KR20150139955A

KR20150139955A - 암 치료에 사용하기 위한 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온

Info

Publication number: KR20150139955A
Application number: KR1020157032015A
Authority: KR
Inventors: 치앙 제이. 리; 웨이 리; 데이비드 레깃; 유지 리; 데이비드 컬스틴; 매트 힐턴
Original assignee: 보스톤 바이오메디칼, 인크.
Priority date: 2013-04-09
Filing date: 2014-04-09
Publication date: 2015-12-14
Also published as: MX2015014181A; SG11201508358RA; WO2014169078A2; US20190388382A1; AU2014250940A1; JP2019011369A; US10543189B2; JP6433085B2; RU2015147696A; WO2014169078A3; CN113491690A; US20200397740A1; BR112015025347A2; SG10201801205YA; US20160030384A1; CN106211758A; CA2908380A1; JP2016516776A; CN113491690B; EP2983790A2

Abstract

본 발명은 나프토푸란 화합물, 나프토푸란 화합물의 다형태, 입자 형태의 나프토푸란 화합물, 1종 이상의 나프토푸란 화합물을 함유하는 정제된 조성물, 입자 형태의 1종 이상의 나프토푸란 화합물을 함유하는 정제된 조성물 및, 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하기 위하여 이들 나프토푸란 화합물, 다형태, 정제된 조성물 및/또는 입자 형태를 사용하는 방법을 제공한다.

Description

암 치료에 사용하기 위한 2-아세틸나프토[2,3-B]푸란-4,9-디온{2-ACETYLNAPHTHO[2,3-B]FURAN-4,9-DIONE FOR USE ON TREATING CANCER}

관련 출원

본원은 2013년 4월 9일자로 출원된 미국 가출원 제61/810,117호; 2013년 6월 1일자로 출원된 미국 가출원 제61/830,068호; 2014년 1월 27일자로 출원된 미국 가출원 제61/932,179호; 및 2014년 2월 11일자로 출원된 미국 가출원 제61/938,386호를 우선권 주장으로 한다. 이들 각각의 내용은 본원에 그 전문이 참조로 포함된다.

발명의 분야

미국에서만 암 치사율은 매년 수십만에 이르고 있다. 수술, 방사선치료 및 화학요법을 통한 특정 형태의 암의 치료에서의 발전에도 불구하고, 다양한 유형의 암이 본질적으로 치료 불가하다. 특정 암에 대하여 효과적인 치료를 이용할 수 있을지라도, 그러한 치료의 부작용은 심각해질 수 있어서 삶의 질을 크게 떨어뜨리게 된다.

가장 통상적인 화학요법제는 특히 진행된 고형 종양을 지닌 환자의 경우 독성 및 제한된 효능을 갖는다. 화학요법제는 암 세포뿐 아니라, 비-암세포도 파괴하게 된다. 그러한 화합물의 치료 지수(요법이 암 세포 및 정상 세포 사이를 구별하는 능력의 측정)는 매우 낮을 수 있다. 종종, 암 세포를 사멸시키는데 효과적인 투여량의 화학요법 약물은 또한 정상 세포, 특히 종종 세포 분열을 겪는 정상의 세포(예컨대 상피 세포)를 사멸시킬 것이다. 정상 세포가 요법에 의해 영향받을 경우, 탈모, 조혈의 억제 및 구역이 발생할 수 있다. 환자의 일반적인 건강에 의존하여, 상기 부작용은 화학요법의 투여를 방해할 수 있거나 또는 적어도 환자에게 매우 불쾌하고, 불편할 수 있으며, 암 환자의 나머지 삶의 질을 크게 떨어뜨릴 수 있다. 종양 퇴행을 갖는 화학요법에 반응하는 암 환자의 경우에서조차 상기 종양 반응은 종종 무진행 생존율(PFS)의 연장 또는 전체 생존율(OS)의 연장을 수반하지는 않는다. 사실상, 암은 종종 화학요법에 대한 초기 반응후 신속하게 진행되며, 더 많은 전이를 형성한다. 상기 재발성 암은 화학요법제에 대한 내성 또는 난치성이 커지게 된다. 화학요법 후 상기 신속한 재발 및 난치성은 암 줄기 세포에 의해 야기되는 것으로 간주된다.

최근의 연구는 자기 재생력을 지니며 악성 종양, 재발 및 전이에 기본적인 원인이 되는 것으로 간주되는 암 줄기 세포(CSC, 또한 종양 개시 세포 또는 암 줄기-유사 세포로 지칭됨)의 존재를 밝혀냈다. 중요하게는, CSC는 통상적인 요법에 대하여 고유한 내성을 갖는다. 그러므로, 암 줄기 세포에 대한 활성을 갖는 표적제는 암 환자에 대한 커다란 가능성을 보유한다(J Clin Oncol. 2008 Jun 10; 26(17)). 그러므로, 통상의 화학요법이 커다란 암세포를 사멸시킬 수 있으나, 이들은 암 줄기 세포를 남긴다. 화학요법 후 빠른 재발에 대한 기전이 되는 것으로 간주되는, 화학요법에 의해 비-줄기 규칙 암 세포의 감소 후 암 줄기 세포는 더 신속하게 성장할 수 있다.

따라서, 암 세포를 선택적으로 표적화시키기 위한 화합물 및 약학적 조성물의 발견, 암 줄기 세포의 표적을 위한 화합물 및 약학적 조성물, 이들 화합물, 임상적 적용을 위한 약학적 조성물의 제조 방법 및 치료를 필요로 하는 대상체에게 이의 투여 방법에 대한 수요가 존재한다.

본원에 인용된 문헌은 청구된 발명에 대하여 종래 기술인 것으로 인정하지는 않는다.

모두의 내용이 본원에 참고로 포함되는 WO 2009/036099, WO 2009/036101 및 WO 2011/116399로서 공개된 공동-소유 PCT 출원에서, 개시내용은 신규한 나프토푸란 화합물, 나프토푸란 화합물의 다형태, 1종 이상의 나프토푸란 화합물을 함유하는 정제된 조성물 및 입자 형태의 나프토푸란 화합물에 관한 것이다. 이들 나프토푸란 화합물(입자 형태의 것 포함), 다형태 및 정제된 조성물은 암 줄기 세포 및 STAT3의 선택적 억제제이다. WO 2009/036099 및 WO 2009/036101은 나프토푸란 화합물이 암 줄기 세포를 표적화한다는 것을 개시한다. 이들은 또한 STAT3을 억제하여 비-줄기 암 세포를 억제한다. 이들 화합물은 특정한 노출 조건 하에서 정상 세포를 파괴하지 않으면서 다수의 상이한 유형의 암 세포를 사멸시킬 수 있다. 그러므로, 화합물은 특히 난치성, 재발성, 전이성 암 또는 STAT3-발현 암의 치료 및 예방을 위하여 암 치료에 사용될 수 있다. 상기 공보에는 나프토푸란 화합물, 유도체 및 그의 중간체 및 관련 화합물의 약학적 조성물의 제조 방법이 기재되어 있다.

본 발명은 세포 증식 장애의 치료, 진행의 지연, 재발의 예방 또는 증상의 완화를 비롯한 다양한 지시에서 이들 나프토푸란 화합물(입자 형태의 것 포함), 다형태 및 정제된 조성물의 신규한 제제화 및 사용 방법을 제공한다. 예를 들면, 나프토푸란 화합물(입자 형태의 것 포함), 다형태 및 정제된 조성물은 암의 치료, 진행의 지연, 재발의 예방, 증상의 완화 또는 그렇지 않으면 개선하는데 유용하다. 일부 실시양태에서, 암은 식도암, 위식도 접합부암, 위식도 선암종, 연골육종, 대장암(결장직장암), 결장 선암종, 직장 선암종, 대장 선암종(결장직장 선암종), 유방암, 난소암, 두경부암, 흑색종, 위 선암종 및 부신피질 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암은 식도암이다. 일부 실시양태에서, 암은 위식도 접합부암이다. 일부 실시양태에서, 암은 위식도 선암종이다. 일부 실시양태에서, 암은 난치성이다. 일부 실시양태에서, 암은 재발성이다. 일부 실시양태에서, 암은 전이성이다. 일부 실시양태에서, 암은 STAT3의 과발현과 관련되어 있다.

사람, 포유동물 또는 동물 대상체에서 암(또는 신생물)의 치료, 진행의 지연, 재발의 예방, 재발, 전이의 억제, 증상의 완화 및/또는 그렇지 않다면 개선의 본 발명에 의한 방법은 치료적 유효량의 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물을 투여하여 항-신생물 활성이 발생할 수 있다. 예를 들면, 항-신생물 활성은 항암 활성일 수 있다. 예를 들면, 항-신생물 활성은 신생물의 부피 성장의 지연, 신생물의 부피 성장의 중지 또는 신생물의 부피 감소를 포함할 수 있다. 신생물은 고형 종양, 악성, 전이성 세포, 암 줄기 세포를 포함할 수 있다. 신생물은 암종, 육종, 선암종, 림프종 또는 혈액성 악성을 포함한다. 신생물은 화학요법, 방사선요법 및/또는 호르몬 요법에 의한 치료에 난치성일 수 있다. 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물은 신생물의 재발을 방지하기 위하여 투여될 수 있다. 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물은 수술적 절제술에 대한 보조 요법으로서 투여될 수 있다. 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물은 예를 들면 경구 및/또는 정맥내 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 약학적 조성물은 적어도 (i) 나트륨 라우릴 술페이트(SLS) 또는 나트륨 도데실 술페이트(SDS)를 포함하는 계면활성제; (ii) 겔루시르(Gelucire)(라우로일 폴리옥실글리세리드); 및 라브라필(Labrafil)(리놀레오일 폴리옥실글리세리드)과 함께 본 발명의 화합물을 포함한다.

본 명세서에서, 용어 "암의 치료"는 암(또는 신생물)의 진행의 지연, 재발의 예방, 재발, 전이의 억제, 증상의 완화 및/또는 그렇지 않다면 개선을 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 약학적 조성물은 적어도 (i) 나트륨 라우릴 술페이트(SLS) 또는 나트륨 도데실 술페이트(SDS)를 포함하는 계면활성제; (ii) 겔루시르(라우로일 폴리옥실글리세리드); 및 (iii) 라브라필(리놀레오일 폴리옥실글리세리드)과 함께 본 발명의 화합물을 포함한다.

일부 실시양태에서, 약학적 조성물은 약 27.18 중량%의 활성 성분, 약 0.27 중량%의 계면활성제, 약 14.51 중량%의 겔루시르 및 약 58.04 중량%의 라브라필을 포함한다. 일부 실시양태에서, 약학적 조성물은 약 125 ㎎의 활성 성분, 약 1.2 ㎎의 계면활성제, 약 66.8 ㎎의 겔루시르 및 약 267 ㎎의 라브라필을 포함한다. 일부 실시양태에서, 약학적 조성물은 약 80 ㎎의 활성 성분, 약 0.8 ㎎의 계면활성제, 약 42.7 ㎎의 겔루시르 및 약 170.9 ㎎의 라브라필을 포함한다. 일부 실시양태에서, 약학적 조성물은 캡슐 내에 수용된다. 일부 실시양태에서, 캡슐은 사이즈 1 또는 이보다 작은 사이즈를 갖는다.

본 발명에 의한 방법은 또한 질환 또는 장애로 고생하는 사람, 포유동물 또는 동물 대상체에서 질환 또는 장애의 치료, 진행의 지연, 재발의 예방, 증상의 완화 또는 그렇지 않다면 개선시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 질환 또는 장애는 본원에 기재된 임의의 암(또는 신생물)이다. 일부 실시양태에서, 암은 식도암, 위식도 접합부암, 위식도 선암종, 연골육종, 대장암, 결장 선암종, 직장 선암종, 대장 선암종, 유방암, 난소암, 두경부암, 흑색종, 위 선암종 및 부신피질 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일부 실시양태에서, 상기 방법은 또한 인산화 STAT3(p-STAT3)의 레벨을 환자 조직에서 검출하는 단계를 포함하며, 여기서 p-STAT3의 레벨은 환자 선택을 위한 바이오마커로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 조직 인산화 STAT3 레벨은 기준 레벨(benchmark level) 초과(p-STAT3의 중간 레벨을 갖는 10% 초과의 종양 세포)이다. 일부 실시양태에서, 암은 세포막 내가 아니라 세포핵 내의 β-카테닌 국재화와 관련되어 있다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 환자의 조직에서 β-카테닌 발현의 부위를 검출하는 단계를 포함하며, 상기 β-카테닌 발현의 부위는 환자 선택을 위한 바이오마커로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 유의적인 β-카테닌 발현은 세포핵에서 검출된다. 일부 실시양태에서, β-카테닌의 중간 내지 강한 발현은 20% 이상의 종양 세포에서 검출된다.

질환 또는 장애를 앓고 있는 환자에게 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물의 투여는 임의의 각종 실험실 또는 임상 결과를 달성할 경우 성공적인 것으로 간주된다. 예를 들면, 질환 또는 장애와 관련된 증상 중 하나 이상이 완화, 감소, 억제되거나 또는 추가의, 즉 악화된 상태로 진행되지 않는 경우 투여는 성공적인 것으로 간주한다. 장애, 예를 들면 암 또는 신생물이 차도를 보이거나 또는 추가의, 즉 악화된 상태로 진행되지 않는 경우 투여는 성공적인 것으로 간주한다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물은 예를 들면 화학요법제 및 기타 항신생물제, 항염증성 화합물 및/또는 면역억제 화합물을 비롯한 임의의 각종 공지의 치료제와 병용 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물은 비제한적인 예로서 수술 치료 및 방법, 방사선요법, 화학요법 및/또는 호르몬 또는 기타 내분비 관련 치료와 함께 유용하다.

이들 "병용 요법"은 순차 또는 동시 투여될 수 있다. 본원에 기재된 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물 및 제2의 요법은 대상체, 바람직하게는 사람 대상체에게 동일한 약학적 조성물로 투여될 수 있다. 대안으로, 본원에 기재된 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물 및 제2의 요법은 대상체에게 별도의 약학적 조성물로 동시, 별도 또는 순차 투여될 수 있다. 본원에 기재된 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물 및 제2의 요법은 대상체에게 동일하거나 또는 상이한 경로의 투여에 의해 투여될 수 있다. 본원에 기재된 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물이 우선 대상체에게 투여될 수 있으며, 그 후 제2의 요법이 대상체에게 투여될 수 있다. 제2의 요법이 우선 대상체에게 투여될 수 있으며, 그 후 본원에 기재된 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물을 대상체에게 투여할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 병용 요법은 본원에 기재된 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물과는 상이한 작용 기전을 갖는 유효량의 본원에 기재된 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물 및 유효량의 1종 이상의 기타 요법(예를 들면 예방제 또는 치료제)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 병용 요법은 함께 작용하여 본원에 기재된 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물의 및 제2의 요법의 예방적 또는 치료적 효과를 개선시켜 상가적 또는 상승적 효과를 갖는다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 병용 요법은 제2의 요법(예를 들면 예방제 또는 치료제)과 관련된 부작용을 감소시킨다.

일부 실시양태에서, 질환 또는 장애는 하기와 같은 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물을 투여하여 치료될 수 있다. 화합물의 혈중 몰 농도는, 적어도 유효 기간 정도로 길며, 유해 기간보다는 짧은 제1의 연속 기간 동안 적어도 유효 농도이며, 유해 농도보다 낮을 수 있다. 혈중 몰 농도는 제1의 연속 기간 후의 유효 농도보다 낮을 수 있다. 예를 들면, 유효 농도는 약 0.1 μM, 약 0.2 μM, 약 0.5 μM, 약 1 μM, 약 2 μM, 약 3 μM, 약 4 μM, 약 5 μM, 약 6 μM, 약 10 μM 또는 당업자에 의해 유효한 것으로 결정된 또 다른 농도일 수 있다. 예를 들면, 유해 농도는 약 1 μM, 약 3 μM, 약 10 μM, 약 15 μM, 약 30 μM, 약 100 μM 또는 당업자에 의해 유해한 것으로 결정된 또 다른 농도일 수 있다. 예를 들면, 유효 기간은 약 1 시간, 2 시간, 약 4 시간, 약 6 시간, 약 8 시간, 약 10 시간, 약 12 시간, 약 24 시간 또는 당업자에 의해 유효한 것으로 결정된 기간일 수 있다. 예를 들면, 유해 기간은 약 12 시간, 약 24 시간, 약 48 시간, 약 72 시간, 약 144 시간 또는 당업자에 의해 유해한 것으로 결정된 기간일 수 있다.

일부 실시양태에서, 치료적 유효량의 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물은 종양의 세포의 IC₅₀보다는 크며, 정상 세포의 IC₅₀보다는 낮은 혈중 농도를 생성하도록 선택된다. 일부 실시양태에서, 치료적 유효량은 종양의 세포를 사멸시키기에 충분히 높으며, 정상 세포의 IC₅₀보다는 낮은 혈중 농도를 생성하도록 선택된다.

일부 실시양태에서, 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물은 투여 형태, 예를 들면, 정제, 환제, 캡슐(경질 또는 연질), 당의정, 분말, 과립, 현탁액, 액제, 겔, 카세제, 트로키, 로젠지, 시럽, 엘릭시르, 에멀젼, 수중유 에멀젼, 유중수 에멀젼 및/또는 물약으로 경구 투여된다.

병용 요법의 다양한 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 환자에게 약 400 ㎎ 내지 약 1,000 ㎎ 범위 내의 총 1일 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 환자에게 약 800 ㎎ 내지 약 1,000 ㎎, 바람직하게는 1일 2회 투여량으로, 예를 들면, 약 480 ㎎ BID 범위 내의 총 1일 투여량으로 투여된다. 투여 사이의 간격은 약 4 시간 내지 약 16 시간, 예를 들면 약 12 시간 범위 내일 수 있다.

일부 실시양태에서, 총 1일 투여량이 1일 총 400 내지 800 ㎎으로 감소되도록 본 발명의 화합물의 투여량이 변경될 수 있다. 일부 실시양태에서, 총 1일 투여량이 1일 총 50 ㎎ 내지 400 ㎎으로 감소되도록 투여량을 변경할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 또한 1일 1회 복용할 수 있다. 일부 실시양태에서, 1일 1회 복용되는 경우, 투여 사이의 간격은 18 내지 30 시간(예를 들면 약 24 시간)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 또한 약 240 내지 1,000 ㎎의 총 투여량으로 1일 3회 복용될 수 있다. 1일 3회 복용시, 투여 사이의 시간은 약 4 시간 내지 8 시간일 수 있다.

본 발명의 한 특징에서, 본 발명의 나프토푸란 화합물은 특히 유효 화학요법제인 것으로 입증된 항유사분열제 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 프로드럭과 병용될 수 있다. 본 발명의 화합물과 함께 병용 요법으로서 유용할 수 있는 항유사분열제의 예로는 파클리탁셀(아브락산/탁솔), 도세탁셀(탁소테레), BMS-275183, 자이오탁스, 토코살, 비노렐빈, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 빈졸리딘, 에토포시드(VP-16), 테니포시드(VM-26), 익사베필론, 라로탁셀, 오르타탁셀, 테세탁셀 및 이스피네십을 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

일부 실시양태에서, 병용 요법에서 본 발명의 화합물과 함께 사용된 제2의 약물은 파클리탁셀(아브락산/탁솔) 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 프로드럭이다. 일부 실시양태에서, 파클리탁셀은 대상체에게 약 40 ㎎/㎡ 내지 약 100 ㎎/㎡ 범위 내의 총 1주 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 파클리탁셀은 대상체에게 약 80 ㎎/㎡의 총 1주 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 파클리탁셀은 대상체에게 IV에 의해 투여된다. 일부 실시양태에서, 파클리탁셀은 매4주당 3주 동안 1주 1회로 투여하며, 즉 3주 투여, 1주 휴약한다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물을 우선 대상체에게 투여할 수 있으며, 그 후, 파클리탁셀을 대상체에게 투여할 수 있다. 파클리탁셀을 우선 대상체에게 투여할 수 있으며, 그 후 본 발명의 화합물을 대상체에게 투여할 수 있다. 그러한 경우에서, 본 발명의 화합물 및 파클리탁셀의 투여 사이의 약간의 간격이 포함될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 치유적 또는 예방적 암 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여량의 본 발명의 화합물 및 투여량의 파클리탁셀을 투여하는 단계를 포함하며, 파클리탁셀을 대상체에게 투여하기 전 또는 후에 제1의 투여량을 투여하는, 파클리탁셀을 대상체에게 투여하여 치유적 또는 예방적 암을 치료하는 방법에 관한 것이다.

한 구체예에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상체에게 본원에서 "화합물 1"로 지칭하며 그리고 하기 제시한 구조를 갖는 나프토푸란 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 프로드럭의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 바람직하게는 사람 대상체에서의 치유적 또는 예방적 암 치료를 제공한다:

(1)

일부 실시양태에서, 화합물은 대상체에게 약 80 ㎎ 내지 약 2,000 ㎎ 범위 내의 총 1일 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 대상체에게 약 80 ㎎, 약 160 ㎎, 약 320 ㎎, 약 480 ㎎, 약 640 ㎎, 약 800 ㎎ 및 약 960 ㎎으로 이루어진 군으로부터 선택되는 총 1일 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 대상체에게 약 960 ㎎의 총 1일 투여량으로 투여된다.

일부 실시양태에서, 화합물은 1일 2회(BID) 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 대상체에게 약 80 ㎎ BID 내지 약 480 ㎎ BID 범위 내의 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 대상체에게 약 80 ㎎ BID, 약 160 ㎎ BID, 약 320 ㎎ BID, 약 400 ㎎ BID 및 약 480 ㎎ BID로 이루어진 군으로부터 선택되는 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 대상체에게 약 480 ㎎ BID의 투여량으로 투여된다.

일부 실시양태에서, 화합물은 화합물의 투여 사이의 시간이 투여 사이의 약 4 시간 내지 투여 사이의 약 16 시간 범위 내로 BID 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 화합물의 투여 사이의 시간이 4 시간 이상, 5 시간 이상, 6 시간 이상, 7 시간 이상, 8 시간 이상, 9 시간 이상, 10 시간 이상, 11 시간 이상, 12 시간 이상, 13 시간 이상, 14 시간 이상, 15 시간 이상 및/또는 16 시간 이상으로 BID 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 대상체에게 약 80 ㎎ BID 내지 약 480 ㎎ BID 범위 내의 투여량으로 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 투여 사이의 약 4 시간 내지 투여 사이의 약 16 시간 범위 내이다. 일부 실시양태에서, 화합물은 화합물의 투여 사이의 시간이 4 시간 이상, 5 시간 이상, 6 시간 이상, 7 시간 이상, 8 시간 이상, 9 시간 이상, 10 시간 이상, 11 시간 이상, 12 시간 이상, 13 시간 이상, 14 시간 이상, 15 시간 이상 및/또는 16 시간 이상으로 BID 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 대상체에게 약 80 ㎎ BID, 약 160 ㎎ BID, 약 320 ㎎ BID, 약 400 ㎎ BID 및 약 480 ㎎ BID로 이루어진 군으로부터 선택되는 투여량으로 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 투여 사이의 약 4 시간 내지 투여 사이의 약 16 시간 범위 내이다. 일부 실시양태에서, 화합물은 화합물의 투여 사이의 시간이 4 시간 이상, 5 시간 이상, 6 시간 이상, 7 시간 이상, 8 시간 이상, 9 시간 이상, 10 시간 이상, 11 시간 이상, 12 시간 이상, 13 시간 이상, 14 시간 이상, 15 시간 이상 및/또는 16 시간 이상으로 BID 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 대상체에게 약 480 ㎎ BID의 투여량으로 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 투여 사이의 약 12 시간이다. 일부 실시양태에서, 화합물은 대상체에게 약 80 ㎎ BID의 투여량으로 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 투여 사이의 약 12 시간이다. 일부 실시양태에서, 화합물은 대상체에게 약 400 ㎎ BID의 투여량으로 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 투여 사이의 약 12 시간이다. 일부 실시양태에서, 화합물은 대상체에게 약 320 ㎎ BID의 투여량으로 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 투여 사이의 약 12 시간이다. 일부 실시양태에서, 화합물은 화합물의 투여 사이의 시간이 4 시간 이상, 약 5 시간 이상, 약 6 시간 이상, 약 7 시간 이상, 약 8 시간 이상, 약 9 시간 이상, 약 10 시간 이상, 약 11 시간 이상, 약 12 시간 이상, 약 13 시간 이상, 약 14 시간 이상, 약 15 시간 이상 및/또는 약 16 시간 이상으로 BID 투여된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 대상체에게 약 80 ㎎ BID, 약 160 ㎎ BID, 약 320 ㎎ BID, 약 400 ㎎ BID 및 약 480 ㎎ BID의 투여량으로 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 5 시간 이상, 바람직하게는 투여 사이의 약 5 시간 내지 투여 사이의 약 15 시간 범위 내이다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 정제 또는 캡슐로서 투여된다. 일부 실시양태에서, 정제 또는 캡슐은 약 80 ㎎의 투여량을 포함한다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 공복에 유체와 함께 경구 투여된다. 일부 실시양태에서, 유체는 밀크 또는 물이다.

일부 실시양태에서, 나프토푸란 화합물은 본원에서 "화합물 1"로 지칭된 하기 제시된 화합물의 다형태이다:

(1)

예를 들면, 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이며, 이들 공보 각각의 내용은 본원에 그 전문이 참조로 포함된다. WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 1에 도시된 X선 분말 회절 분석은 40 KV/30 ㎃에서 0.03°의 스텝 사이즈 및 3 시간의 계수 시간으로 5° 내지 70° 범위에 걸쳐 Cu 방사를 사용하는 필립스(Philips) PW1800 회절계를 사용하여 수행하였다. 분석은 하기 조건을 사용하여 2-45° 2θ로부터 수행하였다: 발산 슬릿: 0.6 mm, 비산란 슬릿: 0.6 mm, 수용 슬릿: 0.1 mm, 검출기 슬릿: 0.6 mm, 스텝 크기: 0.02°, 스텝 시간: 5 초. 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 2 및 3에 도시된 X선 분말 회절 분석은 브루커(Bruker) D8 어드밴스(Advance) 회절계를 사용하여 수행하였다. 분석은 하기 조건을 사용하여 2-45 2θ로부터 수행하였다: 발산 슬릿: 0.6 mm, 비산란 슬릿: 0.6 mm, 수용 슬릿: 0.1 mm, 검출기 슬릿: 0.6 mm, 스텝 크기: 0.02°, 스텝 시간: 5 초.

예를 들면, 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 10.2, 11.4, 11.9, 14.1, 14.5, 17.3, 21.0, 22.2, 24.0, 26.0 및 28.1° 2θ에서 1개 이상의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 10.2, 11.9, 14.1, 14.5, 17.3, 22.2 및/또는 28.1° 2θ에서 1개 이상의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 10.2° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 11.9° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 14.1° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 14.5° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 17.3° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 22.2° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 28.1° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 10.2° 2θ에서의 피크, 적어도 약 11.9° 2θ에서의 피크, 적어도 약 14.1° 2θ에서의 피크, 적어도 약 14.5° 2θ에서의 피크, 적어도 약 17.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 22.2° 2θ에서의 피크 및 적어도 약 28.1° 2θ에서의 피크 및 이들의 임의의 조합으로부터의 피크 2개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다.

예를 들면, 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 7.5, 9.9, 11.4, 12.3, 15.0, 23.0, 23.3, 24.1, 24.6, 25.0, 26.1, 27.0 및 28.4° 2θ에서 1개 이상의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 7.5, 9.9, 12.3, 15, 23.0, 23.3, 24.6 및/또는 28.4° 2θ에서 1개 이상의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 7.5° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 9.9° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 12.3° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 15° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 23° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 23.3° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 24.6° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 28.4° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 7.5° 2θ에서의 피크, 적어도 약 9.9° 2θ에서의 피크, 적어도 약 15° 2θ에서의 피크, 적어도 약 12.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 23.0° 2θ에서의 피크, 적어도 약 23.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 24.6° 2θ에서의 피크 및 적어도 약 28.4° 2θ에서의 피크 및 이들의 임의의 조합으로부터의 피크 2개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다.

본 발명은 또한 입자 형태의 나프토푸란 화합물을 제공한다. 예를 들면, 입자 형태의 나프토푸란 화합물은, 활성이며, 즉 생체내 효능 및/또는 항종양 활성인 하기 제시된 화학식 I의 화합물의 입자이다. 유효 입자 또는 입자들은 입자 크기에 대한 확정된 요건을 가지며, 예를 들면 약 200 ㎛, 약 150 ㎛, 약 100 ㎛, 약 40 ㎛ 또는 약 20 ㎛, 약 10 ㎛, 약 5 ㎛, 약 4 ㎛, 약 3 ㎛, 약 2 ㎛, 약 1 ㎛, 약 0.5 ㎛ 또는 약 0.2 ㎛ 이하의 직경을 갖는다. 확정된 입자 크기보다 큰 입자 또는 입자들은 불활성이거나 또는 활성이 적다.

일부 실시양태에서, 화합물은 화합물 입자의 집단을 포함하며, 입자의 누적 합계의 일부분이 0.2 ㎛ 내지 20 ㎛ 범위 내의 직경을 갖는 약학적 조성물 중에 존재한다.

일부 실시양태에서, 화합물은 화합물 입자의 집단을 포함하며, 입자의 누적 합계의 50%(D₅₀)가 약 0.5 내지 약 5 ㎛ 범위 내의 직경을 갖는 약학적 조성물 중에 존재한다.

일부 실시양태에서, 화합물은 화합물 입자의 집단을 포함하며, 입자의 누적 합계의 50%(D₅₀)가 약 2 ㎛의 직경을 갖는 약학적 조성물 중에 존재한다.

일부 실시양태에서, 입자 형태의 나프토푸란 화합물은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염 또는 용매화물의 입자이며, 입자는 약 200 ㎛ 이하의 직경을 갖는다:

<화학식 I>

상기 화학식에서, 각각의 (R₁)은 수소, 할로겐, 불소, 시아노, 니트로, CF₃, OCF₃, 알킬, 메틸, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, 아릴, 치환된 아릴, OR_a, SR_a 및 NH₂로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며; n은 4이며; R₃은 수소, 할로겐, 불소, 시아노, CF₃, OCF₃, 알킬, 메틸, 치환된 알킬, 할로겐-치환된 알킬, 히드록실-치환된 알킬, 아민-치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, 아릴, 치환된 아릴, OR_a, SR_a 및 NR_bR_c로 이루어진 군으로부터 선택되며; R_a는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, 아릴 및 치환된 아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며; R_b 및 R_c는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, 아릴 및 치환된 아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며, R_b 및 R_c는 이들이 결합된 N과 함께 헤테로사이클 또는 치환된 헤테로사이클을 형성한다.

일부 실시양태에서, 각각의 (R₁)은 수소, 메틸, F(불소), Cl, Br, I, OH 및 NH₂로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며; R₃은 메틸 및 C(R₈)₃으로 이루어진 군으로부터 선택되며, 각각의 (R₈)은 수소, 메틸, F(불소), Cl, Br, I, OH 및 NH₂로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 일부 실시양태에서, (R₁) 및 (R₈) 중 2개 이하는 F(불소)이며, 나머지는 수소이다. 일부 실시양태에서, R₃은 메틸이다. 추가의 실시양태에서, 화합물은 2-(1-히드록시에틸)-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-클로로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-플루오로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-에틸-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 그의 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체 및 염 또는 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일부 실시양태에서, 입자 형태의 나프토푸란 화합물은 화합물 1의 입자이다.

일부 실시양태에서, 입자 형태의 나프토푸란 화합물은 화합물 1의 다형태의 입자이다. 예를 들면, 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 1에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 2에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 3에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다.

예를 들면, 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 10.2, 11.4, 11.9, 14.1, 14.5, 17.3, 21.0, 22.2, 24.0, 26.0 및 28.1° 2θ에서 1개 이상의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 10.2, 11.9, 14.1, 14.5, 17.3, 22.2 및/또는 28.1° 2θ에서 1개 이상의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 10.2° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 11.9° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 14.1° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 14.5° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 17.3° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 22.2° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 28.1° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 10.2° 2θ에서의 피크, 적어도 약 11.9° 2θ에서의 피크, 적어도 약 14.1° 2θ에서의 피크, 적어도 약 14.5° 2θ에서의 피크, 적어도 약 17.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 22.2° 2θ에서의 피크 및 적어도 약 28.1° 2θ에서의 피크 및 이들의 임의의 조합으로부터의 피크 2개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다.

