[go: up one dir, main page]

KR102585848B1 - Cd137 및 종양 항원에 결합할 수 있는 이중특이적 결합 분자, 및 그것의 용도 - Google Patents

Cd137 및 종양 항원에 결합할 수 있는 이중특이적 결합 분자, 및 그것의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR102585848B1
KR102585848B1 KR1020197027622A KR20197027622A KR102585848B1 KR 102585848 B1 KR102585848 B1 KR 102585848B1 KR 1020197027622 A KR1020197027622 A KR 1020197027622A KR 20197027622 A KR20197027622 A KR 20197027622A KR 102585848 B1 KR102585848 B1 KR 102585848B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
cdr
mab
cancer
amino acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
KR1020197027622A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20190121802A (ko
Inventor
리친 리우
치아-잉 카오 람
군도 디드리히
레슬리 에스. 죤슨
폴 에이. 무어
에지오 본비니
Original Assignee
마크로제닉스, 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 마크로제닉스, 인크. filed Critical 마크로제닉스, 인크.
Publication of KR20190121802A publication Critical patent/KR20190121802A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102585848B1 publication Critical patent/KR102585848B1/ko
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G11—INFORMATION STORAGE
    • G11C—STATIC STORES
    • G11C15/00—Digital stores in which information comprising one or more characteristic parts is written into the store and in which information is read-out by searching for one or more of these characteristic parts, i.e. associative or content-addressed stores
    • G11C15/04—Digital stores in which information comprising one or more characteristic parts is written into the store and in which information is read-out by searching for one or more of these characteristic parts, i.e. associative or content-addressed stores using semiconductor elements
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • G—PHYSICS
    • G11—INFORMATION STORAGE
    • G11C—STATIC STORES
    • G11C13/00—Digital stores characterised by the use of storage elements not covered by groups G11C11/00, G11C23/00, or G11C25/00
    • G11C13/0002—Digital stores characterised by the use of storage elements not covered by groups G11C11/00, G11C23/00, or G11C25/00 using resistive RAM [RRAM] elements
    • G11C13/0004—Digital stores characterised by the use of storage elements not covered by groups G11C11/00, G11C23/00, or G11C25/00 using resistive RAM [RRAM] elements comprising amorphous/crystalline phase transition cells
    • G—PHYSICS
    • G11—INFORMATION STORAGE
    • G11C—STATIC STORES
    • G11C13/00—Digital stores characterised by the use of storage elements not covered by groups G11C11/00, G11C23/00, or G11C25/00
    • G11C13/0002—Digital stores characterised by the use of storage elements not covered by groups G11C11/00, G11C23/00, or G11C25/00 using resistive RAM [RRAM] elements
    • G11C13/0021—Auxiliary circuits
    • G11C13/0023—Address circuits or decoders
    • G11C13/0026—Bit-line or column circuits
    • G—PHYSICS
    • G11—INFORMATION STORAGE
    • G11C—STATIC STORES
    • G11C13/00—Digital stores characterised by the use of storage elements not covered by groups G11C11/00, G11C23/00, or G11C25/00
    • G11C13/0002—Digital stores characterised by the use of storage elements not covered by groups G11C11/00, G11C23/00, or G11C25/00 using resistive RAM [RRAM] elements
    • G11C13/0021—Auxiliary circuits
    • G11C13/004—Reading or sensing circuits or methods
    • G—PHYSICS
    • G11—INFORMATION STORAGE
    • G11C—STATIC STORES
    • G11C15/00—Digital stores in which information comprising one or more characteristic parts is written into the store and in which information is read-out by searching for one or more of these characteristic parts, i.e. associative or content-addressed stores
    • G—PHYSICS
    • G11—INFORMATION STORAGE
    • G11C—STATIC STORES
    • G11C15/00—Digital stores in which information comprising one or more characteristic parts is written into the store and in which information is read-out by searching for one or more of these characteristic parts, i.e. associative or content-addressed stores
    • G11C15/04—Digital stores in which information comprising one or more characteristic parts is written into the store and in which information is read-out by searching for one or more of these characteristic parts, i.e. associative or content-addressed stores using semiconductor elements
    • G11C15/046—Digital stores in which information comprising one or more characteristic parts is written into the store and in which information is read-out by searching for one or more of these characteristic parts, i.e. associative or content-addressed stores using semiconductor elements using non-volatile storage elements
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/626—Diabody or triabody
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • G—PHYSICS
    • G11—INFORMATION STORAGE
    • G11C—STATIC STORES
    • G11C13/00—Digital stores characterised by the use of storage elements not covered by groups G11C11/00, G11C23/00, or G11C25/00
    • G11C13/0002—Digital stores characterised by the use of storage elements not covered by groups G11C11/00, G11C23/00, or G11C25/00 using resistive RAM [RRAM] elements
    • G11C13/0021—Auxiliary circuits
    • G11C13/004—Reading or sensing circuits or methods
    • G11C2013/0045—Read using current through the cell

