 μM 이상의 입자의 개수/㎖ 대 희석제에 대한 컬럼 차트이다.
도 13은 항체 1에 대한 항체 2 내지 42의 VH 도메인의 정렬을 보여준다(시트 a, b, c 및 d로 분할).
도 14는 항체 1에 대한 항체 2 내지 42의 VI 도메인의 정렬을 보여준다(시트 a, b, c 및 d로 분할).
도 15는 항체 20에 대한 항체 1 내지 19 및 21 내지 42의 VH 도메인의 정렬을 보여준다(시트 a, b, c 및 d로 분할).
도 16은 항체 20에 대한 항체 1 내지 19 및 21 내지 42의 VI 도메인의 정렬을 보여준다(시트 a, b, c 및 d로 분할).
도 17은 0.01% 초과의 폴리소르베이트 80(PS 80)을 함유하는 시료가 교반 후에, 가장 낮은 입자 표준보다 더 적은 가시적인 입자를 함유하였음을 보여준다.
도 18은 교반된 시료에서 0.02% 초과의 PS 80 및 0.7% 미만의 PS 80의 첨가가 10 ㎛ 이상의 입자의 농도를 교반을 겪지 않은 시료와 유사한 수준으로 감소시키는데 필요한 것을 보여준다.
도 19는 0.005% 초과의 PS 80을 함유하는 시료가 동결 해동 사이클 후에, 가장 낮은 입자 표준에 비하여 적은 가시적인 입자를 함유하였음을 보여준다.

상세한 설명

정의

본 발명을 상세히 기재하기 전에, 본 발명이 그 자체로 변경될 수 있는 특정 조성물 또는 방법 단계로 한정되지 않는다는 것을 이해해야 한다. 본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용된 바와 같이, 문맥이 달리 명시하지 않은 한, 단수형 "하나", "1개" 및 "상기"는 복수형 지시대상을 포함한다는 것을 인식해야 한다. 용어 "하나"(또는 1개)뿐만 아니라 용어 "하나 이상" 및 "적어도 하나"도 본원에서 상호교환가능하게 사용될 수 있다.

또한, 본원에서 사용되는 "및/또는"은 2개의 특정된 특징 또는 성분 각각이 나머지 하나와 함께 또는 나머지 하나 없이 구체적으로 개시된 것으로서 해석되어야 한다. 따라서, 본원에서 "A 및/또는 B"와 같은 어구에서 사용되는 용어 "및/또는"은 "A 및 B", "A 또는 B", "A"(단독) 및 "B"(단독)를 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, "A, B 및/또는 C"와 같은 어구에서 사용된 용어 "및/또는"은 하기 구현예 각각을 포괄하는 것으로 의도된다: A, B 및 C; A, B 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독).

본 명세서에서, 백분율, 비 등의 모든 표현은 달리 나타내지 않는 한, "중량 기준"이다. 본원에 사용되는 "중량 기준"은 용어 "질량 기준"과 같은 의미이며, 본원에 정의된 비 또는 백분율이 부피, 두께 또는 일부 기타 척도보다는 중량에 따르는 것을 나타낸다.

용어 "약"은 대략, 근처의, 개략적으로 또는 대충을 의미하는 것으로 본원에 사용된다. 용어 "약"이 수치 범위와 함께 사용되는 경우, 이는 개시된 수치 상하로 경계를 확장함으로써 범위를 수식한다. 일반적으로, 용어 "약"은, 본원에서 언급된 값의 상하 10%의 분산만큼의 수치를 수식하기 위해 이용된다.

달리 정의되어 있지 않은 한, 본원에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 발명과 관련된 분야에서 숙련자에 의해 통상적으로 이해되는 의미와 동일한 의미를 갖는다. 예를 들면, 문헌[the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press]; 문헌[The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press]; 및 문헌[the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press]은 본 발명에 사용된 많은 용어의 일반적인 사전을 당업자에게 제공한다.

단위, 접두사 및 부호는 국제단위계(SI)에 의해 허용된 형태로 표기된다. 수치 범위는 범위를 한정하는 숫자를 포함한다. 달리 표시되어 있지 않은 한, 아미노산 서열은 아미노에서 카르복시 배향으로 좌측에서 우측으로 기재되어 있다. 본원에서 제공된 표제는 본원을 전체적으로 참고함으로써 가질 수 있는 본 발명의 다양한 양태 또는 구현예의 한정이 아니다. 따라서, 바로 아래에 정의된 용어는 본원을 전체적으로 참고함으로써 더 완전히 정의된다.

구현예가 본원에서 용어 "포함하는"으로 기재되어 있는 경우에는 언제나 "로 이루어진" 및/또는 "로 본질적으로 이루어진"의 관점에서 기재된 다른 유사한 구현예도 제공된다는 것이 이해된다.

아미노산은 본원에서 그들의 통상적으로 공지된 3-문자 부호, 또는 IUPAC-IUB 생화학 명명위원회에 의해 권장된 1-문자 부호에 의해 지칭된다. 마찬가지로, 뉴클레오티드들은 그들의 통상적으로 허용된 1-문자 코드에 의해 지칭된다.

본원에서 사용된 용어 "에피토프"는 본 발명의 스캐폴드에 결합할 수 있는 단백질 결정인자(determinant)를 지칭한다. 에피토프는 통상적으로 분자의 화학적 활성 표면 기, 예컨대, 아미노산 또는 당 측쇄로 이루어지고, 통상적으로 특정 3차원 구조 특성뿐만 아니라 특정 전하 특성을 갖는다. 입체구조적 에피토프와 비-입체구조적 에피토프는 변성 용매의 존재 하에서 입체구조적 에피토프와의 결합이 소실되는 반면, 비-입체구조적 에피토프와의 결합은 소실되지 않는다는 점에서 구별된다.

용어 "DNA"는 2개 이상의 공유 결합된 천연 발생 또는 변형된 데옥시리보뉴클레오티드의 서열을 지칭한다.

"단백질 서열" 또는 "아미노산 서열"은 폴리펩티드의 아미노산 구성요소가 아미노 말단에서 카르복실 말단 방향으로 선형으로 표시되어 있는 것을 의미하고, 이때 상기 표시에서 서로 인접하는 잔기는 폴리펩티드의 일차 구조에서 인접한다.

용어 "핵산"은 임의의 2개 이상의 공유 결합된 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유사체 또는 유도체를 지칭한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 이 용어는 DNA, RNA 및 PNA를 포함하나 이들로 한정되지 않는다. "핵산" 및 "폴리뉴클레오티드"는 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.

용어 "폴리뉴클레오티드"는 단일 핵산뿐만 아니라 다수의 핵산도 포괄하는 것으로 의도되고, 단리된 핵산 분자 또는 작제물, 예를 들면, 메신저 RNA(mRNA) 또는 플라스미드 DNA(pDNA)를 지칭한다. 용어 "단리된" 핵산 또는 폴리뉴클레오티드는 그의 천연 환경으로부터 제거된 핵산 분자, DNA 또는 RNA를 지칭한다. 예를 들면, 벡터 내에 함유된 본 발명의 스캐폴드를 인코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드는 본 발명의 목적을 위해 단리된 것으로서 간주된다. 단리된 폴리뉴클레오티드의 추가 예로는 이종 숙주 세포에서 유지된 재조합 폴리뉴클레오티드, 또는 용액 중의 (부분적으로 또는 실질적으로) 정제된 폴리뉴클레오티드가 포함된다. 단리된 RNA 분자는 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 생체내 또는 시험관내 RNA 전사물을 포함한다. 본 발명에 따른 단리된 폴리뉴클레오티드 또는 핵산은 합성에 의해 생성된 이러한 분자를 추가로 포함한다. 또한, 폴리뉴클레오티드 또는 핵산은 조절 요소, 예컨대, 프로모터, 리보좀 결합 부위 또는 전사 종결자일 수 있거나 이를 포함할 수 있다.

"폴리펩티드"는 길이, 번역 후 변형 또는 기능과 관계없이 아미드 결합(펩티드 결합)에 의해 선형으로 연결된 2개 이상의 아미노산의 임의의 서열을 의미한다. "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 따라서, 펩티드, 디펩티드, 트리펩티드 또는 올리고펩티드는 "폴리펩티드"의 정의 내에 포함되고, 용어 "폴리펩티드"는 이들 용어 중 임의의 용어 대신에 또는 이러한 용어와 상호교환가능하게 사용될 수 있다. 또한, 용어 "폴리펩티드"는 글리코실화, 아세틸화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호/차단기에 의한 유도체화, 단백질용해성 절단, 또는 비-천연 발생 아미노산에 의한 변형을 포함하나 이들로 한정되지 않는 폴리펩티드의 발현 후 변형의 생성물을 지칭하는 것으로 의도된다. 폴리펩티드는 천연 생물학적 공급원으로부터 유래될 수 있거나 재조합 기술에 의해 제조될 수 있으나, 표기된 핵산 서열로부터 반드시 번역될 필요는 없다. 폴리펩티드는 화학적 합성을 포함하는 임의의 방식으로 생성될 수 있다.

본 발명의 폴리펩티드의 단편, 유도체, 유사체 또는 변이체, 및 이들의 임의의 조합물도 본 발명의 폴리펩티드로서 포함된다. 변이체는 천연적으로 발생할 수 있거나 비-천연적으로 발생할 수 있다. 비-천연 발생 변이체는 해당 분야에 공지된 돌연변이유발 기술을 사용하여 생성될 수 있다. 변이체 폴리펩티드는 보존적 또는 비-보존적 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 포함할 수 있다. 20개의 표준 아미노산의 하나 이상의 천연 발생 아미노산 유도체를 함유하는 펩티드도 "유도체"로서 포함된다.

"무작위화된" 또는 "돌연변이된"은 주형 서열에 비하여 결실, 치환 또는 부가를 포함하는 하나 이상의 아미노산 변경을 포함하는 것을 의미한다. "무작위화" 또는 "돌연변이화"는 이러한 아미노산 변경을 서열 내로 도입하는 과정을 의미한다. 무작위화 또는 돌연변이는 일반적으로 핵산 코딩 서열의 의도적, 비의도적 또는 자발적 서열 변경을 통해 달성될 수 있고, 임의의 기술, 예를 들면, PCR, 오류-유발 PCR 또는 화학적 DNA 합성에 의해 발생할 수 있다. 용어 "무작위화", "무작위화된", "돌연변이화", "돌연변이된" 등은 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.

"동족체" 또는 "동족 비-돌연변이된 단백질"은 변이체 단백질 내로 도입된 아미노산 돌연변이를 제외하고 변이체 단백질과 서열이 동일한 단백질을 의미하고, 여기서, 변이체 단백질은 무작위화되거나 돌연변이된다.

"RNA"는 2개 이상의 공유 결합된, 천연 발생 또는 변형된 리보뉴클레오티드의 서열을 의미한다. 이 용어 내에 포함된 변형된 RNA의 일례는 포스포로티오에이트 RNA이다.

본원에서 사용된 용어 "발현"은 유전자가 생화학적 물질, 예를 들면, 본 발명의 스캐폴드 또는 그의 단편을 생성하는 과정을 지칭한다. 상기 과정은 일시적 발현 및 안정한 발현 둘 모두뿐만 아니라 유전자 낙다운도 포함하나 이로 한정되지 않는, 세포 내에서의 유전자의 기능적 존재의 임의의 발현을 포함한다. 그것은 하나 이상의 mRNA로의 유전자의 전사, 및 하나 이상의 폴리펩티드로의 이러한 mRNA의 번역을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 원하는 최종 생성물이 생화학적 물질인 경우, 발현은 생화학적 물질 및 임의의 전구체의 생성을 포함한다.

"발현 생성물"은 핵산, 예를 들면, 유전자의 전사에 의해 생성된 메신저 RNA, 또는 폴리펩티드일 수 있다. 본원에 기재된 발현 생성물은 전사 후 변형, 예를 들면, 폴리아데닐화를 갖는 핵산, 또는 번역 후 변형, 예를 들면, 메틸화, 글리코실화, 지질의 부가, 다른 단백질 서브유닛과의 회합, 단백질용해성 절단 등을 갖는 폴리펩티드를 추가로 포함한다.

용어 "벡터" 또는 "발현 벡터"는 숙주 세포 내로 도입하고 원하는 발현 생성물을 숙주 세포에서 발현하기 위한 비히클로서 본 발명에 따라 사용되는 벡터를 의미하기 위해 본원에서 사용된다. 해당 분야의 숙련자에게 공지된 바와 같이, 이러한 벡터는 플라스미드, 파지, 바이러스 및 레트로바이러스로 이루어진 군으로부터 용이하게 선택될 수 있다. 일반적으로, 본 발명에 적합한 벡터는 선택 마커, 원하는 핵산의 클로닝을 용이하게 하기에 적합한 제한 부위, 및 진핵 또는 원핵 세포 내로 유입되고/거나 진핵 또는 원핵 세포에서 복제하는 능력을 포함할 것이다.

용어 "숙주 세포"는 재조합 DNA 기술을 이용함으로써 작제되고, 적어도 하나의 발현 생성물을 인코딩하는 벡터를 보유하는 세포를 지칭한다. 재조합 숙주로부터 발현 생성물을 단리하는 과정의 설명에서, 용어 "세포" 및 "세포 배양물"은, 명확히 달리 특정되어 있지 않은 한, 발현 생성물의 공급원을 표기하기 위해 상호교환가능하게 사용되며, 다시 말하면, "세포"로부터의 발현 생성물의 회수는 회전 침강된 전체 세포로부터의 회수, 또는 배지 및 현탁된 세포 둘 다를 함유하는 세포 배양물로부터의 회수를 의미한다.

본원에서 사용된 용어 "치료한다" 또는 "치료"는 치료적 처치 및 예방적 또는 방지적 조치 둘다를 지칭하고, 목적은 대상체에서 원하지 않는 생리학적 변화 또는 장애, 예컨대, 염증성 질병 또는 질환의 진행을 예방하거나 늦추는(경감시키는) 것이다. 유리한 또는 원하는 임상 결과는 검출가능하든 검출불가능하든 관계없이 증상의 완화, 질병 정도의 감소, 질병의 안정화된(즉, 악화되지 않는) 상태, 질병 진행의 지연 또는 늦춤, 질병 상태의 호전 또는 경감, 및 (부분적인 또는 전체적인) 관해를 포함하나 이들로 한정되지 않는다.

또한, 용어 "치료"는 치료를 받지 않은 경우 예측된 생존에 비한 생존의 연장을 의미한다. 치료가 필요한 대상체는 질환 또는 장애를 이미 갖는 대상체뿐만 아니라 상기 질환 또는 장애를 갖기 쉬운 대상체, 또는 상기 질환 또는 장애가 예방되어야 할 대상체도 포함한다.

용어 "대상체", "개체", "동물", "환자" 또는 "포유동물"은 진단, 예후 또는 치료법이 요구되는 임의의 개체, 환자 또는 동물, 특히 포유동물 대상체를 지칭한다. 포유동물 대상체는 인간, 가축, 농장 동물, 및 동물원, 스포츠 또는 애완 동물, 예컨대, 개, 고양이, 기니 피그, 토끼, 랫트, 마우스, 말, 소, 젖소 등을 포함한다.

용어 "표적"은 본 발명의 특정 항체에 의해 인식되는 화합물을 지칭한다. 용어 "표적" 및 "항원"은 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 본원에서, 예를 들면, 용어 "특이적으로 결합한다" 또는 "특이적인 결합"에서 사용된 용어 "특이성"은 본 발명의 항체가 하나 이상의 항원 결합 도메인을 통해 하나 이상의 항원에 결합하는 상대적인 친화성을 지칭하고, 상기 결합은 하나 이상의 항원 결합 도메인과 하나 이상의 항원 사이의 어느 정도의 상보성을 필요로 한다. 이 정의에 따르면, 본 발명의 항체는 관련 없는 무작위 에피토프에 결합하는 것보다 더 용이하게 한 에피토프에 결합할 때 그 에피토프에 "특이적으로 결합한다"고 한다.

본원에서 사용된 용어 "친화성"은 개별 에피토프로의 본 발명의 특정 항체의 결합 세기의 척도를 지칭한다.

본원에서 사용된 용어 "결합력"은 본 발명의 항체 집단과 특정 에피토프 사이의 복합체의 전반적 안정성, 즉, 복수의 항체와 항원의 결합의 기능적으로 조합된 세기를 지칭한다. 결합력은 특정 에피토프에 대한 개별 항원 결합 도메인의 친화성 및 본 발명의 항체의 원자가 둘 다와 관련되어 있다.

용어 "표적에 대한 작용"은 하나 이상의 표적으로의 본 발명의 항체의 결합, 이러한 결합으로부터 발생되는 생물학적 효과를 지칭한다.

용어 "면역글로불린" 및 "항체"는 생화학적으로 구별될 수 있는 다양한 넓은 부류의 폴리펩티드를 포함한다. 해당 분야의 숙련자는 중쇄가 감마, 뮤, 알파, 델타 또는 엡실론으로서 분류된다는 것을 인식할 것이다. 이 쇄의 성질에 의해, 항체의 "부류"를 각각 IgG, IgM, IgA, IgG 또는 IgE로서 결정한다. 이들 부류 각각의 변형된 버전은 숙련자에게 용이하게 식별될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체"는 무손상 항체, 변형된 항체, 항체 VL 또는 VL 도메인, CH1 도메인, C카파 도메인, C람다 도메인, Fc 도메인(하기 참조), CH2 또는 CH3 도메인을 포함하나 이들로 한정되지 않는다.

본원에서 사용된 용어 "변형된 항체"는 천연 발생 항체가 아니도록 변경된 합성 형태의 항체, 예를 들면, 적어도 2개의 중쇄 부분을 포함하되 2개의 완전한 중쇄를 포함하지 않는 항체(예를 들면, 도메인 결실 항체 또는 미니바디); 2개 이상의 항원 또는 단일 항원의 상이한 에피토프에 결합하도록 변경된 다중특이적(예를 들면, 이중특이적, 삼중특이적 등) 형태의 항체를 포함한다. 추가로, 용어 "변형된 항체"는 다가 형태의 항체(예를 들면, 동일한 항원의 3개 이상의 카피에 대한 3가, 4가 등의 항체)를 포함한다(예를 들면, 문헌[Antibody Engineering, Kontermann & Dubel, eds., 2010, Springer Protocols, Springer] 참조).

본 발명의 항체는 조류 및 포유동물을 포함하는 임의의 동물 기원으로부터 유래될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법의 항체는 인간, 쥣과(예를 들면, 마우스 및 랫트), 당나귀, 양, 토끼, 염소, 기니 피그, 낙타, 말 또는 닭이다. 본원에서 사용된 바와 같이, "인간" 항체는 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 가진 항체를 포함하고, 인간 면역글로불린 라이브러리로부터 단리된 항체, 또는 하나 이상의 인간 면역글로불린에 대하여 트랜스제닉이고 내인성 면역글로불린을 발현하지 않는 동물로부터 단리된 항체를 포함한다. 예를 들면, 미국 특허 제5,939,598호(Kucherlapati et al.)를 참조한다.

본 발명의 항체는 예를 들면, 천연 항체, 무손상 모노클로널 항체, 폴리클로널 항체, 적어도 2개의 무손상 항체로부터 형성된 다중특이적 항체(예를 들면, 이중특이적 항체), 항체 단편(예를 들면, 하나 이상의 항원에 결합하고/하거나 하나 이상의 항원을 인식하는 항체 단편), 인간화된 항체, 인간 항체(문헌[Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:2551 (1993)]; 문헌[Jakobovits et al., Nature 362:255-258 (1993)]; 문헌[Bruggermann et al., Year in Immunol. 7:33 (1993)]; 미국 특허 제5,591,669호 및 제5,545,807호), 항체 파지 라이브러리로부터 단리된 항체 및 항체 단편(문헌[McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990)]; 문헌[Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991)]; 문헌[Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991)]; 문헌[Marks et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992)]; 문헌[Waterhouse et al., Nucl. Acids Res. 21:2265-2266 (1993)])을 포함할 수 있다. 본 발명의 방법에 의해 정제된 항체는 N-말단 또는 C-말단에서 이종 폴리펩티드에 재조합적으로 융합될 수 있거나, 폴리펩티드 또는 다른 조성물에 화학적으로 컨쥬게이트(공유 컨쥬게이션 및 비공유 컨쥬게이션을 포함함)될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 방법에 의해 정제된 항체는 검출 검정에서 표지로서 유용한 분자 및 이펙터 분자, 예컨대, 이종 폴리펩티드, 약물 또는 독소에 재조합적으로 융합될 수 있거나 컨쥬게이트될 수 있다. 예를 들면, PCT 공개 WO 92/08495호; WO 91/14438호; WO 89/12624호; 미국 특허 제5,314,995호; 및 유럽 특허 제396,387호를 참조한다.

IL- 4Rα

IL-4Rα는 인터류킨-4 수용체 알파이다. IL-4Rα는 보통 다르게 나타내지 않는 한, 인간 IL-4Rα을 참조한다. 야생형 성숙 인간 IL-4Rα의 서열은 수탁 번호 P24394(Swiss-Prot) 하에 기탁되어 있으며, 이는 신호 펩티드를 포함하는 전장 IL-4Rα를 보여준다.

사이노몰거스(cynomolgus) IL-4Rα를 사내에서 시퀀싱하고, 사이노몰거스 IL-4Rα의 cDNA 서열은 SEQ ID NO: 455로 나타나 있다.

본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이, IL-4Rα는 재조합일 수 있고/거나 글리코실화 또는 비글리코실화될 수 있다. IL-4Rα는 생체 내에서 천연적으로 N-연결 글리코실화 형태로 발현된다. 또한, 글리코실화 IL-4Rα는 재조합 시스템, 예를 들어, HEK-EBNA 세포 내에서 발현될 수 있다. 또한, IL-4Rα는 에스케리키아 콜라이(E. coli) 세포에서 비-글리코실화 형태로 발현될 수 있다.

항체 분자

이것은 천연적으로 또는 부분적으로 또는 전체적으로 합성하여 생성되는 면역글로불린을 설명하는 것이다. 이 용어는 또한 항체 항원-결합 부위를 포함하는 임의의 폴리펩티드 또는 단백질을 포함한다. 본원에서, 본 발명은 천연 형태의 항체에 관한 것이 아니며, 즉, 다시 말해 그들의 천연 환경에 존재하는 것이 아니라, 천연 공급원으로부터 정제하여 단리되거나 또는 수득될 수 있거나, 다르게는 유전자 재조합에 의해서, 또는 화학 합성에 의해 수득될 수 있고, 이하에 기술되는 비천연 아미노산을 포함할 수 있는 것으로 이해해야 한다. 항체 항원-결합 부위를 포함하는 항체 단편은 이에 제한되는 것은 아니고 분자, 예컨대 Fab, Fab', Fab'-SH, scFv, Fv, dAb, Fd; 및 디아바디를 포함한다.

본 발명의 항체 분자는 IgG, 예를 들어. IgG1, IgG4, IgG2 또는 글리코실 IgG2일 수 있다.

표적 항원에 결합하는 다른 항체 또는 키메라 분자를 생성하기 위해 재조합 DNA 기술을 사용하고 모노클로널 및 다른 항체를 채택하는 것이 가능하다. 이러한 기술은 항체의 면역글로불린 가변 영역, 또는 CDR을 인코딩하는 DNA를 다른 면역글로불린의 불변 영역, 또는 불변 영역과 프레임워크 영역에 도입하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어, EP-A-184187, GB 2188638A 또는 EP-A-239400, 그리고 이후의 다수 문헌들을 참조한다. 항체를 생성하는 하이브리도마 또는 다른 세포는, 생성되는 항체의 결합 특이성을 변경시키거나 또는 변경시키지 않을 수 있는, 유전자 돌연변이 또는 다른 변화로 처리될 수 있다.

항체는 다수의 방식으로 변형될 수 있으므로, 용어 "항체 분자"는 항원에 대해 요구되는 특이성 및/또는 결합성을 갖는 항체 항원-결합 부위를 가지는 임의의 결합 구성원 또는 물질을 포함하는 것으로 간주되어야 한다. 따라서, 이 용어는 천연이든지 또는 전체적으로 또는 부분적으로 합성되든지, 항체 항원-결합 부위를 포함하는 임의의 폴리펩티드를 비롯하여, 항체 단편 및 유도체를 포함한다. 따라서, 다른 폴리펩티드(예를 들어, 다른 종에서 유래된 것이거나 또는 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 것임)에 융합되는, 항체 항원-결합 부위를 포함하는 키메라 분자, 또는 등가물이 포함된다. 키메라 항체의 클로닝 및 발현은 EP-A-0120694호 및 EP-A-0125023호, 및 이후의 다수 문헌에 기술되어 있다.

항체 조작 분야에서 이용가능한 추가적인 기술은 인간 및 인간화 항체를 단리하는 것을 가능하게 한다. 예를 들어, 인간 하이브리도마는 문헌[Kontermann & Dubel (Antibody Engineering, Springer-Verlag New York, LLC; 2001, ISBN: 3540413545)]에 기술된 바와 같이 제조될 수 있다. 항체를 생성하기 위한 다른 확립된 기술, 파지 디스플레이는 많은 간행물, 예를 들어, WO92/01047호(하기에 추가로 논의함) 및 미국 특허 제5,969,108호, 미국 특허 제5,565,332호, 미국 특허 제5,733,743호, 미국 특허 제5,858,657호, 미국 특허 제5,871,907호, 미국 특허 제5,872,215호, 미국 특허 제5,885,793호, 미국 특허 제5,962,255호, 미국 특허 제6,140,471호, 미국 특허 제6,172,197호, 미국 특허 제6,225,447호, 미국 특허 제6,291,650호, 미국 특허 제6,492,160호, 미국 특허 제6,521,404호 및 문헌[Kontermann & Dubel](상동)에 상세히 기술되어 있다. 마우스 항체 유전자가 불활성화되고 기능적으로 인간 항체 유전자로 치환되는 한편 마우스 면역계의 다른 성분은 온전하게 남겨지는 트랜스제닉 마우스는 인간 항체를 단리하는데 사용될 수 있다(문헌[Mendez et al. Nature Genet, 15(2):146 156, 1997]).

합성 항체 분자는 예를 들어, 문헌[Knappik et al. (J. Mol. Biol. 296, 57-86, 2000)] 또는 문헌[Krebs et al. (Journal of Immunological Methods, 254:67-84, 2001)]에 기술된 바와 같이, 합성되고, 적절한 발현 벡터 내로 어셈블되는 올리고뉴클레오티드의 수단에 의해 생성된 유전자로부터 발현에 의해 생성될 수 있다.

전체 항체의 단편은 항원에 결합하는 기능을 수행할 수 있다는 것이 확인되었다. 결합 단편의 예에는 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fab 단편; (ii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iii) 단일 항체의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편; (iv) VH 또는 VL 도메인으로 이루어진 dAb 단편(문헌[Ward et al., Nature 341:544-546, 1989]; 문헌[McCafferty et al. Nature, 348:552-554, 1990]; 문헌[Holt et al. Trends in Biotechnology 21, 484-490, 2003)]; (v) 단리된 CDR 영역; (vi) 2개의 연결된 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인, F(ab')2 단편; (vii) VH 도메인 및 VL 도메인이 항원 결합 부위를 형성하도록 2개의 도메인이 회합되게 하는 펩티드 링커에 의해 연결되는 단쇄 Fv 분자(scFv)(문헌[Bird et al. Science, 242, 423-426, 1988]; 문헌[Huston PNAS USA, 85, 5879-5883, 1988]); (viii) 이중특이적 단쇄 Fv 이량체(PCT/US92/09965호) 및 (ix) 유전자 융합으로 작제된 "디아바디", 다가 또는 다중특이적 단편(WO94/13804호; 문헌[Holliger et al, PNAS USA 90:6444-6448, 1993a])이 있다. Fv, scFv 또는 디아바디 분자는 VH와 VL 도메인을 연결하는 이황화 가교의 혼입에 의해 안정화될 수 있다(문헌[Reiter et al, Nature Biotech, 14:1239-1245, 1996]). CH3 도메인에 연결된 scFv를 포함하는 미니바디도 제조할 수 있다(문헌[Hu et al, Cancer Res., 56, 3055-3061, 1996]). 결합 단편의 다른 예에는 항체 힌지 영역 유래의 하나 이상의 시스테인을 포함하여, 중쇄 CH1 도메인의 카르복실 말단에 소수의 잔기가 부가된 것이 Fab 단편과는 상이한 Fab' 및 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 유리 티올기를 보유하는 Fab' 단편인 Fab'-SH가 있다.

본 발명의 항체 단편은 본원에 기술된 임의의 항체 분자, 예를 들어, 임의의 항체 1 내지 42의 VH 및/또는 VL 도메인 또는 CDR을 포함하는 항체 분자로부터 출발하여, 예컨대 효소 예를 들어 펩신 또는 파파인에 의한 분해와 같은 방법에 의해 및/또는 화학적 환원에 의한 이황화 가교의 절단에 의해 수득될 수 있다. 다른 방식에서, 본 발명에 포함되는 항체 단편은 해당 분야의 숙련자에게 잘 알려진 유전자 재조합 기술에 의해 또는 예를 들어, 자동 펩티드 합성기, 예컨대 Applied Biosystems 등의 회사에서 판매되는 것들에 의한 펩티드 합성에 의해, 또는 핵산 합성 및 발현에 의해 수득될 수 있다.

본 발명에 따른 기능성 항체 단편은 화학적 변형, 특히 PEG화, 또는 리포솜 내 혼입에 의해 반감기가 증가된 임의의 기능성 단편을 포함한다.

dAb(도메인 항체)는 항체의 작은 단량체 항원-결합 단편, 즉 항체 중쇄 또는 경쇄의 가변 영역이다(문헌[Holt et al. Trends in Biotechnology 21, 484-490, 2003]). VH dAb는 천연적으로 카멜리드(예를 들어, 낙타, 라마 등)에서 천연적으로 발생되며, 카멜리드를 표적 항원으로 면역화하고, 항원 특이적 B 세포를 단리하고, 개별 B 세포 유래의 dAb 유전자를 직접 클로닝하여 생성시킬 수 있다. dAb는 또한 세포 배양물에서 생성가능하다. 그들의 작은 크기, 우수한 가용성 및 온도 안정성은 그들이 특히 생리적으로 유용하며 선택 및 친화성 성숙에 적합하게 한다. 본 발명의 항체는 실질적으로 본원에 제시된 바와 같은 VH 또는 VL 도메인, 또는 실질적으로 본원에 제시된 바와 같은 CDR 세트를 포함하는 VH 또는 VL 도메인을 포함하는 dAb일 수 있다.

본원에서 사용되는 어구 "실질적으로 제시된 바와 같은"은 본원에 기술된 항체의 VH 또는 VL 도메인의 관련 CDR의 특징(들)이 본원에 제시된 특정 영역과 서열이 동일하거나 또는 고도로 유사할 수 있을 것임을 말한다. 본원에 기술한 바와 같이, 하나 이상의 가변 도메인의 특정 영역(들)에 대한 어구 "고도로 유사한"은 약 1 내지 12개, 예를 들어 1 내지 7개, 1 내지 6개, 1 내지 5개, 1 내지 4개, 1 내지 3개, 또는 1개 또는 2개를 포함하여, 1 내지 8개의 아미노산 치환이 VH 및/또는 VL 도메인의 CDR 내에서 이루어진다는 것으로 고려된다.

본 발명의 항체는 이중특이적 항체를 포함한다. 이중특이적 또는 이중기능성 항체는 2개의 상이한 가변 영역이 동일한 분자에 조합된 제2 세대의 모노클로널 항체를 형성한다(문헌[Holliger, P. & Winter, G. 1999 Cancer and metastasis rev. 18:411-419, 1999]). 그들의 용도는 새로운 이펙터 기능을 동원하거나 또는 종양 세포 표면 상의 몇몇 분자를 표적화하는 그들의 능력으로부터 진단 분야 및 치료법 분야 둘 모두에서 검증되었다. 이중특이적 항체를 사용하려는 경우, 이들은 다양한 방법(문헌[Holliger et al, PNAS USA 90:6444-6448, 1993])으로 제조될 수 있는, 예를 들어 화학적으로 제조하거나 또는 하이브리드 하이브리도마로부터 제조될 수 있는 통상의 이중특이적 항체이거나, 또는 상기 언급한 임의의 이중특이적 항체 단편일 수 있다. 이들 항체는 화학적 방법(문헌[Glennie et al., 1987 J. Immunol. 139, 2367-2375]; 문헌[Repp et al., J. Hemat. 377-382, 1995]) 또는 신체적(somatic) 방법(문헌[Staerz U. D. and Bevan M. J. PNAS 83, 1986]; 문헌[et al., Method Enzymol. 121:210-228, 1986])에 의해 수득될 수 있지만, 또한 이종이량체화를 강제시켜, 이에 따라 추구되는 항체의 정제 과정을 용이하게 하는 유전자 조작 기술(문헌[Merchand et al. Nature Biotech, 16:677-681, 1998])에 의해서도 수득될 수 있다. 이중특이적 항체의 예는 상이한 특이성을 갖는 2개의 항체의 결합 도메인이 사용되고 짧은 유연한 펩티드를 통해 직접적으로 연결될 수 있는 BiTE™ 기술에 의한 것들을 포함한다. 이는 짧은 단일 폴리펩티드 쇄 상에 2개의 항체를 조합시킨다. 디아바디 및 scFv는 오직 가변 도메인만을 사용하여, Fc 도메인 없이 작제하여, 잠재적으로 항-이디오타입 반응의 효과를 감소시킬 수 있다.

이중특이적 항체는 전체 IgG로서, 이중특이적 F(ab')2로서, Fab'PEG로서, 디아바디로서 또는 그 밖에 이중특이적 scFv로서 작제될 수 있다. 추가로, 2개의 이중특이적 항체를 해당 분야에 공지된 통상의 방법을 사용하여 연결시켜 4가 항체를 형성할 수 있다.

이중특이적 전체 항체와 달리, 이중특이적 디아바디도 특히 유용할 수 있는데, 그 이유는 그들이 용이하게 작제되고, 에스케리키아 콜라이(E. coli)에서 발현될 수 있기 때문이다. 적절한 결합 특이성의 디아바디(및 다수의 다른 폴리펩티드 예컨대 항체 단편)는 라이브러리로부터 파지 디스플레이(WO94/13804호)를 사용하여 용이하게 선택될 수 있다. 디아바디의 하나의 암(arm)이 예를 들어 IL-4Rα에 대해 유도된 특이성을 갖는, 불변성이 유지되어야 한다면, 다른 암이 가변적이고 적절한 특이성의 항체가 선택되는 라이브러리가 제조될 수 있다. 이중특이적 전체 항체는 문헌[Ridgeway et al., (Protein Eng., 9:616-621, 1996)]에 기술된 바와 같은 대체 조작 방법으로 제조될 수 있다.

IL-4Rα에 대한 항체를 수득하기 위해 해당 분야에서 다양한 방법이 이용가능하다. 항체는 해당 분야의 숙련자에게 널리 공지된 표준 방법에 따라 수득될 수 있는, 특히 인간, 쥣과, 키메라 또는 인간화 기원의 모노클로널 항체일 수 있다.

일반적으로, 특히 쥣과 기원의 모노클로널 항체, 또는 그들의 기능성 단편을 제조하기 위해, 특히 매뉴얼["Antibodies" (Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor N.Y., pp. 726, 1988)]에 설명된 기술 또는 문헌[Kohler and Milstein (Nature, 256:495-497, 1975)]에 기술된 하이브리도마로부터의 제조 기술을 언급할 수 있다.

모노클로널 항체, 또는 상기 모노클로널 항체에 의해 인식되는 에피토프를 함유하는 그들의 단편 중 하나는 예를 들어, IL-4Rα에 대해 면역화된 동물 세포로부터 수득될 수 있다. IL-4Rα, 또는 그의 단편 중 하나는 IL-4Rα 또는 그의 단편를 코딩하는 cDNA 서열에 포함된 핵산 서열로부터 출발하는 유전자 재조합에 의해, IL-4Rα 및/또는 그의 단편의 펩티드 서열에 포함된 아미노산 서열로부터 출발하는 펩티드 합성에 의해 특히 통상의 작업 방법에 따라 생성될 수 있다. 모노클로널 항체는 예를 들어, 상기 모노클로널 항체에 의해 인식되는 에피토프를 함유하는 IL-4Rα 또는 그의 단편 중 하나가 이미 고정된 친화성 컬럼 상에서 정제될 수 있다. 보다 구체적으로, 모노클로널 항체는 단백질 A 및/또는 G 상의 크로마토그래피에 이어서, 그 자체로, DNA 및 LPS와 잔류 단백질 오염물을 제거하기 위한 목적으로 이온 교환 크로마토그래피가 후속되거나 또는 후속되지 않고, 이어서 이량체 또는 다른 다량체의 존재로 인해 가능한 응집물을 제거하기 위해 세파로스 겔 상의 배제 크로마토그래피가 후속되거나 또는 후속되지 않고, 정제될 수 있다. 일 구현예에서, 이러한 기술 전체를 동시에 또는 연속적으로 사용할 수 있다.

항원 결합 부위는 비-항체 단백질 스캐폴드, 예컨대 피브로넥틴 또는 사이토크롬 B 등 상의 CDR의 배열에 의해(문헌[Haan & Maggos, BioCentury, 12(5):A1-A6, 2004]; 문헌[Koide, Journal of Molecular Biology, 284:1141-1151, 1998]; 문헌[Nygren et al., Current Opinion in Structural Biology, 7:463-469, 1997]), 또는 요망되는 표적에 대한 결합 특이성을 부여하도록 단백질 스캐폴드 내의 루프의 아미노산 잔기를 무작위화하거나 또는 돌연변이시켜 제공될 수 있다. 단백질 내 신규한 결합 부위를 조작하기 위한 스캐폴드는 문헌[Nygren et al.](상동)에 의해 상세히 검토되어 있다. 항체 모방체를 위한 단백질 스캐폴드는 본원에 전문이 참조로 포함되는 WO/0034784호에 개시되어 있으며, 여기서 발명자들은 적어도 하나의 무작위화된 루프를 갖는 피브로넥틴 III형 도메인을 포함하는 단백질(항체 모방체)을 기술하고 있다. 하나 이상의 CDR, 예를 들어, HCDR 세트 또는 HCDR 및/또는 LCDR3이 그라프트되는 적절한 스캐폴드는 면역글로불린 유전자 상과의 임의의 도메인 구성원에 의해 제공될 수 있다. 스캐폴드는 인간 또는 비-인간 단백질일 수 있다.

항체 서열 및/또는 항원-결합 부위에 더하여, 본 발명에 따른 항체는, 예를 들어 펩티드 또는 폴리펩티드, 예컨대 폴딩된 도메인을 형성하거나, 또는 항원에 결합하는 능력에 더하여 다른 기능적 특징을 분자에 부여하기 위한, 다른 아미노산을 포함할 수 있다. 본 발명의 항체는 검출가능한 표지를 보유하거나, 또는 (예를 들어, 펩티딜 결합 또는 링커를 통해) 독소 또는 표적화 모이어티 또는 효소에 컨쥬게이트될 수 있다. 예를 들어, 항체는 촉매 부위(예를 들어, 효소 도메인 내) 및 항원 결합 부위를 포함할 수 있으며, 여기서 항원 결합 부위는 항원에 결합하고, 이에 따라 촉매 부위를 항원에 표적화시킨다. 촉매 부위는 예를 들어, 절단에 의해, 항원의 생물학적 기능을 억제할 수 있다.