일부 실시양태에서, 입자는 약 160 ㎛, 약 150 ㎛, 약 120 ㎛, 약 100 ㎛, 약 50 ㎛, 약 40 ㎛ 또는 약 20 ㎛ 이하의 직경을 갖는다. 추가의 실시양태에서, 입자는 약 10 ㎛, 약 5 ㎛, 약 4 ㎛, 약 3 ㎛, 약 2 ㎛, 약 1 ㎛, 약 0.5 ㎛, 약 0.2 ㎛ 또는 약 0.1 ㎛ 이하의 직경을 갖는다.

본 발명은 나프토푸란 화합물, 예를 들면 활성이며, 즉 효능 및/또는 항종양 활성을 갖는 화학식 I의 화합물의 입자 또는 입자들을 제공한다. 활성 입자 또는 입자들은 특정한 크기를 가지며, 예를 들면, 약 200 ㎛, 약 150 ㎛, 약 100 ㎛, 약 40 ㎛ 또는 약 20 ㎛, 약 10 ㎛, 약 5 ㎛, 약 4 ㎛, 약 3 ㎛, 약 2 ㎛, 약 1 ㎛, 약 0.5 ㎛, 약 0.2 ㎛ 또는 약 0.1 ㎛ 이하의 직경을 갖는다. 특정한 크기보다 큰 입자 또는 입자들은 본원에 기재된 입자보다 활성이 적거나 또는 불활성이다.

본 발명에 의한 일부 실시양태에서, 약학적 조성물은 화합물, 예를 들면 화학식 I에 의한 나프토푸란 또는 그의 염 또는 용매화물의 입자를 포함한다. 예를 들면, 일부 실시양태에서, 약학적 조성물은 화합물 1의 입자를 포함한다. 예를 들면, 일부 실시양태에서, 약학적 조성물은 화합물 1의 다형태의 입자를 포함한다. 예를 들면, 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 1에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 2에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 3에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다.

입자의 누적 합계의 일부분은 약 200 ㎛ 이하의 직경을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 입자의 세트의 일부분은 세트 중의 입자 총수의 약 1% 이상, 약 5% 이상, 약 10% 이상, 약 20% 이상 또는 약 30% 이상일 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 일부분은 상당 부분(substantial fraction)이다. 예를 들면 입자의 세트의 "상당 부분"은 세트 중의 입자 총수의 약 99% 이상, 약 95% 이상, 약 90% 이상, 약 85% 이상, 약 80% 이상, 약 75% 이상, 약 70% 이상, 약 60% 이상 또는 약 50% 이상일 수 있다. 각각의 (R₁)은 수소, 할로겐, 불소, 시아노, 니트로, CF₃, OCF₃, 알킬, 메틸, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, 아릴, 치환된 아릴, OR_a, SR_a 및 NH₂로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다. n은 양의 정수일 수 있으며; 예를 들면 n은 4일 수 있다. R₃은 수소, 할로겐, 불소, 시아노, CF₃, OCF₃, 알킬, 메틸, 치환된 알킬, 할로겐-치환된 알킬, 히드록실-치환된 알킬, 아민-치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, 아릴, 치환된 아릴, OR_a, SR_a 및 NR_bR_c로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. R_a는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, 아릴 및 치환된 아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다. R_b 및 R_c는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, 아릴 및 치환된 아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있거나 또는 R_b 및 R_c는 이들이 결합된 N과 함께 헤테로사이클 또는 치환된 헤테로사이클을 형성한다.

일부 실시양태에서, 본 발명에 의하면, 각각의 (R₁)은 수소, 메틸, F(불소), Cl, Br, I, OH 및 NH₂로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다. R₃은 메틸 및 C(R₈)₃으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 각각의 (R₈)은 수소, 메틸, F(불소), Cl, Br, I, OH 및 NH₂로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, (R₁) 및 R₈ 중 2개 이하는 F(불소)일 수 있으며, 나머지는 수소이다.

<화학식 I>

본 발명에 의한 일부 실시양태에서, 화학식 I에 의한 화합물은 2-(1-히드록시에틸)-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-클로로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-플루오로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온 및 2-에틸-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 화학식 I에 의한 화합물은 화합물 1이다. 일부 실시양태에서, 화학식 I에 의한 화합물은 화합물 1의 다형태이다. 예를 들면, 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 1에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 2에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 3에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다.

예를 들면, 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 7.5, 9.9, 11.4, 12.3, 15.0, 23.0, 23.3, 24.1, 24.6, 25.0, 26.1, 27.0 및 28.4° 2θ에서 1개 이상의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 7.5, 9.9, 12.3, 15, 23.0, 23.3, 24.6 및/또는 28.4° 2θ에서 1개 이상의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 7.5° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 9.9° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 12.3° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 15° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 23° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 23.3° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 24.6° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 28.4° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 7.5° 2θ에서의 피크, 적어도 약 9.9° 2θ에서의 피크, 적어도 약 15° 2θ에서의 피크, 적어도 약 12.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 23.0° 2θ에서의 피크, 적어도 약 23.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 24.6° 2θ에서의 피크 및 적어도 약 28.4° 2θ에서의 피크 및 이들의 임의의 조합으로부터의 피크 2개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다.

예를 들면, 약학적 조성물은 입자의 누적 합계의 약 90% 이상이 약 160 ㎛, 100 ㎛, 40 ㎛, 20 ㎛, 10 ㎛, 5 ㎛, 3 ㎛ 또는 2 ㎛ 이하의 입자 크기를 가질 수 있다. 예를 들면, 약학적 조성물은 입자의 누적 합계의 약 50% 이상이 약 160 ㎛, 100 ㎛, 40 ㎛, 20 ㎛, 10 ㎛, 5 ㎛, 3 ㎛, 2 ㎛, 1 ㎛ 또는 0.5 ㎛ 이하의 입자 크기를 가질 수 있다. 예를 들면, 약학적 조성물은 입자의 누적 합계의 약 10% 이상이 약 160 ㎛, 100 ㎛, 40 ㎛, 20 ㎛, 5 ㎛, 2 ㎛, 1 ㎛, 0.5 ㎛ 또는 0.1 ㎛ 이하의 입자 크기를 가질 수 있다. 약학적 조성물에서, 입자는 예를 들면 약 160 ㎛, 40 ㎛, 20 ㎛, 10 ㎛, 5 ㎛, 4㎛ 3 ㎛, 2 ㎛, 1 ㎛, 0.5 ㎛, 0.3 ㎛ 또는 0.2 ㎛ 이하의 중앙 직경을 가질 수 있다. 예를 들면, 입자는 약 0.2 ㎛ 내지 약 50 ㎛의 중앙 직경 또는 약 0.5 ㎛ 내지 약 30 ㎛의 중앙 직경을 가질 수 있다. 예를 들면, 약학적 조성물은 약 2 ㎛ 이하의 중앙 직경에 대한 평균 직경의 비를 갖는 입자의 누적 합계를 갖는다. 약학적 조성물은 결정질 상태로, 2종 이상의 상이한 다형태 상태로 화합물을 포함하는 입자를 가질 수 있다.

일부 실시양태에서, 약학적 조성물은 입자 형태의 화학식 I의 화합물 또는 그의 다형태를 포함하며, 입자 또는 입자들은 20 마이크론, 10 마이크론, 5 마이크론, 2 마이크론, 1 마이크론 또는 0.5 마이크론 미만이다.

본 발명은 하기 화학식 II의 실질적으로 순수한 화합물을 제공한다:

(II)

상기 화학식에서, 각각의 R₁은 독립적으로 H, Cl 또는 F이고; n은 0, 1, 2, 3 또는 4이다. 일부 실시양태에서, 화학식 II의 화합물은 입자 형태로 존재한다.

일부 실시양태에서, 실질적으로 순수한 화합물은 화합물 1이다. 일부 실시양태에서, 화합물 1은 입자 형태로 존재한다.

일부 실시양태에서, 실질적으로 순수한 화합물은 2-(1-히드록시에틸)-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-클로로나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-플루오로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-에틸-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 인산 모노-[1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐]에스테르, 인산 1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐 에스테르 디메틸 에스테르, 그의 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체 및 염 또는 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일부 실시양태에서, 실질적으로 순수한 화합물은 화합물 1의 다형태이다. 예를 들면, 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 1에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 2에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 3에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다.

예를 들면, 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 10.2, 11.4, 11.9, 14.1, 14.5, 17.3, 21.0, 22.2, 24.0, 26.0 및 28.1° 2θ에서 1개 이상의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 10.2, 11.9, 14.1, 14.5, 17.3, 22.2 및/또는 28.1° 2θ에서 1개 이상의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 10.2° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 11.9° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 14.1° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 14.5° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 17.3° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 22.2° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 28.1° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 10.2° 2θ에서의 피크, 적어도 약 11.9° 2θ에서의 피크, 적어도 약 14.1° 2θ에서의 피크, 적어도 약 14.5° 2θ에서의 피크, 적어도 약 17.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 22.2° 2θ에서의 피크 및 적어도 약 28.1° 2θ에서의 피크 및 이들의 임의의 조합으로부터의 피크 2개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다.

일부 실시양태에서, 화합물 1의 다형태는 입자 형태로 존재한다.

일부 실시양태에서, 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물은 적어도 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 99%의 순도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물은 적어도 약 95.5%, 약 96%, 약 96.5%, 약 97%, 약 97.5%, 약 98%, 약 98.5%, 약 99% 또는 약 99.5%의 순도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물은 적어도 약 99.1%, 약 99.2%, 약 99.3%, 약 99.4%, 약 99.5%, 약 99.6%, 약 99.7%, 약 99.8% 또는 약 99.9%의 순도를 갖는다.

일부 실시양태에서, 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물은 약 10%, 약 5%, 약 1%, 약 0.15% 또는 약 0.15% 이하의 불순물을 갖는다. 일부 실시양태에서, 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물은 약 0.5%, 약 0.2%, 약 0.15% 또는 약 0.1% 이하의 불순물을 갖는다. 추가의 실시양태에서, 불순물은 2-아세틸-2,3-디히드로나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2,6-디아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2,7-디아세틸-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 3-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 나프토[2,3-b]푸란-4,9-디올 및 1-(4,9-디히드록시-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-에타논으로 이루어진 군으로부터의 1종 이상이다.

일부 실시양태에서, 불순물은 잔류 용매를 포함한다. 일부 실시양태에서, 용매는 에틸 아세테이트(EtOAc), 톨루엔, 에탄올, 메탄올, 클로로포름 및 CH₂Cl₂/헥산으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일부 실시양태에서, 순도는 HPLC(고성능 액체 크로마토그래피)로 측정된다. 일부 실시양태에서, 순도는 NMR(핵 자기 공명)로 측정된다. 추가의 실시양태에서, 순도는 HPLC 및 NMR 둘 다로 측정된다.

본 발명은 또한 입자 형태의 화합물 1의 다형태를 제공하며, 화합물은 고도로 정제된 형태의 생성물 및/또는 약학적 조성물이다. 예를 들면, 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 1에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 2에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 3에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다.

예를 들면, 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 10.2, 11.4, 11.9, 14.1, 14.5, 17.3, 21.0, 22.2, 24.0, 26.0 및 28.1° 2θ에서 1개 이상의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 10.2, 11.9, 14.1, 14.5, 17.3, 22.2 및/또는 28.1° 2θ에서 1개 이상의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 10.2° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 11.9° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 14.1° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 14.5° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 17.3° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 22.2° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 28.1° 2θ에서의 피크를 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 적어도 약 10.2° 2θ에서의 피크, 적어도 약 11.9° 2θ에서의 피크, 적어도 약 14.1° 2θ에서의 피크, 적어도 약 14.5° 2θ에서의 피크, 적어도 약 17.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 22.2° 2θ에서의 피크 및 적어도 약 28.1° 2θ에서의 피크 및 이들의 임의의 조합으로부터의 피크 2개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다.

화합물 1의 다형태는 입자 형태로 존재한다. 일부 실시양태에서, 화합물 1의 다형태는 입자 형태로 존재하며, 입자는 약 160 ㎛, 약 150 ㎛, 약 120 ㎛, 약 100 ㎛, 약 50 ㎛, 약 40 ㎛ 또는 약 20 ㎛ 이하의 직경을 갖는다. 일부 실시양태에서, 입자 형태의 화합물 1의 다형태는 입자의 집단 중에 존재하며, 입자의 집단은 약 160 ㎛, 약 150 ㎛, 약 120 ㎛, 약 100 ㎛, 약 50 ㎛, 약 40 ㎛ 또는 약 20 ㎛ 이하인 D₅₀(즉, 분포를 2개의 동일한 부분으로 나누는 입자 크기 분포의 중앙점)을 갖는다. 일부 실시양태에서, 화합물 1의 다형태는 입자 형태로 존재하며, 입자는 약 10 ㎛, 약 5 ㎛, 약 4 ㎛, 약 3 ㎛, 약 2 ㎛, 약 1 ㎛, 약 0.5 ㎛, 약 0.2 ㎛ 또는 약 0.1 ㎛ 이하의 지경을 갖는다. 일부 실시양태에서, 입자 형태의 화합물 1의 다형태는 입자의 집단 중에 존재하며, 입자의 집단은 약 10 ㎛, 약 5 ㎛, 약 4 ㎛, 약 3 ㎛, 약 2 ㎛, 약 1 ㎛, 약 0.5 ㎛ 또는 약 0.2 ㎛ 이하의 D₅₀을 갖는다.

본 발명은 활성을 갖는, 즉 효능 및/또는 항종양 활성을 갖는 화합물 1의 다형태의 입자 또는 입자의 집단을 제공한다. 활성 입자 또는 입자들은 특정한 크기, 예를 들면 약 200 ㎛, 약 150 ㎛, 약 100 ㎛, 약 40 ㎛ 또는 약 20 ㎛, 약 10 ㎛, 약 5 ㎛, 약 4 ㎛, 약 3 ㎛, 약 2 ㎛, 약 1 ㎛, 약 0.5 ㎛ 또는 약 0.2 ㎛ 이하의 D₅₀ 또는 직경을 갖는다. 특정한 크기보다 더 큰 입자 또는 입자들은 본원에 기재된 입자보다 활성이 더 적거나 또는 불활성이다.

화합물 1의 다형태의 입자의 누적 합계의 일부분은 약 200 ㎛ 이하의 직경 또는 D₅₀을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 입자의 세트의 일부분은 세트 중의 입자의 총수의 약 1% 이상, 약 5% 이상, 약 10% 이상, 약 20% 이상 또는 약 30% 이상일 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 일부분은 상당 부분이다. 예를 들면, 입자의 세트의 "상당 부분"은 세트 중의 입자의 총수의 약 99% 이상, 약 95% 이상, 약 90% 이상, 약 85% 이상, 약 80% 이상, 약 75% 이상, 약 70% 이상, 약 60% 이상 또는 약 약 50% 이상일 수 있다.

일부 실시양태에서, 화합물 1의 다형태의 입자의 집단은 입자의 누적 합계의 약 90% 이상이 약 160 ㎛, 100 ㎛, 40 ㎛, 20 ㎛, 10 ㎛, 5 ㎛, 3 ㎛ 또는 2 ㎛, 1 ㎛ 또는 0.5 ㎛ 이하의 입자 크기를 가질 수 있다. 예를 들면, 화합물 1의 다형태의 입자의 집단은 입자의 누적 합계의 약 50% 이상이 약 160 ㎛, 100 ㎛, 40 ㎛, 20 ㎛, 10 ㎛, 5 ㎛, 3 ㎛, 2 ㎛, 1 ㎛ 또는 0.5 ㎛ 이하의 입자 크기를 가질 수 있다. 예를 들면, 화합물 1의 다형태의 입자의 집단은 입자의 누적 합계의 약 10% 이상이 약 160 ㎛, 100 ㎛, 40 ㎛, 20 ㎛, 5 ㎛, 2 ㎛, 1 ㎛, 0.5 ㎛ 또는 0.1 ㎛의 이하의 입자 크기를 가질 수 있다. 화합물 1의 다형태의 입자의 집단에서, 입자는 예를 들면 약 160 ㎛, 40 ㎛, 20 ㎛, 10 ㎛, 5 ㎛, 4 ㎛, 3 ㎛, 2 ㎛, 1 ㎛, 0.5 ㎛ or 0.2 ㎛ 이하의 중앙 직경을 가질 수 있다. 예를 들면, 입자는 약 0.002 ㎛ 내지 약 50 ㎛의 중앙 직경 또는 약 0.2 ㎛ 내지 약 30 ㎛의 중앙 직경을 가질 수 있다. 예를 들면, 화합물 1의 다형태의 입자의 집단은 중앙 직경에 대한 평균 직경의 비가 약 2 이하인 입자의 누적 합계를 가질 수 있다. 화합물 1의 다형태의 입자의 집단은 결정질 상태로, 2종의 상이한 다형태 상태로 화합물을 포함하는 입자를 가질 수 있다.

일부 실시양태에서, 화합물 1의 다형태는 입자 형태로 존재하며, 입자는 약 20 마이크론, 10 마이크론, 5 마이크론 또는 2 3 마이크론, 2 마이크론, 1 마이크론, 0.5 마이크론, 0.2 마이크론 또는 0.1 마이크론 이하의 직경을 갖는다. 일부 실시양태에서, 입자 형태의 화합물 1의 다형태는 입자의 집단 중에 존재하며, 입자의 집단은 약 20 마이크론, 10 마이크론, 5 마이크론, 4 마이크론, 5 마이크론, 3 마이크론, 2 마이크론, 1 마이크론, 0.5 마이크론 또는 0.2 마이크론 이하의 D₅₀을 갖는다.

본 발명은 또한 치료적 유효량의 실질적으로 순수한 나프토푸란 화합물 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 부형제로는 예를 들면 지방산의 글리세롤 에스테르, 포화 지방산의 글리세롤 에스테르, 8 내지 18개의 탄소를 갖는 포화 지방산의 글리세롤 에스테르, 글리세릴 라우레이트, 폴리에틸렌 글리콜, 셀룰로스, 미정질 셀룰로스, 카르복시메틸셀룰로스, 포스파티딜콜린, 지질, 스테롤, 콜레스테롤, 계면활성제, 폴리소르베이트 및/또는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 알킬레이트를 들 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명에 의하면, 제조 물품은 치료적 유효량의 약학적 조성물 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 함유하는 용기를 포함할 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태에 의한 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물의 제조 방법은 화합물을 제분하여 입자를 형성하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들면, 화합물은 볼 제분, 롤 제분, 제트 제분, 습식 제분, 초음파 제분, 분쇄 또는 이들의 조합 및/또는 기타 제분 절차로 처리할 수 있다. 화합물의 온도는 감소될 수 있으며, 예를 들면 극저온 온도로 감소될 수 있으며, 제분될 수 있다. 이와 같은 온도의 감소는 화합물을 더욱 잘 부서질 수 있게 하며, 제분에 의해 입자 크기를 더 잘 감소시킬 수 있게 한다.

본 발명의 일부 실시양태에 의한 화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물의 제조 방법은 결정화를 포함할 수 있다. 결정화 중에 얻은 입자 크기 분포(PSD)는 핵화, 성장, 응집, 마모, 파괴 등의 결정화 중에 발생하는 다양한 메카니즘의 조합에 의해 영향을 받는다. 입자 크기가 원하는 규격을 충족시키기 위하여 결정화 중에 일정하게 조절될 수 없는 경우, 추가의 가공 단계, 예컨대 건식 제분을 포함할 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태에서, 신생물 세포의 복제 또는 확산을 감소 또는 억제하기 위한 조성물은 하기 방법에 의해 선택된 입자의 세트를 포함한다. 화학식 I에 의한 화합물 또는 그의 염 또는 용매화물을 제공할 수 있다:

<화학식 I>

일부 실시양태에서, 화합물 1 또는 그의 염 또는 용매화물이 제공될 수 있다. 일부 실시양태에서, 화합물 1의 다형태가 제공될 수 있다. 예를 들면, 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 1에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 2에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 3에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다.

화합물을 포함하는 입자의 하나 이상의 세트를 생성할 수 있다. 입자의 각각의 하나 이상의 세트의 입자 크기 분포를 측정할 수 있다. 입자의 하나 이상의 세트는 소정의 농도에서 소정의 시간 동안 신생물 세포 및 정상 세포에 투여할 수 있다. 신생물 세포 및 정상 세포의 대사 및/또는 분열에 대한 입자의 효과를 관찰할 수 있다. 효율성 평가는 신생물 세포에 대한 입자의 효과에 기초하여 입자의 각각의 세트에 할당할 수 있다. 독성 평가는 정상 세포에 대한 입자의 효과에 기초하여 입자의 각각의 세트에 할당할 수 있다. 제1의 입자 크기 분포를 갖는 입자의 하나 이상의 세트의 효율성 평가 및/또는 독성 평가는 제1의 입자 크기 분포와는 상이한 입자 크기 분포를 갖는 입자의 하나 이상의 다른 세트의 효율성 평가 및/또는 독성 평가와 비교할 수 있다. 입자의 하나 이상의 다른 세트보다 효율성 평가는 더 크며, 독성 평가는 더 적으며 및/또는 가중 효율성 평가 및 독성 평가 합이 더 큰 입자의 세트는 최적의 세트로서 선택될 수 있다. 예를 들면, 입자의 최적의 세트의 입자 크기 분포는 최적의 입자 크기 분포로서 확인될 수 있다. 예를 들면, 입자의 최적의 세트는 조성물 중에 포함될 수 있다. 예를 들면, 효율성 평가는 항종양 활성에 비례할 수 있다. 예를 들면, 효율성 평가는 신생물 세포의 대사 및/또는 분열의 억제에 기초할 수 있다. 예를 들면, 독성 평가는 내약성에 반비례할 수 있다. 예를 들면, 독성 평가는 정상 세포의 대사 및/또는 분열의 억제에 기초할 수 있다. 예를 들면, 입자의 하나 이상의 세트는 신생물 세포 및 정상 세포에 시험관내 투여될 수 있다. 예를 들면, 효율성 평가는 신생물 세포의 IC₅₀에 기초할 수 있다. 예를 들면, 독성 평가는 정상 세포의 IC₅₀에 기초할 수 있다. 예를 들면, 입자의 하나 이상의 세트는 테스트 동물에서 신생물 세포 및 정상 세포에 생체내 투여할 수 있다. 테스트 동물은 예를 들면 포유동물, 영장류, 쥐, 래트, 기니 피그, 토끼 또는 개가 될 수 있다. 효율성 평가는 신생물 세포의 부피의 감소에 기초할 수 있으며, 독성 평가는 테스트 동물의 질량 감소에 기초할 수 있다.

일부 실시양태에서, 화합물을 포함하는 입자의 한 세트를 제조하는 것은 화합물의 용해 및 분산, 미세유체 기법을 사용한 화합물의 용해 및 분산, 공동화 또는 분무를 사용한 화합물의 용해 및 분산, 화합물의 제분, 화합물의 볼 제분, 화합물의 롤 제분, 화합물의 제트 제분, 화합물의 습식 제분, 화합물의 초음파 제분, 화합물의 분쇄 및/또는 화합물의 체질에 의해 소정의 입자 크기 분포의 입자 분리를 포함할 수 있다. 입자는 약학적으로 허용 가능한 부형제 중에 현탁될 수 있다. 입자 크기 분포의 측정은 체(sieve) 분석, 광학 현미경 계수, 전자 현미경사진 계수, 전기저항 계수, 침강 시간, 레이저 회절, 음향 분광법 및 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 기법을 사용하는 것을 포함할 수 있다.

신생물 또는 기타 세포 증식 장애의 치료 방법은 신생물을 앓고 있는 사람, 포유동물 또는 동물에게 최적의 입자 크기 및 분포를 갖는 조성물의 입자의 최적의 세트를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함할 수 있다.

본 발명은 나프토푸란 화합물의 제조 방법을 제공한다. 상기 방법은 나프토디히드로푸란 화합물 또는 나프토디히드로푸란 화합물을 포함하는 혼합물을 제1의 용매 중에서 산화제와 반응시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 혼합물은 나프토푸란 화합물을 더 포함한다. 일부 실시양태에서, 나프토푸란 화합물은 2-(1-히드록시에틸)-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-클로로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-플루오로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-에틸-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 인산 모노-[1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐]에스테르, 인산 1-(4,9-디옥소36 3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐 에스테르 디메틸 에스테르, 그의 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체 및 염 또는 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 산화제는 이산화망간이다. 일부 실시양태에서, 제1의 용매는 톨루엔이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 산화 생성물을 활성탄의 패드에 여과시키는 것을 더 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 제1의 용매를 증발시켜 나프토푸란 화합물을 결정화시키는 것을 더 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 제2의 용매를 사용하여 나프토푸란 화합물을 재결정화시키는 것을 더 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2의 용매는 에틸 아세테이트이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 제2의 용매를 사용하여 나프토푸란 화합물을 슬러리로 만들고, 슬러리를 가열하고, 슬러리를 냉각시키는 것을 더 포함한다.

본 발명은 실질적으로 순수한 나프토푸란 화합물의 제조 방법을 제공한다. 상기 방법은 제1의 용매를 사용하여 나프토푸란 화합물을 결정화시키고, 제2의 용매를 사용하여 나프토푸란 화합물을 재결정화시키는 것을 포함한다. 본 발명은 실질적으로 순수한 나프토푸란 화합물의 또다른 제조 방법을 제공한다. 상기 방법은 제1의 용매를 사용하여 나프토푸란 화합물을 결정화시키고, 제2의 용매를 사용하여 결정질 나프토푸란 화합물을 슬러리로 만들고, 슬러리를 가열하고, 슬러리를 냉각시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 나프토푸란 화합물은 2-(1-히드록시에틸)-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-클로로나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-플루오로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-에틸-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 인산 모노-[1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐]에스테르, 인산 1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐 에스테르 디메틸 에스테르, 그의 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체 및 염 또는 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 제1의 용매는 톨루엔이다. 일부 실시양태에서, 제2의 용매는 에틸 아세테이트이다.

본 발명은 상기 방법 중 임의의 하나에 의해 생성된 나프토푸란 화합물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 나프토푸란 화합물은 2-(1-히드록시에틸)-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-클로로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-플루오로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-에틸-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 인산 모노-[1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐]에스테르, 인산 1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐 에스테르 디메틸 에스테르, 그의 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체 및 염 또는 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 나프토푸란 화합물은 적어도 약 80%, 약 85% 또는 약 90%, 약 95% 또는 약 99%의 순도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 나프토푸란 화합물은 약 10%, 약 5%, 약 2% 또는 약 1%, 약 0.5%, 약 0.2%, 약 0.15% 또는 약 0.1% 이하의 순도를 갖는다.

본 발명은 화합물 1의 다형태의 입자를 포함하는 화합물 1의 입자, 화합물 1의 매우 순수한 형태의 입자 및 화합물 1의 다형태의 매우 순수한 형태의 입자의 제조 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 소정의 중앙 입자 크기, 예를 들면 약 20 마이크론을 갖는 입자는 화합물 1의 결정을 제분하고, 화합물 1의 정제된 형태의 결정, 화합물 1의 다형태의 결정 및/또는 화합물 1의 다형태의 정제된 형태의 결정을 포함하는 화합물 1의 결정을 제분하여 생성된다. 예를 들면, 결정은 벤투리(venturi) 압력이 약 40이고, 제분 압력이 약 100이고, 공급 속도가 약 1,304 g/시간인 제트 제분 방법을 사용하여 제분한다.

또한, 본 발명은 암 줄기세포와 관련된 바이오마커 1종 이상의 발현의 레벨을 검출하여 본 개시내용의 화합물의 치료적 투여에 적절한 특정한 선택된 환자 집단의 치료를 위한 키트 및/또는 방법을 제공한다. 바이오마커는 동일한 마커 발현의 기준선, 대조 또는 정상의 레벨, 예를 들면 암 줄기 세포를 갖는 것으로 공지된 및/또는 이상 Stat3 경로 활성을 갖는 것으로 공지된 암을 앓고 있지 않은 환자에서의 레벨과 비교시, 암 줄기 세포를 갖는 것으로 공지된 및/또는 이상 Stat3 경로 활성을 갖는 것으로 공지된 암을 앓고 있는 환자로부터의 샘플 또는 환자에서 그의 발현이 증가될 때 암 줄기세포와 관련된 것으로 여겨진다.

일부 실시양태에서, 암 줄기세포와 관련된 바이오마커는 인산화 STAT3(p-STAT3)이다. 일부 실시양태에서, 암 줄기세포와 관련된 바이오마커는 β-카테닌이다. 일부 실시양태에서, 암 줄기세포와 관련된 바이오마커는 나녹(NANOG)이다. 일부 실시양태에서, 암 줄기세포와 관련된 바이오마커의 조합이 사용되며, 조합은 p-STAT3, β-카테닌 및 나녹 중 2개 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암 줄기세포와 관련된 바이오마커의 조합을 사용하며, 조합은 p-STAT3, β-카테닌 및 나녹의 3종으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 개시내용의 방법 및/또는 키트에서, 1종 이상의 암 줄기세포 마커의 발현 레벨은 환자 중에서 또는 환자로부터의 샘플 중에 검출되며, 환자 또는 샘플은 발현의 대조 레벨에 비하여 1종 이상의 암 줄기세포 마커의 증가된 레벨을 가지며, 그래서 환자는 치료적 유효량의 본 개시내용의 화합물을 투여한다.

이들 방법의 일부 실시양태에서, 상기 방법은 생체내 방법이다. 이들 방법의 일부 실시양태에서, 상기 방법은 계내(in situ) 방법이다. 이들 방법의 일부 실시양태에서, 상기 방법은 생체외 방법이다. 이들 방법의 일부 실시양태에서, 상기 방법은 시험관내 방법이다.

본 발명은 또한 암 줄기세포와 관련된 바이오마커 1종 이상의 발현의 레벨을 검출하여 본 개시내용의 화합물의 치료적 투여에 적절한 환자 집단을 확인 또는 그렇지 않다면 정제, 예를 들면 계층화시키기 위한 키트 및/또는 방법을 제공한다. 바이오마커는 동일한 마커 발현의 기준선, 대조 또는 정상의 레벨, 예를 들면 암 줄기 세포를 갖는 것으로 공지된 및/또는 이상 Stat3 경로 활성을 갖는 것으로 공지된 암을 앓고 있지 않은 환자에서의 레벨과 비교시, 암 줄기 세포를 갖는 것으로 공지된 및/또는 이상 Stat3 경로 활성을 갖는 것으로 공지된 암을 앓고 있는 환자로부터의 샘플 또는 환자에서 그의 발현이 증가될 때 암 줄기세포와 관련된 것으로 여겨진다.

일부 실시양태에서, 암 줄기세포와 관련된 바이오마커는 인산화 STAT3(p-STAT3)이다. 일부 실시양태에서, 암 줄기세포와 관련된 바이오마커는 β-카테닌이다. 일부 실시양태에서, 암 줄기세포와 관련된 바이오마커는 나녹이다. 일부 실시양태에서, 암 줄기세포와 관련된 바이오마커의 조합을 사용하며, 조합은 p-STAT3, β-카테닌 및 나녹 중 2종 이상으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암 줄기세포와 관련된 바이오마커의 조합을 사용하며, 조합은 p-STAT3, β-카테닌 및 나녹이다.

본 개시내용의 방법 및/또는 키트에서, 1종 이상의 암 줄기세포 마커의 발현 레벨은 환자 중에서 또는 환자로부터의 샘플 중에서 검출되며, 환자 또는 샘플은 발현의 대조 레벨에 비하여 1종 이상의 암 줄기세포 마커의 증가된 레벨을 가지며, 환자는 본 개시내용의 화합물의 치료적 유효량을 투여한다.

