KR20060025141A

KR20060025141A - Ｐ38의 억제제 및 이를 사용하는 방법

Info

Publication number: KR20060025141A
Application number: KR1020057021750A
Authority: KR
Inventors: 마크 애쉬웰; 셰드 알리; 지펭 리우; 얀빈 리우; 피터 로세; 밸류 맥코넌; 로버트 셀리아; 매니쉬 탄돈; 우즈 로나; 발레리 안토넨코
Original assignee: 아르퀼 인코포레이티드
Priority date: 2003-05-15
Filing date: 2004-05-14
Publication date: 2006-03-20
Also published as: US20110301160A1; MXPA05012377A; JP2006528983A; JP4939220B2; EP2251343A1; AU2004247626B8; US7902192B2; WO2004110990A2; EP1633758B1; WO2004110990A3; AU2004247626B2; CA2526285A1; AU2004247626A1; ATE534649T1; US20070270418A1; EP1633758A2

Abstract

본 발명은 p38을 억제할 수 있는 화합물, 생체내 또는 시험관내에서 p38을 억제하는 방법, 및 p38 활성 또는 사이토카인 활성 관련 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.

Description

Ｐ38의 억제제 및 이를 사용하는 방법 {INHIBITORS OF P38 AND METHODS OF USING THE SAME}

많은 만성 및 급성 질환은 염증 반응의 교란과 관련이 있다. IL-1, IL-6, IL-8 및 TNFα를 포함하나 이에 제한되지 않은 많은 사이토카인이 이러한 반응에 관여한다. 이들 사이토카인이 일반적으로 많은 생리적 자극에 대한 반응에 발현됨에도 불구하고, 이들 사이토카인의 과도하거나, 비조절되거나, 과도하고 비조절된 생성이 종종 염증 및 조직 손상을 유도한다. 이는 류마티스 관절염과 같은 질환이 질환 상태를 매개하는 한 메카니즘이다 (Keffer, J., et al, EMBO J., 13:4025-4031, 1991, Feldmann, M., et al, Annu.Rev.Immunol., 14:397-440, 1996 and Bingham, C.O., J.Rheumatol.Suppl., 65:3-9, 2002). 최근에는, TNFα와 같은 전염증성 사이토카인의 전신 수준을 감소시켜 이들 질환을 개선시키고자 하는 여러 치료제가 있다 (Pugsley, M.K. Curr. Opin. Invest. Drugs, 2:1725-1731, 2001 and Bondeson, J., and Maini, R.N., J.Clin.Pract., 55:211-216, 2001). 이들 치료제는 사이토카인의 순환 수준 또는 중화 활성을 감소시키는데 직접적으로 작용한다. 그러나, 이들 치료제는 사이토카인의 발현 및 분비를 조절하거나, 염증 및 조직 파괴의 기타 매개체의 발현을 조절하는 세포내 단백질을 직접적으로 차단하지 않는다.

p38 MAP 키나아제 (p38, 또한 CSBP 또는 SAPK로서 공지됨) 시그널링 경로는 많은 염증 및 자가면역 질환에서 증가된 전염증 사이토카인의 발현을 유도하는 것으로 보고되었다 (예를 들어, 문헌 [Dong, C., et al., Annu.Rev.Immunol., 29:55-72, 2002] 및 본원에 인용된 문헌 참조). 이와 같이, p38 MAP 키나아제 경로의 일부의 억제제 또는 p38 MAP 키나아제 경로를 조절하는 경로의 억제제가 염증 또는 자가면역 반응이 관련된 질환 또는 질병을 위한 치료제로서 수용할 수 있다 (Lee, J.C., et al, Immunopharm, 47:185-201, 2000). 이러한 경로는 세포 스트레서 예컨대, 삼투성 쇼크, UV 광, 유리 라디칼, 박테리아 독소, 바이러스, 사이토카인 및 케모킨에 의해 활성화되는 것으로 보고되었으며, 반응에서 IL-1, IL-6, IL-8 및 TNFα를 포함하나 이에 제한되지 않는 여러 사이토카인의 발현을 매개한다.

전형적으로, p38 MAP 키나아제 경로는 특이적 리간드 예를 들어, 동종 수용체에 결합하는 사이코카인, 케모킨 또는 리포폴리사카라이드 (LPS)에 의해 활성화된 세포 표면 수용체 예컨대, 수용체 티로신 키나아제, 케모킨 또는 G 단백질 결합된 수용체에 의해 직접적으로 또는 간접적으로 활성화된다. 후속적으로, p38 MAP 키나아제는 잔기 트레오닌 180 및 티로신 182에서의 포스포릴화에 의해 활성화된다. 활성화시킨 후, p38 MAP 키나아제는 단백질 키나아제를 포함하는 기타 세포내 단백질을 포스포릴화시킬 수 있으며, 세포 핵으로 전위될 수 있으며, 여기서 이는 전사 인자를 포스포릴화시키고 활성화시켜 전염증 사이토카인 및 염증 반응, 세포 부착 및 단백질분해성 퇴화에 기여하는 기타 단백질의 발현을 초래시킨다. 예를 들어, 마이엘로이드 리니지(myeloid lineage)의 세포에서, 이러한 마크로파지 및 모노사이트, 및 IL-1과 TNFα 둘 모두는 p38 활성화에 대한 반응에서 전사된다. 이들 및 기타 사이토카인의 후속적 번역 및 분비는 인접한 조직에서 류코사이트의 침투를 통해 국부적 또는 전신성 염증 반응을 개시시킨다. 이러한 반응이 세포 스트레스에 대한 생리적 반응의 정상적인 부분이지만, 급성 또는 만성 세포 스트레스는 전염증 사이토카인의 과도하거나, 비조절되거나, 과도하고 비조절된 발현을 유도한다. 차례로 이는 조직 손상을 초래하고, 종종 통증 및 쇠약화를 초래한다. 각각 상이한 발현 수준, 조직 분포 및 조절을 나타내는 4개의 공지된 p38 MAP 키나아제 (p38α, p38β, p38δ 및 p38γ)가 존재한다는 점은 이들이 많은 질환 및 생리학적 교란의 병인 또는 휴유증과 관련있다는 개념을 뒷받침한다.

실제로, 많은 염증 질환 및 염성 염증 및 급성 반응과 관련된 질환은 p38 MAP 키나아제의 활성화 및 염증성 사이토카인의 과다발현 또는 조절악화와 관련되어 있다. 이들 질환은 류마티스 관절염; 류마티스 척추염; 골관절염; 통풍, 기타 관절염; 패혈증; 패혈성 쇼크; 내독소성 쇼크; 그람-네거티브 패혈증; 독소성 쇼크 신드롬; 천식; 성인호흡곤란 증후군; 만성 폐쇄성 폐질환; 만성 폐염증; 염증성 장질환; 크론병; 건선; 습진; 괘양성 결장염; 췌장섬유증; 간섬유증; 급성 및 만성 신장 질환; 과민성 대장증후군; 피레시스; 재협착; 뇌말라리아; 발작 및 허혈 손상; 신경성 외상; 알츠하이머병; 헌팅턴병; 파크슨병; 급성 및 만선 통증; 알레르기성 류마티스; 알레르기성 결막염; 만성 심부전; 급성 관동맥증후군; 악액질; 말라리아; 나병; 레슈마니아증; 라임병; 라이터증후군; 급성 활막염; 근육괴사; 정액낭염; 건염; 급성건초염; 파열성 추간판 탈출증; 골화석증; 혈전증; 암; 재발협착 증; 규폐증; 폐 췌육증; 골재흡수 질환 예컨대, 골다공증; 이식편대숙주 반응; 및 자가면역 질환 예컨대, 다발성 경화증, 루푸스 및 섬유근통; AIDS 및 기타 바이러스 질환 예컨대, 헤르페스 조스터(Herpes Zoster), 헤르페스 심플렉스 I 또는 II, 인플루엔자 바이러스 및 사이토메갈로바이러스; 및 당뇨병을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

많은 연구는 p38 MAP 키나아제의 활성을 감소시키면, 이의 업스트림 활성화제 또는 이의 다운스트림 이펙터가 유전적 또는 화학적 수단을 통해 염증 반응을 무디게하고, 조직 손상을 예방하고 최소화시킨다는 것을 보여주었다 (예를 들어, 문헌 [English, J.M. and Cobb, M.H., Trends in Pharmacol. Sci., 23:40-45, 2002; and Dong, C., et al, Annu.Rev. Immunol., 20:55-72, 2002] 참조). 이와 같이, 과도하거나 비조절된 사이토카인 생성을 억제하고, 하나 이상의 단일 전염증 사이토카인을 억제할 수 있는 p38 활성의 억제제는 항염증제 및 치료제로서 유용할 수 있다. 또한, p38 MAP 키나아제 관련 염증 반응과 관련된 많은 수의 질환은 이러한 질환을 치료하기 위한 효과적인 방법이 요구된다는 것을 시사한다. 그러나, 본원의 출원일까지는, p38 MAP 키나아제 효소 패밀리를 직접적으로 억제하는 입수가능한 약물이 입증되지 않았으며, 사이토카인으로의 결합을 통해 사이토카인 수준을 감소시키거나 중화시키는 작용을 하는 입증된 약물은 일반적으로 경구적으로는 생체이용이 가능하지 않아, 주사와 같은 기법으로 투여되어야 한다.

따라서, p38- 및 사이토카인-관련 질환을 치료하기 위한 신규한 화합물 및 방법이 요구되고 있다.

발명의 요약

일반적으로, 본 발명은 p38 map 키나아제를 억제할 수 있는 화합물, 생체내 또는 실험관내에서 p38 map 키나아제를 억제하는 방법, p38 map 키나아제 활성 또는 사이토카인 활성과 관련된 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.

한 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 프로드러그, 용매화물 또는 염 (바람직하게는, 약제학적으로 허용되는 염)을 제공한다:

상기 식에서,

X는 0 또는 S(O)_m이며; Y는 OR₄, 또는 NR₄R₅이며; m은 0, 1, 또는 2이며; n은 1 또는 2이며; R₁은 수소, -CN, -C00H, 할로겐, C₁- C₆알킬, C₁- C₆알콕시; C₃ - C₆시클로알킬, C₃ - C₆시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁- C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기이며; Ar은 아릴기이며; R₃은 수소, 할로겐, 아미노, C₁- C₆ 알킬, C₁- C₆ 알콕시, C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알 킬카르보닐, 및 C₁-C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기이며; R₄ 및 R₅는 각각 수소, C₁- C₆ 알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬, 아릴, 및 헤테로시클릴로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나; R₄와 R₅는 이들에 결합된 N 원자와 함께 3 내지 8개 원자의 헤테로시클릭 고리를 형성하며;

단, X가 S(O)_m이고, m이 0이며, Ar은 페닐이며, Y는 NR₄R₅이고, R₄는 수소이고, R₅는 알킬인 경우, R₅이 히드록시알킬 기이면, R₅은 1) -CH₂(CH₃)₂CH₂OH이 아니고, 2) N 원자에 알파인 탄소 원자에서 페닐기로 치환되지 않는다 (즉, N 원자에 결합된 R₅의 탄소 원자는 페닐 기를 함유하지 않는다).

화학식 I의 바람직한 구체예에서, X는 0 또는 S이며, 가장 바람직하게는 0이다. 바람직한 구체에에서, Ar은 페닐 또는 나프틸이며, 가장 바람직하게는 페닐이며; 바람직한 구체예에서, 페닐기는 1-3 할로겐 또는 트리플루오로메틸 치환기로 치환될 수 있다. 가장 바람직한 페닐기는 4-플루오로페닐이다.

추가의 바람직한 구체예에서, Y는 NR₄R₅이고, 바람직하게는 R₄는 수소이다. 바람직한 구체예에서, R₅는 C₂-C₆ 히드록시알킬, C₂-C₆아미노알킬, 히드록시아릴, 아미노아릴, C₃ - C₆ 시클로알킬 및 헤테로시클릴로 구성된 군으로부터 선택되며, 더욱 바람직하게는, R₅는 질소 함유 헤테로사이클 (아자사이클)이다.

추가의 구체예에서, R₁ 및 R₃ 각각은 모든 경우에서 H이다.

기타 바람직한 구체예에서, X는 S(O)_m이고, m은 0이다. 추가의 바람직한 구체예에서, Ar은 페닐 또는 나프틸이며, 더욱 바람직하게는, 페닐이며; 바람직한 구체예에서, 페닐기는 1-3 할로겐 또는 트리플루오로메틸 치환기로 치환될 수 있다. 가장 바람직한 페닐 기는 4-플루오로페닐이다. 추가의 바람직한 구체예에서, Y는 NR₄R₅이고, R₄는 수소이고; R₅는 바람직하게는, C₂ - C₆ 히드록시알킬 기, C₂ - C₆ 아미노알킬 기, 히드록시아릴 기, 아미노아릴 기, 또는 1-3개의 원자가 질소인 3 내지 8개 원자의 질소 함유 헤테로시클릭 고리이다. 바람직한 구체예에서, R₁ 및 R₃ 둘 모두는 모든 경우에서 수소이다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 하나 이상의 화학식 I의 화합물을 포함하는 약제 조성물을 제공한다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 p38-관련된 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법은 유효량의 화학식 I의 화합물을 포유동물에 투여하여 p38-관련 질환을 치료하는 것을 포함한다. 바람직한 구체예에서, p38-관련 질환은 류마티스 관절염, 골관절염 또는 통풍성 관절염 (더욱 바람직하게는, 류마티스 관절염); 크론병, 궤양성 직장염, 염증성 장질환 또는 건선; 또는 증식성 질환, 자가면역질환 또는 염증 질환이다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 사이토카인 활성과 관련된 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법은 변형된 사이토카인 활성과 관련된 질환이 치료되도록 유효량의 화학식 I의 화합물을 치료가 필요한 대상에 투여하는 것을 포함한다. 바 람직한 구체예에서, p38-관련 질환은 류마티스 관절염, 골관절염 또는 통풍성 관절염; 크론병, 궤양성 직장염, 염증성 장질환 또는 건선; 또는 증식성 질환, 자가면역질환 또는 염증 질환이다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 p38 예를 들어, p38α, p38β, p38δ 또는 p38γ의 특이적 이소폼, 또는 이들의 조합, 및 가장 바람직하게는 p38α와 관련된 질환을 치료하기 위한 방법을 제공한다. 바람직한 구체예에서, p38-관련 질환은 류마티스 관절염, 골관절염 또는 통풍성 관절염; 크론병, 궤양성 직장염, 염증성 장질환 또는 건선; 또는 증식성 질환, 자가면역질환 또는 염증 질환이다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 p38, 기타 키나아제, 또는 p38과 키나아제와 관련되거나 이에 의해 매개되는 질환을 치료하기 위한 방법을 제공한다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 사이토카인과 관련된 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 사이토카인은 바람직하게는, IL-1, IL-6, IL-8 및 TNFα로 구성되나 이들로 제한되지 않은 군으로부터 선택된다. 일반적으로, 본 방법은 유효량의 화학식 I의 화합물을 포유동물 (예를 들어, 이러한 치료가 필요한 포유동물)에 투여하여 포유동물을 치료하는 것을 포함한다. 바람직한 포유동물 대상은 사람이다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 세포내, 실험관내 또는 생체내에서 p38의 활성을 억제하는 방법을 제공한다. 일반적으로, 본 방법은 p38 함유 세포를 세포의 p38 활성이 억제되는 조건하에 p38을 억제하기에 유효한 양의 화학식 I의 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 세포 또는 조직 샘플중의 p38 단백질의 존재, 위치, 정량 또는 이들의 복합된 사항을 결정하기 위한 방법을 제공한다. 본 방법은 a) 화학식 I의 화합물이 p38 단백질에 결합할 수 있는 조건하에 화학식 I의 화합물과 세포 또는 조직 샘플을 접촉시키고; b) 세포 또는 조직 샘플중의 화학식 I의 화합물의 존재, 위치, 정량 또는 이들이 조합된 사항을 측정하여, 세포 또는 조직 샘플중의 p38 단백질의 존재, 위치, 정량 또는 이들이 조합된 사항을 결정하는 것을 포함한다.

본 발명의 치료 방법의 특정 구체예에서, 화학식 I의 하나 이상의 화합물은 본 발명의 방법에 사용하기 위한 기타 제제 예를 들어, 또 다른 약제학적 활성제와 혼합될 수 있다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 II의 화합물을 제공한다:

상기 식에서,

R₁은 수소, -CN, -C00H, 할로겐, C₁-C₆ 알킬, C₁-C₆ 알콕시; C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁- C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 선택되고; Ar은 아릴 기이다. 화학식 II의 화합물은 특히, 화학식 I의 이미다조옥사졸 및 이미다조티아졸 화합물의 합성에 유 용하다. 화학식 II의 바람직한 구체예에서, Ar은 페닐 또는 나프틸이고, 가장 바람직하게는, 페닐이며; 특정 바람직한 구체예에서, 페닐기는 1-3 할로겐, 트리플루오로메틸, 또는 C₁- C₆ 알콕시 치환기로 치환된다. 가장 바람직한 페닐 기는 4-플루오로페닐이다. 추가의 바람직한 구체예에서, R₁은 H이다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 III의 화합물 또는 이의 염을 제공한다:

상기 식에서,

X는 0 또는 S(O)m이고; m 및 n은 각각 독립적으로, 0, 1, 또는 2이고; p는 1 또는 2이고; R₁은 독립적으로 수소, -CN, -COOH, 할로겐, C₁- C₆ 알킬, C₁- C₆ 알콕시; C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁- C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 선택되고; Ar은 아릴 기이고; R₃은 독립적으로 수소, 할로겐, 아미노, C₁- C₆ 알킬, C₁- C₆ 알콕시, C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보 닐, 및 C₁- C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 선택되고; L은 C₁- C₆ 알킬 기 또는 아릴 기이다. 화학식 III의 바람직한 구체예에서, X는 0 또는 S이고, 가장 바람직하게는 O이다. 바람직한 구체예에서, Ar은 페닐 또는 나프틸이며, 가장 바람직하게는 페닐이며; 특정 바람직한 구체예에서, 페닐 기는 1-3 할로겐, 트리플루오로메틸, 또는 C₁- C₆ 알콕시 치환기로 치환된다. 가장 바람직한 페닐 기는 4-플루오로페닐이다. 추가의 바람직한 구체예에서, R₁ 및 R₃ 각각은 모든 경우에서 H이다. 화학식 III의 화합물은 예를 들어, 본원에 기술된 바와 같은 화학식 I의 화합물을 제조하는데 유용하다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 III의 화합물을 제조하는 방법을 제공한다. 본 발명은 하기 화학식 IV의 화합물 또는 이의 염을 하기 화학식 V의 화합물 또는 이의 염과 금속 촉매의 존재하에 화학식 III의 화합물이 형성되는 조건하에 반응시켜 화학식 III의 화합물을 제조하는 것을 포함한다:

화학식 (IV)의 화합물

화학식 (V)의 화합물

상기 식에서,

X는 0 또는 S(O)_m이고; m은 0, 1, 또는 2이며; n은 1 또는 2이고; R₁은 수소, -CN, -C00H, 할로겐, C₁- C6 알킬, C₁- C₆ 알콕시; C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁- C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되며; Ar은 아릴 기이며;

Z는 할로겐, 트리플레이트, 메실레이트, 또는 기타 적합한 기로 구성된 군으로부터 선택되며; p는 1 또는 2이며; R₃은 독립적으로 수소, 할로겐, 아미노, C₁- C₆ 알킬, C₁- C₆ 알콕시, C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁- C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 선택되고;

Y는 S(O)_nL이고; n은 0, 1, 또는 2이고; L은 C₁- C₆ 알킬 기이다. 바람직한 구체예에서, 화학식 IV의 화합물에서, X는 0 또는 S이며, 가장 바람직하게는 0이며; 특정 바람직한 구체예에서, 화학식 IV의 화합물에서, Ar은 페닐 또는 나프틸이고, 가장 바람직하게는, 페닐이고; 특정 바람직한 구체예에서, 페닐은 1-3 할로겐, 트리플루오로메틸, 또는 C₁- C₆ 알콕시 치환기로 치환되며; 가장 바람직한 페닐 기는 4-플루오로페닐이다. 추가의 바람직한 구체예에서, 화학식 IV 또는 V의 화합물의 R₁ 및 R₃ 각각은 모든 경우에서 H이다.