본 발명의 CDR, 예를 들어 CDR3, 또는 CDR 세트를 보유하기 위한 구조는 일반적으로, 재배열된 면역글로불린 유전자에 의해 인코딩되는 천연 발생 VH 및 VL 항체 가변 도메인의 CDR 또는 CDR 세트에 상응하는 위치에 CDR 또는 CDR 세트가 위치하는 항체 중쇄 또는 경쇄 서열 또는 그의 실질적인 부분일 것이다. 면역글로불린 가변 도메인의 구조 및 위치는 문헌[Kabat (Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4^th Edition. US Department of Health and Human Devices, 1987]), 및 그의 최신판, 예컨대 문헌[5^th Edition (Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Edition. US Department of Health and Human Services, Public Service, NIH, Washington, 1991)]을 참조하여 결정될 수 있다.

달리 나타나지 않으면, 본원에 언급된 특정 잔기, 및 CDR 및 프레임워크 영역의 위치는 카바트 넘버링 체계를 사용한다.

CDR 영역 또는 CDR은, 문헌[Kabat et al.](상동)에 의해 정의된 바와 같이 면역글로불린의 중쇄 및 경쇄의 초가변 영역을 표시하고자 한다. 항체는 전형적으로 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDR을 포함한다. 용어 CDR 또는 CDR들은 경우에 따르면, 항체가 인식하는 항원 또는 에피토프에 대한 항체의 친화성에 의한 결합의 원인이 되는 아미노산 잔기의 대부분을 함유하는 이들 영역 중 하나 또는 몇몇 영역, 또는 전체를 나타내기 위해 본원에서 사용된다.

6개의 짧은 CDR 서열 중, 중쇄의 제3 CDR(HCDR3)은 보다 큰 크기의 가변성(본질적으로 다양성을 일으키는 유전자의 배열 메커니즘에 기인한 보다 큰 다양성)을 갖는다. 가장 큰 크기가 26으로 알려져 있지만 2개 아미노산 정도로 짧을 수 있다. 기능적으로, HCDR3은 부분적으로 항체의 특이성을 결정하는 데에서 역할을 한다(문헌[Segal et al. PNAS, 71:4298-4302, 1974]; 문헌[Amit et al., Science, 233:747-753, 1986]; 문헌[Chothia et al. J. Mol. Biol., 196:901-917, 1987]; 문헌[Chothia et al. Nature, 342:877-883, 1989]; 문헌[et al. J. Immunol., 144:1965-1968, 1990]; 문헌[Sharon et al. PNAS, 87:4814-4817, 1990(a)]; 문헌[Sharon et al. J. Immunol., 144:4863-4869, 1990]; 문헌[Kabat et al., et al., J. Immunol., 147:1709-1719, 1991b]).

HCDR1은 카바트 잔기 31 내지 35로 이루어진 5개 아미노산 길이일 수 있다.

HCDR2는 카바트 잔기 50 내지 65로 이루어진 17개 아미노산 길이일 수 있다.

HCDR3은 카바트 잔기 95 내지 102로 이루어진 7개 아미노산 길이일 수 있다.

LCDR1은 카바트 잔기 24 내지 34로 이루어진 13개 아미노산 길이일 수 있다.

LCDR2는 카바트 잔기 50 내지 56으로 이루어진 7개 아미노산 길이일 수 있다.

LCDR3은 카바트 잔기 89 내지 97로 이루어진 12개 아미노산 길이일 수 있다.

항원-결합 부위

항원-결합 부위는 표적 항원의 전체 또는 부분에 결합하고 이에 상보적인 분자의 부분을 의미한다. 항체 분자에서, 그것은 항체 항원-결합 부위로 지칭되고, 표적 항원의 전체 또는 부분에 결합하고 이에 상보적인 항체의 부분을 포함한다. 항원이 큰 경우, 항체는 항원의 특정 부분에만 결합할 수 있는데, 이러한 부분을 에피토프라고 한다. 항체 항원-결합 부위는 하나 이상의 항체 가변 도메인에 의해 제공될 수 있다. 항체 항원-결합 부위는 항체 경쇄 가변 영역(VL) 및 항체 중쇄 가변 영역(VH)을 포함할 수 있다.

단리

단리는 본 발명의 항체, 또는 이러한 항체를 인코딩하는 핵산이 일반적으로 본 발명에 따라 존재하게 될 상태를 말한다. 따라서, 본 발명에 따른, VH 및/또는 VL 도메인을 포함하는 항체, 및 인코딩 핵산 분자 및 벡터는 예를 들어, 그들의 천연 환경으로부터, 실질적으로 순수하거나 또는 균질한 형태로, 또는 핵산의 경우 요구되는 기능을 갖는 폴리펩티드를 인코딩하는 서열 이외의 기원의 유전자 또는 핵산이 없거나 또는 실질적으로 없이, 단리 및/또는 정제되어 제공될 수 있다. 단리된 구성원 및 단리된 핵산은, 그들이 천연적으로 회합되어 있는 물질, 예를 들어, 그들의 천연 환경, 또는 생체 내 또는 시험관 내에서 실시되는 재조합 DNA 기술에 의해 제조되는 경우 그들이 제조되는 환경(예를 들어, 세포 배양물)에서 발견되는 다른 폴리펩티드 또는 핵산이 없거나 또는 실질적으로 없을 것이다. 구성원 및 핵산은 희석제 또는 애쥬번트와 함께 제형화될 수 있으며, 또한 실제적인 목적을 위해서, 단리되며 - 예를 들어 구성원은, 면역검정에서 사용하기 위해 마이크로타이터 플레이트를 코팅하는데 사용되는 경우 젤라틴 또는 다른 담체와 보통 혼합되거나, 또는 진단 또는 치료법에 사용되는 경우 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제와 혼합될 것이다. 항체는 천연적으로 또는 이종 진핵 세포(예를 들어, CHO 또는 NS0(ECACC 85110503)) 세포의 시스템에 의해 글리코실화되거나, 또는 그들은 (예를 들어, 원핵 세포에서의 발현에 의해 생성된다면) 비글리코실화될 수 있다.

항-IL-4Rα 항체 분자를 포함하는 이종 제제도 또한 본 발명의 일부를 형성한다. 예를 들어, 이러한 제제는 다양한 정도의 글리코실화 및/또는 예컨대 피로글루탐산 잔기 형성을 위한 N-말단 글루탐산의 고리화와 같은 유도체화된 아미노산과 함께, C-말단 라이신이 결여된 중쇄 및 전장 중쇄와 항체의 혼합물일 수 있다.

상기 언급한 바와 같이, 본 발명에 따른 항체는 IL-4Rα의 생물학적 활성을 조절하고 중화시킬 수 있다. 본원에 기술한 바와 같이, 본 발명의 IL-4Rα-항체는 중화 효력을 위해 최적화될 수 있다. 일반적으로, 효력 최적화는 선택된 항체의 서열(보통 항체의 가변 도메인 서열)을 돌연변이시켜 항체의 라이브러리를 생성한 다음, 효력에 대해 검정하고, 더욱 강력한 항체를 선택하는 것을 포함한다. 따라서, 선택된 "효력-최적화된" 항체는 라이브러리가 생성된 항체보다 더 높은 효력을 갖는 경향이 있다. 그럼에도 불구하고, 높은 효력의 항체는 또한 최적화 없이도 수득될 수 있으며, 예를 들어 높은 효력의 항체는 초기 스크린, 예를 들어, 생화학적 중화 검정으로부터 직접 수득될 수 있다. "효력 최적화된" 항체는 IL-4Rα의 하류 기능 또는 특정 활성의 중화 또는 결합 효력이 최적화된 항체를 말한다. 검정 및 효력은 본원의 다른 부분에서 더욱 상세히 기술되어 있다. 본 발명은 효력-최적화 및 비-최적화된 항체 둘 모두와, 선택된 항체로부터 효력을 최적화하기 위한 방법을 제공한다. 따라서, 본 발명은 숙련자가 높은 효력을 지닌 항체를 갖는 조성물을 생성하게 한다.

효력 최적화가 주어진 결합 구성원으로부터 더 높은 효력의 항체를 생성하는데 사용될 수 있지만, 또한, 효력 최적화 없이도 높은 효력의 항체가 수득될 수 있는 것을 주의한다.

상기 선택된 결합 구성원의 항체 VH 도메인의 아미노산 서열을 갖는 항체 VH 도메인은, 이러한 VH 도메인을 포함하는 항체처럼, 단리된 형태로 제공될 수 있다.

IL-4Rα에 결합하는 능력 및/또는 IL-4Rα로의 결합을 위해 예를 들어, 모 항체 분자(예를 들어, 항체 1) 또는 최적화된 항체 분자, 항체 2 내지 42(예를 들어, scFv 포맷 및/또는 IgG 포맷, 예를 들어 IgG 1, IgG2 또는 IgG4)와 경쟁하는 능력을 추가로 시험할 수 있다. IL-4Rα 중화 능력도 본원의 다른 부분에서 추가로 논의된 바와 같이, 시험할 수 있다.

본 발명에 따른 항체는 예를 들어, scFv 또는 IgG 1 또는 IgG2 또는 IgG4 포맷의 항체 1 내지 42 중 하나의 친화성으로, 또는 더 양호한 친화성으로 IL-4Rα에 결합할 수 있다.

본 발명에 따른 항체는 예를 들어, scFv 또는 IgG 1 또는 IgG2 또는 IgG4 포맷의 항체 1 내지 42 중 하나의 효력으로, 또는 더 양호한 효력으로 IL-4Rα의 생물학적 활성을 중화시킬 수 있다.

상이한 항체의 결합 친화성 및 중화 효력을 적절한 조건 하에서 비교할 수 있다.

본원에 개시된 항체 분자의 변이체를 본 발명에서 생성하고 사용할 수 있다. 구조/특성-활성 관계에 다변량 데이터 분석 기술을 적용하는 데에서 컴퓨터 화학의 주도 후에(문헌[Wold et al Multivariate data analysis in chemistry. Chemometrics―Mathematics and Statistics in Chemistry (Ed.: B. Kowalski), D. Reidel Publishing Company, Dordrecht, Holland, 1984 (ISBN 90-277-1846-6)]), 항체의 정량적 활성-특성 관계는 널리 알려져 있는 수학적 기술, 예컨대 통계적 회귀, 패턴 인식 및 분류법을 사용하여 도출될 수 있다(문헌[Norman et al. Applied Regression Analysis. Wiley-Interscience; 3^rd edition (April 1998) ISBN: 0471170828]; 문헌[Kandel, Abraham & Backer, Computer-Assisted Reasoning in Cluster Analysis. Prentice Hall PTR, (May 11, 1995), ISBN: 0133418847]; 문헌[Principles of Multivariate Analysis: A User's Perspective (Oxford Statistical Science Series, No 22 (Paper)). Oxford University Press; (December 2000), ISBN: 0198507089]; 문헌[Witten & Frank Data Mining: Practical Machine Learning Tools and Techniques with Java Implementations. Morgan Kaufmann; (Oct. 11, 1999), ISBN: 1558605525]; 문헌[Denison DGT. (Editor), Holmes, C. C. et al. Bayesian Methods for Nonlinear Classification and Regression (Wiley Series in Probability and Statistics). John Wiley & Sons; (July 2002), ISBN: 0471490369]; 문헌[Ghose, A K. & Viswanadhan, V N. Combinatorial Library Design and Evaluation Principles, Software, Tools, and Applications in Drug Discovery. ISBN: 0-8247-0487-8]). 항체의 특성은 항체 서열, 기능성 및 3차원 구조의 실험적 및 이론적 모델로부터 도출될 수 있으며(예를 들어, 가능한 접촉 잔기 또는 계산된 물리화학적 특성의 분석), 이들 특성은 단독으로, 그리고 조합하여 고려될 수 있다.

CDR, 항체 VH 또는 VL 도메인 및 항체의 아미노산 서열 내에 치환을 만드는데 필요한 기술은 일반적으로 해당 분야에서 이용가능하다. 변이체 서열을 활성에 최소 또는 유리한 효과를 갖는 것으로 예상되거나 그러하지 않을 수 있는 치환을 갖도록 만들고, IL-4Rα로의 결합 및/또는 중화 능력, 및/또는 임의의 다른 요망되는 특성에 대해 시험할 수 있다.

본원에 구체적으로 서열이 개시된 임의의 VH 및 VL 도메인의 가변 도메인 아미노산 서열 변이체는 논의된 바와 같이 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 특정 변이체는 하나 이상의 아미노산 서열 변경(아미노산 잔기의 부가, 결실, 치환 및/또는 삽입)을 포함할 수 있고, 약 20개 미만의 변경, 약 15개 미만의 변경, 약 12개 미만의 변경, 약 10개 미만의 변경, 또는 약 6개 미만의 변경일 수 있고, 5, 4, 3, 2 또는 1개일 수 있다. 변경은 하나 이상의 프레임워크 영역 및/또는 하나 이상의 CDR에서 이루어질 수 있다. 변경은 보통 기능 소실을 초래하지 않아서, 이에 따라, 변경된 아미노산 서열을 포함하는 항체는 IL-4Rα로의 결합 및/또는 중화 능력을 유지할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 검정에서 측정시, 변경이 이루어지지 않은 항체와 동일한 정량적 결합 및/또는 중화 능력을 유지할 수 있다. 이에 따라 변경된 아미노산 서열을 포함하는 결합 구성원은 개선된 IL-4Rα로의 결합 및/또는 중화 능력을 가질 수 있다. 실제로, 항체 20의 무작위 돌연변이유발로부터 생성된, 항체 21 내지 42는 대부분 다양한 프레임워크 영역 내의, 항체 20에 비한 치환을 나타내며, 이들 각각은 여전히 IL-4Rα로 결합하고/거나 그를 중화하며, 실제로, 일부는 개선된 IL-4Rα로의 결합 및/또는 중화 능력을 보인다.

변경은 하나 이상의 아미노산 잔기를 비천연 발생 아미노산 또는 비-표준 아미노산으로 대체하는 것, 하나 이상의 아미노산 잔기를 비-천연 발생 형태 또는 비-표준 형태로 변형시키는 것, 또는 하나 이상의 비-천연 발생 아미노산 또는 비-표준 아미노산을 서열 내로 삽입하는 것을 포함할 수 있다. 본 발명의 서열에서 변경의 수 및 위치의 예가 본원의 다른 부분에 기재되어 있다. 천연 발생 아미노산은 20개의 "표준" L-아미노산을 포함하며, 이는 그들의 표준 1-문자 코드에 의해 G, A, V, L, I, M, P, F, W, S, T, N, Q, Y, C, K, R, H, D, E로 확인된다. 비-표준 아미노산은 폴리펩티드 골격 내로 혼입될 수 있는 임의의 다른 잔기 또는 기존의 아미노산 잔기의 변형으로부터의 결과를 포함한다. 비-표준 아미노산은 천연 발생 또는 비-천연 발생일 수 있다. 몇몇의 천연 발생 비-표준 아미노산이 당업계에 알려져 있으며, 예를 들어, 4-하이드록시프롤린, 5-하이드록시라이신, 3-메틸히스티딘, N-아세틸세린 등이다(문헌[Voet & Voet, Biochemistry, 2nd Edition, (Wiley) 1995]). N-알파 위치에서 유도체화된 아미노산 잔기는 단지 아미노산 서열의 N-말단에만 위치할 것이다. 보통 본 발명에서 아미노산은 L-아미노산이지만, 일부 구현예에서, 그것은 D-아미노산일 수 있다. 따라서 변경은 L-아미노산을 D-아미노산으로 변형시키거나, 그로 대체하는 것을 포함할 수 있다. 아미노산의 메틸화, 아세틸화 및/또는 인산화 형태도 또한 알려져 있으며, 본 발명에서 아미노산은 그러한 변형으로 처리될 수 있다.

본 발명의 항체 도메인 및 항체에서 아미노산 서열은 상기 기재된 비-천연 또는 비-표준 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 비-표준 아미노산(예를 들어, D-아미노산)이 합성 동안 아미노산 서열 내로 혼입될 수 있으며, 다른 구현예에서, 비-표준 아미노산이 아미노산 서열 합성 이후에 "원래의" 표준 아미노산의 변형 또는 대체에 의해 도입될 수 있다.

비-표준 및/또는 비-천연 발생 아미노산의 사용은 구조 및 기능적 다양성을 증가시키며, 따라서 본 발명의 항체에서 요망되는 IL-4Rα 결합 및 중화 특성을 달성할 가능성을 증가시킬 수 있다. 또한, D-아미노산 및 유사체는 표준 L-아미노산과 비교하여 더 나은 약동학 프로파일을 갖는 것으로 나타났으며, 이는 동물, 예를 들어, 인간에 투여한 후에 L-아미노산을 갖는 폴리펩티드의 생체내 분해에 기인한다.

본 발명의 CDR-유도 서열을 지니는 신규한 VH 또는 VL 영역은 전체 가변 도메인 내에 돌연변이를 생성하도록 하나 이상의 선택된 VH 및/또는 VL 유전자의 무작위 돌연변이유발을 사용하여 생성될 수 있다. 그러한 기술은 문헌[Gram et al. (Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 89:3576-3580, 1992)]에 기재되어 있는데, 여기서는 오류-유발(error-prone) PCR을 사용하였다. 일부 구현예에서, 1개 또는 2개의 아미노산 치환이 전체 가변 도메인 또는 CDR 세트 내에서 이루어진다. 사용할 수 있는 다른 방법은 VH 또는 VL 유전자의 CDR 영역에 돌연변이유발을 지시하는 것이다. 이러한 기술은 문헌[Barbas et al. (Proc. Natl. Acad. Sci., 91:3809-3813, 1994)] 및 문헌[Schier et al. (J. Mol. Biol. 263:551-567, 1996)]에 개시되어 있다.

상기 기술된 모든 기술은 해당 분야에 그 자체로 알려져 있으며, 숙련자는 그러한 기술을 이용하여 해당 분야의 통상적인 방법을 사용하여 본 발명의 항체를 제공할 수 있을 것이다.

본 발명의 추가의 양태는 IL-4Rα에 대한 항체 항원-결합 부위를 수득하는 방법을 제공하고, 당해 방법은 본원에 제시된 VH 도메인의 아미노산 서열 내의 하나 이상의 아미노산의 부가, 결실, 치환 또는 삽입에 의해서, VH 도메인의 아미노산 서열 변이체인 VH 도메인을 제공하는 단계, 임의로 이에 따라 제공된 VH 도메인을 하나 이상의 VL 도메인과 조합하는 단계, 및 VH 도메인 또는 VH/VL 조합물 또는 조합물들을 시험하여, 임의로 하나 이상의 기능적 특성, 예를 들어 IL-4Rα 활성을 중화하는 능력을 갖는, IL-4Rα에 대한 항체 또는 항체 항원-결합 부위를 확인하는 단계를 포함한다. 상기 VL 도메인은 실질적으로 본원에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 가질 수 있다. 본원에 개시된 VL 도메인의 하나 이상의 서열 변이체를 하나 이상의 VH 도메인과 조합하는 유사 방법을 사용할 수 있다.

상기 언급한 바와 같이, 실질적으로 본원에 제시된 바와 같은 CDR 아미노산 서열은 CDR로서 인간 항체 가변 도메인 또는 그의 실질적인 부분에 포함될 수 있다. 실질적으로 본원에 제시된 바와 같은 HCDR3 서열은 본 발명의 구현예를 대표하며, 예를 들어 이들 각각은 HCDR3로서 인간 중쇄 가변 도메인 또는 그의 실질적인 부분에 포함될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 가변 도메인은 임의의 생식계열 또는 재배열된 인간 가변 도메인으로부터 수득되거나 또는 유도될 수 있거나, 또는 공지된 인간 가변 도메인의 공통 또는 실제 서열에 기초하여 합성 가변 도메인일 수 있다. 가변 도메인은 비-인간 항체로부터 유도될 수 있다. 본 발명의 CDR 서열(예를 들어, CDR3)은 재조합 DNA 기술을 사용하여 CDR(예를 들어, CDR3)이 결여된 가변 도메인의 레퍼토리 로 도입될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Marks et al. (Bio/Technology, 10:779-783, 1992)]은 항체 가변 도메인의 레퍼토리를 생성하는 방법을 기술하고 있으며, 여기서 가변 도메인 영역의 5' 말단에 지정되거나 또는 이에 인접한 공통 프라이머를 인간 VH 유전자의 제3 프레임워크 영역에 대한 공통 프라이머와 함께 사용하여 CDR3이 결여된 VH 가변 도메인의 레퍼토리를 제공한다. Marks 등은 추가로 이러한 레퍼토리를 특정 항체의 CDR3와 조합할 수 있는 방법에 대해 기술하고 있다. 유사한 기술을 사용하여, 본 발명의 CDR3-유도 서열을 CDR3이 결여된 VH 또는 VL 도메인의 레퍼토리와 셔플링할 수 있으며, 셔플링된 완전한 VH 또는 VL 도메인은 동족 VL 또는 VH 도메인과 조합되어 본 발명의 항체를 제공한다. 그 다음, 적절한 항체을 선택할 수 있도록, 레퍼토리는 적합한 숙주 시스템, 예를 들어, 본원에 전문이 참조로 포함되는 WO92/01047호, 또는 문헌[Kay, Winter & McCafferty (Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, San Diego: Academic Press, 1996)]을 포함하는 임의의 다수 후속 문헌의 파지 디스플레이 시스템에서 디스플레이될 수 있다. 레퍼토리는 10⁴개 이상의 개별 구성원 유래의 임의의 구성원, 예를 들면 적어도 10⁵개, 적어도 10⁶개, 적어도 10⁷개, 적어도 10⁸개, 적어도 10⁹개, 또는 적어도 10¹⁰개의 구성원으로 이루어질 수 있다. 다른 적절한 숙주 시스템은 효모 디스플레이, 박테리아 디스플레이, T7 디스플레이, 바이러스 디스플레이, 세포 디스플레이, 리보솜 디스플레이 및 공유 디스플레이를 포함하지만 이들에 한정되지 않는다.

유사한 셔플링 또는 조합 기술이 또한 문헌[Stemmer (Nature, 370:389-391, 1994)]에 의해 개시되어 있으며, Stemmer는 β-락타마제 유전자와 관련된 기술을 기술하였지만 이 접근법이 항체 생성에 사용될 수 있음을 관찰하였다.

다시, 본 발명의 VL CDR3을, 교체하려는 CDR3을 포함하거나 또는 CDR3 인코딩 영역이 결여된 VL 도메인을 인코딩하는 핵산의 레퍼토리와 조합하는 유사 방법을 사용할 수 있다.

유사하게, 본원에 개시된 다른 VH 및 VL 도메인, CDR 세트 및 HCDR 세트 및/또는 LCDR 세트를 사용할 수 있다.

유사하게, 하나 이상의, 또는 3개 모두의 CDR은, VH 또는 VL 도메인의 레퍼토리에 그라프트될 수 있으며, 이는 이어서 IL-4Rα에 대한 항체 또는 항체들에 대해 스크리닝될 수 있다.

대안적으로, 임의의 본 발명의 항체 중 임의의 것, 예를 들어, 항체 1 내지 42의 VH 및/또는 VL 도메인을 인코딩하는 핵산을 돌연변이유발(예를 들어, 표적화 또는 무작위) 처리하여 하나 이상의 돌연변이 핵산을 생성할 수 있다. 그 다음, 이들 서열에 의해 인코딩되는 항체가 생성될 수 있다.

일 구현예에서, 항체 1 내지 42 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 또는 항체 1 내지 42 HCDR 세트 중 하나 이상이 사용될 수 있고/거나 항체 1 내지 42 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 또는 항체 1 내지 42 LCDR 세트 중 하나 이상이 사용될 수 있다.

특정 구현예에서, 공여자 핵산은 VH 또는 VL 도메인 또는 그 안의 임의의 CDR 영역의 표적화 또는 무작위 돌연변이유발에 의해 생성된다.

다른 구현예에서, 생성물 VH 또는 VL 도메인은 항체 불변 영역에 부착된다.

다른 구현예에서, 생성물 VH 또는 VL 도메인, 및 짝 VL 또는 VH 도메인은 각각 IgG, scFV 또는 Fab 항체 분자에 포함된다.

다른 구현예에서, 회수된 결합 구성원 또는 항체 분자를 IL-4Rα 중화 능력에 대해 시험한다.

일부 구현예에서, 면역글로불린 가변 도메인의 상당한 부분은, 적어도 3개의 CDR 영역과, 그들의 개재 프레임워크 영역을 함께 포함할 것이다. 당해 부분은 또한 제1 및 제4 프레임워크 영역 중 하나 또는 둘 모두의 적어도 약 50%를 포함할 수 있으며, 50%는 제1 프레임워크 영역의 C-말단 50%, 및 제4 프레임워크 영역의 N-말단 50%이다. 가변 도메인의 상당한 부분의 N-말단 또는 C-말단에서의 추가의 잔기는 천연 발생 가변 도메인 영역과 보통 회합되지 않은 것들일 수 있다. 예를 들어, 재조합 DNA 기술에 의해 이루어지는 본 발명의 항체의 작제는 도입되는 링커에 의해 인코딩되는 N- 또는 C-말단 잔기의 도입을 초래하여, 클로닝 또는 다른 조작 단계를 용이하게 할 수 있다. 다른 조작 단계는 본 발명의 가변 도메인을, 항체 불변 영역, 다른 가변 도메인(예를 들어, 디아바디의 생성에서) 또는 본원의 다른 부분에서 더욱 상세히 논의된 바와 같은 검출가능/기능성 표지를 포함하는 추가의 단백질 서열에 연결시키기 위한 링커의 도입을 포함한다.

본 발명의 일부 양태에서, 항체는 한 쌍의 VH 및 VL 도메인을 포함하지만, VH 또는 VL 도메인 서열 중 어느 하나에 기초한 단일 결합 도메인이 본 발명의 추가의 양태를 형성한다. 단일 면역글로불린 도메인, 특히 VH 도메인은 특이적인 방식으로 표적 항원에 결합할 수 있는 것으로 알려져 있다. 예를 들면, 상기 dAb의 논의를 참조한다.

단일 결합 도메인 중 어느 하나의 경우에, 이들 도메인을 사용하여, IL-4Rα에 결합할 수 있는 2-도메인 결합 구성원을 형성할 수 있는 상보적 도메인을 스크리닝할 수 있다. 이는 본원에 전문이 참조로 포함되는 WO92/01047호에 개시된 바와 같은, 소위 계층적 이중 조합 접근법을 사용하는 파지 디스플레이 스크리닝 방법에 의해 달성될 수 있으며, 여기서 H 또는 L 쇄 클론 중 어느 하나를 함유하는 개별 콜로니를 사용하여 다른 쇄(L 또는 H)를 인코딩하는 클론의 완전한 라이브러리를 감염시키고, 생성된 2-쇄 결합 구성원을 상기 문헌에 기재되어 있는 바와 같은 파지 디스플레이 기술에 따라 선택한다. 이러한 기술은 문헌[Marks et al. (Bio/Technology, 10:779-783, 1992)]에도 개시되어 있다.

본 발명의 항체는 추가로 항체 불변 영역 또는 그의 부분, 예를 들어, 인간 항체 불변 영역 또는 그의 부분을 포함할 수 있다. 예를 들어, VL 도메인은 그의 C-말단에서 인간 Cκ 또는 Cλ 쇄, 예를 들어, Cλ 쇄를 포함하는 항체 경쇄 불변 도메인에 부착될 수 있다. 유사하게, VH 도메인에 기초한 항체는 그의 C-말단에서 임의의 항체 아이소타입, 예를 들어, IgG, IgA, IgD, IgY, IgE 및 IgM, 및 임의의 아이소타입 하위부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2; 특히 IgG1 및 IgG4)로부터 유도된 면역글로불린 중쇄의 전체 또는 부분(예를 들어, CH1 도메인)에 부착될 수 있다. IgG1은 그의 이펙터 기능 및 제조 용이성으로 인하여 유리하다. 이들 특성을 가지며 가변 영역을 안정화시키는 임의의 합성 또는 기타 불변 영역 변이체도 또한, 본 발명의 구현예에서 유용하다.

용어 "아이소타입"은 항체의 중쇄 또는 경쇄 불변 영역의 분류를 의미한다. 항체의 불변 도메인은 항원으로의 결합에 관여되지 않지만, 다양한 이펙터 기능을 나타낸다. 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열에 따라, 주어진 인간 항체 또는 면역글로불린은 면역글로불린의 주요 5개 부류: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM 중 하나로 지정될 수 있다. 이들 부류 중 몇몇은 하위부류(아이소타입), 예를 들어 IgG1(감마 1), IgG2(감마 2), IgG3(감마 3), 및 IgG4(감마 4), 및 IgA1 및 IgA2로 추가로 분류될 수 있다. 상이한 부류의 면역글로불린에 상응하는 중쇄 불변 영역을 각각 α, δ, ε, γ 및 μ라고 한다. 상이한 부류의 면역글로불린의 구조 및 3차원 입체구조는 잘 알려져 있다. 다양한 인간 면역글로불린 부류 중에서, 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, 및 IgM만이 보체를 활성화시키는 것으로 알려져 있다. 인간 IgG1 및 IgG3은 인간에서 ADCC를 매개하는 것으로 알려져 있다. 인간 경쇄 불변 영역은 주요한 2개 부류, 카파 및 람다로 분류될 수 있다.

항체 포맷

본 발명은 또한 본 발명의 항체, 특히 변형된 IgG 불변 도메인을 갖는 본 발명의 항체를 포함한다. 기능적 특징, 예를 들어, 혈청 내에서의 긴 반감기 및 다양한 이펙터 기능을 매개하는 능력을 갖는, 인간 IgG 부류의 항체가 본 발명의 특정 구현예에서 사용된다(문헌[Monoclonal Antibodies: Principles and Applications, Wiley-Liss, Inc., Chapter 1 (1995)]). 인간 IgG 부류 항체는 하기 4개의 하위부류로 추가로 분류된다: IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4. 다수의 연구가 지금까지 IgG 부류 항체의 이펙터 기능으로서 ADCC 및 CDC에 대해 수행되었고, 인간 IgG 부류의 항체 중에서, IgG1 하위부류가 인간에서 최고의 ADCC 활성 및 CDC 활성을 갖는다고 보고되었다(문헌[Chemical Immunology, 65, 88 (1997)]).

따라서, 본 발명의 추가의 양태에 따르면, 항체, 특히, 항체의 생물학적 이펙터 기능을 변화, 즉, 증가, 감소 또는 제거하도록 변형된 항체, 예를 들어, 변형된 Fc 영역을 갖는 항체가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 바와 같은 항체는 보체를 고정하고 보체 의존적 세포독성(CDC)에 참여하는 그들의 능력이 증진되도록 변형될 수 있다. 다른 구현예에서, 항체는 이펙터 세포를 활성화시키고 항체 의존적 세포독성(ADCC)에 참여하는 그들의 능력이 증진되도록 변형될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 본원에 개시된 바와 같은 항체는 이펙터 세포를 활성화시키고 항체 의존적 세포독성(ADCC)에 참여하는 그들의 능력이 증진되고, 또한 보체를 고정시키고 보체 의존적 세포독성(CDC)에 참여하는 그들의 능력이 증진되도록 변형될 수 있다.

일부 구현예에서, 본원에 개시된 바와 같은 항체는 보체를 고정하고 보체 의존적 세포독성(CDC)에 참여하는 그들의 능력이 감소되도록 변형될 수 있다. 다른 구현예에서, 항체는 이펙터 세포를 활성화시키고 항체 의존적 세포독성(ADCC)에 참여하는 그들의 능력이 감소되도록 변형될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 본원에 개시된 바와 같은 항체는 이펙터 세포를 활성화시키고 항체 의존적 세포독성(ADCC)에 참여하는 그들의 능력이 감소되고, 또한 보체를 고정하고 보체 의존적 세포독성(CDC)에 참여하는 그들의 능력이 감소되도록 변형될 수 있다.

일 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 항체는 비교가능한 분자에 비하여 ADCC 활성이 증진된다. 특정 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 항체는 ADCC 활성이 비교가능한 분자보다 적어도 2배, 또는 적어도 3배, 또는 적어도 5배 또는 적어도 10배 또는 적어도 50배 또는 적어도 100배 더 크다. 다른 특정 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 항체는 비교가능한 분자에 비하여 Fc 수용체 FcγRIIIA로의 결합이 증진되고 ADCC 활성이 증진된다. 다른 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 비교가능한 분자에 비하여 ADCC 활성이 증진되고, 혈청 반감기가 증진된다.

일 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 항체는 비교가능한 분자에 비하여 ADCC 활성이 감소된다. 특정 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 항체는 ADCC 활성이 비교가능한 분자보다 적어도 2배, 또는 적어도 3배, 또는 적어도 5배 또는 적어도 10배 또는 적어도 50배 또는 적어도 100배 더 낮다. 다른 특정 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 비교가능한 분자에 비하여 Fc 수용체 FcγRIIIA로의 결합이 감소되고 ADCC 활성이 감소된다. 다른 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 비교가능한 분자에 비하여 ADCC 활성이 감소되고 혈청 반감기가 증진된다.

일 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 비교가능한 분자에 비하여 CDC 활성이 증진된다. 특정 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 CDC 활성이 비교가능한 분자보다 적어도 2배, 또는 적어도 3배, 또는 적어도 5배 또는 적어도 10배 또는 적어도 50배 또는 적어도 100배 더 크다. 다른 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 비교가능한 분자에 비하여 CDC 활성이 증진되고 혈청 반감기가 증진된다.

일 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 비교가능한 분자에 비하여 하나 이상의 Fc 리간드로의 결합이 감소된다. 다른 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 Fc 리간드에 대한 친화성이 비교가능한 분자보다 적어도 2배, 또는 적어도 3배, 또는 적어도 5배, 또는 적어도 7배, 또는 적어도 10배, 또는 적어도 20배, 또는 적어도 30배, 또는 적어도 40배, 또는 적어도 50배, 또는 적어도 60배, 또는 적어도 70배, 또는 적어도 80배, 또는 적어도 90배, 또는 적어도 100배, 또는 적어도 200배 더 낮다. 특정 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 Fc 수용체로의 결합이 감소된다. 다른 특정 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 Fc 수용체 FcγRIIIA로의 결합이 감소된다. 추가의 특정 구현예에서, 본원에 기술된 Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 Fc 수용체 FcγRIIIA에 대한 친화성이 비교가능한 분자보다 적어도 약 5배 더 낮고, 여기서 상기 Fc 변이체는 Fc 수용체 FcγRIIB에 대한 친화성이 비교가능한 분자의 약 2배 이내이다. 또 다른 특정 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 Fc 수용체 FcRn으로의 결합이 감소된다. 또 다른 특정 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 비교가능한 분자에 비하여 C1q로의 결합이 감소된다.

일 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 비교가능한 분자에 비하여 하나 이상의 Fc 리간드(들)로의 결합이 증진된다. 다른 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 Fc 리간드에 대한 친화성이 비교가능한 분자보다 적어도 2배, 또는 적어도 3배, 또는 적어도 5배, 또는 적어도 7배, 또는 적어도 10배, 또는 적어도 20배, 또는 적어도 30배, 또는 적어도 40배, 또는 적어도 50배, 또는 적어도 60배, 또는 적어도 70배, 또는 적어도 80배, 또는 적어도 90배, 또는 적어도 100배, 또는 적어도 200배 더 크다. 특정 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 Fc 수용체로의 결합이 증진된다. 다른 특정 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 Fc 수용체 FcγRIIIA로의 결합이 증진된다. 추가의 특정 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 Fc 수용체 FcγRIIB로의 결합이 증진된다. 또 다른 특정 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 Fc 수용체 FcRn으로의 결합이 증진된다. 또 다른 특정 구현예에서, Fc 변이체 영역을 갖는 결합 구성원은 비교가능한 분자에 비하여 C1q로의 결합이 증진된다.

일 구현예에서, 본 발명의 항-IL-4Rα 항체는 변이체 Fc 도메인을 포함하고, 여기서 상기 변이체 Fc 도메인은 비교가능한 비-변이체 Fc 도메인에 비하여 Fc 감마 수용체 IIB로의 결합 친화성이 증진되었다. 추가의 구현예에서, 본 발명의 항-IL-4Rα 항체는 변이체 Fc 도메인을 포함하고, 여기서 상기 변이체 Fc 도메인은 Fc 감마 수용체 IIB에 대한 친화성이 비교가능한 비-변이체 Fc 도메인보다 적어도 2배, 또는 적어도 3배, 또는 적어도 5배, 또는 적어도 7배, 또는 적어도 10배, 또는 적어도 20배, 또는 적어도 30배, 또는 적어도 40배, 또는 적어도 50배, 또는 적어도 60배, 또는 적어도 70배, 또는 적어도 80배, 또는 적어도 90배, 또는 적어도 100배, 또는 적어도 200배 더 크다.

일 구현예에서, 본 발명은 Fc 변이체 영역을 갖는 항체 또는 이들을 포함하는 제형을 제공하며, 여기서 Fc 영역은 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링시, 228, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 243, 244, 245, 247, 251, 252, 254, 255, 256, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 279, 280, 284, 292, 296, 297, 298, 299, 305, 313, 316, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 339, 341, 343, 370, 373, 378, 392, 416, 419, 421, 440 및 443으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 위치에 비-고유 아미노산 잔기를 포함한다. 임의로, Fc 영역은 해당 분야의 숙련자에게 공지된 추가의 및/또는 대안적인 위치에 비-고유 아미노산 잔기를 포함할 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제5,624,821호; 제6,277,375호; 제6,737,056호; PCT 특허 공개 WO 01/58957호; WO 02/06919호; WO 04/016750호; WO 04/029207호; WO 04/035752호; WO 04/074455호; WO 04/099249호; WO 04/063351호; WO 05/070963호; WO 05/040217호, WO 05/092925호 및 WO 06/020114호 참조).

"비-고유 아미노산 잔기"는 천연 발생 단백질 내 언급된 위치에 존재하지 않는 아미노산 잔기를 의미한다. 전형적으로, 이는 다른 20개의 천연 발생(통상의) 아미노산 또는 비-고전적 아미노산 또는 화학적 아미노산 유사체 중 하나를 포함할 수 있는, 하나 이상의 다른 잔기로 고유/천연 아미노산 잔기가 치환되는 것을 의미한다. 비-고전적 아미노산은 일반적으로 통상의 아미노산의 D-이성질체, α-아미노 이소부티르산, 4-아미노부티르산, Abu, 2-아미노부티르산, γ-Abu, ε-Ahx, 6-아미노 헥산산, Aib, 2-아미노 이소부티르산, 3-아미노 프로피온산, 오르니틴, 노르류신, 노르발린, 하이드록시프롤린, 사르코신, 시트룰린, 시스테산, t-부틸글리신, t-부틸알라닌, 페닐글리신, 사이클로헥실알라닌, β-알라닌, 플루오로-아미노산, 디자이너 아미노산, 예컨대, β-메틸 아미노산, Cα-메틸 아미노산, Nα-메틸 아미노산, 및 아미노산 유사체를 포함하지만, 이들에 한정되지 않는다.