이들 방법의 일부 실시양태에서, 상기 방법은 생체내 방법이다. 이들 방법의 일부 실시양태에서, 상기 방법은 계내 방법이다. 이들 방법의 일부 실시양태에서, 상기 방법은 생체외 방법이다. 이들 방법의 일부 실시양태에서, 상기 방법은 시험관내 방법이다.

도 1은 각각의 투여 중에 환자에게 500 ㎎을 투여하는, 환자에서의 BID 투여 대 QD 투여의 약물동태학을 비교하는 그래프이다. 투약은 500 ㎎ BID 요법에 대하여 동일한 일차 중에 2개의 투여 사이에 4 시간 간격으로 투여하였다.
도 2는 본 발명의 화합물의 2종의 상이한 제제의 약물동태학을 비교하는 그래프이다. 2종의 제제는 상이한 크기의 캡슐을 생성한다.
도 3a는 인산화 STAT3 및 DAPI(아랫줄)에 대한 항체를 사용하여 면역조직화학에 의해 가시화된 CRC 환자로부터 종양 조직 샘플의 사진 화상으로 이루어진다.
도 3b는 (저 또는 음성 p-STAT3을 갖는 환자에 비하여) 고 p-STAT3의 환자에 대한 생존율의 개선에 대한 경향을 나타내는 차트이다.
도 4a는 β-카테닌 및 DAPI(아랫줄)에 대한 항체를 사용한 면역조직화학에 의해 가시화된 CRC 환자로부터의 종양 조직 샘플의 사진 화상으로 이루어진다.
도 4b는 (세포막에 국한된 β-카테닌을 갖는 환자에 비하여) 핵내 β-카테닌 국재화를 갖는 환자에 대한 생존율의 개선에 대한 경향을 나타내는 차트이다.
도 5는 본 발명의 화합물에 의해 차단되는 CD44^고 세포 성장을 나타낸다. CD44^고 세포는 FACS(FaDu)에 의해 분리되었으며, 부착 및 혈청의 부재하에서 5 일 동안 배양하여 1차 구체를 형성하였다. 그 후, 1차 구체를 아큐맥스(Accumax)(이바이오사이언스(eBioscience), 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재) 중에서 단일 세포로 분해하고, 상기와 같이 72 시간 동안 배양한 후, 제시된 농도의 치료제를 첨가하였다. 처치 5일 후, 대표 구체 화상을 촬영하였다.
도 6은 본 발명의 화합물이 p-STAT3 및 β-카테닌 레벨을 감소 또는 청소하는데 있어서 효율적인 것을 나타낸 이종이식된 사람 결장 암 종양 조직을 갖는 누드 마우스의 생체내 실험을 나타낸다. 본 발명의 화합물 또는 비히클(대조군)의 경구 섭식으로 15 일 동안 매일 처치한 마우스로부터의 포름알데히드-고정된 종양을 절단하고, 사람 STAT2 및 β-카테닌에 대하여 특이성인 항체를 사용하여 면역형광 염색에 의해 분석하였다.
도 7은 마우스 실험에서 본 발명의 화합물이 암 줄기 세포를 표적화시킨 것을 나타낸다. 이종이식을 갖는 마우스에게 비히클, 젬시타빈(120 ㎎/㎏(MIA PaCa-2)), 카르보플라틴(30 ㎎/㎏(FaDu)) 또는 20 ㎎/㎏의 본 발명의 화합물을 복강내 투여하였다. 마우스를 희생시킨 후, PaCa-2 및 FaDu 세포에 대하여 각각 처치 7일 또는 14일후 종양을 수집하였다. 동물 희생 및 종양의 멸균 제거 후 단일 세포 현탁액을 얻었다. 그 후, 생세포를 계수하고, 암 줄기 세포 배지(DMEM/F12, B27 뉴로바살(Neurobasal) 보충, 20 ng/㎖ EGF, 10 ng/㎖ FGF, 4 ng/㎖ 인슐린 및 0.4% BSA) 중에 배양시 구체를 형성하는 그의 능력을 측정하는데 사용하였다. 새로운 배지를 매3일마다 첨가하고, 배양액 중에서 10-14 일 후 구체 형성을 측정하였다. >50 세포를 갖는 구체를 기록하였다.
도 8a, 8b 및 8c는 사람 임상 실험에서 본 발명의 화합물은 CRC 환자에서 효과적인 것으로 밝혀졌다는 것을 나타내는 일련의 그래프이다. 도 8a는 대장암(CRC) 환자에서 무진행 생존율(PFS) 및 본 발명의 화합물의 노출 사이의 관계를 도시한다. CRC 환자에서, 통계적 유의성 차이는 4 시간 초과 동안 2.0 μM 초과의 본 발명의 화합물 혈장 농도를 갖는 환자 및 노출의 레벨에 도달하지 못한 환자 사이에서의 PFS에서 나타났다. 도 8b는 평가 가능한 CRC 환자에서의 전체 생존율(OS)을 도시한다. 과거 대조군 [대장암의 치료를 위한 세툭시맙, 2007, N. Engl . J. Med. 357 2040-2048]에 비하여 본 발명의 화합물(≥4 주의 본 발명의 화합물로서 정의됨, 80% 만족)로 처치한 평가 가능한 CRC 환자의 OS. 도 8c는 평가 가능한 CRC 환자에서의 PFS를 도시한다. 과거 대조군 [화학요법-난치성 전이성 대장암 환자에서 최적 지지 요법 단독과 비교한 파니투무맙 + 최적 지지 요법의 오픈-라벨 단계 III 시험, 2007, J. Clin . Onc . 25: 1658-1665]에 비하여 본 발명의 화합물(≥4 주의 본 발명의 화합물로서 정의됨, 80% 만족)로 처치한 평가 가능한 CRC 환자의 PFS.

본 발명의 실시양태는 하기에 상세하게 논의된다. 실시양태의 기재에서, 명확성을 위하여 특정 용어를 사용한다. 그러나, 본 발명은 그와 같이 선택된 특정한 용어로 한정하고자 하지는 않는다. 관련 분야의 숙련자는 기타 등가의 성분을 사용할 수 있으며, 본 발명의 정신 및 범주로부터 벗어남이 없이 기타의 방법을 개발한다는 것을 숙지할 것이다. 본원에 인용된 모든 문헌은 마치 각각의 문헌이 개별적으로 포함되는 바와 같이 참조로 포함된다.

본 명세서에서, 입자의 세트의 "상당 부분(substantial fraction)"은 세트 중의 입자의 총수의 약 99% 이상, 약 95% 이상, 약 90% 이상, 약 85% 이상, 약 80% 이상, 약 75% 이상, 약 70% 이상, 약 60% 이상 또는 약 50% 이상일 수 있다.

조성물의 항암 줄기 세포 활성은 시험관내 또는 생체내 측정될 수 있다. 예를 들면, 조성물의 항종양 활성은 화합물을 투여하고, 암 줄기 세포의 자기-재생 및 생존을 측정하여 시험관내 측정할 수 있다. 예를 들면, 화합물의 항종양 활성은 화합물을 투여한 종양 세포의 양상과 화합물을 투여하지 않은 종양 세포(대조군)의 양상을 비교하여 시험관내 평가할 수 있다. 예를 들면, 조성물의 항종양 활성은 화합물을 투여한 동물에서 종양의 부피 변화를 측정하고, 전이성 모델을 적용하고 및/또는 동소 모델을 적용하여 생체내 측정될 수 있다. 예를 들면, 화합물의 항종양 활성은 화합물을 투여한 동물 및 화합물을 투여하지 않은 동물(대조군)을 비교하여 생체내 평가할 수 있다.

조성물의 내약성은 시험관내 또는 생체내 측정될 수 있다. 예를 들면, 화합물을 투여하고, 정상 세포의 분열 속도를 측정하고, 정상 세포의 영양소 섭취를 측정하고, 영양소 섭취를 제외한 정상 세포의 대사율의 지수를 측정하고, 정상 세포의 성장을 측정하고 및/또는 정상 세포의 활력의 또 다른 지수를 측정하여 조성물의 내약성을 시험관내 측정할 수 있다. 예를 들면, 화합물을 투여한 정상 세포의 양상과 화합물을 투여하지 않은 정상 세포(대조군)의 양상을 비교하여 화합물의 내약성을 시험관내 평가할 수 있다. 예를 들면, 조성물의 내약성은 화합물을 투여한 동물에서 체중 또는 식품 섭취를 측정하거나 또는 임상적 관찰, 예컨대 모발 보유 또는 손실, 활성 및/또는 자극에 대한 반응성을 실시하여 생체내 측정할 수 있다. 예를 들면, 화합물의 내약성은 화합물을 투여한 동물과 화합물을 투여하지 않은 동물(대조군)을 비교하여 생체내 평가될 수 있다.

화합물, 생성물 및/또는 약학적 조성물은 효율성 평가 및/또는 독성 평가를 할당할 수 있다. 예를 들면, 효율성 평가는 항종양 활성에 비례할 수 있거나 또는 항종양 활성에 관하여 단조 증가되는 기능일 수 있다. 예를 들면, 독성 평가는 내약성에 반비례할 수 있거나 또는 내약성에 관하여 단조 감소되는 기능일 수 있다. 나프토푸란 화합물은 생체내 항종양 활성이 결핍되어 있는 것으로 보고되었다. 문헌[M.M. Rao and D.G.I. Kingston, J. Natural Products, 45(5) (1982) 600-604]을 참조한다. 더욱이, 화합물은 암 세포 및 정상 세포에 대하여 동등한 독성을 갖는 것으로 보고되었다. 즉, 화합물은 암 세포 및 정상 세포 모두를 동등하게 사멸시키는 것으로 보고되었으며, 이는 화합물이 암 치료에 대한 가능성이 없다는 결론을 낼 수 있다. 문헌[K. Hirai K. et al., Cancer Detection and Prevention, 23(6) (1999) 539-550; Takano A. et al., Anti암 Research 29:455-464, 2009]을 참조한다.

그러나, 본원에 보고된 실험 연구는 이러한 문헌에 기재된 바와 같이 특정한 약물동태학적 노출을 달성하기 위하여 적절한 입자 크기 분포를 갖는 입자로서 화합물을 투여시 화합물이 선택적 항종양 활성을 갖는다는 것을 나타낸다.

본 발명을 위하여, 약물의 "생체이용률"은 체순환으로 가는 투여된 투여 형태로부터의 약물의 상대적 양 및, 약물이 혈류 중에 나타나는 속도로서 정의된다. 생체이용률은 (i) 생체이용률을 조절하는 흡수에 이어서 (ii) 그의 조직 재-분포 및 (iii) 제거 (대사 분해 및 신장 기타 기전)인 3가지 이상의 요인에 의해 좌우된다.

"절대 생체이용률"은 약물의 정맥내 투여에 의해 추정될 수 있는 조직 재분배 및 생체전환(즉, 제거)을 참조하여 추정된다. 반대 의미로 나타내지 않는다면, "HPLC"는 고성능 액체 크로마토그래피를 지칭하며; "약학적으로 허용 가능한"은 포유동물에 투여시 급성위연동이상항진, 어지럼 등의 알러지성 또는 기타 유해 반응을 통상적으로 생성하지 않는 생리학적으로 허용 물질을 지칭하며; "포유동물"은 그의 새끼에게 유선에 의해 분비된 젖을 먹이며, 일반적으로 피부가 다소 털로 덮혀 있는 사람 및 기타 모든 동물을 비롯한 고등 척추 동물의 부류를 지칭하며; "치료하는"은 포유동물에서 질환(들)의 하나 이상의 증상을 이완, 완화 또는 제거하는 것을 포함하고자 한다.

본원에서 사용된 바와 같이 용어 "치료"는 원치않는 병태를 예방적으로 예방 또는 억제하고, 병태의 정도 또는 증상을 치료적으로 배제 또는 감소시키기 위한 본 발명에 의한 화합물의 투여를 포함하고자 한다. 치료는 또한 원치않는 병태의 재발을 예방하고, 원치않는 병태의 진행을 지연시키고, 원치않는 병태의 개시를 예방 또는 지연시키는 것을 포함한다. 본 발명에 의한 치료는 치료의 필요를 생성하는 질환 또는 병태를 갖는 사람 또는 기타 포유동물에 제공한다. 치료는 또한 화합물을 세포 또는 기관에 시험관내 적용하는 것을 포함한다. 치료는 전신 또는 국소 투여일 수 있다.

유효량은 원하는 약리 효과를 달성하는데 필요한 단일 투여 또는 복수의 투여로 투여되는 활성 성분의 양이다. 숙련된 의사는 개개의 환자에게 유효한 투여량을 결정할 수 있거나 또는 개개의 병태를 치료하기 위하여 숙련된 임상의에게 공지된 통상의 실험 및 적정에 의해 결정할 수 있다. 그러나, 환자 집단으로부터 약학적 제제 또는 조성물로의 예상 외의 임상 반응은 투여량, 약물 투여 사이의 간격 및/또는 약물 투여 방식 등의 치료의 측면에 따라 뜻밖의 변경 또는 조절을 지시할 수 있다. 실제의 투여량 및 스케쥴은 조성물이 기타 약물과 병용하여 투여될 수 있는지의 여부에 의존하여 또는 약물동태학, 약물 분해 및 대사에서의 개인간 차이에 의존하여 투여된다. 유사하게, 시험관내 적용에 대하여 양이 변경될 수 있다. 본원에 개시된 경우, 투여량 범위는 반대 의미로 명시하지 않는다면 특정한 적용에서 보장되는 바와 같이 높거나 또는 낮은 투여량의 성분의 사용을 반드시 방해하지는 않는다.

본원에 제공된 약학적 조성물의 기재는 사람에게 투여에 적절한 약학적 조성물을 포함한다. 당업자는 본 개시내용에 기초하여 상기 조성물이 일반적으로 임의의 포유동물 또는 기타 동물에게 투여에 적절한 것으로 이해할 것이다. 다양한 동물에게 투여에 적절한 조성물의 제조는 이해될 것이며, 통상적으로 숙련된 수의 약리학자는 사람에게 투여를 위한 약학적 조성물에 기초한 통상의 실험으로 상기 변형을 설계 및 술시할 수 있다.

화합물 구조 및 특성

화학식 I의 나프토푸란 화합물, 예컨대 2-(1-히드록시에틸)-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-클로로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-플루오로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-에틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온은 DMSO(디메틸 술폭시드), N-메틸피롤리리딘, DMA(디메틸아세트아미드), 에탄올, PEG400(폴리에틸렌 글리콜 400), 프로필렌 글리콜, 크레모포르(Cremophor) EL(폴리에톡실화 피마자유), 라브라솔(Labrasol)(카프릴로카프로일 마크로골글리세리드(폴리옥실글리세리드)), 라브라필 M(식물성유 PEG-6(폴리에틸렌 글리콜) 에스테르) 및 카프리올(프로필렌 글리콜 카프릴레이트)을 비롯한 테스트되는 광범위한 패널의 용매 및 물 중에서 실질적으로 불용성이었다. 나프토푸란 화합물은 광범위한 극성 유기 용매, 예컨대 특정한 할로카본, 예를 들면 메틸렌 클로라이드 등의 클로로카본, 에스테르, 에틸 아세테이트, 아세트산 등의 카르복실산, 아세톤 등의 케톤 및 메탄올 등의 알콜 중에서 가용성일 수 있다. 나프토푸란 화합물은 메틸렌 클로라이드 및 에틸 아세테이트 중에서 가용성인 것으로 밝혀졌다.

선택적 항종양 활성이 발견된 본원에 기재된 실험 연구는 나프토푸란 화합물에 촛점을 맞춘 선택적 항암 활성에 대한 특정한 약물동태학 노출을 달성하기 위하여 작은 입자 형태로 약학적 조성물의 활성 화합물을 투여하여 달성되었다. 화합물을 사용하여 논의된 관찰을 실시하면, 유사하게 기타 나프토푸란, 예를 들면, 나프토푸란은 작은 직경의 입자 형태로 투여시 선택적 항암 활성을 달성하기 위하여 특정한 약물동태학 노출의 달성으로 그의 약물동태학 프로파일을 변경시키는 것이 이로울 수 있다. 1종 이상의 상이한 입자 크기 분포로서 투여된 기타 나프토푸란의 약물동태학 프로파일을 실험에 의해 구할 수 있다.

실시예에서 테스트한 화합물에 대하여 관찰된 바와 같이 동물, 포유동물 또는 사람에게 투여된 형태의 특정한 크기의 감소와 함께 그의 약물동태학 프로파일 및 효율에서의 개선을 나타낼 수 있는 일부 기타 화합물로는 하기 화학식 I로 나타낸 것 및 그의 염 및 용매화물을 들 수 있다.

<화학식 I>

화학식 I에서, 표시 (R₁)_n은 (R₁) 치환기가 독립적으로 벤젠 고리를 따라 각각의 이용 가능한 위치에서 치환되는 것을 나타낸다. 예를 들면, n이 4이면, 4개의 R₁ 치환기는 모두 동일할 수 있거나 또는 각각 서로 상이할 수 있다. 예를 들면, 각각의 (R₁)은 수소, 할로겐, 불소, 시아노, 니트로, CF₃, OCF₃, 알킬, 메틸, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, 아릴, 치환된 아릴, OR_a, SR_a 및 NH₂로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다. 알킬은 예를 들면 단일 결합에 의해 결합된 1 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 모이어티를 포함할 수 있으며, 알케닐은 예를 들면 1개 이상의 이중 결합에 의해 결합된 2 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 모이어티를 가질 수 있으며, 알키닐은 예를 들면 1개 이상의 삼중 결합에 의해 결합된 2 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 모이어티를 가질 수 있다. 치환기는 모이어티, 예컨대 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 아릴, OR_a, SR_a 및 NH₂를 들 수 있다. 예를 들면, 각각의 (R₁)은 수소, 메틸, F(불소), Cl(염소), Br(브롬), I(요오드), OH(히드록실) 및 NH₂(아민)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다. 예를 들면, R₃은 수소, 할로겐, 불소, 시아노, CF₃, OCF₃, 알킬, 메틸, 치환된 알킬, 할로겐-치환된 알킬, 히드록실-치환된 알킬, 아민-치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, 아릴, 치환된 아릴, OR_a, SR_a 및 NR_bR_c로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 예를 들면, R₃은 메틸 및 C(R₈)₃으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 각각의 (R₈)은 수소, 메틸, F(불소), Cl, Br, I, OH 및 NH₂로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다. 예를 들면, 독립적으로 선택된 (R₁) 치환기 및 (R₈) 치환기 중 2개 이하는 F(불소)인 것으로 선택될 수 있으며, 나머지는 수소가 되도록 선택된다.

일부 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 2-(1-히드록시에틸)-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-클로로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-플루오로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-에틸-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 그의 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체 및 염 또는 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 예를 들면, 화학식 I의 화합물이 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온이 되도록 각각의 (R₁)은 수소로부터 선택될 수 있으며, R₃은 메틸로 선택될 수 있다. 예를 들면, 각각의 R_a는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 알케닐, 치환된 알케닐, 알키닐, 치환된 알키닐, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 시클로알케닐, 치환된 시클로알케닐, 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, 아릴 및 치환된 아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다. 예를 들면, 각각의 R_b 및 R_c는 수소, 알킬, 치환된 알킬, 시클로알킬, 치환된 시클로알킬, 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, 아릴 및 치환된 아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다. 대안으로, R_b 및 R_c는 이들이 결합된 N과 함께 헤테로사이클 또는 치환된 헤테로사이클을 형성할 수 있다.

다형태

본 발명의 나프토푸란 화합물은 다형태를 포함한다. 일부 실시양태에서, 다형태는 화학식 I에 의한 화합물의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 다형태는 화합물 1의 다형태이다. 예를 들면, 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 1에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 이러한 다형태는 본원에서 "결정 형태 1", "형태 1" 또는 "XRPD1"로서 지칭되며, 이러한 용어는 번갈아 사용된다. 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 2에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 이러한 다형태는 본원에서 "결정 형태 2", "형태 2" 또는 "XRPD2"로서 지칭되며, 이러한 용어는 번갈아 사용된다. 일부 실시양태에서, 다형태는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 3에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태이다. 이러한 다형태는 본원에서 "결정 형태 3", "형태 3" 또는 "XRPD3"으로서 지칭되며, 이들 용어는 번갈아 사용된다.

결정 형태 1은 각종 용매 및 조건 중에서 검출되지만, 낮은 항종양 활성을 갖는다(WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 8). WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 9에 도시된 연구에서, 확립된 피하 FaDu 사람 두경부암을 갖는 면역억제 마우스에게 결정 형태 1을 갖는 제시된 양의 수동 분쇄된 화합물 1 또는 비히클 대조군을 경구(po) 투여하였다. 화합물 1을 겔루시르™ 중에서 제제화하였다. 모든 요법은 매일(qd) 투여하였다. 종양 크기는 처치 중에 주기적으로 평가하였다.

결정 형태 2는 놀랍게도 불순물의 존재하에서 얻었으며, 이러한 다형태는 유효한 항종양 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌다(WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 9). WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 9에 도시된 연구에서, 확립된 피하 FaDu 사람 두경부암을 갖는 면역억제된 마우스에게 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 5A 및 5B에 기재된 합성 방법으로 생성된 100 ㎎/㎏의 미분화된 화합물 1(제1의 수확물) 또는 비히클 대조군을 경구(po) 투여한다. 화합물 1은 겔루시르™ 중에서 제제화하였다. 모든 요법은 매일(qd) 투여하였다. 종양 크기는 처치 중에 주기적으로 평가하였다. 형태 2는 현행 우수 제조 관리기준(cGMP) 프로세스에 의해 성공적으로 제조하였으며, FDA 및 캐나다 보건부로부터 임상 시험 사용에 대한 승인을 받았다. 형태 2는 암 환자에서의 항종양 활성의 바람직한 약물동태학(WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 11), 안정성 및 강한 징후를 나타냈다.

결정 형태 3은 형태 1과 유사하지만 상이한 X선 분말 회절(XRPD) 패턴을 공유하는 것으로 나타났으며, 형태 1보다 매우 상이한 결정 습성을 나타냈다(WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 7A 및 도 7B). 형태 3은 본원에 기재된 특수 설계된 슬러리 프로레스를 사용하여 형태 1로부터만 생성될 수 있다. 형태 3은 유효한 항종양 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌다(WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 10). WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 10에 제시된 연구에서, 확립된 피하 FaDu 사람 두경부암을 갖는 면역억제된 마우스는 수동 분쇄된 결정 형태 1 또는 형태 3을 갖는 200 ㎎/㎏의 화합물 1 또는 비히클 대조군을 경구(po) 투여하였다. 화합물 1은 겔루시르 중에서 제제화하였다. 모든 요법은 매일(qd) 투여하였다. 종양 크기는 처치 중에 주기적으로 평가하였다. 이러한 다형태는 cGMP 프로세스에 의해 성공적으로 제조하였으며, FDA 및 캐나다 보건부로부터 임상 시험 사용에 대한 승인을 받았다. 형태 3은 암 환자에서의 항종양 활성의 바람직한 약물동태학(WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 12), 안전성 및 강한 징후를 나타냈다.

결정 형태 2를 생성하는 합성 방법은 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 5A-5B에 도시되어 있다. 간단하게, 하전된 3-부텐-2-온(451.2 g)을 기계적 교반기, 온도계 및 첨가 깔때기가 장착된 2 ℓ 3목 둥근 바닥 플라스크에 첨가한다. 첨가 깔때기에 브롬(936.0 g)을 첨가하였다. 플라스크내의 내용물을 -5℃로 냉각시킨 후, 브롬을 격렬히 교반하면서, -5℃에서 온도를 유지하면서 30 분에 걸쳐 플라스크에 적가한다. 혼합물을 추가의 15 분 동안 -5℃에서 교반한 후, 4개의 동일한 부분으로 나눈다. 테트라히드로푸란(2,133.6 g)과 함께 혼합물의 각각의 부분을 기계적 교반기, 온도계 및 첨가 깔때기가 장착된 22 ℓ 4목 둥근 바닥 플라스크에 가한다. 가한 DBU(1,3-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔, 222.9 g)를 첨가 깔때기에 첨가한다. DBU를 격렬히 교반하면서, 0℃-5℃에서 온도를 유지하면서 30 분에 걸쳐 플라스크에 적가한다. 혼합물을 추가의 15 분 동안 0℃-5℃에서 교반하였다. 그 후, 2-히드록시-1,4-나프토퀴논(231 g)을 플라스크에 첨가한다. 추가의 DBU(246.0 g)를 첨가 깔때기에 가한 후, 반응 혼합물의 온도가 40℃를 넘지 않도록 하는 속도로 플라스크내의 혼합물에 적가한다. DBU의 첨가를 완료한 후, 생성된 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 반응 혼합물의 샘플을 HPLC 분석에 대하여 실시한다. 반응 혼합물에 물(10.8 ℓ)을 가하고, 생성된 혼합물을 0℃-3℃로 30 분 이상 동안 냉각시킨 후, 진공 필터에 의해 여과한다. 여과한 고체를 5% 수성 중탄산나트륨(3 ℓ), 물(3 ℓ), 1% 수성 아세트산(3 ℓ) 및 에탄올 2회(2×1 ℓ)로 연속적으로 헹군다. 헹군 고체를 저장하고, 다른 배취로부터 함께 푸울링한다. 합한 미정제 생성물(28.73 ㎏)을 에틸 아세테이트(811.7 ㎏)와 함께 기계적 교반기, 온도계 및 응축기가 장착된 500 갤런 용기에 가한다. 질소 대기 하에서, 혼합물을 2 시간 동안 환류 가열하고(72℃), 그 후 활성탄층을 함유하는 10 마이크론 카트리지 필터로 여과하여 불용물을 제거한다. 새로운 고온의 에틸 아세테이트(10 ㎏)를 사용하여 용기, 전달 라인 및 필터를 헹군다. 합한 여과액을 0-5℃로 냉각하고, 이 온도에서 2 시간 동안 유지하고, 20 인치 뷰흐너 필터로 여과한다. 여과한 고체 생성물을 0-5℃ 에틸 아세테이트(5.7 ㎏)로 헹구고, 진공하에서 40℃에서 일정한 중량으로 건조시킨다. 나머지 여과액을 증발에 의해 63%까지의 부피로 감소시키고, 결정화 과정을 다시 반복하여 생성물의 제2의 수확물을 생성하고, 이를 또한 동일한 조건 하에서 생성물의 제1의 수확물로서 건조시켰다. 얻은 수확물 둘 다는 결정 형태 2이다. 생성된 제1의 수확물(0.5 ㎏)은 HPLC에 의해 99.5% 순도(NMR에 의해 ~95%)를 지녔다. 생성된 제2의 수확물(1.09 ㎏)은 HPLC에 의해 98.9% 순도(NMR에 의해 ~90%)를 지녔다.

결정 형태 3을 생성하는 합성 공정은 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 6A-6D에 도시한다. 단계는 본원에 간략하게 상술한다. 단계 1: 3-부텐-2-온(메틸 비닐 케톤, MVK)은 브롬을 사용하여 브롬화한다. 추가의 용매는 사용하지 않는다. 중간체 3,4-디브로모부탄-2-온을 테트라히드로푸란(THF) 중에 용해시키고, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔(DBU)와 반응시켜 제2의 중간체인 3-브로모-3-부텐-2-온을 형성한다. 반응이 완료되면, 2-히드록시-1,4-나프토퀴논(HNQ)을 첨가한다. DBU의 제2의 부분을 첨가하고, 혼합물을 공기에 노출시킨다. 반응을 물로 켄칭시키고, 고체를 여과에 의해 수집한다. 이들 고체를 수성 중탄산나트륨, 수성 아세트산, 물 및 에탄올로 세정한다. 생성물을 에탄올 중에 슬러리로 만들고, 고체를 수집하여 분리한다. 단계 2: 원하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온(화합물 1)을 수반하는 잔류량의 2-아세틸-2,3-디히드로나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온을 화합물 1로 톨루엔 중의 활성화된 이산화망간을 사용하여 산화시킨다. 혼합물을 차콜 및 셀라이트의 케이크에 여과시킨다. 여과액을 농축시켜 생성물을 침전시키고, 여과 및 건조시킨다. 단계 3: 고체를 에틸 아세테이트(25 ㎖/g 정제된 화합물 1) 중에서 75℃-80℃에서 약 5 시간 동안 슬러리로 만들고, 여과에 의해 수집하고, 건조시킨다. 이러한 방법으로 생성된 화합물 1은 결정 형태 3이다. 슬러리 과정 없이 이러한 방법으로 생성된 화합물 1은 결정 형태 1을 생성하였다.

혈장 약물 농도 및 선택적 항종양 활성에 대한 화합물 입자 크기 분포의 효과

본 발명에 대한 종래 기술에서, 화합물 1의 미립자는 생성 및/또는 평가하지 않았다. 종래의 연구는 화합물 1이 정상 및 암 세포에 대하여 동일하게 독성인 것으로 밝혀졌으며, 항종양 활성은 동물 모델에서 관찰되지 않았다. 본원에 제시된 연구는 화합물 1의 입자 크기 감소가 생체이용률을 개선시킬 뿐 아니라, 독성의 징후 없이 선택적 항종양 활성을 증가시킨다는 것을 입증한다. 생체이용률에 대한 개선이 암 세포 및 정상 세포에 의해 동일하게 화합물 1로의 노출을 증가시키므로 예상밖이다. 정상 세포에 대한 독성의 개선 없이 항암 활성의 선택적 향상에 대한 기전은 공지되어 있지 않다. 이러한 연구에서, D₅₀(즉, 분포를 2개의 동일한 부분으로 나누는 입자 크기 분포의 중앙점)이 약 20 ㎛일 때 화합물 1의 생체이용률에서이 개선은 최대인 것으로 나타났다. 그러나, D₅₀ 값이 약 2 ㎛인 경우 추가의 실험을 실시하였다. 2 마이크론의 D₅을 갖는 화합물 1의 마이크로입자는 20 마이크론의 D₅₀을 갖는 입자에 비하여 약물동태학 노출에서 개선을 나타내지 않더라도 놀랍게도 향상된 항종양 활성을 지녔다. 추가의 실험에서, 약 100 ㎚의 D₅₀(D₅₀=110.4 ㎚)을 갖는 화합물 1의 나노입자가 생성되었으나, 놀랍게도 항종양 활성의 감소는 화합물의 1의 이러한 입자 크기를 사용하여 관찰되었다. 따라서, 바람직한 실시양태에서, 화합물 1의 입자, 예를 들면 마이크로입자를 함유하는 조성물은 20 마이크론 이하 0.2 마이크론 이상의 D₅₀을 가지며, 정상 세포에 대한 세포독성의 증가 없이 놀랍게도 유효한 항종양 활성을 지닌다.

상이한 입자 크기 범위를 갖는 화합물 1의 입자의 항종양 활성은 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 15에 예시되며, 상이한 입자 크기 범위를 갖는 화합물 1의 입자에 대한 약물동태학 데이타는 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 16-18에 예시되어 있다. WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 15에 도시된 실험에서, 확립된 피하 FaDu 사람 두경부암을 갖는 면역억제된 마우스는 제시된 입자 크기를 갖는 제시된 양의 화합물 1 또는 비히클 대조군을 경구(po) 투여하였다. 모든 요법은 매일(qd) 투여하였다. 종양 크기는 주기적으로 평가하였다.

확정된 입자 크기, 예를 들면 감소된 입자 크기를 갖는 입자의 형태로 나프토푸란 화합물을 투여하는 것은 생체내 혈장 약물 농도를 향상시키는 것으로 밝혀졌다. 본원에서, 반대의 의미로 명시하지 않는다면, 용어 "크기" 및 "직경"은 입자를 교대로 기재하는데 사용될 것이다. 용어 "직경"의 사용은 입자가 완벽하게 또는 대략적으로 구체 형태를 갖는다는 것을 반드시 시사하지 않는 것으로 이해하여야 한다. 예를 들면, "직경"은 입자의 크기, 예를 들면 비-구체 입자에 대한 등가 부피의 구체의 직경의 근사치로서 사용될 수 있다.