본 발명은 n이 2인 화학식 III의 화합물을 R₄ 및 R₅가 화학식 I에서 정의된 바와 같은 화학식 HOR₄ 또는 HNR₄R₅의 친핵체 또는 이의 컨쥬게이트 염기와, 기 -S(O)_n가 대체되고, 화학식 I의 화합물 또는 이의 염이 형성되는 조건하에 반응시키는 것을 포함하여, 화학식 I의 화합물 또는 이의 염을 제조하는 방법을 포함한다.

본 발명의 이러한 양태 및 기타 양태 및 이점은 하기 설명으로부터 분명해질 것이다.

도면의 설명

도 1은 화학식 I의 이미다조옥사졸 화합물을 제조하는 한 방법을 나타낸다.

도 2는 화학식 I의 이미다조티아졸 화합물을 제조하는 한 방법을 나타낸다.

도 3은 화학물 LXXXVII로 처리시 래트의 발목 직경의 평균 증가치를 나타낸다.

도 4는 화합물 LXXXIV로 처리시 래트의 발목 직경의 평균 증가치를 나타낸다.

도 5는 화합물 CXIX로의 처리시 래트의 발목 직경의 평균 증가치를 나타낸다.

도 6은 화합물 CCLXXXI로의 처리시 래트의 발목 직경의 평균 증가치를 나타낸다.

도 7은 화합물 CCLXXVIII로의 처리시 래트의 발목 직경의 평균 증가치를 나타낸다.

도 8은 화합물 CCLXXIX로의 처리시 래트의 발목 직경의 평균 증가치를 나타 낸다.

도 9는 화합물 CCLXXX로의 처리시 래트의 발목 직경의 평균 증가치를 나타낸다.

본 발명은 p38 또는 사이토카인 활성과 관련되거나 p38 또는 사이토카인 관련 사람 및 가축 질환의 치료에 유용한 화합물, 약제 조성물 및 방법을 제공한다.

정의

용어 "알킬"은 불포화기가 없는 탄소 및 수소 함유 라디칼이다. 알킬 라디칼은 직쇄이거나 분지쇄일 수 있다. 알킬 라디칼은 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 헥실, t-부틸, sec-부틸 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. C₁ - C₆ 알킬 기는 직쇄 또는 분지쇄 알킬 백본에 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 알킬 기이다. 알킬 기는 선택적으로 하나 이상의 잔기 예컨대, 히드록실 기, 카르복실레이트, 옥소, 할로겐, 티올, 시아노, 니트로, 아미노, - NR₁₂R₁₃, C₁-C₆ 알킬티오, 아릴티오, C₁- C₆ 알킬, C₁- C₆ 알콕시, 아릴옥시, 알킬카르보닐옥시, 아릴카르보닐옥시, C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, C₂ - C₆ 알케닐, C₂ - C₆ 알키닐, 아릴, 아미노카르보닐, C₁ - C₆ 알킬카르보닐, C₃ - C₆ 시클로알킬카르보닐, 헤테로시클릴카르보닐, 아릴카르보닐, 아릴옥시카르보닐, C₁- C₆ 알콕시카르보닐, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시카르보닐, 헤테로시클릴옥시카르보닐, C₁- C₆ 알킬설포닐, 아릴설포닐, 헤테로시클릴 기 등으로 치환될 수 있다.

"시클로알킬" 기는 고리 부분에 3 내지 7개의 탄소 원자를 갖는 고리를 갖는 시클릭 알킬 기이다. 시클로알킬 기는 알킬기에 대해 기술된 바와 같은 하나 이상의 잔기들로 치환될 수 있다.

용어 "알케닐"은 하나 이상의 탄소-탄소 이중결합을 갖는 탄화수소 라디칼이다. C₂ - C₆ 알케닐 기는 직쇄 또는 분지된 알케닐 백본에서 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 알케닐 기이다. 예를 들어, 알케닐 라디칼은 비닐, 프로페닐, 2-부테닐 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 알케닐 기는 알킬 기에 대해 기술된 바와 같은 하나 이상의 잔기로 치환될 수 있다.

본원에 기술된 바와 같은 용어 "알키닐"은 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 탄화수소 라디칼을 의미한다. C₂ - C₆ 알키닐 기는 직쇄 또는 분지된 알키닐 백본에서 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 알키닐 기이다. 예를 들어, 알키닐 잔기는 프로피닐, 3-헥시닐 등을 포함한다. 알키닐 기는 알킬 기에 대해 기술된 바와 같은 하나 이상의 잔기로 치환될 수 있다.

용어 "아릴"은 1, 2 또는 3개의 고리를 갖는 방향족 카보시클릭 또는 헤테로방향족 잔기를 의미한다. 아릴 기는 카보시클릭일 수 있거나 방향족 고리에 선택적으로 1 내지 4개의 헤테로원자 (예컨대, 질소, 황, 또는 산소)를 함유할 수 있다. 예를 들어, 아릴 라디칼은 페닐, 나프틸, 피리딜, 피리미딜, 트리아질, 퀴나졸리닐, 티아졸릴, 벤조티오페닐, 푸라닐, 이미다졸릴 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 아릴 기는 하나 이상의 치환기 예컨대, 히드록실 기, 할로겐, 티올, 시아노, 니트로, 아미노, -NR₁₂R₁₃, C₁- C₆ 알킬티오, 아릴티오, C_l - C₆ 알킬, C₁- C₆ 알콕시, 아릴옥시, 알킬카르보닐옥시, 아릴카르보닐옥시, C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, C₂ - C₆ 알케닐, C₂ - C₆ 알키닐, 아릴, 카르복실레이트, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, C₃ - C₆ 시클로알킬카르보닐, 헤테로시클릴카르보닐, 아릴카르보닐, 아릴옥시카르보닐, C₁- C₆ 알콕시카르보닐, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시카르보닐, 헤테로시클릴옥시카르보닐, 아릴옥시카르보닐, C_l - C₆ 알콕시카르보닐, C₁- C₆ 알킬설포닐, 아릴설포닐, 헤테로시클릴 기 등으로 선택적으로 치환될 수 있다.

용어 "헤테로시클릴" 또는 "헤테로사이클"은 안정한 비-방향족 3 내지 7원 모노시클릭 헤테로시클릭 고리 또는 8 내지 11원 비시클릭 헤테로시클릭 고리를 의미하며, 이는 포화되거나 불포화되며, 융합되거나, 스피로되거나 브릿징되어 추가적인 고리를 형성할 수 있다. 각각의 헤테로사이클은 하나 이상의 탄소 원자 및 질소, 산소 및 황으로 구성된 군으로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자로 이루어진다. 헤테로시클릴 라디칼은 임의의 엔도시클릭 탄소에 부착할 수 있어 안정한 구조를 유도할 수 있다. 바람직한 헤테로사이클은 3 내지 7원 모노시클릭 헤테로사이클 (더욱 바람직하게는, 5 내지 7원 모노시클릭 헤테로사이클) 및 8 내지 10원 비시클릭 헤테로사이클을 포함한다. 이러한 기의 예로는 피페리디닐, 피라닐, 피페라지닐, 모르폴리닐, 티아모르폴리닐, 티아모르폴리닐 설폰, 옥소피페리디닐, 옥소피롤리디닐, 옥소아제피닐, 아제피닐, 이속소졸릴, 테트라히드로피라닐, 테트라히드로푸라닐, 디옥솔릴, 디옥시닐, 옥사티올릴, 벤조디옥솔릴, 디티올릴, 티오페닐, 테트라히드로티오페닐, 설폴라닐, 디옥사닐, 디옥솔라닐, 테트라히드로푸로디히드로푸라닐, 테트라히드로피라노디히드로푸라닐, 디히드로피라닐, 테트라히드로푸로푸라닐 및 테트라히드로피라노푸라닐을 포함한다. 헤테로사이클은 선택적으로 알킬 기에 대해 상기 기술된 바와 같은 하나 이상의치환기로 선택적으로 치환될 수 있으며, 단 엔도시클릭 산소는 치환될 수 없으며, 엔도시클릭 질소 원자는 수소, C₁- C₆ 알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬, C₂ - C₆ 알케닐, C₂ - C₆ 알키닐, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 아릴카르보닐, 아릴옥시카르보닐, C₁- C₆ 알콕시카르보닐, C₁- C₆ 알킬설포닐, 아릴설포닐, 또는 헤테로시클릴 기로 치환될 수 있다. 본원에 사용된 "아자사이클"은 상기 기술된 바와 같은 엔도시클릭-질소-함유 헤테로사이클이다. 바람직한 아자사이클은 (비제한적으로) 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 모르폴리노, 아제피닐, 퀴누클리디닐 (1-아자비시클로[2.2.2]옥타닐) 및 트로파닐 (8-메틸-8-아자비시클로 [3.2.1] 옥타닐)로 치환되거나 치환되지 않는다.

용어 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬, 및 요오드로부터 선택된 원자이다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "아미노"는 화학식 - NR₁₀R₁₁의 잔기를 의미하며, 여기서, R₁₀ 및 R₁₁는 각각 수소, C₁- C₆ 알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬, 아릴, 및 헤테로시클릴 잔기로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나; R₁₀ 및 R₁₁는 이들에 결합된 질소 원자와 함게 3 내지 8원의 헤테로시클릭 고리 (이는 헤테로시클릴 잔기에 대해 상기 기술된 바와 같이 융합되거나 브릿징될 수 있음)를 형성한다. 바람직한 아미노 기는 NH₂, 모노알킬아미노 (-NHC₁-C₆ 알킬), 디알킬아미노 (-N(C₁-C₆ 알킬)₂), 모노아릴아미노 (-NH-아릴), 아릴알킬아미노 (-N(아릴)(C₁-C₆ 알킬)) 등을 포함한다.

R₁₂는 수소, C_l - C₆ 알킬, 및 아릴로 구성된 군으로부터 선택된다. R₁₃은 -C(O)-C₁-C₆ 알킬, -C(O)-C₃-C₆ 시클로알킬, -C(O)-아릴, -C(O)-헤테로시클릴, -C(O)O-C₁- C₆ 알킬, -C(O)O-C₃ - C₆ 시클로알킬, -C(O)O-아릴, - C(O)O-헤테로시클릴, -C(O)-아미노, -S0₂-C₁- C₆ 알킬, -SO₂-C₃ - C₆ 시클로알킬 -S0₂-아릴, 및 -SO₂-헤테로시클릴로 구성된 군으로부터 선택된다.

다르게 언급되지 않는한, 질소 원자의 N-옥사이드 형태는 본 발명의 화합물 및 방법에 포함된다.

I. 본 발명의 화합물

한 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 염 (바람직하게는, 약제학적으로 허용되는 염)을 제공한다:

상기 식에서,

X는 0 또는 S(O)_m이며; Y는 OR₄ 또는 NR₄R₅이며; m은 0, 1, 또는 2이며; n은 1 또는 2이며; R₁은 수소, -CN, -C00H, 할로겐, C₁- C₆알킬, C₁- C₆알콕시; C₃ - C₆시클로알킬, C₃ - C₆시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁- C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되며; Ar은 아릴기이며; R₃은 수소, 할로겐, 아미노, C₁- C₆ 알킬, C₁-C₆ 알콕시, C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁-C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되며; R₄ 및 R₅는 각각 수소, C₁- C₆ 알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬, 아릴, 및 헤테로시클릴로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나; R₄와 R₅는 이들에 결합된 N 원자와 함께 3 내지 8 원자의 헤테로시클릭 고리를 형성하며;

추가의 바람직한 구체예에서, Y는 NR₄R₅이고, 바람직하게는 R₄는 수소이다. 바람직한 구체예에서, R₅는 C₂-C₆ 히드록시알킬, C₂-C₆아미노알킬, 히드록시아릴, 아미노아릴, C₃ - C₆ 시클로알킬 및 헤테로시클릴로 구성된 군으로부터 선택되며, 더욱 바람직하게는, R₅는 C₂-C₆ 히드록시알킬 또는 질소 함유 헤테로사이클 (아자사이클)이며, 더욱 바람직하게는, 퀴누클리딘-3-일이다.

추가의 구체예에서, R₁ 및 R₃ 각각은 모든 경우에서 H이다.

화학식 I의 화합물은 트래이서, 태그 또는 라벨링 잔기 예를 들어, 라디오이소토프 (예컨대, 트리튬, 탄소-14 또는 황-35), 형광성 라벨 등을 포함할 수 있으며, 이는 당업자에게 공지되어 있다. 이러한 라벨링된 화합물은 세포 또는 조직 유형에서 p38의 존재를 검출하거나 측정하기 위한 방법에 사용될 수 있다.

바람직한 구체예에서, 화학식 I의 화합물은 화합물의 원하는 활성을 보존하기 위해 선택된다 (예를 들어, TNFα 활성 및 IL-1 활성의 억제, 또는 p38 활성의 억제를 포함하는 사이토카인 활성의 억제). 이와 같이, 화학식 I의 화합물의 치환기 (R₁, R₃, R₄, Y 등)는 이러한 활성이 보존되도록 선택되어야 한다. 활성의 보존은 본 명세서의 다른 부분에 기술된 검정법과 같은 생체내 및 실험관내 검정을 이용하여 측정될 수 있다.

예를 들어, 본원에 기술된 바와 같이, 화학식 I의 바람직한 화합물은 Ar이 페닐 또는 나프틸 기이며, 더욱 바람직하게는 하나 이상의 할로겐 잔기, 바람직하게는 플루오르 원자로 치환되며, 더욱 바람직하게는 (페닐 고리가 이미다조옥사졸 또는 이미다조티아졸 잔기로 부착되는 지점과 관련하여) 부착된 페닐 고리의 4번 위치에 위치한다.

특정 바람직한 구체예에서, 화학식 I의 화합물에서, R₃은 수소이다.

화학식 I의 화합물의 바람직한 구체예에서, Y는 -OR₄ 또는 -NR₄R₅, 더욱 바람직하게는 -NR₄R₅이다. 바람직한 구체예에서, -NR₄R₅은 -NH-히드록시알킬 또는 -NH-헤테로시클릴이며, 여기서 헤테로시클릴 부분은 고리계에서 3 내지 8개의 원자를 갖는 질소-함유 고리계이며, 고리계의 1 내지 3개의 원자는 질소 원자이다.

화학식 I의 또 다른 구체예에서, Y는 -NHR₇이며, R₇은 -C(O)-알킬, -C(O)-아릴, -C(O)O-알킬, -C(O)O-아릴, -C(O)-NR₈R₉, -S(O)₂-알킬 및 -S(O)₂-아릴이며, 여기서 R₈ 및 R₉는 수소, 알킬 및 아릴로부터 각각 독립적으로 선택된다.

일반적으로, 본원에 기술된 구조는 특정 입체화학이 특별하게 지시되지 않는 한 구조의 모든 입체화학 형태 즉, 각각 비대칭 중심에 있어서 R 및 S 형태를 포함하는 것을 뜻한다. 따라서, 본 화합물의 단일 입체화학 이성질체 (즉, 실질적으로 순수한 거울상이성질체 및 부분입체 이성질체 혼합물 예컨대, 라세미체 혼합물은 본 발명의 범위내에 있다. 또한, 모든 기하학 이성질체 예컨대, 이중 결합에서의 E- 및 Z-형태는 다르게 언급되어 있지 않는 한 본 발명의 범위내에 있다. 본 발명의 특정 화합물은 토토머 형태로 존재할 수 있다. 본 발명의 모든 이러한 토토머 형태는 다르게 언급되어 있지 않는 한 본 발명의 범위내에 속한 것으로 여겨진다.

본 발명은 또한, 활성 화합물의 프로드러그인 화합물을 포함한다. 일반적으로, 프로드러그는 생체내에서 대사되어 (예를 들어, 대사 변형 예컨대, 탈아민화, 탈알킬화, 탈에스테르화 등) 활성 화합물을 제공하는 화합물이다. "약제학적으로 허용되는 프로드러그"는 정상적인 의학적 판단내에서 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 등을 유도하지 않으면서 사용하고자 하는 바에 효과적인 환자에 사용하기에 약제학적으로 적합한 화합물이며, 가능하게는 본 발명의 화합물의 약제학적으로 허용되는 에스테르 및 양쪽 이온성 형태를 포함한다. 본 발명에 의해 고려되는 약제학적으로 허용되는 프로드러그 유형의 예로는 본원에 참고문헌으로 인용된 문헌 [T.Higuchi and V.Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series, and in Edward B.Roche, ed., Bioreversibel Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987]에 기술되어 있다.

본 발명의 화합물 및 조성물은 또한 대사물을 포함할 수 있다. 본원에 기술된 바와 같이, 용어 "대사물"은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 유사체 또는 유도체의 대사 생성물을 의미하며, 이는 본 발명의 화합물과 유사한 실험관내 또는 생체내 활성을 나타낸다.

본 발명의 화합물 및 조성물은 또한 수화물 및 용매화물을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "용매화물"은 용질 (본 발명에서는 화학식 I의 화합물)과 용매에 의해 형성된 착물을 복합물을 의미한다. 본 발명의 목적을 위한 이러한 용매는 바람직하게는, 용질의 생물학적 활성을 간섭하지 않아야 한다. 용매를 예를 들어, 물, 에탄올 또는 아세트산일 수 있다.