특정 구현예에서, 본 발명은 변이체 Fc 영역을 갖는 항체 또는 변이체 Fc 영역을 갖는 이러한 결합 구성원을 포함하는 제형을 제공하며, 여기서 Fc 영역은 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링시 234D, 234E, 234N, 234Q, 234T, 234H, 234Y, 2341, 234V, 234F, 235A, 235D, 235R, 235W, 235P, 235S, 235N, 235Q, 235T, 235H, 235Y, 2351, 235V, 235F, 236E, 239D, 239E, 239N, 239Q, 239F, 239T, 239H, 239Y, 2401, 240A, 240T, 240M, 241W, 241 L, 241Y, 241E, 241R. 243W, 243L 243Y, 243R, 243Q, 244H, 245A, 247L, 247V, 247G, 251F, 252Y, 254T, 255L, 256E, 256M, 2621, 262A, 262T, 262E, 2631, 263A, 263T, 263M, 264L, 2641, 264W, 264T, 264R, 264F, 264M, 264Y, 264E, 265G, 265N, 265Q, 265Y, 265F, 265V, 2651, 265L, 265H, 265T, 2661, 266A, 266T, 266M, 267Q, 267L, 268E, 269H, 269Y, 269F, 269R, 270E, 280A, 284M, 292P, 292L, 296E, 296Q, 296D, 296N, 296S, 296T, 296L, 2961, 296H, 269G, 297S, 297D, 297E, 298H, 2981, 298T, 298F, 2991, 299L, 299A, 299S, 299V, 299H, 299F, 299E, 3051, 313F, 316D, 325Q, 325L, 3251, 325D, 325E, 325A, 325T, 325V, 325H, 327G, 327W, 327N, 327L, 328S, 328M, 328D, 328E, 328N, 328Q, 328F, 3281, 328V, 328T, 328H, 328A, 329F, 329H, 329Q, 330K, 330G, 330T, 330C, 330L, 330Y, 330V, 3301, 330F, 330R, 330H, 331G, 331A, 331L, 331M, 331F, 331W, 331K, 331Q, 331E, 331S, 331V, 331I, 331C, 331Y, 331H, 331R, 331N, 331D, 331T, 332D, 332S, 332W, 332F, 332E, 332N, 332Q, 332T, 332H, 332Y, 332A, 339T, 370E, 370N, 378D, 392T, 396L, 416G, 419H, 421K, 440Y 및 434W로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 비-고유 아미노산 잔기를 포함한다. 임의로, Fc 영역은 해당 분야의 숙련자에게 공지된 추가의 및/또는 대안적인 비-고유 아미노산 잔기를 포함할 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제5,624,821호; 제6,277,375호; 제6,737,056호; PCT 특허 공개 WO 01/58957호; WO 02/06919호; WO 04/016750호; WO 04/029207호; WO 04/035752호 및 WO 05/040217호 참조).

본원에 사용되는 바와 같은 Fc 영역이 제1 불변 영역 면역글로불린 도메인을 배제한 항체의 불변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 것이 이해될 것이다. 따라서, Fc는 IgA, IgD, 및 IgG의 마지막 2개의 불변 영역 면역글로불린 도메인, 및 IgE 및 IgM의 마지막 3개의 불변 영역 면역글로불린 도메인, 및 이들 도메인의 N-말단 유연성 힌지를 의미한다. IgA 및 IgM에 있어서, Fc는 J 쇄를 포함할 수 있다. IgG에 있어서, Fc는 면역글로불린 도메인 C감마2 및 C감마3(Cγ2 및 Cγ3) 및 C감마1(Cγ1)과 C감마2(Cγ2) 사이의 힌지를 포함한다. Fc 영역의 경계가 다양할 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 통상 잔기 C226 또는 P230 내지 그의 카르복실 말단을 포함하는 것으로 정의되며, 여기서 넘버링은 문헌[Kabat et al. (1991, NIH Publication 91-3242, National Technical Information Service, Springfield, Va.)]에서와 같은 EU 인덱스에 따른다. "카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스"는 상기 문헌[Kabat et al.]에 기술된 바와 같은 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 의미한다. Fc는 단리된 이러한 영역, 또는 항체, 항체 단편 또는 Fc 융합 단백질에서의 이러한 영역을 의미할 수 있다. 변이체 Fc 단백질은 Fc의 비천연 발생 변이체인 변이체 Fc 영역을 포함하는 단백질을 포함하나 이에 한정되지 않는 Fc 영역을 포함하는 항체, Fc 융합체, 또는 임의의 단백질 또는 단백질 도메인일 수 있다.

본 발명은 비교가능한 분자(예를 들어, 야생형 Fc 영역을 갖는 것을 제외하고 동일한 아미노산 서열을 갖는 단백질)에 비하여 Fc 리간드(예를 들어, Fc 수용체, C1q)에 대한 결합 특성이 변경된, 변이체 Fc 영역을 갖는 항체를 포함한다. 결합 특성의 예는 결합 특이성, 평형 해리 상수(K_D), 해리 및 회합 속도(각각 k_off 및 k_on), 결합 친화성 및/또는 결합력을 포함하나 이들에 한정되지 않는다. 일반적으로, 낮은 K_D를 갖는 결합 분자(예를 들어, 변이체 Fc 단백질 예컨대 항체)가 높은 K_D를 갖는 결합 분자보다 바람직할 수 있는 것으로 이해된다. 그러나, 일부 예에서, k_on 또는 k_off의 값이 K_D의 값보다 더 관련이 있을 수 있다. 해당 분야의 숙련자는 주어진 항체 응용을 위해서 어떠한 동역학 변수가 가장 중요한지 결정할 수 있다.

그의 리간드에 대한 Fc 도메인의 친화성 및 결합 특성은 평형 방법(예를 들어, 효소 연결 면역흡착 검정(ELISA), 또는 방사선면역검정(RIA)), 또는 동역학(예를 들어, BIACORE® 분석) 및 다른 방법, 예를 들어, 간접적 결합 검정, 경쟁적 억제 검정, 형광 공명 에너지 전달(FRET), 겔 전기영동 및 크로마토그래피(예를 들어, 겔 여과)를 포함하나 이들에 한정되지 않는, Fc-FcγR 상호작용, 즉 FcγR로의 Fc 영역의 특이적인 결합을 결정하기 위한 해당 분야에 공지된 다양한 시험관 내 검정 방법(생화학 또는 면역학 기반의 검정)에 의해 결정될 수 있다. 이들 및 다른 방법은 시험 중인 성분 중 하나 이상에 표지를 사용하고/거나, 발색, 형광, 발광 또는 동위원소 표지를 포함하나 이들에 한정되지 않는 다양한 검출 방법을 사용할 수 있다. 결합 친화성 및 동역학의 상세한 설명은 문헌[Paul, W. E., ed., Fundamental Immunology, 4th Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999)]에서 찾을 수 있으며, 이는 항체-면역원 상호작용에 집중하였다. Fc 영역을 포함하는 단백질의 혈청 반감기는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합 친화성을 증가시킴으로써 증가될 수 있다. 일 구현예에서, Fc 변이체 단백질은 비교가능한 분자에 비하여 혈청 반감기가 증진된다.

컨쥬게이션 및 반감기

본원에 사용되는 용어 "항체 반감기"는 그들의 투여 후의 항체 분자의 평균 생존 시간의 척도인 항체의 약동학적 특성을 의미한다. 항체 반감기는 예를 들어, 혈청 또는 혈장에서 측정시, 즉, 순환 반감기 또는 다른 조직에서 측정시, 환자의 신체 또는 그의 특정 구획으로부터 알려져 있는 양의 면역글로불린의 50%가 제거되는데 요구되는 시간으로 표현될 수 있다. 반감기는 면역글로불린이나 또는 면역글로불린 부류에 따라 달라질 수 있다. 일반적으로, 항체 반감기 증가는 투여된 항체에 대한 순환에서의 평균 체류 시간(MRT)의 증가를 초래한다.

특정 구현예에서, 본 발명의 항-IL-4Rα 항체 또는 조성물 및 방법의 반감기는 적어도 약 4 내지 7일이다. 특정 구현예에서, 본 발명의 조성물 및 방법의 항-IL-4Rα 항체의 평균 반감기는 적어도 약 2 내지 5일, 3 내지 6일, 4 내지 7일, 5 내지 8일, 6 내지 9일, 7 내지 10일, 8 내지 11일, 8 내지 12, 9 내지 13, 10 내지 14, 11 내지 15, 12 내지 16, 13 내지 17, 14 내지 18, 15 내지 19, 또는 16 내지 20일이다. 다른 구현예에서, 본 발명의 조성물 및 방법의 항-IL-4Rα 항체의 평균 반감기는 적어도 약 17 내지 21일, 18 내지 22일, 19 내지 23일, 20 내지 24일, 21 내지 25일, 22 내지 26일, 23 내지 27일, 24 내지 28일, 25 내지 29일, 또는 26 내지 30일이다. 추가의 구현예에서, 본 발명의 조성물 및 방법의 항-IL-4Rα 항체의 반감기는 최대 약 50일일 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 조성물 및 방법의 항체의 반감기는 해당 분야에 공지된 방법에 의해 연장될 수 있다. 이러한 연장은 차례로 항체 조성물의 투여량 및/또는 투여 빈도를 감소시킬 수 있다. 생체 내 반감기가 개선된 항체 및 그들의 제조 방법은 미국 특허 제6,277,375호, 미국 특허 제7,083,784호; 및 국제 공개 WO 98/23289호 및 WO 97/3461호에 개시되어 있다.

생체 내 항-IL-4Rα 항체의 혈청 순환은 또한 비활성 중합체 분자, 예컨대 고분자량 폴리에틸렌글리콜(PEG)을 다기능성 링커를 사용하거나 또는 사용하지 않고, 항체의 N-말단 또는 C-말단에 PEG의 위치 특이적 컨쥬게이션을 통해 또는 리실 잔기에 존재하는 엡실론-아미노기를 통해 항체에 부착시킴으로써 연장될 수 있다. 최소의 생물학적 활성의 소실을 초래하는 선형 또는 분지형 중합체 유도체화가 사용될 수 있다. 컨쥬게이션 정도를 SDS-PAGE 및 질량 분광분석법에 의해 면밀하게 모니터링하여 항체로의 PEG 분자의 적절한 컨쥬게이션을 보장할 수 있다. 미반응된 PEG는 크기-배제 또는 이온-교환 크로마토그래피에 의해 항체-PEG 컨쥬게이트로부터 분리될 수 있다. PEG-유도체화된 항체는 해당 분야의 숙련자에게 공지된 방법을 사용하여, 예를 들어 본원에 기술된 면역검정에 의해 결합 활성 및 생체 내 효능에 대해 시험될 수 있다.

추가로, 본 발명의 조성물 및 방법의 항체를 알부민에 컨쥬게이트시켜, 항체가 생체 내에서 보다 안정하게 만들거나 또는 생체 내에서 더 긴 반감기를 갖게 할 수 있다. 당해 기술은 해당 분야에 널리 알려져 있으며, 예를 들어 국제 공개 WO 93/15199호, WO 93/15200호, 및 WO 01/77137호; 및 유럽 특허 EP 413,622호를 참조하며, 이들 전부는 본원에 참조로 포함된다.

특정 구현예에서, 본원에 개시된 바와 같은 항체 및 본 발명의 조성물의 반감기는 적어도 약 4 내지 7일이다. 특정 구현예에서, 본원에 개시된 바와 같은 항체 및 본 발명의 조성물의 평균 반감기는 적어도 약 2 내지 5일, 3 내지 6일, 4 내지 7일, 5 내지 8일, 6 내지 9일, 7 내지 10일, 8 내지 11일, 8 내지 12, 9 내지 13, 10 내지 14, 11 내지 15, 12 내지 16, 13 내지 17, 14 내지 18, 15 내지 19, 또는 16 내지 20일이다. 다른 구현예에서, 본원에 개시된 바와 같은 항체 및 본 발명의 조성물의 평균 반감기는 적어도 약 17 내지 21일, 18 내지 22일, 19 내지 23일, 20 내지 24일, 21 내지 25일, 22 내지 26일, 23 내지 27일, 24 내지 28일, 25 내지 29일, 또는 26 내지 30일이다. 추가의 구현예에서, 본원에 개시된 바와 같은 항체 및 본 발명의 조성물의 반감기는 최대 약 50일일 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항체 및 조성물의 반감기는 해당 분야에 알려져 있는 방법에 의해 연장될 수 있다. 이러한 연장은 차례로 항체 조성물의 투여량 및/또는 투여 빈도를 감소시킬 수 있다. 생체 내 반감기가 개선된 항체 및 그들의 제조 방법은 미국 특허 제6,277,375호; 미국 특허 제7,083,784호; 및 국제 공개 WO 1998/23289호 및 WO 1997/34361호에 개시되어 있다.

돌연변이 및 변형

다른 구현예에서, 본 발명은 변이체 Fc 영역을 갖는 항체, 또는 이들을 포함하는 제형을 제공하고, 여기서 Fc 영역은 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링시, 239, 330 및 332로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 위치에 적어도 하나의 비-고유 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명은 Fc 변이체를 제공하고, 여기서 Fc 영역은 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링시 239D, 330L 및 332E로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 비-고유 아미노산을 포함한다. 임의로, Fc 영역은 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링시 252, 254, 및 256으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 위치에 추가적인 비-고유 아미노산을 추가로 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명은 Fc 변이체를 제공하고, 여기서 Fc 영역은 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링시 239D, 330L 및 332E로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 비-고유 아미노산 및 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링시, 252Y, 254T 및 256E로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 위치에 적어도 하나의 비-고유 아미노산을 포함한다.

다른 구현예에서, 본 발명은 변이체 Fc 영역을 갖는 항체, 또는 이들을 포함하는 제형을 제공하고, 여기서 Fc 영역은 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링시 234, 235 및 331로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 위치에 적어도 하나의 비-고유 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명은 Fc 변이체를 제공하고, 여기서 Fc 영역은 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링시 234F, 235F, 235Y, 및 331S로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 비-고유 아미노산을 포함한다. 추가의 특정 구현예에서, 본 발명의 Fc 변이체는 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링시, 234F, 235F, 및 331S 아미노산 잔기를 포함한다. 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 Fc 변이체는 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링시 234F, 235Y, 및 331S 아미노산 잔기를 포함한다. 임의로, Fc 영역은 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링시 252, 254, 및 256으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 위치에 추가적인 비-고유 아미노산 잔기를 추가로 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명은 Fc 변이체를 제공하며, 여기서 Fc 영역은 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링시 234F, 235F, 235Y, 및 331S로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 비-고유 아미노산; 및 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링시, 252Y, 254T 및 256E로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 위치에 적어도 하나의 비-고유 아미노산을 포함한다.

특정 구현예에서, 본 발명은 변이체 Fc 영역을 갖는 본 발명의 항체를 제공하고, 여기서 변이체는 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링시, 위치 252에 티로신(Y) 잔기, 위치 254에 트레오닌(T) 잔기 및 위치 256에 글루탐산(E) 잔기를 포함한다.

이하 YTE 돌연변이로 지칭되는, 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링되는 바와 같은 M252Y, S254T 및 T256E 돌연변이는 특정 IgG1 항체 분자의 혈청 반감기를 증가시키는 것으로 보고된 바 있다(문헌[Dall'Acqua et al. J. Biol. Chem. 281(33):23514-23524, 2006]).

추가의 구현예에서, 본 발명은 변이체 Fc 영역을 갖는 본 발명의 항체를 제공하고, 여기서 변이체는, 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링시 위치 252에 티로신(Y) 잔기, 위치 254에 트레오닌(T) 잔기, 위치 256에 글루탐산(E) 잔기, 및 위치 241에 프롤린(P) 잔기를 포함한다.

이하 P 돌연변이로 지칭되는, 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링되는 바와 같은 세린228프롤린 돌연변이(S228P)는 특정 IgG4 분자의 안정성을 증가시키는 것으로 보고된 바 있다(문헌[Lu et al., J Pharmaceutical Sciences 97(2):960-969, 2008]). 주목할 것은, 문헌[Lu et al.]에서, 그것이 위치 241로서 언급되어 있는데, 그 이유는 상기 문헌에서 그들이 카바트에 나타난 바와 같은 "EU 인덱스"가 아닌 카바트 넘버링 시스템을 사용하기 때문이다.

이러한 P 돌연변이는 L235E와 조합되어 추가로 ADCC를 낙아웃시킬 수 있다. 이러한 돌연변이 조합을 이하에는 이중 돌연변이(DM)로 지칭한다.

특정 구현예에서, 본 발명은 변이체 Fc 영역을 갖는 본 발명의 항체를 제공하고, 여기서 변이체는 카바트에 나타난 바와 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링시, 위치 234에 페닐알라닌(F) 잔기, 위치 235에 페닐알라닌(F) 잔기 또는 글루탐산(E) 잔기, 및 위치 331에 세린(S) 잔기를 포함한다. 이러한 돌연변이 조합을 이하에서는 삼중 돌연변이체(TM)라 지칭한다.

추가의 구현예에 따르면, 본 발명은 Fc 영역에 YTE 돌연변이를 갖는 IgG1 포맷의 본 발명의 항체를 제공한다.

추가의 구현예에 따르면, 본 발명은 Fc 영역에 TM 돌연변이를 갖는 IgG1 포맷의 본 발명의 항체를 제공한다.

추가의 구현예에 따르면, 본 발명은 Fc 영역에 YTE 돌연변이 및 TM 돌연변이를 갖는 IgG1 포맷의 본 발명의 항체를 제공한다.

구현예에 따르면, 본 발명은 Fc 영역에 YTE 및 P 돌연변이를 갖는 IgG4 포맷의 본 발명의 항체를 제공한다.

구현예에 따르면, 본 발명은 Fc 영역에 YTE 및 DM 돌연변이를 갖는 IgG4 포맷의 본 발명의 항체를 제공한다.

본 발명의 특정 구현예에 따르면, IgG1 YTE, IgG1 TM, IgG1 TM+YTE, IgG4 P, IgG4 DM, IgG4 YTE, IgG4 P+YTE 및 IgG4 DM+YTE로부터 선택되는 포맷의 본 발명의 항체가 제공된다.

사용되는 명명법에서, DM + YTE는 불변 도메인 Fc 영역이 이중 돌연변이(S228P 및 L235E) 및 YTE 돌연변이(M252Y, S254T 및 T256E) 둘 모두를 지니는 것을 의미하는 것이 이해될 것이다.

비천연 발생 Fc 영역의 생성 방법은 해당 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 아미노산 치환 및/또는 결실은 위치 지정 돌연변이유발(문헌[Kunkel, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:488-492, 1985]), PCR 돌연변이유발(문헌[Higuchi, in "PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications", Academic Press, San Diego, pp. 177-183, 1990]), 및 카세트 돌연변이유발(문헌[Wells et al., Gene 34:315-323, 1985])을 포함하나 이들에 한정되지 않는 돌연변이유발 방법에 의해 생성될 수 있다. 바람직하게, 위치 지정 돌연변이유발은 중첩-연장 PCR 방법(문헌[Higuchi, in "PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification", Stockton Press, New York, pp. 61-70, 1989])에 의해 수행된다. 중첩-연장 PCR 기술(문헌[Higuchi], 상동)은 또한 임의의 요망되는 돌연변이(들)를 표적 서열(출발 DNA)에 도입하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 중첩-연장 방법에서 제1차의 PCR은 외측 프라이머(프라이머 1) 및 내측 돌연변이유발 프라이머(프라이머 3), 및 개별적으로 제2 외측 프라이머(프라이머 4) 및 내측 프라이머(프라이머 2)를 사용하여 표적 서열을 증폭시켜, 2개의 PCR 세그먼트(세그먼트 A 및 B)를 제공하는 것을 포함한다. 내측 돌연변이유발 프라이머(프라이머 3)는 요망되는 돌연변이(들)를 특정하는 표적 서열에 대한 미스매치를 포함하도록 설계된다. 제2차의 PCR에서, 제1차의 PCR의 생성물(세그먼트 A 및 B)을 2개의 외측 프라이머(프라이머 1 및 4)를 사용하여 PCR에 의해 증폭시킨다. 생성된 전장 PCR 세그먼트(세그먼트 C)를 제한 효소로 분해하고, 생성된 제한 단편을 적절한 벡터 내로 클로닝한다. 돌연변이유발의 제1 단계로서, 출발 DNA(예를 들어, Fc 융합 단백질, 항체 또는 단순히 Fc 영역을 인코딩함)를 돌연변이유발 벡터 내로 작동가능하게 클로닝한다. 프라이머는 요망되는 아미노산 치환을 반영하도록 설계된다. 변이체 Fc 영역의 생성에 유용한 다른 방법이 해당 분야에 공지되어 있다(예를 들어, 미국 특허 제5,624,821호; 제5,885,573호; 제5,677,425호; 제6,165,745호; 제6,277,375호; 제5,869,046호; 제6,121,022호; 제5,624,821호; 제5,648,260호; 제6,528,624호; 제6,194,551호; 제6,737,056호; 제6,821,505호; 제6,277,375호; 미국 특허 공개 제2004/0002587호 및 PCT 공개 WO 94/29351호; WO 99/58572호; WO 00/42072호; WO 02/060919호; WO 04/029207호; WO 04/099249호; WO 04/063351호; WO 06/23403호 참조).

본 발명의 일부 구현예에서, 본원에 제공되는 항체의 글리코실화 패턴을 변형시켜, ADCC 및 CDC 이펙터 기능을 증진시킬 수 있다(문헌[Shields RL et al., (JBC. 277:26733-26740, 2002]; 문헌[Shinkawa T et al., JBC. 278:3466-3473, 2003]; 및 문헌[Okazaki A et al., J. Mol. Biol., 336:1239, 2004] 참조). 일부 구현예에서, Fc 변이체 단백질은 하나 이상의 조작된 당형태, 즉 Fc 영역을 포함하는 분자에 공유적으로 부착된 탄수화물 조성을 포함한다. 조작된 당형태는 이펙터 기능을 증진시키거나 감소시키는 것을 포함하나 이들에 한정되지 않는 다양한 목적에 유용할 수 있다. 조작된 당형태는 해당 분야의 숙련자에게 알려져 있는 임의의 방법에 의해, 예를 들어 조작된 발현 균주 또는 변이체 발현 균주를 사용하거나, 하나 이상의 효소, 예를 들어 DI N-아세틸글루코사미닐 트랜스퍼라제 III(GnTI11)과 동시-발현시키거나, 또는 다양한 유기체 또는 다양한 유기체 유래의 세포주에서 Fc 영역을 포함하는 분자를 발현시키거나, 또는 Fc 영역을 포함하는 분자가 발현된 후 탄수화물(들)을 변형시킴으로써 생성될 수 있다. 조작된 당형태를 생성하는 방법은 해당 분야에 알려져 있고, 문헌[Umana et al, Nat. Biotechnol 17:176-180, 1999]; 문헌[Davies et al., Biotechnol Bioeng 74:288-294, 2007]; 문헌[Shields et al, J Biol Chem 277:26733-26740, 2002]; 문헌[Shinkawa et al., J Biol Chem 278:3466-3473, 2003)], 미국 특허 제6,602,684호; 미국 출원 제10/277,370호; 미국 출원 제10/113,929호; PCT WO 00/61739A1호; PCT WO 01/292246A1호; PCT WO 02/311140A1호; PCT WO 02/30954A1호에 기술된 것들; Potillegent™ 기술(Biowa, Inc. Princeton, N.J.); GlycoMAb™ 글리코실화 조작 기술(Glycart Biotechnology AG, Zurich, Switzerland)을 포함하나 이들에 한정되지 않는다. 예를 들어, WO 00/061739호; EA01229125호; US 20030115614호; 문헌[Okazaki et al., JMB. 336:1239-49, 2004]을 참조한다.

표지화

본 발명의 항체 제형의 항체는 검출가능한 또는 기능성 표지로 표지화될 수 있다. 표지는 형광물질, 방사성표지, 효소, 화학발광물질 또는 감광물질을 포함하나 이들에 한정되지 않는, 신호를 생성하거나 또는 신호를 생성하도록 유도될 수 있는 임의의 분자일 수 있다. 따라서, 결합은 형광 또는 발광, 방사능, 효소 활성 또는 흡광을 검출함으로써 검출 및/또는 측정될 수 있다.

적합한 표지는 예시에 의해 제한 없이, 효소, 예컨대 알칼리성 포스파타제, 글루코스-6-포스페이트 데하이드로게나제("G6PDH") 및 서양고추냉이 퍼옥시다제; 염료; 형광물질, 예컨대 플루오레세인, 로다민 화합물, 파이코에리트린, 파이코시아닌, 알로파이코시아닌, o-프탈데히드, 플루오레사민, 형광단, 예컨대 란탄계 크립테이트 및 킬레이트(Perkin Elmer and Cis Biointernational); 화학발광물질, 예컨대 이소루미놀; 감작제; 보조효소; 효소 기질; ¹²⁵I, ¹³¹I, ³⁵S, ³²P, ¹⁴C, ³H, ⁵⁷Co, ⁹⁹Tc 및 ⁷⁵Se를 포함하나 이들에 한정되지 않는 방사성표지 및 본원에 언급된 다른 방사성표지; 입자, 예컨대 라텍스 또는 탄소 입자; 금속 졸; 미소결정; 리포좀; 세포 등을 포함하며, 이들은 염료, 촉매 또는 다른 검출가능한 기로 추가로 표지화될 수 있다. 적합한 효소 및 보조효소는 미국 특허 제4,275,149호 및 미국 특허 제4,318,980호에 개시되어 있으며, 이들 각각은 그들 전문이 본원에 참조로 포함된다. 적합한 형광물질 및 화학발광물질도 또한 미국 특허 제4,275,149호에 개시되어 있으며, 이는 전문이 본원에 참조로 포함된다. 표지는 추가로 화학적 모이어티, 예컨대 특정 동족 검출가능한 모이어티, 예를 들어 표지된 아비딘 또는 스트렙트아비딘으로의 결합을 통해 검출될 수 있는 비오틴을 포함한다. 검출가능한 표지는 해당 분야에 공지된 통상의 화학 방법을 사용하여 본 발명의 항체에 부착될 수 있다.

표지가 외부 수단, 예를 들어 육안의 검사, 전자기 방사선, 열 및 화학 시약에 의해 검출가능한 신호를 생성할 수 있는 수많은 방법이 존재한다. 표지는 또한 지지체 또는 본 발명의 항체에 결합하는 다른 결합 구성원에 결합될 수 있다.

표지는 직접적으로 신호를 생성할 수 있고, 따라서, 신호를 생성하기 위하여 추가의 성분이 필요하지 않다. 수많은 유기 분자, 예를 들어, 형광물질은 자외선 및 가시광선을 흡수할 수 있고, 여기서 흡광은 이들 분자에 에너지를 전달하여 그들을 여기 에너지 상태로 상승시킨다. 이러한 흡수된 에너지는 이어서 제2 파장에서 광의 방출에 의해 소산된다. 이러한 제2 파장 방출은 또한 표지된 수용 분자에 에너지를 전달하고, 생성된 에너지는 이어서 광의 방출, 예를 들여 형광 공명 에너지 전달(FRET)에 의해 수용 분자로부터 소산될 수 있다. 직접적으로 신호를 생성하는 다른 표지는 방사성 동위원소 및 염료를 포함한다.

대안적으로, 표지는 신호를 생성하기 위해 다른 성분을 필요로 할 수 있으며, 이어서, 신호 생성 시스템은 측정가능한 신호를 생성하는데 필요한 모든 성분을 포함할 것이고, 이는 기질, 보조효소, 인핸서, 추가의 효소, 효소 생성물과 반응하는 물질, 촉매, 활성화제, 보조인자, 억제제, 스캐빈저, 금속 이온, 및 신호 생성 물질의 결합에 필요한 특이적 결합 물질을 포함할 수 있다. 적합한 신호 생성 시스템의 상세한 논의는 미국 특허 제5,185,243호에서 찾을 수 있고, 이는 전문이 본원에 참조로 포함된다.

결합 구성원, 항체, 또는 그의 기능성 단편 중 하나는, 검출가능한 및/또는 정량화가능한 신호를 수득하도록 면역컨쥬게이트의 형태로 존재할 수 있다. 면역컨쥬게이트는 예를 들어, 효소, 예컨대 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, 알파-D-갈락토시다제, 글루코스 옥시다제, 글루코스 아밀라제, 탄산 탈수효소, 아세틸콜린에스테라제, 리소자임, 말레이트 데하이드로게나제 또는 글루코스 6-포스페이트 데하이드로게나제와, 또는 분자, 예컨대 비오틴, 디곡시게닌 또는 5-브로모데옥시우리딘에 의해 컨쥬게이트될 수 있다. 형광 표지도 마찬가지로 본 발명에 따른 면역컨쥬게이트 또는 그들의 기능성 단편에 컨쥬게이트될 수 있으며, 특히, 플루오레세인 및 그의 유도체, 형광 색소, 로다민 및 그의 유도체, GFP("녹색 형광 단백질"에 대해 GFP), 단실(dansyl), 움벨리페론(umbelliferone), 란탄계 킬레이트 또는 크립테이트(cryptate), 예를 들어 유로피움(Europium) 등을 포함한다.

면역컨쥬게이트 또는 그들의 기능성 단편은 해당 분야의 숙련자에게 알려져 있는 방법에 의해 제조될 수 있다. 그들은 효소 또는 형광 표지에 직접적으로 또는 스페이서 기 또는 연결기, 예컨대 폴리알데히드, 예컨대 글루타르알데히드, 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 디에틸렌트리아민펜타아세트산(DPTA)의 개재에 의해, 또는 치료적 컨쥬게이트에 대해 상기 언급된 것들과 같은 커플링 작용제의 존재하에 커플링될 수 있다. 플루오레세인 유형의 표지를 함유하는 컨쥬게이트는 이소티오시아네이트와의 반응에 의해 제조될 수 있다. 다른 면역컨쥬게이트는 또한 화학발광 표지, 예컨대 루미놀 및 디옥세탄, 생물발광 표지, 예컨대 루시퍼라제 및 루시페린, 또는 그 밖의 방사성 표지, 예컨대 요오드123, 요오드125, 요오드126, 요오드131, 요오드133, 브롬77, 테크네튬99m, 인듐111, 인듐113m, 갈륨67, 갈륨68, 황35, 인32, 탄소14, 삼중수소(수소3), 코발트57, 셀레늄75, 루테늄95, 루테늄97, 루테늄103, 루테늄105, 수은107, 수은203, 레늄99m, 레늄101, 레늄105, 스칸듐47, 텔루륨121m, 텔루륨122m, 텔루륨125m, 툴륨165, 툴륨167, 툴륨168, 불소8, 이트륨199를 포함할 수 있다. 치료적 방사성 동위원소를 항체에 직접적으로 또는 킬레이트화제, 예컨대 상기 언급된 EDTA, DTPA를 통해 커플링시키기 위해 존재하는 해당 분야의 숙련자에게 공지된 방법은 진단에 사용할 수 있는 방사성 원소에 대해 사용될 수 있다. 또한, 클로라민 T 방법(문헌[Hunter and Greenwood, Nature, 194:495, 1962])에 의한 Na[I 125]로의 표지화 또는 그 밖에 Crockford 등(전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제4,424,200호)의 기술에 의한 테크네튬99m으로의 표지화, 또는 Hnatowich(전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제4,479,930호)에 의해 기술된 바와 같이 DTPA를 통한 부착을 언급하는 것이 가능하다. 추가의 면역컨쥬게이트는 독소 모이어티, 예컨대 슈도모나스(Pseudomonas) 외독소(PE 또는 그의 세포독성 단편 또는 돌연변이체), 디프테리아 독소 또는 그의 세포독성 단편 또는 돌연변이체, 보튤리늄 독소 A 내지 F, 리신 또는 그의 세포독성 단편, 아브린 또는 그의 세포독성 단편, 사포린 또는 그의 세포독성 단편, 미국자리공 항바이러스 독소 또는 그의 세포독성 단편 및 브리오딘 1 또는 그의 세포독성 단편의 군으로부터 선택되는 독소 모이어티를 포함할 수 있다.

본 발명은 IL-4Rα로의 본원에서 제공된 바와 같은 항체의 결합을 야기하거나 또는 그를 가능하게 하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 언급된 바와 같이, 이러한 결합은 예를 들어, 항체 또는 항체를 인코딩하는 핵산의 투여 후에 생체 내에서 일어날 수 있거나, 또는 그것은 예를 들어 ELISA, 웨스턴 블롯팅, 면역세포화학, 면역-침전, 친화성 크로마토그래피, 및 본원에 기술된 바와 같은 생화학 또는 세포 기반 검정에서 시험관 내에서 일어날 수 있다. 본 발명은 또한 예를 들어 바이오센서 시스템에서 본 발명에 따른 항체를 사용함으로써, 직접적으로 항원의 수준을 측정하는 것을 제공한다.

IL-4Rα로의 결합 구성원의 결합의 양이 결정될 수 있다. 정량화는 진단적으로 관심이 있을 수 있는, 시험 시료 중 항원의 양과 관련이 있을 수 있다. IL-4Rα 결합에 대한 스크리닝 및/또는 그의 정량화는 예를 들어, 본원의 다른 곳에 언급된 바와 같은 IL-4Rα와 관련된 질병 또는 장애에 대해 환자를 스크리닝하는데 유용할 수 있다. 일 구현예에서, 다른 것들 중, 본 발명의 진단 방법은 (i) 대상체로부터 조직 또는 유체 시료를 수득하는 단계, (ii) 상기 조직 또는 유체 시료를 본 발명의 하나 이상의 항체에 노출시키는 단계; 및 (iii) 대조군 시료와 비교하여 결합된 IL-4Rα를 검출하는 단계로서, 대조군과 비교하여 IL-4Rα 결합의 양의 증가가 IL-4Rα 발현 또는 활성의 비정상적인 수준을 나타낼 수 있는 단계를 포함한다. 시험하려는 조직 또는 유체 시료는 혈액, 혈청, 소변, 생검물, 종양 또는 비정상적인 IL-4Rα 수준을 함유하는 것으로 의심되는 임의의 조직을 포함한다. 비정상적인 IL-4Rα 수준 또는 활성에 대해 양성으로 시험된 대상체는 또한 이후 본원에 개시된 치료 방법으로부터 이익을 얻을 수 있다.

해당 분야의 숙련자는 본원에 개시된 방법에 비추어, 그들의 선호도 및 일반적인 지식에 따라, 항원으로의 결합 구성원이 결합을 결정하는 적합한 방식을 선택할 수 있다.

IL- 4Rα 항체

본 발명은 인터류킨(IL)-4 수용체 알파에 대한 항체(IL-4Rα, CD 124로도 지칭) 및 예를 들어, IL-4Rα, IL-4 및/또는 IL-13과 관련된 장애의 치료 또는 예방에서의 그들의 치료적 용도에 관한 것이며, 상기 장애의 예에는 천식, COPD 및 염증성 피부 장애, 예를 들어, 아토피 피부염이 있다. 예를 들어, 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제8,092,804호를 참조한다.

인간 IL-4Rα 서브유닛(Swiss Prot 수탁 번호 P24394)은 높은 친화성으로 인간 IL-4에 결합하는 140 kDa 1형 막 단백질이다(문헌[Andrews et al J. Biol. Chem. (2002) 277:46073-46078]). IL-4/IL-4Rα 복합체는 IL-4 상의 도메인을 통해, 통상의 감마 쇄(γc, CD132) 또는 IL-13R알파1(IL-13Rα1) 서브유닛와 이량체화하여, 각각 I형 및 II형 수용체로 통상적으로 지칭되는 2개의 상이한 신호전달 복합체를 생성할 수 있다. 대안적으로, IL-13은 IL-13Rα1에 결합하여, IL-13/IL-13Rα1 복합체를 형성할 수 있으며, 이는 IL-4Rα 서브유닛을 동원하여, II형 수용체 복합체를 형성한다. 따라서, IL-4Rα는 IL-4 및 IL-13 둘 모두의 생물학적 활성을 매개한다(문헌[Gessner et al, Immunobiology, 201:285, 2000]에 의해 검토). 시험관내 연구에 의해, IL-4 및 IL-13이 다수의 세포 유형에서, 예를 들어, T 세포, B 세포, 호산구, 비만 세포, 호염기구, 기도 평활근 세포, 호흡 상피 세포, 폐 섬유아세포 및 내피 세포에서 이펙터 기능을 활성화시키는 것으로 나타났다(문헌[Steinke et al, Resp Res, 2:66, 2001] 및 문헌[Willis-Karp, Immunol Rev, 202:175, 2004]에 의해 검토).

IL-4Rα는 다양한 세포 유형(문헌[Lowenthal et al, J Immunol, 140:456, 1988]), 예를 들어, 말초 혈액 T 세포, 단핵구, 기도 상피 세포, B 세포 및 폐 섬유아세포에서 낮은 수(100 내지 5000개 분자/세포)로 발현된다. I형 수용체는 조혈 세포에서 우세적인 한편, II형 수용체는 조혈 세포 및 비-조혈 세포 둘 모두에서 발현된다.

IL-4Rα에 대한 항체가 설명되어 있다. 2가지 예로는 중화 쥣과 항-IL-4Rα 모노클로널 항체 MAB230(클론 25463) 및 I6146(클론 25463.11)이 있고, 이들은 각각 R&D Systems(Minneapolis, MN) 및 Sigma(St Louis, MO)에 의해 공급된다. 이들 항체는 IgG2a 아형이고, 정제된 재조합 인간 IL-4Rα(배큘로바이러스 유래)로 면역화시킨 마우스로부터 발생한 마우스 하이브리도마로부터 발생되었다. 2가지의 추가의 중화 쥣과 항-IL-4Rα 항체 M57 및 X2/45-12가 각각 BD Biosciences(Franklin Lakes, NJ) 및 eBioscience(San Diego, CA)에 의해 공급된다. 이들은 IgG1 항체이고 역시 재조합 가용성 IL-4Rα로 면역화시킨 마우스로부터 발생한 마우스 하이브리도마에 의해 생성된다.

완전한 인간 항체는 쥣과 또는 키메라 항체보다 임상적 유용성이 보다 양호한 듯하다. 이것은 마우스 면역글로불린의 Fc 부분에 대해 유도된 인간 항-마우스 항체(HAMA)가 빈번하게 생성되고, 이로 인해 신속한 제거 및 가능한 아나필락시스 반응이 초래되기 때문이다(문헌[Brochier et al,. Int. J. Immunopharm., 17:41-48, 1995]). 키메라 항체(마우스 가변 영역과 인간 불변 영역)가 쥣과 mAb보다 면역원성이 더 낮지만, 인간 항-키메라 항체(HACA) 반응이 보고된 바 있다(문헌[Bell and Kamm, Aliment. Pharmacol. Ther., 14:501-514, 2000]).

WO 01/92340호(Immunex)는 가용성 IL-4R 펩티드로 트랜스제닉 마우스를 면역화시키고, IL-4R에 대한 항체를 분비하는 하이브리도마 세포주를 생성하는 것을 포함하는 절차에 의해 생성된 IL-4 수용체에 대한 인간 모노클로널 항체를 기술하고 있으며, 주요 항체 12B5는 IgG1 항체이고 완전하게 인간 항체인 것으로 개시되어 있다. WO 05/047331호(Immunex)는 VH 영역의 올리고뉴클레오티드 돌연변이유발을 통해 12B5(H1L1로 재명명함)로부터 유래된 추가의 항체를 개시하고 있다. 각각의 돌연변이된 VH 쇄는 6개의 별개의 VL 쇄 중 하나와 쌍을 이루어, 항체 분자의 작은 레퍼토리를 생성하였다.