놀라운 결과에서, 약학적 조성물 중에서 확정된 입자 크기 분포의 나프토푸란 화합물 입자, 예를 들면 작은 입자로서 투여는 선택적 항종양 활성을 초래하는 것으로 밝혀졌다. 예를 들면, 20 ㎛(즉, 마이크론, 이들 용어는 본원에서 번갈아 사용됨)의 중앙 입자 크기를 갖는 입자로서 투여된 화합물은 마우스 이종이식 모델에서 비교적 약하기는 하나 효능(선택적 항종양 활성)을 나타냈다. 비교로, 150 ㎛(마이크론)의 입자는 효능을 나타내지 않았다. 더 작은 입자의 형태의 나프토푸란 화합물의 투여가 선택적 항종양 활성을 초래할 수 있다는 발견은 놀라우며, 용해도 또는 생체이용률 단독의 개선에 기초하여서는 설명될 수 없다. 즉, 일반적으로, 개선된 용해도는 정상 세포에 대한 독성을 향상시킬 수 있는 증가된 약물 경구 생체이용률뿐 아니라, 항종양 활성과 관련되어 있다. 상기 논의된 바와 같이, 나프토푸란 화합물은 노출이 WO 2009/036099 및 WO 2009/036101에 기재된 바와 같이 확정된 조건하에서 실시되지 않을 경우, 종양 세포 및 정상 세포에 대한 동등한 독성일 수 있다.

추가의 놀라운 결과에서, 약학적 조성물 중에서 추가로 감소된 크기의 나프토푸란 화합물 입자의 투여는 크게 개선된 항종양 활성을 초래하지만, 거의 변경되지 않은 약물동태학 프로파일, 즉 비변형 생체이용률을 초래하는 것으로 밝혀졌다. 예를 들면, 2 ㎛(마이크론)의 중앙 입자 크기를 갖는 입자로서 투여된 화합물은 마우스 이종이식 모델에서 크게 향상된 효능을 나타냈다. 20 ㎛의 입자에 비하여, 2 ㎛의 입자는 크게 개선된 효능을 나타내지만, 매우 유사한 약물동태학 프로파일을 나타낸다. 환언하면, 그러한 개선된 효능은 약물동태학 프로파일, 즉 생체이용률과는 무관하다. 불량한 용해도를 갖는 화합물로 인하여, 개선된 효능은 일반적으로 증가된 약물 경구 생체이용률과 관련되어 있으므로 이러한 결과는 매우 놀랍다.

그러므로, 선택적 항종양 활성에서의 관찰된 개선은 놀라우며, 예상밖이다. 본 발명은 활성을 지니며, 즉 효능 또는 선택적 항종양 활성을 갖는 나프토푸란 화합물, 예를 들면, 화학식 I의 화합물의 입자 또는 입자들을 제공한다. 활성 입자 또는 입자들은 확정된 입자 크기를 가지며, 예를 들면 약 200 ㎛, 약 150 ㎛, 약 100 ㎛, 약 40 ㎛ 또는 약 20 ㎛, 약 10 ㎛, 약 5 ㎛, 약 4 ㎛, 약 3 ㎛, 약 2 ㎛, 약 1 ㎛, 약 0.5 ㎛, 약 0.2 ㎛ 또는 약 0.1 ㎛ 이하의 직경을 갖는다. 확정된 입자 크기보다 큰 입자 또는 입자들은 본원에 기재된 입자보다 덜 활성이거나 또는 비활성이다.

그래서, 더 작은 입자의 형태로 화학식 I에 의한 또 다른 화합물 또는 나프토푸란 화합물의 투여는 그의 선택적 항종양 활성의 개선을 초래할 수 있다. 투여에서 확정된 입자 크기 분포를 갖는 화학식 I에 의한 화합물의 입자의 사용은 원하는 선택적 항종양 활성의 설정을 허용할 수 있다. 예를 들면, 확정된 입자 크기 분포를 갖는 나프토푸란 화합물 입자, 예를 들면, 더 작은 입자의 사용은 비교적 약하기는 하나 더 짧은 기간 동안 더 높은 혈중 농도 및 선택적 항종양 활성을 초래할 수 있다. 화합물의 추가로 감소된 입자 크기는 크게 개선된 효능과 함께 화합물의 변경되지 않은 혈장 농도를 초래할 수 있다.

본원에서, 반대 의미로 나타내지 않는다면, 용어 "혈장 농도", "혈액 몰 농도" 및 "혈액 농도"는 번갈아 사용된다. 용어 "신생물"은 성장의 비정상적 패턴을 나타내는 세포를 기재하는데 사용될 수 있다. 그러한 신생물은 양성 및 악성인, 예를 들면 고형 종양인 종양뿐 아니라, 확정된 형상을 갖지 않고, 사람 또는 동물 신체의 특정 부분에 한정되지 않는 백혈병 등의 기타 세포 성장 장애를 들 수 있다. 그래서, "신생물"은 암성 및 비-암성 신생물 세포 및 조직 모두를 들 수 있다. 본원에서, 다른 의미로 명시하지 않는다면, 명확히 하거나 또는 특정한 연구 또는 실험을 지칭하여, 용어 "종양" 및 "암"은 사람 또는 동물 신체의 특정 부위로 국한되지 않는 것을 비롯한 모든 신생물의 광의의 부류를 지칭하는 것으로 이해하여야 한다. 그러나, 보다 제한적인 용어 "고형 종양"은 확정된 형태를 갖지 않으며, 사람 또는 동물 신체의 특정 부위로 한정되지 않는 백혈병 등의 세포 성장 장애를 포함하지 않는 것으로 이해하여야 한다.

신생물은 고형 형태(고형 종양), 악성, 전이 또는 Stat3 경로 활성 등의 특징 중 하나 또는 하나 초과를 나타낼 수 있거나 또는 나타내지 않을 수 있다. 신생물은 예를 들면 암 줄기 세포를 포함할 수 있다. 신생물은 예를 들면 암종, 육종, 선암종, 림프종 또는 혈액성 악성을 포함할 수 있다.

흡수는 약물을 투여 부위로부터 체내 측정 부위로 전해지는 과정으로서 정의된다. 문헌[M. Rowland, T.N. Tozer (1995) Clinical pharmacokinetics: Concepts and applications. Lippincott Williams & Wilkins]을 참조한다. 정단 막이 막의 투과를 위한 속도 제한 단계인 것으로 간주되므로, 경구 약물 흡수는 종종 소장세포의 정단 막을 가로질러 약물이 전달되는 것을 지칭한다. 문헌[U. Fagerholm & H. Lennernaes (1995) Experimental estimation of the effective unstirred Water layer thickness in the human jejunum, and its importance in oral drug absorption, Eur J Pharm Sci 3: 247-253; M.B. Lande, J.M. Donovan & M.L. Zeidel (1995) The relationship between membrane fluidity and permeabilities to water, solutes, ammonia and protons, J Gen Physiol 106: 67-84]를 참조한다. 투과성은 약물이 막을 통하여 얼마나 쉽게 통과되는지를 나타내는 일반적인 용어이다. 약물의 특정한 투과성 특징은 친유성, 하전, 크기 및 극성 표면적을 비롯한 그의 물리화학적 성질에 의존한다. 문헌[Rowland & Tozer 1995; C.A. Lipinski, F. Lombardo, B.W. Dominy & P.J. Feeney (2001) Experimental and computational approaches to estimate solubility and permeability in drug discovery and development settings, Adv Drug Deliv Rev 46: 3-26]을 참조한다. 흡수 속도는 약물의 투과성, 막의 표면적 및 막에 대한 농도 구배에 의존한다. 농도 구배는 약물 막 수송에 대하여 가장 흔한 기전인 수동 확산에 대한 구동력이다. 경구 투여의 경우, 약물은 주로 소장에 의해 흡수된다. 사람 소장은 길이가 약 5-8 미터이며, 거의 200 제곱미터의 총 표면적을 갖는 한편, 마우스의 소장은 길이가 단지 약 10-20 cm이다. 그러므로, 더 큰 입자 크기를 갖는 약물의 투과성이 더 작은 입자 크기를 갖는 약물보다 더 작기는 하나, 더 큰 입자 크기를 갖는 약물은 마우스에서 더 작은 입자 크기를 갖는 약물보다 더 크거나 또는 동일한 사람에서의 흡수율을 가질 수 있다는 것을 예측할 수 있다.

예를 들면, 약 200 ㎛, 150 ㎛, 100 ㎛, 80 ㎛, 60 ㎛, 40 ㎛, 20 ㎛, 10 ㎛, 5 ㎛, 4 ㎛, 3 ㎛, 2 ㎛, 1 ㎛, 0.5 ㎛ 또는 0.2 ㎛ 이하의 중앙 직경을 갖는 화학식 I에 의한 화합물의 입자 크기의 분포는 예를 들면 암 또는 종양의 치료를 위하여 약학적 제제로 투여시 선택적 항종양 활성을 초래할 것으로 예측될 수 있다. 예를 들면, 입자 크기의 분포는 입자가 약 0.02 ㎛ 내지 약 5 ㎛ 또는 약 0.2 ㎛ 내지 약 4 ㎛의 중앙 직경을 갖도록 할 수 있다. 예를 들면, 입자 크기의 분포는 입자가 약 5 ㎛ 이하의 중앙 직경, 약 2 이하의 중앙 직경에 대한 평균 직경의 비 및 약 0.25 이상의 중앙 직경에 대한 모드 직경의 비를 갖도록 할 수 있다.

용어 "입자"는 화학식 I의 화합물의 응집물을 지칭할 수 있다. 용어 "평균"은 입자의 총수로 나눈 모든 입자의 크기의 합을 지칭할 수 있다. 용어 "중앙"은 예를 들면 입자의 1/2이 더 큰 직경을 가지며, 입자의 1/2가 더 적은 직경을 갖는 것을 지칭할 수 있다. 용어 "모드"는 가장 흔하게 발생하는 입자 크기 값을 나타낼 수 있다. 용어 "누적 합계"는 모든 입자를 지칭할 수 있다.

나프토푸란 화합물 입자의 투여에 의해 달성된 선택적 항종양 활성은 입자의 크기 분포, 예를 들면 이들 부피를 대표하는 직경 또는 입자의 부피뿐 아니라, 입자의 형상 및 형상의 분포에 의존할 수 있다. 예를 들면, 바늘형 형상을 갖는 입자의 세트는 구체 형상을 갖는 입자의 세트보다 상이한 약물동태학 프로파일을 초래할 수 있다. 그래서, 투여하고자 하는 입자의 형상 및 형상 분포를 측정하며 및/또는 소정의 형상 및 형상 분포, 예를 들면 거의 균일한 형상을 갖는 입자, 예를 들면 구체의 근사치인 입자를 생성하는 방법을 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들면 입자의 구형도 Ψ는

로서 정의될 수 있으며, 여기서 V_p는 입자의 부피이며, A_p는 입자의 표면적이다. 구체는 Ψ = 1의 구형도를 가지며, 입자의 구형도가 1(unity)에 근접할수록 입자의 형상은 구체의 근사치에 더 가깝다. 비교에 의하면, 4면체는 약 0.671의 구형도를 가지며, 정육면체는 약 0.806의 구형도를 가지며, 8면체는 약 0.846의 구형도를 가지며, 12면체는 약 0.910의 구형도를 가지며, 20면체는 약 0.939의 구형도를 갖는다. 구체의 형태가 주어진 부피에 대한 표면적을 최소로 하므로, 거의 구체인 입자는 덜 구체에 가까운 동일한 부피의 입자보다 더 느리게 흡수될 것으로 예상될 수 있다. 구체의 세트의 평균 구형도는

로서 정의될 수 있으며, 여기서 ΣV_p는 모든 입자의 총 부피이며, ΣA_p는 모든 입자의 총 표면적이다. 예를 들면, 투여되는 화학식 I에 의한 화합물의 입자는 약 0.8 이상의 평균 구형도 또는 약 0.9 이상의 평균 구형도를 가질 수 있다.

크기, 크기 분포, 형상, 형상 분포 및 인자, 에컨대 표면 거칠기 또는 입자의 불규칙성은 약학적 제제 중에 투여되는 화합물 1 입자의 세트의 평균 비표면적에 영향을 미칠 수 있다. 평균 비표면적은 ΣA_p/Σm_p로서 정의될 수 있으며, 여기서 ΣA_p는 입자의 총 표면적이며, Σm_p는 입자의 총 질량이다. 입자의 평균 비표면적이 클수록 입자의 예상 용해는 더 빠르게 된다.

약학적 제제 중의 화학식 I에 의한 화합물의 입자는 상이한 입자를 가로질러 또는 동일한 입자 내에서 결정질 상태로 나프토푸란 화합물을 포함할 수 있다. 결정질 상태는 상이한 입자를 가로질러 또는 동일한 입자내에서 하나 이상의 다형태를 포함할 수 있다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 입자의 용해 속도는 예를 들면 제1의 다형태 또는 제2의 다형태의 결정질인 것과는 상관 없이 화합물 입자 중의 물질의 상태에 영향을 받을 수 있는 것으로 예상된다.

다양한 기법 중 하나 이상은 약학적 제제 중의 화학식 I에 의한 화합물의 입자의 크기 및/또는 크기 분포를 결정하는데 적용될 수 있다. 예를 들면, 체 분석, 광학 현미경 계수, 전자 현미경 계수, 전기저항 계수, 침강 시간, 레이저 회절 및/또는 음향 분광법을 적용할 수 있다. 이들 기법 중 일부 또는 전부 또는 그의 변형은 약학적 제제 중의 나프토푸란 화합물 입자의 형상, 형상 분포 및/또는 비표면적을 측정하는데 적용될 수 있다. BET 등온선 및/또는 공기 투과율 특이성 표면 기법은 약학적 제제 중의 화학식 I에 의한 화합물의 입자의 비표면적을 구하기 위하여 적용될 수 잇다.

나프토푸란 화합물의 생성을 위한 공정

WO 2009/036099 및 WO 2009/036101에는 하기와 같이 화학식 II의 나프토푸란 화합물의 제조 방법이 개시되어 있다:

이러한 공정에서, 3-브로모-3-부텐-2-온(4-3)을 2-히드록시-1,4-나프토퀴논(4-4)과 개방 공기 용기내에서 반응시켜 2,3-디히드로나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온(4-5)을 생성한다. 2,3-디히드로나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온(4-5)을 개방 공기로부터의 산소에 의해 산화시켜 나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온(4-6)이 된다. 이러한 공정에 의해 나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온을 생성한다. 그러나, 화합물의 추가의 생성 중에, 이러한 공정은 이들 화합물의 잠재적 임상 적용예를 방해하는 상당한 각종 불순물을 생성하는 것으로 결정되었다. 일부 실시양태에서, 불순물 중 하나는 2,3-디히드로나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온(4-5)이다.

한 구체예에서, 본 발명은 나프토푸란 제조의 개선된 방법을 제공한다. 개선된 방법은 불순물을 최소로 하여 실질적으로 순수한 나프토푸란을 생성한다. 본원에 사용한 바와 같이, 용어 "실질적으로 순수한"은 % 면적 HPLC로서 측정하여 적어도 약 80% 이상의 본 발명의 화합물을 포함하는 제조를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 나프토푸란은 나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온 및 그의 관련된 화합물(4-6)이다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 방법은 본원에 제공된 작업예에 제시된 방법 중 하나를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 본원에 제공된 실시예 1, 2 및/또는 5에 제시된 방법 중 하나 이상을 포함한다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 방법은 제1의 용매 중에서 3-브로모-3-부텐-2-온(4-3) 및 2-히드록시-1,4-나프토퀴논(4-4)을 산화제로 커플링시킨 미정제 생성물을 산화시키는 것을 포함한다. 추가의 실시양태에서, 산화제는 이산화망간 (MnO₂)이다. 추가의 실시양태에서, 미정제 생성물은 산화시키기 이전에 분리한다. 일부 실시양태에서, 제1의 용매는 톨루엔 또는 클로로포름이다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 방법은 숙성된 산화 혼합물을 차콜로 처리하여 특정 불순물을 제거하는 것을 더 포함한다. 추가의 실시양태에서, 숙성된 산화 혼합물을 활성탄 패드로 여과한다. 추가의 실시양태에서, 혼합물을 약 100℃에서 여과한다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 방법은 생성물을 여과액으로부터 결정화시키는 것을 더 포함한다. 추가의 실시양태에서, 여과액을 증발로 농축시키고, 냉각시켜 생성물을 결정화시킨다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 방법은 생성물을 제2의 용매로 재결정화시키는 것을 더 포함한다. 추가의 실시양태에서, 제2의 용매는 에틸 아세테이트이다.

대안의 실시양태에서, 본 발명의 방법은 제1의 용매로부터 결정화된 생성물을 제2의 용매 중에서 슬러리화하고, 슬러리를 가열하고, 슬러리를 냉각시키는 것을 더 포함한다. 추가의 실시양태에서, 제2의 용매는 에틸 아세테이트이다. 일부 실시양태에서, 생성물을 슬러리로 만들고, 단지 부분 용해시키기 위하여 가열한다. 추가의 실시양태에서, 생성물을 슬러리화하는데 사용된 제2의 용매의 부피는 가열된 상태에서 생성물의 완전 용해를 위한 부피의 약 1/10, 1/5, 1/4, 1/3, 1/2 또는 2/3이다.

본 발명은 또한 본 발명의 방법에 의해 생성된 나프토푸란 화합물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 나프토푸란 화합물은 2-(1-히드록시에틸)-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-클로로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-플루오로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-에틸-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 인산 모노-[1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐]에스테르, 인산 1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐 에스테르 디메틸 에스테르, 그의 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체 및 염 또는 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가의 실시양태에서, 나프토푸란 화합물은 2-히드록시-1,4-나프토퀴논(4-4) 및 3-브로모-3-부텐-2-온(4-3)을 커플링시킨 분리된 미정제 생성물을 톨루엔의 존재하에서 이산화망간과 반응시키는 것을 포함하는 방법에 의해 생성된다. 추가의 실시양태에서, 방법은 숙성된 반응 혼합물을 활성탄 패드로 여과하는 것을 추가로 포함한다.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 실질적으로 순수한 나프토푸란 화합물을 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 2-(1-히드록시에틸)-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-클로로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-플루오로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-에틸-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 인산 모노-[1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐]에스테르, 인산 1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐 에스테르 디메틸 에스테르, 그의 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체 및 염 또는 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택되는 실질적으로 순수한 화합물을 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 II의 실질적으로 순수한 화합물을 제공한다:

(II)

상기 화학식에서, 각각의 R₁은 독립적으로 H, Cl 또는 F이며; n은 0, 1, 2, 3 또는 4이다.

본원에서 사용된 바와 같이, "실질적으로 순수한"은 약 80% 이상의 순도를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 순도는 적어도 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 99%의 순도를 갖는다. 추가의 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 순도는 적어도 약 99.5% 또는 약 99.8%의 순도를 갖는다. 추가의 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 순도는 적어도 약 99.85%, 약 99.90%, 약 99.94%, 약 99.95% 또는 약 99.99%의 순도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 2-(1-히드록시에틸)-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-클로로나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-플루오로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-에틸-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 인산 모노-[1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐]에스테르, 인산 1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐 에스테르 디메틸 에스테르, 그의 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체 및 염 또는 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 다형태이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 화학식 I에 의한 화합물의 다형태이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 화합물 1의 다형태이다.

본 발명의 화합물 중에 존재할 수 있는 통상의 불순물은 부산물, 이성질체, 중간체 및 용매로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물 중에 존재할 수 있는 불순물은 화학식 II의 화합물에 대하여 약 10%, 약 8%, 약 5%, 약 2% 또는 약 1% 이하이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명의 화합물 중에 존재할 수 있는 불순물은 화학식 II의 화합물에 대하여 약 0.5%, 약 0.2%, 약 0.15% 또는 약 0.1% 이하이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명의 화합물 중에 존재하는 불순물은 화학식 II의 화합물에 대하여 약 0.05%, 약 0.02% 또는 약 0.01% 이하이다. 일부 실시양태에서, 화학식 II의 실질적으로 순수한 화합물은 화학식 II의 화합물에 대하여 약 500, 200, 100, 50, 20, 10, 5, 2, 1, 0.5, 0.2, 0.15, 0.1 또는 0 ppm 이하의 잔류 부산물 또는 부산물들이다.

일부 실시양태에서, 불순물은 2-아세틸-2,3-디히드로나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2,6-디아세틸-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2,7-디아세틸-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 3-아세틸-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 나프토[2,3-b]푸란-4,9-디올 및 1-(4,9-디히드록시-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-에타논으로 이루어진 군으로부터 선택되는 부산물 1종 이상을 포함한다.

일부 실시양태에서, 불순물은 망간(Mn)을 포함한다.

본 발명의 화합물의 순도는 다양한 디바이스를 사용하여 측정할 수 있다. 일부 실시양태에서, 순도는 HPLC(고성능 액체 크로마토그래피)를 사용하여 측정한다. 일부 실시양태에서, 순도는 NMR(핵 자기 공명)을 사용하여 측정한다. 추가의 실시양태에서, 순도는 HPLC 및 NMR을 사용하여 측정한다.

화합물 1을 함유하는 이들 매우 순수한 조성물은 화합물 1을 함유하는 덜 순수한 조성물에 비하여 동물 실험에서 크게 개선된 안정성 프로파일을 나타낸다. 매우 순수한 화합물 1의 임의의 유해한 효과에 대한 징후가 마우스에서는 관찰되지 않았다. 게다가, 화합물 1을 함유하는 이들 매우 순수한 조성물을 환자에게서 시험하였으며, 우수한 안정성이 입증되었다. 예를 들면, WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 13은 화합물 1에 대하여 약 90% 순도를 갖는 조성물을 사용하여 관찰된 독성을 예시하며, WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 14는 화합물 1에 대하여 약 95% 이상의 순도를 갖는 매우 순수한 조성물이 안전하며, 효과적이라는 것을 예시한다. WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 13에 도시된 연구에서, 확립된 피하 FaDu 사람 두경부암(상부 패널) 또는 MDA-231 사람 유방암(하부 패널)을 갖는 면역억제된 마우스에게 제시된 양의 화합물 1 또는 비히클 대조군을 경구(po) 투여하였다. 화합물 1은 겔루시르™ 중에서 제제화하였다. 모든 요법은 매일(qd) 투여하였다. 체중은 처치 중에 주기적으로 평가하였다. 각각의 시점은 8개의 종양의 평균±SEM을 나타낸다. 상당한 독성이 약 90% 순수한 화합물 1에서 관찰되었다. 총 4마리의 마우스가 제1의 실험(상부 패널)에서 처치 중에 죽었으므로(16일차 2마리, 19일차 2마리, 23일차 1마리), 그들의 체중은 그들의 사망후 플롯에 포함시키지 않았다. 총 3마리의 마우스가 제2의 실험(하부 패널)에서 처치 중에 죽었으므로(14일차 1마리, 21일차 2마리), 그들의 체중은 그들의 사망후 플롯에 포함시키지 않았다. WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 14에 도시된 연구에서, 확립된 피하 FaDu 사람 두경부암(상부 패널) 또는 MDA-231 사람 유방암(하부 패널)을 갖는 면역억제된 마우스에게 제시된 양의 화합물 1 또는 비히클 대조군을 경구(po) 투여하였다. 화합물 1은 겔루시르™ 중에서 제제화하였다. 모든 요법은 매일(qd) 투여하였다. 체중은 처치 중에 주기적으로 평가하였다. 각각의 시점은 8개의 종양의 평균±SEM을 나타낸다. 더 높은 순도를 갖는 화합물 1은 잘 견디었으며, 독성의 징후를 나타내지 않았다. 모든 마우스가 두 실험 모두에서 처치 동안 건강하게 유지되었다. 단계 I 실험에서, 화합물 1의 투여량은 20 ㎎으로부터 2,000 ㎎/일로 확대되었으며, 최대 허용 투여량(MTD)은 도달되지 않았다. 투여량-제한 독성은 관찰되지 않았다. 환자는 약물-유도된 유해 효과 없이 화합물 1을 매우 잘 견디었으며, 이는 암 화학요법제에 대하여 현저한 대조를 이룬다. 화합물 1의 실질적으로 순수한 조성물의 임상적 안전성 프로파일은 역사상 종양학 약물 중에서 최고에 해당한다.

약학적 제제

특정한 부형제 또는 인핸서는 약학적 제제 중에서 주어진 입자 크기 분포의 화학식 I에 의한 화합물의 입자의 경구 생체이용률을 개선시키는 것으로 밝혀졌다. 예를 들면, 약학적 적합성 부형제 겔루시르™ 44/14(가트포세(Gatefosse)가 제조한 폴리에틸렌 글리콜 글리세릴 라우레이트)의 첨가는 약 20 마이크론 이하의 중앙 입자 크기를 갖는 화합물 1의 생체이용률을 증가시킬 수 있다. 경구 생체이용률을 향상 또는 제어하는데 사용될 수 있는 기타 부형제의 예로는 계면활성제, 예컨대 트윈(TWEEN) 80™ 또는 트윈 20™(폴리소르베이트, 즉, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트) 또는 특정한 지질, 예컨대 포스파티딜콜린, 예를 들면 디미리시토일포스파티딜콜린(DMPC)을 들 수 있다. 계면활성제로는 양쪽성이며, 소수성 및 친수성 기 모두를 함유하는 화합물을 들 수 있다. 기타 부형제로는 예를 들면, 지방산의 글리세롤 에스테르, 포화 지방산의 글리세롤 에스테르, 8 내지 18 개의 탄소를 갖는 포화 지방산의 글리세롤 에스테르, 글리세릴 라우레이트, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 알킬레이트, 셀룰로스 또는 셀룰로스 유도체, 예컨대 미정질 셀룰로스 및 카르복시메틸 셀룰로스(CMC)뿐 아니라, 지질, 예컨대 스테롤, 예를 들면 콜레스테롤을 들 수 있다. 기타 부형제로는 산화방지제, 예컨대 비타민 E를 들 수 있다. 기타 부형제 및 추가의 성분은 당업자가 인지하고 있는 바와 같이 본 발명에 의한 약학적 제제에 포함될 수 있다. 예를 들면, 기타 활성제, 표준 비히클, 담체, 액체 담체, 염수, 수성 액제, 희석제, 표면 활성제, 분산제, 불활성 희석제, 과립화 및 붕해제, 결합제, 윤활제, 활택제, 발염제, 감미제, 풍미제, 착색제, 방부제, 생리학적 분해성 조성물, 예컨대 젤라틴, 수성 비히클 및 용매, 유성 비히클 및 용매, 현탁제, 분산 또는 습윤화제, 현탁제, 유화제, 완화제, 완충제, 염, 농조화제, 젤라틴, 충전제, 유화제, 산화방지제, 항생물질, 항진균제, 안정화제, 물, 글리콜, 오일, 알콜, 결정화 지연제(예를 들면 당의 결정화를 지연시킴), 전분, 당, 수크로스, 표면 활성제, 임의의 기타 성분, 예컨대 폴리히드록시 알콜의 용해도를 증가시키는 물질, 예를 들면 글리세롤 또는 소르비톨, 약학적으로 허용 가능한 중합체 또는 소수성 물질 및 기타 성분을 포함할 수 있다. 첨가하기 적절한 추가의 물질 또는 물질들은 당업자가 인지하고 있는 바와 같이 투여 형태(예를 들면 주사용 액제, 캡슐 또는 환제)에 의존할 것이다.

본 발명의 화학식 I에 따른 화합물은 "약학적 조성물"로 제제화될 수 있다. 본 발명에 의한 실시양태는 예를 들면 환자를 치료하는데 유용할 수 있는 화합물을 포함한 각종 투여 형태를 포함한다. 예를 들면, 경구 투여 형태는 정제, 환제, 캡슐(경질 또는 연질), 당의정, 분말, 과립, 현탁액(예를 들면 수성 또는 유성 비히클 중의), 액제(예를 들면 수성 또는 유성 비히클 중의), 겔, 카세제, 트로키, 로젠지, 시럽, 엘릭시르, 에멀젼, 물약, 수중유 에멀젼 또는 유중수 에멀젼을 포함할 수 있다. 투여의 용이성으로 인하여, 정제 및 캡슐은 바람직한 경구 투여를 나타낼 수 있다. 고체 경구 투여 형태는 표준 기법에 의해 당의 또는 장용피될 수 있다. 예를 들면 비강 및 기타 점막 분무 제제(예, 흡입성 제형)는 활성 화합물과 방부제 및 등장화제의 정제된 수성 액제를 포함할 수 있다. 상기 제제는 바람직하게는 비강 또는 기타 점막과 적합성을 갖는 pH 및 등장화 상태로 조절된다. 대안으로, 이들은 흡입제 또는 에어로졸의 기체 담체 중에 현탁된 미분 고체 분말의 형태로 존재할 수 있다. 상기 제제는 임의의 적절한 수단 또는 방법에 의하여, 예를 들면 네뷸라이저, 분무기, 계측 투여 흡입기 등에 의해 전달될 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 의한 약학적 조성물은 국소, 예를 들면 연고, 크림 또는 좌제의 형태로 투여될 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 의한 약학적 조성물은 주사제를 주사하여 투여될 수 있다. 그래서, 본 발명에 의한 투여 형태는 예를 들면 고체, 반고체, 액체 또는 기체 형태를 가질 수 있다. 적절한 투여 형태로는 경구, 직장, 설하, 점막, 비강, 안구, 피하, 근육내, 정맥내, 비경구, 경피, 척수, 경막내, 관절내동맥내, 지주막하, 기관지, 림프관 및 자궁내 투여 및 활성 성분의 전신 전달을 위한 기타 투여 형태를 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 활성 성분, 예를 들면, 화학식 I에 의한 화합물은 대상체(환자)에게 투여후 신속 방출, 지속 방출, 지연 방출 또는 당업자에게 공지된 임의의 기타 방출 프로파일을 제공하는 제제내에 함유될 수 있다. 주어진 처치에 대하여 선택된 투여 방식 및 투여 형태는 주어진 처치 적용에 바람직하며 효과적인 화합물 또는 조성물의 치료량뿐 아니라, 예컨대 대상체(환자)의 정신 상태 및 신체적 상태 등의 요인과 밀접한 관계가 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 벌크로, 단일 단위 투여로서, 복수의 단일 단위 투여로서 또는 복수의 투여 형태로서 제조, 포장 또는 판매될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "단위 투여"는 소정량의 활성 성분을 포함하는 불연속양의 약학적 조성물이다. 각각의 단위 투여 중의 활성 성분의 양은 일반적으로 투여되는 활성 성분의 총량 또는, 예를 들면 투여의 1/2 또는 1/3과 같은 총 투여량의 간편한 분획에 해당한다. 경구 투여에 적절한 본 발명의 약학적 조성물의 제제는 불연속 고체 투여 단위의 형태로 존재할 수 있다. 각각의 고체 투여 단위는 소정량의 활성 성분, 예를 들면 그의 단위 투여 또는 분획을 함유한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "유성" 액체는 물보다 극성이 적은 탄소 또는 규소계 액체를 포함하는 것이다. 상기 약학적 투여 형태에서, 활성제는 바람직하게는 1종 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체(들) 및 임의로 임의의 기타 치료 성분과 함께 사용된다. 담체(들)는 제제의 기타 성분과의 적합성의 관점에서 약학적 허용 가능하여야 하며, 그의 수용체에 대하여 지나치게 유해하지 않아야 한다. 본 발명의 조성물은 단위 투여 형태로 제공될 수 있으며, 각각의 단위 투여, 예를 들면 티스푼, 정제, 캡슐, 액제 또는 좌제는 소정량의 활성 약물 또는 프로드럭을 단독으로 또는 기타 약학적 활성제와 적절하게 병용하여 함유된다. 용어 "단위 투여 형태"는 사람 및 동물 대상체에 대한 단일 투여로서 적절한 물리적 불연속 단위를 지칭하며, 각각의 단위는 소정량의 본 발명의 조성물을 단독으로 또는 의도한 효과를 생성하기에 충분한 양으로 계산된 기타 활성제와 병용하여 함유한다.