II. 본 발명의 화합물을 제조하는 방법 및 중간체

본 발명의 화합물은 다양한 방법에 의해 제조될 수 있으며, 이들 일부는 당해분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 피리미딜 치환된 이미다조티아졸의 합성 방법은 PCT 특허 출원 WO 03/00682에 기술되어 있다. 일반적으로, 본 발명의 화합물은 시중에서 구입가능한 화합물, 문헌에 공지된 화합물, 또는 사전 제조된 중간체로부터 본원에 교시된 관점에서 당업자에게 자명할 당해분야에 공지된 표준 합성 방법 및 공정을 이용하여 제조될 수 있다. 유기 분자 및 작용기 변형물 및 조작물을 제조하기 위한 표준 합성 방법 및 공정은 당해분야의 관련 과학 문헌 또는 표준 텍스트북으로부터 수득될 수 있다. 하나 또는 수개의 공급원으로 제한하고자 하는 것은 아니지만, 문헌 예컨대, [Smith, M.B.; March, J.March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5^th ed.; John Wiley & Sons; New York, 2001; and Greene, T.W.; Wuts, P.G.M. Protective Groups in Organic Synthesis, 3^rd.; John Wiley & Sons; New York, 1999]이 유용하고 인정받은 당업자에게 공지된 유기 합성의 참고 텍스트북이다.

구체에에서, 본 발명은 중간체 화합물을 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 하기 화학식 II의 신규한 화합물 또는 이의 염을 제공한다:

상기 식에서,

R₁은 수소, -CN, -C00H, 할로겐, C₁-C₆ 알킬, C₁-C₆ 알콕시, C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁- C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 선택되고; Ar은 아릴 기이다. 당업자가 본원에 교시된 바로부터 인지할 바와 같이, 화학식 II의 화합물은 화학식 I의 이미다조옥사졸 화합물의 합성에 특히 유용하다. 예를 들어, 도 1에 도시된 바와 같이, 화학식 II의 화합물 예컨대, 화합물 4는 헤크 반응 조건하에 전형적으로 팔라듐 촉매 (예컨대, Pd(OAc)₂)를 사용하여 적합한 할로피리미딘 화합물 (예컨대, 화합물 5)와 반응시켜 화학식 I의 화합물 또는 이러한 화합물의 전구체를 제공할 수 있다. 화학식 II의 화합물의 바람직한 구체예에서, Ar은 페닐 또는 나프틸, 가장 바람직하게는 페닐이며; 특정 바람직한 구체예에서, 페닐기는 예를 들어, 1-3 할로겐, 트리플루오로메틸, 또는 C₁- C₆ 알콕시 치환기로 치환된다. 특정 바람직한 구체예에서, 페닐기는 비치환된 페닐, 4-플루오로페닐, 3-메톡시페닐, 4-메톡시페닐, 3,4-디플루오로페닐, 4-메틸페닐, 4-브로모페닐, 3-플루오로페닐 및 4-트리플루오로메틸페닐로 구성된 군으로부터 선택된다. 가장 바람직한 페닐 기는 4-플루오로페닐이다. 바람직한 구체예에서, R₁은 H이다. 가장 바람직한 구체예에서, R₁은 H이고, Ar은 4-플루오로페닐이다.

상기 식에서,

X는 0 또는 S(O)_m이고; m 및 n은 각각 독립적으로, 0, 1, 또는 2이고; p는 1 또는 2이고; R₁은 독립적으로 수소, -CN, -COOH, 할로겐, C₁-C₆ 알킬, C₁- C₆ 알콕시, C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁- C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 선택되고; Ar은 아릴 기이고; R₃은 독립적으로 수소, 할로겐, 아미노, C₁- C₆ 알킬, C₁- C₆ 알콕시, C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁- C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 선택되고; L은 C₁- C₆ 알킬 기 또는 아릴 기이다. 화학식 III의 화합물은 예를 들어, 본원에 기술된 바와 같은 화학식 I의 추가적인 화합물을 제조하는데 유용하다. 예를 들어, n이 2인 기 S(O)_nL은 당해분야에 공지된 산소 및 질소 친핵체를 포함하는 친핵체에 의해 대체되기에 적합한 이탈기이다. n이 0 또는 1인 화학식 III의 화합물에 있어서, 티오알킬 황 원자의 산화는 바람직하게는 선택적인 방식으로 달성되어 친핵체 대체에 적합한 화합물을 제공한다. 본원에 기술된 바와 같이, 옥손(Oxone^TM)은 본 목적에 바람직한 산화제이다. 염 형태의 화학식 III의 화합물은 하기에 기술된 바와 같이 약제학적으로 허용되는 염을 포함할 수 있다.

화학식 III의 화합물은 본원에 기술된 방법 또는 당업자에게 자명한 기타 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 바와 같이, 화학식 III의 화합물은 헤크 조건하에 화학식 II의 화합물과 4-할로-2-알킬티오피리미딘을 반응시키므로써 제조될 수 있다. 헤트 반응을 위한 금속 촉매는 전형적으로 팔라듐 촉매 에컨대, Pd(OAc)₂이다. 바람직하게는, 첨가제 예컨대, 트리페닐 포스핀 또는 염기 예컨대, 탄산세슘이 본 반응을 촉진하는데 사용될 수 있다.

화학식 III의 화합물과 화학식 HOR₄ 또는 HNR₄R₅의 친핵체와의 반응에서, 프로톤 스폰지로서 작용하는 염기의 존재하에 반응을 수행하는 것이 일반적으로 용이하며; 휴니그 염기(Hunig's base)와 같은 장애된 아민 염기는 아민 친핵체가 화학식 III의 화합물의 설폰 잔기를 치환하는데 사용될 경우 본 목적에 유용하다. 기타 장애된 아민 염기 예컨대, 2,6-루티딘은 본 목적에 또한 유용할 수 있다. 산소 친핵체가 치환 반응에 사용될 경우, 기타 염기 예컨대, 탄산칼륨 (예를 들어, 실시예 3 참조)이 사용될 수 있다.

구체예에서, 본 발명은 화학식 III의 화합물을 제조하는 방법을 제공한다. 본 방법은 하기 화학식 IV의 화합물 또는 이의 염을 하기 화학식 V의 화합물 또는 이의 염과 금속 촉매의 존재하에 화학식 III의 화합물이 형성되는 조건하에 반응시켜 화학식 III의 화합물을 제조하는 것을 포함한다:

화학식 (IV)의 화합물

화학식 (V)의 화합물

상기 식에서,

X는 0 또는 S(O)_m이고; m은 0, 1, 또는 2이며; n은 1 또는 2이고; R₁은 수소, -CN, -C00H, 할로겐, C₁- C₆ 알킬, C₁- C₆ 알콕시; C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁- C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되며; Ar은 아릴 기이며; Z는 할로겐, 트리플레이트, 메실레이트, 또는 기타 적합한 기로 구성된 군으로부터 선택되며; p는 1 또는 2이며; R₃은 독립적으로 수소, 할로겐, 아미노, C₁- C₆ 알킬, C₁- C₆ 알콕시, C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁- C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 선택되고; Y는 S(O)_nL이고; n은 0, 1, 또는 2이고; L은 C₁- C₆ 알킬 기이다. 화학식 IV의 화합물은 본원에 기술된 바와 같이 제조될 수 있거나 (예를 들어, 도 1 및 2, 및 실시예 1 및 2에 기술된 바와 같이), 본원에 교시된 관점에서 당업자에게 공지되거나 자명할 방법에 따라 제조될 수 있다. 화학식 IV의 바람직한 구체예에서, X는 O이며; Ar은 페닐 또는 나프틸, 가장 바람직하게는 페닐이며; 특정 바람직한 구체예에서, 페닐 기는 예를 들어, 1-3 할로겐, 트리플루오로메틸, 또는 C₁- C₆ 알콕시 치환기로 치환된다. 특정 바람직한 구체예에서, 페닐 기는 비치환된 페닐, 4-플루오로페닐, 3-메톡시페닐, 4-메톡시페닐, 3,4-디플루오로페닐, 4-메틸페닐, 4-브로모페닐, 3-플루오로페닐 및 4-플루오로페닐로 구성된 군으로부터 선택된다. 가장 바람직한 페닐 기는 4-플루오로페닐이다. 바람직한 구체예에서, R₁은 모든 경우에서 H이다. 가장 바람직한 구체예에서, X는 O이며, R₁은 H이고, Ar은 4-플루오로페닐이다. 화학식 V의 화합물은 문헌에 보고되어 있다 (예를 들어, 4-요오도-2-메틸티오 피리미딘; 예를 들어, PCT 공개 WO 02/04447 (2002) 참조). 화학식 V의 추가의 화합물은 하나 이상의 일정한 실험을 이용하여 본원에 교시된 관점에서 당업자에 의해 제조될 수 있다.

본 발명의 이미다조옥사졸 화합물을 제조하는 방법은 하기 실시예에 기술되어 있으며, 도 1에 예시되어 있다. 도 1에서, 단계 a는 적합하게 치환된 α-할로케톤 1(여기서, Ar은 아릴 잔기임)을 선택적으로 치환된 2-아미노옥사졸 2와 반응시킨다. 이러한 반응은 불활성 유기 용매 예컨대, 아세토니트릴 또는 유사한 용매중에서 실온하에 전형적으로 수행된다. 생성물 3은 전형적으로 여과에 의해 고형의 수소 브로마이드 염으로서의 반응 혼합물로부터 분리된다. 도 1에서 단계 b로서 나타낸 이미다조옥사졸 화합물 4를 수득하기 위한 화합물 3의 고리화는 용이하게는 탈구제 예컨대, 티타늄 테트라클로라이드를 단계 a로부터의 생성물에 첨가하므로써 수행된다. 생성된 반응 혼합물을 적합한 pH 변형시킨 후, 이러한 반응은 화합물 4를 제공한다. 화합물 4와 적합하게 치환된 피리미딘 5를 결합시켜 화합물 6을 생성시키는 것은 도 1의 단계 c에 도시된 바와 같이 팔라듐 촉매와 가장 빈번하게 수행된다. 헤크-유형 반응에 적합한 팔라듐 촉매가 일반적으로 바람직하다. 본 반응은 무수성 용매 가장 용이하게는 디메틸포름아미드중에서 승온하에 전형적으로 수행된다. 기타 4-할로-피리미딘이 사용될 수 있지만, 바람직한 피리미딘제는 4-요오도-2-티오메틸피리미딘이다. 화합물 6을 제공하는 화합물 4와 화합물 5의 헤크-유형 반응은 항상 완료되는 것은 아니기 때문에, 화합물 4와 화합물 6의 혼합물을 함께 다음 단계를 통해 용해시키고, 후속 단계에서 비반응된 출발 물질 4를 분리시킨다 (그리고, 바람직하게는, 회수하고 재순환시킨다).

산화단계 d (도 1)는 문헌에 공지된 다양한 표준 산화제로 수행될 수 있다. 한가지 바람직한 방법은 실온에서 옥손(Oxone^TM)의 수성액을 사용하는 것이다. 단계 e에서 화합물 7의 설폰 이탈기를 산소 또는 질소 친핵체로 대체하여 본 발명의 화합물 8 (여기서, Y는 화학식 I에서 정의된 바와 같음)의 추가적인 화합물을 제공하는 것은 새로 생성된 신규한 결합의 특성에 따라 많은 표준 공정을 이용하여 수행될 수 있다. 아민 친핵체의 경우, 예를 들어, 한 바람직한 방법은 디메틸설폭시드 (DMSO) 용액중의 일차 또는 이차 아민의 염을 장애된 유기 염기 예컨대, 디이소프로필에틸아민과의 반응을 승온하에 교반시키면서 수행하는 것이다. 또 다른 바람직한 방법은 고온의 디메틸설폭시드중의 과량의 아민 유리 염기를 교반시키면서 사용하는 것이다. 그 후, 화합물 8을 분리하고, 표준 기법을 사용하여 정제할 수 있다. 화합물 8의 추가의 작용기화는 필요에 따라 수행될 수 있다. 예를 들어, 비보호된 화합물을 수득하기 위한 탈보호는 당업자에게 일상적인 것으로서 수행될 수 있다 (예를 들어, 보호기 예컨대, t-부톡시카르보닐 기는 보호된 아민으로부터 제거되어 비보호된 아민을 수득할 수 있다). 대안적으로, 아미드 또는 설폰아미드의 형성은 일차 또는 이차 아민의 아실화에 의해 수득될 수 있다 (예를 들어, 화합물 CCLXXX로부터 제조된 표 1의 화합물 CCLXXVIII 및 CCLXXIX).

본 발명의 이미다조티아졸 화합물을 제조하기 위한 유사한 방법은 도 2에 도시되어 있다.

도 2에 도시된 바와 같이, 단계 a에서, 적합하게 치환된 α-할로케톤 9 (여기서, Ar은 아릴 잔기임)는 선택적으로 치환된 2-아미노티아졸 10과 반응하여 융합된 헤테로사이클 11을 생성시킨다. 이러한 반응은 불활성 유기 용매 예컨대, 에탄올 등에서 선택적으로 승온하에 수행된다. 화합물 11을 적합하게 치환된 피리미딘 5와 결합시켜 화합물 12를 생성시키는 것은 도 2의 단계 b에 도시된 바와 같이 팔라듐 촉매로 가장 빈번하게 수행된다. 이러한 반응은 전형적으로, 무수성 용매, 가장 바람직하게는 디메틸포름아미드중에서 승온하에 수행된다. 바람직한 피리미딘제는 4-요오도-2-티오메틸피리미딘이지만, 기타 할로피리미딘이 사용될 수 있다. 화합물 12의 티오메틸기는 단계 c에서 산화되어 단계 d에서 치환 반응에 적합한 설폰 기를 제공할 수 있다. 산화 단계 c는 문헌에 공지된 다양한 표준 산화제로 수행될 수 있다. 바람직한 방법은 실온하에서 옥손의 수성 용액을 사용하는 것이며, 이는 유리하게는 이미다조티아졸 황 원자의 과도한 산화를 초래하지 않는다. 단계 d에서 이탈기를 산소 또는 질소 친핵체로 대체하여 본 발명의 화합물 14 (여기서, Y는 화학식 I에서 정의된 바와 같음)의 추가의 화합물을 제공하는 것은 생성된 신규한 결합의 특성에 따라 다양한 표준 공정을 이용하여 수행될 수 있다. 아민 친핵체의 경우, 예를 들어, 바람직한 방법은 디메틸설폭시드 용액중의 일차 또는 이차 아민의 염을 갖는 화합물 13을 장애된 유기 염기 예컨대, 디이소프로필에틸아민과 승온하에 교반시키면서 반응시키므로써 수행된다. 또 다른 바람직한 방법은 고온의 디메틸설폭시드중의 아민 유기 염기를 교반시키면서 사용하는 것이다. 상기 기술된 바와 같이, 생성물 14의 추가의 작용기화는 필요에 따라 수행될 수 있다.

III. 본 발명의 치료학적 및 진단학적 방법

또 다른 양태에서, 본 방법은 p38 또는 하나 이상의 사이토카인 관련 (예를 들어, 이에 의해 직접적으로 또는 간접적으로 매개된) 질환을 치료하기 위한 방법을 제공한다. 예를 들어, 바람직한 구체예에서, 본 방법은 치료학적으로 또는 생리학저으로 유효한 양의 본 발명의 화합물을 치료가 필요한 대상 (예를 들어, 이러한 치료가 필요한 포유동물)에 투여하는 것을 포함한다. 본 발명의 화합물은 바람직하게는 화학식 I의 화합물이다. 대안적으로, 화합물은 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV 또는 화학식 V, 또는 이의 복합물일 수 있다. 대상은 하나 이상의 세포, 조직 또는 유기체일 수 있다. 바람직한 대상은 포유동물이다. 포유동물은 어떠한 포유동물도 포함한다. 비제한적인 예로서, 바람직한 포유동물은 소, 돼지, 양, 염소, 말, 낙타, 버팔로, 고양이, 개, 래트, 마우스 및 사람을 포함한다. 매우 바람직한 포유동물 대상은 사람이다.

본 발명의 방법에 있어서, 화합물(들)은 공지된 약물 전달 경로를 통해 대상에 투여될 수 있다. 특이적 투여 경로 예로는 경구, 안구, 직장, 구강, 국부, 비, 눈, 피하, 근내, 정맥내 (식괴 및 주입), 뇌내, 경피 및 폐를 포함한다.

한 구체예에서, 본 발명은 p38 활성이 표현형에 기여하는 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법은 본 발명의 화합물을 이를 필요로 하는 대상에 치료학적으로 또는 생리학적으로 유효한 양으로 투여하는 것을 포함한다. 또한, 본 발명의 화합물은 바람직하게는, 화학식 I의 화합물이다. 대안적으로, 본 화합물은 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV 또는 화학식 V, 또는 이들의 복합물일 수 있다.

용어 "p38-관련 질병"은 직접적이든 또는 간접적이든 p38 MAP 키나아제 시그널링 경로가 포함된 질환 또는 기타 유독한 질병을 의미한다. 이는 비제한적으로 IL-1, TNFα, IL-6 또는 IL-8 조절악화 또는 과다발현으로 인한 유지되거나, 연장되거나, 향상되거나 증가된 수준의 p38 활성을 초래하는 질환을 포함한다. 이러한 질환을 비제한적으로, 염증 질환, 자가면역 질환, 파괴성 골 장애, 증식 장애, 감연 질환, 신경퇴행성 질환, 알레르기, 발작시 재관류/허혈, 심장마비, 혈관신생 장애, 기관 저산소증, 혈관 증식, 심비대, 트림빈 유도된 혈소판 응집, 및 프로스타글란딘 또는 시클로옥시게나아제 경로와 관련된 질환 예를 들어, 포스타글란딘 엔도퍼옥시드 합성효소-2와 관련된 질환을 포함한다. p38-관련 질환은 p38의 이소폼과 관련되거나 이에 의해 매개된 질환을 포함할 수 있다. 바람직한 구체예에서, p38-관련 질환은 p38α와 관련된 질환이다.

용어 "p38 활성 조절"은 실험관내에서 또는 생체내에서 든지 p38 활성을 증가시키거나 감소시키는 것을 의미한다. p38 활성 조절은 바람직하게는, p38 활성을 감소 (억제)시키는 것을 의미한다. 특정 바람직한 구체예에서, 세포중의 p38 활성은 비처리된 대조군 세포의 p38 활성과 비교하여 20% 이상, 더욱 바람직하게는 30%, 40%, 50%, 805, 90%, 95% 또는 99% 이상 까지 억제된다. 바람직한 구체예에서, 세포 (또는 조직)중의 p38 활성은 본 발명의 방법에 따른 치료시 세포 (또는 조직) 유형에 대해 정상적인 범위로 복원된다.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 사이토카인과 관련된 질환 상태를 치료하기 위한 방법을 제공한다. 본 방법은 본 발명의 화합물을 이를 필요로 하는 대상에 치료학적으로 또는 생리학적으로 유효한 양으로 투여하는 것을 포함한다. 또한, 본 발명의 화합물은 바람직하게는, 화학식 I의 화합물이다. 대안적으로는, 본 화합물은 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV 또는 화학식 V, 또는 이의 복합물일 수 있다. 바람직한 구체예에서, 하나 이상의 사이토카인은 바람직하게는 IL-1, IL-6, IL-8 및 TNFα로 구성된 군으로부터 선택된다. 더욱 바람직한 구체예에서, 모든 사이토카인은 IL-1, IL-6, IL-8 및 TNFα로 구성된 군으로부터 선택된다. 비제한적인 예로서, 본 방법은 유효량의 본 발명의 화합물을 치료가 필요한 대상 (예를 들어, 이러한 치료가 필요한 포유동물)에 투여하는 것을 포함한다. 대상은 하나 이상의 세포, 조직 또는 유기체를 포함할 수 있다. 바람직한 대상은 포유동물이다. 포유동물은 어떠한 포유동물도 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 바람직한 포유동물은 소, 돼지, 양, 염소, 말, 낙타, 버팔로, 고양이, 개, 래트, 마우스 및 사람을 포함한다. 매우 바람직한 포유동물 대상은 사람이다.