WO 07/082,068호(Aerovance)는 R121D 및 Y124D의 치환을 갖는 돌연변이체 인간 IL-4 단백질의 투여를 포함하는 천식의 치료 방법을 개시한다. 본 명세서는 약제학적 조성물로 투여되는 이러한 IL-4 뮤테인이 수용체로의 야생형 huIL-4 및 야생형 huIL-13의 결합을 길항할 수 있다고 교시하고 있다.

WO 08/054,606호(Regeneron)는 인간 항체를 생성할 수 있는 트랜스제닉 마우스에서 상승되는 인간 IL-4R에 대한 특정 항체를 개시하고 있다.

다른 종, 예를 들어 사이노몰거스 원숭이 유래의 오르토로거스(orthologous) 단백질과도 교차 반응성을 나타내는 인간 IL-4Rα에 대한 항체를 발견하고 개발하는 것은 이점과 이익이 존재한다. 이러한 항체는 생체 내 안전성 및 약리학의 면에서 이러한 항체의 특성화를 용이하게 할 것이다. 예를 들어, 인간 활성과 10배 미만으로 상이한, 다른 종에 대한 효력 또는 친화성은 이러한 평가에 적절할 수 있다. 그러나, 인간 IL-4Rα 단백질은 침팬지를 제외한 다른 종으로부터의 오르토로거스 IL-4Rα 단백질과 비교적 적은 유사성을 나타낸다. 따라서, 임상 개발을 위한 안전성 및 독성 평가에 적합한 것으로 널리 고려되는 종에 대해 교차 반응성을 갖는 임상 용도에 적절한 높은 친화성 및 효력의 항체를 개발하는 것은 매우 힘든 작업일 것이다.

적절하게 설계된 선택 기술 및 검정을 통해, 본 발명자들은 인간 및 사이노몰거스 원숭이 IL-4Rα의 생물학적 활성을 억제하는 IL-4α에 대한 안정한 항체 조성물을 개발하였다.

미국 특허 제8,092,804호에 상세히 설명한 바와 같이, 초기 선도물질 확인 프로그램으로부터, 사이노몰거스 IL-4Rα로의 어느 정도의, 그러나 약한 결합 및 기능적 중화를 나타내는 인간 IL-4Rα에 대한 단일 항체 분자를 선택하였다. 이러한 모 항체 분자로부터의 표적화된 및 무작위 돌연변이유발 및 추가의 선택의 계획되고 정해진 과정 후에, 크게 개선된 특성을 갖는 더 큰 패널의 항체 분자가 발생되었다. 최적화된 항체, 및 모 항체(항체 1)의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하여, VH 및 VL 영역이 도 13, 14, 15 및 16에 도시되어 있다. 이들 항체 분자, VH, VL 및 CDR은 본 발명의 양태를 이룬다.

야생형 IL-4Rα에 더하여, 본 발명의 항체는 또한 통상의 인간 변이체인, I75V IL-4Rα에 결합하는 것으로 확인되었다.

본원에서는 높은 효력으로 IL-4Rα의 생물학적 효과를 중화시키고, 높은 친화성으로 IL-4Rα에 결합하며, IL-4 및 IL-13에 의해 유도되는 신호전달을 억제하는 항체가 기재된다. 특히, 항체는 높은 친화성 복합체, 예를 들어 IL-4:IL-4Rα:γc, IL-4:IL-4Rα:IL-13Rα1, IL-13:IL-13Rα1:IL-4Rα로부터의 신호전달을 억제한다. 이러한 작용은 IL-4 및 IL-13 둘 모두의 신호전달을 방지한다. 부가적으로, 데이터는 항체가 IL-4Rα 제1형 및 제2형 복합체의 상호작용 및 신호전달을 억제하는 것을 나타낸다. 항체의 이들 특성 및 기타 특성 및 효과가 하기에서 추가로 상세히 기술된다.

항체는 IL-4Rα, IL-4 또는 IL-13이 발현되는 장애, 예를 들어, 본원의 다른 부분에서 언급되는 IL-4Rα-, IL-4- 또는 IL-13-관련 장애 중 하나 이상, 예컨대 천식, COPD 또는 염증성 피부 장애, 예를 들어, 아토피 피부염을 치료하는데 유용하다.

본원의 다른 부분에 기술된 바와 같이, IL-4Rα로의 항체의 결합은 표면 플라스몬 공명, 예를 들어 BIAcore를 사용하여 결정될 수 있다.

표면 플라스몬 공명 데이터는 1:1 랑뮈어 결합 모델(동시 ka kd)에 핏팅시킬 수 있으며, 친화성 상수 KD를 속도 상수 kd1/ka1의 비로부터 계산할 수 있다. 본 발명의 항체는 인간 IL-4Rα에 결합하기 위한 1가 친화성(monovalent affinity)이 20 nM 미만일 수 있다. 다른 구현예에서, 인간 IL-4Rα에 결합하기 위한 1가 친화성은 10 nM 미만, 예를 들어, 8 nM 미만, 5 nM 미만이다. 다른 구현예에서, 결합 구성원은 또한 사이노몰거스 IL-4Rα에 결합한다. 일 구현예에서, 본 발명의 항체는 인간 IL-4Rα에 결합하기 위한 1가 친화성이 0.05 내지 12 nM 범위이다. 일 구현예에서, 본 발명의 항체는 인간 IL-4Rα에 결합하기 위한 1가 친화성이 0.1 내지 5 nM 범위이다. 일 구현예에서, 본 발명의 항체는 인간 IL-4Rα에 결합하기 위한 1가 친화성이 0.1 내지 2 nM 범위이다.

일 구현예에서, 본 발명의 항체는 인간 IL-4Rα에 면역특이적으로 결합할 수 있고, 본원에 기술하거나 해당 분야의 숙련자에게 공지된 방법(예를 들어, BIAcore 검정, ELISA)(Biacore International AB, Uppsala, Sweden)을 사용하여 평가시, 5000 pM 미만, 4000 pM 미만, 3000 pM 미만, 2500 pM 미만, 2000 pM 미만, 1500 pM 미만, 1000 pM 미만, 750 pM 미만, 500 pM 미만, 250 pM 미만, 200 pM 미만, 150 pM 미만, 100 pM 미만, 75 pM 미만의 친화성(KD)을 가질 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 항-IL-4Rα 항체는 인간 IL-4Rα에 면역특이적으로 결합할 수 있고, 본원에 기술되거나 해당 분야의 숙련자에게 공지된 방법(예를 들어, BIAcore 검정, ELISA)을 사용하여 평가시, 500 pM, 100 pM, 75 pM 또는 50 pM의 친화성(KD)을 가질 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체는 높은 효력으로 IL-4Rα를 중화시킬 수 있다. 중화는 IL-4Rα에 의해 매개되는 생물학적 활성의 억제를 의미한다. 본 발명의 항체는 IL-4Rα에 의해 매개되는 하나 이상의 활성을 중화시킬 수 있다. 억제되는 생물학적 활성은 IL-4Rα가 감마 쇄(또는 IL-13Rα) 및 회합된 가용성 리간드, 예를 들어 IL-4 또는 IL-13과의 신호전달 복합체의 형성을 방지하여 매개될 가능성이 있다.

IL-4Rα 함유 수용체 복합체를 통한 IL-4 또는 IL-13 신호전달의 중화는 IL-4 또는 IL-13 자극된 TF-1 세포 증식의 억제에 의해 측정될 수 있다.

본 발명의 항체가 결합하는 인간 IL4Rα의 에피토프를 돌연변이유발 및 도메인 스와핑의 조합에 의해 위치시켰다. 전체 도메인 스와핑 키메라는 에피토프를 인간 IL4Rα의 도메인 1(D1)(잔기 M1-E119)에 위치시켰다. 인간 IL-4Rα는 5개의 루프 영역을 포함하며, 이들은 결정 구조에서 IL-4에 매우 근접하여 존재한다(문헌[Hage et al., Cell 97:271-281, 1999]). 루프 스와핑 키메라는 본 발명의 항체에 의해 결합되는 인간 IL-4Rα 에피토프가 루프 3의 주 성분(잔기 L89-N98) 및 루프 2의 부 성분(잔기 V65-H72)에 추가로 국소화되게 할 수 있다. 인간 루프 3이 없는 키메라는 항체로의 인간 IL-4Rα 결합을 억제하는데 실패하였으며, 루프 2가 없는 키메라는 인간 IL-4Rα보다 100배 더 높은 IC₅₀을 제공하였다(표 5). 도메인 스와핑 데이터와 일관되게, 루프 2 및 루프 3은 도메인 1(D1)에 위치한다(문헌[Hage et al., Cell 97:271-281, 1999]).

항체 에피토프는 인간 IL-4Rα의 2개의 루프 영역 내의 18개 아미노산의 불연속 에피토프에 위치하였다; V65-H72 및 L89-N98. 상기 에피토프는 추가로 루프 2의 아미노산 잔기 L67 및 L68, 및 루프 3의 D92 및 V93에 국소화될 수도 있다(잔기 67, 68, 92 및 93의 위치에 대해서는 SEQ ID NO: 454 또는 460 참조). D92 잔기가 가장 중요하고, 그 다음으로는 V93인데, 시험한 항체는 루프 2의 L67 및/또는 L68 잔기가 결여된 키메라 IL-4Rα에 여전히 결합할 수 있었다. 물론, 본 발명의 항체는 L67, L68, D92 및 V93 중 하나에 더하여 인간 IL-4Rα 단백질의 잔기에도 결합할 가능성이 있다.

본 발명의 일 양태에 따르면, SEQ ID NO: 460의 위치에 따라, 위치 67, 68, 92 및 93에서의 아미노산으로부터 선택되는 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα) 적어도 하나의 아미노산 잔기를 결합할 수 있는 항체를 포함하는 항체 제형이 제공된다. 본 발명의 일 양태에 따르면, 고유 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)의, SEQ ID NO: 460의 위치에 따른 아미노산 잔기 67, 68, 92 및 93 중 적어도 하나에 결합할 수 있는 단리된 결합 구성원, 예를 들어, 항체를 포함하는 항체 제형이 제공된다. 특정 구현예에서, 단리된 결합 구성원, 예를 들어, 항체는 SEQ ID NO: 460의 위치에 따라, hIL-4Rα의 위치 92에서의 아미노산에 결합할 수 있다. 다른 구현예에서, 단리된 결합 구성원, 예를 들어, 항체는 D92, 및 L67, L68 및 V93으로부터 선택되는 적어도 하나의 다른 잔기에 결합할 수 있다. 다른 구현예에서, 단리된 결합 구성원, 예를 들어, 항체는 D92 및 V93에 결합할 수 있다. 다른 구현예에서, 단리된 결합 구성원, 예를 들어, 항체는 D92, V93, 및 L67 또는 L68 중 어느 하나에 결합할 수 있다. 다른 구현예에서, 항체는 L67, L68, D92 및 V93의 각각에 결합할 수 있다. 이들 구현예 각각은 위치가 SEQ ID NO: 460에 나타낸 hIL-4Rα 아미노산 서열(위치 1 내지 229)에 따라 확인될 수 있는 hIL-4Rα의 아미노산 위치를 말한다. 일 구현예에서, 결합 구성원, 예를 들어, 항체는 전장 hIL-4Rα의 열거된 에피토프 잔기(즉, 위치 67, 68, 92 및 93 중 적어도 하나)에 결합할 수 있다. 일 구현예에서, 결합 구성원, 예를 들어, 항체는 세포 표면 상에 발현되는 고유 hIL-4Rα의 열거된 에피토프 잔기(즉, 위치 67, 68, 92 및 93 중 적어도 하나)에 결합할 수 있다. 일 구현예에서, 결합 구성원, 예를 들어, 항체는 재조합 발현된 전장(229개 아미노산) hIL-4Rα의 열거된 에피토프 잔기(즉, 위치 67, 68, 92 및 93 중 적어도 하나)에 결합할 수 있다.

본 발명의 추가의 양태에 따르면, 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 결합할 수 있는 단리된 결합 구성원, 예를 들어, 항체를 포함하는 항체 제형이 제공된다. 특정 구현예에서, 결합 구성원은 인간 항체이다. 추가의 구현예에서, 결합 구성원은 또한 사이노몰거스 원숭이 인터류킨-4 수용체 알파(cyIL-4Rα)에 결합할 수 있다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 대한 단리된 결합 구성원을 포함하는 항체 제형이 제공되고, 당해 결합 구성원은 18 pM 가용성 인간 IL-4 단백질을 사용하는 TF-1 증식 검정에서 인간 IL-4(hIL-4) 유도된 세포 증식 억제에 대한 IC₅₀ 기하 평균이 50 pM 미만이고, 또한 당해 결합 구성원은 cyIL-4Rα에 결합할 수 있다.

본 발명의 이러한 양태에 대한 특정 구현예에서, 결합 구성원은 18 pM의 가용성 인간 IL-4를 사용하는 TF-1 증식 검정에서, 인간 IL-4(hIL-4) 유도된 세포 증식 억제에 대한 IC₅₀ 기하 평균이 50 pM 미만, 35 pM 미만, 25 pM 미만, 또는 20 pM 미만이다. 특정 구현예에서, 본 발명의 결합 구성원은 본원에 기술되거나(예를 들어 실시예 3.2.1) 또는 해당 분야의 숙련자에게 공지된 방법에서, 18 pM의 가용성 인간 IL-4를 사용하여, 인간 IL-4(hIL-4) 유도된 세포 증식 억제에 대한 IC₅₀ 기하평균이 1 내지 50 pM, 1 내지 35 pM, 2 내지 30 pM, 2 내지 25 pM, 2 내지 12 pM이다. cyIL-4Rα로의 결합은 임의의 적합한 수단에 의해 측정될 수 있다.

유사하게, 본 발명의 범주 내의 항체는 400 pM의 가용성 인간 IL-13(hIL-13)을 사용하여, 인간 IL-13(hIL-13)-매개의 TF-1 증식 억제(hIL-4Rα의 중화를 통함)에 대한 IC₅₀ 기하 평균이 200 pM 미만이다. 특정 구현예에서, 400 pM의 가용성 인간 IL-13(hIL-13)을 사용한 인간 IL-13(hIL-13)-매개의 TF-1 증식 억제(hIL-4Rα의 중화를 통함)에 대한 IC₅₀ 기하 평균이 5 내지 75 pM 또는 5 내지 45 pM이다.

특정 구현예에서, 본 발명의 항체 제형은 실질적으로 쥣과 IL-4Rα에 결합할 수 없는 항체를 포함한다. 이에 의해, 본 발명자들은 본 발명의 항체가 쥣과 IL-4Rα보다 인간 인터류킨-4 수용체 알파에 적어도 500배(예컨대 적어도 500배, 적어도 1000배, 적어도 1500배, 적어도 2000배, 적어도 3000배, 적어도 4000배) 더 크게 결합할 수 있음을 의도한다(즉, 쥣과 IL-4Rα로의 결합은 인간 IL-4Rα로의 결합보다 적어도 500배 더 약하다). 이것은 예를 들어, HTRF 경쟁 검정에 의해 측정될 수 있다.

생물학적 활성의 억제는 부분적이거나 또는 전체적일 수 있다. 특정 구현예에서, 결합 구성원의 부재 하의 활성의 적어도 95%, 적어도 90%, 적어도 85%, 적어도 80%, 적어도 75%, 적어도 70%, 적어도 60%, 또는 적어도 50%로 IL-4Rα 생물학적 활성을 억제하는 항체가 제공된다. 항체가 IL-4Rα를 중화하는 정도는 그의 중화 효력으로 지칭된다. 효력은 숙련자에게 공지되고/되거나 본원에 기술하거나 언급된 하나 이상의 검정을 사용하여 결정되거나 측정될 수 있다. 예를 들어, 효력은 다음에서 검정될 수 있다:

-- 형광(예를 들어, HTRF 또는 DELFIA) 또는 방사능 포맷의 수용체-리간드 결합 검정

-- 형광(예를 들어, HTRF 또는 DELFIA) 에피토프 경쟁 검정

-- 인간 또는 사이노몰거스 PMBC의 STAT6 인산화, TF-1 세포의 증식, 인간 또는 사이노몰거스 섬유아세포 세포주로부터의 에오탁신 방출, 인간 내피 정맥 세포 상에서의 VCAM-1 상향조절 또는 인간 T-세포의 증식을 포함하는 세포-기반의 기능 검정.

이들 검정 방법 중 일부가 또한 미국 특허 제8,092,804호의 실시예에 기술되어 있다.

제1 종(예를 들어, 인간) 유래의 IL-4Rα를 사용하는 검정에서 계산된 바와 같은 항체의 중화 효력을 제2 종(예를 들어, 사이노몰거스 원숭이) 유래의 IL-4Rα를 사용하는 동일 검정에서의 결합 구성원의 중화 효력과 비교하여, 2종의 IL-4Rα에 대한 결합 구성원의 교차 반응성의 정도를 평가할 수 있다. 인간 표적 및 다른 종 유래의 오르토로거스 표적 둘 모두에 결합하는 항체가 존재하는 것은 상당한 이점을 갖는다. 주요 이점은 결합-구성원이 치료적 생성물로서 진전되고, 안전성 연구(예를 들어, 독성)가 다른 종에서 수행되어야 할 필요가 있는 경우에, 비롯된다. 예를 들어, 인간 활성과 10배 미만이 상이한, 다른 종에 대한 친화성 또는 효력이 이러한 평가에 적절할 수 있다.

본 발명의 특정 구현예에 따르면, 수용체-리간드 결합 검정을 사용하여 측정하는 경우, scFv로서의 결합 구성원, 예를 들어, 항체 대 hIL-4Rα 및 cyIL-4Rα의 결합 비는 적어도 6:1이다. 본원에 사용되는 바와 같이, "적어도" 6:1은, 2:1, 1:1보다는 8:1, 10:1 등을 포함한다.

본 발명의 항체는 인간 IL-4Rα 및 사이노몰거스 원숭이 IL-4Rα에 결합하고, 수용체-리간드 결합 검정에서 결정시 인간 및 사이노몰거스 IL-4Rα를 중화하기 위한 효력이 250배 미만, 예를 들어 150배 미만, 100배 미만, 75배 미만, 50배 미만, 25배 미만, 20배 미만, 15배 미만, 10배 미만으로 상이할 수 있고, 결합 구성원은 미국 특허 제8,092,804호에서와 같이, scFv 포맷이다.

일부 구현예에서, 수용체-리간드 결합 검정법을 사용하여 측정되는 인간 및 사이노몰거스 IL-4Rα에 대한 본 발명의 항체(scFv 포맷인 경우)의 중화 효력은 25배 이내이다. 일 구현예에서, 인간 및 사이노몰거스 IL-4Rα에 대한 본 발명의 항체의 중화 효력은 210배 이내이며; 즉, 인간 IL-4Rα로의 결합은 사이노몰거스 IL-4Rα에 대한 것보다 210배 이하이다. 다른 구현예에서, 상기 중화 효력은 5:1 내지 210:1, 예컨대 5:1 내지 100:1이다.

기능성 세포-기반의 검정에 있어서, 효력은 달리 언급하지 않으면, 보통 nM 단위의 IC₅₀ 값으로 표현된다. 기능성 검정에서, IC₅₀은 생물학적(또는 생화학적) 반응을 그의 최대치의 50%로 감소시키는 결합 구성원의 몰 농도이다. IC₅₀은 결합 구성원 농도의 로그 함수로서, 최대 생물학적 반응의 %를 플롯팅하고, 소프트웨어 프로그램, 예컨대 Prism(GraphPad) 또는 Origin(Origin Labs)을 사용하여 상기 데이터에 S형 함수를 핏팅시켜 IC₅₀ 값을 생성함으로써 계산할 수 있다.

수용체-리간드 결합 검정에 있어서, 효력은 보통 Ki(억제 상수)로서 표현되며, 표지화된 리간드가 존재하지 않는 경우 수용체의 50%를 차지하는 결합 구성원의 농도이다. IC₅₀이 리간드 농도에 따라 실험 간에 달라질 수 있지만, Ki는 Cheng Prusoff 식으로부터 계산된 절대값이다.

본 발명의 항체는 본원에서 기술한 바와 같은 인간 IL-4RαHTRF^® 검정에서 최대 5 nM의 Ki 또는 중화 효력을 가질 수 있다. 이러한 검정은 scFv 포맷의 항체에 대한 Ki를 결정하는데 사용될 수 있다. Ki는 예를 들어 최대 5.0, 4.0, 3.0, 2.0, 1.0, 0.5, 0.2, 0.1, 0.05, 또는 0.02 nM일 수 있다.

부가적으로, IL-4Rα에 대한 IL-4Rα 항체의 결합 역학 및 친화성(평형 해리 상수, KD로 표현)은 예를 들어, 표면 플라스몬 공명, 예컨대 BIAcore®을 사용하여 결정되거나, 또는 Kd는 pA₂ 분석으로부터 평가될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 글리코실화된 hIL-4Rα에 결합할 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 임의로 다른 구조적으로 관련된 분자(예를 들어, 다른 인터류킨 수용체)에 비해 IL-4Rα에 특이적일 수 있고, 따라서 선택적으로 IL-4Rα에 결합한다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 IL-13Rα1 또는 IL-13Rα2 중 임의의 것 및 공통 감마 쇄(γc)와 교차 반응하지 않을 수 있다.

본 발명의 항체는 항체 분자, 예를 들어 인간 항체 분자를 포함할 수 있다. 결합 구성원은 항체 VH 및/또는 VL 도메인을 포함한다. 항체의 VH 도메인은 또한 본 발명의 일부로서 제공된다. 각각의 VH 및 VL 도메인 내에 상보성 결정 영역("CDR"), 및 프레임워크 영역("FR")이 존재한다. VH 도메인은 HCDR 세트를 포함하고, VL 도메인은 LCDR 세트를 포함한다. 항체 분자는 VH CDR1, CDR2 및 CDR3, 및 프레임워크를 포함하는 항체 VH 도메인을 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 또한, 그것은 VL CDR1, CDR2 및 CDR3 및 프레임워크를 포함하는 항체 VL 도메인을 포함할 수 있다. VH 또는 VL 도메인 프레임워크는 다음의 구조로 CDR이 개재된 4개의 프레임워크 영역, FR1, FR2, FR3 및 FR4를 포함한다:

FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4.

본 발명에 따른 항체 VH 및 VL 도메인, FR 및 CDR의 예는 본 명세서의 일부를 형성하는 첨부된 서열 목록에 열거된 바와 같다. 본원에 개시된 모든 VH 및 VL 서열, CDR 서열, CDR 세트 및 HCDR 세트 및 LCDR 세트는 본 발명의 양태 및 구현예를 대표한다. 본원에 기술된 바와 같이, "CDR 세트"는 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다. 따라서, HCDR 세트는 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 의미하고, LCDR 세트는 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 의미한다. 달리 언급하지 않으면, "CDR의 전체 세트"는 HCDR 및 LCDR을 포함한다. 전형적으로, 본 발명의 항체는 모노클로널 항체이다.

본 발명의 추가의 양태는 첨부된 서열 목록에 나타낸 항체 1 내지 42 중 임의의 것의 VH 도메인과 아미노산 서열 동일성이 적어도 75, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99%인 VH 도메인을 포함하고/거나, 첨부된 서열 목록에 나타낸 항체 1 내지 42 중 임의의 것의 VL 도메인과 아미노산 서열 동일성이 적어도 75, 80, 85, 90, 95, 98 또는 99%인 VL 도메인을 포함하는 항체 분자이다. Accelerys의 "MacVector™" 프로그램을 사용하여 2개의 아미노산 서열의 동일성 %를 계산할 수 있다.

본 발명의 항체는 이하에 구체적으로 논의된 바와 같이, 비-항체 단백질 스캐폴드에, 보통 하나 이상의 CDR, 예를 들어 HCDR3 및/또는 LCDR3, 또는 CDR 세트에 의해 제공되는, 비-항체 분자 내의 항원-결합 부위를 포함할 수 있다.

본 발명자들은 도 13(VH 도메인) 및 도 14(VL 도메인)에 도시한 바와 같이, CDR 서열 세트를 갖는 모 항체 분자(항체 1)를 단리하였다. 본 발명자들은 최적화 과정을 통해, 도 13(VH 도메인) 및 도 14(VL 도메인)에 나타낸 위치에 치환을 가지고, 모체 CDR3 서열로부터 유래된 CDR3 서열을 갖는, 2 내지 20으로 넘버링된 항체를 포함하는 항체 클론 패널을 생성하였다. 따라서, 예를 들어, 항체 2가 모체 HCDR1, HCDR2, LCDR1 및 LCDR2 서열을 가지며, 카바트 잔기 95가 Q로 대체되고, 카바트 잔기 95A, 95B 및 96이 각각 P로 대체되며, 카바트 잔기 97이 L로 대체되는 모체 LCDR3 서열을 가지고; 카바트 잔기 101이 Y로 대체되고, 카바트 잔기 102가 N으로 대체된 모체 HCDR3 서열을 갖는 것을 도 13(a 및 b)으로부터 알 수 있다.

본원에 기술된 바와 같이, 모체 항체 분자, 및 항체 분자 2 내지 20은 각각 모체 항체 분자의 CDR을 갖는 항체 분자, 및 항체 분자 2 내지 20의 CDR을 갖는 항체 분자를 의미한다. 본 발명자들은 추가의 최적화 과정을 통해, VH 및 VL 도메인 도처에 추가의 치환을 갖는, 21 내지 42로 넘버링된 항체 클론의 패널을 생성하였다. 따라서, 예를 들어 항체 21은 항체 20과 동일한 LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, 및 HCDR3을 가지며; 그것은 카바트 잔기 57이 A로 대체된 항체 20의 모체 HCDR2 서열을 가지며; 그것은 각각 V 및 F로 대체된 카바트 잔기 85 및 87(LFW3에서)을 갖는다.

도 15(VH) 및 도 16(VL)에 도시된 바와 같은 항체 20 CDR 세트를 포함하는 참조 결합 구성원이 본원에 기술되어 있으며, 여기서 HCDR1은 SEQ ID NO: 193(카바트 잔기 31 내지 35)이고, HCDR2는 SEQ ID NO: 194(카바트 잔기 50 내지 65)이며, HCDR3은 SEQ ID NO: 195(카바트 잔기 95 내지 102)이고, LCDR1은 SEQ ID NO: 198(카바트 잔기 24 내지 34)이며, LCDR2는 SEQ ID NO: 199(카바트 잔기 50 내지 56)이고, LCDR3은 SEQ ID NO: 200(카바트 잔기 89 내지 97)이다. 추가의 항체는 참조 결합 구성원의 서열과 관련하여 기술될 수 있다.

항체를 포함하는 항체 제형은 본원에 기술한 바와 같이 하나 이상의 CDR(즉, 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5 및 적어도 6개), 예를 들어 CDR3, 및 임의로 또한 CDR1 및 CDR2를 포함하여 CDR 세트를 형성할 수 있다. CDR 또는 CDR 세트는 모체 CDR 또는 모체 CDR 세트일 수 있거나, 또는 항체 2 내지 42 중 임의의 것의 CDR 또는 CDR 세트일 수 있거나, 또는 본원에 기술된 바와 같은 그의 변이체일 수 있다.

예를 들어, 본 발명에 따른 항체 또는 VL 도메인은 카바트 잔기 92 내지 97 중 하나 이상이 다른 아미노산으로 치환된 참조 LCDR3을 포함할 수 있다. 예시적인 치환은 하기를 포함한다:

Phe(F), Val(V) 또는 Ala(A)에 의해 대체된 카바트 잔기 92;

Gly(G) 또는 Ser(S)에 의해 대체된 카바트 잔기 93;

Thr(T)에 의해 대체된 카바트 잔기 94;

Leu(L), GLn(Q), Pro(P) 또는 Ser(S)에 의해 대체된 카바트 잔기 95;

Ser(S), Prol(P), Ala(A), Thr(T), His(H) 또는 Gly(G)에 의해 대체된 카바트 잔기 95a;

Ala(A), Pro(P), Ser(S), Tyr(Y), Met(M), Leu(L), Thr(T), Arg(R) 또는 Asp(D)에 의해 대체된 카바트 잔기 95b;

Asn(N), Gln(Q), His(H), Tyr(Y), Thr(T), Ile(I), Lys(K), Arg(R) 또는 Met(M)에 의해 대체된 카바트 잔기 95c;

Tyr(Y) 또는 Pro(P)에 의해 대체된 카바트 잔기 96;

Val(V), Leu(L) 또는 Ile(I)에 의해 대체된 카바트 잔기 97.

항체 또는 VH 도메인은 카바트 잔기 97 내지 102 중 하나 이상이 다른 아미노산으로 치환된 참조 HCDR3을 포함할 수 있다. 예시적인 치환은 하기를 포함한다:

Trp(W) 또는 Leu(L)에 의해 대체된 카바트 잔기 97;

Leu(L)에 의해 대체된 카바트 잔기 98;

Leu(L), Lys(K), Phe(F) 또는 Trp(W)에 의해 대체된 카바트 잔기 99;

Asp(D), Asn(N) 또는 Gln(Q)에 의해 대체된 카바트 잔기 101;

Tyr(Y), Asn(N), Pro(P) 또는 His(H)에 의해 대체된 카바트 잔기 102.

본 발명의 항체는 항체 1 내지 42 중 임의의 것의 HCDR1, HCDR2 및/또는 HCDR3, 및/또는 항체 1 내지 42 중 임의의 것의 LCDR1, LCDR2 및/또는 LCDR3을 포함할 수 있다. 항체는 이들 항체 중 하나의 VH CDR 세트를 포함할 수 있다. 임의로, 그것은 또한 이들 항체 중 하나의 VL CDR 세트를 포함할 수 있고, VL CDR은 VH CDR과 동일하거나 또는 상이한 항체 유래의 것일 수 있다. 항체 1 내지 42 중 임의의 것의 HCDR 세트를 포함하는 VH 도메인, 및/또는 항체 1 내지 42 중 임의의 것의 LCDR 세트를 포함하는 VL 도메인도 또한 본 발명의 개별 구현예이다.

전형적으로, VH 도메인은 VL 도메인과 쌍을 이루어 항체 항원-결합 부위를 제공하지만, 하기에 추가로 논의된 바와 같이, VH 또는 VL 도메인은 단독으로 사용되어 항원에 결합할 수 있다. 일 구현예에서, 항체 1 VH 도메인은 항체 1 VL 도메인과 쌍을 이루어, 항체 1 VH 및 VL 도메인 둘 모두를 포함하는 항체 항원-결합 부위가 형성되게 한다. 유사한 구현예가 본원에 개시된 다른 VH 및 VL 도메인에 대하여 제공된다. 다른 구현예에서, 항체 1 VH는 항체 1 VL 이외의 VL 도메인과 쌍을 이룬다. 경쇄 무작위 혼합(promiscuity)은 해당 분야에 널리 확립되어 있다. 다시, 유사한 구현예가 본원에 개시된 다른 VH 및 VL 도메인에 대해 본 발명에 의해 제공된다. 따라서, 모체(항체 1) 또는 항체 2 내지 42 중 임의의 것의 VH는 모체 또는 항체 2 내지 42 중 임의의 것의 VL과 쌍을 이룰 수 있다.

본 발명의 일 양태는 VH 및 VL 도메인을 포함하는 항체이고, 여기서 VH 도메인은 도 13 또는 도 15에 개시된 서열을 포함한다.

본 발명의 다른 양태는 VH 및 VL 도메인을 포함하는 항체이고, 여기서 VL 도메인은 도 14 또는 도 16에 개시된 서열을 포함한다.

본 발명의 다른 양태는 SEQ ID NO: 362, 442, 232, 422 또는 432에 나타낸 VH 도메인 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인, 및 SEQ ID NO: 367, 237, 447, 437 또는 427에 나타낸 VL 도메인 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 단리된 항체 분자이다.

항체는 개시된 H 및/또는 L CDR 세트 내에 12개 또는 10개 또는 9개 또는 그 이하, 예를 들어 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 치환을 갖는 항체 2 내지 42 중 임의의 것 또는 모 항체의 H 및/또는 L CDR의 세트를 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 12개 이하의 치환, 예를 들어 7개 이하의 치환, 예를 들어 0개, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 치환을 갖는 H 및/또는 L CDR의 항체 16 또는 항체 20 세트를 포함할 수 있다. 치환은 가능하게는 CDR 세트 내 임의의 잔기에서 이루어질 수 있고, CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 내에 존재할 수 있다.

따라서, 본 발명의 일 양태에 따르면, CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 대한 단리된 결합 구성원이 제공되며, 여기서 CDR의 세트는 참조 CDR 세트로부터 12개 이하의 아미노산 변경을 갖고, 참조 CDR 세트에서:

HCDR1은 SEQ ID NO: 153의 아미노산 서열을 가지고;

HCDR2는 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열을 가지고;

HCDR3은 SEQ ID NO: 155의 아미노산 서열을 가지고;

LCDR1은 SEQ ID NO: 158의 아미노산 서열을 가지고;

LCDR2는 SEQ ID NO: 159의 아미노산 서열을 가지고;

LCDR3은 SEQ ID NO: 160의 아미노산 서열을 갖는다.

이러한 예에서 참조 항체는 항체 16이다.

단리된 결합 구성원은 참조 CDR 세트로부터 10개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 예를 들어 6개, 5개, 4개, 3개, 2개, 1개 또는 0개의 아미노산 변경을 가질 수 있다. 특히 변경은 아미노산 치환이다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 대한 단리된 결합 구성원이 제공되고, 여기서, CDR의 세트는 참조 CDR 세트로부터 12개 이하의 아미노산 변경을 가지며, 참조 CDR 세트에서:

HCDR1은 SEQ ID NO: 193의 아미노산 서열을 가지고;

HCDR2은 SEQ ID NO: 194의 아미노산 서열을 가지고;

HCDR3은 SEQ ID NO: 195의 아미노산 서열을 가지고;

LCDR1은 SEQ ID NO: 198의 아미노산 서열을 가지고;

LCDR2는 SEQ ID NO: 199의 아미노산 서열을 가지고;

LCDR3은 SEQ ID NO: 200의 아미노산 서열을 갖는다.

이러한 예에서 참조 항체는 항체 20이다.

단리된 결합 구성원은 참조 CDR 세트로부터 10개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 예를 들어 6개, 5개, 4개, 3개, 2개, 1개 또는 0개의 아미노산 변경을 가질 수 있다. 특히 변경은 아미노산 치환이다. 특정 구현예에서, 단리된 결합 구성원은 상기 확인된 참조 CDR 세트로부터 4개 이하의 아미노산 치환을 갖는다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 대한 단리된 결합 구성원이 제공되며, 여기서 CDR의 세트는 참조 CDR 세트로부터 6개 이하의 아미노산 변경을 가지며, 참조 CDR 세트에서:

HCDR1은 SEQ ID NO: 363의 아미노산 서열을 가지고;

HCDR2는 SEQ ID NO: 364의 아미노산 서열을 가지고;

HCDR3은 SEQ ID NO: 365의 아미노산 서열을 가지고;

LCDR1은 SEQ ID NO: 368의 아미노산 서열을 가지고;

LCDR2는 SEQ ID NO: 369의 아미노산 서열을 가지고;

LCDR3은 SEQ ID NO: 370의 아미노산 서열을 갖는다.

이러한 예에서 참조 항체는 항체 37이다.

치환은 CDR3 내에, 예를 들어, 도 13 또는 도 15(VH 도메인) 및 도 14 또는 도 16(VL 도메인)에 도시한 바와 같이, 항체 2 내지 42 중 임의의 것에서 치환되는 위치에 존재할 수 있다. 따라서, 하나 이상의 치환은 하기 잔기에서 하나 이상의 치환을 포함할 수 있다:

HCDR3에서 카바트 잔기 97, 98, 99, 101 또는 102; 또는

LCDR3에서 카바트 잔기 92, 93, 94, 95, 95A, 95B, 95C, 96 또는 97.

따라서, CDR3은 예를 들어, 카바트 잔기 92, 93, 94, 95, 95A, 95B, 95C, 96 또는 97에서 하나 이상의 치환을 갖는 참조 LCDR3일 수 있다.

모/참조 CDR 내의 치환의 예는 본원의 다른 부분에 기술되어 있다. 기술된 바와 같이, 치환은 도 13 내지 도 16에 도시한 바와 같은 하나 이상의 치환을 포함할 수 있다.

본 발명의 항체는 참조 항체 20, 또는 하기의 치환 중 하나 이상을 갖는 HCDR1, HCDR2 및/또는 HCDR3을 포함할 수 있다:

카바트 잔기 53이 Arg(R)인 HCDR2;

카바트 잔기 57이 Ala(A)인 HCDR2;

카바트 잔기 97이 Trp(W) 또는 Leu(L)이고/이거나; 카바트 잔기 98이 Leu이고/이거나; 카바트 잔기 99가 Leu(L), Lys(K) 또는 Trp(W)이고/이거나; 카바트 잔기 101이 Asn(N) 또는 Gln(Q)이고/이거나; 카바트 잔기 102가 Tyr(Y), Asn(N), Pro(P) 또는 His(H)인 HCDR3.

본 발명의 항체는 참조 항체 20, 또는 하기 치환 중 하나 이상을 갖는 LCDR1, LCDR2 및/또는 LCDR3을 포함할 수 있다:

카바트 잔기 27이 Gly(G)이고;

카바트 잔기 27A가 Thr(T)이고;

카바트 잔기 27B가 Ser(S)이고;

카바트 잔기 31이 Asn(N)인 LCDR1;

카바트 잔기 56이 Pro(P)인 LCDR2;

카바트 잔기 92가 Phe(F), Val(V) 또는 Ala(A)이고/이거나;

카바트 잔기 93이 Gly(G) 또는 Ser(S)이고/이거나;

카바트 잔기 94가 Thr(T)이고/이거나;

카바트 잔기 95가 Leu(L), Gln(Q), Pro(P) 또는 Ser(S)이고/이거나;

카바트 잔기 95A가 Ser(S), Pro(P), Ala(A), Thr(T), His(H) 또는 Gly(G)이고/이거나;

카바트 잔기 95B가 Ala(A), Pro(P), Ser(S), Tyr(Y), Met(M), Leu(L), Thr(T), Asp(D) 또는 Arg(R)이고/이거나;

카바트 잔기 95C가 Asn(N), Gln(Q), His(H), Tyr(Y), Ile(I), Lys(K), Arg(R), Thr(T) 또는 Met(M)이고/이거나;

카바트 잔기 96이 Tyr(Y) 또는 Pro(P)이고/이거나;

카바트 잔기 97이 Val(V), Leu(L) 또는 Ile(I)인 LCDR3.

특정 구현예에서, 항체 20 서열에 관하여, HCDR2의 카바트 잔기 53이 Arg(R)에 의해 대체되고/되거나; HCDR2의 카바트 잔기 57이 Ala(A)에 의해 대체되고/되거나; LCDR1의 카바트 잔기 27이 Gly(G)에 의해 대체되고/되거나; LCDR1의 카바트 잔기 27B가 Ser(S)에 의해 대체되고/되거나; LCDR3의 카바트 잔기 95가 Pro(P)에 의해 대체된다.