본 발명의 약학적 조성물의 투여 형태는 당업계에 공지된 기법에 의해 생성될 수 있으며, 치료적 유효량의 활성 화합물 또는 성분을 함유한다. 공지된 또는 이후에 개발된 임의의 기법은 본 발명에 의한 약학적 조성물 또는 제제의 제조에 사용될 수 있다. 일반적으로, 제조는 활성 성분을 담체 또는 1종 이상의 기타 추가의 성분과 연합시킨 후, 필요하거나 또는 적절할 경우, 생성물을 원하는 단일- 또는 복수의- 투여 단위로 성형하는 것을 포함한다. 본 발명에 의한 분말 및 과립 제제는 공지의 방법 또는 개발되는 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 상기 제제는 직접 대상체에게 투여할 수 있거나 또는 예를 들면 정제를 형성하고, 캡슐을 채우거나 또는, 이에 수성 또는 유성 비히클의 첨가에 의해 수성 또는 유성 현탁액 또는 액제를 생성하는데 사용될 수 있다. 정제는 임의로 1종 이상의 보조 성분과 함께 압축 또는 성형에 의해 또는 습식 과립화에 의해 생성될 수 있다. 압축 정제는 적절한 디바이스내에서 활성 성분을 유동 가능한 형태, 예컨대 분말 또는 과립 제제로 압축시켜 생성될 수 있다. 성형 정제는 적절한 디바이스내에서 활성 성분, 약학적으로 허용 가능한 담체 및 적어도 혼합물을 습윤화시키기에 충분한 액체의 혼합물을 성형시켜 생성될 수 있다. 정제는 코팅되지 않을 수 있거나 또는 당업계에 공지된 방법 또는 개발되는 방법을 사용하여 코팅될 수 있다. 코팅된 정제는 예를 들면 장용피를 사용하여 활성 성분의 지속 방출 및 흡수를 제공하여 대상체의 위장관내에서의 지연된 붕해를 위하여 제제화될 수 있다. 정제는 약학적으로 보기 좋으며 맛이 좋은 제제를 제공하기 위한 성분을 추가로 포함할 수 있다. 활성 성분을 포함하는 경질 캡슐은 생리학적으로 분해 가능한 조성물, 예컨대 젤라틴을 사용하여 생성될 수 있다. 그러한 경질 캡슐은 활성 성분을 함유할 수 있다. 활성 성분을 포함하는 연질 젤라틴 캡슐은 생리학적으로 분해 가능한 조성물, 예컨대 젤라틴을 사용하여 생성될 수 있다. 상기 연질 캡슐은 물 또는 오일 매체와 혼합될 수 있는 활성 성분을 포함한다. 투여에 적절한 본 발명의 약학적 조성물의 액체 제제는 액체 형태로 또는 사용전 물 또는 또 다른 적절한 비히클을 사용하여 재구성하고자 하는 건조 생성물의 형태로 제조, 포장 및 판매될 수 있다. 활성 성분이 수성 또는 유성 비히클 중에 분산된 액체 현탁액 및, 활성 성분이 수성 또는 유성 비히클 중애 용해된 액체 액제는 통상의 방법 또는 개발되는 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 활성 성분의 액체 현탁액은 수성 또는 유성 비히클 중에 존재할 수 있다. 활성 성분의 액체 액제는 수성 또는 유성 비히클 중에 존재할 수 있다. 약학적 투여 형태를 생성하기 위하여, 활성 성분, 예를 들면 나프토푸란을 통상의 약학적 배합 기법에 의해 약학적 담체와 긴밀히 혼합할 수 있다. 담체는 투여에 요구되는 제제의 형태에 의존하여 다양한 형태를 취할 수 있다. 경구 투여 형태로 조성물을 생성하기 위하여, 임의의 일반적인 약학적 매체를 사용할 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태에서, 제조 물품은 화학식 I에 의한 화합물을 포함하는 치료적 유효량의 약학적 조성물을 함유하는 용기를 포함한다. 용기는 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함할 수 있다. 용기는 인쇄된 라벨의 지시사항을 포함할 수 있다. 예를 들면, 인쇄된 라벨은 약학적 조성물이 투여되는 투여량 및 빈도 및, 조성물이 식품과 함께 투여되어야 하는지 또는 식품 섭취 이전 또는 이후의 확정된 시간 이내에 투여되어야 하는지의 여부를 나타낼 수 있다. 조성물은 조성물과 상당하게 상호작용하지 않는 투여 형태를 유지 및 계량할 수 있는 임의의 적절한 용기내에 수용될 수 있다. 라벨 지시사항은 본원에 기재된 치료 방법과 일치할 수 있다. 라벨은 2의 물리적 근접성을 유지하는 수단에 의해 용기와 연합될 수 있다. 비제한적인 예로서, 용기 및 라벨은 포장재, 예컨대 박스 또는 플라스틱 수축 포장내에 둘 다 수용될 수 있거나 또는 예컨대 라벨 지시사항을 모호하게 하지 않는 접착제 또는 기타 본딩 또는 유지 수단을 사용하여 용기에 본딩시키는 지시사항과 함께 연합될 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태에서, 약학적 조성물은 (a) 본 발명의 화합물, 예를 들면 화학식 I에 의한 화합물인 치료적 유효량의 활성 성분, b) 친수성-친유성 균형(HLB)이 10 초과인 폴리옥실글리세리드 및 (c) HLB이 10 미만인 폴리옥실글리세리드를 포함한다. 보다 바람직하게는, 약학적 조성물은 (d) 계면활성제를 더 포함한다.

HLB가 10 초과인 폴리옥실글리세리드의 바람직한 예로는 HLB가 10 내지 17인 것, 더욱 바람직하게는 HLB가 12 내지 15인 것을 들 수 있다. 추가로 바람직한 예로는 25℃에서 고체 또는 반고체인 것, 바람직하게는 융점이 30℃ 초과인 것, 더욱 바람직하게는 융점 중 하나가 33-64℃인 것, 더 더욱 바람직하게는 융점 중 하나가 40-55℃인 것을 들 수 있다. 구체적인 예로는 라우로일 폴리옥실글리세리드, 보다 구체적으로 라우로일 폴리옥실-32 글리세리드, 예컨대 겔루시르™ 44/14 및 스테아로일 폴리옥실글리세리드를 들 수 있으며, 보다 구체적으로 스테아로일 폴리옥실-32 글리세리드, 예컨대 겔루시르™ 50/13이 바람직하다. 더욱 바람직한 예로는 라우로일 폴리옥실글리세리드, 보다 구체적으로 라우로일 폴리옥실-32 글리세리드, 예컨대 겔루시르™ 44/14를 들 수 있다.

HLB가 10 미만인 폴리옥실글리세리드의 바람직한 예로는 HLB가 2 내지 8인 것, 더욱 바람직하게는 HLB가 3 내지 7인 것을 들 수 있다. 구체적인 예로는 리놀레오일 폴리옥실글리세리드, 예컨대 라브라필™ M2125CS, 레오일 폴리옥실글리세리드, 예컨대 라브라필™ M1944CS 및 라우로일 폴리옥실-6 글리세리드, 예컨대 라브라필™ M2130CS를 들 수 있다. 보다 바람직한 구체적인 예로는 리놀레오일 폴리옥실글리세리드 및 올레오일 폴리옥실글리세리드를 들 수 있다.

계면활성제의 예로는 나트륨 라우릴 술페이트(SLS) 또는 나트륨 도데실 술페이트(SDS), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르(폴리소르베이트, 바람직하게는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트(TWEEN 80™) 또는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트(TWEEN 20™), 특정 지질, 예컨대 포스파티딜콜린, 예를 들면 디미리시토일포스파티딜콜린(DMPC)을 들 수 있다. 계면활성제는 양쪽성인 화합물을 포함하며, 소수성 및 친수성 기 모두를 함유한다. 바람직한 계면활성제는 나트륨 라우릴 술페이트(SLS) 또는 나트륨 도데실 술페이트(SDS)이다.

활성 성분은 제제의 중량에 대하여 5% 내지 50% 범위 내로 포함될 수 있다. 계면활성제는 제제의 중량에 대하여 0.05% 내지 5% 범위 내로 포함될 수 있다. HLB가 10 초과인 폴리옥실글리세리드는 제제의 중량에 대하여 5% 내지 80% 범위 내로 포함될 수 있다. HLB가 10 미만인 폴리옥실글리세리드는 제제의 중량에 대하여 5% 내지 80% 범위 내로 포함될 수 있다. HLB가 10 초과인 폴리옥실글리세리드 및 HLB가 10 미만인 폴리옥실글리세리드 사이의 비는 약 90/10 내지 약 10/90이다. 바람직하게는 비는 약 80/20 내지 약 20/80이며, 더욱 바람직하게는 약 40/60 내지 약 80/20이다. 조성물은 중량을 기준으로 약 27.18%의 활성 성분, 약 0.27%의 계면활성제, 약 14.51%의 HLB가 10 초과인 폴리옥실글리세리드 및 약 58.04%의 HLB가 10 미만인 폴리옥실글리세리드로 이루어질 수 있다. 125 ㎎ 캡슐 실시양태는 125 ㎎의 활성 성분, 약 1.2 ㎎의 계면활성제, 약 66.8 ㎎의 HLB가 10 초과인 폴리옥실글리세리드 및 약 267 ㎎의 HLB가 10 미만인 폴리옥실글리세리드로 이루어질 수 있다. 80 ㎎ 캡슐 실시양태는 약 80 ㎎의 활성 성분, 약 0.8 ㎎의 계면활성제, 약 42.7 ㎎의 HLB가 10 초과인 폴리옥실글리세리드 및 약 170.9 ㎎의 HLB가 10 미만인 폴리옥실글리세리드로 이루어질 수 있다. 본 발명의 실시양태는 임의의 상기 약학적 조성물이 캡슐, 예를 들면 LIcap 캡슐 중에 수용되는 제조 물품을 포함한다. 캡슐은 사이즈 1 또는 그보다 작은, 예를 들면 크기 2를 갖는 것이 바람직하다.

선택된 입자 크기 분포를 갖는 약학적 제제의 제조 방법 및 최적의 입자 크기 분포의 확인 방법

제분 공정

본 발명에 의한 방법에서, 제분 또는 분쇄 공정을 사용하여 활성 성분 또는 화학식 I에 의한 화합물의 입자 크기를 감소시킬 수 있다. 예를 들면, 제분 또는 분쇄 공정은 200 ㎛, 150 ㎛, 100 ㎛, 40 ㎛, 20 ㎛, 5 ㎛, 2 ㎛의 중앙 크기 또는 더 크거나 또는 더 작은 크기를 갖는 입자를 생성하는데 적절할 수 있다. 상기 제분 또는 분쇄 공정으로는 예를 들면 볼 제분, 롤 제분, 제트 제분, 습식 제분, 초음파 제분, 분쇄 및 조합을 들 수 있다. 예를 들면, 그러한 공정은 입자를 단단한 표면에 충돌시키거나 또는 입자를 고압으로 처리하고, 예를 들면 2개의 표면 사이에 입자를 압착시켜 입자 크기를 감소시킬 수 있다. 예를 들면, 제트 제분에서, 기체 흐름은 입자를 동반하며, 이를 고속으로 가속시킨다. 그 후, 입자는 다른 입자 및 벽면과 충돌하여 더 작은 입자로 파열시킨다. 예를 들면, 습식 제분에서, 입자를 액체와 조합하고, 생성된 슬러리를 고 전단 혼합기에 통과시켜 입자를 파열시킨다. 예를 들면, 초음파 제분에서, 예를 들면 슬러리 중의 입자는 초음파 방사에 노출시킨다. 초음파에 의해 유발된 공동화는 입자를 더 작은 크기의 입자로 파열시킬 수 있다.

입자를 제분 또는 분쇄 작업으로 처리하기 이전에 입자의 온도를 감온시키는 것이 이로울 수 있다. 예를 들면, 입자를 극저온 유체, 예컨대 액체 질소에 노출시키거나 또는 침지시켜 온도를 극저온 온도로 감온시킬 수 있다. 이와 같은 감온은 입자를 더 잘 부스러지게 하며, 제분 또는 분쇄 작업에서 감소된 그의 크기를 가질 가능성이 커질 수 있다. 제분 또는 분쇄 공정 후, 선택 공정, 예컨대 체 처리는 입자 크기의 범위를 좁히는데 사용될 수 있다.

결정화 공정

결정화는 약물 입자의 제조를 위한 주요 분리 및 정제 단계이다. 결정화는 또한 입자 크기를 조절하는데 사용될 수 있다. 결정화 중에 얻은 입자 크기 분포(PSD)는 결정화, 예컨대 핵화, 성장, 응집, 마모, 분해 등의 도중에 발생하는 다양한 기전의 조합에 의해 영향을 받을 수 있다. 결정화 중의 PSD의 제어는 원하는 생성물 성질을 달성하는데 있어서 중요하다. 입자 크기가 원하는 요건을 충족시키기 위하여 결정화 중에 일관되게 조절할 수 없을 경우, 추가의 가공 단계, 예컨대 건조 제분을 포함할 수 있다. 문헌[Braat, et al., Crystallization: Particle Size Control, Encyclopedia of Pharmaceutical Technology: Third Edition, Published on 02 October 2006].

암 치료 방법

신생물을 앓고 있는 사람, 포유동물 또는 동물 대상체의 증상의 치료, 진행의 지연, 재발의 예방 또는 그렇지 않다면 개선하는 본 발명에 의한 방법은, 신생물의 부피 성장을 느리게 하며, 신생물의 성장을 중지시키고, 신생물의 부피를 감소시키거나 및/또는 암성 신생물을 사멸시키도록 소정의 크기 분포의 입자를 포함하는 치료적 유효량의 약학적 조성물, 예를 들면 화학식 I에 의한 화합물, 예컨대 화합물 1, 순수한 화합물, 순수한 생성물 및/또는 순수한 약학적 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 이러한 방법에 의해 치료를 실시할 수 있는 신생물의 유형의 일부예로는 고형 종양, 악성 종양, 암, 난치성 암, 재발성 암, 전이성 종양, 암 줄기 세포를 포함하는 신생물, STAT3 경로가 연관되어 있는 신생물, 암종 및 육종을 들 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학식 I에 의한 화합물의 입자의 투여에 의해 치료를 실시할 수 있는 암은 식도암, 위식도 접합부암, 위식도 선암종, 연골육종, 대장암, 결장 선암종, 직장 선암종, 대장 선암종, 유방암, 난소암, 두경부암, 흑색종, 위 선암종 및 부신피질 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. STAT3 경로는 이들 암에 연루될 수 있다. CSC 경로는 이들 암에 연루될 수 있다.

본 발명의 실시양태에서, 치료적 유효량의 본 발명의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 프로드럭을 암을 진단받은 환자 또는 대상체에게 투여하며, 여기서 암은 위식도 접합부암, 식도암 또는 위식도 선암종이다. 임의로, 항유사분열제, 예컨대 파클리탁셀을 병용 요법을 위한 제2의/병용제로서 투여된다. 한 특징에서, 본 발명의 화합물을 대상체에게 총 약 160 ㎎ 내지 약 1,000 ㎎ 범위 내의 1일 2회 투여량으로, 바람직하게는 화합물의 투여 사이의 간격 약 4 시간 내지 약 16 시간, 더욱 바람직하게는 약 12 시간 범위 내로 BID로 투여된다. 임의의 병용-약물인 파클리탁셀은 대상체에게 약 40 ㎎/㎡ 내지 약 100 ㎎/㎡, 예를 들면 약 80 ㎎/㎡의 범위 내의 총 1주 투여량으로 투여될 수 있다.

암 줄기 세포

최근 수년간, 종양발생의 신규한 모델은 폭넓게 용인되었으며, 여기서 전체 종양 덩어리의 작은 분획만이 종양 내의 종양발생 활성에 기인하는 것으로 가설을 세운 반면, 종래의 또는 클로날 유전 모델은 변이된 종양 세포가 상기 종양발생 활성에 등등하게 기여하는 것으로 받아들여졌다. 신규한 모델에 의한 이러한 작은 분획의 종양발생 세포는 줄기-세포-유사 양으로 세포를 변형시키며, 이는 "암 줄기 세포"(CSC)로 지칭된다. Bonnet 및 Dick은 최초로 1990대에 생체내에서 급성 골수성 백혈병(AML)에서의 CSC의 존재를 입증하였다. 그들의 데이타는 사람 AML 세포의 작은 하위집단만이 면역결핍 마우스에게 이식시 AML을 전이시키는 능력을 가지며, 기타 AML 세포는 백혈병을 유발할 수 없다는 것을 나타냈다. 차후에, 이들 CSC는 동일한 세포성 마커인 CD34⁺/CD38^-를 원시 조혈 줄기 세포로서 갖는 것으로 나타났다. 문헌[Bonnet, D., Normal and leukaemic stem cell. Br J Haematol, 2005. 130(4): p. 469-79]. 그 후, 연구자들은 뇌, 유방, 피부, 전립선, 대장암 등의 것을 비롯한 다양한 유형의 종양에서 결정적으로 CSC가 발견되었다.

종양발생의 CSC 모델은 종양 이식을 설정하기 위하여 수만 또는 수십만의 종양 세포를 실험 동물에게 주사하여야만 하는 이유를 설명한다. 사람 AML에서, 이들 세포의 빈도는 10,000 중 1 미만이다. 문헌[Bonnet, D. and J.E. Dick, Human acute myeloid leukemia is organized as a hierarchy that originates from a primitive hematopoietic cell. Nat Med, 1997. 3(7): p. 730-7]. 주어진 종양 세포 집단에서 드물기는 하나, 상기 세포는 거의 모든 종양 유형에 존재한다는 증거가 증가하고 있다. 그러나, 암 세포주는 조직 배양액 중에서 성장하도록 구체적으로 변형된 암 세포의 하위집단으로부터 선택되므로, 암 세포주의 생물학적 및 기능적 성질은 급격한 변화를 겪을 수 있다. 그러므로, 모든 암 세포주가 CSC를 함유하는 것은 아니다.

암 줄기 세포는 정상의 줄기 세포와 다수의 유사한 형질을 공유한다. 예를 들면, CSC는 자기-재생 용량, 이른바 제한된 수의 분열과는 반대로, 통상적으로 기타 분열 중인 종양 세포보다 느린 속도로 추가의 종양발생 암 줄기 세포를 야기하는 능력을 갖는다. CSC는 또한 복수의 세포 유형으로 분화되는 능력을 갖는데, 이는 다수의 종양이 숙주 기관에 대하여 고유한 복수의 세포 유형을 함유할 뿐 아니라, 이질성이 종양 전이에서 통상적으로 보유되는 조직학적 증거를 설명한다. CSC는 종양발생, 암 전이 및 암 재발에 대하여 근본적으로 기인하는 것으로 입증되었다. CSC는 또한 종양 개시 세포, 암 줄기-유사 세포, 줄기-유사 암 세포, 고 종양발생 세포, 종양 줄기 세포, 고형 종양 줄기 세포 또는 고 악성 세포로 지칭된다.

암 줄기 세포의 존재는 미래의 암 치료 및 요법에 대한 기본적인 시사를 갖는다. 이들 시사는 질환 확인, 선택적 약물 표적화, 암 전이 및 재발의 예방 및 암과 싸우는 새로운 전략의 수립으로 나타난다.

현재의 암 치료의 효능은 시험의 초기 단계에서 종종 종양 수축의 크기, 즉 사멸되는 종양 덩어리의 양에 의해 측정된다. CSC는 매우 작은 비율의 종양을 형성하며, 그의 보다 분화된 후손에서보다는 크게 상이한 생물학적 특징을 지니므로, 종양 덩어리의 측정은 줄기 세포에 대하여 특이적으로 작용하는 약물에 대하여 반드시 선택될 수 없다. 사실상, 암 줄기 세포는 방사선요법에 대한 내성(XRT) 및 또한 화학요법제 및 표적화된 약물에 대한 난치성을 나타낸다. 문헌[Hambardzumyan, D., M. Squatrito and E.C. Holland, Radiation resistance and stem-like cells in brain tumor. Cancer Cell, 2006. 10(6): p. 454-6; Baumann, M., M. Krause and R. Hill, Exploring the role of cancer stem cells in radioresistance. Nat Rev Cancer, 2008. 8(7): p. 545-54; Ailles, L.E. and I.L. Weissman, Cancer stem cell in solid tumors. Curr Opin Biotechnol, 2007. 18(5): p. 460-6]. 정상의 체 줄기 세포는 자연적으로 화학요법제에 대한 내성을 가지며, 이들은 약물 및 DNA 복구 단백질을 펌핑시키는 다양한 펌프(예컨대 MDR)를 갖는다. 추가로, 이들은 또한 느린 세포 교대율을 갖는 한편, 화학요법제는 신속하게 복제중인 세포를 표적화한다. 정상 줄기 세포의 변이된 대응부인 암 줄기 세포는 또한 약물 요법 및 방사선 치료를 견디도록 하는 유사한 기전을 가질 수 있다. 환언하면, 통상의 화학요법 및 방사선요법은 분화되거나 또는 분화중엔 세포를 사멸시키며, 이는 새로운 고 종양발생 암 줄기 세포를 생성할 수 없게 되는 종양의 벌크를 형성한다. 다른 한편으로, 분화되거나 또는 분화중인 세포를 생성하는 암 줄기 세포의 집단은 본래 그대로 유지되며, 질환의 재발을 야기한다. 통상의 항암 요법에 대한 추가의 위험성은 화학요법 처치가 화합요법-내성 암 줄기 세포만을 남기며, 그 다음의 재발성 종양이 화학요법에 대한 내성을 갖게 될 것이라는 가능성이다.

생존하는 암 줄기 세포는 종양을 재증식하여 재발을 야기할 수 있으므로, 항암 요법은 CSC에 대한 전략을 포함하여야만 한다(WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 18 참조). 이는 잡초의 흙 부분의 덩어리를 절단하더라도 민들레가 재성장하는 것을 방해하기 위하여 뿌리째 뽑는 것과 유사하다. 문헌[Jones, R.J., W.H. Matsui and B.D. Smith, Cancer stem cells: are we missing the target? J Natl Cancer Inst, 2004. 96(8): p. 583-5]. 암 줄기 세포를 선택적으로 표적화하여 공격적인, 비-절제 가능한 종양 및 난치성 또는 재발성 암을 갖는 환자를 치료할 수 있을 뿐 아니라, 종양 전이 및 재발을 예방할 수 있다. 암 줄기 세포를 표적화하는 특이적 요법의 개발은 특히 전이성 암을 앓고 있는 환자의 경우 암 환자의 삶의 질 및 생존을 개선시킬 수 있다. 이와 같은 개발되지 않은 가능성을 해제하는 핵심은 암 줄기 세포 자기-재생 및 생존에 선택적으로 중요한 경로의 확인 및 인증이다. 불행하게도, 암에서의 종양발생 또는, 배아 및 성체 줄기 세포에서의 자기-재생에 근본적인 복수의 경로가 과거에 규명되기는 하였으나, 매우 적은 경로가 암 줄기 세포 자기-재생 및 생존에 대하여 확인 및 인증되었다.

또한, 암 줄기 세포의 확인 및 분리에 대한 다수의 연구가 이루어져 왔다. 주로 사용된 방법은 약물을 유출하는 CSC의 능력을 이용하거나 또는 암 줄기 세포와 관련된 표면 마커의 발현에 기초한다.

예를 들면, CSC는 다수의 화학요법제에 대하여 내성을 지니므로, CSC는 약물 유출 펌프, 예컨대 ABCG2(BCRP-1)(Ho, M.M., et al., Side population in human lung cancer cell lines and tumors is enriched with stem-like cancer cells. Cancer Res, 2007. 67(10): p. 4827-33; Wang, J., et al., Identification of cancer stem cell-like side population cells in human nasopharyngeal carcinoama cell line. Cancer Res, 2007. 67(8): p. 3716-24; Haraguchi, N., et al., Characterization of a side population of cancer cells from human gastrointestinal system. Stem Cells, 2006. 24(3): p. 506-13; Doyle, L.A. and D.D. Ross, Multidrug resistance mediated by the breast cancer resistance protein BCRP (ABCG2). Oncogene, 2003. 22(47): p. 7340-58; Alvi, A.J., et al., Functional and molecular characterisation of mammary side population cells. Breast Cancer Res, 2003. 5(1): p. R1-8) 및 기타 ATP 결합 카세트(ABC) 상과 구성원(Frank, N.Y., et al., ABCB5-mediated doxorubicin transport and chemoresistance in human malignant melanoma. Cancer Res, 2005. 65(10): p. 4320-33; Schatton, T., et al., Identification of cells initiating human melanomas. Nature, 2008. 451(7176): p. 345-9)을 거의 모든 곳에서 과발현시킨다는 것은 놀랍지 않다. 따라서, 조혈 및 백혈병 줄기 세포를 풍부하게 하는데 초기에 사용된 부(side)-집단(SP) 기법은 CSC를 확인 및 분리하는데 사용되었다(Kondo, T., T. Setoguchi and T. Taga, Persistence of a small subpopulation of cancer stem-like cells in the C6 glioma cell line. Proc Natl Acad Sci USA, 2004. 101(3): p. 781-6). Goodell et al.이 최초로 기재한 이러한 기법은 CSC 중에서 농후한 세포 집단을 구획 및 분리하기 위하여 형광 염료, 예컨대 획스트(Hoechst) 33342의 분별 ABC 전달체-의존성 유출을 이용한다(Doyle, L.A. and D.D. Ross, Multidrug resistance mediated by the breast cancer resistance protein BCRP(ABCG2). Oncogene, 2003. 22(47): p. 7340-58; Goodell, M.A., et al., Isolation and functional properties of murine hematopoietic stem cells that are replicating in vivo. J Exp Med, 1996. 183(4): p. 1797-806). 구체적으로, SP는 염료가 SP를 더 이상 펌핑시킬 수 없는 시점에서 베라파밀을 사용하여 약물 유출을 차단하여 밝혀진다.

연구자들은 또한 암 줄기 세포를 종양의 벌크로부터 식별하는 특이성 마커를 찾는 것에 집중하였다. 암 줄기 세포에 의한 대부분의 통상적으로 발현된 표면 마커로는 CD44, CD133 및 CD166을 들 수 있다. (Collins, A.T., et al., Prospective identification of tumorigenic prostate cancer stem cells. Cancer Res, 2005. 65(23): p. 10946-51; Li, C., et al., Identification of pancreatic cancer stem cells. Cancer Res, 2007. 67(3): p. 1030-7; Ma, S., et al., Identification and characterization of tumorigenic liver cancer stem/progenitor cells. Gastroenterology, 2007. 132(7): p. 2542-56; Prince, M.E., et al., Identification of a subpopulation of cells with cancer stem cell properties in head and neck squamous cell carcinoma. 1, 2007. 104(3): p. 973-8; Ricci-Vitiani, L., et al., Identification and expansion of 사람 colon-cancer-initiating cells. Nature, 2007. 445(7123): p. 111-5; Singh, S.K., et al., Identification of cancer stem cell in human brain tumors. Cancer Res, 2003. 63(18): p. 5821-8; Dalerba, P., et al., Phenotypic characterization of human colorectal stem cells. Proc Natl Acad Sci USA, 2007. 104(24): p. 10158-63). 주로 이들 표면 마커(들)의 분별 발현에 기초한 종양 세포 분류는 오늘날까지 기재된 주요 고 종양발생 CSC에 대하여 간주한다. 그러므로, 이들 표면 마커는 암 세포주로부터 및 종양 조직의 벌크로부터 암 줄기 세포의 확인 및 분리에 대하여 입증된다.

최근의 연구는 종양을 재생시키는 독점적인 능력을 갖는 암 줄기 세포(CSC)의 존재를 밝혀냈다. 이들 CSC는 거의 모든 종양 유형에 존재하며, 지속된 악성 성장, 암 전이, 재발 및 암 약물 내성과 기능적으로 관련되어 있다. CSC 및 그의 보다 분화된 후손은 크게 상이한 생물학적 특징을 갖는 것으로 보인다. 통상의 암 약물 스크리닝은 종양 덩어리의 양의 측정에 의존하며, 그리하여 이는 CSC에 대하여 특이적으로 작용하는 약물에 대하여 반드시 선택될 필요는 없다. 사실상, CSC는 표준 화학요법 및 방사선요법에 대한 내성을 지니며, 표준 항암 치료 후 농후해져서 암 난치성 및 재발을 초래하는 것으로 입증되었다. 이들 세포의 분리 방법으로는 그의 획스트 33342의 유출 능력에 의한 확인, 이들 세포가 발현되는 표면 마커, 예컨대 CD133, CD44, CD166 등에 의한 확인 및 그의 종양발생 성질에 의한 농후 등을 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 암 줄기 세포를 종양발생에 연결시키는 증가 중인 증거는 암 줄기 세포를 표적화하는 막대한 치료적 기회를 푼다.

CSC 연구에서 최근의 돌파구와 함께 본원에서 제공된 데이타는 본 발명이 CSC의 억제와 관련된 다수의 방법, CSC 및 불균질 암 세포 모두의 억제와 관련된 방법 및, 특이적으로 CSC를 갖는 암 또는 일반적으로 암을 치료하는 방법을 제공하도록 한다. 본 발명은 또한 관련 방법(예를 들면 제조 및 약물 후보 스크리닝), 물질, 조성물 및 키트를 제공한다. 상기 방법은 종양발생 CSC 세포로 분열시켜 그의 수를 더 이상 보충할 수 없도록, CSC가 자기-재생하는 것을 방지할 수 있다. 또는, 상기 방법은 CSC에서 또는 CSC와 불균질 암 세포 모두에서 암 사멸을 유도할 수 있다.

이러한 방법은 대상체의 암을 치료하는데 사용될 수 있다. 상기 치료에 대한 우수한 후보인 암으로는 식도암, 위식도 접합부암, 위식도 선암종, 연골육종, 대장암, 결장 선암종, 직장 선암종, 대장 선암종, 유방암, 난소암, 두경부암, 흑색종, 위 선암종 및 부신피질 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암(들)을 들 수 있다.

추가로, CSC는 기본적으로 종양발생, 암 전이 및 암 재발에 대하여 기인하는 것으로 입증되었으므로, CSC 또는, CSC와 불균질 암 세포 모두의 억제에 관한 본 발명의 임의의 방법은 전이성, 화학요법 또는 방사선요법에 대한 난치성이거나 또는 초기 치료 후 대상체에서 재발되는 암을 치료하기 위하여 실시될 수 있다.

일부 실시양태에서, 본 발명에 의한 암 줄기 세포 억제제는 화학식 1의 화합물, 화합물 1, 화합물 1의 다형태, WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 1에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태, WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 2에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태, 적어도 약 10.2° 2θ에서의 피크, 적어도 약 11.9° 2θ에서의 피크, 적어도 약 14.1° 2θ에서의 피크, 적어도 약 14.5° 2θ에서의 피크, 적어도 약 17.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 22.2° 2θ에서의 피크 및 적어도 약 28.1° 2θ에서의 피크 및 이들의 임의의 조합으로부터의 피크 2개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H75 나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태, WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 3에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태, 적어도 약 7.5° 2θ에서의 피크, 적어도 약 9.9° 2θ에서의 피크, 적어도 약 12.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 15° 2θ에서의 피크, 적어도 약 23° 2θ에서의 피크, 적어도 약 23.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 24.6° 2θ에서의 피크 및 적어도 약 28.4° 2θ에서의 피크 및 이들의 임의의 조합으로부터의 피크 2개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-(1-히드록시에틸)-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-클로로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-플루오로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-에틸-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 인산 모노-[1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐]에스테르, 인산 1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐 에스테르 디메틸 에스테르, 그의 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체 및 염 또는 용매화물의 다형태; 화학식 1의 화합물의 다형태, 화합물 1, 화합물 1의 다형태, WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 1에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태, WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 2에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태, 적어도 약 10.2° 2θ에서의 피크, 적어도 약 11.9° 2θ에서의 피크, 적어도 약 14.1° 2θ에서의 피크, 적어도 약 14.5° 2θ에서의 피크, 적어도 약 17.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 22.2° 2θ에서의 피크 및 적어도 약 28.1° 2θ에서의 피크 및 이들의 임의의 조합으로부터의 피크 2개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태, WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 3에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태, 적어도 약 7.5° 2θ에서의 피크, 적어도 약 9.9° 2θ에서의 피크, 적어도 약 12.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 15° 2θ에서의 피크, 적어도 약 23° 2θ에서의 피크, 적어도 약 23.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 24.6° 2θ에서의 피크 및 적어도 약 28.4° 2θ에서의 피크 및 이들의 임의의 조합으로부터의 피크 2개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-(1-히드록시에틸)-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-클로로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-플루오로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-에틸-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 인산 모노-[1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐]에스테르, 인산 1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐 에스테르 디메틸 에스테르, 그의 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체 및 염 또는 용매화물의 다형태; 또는 화학식 1의 화합물의 실질적으로 순수한 형태, 화합물 1, 화합물 1의 다형태, WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 1에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태, WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 2에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태, 적어도 약 10.2° 2θ에서의 피크, 적어도 약 11.9° 2θ에서의 피크, 적어도 약 14.1° 2θ에서의 피크, 적어도 약 14.5° 2θ에서의 피크, 적어도 약 17.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 22.2° 2θ에서의 피크 및 적어도 약 28.1° 2θ에서의 피크 및 이들의 임의의 조합으로부터의 피크 2개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태, WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 3에 명시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태, 적어도 약 7.5° 2θ에서의 피크, 적어도 약 9.9° 2θ에서의 피크, 적어도 약 12.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 15° 2θ에서의 피크, 적어도 약 23° 2θ에서의 피크, 적어도 약 23.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 24.6° 2θ에서의 피크 및 적어도 약 28.4° 2θ에서의 피크 및 이들의 임의의 조합으로부터의 피크 2개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-(1-히드록시에틸)-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-클로로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-플루오로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-에틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 인산 모노-[1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐]에스테르, 인산 1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐 에스테르 디메틸 에스테르, 그의 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체 및 염 또는 용매화물의 다형태; 2-(1-히드록시에틸)-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-클로로-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸-7-플루오로나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 2-에틸-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온, 인산 모노-[1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐]에스테르, 인산 1-(4,9-디옥소-3a,4,9,9a-테트라히드로-나프토[2,3-b]푸란-2-일)-비닐 에스테르 디메틸 에스테르, 그의 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 호변이성질체 및 염 또는 용매화물(또한 본원에서 "본 발명의 화합물"로서 지칭함)의 입자 형태이다.