본원에 사용된 바와 같은 변형된 사이토카인 활성과 관련된 질환은 사이토카인 활성이 비질환 상태와 비교하여 변형된 질환을 의미한다. 이는 비제한적으로 IL-1, TNFα, IL-6 또는 IL-8 조절악화 또는 과다발현으로 인한 유지되거나, 연장되거나, 향상되거나 증가된 수준의 p38 활성을 초래하는 질환을 포함한다. 이러한 질환을 비제한적으로, 염증 질환, 자가면역 질환, 파괴성 골 장애, 증식 장애, 감연 질환, 신경퇴행성 질환, 알레르기, 발작시 재관류/허혈, 심장마비, 혈관신생 장애, 기관 저산소증, 혈관 증식, 심비대, 트림빈 유도된 혈소판 응집, 및 프로스타글란딘 또는 시클로옥시게나아제 경로와 관련된 질환 예를 들어, 포스타글란딘 엔도퍼옥시드 합성효소-2와 관련된 질환을 포함한다. 사이토카인 관련 질환은 p38에 으해 조절될 수 있는 IL-1 (특히, IL-1β), TNFα, IL-6 또는 IL-8, 또는 기타 사이토카인과 관련되거나 이에 의해 매개된 질환을 포함할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 사이토카인 관련 질환은 TNFα와 관련된 질환이다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "치료학적 유효량" 및 "생리학적 유효량"은 확인된 질환 또는 질병을 치료하거나, 완화시시키거나 예방하거나, 검출가능한 치료학적, 예방적 또는 억제 효과를 나타는데 효과적인, 본 발명의 화합물의 양을 의미한다. 이러한 효과는 예를 들어, 하기 실시예에 기술된 검정법으로 검출될 수 있다. 대상에 대한 정확한 유효량은 대상의 체중, 크기 및 건강 상태; 질병의 특성 및 정도; 및 투여를 위해 선택된 치료법 또는 복합 치료법에 의존적일 것이다. 주어진 상태에 대해 치료학적으로 그리고 생리학적으로 효과적인 양은 당업자에 공지된 일정한 실험 및 임상의의 판단에 의해 결정될 수 있다.

화합물에 있어서, 치료학적 또는 생리학적 유효량은 예를 들어, 신생물 세포의 세포 배양 검정, 또는 동물 모델 일반적으로, 래트, 마우스, 토끼, 개 또는 돼지에서 초기에 에측될 수 있다. 동물 모델은 또한 적합한 투여 농도 범위 및 경로를 결정하는데 사용될 수 있다. 그 후, 이러한 정보는 사람에서 유용한 투여량 및 경로를 결정하는데 이용될 수 있다.

치료학적/생리학적 효능 및 독성은 세포 배양물 또는 실험 동물에서 표준 약제학적 공정에 의해 예를 들어, ED₅₀ (집단의 50%가 치료학적으로 효과적인 용량) 및 LD₅₀ (집단의 50%가 치사에 이르는 용량)로서 측정될 수 있다. 치료학적 효과와 독성 효과 간의 투여량 비는 치료학적 지수이며, 이는 비 ED₅₀/LD₅₀으로서 나타낼 수 있다. 큰 치료학적 지수를 나타내는 약제 조성물이 바람직하다. 세포 배양물 검정 및 동물 연구로부터 수득된 데이타는 사람에 사용하기 위한 투여량의 범위를 포뮬레이팅하는데 이용될 수 있다. 이러한 조성물중의 투여량은 바람직하게는, 독성이 없거나 거의 없는 ED₅₀를 포함하는 순환 농도 범위내에 있다.

더욱 특이적으로는, 초기 표적 혈장 농도는 약 5㎍/mL 내지 약 100㎍/mL, 바람직하게는 10㎍/mL 내지 약 100㎍/mL, 더욱 바람직하게는 약 20㎍/mL 내지 약 100㎍/mL일 수 있다. 이러한 혈장 농도를 달성하기 위해서, 본 발명의 화합물은 투여 경로에 따라 0.1㎍ 내지 100,000mg의 용량으로 투여될 수 있다. 특정 투여량 및 전달 방법에 대한 안내는 문헌에 제공되어 있으며, 일반적으로 당해분야의 숙련자가 이용가능하다. 일반적으로, 용량은 약 40 내지 약 100kg 체중의 환자에 대해 단일, 분할 또는 연속적 투여시 약 1mg/일 내지 약 10g/일, 약 0.1g 내지 약 3g/일, 약 0.3g 내지 약 3g/일, 또는 약 0.5g 내지 약 2g/일 수 있다 (이는 상기 범위보다 체중이 높거나 낮은 환자 특히, 40kg 미만의 아동에 대해서 조절될 수 있다).

정확한 투여량은 치료가 필요한 대상에 관련된 인자의 견지에서 숙력자에 의해 결정될 것이다. 투여량 및 투여는 충분한 수준의 활성제(들)을 제공하거나, 목적하는 효과를 유지시키도록 조절될 수 있다. 고려될 수 있는 요인은 질환 상태의 중증도, 대상의 일반적 건강 상태, 연령, 체중 및 성별, 식단, 시간 투간 및 빈도, 약물 복합물(들), 반응 민감도 및 치료에 대한 내성/반응을 포함한다. 길게 작용하는 약제 조성물은 특정 제형의 반감기 및 청소율에 따라 매 3 내지 4일, 매주, 또는 매 두주에 한번으로 투여될 수 있다.

본 방법은 또한, 자가면역 질환과 급성 및 만성 염증과 관련된 질환을 치료하는데 사용될 수 있다. 이들 질환은 류마티스 관절염; 류마티스 척추염; 골관절염; 통풍, 기타 관절염; 패혈증; 패혈성 쇼크; 내독소성 쇼크; 그람-네거티브 패혈증; 독소성 쇼크 신드롬; 근막통 증후군 (MPS); 세균성 이질; 천식; 성인호흡곤란 증후군; 만성 폐쇄성 폐질환; 만성 폐염증; 염증성 장질환; 크론병; 건선; 습진; 괘양성 결장염; 사구체 신염; 경피증; 만성 갑상선염; 그레이브스명; 자가면역 위장염; 중증근무력증; 자가면역 용혈성 빈혈; 자가면역 호중구 감소증; 혈소판감소, 췌장섬유증; 간섬유증을 포함한 만성 급성 간염; 급성 및 만성 신장 질환; 과민성 대장증후군; 피레시스; 재협착; 뇌말라리아; 발작 및 허혈 손상; 신경성 외상; 알츠하이머병; 헌팅턴병; 파크슨병; 급성 및 만선 통증; 알레르기성 류마티스 및 알레르기성 결막염을 포함한 알레르기; 심비대증, 만성 심부전; 급성 관동맥증후군; 악액질; 말라리아; 나병; 레슈마니아증; 라임병; 라이터증후군; 급성 활막염; 근육괴사; 정액낭염; 건염; 급성건초염; 파열성 추간판 탈출증; 골화석증; 혈전증; 규폐증; 폐 췌육증; 골재흡수 질환 예컨대, 골다공증 또는 다발성 골수종 관련 골 장애; 유방암종, 대장암종, 악성 흑색종, 위암 및 비소세포 폐암을 포함한 암; 이식편대숙주 반응; 및 자가면역 질환 예컨대, 다발성 경화증, 루푸스 및 섬유근통; AIDS 및 기타 바이러스 질환 예컨대, 헤르페스 조스터(Herpes Zoster), 헤르페스 심플렉스 I 또는 II, 인플루엔자 바이러스, 중증급성호흡기증후군(SARS) 및 사이토메갈로바이러스; 및 당뇨병을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 또한, 본 방법은 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 카포시 육종, 전이성 흑색종, 다발성 골수종, 전이성 유방암종을 포함한 유방암; 대장암종; 악성 흑색종; 위암; 비소세포 폐암(NSCLS); 골전이 등; 신경근육통; 두통, 암 통증, 치통 및 관절통을 포함한 통증; 고형암 신생혈관, 각막혈관신생 및 혈관종을 포함한 혈관형성; 프로스타글란딘 과산화물 합성효소-2와 관련된 질병을 포함하는 시클로옥시게나아제 및 리폭시게나아제 시그널링 경로 관련 질환 (부종, 열, 무통각 및 통증을 포함); 기관 저산소증; 트롬빈 유도된 혈소판 응집을 치료하는데 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물은 포유동물을 포함한 동물에서 원충성 질환을 치료하는데 유용할 수 있다.

구체예에서, 본 방법은 사람 도는 사람 이외의 동물, 바람직하게는 포유동물을 치료하는데 사용될 수 있다. 치료될 수 있는 포유동물로는 소, 돼지, 양, 염소, 말, 낙타, 버팔로, 고양이, 개, 래트 및 마우스를 포함하나 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 따른 치료는 질환을 예방하거나, 증상을 완화시키거나, 질환 진행을 감속시키거나, 손상을 거스리거나, 질환을 치료하다는 것을 포함함이 자명할 것이다.

한 양태에서, p38 또는 하나 이상의 사이토카인과 관련된 질환의 치료는 비처리된 대상의 집단과 비교하여 처리된 대상의 집단의 평균 생존 시간의 증가를 유도한다. 바람직하게는, 평균 생존 시간은 30일 초과; 더욱 바람직하게는 60일 초과; 더욱 바람직하게는 90일 초과; 심지어 더욱 바람직하게는 120일 초과 까지 증가된다. 집단의 생존 시간의 증가는 재현가능한 수단에 의해 측정될 수 있다. 바람직한 양태에서, 집단의 평균 생존 시간의 증가는 예를 들어, 집단에 있어서 활성 화합물로의 처리 개시 후 평균 생존 기간을 계산하므로써 측정될 수 있다. 또 다른 바람직한 양태에서, 집단의 평균 생존 시간의 증가는 예를 들어, 집단에 있어서 활성 화합물로의 1회 처리 완료 후 평균 생존 기간을 측정하므로써 측정될 수 있다.

또 다른 양태에서, p38 또는 하나 이상의 사이토카인과 관련된 질환의 치료는 담체 단독으로만 처리된 대상의 집단과 비교하여 처리된 대상의 집단의 사망률의 감소를 유도한다. 또 다른 양태에서, p38 또는 하나 이상의 사이토카인과 관련된 질환의 치료는 비처리된 집단과 비교하여 처리된 대상의 집단의 사망율의 감소를 유도한다. 추가의 양태에서, p38 또는 하나 이상의 사이토카인과 관련된 질환의 치료는 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 대사물, 유사체 또는 유도체가 아닌 화합물인 약물로 단일치료법으로 처리된 집단과 비교하여 처리된 대상의 집단의 사망율 감소를 유도한다. 바람직하게는, 사망율은 2% 초과; 더욱 바람직하게는 5% 초과; 더욱 바람직하게는 10% 초과; 및 가장 바람직하게는 25% 초과 까지 감소한다. 바람직한 양태에서, 처리된 대상의 집단의 사망율 감소가 임의의 재현가능한 수단에 의해 측정될 수 있다. 또 다른 바람직한 양태에서, 집단의 사망율 감소는 예를 들어, 집단에 있어서 활성 화합물로 처리 개시 후 단위 시간당 평균 질환 관련 치사 수를 계산하므로써 측정될 수 있다. 또 다른 바람직한 양태에서, 집단의 사망율 감소는 예를 들어, 집단에 있어서 활성 화합물로의 1회 처리 완료 후 시간 당 평균 질환 관련 치사 수를 계산하므로써 측정될 수 있다.

또 다른 양태에서, p38 또는 하나 이상의 사이토카인과 관련된 질환의 치료는 종양의 성장율 감소를 유도한다. 바람직하게는, 처리 후, 종양 성장 속도는 처리 전 값과 비교하여 5% 이상 까지 감소되며; 더욱 바람직하게는 종양 성장 속도는 10% 이상; 더욱 바람직하게는 20% 이상; 더욱 바람직하게는 30% 이상; 더욱 바람직하게는 40% 이상; 더욱 바람직하게는 50% 이상; 심지어 더욱 바람직하게는 50% 이상; 가장 바람직하게는 75% 이상 감소된다. 종양 성장 속도는 재현가능한 측정 수단에 의해 측정될 수 있다. 바람직한 양태에서, 종양 성장 속도는 단위 시간 당 종양 직경의 변화에 따라 측정된다.

또 다른 양태에서, p38 또는 하나 이상의 사이토카인 관련 질환의 치료는 종양 성장의 감소를 유도한다. 바람직하게는, 처리 후, 종양 성장은 5% 미만; 더욱 바람직하게는 10% 미만; 더욱 바람직하게는 20% 미만; 더욱 바람직하게는 30% 미만; 더욱 바람직하게는 40% 미만; 더욱 바람직하게는 50% 미만; 심지어 더욱 바람직하게는 50% 미만; 가장 바람직하게는 75% 미만이다. 종양 재성장은 재현가능한 측정 수단에 의해 측정될 수 있다. 바람직한 양태에서, 종양 재성장은 예를 들어, 사전 종양 수축 및 처리 후, 종양의 직경의 증가를 측정하므로써 측정될 수 있다. 또 다른 바람직한 양태에서, 종양 재성장의 감소는 처리가 중단된 후 종양의 재발생 실패에 의해 나타내어진다.

또 다른 양태에서, p38 또는 하나 이상의 사이토카인과 관련된 질환의 치료는 세포 증식율의 감소를 유도한다. 바람직하게는, 처리 후, 세포 증식율은 5% 이상; 더욱 바람직하게는 10% 이상; 더욱 바람직하게는 20% 이상; 더욱 바람직하게는 30% 이상; 더욱 바람직하게는 40% 이상; 더욱 바람직하게는 50% 이상; 심지어 더욱 바람직하게는 50% 이상; 가장 바람직하게는 75% 이상 감소된다. 세포 증식 속도는 재현가능한 측정 수단에 의해 측정될 수 있다. 바람직한 양태에서, 세포 증식 속도는 예를 들어, 단위 시간 당 조직 샘플에서 세포가 분화되는 수를 측정하므로써 측정된다.

또 다른 양태에서, p38 또는 하나 이상의 사이토카인과 관련된 질환의 치료는 증시 세포 비율의 감소를 유도한다. 바람직하게는, 처리 후, 증식 세포의 비율은 5% 이상; 더욱 바람직하게는 10% 이상; 더욱 바람직하게는 20% 이상; 더욱 바람직하게는 30% 이상; 더욱 바람직하게는 40% 이상; 더욱 바람직하게는 50% 이상; 심지어 더욱 바람직하게는 50% 이상; 가장 바람직하게는 75% 이상 감소된다. 세포 증식 속도는 재현가능한 측정 수단에 의해 측정될 수 있다. 바람직한 양태에서, 세포 증식 비율은 예를 들어, 조직 샘플중의 비분화 세포의 수와 비교하여 분화 세포의 수를 정량하므로써 측정된다. 또 다른 바람직한 양태에서, 증식 세포의 비율은 유사분열 지수와 등가이다.

또 다른 양태에서, p38 또는 하나 이상의 사이토카인 관련 질환의 치료는 세포 증식의 영역 또는 구역 크기의 감소를 유도한다. 바람직하게는, 처리 후 세포 증식 영역 또는 구역의 크기는 처리 전 크기와 비교하여 5% 이상, 더욱 바람직하게는 10% 이상; 더욱 바람직하게는 20% 이상; 더욱 바람직하게는 30% 이상; 더욱 바람직하게는 40% 이상; 더욱 바람직하게는 50% 이상; 심지어 더욱 바람직하게는 50% 이상; 가장 바람직하게는 75% 이상 감소된다. 세포 증식의 영역 또는 구역 크기의 감소는 재현가능한 측정 수단에 의해 측정될 수 있다. 바람직한 양태에서, 세포 증식 영역 또는 구역의 크기는 세포 증식의 영역 또는 구역의 직경 또는 폭으로서 측정될 수 있다.

본 발명의 방법은 치료가 필요한 대상을 확인하는 것을 포함할 수 있다. 바람직한 양태에서, 본 방법은 치료가 필요한 포유동물을 확인하는 것을 포함한다. 매우 바람직한 구체예에서, 본 방법은 치료가 필요한 사람을 확인하는 것을 포함한다. 치료가 필요한 대상의 확인은 치료에 의해 이로울 수 있는 대상을 나타내는 수단에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 치료가 필요한 대상의 확인은 조합된 확인 수단을 포함하여 임상 진단, 실험 테스트 또는 당업자에게 공지된 임의의 기타 수단에 의해 수행될 수 있다.

본원에 기술된 바와 같이, 본 발명의 화합물은 필요에 따라 약제 조성물중에 제형화될 수 있으며, 질환 또는 질병의 치료를 허용하는 임의의 경로에 의해 투여될 수 있다. 바람직한 투여 경로는 경구 투여이다. 투여는 단일 용량 투여의 형태일 수 있거나, 본 발명의 화합물은 기간에 걸쳐 분화된 용량으로 또는 연속적 방출 제형 또는 투여 방법 (예를 들어, 펌프)으로 투여될 수 있다. 그러나, 본 발명의 화합물은 대상에 투여되고, 투여된 화합물의 양 및 선택된 투여 경로는 질환의 효과적인 치료가 허용되도록 선택되어야 한다.

본 발명의 방법은 또한 본 발명의 화합물과 질환 치료를 위한 하나 이상의 추가적인 치료제의 사용을 포함한다. 이와 같이, 예를 들어, 특정 구체예에서, 본 발명은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 질환 치료시 기타 약제학적으로 활성인 제제와 함게 사용하는 것을 제공한다. 약제학적 활성 제제는 임의의 질환 치료에 유용한 약제학적 제제를 포함한다. 하나의 비제한적 예에서, 본 발명의 화합물은 류마티스 관절염 치료를 위한 기타 약제학적으로 활성인 제제와 혼합될 수 있는 약제학적으로 활성인 제제이다. 이러한 기타 약제학적으로 활성인 제제는 매트릭스 메탈로프로테아제 억제제 및 기타 DMARD (질환 변형 항-류마티스 약물) 예컨대, 메토트렉세이트, 설파살라진, 히드록시클로로퀸, 페니실아민, 시클로스포린 A, 골드 나트륨 티오말레이트, 아우로아노핀 및 아우로티오글로코스; CD8 안타고니스트; 항-TNFα 제제; 면역제제제 및 NSAID (비스테로이드 항-염증제)를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 기타 질환의 치료에 있어서, 임의의 추가적인 활성제는 당업자에게 자명한 것으로 사용될 수 있다.