본 발명의 특정 양태에 따르면, 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 대한 단리된 결합 구성원이 제공되고, 여기서,

HCDR1은 SEQ ID NO: 363의 아미노산 서열을 가지고;

HCDR2는 SEQ ID NO: 364의 아미노산 서열을 가지고;

HCDR3은 SEQ ID NO: 365의 아미노산 서열을 가지고;

LCDR1은 SEQ ID NO: 368의 아미노산 서열을 가지고;

LCDR2는 SEQ ID NO: 369의 아미노산 서열을 가지고;

LCDR3은 SEQ ID NO: 370의 아미노산 서열을 갖는다.

본 발명의 다른 특정 양태에 따르면, 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 대한 단리된 결합 구성원이 제공되고, 여기서,

HCDR1은 SEQ ID NO: 233의 아미노산 서열을 가지고;

HCDR2는 SEQ ID NO: 234의 아미노산 서열을 가지고;

HCDR3은 SEQ ID NO: 235의 아미노산 서열을 가지고;

LCDR1은 SEQ ID NO: 238의 아미노산 서열을 가지고;

LCDR2는 SEQ ID NO: 239의 아미노산 서열을 가지고;

LCDR3은 SEQ ID NO: 240의 아미노산 서열을 갖는다.

본 발명의 항체에서,

HCDR1은 카바트 잔기 31 내지 35로 이루어진, 5개 아미노산 길이일 수 있고/있거나;

HCDR2는 카바트 잔기 50 내지 65로 이루어진, 17개 아미노산 길이일 수 있고/있거나;

HCDR3은 카바트 잔기 95 내지 102로 이루어진, 9개 아미노산 길이일 수 있고/있거나;

LCDR1은 카바트 잔기 24 내지 34로 이루어진, 13개 아미노산 길이일 수 있고/있거나;

LCDR2는 카바트 잔기 50 내지 56으로 이루어진, 7개 아미노산 길이일 수 있고/있거나,

LCDR3은 카바트 잔기 89 내지 97로 이루어진, 9개 아미노산 길이일 수 있다.

HCDR1이 카바트 잔기 31 내지 35이고, HCDR2가 카바트 잔기 50 내지 65이며, HCDR3이 카바트 잔기 95 내지 102인 HCDR 및 LCDR 세트의 카바트 넘버링이 도 13 및 도 15에 도시되어 있고; LCDR1이 카바트 잔기 24 내지 34이고, LCDR2가 카바트 잔기 50 내지 56이며, LCDR3이 카바트 잔기 89 내지 97인 HCDR 및 LCDR 세트의 카바트 넘버링이 도 14 및 도 16에 도시되어 있다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 대한 단리된 결합 구성원이 제공되고, 여기서, CDR의 세트는 수탁 번호: NCIMB 41600으로 2008년 12월 9일자로 NCIMB에 기탁된 클론에 존재하는 참조 CDR 세트로부터 6개 또는 그 이하의 아미노산 변경을 갖는다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 수탁 번호 NCIMB 41600으로 2008년 12월 9일자로 NCIMB에 기탁된 클론에서 확인되는 바와 같은 VH 서열을 포함하는, 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 대한 단리된 결합 구성원이 제공된다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 수탁 번호 NCIMB 41600으로 2008년 12월 9일자로 NCIMB에 기탁된 클론에서 확인되는 바와 같은 VL 서열을 포함하는, 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 대한 단리된 결합 구성원이 제공된다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 수탁 번호 NCIMB 41600으로 2008년 12월 9일자로 NCIMB에 기탁된 클론에서 확인되는 바와 같은 VH 및 VL 서열을 포함하는, 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 대한 단리된 결합 구성원이 제공된다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 단리된 항체 또는 항체의 단편이 제공되고, 여기서 항체 또는 단편은 면역특이적으로 인간 인터류킨-4 수용체 알파에 결합하며, 하기 (a) 내지 (f)를 포함한다:

(a) 수탁 번호: NCIMB 41600으로 2008년 12월 9일자로 NCIMB에 기탁된 클론에 존재하는 VH CDR1과 동일하거나 또는 이와 비교하여 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1;

(b) 수탁 번호: NCIMB 41600으로 2008년 12월 9일자로 NCIMB에 기탁된 클론에 존재하는 VH CDR2와 동일하거나 또는 이와 비교하여 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2;

(c) 수탁 번호: NCIMB 41600으로 2008년 12월 9일자로 NCIMB에 기탁된 클론에 존재하는 VH CDR3과 동일하거나 또는 이와 비교하여 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3;

(d) 수탁 번호: NCIMB 41600으로 2008년 12월 9일자로 NCIMB에 기탁된 클론에 존재하는 VL CDR1과 동일하거나 또는 이와 비교하여 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1;

(e) 수탁 번호: NCIMB 41600으로 2008년 12월 9일자로 NCIMB에 기탁된 클론에 존재하는 VL CDR2와 동일하거나 또는 이와 비교하여 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및

(f) 수탁 번호: NCIMB 41600으로 2008년 12월 9일자로 NCIMB에 기탁된 클론에 존재하는 VL CDR3과 동일하거나 또는 이과 비교하여 1, 2, 또는 3개의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 단리된 항체 또는 항체의 단편이 제공되고, 여기서, 항체 또는 단편은 면역특이적으로 인간 인터류킨-4 수용체 알파에 결합하고, 하기 (a) 및 (b)를 포함한다:

(a) 수탁 번호: NCIMB 41600으로 2008년 12월 9일자로 NCIMB에 기탁된 클론에 존재하는 VH 서열과 동일하거나 또는 이와 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VH 서열;

(b) 수탁 번호: NCIMB 41600으로 2008년 12월 9일자로 NCIMB에 기탁된 클론에 존재하는 VL 서열과 동일하거나 또는 이와 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 VL 서열.

항체는 항체 프레임워크 내에, 하나 이상의 CDR, 예를 들어 CDR의 세트를 갖는 항체 분자를 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체의 하나 이상의 CDR 또는 CDR의 세트는 프레임워크(예를 들어, 인간 프레임워크)에 그라프트되어 항체 분자를 제공할 수 있다. 프레임워크 영역은 인간 생식계열(germline) 유전자 세그먼트 서열을 포함할 수 있다. 따라서, 프레임워크는 생식계열화(germlined)될 수 있고, 그에 의해 프레임워크 내의 하나 이상의 잔기를 변화시켜, 가장 유사한 인간 생식계열 프레임워크 내의 동등한 위치에서 잔기를 매치시킨다. 숙련자는 생식계열화 이전에 항체의 프레임워크 서열과 서열이 가장 가까운 생식계열 세그먼트를 선택하고, 항체의 친화성 또는 활성을 시험하여 생식계열화가 본원에 기술된 검정에서 유의하게 항원 결합 또는 효력을 감소시키지 않는다는 것을 확인할 수 있다. 인간 생식계열 유전자 세그먼트 서열은 해당 분야의 숙련자에게 알려져 있고, 예를 들어, VBase compilation으로부터 접근할 수 있다(문헌[Tomlinson. Journal of Molecular Biology. 224. 487-499, 1997] 참조).

일 구현예에서, 본 발명의 항체는 인간 생식계열 프레임워크, 예를 들어 Vh1_DP-7_(1-46)에 HCDR의 세트를 포함하는 VH 도메인을 갖는 단리된 인간 항체 분자이다. 따라서, VH 도메인 프레임워크 영역 FR1, FR2 및/또는 FR3은 인간 생식계열 유전자 세그먼트 Vh1_DP-7_(1-46)의 프레임워크 영역을 포함할 수 있다. FR4는 인간 생식계열 j 세그먼트 JH1, JH4 또는 JH5(이들 j 세그먼트는 동일한 아미노산 서열을 가짐)의 프레임워크 영역을 포함할 수 있거나 또는 그것은 인간 생식계열 j 세그먼트 JH3의 프레임워크 영역을 포함할 수 있다. VH FR1의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 442(잔기 1 내지 30)일 수 있다. VH FR2의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 442(잔기 36 내지 49)일 수 있다. VH FR3의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 442(잔기 66 내지 94)일 수 있다. VH FR4의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 442(103 내지 113)일 수 있다. 보통 결합 구성원은 또한 예를 들어, 인간 생식계열 프레임워크, 예를 들어, Vλ1_DPL5에 LCDR의 세트를 포함하는 VL 도메인을 가진다. 따라서, VL 도메인 프레임워크 영역 FR1, FR2 및/또는 FR3은 인간 생식계열 유전자 세그먼트 Vλ 1_DPL5의 프레임워크 영역을 포함할 수 있다. FR4는 인간 생식계열 j 세그먼트 JL2 또는 JL3(이들 j 세그먼트는 동일한 아미노산 서열을 가짐)의 프레임워크 영역을 포함할 수 있다. VL FR1의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 447(잔기 1 내지 23)일 수 있다. VL FR2의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 447(잔기 35 내지 49)일 수 있다. VL FR3의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 447(잔기 57 내지 88)일 수 있다. VL FR4의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 447(잔기 98 내지 107)일 수 있다. 생식계열화된 VH 또는 VL 도메인은 하나 이상의 베르니에르 잔기에서 생식계열화되거나 또는 생식계열화되지 않을 수 있지만, 보통은 그렇지 않다.

본 발명의 항체 분자 또는 VH 도메인은 하기의 중쇄 프레임워크 영역의 세트를 포함하거나, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 아미노산의 변경, 예를 들어 치환을 갖는 하기 중쇄 프레임워크 영역의 세트를 포함할 수 있다:

FR1 SEQ ID NO: 442(잔기 1 내지 30);

FR2 SEQ ID NO: 442(잔기 36 내지 49);

FR3 SEQ ID NO: 442(잔기 66 내지 94);

FR4 SEQ ID NO: 442(잔기 103 내지 113).

본 발명의 항체 분자 또는 VL 도메인은 하기 경쇄 프레임워크 영역의 세트를 포함하거나 또는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 아미노산 변경, 예를 들어 치환을 갖는 하기의 중쇄 프레임워크 영역의 세트를 포함할 수 있다:

FR1 SEQ ID NO: 447(잔기 1 내지 23);

FR2 SEQ ID NO: 447(잔기 35 내지 49);

FR3 SEQ ID NO: 447(잔기 57 내지 88);

FR4 SEQ ID NO: 447(잔기 98 내지 107).

아미노산 변경은, 치환, 삽입(부가) 또는 결실일 수 있다. 가장 흔한 변경은 치환일 가능성이 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체 분자는

중쇄 FR1이 SEQ ID NO: 192(잔기 1 내지 30)이고;

중쇄 FR2가 SEQ ID NO: 192(잔기 36 내지 49)이고;

중쇄 FR3이 SEQ ID NO: 192(잔기 66 내지 94)이고;

중쇄 FR4가 SEQ ID NO: 192(잔기 103 내지 113)이고;

경쇄 FR1이 SEQ ID NO: 197(잔기 1 내지 23)이고;

경쇄 FR2가 SEQ ID NO: 197(잔기 35 내지 49)이고;

경쇄 FR3이 SEQ ID NO: 197(잔기 57 내지 88)이고;

경쇄 FR4가 SEQ ID NO: 197(잔기 98 내지 107)인 중쇄 및 경쇄 프레임워크의 세트를 포함하거나, 또는 7개 이하, 예를 들어 6개 이하의 아미노산 변경, 예를 들어, 치환을 갖는 상기 중쇄 및 경쇄 프레임워크 영역의 세트를 포함할 수 있다. 예를 들어, 1 또는 2개의 아미노산 치환이 중쇄 및 경쇄 프레임워크 영역의 세트에 존재할 수 있다.

항체 21 내지 42는 항체 20을 기반으로 하지만, CDR 및 프레임워크 영역 내에 특정한 추가의 변경을 가진다. 항체 20과 유사하게, 항체 21 내지 42는 hIL-4Rα 및 cyIL-4Rα에 결합한다. 그러므로, 이러한 CDR 및/또는 프레임워크 치환은 잠재적으로 더 큰 결합을 갖는 항체를 생성하는 임의의 또는 추가의 치환으로 간주될 수 있다.

따라서, VH 및 VL 도메인의 6개의 CDR 영역 중 임의의 영역 내의 치환에 더하여, 항체는 또한 표준 카바트 넘버링을 사용하여, 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함할 수 있다:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85;

HFW4 내의 105, 108, 113;

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87.

적합한 프레임워크 치환은 도 13 내지 도 16에 도시되어 있다. 그리고, 본 발명의 항체는 도 13 내지 도 16에 도시된 특정 치환 중 하나 이상을 포함할 수 있다.

본 발명의 항체 분자 또는 VH 도메인은 VH FR1을 포함할 수 있고, 여기서 카바트 잔기 11은 Val 또는 Glu이고/이거나 카바트 잔기 12는 Lys 또는 Arg이고; 본 발명의 항체 분자 또는 VH 도메인은 VH FR2를 포함할 수 있고, 여기서 카바트 잔기 37은 Ala 또는 Val이고/이거나 카바트 잔기 48은 Met 또는 Val이고; 본 발명의 항체 분자 또는 VH 도메인은 VH FR3을 포함할 수 있고, 여기서 카바트 잔기 68은 Ser, Ala 또는 Thr이고/이거나 카바트 잔기 84는 Ser 또는 Pro이고/이거나 카바트 잔기 85는 Glu 또는 Gly이고; 본 발명의 항체 분자 또는 VH 도메인은 VH FR4를 포함할 수 있고, 여기서 카바트 잔기 105는 Lys 또는 Asn이고/이거나 카바트 잔기 108은 Gln, Arg 또는 Leu이고/이거나 카바트 잔기 113은 Ser 또는 Gly이다.

본 발명의 항체 분자 또는 VL 도메인은 VL FR1을 포함할 수 있고, 여기서 카바트 잔기 1은 Gln 또는 Leu이고/이거나 카바트 잔기 2는 Ser 또는 Pro 또는 Ala이고/이거나 카바트 잔기 3은 Val 또는 Ala이고/이거나 카바트 잔기 9는 Ser 또는 Leu이고; 본 발명의 항체 분자 또는 VL 도메인은 VL FR2을 포함할 수 있고, 여기서 카바트 잔기 38은 Gln 또는 Arg이고/이거나 카바트 잔기 42는 Thr 또는 Ala이고; 본 발명의 항체 분자 또는 VL 도메인은 VL FR3을 포함할 수 있고, 여기서 카바트 잔기 58은 Ile 또는 Val이고/이거나 카바트 잔기 65는 Ser 또는 Phe이고/이거나 카바트 잔기 66은 Lys 또는 Arg이고/이거나 카바트 잔기 70은 Ser 또는 Thr이고/이거나 카바트 잔기 74는 Ala 또는 Gly이고/이거나 카바트 잔기 85는 Asp 또는 Val이고/이거나 카바트 잔기 87은 Tyr 또는 Phe이다.

비-생식계열화된 항체는 생식계열화된 항체와 비교하여, 동일한 CDR을 갖지만, 상이한 프레임워크를 갖는다. 본원에 나타낸 항체 서열 중에서, 항체 24PGL 및 37GL의 VH 및 VL 도메인이 생식계열화된다.

본 발명의 추가의 양태에 따르면, CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 대한 단리된 결합 구성원이 제공되며, 당해 결합 구성원은 항체 1 내지 42 중 임의의 것의 임의의 개재 프레임워크 서열이 없는 라인 서열에 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 복합 서열과 적어도 73% 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 특정 구현예에서, 단리된 결합 구성원은 항체 1 내지 42 중 임의의 것의 복합 스코어와 적어도 78% 아미노산 서열 동일성을 갖는다.

본 발명의 추가의 양태에 따르면, CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 대한 단리된 결합 구성원이 제공되며, 당해 결합 구성원은 항체 1 내지 42 중 임의의 것의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3의 복합 서열과 적어도 75% 아미노산 서열 동일성을 갖는다.

본 발명의 추가의 양태에 따르면, CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 대한 단리된 결합 구성원이 제공되며, 당해 결합 구성원은 항체 1 내지 42 중 임의의 것의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 복합 서열과 적어도 65% 아미노산 서열 동일성을 갖는다.

본 발명의 항체는, 둘 모두가 IL-4Rα에 결합하고, 항체, VH 및/또는 VL 도메인, CDR, 예를 들어 HCDR3, 및/또는 본 명세서에 개시된 CDR의 세트를 포함하는 임의의 결합 구성원과 IL-4Rα로의 결합을 위해 경쟁하는 것일 수 있다. 항체 간의 경쟁은, 예를 들어 ELISA를 사용하고/하거나 동일한 에피토프 또는 중첩된 에피토프에 결합하는 항체의 확인이 가능하도록, 하나 이상의 다른 비태깅된 항체의 존재하에서 검출될 수 있는 하나의 결합 구성원에 특정 리포터 분자를 태깅하여, 시험관 내에서 용이하게 검정할 수 있다. 경쟁은 예를 들어, IL-4Rα를 플레이트에 고정화하고, 제1 태깅된 결합 구성원을 하나 이상의 다른 비태깅된 항체와 함께 플레이트에 첨가하는 ELISA를 사용하여 결정될 수 있다. 태깅된 결합 구성원과 경쟁하는 비태깅된 결합 구성원의 존재는 태깅된 결합 구성원에 의해 방출되는 신호의 감소에 의해 관찰된다. 이러한 방법은 해당 분야의 숙련자에게 널리 알려져 있으며, 본원에 더욱 상세히 기재되어 있다. 일 구현예에서, 경쟁적 결합은 본원에 기술된 바와 같이, 에피토프 경쟁 검정을 사용하여 검정한다. 본 발명의 항체는 IL-4Rα로의 결합을 위해, 항체 분자, 예를 들어, 특히 VH 및/또는 VL 도메인, CDR, 예를 들어, HCDR3 또는 모체 항체 또는 항체 2 내지 42 중 임의의 것의 CDR의 세트를 포함하는 항체 분자와 경쟁하는 항체 항원-결합 부위를 포함할 수 있다.

본 발명의 양태는 IL-4Rα로의 결합을 위해, 예를 들어, 본원에 정의된 임의의 결합 구성원과 경쟁하는, 예를 들어 scFv 또는 IgG1, IgG2 또는 IgG4 포맷의 항체 2 내지 42 중 임의의 것 또는 모체 항체와 경쟁하는 항체를 제공한다. IL-4Rα로의 결합을 위해 본원에 정의된 임의의 결합 구성원과 경쟁하는 항체는 본 발명의 항체에 대해 본원에 개시된 구조적 및/또는 기능적 특성 중 임의의 하나 이상을 가질 수 있다.

치료 방법

본 발명에 따른 항체는 인간 또는 동물 신체의 치료 또는 진단 방법, 예를 들어, 유효량의 본 발명의 항체를 인간 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 인간 환자에서의 질병 또는 장애의 치료 방법(예방적 처치를 포함할 수 있음)에 사용될 수 있다. 본 발명에 따라 치료가능한 질환은 본원의 다른 곳에 상세히 논의된 바와 같이 IL-4Rα, IL-4 및/또는 IL-13이 역할을 수행하는 임의의 것일 수 있다.

본 발명의 이들 및 다른 양태는 하기에 추가로 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 항체는 인간 또는 동물 대상체, 예를 들어, 인간에서의 진단 또는 치료 방법에 사용될 수 있다. 예를 들어, 항체는 예가 본원의 다른 곳에 언급되어 있는 IL-4Rα-관련 질병 또는 장애의 진단 또는 치료에 사용될 수 있다.

본 발명의 항체가 치료 또는 진단에 사용될 수 있는 특정 질환은 천식, COPD(만성 기관지염, 소기도 질병 및 기종 포함), 염증성 장질병, 섬유증 질환(전신 경화증, 폐 섬유증, 기생충 유도된 간 섬유증, 및 낭성 섬유증 포함), 알러지(예를 들어, 아토피 피부염 및 음식물 알러지 포함)를 포함하고, 이식 거부를 방지하기 위한 이식 요법, 및 알러지 면역요법에 대한 애쥬번트로서 및 백신 애쥬번트로서 지연형 과민증 또는 접촉성 과민 반응의 억제를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 항체 제형을 투여함에 의한 염증성 피부 장애의 치료 방법에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 염증성 피부 장애는 아토피 피부염이다.

특정 양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 제형을 투여하는 단계를 포함하는 폐 질병 또는 장애(예를 들어, 천식, 특발성 폐 질병(IPF) 또는 COPD) 또는 만성 염증성 피부 질병 또는 장애(예를 들어, 또는 아토피 피부염)로 진단받은 환자의 치료 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 제형을 투여하는 단계를 포함하는 만성 염증성 피부 질병 또는 장애의 치료 방법에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 만성 염증성 피부 질병은 아토피 피부염, 알러지성 접촉 피부염, 습진 또는 건선으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

용어 "특발성 폐 섬유증"(IPF)은 폐의 진행성 반흔형성 또는 섬유증을 특징으로 하는 질병을 말한다. 그것은 폐포가 점차 섬유성 조직으로 대체되게 하는 특정 유형의 간질성 폐 질병이다. IPF와 함께, 진행성 반흔형성은 정상적으로 얇고 유연한 조직이 비대되고, 경직되어, 폐가 팽창되기 어렵게 만들어, 산소가 용이하게 혈류에 들어가지 못하게 한다. 예를 들어, 문헌[Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2000. 161:646-664]을 참조한다.

아토피 피부염은 기타 아토피 장애, 예를 들어, 알러지성 비염 및 천식과 종종 관련이 있는 흔한 만성 염증성 피부 질병이다(문헌[Bieber, New England Journal of Medicine, 2008, 358: 1483-1494]). IL-13 mRNA의 상향조절은 아토피 피부염의 아급성 및 만성 병변에서 관찰된다(문헌[Tazawa et al., Arch. Dermatol. Res., 2004, 295:459-464]; 문헌[Purwar et al,, J. Invest. Derm., 2006, 126, 1043-1051]; 문헌[Oh et al., J Immunol., 2011, 186:7232-42]).

본원에 사용되는 용어 "아토피 피부염"은 기타 아토피 장애, 예를 들어, 알러지성 비염 및 천식과 종종 관련이 있는 만성 염증성, 재발성, 비-전염성 및 소양성 피부 장애를 지칭한다(문헌[Bieber, New England Journal of Medicine, 2008, 358: 1483-1494]). 용어 "아토피 피부염"은 "신경피부염", "아토피성 습진" 또는 "내인 습진"과 동등하다. 특정 형태의 아토피 피부염은 그들이 발생하는 장소, 그들의 외양, 또는 그들을 유발하는 스트레스 인자로부터 그의 명칭을 얻으며, 본 발명에 따르면, 용어 "아토피 피부염"에 포함된다. 이들은 굴측성 습진(eczema flexurarum), 유연성 습진(eczema mulluscatum), 사마귀 습진(eczema verrucatum), 종두상 습진(eczema vaccinatum), 디스코이드성 습진(eczema dyskoides), 발한이상 습진(dyshydrotic eczema), 미생물 습진, 동전 습진(nummular eczema), 지루성 습진 및 다른 형태의 습진; 입주위 피부염 및 안와 피부염을 포함하나 이들로 한정되지 않는다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 아토피 피부염은 빈번하게 발생하는 세균성 이차 감염, 예컨대, 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 감염으로 인한 이차 감염, 화농피부증, 예컨대, 접촉전염성 농가진 및 그의 유도체뿐만 아니라 턱수염모낭염 또는 바이러스성 이차 감염도 포함한다. IL-13은 질병의 발병에 관여하며, 중요한 생체 내 유도물질이다. 예를 들면, 문헌[Oh et al., J. Immunol. 186:7232-42 (2011)]; 문헌[Tazawa et al., Arch. Dermatol. Res. 295:459-464 (2004)]; 문헌[Metwally et al. Egypt J. Immunol.　 11:171-7 (2004)]을 참조한다.

따라서, 본 발명의 항체는 IL-4, IL-13 또는 IL-4Rα 발현 및/또는 활성을 수반하는 질환의 치료에서의 치료제로서 유용하다. 다른 것들 중 특히, 일 구현예는 유효량의 본 발명의 항체를 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법이며, 여기서, IL-4Rα 활성화의 기능상 결과가 감소된다. 다른 것들 중 특히, 다른 구현예는 (i) 예를 들어, 상기 기재된 진단 방법을 사용하여, IL-4, IL-13 또는 IL-4Rα 발현 또는 활성을 나타내는 환자를 확인하는 단계, 및 (ii) 유효량의 본 발명의 항체를 환자에게 투여하는 단계로서, IL-4Rα 활성화의 기능상 결과가 약화되는 단계를 포함하는 치료 방법이다. 본 발명에 따른 유효량은 질병 또는 장애를 본질적으로 치유하지 않지만, 치료 중인 특징 질병 또는 장애의 적어도 하나의 증상의 중증도를 조절하도록(예를 들어, 감소 또는 경감시키도록) IL-4R 활성화의 기능상 결과를 조절하는(예를 들어, 감소시키는) 양이다. 따라서, 본 발명의 일 구현예는 본원에 언급된 장애 중 임의의 것의 적어도 하나의 증상의 치료 또는 그의 중증도의 감소를 필요로 하는 환자에게 유효량의 본 발명의 하나 이상의 항체를 단독으로, 또는 해당 분야에서 공지되거나 본 발명에 기술된 다른 적절한 약제와의 병용된 치료학적 섭생법으로 투여하여 장애 중의 임의의 것의 적어도 하나의 증상의 중증도가 감소되게 하는 단계를 포함하는 본원에 언급된 장애 중 임의의 것의 적어도 하나의 증상의 치료 또는 그의 중증도의 감소 방법이다. 다른 것들 중 특히, 본 발명의 다른 구현예는 유효량의 본 발명의 하나 이상의 항체와 접촉시키거나, 그를 투여하여, 상기 IL-4Rα의 적어도 하나의 효과가 길항되게 하는 단계를 포함하는 IL-4Rα의 적어도 하나의 효과, 예를 들어, IL-4Rα가 IL-4와 복합체(신호전달을 활성화시키기 위한 전구체)를 형성하는 능력의 길항 방법이다.

따라서, 본 발명의 추가의 양태는 제공된 바와 같은 항체 또는 이러한 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 투여를 포함하는 치료 방법 및/또는 투여용 약제의 제조에서의, 예를 들어, 약제학적으로 허용되는 부형제를 사용하여 결합 구성원을 제형화하는 것을 포함하는 약제 또는 약제학적 조성물의 제조 방법에서의 이러한 항체의 용도를 제공한다. 약제학적으로 허용되는 부형제는 이차 반응을 유발하지 않고 약제학적 조성물 내로 유입되며, 예를 들어, 활성 화합물(들)의 투여를 용이하게 하거나, 그의 수명 및/또는 체내에서의 그의 효능을 증가시키거나, 용액 중에서의 그의 용해도를 증가시키거나, 아니면 그의 보존을 개선시키도록 하는 화합물 또는 화합물의 조합물일 수 있다. 이들 약제학적으로 허용되는 비히클은 널리 알려져 있으며, 선택된 활성 화합물(들)의 성질 및 투여 방식의 함수로서 해당 분야의 숙련자에 의해서 조정될 것이다.

항체 제형

본 발명의 추가의 양태는 본 발명의 항체를 함유하는 항체 제형, 및 치료법에 의한 인간 또는 동물 신체의 치료 방법을 포함하는 IL-4Rα의 억제 및/또는 중화 방법에서의 그들의 용도를 제공한다.

일부 구현예에서, 항체 제형은 약제학적으로 허용된다. 용어 "약제학적으로 허용되는"은 유의미한 유해한 의학적 결과 없이, 동물(예를 들어, 포유류)에게 투여될 수 있는 화합물 또는 단백질을 지칭한다.

일부 구현예에서, 항체 제형은 생리학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 용어 "생리학적으로 허용되는 담체"는 치료되는 숙주에 유의미한 유해한 영향을 갖지 않고, 함께 투여되는 화합물의 치료적 특성을 유지시키는 담체를 지칭한다. 예시적인 하나의 생리학적으로 허용되는 담체는 생리학적 염수이다. 다른 생리학적으로 허용되는 담체 및 그들의 제형은 해당 분야의 숙련자에게 알려져 있으며, 예를 들어, 본원에 참조로 포함되는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, (18th edition), ed. A. Gennaro, 1990, Mack Publishing Company, Easton, Pa.]에 기술되어 있다.

본 발명의 항체는 통상 항체에 더하여 적어도 하나의 성분을 포함할 수 있는 약제학적 조성물의 형태로 투여될 것이다. 따라서, 본 발명에 따른, 그리고 본 발명에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물은 항체에 더하여, 점도 조절제, 비이온성 계면활성제, 제형 완충제, 약제학적으로 허용되는 부형제, 담체, 완충제, 안정화제 또는 해당 분야의 숙련자에게 알려져 있는 다른 물질 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 이러한 물질은 비독성이어야 하며, 항체의 효능을 간섭하지 않아야 한다. 담체 또는 다른 물질의 정확한 성질은 경구, 흡입 또는 주사에 의한 투여, 예를 들어, 정맥내 투여일 수 있는 투여 경로에 좌우될 것이다. 일 구현예에서, 조성물은 멸균이다.

정맥내 주사, 또는 환부 주사를 위해, 활성 성분은 발열원이 없고, 적합한 pH, 등장성 및 안정성을 갖는 비경구적으로 허용되는 수용액의 형태일 것이다. 해당 분야의 숙련자는 예를 들어, 염화나트륨 주사액, 링거 주사액, 락테이트 첨가 링거 주사액과 같은 등장성 비히클을 사용하여 적합한 용액을 잘 제조할 수 있다. 필요에 따라 보존제, 안정화제, 완충제, 항산화제 및/또는 다른 첨가제를 사용할 수 있으며, 완충제, 예컨대 인산염, 시트르산염, 히스티딘 및 다른 유기산; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 및 메티오닌; 보존제(예를 들어, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥사놀; 3'-펜타놀; m-크레졸); 저분자량 폴리펩티드; 단백질, 예컨대, 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 라이신; 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 비롯한 단당류, 이당류, 및 기타 탄수화물; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염형성 반대 이온, 예컨대 나트륨; 금속 착체(예를 들어, Zn-단백질 착체); 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 TWEEN™, PLURONICS™ 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다.

본 발명의 항체는 분자의 물리화학적 특성 및 전달 경로에 따라 액체, 반고체 또는 고체 형태로 제형화될 수 있다. 제형은 부형제 또는 부형제의 조합, 예를 들어, 당, 아미노산 및 계면활성제를 포함할 수 있다. 액체 제형은 광범위한 항체 농도 및 pH를 포함할 수 있다. 고체 제형은 동결건조, 분무 건조, 또는 예를 들어, 초임계 유체법에 의한 건조에 의해 생성될 수 있다. 항-IL-4Rα의 제형은 의도하는 전달 경로에 따라 좌우될 것이다: 예를 들어, 폐 전달용 제형은 흡입시 심폐로의 침투를 보장하는 물리적 특성을 갖는 입자로 구성될 수 있으며; 국소 제형은 약물이 작용 부위에 체류하는 시간을 연장시키는 점도 조절제를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 결합 구성원은 결합 구성원이 신속하게 방출되는 것을 방지하는 담체와 함께 제조될 수 있으며, 예컨대 임플란트, 경피 팻치, 및 미세캡슐화 전달 시스템을 비롯한, 제어 방출 제형일 수 있다. 생분해성, 생체적합성 중합체, 예컨대 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리락트산을 사용할 수 있다. 이러한 제형을 제조하는 많은 방법이 해당 분야의 숙련자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Robinson, 1978]을 참조한다.

본 발명의 항체를 사용한 항-IL-4Rα 치료는 경구로(예를 들어, 나노바디), 주사에 의해(예를 들어, 피하, 관절내, 정맥내, 복강내, 동맥내 또는 근육내), 흡입에 의해, 소포내 경로에 의해(방광 내로 점적주입), 또는 국소적으로(예를 들어, 안내, 비강내, 직장내, 환부내, 피부 상에) 제공될 수 있다. 치료는 특히 결합 구성원의 용량을 감소시키면서 펄스 주입에 의해 투여될 수 있다. 투여 경로는 치료의 물리화학적 특징에 의해, 질병에 대한 특수 고려사항에 의해, 또는 효능을 최적화하거나 또는 부작용을 최소화하기 위한 요건에 의해, 결정될 수 있다. 특정 투여 경로 중 하나는 정맥내이다. 본 발명의 약제학적 조성물을 투여하는 다른 경로는 피하에 의한 것이다. 항-IL-4Rα 치료는 병원이나 의사 진료실에서 사용하는데 제한되지 않으며 가정 및 작업실을 포함할 수 있는 것으로 고려된다. 따라서, 바늘이 없는 장치를 사용하는 피하 주사가 유리하다.

본 발명의 일부 구현예에서, 항체 제형은 고농도의 항체를 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 제형 중 항체 농도는 100 ㎎/㎖ 초과의 항체이다. 일부 구현예에서, 항체 농도는 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖, 약 120 ㎎/㎖ 내지 약 180 ㎎/㎖, 약 140 ㎎/㎖ 내지 약 160 ㎎/㎖ 또는 약 150 ㎎/㎖이다.

일부 구현예에서, 항체 제형은 더 낮은 농도의 항체, 예를 들어, 약 10 ㎎/㎖ 내지 약 100 ㎎/㎖을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 제형 중 항체 농도는 약 20 ㎎/㎖ 내지 약 80 ㎎/㎖, 약 30 ㎎/㎖ 내지 약 70 ㎎/㎖, 약 40 ㎎/㎖ 내지 약 60 ㎎/㎖, 또는 약 50 ㎎/㎖이다. 일부 구현예에서, 더 낮은 농도의 항체를 포함하는 항체 제형은 부형제를 추가로 포함한다. 용어 부형제는 본원에 기재된 바와 같은 항체와 제형화된 약리학적 비활성 물질을 지칭한다. 일부 구현예에서, 부형제는 더 낮은 농도에서 항체의 변성의 방지를 돕거나, 또는 다르게는 항체의 안정화를 도울 수 있다.

약제학적 조성물에 사용될 수 있는 적합한 부형제는 해당 분야에 알려져 있다. 예는 예를 들어, 문헌[handbook: Gennaro, Alfonso R.: "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990]으로부터 취할 수 있다. 일부 구현예에서, 부형제는 "비하전" 부형제이며, 즉, 부형제는 양의 "+" 또는 음의 "-" 전하를 지니지 않는다. 일부 구현예에서, 부형제는 프룩토스, 글루코스, 만노스, 소르보스, 자일로스, 락토스, 말토스, 수크로스, 덱스트란, 풀룰란, 덱스트린, 사이클로덱스트린, 가용성 전분, 트레할로스, 소르비톨, 에리트리톨, 이소말트, 락티톨, 말티톨, 자일리톨, 글리세롤, 락티톨, 하이드록시에틸 전분, 수용성 글루칸으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 부형제는 트레할로스이다.

일부 구현예에서, 트레할로스는 항체 제형, 예를 들어, 20 내지 100 ㎎/㎖ 항체를 포함하는 항체 제형 중 약 50 mM 내지 약 800 mM, 약 100 mM 내지 약 500 mM, 약 150 mM 내지 약 400 mM, 약 200 mM, 약 400 mM, 약 200 mM, 약 300 mM 또는 약 250 mM이다. 일 구현예에서, 트레할로스는 항체 제형 중 약 250 mM이다.

일부 구현예에서, 제형 완충제에는 본질적으로 인산염이 없다. 용어 "본질적으로 인산염이 없다"는 제형 완충제를 나타내는 경우, 인산 이온이 pH를 완충시키기 위해 사용되지 않는 완충계를 지칭한다. 따라서, 본질적으로 인산염이 없는 완충제는 작용 pH에서 화합물에 존재하는(즉, 공유 결합된) 인산염 모이어티를 가질 수 있지만, 인산 이온이 존재하지 않을 것이다. 일부 구현예에서, 항체 제형에는 본질적으로 인산염이 없다. 용어 "본질적으로 인산염이 없는"은 항체 제형을 나타내는 경우, 인산 이온이 항체 제형의 pH를 완충시키기 위해 사용되지 않는 완충계를 지칭한다.

일부 구현예에서, 항체 제형은 점도 조절제를 포함한다. 일부 예에서, 항체 제형은 고농도의 항체로 인하여 높은 점도를 갖는다. 다양한 점도 조절제가 해당 분야의 숙련자에게 알려져 있다. 일부 구현예에서, 점도 조절제는 히스티딘, 아르기닌, 라이신, 폴리비닐 알코올, 폴리알킬 셀룰로스, 하이드록시알킬 셀룰로스, 글리세린, 폴리에틸렌 글리콜, 글루코스, 덱스트로스 및 수크로스로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 점도 조절제는 라이신, 아르기닌 또는 히스티딘이다. 일부 구현예에서, 점도 조절제는 아르기닌이다. 일부 구현예에서, 점도 조절제는 염 형태, 예를 들어, 아르기닌, 라이신 또는 히스티딘의 염을 포함한다. 일부 구현예에서, 점도 조절제는 아미노산, 예를 들어, L-형 아미노산, 예를 들어, L-아르기닌, L-라이신 또는 L-히스티딘이다. 일부 구현예에서, 점도 조절제는 약 50 mM 내지 약 400 mM, 또는 약 100 mM 내지 약 250 mM의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 점도 조절제는 약 190 mM의 농도로 존재한다. 일부 구현예에서, 점도 조절제는 약 100 mM 내지 약 250 mM의 농도의 아르기닌이다. 일부 구현예에서, 점도 조절제는 약 100 mM 내지 약 250 mM의 농도의 아르기닌-HCl이다. 일부 구현예에서, 점도 조절제는 약 190 mM의 농도의 아르기닌이다. 일부 구현예에서, 점도 조절제는 약 190 mM의 농도의 아르기닌-HCl이다.

일부 구현예에서, 점도 조절제는 23℃에서 약 40 cP 미만, 23℃에서 약 30 cP 미만, 23℃에서 약 25 cP 미만 또는 23℃에서 약 20 cP 미만의 점도를 수득하기 위한 양으로 첨가된다. 일부 구현예에서, 점도 조절제는 23℃에서 약 1 cP 내지 약 40 cP, 23℃에서 약 2 cP 내지 약 30 cP, 23℃에서 약 5 cP 내지 약 25 cP 또는 23℃에서 약 10 cP 내지 약 20 cP의 점도를 수득하기 위한 양으로 첨가된다.

일부 구현예에서, 계면활성제가 항체 제형에 존재한다. 다양한 계면활성제가 해당 분야의 숙련자에게 알려져 있다. 일부 구현예에서, 계면활성제는 비이온성 계면활성제이다. 일부 구현예에서, 비이온성 계면활성제는 트리톤(Triton) X-100, 트윈(Tween) 80, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 노녹시놀-9, 폴리옥사머, 스테아릴 알코올 또는 소르비탄 모노스테아레이트로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 비이온성 계면활성제는 폴리소르베이트 80이다. 본 발명자들은 IL-4Rα 항체를 제형화하는 경우, 일부 구현예에서, 제형이 약 0.002% 내지 약 0.4%, 0.005% 내지 약 0.15%, 약 0.002% 내지 약 0.2%, 약 0.01% 내지 약 0.1%, 또는 약 0.02% 내지 약 0.08%의 비이온성 계면활성제를 포함하는 것을 발견하였다. 일부 구현예에서, 제형은 약 0.04%의 비이온성 계면활성제를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형은 약 0.002% 내지 약 0.4%, 약 0.002% 내지 약 0.2%, 약 0.005% 내지 약 0.15%, 약 0.01% 내지 약 0.1%, 또는 약 0.02% 내지 약 0.08%의 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 구현예에서, 제형은 약 0.04%의 폴리소르베이트 80을 포함한다. 일부 구현예에서, 비이온성 계면활성제는 CMC 값이거나, CMC 값 초과이며, 최대 0.5%이다. 일부 구현예에서, 비이온성 계면활성제의 농도는 응집을 방지하거나 억제하기에 충분하다. 일부 구현예에서, 응집은 시각적 분석에 의해 결정된다.