본 발명은 암 줄기 세포를 억제시킬 수 있는 약물 후보를 확인하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 약물 후보는 CSC에서의 세포 사멸을 유발할 수 있거나 또는 적어도 그의 자기-재생을 억제할 수 있다. 추가의 실시양태에서, 약물 후보는 CSC에서의 세포 사멸을 유발시키고, 적어도 그의 자기-재생을 억제하고, 균질한 암 세포에서의 세포 사멸을 유발시킬 수 있다. 경로에서의 다양한 단계는 약물 후보를 스크리닝하기 위하여 표적화될 수 있다.

따라서, 또 다른 구체예에서, 본 발명의 화합물은 질병 또는 병태를 치료 또는 예방하기 위한 약학적 조성물을 제제화하는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 식도암, 위식도 접합부암, 위식도 선암종, 연골육종, 대장암, 결장 선암종, 직장 선암종, 대장 선암종, 유방암, 난소암, 두경부암, 흑색종, 위 선암종 및 부신피질 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

따라서, 한 구체예에서, 본 발명은 유효량의 본 발명의 화합물을 세포에 투여하는 암 줄기 세포의 억제 방법을 제공한다. CSC를 갖는 것으로 공지된 암은 상기 치료에 대한 우수한 후보가 되며, 그의 예로는 식도암, 위식도 접합부암, 위식도 선암종, 연골육종, 대장암, 결장 선암종, 직장 선암종, 대장 선암종, 유방암, 난소암, 두경부암, 흑색종, 위 선암종 및 부신피질 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암(들)을 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

추가로, CSC는 기본적으로 종양발생, 암 전이 및 암 재발에 기여하는 것으로 입증되었으므로, CSC를 억제하는 것에 관한 본 발명의 임의의 방법은 전이성, 화학요법 또는 방사선요법에 대한 난치성이며, 초기 치료 후 대상체에서 재발되는 암을 치료하기 위하여 실시될 수 있다.

본 발명의 일부 실시양태에서, 치료되는 암은 식도암, 위식도 접합부암, 위식도 선암종, 연골육종, 대장암, 결장 선암종, 직장 선암종, 대장 선암종, 유방암, 난소암, 두경부암, 흑색종, 위 선암종 및 부신피질 암종의 군으로부터 선택된다. 암은 STAT3, 나녹 및/또는 β-카테닌 경로의 기능부전과 연관될 수 있다.

한 구체예에서, 본 발명은 본 발명의 화합물을 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는, 대상체에서 암의 치료 방법을 제공한다. 암은 전이성, 난치성 또는 재발성일 수 있다. 대상체는 포유동물, 예를 들면 사람일 수 있다.

신생물을 앓고 있는 대상체(환자)에게 예를 들면 화학식 I에 의한 화합물의 입자의 투여에 의한 치료는 하기 병태에 대하여 나타낼 수 있다. 신생물은 화학요법, 방사선요법 또는 호르몬 요법에 의한 치료에 대하여 난치성일 수 있다. 신생물은 수술적 절제술로 처리할 수 없을 수 있다. 신생물은 대상체(환자)에서 재발될 수 있다. 암 줄기 세포는 신생물의 재발에 관련되어 있으며; 암 줄기 세포의 사멸 또는 명에 의한 방법에 의한 그의 자기-재생의 억제는 신생물이 그 자체를 재생하는 것을 방지할 수 있다. 나프토푸란의 입자의 투여에 의한 치료는 신생물의 부피 성장을 서행 또는 중지시킬 수 있거나 또는 예를 들면 신생물 세포의 사멸의 유발, 신생물 세포의 성장 및/또는 분열의 억제 및/또는, 신생물 세포를 선택적으로 사멸시킬 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 의한 치료는 신생물의 세포의 세포 사멸을 유발할 수 있다. 예를 들면, 치료는 신생물 세포의 STAT3, 나녹 및/또는 β-카테닌 경로를 억제하는 작용을 할 수 있다.

예를 들면, 본 발명의 화합물의 입자를 신생물을 앓고 있는 대상체(환자)에게 투여하는 치료는 신생물의 재발을 방지하거나 또는 수술적 절제술에 대한 보조 요법으로서 사용될 수 있다.

예를 들면, 본 발명의 화합물의 입자를 포함하는 약학적 조성물은 치료의 간편한 형태이므로 경구 투여될 수 있다. 예를 들면, 약학적 조성물은 1일 4회 초과로 경구 투여될 수 있다. 대안으로, 약학적 조성물은 정맥내 또는 복강내 투여될 수 있다.

추정되는 바이오마커를 사용한 환자 스크리닝

세포성 핵에서의 인산화 STAT3(p-STAT3) 확실성(positivity) 및 β-카테닌 발현이 둘 다 개별적으로 또는 병용하여 본 발명의 화합물을 사용한 치료 효능의 더 높은 가능성을 위한 예측성 바이오마커로서 작용한다는 발견(실시예 9 및 10 참조)에 기초하여, 본 발명은 본 발명의 화합물을 수반하는 암 치료의 추천에 대하여 환자를 스크리닝하는 방법을 제공한다. 본원의 데이타는 치료전 종양 조직에서의 p-STAT3의 레벨 및 본 발명의 화합물을 사용한 생존 기회 또는 치료 성공 사이의 직접적인 상관관계를 나타낸다. 환언하면, 본 발명의 화합물 및 관련 조성물을 사용한 1회 치료에서 적어도 대장암(CRC) 환자에서 치료 전 암 환자에서 발견되는 p-STAT3의 레벨이 높을수록, 전체 생존율(OS)은 높다(도 3b). 따라서, 본 발명은 선택된 환자 집단에서의 암의 치료 또는 치료를 위한 잠재적 암 환자의 스크리닝 방법을 제공하며, 그러한 방법은 암(예를 들면 대장 선암종)을 진단받은 환자 후보자로부터 얻은 생물학적 샘플(예를 들면 치료전 종양 조직) 중의 인산화 STAT3(p-STAT3)의 레벨을 측정하는 단계; 환자 후보자의 p-STAT3 레벨이 기준 레벨보다 높은지를 확인하는 단계; 환자 후보자에게 치료적 유효량의 본 발명의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 프로드럭을 투여하는 단계를 포함한다. 기준 레벨은 상이한 인구학적 부문에 대하여 상이할 수 있으며, 당업자에 의해 통상의 실험을 통하여 결정될 수 있다.

유사하게, 본원의 데이타가 β-카테닌의 발현 또는 국재화의 레벨 사이의 직접적인 상관관계를 나타내므로, 종양유전자는 세포핵에서의 STAT3 및, 본 발명의 화합물을 사용한 생존 또는 치료 성공의 가능성과 밀접한 관계가 있다. 환언하면, 암 환자, 적어도 CRC 환자에서의 세포막과는 반대로, 암 세포핵에서의 β-카테닌의 발현 레벨이 높을수록, 전체 생존율(OS)은 높다(도 4B). 따라서, 본 발명은 암을 진단받은 환자 후보자로부터 얻은 생물학적 샘플(예를 들면 치료 이전의 종양 조직)에서 β-카테닌 발현의 부위를 검출하는 단계; 유의적인 β-카테닌 발현이 환자 후보자로부터의 샘플 중의 세포핵에서 검출되는지를 확인하는 단계; 및 환자 후보자에게 치료적 유효량의 본 발명의 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 프로드럭을 투여하는 단계를 포함하는, 선택된 환자 집단에서의 암의 치료 또는 치료를 위한 잠재적 암 환자의 스크리닝 방법을 제공한다. β-카테닌에 대한 핵 발현이 임상적으로 유의적인 것으로 간주되는 레벨은 상이한 인구학적 부문에 대하여 상이할 수 있으며, 당업자는 통상의 실험에 의해 결정할 수 있다.

본 발명은 암 줄기세포와 관련된 바이오마커 1종 이상의 발현의 레벨을 검출하여 본 개시내용의 화합물의 치료적 투여에 적절한 환자 집단을 확인 또는 그렇지 않다면 개선, 예를 들면 계층화시키는 키트 및/또는 이를 위한 키트를 제공한다. 본 개시내용의 방법 및/또는 키트에서, 1종 이상의 암 줄기세포 마커의 발현 레벨은 환자 또는 환자로부터의 샘플 중에서 검출되며, 환자 또는 샘플이 발현의 대조 레벨에 비하여 1종 이상의 암 줄기세포 마커의 증가된 레벨을 갖는 경우, 환자에게 본 개시내용의 화합물의 치료적 투여량을 투여한다. 이들 방법의 일부 실시양태에서, 상기 방법은 생체내 방법이다. 이들 방법의 일부 실시양태에서, 상기 방법은 계내 방법이다. 이들 방법의 일부 실시양태에서, 상기 방법은 생체외 방법이다. 이들 방법의 일부 실시양태에서, 상기 방법은 시험관내 방법이다.

암 줄기세포 마커의 임상 관련성을 이해하고, 본 발명의 화합물에 대한 그의 예측성 반응을 확인하는 것은 본원에서 임상적 잇점을 가장 많이 유도할 수 있는 환자를 선택하여 임상적 개발을 뒷받침하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 1종 이상의 공지의 암 줄기세포 마커(들), 예를 들면 p-STAT3 및/또는 기타 암 줄기 세포 관련 단백질, 예컨대 β-카테닌 및 나녹의 발현을 사용한다. 이들 단백질 모두는 임의의 각종 당업계에 공지된 기법을 사용하여 쉽게 검출될 수 있다. 일부 실시양태에서, 암 줄기세포 마커는 항체를 사용한 면역조직화학으로 검출된다. 본 발명의 화합물을 사용한 단계 I 시험으로부터 수집한 아키발(archival) 조직 샘플을 사용하여 본 발명의 화합물에 대한 환자 반응은 바이오마커 상태에 기초하여 분석하였다. 본 발명의 화합물을 사용하여 처치 CRC 환자의 분석은 p-STAT3 또는 나녹의 낮거나 또는 음성인 레벨을 갖는 환자에 비하여 높은 레벨의 p-STAT3 또는 나녹을 갖는 환자에 대한 증가된 생존의 경향을 입증하였다. 세포막에 국부화된 β-카테닌을 갖는 환자에 비하여 핵 β-카테닌 국재화를 갖는 환자의 경우 생존에서의 유의적인 개선이 검출되었다. HR=0.043, p값 <0.001. 추가의 증거로서, 암 세포의 패널을 스크리닝하는 시험관내 실험에서, 핵 β-카테닌을 갖는 세포주는 본 발명의 화합물에 대하여 더 낮은 IC₅₀을 나타낸다. 추가로, 본 발명의 화합물에 의한 STAT3의 억제는 암 세포주 그리고 사람 CRC 이종이식 마우스 모델 모두에서 β-카테닌 단백질 레벨을 감소시킨다. 그래서, STAT3 활성화는 핵 β-카테닌 조절에 관여한다. 게다가, β-카테닌 상태는 본 발명의 화합물에 대한 CRC 환자의 반응성을 예측하기 위한 바이오마커이다.

상기 치료 방법의 다양한 실시양태에서, 암은 식도암, 위식도 접합부암, 위식도 선암종, 연골육종, 대장암, 결장 선암종, 직장 선암종, 대장 선암종, 유방암, 난소암, 두경부암, 흑색종, 위 선암종 및 부신피질 암종 중 하나일 수 있다. 암은 난치성, 재발성 또는 전이성일 수 있다.

약물 요법, 투여량 및 간격

본 발명에 의한 방법에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 약 20 ㎎ 내지 약 2,000 ㎎, 약 100 ㎎ 내지 약 1,500 ㎎, 약 160 ㎎ 내지 약 1,400 ㎎ 또는 약 180 ㎎ 내지 약 1,200 ㎎ 범위 내의 총 1일 투여량일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 약 200 ㎎ 내지 약 1,500 ㎎ 또는 약 360 ㎎ 내지 1,200 ㎎ 범위 내의 총 1일 투여량이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 약 400 ㎎ 내지 약 1,000 ㎎ 범위 내의 총 1일 투여량이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 약 1,000 ㎎의 총 1일 투여량이다.

각각의 투여 사이의 간격은 요건, 예컨대 조성물의 약물동태학, 유체 또는 식품의 섭취시 또는 섭취하지 않은 상태의 약물 대사, 내약성 및 기타 약물 복용 충실도 요인(예를 들면 간편성)에 의존하여 변동될 수 있거나 또는 일정하게 유지될 수 있다. 바람직한 간격은 최소의 부작용 효과를 야기하면서 체내 약학적 조성물의 유효 레벨을 유지한다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이의 간격은 약 4 시간 내지 약 24 시간 범위 내이다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이의 간격은 약 8 시간 내지 약 14 시간 범위 내이다. 일부 실시양태에서, 각각의 투여 사이의 간격은 약 10 시간 내지 약 13 시간 범위 내이거나 또는 약 12 시간이다. 따라서 이들 실시양태에서, 화합물은 대상체에게 예를 들면 요법의 기간에 걸쳐 평균 매일 약 2회로 투여된다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 약 160 ㎎ 내지 약 960 ㎎ 또는 약 1,000 ㎎ 범위 내의 총 1일 투여량이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 약 160 ㎎, 약 320 ㎎, 약 640 ㎎, 약 800 ㎎ 및 약 960 ㎎으로 이루어진 군으로부터 선택되는 총 1일 투여량이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 대상체에게 약 960 ㎎의 총 1일 투여량으로 투여된다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 BID 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 대상체에게 약 80 ㎎ BID 내지 약 480 ㎎ BID 범위 내의 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 대상체에게 약 80 ㎎ BID, 약 160 ㎎ BID, 약 320 ㎎ BID, 약 400 ㎎ BID 및 약 480 ㎎ BID로 이루어진 군으로부터 선택되는 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 대상체에게 약 480 ㎎ BID의 투여량으로 투여된다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 BID 투여되며, 투여 사이의 시간은 투여 사이의 약 4 시간 내지 투여 사이의 약 16 시간 범위 내이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 BID 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 4 시간 이상, 5 시간 이상, 6 시간 이상, 7 시간 이상, 8 시간 이상, 9 시간 이상, 10 시간 이상, 11 시간 이상, 12 시간 이상, 13 시간 이상, 14 시간 이상, 15 시간 이상 및/또는 16 시간 이상이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 대상체에게 약 80 ㎎ BID 내지 약 480 ㎎ BID 범위 내의 투여량으로 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 투여 사이의 약 4 시간 내지 투여 사이의 약 16 시간 범위 내이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 BID 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 4 시간 이상, 5 시간 이상, 6 시간 이상, 7 시간 이상, 8 시간 이상, 9 시간 이상, 10 시간 이상, 11 시간 이상, 12 시간 이상, 13 시간 이상, 14 시간 이상, 15 시간 이상 및/또는 16 시간 이상이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 대상체에게 약 80 ㎎, 약 160 ㎎, 약 320 ㎎ BID, 약 400 ㎎ BID 및 약 480 ㎎ BID로 이루어진 군으로부터 선택되는 투여량으로 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 투여 사이의 약 4 시간 내지 투여 사이의 약 16 시간 범위 내이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 BID 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 4 시간 이상, 5 시간 이상, 6 시간 이상, 7 시간 이상, 8 시간 이상, 9 시간 이상, 10 시간 이상, 11 시간 이상, 12 시간 이상, 13 시간 이상, 14 시간 이상, 15 시간 이상 및/또는 16 시간 이상이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 대상체에게 약 480 ㎎ BID의 투여량으로 투어되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 투여 사이의 약 4 시간 내지 투여 사이의 약 16 시간 범위 내이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 대상체에게 약 80 ㎎ BID의 투여량으로 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 투여 사이의 약 4 시간 내지 투여 사이의 약 16 시간 범위 내이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 대상체에게 약 400 ㎎ BID의 투여량으로 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 투여 사이의 약 4 시간 내지 투여 사이의 약 16 시간 범위 내이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 대상체에게 약 320 ㎎ BID의 투여량으로 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 투여 사이의 약 4 시간 내지 투여 사이의 약 16 시간 범위 내이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 BID 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 4 시간 이상, 5 시간 이상, 6 시간 이상, 7 시간 이상, 8 시간 이상, 9 시간 이상, 10 시간 이상, 11 시간 이상, 12 시간 이상, 13 시간 이상, 14 시간 이상, 15 시간 이상 및/또는 16 시간 이상이다.

일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 대상체에게 약 480 ㎎ BID의 투여량으로 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 투여 사이의 약 12 시간이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 대상체에게 약 80 ㎎ BID의 투여량으로 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 투여 사이의 약 12 시간이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 대상체에게 약 400 ㎎ BID의 투여량으로 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 투여 사이의 약 12 시간이다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 대상체에게 약 320 ㎎ BID의 투여량으로 투여되며, 화합물의 투여 사이의 시간은 투여 사이의 약 12 시간이다.

본 발명의 화합물 또는 그의 약학적 조성물은 경로, 예를 들면 경구, 정맥내 또는 복강내 중 임의의 하나 또는 그의 조합에 의해 투여될 수 있다. 예를 들면, 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 경구 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 라우로일 폴리옥실글리세리드(예, 겔루시르) 및 트윈 80을 포함하는 제제 또는 라우로일 폴리옥실글리세리드(예, 겔루시르), 리놀레오일 폴리옥실글리세리드(예, 라브라필) 및 계면활성제, 예컨대 나트륨 라우릴 술페이트(SLS) 또는 나트륨 도데실 술페이트(SDS)를 포함하는 제제로 경구 투여될 수 있다.

본 발명의 화합물은 2 시간 이상 내지 24 시간 이하의 시간 동안 약 0.002 μM 내지 약 30 μM 범위 내의 화합물의 대상체, 예를 들면 환자에서의 혈중 농도를 달성하는 투여량으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 2 시간 이상 및 24 시간 미만 동안 약 0.2 μM, 0.5 μM, 1.0 μM, 1.5 μM, 2.0 μM, 2.5 μM, 3.0 μM 4.0 μM, 5.0 μM, 6.0 μM, 7.0 μM, 8.0 μM, 9.0 μM, 10.0 μM, 15.0 μM 이상에 해당하는 2 시간 이상 내지 24 시간 이내의 시간 동안 적어도 약 0.2 μM 내지 약 1 μM의 범위 내의 화합물의 대상체에서의 혈중 농도를 달성하는 투여량으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 2 시간 이상 내지 24 시간 미만 동안 약 1.0 μM, 1.5 μM, 2.0 μM, 3.0 μM, 5.0 μM, 10.0 μM, 15.0 μM 이상에 해당하는 화합물의 대상체에서의 혈중 농도를 달성하는 투여량으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 2 시간 이상 및 24 시간 미만 동안 약 2.0 μM, 3.0 μM, 5.0 μM, 10.0 μM 이상에 해당하는 화합물의 대상체에서의 혈중 농도를 달성하는 투여량으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 2 시간 이상 및 24 시간 미만 동안 약 3.0 μM 또는 5.0 μM 이상에 해당하는 화합물의 대상체에서의 혈중 농도를 달성하는 투여량으로 투여될 수 있다.

본 발명의 화합물은 24 시간 이내에 적어도 약 0.002 μM.h 내지 약 300 μM.h 범위 내의 화합물의 대상체, 예를 들면 환자에서의 혈중 농도를 달성하는 투여량으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 2 시간 이상 및 24 시간 미만 동안 약 0.2 μM, 0.5 μM, 1.0 μM, 1.5 μM, 2.0 μM, 2.5 μM, 3.0 μM 4.0 μM, 5.0 μM, 6.0 μM, 7.0 μM, 8.0 μM, 9.0 μM, 10.0 μM, 15.0 μM 이상에 해당하는 대상체에서의 24 시간 이내의 곡선 아래의 면적(AUC24)을 달성하는 투여량으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 2 시간 이상 및 24 시간 미만 동안 약 1.0 μM, 1.5 μM, 2.0 μM, 3.0 μM, 5.0 μM, 10.0 μM, 15.0 μM 이상에 해당하는 화합물의 대상체에서의 혈중 농도를 달성하는 투여량으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 2 시간 이상 및 24 시간 미만 동안 약 2.0 μM, 3.0 μM, 5.0 μM, 10.0 μM 이상에 해당하는 화합물의 대상체에서의 혈중 농도를 달성하는 투여량으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 2 시간 이상 및 24 시간 미만 동안 약 3.0 μM 또는 5.0 μM 이상에 해당하는 화합물의 대상체에서의 혈중 농도를 달성하는 투여량으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 약 2 μM*hr, 10 μM*hr, 20 μM*hr, 30 μM*hr, 40 μM*hr, 50 μM*hr, 60 μM*hr, 70 μM*hr, 80 μM*hr, 90 μM*hr, 100 μM*hr, 125 μM*hr, 150 μM*hr, 200 μM*hr, 250 μM*hr, 300 μM*hr, 400 μM*hr 및 500 μM*hr 이상에 해당하는 대상체에서의 24 시간 이내의 곡선 아래의 면적(AUC_0-24시간)을 달성하는 투여량으로 투여될 수 있다.

대상체(환자)의 상태가 그와 같이 요구될 경우, 약학적 조성물의 투여량은 연속 또는 박동성 주입으로서 투여될 수 있다. 치료 기간은 잇점이 지속되는 한 수십일, 수년, 수개월, 수주 또는 수일일 수 있다. 상기 범위는 단지 가이드라인으로서 제공되며, 최적화된다.

본 발명에 의한 방법에서, 신생물의 세포는 약학적 조성물을 투여하여 선택적으로 사멸되며, 그리하여 화합물의 혈중 몰 농도는 적어도 유효 시간 정도로 길며, 유해 시간보다 짧은 제1의 연속 기간 동안 유효 농도 이상이며, 유해 농도보다 낮다. 혈중 몰 농도는 제1의 연속 기간 후 유효 농도보다 낮을 수 있다. 유효 농도는 충분히 높은 온도일 수 있어서 신생물 세포, 예를 들면 암 세포가 사멸된다. 유효 기간은 충분히 길 수 있어서 신생물 세포, 예를 들면 암 세포가 사멸된다. 유해 농도는 정상 세포를 손상 또는 사멸시키는 농도일 수 있다. 유해 시간은 정상 세포가 손상 또는 사멸되기에 충분히 긴 시간일 수 있다. 예를 들면, 유효 농도는 약 0.02 μM, 약 0.05 μM, 약 0.1 μM, 약 0.2 μM, 약 0.5 μM, 약 1 μM, 약 3 μM, 약 10 μM 또는 약 20 μM 이상일 수 있다. 예를 들면, 비-유해 농도는 약 3 μM, 약 10 μM, 약 14 μM, 약 30 μM 또는 약 100 μM 이하일 수 있다. 예를 들면, 유효 기간은 약 2 시간, 약 4 시간, 약 6 시간, 약 12 시간, 약 24 시간 또는 약 48 시간 이상일 수 있다. 예를 들면, 정상 세포에 대한 비-유해 노출을 달성하기 위하여, 화합물 1의 약물 농도는 약 12 시간, 약 24 시간 이내에 혈액으로부터 실질적으로 청소되어야 한다. "혈액으로부터의 실질적으로 청소"는 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 80% 이상, 약 90% 이상까지의 혈중 약물 농도 감소를 의미한다. 예를 들면, 유효 농도는 화합물을 일정 시간 동안 투여시 암 세포의 IC₅₀을 초과하는 농도일 수 있다. 예를 들면, 유효 시간은 화합물을 적어도 유효 농도에서 투여시 암세포를 선택적으로 억제 또는 사멸시키는 시간일 수 있다. 예를 들면, 유해 농도는 화합물이 임의의 시간 동안 투여시 정상 세포의 IC₅₀을 초과하는 농도일 수 있다. 예를 들면, 유해 시간은 화합물을 유효 농도로 투여시 정상 세포뿐 아니라 암세포가 억제 또는 사멸되는 시간일 수 있다.

당업자는 신생물 세포, 예컨대 암 세포를 선택적으로 사멸시키고, 정상 세포를 남기는데 필요한 것으로 보이는 본원에 기재된 "선택적 약물동태학 프로파일"(SPP)을 달성하도록 투여량 및 빈도를 선택하여 약학적 조성물을 투여할 수 있다. SPP의 상기 고려는 또한 약학적 조성물, 예를 들면 입자 크기 분포 및 입자 형상 분포의 설계를 안내할 수 있다.

본 발명에 의한 방법에서, 약학적 조성물은 투여 형태, 예컨대 정제, 환제, 캡슐(경질 또는 연질), 당의정, 분말, 과립, 현탁액, 액제, 겔, 카세제, 트로키, 로젠지, 시럽, 엘릭시르, 에멀젼, 수중유 에멀젼, 유중수 에멀젼 또는 물약으로 경구 투여된다.

최적의 입자 크기 분포의 확인

본 발명에 의한 방법에서, 신생물을 앓고 있는 사람, 포유동물 또는 동물을 치료하기 위한 화학식 I에 의한 화합물, 화합물 1, 화합물 1의 다형태 및/또는 화합물 1의 실질적으로 순수한 형태의 최적의 입자 크기 분포는 하기와 같이 측정될 수 있다. 화합물을 포함하는 입자의 하나 이상의 세트를 생성할 수 있다. 입자의 세트 제조시, 예를 들면 고체 화합물의 샘플의 입자 크기는 예를 들면 화합물을 용해시키고, 용액을 분무시키고, 화합물을 용해시키고 및 용액을 초음파 처리하고, 고체 화합물을 볼 제분시키고, 고체 화합물을 롤 제분시키고, 고체 화합물을 분쇄하고 및/또는 고체 화합물을 체질 처리하여 감소될 수 있다. 입자의 하나 이상의 세트의 입자 크기 분포는 당업자에게 공지된 방법 또는 방법의 조합에 의해 측정될 수 있다. 예를 들면, 입자 크기 분포는 예컨대 체 분석, 광학 현미경 계수, 전자 현미경 계수, 전기저항 계수, 침강 시간, 레이저 회절 및/또는 음향 분광법 등의 기법, 또다른 기법 또는 기법의 조합을 사용하여 측정될 수 있다. 입자의 하나 이상의 세트는 소정의 농도에서, 소정의 시간 동안 신생물 세포 및 정상 세포에 투여할 수 있다. 신생물 세포 및 정상 세포의 활력의 대사, 분열 및/또는 기타 지표에 대한 입자의 효과가 관찰될 수 있다. 신생물 세포에 대한 입자의 관찰된 효과는 입자의 각각의 세트에 효율성 평가를 할당하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, 신생물 세포의 대사 및/또는 분열을 억제하고, 신생물 세포를 손상 또는 사멸시키거나 또는 그렇지 않을 경우 높은 항종양 활성을 나타내는 입자의 세트는 높은 효율성 평가를 할당할 수 있다. 정상 세포에 대한 입자의 관찰된 효과는 각각의 입자 세트에 독성 평가를 할당하는데 사용될 수 있다. 예를 들면, 정상 세포의 대사 및/또는 분열을 억제하거나 또는 정상 세포를 손상 또는 사멸시키거나 또는 정상 세포가 그렇지 않을 경우 입자 세트의 낮은 내약성을 나타내는 입자의 세트는 높은 독성 평가를 할당할 수 있다.

예를 들면, 입자의 세트는 신생물 세포 및 정상 세포에 시험관내 투여될 수 있다. 예를 들면, 효율성 평가는 신생물 세포의 IC₅₀의 작용에 해당하거나, 이에 비례하거나 또는 단조 증가될 수 있다. 예를 들면, 독성 평가는 정상 세포의 IC₅₀의 작용에 해당하거나, 이에 비례하거나 또는 단조 증가될 수 있다.

예를 들면, 입자의 세트는 시험 동물에서 신생물 세포 및 정상 세포에 생체내 투여할 수 있다. 예를 들면, 테스트 동물은 포유동물, 영장류, 마우스, 래트, 기니 피그, 토끼 또는 개일 수 있다. 예를 들면, 효율성 평가는 입자 세트의 투여후 신생물 세포의 부피 감소의 작용에 해당하거나, 이에 비례하거나 또는 단조 증가될 수 있다. 예를 들면, 독성 평가는 입자의 세트의 투여 후 시험 동물의 덩어리 감소의 작용에 해당하거나, 이에 비례하거나 또는 단조 증가될 수 있다. 예를 들면, 입자의 세트는 임상 실험에서 사람에게 투여될 수 있다. 신생물의 치료 방법은 화학식 I에 의한 화합물, 화합물 1, 화합물 1의 다형태 및/또는 화합물 1의 실질적으로 순수한 형태의 입자 세트의 치료적 유효량을 신생물을 앓고 있는 사람, 포유동물 또는 동물에게 투여하는 것을 포함할 수 있다. 화합물, 화학식 I의 화합물, 화합물 1, 화합물 1의 다형태 및/또는 화합물 1의 실질적으로 순수한 형태의 입자를 동물 또는 사람에게 또는 세포에 시험관내 투여하기 이전에, 입자는 약학적으로 허용 가능한 부형제 중에 현탁될 수 있다.

제1의 입자 크기 분포를 갖는 입자의 각각의 세트의 효율성 평가 및/또는 독성 평가는 제1의 입자 크기 분포와는 상이한 입자 크기 분포를 갖는 입자의 또 다른 세트 또는 세트들의 효율성 평가 및/또는 독성 평가와 비교할 수 있다. 높은 효율성 평가 및 낮은 독성 평가를 갖는 화합물의 입자의 세트는 신생물, 예를 들면 암, 세포를 억제 또는 사멸시키지만, 정상 세포는 남기기에 효과적일 수 있다. 당업자는 입자의 1종 이상의 다른 세트보다 더 큰 효율성 평가, 더 낮은 독성 평가 및/또는 더 큰 가중 효율성 평가 및 독성 평가 합을 갖는 최적의 입자의 세트를 최적의 세트로서 선택될 수 있다(예를 들면, 효율성 평가는 양의 계수로 가중될 수 있으며, 독성 평가는 음의 계수로 가중될 수 있다). 당업자는 입자, 예를 들면, 독성 평가에 대한 효율성 평가의 가중비 및 가중 효율성 평가의 합을 갖는 입자의 최적의 세트를 선택하는 또 다른 기준을 사용할 수 있다. 입자의 최적의 세트의 입자 크기 분포는 테스트한 화합물에 대한 최적의 입자 크기 분포를 고려할 수 있다. 최적의 입자 크기 분포는 또 다른 화합물, 예를 들면 화합물 1이 아닌 화학식 I에 의한 화합물보다 한 화합물, 예를 들면 화합물 1에 대하여 상이할 수 있다. 주어진 화합물에 대한 최적의 입자 크기 분포는 시험관내 세포, 작은 시험 동물 및 커다란 시험 동물에게 투여에 의해 측정 시상이할 수 있다. 그러나, 주어진 화합물을 유기체에게 시험관내 또는 생체내 투여에 의해 결정된 최적의 입자 크기 분포는 또 다른 화합물에 대한 입자 크기 분포 또는 또 다른 유기체에게 투여를 위하여 합리적인 출발점을 나타낼 수 있다.