본 발명의 방법에 있어서, 활성 성분의 조합은 (1) 공동 제형화디고, 혼합된 제형으로 동시에 투여되거나 전달되거나; (2) 개별적 제형으로서 교대로 또는 나란히 전달되거나, (3) 당해분야에 공지된 기타 조합적 치료법에 의해 수행될 수 있다. 교대 치료법으로 전달시, 본 발명의 방법은 활성 성분을 예를 들어, 별도의 용액, 에멀션, 현탁액, 정제, 환약 또는 캡슐로 또는 별도의 주사기로의 상이한 주입으로 연속하여 활성 성분을 투여하거나 전달하는 것을 포함할 수 있다. 일반적으로, 교대 치료 동안, 유효량의 각 활성 성분은 연속적으로 즉, 순차적으로 투여되는 반면, 동시 치료시에는, 유효량의 2개 이상의 활성 성분이 함께 투여된다. 간헐적 조합의 다양한 순서가 이용될 수 있다.

본 발명의 구체예에서, 본 방법은 세포내, 실험관내 또는 생체내에서 p38의 활성을 억제하기 위해 제공된다. 본 방법은 p38을 함유하는 세포 또는 조직을 세포 또는 조직의 p38이 억제되는 조건하에 효과적인 p38-억제량의 본 발명의 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다. 세포를 접촉시킨다는 것은 화합물 또는 물지르이 기타 조성물을 세포 또는 조직과 직접적으로 접촉시키거나, 세포 또는 조직에서 원하는 생물학적 효과를 유도하기에 충분히 근접한 상태를 의미한다. 예를 들어, p38 함유 세포 또는 조직을 본 발명의 화합물을 접촉시키는 것은 p38과 본 발명의 화합물 간의 상호작용을 허용하는 임의의 수단에 의해 수행되어, 세포에서 목적하는 생물학적 효과를 유도할 수 있다. 세포 또는 조직과의 접촉은 예를 들어, 화학식 I의 화합물, 프로드러그 또는 중간체와 같은 본 발명의 화합물을 유입시키므로써 달성될 수 있다. 세포 또는 조직의 접촉은 약제 조성물의 유입에 의해 달성될 수 있다. 세포 또는 조직과의 접촉은 p38 함유 세포 또는 조직으로의 활성 화합물의 직접적인 유입에 의해 달성될 수 있다. 대안적으로, 예를 들어, 세포 또는 조직과의 접촉은 화합물이 p38 함유 세포 또는 조직으로 직접적이거나 간접적인 표적화되는 방식으로 화합물을 유입시키므로써 달성될 수 있다. 세포 또는 조직과의 접촉은 본 발명의 화합물 바람직하게는, 화학식 I의 화합물이 p38 단백질에 결합할 수 있는 조건하에 달성될 수 있다. 이러한 조건은 화합물과 p38-함유 세포 또는 조직간의 근접함, pH, 온도 또는 본 발명의 화합물의 p38 단백질로의 결합에 영향을 끼치는 임의의 조건을 포함할 수 있다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 세포중의 또는 세포에 의해 분비된 p38 활성을 조절하는 방법을 제공한다. 본 방법은 세포중의 p38 활성이 조절되는 (더욱 바람직하게는 억제되는) 조건하에 p38을 억제하는데 효과적인 양의 본 발명의 화합물과 p38 함유 세포를 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 세포는 실험관내에서 본 발명의 화합물과 접촉되며; 다른 구체에에서, 세포는 생체내에서 본 발명의 화합물과 접촉된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 약제 조성물의 형태로 제공된다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 세포중의 사이토카인 활성 또는 수준을 조절하는 방법을 제공한다. 본 방법은 세포중의 사이토카인 활성이 조절되는 (더욱 바람직하게는 억제되는) 조건하에 사이토카인을 억제하는데 효과적인 양의 본 발명의 화합물과 사이토카인 함유 세포를 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구체예에서, 세포는 실험관내에서 본 발명의 화합물과 접촉되며; 다른 구체에에서, 세포는 생체내에서 본 발명의 화합물과 접촉된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 화합물은 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 약제 조성물의 형태로 제공된다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물이 p38- 또는 사이토카인 관련 질환의 치료를 위한 치료제로서 잠재적으로 유용한지의 여부를 측정하기 위한 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 본 방법은 p38과 본 발명의 화합물을 접촉시키고, 본 발명의 화합물이 p38의 활성을 조절 (바람직하게는 억제)하는 지의 여부를 측정하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 본 방법은 p38을 본 발명의 호합물과 접촉시키고, 본 발명의 화합물이 사이토카인의 활성을 조절 (바람직하게는, 억제)하는 지의 여부를 측정하는 것을 포함한다. 바람직한 구체예에서, 접촉 단계는 실험관내에서 수행되며; 특정 바람직한 구체예에서, 접촉 단계는 p38을 화학식 I의 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다.

본 발명의 방법은 많은 용도를 갖는다. 예를 들어, 실험관내에서 p38 활성을 억제하는 방법이 예를 들어, 스크리닝 검정 (예를 들어, 파지티브 대조군), 또는 세포 작용에서 p38의 역할을 연구하기 위한 조사 또는 분석 도구 (예를 들어, p38을 억제하여 세포의 기타 작용에 대한 이러한 억제 효과를 측정)를 개발하는데 유용할 수 있다. 방사성동위원소 또는 형광성 라벨로서 라벨 또는 태그를 함유하는 본 발명의 화합물이 이러한 목적에 특히 유용하다. 이러한 라벨링된 화합물은, 예를 들어, 본 발명의 라벨링된 화합물과 세포 또는 조직을 접촉시키고, 세포 또는 조직에서 라벨의 존재 또는 부재를 검출하므로써 세포 또는 조직 유형에서 p38의 존재 여부, 활성 또는 분포를 검출하거나 측정하는 방법에 사용될 수 있다.

따라서, 진단 시험은 본 발명의 일부로서 고려된다. 예를 들어, 조직 생검 샘플은 p38-관련 또는 사이토카인-관련 질병을 앓는 환자로부터 취해질 수 있다. 이러한 생검 샘플은 샘플중에 존재하는 p38 활성 (또는 사이토카인 수준)을 측정하도록 시험될 수 있다; 그 후, 샘플은 샘플을 본 발명의 화합물과 접촉시키고, 화학식 I의 화합물이 목적하는 효과 (예를 들어, p38 또는 사이토카인 활성의 억제)를 갖는지의 여부를 결정하기 위해 측정된다. 이러한 시험은 본 발명의 화합물로의 치료가 시험된 대상에 효과적일 수 있는지의 여부를 결정하는데 사용될 수 있다. 대안적으로, 샘플은 본 발명의 라벨링된 화합물 (예를 들어, 형광-라벨링된 화합물)과 접촉시킨 후, 샘플은 조직 샘플중의 p38의 분포를 측정하기 위해 시험될 수 있다 (예를 들어, 공초점 현미경하에). 처리 경로 동안 취해진 반복된 생검 샘플은 치료 효능을 연구하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물을 이용하는 기타 진단 시험은 본 명세서에 교시된 견지에서 당업자에게 자명할 것이다.

이와 같이, 예를 들어, 본 발명은 세포 또는 조직 샘플에서 p38 단백질의 존재, 위치 또는 정량, 또는 이들의 조합된 사항을 측정하기 위한 방법을 제공한다. 본 방법은 a) 본 발명의 화합물이 p38 단백질에 결합될 수 있는 조건하에 본 발명의 화합물을 세포 또는 조직 샘플과 접촉시키고; b) 세포 또는 조직 샘플중의 본 발명의 화합물의 조재, 위치 또는 정량, 또는 이들의 조합된 사항을 측정하여 세포 또는 조직 샘플중의 p38 단백질의 존재, 위치 또는 정량, 또는 이들의 조합된 사항을 결정하는 것을 포함한다. 세포 또는 조직 샘플중의 본 발명의 화합물의 존재, 위치 또는 정량, 또는 이들의 조합된 사항을 결정하는 것은, 세포 또는 조직중의 화합물의 존재, 위치 또는 정량, 또는 이들의 조합된 사항을 나타내는 수단에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 이전에 기술된 바와 같이, 방사성 또는 형광성 라벨링 방법이 이용될 수 있다. 본 발명의 화합물의 존재, 위치 또는 정량, 또는 이들의 조합된 사항을 결정하는 추가적인 방법은 당업자에게 자명할 것이다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 (1) 본 발명의 화합물이 p38-관련 질병을 앓고 있는 대상을 치료하기 위한 유용한 치료제인지의 여부, 또는 (2) 질환의 중증도, 또는 (3) 질환 완화제로의 처리 동안 질환의 경로를 결정하기 위한 방법을 제공한다. 본 방법은 a) 본 발명의 화합물로의 처리 전, 동안 또는 후에 대상으로부터 세포 또는 조직 샘플을 수득하고; b) 샘플을 본 발명의 화합물과 접촉시키고; c) 샘플에 결합하는 본 발명의 화합물의 양을 측정하는 것을 포함하며, 여기서 화합물에 의한 p38 단백질로의 결합은 샘플에서 p38 단백질의 양과 관련이 있다.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 (1) 본 발명의 화합물이 사이토카인-관련 질병을 앓고 있는 대상을 치료하기 위한 유용한 치료제인지의 여부, 또는 (2) 질환의 중증도, 또는 (3) 질환 완화제로의 처리 동안 질환의 경로를 결정하기 위한 방법을 제공한다. 본 방법은 a) 본 발명의 화합물로의 처리 전, 동안 또는 후에 대상으로부터 세포 또는 조직 샘플을 수득하고; b) 샘플을 본 발명의 화합물과 접촉시키고; c) 샘플에 결합하는 본 발명의 화합물의 양을 측정하는 것을 포함하며, 여기서 화합물에 의한 p38 단백질로의 결합은 샘플에서 p38 단백질의 양과 관련이 있으며, 샘플중의 p38의 양은 방출된 사이토카인의 양과 관련이 있다. 예시적 구체예에서, 이러한 방법은 암세포주로부터 세포를 수득하고, 암 세포주 예를 들어, 악성 유방암종, 결장직장암종, 악성 흑색종, 위암 또는 비소세포 폐암으로부터의 세포를 본 발명의 화합물과 접촉시키고, 결합을 측정하므로써 수행될 수 있다.

IV. 약제 조성물

본 발명의 화합물이 투여가능한 경우, 약제 조성물로서 본 발명의 화합물을 제형화시키는 것이 바람직할 수 있다. 이와 같이, 본 발명의 또 다른 양태에서, 본 발명의 방법에 유용한 약제 조성물이 제공된다. 더욱 특히, 본 발명의 약제 조성물은 p38 활성 또는 사이토카인 활성, 또는 이들의 복합적 활성과 관련된 질환을 치료하는데 특히 유용할 수 있다. 약제 조성물은 질환을 치료하거나 완화시키기 위해 실험관내, 생체내 또는 일 둘 모두로 대상에 투여될 수 있는 모든 조성물이다. 바람직한 구체예에서, 약제 조성물은 생체내에서 투여될 수 있다. 대상은 하나 이상의 세포, 조직 또는 유기체를 포함할 수 있다. 바람직한 대상은 포유동물이다. 포유동물은 모든 포유동물 예컨대, 비제한적인 예로서, 소, 돼지, 양, 염소, 말, 낙타, 버팔로, 고양이, 개, 래트, 마우스 및 사람을 포함한다. 매우 바람직한 포유동물 대상은 사람이다.

본 발명의 약제학적 조성물은 특정 투여 방식 및 투여 형태에 따라 약제학적으로 허용되는 부형제 예컨대, 담체, 용매, 안정화제, 애주번트, 희석제 등과 제형화될 수 있다. 약제 조성물은 일반적으로 생리학적으로 양립가능한 pH를 달성하도록 제형화되어야 하며, 제형 및 투여 경로에 따라 pH 약 3 내지 약 11, 바람직하게는 pH 약 3 내지 약 7일 수 있다. 대안적인 구체예에서, pH는 약 pH 5.0 내지 약 pH 8.0으로 조절되는 것이 바람직하다.

더욱 특히, 본 발명의 약제 조성물은 치료학적 또는 생리학적으로 유효한 양의 본 발명의 하나 이상의 화합물과 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함한다. 선택적으로, 본 발명의 약제 조성물은 본 발명의 화합물의 조합물을 포함할 수 있거나, 박테리아 감염의 처리 또는 예방시 유용한 제 2 성분 (예를 들어, 항박테리아제 또는 항균제)을 포함할 수 있다.

예를 들어, 비경구 또는 경구 투여용의 본 발명의 제형은 가장 일반적으로는 고체, 액체 용액, 에멀션 또는 현탁액인 반면, 폐 투여를 위한 흡입가능한 제형은 일반적으로 액체 또는 분말이며, 분말 제형이 일반적으로 바람직하다. 본 발명의 바람직한 약제학적 조성물은 또한 투여 전에 생리학적으로 양립가능한 용매와 재구성화되는 동결건조된 고형물로서 제형화될 수 있다. 본 발명의 대안적인 약제 조성물은 시럽, 크림, 연고, 정제 등으로서 제형화될 수 있다.

용어 "약제학적으로 허용되는 부형제"는 약제 예컨대, 본 발명의 화합물의 투여를 위한 부형제를 의미한다. 본 용어는 과도한 독성 없이 투여될 수 있는 모든 약제 부형제를 의미한다. 약제학적으로 허용되는 부형제는 투여되는 특정 조성물 및 조성물을 투여하는데 사용된 특정 방법에 의해 결정될 수 있다. 따라서, 본 발명의 약제 조성물에 적합한 제형이 매우 다양하게 존재한다 (예를 들어, [Reminton's Pharmaceutical Sciences] 참조).

적합한 부형제는 크고 느리게 대사된 거대분자 예컨대, 단백질, 폴리사카라이드, 폴리락트산, 폴리글리콜산, 중합체 아미노산, 아미노산 공중합체 및 불활성 바이러스 입자를 포함하는 담체 분자일 수 있다. 기타 예시적 부형제는 항산화제 에컨대, 아스코르브산; 킬레이팅화제 예컨대, EDTA; 카르보히드레이트 예컨대, 덱스트린, 히드록시알킬셀룰로오스, 히드록시알킬메틸셀룰로오스, 스테아르산; 액체 예컨대, 오일, 물, 염수, 글리세롤 및 에탄올; 습윤제 또는 에멀션화제; pH 완충제; 등일 수 있다. 리포좀 또한 약제학적으로 허용가능한 부형제의 정의내에 포함된다.

본 발명의 약제 조성물은 의도된 투여 방법에 적합한 임의의 형태로 제형화될 수 있다. 경구용으로 사용하고자 하는 경우, 예를 들어, 정제, 알약, 로젠지, 수성 또는 유성 현탁액, 비수성액, 분산가능한 분말 또는 그래뉼 (미세화된 입자 또는 나노입자 포함), 에멀션, 경질 또는 연질 캡슐, 시럽 또는 엘릭서르가 제조될 수 있다. 경구 사용을 위한 조성물은 약제 조성물의 제조를 위한 당업계에 공지된 방법에 따라 제조될 수 있으며, 이러한 조성물은 입에 맞는 제조물을 제공하기 위해 감미제, 향미제, 착색제 및 보존제를 포함한 하나 이상의 제제를 함유할 수 있다.

정제와 함게 사용하기에 특히 적합한 약제학적으로 허용되는 부형제로는 예를 들어, 불활성 희석제 예컨대, 셀룰로오스, 칼슘 또는 나트륨 탄산염, 락토오스, 칼슘 또는 나트륨 포스페이트; 붕해제 예컨대, 크로스카르멜로스 나트륨, 가교된 포비돈, 메이즈 전분 또는 알긴산; 결합제 예컨대, 포비돈, 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 및 윤활제 예컨대, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 또는 탈크를 포함한다. 정제는 비코팅되거나 마이크로캡슐화를 포함한 공지된 방법에 의해 코팅되어 위장관에서의 붕해 및 흡착을 지연시켜 더 장기간에 걸쳐 연속된 작용을 제공한다. 예를 들어, 시간 지연 물질 예컨대, 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트는 단독으로 또는 왁스와 함께 사용될 수 있다.

경구용 제형은 또한 활성 성분이 불활성 고체 희석제 예를 들어, 셀룰로오스, 락토오스, 칼슘 포스페이트 또는 카올린인 경질 젤라틴 캡슐 또는 활성 성분이 비수성 또는 유성 매질 예컨대, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 땅콩유, 액체 파라핀 또는 올리브유와 혼합된 연질 젤라틴 캡슐로서 존재할 수 있다.

또 다른 구체예에서, 본 발명의 약제 조성물은 현탁액 제조에 적합한 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제와 함께 혼합된 본 발명의 화합물을 포함하는 현탁액으로서 제형화될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 약제 조성물은 적합한 부형제를 첨가하므로써 현탁액 제조에 적합한 분산가능한 분말 및 그래뉼로서 제형화될 수 있다.

현탁액과 함께 사용하기에 적합한 부형제는 현탁제 예컨대, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 나트륨 알기네이트, 폴리비닐피롤리돈, 검 타르가칸트, 검 아카시아, 분산제 또는 습윤제 예컨대, 자연적으로 발생하는 포스파티드 (예를 들어, 레시틴), 알킬렌 옥사이드와 지방산과의 축합 생성물 (예를 들어, 폴리에틸렌 스테아레이트), 에틸렌 옥사이드와 장쇄 지방족 알코올과의 축합 생성물 (예를 들어, 헵타데카에틸렌옥시세탄올), 에틸렌 옥사이드와 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유래된 부분 에스테르의 축합 생성물 (예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트), 및 증점제 예컨대, 카르보머, 밀랍, 하드 파라핀 또는 세틸 알코올을 포함한다. 현탁액은 또한 하나 이상의 보존제 예컨대, 아세트산, 메틸 및/또는 n-프로필 p-히드록시-벤조에이트; 하나 이상의 착색제; 하나 이상의 방향제; 및 하나 이상의 감미제 예컨대, 수크로오스 또는 사카린을 포함할 수 있다.