일부 구현예에서, 항체 제형은 제형 완충제를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형 완충제는 아세트산염 완충제, TRIS 완충제, HEPES 완충제, 하이드로클로라이드 완충제, 아르기닌 완충제, 글리신 완충제, 시트르산염 완충제 또는 TES 완충제 이다. 일부 구현예에서, 제형 완충제는 아르기닌 완충제이다. 일부 구현예에서, 아르기닌 완충제는 아르기닌 하이드로클로라이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 아르기닌 완충제는 히스티딘을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 히스티딘은 L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드이다.

제형 완충제는 다양한 농도의 아르기닌을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 제형 완충제는 약 10 mM 내지 약 40 mM의 L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형 완충제는 약 25 mM의 L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드를 포함한다.

다양한 추가의 부형제가 항체 제형에서 관찰될 수 있다. 일부 구현예에서, 제형은 추가로 염, 예를 들어, NaCl 또는 KCl 염을 포함한다. 일부 구현예에서, 염은 약 100 mM 내지 약 200 mM NaCl이다.

항체 제형은 다양한 pH 수준을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 제형은 약 5 내지 약 8, 약 5.5 내지 약 8, 약 6 내지 약 8, 약 6.5 내지 약 8, 약 7 내지 약 8의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 제형은 약 7.0, 약 7.1, 약 7.2, 약 7.3, 약 7.4, 약 7.5, 약 7.6, 약 7.7, 약 7.8 또는 약 7.9의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 제형은 약 7.2 내지 약 7.6, 또는 약 7.4의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 제형은 약 5.5 내지 약 6.5의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 제형은 약 5.6, 약 5.7, 약 5.8, 약 5.9, 약 6.0, 약 6.1, 약 6.2, 약 6.3, 또는 약 6.4의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다.

일부 구현예에서, 항체 제형은 피하 투여에 적합한 액체 제형이다. 일부 구현예에서, 항체 제형은 동결건조된 제형이다. 일부 구현예에서, 동결건조된 제형은 투여 이전 액체(예를 들어, 수성) 형태로 재구성된다. 일부 구현예에서, 항체는 동결건조로 처리되지 않는다.

본 발명의 항체 제형은 연장된 기간 동안의 보관에 적합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제형은 약 40℃에서의 보관시에 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 1년 또는 적어도 약 18개월 동안 안정하다. 일부 구현예에서, 항체 제형은 약 40℃에서의 보관시에 약 2주 내지 약 1년, 약 1개월 내지 약 1년, 약 2개월 내지 약 1년 또는 약 3개월 내지 약 1년 동안 안정하다. 일부 구현예에서, 항체 제형은 약 40℃에서의 보관시에 약 2주 내지 약 6개월, 약 1개월 내지 약 6개월, 약 2개월 내지 약 6개월 또는 약 3개월 내지 약 6개월 동안 안정하다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 항체 제형은 교반 동안 입자 형성이 감소된다. 입자 제형 분석은 본원의 실시예 5에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 항체 제형은 실시예 5의 교반 실험에 노출되는 경우, "10 ㎛ 이상의 입자"/㎖이 1,000개 미만이다. 일부 구현예에서, 항체 제형은 실시예 5의 교반 실험에 노출되는 경우, "10 ㎛ 이상의 입자"/㎖이 500개 미만이다. 일부 구현예에서, 항체 제형은 실시예 5의 교반 실험에 노출되는 경우, "10 ㎛ 이상의 입자"/㎖이 100개 미만이다. 일부 구현예에서, 항체 제형은 실시예 5의 교반 실험에 노출되는 경우, "10 ㎛ 이상의 입자"/㎖이 1,000개 미만이다. 일부 구현예에서, 항체 제형은 실시예 5의 교반 실험에 노출되는 경우, "10 ㎛ 이상의 입자"/㎖이 500개 미만이다. 일부 구현예에서, 항체 제형은 실시예 5의 교반 실험에 노출되는 경우, "10 ㎛ 이상의 입자"/㎖이 100개 미만이다.

일부 구현예에서, 제형은 약 25℃에서의 보관시에 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월 또는 적어도 1년 동안 안정하다. 일부 구현예에서, 제형은 약 5℃에서의 보관시에 적어도 18개월, 적어도 24개월 또는 적어도 36개월 동안 안정하다.

일부 구현예에서, 약 40℃에서 적어도 1개월 동안 보관된 항체는 보관되지 않은 참조 항체에 비하여 hIL-4Rα 폴리펩티드로의 결합 능력의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95%가 유지된다. 일부 구현예에서, 약 5℃에서 적어도 6개월 동안 보관된 항체는 보관되지 않은 참조 항체에 비하여 hIL-4Rα 폴리펩티드로의 결합 능력의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 95%가 유지된다. 일부 구현예에서, 약 40℃에서 적어도 1개월 동안 보관된 항체는 보관되지 않은 참조 항체에 비하여 hIL-4Rα 폴리펩티드로의 결합 능력의 적어도 50% 또는 적어도 95%가 유지된다. 일부 구현예에서, 약 5℃에서 적어도 6개월 동안 보관된 항체는 보관되지 않은 참조 항체에 비하여 hIL-4Rα 폴리펩티드로의 결합 능력의 적어도 50% 또는 적어도 95%가 유지된다.

일부 구현예에서, 제형은 주사가능한 제형이다. 일부 구현예에서, 제형은 정맥내, 피하 또는 근육내 투여에 적합하다.

본 발명의 항체 제형은 운반, 보관 및/또는 투여를 위하여 밀봉된 용기에 배치될 수 있다. 일부 구현예에서, 밀봉된 용기는 밀봉된 바이얼 또는 밀봉된 주사기이다. 일부 구현예에서, 용기는 사전-충전된 주사기이다. 일부 구현예에서, 용기는 1회 용량의 항체를 함유하는 1회 이용 용기이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 적합한 용기에 항체 제형을 포함하는 인간으로의 비경구 투여에 적합한 약제학적 단위 투여형에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 본원에 기재된 항체 제형, 본원에 기재된 용기, 본원에 기재된 단위 투여형 및/또는 본원에 기재된 사전-충전된 주사기를 포함하는 키트에 관한 것일 수 있다.

조성물은 치료할 질환에 따라, 단독으로 또는 다른 치료와 병용하여, 다른 치료제 또는 치료제들과 동시에 또는 순차적으로 또는 그와의 조합된 제제로서 투여될 수 있다.

IL-4Rα에 대한 항체는 추가의 약제 성분과 함께 병용 요법의 부분으로 사용될 수 있다. 병용 치료, 특히 항-IL-4Rα 결합 구성원과 하나 이상의 다른 약물의 병용을 사용하여 유의미한 상승 효과를 제공할 수 있다. IL-4Rα에 대한 항체는 본원에 열거된 질환 중 하나 이상의 치료를 위하여, 다른 치료제 또는 치료제들과 동시에 또는 순차적으로 또는 그와의 조합된 제제로서 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 항체 조성물은 하기의 작용제 중 하나 이상과 병용하여, 또는 그에 더하여, 본원에 기재된 항체를 포함할 수 있다:

● 사이토카인 또는 사이토카인 기능의 효능제 또는 길항제(예를 들어, SOCS 시스템의 조절제와 같은, 사이토카인 신호전달 경로에 작용하는 작용제), 예컨대, 알파-, 베타- 및/또는 감마-인터페론; 인슐린-유사 성장 인자 I형(IGF-1), 그의 수용체 및 관련 결합 단백질; 인터류킨(IL), 예를 들어, IL-1 내지 -33 중 하나 이상, 및/또는 인터류킨 길항제 또는 억제제, 예를 들어, 아나킨라(anakinra); 인터류킨 과 구성원 수용체의 억제제 또는 이러한 수용체의 특정 서브유닛의 억제제, 종양 괴사 인자 알파(TNF-α) 억제제, 예컨대, 항-TNF 모노클로널 항체(예를 들어, 인플릭시맙(infliximab), 아달리무맙(adalimumab), 및/또는 CDP-870), 및/또는 TNF 수용체 길항제, 예를 들어, 면역글로불린 분자(예를 들어, 에타너셉트(etanercept)) 및/또는 저분자량 작용제, 예를 들어, 펜톡시필린(pentoxyfylline);

● B 세포 조절제, 예를 들어, B-림프구 표적화 모노클로널 항체(예컨대, CD20(리툭시맙(rituximab)) 또는 MRA-aIL16R) 또는 T-림프구 표적화 모노클로널 항체(예를 들어, CTLA4-Ig 또는 아바타셉트(Abatacept));

● 파골세포 활성을 억제하는 조절제, 예를 들어, RANKL에 대한 항체;

● 케모카인 또는 케모카인 수용체 기능의 조절제, 예를 들어, CCR1, CCR2, CCR2A, CCR2B, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10 또는 CCR11(C-C 과)의 길항제; CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, 또는 CXCL13(C-X-C 과) 또는 CX₃CR1(C-X₃-C 과)의 길항제;

● 매트릭스 메탈로프로테아제(MMP), 즉, 스트로멜리신, 콜라게나제, 및 젤라티나제, 및 어그레카나제 중 하나 이상, 특히, 콜라게나제-1(MMP-1), 콜라게나제-2(MMP-8), 콜라게나제-3(MMP-13), 스트로멜리신-1(MMP-3), 스트로멜리신-2(MMP-10), 및/또는 스트로멜리신-3(MMP-11) 및/또는 MMP-9 및/또는 MMP-12의 억제제, 예를 들어, 독시사이클린과 같은 작용제;

● 류코트리엔 생합성 억제제, 5-리폭시게나제(5-LO) 억제제 또는 5-리폭시게나제 활성화 단백질(FLAP) 길항제, 예를 들어, 질루톤(zileuton); ABT-761; 펜루톤(fenleuton); 테폭살린(tepoxalin); 애보트(Abbott)-79175; 애보트-85761; N-(5-치환)-티오펜-2-알킬설폰아미드; 2,6-디-t-부틸페놀하이드라존; 메톡시테트라하이드로피란, 예컨대, 제네카(Zeneca) ZD-2138; 화합물 SB-210661; 피리디닐-치환 2-시아노나프탈렌 화합물, 예컨대, L-739,010; 2-시아노퀴놀린 화합물, 예를 들어, L-746,530; 인돌 및/또는 퀴놀린 화합물, 예컨대, MK-591, MK-886, 및/또는 BAY x 1005;

● 페노티아진-3-1s, 예를 들어, L-651,392; 아미디노 화합물, 예를 들어, CGS-25019c; 벤족살아민, 예를 들어, 온타졸라스트(ontazolast); 벤젠카복스이미드아미드, 예를 들어, BIIL 284/260; 및 자피르루카스트(zafirlukast), 아브루카스트(ablukast), 몬테루카스트(montelukast), 프란루카스트(pranlukast), 베르루카스트(verlukast)(MK-679), RG-12525, Ro-245913, 이라루카스트(iralukast)(CGP 45715A), 및 BAY x 7195와 같은 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 류코트리엔(LT) B4, LTC4, LTD4, 및 LTE4에 대한 수용체 길항제;

● 포스포디에스테라제(PDE) 억제제, 예를 들어, 메틸잔타닌, 예컨대 테오필린 및/또는 아미노필린; 및/또는 선택적 PDE 동질효소 억제제, 예를 들어, PDE4 억제제 및/또는 아이소형 PDE4D의 억제제 및/또는 PDE5의 억제제;

● 히스타민 1형 수용체 길항제, 예를 들어, 세티리진(cetirizine), 로라타딘(loratadine), 데스로라타딘(desloratadine), 펙소페나딘(fexofenadine), 아크리바스틴(acrivastine), 테르페나딘(terfenadine), 아스테미졸(astemizole), 아젤라스틴(azelastine), 레보카바스틴(levocabastine), 클로르페니라민(chlorpheniramine), 프로메타진(promethazine), 사이클리진(cyclizine) 및/또는 미졸라스틴(mizolastine)(일반적으로 경구, 국소 또는 비경구 적용됨);

● 양성자 펌프 억제제(예를 들어, 오메프라졸(omeprazole)) 또는 위장보호 히스타민 2형 수용체 길항제;

● 히스타민 4형 수용체의 길항제;

● 알파-1/알파-2 아드레날린 수용체 효능제 혈관수축 교감신경 흥분제, 예를 들어, 프로필헥세드린, 페닐에프린, 페닐프로판올아민, 에페드린, 슈도에페드린, 나파졸린 하이드로클로라이드, 옥시메타졸린 하이드로클로라이드, 테트라하이드로졸린 하이드로클로라이드, 자일로메타졸린 하이드로클로라이드, 트라마졸린 하이드로클로라이드 및 에틸노르에피네프린 하이드로클로라이드;

● 항콜린제, 예를 들어, 무스카린 수용체(M1, M2, M3, M4 또는 M5) 길항제, 예컨대, 아트로핀(atropine), 하이오신(hyoscine), 글리코피롤레이트(glycopyrrrolate), 이프라트로퓸 브로마이드(ipratropium bromide), 티오트로퓸 브로마이드(tiotropium bromide), 옥시트로퓸 브로마이드(oxitropium bromide), 피렌제핀(pirenzepine), 및 텔렌제핀(telenzepine);

● 베타-아드레날린 수용체 효능제(베타 수용체 아형 1 내지 4 포함), 예를 들어, 이소프레날린(isoprenaline), 살부타몰(salbutamol), 포르모테롤(formoterol), 살메테롤(salmeterol), 터부탈린(terbutaline), 오르시프레날린(orciprenaline), 비톨테롤 메실레이트(bitolterol mesylate), 및/또는 피르부테롤(pirbuterol), 예를 들어, 그의 키랄 에난티오머;

● 크로몬(chromone), 예를 들어, 소듐 크로모글리케이트 및/또는 네도크로밀 소듐;

● 글루코코르티코이드, 예를 들어, 플루니졸라이드(flunisolide), 트리암시놀론 아세토나이드(triamcinolone acetonide), 베클로메타손 디프로피오네이트(beclomethasone dipropionate), 부데소나이드(budesonide), 플루티카존 프로피오네이트(fluticasone propionate), 시클레조나이드(ciclesonide) 및/또는 모메타존 푸로에이트(mometasone furoate);

● PPAR과 같은 핵 호르몬 수용체를 조절하는 작용제;

● 면역글로불린(Ig) 또는 Ig 제제, 또는 항-IgE(예를 들어, 오말리주맙(omalizumab))과 같은 Ig 기능을 조절하는 길항제 또는 항체;

● 다른 전신 또는 국소 투여용 항염증제, 예를 들어, 탈리도마이드(thalidomide) 또는 그의 유도체, 레티노이드(retinoid), 디트라놀(dithranol), 및/또는 칼시포트리올(calcipotriol);

● 아미노살리실레이트와, 설파살라진, 메살라진, 발살라지드 및 올살라진과 같은 설파피리딘의 조합; 및 티오퓨린과 같은 면역조절제; 및 부데소나이드와 같은 코르티코스테로이드;

● 항박테리아제, 예를 들어, 페니실린 유도체, 테트라사이클린, 마크롤리드, 베타-락탐, 플루오로퀴놀론, 메트로니다졸, 및/또는 흡입형 아미노글리코시드; 및/또는 항바이러스제, 예를 들어, 아시클로버(acyclovir), 팜시클로버(famciclovir), 발라시클로버(valaciclovir), 간시클로버(ganciclovir), 시도포비르(cidofovir); 아만타딘(amantadine), 리만타딘(rimantadine); 리바비린(ribavirin); 자나마비르(zanamavir) 및/또는 오셀타마비르(oseltamavir); 프로테아제 억제제, 예를 들어, 인디나비르(indinavir), 넬피나비르(nelfinavir), 리토나비르(ritonavir), 및/또는 사퀴나비르(saquinavir); 뉴클레오시드 역전사효소 억제제, 예를 들어, 디다노신(didanosine), 라미부딘(lamivudine), 스타부딘(stavudine), 잘시타빈(zalcitabine), 지도부딘(zidovudine); 비-뉴클레오시드 역전사효소 억제제, 예를 들어, 네비라핀(nevirapine), 에파비렌츠(efavirenz);

● 심혈관 작용제, 예를 들어, 칼슘 채널 차단제, 베타-아드레날린 수용체 차단제, 안지오텐신 전환 효소(ACE) 억제제, 안지오텐신-2 수용체 길항제; 지질 강하제, 예를 들어, 스타틴 및/또는 피브레이트; 펜톡시필린과 같은 혈액 세포 형태 조절제; 혈소판 응집 억제제와 같은 혈전용해 및 항응고제;

● CNS 작용제, 예를 들어, 항우울제(예를 들어, 세르트랄린(sertraline)), 항-파킨슨 약물(예를 들어, 데프레닐(deprenyl), L-도파(L-dopa), 로피니롤(ropinirole), 프라미펙솔(pramipexole); MAOB 억제제, 예를 들어, 셀레진(selegine), 라사질린(rasagiline); comP 억제제, 예를 들어, 타스마르(tasmar), A-2 억제제, 도파민 재흡수 억제제, NMDA 길항제, 니코틴 효능제, 도파민 효능제 및/또는 뉴런 산화질소 합성효소의 억제제), 및 항-알츠하이머 약물, 예를 들어, 도네페질(donepezil), 리바스티그민(rivastigmine), 타크린(tacrine), COX-2 억제제, 프로펜토필린(propentofylline) 또는 메트리포네이트(metrifonate);

● 급성 및 만성 통증 치료를 위한 작용제, 예를 들어, 중추 또는 말초 작용 진통제, 예를 들어, 아편 유사체 또는 유도체, 카바마제핀(carbamazepine), 페닐로인(phenyloin), 소듐 발프로에이트(sodium valproate), 아미트립틸린(amitryptiline) 또는 다른 항우울제, 파라세타몰(paracetamol) 또는 비-스테로이드성 항염증제;

● 비경구 또는 국소 적용(흡입 포함) 국부 마취제, 예를 들어, 리그노카인(lignocaine) 또는 그의 유사체;

● 항-골다공증제, 예를 들어, 랄록시펜(raloxifene)과 같은 호르몬제, 또는 알렌드로네이트(alendronate)와 같은 비포스포네이트;

● (i) 트립타제 억제제; (ii) 혈소판 활성화 인자(PAF) 길항제; (iii) 인터류킨 전환 효소(ICE) 억제제; (iv) IMPDH 억제제; (v) 부착 분자 억제제, 예를 들어, VLA-4 길항제; (vi) 카텝신; (vii) 키나제 억제제, 예를 들어, 티로신 키나제 억제제(예를 들어, Btk, Itk, Jak3 MAP 억제제의 예는 제피티닙(Gefitinib), 이마티닙 메실레이트(Imatinib mesylate)), 세린/트레오닌 키나제 억제제(예를 들어, p38, JNK와 같은 MAP 키나제, 단백질 키나제 A, B 및 C 및 IKK 억제제), 또는 세포주기 조절에 관여하는 키나제(예를 들어, 사이클린 의존적 키나제)의 억제제; (viii) 글루코스-6 포스페이트 데하이드로게나제 억제제; (ix) 키닌-B.서브1.- 및/또는 B.서브2.-수용체 길항제; (x) 통풍 방지제, 예를 들어, 콜히친; (xi) 잔틴 옥시다제 억제제, 예를 들어, 알로푸리놀(allopurinol); (xii) 요산 배출 촉진제, 예를 들어, 프로벤시드(probenecid), 설핀피라존(sulfinpyrazone) 및/또는 벤즈브로마론(benzbromarone); (xiii) 성장 호르몬 분비촉진제; (xiv) 전환성장인자(TGFβ); (xv) 혈소판-유래 성장 인자(PDGF); (xvi) 섬유아세포 성장 인자, 예를 들어, 염기성 섬유아세포 성장 인자(bFGF: basic fibroblast growth factor); (xvii) 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF); (xviii) 캡사이신 크림; (xix) 타치키닌 NK.서브1. 및/또는 NK.서브3. 수용체 길항제, 예를 들어, NKP-608C, SB-233412(탈네탄트(talnetant)), 및/또는 D-4418; (xx) 엘라스타제 억제제, 예를 들어, UT-77 및/또는 ZD-0892; (xxi) TNF-알파 전환 효소 억제제(TACE); (xxii) 유도된 산화질소 합성효소(iNOS: induced nitric oxide synthase) 억제제 또는 (xxiii) TH2 세포 상에 발현된 화학유인 수용체-유사 분자(예를 들어, CRTH2 길항제); (xxiv) P38 억제제; (xxv) Toll-유사 수용체(TLR) 기능을 조절하는 작용제 및 (xxvi) P2X7과 같은 퓨린 수용체 활성을 조절하는 작용제; (xxvii) NFkB, API, 및/또는 STATS와 같은 전사 인자 활성화 억제제.

억제제는 특이적이거나 또는 혼합 억제제, 예를 들어 상기 언급한 분자(예를 들어, 수용체) 또는 분자 부류 중 하나 이상을 표적화하는 억제제일 수 있다.

결합 구성원은 또한 면역컨쥬게이트의 형태로 또는 동시 투여로 화학치료제 또는 다른 티로신 키나제 억제제와 함께 사용될 수 있다. 상기 항체의 단편은 또한 재조합 메커니즘 또는 생화학적 커플링 및 이후 IL-4Rα가 관련되는 활성에 수반되는 다른 분자를 인식할 수 있는 다른 항체의 특이성과 함께 상기 기술된 항체의 특이성을 회합시켜 수득되는 이중 특이적 항체로 사용될 수 있다.

염증성 질병, 예를 들어 류마티스성 관절염, 골관절염, 천식, 알러지성 비염, 만성 폐쇄성 폐질병(COPD), 염증성 피부 질병, 예를 들어, 아토피 피부염 또는 건선의 치료를 위해, 본 발명의 항체는 하나 이상의 작용제, 예컨대, 비스테로이드성 항염증제(이후, NSAID), 예를 들어, 국소적으로 적용되든지 전신적으로 투여되든지, 비선택적 사이클로-옥시게나제(COX)-1/COX-2 억제제, 예컨대, 피록시캄(piroxicam), 디클로페낙(diclofenac), 프로피온산, 예를 들어, 나프록센(naproxen), 플루비프로펜(flurbiprofen), 페노프로펜(fenoprofen), 케토프로펜(ketoprofen) 및 이부프로펜(ibuprofen), 페나메이트(fenamate), 예를 들어, 메페남산(mefenamic acid), 인도메타신(indomethacin), 설린닥(sulindac), 아자프로파존(azapropazone), 피라졸론(pyrazolone), 예컨대, 페닐부타존, 살리실레이트, 예를 들어, 아스피린); 선택적 COX-2 억제제(예컨대, 멜록시캄(meloxicam), 셀레콕시브(celecoxib), 로페콕시브(rofecoxib), 발데콕시브(valdecoxib), 루마로콕시브(lumarocoxib), 파레콕시브(parecoxib) 및 에토리콕시브(etoricoxib)); 사이클로-옥시게나제 억제 산화질소 공여제(CINOD: cyclooxygenase inhibiting nitric oxide donor); 글루코코르티코스테로이드(국소 경로에 의해 투여되든, 경구 경로에 의해 투여되든, 근육내 경로에 의해 투여되든, 정맥내 경로에 의해 투여되든 또는 관절내 경로에 의해 투여되든); 메토트렉세이트, 레플루노마이드(leflunomide); 하이드록시클로로퀸, d-페니실라민, 아우라노핀(auranofin) 또는 다른 비경구 또는 경구 금 제제; 진통제; 디아세레인(diacerein); 관절내 치료제, 예컨대 히알루론산 유도체; 및 영양 보충제, 예컨대 글루코사민과 병용될 수 있다.

본 발명의 항체는 또한 암 치료를 위한 기존의 치료제와 병용될 수 있다. 병용하기에 적합한 작용제는 하기의 것을 포함한다:

(i) 종양 치료에 사용되는 항증식/항신생물 약물 및 그의 조합, 예를 들어, 글리벡(Gleevec)(이마티닙 메실레이트(imatinib mesylate)), 알킬화제(예를 들어, 시스-플라틴, 카보플라틴, 사이클로포스파미드, 질소 머스타드, 멜팔란(melphalan), 클로람부실(chlorambucil), 부설판(busulphan) 및 니트로소우레아(nitrosourea)); 항대사물질(예를 들어, 항엽산대사제, 예를 들어, 5-플루오로우라실 및 테가푸르(tegafur)와 같은 플루오로피리미딘, 랄티트렉시드(raltitrexed), 메토트렉세이트, 시토신 아라비노시드, 하이드록시우레아, 젬시타빈 및 파클리탁셀); 항종양 항생제(예를 들어, 아드리아마이신(adriamycin), 블레오마이신(bleomycin), 독소루비신(doxorubicin), 다우노마이신(daunomycin), 에피루비신(epirubicin), 이다루비신(idarubicin), 미토마이신(mitomycin)-C, 닥티노마이신(dactinomycin) 및 미트라마이신(mithramycin)과 같은 안트라사이클린); 항유사분열제(예를 들어, 빈크리스틴(vincristine), 빈블라스틴(vinblastine), 빈데신(vindesine) 및 비노렐빈(vinorelbine)과 같은 빈카 알칼로이드, 및 탁솔(taxol) 및 탁소테레(taxotere)와 같은 탁소이드(taxoid)); 및 토포이소머라제 억제제(예를 들어, 에토포시드(etoposide) 및 테니포시드(teniposide), 암사크린(amsacrine), 토포테칸(topotecan) 및 캄프토테신(camptothecin)과 같은 에피포도필로톡신);

(ii) 세포증식억제제, 예를 들어, 항에스트로겐제(예를 들어, 타목시펜(tamoxifen), 토레미펜(toremifene), 랄록시펜(raloxifene), 드롤록시펜(droloxifene) 및 요독시펜(iodoxyfene)), 에스트로겐 수용체 하향 조절제(예를 들어, 풀베스트란트(fulvestrant)), 항안드로겐제(예를 들어, 비칼루타미드(bicalutamide), 플루타미드(flutamide), 닐루타미드(nilutamide) 및 시프로테론 아세테이트(cyproterone acetate)), LHRH 길항제 또는 LHRH 효능제(예를 들어, 고세렐린(goserelin), 류프로렐린(leuprorelin) 및 부세렐린(buserelin)), 프로게스토겐(예를 들어, 메게스트롤 아세테이트(megestrol acetate)), 아로마타제 억제제(예를 들어, 아나스트로졸(anastrozole), 레트로졸(letrozole), 보라졸(vorazole) 및 엑세메스탄(exemestane)) 및 피나스테리드(finasteride)와 같은 5α-환원효소 억제제;

(iii) 암세포 침윤을 억제하는 작용제(예를 들어, 마리마스타트(marimastat)와 같은 메탈로프로테이나제 억제제 및 유로키나제 플라스미노겐 활성화제 수용체 기능의 억제제);

(iv) 성장 인자 기능의 억제제, 예를 들어, 성장 인자 항체, 성장 인자 수용체 항체(예를 들어, 항-erbb2 항체 트라스투주맙(trastuzumab) 및 항-erbb1 항체 세툭시맙(cetuximab)[C225]), 파네실 트랜스퍼라제 억제제, 티로신 키나제 억제제 및 세린/트레오닌 키나제 억제제, 예를 들어, 상피 성장 인자 과의 억제제(예를 들어, EGFR 과 티로신 키나제 억제제, 예를 들어, N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-메톡시-6-(3-모르폴리노프로폭시)퀴나졸린-4-아민(제피티닙(gefitinib), AZD1839), N-(3-에티닐페닐)-6,7-비스(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-4-아민(에를로티닙(erlotinib), OSI-774) 및 6-아크릴아미도-N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-(3-모르폴리노프로폭시)퀴나졸린-4-아민(CI 1033)), 예를 들어, 혈소판-유래 성장 인자 과의 억제제 및 예를 들어, 간세포 성장 인자 과의 억제제;

(v) 혈관신생 억제제, 예를 들어, 혈관 내피 성장 인자의 효과를 억제하는 것들(예를 들어, 항-혈관 내피 세포 성장 인자 항체 베바시주맙(bevacizumab), 화합물, 예컨대 국제 특허 출원 WO 97/22596호, WO 97/30035호, WO 97/32856호 및 WO 98/13354호에 개시된 것들, 상기 문헌은 각각 전문이 참조로 포함됨) 및 다른 메커니즘에 의해 작용하는 화합물(예를 들어, 리노마이드(linomide), 인테그린 αvβ3 기능의 억제제 및 안지오스타틴);

(vi) 혈관 손상제, 예를 들어, 콤브레타스타틴(combretastatin) A4 및 국제 공개 특허 출원 WO 99/02166호, WO 00/40529호, WO 00/41669호, WO 01/92224호, WO 02/04434호 및 WO 02/08213호(이들 각각은 전문이 본원에 포함됨)에 개시된 화합물;

(vii) 안티센스 요법제, 예를 들어, 상기 열거된 표적에 대해 유도된 것들, 예컨대, ISIS 2503, 항-ras 안티센스;

(viii) 유전자 요법 접근법, 예를 들어, 비정상 p53 또는 비정상 BRCA1 또는 BRCA2와 같은 비정상 유전자를 대체하는 접근법, GDEPT(gene directed enzyme pro-drug therapy) 접근법, 예컨대, 시토신 데아미나제, 티미딘 키나제 또는 박테리아 니트로리덕타제 효소를 사용하는 접근법 및 화학요법 또는 방사선요법에 대한 환자의 내성을 증가시키는 접근법, 예컨대, 다중-약물 내성 유전자 요법; 및

(ix) 면역치료 접근법, 예를 들어, 환자 종양 세포의 면역원성을 증가시키는 생체 외 및 생체 내 접근법, 예를 들어, 인터류킨 2, 인터류킨 4 또는 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자와 같은 사이토카인으로의 트랜스펙션, T 세포 아네르기를 감소시키는 접근법, 사이토카인 트랜스펙션된 수지상 세포와 같은 트랜스펙션된 면역 세포를 사용하는 접근법, 사이토카인 트랜스펙션된 종양 세포주를 사용하는 접근법 및 항-이디오타입 항체를 사용하는 접근법.

본 발명의 항체 및 상기 추가의 약제 성분 중 하나 이상은 약제 제조에 사용할 수 있다. 약제는 개체에게 개별적으로 또는 병용하여 투여하기 위한 것일 수 있고, 따라서 결합 구성원 및 조합된 제제로서 또는 개별 제제로서 추가의 성분을 포함할 수 있다. 개별 제제는 개별적 및 순차적 또는 동시 투여가 용이하도록, 그리고 상이한 경로, 예를 들어 경구 및 비경구 투여에 의해 성분을 투여하는 것이 가능하도록 사용할 수 있다.

본 발명에 따르면, 제공되는 조성물은 포유동물에게 투여될 수 있다. 투여는 "치료적 유효량"으로 이루어질 수 있으며, 이는 환자에게 이익을 나타내기에 충분하다. 이러한 이익은 적어도 하나의 증상의 적어도 완화일 수 있다. 투여되는 실제량, 및 투여 속도와 시간 추이는 치료하려는 것의 성질 및 중증도, 치료되는 특정 포유동물, 개별 환자의 임상적 상태, 질병의 원인, 조성물의 전달 부위, 결합 구성원의 유형, 투여 방법, 투여 계획 및 의학 종사자에게 공지된 다른 인자에 따라 좌우될 것이다. 치료 처방, 예를 들어 용량 등의 결정은 일반의 및 다른 의사의 책임에 속하며, 치료하려는 질병의 증상 및/또는 진행의 중증도에 따라 좌우될 수 있다. 적절한 항체 용량은 해당 분야에 널리 공지되어 있다(문헌[Ledermann et al. Int. J. Cancer 47:659-664, 1991]; 문헌[Bagshawe et al. Antibody, Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals 4:915-922, 1991]). 투여되는 약제 유형에 적절한 본원에, 또는 문헌[Physician's Desk Reference (2003)]에서 표시된 특정 투여량을 사용할 수 있다. 본 발명의 항체의 적절한 용량 또는 치료적 유효량은 동물 모델에서의 생체 내 활성 및 시험관 내 활성을 비교함으로써 결정할 수 있다. 마우스 및 다른 시험 동물에서의 유효량을 인간에 외삽하는 방법이 공지되어 있다. 정확한 용량은 항체가 진단, 예방 또는 치료용인지, 치료하려는 영역의 위치와 크기, 항체의 정확한 성질(예를 들어, 전체 항체, 단편 또는 디아바디), 및 항체에 부착된 임의의 검출가능한 표지 또는 다른 분자의 성질을 포함하는 다수의 인자에 따라 좌우될 것이다. 통상적인 항체 용량은 전신 응용을 위해서는 100 ㎍ 내지 1 g 범위이고, 국소 응용을 위해서는 1 ㎍ 내지 1 mg 범위일 것이다. 초기의 더 높은 로딩 용량, 이후 1회 이상의 더 낮은 용량을 투여할 수 있다. 전형적으로, 항체는 전체 항체, 예를 들어 IgG1 아이소타입일 수 있다. 이는 성인 환자의 단독 치료를 위한 용량이고, 어린이와 유아를 위해서 비례적으로 조정할 수 있으며, 또한 분자량에 비례하여 다른 항체 포맷을 위해 조정할 수 있다. 치료는 날마다, 주 2회, 1주 또는 1개월 간격으로, 담당의의 판단에 따라 반복할 수 있다. 치료는 피하 투여를 위해 매 2 내지 4주마다 그리고 정맥내 투여를 위해서는 매 4주 내지 8주마다 이루어질 수 있다. 본 발명의 일부 구현예에서, 치료는 정기적이고, 투여 사이 기간은 약 2주 이상, 예를 들어 약 3주 이상, 약 4주 이상, 또는 약 1개월에 1번이다. 본 발명의 다른 구현예에서, 치료는 수술 전, 및/또는 후에 제공될 수 있고, 수술 치료의 해부학적 부위에 직접 투여되거나 또는 적용될 수 있다.

또한, 본 발명은 안정한 수성 항체 제형의 생성 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 항체를 본원에 기재된 바와 같은 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 특이적으로 결합하는 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체 또는 그의 단편으로 정제하는 단계, 그 다음, 단리된 항체를 안정화 제형에 배치하여, 안정한 수성 항체 제형을 형성하는 단계로서, 생성된 안정한 수성 항체 제형이 (1) 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체; (2) 약 50 mM 내지 약 400 mM의 점도 조절제; (3) 약 0.01% 내지 약 0.2%의 비이온성 계면활성제; 및 (4) 제형 완충제를 포함하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 트레할로스, 아르기닌 또는 그의 조합의 존재하에 농축된다. 일부 구현예에서, 트레할로스, 아르기닌 또는 그의 조합을 첨가하여, 접선 유동 여과 공정을 돕는다.

특정 구현예에서, 본 발명은 다음에 관한 것이다:

1. a. 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 특이적으로 결합하는 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체 또는 그의 단편으로서,

(I) 항체가 CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, CDR의 세트가 참조 CDR 세트로부터 10개 이하의 아미노산 치환을 갖고, 참조 CDR 세트에서:

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 193을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 194를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 195를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 198을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 199를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 200을 갖거나;

(II)

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 363을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 364를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 365를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 368을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 369를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 370을 갖거나;

또는

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 233을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 234를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 235를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 238을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 239를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 240을 갖거나;

(III) 항체가 VH 도메인을 포함하고,

i. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖거나;

ii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖거나;

iii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고;

VH 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85; 또는

HFW4 내의 105, 108, 113에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

(IV) 항체가 VL 도메인을 포함하고,

i. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;

ii. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나;

iii. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;

VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

또는

(V) 항체 또는 그의 단편이 VH 및 VL 도메인을 포함하고,

i. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;

ii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나; 또는

iii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;

VH 도메인 및 VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85;

HFW4 내의 105, 108, 113;

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

(I) 내지 (V) 중 임의의 조합인 항체 또는 그의 단편; 및

b. 약 50 mM 내지 약 400 mM의 점도 조절제;

c. 약 0.002% 내지 약 0.2%의 비이온성 계면활성제; 및

d. 제형 완충제를 포함하는 안정한 항체 제형.

2. 제형 완충제에 본질적으로 인산염이 없는 구현예 1의 항체 제형.

3. 점도 조절제가 히스티딘, 아르기닌, 라이신, 폴리비닐 알코올, 폴리알킬 셀룰로스, 하이드록시알킬 셀룰로스, 글리세린, 폴리에틸렌 글리콜, 글루코스, 덱스트로스 및 수크로스로 이루어진 군으로부터 선택되는 구현예 2의 항체 제형.

4. 점도 조절제가 라이신, 아르기닌 또는 히스티딘인 구현예 1 내지 3 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

5. 점도 조절제가 아르기닌인 구현예 4의 항체 제형.

6. 점도 조절제가 약 100 mM 내지 약 250 mM의 농도로 존재하는 구현예 1 내지 4 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

7. 점도 조절제가 약 190 mM의 농도로 존재하는 구현예 1 내지 5 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

8. 비이온성 계면활성제가 트리톤 X-100, 트윈 80, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 노녹시놀-9, 폴리옥사머, 스테아릴 알코올 또는 소르비탄 모노스테아레이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 구현예 1 내지 7 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

9. 비이온성 계면활성제가 폴리소르베이트 80인 구현예 8의 항체 제형.

10. 제형이 약 0.02% 내지 약 0.08%의 비이온성 계면활성제를 포함하는 구현예 1 내지 9 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

11. 제형이 약 0.04%의 비이온성 계면활성제를 포함하는 구현예 10의 항체 제형.

12. 제형 완충제가 아세트산염 완충제, TRIS 완충제, HEPES 완충제, 하이드로클로라이드 완충제, 아르기닌 완충제, 글리신 완충제, 시트르산염 완충제 또는 TES 완충제인 구현예 1 내지 11 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

13. 제형 완충제가 아르기닌 완충제인 구현예 12의 항체 제형.

14. 아르기닌 완충제가 아르기닌 하이드로클로라이드를 포함하는 구현예 13의 항체 제형.

15. 아르기닌 완충제가 히스티딘을 추가로 포함하는 구현예 14의 항체 제형.

16. 히스티딘이 L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드인 구현예 15의 항체 제형.

17. 아르기닌 완충제가 약 10 mM 내지 약 40 mM의 L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드를 포함하는 구현예 16의 항체 제형.

18. 아르기닌 완충제가 약 25 mM의 L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드를 포함하는 구현예 17의 항체 제형.

19. 제형이 약 100 mM 내지 약 200 mM의 NaCl을 추가로 포함하는 구현예 1 내지 18 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

20. 제형이 약 5 내지 약 8의 pH를 갖는 구현예 1 내지 19 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

21. 제형이 약 6의 pH를 갖는 구현예 20의 항체 제형.