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

본 발명은 CD137의 에피토프에 특이적인 하나 이상의 에피토프-결합 부위 및 종양 항원 ("TA")의 에피토프에 특이적인 하나 이상의 에피토프-결합 부위를 가지는 결합 분자 (예컨대, "CD137 x TA 결합 분자")에 관한 것이다. 한 구체예에서, 이러한 CD137 x TA 결합 분자는 2, 3, 4개 또는 4개 이상의 폴리펩타이드 사슬로 구성되고 각각이 CD137의 에피토프에 특이적인 2개의 에피토프-결합 부위 및 각각이 TA의 에피토프에 특이적인 2개의 에피토프-결합 부위를 가지는 이중특이적 분자, 특히 이중특이적 사가 디아바디일 것이다. 대안적으로, 이러한 CD137 x TA 결합 분자는 3개 이상의 폴리펩타이드 사슬로 구성되고 각각이 CD137의 에피토프에 특이적인 하나 또는 2개의 에피토프-결합 부위 및 각각이 TA의 에피토프에 특이적인 하나 또는 2개의 에피토프-결합 부위를 가지는 이중특이적 분자, 특히 이중특이적 삼가 결합 분자일 것이다. 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 CD137, 및 TA에 동시에 결합할 수 있다. 발명은 임의의 이러한 CD137 x TA 결합 분자를 함유한 제약학적 조성물에 관련된다. 발명은 추가적으로 암 및 기타 질환 또는 상태의 치료에서의 이러한 분자의 사용 방법에 관련된다. 발명은 또한 신규한 CD137-결합 분자, 및 HER2/neu-결합 분자, 뿐만 아니라 이것들의 유도체 및 용도를 제공한다.