본 발명의 약제 조성물은 수중유 에멀션 형태로 존재할 수 있다. 오일상은 식물성유 예컨대, 올리브유 또는 아라키스유, 미네랄유 예컨대, 액체 파라핀, 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 적합한 에멀션화제는 자연적으로 발생하는 검 예컨대, 검 아사키아 및 검 트라가칸트; 자연적으로 발생하는 포스파티드 예컨대, 콩 레시틴, 지방산으로부터 유래된 에스테르 또는 부분 에스테르; 헥시톨 무수물 예컨대, 소르비탄 모노올레이트; 및 이들 부분 에스테르와 에틸렌 옥사이드의 축합 생성물 예컨대, 폴리에틸렌 소르비탄 모노올레이트를 포함한다. 에멀션은 또한 감미제 및 방향제를 포함할 수 있다. 시럽 및 엘릭서르는 감미제 예컨대, 글리세롤, 소르비톨 또는 수크로스와 제형화될 수 있다. 이러한 제형은 또한 진통제, 보존제, 방향제 또는 착색제를 함유할 수 있다.

또한, 본 발명의 약제 조성물은 무균의 주입가능한 수성 에멀션 또는 유질 현탁액 형태일 수 있다. 이러한 에멀션 또는 현탁액은 상기 언급된 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 당업계에 공지된 사항에 따라 제형화될 수 있다. 무균의 주입가능한 제조물은 비독성의 비경구적으로 허용가능한 희석제 또는 용매중의 무균의 주입가능한 용액 또는 현탁액 예컨대, 1,2-프로판-디올중의 용액일 수 있다. 무균의 주입가능한 제조물은 또한 동결건조된 분말로서 제조될 수 있다. 사용될 수 있는 허용가능한 비히클 및 용매로는 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 또한, 무균의 고정유는 용매 또는 현탁 매질로서 사용될 수 있다. 이러한 목적을 위해, 합성 모노- 또는 디글리세리드를 포함한 임의의 블랜드 고정유가 사용될 수 있다. 또한, 지방산 예컨대, 올레산 또한 주입가능한 제조물에 사용될 수 있다.

본 발명의 약제 조성물을 안정한 수용성 투여량 형태로 수득하기 위해, 본 발명의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염은 유기 또는 무기산의 수성액 예컨대, 0.3M의 숙신산 용액 또는 더욱 바람직하게는 시트리산 용액중에 용해될 수 있다. 용해가능한 염 형태가 달성 불가능한 경우, 화학식 (I)의 화합물은 적합한 공용애 또는 공용매의 복합물중에 용해될 수 있다. 적합한 공용매의 예로는 총 부피중 0 내지 60% 농도의 알코올, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 300, 폴리소르베이트 80, 글리세린 등을 포함한다. 한 구체예에서, 화학식 I의 활성 화합물은 DMSO중에 용해되며, 물로 희석된다. 약제 조성물은 적합한 수성 비히클 예컨대, 물 또는 등장성 염수 또는 덱스트로스 용액중에 활성 성분의 염 형태 용액일 수 있다. 또한 화합물을 화학적 또는 생화학적 부분을 치환하거나 첨가하므로써 변형시켜 예를 들어, 에스테르화, 글리코실화, PEG화 등을 수행하여 전달에 더욱 적합하게 만든 (예를 들어, 가용성 및 생활성 증가, 입맛에 맞음, 역반응 감소 등) 화합물이 고려된다.

바람직한 구체예에서, 본 발명의 화합물은 낮은 가용성 화합물에 적합한 액체 기재 제형중에서 경구 투여용으로 제형화될 수 있다. 지질 기재 제형은 일반적으로 이러한 화합물의 경구 생체이용율을 향상시킬 수 있다. 이와 같이, 본 발명의 바람직한 약제 조성물은 중쇄 지방산 또는 이의 프로필렌 글리콜 에스테르 (예를 들어, 식용성 지방산의 프로필렌 글리콜 에스테르 예컨대, 카프릴산 및 카프릭 지방산) 및 약제학적으로 허용되는 계면활성제 예컨대, 폴리옥실 40 수소화된 카스터유로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제와 함께 치료학적 또는 생리학적으로 유효한 양의 본 발명의 화합물을 포함한다.

대안적인 바람직한 구체예에서, 시클로덱스트린은 수성의 가용성 증진제로서 첨가될 수 있다. 바람직한 시클로엑스트린은 히드록시프로필, 히드록시에틸, 글루코실, 말토실 및 α-, β- 및 γ의 말토트리오실 유도체를 포함한다. 특히 바람직한 시클로덱스트린 가용성 증진제는 히드록시프로필-β-시클로덱스트린 (HPBC)이며, 이는 상기 기술된 조성물에 첨가되어 본 발명의 화합물의 수성 가용도를 추가로 증진시킬 수 있다. 한 구체예에서, 본 조성물은 0.1% 내지 20% 히드록시프로필-β-시클로덱스트린, 더욱 바람직하게는 1% 내지 15% 히드록시프로필-β-시클로덱스트린, 더욱 바람직하게는 2.5 내지 10% 히드록시프로필-β-시클로덱스트린을 포함한다. 사용된 가용도 증진제의 양은 조성물중의 본 발명의 화합물의 양에 좌우될 것이다.

약제 조성물은 고려된 치료학적 효과를 달성하기에 충분한 총량의 활성제를 함유한다. 더욱 특히, 일부 구체예에서, 약제 조성물은 치료학적 유효량을 함유한다 (즉, p38에 의해 간접적으로 또는 직접적으로 매개되거나 이와 관련된 질환 또는 질병의 존재하는 증상을 예방하거나 치료하는데 효과적인 본 발명의 p38-억제 화합물의 양). 특정 구체예에서, 약제 조성물은 치료학적 유효량 (즉, 사이토카인 또는 사이토카인들 비제한적인 예로서, IL-1, IL-6, IL-8 및 TNFα과 관련된 질환 또는 질병의 존재하는 증상을 완화시키거나, 전개를 억제하는데 효과적인 양)의 본 발명의 사이토카인-억제 화합물을 함유한다. 단일 용량을 생성시키기 위해 담체 물질과 혼합될 수 있는 본 발명의 화합물의 총량은 치료되는 숙주 및 특정한 투여 방식에 따라 좌우될 것이다. 바람직하게는, 조성물은 0.01 내지 100mg/체중 kg/일의 p38-억제제가 조성물을 투여받을 환자에 투여되도록 제형화된다.

본 발명의 이해를 돕기 위해, 하기 실시예가 포함된다. 본 발명에 관한 실험은 물론 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니며, 당업자의 견지내에 있는 현재 공지되거나 후에 개발될 본 발명의 이러한 변형은 본원에 기술되고 하기 청구된 본원 발명의 범위내에 포함되는 거승로 간주된다.

본 발명은 하기 비제한 실시예를 참조로 하여 더욱 상세히 설명될 것이며, 이는 본 발명을 충분히 설명하고자 하는 것이며, 이의 범위를 제한하고자 하는 것은 아니다. 본 실시예는 본 발명의 특정 화합물의 제조법, 및 실험관내 및/또는 생체내에서 이들 화합물의 시험을 설명하고 있다. 하기 실시예는 본 발명의 대표적 화합물의 화학적 합성법을 더욱 상세히 설명하고 있다. 공정이 설명되고 있으며, 본 발명은 이들이 나타내는 화학 반응 및 조건에 의해 제한하고자 하는 것은 아니다. 이들 반응에서 수득된 수율을 최적화시키고자 하는 시도는 하지 않았으며, 반응 시간, 온도, 용매 및/또는 시제에 있어서의 변형이 수율을 증가시킬 수 있다는 것은 당업자에게 자명할 것이다.

실시예 1: 3-({4-[6-(4-플루오로페닐)이미다조[2,1-b][1,3]옥사졸-5-일]피리미딘-2-일} 아미노)-2,2-디메틸프로판-1-올의 제조

화학식 I (X가 0임)의 본 발명의 화합물을 하기 대표적인 방법에 따라 제조하였다.

시중에서 구입가능한 화합물을 다르게 언급되어 있지 않는 한 수득한 대로 사용하였다.

단계 1

2-아미노-옥사졸

THF (100ml)중의 시안아미드 용액 (33ml, 물중의 50%wt, 0.416mol)에 물 (40ml)중의 2-히드록시아세트알데히드 (25g, 0.416mo1) 수용액을 첨가하고, 2M 수산화나트륨 (42ml, 0.083mol)을 0℃에서 적가하였다. 총 24 시간 동안 연속해서 교반하였다. 그 후, 반응 혼합물을 진공하에 농축시켜 대부분의 THF를 제거하였다. 남아있는 물 층을 에틸 아세테이트 (4 x 200ml)로 추출하였다. 추출물을 나트륨 설페이트으로 건조시키고, 용매를 진공하에 증발시켰다. 이렇게 해서 백색 고형물인 생성물 A (23g, 66%)를 수득하였다.

단계 2:

무수성 테트라히드로푸란 (THF) 용액 (200ml)중의 2-브로모-l-(4-플루오로페닐)-에타논 (CAS# 403-29-2, I) (60g, 0.376mo1) 용액에 20분에 걸쳐 실온에서 무수성 아세토니트릴중의 2-아미노-옥사졸 (A) (16g, 0.19mol) 용액을 첨가하였다. 혼합물을 24 시간 동안 교반시킨 후, 0℃로 냉각시켰다. 침전물을 여과시켜 모으고, 냉 아세토니트릴 (3 x 30mL)로 세척하고, 진공 오븐에 건조시켜 1-(4-플루오로페닐)-2-(2-이미노-1,3-옥사졸-3(2H)-일)에타논 히드로브로마이드 (B) (42.0g, 77%)의 연황색 결정을 수득하였다. MS (ES+) 203 (M+1).

¹H NMR (300 MHz, DMSO) δ: 7.95 (brs, 1H), 9.7 (brs, 1H), 8.14 (m, 2H), 7.99 (d, J = 0.9, 1H), 7.61 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 7.51 (t, J= 8.7 Hz, 2H), 5.79 (s, 2H).

단계 3:

1-(4-플루오로페닐)-2-(2-이미노-1,3-옥사졸-3(2H)-일)에타논 히드로브로마이드 (B) (13.0 g, 43.0 mmol)를 무수성 톨루엔 (100 mL)중에 현탁시키고, 빙조에서 -10 ℃에서 교반시켰다.

티타늄 테트라클로라이드 (24 mL, 0.225 mol)를 20분에 걸쳐 적가하였다. 첨가 완료 후, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반시킨 후, 110℃에서 5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 과량의 톨루엔을 경사분리하고, 냉수 (200 mL)를 첨가하였다. 1시간 동안 강하게 교반시킨 후, 혼합물을 탄산나트륨으로 처리하고, 30분 동안 연속하여 교반하였다. 에틸 아세테이트 (100mL)를 혼합물에 첨가하고, 추가로 1시간 동안 교반시켰다. 유기상을 제거하고, 수성 잔류물을 에틸 아세테이트 (3 x 100 mL)로 추출하였다. 혼합된 유기상을 무수성 나트륨 설페이트로 건조시키고, 여과시키고, 진공하에 농축시켜 표제 화합물 (8.0 g, 92%)을 수득하였다.

MS (ES+) 203 (M+1);

¹H NMR (300 MHz, DMSO) δ: 7.95 (brs, 1H), 7.92 (brs, 1H), 7.79 (m, 2H), 7.74 (d, J= 8.4, 1H), 7.19 (m, 2H).

단계 4:

탈기된 디메틸포름아미드 (10 mL)중의 6-(4-플루오로페닐)이미다조[2,1-b][1,3]옥사졸 (C) (1g, 4.9mmol) 및 4-요오도-2-티오메틸피리미딘 (D) (2.49 g, 9.8 mmol) 용액에 아르곤하에 Pd(OAc)₂ (0.222 g, 0.9 mmol) 및 트리페닐포스핀 (0.518 g, 1.9 mmol)을 연속적으로 첨가하였다. 탄산세슘 (2.41 g, 7.4 mmol)을 혼합물에 첨가하고, 반응 용기를 아르곤으로 플러싱시키고, 밀봉하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 15시간 동안 강하게 자석 교반시키면서 가열하였다. 점성 슬러리를 실온으로 냉각시키고, 실리카 겔 상단상의 셀라이트 베드를 통해 여과하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 세척하고 여과시켰다. 여과물을 물 (2 x 100 ml)로 세척하였다. 유기상을 무수성 마그네슘 설페이트로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공하에 제거하였다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 6-(4-플루오로페닐)-5-[2-(메틸설파닐)피리미딘-4-일]이미다조[2,1-b][1,3]옥사졸 (E) (화합물 X, 표 1)을 연황색 고형물 (0.474 g, 30 %)로서 수득하였다. m.p. 144-145 ℃;

¹H NMR (300 MHz CDCl₃) δ_:8.2 (d, 1H), 8.1 (s, 1H), 7.6 (t, 2H), 7.4 (s, 1H), 7.1 (t, 2H), 6.8 (d, 1H), 2.6 (s, 3H).

¹³CNMR (300 MHz CDCl₃): 172.3, 164.5, 161.2, 156.1, 155.8, 147.0, 137.6, 130.9, 130.8, 130.4, 116.0, 115.8, 115.5, 114.7, 110.5, 및 14.2.

단계 5:

메탄올 (250mL)중의 6-(4-플루오로페닐)-5-[2-(메틸설파닐)피리미딘-4-일]이미다조[2,1-b][1,3]옥사졸 (E) (2.0g, 6.13mmol) 용액에 물 (50mL)중의 옥손^TM(칼륨 모노퍼설페이트) (11.3g,18.4mmol)을 서서히 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 용매를 진공하에 제거하고, 잔류물을 디클로로메탄중에 용해시키고, 물로 세척하고, 무수성 나트륨 설페이트로 건조시켰다. 고형물을 여과에 의헤 제거하고, 용매를 진공하에 제거하였다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 6-(4-플루오로페닐)-5-[2-(메틸설포닐)피리미딘-4-일]이미다조[2,1-b][1,3]옥사졸 (F) (화합물 XI, 표 1))을 백색 고형물 (1.8g, 82%)로서 수득하였다.

MS (ES+) 359 (M+1).

¹H NMR (300 MHz, DMSO) δ 8.75 (brm. 1H), 8.22 (brd, 2H), 7.68 (m, 2H), 7.30-7.42 (m, 3H), 3.39 (s, 3H).

단계 6:

3-({4-[6-(4-플루오로페닐)이미다조[2,1-b] [1,3]옥사졸-5-일]피리미딘-2-일}아미노)-2,2-디메틸프로판-1-올 (화합물 XXXIX, 표 1).

디메틸설폭시드중의 6-(4-플루오로페닐)-5-[2-(메틸설포닐)피리미딘-4-일]이미다조[2,1-b][1,3]옥사졸 (F) (0.5g, 1.4 mmol) 용액에 3-아미노-2,2-디메틸 프로판올 (0.430 mg, 3.8 mmol)을 첨가하고, 디이소프로필에틸아민 (0.631 g, 5.0 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 100 ℃에서 밤새 교반시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물로 희석하고, 디클로로메탄 (2 x 50 ml)으로 추출하였다. 혼합된 유기상을 무수성 나트륨 설페이트로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공하에 제거하였다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하면서 에틸 아세테이트/헥산 (3:1)으로 용출시켜 3-({4-[6-(4-플루오로페닐)이미다조[2,1-b][1,3]옥사졸-5-일]피리미딘-2-일}아미노)-2,2-디메틸프로판-1-올 (G) (0.46 g, 86%)을 제공 하였다. m.p. 149 ℃;

¹H NMR (300 MHz CDCl₃) δ: 8.06 (s, 1H), 7.98 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 7.59 (m, 2H), 7.45 (s, 1H), 7.11 (t, 2H), 6.49 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 3.29 (d, J=7.2 Hz, 2H), 3.21 (s, 2H), 0.95 (s, 6H).

표 1 (본원에 기재되어 있으며, 참조로 인용됨)의 화합물을 상기 실시예와 유사한 방식으로 제조할 수 있다.

실시예 2: 4-{4-[6-(4-플루오로_페닐)-이미다조[2,1-b]티아졸-5-일] 피리미딘-2-일아미노}-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르

화학식 I (X = S)의 본 발명의 예시적 화합물을 하기 방법에 따라 제조하였다.

단계 1:

2-아미노티아졸 (H) (23.7 g, 0.23 mol)과 2-브로모-1-(4-플루오로페닐)-에타논 (I) (50 g, 0.23 mol)의 혼합물에 무수 에탄올 (600 mL)을 첨가하였다. 반응물을 16시간 동안 강하게 교반시키면서 환류시켰다. 반응 혼합물을 진공하에 원래 부피의 반으로 감소시켰다. 남아있는 액체를 얼음에 붓고, 용액을 수산화암모늄 용액 (30%)을 첨가하여 염기성이 되게 하였다. 생성된 미세 고형물을 여과시키고, 물로 세척하였다. 수득된 암황색 고형물을 진공 오븐하에 50 ℃에서 건조시켜 6-(4-플루오로페닐)-이미다조[2,1-b]티아졸 (J) (43.0 g, 86 %)을 수득하였다.

ESMS [M+H]⁺ = 219;

¹H NMR (300 MHz CDCl₃) δ 8 - 7.6 (m, 3H), 7.38 (bs, 1H), 7.08 (bs, 2H), 6.79 (bs, 1H); ¹³ C 75 MHz (NMR CDCl₃) δ: 163.2 (d, C-F, J= 244.7 Hz), 150.1, 146.8, 130.3 (C-C-C-C-F), 126.7 (d, C-C-C-F, J=7.73 Hz), 118.4, 115.5 (d, C-C-F, J= 21.4 Hz), 112.4, 107.6;

단계 2:

6-(4-플루오로페닐)-이미다조[2,1-b]티아졸 (J) (6.0 g, 27.6 mmol), 4-요오도-2-티오메틸피리미딘 (10.4 g, 41.3 mmol), 탄산세슘 (13.4 g, 41.3 mmol), 트리페닐포스핀 (2.88 g, 11 mmol), 및 팔라듐 아세테이트 (1.22 g, 5.5 mmol)의 혼합 물에 무수성 디메틸포름아미드 (60 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉시키고, 80 ℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 물 (200 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭시켰다. 수성층을 에틸 아세테이트 (3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기상을 물 (100 mL) 및 포화된 염화나트륨 수용액 (100 mL)으로 연속적으로 세척하였다. 유기상을 나트륨 설페이트로 건조시키고, 여과시키고, 용매 진공하에 증발시켰다. 조생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하면서 에틸 아세테이트/헥산 (20-30%) 구배로 용출시켰다. 용매를 증발시킨 후, 6-(4-플루오로페닐)-5-(2-메틸설파닐-피리미딘-4-일)-이미다조[2,1-b]티아졸 (K) (화합물 CXXXIX, 표 2)을 백색 고형물 (3.5 g, 37%)로서 수득하였다. m.p. 151-152 ℃;

ESMS [M+H]⁺ = 343;

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ_:8.61 (d, J⁼ 4.41 Hz, 1H), 8.27 (d, J= 5.43 Hz, 1H), 7.66 - 7.58 (m, 2H), 7.2 - 7.12 (m, 2H), 7.0 (d, J= 4.56 Hz, 1H), 6.86 (d, J= 5.43 Hz, 1H), 2.64 (s, 3H);

¹³CNMR (75 MHz, CDCl ₃ ) δ_:172.6, 163.1 (d, C-F, J= 247.1 Hz), 156.4, 156.1, 152.7,150.0, 131.1 (d, C-C-C-F, J= 8.1 Hz), 130.7 (d, C-C-C-C-F, J= 3.15 Hz), 122.2, 120.2, 115.9 (d, C-C-F, J = 21.5 Hz), 112.8, 111.9, 14.2;

C₁₆H₁₁FN₄S₂에 대한 분석, 계산치:C 56.12; H 3.24; N 16.36; 실측치 C 55.81; H 3.20; N 16.10.