22. 항체가 CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, CDR의 세트가 참조 CDR 세트로부터 10개 이하의 아미노산 치환을 갖고, 참조 CDR 세트에서:

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 193을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 194를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 195를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 198을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 199를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 200을 갖는 구현예 1의 항체 제형.

23. 아미노산 치환이 도 15 및 도 16에 나타낸 바와 같은 하나 이상의 치환을 포함하는 구현예 22의 항체 제형.

24. 아미노산 치환이 표준 카바트 넘버링을 사용하여, CDR 내의 하기의 잔기 중 하나 이상에서 아미노산 치환을 포함하는 구현예 22의 항체 제형:

HCDR2 내의 53, 57;

HCDR3 내의 97, 98, 99, 101, 102;

LCDR1 내의 27, 27A, 27B, 31;

LCDR2 내의 56; 또는

LCDR3 내의 92, 93, 94, 95, 95A 95B, 95C, 96, 97.

25. 표준 카바트 넘버링을 사용하여, 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기에 하나 이상의 아미노산 치환을 추가로 포함하는 구현예 22의 항체 제형:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85;

HFW4 내의 105, 108, 113;

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87.

26. 프레임워크 영역 내의 아미노산 치환이 도 15 및 도 16에 나타낸 바와 같은 하나 이상의 치환을 포함하는 구현예 25의 항체 제형.

27. 항체 또는 그의 단편이 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 특이적으로 결합하며,

(I)

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 363을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 364를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 365를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 368을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 369를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 370을 갖거나;

또는

(II)

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 233을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 234를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 235를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 238을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 239를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 240을 갖는 구현예 1의 항체 제형.

28. 항체 또는 그의 단편이 항체 VH 도메인 및 항체 VL 도메인을 포함하며, VH 도메인이 HCDR1, HCDR2, HCDR3, 및 제1 프레임워크를 포함하고, VL 도메인이 LCDR1, LCDR2, LCDR3 및 제2 프레임워크를 포함하는 구현예 22 또는 27의 항체 제형.

29. 항체가 scFv인 구현예 1 내지 28 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

30. 항체가 항체 불변 영역을 포함하는 구현예 1 내지 29 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

31. 항체 분자가 IgG1, IgG2 또는 IgG4 분자인 구현예 1 내지 30 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

32. 항체 또는 그의 단편이 VH 도메인을 포함하고,

a. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖거나;

b. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖거나;

c. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고;

VH 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85; 또는

HFW4 내의 105, 108, 113에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는 구현예 1의 항체 제형.

33. 프레임워크 영역 내의 아미노산 치환이 도 15 및 도 16에 나타낸 바와 같은 하나 이상의 치환을 포함하는 구현예 32의 항체 제형.

34. 항체가 scFv인 구현예 32의 항체 제형.

35. 항체가 항체 불변 영역을 포함하는 구현예 32의 항체 제형.

36. 항체 분자가 IgG1, IgG2 또는 IgG4 분자인 구현예 32의 항체 제형.

37. 항체 또는 그의 단편이 VL 도메인을 포함하고,

a. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;

b. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나;

c. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;

VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는 구현예 1의 항체 제형.

38. 항체 분자가 scFv인 구현예 37의 항체 제형.

39. 항체 분자가 항체 불변 영역을 포함하는 구현예 37의 항체 제형.

40. 항체 분자가 IgG1, IgG2 또는 IgG4 분자인 구현예 37의 항체 제형.

41. 항체 또는 그의 단편이 VH 및 VL 도메인을 포함하고,

a. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;

b. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나; 또는

c. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;

VH 도메인 및 VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85;

HFW4 내의 105, 108, 113;

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는 구현예 1의 항체 제형.

42. 프레임워크 영역 내의 아미노산 치환이 도 15 및 도 16에 나타낸 바와 같은 하나 이상의 치환을 포함하는 구현예 41의 항체 제형.

43. 항체 분자가 scFv인 구현예 41의 항체 제형.

44. 항체 분자가 항체 불변 영역을 포함하는 구현예 41의 항체 제형.

45. 항체 분자가 IgG1, IgG2 또는 IgG4 분자인 구현예 41의 항체 제형.

46. 상기 항체가 동결건조 처리되지 않는 구현예 1 내지 45 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

47. 상기 제형이 약 40℃에서 보관시 적어도 1개월 동안 안정한 구현예 1 내지 46 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

48. 제형은 약 40℃에서 1개월 동안의 보관 후에 "10 ㎛ 이상의 입자"/㎖이 1000개 미만인 구현예 1 내지 47 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

49. 제형이 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는 구현예 1 내지 48 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

50. a. 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 특이적으로 결합하는 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체 또는 그의 단편으로서,

(I) 항체가 CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, CDR의 세트가 참조 CDR 세트로부터 10개 이하의 아미노산 치환을 갖고, 참조 CDR 세트에서:

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 193을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 194를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 195를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 198을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 199를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 200을 갖거나;

(II)

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 363을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 364를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 365를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 368을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 369를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 370을 갖거나;

또는

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 233을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 234를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 235를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 238을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 239를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 240을 갖거나;

(III) 항체가 VH 도메인을 포함하고,

i. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖거나;

ii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖거나;

iii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고;

VH 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85; 또는

HFW4 내의 105, 108, 113에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

(IV) 항체가 VL 도메인을 포함하고,

iv. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;

v. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나;

vi. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;

VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

또는

(V) 항체 또는 그의 단편이 VH 및 VL 도메인을 포함하고,

iv. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;

v. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나; 또는

vi. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;

VH 도메인 및 VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85;

HFW4 내의 105, 108, 113;

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

(I) 내지 (V) 중 임의의 조합인 항체 또는 그의 단편; 및

b. 약 50 mM 내지 약 400 mM의 아르기닌;

c. 약 0.002% 내지 약 0.2%의 폴리소르베이트 80; 및

d. 약 10 내지 약 40 mM의 L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드를 포함하는 안정한 항체 제형.

51. a. 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 특이적으로 결합하는 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체 또는 그의 단편으로서,

(I) 항체가 CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, CDR의 세트가 참조 CDR 세트로부터 10개 이하의 아미노산 치환을 갖고, 참조 CDR 세트에서:

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 193을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 194를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 195를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 198을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 199를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 200을 갖거나;

(II)

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 363을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 364를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 365를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 368을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 369를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 370을 갖거나;

또는

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 233을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 234를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 235를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 238을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 239를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 240을 갖거나;

(III) 항체가 VH 도메인을 포함하고,

iv. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖거나;

v. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖거나;

vi. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고;

VH 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85; 또는

HFW4 내의 105, 108, 113에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

(IV) 항체가 VL 도메인을 포함하고,

iv. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;

v. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나;

vi. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;

VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

또는

(V) 항체 또는 그의 단편이 VH 및 VL 도메인을 포함하고,

iv. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;

v. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나; 또는

vi. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;

VH 도메인 및 VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85;

HFW4 내의 105, 108, 113;

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

(I) 내지 (V) 중 임의의 조합인 항체 또는 그의 단편; 및

b. 약 190 mM의 아르기닌;

c. 약 0.04%의 폴리소르베이트 80; 및

d. 약 25 mM의 L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드를 포함하는 안정한 항체 제형.

52. 제형이 약 25℃에서 보관시에 적어도 3개월 동안 안정한 구현예 1 내지 51 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

53. 제형이 약 5℃에서 보관시에 적어도 18개월 동안 안정한 구현예 1 내지 52 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

54. 약 40℃에서 적어도 1개월 동안 보관된 항체가 보관되지 않은 참조 항체에 비하여 hIL-4Rα 폴리펩티드로의 결합 능력의 적어도 80%를 유지하는 구현예 1 내지 53 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

55. 약 5℃에서 적어도 6개월 동안 보관된 항체가 보관되지 않은 참조 항체에 비하여 hIL-4Rα 폴리펩티드로의 결합 능력의 적어도 80%를 유지하는 구현예 1 내지 54 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

56. 약 40℃에서 적어도 1개월 동안 보관된 항체가 보관되지 않은 참조 항체에 비하여 hIL-4Rα 폴리펩티드로의 결합 능력의 적어도 50%를 유지하는 구현예 1 내지 55 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

57. 약 5℃에서 적어도 6개월 동안 보관된 항체가 보관되지 않은 참조 항체에 비하여 hIL-4Rα 폴리펩티드로의 결합 능력의 적어도 50%를 유지하는 구현예 1 내지 56 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

58. 제형이 주사가능한 제형인 구현예 1 내지 57 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

59. 제형이 정맥내, 피하 또는 근육내 투여에 적합한 구현예 1 내지 58 중 어느 한 구현예의 항체 제형.

60. 구현예 1 내지 59 중 어느 한 구현예의 항체 제형을 함유하는 밀봉된 용기.

61. 적합한 용기 내에 구현예 1 내지 59 중 어느 한 구현예의 항체 제형을 포함하는 인간으로의 비경구 투여에 적합한 약제학적 단위 투여형.

62. 항체 제형이 정맥내, 피하 또는 근육내 투여되는 구현예 61의 약제학적 단위 투여형.

63. 적합한 용기가 사전-충전된 주사기인 구현예 61 또는 62의 약제학적 단위 투여형.

64. 구현예 1 내지 59 중 어느 한 구현예의 제형, 구현예 60의 용기, 구현예 61 또는 62의 단위 투여형 또는 구현예 63의 사전-충전된 주사기를 포함하는 키트.

65. 안정한 수성 항체 제형의 제조 방법으로서,

a. 항체를 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 특이적으로 결합하는 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체 또는 그의 단편으로 정제하는 단계로서,

(I) 항체가 CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, CDR의 세트가 참조 CDR 세트로부터 10개 이하의 아미노산 치환을 갖고, 참조 CDR 세트에서:

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 193을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 194를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 195를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 198을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 199를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 200을 갖거나;

(II)

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 363을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 364를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 365를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 368을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 369를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 370을 갖거나;

또는

HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 233을 갖고;

HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 234를 갖고;

HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 235를 갖고;

LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 238을 갖고;

LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 239를 갖고;

LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 240을 갖거나;

(III) 항체가 VH 도메인을 포함하고,

VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖거나;

VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖거나;

VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고;

VH 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85; 또는

HFW4 내의 105, 108, 113에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

(IV) 항체가 VL 도메인을 포함하고,

VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;

VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나;

VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;

VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

또는

(V) 항체 또는 그의 단편이 VH 및 VL 도메인을 포함하고,

i. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;

ii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나; 또는

iii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;

VH 도메인 및 VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:

HFW1 내의 11, 12;

HFW2 내의 37, 48;

HFW3 내의 68, 84, 85;

HFW4 내의 105, 108, 113;

LFW1 내의 1, 2, 3, 9;

LFW2 내의 38, 42; 또는

LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;

(I) 내지 (V) 중 임의의 조합인 단계; 및

b. 단리된 항체를 안정화 제형에 배치하여, 안정한 수성 항체 제형을 형성하는 단계로서, 생성된 안정한 수성 항체 제형이

i. 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체;

ii. 약 50 mM 내지 약 400 mM의 점도 조절제;

iii. 약 0.002% 내지 약 0.2%의 비이온성 계면활성제; 및

iv. 제형 완충제를 포함하는 단계를 포함하는 안정한 수성 항체 제형의 제조 방법.

66. 항체가 트레할로스, 아르기닌 또는 그들의 조합의 존재하에 농축되는 구현예 65의 방법.

67. 치료적 유효량의 구현예 1 내지 60 중 어느 한 구현예의 항체 제형을 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서의 폐 질병 또는 장애, 또는 만성 염증성 피부 질병 또는 장애의 치료 방법.

68. 질병 또는 장애가 천식, COPD(만성 기관지염, 소기도 질병 및 기종 포함), 염증성 장 질병, 섬유증 질환(전신 경화증, 폐 섬유증, 기생충 유도된 간 섬유증, 및 낭성 섬유증 포함), 알러지(예를 들어, 아토피 피부염 및 음식물 알러지 포함), 이식 거부를 방지하기 위한 이식 요법, 및 알러지 면역요법에 대한 애쥬번트로서 및 백신 애쥬번트로서의 지연형 과민증 또는 접촉성 과민증 반응의 억제로 이루어진 군으로부터 선택되는 구현예 67의 방법.

69. 폐 질병 또는 장애가 천식, COPD, 호산구성 천식, 복합 호산구성 및 호중구성 천식, 아스피린 감수성 천식, 알러지성 기관지 폐 아스페르길루스증, 급성 및 만성 호산구성 기관지염, 급성 및 만성 호산구성 폐렴, 처그-스트라우스 증후군, 과다호산구 증후군, 약물, 자극원 및 방사선-유도 폐 호산구증가증, 감염-유도 폐 호산구증가증(진균, 결핵, 기생충), 자가면역-관련 폐 호산구증가증, 호산구성 식도염, 크론병 또는 그들의 조합인 구현예 67의 방법.

70. 폐 질병 또는 장애가 천식인 구현예 69의 방법.

71. 만성 염증성 피부 장애가 아토피 피부염, 알러지성 접촉 피부염, 습진 또는 건선으로 이루어진 군으로부터 선택되는 구현예 67의 방법.

72. 염증성 피부 장애가 아토피 피부염인 구현예 71의 방법.

등가물

해당 분야의 숙련자는 단지 관용적인 실험을 이용하여 본원에 기재된 본 발명의 특정 구현예에 대한 많은 등가물을 인식할 것이거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 하기 청구범위에 의해 포괄되고자 한다.

본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은 각각의 개별 간행물, 특허 또는 특허 출원이 본원에 참고로 포함되는 것으로 구체적으로 및 개별적으로 표시되어 있는 것처럼 동일한 정도로 본 명세서 내로 참고로 포함된다.

실시예

이제 본 발명을 하기 실시예와 관련하여 기재한다. 이들 실시예는 단지 예시적이고 본 발명은 이들 실시예로 한정되는 것으로서 해석되어서는 결코 안되며 오히려 본원에서 제공된 교시의 결과로서 자명해질 임의의 모든 변형을 포괄하는 것으로서 해석되어야 한다.

실시예 1

재료 및 방법

재료

사용되는 모든 재료는 USP 또는 다중공정서 등급(Multicompendial grade)이었다. 모든 용액 및 완충제는 USP 또는 HPLC 물을 사용하여 제조하였고, 추가의 이용 전에 0.2 ㎛ PVDF 필터(Millipore)를 통해 여과하였다. 정제된 항-hIL-4Rα 항체를 표 1에 요약된 바와 같이 정제하였다. 안정성 연구를 위하여 정제된 항-hIL-4Rα 항체 시료를 생물안전성 캐비넷 후드(BSC: Biosafety Cabinet Hood)에서 살균 무균 조건하에 제조하였다. 벌크 물질을 2 내지 8℃에 보관하였다.

단백질 농도 결정

현행의 배합(formulation) 과학 지침에 따라 아질런트(Agilent) UV-Vis 분광광도계를 사용하여 280 nm에서 흡광도를 측정함으로써 항-hIL-4Rα 단백질 농도를 결정하였다. PBS 또는 제형 완충제를 사용하여 희석을 행하였다. 1.77 (㎎/㎖)^-1㎝^-1의 흡광 계수를 사용하여 모든 연구를 위한 단백질 농도를 계산하였다. 이러한 수치는 분자에 대하여 결정된 이론적 흡광 계수에 상응한다. 물질이 제한되는 경우, 나노드롭(Nanodrop) 2000(ThermoScientific)을 사용하여 280 nm에서 흡광도를 측정하였다.

크기 배제 크로마토그래피( HPSEC )에 의한 순도 결정

현행의 포뮬레이션 과학 지침에 따라 TSK-Gel G3000과 함께 아질런트 HPLC 시스템에서 SEC 분석을 수행하였다. 주입 부피를 조정하여, 10 ㎎/㎖ 미만 2.5 ㎎/㎖ 초과의 농도를 위하여 250 ㎍의 일정 질량을 유지하였다. HPSEC를 위해 사용되는 희석제는 인산염 완충 염수(Sigma) 또는 제형 완충제였다.

시각적 외양

PhEur(섹션 2.9.20)로부터 조정된 절차를 따라, 입자 표준을 사용하여 입자에 대하여 그들의 각각의 용기에서 시료를 시험함으로써 시료의 시각적 검사를 수행하였다.

미시적 입자 분석

현행의 포뮬레이션 과학 지침을 사용하여 광 엄폐 유동 현미경분석(Brightwell Microflow Imager, MFI)을 사용하여 미시적 입자 분석을 수행하였다.

오스몰농도

고노테크 오스모마트(Gonotec Osmomat) 030-D 삼투압계 동결점 저하 삼투압계에서 오스몰농도를 측정하였다. 참조 표준을 시행함으로써 시스템 적합성을 평가하였다.

점도 평가

다양한 농도의 항-hIL-4Rα 제형의 점도를 원뿔형 및 판형 보조장치(40 ㎜)와 함께 안톤 파르(Anton Paar) MCR301 유동계를 사용하여 측정하였다. 점도를 초당 1000의 고전단 제한의 전단 속도에서 기록하였다.

제형 안정성 연구

상이한 부형제로 제형화된 항-hIL-4Rα 항체를 투명한 3 ㏄, 13 ㎜ 유리 바이얼에 채웠다. 스크리닝 가속화를 위하여, 시료를 40℃/75% RH에서 안정성 하에 두었다. 가속화 40℃ 조건에 더하여 선도 제형의 더욱 장기간의 안정성 연구를 위하여, 25℃/60% RH 및 5℃에서 또한 연구를 수행하였다. 시료를 SEC HPLC 및 생물분석기(Bioanalyzer)에 의해 분석하고, 바이얼을 입자에 대하여 시각적으로 검사하였다. 또한, 선택된 시점을 적절한 대로 효력, 오스몰농도, pH 및 미세유동 영상화(MFI)에 대하여 분석하였다.

시차 주사 열량계를 사용한 열 안정성

5 ㎎/㎖의 단백질 농도에서 96 웰 플레이트를 사용하여 VP-DSC 초감수성 시차 주사 열량계(Microcal, Northampton, MA)에서 시차 주사 열량계(DSC) 실험을 수행하였다. 시간당 95℃의 속도로 25에서 100℃로 시료를 가열하였다. 정규화된 열 용량(Cp) 데이터를 완충제 기준선에 대하여 보정하였다.

실시예 2

안정성 50 ㎎ /㎖ 스크리닝 평가

다중의 항-hIL-4Rα 항체 제형의 안정성을 평가하고, 안정성 관점에서 유사한 것으로 관찰되었다. 40℃의 응력 온도에서의 형태적(열적) 안정성 및 응집률은 본 연구에서 조사되는 주요 파라미터였다.

표 2는 대략 50 ㎎/㎖의 농도에서 항-hIL-4Rα 항체 제형의 40℃에서의 응집률/개월 및 형태적 안정성(Tm1)에 대한 완충제 유형, 당 유형, 당 수준 및 아르기닌-HCL 수준의 영향에 대한 조사를 요약한 것이다.

표 2는 모든 항-hIL-4Rα 항체 제형이 40℃에서 1개월 인큐베이션 후에 유사한 형태적 안정성(Tm1) 및 응집률을 갖는 것을 보여준다. 시료 2 및 3은 아르기닌-HCL의 첨가가 형태적 안정성 또는 응집률에 영향을 미치지 않는 것을 보여준다. 시료 4 및 5는 아르기닌-HCL의 농도의 증가가 40℃에서 형태적 안정성 또는 응집률을 개선시키지 않는 것을 보여준다.

실시예 3

점도 스크리닝 평가

다수의 제형에서 109.8 ㎎/㎖ ± 5.8 ㎎/㎖의 농도의 항-hIL-4Rα 항체의 점도를 평가하였다. 도 1은 히스티딘 베이스 완충 제형 및 수크로스 함유 제형에서의 항-hIL-4Rα 항체의 점도가 23℃에서 50 cP 초과인 것을 보여준다. 데이터는 이온성 부형제가 고농도의 항-hIL-4Rα 항체의 점도를 피하 전달에 적절할 수준으로 감소시키는데 필요한 것을 보여준다. 이전의 데이터는 이러한 수준이 23℃에서 20 cP 미만일 것임을 뒷받침한다.

실시예 4

안정성 고농도 스크리닝 평가

항-hIL-4Rα 항체의 안정성 및 점도를 좁은 pH 범위에 걸쳐 히스티딘/아르기닌-HCL 제형에서 평가하였다. 제조 한계를 고려하기 위하여 제품 사양에 포함되는 pH 범위에 걸친 안정성 및 점도의 견고성을 보여주기 위하여 이러한 실험을 설계하였다. 표 3은 안정성 및 점도가 허용 한계 내에 있으며, pH 6.0 ± 0.5의 범위에 걸쳐 견고함을 보여준다.

순도 손실은 2 내지 8℃에서의 10개월 데이터에 기초하며, 외삽하여, HPSEC(고성능 크기 배제 크로마토그래피)에 의해 측정되는 바와 같은 연간 순도 손실을 계산한다.

실시예 5

교반에 대한 IL4R 항체 감수성

재료

항-hIL-4Rα 항체를 25 mM 히스티딘/히스티딘-HCL, 190 mM 아르기닌-HCL, pH 6 중에 140 ㎎/㎖의 농도로 제형화하였다. 사용되는 폴리소르베이트 80(식물-유래)은 다중공정서 J.T. Baker 브랜드였다. 물을 사내 USP 물 시스템으로부터 수득하였다. 사용되는 모든 다른 시약은 약전 등급이었다.

시료 제조

항-hIL-4Rα 항체 시료를 0.22 μM PVDF 주사기 필터를 통해 여과하고, 폴리프로필렌 튜브 내로 나누었다. 폴리소르베이트 80을 표 4에 나타낸 바와 같이 다양한 농도로 각 시료에 첨가하였다. 폴리소르베이트 80을 함유하지 않는 대조군 시료도 또한 제조하였다(시료 1 내지 3, 표 4). 각 시료를 0.22 μM 주사기 필터를 통해 재여과하고, 3 ㏄ 유리 바이얼 내로 무균으로 채우고, 마개로 막고, 알루미늄 오버실(overseal)로 밀봉하였다. 바이얼을 오비탈 진탕기(Scientific Industries, Inc)를 사용하여 4시간 동안 600 rpm에서 교반 처리하거나, 실험 기간 동안 벤치에 똑바로 놔두었다. 교반 시간의 마지막에, 시료를 고성능 크기 배제 크로마토그래피에 의해 가용성 응집물 함량에 대하여 분석하고, 유동 영상화에 의해 미시적 입자 특성화에 대하여 분석하고, 큰 입자 또는 섬유의 존재에 대하여 시각적으로 검사하였다.

순도 및 가용성 응집물 .

고성능 크기 배제 크로마토그래피(HPSEC)를 280 nm에서의 UV 검출과 함께, TSK-GEL G3000SWXL 컬럼 및 SW 가드 컬럼(Tosoh Bioscience)을 사용하여 수행하였다. 0.1 M 인산나트륨, 0.1 M 황산나트륨 및 0.05%(w/v) 아지드화나트륨을 함유하는 pH 6.8 이동상을 사용하여 20분 동안 1.0 ㎖/분의 유량을 사용하여, 시료를 검정하였다. 약 250 ㎍의 단백질을 주입하였다. 가용성 응집물, 단량체 및 단편의 용리는 각각 대략 6 내지 8분, 8.6분 및 9 내지 10분에 일어났다.

시각적 검사.

시료 중 입자 수준을 일련의 사내 황산바륨 가시적 입자 표준에 대하여 비교하였다. 3 ㏄ 유리 바이얼 내의 시료를 암 및 명 백그라운드와 함께 라이트 박스(light box)를 사용하여 미립자 및 섬유상 물질의 존재에 대하여 검사하였다. 시료를 가시적인 입자가 없거나, 사실상 가시적인 입자가 없거나, 많은 입자가 존재하는 것으로 지정하였다.

미시적 입자 분석

미시적 입자 분석을 현행의 포뮬레이션 과학 지침을 사용한 유동 현미경분석(Brightwell Microflow Imager, MFI)을 사용하여 수행하였다. 시료를 순수한 상태로 분석하고, 각 시료 간에 유동 셀을 초순수로 완전히 세정하였다.

결과 및 논의

항-hIL-4Rα 항체는 폴리소르베이트 80의 부재하에 교반 유도 응집에 매우 감수성인 것으로 관찰되었다. 표 5는 이러한 실험으로부터의 데이터의 요약이다. 표 5에서 시료 2 및 3은 폴리소르베이트 80의 부재하에서의 교반이 가용성 응집물 백분율을 2.5배 증가시키고, 가시적 입자 및 섬유의 수의 큰 증가를 야기하는 것을 보여준다; 도 2 및 도 3. 시료 3은 시료 내의 높은 수준의 침전물의 존재로 인하여 미세유동 영상화에 의해 분석될 수 없었다. 이들 입자는 100 ㎛의 최대 직경을 갖는 유동 셀을 차단할 수 있었다. 표 5에서 시료 4 내지 10은 0.005% 초과의 PS80의 존재가, 항체가 교반시에 큰 가시적인 입자를 형성하는 것을 방지하는 것을 보여준다; 도 4. 0.02% 초과의 PS80의 수준(시료 6 내지 10)에서, 교반된 시료는 비-교반된 시료(시료 2)와 유사한 수준의 미시적 입자, 가용성 응집물 및 시각적인 외양을 갖는다. 이들 데이터는 교반 유도 응집으로부터 항체를 완전히 보호하기 위하여, 0.02% 초과의 최소 수준의 PS80이 항-hIL-4Rα 제형에 필요함을 보여준다.

실시예 6

동결 해동에 대한 hIL4R 항체 감수성

재료

항-hIL-4Rα 항체를 25 mM 히스티딘/히스티딘-HCL, 190 mM 아르기닌-HCL, pH 6 중에 140 ㎎/㎖의 농도로 제형화하였다. 사용되는 폴리소르베이트 80(식물-유래)은 다중공정서 J.T. Baker 브랜드였다. 물을 사내 USP 물 시스템으로부터 수득하였다. 사용되는 모든 다른 시약은 약전 등급이었다.

시료 제조

항-hIL-4Rα 항체 시료를 0.22 μM PVDF 주사기 필터를 통해 여과하고, 폴리프로필렌 튜브 내로 나누었다. 폴리소르베이트 80을 표 6에 나타낸 바와 같이 다양한 농도로 각 시료에 첨가하였다. 폴리소르베이트 80을 함유하지 않는 대조군 시료도 또한 제조하였다(시료 1 내지 3, 표 6). 각 시료를 0.22 μM 주사기 필터를 통해 재여과하고, 3 ㏄ 유리 바이얼 내로 무균으로 채우고, 마개로 막고, 알루미늄 오버실로 밀봉하였다. 바이얼을 5회의 조절되지 않은 동결 해동(FT) 사이클링(하나의 사이클은 -40℃에서의 1시간에 이어서 실온에서의 1시간으로 이루어짐)으로 처리하거나, 실험 기간 동안 벤치에 똑바로 놔두었다. 동결 해동 사이클링의 마지막에, 시료를 고성능 크기 배제 크로마토그래피에 의해 가용성 응집물 함량에 대하여 분석하고, 유동 영상화에 의해 미시적 입자 특성화에 대하여 분석하고, 큰 입자 또는 섬유의 존재에 대하여 시각적으로 검사하였다.

순도 및 가용성 응집물 .

고성능 크기 배제 크로마토그래피(HPSEC)를 280 nm에서의 UV 검출과 함께, TSK-GEL G3000SWXL 컬럼 및 SW 가드 컬럼(Tosoh Bioscience)을 사용하여 수행하였다. 0.1 M 인산나트륨, 0.1 M 황산나트륨 및 0.05%(w/v) 아지드화나트륨을 함유하는 pH 6.8 이동상을 사용하여 20분 동안 1.0 ㎖/분의 유량을 사용하여, 시료를 검정하였다. 약 250 ㎍의 단백질을 주입하였다. 가용성 응집물, 단량체 및 단편의 용리는 각각 대략 6 내지 8분, 8.6분 및 9 내지 10분에 일어났다.

시각적 검사.

시료 중 입자 수준을 일련의 사내 황산바륨 가시적 입자 표준에 대하여 비교하였다. 3 ㏄ 유리 바이얼 내의 시료를 암 및 명 백그라운드와 함께 라이트 박스를 사용하여 미립자 및 섬유상 물질의 존재에 대하여 검사하였다. 시료를 가시적인 입자가 없거나, 사실상 가시적인 입자가 없거나, 많은 입자가 존재하는 것으로 지정하였다.

미시적 입자 분석

미시적 입자 분석을 현행의 포뮬레이션 과학 지침을 사용한 유동 현미경검사(Brightwell Microflow Imager, MFI)를 사용하여 수행하였다. 시료를 순수한 상태로 분석하고, 각 시료 간에 유동 셀을 초순수로 완전히 세정하였다.

결과 및 논의

항-hIL-4Rα 항체는 폴리소르베이트 80의 부재하에 동결 해동 유도 응집에 매우 감수성인 것으로 관찰되었다. 표 7은 이러한 실험으로부터의 데이터의 요약이다. 표 7에서 시료 2 및 3은 폴리소르베이트 80의 부재하에서의 동결 해동 사이클링이 가시적인 입자 및 섬유의 수의 큰 증가를 야기하는 것을 보여준다; 도 5 및 도 6. 그러나, 미시적 입자 계수는 폴리소르베이트 80의 부재하에 동결 해동 사이클링과 함께 감소하였다(시료 2 및 3). 이것은 시료 3에서의 높은 수준의 큰 가시적인 입자의 존재로 인한 것일 수 있다. 이것은 100 ㎛의 최대 직경을 갖는 유동 셀을 차단하고, 더 낮은 수의 입자가 영상화에 이용가능하게 할 수 있었다. 표 7에서 시료 4 내지 10은 0.005% 초과의 PS80의 존재가, 항체가 동결 해동 사이클링과 함께 큰 가시적인 입자를 형성하는 것을 방지하는 것을 보여준다; 도 7. 가용성 응집물 형성에 대한 동결 해동 사이클링의 영향(HPSEC)이 이러한 실험에서 관찰되지 않았다.

실시예 7

hIL4R 항체 형태적 안정성 및 응집 평가

항-hIL-4Rα 항체를 다양한 pH(5.5 내지 6.5)의 25 mM 히스티딘/히스티딘-HCL, 190 mM 아르기닌-HCL, 0.02% PS80 중에 149 ± 4.6 ㎎/㎖로 제조하였다. 약제품을 3 ㏄ 유리 바이얼에 무균으로 채우고, 마개로 막고, 알루미늄 오버실로 밀봉하였다. 스크리닝 가속화를 위하여, 시료를 40℃에서 안정성 하에 두었다. 가속화 40℃ 조건에 더하여 더욱 장기간의 안정성 연구를 위하여, 5℃에서 또한 연구를 수행하였다. 시료를 SEC HPLC 및 생물분석기에 의해 분석하고, 바이얼을 입자에 대하여 시각적으로 검사하였다. 또한, 개시 시점을 오스몰농도, pH, HIAC 및 DSC에 대하여 분석하였다.

도 7은 pH의 증가와 함께 형태적 안정성(Tm1)이 증가함을 보여준다(pH 6.5 > pH 6 > pH 5.5).

도 8은 40℃에서 보관된 시료의 HPSEC 분석 동안 총 피크 면적의 시간 의존적 UV 흡수의 손실을 보여준다. 도 9에 나타낸 바와 같이 시료가 2 내지 8℃ 또는 25℃에서 1개월 동안 보관되는 경우, 이러한 총 피크 면적의 손실은 명백하지 않다. 총 피크 면적의 UV 흡수는 분석되는 총 단백질의 농도의 간접적인 척도이다. 가용성 단백질의 손실은 일반적으로 직접 분석되지 않는 불용성 응집물로 인한 것으로 가정된다.

도 10은 각 제형의 Tm1에 대하여 40℃에서 8주 후에 총 흡수 면적 백분율 감소의 그래프를 보여준다. 이들 데이터는 40℃에서 시간에 걸친 불용성 응집물 형성이 분자의 형태적 안정성에 좌우되는 것을 보여준다.

실시예 8

hIL4R 항체 불용성 응집물 형성에 대한 희석제의 영향의 연구

이전의 데이터는 40℃에서 1개월 동안 보관한 시료가 잠재적으로 분석 이전 또는 그 동안의 불용성 응집물의 형성으로 인하여 고성능 크기 배제 크로마토그래피에 의한 분석 동안 총 피크 흡수의 시간 의존적 손실을 보였음을 보여주었다. 시료를 인산염 완충 염수 내로 희석하고, HPSEC 분석 이전에 0.2 μM 필터를 통해 여과하였다. 하기의 연구는 미시적 입자 형성에 대한 희석의 영향을 평가하기 위한 것이었다.

25 mM L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드 일수화물, 190 mM 아르기닌 하이드로클로라이드, 0.04 %(w/v) 폴리소르베이트 80, pH 6.0 중 148.2 ㎎/㎖의 항-hIL-4Rα 항체를 함유하는 항-hIL-4Rα 항체 제형을 제조하였다.

약제품을 3 ㏄ 유리 바이얼 내로 무균으로 채우고, 마개로 막고, 알루미늄 오버실로 밀봉하였다. 시료를 2 내지 8℃, 25℃, 35℃ 또는 40℃에서 1개월 동안 보관하였다. 시료를 제형 완충제(25 mM L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드 일수화물, 190 mM 아르기닌 하이드로클로라이드, pH 6) 인산염 완충 염수 중에 1/16 희석하였다. 추가로, 40℃에 보관한 시료도 또한, 25 mM L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드 일수화물, 190 mM 아르기닌 하이드로클로라이드, pH 7.4, 25 mM L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드 일수화물, 140 mM NaCl, pH 7.4 또는 10 mM 인산염, 190 mM 아르기닌, pH 7.4로 1/16 희석하였다.

각 온도 조건으로부터의 희석된 시료 및 희석되지 않은 시료를 미세유동 영상화에 의해 미시적 입자 수에 대하여 분석하였다.

미시적 입자 분석

미시적 입자 분석을 현행의 포뮬레이션 과학 지침을 사용하여 유동 현미경검사(Brightwell Microflow Imager, MFI)를 사용하여 수행하였다. 시료를 순수한 상태로 또는 인산염 완충 염수 또는 제형 완충제로의 희석 후에 분석하였다. 각 시료 간에 유동 셀을 초순수로 완전히 세정하였다.

결과 및 논의

도 11은 적절한 경우 희석률을 고려하여 10 ㎛ 이상의 절대적 입자 수를 보여준다. 40℃에서 4주 동안 인큐베이션시킨 시료는 인산염 완충 염수 및 제형 완충제 둘 모두에서의 희석 후에 높은 수준의 10 ㎛ 이상의 입자를 형성한다. 인산염 완충 염수로의 항-hIL-4Rα 항체의 희석은 미시적 입자 형성에 대하여, 제형 완충제로의 항체의 희석보다 더 큰 영향을 갖는다. 열 응력이 가해진 항-hIL-4Rα 항체의 미시적 입자 형성에 대한 pH, 이온 세기 및 이온 유형의 영향도 또한 조사하였다. 도 12는 열 응력이 가해진 항-hIL-4Rα 항체의 미시적 입자 형성이 인산 이온의 존재에 의해 악화되는 것을 보여준다.

상기 나타낸 실시예는 본 발명 및 본 발명의 방법의 실시의 다양한 양태를 예시한 것이다. 이들 실시예는 본 발명의 많은 상이한 구현예의 배타적인 설명을 제공하는 것으로 의도되지 않는다. 따라서, 본 발명이 명확한 이해를 목적으로 예증 및 예시에 의해 다소 상세히 기재되어 있다 하더라도, 해당 분야의 숙련자는 첨부된 청구범위의 목적 또는 범주를 벗어나지 않으면서 많은 변화 및 변경을 만들 수 있다는 것을 용이하게 인식할 것이다.

본 명세서에서 언급된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은 각각의 개별 간행물, 특허 또는 특허 출원이 본원에 참고로 포함되는 것으로 구체적으로 및 개별적으로 표시되어 있는 것처럼 동일한 정도로 본 명세서 내로 참고로 포함된다.