화학식 I의 화합물, 화합물 1, 화합물 1의 다형태 및/또는 화합물 1의 실질적으로 순수한 형태의 입자의 최적의 세트는 신생물 세포의 복제 또는 확산을 감소 또는 억제시키기 위한 조성물에 포함될 수 있다.

실시예

본 발명의 각종 특징을 추가로 예시하기 위하여 하기에 실시예를 제공한다. 실시예는 또한 본 발명을 실시하기 위한 유용한 방법을 예시한다. 이들 실시예는 청구된 발명을 한정하지 않는다.

실시예 1: 나프토푸란 화합물의 제조

나프토푸란 화합물(2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온)의 제조 절차를 하기에 요약한다:

단계 1: 브롬화

기계적 교반기, 온도계 및 첨가 깔때기가 장착된 2 ℓ 3목 둥근 바닥 플라스크에 3-부텐-2-온(451.2 g)을 가한다. 첨가 깔때기에 브롬(936.0 g)을 첨가하였다. 플라스크내의 내용물을 -5℃로 냉각시킨 후, 격렬히 교반하고, 온도를 -5℃에서 유지하면서 브롬을 플라스크에 30 분에 걸쳐 적하한다. 혼합물을 추가의 15 분 동안 -5℃에서 교반한 후, 4개의 동일한 부분으로 분할한다.

단계 2: 탈브롬화

테트라히드로푸란(2,133.6 g)과 함께 혼합물의 각각의 부분을 기계적 교반기, 온도계 및 첨가 깔때기가 장착된 22 ℓ 4목 둥근 바닥 플라스크에 가한다. 첨가 깔때기에 DBU(1,3 디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔, 222.9 g)를 가한다. 격렬히 교반하면서 온도를 0℃-5℃에서 유지하면서 30 분에 걸쳐 DBU를 적하한다. 혼합물을 추가의 15 분 동안 0℃-5℃에서 교반한다.

단계 3: 커플링 반응

그 후, 2-히드록시-1,4-나프토푸란(231 g)을 플라스크에 첨가한다. 추가의 DBU(246.0 g)를 첨가 깔때기에 가한 후, 반응 혼합물의 온도가 40℃를 초과하지 않는 속도로 플라스크내의 혼합물에 적하한다. DBU의 첨가를 완료한 후, 생성된 혼합물을 밤새 실온에서 교반하고, 반응 혼합물의 샘플을 HPLC 분석을 위하여 취한다.

단계 4: 결정화

반응 혼합물에 물(10.8 ℓ)을 가하고, 생성된 혼합물을 0℃-3℃로 30 분 이상 동안 냉각시킨 후, 진공 필터에 의해 여과한다. 여과된 고체를 5% 수성 중탄산나트륨(3 ℓ), 물(3 ℓ), 1% 수성 아세트산(3 ℓ) 및 에탄올 2회(2×1 ℓ)로 연속적으로 헹군다

헹군 고체를 저장하고, 다른 배취로부터 함께 푸울링시킨다. 합한 미정제 생성물(28.73 ㎏)을 에틸 아세테이트(811.7 ㎏)와 함께 기계적 교반기, 온도계 및 응축기가 장착된 500 갤런 용기에 가한다. 질소 대기 하에서, 혼합물을 2 시간 동안 환류 가열한 후(72℃), 활성탄 층을 함유하는 10 마이크론 카트리지 필터로 여과하여 불용물을 제거한다.

새로운 고온의 에틸 아세테이트(10 ㎏)를 사용하여 용기, 전달 라인 및 필터를 헹군다. 합한 여과액을 0-5℃로 냉각시키고, 이 온도에서 2 시간 동안 유지한 후, 20 인치 뷰흐너 필터로 여과한다. 여과한 고체 생성물을 0-5℃ 에틸 아세테이트(5.7 ㎏)로 헹구고, 진공 하에서 40℃에서 일정한 중량으로 건조시킨다. 나머지 여과액을 증발에 의해 63%까지 부피를 감소시키고, 결정화 공정을 다시 반복하여 생성물의 제2의 수확물을 생성하고, 이를 생성물의 제1의 수확물과 동일한 조건하에서 건조시킨다.

나프토푸란 화합물의 로트는 하기 절차를 수행하여 얻는다. 화합물의 로트에 대한 순도는 95.44 면적%(HPLC)이다.

실시예 2: 나프토푸란 화합물의 제조

나프토푸란 화합물(2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온)의 제조를 위한 또 다른 절차는 하기와 같이 요약한다:

단계 1: 브롬화

12 ℓ RBF(둥근 바닥 플라스크)(UV 필터를 사용하여 광을 차단시킴)에 MVK(2,160 ㎖, 26.4 mol)를 가하고, 드라이아이스/아세톤 배쓰내에서 -9.6℃로 냉각시킨다. T=<-2.6℃(T_max)를 유지하면서 브롬(1,300 ㎖, 25.3 mol)을 서서히 2 시간 20 분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 황색 혼합물을 추가의 28 분 동안 교반하였다.

단계 2: 탈히드로브롬화

예냉시킨 THF(테트라히드로푸란)(20 ℓ, 5 ㎖/g HNQ(2-히드록시-1,4-나프토퀴논))을 갖는 72 ℓ RBF에 상기로부터의 브롬화 생성물을 가하고, 생성된 용액을 -4.8℃로 냉각시켰다. T<0.3℃(T_max)를 유지하면서 THF(4,200 ㎖) 중에 용해된 DBU(4,200 ㎖, 28.1 mol)를 2 시간 20 분에 걸쳐 서서히 첨가하였다. 생성된 현탁액을 42 분 동안 교반하였다.

단계 3: 커플링

2-히드록시-1,4-나프토푸란(4,003 g, 23.0 mol)을 한번에 상기로부터의 반응 혼합물에 -1.8℃에서 가하였다. DBU의 제2의 부분(3,780 ㎖, 25.3 mol)을 48 분에 걸쳐 첨가하면서 냉각조를 가하여 반응 온도가 40℃가 되게 한다. 냉각조를 꺼내고, 반응 혼합물을 주말에 걸쳐 대기에 개방한 상태로 교반하였다.

단계 4: 미정제 물질의 분리

예냉된 물(100 ℓ, 25 ㎖/g HNQ)을 갖는 200 ℓ 반응기에 상기로부터의 반응 혼합물을 가하였다. 생성된 현탁액을 6.0℃로 냉각시킨 후, T=3±3℃에서 약 1 시간 동안 교반하였다. 그 후, 생성된 현탁액을 여과하고, 수집된 고체를 다시 200 ℓ 반응기에 옮겼다.

5 % NaHCO₃ 수성(26 ℓ, 6.5 ㎖/g HNQ) 중에서 1 시간 동안 교반한 후, 현탁액을 여과하였다. 수집된 고체를 다시 200 ℓ 반응기로 옮기고, 물(26 ℓ) 중에서 1 시간 동안 교반한 후, 여과하였다.

젖은 고체를 다시 200 ℓ 반응기로 옮기고, 1 % 수성 아세트산(26 ℓ) 중에서 약 1 시간 동안 교반하고, 여과한 후, 여과 깔때기 위에서 물(10 ℓ)로 세정하였다. 수집된 고체를 다시 200 ℓ 반응기로 옮기고, 에탄올(17.5 ℓ; 4.3 ㎖/g HNQ) 중에서 온화한 환류 가열하였다(77.4℃). 생성된 현탁액을 4.2℃로 냉각시키고, 여과하였다.

젖은 고체를 100 ℓ 반응기로 옮기고, 에탄올(17.5 ℓ; 4.3 ㎖/g HNQ) 중에서 환류 가열하였다(77.6℃). 생성된 현탁액을 4.5℃로 냉각시키고, 여과하였다. 젖은 케이크를 밤새 탈-리커(de-liquor) 처리하였다. ¹H NMR 및 HPLC 샘플을 취하였다. ¹H NMR: 화합물 1/NDHF(2-아세틸-2,3-디히드로나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온) 42:58 %; HPLC: 화합물 1/NDHF 74:11 면적 %.

고체를 진공 오븐내에서 50℃에서 4 일에 걸쳐 건조시켜 2,268 g의 미정제 화합물 1을 제공하였다. ¹H NMR: 화합물 1/NDHF 41:59 %; HPLC: 화합물 1/NDHF 67:11 면적 %.

단계 5: 나프토디히드로푸란의 산화

미정제 화합물 1(2.268 ㎏)을 톨루엔(77 ℓ) 중에서 슬러리로 만들었다. MnO₂(9,536 g)을 첨가하고, 혼합물을 온화한 환류 가열하였다. TLC(1:1 EA:헥산)는 1 시간 후 반응이 완료된 것으로 나타났다.

그 후, 반응 혼합물을 예열된 셀라이트 패드(1,530 g, 바닥층), 활성탄(2,230 g, 중간층) 및 셀라이트(932 g, 상부층)을 통하여 여과하였다. 황색-오렌지색 여과액을 수집하였다.

여과액을 회전증발기에서 약 1/10 부피로 농축시켰다. 슬러리를 여과하고, 톨루엔으로 세정하였다. 그 후, 결정을 50℃에서 건조시켜 952 g(42%)의 암황색 고체를 얻었다. HPLC: 99.94%. ¹H NMR은 나프토디히드로푸란이 없는 것으로 나타났다.

결정을 50℃에서 진공하에서 추가의 46-65 시간 동안 건조시켜 물질 중의 잔류 톨루엔의 양을 감소시켰다.

단계 6: 에틸 아세테이트 처리

화합물 1(5,816 g)을 200 ℓ 반응 용기에 넣었다. 에틸 아세테이트(145 ℓ, 25 ㎖/g)를 첨가하고, 용액을 2 시간 26 분에 걸쳐 환류 가열하였다. 환류는 5 시간 30 분 동안 유지한 후, 혼합물을 냉각시키고, 밤새 17℃로 유지하였다.

슬러리를 폴리에틸렌 프릿 위에서 여과하였다. 황색 결정을 공기 건조시킨 후, 진공 오븐내의 트레이에 75 시간 동안 두어 5,532 g(95.1% 수율)의 황색 고체를 얻었다. HPLC: 99.86%. ¹H NMR은 화합물 1의 구조에 부합한다.

단계 7: 에틸 아세테이트 재결정화

2 ℓ RBF에 미정제 물질(10 g) 및 에틸 아세테이트(900 ㎖)를 가하였다. 혼합물을 약 77℃에서 환류시킨 후, 에틸 아세테이트(100 ㎖)를 더 첨가하여 용해 완료를 달성하였다. 생성된 맑은 황색 용액을 약 30 분 동안 환류 가열한 후, 가열을 제거하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다.

생성된 현탁액을 여과하고, 수집된 황색 고체를 깔때기 위에서 에틸 아세테이트(30 ㎖)로 헹구었다. 젖은 고체를 진공 오븐내에서 40-50℃에서 4 시간에 걸쳐 건조시켜 8.53 g의 황색 결정질 생성물(총 수율 약 17 %)을 얻었다.

¹H NMR: 구조와 일치함; HPLC: 99.94 면적%; DSC: 228.68℃, 151 J/g.

실시예 3: 나프토푸란 화합물의 미분화

예를 들면, 화합물 1 결정을 제분하고, 160 마이크론(㎛) 체(체 # 100, 150 ㎛ 개구)에 통과시켜 약 160 마이크론 이하의 결정을 생성하였다.

예를 들면, 화합물 1 결정을 약 20 마이크론의 중앙 입자 크기로 제분하였다(더 레취울트라 센트리푸걸 밀(The Retsch Ultra centrifugal Mill) ZM 200; 단일 통과, 0.25 mm 스크린을 사용한 18,000 rpm에서). 하기 표 3은 입자 크기의 분포를 나타낸다(히드로(Hydro) 2000S 습식 액세서리를 갖는 말번(Malvern) 2000). 표의 열은 열의 제목에서 아래첨자로 나타낸 총 누적율로 입자의 최대 크기를 나타낸다. 예를 들면, 열 D₉₀은 입자의 90%가 동일하거나 또는 더 적은 크기를 갖는 크기를 나타낸다. 열 D₅₀은 중앙 크기를 나타내며, 입자의 절반은 더 큰 크기를 가지며, 입자의 절반은 동일하거나 또는 더 작은 크기를 갖는다.

[표 3]

예를 들면, 화합물 1 결정을 하기 표 4에 제시한 바와 같이 약 2 마이크론의 중앙 입자 크기로 제트 제분 방법을 사용하여 미분화시켰다(4" 제트 밀, 벤투리 압력 = 40, 제분 압력 = 100, 공급 속도 = 1,304 g/시간). 입자 크기 분석은 건조 입자 방법(심파텍 헬로스(Sympatec Helos)/KF 입자 크기 분석기)을 사용하여 실시하였다.

[표 4]

입자 크기 분포의 로그-정상 모델로부터 유래한 누적 분포 함수는 표 4에 제시된 데이타에 우수한 대입을 제공하였다. 누적 분포 함수는

로서 나타냈으며, 여기서 erf는 오차 함수이며, d는 입자 직경 변수이며, d_중앙은 중앙 입자 크기이며, σ는 누적 분포 함수의 폭(breath)과 관련된 변수이다. CDF(d)는 d 이하의 크기를 갖는 입자의 분율을 나타낸다. d_중앙을 2.07 마이크론의 관찰된 중앙값으로 설정하고, 모델을 대입하여 σ=1.06의 값을 얻었다. 모델은 3.6 마이크론의 평균 직경 및 0.67 마이크론의 모드 직경을 나타냈다. 모델은 또한 표면 거칠기 등의 요인을 고려하지는 않았으나, 2,200 ㎡/㎏의 입자의 비표면적을 시사한다.

실시예 4: HPLC 검정

본 HPLC 방법은 나프토푸란, 예를 들면 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온(화합물 1)의 순도 및 HPLC에 의한 그의 반응 완료를 평가하기 위한 것이다. 모든 성분은 크로마토그램내의 모든 피크의 면적%로 나타낸다.

1. 장치 및 재료

[표 5A]

2. 용액 제조

10 mM 인산염 완충액

1.74 g의 인산칼륨, 2염기성을 계량하고, 1 ℓ의 정제수로 희석한다(요구량에 대하여 중량 및 부피를 조절한다). 인산을 사용하여 pH를 pH 6.8로 조정한다.

이동상 A

10 mM 인산염 완충액 및 아세토니트릴을 80:20 완충액:아세토니트릴 비로 혼합하여 이동상 A를 생성한다. 탈기시킨다.

이동상 B

10 mM 인산염 완충액 및 아세토니트릴을 20:80 완충액:아세토니트릴 비로 혼합하여 이동상 B를 생성한다. 탈기시킨다.

희석제

이동상 A는 모든 샘플 및 표준 제제에 대한 희석제로서 사용할 것이다.

3. 표준 제제

화합물 1 스톡 표준(농도

1.0 ㎎/㎖)

10 ㎎의 화합물 1 기준 물질을 20 ㎖ 신틸레이션 바이알로 계량하고; 중량±0.01 ㎎을 기록하여 생성한다. 10 ㎖의 DMSO를 첨가하고, 고체가 용해될 때까지 초음파 처리한다.

스톡 테스트 샘플(농도

1.0 ㎎/㎖)

10 ㎎의 샘플을 20 ㎖ 신틸레이션 바이알 중에 계량하고, 10 ㎖의 DMSO로 희석하여 시험 용액을 생성한다.

작업 시험 샘플(농도0.01 ㎎/㎖)

1 ㎖를 100 ㎖ 메스 플라스크로 옮기고, 희석제 용액으로 희석하여 용액을 생성한다.

4. 기기 작동 조건

[표 5B]

5. 작동 절차

용액을 하기 순서로 주입한다:

1. 희석제 블랭크(1X)

2. 화합물 1 작업 표준(5X)

3. 테스트 용액(각각 2X)

4. 작업 표준(각각 1X)

6. 시스템 적합성

시스템은 하기 기준을 충족할 경우 사용에 적절하다.

1. 순서의 개시에서 희석제 블랭크 주입은 임의의 확인된 불순물로 방해받는 피크를 함유하지 않는다.

2. 화합물 1 작업 표준의 초기 5회 반복 주입은 (1) % RSD_{피크 면적} <3.0%; (2) % RSD_{보유 시간} <3.0%; 및 (3) 평균 꼬리끌림 요소 <2.0을 갖는다.

3. 괄호로 묶은 표준에 대한 크로마토그램에서, (1) 보유 시간은 초기 적합성 주입으로부터 평균 보유 시간의 97.0-103.0%이며, (2) 그의 면적 %는 초기 값의 97.0 - 103.0%이다.

7. 계산

모든 피크는 크로마토그램에서의 총 피크의 면적%로서 보고할 것이며, 이는 하기 수학식에 의한 적분 소트프웨어에 의해 계산할 것이다.

NMR 및 TLC

[표 5C]

[표 5D]

실시예 5: 미정제 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 제조

화합물 1의 제조에 대한 또 다른 절차는 하기와 같이 요약한다.

반응 온도를 0℃ 미만으로 유지하면서 브롬(0.95 당량)을 메틸 비닐 케톤(MVK, 1.0 당량)에 -20 내지 -15℃에서 첨가 깔때기를 통하여 첨가한다. 반응 혼합물을 -10 내지 0℃에서 추가의 2 내지 3 시간 동안 교반한 후, 테트라히드로푸란(6 vol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 -20 내지 -10℃로 냉각시킨다. 그 후, 반응 온도를 0℃ 미만으로 유지하면서 트리에틸아민(1.1 당량)을 격렬히 교반하면서 첨가한다. 생성된 슬러리를 -15 내지 -5℃에서 최소 10 시간 동안 교반한 후, -5 내지 5℃로 가온시키고, 여과한다. 그 후, 여과액을 인-프로세스 ¹H NMR에 의해 분석하여 존재하는 중간체 브로모메틸 비닐 케톤(BrMVK)의 양(중량%)을 구하고, -25 내지 -10℃에서 추가 사용시까지 유지한다.

그 다음, 깨끗한 반응 용기내의 테트라히드로푸란(3.15 vol)에 2-히드록시-1,4-나트포퀴논(인-프로세스 ¹H NMR로부터 BrMVK의 계산량에 대하여 1.0 당량)을 가한다. 생성된 오렌지색 슬러리를 간단히 교반한 후, 온도를 45℃ 이하로 유지하면서 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데크-7-엔(DBU, 1.1 당량)을 첨가한다. 그 후, 반응 혼합물을 40 내지 45℃에서 최소 1 시간 동안 교반하고, 50 내지 55℃로 가열하고, 반응 온도를 50 내지 60℃에서 유지하면서 BrMVK 용액을 첨가 깔때기에 의해 첨가한다. 그 후, 5% 미만의 2-히드록시-1,4-나트포퀴논이 남을 때까지 반응 혼합물을 50 내지 55℃에서 약 18 시간 동안 교반한다. 그 후, 반응 혼합물을 농축시키고, 에탄올과 함께 2회 동시증발시키고, 에탄올/물(1:1)로부터 재결정시킨다. 고체를 진공하에서 35 내지 45℃에서 건조시킨다. 미정제 고체 및 차콜 G-60(100 중량%)을 아세토니트릴 중에 현탁시키고, 70 내지 75℃에서 2 시간 동안 가열하고, 여과하고, 고온의 아세토니트릴로 세정한다. 그 후, 여과액을 1/3 부피로 농축시키고, 0 내지 5℃로 냉각시키고, 여과한다. 그 후, 고체를 진공하에서 45 내지 50℃에서 건조시킨다. 그 후, 이들 미정제 고체를 에틸 아세테이트 중에서 환류하에 6 시간 동안 다시 슬러리로 만들고, 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 에틸 아세테이트로 세정한다. 그 후, 물질을 진공 하에서 45 내지 50℃에서 건조시키고, 최종 방출을 위하여 포장한다.

실시예 6: 임상 시험: 안전성 및 효능

표준 요법을 실패한 진행암을 갖는 성인 환자에서 투여량 증가 실험인, 미국 FDA 및 캐나다 보건부로부터 IND 승인을 받은 후 단계 I 임상 시험에 투입하기 위하여 화합물 2-아세틸나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온을 선택한다. 각각의 주기는 4 주간 화합물의 1일 2회 경구 투여로 이루어진다. 질환의 진행, 허용 불가한 독성 또는 또 다른 불연속 기준이 충족될 때까지 주기를 4주마다(28일) 반복하였다. 투여량 상승 시험은 오픈 라벨 및 다중심 시험으로서 실시하였다. 변형된 사이몬(Simon) 가속 적정 반응을 투여량 증가에 사용하였다.

시험의 주목적은 안전성, 내약성 및 추천된 단계 II 투여(RP2D)를 측정하기 위함이었다. 시험의 2차 목적은 화합물의 약물동태학 프로파일, 화합물의 약력학 및 화합물의 예비 항종양 활성을 측정하기 위함이다.

포함 기준은 전이성, 절제불가 또는 재발성인 조직학적 또는 세포학적으로 확인된 고형 종양; ≥18세의 연령; RECIST에 의한 측정 가능한 질환; 및 카르노프스키(Karnofsky) ≥70%를 포함하였다. 배제 기준은 최초 투여 4주 이내에 화학요법, 방사선요법, 면역요법 또는 연구 약품; 최초 투여 4 주 이내에 수술; 공지된 뇌 전이를 포함하였다.

상기 기준 하에서 선택된 환자의 인구학 및 기준선 질환 특징을 하기 표 6에 요약하였다.

[표 6]

이들 환자 중에서, 10명의 코호트를 20 ㎎ 내지 2,000 ㎎/일 범위 내의 투여량에서 평가하였다. 투여량 제한 독성은 관찰되지 않았다. 가장 흔한 유해 사례는 설사, 구역 및 피로이었다. 등급 3 이상의 사례는 피로 및 설사를 포함한다. 유해 사례는 하기 표 7에 요약하였다.

[표 7]

20 ㎎ 1일 투여에서, 놀랍게도 환자의 소변에서 고 농도의 화합물이 관찰되었다. 더욱이, 본 출원인은 환자 소변 중의 본 발명의 화합물의 항종양 활성을 테스트하였으며, 화합물은 암 세포에 대한 효능이 남아 있는 것으로 밝혀졌다.

투여된 환자 중에서, 질환 대조군(질환 안정화 및 종양 퇴행)은 대장 선암종, 두경부암, 유방암, 위암, 난소암, 연골육종, 부신피질 암종 및 흑색종을 비롯한 화학요법에 대하여 난치성인 각종 종양에서 종양 반응에 대하여 평가 가능한 환자의 65%에서 관찰되었다. 결장 암 전이성 병변의 신장으로의 하나의 완전 퇴행이 존재하였다(환자 0001). 화합물 1로 처치한 환자는 새로운 전이성 종양 병변의 극적인 결여를 나타냈다. 진행성 난치성 암을 갖는 24명의 평가 가능한 환자 중에서 80% 넘게 전이성 종양을 나타내지 않았다.

활성의 징후가 등록된 환자는 하기 표 8에 요약하였다.

[표 8]

본 출원인은 또한 항-p-STAT3 항체를 사용한 면역조직화학에 의한 처치 이전에 종양 조직에서 높은 레벨의 p-STAT3이 화합물 1에 대한 그의 종양의 우수한 반응을 예측한다는 것을 발견하였다.

경구 BID 투여의 약물동태학 프로파일도 또한 실험하였다. 약물의 혈장 농도는 하기 표 9에 예시된 바와 같이 유효한 농도(시험관내 IC₅₀)에 대하여 수배 달성하였다. 그러나, 약물 농도는 장시간 동안 높은 레벨에서 유지되지 못하고, 유효 농도 미만으로 신속하게 감소되었다.

[표 9]

바람직한 기간 동안 유효 레벨에서 또는 그보다 높은 레벨에서 약물 혈장 농도를 유지하고, 피크 혈장 농도를 추가로 증가시키기 위하여, 본 출원인은 (동일한 일자 또는 "q4h"에 2개의 투여 사이에 4 시간 간격에서) 500 ㎎ BID 요법의 약물동태학을 연구하였으며, 500 ㎎ QD 요법의 것과 비교하였다(도 1). 놀랍게도, 2개의 투여 요법 사이에서의 약물동태학과 관련하여 유의적인 차이는 관찰되지 않았다. 이전에, BID 요법을 사용하면 환자 혈장 중의 약물 레벨은 QD 요법에 비하여 투여가 동일 일차내에 2배가 되는 바와 같이 또 다른 뚜렷한 피크가 나타나는 것으로 예상되었다. 그러나, 화합물 1의 2회 q4h 투여는 동일한 24 시간 동안 제1의 투여후 바람직한 길이의 시간 동안 약물 레벨을 유지하지 못했다. 또 다른 적절한 투여 요법에서, 500 ㎎의 화합물 1을 1일 3회(TID)로 사람 대상체에게 투여하였다. 다소 실망스럽게도, 화합물 1로의 환자 노출의 레벨은 1일 2회 투여에 비하여 1일 3회에 의해 크게 개선되지 못했다.

실시예 7: 투여 요법 및 새로운 제제

본 발명의 화합물의 입자, 다형태 및/또는 정제된 형태를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효량은 약 160 ㎎ 내지 약 1,000 ㎎ 범위 내, 예를 들면 약 960 ㎎의 총 1일 투여량일 수 있다. 그러나, 유효 투여 레벨을 달성하기 위하여, 임상 실험은 환자가 겪을 환제 부담의 도전에 직면하였다. 환제 부담을 극복하고, 바람직한 기간 동안 최소 유효 레벨에서 또는 그보다 높은 레벨에서 약물 농도를 유지하는 문제를 해소하기 위하여, 더 높은 강도 캡슐을 새로운 제제(DP2A) 중에 설계하였다.

그러나, 더 높은 강도 캡슐을 사용하면 본 출원인은 환자에서의 구역, 구토 및 설사를 비롯한 악화된 위장관 유해 효과를 관찰하였다. 본 출원인이 추가의 단계 I 임상 실험에서 혈장 약물 농도 및 유해 효과 사이의 관계를 연구할 때, 그의 일부를 하기 표 10에 요약하며, 놀랍게도, 데이타는 위장관 유해 사례의 경중도가 통상적으로 의심되는 바와 같이 혈장 약물동태학 파라미터와 상관관계를 갖는 것으로 보이지는 않는 것으로 나타난다(하기 표 10 및 11 참조).

[표 10]

[표 11]

힘든 통상의 해결책 이후, 돌파구는 약물 섭취 프로토콜에 대한 예상밖의 변화로부터 유래한다. 놀랍게도, 본 출원인은 본 발명의 일부 바람직한 실시양태에 의한 투여량 사이의 섭취 간격이 연장된 약물 노출뿐 아니라 감소되는 위장관 부작용에 대한 핵심 요인이 된다는 것을 밝혀냈다. 더 더욱 놀랍게는 혈류 중의 약물 농도의 급격한 감소가 문제시될 때 직관적으로 시도하는 바와 같이 각각의 섭취 사이의 간격을 단축시켜 약물 투여를 농축시키는 대신에, 본 출원인은 그러한 간격을 연장시키는 것이 실제로 문제를 해결한다는 것을 밝혀냈다. 예를 들면, 약물 투여 사이의 바람직한 간격은 약 8 시간 내지 약 14 시간, 더욱 바람직하게는 약 10 시간 내지 약 13 시간 범위 내의 시간이 된다. 특정한 실시양태에서, 본 발명의 화합물 또는 관련 조성물 및 형태는 각각의 투여량이 약 480-500 ㎎ BID인 투여 사이의 기간에 걸쳐 평균 약 12 시간의 간격으로 1일 2회 투여한다.

또 다른 적절한 투여 요법에서, 약 20 ㎎ 또는 20 ㎎이 넘는 화합물 1을 사람 대상체에게 1일 1회 투여하였다. 본원에서 20 ㎎ QD로 지칭되는 이러한 투여 요법은 환자에서의 치료적 활성 레벨인 것으로 나타났으나, 약물은 사람의 혈액으로부터 신속하게 청소된다. 그러나, 약물이 혈류로부터 신장을 통하여 소변으로 청소됨에 따라, 소변 중의 약물의 매우 높은 농도로 인하여 결장 암 병변을 갖는 신장에서 특히 유효한 항종양 활성의 징후를 나타냈다. 일반적으로 이러한 투여 요법은 사람에서의 우수한 내약성을 나타냈다.

또 다른 적절한 투여 요법에서, 화합물 1을 약물동태학 노출을 개선시키는 비어 있는 위에 유체, 예를 들면 밀크 또는 물과 함께 투여된다(하기 표 12). 반직관적으로, 밀크는 위장관 유해 효과를 갖는 환자를 돕는다.

[표 12]

또 다른 적절한 투여 요법에서, 화합물 1을 식품과 함께 투여하여 Tmax가 지연되었다(하기 표 13).

[표 13]

또 다른 적절한 투여 요법에서, 환제 부담 문제는 새로운 약물 제제(DP2A)에 의해 다루었다. 새로운 제제는 DP1 제제에 사용된 계면활성제 겔루시르™ 44/14의 대부분을 또 다른 계면활성제 라브라필로 교체하고, 캡슐 치수를 크기 00으로부터 사이즈 1 또는 크기 2로 감소시키는데, 이는 유의적인 감소가 된다. 새로운 제제는 유사한 생체이용률을 유지할 수 있었다(도 2). 2종의 제제의 성분은 하기에 요약한다(하기 표 14):

[표 14]

본 발명의 화합물의 경구 제제, 구체적으로 더 높은 강도의 캡슐 제제(DP2A)를 사용하여 추가의 연구를 실시하였다. 본원에 기재된 바와 같이, 본 발명의 화합물은 암 줄기 세포(CSC) 자기-재생을 차단하며, Stat3, β-카테닌 및 나녹 경로를 억제하여 CSC뿐 아니라, 비-줄기 암 세포에서의 세포 사멸을 유도하며, 유효한 항종양 및 항-전이성 활성을 임상전 나타냈다. 상기 기재된 단계 I 연구에서, 화합물은 고형 종양을 갖는 환자에서 항암 활성의 징후뿐 아니라, 내약성을 나타냈다. 본원에 기재된 연구는 진행암을 갖는 환자에서 약물동태학(PK)을 측정하기 위하여 중추적 시험을 위하여 설계된 제제를 평가하기 위한 단계 1 확대 실험으로서 설계하였다.

1일차에, 환자는 본 발명의 화합물의 경구 투여 제제의 단일 500 ㎎ 투여량을 투여하였다(DP1). 4일차 및 8일차에, 중추적 시험을 위한 더 높은 강도의 캡슐(DP2A)을 금식과 함께 투여한 후, 상태를 제공하였다. 그 후, DP2A를 질환 진행 또는 허용 불가한 독성이 발생할 때까지 매일 투여하였다. 종점은 안전성, PK 및 예비항암 활성이었다.

DP2A는 24명의 환자에게서 평가하였다. DP1 및 DP2A 사이에서의 혈장 노출에는 유의적인 차이가 없었으며, 상당한 식품 효과도 관찰되지 않았다. 9명의 환자에게 화합물 DP2A 500 ㎎을 매일 2회 4 시간 간격으로 투여하고(DP2A-4h), 15명의 환자에게 화합물 DP2A 500 ㎎ BID로 12 시간 간격으로 투여하였다(DP2A-12h). 화합물 DP1에 대한 등가에도 불구하고, DP2A-4h는 설사, 경련성 복통, 구역/구토, 식욕부진 및 피로를 비롯한 상기 기재된 종래 실험에서 관찰된 것보다 더 높은 빈도의 위장관(GI) 유해 사례(AE)와 관련되어 있다. 반대로, DP2A-12h는 더 적은 GI AE를 가지며, 확대 실험을 위하여 선택되었다. DP2A-12h를 투여한 15명의 환자 중에서, 8명의 CRC 환자가 등록하였으며, 질병 통제는 17주 및 39주 각각에 무진행 생존율 및 전체 생존율로 반응(4/6)에 대하여 평가 가능한 67%로 관찰되었다.