단계 3:

메탄올 (25 mL)중의 6-(4-플루오로페닐)-5-(2-메틸설파닐-피리미딘-4-일)-이미다조[2,1-b]티아졸 (K)과 6-(4-플루오로페닐)-이미다조[2,1-b]티아졸 (J) (0.205 g, 0.6 mmol)의 혼합물 (1.1:1) 용액에 물 (5 mL)중의 옥손 (1.23 g, 1.8 mmol) 용액을 적가하였다. 반응을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 휘발물질을 진공하에 실온에서 제거하였다. 잔류물에 디클로로메탄을 첨가하였다. 유기상을 물 및 포화된 염화나트륨 수용액으로 연속적으로 세척하였다. 유기상을 무수성 나트륨 설페이트로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공하에 증발시켰다. 조생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하면서 에틸 아세테이트 헥산 (1:1)으로 용출시켜 6-(4-플루오로페닐)-5-(2-메탄설포닐-피리미딘-4-일)-이미다조[2,1-b]티아졸 (L) (화합물 CXL, 표 2)을 백색 고형물 (0.113 g, 98 %)로서 수득하였다; m.p. 197-198 ℃;

ESMS [M+H]⁺ = 375;

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 8.84 - 8.9 (m, 1H), 8.56 - 8.5 (bd, 1H), 7.68 - 7.58 (m, 2H), 7.38 - 7.30 (m, 1H), 7.26 - 7.16 (m, 2H), 7.1 (m, 1H), 3.38 (s, 3H);

¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ:165.8, 163.4 (d, C-F, J= 248.6 Hz), 157.4, 156.9, 154.4,152.1, 131.1 (d, C-C-C-F, J= 8.3 Hz), 130.3 (d, C-C-C-C-F, J= 6.3 Hz), 123.2, 119.5, 117.3, 116.2 (d, C-C-F, J= 21.6 Hz), 113.9, 39.2;

C₁₆H₁₁FN₄0₂S₂.0.045 CHCl₃에 대한 분석, 계산치: C, 51.33; H, 2.96; N, 14.96. 실측치: C, 50.76; H, 2.83; N, 14.62.

단계 4:

디메틸설폭시드 (12.0 mL)중의 6-(4-플루오로페닐)-5-(2-메탄설포닐-피리미딘-4-일)-이미다조[2,1-b]티아졸 (L) (1.05 g, 2.8 mmol) 용액에 4-아미노-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (1.12 g, 5.6 mmol)를 첨가한 후, 휴니그스 염기 (Hunig's Base) (0.76 mL, 5.6 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉시키고, 100 ℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 물을 첨가하고 (50 mL), 수성상을 에틸 아세테이트 (4 x 20 mL)로 추출하였다. 혼합된 유기상을 포화된 염화나트륨 수용액 (3 x 50 mL)으로 세척하고, 무수성 나트륨 설페이트로 건조시켰다. 유기상을 여과시키고, 용매를 진공하에 증발시켰다. 조생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하면서 에틸 아세테이트/헥산 (3/2)로 용출시켰다. 화합물 4-{4-[6-(4-플루오로페닐)-이미다조[2,1-b]티아졸-5-일]-피리미딘-2-일아미노}-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (M) (화합물 CCXXXIII, 표 2)을 연황색 고형물 (1.2 g, 88 %)로서 수득하였다; m.p. 209 - 211 ℃;

¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ:8.51 (d, J= 6 Hz), 8.07 (d, J= 7.2 Hz), 7.65 - 7.5 (m, 2H), 7.16 - 7.1 (m, 2H), 6.93 (d, J = 6 Hz), 6.48 (d, J = 7.2 Hz), 5.17 (bs, 1H), 3.9 - 4.2 (m, 5H), 3.03 - 2.97 (m, 2H), 2.16 - 2.07 (m, 2H), 1.49 (s, 9H);

¹³CNMR (75 MHz, CDCl₃) δ:162.96 (d, C-F, J= 247 Hz), 161.5, 157.7, 156.94, 154.7, 151.9, 148.99, 131.07 (d, C-C-C-F, J = 8.5 Hz), 130.9 (d, C-C-C-C-F, J = 3.2 Hz), 121.7, 120.8, 115.6 (d, C-C-F, J = 21.6 Hz), 107.2, 79.7, 48.4, 42.7 (bs), 32.2, 28.4;

ESMS [M+H]⁺ = 495;

C₂₅H₂₇FN₆0₂S.0.065CH₂C₁₂:에 대한 분석, 계산치: C, 60.71; H, 5.50;N, 16.99; 실측치: C, 60.15; H, 5.14;N, 16.41

실시예 3: N'-{4-[6-(4-플루오로페닐)이미다조[2,1-b][1,3]티아졸-5-일]피리미딘-2-일}-N,N-디메틸에탄-1,2-디아민

건조 디메틸설폭시드 (4 mL)중의 6-(4-플루오로페닐)-5-[2 (메틸설포닐)피리미딘-4-일]이미다조[2,1-b][1,3]티아졸 (L; 상기 실시예 2 참조) (200 mg, 0.53 mmol) 용액에 N,N-디메틸에탄올아민 (273 mg, 3.06 mmol) 및 탄산칼륨 (365 mg, 2.64 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 100 ℃에서 6 시간 동안 교반시키고, 물 (5 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트 (2 X 10 ml)로 추출하였다. 유기상을 물로 세척하고, 무수성 나트륨 설페이트로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 'N-{4-[6-(4-플루오로페닐)이미다조[2,1-b][1,3]티아졸-5-일]피리미딘-2-일옥시}-N,N-디메틸에탄아민 (N) (108 mg)을 수득하였다.

¹H NMR (300 MHz, DMSO) δ: 8.55 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 8.41 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 7.65 (m, 2H), 7.52 (d, J= 4.5 Hz, 1H), 7.32 (t, J= 9.3 Hz, 2H), 6.82 (d, J= 5.4, 1H), 4.53 (t, J= 5.7 Hz, 2H), 2.98 (t, J= 5.7 Hz, 2H), 2.46 (s, 6H). MS (ES+) 384 (M+1).

표 2에 도시된 화합물 (본원에 기술되고, 본원에 참조로 인용됨)을 실시예 2 및 3과 유사한 방식으로 제조하였다.

실시예 4

본 발명의 화합물을 실험관내에서 p38 MAP 키나아제에 의해 ATF2 포스포릴화를 억제하는 능력에 대해 스크리닝하였다. 이러한 실험관내 검정에서 ATF2 포스포릴화를 억제하는 화합물의 능력은 p38 MAP 키나아제 및 실험관내의 TNFα 발현의 억제와 관련되어 있으며, 따라서, 이는 생체내 치료학적 활성의 잠재적 인디케이터이다 (Raingeaud, J., et al, J. Biol. Chem., 270: 7420-7426, 1995, Brinkman, M. N., et al, J. Bil. Chem. 274: 30882-30886, 1999 and Fuchs, S. Y. et al, J. Biol. Chem. 275: 12560-12564, 2000).

재료: 모든 키나아제 및 기질 ATF2를 업스테이트(Upstate:Charlottesville, VA)로부터 수득하였다. p38 MAP 키나아제는 E.coli에서 발현되고 이로부터 정제된 아미노-말단 GST 융합된 재조합 사람 전장 단백질이다. ATF2는 E.coli에서 발현된 사람 ATF2의 아미노산 19-96을 함유하는 GST 융합 단백질이다. 모든 단백질을 분할하고, -80 ℃에서 저장하였다.

방법: p38 MAP 키나아제 검정을 25 mM HEPES, pH 7.5, 10 mM MgCl₂, 2 mM DTT, 20 mM (3-글리세로포스페이트, 0.1 mM Na₃VO₄, 40 μM ATP 및 1.25μM의 ATF2와 6ng의 p38α 단백질, 12ng p38β 단백질, 1.5ng p38γ, 또는 0.4ng JNK2a2를 함유하는 검정 완충액을 이용하여 수행하였다. 화합물을 DMSO중에 연속적으로 희석 시키고, 25x 최종 농도로 2μM의 시험 화합물을 사용하였다. 비히클 대조군은 단지 DMSO만 처리하였다. 시험 화합물을 키나아제 완충액 (25 mM HEPES, pH 7.5, 10 mM MgC1₂, 2 mM DTT, 20 mM β-글리세로포스페이트 및 0.1 mM Na₃VO4)중의 20㎕의 효소와 실온에서 15분 동안 사전인큐베이팅시켰다. 30㎕ 기질 용액을 첨가하여 반응을 개시시켜 키나아제 완충액중의 40μM ATP 및 1.25μM ATF2의 최종 농도로 수득하였다. 반응물을 30분 동안 37℃에서 인큐베이션시키고, 18㎕의 200mM EDTA를 첨가하여 반응을 종결시켰다. ELISA 방법을 이용하여 Thr69에서 ATF2의 포스포릴화를 측정하였다. 높은 결합 96-웰 플레이트 (코닝 3369)를 50㎕의 키나아제 반응물로 1시간 동안 37℃에서 코팅시켰다. 코팅된 플레이트를 200㎕의 세척 완충액 (25 mM Tris HC1, pH 8.3, 192 mM 글리신, 0.1%SDS 및 0.05% Tween-20)으로 3회 세척하였다. 그 후, 플레이트를 TBS중의 수퍼블록 (Pierce, 37535)으로 3회 세척하였다. 블록킹한 후, 플레이트를 50㎕의 래빗 항-포스포-ATF2 항체 (Cell Signaling, 9221L, 1:500)와 30분 동안 37℃에서 인큐베이션시켰다. 플레이트를 세척 완충액으로 3회 세척한 후, 50 ㎕ HRP-컨쥬게이팅된 염소 항-래빗 항체 (Cell Signaling, 7074, 1:500)와 30분 동안 37℃에서 인큐베이션시켰다. 그 후, 플레이트를 세척 완충액으로 3회 세척하고, 50 ㎕의 Ultra TMB-ELISA (Pierce, 34028)와 8분동안 실온에서 인큐베이션시켰다. 최종적으로, 50㎕의 인산 (1 M)을 첨가하여 반응을 정지시키고, 플레이트 흡수를 450 nm에서 SpectraMax 250 플레이트 리더로 읽었다.

결과: 본 발명의 특정 화합물의 p38α 검정 결과는 표 1 및 2에 도시되어 있다. 본 발명의 화합물이 실험관내 검정에서 ATF2의 포스포릴화를 억제한다는 것이 밝혀졌다. 바람직한 화합물은 500 nM 미만, 더욱 바람직하게는 100 nM 미만, 더욱 더 바람직하게는 20 nM 미만의 IC₅₀ 를 나타낸다.

실시예 5

본 발명의 화합물을 실험관내에서 리포폴리사카라이드 (LPS)로 자극한 THP-1 세포로부터 TNFα 및 IL-1β 방출을 억제하는 능력에 대해 스크리닝하였다. 실험관내 검정에서 TNFα 및 IL-1β 방출을 억제하는 화합물의 능력은 생체내 p38 활성 및 TNFα 및 IL-1β 발현의 억제와 관련있으며, 따라서 생체내 치료학적 활성의 잠재적 인디케이터이다 (Lee J. C. et al, Ann. N.Y. Acad. Sci. 696: 149-170, 1993 and Nature, 372: 739-746, 1994).

재료: ATCC (TIB202)로부터의 THP-1 세포를 10% 소태 혈청, 1% 페니실린/스트렙토마이신 및 50μM β-메르캅토에탄올로 보충한 4.5g/L 글루코오스를 함유하는 RPMI 1640 매질 (MediaTech, Herndon, VA)에서 37 ℃에서 5% CO₂하에 유지시켰다.

방법: 시험 화합물을 1% DMSO (v/v)를 갖는 RPMI 매질중에 초기에 용해시켰다. 그 후, 화합물을 모든 후속 희석을 위한 RPMI 매질중에서 연속적으로 희석하였다. 검정을 무균 조건하에서 수행하였다. 6-8 x 10⁵ 세포/ml의 배양 밀도의 THP-1 세포를 모으고, 10⁶ 세포/ml로 RPMI 배지중에 재현탁시켰다. 100㎕의 재현탁 세포를 100㎕의 시험 화합물을 함유하는 각각의 웰에 첨가하였다. 시험 화합물을 최종 농도로 2회 제조하였다. 최종 DMSO 농도는 0.5% (v/v) 이하이다. 세포를 30분 동안 37℃에서 5% CO₂와 사전인큐베이션시킨 후, 리포폴리사카라이드 (LPS) (시그마 L-2880, PBS중의 4 mg/ml 원액)로 자극하였다. 각각의 웰중의 최종 LPS 농도는 TNFα 및 IL-1β 방출 각각에 대해 10 또는 30㎍/ml이다. 비자극된 대조군 세포 현탁은 단지 PBS 비히클로만 처리하였다. 세포 혼합물을 TNFα 및 IL-1β에 대해 18 또는 48시간 동안 인큐베이션시켰다. 150㎕의 상청액을 취하고, 새로운 플레이트로 이동시키고, 추가로 검정될 때까지 -20℃에서 보관하였다. TNFα 및 IL-1β 수준을 ELISA 키트 (Biosource (TNFα에 있어서 KHC3012; IL-1β에 있어서, KAC1192)를 사용하여 측정하였다. SpectraMAX 250를 플레이트 리더로서 사용하였다. 비선형 회구에 의해 검정을 수행하여 용량 반응 곡선을 생성시켰다. 계산된 IC₅₀ 값은 TNFα 또는 IL-1β 수준을 50% 감소시키는 시험 화합물의 농도이다.

결과: 본 발명의 화합물은 이러한 실험관내 검정에서 TNFα, IL-1β 또는 TNFα와 IL-1β 둘 모두의 방출을 억제한다. 본 발명의 특정 화합물에 대한 TNFα 억제 데이타는 표 1 및 2에 도시되어 있다. 바람직한 화합물은 TNFα 및/또는 IL-1β에 대해 500mM 미만, 더욱 바람직하게는 200nM 미만, 더욱 바람직하게는 100nM 미만, 더욱 더 바람직하게는 20nM 미만의 IC₅₀ 값을 나타낸다.

실시예 6

본 발명의 화합물을 실험관내에서 리포폴리사카라이드 (LPS)로 자극된 일차 사람 말초혈 모노뉴클레어 세포 (PBMC)로부터 TNFα 방출을 억제하는 능력에 대해 스크리닝하였다. 실험관내에서 TNFα 방출을 억제하는 화합물의 능력은 p38 활성의 억제와 관련되며, 따라서 생체내 치료학적 활성의 잠재적인 인디케이터이다 (Osteoarthritis & Cartilage, 10: 961-967, 2002 and Laufer, S. A. and Wagner, G. K., J. Med. Chem. 45: 2733-2740, 2002).

재료 및 방법: 사람 말초혈 모노뉴클레어 세포 (PBMC)를 3-8 개체 혈액 도너의 풀링된 혈청으로부터 Ficoll-HyPaque 밀도 구배를 통해 상이한 농도로 분리하였다. 분리된 PBMC는 약 10% CD-14 파지티브 모노사이트, 90% 림포사이트 및 <1% 그래뉼로사이트 및 혈소판을 함유한다. PBMC (10⁶/ml)를 폴리스티렌 플레이트중에 배양시키고, 화합물의 존재 및 부재하에 리포폴리사카라이드 (LPS; 50 ng/ml; Sigma, St. Louis, MO)로 이중으로 24시간 동안 37℃에서 혈청 비함유 GIBCO^TM RPMI 배지 (Invitrogen, Carlsbad, CA)중에서 자극시켰다. 세포 상청액중의 TNFα 수준을 통상적으로 구입가능한 키트 (MDS Panlabs # 309700)를 사용하여 ELISA에 의해 측정하였다.

결과: 본 발명의 바람직한 화합물은 500nM, 더욱 바람직하게는 100nM, 더욱 바람직하게는 20nM 미만의 IC₅₀ 값으로 TNFα의 방출을 억제한다.

실시예 7

본 발명의 화합물을 생체내 동물 모델에서 TNFα 방출을 억제하는 능력에 대해 스크리닝하였다 (예를 들어, 문헌[Griswold D. E. et al, Drugs Exp. Clin. Res. 19: 243-248, 1993, Badger, A.M. et al, J. Pharmacol. Exp. Ther., 279: 1453-1461, 1996, Dong, C. et al, Annu. Rev. Immunol., 20: 55-72, 2002 (본원에 참고문헌으로 인용됨), Ono, K. and Han, J.,Cellular Signalling, 12: 1-13, 2000 (본원에 참고문헌으로 인용됨) and Griffiths, J. B. et al, Curr. Rheumatol. Rep., 1: 139-148, 1999)] 참조).

특정 이론으로 제한하고자 하는 것은 아니지만, 이 모델에서 TNFα의 억제는 화합물에 의해 p38 MAP 키나아제의 억제로 인한 것으로 여겨진다.

실험관내 LPS 자극 연구

수컷 스프라그-데일리 래트 (0.2 - 0.35 kg)를 6개 이상의 집단으로 불규칙하게 나누고, 각각의 경우에 적합한 제형의 시험 화합물을 주사 또는 일시주사에 의해 정맥내로 투여하거나 경구 복용시켰다. 주사 또는 일시 주사 후 30분, 및 경구 투여후 1-2시간에, 리포폴리사카라이드 E. coli/0127:B8 (0.8 mg/kg)를 정맥내 투여하였다. 혈액 샘플을 LPS로의 1.5시간 후-처리하여 수집하였다. 혈청 TNFα 수준을 바이오소스 (KRC3011C)로부터의 ELISA 키트를 사용하여 측정하고, 비히클-처리된 대조군으로부터의 수준과 비교하였다.

결과: 본 발명의 화합물은 생체내 검정에서 TNFα의 방출을 억제한다. 정맥내로 전달된 바람직한 화합물은 20 mg/kg 미만, 더욱 바람직하게는 5mg/kg 미만, 더욱 더 바람직하게는 1 mg/kg 미만의 ED₅₀ 값을 나타낸다. 경구로 전달된 바람직한 화합물은 100 mg/kg 미만, 더욱 바람직하게는 20 mg/kg 미만, 더욱 더 바람직하 게는 1 mg/kg 미만의 ED₅₀ 값을 나타낸다.