SEQUENCE LISTING <110> COHEN, SUZANNE DOBSON, CLAIRE LOUISE ERIKSSON, PER-OLOF FREDRIK LANE, DEBORAH LOUISE VON WACHENFELDT, KARIN <120> BINDING MEMBERS FOR INTERLEUKIN-4 RECEPTOR ALPHA (IL-4RA) - 173 <130> IL4R-100US2 <140> US 13/911,256 <141> 2013-06-06 <150> 13/311,715 <151> 2011-12-06 <150> 12/338,161 <151> 2008-12-18 <150> 61/015,869 <151> 2007-12-21 <160> 461 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 348 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 1 <400> 1 caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg catctggata cgccttcacc agctactata tgcactgggc gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggaaaa 300 tggtggcttg actactgggg caaaggcacc ctggtcaccg tctcgagt 348 <210> 2 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 1 <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Trp Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 1 <400> 3 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 4 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 1 <400> 4 Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 1 <400> 5 Gly Lys Trp Trp Leu Asp Tyr 1 5 <210> 6 <211> 333 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 1 <400> 6 cagtctgtgt tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa ggtcaccatc 60 tcctgctctg gaggcagctc caacattggg aatagttatg tatcctggta ccagcaactc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttac gacaataata agcgaccctc agggattcct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tggccatcac cggactccag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggata ccagcctgag tgccaattat 300 gtcttcggaa ctgggaccaa gctgaccgtc cta 333 <210> 7 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 1 <400> 7 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Thr Ser Leu 85 90 95 Ser Ala Asn Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 8 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 1 <400> 8 Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 1 <400> 9 Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 10 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 1 <400> 10 Gly Thr Trp Asp Thr Ser Leu Ser Ala Asn Tyr Val 1 5 10 <210> 11 <211> 348 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 2 <400> 11 caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg catctggata cgccttcacc agctactata tgcactgggc gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggaaaa 300 tggtggctgt acaactgggg caaaggcacc ctggtcaccg tctcgagt 348 <210> 12 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 2 <400> 12 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Trp Trp Leu Tyr Asn Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 13 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 2 <400> 13 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 14 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 2 <400> 14 Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 2 <400> 15 Gly Lys Trp Trp Leu Tyr Asn 1 5 <210> 16 <211> 333 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 2 <400> 16 cagtctgtgt tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa ggtcaccatc 60 tcctgctctg gaggcagctc caacattggg aatagttatg tatcctggta ccagcaactc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttac gacaataata agcgaccctc agggattcct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tggccatcac cggactccag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggata ccagccagcc cccgaacccc 300 ctcttcggaa ctgggaccaa gctgaccgtc cta 333 <210> 17 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 2 <400> 17 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Thr Ser Gln 85 90 95 Pro Pro Asn Pro Leu Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 18 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 2 <400> 18 Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 19 <211> 7 <212> PRT 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45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Leu Leu Lys Asn Pro Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 23 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 3 <400> 23 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 24 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 3 <400> 24 Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 25 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 3 <400> 25 Gly Lys Leu Leu Lys Asn Pro 1 5 <210> 26 <211> 333 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 3 <400> 26 cagtctgtgt tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa ggtcaccatc 60 tcctgctctg gaggcagctc caacattggg aatagttatg tatcctggta ccagcaactc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttac gacaataata agcgaccctc agggattcct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tggccatcac cggactccag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatggttcg gcacccccgc gagcaattat 300 gtcttcggaa ctgggaccaa gctgaccgtc cta 333 <210> 27 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 3 <400> 27 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Phe Gly Thr Pro 85 90 95 Ala Ser Asn Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 28 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 3 <400> 28 Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 3 <400> 29 Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 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Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Trp Trp Leu Tyr Asn Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 33 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 4 <400> 33 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 34 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 4 <400> 34 Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 35 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 4 <400> 35 Gly Lys Trp Trp Leu Tyr Asn 1 5 <210> 36 <211> 333 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 4 <400> 36 cagtctgtgt tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa ggtcaccatc 60 tcctgctctg gaggcagctc caacattggg aatagttatg tatcctggta ccagcaactc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttac gacaataata agcgaccctc agggattcct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tggccatcac cggactccag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggata ccagcagccc cccccagccg 300 atcttcggaa ctgggaccaa gctgaccgtc cta 333 <210> 37 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 4 <400> 37 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Thr Ser Ser 85 90 95 Pro Pro Gln Pro Ile Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 38 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 4 <400> 38 Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 39 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 4 <400> 39 Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 40 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 4 <400> 40 Gly Thr Trp Asp Thr Ser Ser Pro Pro Gln Pro Ile 1 5 10 <210> 41 <211> 348 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 5 <400> 41 caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg catctggata cgccttcacc agctactata tgcactgggc gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggaaaa 300 tggtggttgt acgactgggg caaaggcacc ctggtcaccg tctcgagt 348 <210> 42 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 5 <400> 42 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Trp Trp Leu Tyr Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 43 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 5 <400> 43 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 44 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 5 <400> 44 Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 5 <400> 45 Gly Lys Trp Trp Leu Tyr Asp 1 5 <210> 46 <211> 333 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 5 <400> 46 cagtctgtgt tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa ggtcaccatc 60 tcctgctctg gaggcagctc caacattggg aatagttatg tatcctggta ccagcaactc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttac gacaataata agcgaccctc agggattcct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tggccatcac cggactccag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggata ccagcagccc cccccagccg 300 atcttcggaa ctgggaccaa gctgaccgtc cta 333 <210> 47 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 5 <400> 47 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Thr Ser Ser 85 90 95 Pro Pro Gln Pro Ile Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 48 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 5 <400> 48 Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 49 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 5 <400> 49 Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 50 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 5 <400> 50 Gly Thr Trp Asp Thr Ser Ser Pro Pro Gln Pro Ile 1 5 10 <210> 51 <211> 348 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 6 <400> 51 caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg catctggata cgccttcacc agctactata tgcactgggc gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggaaag 300 tactggatgt acgactgggg caaaggcacc ctggtcaccg tctcgagt 348 <210> 52 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 6 <400> 52 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Tyr Trp Met Tyr Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 53 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 6 <400> 53 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 54 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 6 <400> 54 Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 55 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 6 <400> 55 Gly Lys Tyr Trp Met Tyr Asp 1 5 <210> 56 <211> 333 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 6 <400> 56 cagtctgtgt tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa ggtcaccatc 60 tcctgctctg gaggcagctc caacattggg aatagttatg tatcctggta ccagcaactc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttac gacaataata agcgaccctc agggattcct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tggccatcac cggactccag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggata ccagcacgac ctaccacccc 300 atcttcggaa ctgggaccaa gctgaccgtc cta 333 <210> 57 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 6 <400> 57 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tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg catctggata cgccttcacc agctactata tgcactgggc gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggaaaa 300 tggtggtggc agtactgggg caaaggcacc ctggtcaccg tctcgagt 348 <210> 62 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 7 <400> 62 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Trp Trp Trp Gln Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 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agctactata tgcactgggc gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggaaaa 300 tggtggtggc agtactgggg caaaggcacc ctggtcaccg tctcgagt 348 <210> 72 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 8 <400> 72 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Trp Trp Trp Gln Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 73 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 8 <400> 73 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gtggtggtag cacaagctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggaaaa 300 tggtggctgt acaactgggg caaaggcacc ctggtcaccg tctcgagt 348 <210> 82 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 9 <400> 82 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Trp Trp Leu Tyr Asn Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 83 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 9 <400> 83 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 84 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> 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acggccgtgt attactgtgc gagaggaaaa 300 tggtggttct acgactgggg caaaggcacc ctggtcaccg tctcgagt 348 <210> 102 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 11 <400> 102 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Trp Trp Phe Tyr Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 103 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 11 <400> 103 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 104 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 11 <400> 104 Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 105 <211> 7 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acgactgggg caaaggcacc ctggtcaccg tctcgagt 348 <210> 112 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 12 <400> 112 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Trp Trp Phe Tyr Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 113 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 12 <400> 113 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 114 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 12 <400> 114 Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 115 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 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cccccaaact cctcatttac gacaataata agcgaccctc agggattcct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tggccatcac cggactccag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggata ccagcaccac cccgatgccc 300 gtcttcggaa ctgggaccaa gctgaccgtc cta 333 <210> 177 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 18 <400> 177 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Thr Ser Thr 85 90 95 Thr Pro Met Pro Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 178 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 18 <400> 178 Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 179 <211> 7 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agggattcct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tggccatcac cggactccag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggata ccagcacgac ctaccacccc 300 atcttcggaa ctgggaccaa gctgaccgtc cta 333 <210> 187 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 19 <400> 187 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Thr Ser Thr 85 90 95 Thr Tyr His Pro Ile Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 188 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 19 <400> 188 Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 189 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> 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actggggacg aggccgttta tttctgcgga acatgggata ccagcacggt gtgggagtgg 300 ccgttcggaa ctgggaccaa gctgaccgtc cta 333 <210> 207 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 21 <400> 207 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Thr Trp Asp Thr Ser Thr 85 90 95 Val Trp Glu Trp Pro Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 208 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 21 <400> 208 Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 209 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 21 <400> 209 Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 210 <211> 12 <212> PRT <213> 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cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggaaag 300 tactggatgt acgactgggg caaaggcacc cgggtcaccg tctcgagt 348 <210> 282 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 29 <400> 282 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Tyr Trp Met Tyr Asp Trp Gly Lys Gly Thr Arg Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 283 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 29 <400> 283 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 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gtggtggtag cacaagctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggaaag 300 tactggatgt acgactgggg caaaggcacc ctggtcaccg tctcgagt 348 <210> 292 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 30 <400> 292 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Tyr Trp Met Tyr Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 293 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 30 <400> 293 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 294 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens 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agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggaaag 300 tactggatgt acgactgggg caaaggcacc ctggtcaccg tctcgagt 348 <210> 302 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 31 <400> 302 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Tyr Trp Met Tyr Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 303 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 31 <400> 303 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 304 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 31 <400> 304 Ile Ile Asn Pro 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caaaggcacc ctggtcaccg tctcgagt 348 <210> 332 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 34 <400> 332 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Ala Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Ser Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Lys Tyr Trp Met Tyr Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 333 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 34 <400> 333 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 334 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 34 <400> 334 Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 335 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 34 <400> 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tatcctggta ccagcaactc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttac gacaataata agcgaccctc agggattcct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tggccatcac cggactccag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggata ccagcacggc gtgggagtgg 300 ccgttcggaa ctgggaccaa gctgaccgtc cta 333 <210> 387 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 39 <400> 387 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Thr Ser Thr 85 90 95 Ala Trp Glu Trp Pro Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 388 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 39 <400> 388 Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser Tyr 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cctcatttac gacaataata agcgaccctc agggattcct 180 gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tggccatcac cggactccag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggatt ccagcacggt gtgggagtgg 300 ccgttcggaa ctgggaccaa gctgaccgtc cta 333 <210> 397 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 40 <400> 397 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Thr 85 90 95 Val Trp Glu Trp Pro Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 398 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 40 <400> 398 Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 399 <211> 7 <212> PRT <213> 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gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tggccatcac cggactccag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggata ccagcacggt gtgggagtgg 300 ccgttcggaa ctgggaccaa gctgaccgtc cta 333 <210> 407 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 41 <400> 407 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Ser Thr Asn Ile Gly Asn Ser 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Arg Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Pro Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Thr Ser Thr 85 90 95 Val Trp Glu Trp Pro Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 408 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 41 <400> 408 Ser Gly Gly Ser Thr Asn Ile Gly Asn Ser Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 409 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 41 <400> 409 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tggccatcac cggactccag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggata ccagcacggg gtgggagtgg 300 ccgttcggaa ctgggaccaa gctgaccgtc cta 333 <210> 417 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 42 <400> 417 Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Arg Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Thr Ser Thr 85 90 95 Gly Trp Glu Trp Pro Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 418 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 42 <400> 418 Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 419 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 42 <400> 419 Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 420 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actggggacg aggccgatta tttctgcgga acatgggata ccagcacggt gtgggagtgg 300 ccgttcggaa ctgggaccaa gctgaccgtc cta 333 <210> 427 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 24 PGL <400> 427 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Gly Thr Trp Asp Thr Ser Thr 85 90 95 Val Trp Glu Trp Pro Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 428 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 24 PGL <400> 428 Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 429 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 24 PGL <400> 429 Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 430 <211> 12 <212> 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aggccgatta ttactgcgga acatgggata ccagcacggt gtgggagtgg 300 ccgttcggaa ctgggaccaa gctgaccgtc cta 333 <210> 437 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 24 GL <400> 437 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Thr Ser Thr 85 90 95 Val Trp Glu Trp Pro Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 438 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 24 GL <400> 438 Ser Gly Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 439 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 24 GL <400> 439 Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 440 <211> 12 <212> PRT <213> Homo 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ttactgcgga acatgggata ccagcccggt gtgggagtgg 300 ccgttcggaa ctgggaccaa gctgaccgtc cta 333 <210> 447 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 37 GL <400> 447 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Gly Ser Ser Ile Gly Asn Ser 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Thr Ser Pro 85 90 95 Val Trp Glu Trp Pro Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 448 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 37 GL <400> 448 Ser Gly Gly Gly Ser Ser Ile Gly Asn Ser Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 449 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Antibody 37 GL <400> 449 Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 450 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens 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Pro Pro Cys Pro Ala 245 250 255 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 260 265 270 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 275 280 285 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 290 295 300 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 305 310 315 320 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 325 330 335 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 340 345 350 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 355 360 365 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 370 375 380 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 385 390 395 400 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 405 410 415 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 420 425 430 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 435 440 445 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 450 455 460 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys His His His His His His 465 470 475 <210> 455 <211> 693 <212> DNA <213> Macaca fascicularis <220> <223> Cynomolgus monkey IL-4Ra cDNA nucleotide <400> 455 atggggtggc tttgctctgg gctcctgttg cctgtgagct gcctggtcct gctgcaggtg 60 gcaagctctg ggagcatgaa ggtcctgcag gagcccacct gcgtctccga ctacatgagc 120 atctctacct gtgagtggaa gatgggcggt cccaccaatt gcagcgccga gctccgtctg 180 ttgtaccagc tggtttttca gtcctccgaa acccacacgt gtgtccccga gaacaacggc 240 ggtgtggggt gcgtgtgcca cctgctcatg gatgatgtgg tcagtatgga caactatacg 300 ctggacctgt gggctggaca gcagctgctg tggaagggct ccttcaagcc cagcgagcat 360 gtgaaaccca gggccccagg aaacctcacg gttcacacca atgtctccga cactgtgctg 420 ctgacctgga gcaacccata tccccctgac aattacctgt ataatgatct cacctatgca 480 gtcaacattt ggagtgaaaa cgacccggca tattccagaa tccataacgt gacctaccta 540 aaacccaccc tccgcatccc agccagcacc ctgaagtctg gaatttccta cagggcacgg 600 gtgagggcct gggctcagca ctataacacc acctggagtg agtggagccc cagcaccaag 660 tggtacaact cctacaggga gcccttcgag cag 693 <210> 456 <211> 1428 <212> DNA <213> Macaca fascicularis <220> <223> Cynomolgus monkey IL-4Ra/Fc cDNA nucleotide <400> 456 atggggtggc tttgctctgg gctcctgttg cctgtgagct gcctggtcct gctgcaggtg 60 gcaagctctg ggagcatgaa ggtcctgcag gagcccacct gcgtctccga ctacatgagc 120 atctctacct gtgagtggaa gatgggcggt cccaccaatt gcagcgccga gctccgtctg 180 ttgtaccagc tggtttttca gtcctccgaa acccacacgt gtgtccccga gaacaacggc 240 ggtgtggggt gcgtgtgcca cctgctcatg gatgatgtgg tcagtatgga caactatacg 300 ctggacctgt gggctggaca gcagctgctg tggaagggct ccttcaagcc cagcgagcat 360 gtgaaaccca gggccccagg aaacctcacg gttcacacca atgtctccga cactgtgctg 420 ctgacctgga gcaacccata tccccctgac aattacctgt ataatgatct cacctatgca 480 gtcaacattt ggagtgaaaa cgacccggca tattccagaa tccataacgt gacctaccta 540 aaacccaccc tccgcatccc agccagcacc ctgaagtctg gaatttccta cagggcacgg 600 gtgagggcct gggctcagca ctataacacc acctggagtg agtggagccc cagcaccaag 660 tggtacaact cctacaggga gcccttcgag caggacccag ctttcttgta caaagtggtt 720 cgattcgagg agcccaaatc tagcgacaaa actcacacat gcccaccgtg cccagcacct 780 gaactcctgg ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 840 atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag 900 gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 960 gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 1020 tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agcccccatc 1080 gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc 1140 ccatcccggg atgagctgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 1200 tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaaa 1260 accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg 1320 gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg 1380 cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc ctgtctccgg gtaaatga 1428 <210> 457 <211> 475 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <220> <223> Cynomolgus monkey IL-4Ra/Fc protein <400> 457 Met Gly Trp Leu Cys Ser Gly Leu Leu Leu Pro Val Ser Cys Leu Val 1 5 10 15 Leu Leu Gln Val Ala Ser Ser Gly Ser Met Lys Val Leu Gln Glu Pro 20 25 30 Thr Cys Val Ser Asp Tyr Met Ser Ile Ser Thr Cys Glu Trp Lys Met 35 40 45 Gly Gly Pro Thr Asn Cys Ser Ala Glu Leu Arg Leu Leu Tyr Gln Leu 50 55 60 Val Phe Gln Ser Ser Glu Thr His Thr Cys Val Pro Glu Asn Asn Gly 65 70 75 80 Gly Val Gly Cys Val Cys His Leu Leu Met Asp Asp Val Val Ser Met 85 90 95 Asp Asn Tyr Thr Leu Asp Leu Trp Ala Gly Gln Gln Leu Leu Trp Lys 100 105 110 Gly Ser Phe Lys Pro Ser Glu His Val Lys Pro Arg Ala Pro Gly Asn 115 120 125 Leu Thr Val His Thr Asn Val Ser Asp Thr Val Leu Leu Thr Trp Ser 130 135 140 Asn Pro Tyr Pro Pro Asp Asn Tyr Leu Tyr Asn Asp Leu Thr Tyr Ala 145 150 155 160 Val Asn Ile Trp Ser Glu Asn Asp Pro Ala Tyr Ser Arg Ile His Asn 165 170 175 Val Thr Tyr Leu Lys Pro Thr Leu Arg Ile Pro Ala Ser Thr Leu Lys 180 185 190 Ser Gly Ile Ser Tyr Arg Ala Arg Val Arg Ala Trp Ala Gln His Tyr 195 200 205 Asn Thr Thr Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Thr Lys Trp Tyr Asn Ser 210 215 220 Tyr Arg Glu Pro Phe Glu Gln Asp Pro Ala Phe Leu Tyr Lys Val Val 225 230 235 240 Arg Phe Glu Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 245 250 255 Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 260 265 270 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 275 280 285 Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 290 295 300 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 305 310 315 320 Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 325 330 335 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 340 345 350 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 355 360 365 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp 370 375 380 Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 385 390 395 400 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 405 410 415 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 420 425 430 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 435 440 445 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 450 455 460 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 465 470 475 <210> 458 <211> 1422 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Human I75V IL-4Ra/Fc cDNA nucleotide <400> 458 atggggtggc tttgctctgg gctcctgttc cctgtgagct gcctggtcct gctgcaggtg 60 gcaagctctg ggaacatgaa ggtcttgcag gagcccacct gcgtctccga ctacatgagc 120 atctctactt gcgagtggaa gatgaatggt cccaccaatt gcagcaccga gctccgcctg 180 ttgtaccagc tggtttttct gctctccgaa gcccacacgt gtgtccctga gaacaacgga 240 ggcgcggggt gcgtgtgcca cctgctcatg gatgacgtgg tcagtgcgga taactataca 300 ctggacctgt gggctgggca gcagctgctg tggaagggct ccttcaagcc cagcgagcat 360 gtgaaaccca gggccccagg aaacctgaca gttcacacca atgtctccga cactctgctg 420 ctgacctgga gcaacccgta tccccctgac aattacctgt ataatcatct cacctatgca 480 gtcaacattt ggagtgaaaa cgacccggca gatttcagaa tctataacgt gacctaccta 540 gaaccctccc tccgcatcgc agccagcacc ctgaagtctg ggatttccta cagggcacgg 600 gtgagggcct gggctcagtg ctataacacc acctggagtg agtggagccc cagcaccaag 660 tggcacaact cctacaggga gcccttcgac ccagctttct tgtacaaagt ggttcgattc 720 gaggagccca aatctagcga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc 780 ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 840 cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 900 ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 960 cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 1020 aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa 1080 accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 1140 cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 1200 agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caaaaccacg 1260 cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag 1320 agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 1380 cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaat ga 1422 <210> 459 <211> 473 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Human I75V IL-4Ra/Fc protein <400> 459 Met Gly Trp Leu Cys Ser Gly Leu Leu Phe Pro Val Ser Cys Leu Val 1 5 10 15 Leu Leu Gln Val Ala Ser Ser Gly Asn Met Lys Val Leu Gln Glu Pro 20 25 30 Thr Cys Val Ser Asp Tyr Met Ser Ile Ser Thr Cys Glu Trp Lys Met 35 40 45 Asn Gly Pro Thr Asn Cys Ser Thr Glu Leu Arg Leu Leu Tyr Gln Leu 50 55 60 Val Phe Leu Leu Ser Glu Ala His Thr Cys Val Pro Glu Asn Asn Gly 65 70 75 80 Gly Ala Gly Cys Val Cys His Leu Leu Met Asp Asp Val Val Ser Ala 85 90 95 Asp Asn Tyr Thr Leu Asp Leu Trp Ala Gly Gln Gln Leu Leu Trp Lys 100 105 110 Gly Ser Phe Lys Pro Ser Glu His Val Lys Pro Arg Ala Pro Gly Asn 115 120 125 Leu Thr Val His Thr Asn Val Ser Asp Thr Leu Leu Leu Thr Trp Ser 130 135 140 Asn Pro Tyr Pro Pro Asp Asn Tyr Leu Tyr Asn His Leu Thr Tyr Ala 145 150 155 160 Val Asn Ile Trp Ser Glu Asn Asp Pro Ala Asp Phe Arg Ile Tyr Asn 165 170 175 Val Thr Tyr Leu Glu Pro Ser Leu Arg Ile Ala Ala Ser Thr Leu Lys 180 185 190 Ser Gly Ile Ser Tyr Arg Ala Arg Val Arg Ala Trp Ala Gln Cys Tyr 195 200 205 Asn Thr Thr Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Thr Lys Trp His Asn Ser 210 215 220 Tyr Arg Glu Pro Phe Asp Pro Ala Phe Leu Tyr Lys Val Val Arg Phe 225 230 235 240 Glu Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 245 250 255 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 260 265 270 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 275 280 285 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 290 295 300 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 305 310 315 320 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 325 330 335 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 340 345 350 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 355 360 365 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu 370 375 380 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 385 390 395 400 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 405 410 415 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 420 425 430 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 435 440 445 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 450 455 460 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 465 470 <210> 460 <211> 261 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Human IL-4Ra/HIS tag polypeptide <400> 460 Met Gly Trp Leu Cys Ser Gly Leu Leu Phe Pro Val Ser Cys Leu Val 1 5 10 15 Leu Leu Gln Val Ala Ser Ser Gly Asn Met Lys Val Leu Gln Glu Pro 20 25 30 Thr Cys Val Ser Asp Tyr Met Ser Ile Ser Thr Cys Glu Trp Lys Met 35 40 45 Asn Gly Pro Thr Asn Cys Ser Thr Glu Leu Arg Leu Leu Tyr Gln Leu 50 55 60 Val Phe Leu Leu Ser Glu Ala His Thr Cys Ile Pro Glu Asn Asn Gly 65 70 75 80 Gly Ala Gly Cys Val Cys His Leu Leu Met Asp Asp Val Val Ser Ala 85 90 95 Asp Asn Tyr Thr Leu Asp Leu Trp Ala Gly Gln Gln Leu Leu Trp Lys 100 105 110 Gly Ser Phe Lys Pro Ser Glu His Val Lys Pro Arg Ala Pro Gly Asn 115 120 125 Leu Thr Val His Thr Asn Val Ser Asp Thr Leu Leu Leu Thr Trp Ser 130 135 140 Asn Pro Tyr Pro Pro Asp Asn Tyr Leu Tyr Asn His Leu Thr Tyr Ala 145 150 155 160 Val Asn Ile Trp Ser Glu Asn Asp Pro Ala Asp Phe Arg Ile Tyr Asn 165 170 175 Val Thr Tyr Leu Glu Pro Ser Leu Arg Ile Ala Ala Ser Thr Leu Lys 180 185 190 Ser Gly Ile Ser Tyr Arg Ala Arg Val Arg Ala Trp Ala Gln Cys Tyr 195 200 205 Asn Thr Thr Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Thr Lys Trp His Asn Ser 210 215 220 Tyr Arg Glu Pro Phe Asn Pro Ala Phe Leu Tyr Lys Val Val Gly Ala 225 230 235 240 Ala Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Ala Ala His His His His His 245 250 255 His His His His His 260 <210> 461 <211> 262 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <223> Murine IL-4Ra/HIS tag polypeptide <400> 461 Met Gly Arg Leu Cys Thr Lys Phe Leu Thr Ser Val Gly Cys Leu Ile 1 5 10 15 Leu Leu Leu Val Thr Gly Ser Gly Ser Ile Lys Val Leu Gly Glu Pro 20 25 30 Thr Cys Phe Ser Asp Tyr Ile Arg Thr Ser Thr Cys Glu Trp Phe Leu 35 40 45 Asp Ser Ala Val Asp Cys Ser Ser Gln Leu Cys Leu His Tyr Arg Leu 50 55 60 Met Phe Phe Glu Phe Ser Glu Asn Leu Thr Cys Ile Pro Arg Asn Ser 65 70 75 80 Ala Ser Thr Val Cys Val Cys His Met Glu Met Asn Arg Pro Val Gln 85 90 95 Ser Asp Arg Tyr Gln Met Glu Leu Trp Ala Glu His Arg Gln Leu Trp 100 105 110 Gln Gly Ser Phe Ser Pro Ser Gly Asn Val Lys Pro Leu Ala Pro Asp 115 120 125 Asn Leu Thr Leu His Thr Asn Val Ser Asp Glu Trp Leu Leu Thr Trp 130 135 140 Asn Asn Leu Tyr Pro Ser Asn Asn Leu Leu Tyr Lys Asp Leu Ile Ser 145 150 155 160 Met Val Asn Ile Ser Arg Glu Asp Asn Pro Ala Glu Phe Ile Val Tyr 165 170 175 Asn Val Thr Tyr Lys Glu Pro Arg Leu Ser Phe Pro Ile Asn Ile Leu 180 185 190 Met Ser Gly Val Tyr Tyr Thr Ala Arg Val Arg Val Arg Ser Gln Ile 195 200 205 Leu Thr Gly Thr Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Ile Thr Trp Tyr Asn 210 215 220 His Phe Gln Leu Pro Leu Asn Pro Ala Phe Leu Tyr Lys Val Val Gly 225 230 235 240 Ala Ala Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Ala Ala His His His His 245 250 255 His His His His His His 260

Claims (30)

1. a. 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 특이적으로 결합하는 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체 또는 그의 단편으로서,
   (I) 상기 항체가 CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 상기 CDR의 세트가 참조 CDR 세트로부터 10개 이하의 아미노산 치환을 갖고, 상기 참조 CDR 세트에서:
   HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 193을 갖고;
   HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 194를 갖고;
   HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 195를 갖고;
   LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 198을 갖고;
   LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 199를 갖고;
   LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 200을 갖거나;
   (II)
   HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 363을 갖고;
   HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 364를 갖고;
   HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 365를 갖고;
   LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 368을 갖고;
   LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 369를 갖고;
   LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 370을 갖거나;
   HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 233을 갖고;
   HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 234를 갖고;
   HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 235를 갖고;
   LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 238을 갖고;
   LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 239를 갖고;
   LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 240을 갖거나;
   (III) 상기 항체가 VH 도메인을 포함하고,
   iv. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖거나;
   v. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖거나;
   vi. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고;
   VH 도메인이 표준 카바트(Kabat) 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:
   HFW1 내의 11, 12;
   HFW2 내의 37, 48;
   HFW3 내의 68, 84, 85; 또는
   HFW4 내의 105, 108, 113에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;
   (IV) 상기 항체가 VL 도메인을 포함하고,
   iv. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;
   v. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나;
   vi. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;
   VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:
   LFW1 내의 1, 2, 3, 9;
   LFW2 내의 38, 42; 또는
   LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;
   (V) 상기 항체 또는 그의 단편이 VH 및 VL 도메인을 포함하고,
   iv. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;
   v. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나;
   vi. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;
   VH 도메인 및 VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:
   HFW1 내의 11, 12;
   HFW2 내의 37, 48;
   HFW3 내의 68, 84, 85;
   HFW4 내의 105, 108, 113;
   LFW1 내의 1, 2, 3, 9;
   LFW2 내의 38, 42; 또는
   LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;
   (I) 내지 (V) 중 임의의 조합인 항체 또는 그의 단편; 및
   b. 약 50 mM 내지 약 400 mM의 점도 조절제;
   c. 약 0.002% 내지 약 0.2%의 비이온성 계면활성제; 및
   d. 제형 완충제를 포함하는 안정한 항체 제형.
2. 제1항에 있어서, 상기 제형 완충제에 본질적으로 인산염이 없는 항체 제형.
3. 제2항에 있어서, 상기 점도 조절제가 히스티딘, 아르기닌, 라이신, 폴리비닐 알코올, 폴리알킬 셀룰로스, 하이드록시알킬 셀룰로스, 글리세린, 폴리에틸렌 글리콜, 글루코스, 덱스트로스 및 수크로스로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체 제형.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비이온성 계면활성제가 트리톤(Triton) X-100, 트윈(Tween) 80, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 노녹시놀-9, 폴리옥사머, 스테아릴 알코올 또는 소르비탄 모노스테아레이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체 제형.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형 완충제가 아세트산염 완충제, TRIS 완충제, HEPES 완충제, 하이드로클로라이드 완충제, 아르기닌 완충제, 글리신 완충제, 시트르산염 완충제 또는 TES 완충제인 항체 제형.
6. 제5항에 있어서, 상기 제형 완충제가 아르기닌 완충제인 항체 제형.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 약 100 mM 내지 약 200 mM의 NaCl을 추가로 포함하는 항체 제형.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 약 5 내지 약 8의 pH를 갖는 항체 제형.
9. 제1항에 있어서, 상기 항체가 CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 상기 CDR의 세트가 참조 CDR 세트로부터 10개 이하의 아미노산 치환을 갖고, 상기 참조 CDR 세트에서:
   HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 193을 갖고;
   HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 194를 갖고;
   HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 195를 갖고;
   LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 198을 갖고;
   LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 199를 갖고;
   LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 200을 갖는 항체 제형.
10. 제9항에 있어서, 상기 아미노산 치환이 표준 카바트 넘버링을 사용하여, CDR 내의 하기의 잔기 중 하나 이상에 아미노산 치환을 포함하는 항체 제형:
    HCDR2 내의 53, 57;
    HCDR3 내의 97, 98, 99, 101, 102;
    LCDR1 내의 27, 27A, 27B, 31;
    LCDR2 내의 56; 또는
    LCDR3 내의 92, 93, 94, 95, 95A 95B, 95C, 96, 97.
11. 제9항에 있어서, 표준 카바트 넘버링을 사용하여, 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기에 하나 이상의 아미노산 치환을 추가로 포함하는 항체 제형:
    HFW1 내의 11, 12;
    HFW2 내의 37, 48;
    HFW3 내의 68, 84, 85;
    HFW4 내의 105, 108, 113;
    LFW1 내의 1, 2, 3, 9;
    LFW2 내의 38, 42; 또는
    LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87.
12. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 특이적으로 결합하며,
    (I)
    HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 363을 갖고;
    HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 364를 갖고;
    HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 365를 갖고;
    LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 368을 갖고;
    LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 369를 갖고;
    LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 370을 갖거나;
    (II)
    HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 233을 갖고;
    HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 234를 갖고;
    HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 235를 갖고;
    LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 238을 갖고;
    LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 239를 갖고;
    LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 240을 갖는 항체 제형.
13. 제9항 또는 제12항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이 항체 VH 도메인 및 항체 VL 도메인을 포함하며, VH 도메인이 HCDR1, HCDR2, HCDR3, 및 제1 프레임워크를 포함하고, VL 도메인이 LCDR1, LCDR2, LCDR3 및 제2 프레임워크를 포함하는 항체 제형.
14. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이 VH 도메인을 포함하고,
    a. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖거나;
    b. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖거나;
    c. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고;
    VH 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:
    HFW1 내의 11, 12;
    HFW2 내의 37, 48;
    HFW3 내의 68, 84, 85; 또는
    HFW4 내의 105, 108, 113에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는 항체 제형.
15. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이 VL 도메인을 포함하고,
    a. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;
    b. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나;
    c. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;
    VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:
    LFW1 내의 1, 2, 3, 9;
    LFW2 내의 38, 42; 또는
    LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는 항체 제형.
16. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이 VH 및 VL 도메인을 포함하고,
    a. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;
    b. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나; 또는
    c. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;
    VH 도메인 및 VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:
    HFW1 내의 11, 12;
    HFW2 내의 37, 48;
    HFW3 내의 68, 84, 85;
    HFW4 내의 105, 108, 113;
    LFW1 내의 1, 2, 3, 9;
    LFW2 내의 38, 42; 또는
    LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는 항체 제형.
17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 약 40℃에서 적어도 1개월 동안의 보관시에 안정한 항체 제형.
18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 약 40℃에서 1개월 동안의 보관 후에 "10 ㎛ 이상의 입자"/㎖이 1000개 미만인 항체 제형.
19. 제1항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 23℃에서 20 cP 미만의 점도를 갖는 항체 제형.
20. a. 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 특이적으로 결합하는 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체 또는 그의 단편으로서,
    (I) 상기 항체가 CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 상기 CDR의 세트가 참조 CDR 세트로부터 10개 이하의 아미노산 치환을 갖고, 상기 참조 CDR 세트에서:
    HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 193을 갖고;
    HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 194를 갖고;
    HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 195를 갖고;
    LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 198을 갖고;
    LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 199를 갖고;
    LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 200을 갖거나;
    (II)
    HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 363을 갖고;
    HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 364를 갖고;
    HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 365를 갖고;
    LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 368을 갖고;
    LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 369를 갖고;
    LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 370을 갖거나;
    HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 233을 갖고;
    HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 234를 갖고;
    HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 235를 갖고;
    LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 238을 갖고;
    LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 239를 갖고;
    LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 240을 갖거나;
    (III) 상기 항체가 VH 도메인을 포함하고,
    i. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖거나;
    ii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖거나;
    iii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고;
    VH 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:
    HFW1 내의 11, 12;
    HFW2 내의 37, 48;
    HFW3 내의 68, 84, 85; 또는
    HFW4 내의 105, 108, 113에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;
    (IV) 상기 항체가 VL 도메인을 포함하고,
    vii. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;
    viii. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나;
    ix. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;
    VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:
    LFW1 내의 1, 2, 3, 9;
    LFW2 내의 38, 42; 또는
    LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;
    (V) 상기 항체 또는 그의 단편이 VH 및 VL 도메인을 포함하고,
    vii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;
    viii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나; 또는
    ix. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;
    VH 도메인 및 VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:
    HFW1 내의 11, 12;
    HFW2 내의 37, 48;
    HFW3 내의 68, 84, 85;
    HFW4 내의 105, 108, 113;
    LFW1 내의 1, 2, 3, 9;
    LFW2 내의 38, 42; 또는
    LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;
    (I) 내지 (V) 중 임의의 조합인 항체 또는 그의 단편; 및
    b. 약 50 mM 내지 약 400 mM의 아르기닌;
    c. 약 0.002% 내지 약 0.2%의 폴리소르베이트 80; 및
    d. 약 10 내지 약 40 mM의 L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드를 포함하는 안정한 항체 제형.
21. b. 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 특이적으로 결합하는 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체 또는 그의 단편으로서,
    (I) 상기 항체가 CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 상기 CDR의 세트가 참조 CDR 세트로부터 10개 이하의 아미노산 치환을 갖고, 상기 참조 CDR 세트에서:
    HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 193을 갖고;
    HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 194를 갖고;
    HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 195를 갖고;
    LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 198을 갖고;
    LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 199를 갖고;
    LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 200을 갖거나;
    (II)
    HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 363을 갖고;
    HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 364를 갖고;
    HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 365를 갖고;
    LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 368을 갖고;
    LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 369를 갖고;
    LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 370을 갖거나;
    HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 233을 갖고;
    HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 234를 갖고;
    HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 235를 갖고;
    LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 238을 갖고;
    LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 239를 갖고;
    LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 240을 갖거나;
    (III) 상기 항체가 VH 도메인을 포함하고,
    vii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖거나;
    viii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖거나;
    ix. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고;
    VH 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:
    HFW1 내의 11, 12;
    HFW2 내의 37, 48;
    HFW3 내의 68, 84, 85; 또는
    HFW4 내의 105, 108, 113에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;
    (IV) 상기 항체가 VL 도메인을 포함하고,
    vii. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;
    viii. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나;
    ix. VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;
    VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:
    LFW1 내의 1, 2, 3, 9;
    LFW2 내의 38, 42; 또는
    LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;
    (V) 상기 항체 또는 그의 단편이 VH 및 VL 도메인을 포함하고,
    vii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;
    viii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나; 또는
    ix. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;
    VH 도메인 및 VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:
    HFW1 내의 11, 12;
    HFW2 내의 37, 48;
    HFW3 내의 68, 84, 85;
    HFW4 내의 105, 108, 113;
    LFW1 내의 1, 2, 3, 9;
    LFW2 내의 38, 42; 또는
    LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;
    (I) 내지 (V) 중 임의의 조합인 항체 또는 그의 단편; 및
    b. 약 190 mM의 아르기닌;
    c. 약 0.04%의 폴리소르베이트 80; 및
    d. 약 25 mM의 L-히스티딘/L-히스티딘 하이드로클로라이드를 포함하는 안정한 항체 제형.
22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 약 25℃에서 보관시에 적어도 3개월 동안 안정한 항체 제형.
23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 약 5℃에서 보관시에 적어도 18개월 동안 안정한 항체 제형.
24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 약 40℃에서 적어도 1개월 동안 보관된 항체가, 보관되지 않은 참조 항체에 비하여 hIL-4Rα 폴리펩티드로의 결합 능력의 적어도 80%를 유지하는 항체 제형.
25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 약 5℃에서 적어도 6개월 동안 보관된 항체가, 보관되지 않은 참조 항체에 비하여 hIL-4Rα 폴리펩티드로의 결합 능력의 적어도 80%를 유지하는 항체 제형
26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 약 40℃에서 적어도 1개월 동안 보관된 항체가, 보관되지 않은 참조 항체에 비하여 hIL-4Rα 폴리펩티드로의 결합 능력의 적어도 50%를 유지하는 항체 제형.
27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 약 5℃에서 적어도 6개월 동안 보관된 항체가, 보관되지 않은 참조 항체에 비하여 hIL-4Rα 폴리펩티드로의 결합 능력의 적어도 50%를 유지하는 항체 제형.
28. 적합한 용기 내에 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항의 항체 제형을 포함하는, 인간으로의 비경구 투여에 적합한 약제학적 단위 투여형.
29. c. 항체를 인간 인터류킨-4 수용체 알파(hIL-4Rα)에 특이적으로 결합하는 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체 또는 그의 단편으로 정제하는 단계로서,
    (I) 상기 항체가 CDR의 세트: HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 상기 CDR의 세트가 참조 CDR 세트로부터 10개 이하의 아미노산 치환을 갖고, 상기 참조 CDR 세트에서:
    HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 193을 갖고;
    HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 194를 갖고;
    HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 195를 갖고;
    LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 198을 갖고;
    LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 199를 갖고;
    LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 200을 갖거나;
    (II)
    HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 363을 갖고;
    HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 364를 갖고;
    HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 365를 갖고;
    LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 368을 갖고;
    LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 369를 갖고;
    LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 370을 갖거나;
    HCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 233을 갖고;
    HCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 234를 갖고;
    HCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 235를 갖고;
    LCDR1이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 238을 갖고;
    LCDR2가 아미노산 서열 SEQ ID NO: 239를 갖고;
    LCDR3이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 240을 갖거나;
    (III) 상기 항체가 VH 도메인을 포함하고,
    VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖거나;
    VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖거나;
    VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고;
    VH 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:
    HFW1 내의 11, 12;
    HFW2 내의 37, 48;
    HFW3 내의 68, 84, 85; 또는
    HFW4 내의 105, 108, 113에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;
    (IV) 상기 항체가 VL 도메인을 포함하고,
    VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;
    VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나;
    VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;
    VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:
    LFW1 내의 1, 2, 3, 9;
    LFW2 내의 38, 42; 또는
    LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;
    (V) 상기 항체 또는 그의 단편이 VH 및 VL 도메인을 포함하고,
    i. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 192를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 197을 갖거나;
    ii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 362를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 367을 갖거나; 또는
    iii. VH 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 232를 갖고, VL 도메인이 아미노산 서열 SEQ ID NO: 237을 갖고;
    VH 도메인 및 VL 도메인이 표준 카바트 넘버링을 사용하여 프레임워크 영역 내의 하기의 잔기:
    HFW1 내의 11, 12;
    HFW2 내의 37, 48;
    HFW3 내의 68, 84, 85;
    HFW4 내의 105, 108, 113;
    LFW1 내의 1, 2, 3, 9;
    LFW2 내의 38, 42; 또는
    LFW3 내의 58, 65, 66, 70, 74, 85, 87에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하거나;
    (I) 내지 (V) 중 임의의 조합인 단계; 및
    d. 상기 단리된 항체를 안정화 제형에 배치하여, 안정한 수성 항체 제형을 형성하는 단계로서, 생성된 안정한 수성 항체 제형이
    i. 약 100 ㎎/㎖ 내지 약 200 ㎎/㎖의 항체;
    ii. 약 50 mM 내지 약 400 mM의 점도 조절제;
    iii. 약 0.002% 내지 약 0.2%의 비이온성 계면활성제; 및
    iv. 제형 완충제를 포함하는 단계를 포함하는 안정한 수성 항체 제형의 제조 방법.
30. 치료적 유효량의 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 항체 제형을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서의 폐 질병 또는 장애, 또는 만성 염증성 피부 질병 또는 장애의 치료 방법.

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