중추적 시험에서 화합물에 대하여 추천된 투여 요법은 약 500 ㎎ BID q12h인 것으로 결정되었다. 항암 활성의 징후는 CRC 및 난소암을 갖는 환자에서 관찰되었다.

실시예 8: 항유사분열제를 사용한 병용 요법

본 발명의 화합물은 환자를 성공적으로 치료하기 위하여 특히 효과적인 화학요법제인 것으로 입증된 항유사분열제와 병용하였다. 본 발명의 화합물과의 병용 요법에서 유용할 수 있는 항유사분열제의 예로는 파클리탁셀(아브락산/탁솔), 도세탁셀(탁소테레), BMS-275183, 자이오탁스, 토코살, 비노렐빈, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 빈졸리딘, 에토포시드(VP-16), 테니포시드(VM-26), 익사베필론, 라로탁셀, 오르타탁셀, 테세탁셀 및 이스피네십을 들 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

단계 Ib 실험은 진행성 악성 종양을 갖는 환자에서 본 발명의 화합물과 파클리탁셀의 병용을 평가도록 설계되었다. 실험은 주당 파클리탁셀과 함께 사용시 본 발명의 화합물의 안전성, 내약성, RP2D 및 예비 항암 활성을 측정하기 위한 단계 Ib 투여량-증가 실험으로서 설계되었다. 질환의 진행, 허용 불가한 독성 또는 기타 불연속 기준이 충족될 때까지 3종의 상승하는 투여량 코호트(200 ㎎ BID, 400 ㎎ BID, 500 ㎎ BID)에서 화합물을 파클리탁셀(80 ㎎/㎡ 매주; 매4주당 3주)과 병용하여 투여하였다.

24명의 환자가 이 실험에 등록하였다. 본 발명의 화합물 단일요법 RP2D는 전체 투여량으로 파클리탁셀과 병용하여 투여할 수 있다. 최대 내약 투여량(MTD)은 결정하지 않았다. 새로운 유해 사례는 관찰되지 않았으며, 안전 프로파일은 단일요법으로서 각각의 약물의 것과 유사하였다. 가장 흔한 유해 사례는 등급 1 및 2 설사, 경련성 복통, 구역, 구토를 포함하였다. 등급 3 사례는 4명의 환자에게서 발생한 프로토콜 요법에 관한 것이며, 이는 설사, 탈수 및 허약을 포함하였다. 유의적인 약물동태학 상호작용은 관찰되지 않았다. 질환 제어(즉, 완전 반응(CR) + 부분 반응(PR) + 안정한 질환(SD)의 합)는 15명 중 10명(67%)의 평가 가능한 환자에게서 관찰되었다. 하기 표 15에 제시한 바와 같이, 난치성 위/위식도 접합부(GEJ) 선암종을 갖는 5명의 환자가 등록하였으며, 2명은 PR(48% 및 44% 퇴행)이고, 1명은 25% 퇴행으로 SD이고, 2명(종래 탁산을 실패함)은 SD≥24 주로 연장되었다.

이러한 단계 Ib 실험은 본 발명의 화합물 및 주당 파클리탁셀이 전체 투여량에서 안전하게 병용될 수 있다는 것을 입증하였다. 고무적인 항종양 활성이 위 및 GEJ 선암종을 갖는 환자에게서 관찰되었다.

[표 15]

단계 II 실험은 단계 Ib 실험으로부터 확대되어 진행중이며, 위/GEJ 선암종을 갖는 환자를 계속 등록한다.

[표 16]

이들 실험에서, 평가 가능한 위/GEJ 환자 9명 중 7명은 본 발명의 화합물 및 파클리탁셀과의 병용 요법에 반응하는 활성을 나타냈다.

실시예 9: 예측성 바이오마커로서 P- STAT3

CRC 환자의 아키발 종양 조직 샘플은 면역조직화학(IHC)에 의해 인산화 STAT3(p-STAT3)에 대하여 표지된 항체를 사용하여 분석하였다. 도 3b에 도시한 바와 같이, 본 발명의 화합물은 p-STAT3 발현을 억제하는데 있어서 매우 효과적이었다. 100 QD(단일 1일 투여량) 정도로 낮은 투여량조차 처치후 환자 조직에서 더 이상 임의의 검출 가능한 p-STAT3이 거의 존재하지 않았다. 도 3b의 차트가 나타내는 바와 같이, 본 발명의 화합물 처치를 받는 환자(N=13)의 경우, 전체 생존율(OS)은 p-STAT3의 비교적 높은 레벨을 이미 나타냈던 환자에게서 훨씬 더 낙관적이다. 예를 들면, 처치후 높은 p-STAT3 레벨을 갖는 환자의 40%는 10주보다 더 길게 생존한 반면, 처치전 낮은 p-STAT3 레벨을 갖거나 또는 p-STAT3 레벨을 갖지 않는 환자의 10%만이 100주 이상으로 생존하였다. 이는 본 발명의 화합물이 상기 STAT3 경로를 하향조절하며, STAT3 경로는 대장암과 연관되어 있다는 것을 추가로 확인하였다.

본 발명의 화합물을 사용한 처치를 받은 CRC 환자의 p-STAT3 레벨 및 OS 사이의 직접적인 상관 관계는 처료 효능을 예측하는데 사용될 수 있는 유망한 진단 바이오마커인 p-STAT3을 생성한다. 따라서, p-STAT3 레벨은 본 발명의 화합물을 사용한 치료에 대한 환자 푸울을 스크리닝하는데 사용될 수 있다.

실시예 10: 예측성 바이오마커로서 핵 β- 카테닌

면역조직화학(IHC)에 의해 β-카테닌에 대한 표지된 항체를 사용하여 CRC 환자의 아키발 종양 조직 샘플을 분석하였다. 도 4a에서 도시한 바와 같이, 본 발명의 화합물은 종양 조직에서의 세포핵 중의 β-카테닌의 축적을 제거 또는 예방하는데 효과적이다. 도 4B에서의 차트가 도시하는 바와 같이, 본 발명의 화합물을 사용한 처치를 받는 환자(N=13)의 경우, 전체 생존율(OS)은 치료전 핵 β-카테닌의 높은 레벨을 이미 나타내는 것으로 밝혀졌으므로, 훨씬 더 낙관적이다. 예를 들면, 처치전 높은 핵 β-카테닌 레벨을 갖는 환자의 40% 가까이는 100 주보다 더 길게 생존하는 한편, 높은 레벨의 막 β-카테닌을 사용한 환자는 25 주를 넘어서 생존하지 못했다. 이는 본 발명의 화합물이 β-카테닌 작용을 파괴하거나 또는 조절하며, β-카테닌 경로가 대장암에 연관되어 있다는 것을 추가로 확인한다.

본 발명의 화합물을 사용한 처치를 받은 CRC 환자의 핵 β-카테닌 레벨 및 OS 사이의 직접적인 상관관계가 치료 효능을 예측하는데 사용될 수 있는 유망한 진단 바이오마커인 핵 β-카테닌 레벨을 생성한다. 따라서, 핵 β-카테닌 레벨은 본 발명의 화합물을 사용한 치료에 대한 환자 푸울을 스크리닝하는데 사용될 수 있다.

실시예 11: 본 발명의 화합물의 시험관내 및 생체내 분석

CD44^고 세포는 FACS(FaDu)에 의해 분리되었으며, 그의 성장은 본 발명의 화합물에 의해 차단되었다(도 5).

그리고, 이종이식된 사람 결장 암 종양 조직을 갖는 누드 마우스의 생체내 실험에서, 본 발명의 화합물은 p-STAT3 및 β-카테닌 레벨을 감소 또는 청소하는데 있어서 효과적인 것으로 나타났다(도 6).

마우스 실험은 또한 본 발명의 화합물이 암 줄기 세포를 표적화한다는 것을 나타냈다(도 7).

사람 임상 실험에서, 본 발명의 화합물은 CRC 환자에서 효과적인 것으로 밝혀졌다(도 8).

본 명세서에서 예시 및 논의된 실시양태는 단지 본 발명자가 본 발명을 생성 및 사용하는 것으로 공지된 최선의 방법을 당업자에게 교시하고자 한다. 본 명세서에서는 어느 것도 본 발명의 범주를 한정하는 것으로 간주하여서는 안된다. 제시된 모든 실시예는 예를 위한 것이며, 한정하지 않는다. 본 발명의 상기 기재된 실시양태는 상기 교시에 비추어 당업자가 숙지하는 바와 같이 본 발명으로부터 벗어남이 없이 변형 또는 변경될 수 있다. 그러므로, 청구범위의 범주 및 그의 등가물내에서 본 발명은 구체적으로 기재된 것 외에도 실시될 수 있는 것으로 이해하여야 한다.

Claims

사람 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료적 유효량의 하기 구조:

를 갖는 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 프로드럭을 투여하는 것을 포함하며, 상기 화합물을 약 80 ㎎ 내지 약 2,000 ㎎ 범위 내의 총 1일 투여량으로 상기 대상체에게 투여하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 화합물을 약 960 ㎎의 총 1일 투여량으로 상기 대상체에게 투여하는 것인 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 화합물을 1일 2회 투여량으로 상기 대상체에게 투여하는 것인 방법.
제3항에 있어서, 각각의 투여량이 약 480 ㎎인 방법.
제1항에 있어서, 상기 화합물을 정제 또는 캡슐로서 상기 대상체에게 투여하는 것인 방법.
제5항에 있어서, 정제 또는 캡슐이 약 80 ㎎의 투여량을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물의 투여 사이의 간격이 약 4 시간 내지 약 16 시간 범위 내인 방법.
제7항에 있어서, 상기 화합물을 약 80 ㎎ BID, 약 160 ㎎ BID, 약 320 ㎎ BID, 약 400 ㎎ BID, 약 480 ㎎ BID, 약 500 ㎎ BID 및 약 600 ㎎ BID로 이루어진 군으로부터 선택되는 투여량으로 상기 대상체에게 투여하는 것인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물의 투여 사이의 간격이 약 4 시간 이상, 약 5 시간 이상, 약 6 시간 이상, 약 7 시간 이상, 약 8 시간 이상, 약 9 시간 이상, 약 10 시간 이상, 약 11 시간 이상, 약 12 시간 이상, 약 13 시간 이상, 약 14 시간 이상, 약 15 시간 이상 및 약 16 시간 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 투여 사이의 간격이 약 12 시간인 방법.
제1항에 있어서, 각각의 투여량이 약 480 ㎎ BID이고, 투여 사이의 간격이 약 12 시간인 방법.
제1항에 있어서, 각각의 투여량이 약 80 ㎎ BID이고, 투여 사이의 간격이 약 12 시간인 방법.
제1항에 있어서, 각각의 투여량이 약 400 ㎎ BID이고, 투여 사이의 간격이 약 12 시간인 방법.
제1항에 있어서, 각각의 투여량이 약 320 ㎎ BID이고, 투여 사이의 간격이 약 12 시간인 방법.
제1항에 있어서, 상기 화합물을 공복에 유체와 함께 경구 투여하는 것인 방법.
제15항에 있어서, 상기 유체가 밀크 또는 물을 포함하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 화합물이
(a) 특허 공보 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 2에 도시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 다형태;
(b) 적어도 약 10.2, 11.9, 14.1, 14.5, 17.3, 22.2 및 28.1° 2θ에서의 피크로 이루어진 군으로부터의 피크 1개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태;
(c) 적어도 약 10.2° 2θ에서의 피크, 적어도 약 11.9° 2θ에서의 피크, 적어도 약 14.1° 2θ에서의 피크, 적어도 약 14.5° 2θ에서의 피크, 적어도 약 17.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 22.2° 2θ에서의 피크 및 적어도 약 28.1° 2θ에서의 피크 및 이들의 임의의 조합으로부터의 피크 2개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태;
(d) 특허 공보 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 3에 도시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 다형태;
(e) 적어도 약 7.5, 9.9, 12.3, 15, 23, 23.3, 24.6 및 28.4° 2θ에서의 피크로 이루어진 군으로부터 선택되는 피크 1개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태; 및
(f) 적어도 약 7.5° 2θ에서의 피크, 적어도 약 9.9° 2θ에서의 피크, 적어도 약 12.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 15° 2θ에서의 피크, 적어도 약 23° 2θ에서의 피크, 적어도 약 23.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 24.6° 2θ에서의 피크 및 적어도 약 28.4° 2θ에서의 피크 및 이들의 임의의 조합으로부터의 피크 2개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태
로부터 선택되는 다형태인 방법.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물이 입자 형태로 존재하고, 상기 입자는 약 20 ㎛ 이하의 직경을 갖는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 화합물이 이 화합물 입자의 집단을 포함하는 약학적 조성물 중에 존재하고, 상기 입자의 누적 합계의 일부분이 0.2 ㎛ 내지 20 ㎛ 범위 내의 직경을 갖는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 화합물이 이 화합물 입자의 집단을 포함하는 약학적 조성물 중에 존재하고, 상기 입자의 누적 합계의 50%(D50)가 약 0.5 내지 약 5 ㎛ 범위 내의 직경을 갖는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 화합물이 이 화합물 입자의 집단을 포함하는 약학적 조성물 중에 존재하고, 상기 입자의 누적 합계의 50%(D50)가 약 2 ㎛의 직경을 갖는 것인 방법.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물이 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC), 핵 자기 공명(NMR), 또는 HPLC와 NMR 둘 다에 의해 측정 시 95.0% 이상의 순도를 갖는 API를 갖는 제제로 투여되며, 조성물이 5% 이하의 불순물을 포함하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 암이 위 및 위식도 선암종, 대장 선암종, 유방암, 난소암, 두경부암, 흑색종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
21. 제1항에 있어서, 상기 암이 위암인 방법.
제1항에 있어서, 상기 암이 위/위식도 접합부 선암종인 방법.
제1항에 있어서, 상기 암이 난치성인 방법.
제1항에 있어서, 상기 암이 재발성인 방법.
제1항에 있어서, 상기 암이 전이성인 방법.
제1항에 있어서, 상기 암이 STAT3의 과발현과 관련되어 있는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 방법이 환자 조직에서 인산화 STAT3(p-STAT3)의 레벨을 검출하는 것을 더 포함하며, p-STAT3의 레벨이 환자 선택을 위한 바이오마커로서 사용되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 암이 핵 β-카테닌 과발현과 관련되어 있는 것인 방법.
제1항에 있어서, 상기 방법이 환자의 조직 내의 핵 β-카테닌 발현을 검출하는 것을 더 포함하며, 상기 핵 β-카테닌 발현이 환자 선택을 위한 바이오마커로서 사용되는 것인 방법.
치유적 또는 예방적 암 치료 방법으로서,
(a) 치유적 또는 예방적 암 치료를 필요로 하는 대상체에게 하기 구조:

를 갖는 제1 작용제(agent) 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 프로드럭의 투여량을 투여하는 단계; 및
(b) 상기 대상체에게 항유사분열제 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 프로드럭의 투여량을 투여하는 단계
를 포함하는 방법.
대상체에게 파클리탁셀(아브락산/탁솔)을 투여함으로써 치유적 또는 예방적으로 암을 치료하는 방법으로서,
(a) 치유적 또는 예방적 암 치료를 필요로 하는 대상체에게 하기 구조:

를 갖는 제1 작용제 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 프로드럭의 투여량을 투여하는 단계를 포함하며, 상기 제1 작용제의 투여량을, 파클리탁셀(아브락산/탁솔)을 대상체에게 투여하기 전 또는 후에 투여하는 것인 방법.
제32항에 있어서, 상기 항유사분열제가 파클리탁셀(아브락산/탁솔), 도세탁셀(탁소테레), BMS-275183, 자이오탁스, 토코살, 비노렐빈, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 빈졸리딘, 에토포시드(VP-16), 테니포시드(VM-26), 익사베필론, 라로탁셀, 오르타탁셀, 테세탁셀 및 이스피네십으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제33항에 있어서, 상기 항유사분열제가 파클리탁셀(아브락산/탁솔)을 포함하는 것인 방법.
제32항 또는 제33항에 있어서, 상기 암이 위암, 위식도 접합부암 및 식도암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제32항 또는 제33항에 있어서, 상기 암이 위/위식도 선암종인 방법.
제32항 또는 제33항에 있어서, 상기 암이 난치성인 방법.
제32항 또는 제33항에 있어서, 상기 암이 재발성인 방법.
제32항 또는 제33항에 있어서, 상기 암이 전이성인 방법.
제32항 또는 제33항에 있어서, 환자의 조직에서 인산화 STAT3(p-STAT3)의 레벨을 검출하는 것을 더 포함하며, p-STAT3의 레벨이 환자 선택을 위한 바이오마커로서 사용되는 것인 방법.
제32항 또는 제33항에 있어서, 상기 암이 핵 β-카테닌의 과발현과 관련되어 있는 것인 방법.
제32항 또는 제33항에 있어서, 환자의 조직에서 핵 β-카테닌 발현을 검출하는 것을 더 포함하며, 핵 β-카테닌 발현이 환자 선택을 위한 바이오마커로서 사용되는 것인 방법.
선택된 환자 집단에서 암을 치료하는 방법으로서,
(a) 암을 진단받은 환자 후보자로부터 얻은 생물학적 샘플 중에서 인산화 STAT3(p-STAT3)의 레벨을 측정하는 단계;
(b) 환자 후보자의 p-STAT3 레벨이 기준(benchmark) 레벨보다 높은지를 확인하는 단계; 및
(c) 환자 후보자에게 치료적 유효량의 하기 구조:

를 갖는 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 프로드럭을 투여하는 단계
를 포함하는 방법.
제44항에 있어서, 상기 암이 식도암, 위식도 접합부암, 위식도 선암종, 연골육종, 대장암, 결장 선암종, 직장 선암종, 대장 선암종, 유방암, 난소암, 두경부암, 흑색종, 위 선암종 및 부신피질 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제44항에 있어서, 상기 암이 대장 선암종인 방법.
제44항에 있어서, 상기 암이 난치성인 방법.
제44항에 있어서, 상기 암이 재발성인 방법.
제44항에 있어서, 상기 암이 전이성인 방법.
선택된 환자 집단에서 암을 치료하는 방법으로서,
(d) 암을 진단받은 환자 후보자로부터 얻은 생물학적 샘플 중에서 핵 β-카테닌 발현을 검출하는 단계;
(e) 환자 후보자로부터의 샘플 중의 세포핵 중에서 유의적인 β-카테닌 발현이 검출되는지를 확인하는 단계; 및
(f) 환자 후보자에게 치료적 유효량의 하기 구조:

를 갖는 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 프로드럭을 투여하는 단계
를 포함하는 방법.
제50항에 있어서, 상기 암이 위 및 위식도 선암종, 식도 선암종, 대장 선암종, 유방암, 난소암, 두경부암, 흑색종 및 부신피질 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제50항에 있어서, 상기 암이 대장 선암종인 방법.
제50항에 있어서, 상기 암이 난치성인 방법.
제50항에 있어서, 상기 암이 재발성인 방법.
제50항에 있어서, 상기 암이 전이성인 방법.
사람 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 암을 진단받은 대상체에게 치료적 유효량의 하기 구조:

를 갖는 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 프로드럭을 투여하는 것을 포함하며, 상기 암이 대장암, 결장 선암종 또는 직장 선암종인 방법.
제56항에 있어서, 상기 화합물을 총 약 80 ㎎ 내지 약 2,000 ㎎ 범위 내로 1일 2회 투여량으로 상기 대상체에게 투여하는 것인 방법.
제56항에 있어서, 상기 화합물을 약 480 ㎎의 투여량으로 상기 대상체에게 투여하는 것인 방법.
제56항에 있어서, 상기 화합물의 투여 사이의 간격이 약 4 시간 내지 약 16 시간 범위 내인 방법.
제56항에 있어서, 상기 화합물을 약 80 ㎎ BID, 약 160 ㎎ BID, 약 320 ㎎ BID, 약 400 ㎎ BID, 약 480 ㎎ BID 및 약 500 ㎎ BID로 이루어진 군으로부터 선택되는 투여량으로 상기 대상체에게 투여하는 것인 방법.
제56항에 있어서, 상기 암이 난치성인 방법.
제56항에 있어서, 상기 암이 재발성인 방법.
제56항에 있어서, 상기 암이 전이성인 방법.
치료적 유효량의 하기 구조:

를 갖는 활성 성분;
나트륨 라우릴 술페이트(SLS) 또는 나트륨 도데실 술페이트(SDS)를 포함하는 계면활성제;
겔루시르(라우로일 폴리옥실글리세리드); 및
라브라필(리놀레오일 폴리옥실글리세리드)
를 포함하는 약학적 조성물.
제64항에 있어서, 추가로, 약 27.18 중량%의 활성 성분, 약 0.27 중량%의 계면활성제, 약 14.51 중량%의 겔루시르 및 약 58.04 중량%의 라브라필로 이루어지는 약학적 조성물.
제64항에 있어서, 추가로, 약 125 ㎎의 활성 성분, 약 1.2 ㎎의 계면활성제, 약 66.8 ㎎의 겔루시르 및 약 267 ㎎의 라브라필로 이루어지는 약학적 조성물.
제64항에 있어서, 추가로, 약 80 ㎎의 활성 성분, 약 0.8 ㎎의 계면활성제, 약 42.7 ㎎의 겔루시르 및 약 170.9 ㎎의 라브라필로 이루어지는 약학적 조성물.
캡슐 내에 수용된 제64항 내지 제67항 중 어느 한 항의 약학적 조성물을 포함하는 제조 물품.
제68항에 있어서, 캡슐이 사이즈 1 또는 이보다 작은 것인 제조 물품.
선택된 환자 집단에서 암을 치료하는 방법으로서,
(a) 암을 진단받은 환자 후보자로부터 얻은 생물학적 샘플 중에서 인산화 STAT3(p-STAT3), β-카테닌 및 나녹(NANOG)으로부터 선택되는 암 줄기세포 마커(cancer stemness marker) 1종 이상의 레벨 및/또는 세포 내 국재화(subcellular localization)를 측정하는 단계;
(b) 환자 후보자의 암 줄기세포 마커 레벨 및/또는 세포 내 국재화가 기준 레벨보다 높은지를 확인하는 단계; 및
(c) 환자 후보자에게 치료적 유효량의 하기 구조:

를 갖는 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 프로드럭을 투여하는 단계
를 포함하는 방법.
제70항에 있어서, 상기 암이 대장 선암종, 유방암, 난소암, 두경부암, 흑색종, 위/위식도 선암종, 식도 선암종 및 부신피질 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제70항에 있어서, 상기 암이 대장 선암종인 방법.
제70항에 있어서, 상기 암이 난치성인 방법.
제70항에 있어서, 상기 암이 재발성인 방법.
제70항에 있어서, 암이 전이성인 방법.
사람 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료적 유효량의 하기 구조:

를 갖는 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 프로드럭을 투여하고, 치료적 유효량의 파클리탁셀을 투여하는 것을 포함하는 방법.
제76항에 있어서, 상기 화합물을 약 80 ㎎ 내지 약 2,000 ㎎ 범위 내의 총 1일 투여량으로 상기 대상체에게 투여하는 것인 방법.
제76항에 있어서, 상기 화합물을 약 960 ㎎의 총 1일 투여량으로 상기 대상체에게 투여하는 것인 방법.
제76항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물을 1일 2회 투여량으로 상기 대상체에게 투여하는 것인 방법.
제79항에 있어서, 각각의 투여량이 약 480 ㎎인 방법.
제76항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물의 투여 사이의 간격이 약 4 시간 내지 약 16 시간 범위 내인 방법.
제81항에 있어서, 상기 화합물을 약 80 ㎎ BID, 약 160 ㎎ BID, 약 320 ㎎ BID, 약 400 ㎎ BID, 약 480 ㎎ BID 및 약 500 ㎎ BID로 이루어진 군으로부터 선택되는 투여량으로 상기 대상체에게 투여하는 것인 방법.
제76항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물의 투여 사이의 간격이 4 시간 이상, 5 시간 이상, 6 시간 이상, 7 시간 이상, 8 시간 이상, 9 시간 이상, 10 시간 이상, 11 시간 이상, 12 시간 이상, 13 시간 이상, 14 시간 이상, 15 시간 이상 및 16 시간 이상으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제76항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 투여 사이의 간격이 약 12 시간인 방법.
제76항에 있어서, 각각의 투여량이 약 480 ㎎ BID이고, 투여 사이의 간격이 약 12 시간인 방법.
제76항에 있어서, 각각의 투여량이 약 80 ㎎ BID이고, 투여 사이의 간격이 약 12 시간인 방법.
제76항에 있어서, 각각의 투여량이 약 400 ㎎ BID이고, 투여 사이의 간격이 약 12 시간인 방법.
제76항에 있어서, 각각의 투여량이 약 320 ㎎ BID이고, 투여 사이의 간격이 약 12 시간인 방법.
제76항에 있어서, 상기 화합물을 공복에 유체와 함께 경구 투여하는 것인 방법.
제76항에 있어서, 상기 유체가 밀크 또는 물을 포함하는 것인 방법.
제76항에 있어서, 상기 파클리탁셀을 약 40 ㎎/㎡ 내지 약 100 ㎎/㎡ 범위 내의 총 1주 투여량으로 상기 대상체에게 투여하는 것인 방법.
제76항에 있어서, 상기 파클리탁셀을 약 80 ㎎/㎡의 총 1주 투여량으로 상기 대상체에게 투여하는 것인 방법.
제76항에 있어서, 상기 파클리탁셀을 IV를 통해 상기 대상체에게 투여하는 것인 방법.
제76항에 있어서, 상기 화합물이
(a) 특허 공보 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 2에 도시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 다형태;
(b) 적어도 약 10.2, 11.9, 14.1, 14.5, 17.3, 22.2 및 28.1° 2θ에서의 피크로 이루어진 군으로부터의 피크 1개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태;
(c) 적어도 약 10.2° 2θ에서의 피크, 적어도 약 11.9° 2θ에서의 피크, 적어도 약 14.1° 2θ에서의 피크, 적어도 약 14.5° 2θ에서의 피크, 적어도 약 17.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 22.2° 2θ에서의 피크 및 적어도 약 28.1° 2θ에서의 피크 및 이들의 임의의 조합으로부터의 피크 2개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태;
(d) 특허 공보 WO 2011/116398 및 WO 2011/116399의 도 3에 도시된 것과 실질적으로 유사한 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 다형태;
(e) 적어도 약 7.5, 9.9, 12.3, 15, 23, 23.3, 24.6 및 28.4° 2θ에서의 피크로 이루어진 군으로부터 선택되는 피크 1개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태; 및
(f) 적어도 약 7.5° 2θ에서의 피크, 적어도 약 9.9° 2θ에서의 피크, 적어도 약 12.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 15° 2θ에서의 피크, 적어도 약 23° 2θ에서의 피크, 적어도 약 23.3° 2θ에서의 피크, 적어도 약 24.6° 2θ에서의 피크 및 적어도 약 28.4° 2θ에서의 피크 및 이들의 임의의 조합으로부터의 피크 2개 이상을 포함하는 X선 회절 패턴을 특징으로 하는 2-아세틸-4H,9H-나프토[2,3-b]푸란-4,9-디온의 다형태
로부터 선택되는 다형태인 방법.
제1항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물이 입자 형태로 존재하고, 상기 입자가 약 20 ㎛ 이하의 직경을 갖는 것인 방법.
제76항에 있어서, 상기 화합물이 이 화합물 입자의 집단을 포함하는 약학적 조성물 중에 존재하고, 입자의 누적 합계의 일부분이 약 0.5 ㎛ 내지 약 5 ㎛ 범위 내의 직경을 갖는 것인 방법.
제76항에 있어서, 상기 화합물이 이 화합물 입자의 집단을 포함하는 약학적 조성물 중에 존재하고, 입자의 누적 합계의 50%(D50)가 약 2 ㎛의 직경을 갖는 것인 방법.
제1항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물이 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC), 핵 자기 공명(NMR) 또는 HPLC와 NMR 둘 다에 의해 측정 시 95.0% 이상의 순도를 갖는 API를 갖는 제제로 투여되고, 조성물이 5% 이하의 불순물을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 위 및 위식도 선암종, 유방암, 난소암, 두경부암, 흑색종 및 식도 선암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제76항에 있어서, 상기 암이 위 및 위식도 선암종인 방법.
제76항에 있어서, 상기 암이 대장 선암종, 유방암, 난소암, 두경부암, 흑색종, 위 선암종 및 부신피질 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제76항에 있어서, 상기 암이 난치성인 방법.
제76항에 있어서, 상기 암이 재발성인 방법.
제76항에 있어서, 상기 암이 전이성인 방법.
제76항에 있어서, 상기 암이 STAT3의 과발현과 관련되어 있는 것인 방법.
제76항에 있어서, 환자의 조직 중에서 인산화 STAT3(p-STAT3)의 레벨을 검출하는 것을 더 포함하며, p-STAT3의 레벨이 환자 선택을 위한 바이오마커로서 사용되는 것인 방법.
제76항에 있어서, 상기 암이 핵 β-카테닌 발현과 관련되어 있는 것인 방법.
제76항에 있어서, 환자의 조직 중에서 β-카테닌 발현을 검출하는 것을 더 포함하며, 상기 β-카테닌 발현이 환자 선택을 위한 바이오마커로서 사용되는 것인 방법.
제76항에 있어서, 세포핵 내에서 유의적인 β-카테닌 발현이 검출되는 것인 방법.
세포 내의 β-카테닌 발현이 세포핵 내에서 검출되는 환자의 암을 치료하는 방법으로서, 상기 환자에게 치료적 유효량의 하기 구조:

를 갖는 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 프로드럭을 투여하는 것을 포함하는 방법.
세포 내의 β-카테닌 발현이 세포막이 아니라 세포핵 내에서 검출되는 환자의 암을 치료하는 방법으로서, 상기 환자에게 치료적 유효량의 하기 구조:

를 갖는 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물 또는 프로드럭을 투여하는 것을 포함하는 방법.
제111항에 있어서, β-카테닌이 20% 이상의 종양 세포에서 검출되도록 β-카테닌이 중간 내지 강한 β-카테닌 발현 레벨로 존재하는 것인 방법.
(a) 치료적 유효량의 하기 구조:

를 갖는 활성 성분;
(b) HLB가 10 초과인 폴리옥실글리세리드; 및
(c) HLB가 10 미만인 폴리옥실글리세리드
를 포함하는 약학적 조성물.
제113항에 있어서, 계면활성제를 더 포함하는 약학적 조성물.
제113항에 있어서, HLB가 10 초과인 폴리옥실글리세리드가 라우로일 폴리옥실글리세리드 및 스테아로일 폴리옥실글리세리드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 약학적 조성물.
제113항에 있어서, HLB가 10 미만인 폴리옥실글리세리드가 리놀레오일 폴리옥실글리세리드인 약학적 조성물.
제114항에 있어서, 상기 계면활성제가 나트륨 라우릴 술페이트(SLS) 또는 나트륨 도데실 술페이트인 약학적 조성물.
제113항 또는 제114항에 있어서, HLB가 10 초과인 폴리옥실글리세리드가 라우로일 폴리옥실글리세리드 및 스테아로일 폴리옥실글리세리드로 이루어진 군으로부터 선택되고, HLB가 10 미만인 폴리옥실글리세리드가 리놀레오일 폴리옥실글리세리드인 약학적 조성물.
제114항에 있어서, HLB가 10 초과인 폴리옥실글리세리드가 라우로일 폴리옥실글리세리드 및 스테아로일 폴리옥실글리세리드로 이루어진 군으로부터 선택되고, HLB가 10 미만인 폴리옥실글리세리드가 리놀레오일 폴리옥실글리세리드이며, 계면활성제가 나트륨 라우릴 술페이트(SLS) 또는 나트륨 도데실 술페이트인 약학적 조성물.