실시예 8

키나아제 선택도

선택도 패널을 사용하여 본 발명의 화합물과 p38 MAP 키나아제, Src^p60 및 JNK2α2의 β 및 γ 이성질체와의 가교-반응성을 시험하였다. p38β, p38γ, 및 JNK2α2 검정은 실시예 4에 기술되어 있다. Sre^p60검정은 펩티드 기질의 Src^p60-촉매된 포스포릴화를 억제하는 화합물의 능력을 측정한다.

방법: 화합물을 연속적으로 DMSO중에 희석시키고, 25x 최종 농도의 1㎕의 시험 화합물을 사용하였다. 비히클 대조군은 단지 DMSO만으로 처리하였다. 시험 화합물을 실온에서 15분 동안 5.3 유닛의 Src^p60 효소 (Upstate, Charlottesville, VA)를 함유하는 10㎕의 물로 사전인큐베이션시켰다. 14㎕ 기질 칵테일 (45 mM HEPES, pH 7.5, 18 mM MgCl₂, 36 mM β-글리세로포스페이트 및 0.18 mM Na₃VO4, 71.5 pM ATP 및 1.8 μM CDC2p34 기질) (비오틴-KVEKIGEGTYGVVYK-아미드, 관행적 합성법, 뉴잉글랜드 펩티드 (New England Peptide)을 첨가하여 반응을 개시시켰다. 반응물을 3.5시간 동안 실온하에서 인큐베이션시키고, 25㎕의 25mM EDTA를 첨가하여 반응을 종료하였다. 8㎕의 반응 혼합물을 코스타 블랙 96-웰 폴리스티렌 플레이트 (Costar Black 96-well polystyrene plate) 및 1ml의 Tris-EDTA 완충액 (pH 8.0:Fiuka))중의 96㎕의 검출 혼합물 (30㎕의 APC-스트레파비딘 (Perkin Elmer Life Sciences)(물중의 1 mg/ml), 8㎕ Eu-P66 (Perkin Elmer Life Sciences) (500 ㎍/ml)에 이동시켰다. 반응물을 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 시분해형광을 665 및 615 nm에서 빅토르² V 플레이트 리더 (Perkin Elmer Life Sciences)상에서 빅토르 V 프로그램 LANCE 615/665를 이용하여 읽었다.

결과: 표 III은 키나아제 선택도 패널 데이타를 나타낸다. p38β에 대한 선택도가 3- 내지 71-배이며, LXXXVII는 p38α와 비교하여 p38β에 대해 17배 선택도를 나타낸다. p38γ 및 Src에 대한 선택도에 대해 관찰된 가장 낮은 값은 p38α와 비교하여 465배이었다. 화합물 LXXXVII, LXXXIV, LXXI, CXIX 및 CCLXXXI는 JNK2α2에 대해 83- 내지 191-배의 선택도를 나타내는 반면, 화합물 CCLXXVIII, CCLXXIX 및 CCLXXX는 JNK2α2에 비해 다소 낮은 선택도를 나타내며, p38α에 대한 활성의 28-64배이다.

		선택도 (IC₅₀, nM)
화합물	p38β	p38γ	Src	JNK2α2
LXXXVII	150	59500	25930	1040
LXXXIV	1288	>81268	>29488	2258
LXXI	114	>519000	12940	1588
CXIX	288	>100000	>100000	2078
CCLXXXI	24.6	>100000	>9025	762
CCLXXVIII	6.3	>100000	>70000	53.6
CCLXXIX	1.8	>100000	>64000	23.3
CCLXXX	95.4	>100000	>11000	646

표 III. 리드 화합물의 실험관내 효능 및 선택도. IC₅₀ 값 (nM)을 나타낸다.

본 발명의 다양한 화합물을 24 첨가 키나아제 (Upstate, Charlottesville, VA)에 대해 스크리닝하였다. 화합물을 40μM ATP를 함유하는 반응물중의 0.1μM 및 1μM 화합물을 시험하였다. 시험 화합물의 존재 및 부재시에 각각의 키나아제 기질로 방사성라벨링된 포스페이트(³²P) 유입을 측정하였다. 표 IV(a) 및 IV(b)는 이들 화합물에 대한 브로드 키나아제 패널 선택도를 나타낸다. 결과는 완충액 대조군과 비교하여 화합물의 존재시에 기질로 혼입된 ³²P의 양의 감소율%로서 나타내었다.

화합물	LXXXVII		LXXI		CXIX		CCLXXXI
	0.1 μM	1μM	0.1 μM	1μM	0.1μM	1μM	0.1 μM	1μM
CaMKIV	-12	10	5	6	13	7	12	33
CDK2/시클린A	1	0	0	8	-1	-1	-2	5
CK2	4	4	3	12	9	3	6	16
c-RAF	15	58	7	42	-3	3	-4	8
FGFR3	-23	-21	-1	16	9	-2	-27	26
GSK13	6	8	-8	10	11	13	6	19
InsR	-8	8	-25	12	8	3	-7	14
JNK1a1	-25	0	-20	3	-1	-18	-13	6
JNK3-His	19	61	-7	59	19	56	19	75
Lck	-15	18	8	17	13	10	26	35
Lyn	-32	-13	4	10	2	-12	-6	4
MAPK1	12	27	27	56	7	15	25	49
MAPK2	-4	14	-5	18	10	7	10	23
MEK1	3	-1	2	6	-1	2	-3	-7
MKK6	-4	54	-5	80	1	75	19	6
p7OS6K	-4	-1	-10	6	0	-5	-16	-10
PDGFR a	-6	-11	10	9	26	10	11	21
PKA	-10	-6	16	11	1	-8	-11	-2
PKB a	-2	5	-5	9	11	5	-2	6
PKB(3	-26	-29	-42	-5	-4	-19	-12	13
ROCK-II	2	8	-7	10	16	-8	10	9
SAPK4	-3	-1	-1	3	3	-4	2	7
Syk	17	23	-5	33	35	33	17	33
ZAP-70	-51	-14	-17	4	13	-9	12	30

표 IV(a). 브로드 선택도 패널. 화합물을 0.1 및 1μM의 농도에서 키나아제에 대해 스크리닝하고, 화합물의 부재하의 키나아제 활성과 비교하였다. 각 농도에서의 억제율을 나타낸다.

화합물	CCLXXVIII		CCLXXIX		CCLXXX
	0.1μM	1μM	0.1μM	1μM	0.1μM	1μM
CaMKIV	8	21	18	-2	-I0	7
CDK2/시클린A	1	20	24	65	3	19
CK2	5	10	8	4	10	32
c-RAF	26	66	32	83	21	75
FGFR3	19	32	9	10	-1	13
GSK3~3	16	66	15	57	5	14
InsR	-28	-4	9	2	4	27
JNKIal	-13	61	37	86	-26	18
JNK3-His	78	100	97	101	39	84
Lck	5	31	2	-3	-3	27
Lyn	-26	-29	-7	-13	-24	27
MAPK1	25	63	29	79	20 _	45
MAPK2	18	42	14	43	-9	9
MEK1	6	13	7	11	9	13
MKK6	26	83	8	90	0	62
p7OS6K	-11	4	9	10	7	18
PDGFR a	23	17	0	-9	1	8
PKA	-6	10	6	-2	0	11
PKB a	-6	4	5	6	-1	13
PKB(3	-3	41	0	-30	-18	13
ROCK-II	-6	6	10	12	8	10
SAPK4	-3	-4	3	0	0	6
Syk	7	-6	3	10	5	40
ZAP-70	-53	18	13	-1	-2	9

표 IV(b). 브로드 선택도 패널. 화합물을 0.1 및 1μM의 농도에서 키나아제에 대해 스크리닝하고, 화합물의 부재하의 키나아제 활성과 비교하였다. 각 농도에서의 억제율을 나타낸다.

실시예 9

생체내 성립된 타입 II 콜라겐 관절염 연구

화합물을 콜라겐-유도된 관절염에 걸린 래트에서 시험하였다. 암컷 루이스 래트 (0.16-0.2 kg)의 꼬리 말단 및 등 두 부위에 2mg/ml의 보빈 타입 II 콜라겐을 함유하는 300㎕의 프륜드의 불완전 애쥬번트 (Freund's Incomplete Adjuvant)로 0일 및 6일에 피하내 주입하였다. 연구 9일째에, 뒷다리 발목 관절의 캘리퍼 측정을 수행하였다. 이러한 측정은 정상적인 사전 질환 측정으로서 여겨진다. 발목 팽창이 하나 이상의 뒷발에서 선명하게 관찰되는 경우 (캘리퍼 측정치가 0.263에서 0.282 인치로 증가), 래트는 연구의 처리 상태로 등록하였다. 이는 연구 10 또는 11일에 발생하며, 관절염 1일째로 여겨진다. 등록된 동물을 무작위 추출하여, 관절염 1-7일째 (처리일)에 경구 위관법을 통해 비히클 대조군, 화합물 (1, 3.3, 10, 또는 30 mg/kg, 비드; 다르게 언급되어 있지 않는 한), 또는 덱사메타손 (0.0375 mg/kg, 비드)을 투여하였다. 발목 직경을 각각의 처리 날짜에 측정하였다. 7개의 리드 화합물에 대한 발목 직경의 평균 증가는 도 3-9에 도시하였다.

7일째에 희생시켜, 양 뒷발을 각각의 동물로부터 제거하여 중량을 측정하였다. 모든 군의 모든 동물로부터의 무릎 및 발목을 보존하고, 5% 포름산으로 탈석회화시키고, 두개의 거의 동일한 세로 뼈대 (발목) 또는 앞부분 (무릎)을 반으로 정돈하고, 탈수시키고, 깨끗하게 하고, 침투시키고, 파라핀에 함침시켰다. 블록을 절단하고, 톨루이딘 블루(Toluidine Blue)로 염색하였다.

조직을 현미경으로 시험하고, 무릎 및 발목 염증 (세포 침투), 판누스 형성 및 침투, 연골 손상 (톨루이딘 염색의 손실 및 콜라겐 파괴) 및 골 재흡수에 대해 기록하였다. 스코어링을 0-5로 평가하고, 여기서 스코어 0은 정상이며, 스코어 5는 심각한 손상, 질환의 증상, 또는 이 둘 모두를 나타낸다.

결과: 시험 화합물은 염증 및 골 손상을 포함하는 관절염의 임상적 및 병리조직학적 변수의 용량-의존적 감소를 유도하는 것으로 나타났다. 본 결과는 표 V에서 질환 변수 (mg/kg중의 ED₅₀)의 측정값을 50% 감소시키는 것으로 요약된다.

화합물	발목 직경	발 중량	총 발목 조직	총 발목 조직
LXXXVII	1.29	1.88	2.07	0.42
LXXXIV	1.9	2	2.6	0.6
CXIX	2.3	3.75	2.64	1.19
CCLXXXI	0.98	0.94	0.93	0.2
CCLXXVIII	2.04	1.55	3.09	1.24
CCLXXIX	2.09	2.57	4.29	0.72
CCLXXX	5.43	3.51	7.6	1.04

표 V. 본 발명의 화합물에 의한 래트의 콜라겐-유도된 관절염의 억제. mg/kg의 ED₅₀ 값은 관절염의 여러 변수에 대해 도시하였다.

실시예 10

화합물의 다양한 암세포주에 대한 활성을 시험하였다. 암세포주는 유방암종, 직장암종, 악성 흑색종, 위암 및 비소세포 폐암(NSCLC)에 대한 세포주를 포함한다.

본원에 참조된 모든 내용은 참고문헌으로서 인용되었다.

Claims

하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 프로드러그, 용매화물 또는 염:

상기 식에서,

X는 0 또는 S(O)_m이며;

Y는 OR₄, 또는 NR₄R₅이며;

m은 0, 1, 또는 2이며;

n은 1 또는 2이며;

R₁은 수소, -CN, -C00H, 할로겐, C₁- C₆알킬, C₁- C₆알콕시; C₃ - C₆시클로알킬, C₃ - C₆시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁- C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되며;

Ar은 아릴기이며;

R₃은 수소, 할로겐, 아미노, C₁- C₆ 알킬, C₁- C₆ 알콕시, C₃ - C₆ 시클로알 킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁-C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되며;

R₄ 및 R₅는 각각 수소, C₁- C₆ 알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬, 아릴, 및 헤테로시클릴로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나; R₄와 R₅는 이들에 결합된 N 원자와 함께 3 내지 8개 원자의 헤테로시클릭 고리를 형성하며;

단, X가 S(O)_m이고, m이 0이며, Ar은 페닐이며, Y는 NR₄R₅이고, R₄는 수소이고, R₅는 알킬인 경우, R₅이 히드록시알킬 기이면, R₅은 1) -CH₂(CH₃)₂CH₂OH이 아니고, 2) N 원자에 알파인 탄소 원자에서 페닐기로 치환되지 않는다 (즉, N 원자에 결합된 R₅의 탄소 원자는 페닐 기를 함유하지 않는다).
제 1항에 있어서, X가 0 또는 S인 화합물.
제 1항에 있어서, X가 0인 화합물.
제 1항에 있어서, Ar이 페닐 또는 나프틸인 화합물.
제 1항에 있어서, Ar이 페닐기인 화합물.
제 5항에 있어서, 페닐기가 4-플루오로페닐인 화합물.
제 1항에 있어서, 화합물이 화학식 LXXXVII, LXXXIV, LXXI, CXIX, CCLXXXI, CCLXXVIII, CCLXXIX 및 CCLXXX로 구성된 군으로부터 선택된 화합물.
제 1항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 염인 화합물.
하기 화학식 II의 화합물 또는 이의 염:

상기 식에서,

R₁은 수소, -CN, -C00H, 할로겐, C₁-C₆ 알킬, C₁-C₆ 알콕시; C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁- C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 선택되고;

Ar은 아릴 기이다.
하기 화학식 III의 화합물 또는 이의 염:

상기 식에서,

X는 0 또는 S(O)_m이고;

m 및 n은 각각 독립적으로, 0, 1, 또는 2이고;

p는 1 또는 2이고;

R₁은 독립적으로 수소, -CN, -COOH, 할로겐, C₁- C₆ 알킬, C₁- C₆ 알콕시; C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁- C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 선택되고;

Ar은 아릴 기이고;

R₃은 독립적으로 수소, 할로겐, 아미노, C₁- C₆ 알킬, C₁- C₆ 알콕시, C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁- C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 선택되고;

L은 C₁- C₆ 알킬 기 또는 아릴 기이다.
하나 이상의 화학식 I의 화합물 및 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제 조성물.
p38-관련 질환의 치료가 필요한 피검체를 확인하고, p38-관련 질환을 치료하는데 효과적인 양의 화학식 I의 화합물을 피검체에 투여하는 것을 포함하여, p38-관련 질환을 치료하는 방법.
제 12항에 있어서, 화학식 I의 화합물이 또 다른 약제학적 활성제와 혼합되는 방법.
제 12항에 있어서, 피검체가 소, 돼지, 양, 염소, 말, 낙타, 버팔로, 고양이, 개, 래트, 마우스 및 사람으로 구성된 군으로부터 선택된 포유동물인 방법.
제 12항에 있어서, 피검체가 사람인 방법.
제 12항에 있어서, p38-관련 질환이 p38의 특이적 이소폼과 관련된 방법.
제 16항에 있어서, p38의 특이적 이소폼이 p38α, p38β, p38δ 또는 p38γ로 구성된 군으로부터 선택된 방법.
제 17항에 있어서, p38의 특이적 이소폼이 p38α인 방법.
하나 이상의 사이토킨의 변형된 활성과 관련된 질환을 치료하는 방법으로서, 이러한 치료가 필요한 피검체를 확인하고, 하나 이상의 사이토킨의 변형된 활성을 치료하는데 효과적인 양의 화학식 I의 화합물을 피검체에 투여하는 것을 포함하는 방법.
제 19항에 있어서, 화학식 I의 화합물이 또 다른 약제학적 활성제와 혼합되는 방법.
제 19항에 있어서, 피검체가 소, 돼지, 양, 염소, 말, 낙타, 버팔로, 고양이, 개, 래트, 마우스 및 사람으로 구성된 군으로부터 선택된 포유동물인 방법.
제 19항에 있어서, 피검체가 사람인 방법.
제 19항에 있어서,하나 이상의 사이토킨중 하나 이상은 IL-1, IL-6, IL-8 및 TNFα로 구성된 군으로부터 선택된 방법.
생체내 또는 실험관내 세포에서 p38 활성을 억제하는데 효과적인 양의 화학식 I의 화합물을 생체내 또는 실험관내 세포와 접촉시키는 것을 포함하여, 생체내 또는 실험관내 세포에서 p38의 활성을 억제하는 방법.
세포 또는 조직중의 p38 단백질의 존재, 위치, 정량 또는 이들의 복합된 사항을 결정하기 위한 방법으로서, a) 화학식 I의 화합물이 p38 단백질에 결합할 수 있는 조건하에 화학식 I의 화합물과 세포 또는 조직을 접촉시키고; b) 세포 또는 조직중의 화학식 I의 화합물의 존재, 위치, 정량 또는 이들이 조합된 사항을 측정하여, 세포 또는 조직 샘플중의 p38 단백질의 존재, 위치, 정량 또는 이들이 조합된 사항을 결정하는 것을 포함하는 방법.
화학식 I의 화합물 또는 이의 염을 제조하는 방법으로서,

n이 2인 화학식 III의 화합물을 R₄ 및 R₅가 화학식 I에서 정의된 바와 같은 화학식 HOR₄ 또는 HNR₄R₅의 친핵체 또는 이의 컨쥬게이트 염기와, 기 -S(O)_n가 대체되고, 화학식 I의 화합물 또는 이의 염이 형성되는 조건하에 반응시키는 것을 포함하는 방법.
하기 화학식 III의 화합물을 제조하는 방법으로서,

하기 화학식 IV의 화합물 또는 이의 염을 하기 화학식 V의 화합물 또는 이의 염과 금속 촉매의 존재하에 화학식 III의 화합물이 형성되는 조건하에 반응시키는 것을 포함하는 방법:

화학식 (IV)의 화합물

화학식 (V)의 화합물

상기 식에서,

X는 0 또는 S(O)_m이고;

m은 0, 1, 또는 2이며;

n은 1 또는 2이고;

R₁은 수소, -CN, -C00H, 할로겐, C₁- C₆ 알킬, C₁- C₆ 알콕시; C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁- C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되며;

Ar은 아릴 기이며;

Z는 할로겐, 트리플레이트 또는 기타 적합한 이탈 기로 구성된 군으로부터 선택되며;

p는 1 또는 2이며;

R₃은 독립적으로 수소, 할로겐, 아미노, C₁- C₆ 알킬, C₁- C₆ 알콕시, C₃ - C₆ 시클로알킬, C₃ - C₆ 시클로알킬옥시, 아릴, 아미노카르보닐, C₁- C₆ 알킬카르보닐, 및 C₁- C₆ 알콕시카르보닐로 구성된 군으로부터 선택되고;

Y는 S(O)_nL이고, 여기서, n은 0, 1, 또는 2이고, L은 C₁- C₆ 알킬 기이다.