Description

CD137 및 종양 항원에 결합할 수 있는 이중특이적 결합 분자, 및 그것의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 미국 특허 출원 일련 번호 62/463,353 (2017년 2월 24일에 출원됨; 계류중) 및 62/597,594 (2017년 12월 12일에 출원됨; 계류중)에 대한 우선권을 주장하며, 상기 출원은 본원에 그 전문이 참조로 포함된다.
서열 목록에 대한 언급
본 출원은 컴퓨터-판독 가능한 매체 (파일명: 1301_0149PCT_ST25.txt, 2018년 2월 11일에 생성되고, 309,094 바이트의 크기를 가짐)에 개시된, 37 C.F.R. 1.821 (이하 참조)에 따르는 하나 이상의 서열 목록을 포함하며, 상기 파일은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
기술분야
본 발명은 CD137의 에피토프에 특이적인 하나 이상의 에피토프-결합 부위 및 종양 항원 ("TA")의 에피토프에 특이적인 결합 분자 (예컨대, "CD137 x TA 결합 분자")에 관한 것이다. 한 구체예에서, 이러한 CD137 x TA 결합 분자는 2, 3, 4개 또는 4개 이상의 폴리펩타이드 사슬로 구성되고 각각이 CD137의 에피토프에 특이적인 2개의 에피토프-결합 부위 및 각각이 TA의 에피토프에 특이적인 2개의 에피토프-결합 부위를 가지는 이중특이적 분자, 특히 이중특이적 사가 디아바디일 것이다. 대안적으로, 이러한 CD137 x TA 결합 분자는 3개 이상의 폴리펩타이드 사슬로 구성되고 각각이 CD137의 에피토프에 특이적인 1개 또는 2개의 에피토프-결합 부위 및 각각이 TA의 에피토프에 특이적인 1개 또는 2개의 에피토프-결합 부위를 가지는 이중특이적 분자, 특히 이중특이적 삼가 결합 분자일 것이다. 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 CD137, 및 TA에 동시에 결합할 수 있다. 발명은 임의의 이러한 CD137 x TA 결합 분자를 함유하는 제약학적 조성물에 관련된다. 발명은 추가적으로 암 및 기타 질환 및 상태의 치료에서 이러한 분자의 사용 방법에 관련된다. 발명은 또한 신규한 CD137-결합 분자, 및 HER2/neu-결합 분자, 뿐만 아니라 그것들의 유도체 및 그것들의 용도를 제공한다.
CD137 (4-1BB 및 "TNF 수용체 수퍼패밀리 구성원 9"("TNFRSF9")로도 알려져 있음)은 CD28-의존적 및 독립적 T-세포 동시자극을 매개하는, 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리의 동시자극성 수용체 구성원이다 (Vinay, D.S. and Kwon, B.S. (1998) "Role of 4-1BB in immune responses", Semin Immunol. 10:481-489; Bartkowiak, T. et al. (2015) "4-1BB Agonists: Multi-Potent Potentiators Of Tumor Immunity", Frontiers Oncol. 5:117; pp. 1-16; So, T., et al. (2008) "Immune Regulation And Control Of Regulatory T cells By OX40 And 4-1BB", Cytokine & Growth Factor Rev. 19:253-262; Croft, M. (2009) "The Role Of TNF Superfamily Members In T-Cell Function And Diseases", Nat. Rev. Immunol. 9:271-285; Yonezawa, A. et al. (2015) "Boosting cancer immunotherapy with Anti-CD137 antibody therapy", Clin. Cancer Res. 21(14):3113-3120; Li, S.Y. et al. (2013) "Immunotherapy Of Melanoma With The Immunecostimulatory Monoclonal Antibodies Targeting CD137", Clin. Pharmacol. 5:47-53; Vinay, D.S. et al. (2012) "Immunotherapy Of Cancer With 4-1BB", Mol. Cancer Ther. 11:1062-1070; Houot, R. et al. (2012) "Boosting Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity Against Tumor Cells With A CD137 Stimulatory Antibody", Oncoimmunology. 1:957-958; Kwon, B.S. et al. (1989) "cDNA Sequences Of Two Inducible T-Cell Genes", Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86:1963-1967; Chen, L. et al. (2013) "Molecular Mechanisms Of T cells Co-Stimulation And Coinhibition", Nat. Rev. Immunol. 13:227-242; Yao S. et al. "Advances In Targeting Cell Surface Signaling Molecules For Immune Modulation", Nat. Rev. Drug Discov. 12:130-146).
CD137은 T 세포, 천연 살해 (NK) 세포, 수지상 세포 (DC), B 세포, 및 면역 체계의 기타 세포에 의해 유도성으로 발현된다 (Vinay, D.S. et al. (2015) "Therapeutic Potential Of Anti-CD137 (4-1BB) Monoclonal Antibodies, Expert Opinion On Therapeutic Targets", DOI:10.1517/14728222.2016.1091448; pp.1-14; Wang, C. et al. (2009) "Immune Regulation By 4-1BB And 4-1BBL: Complexities And Challenges", Immunol. Rev. 229:192-215; Sallin, M.A. et al. (2014) "The Anti-Lymphoma Activities Of Anti-CD137 Monoclonal Antibodies Are Enhanced In FcγRIII -/- Mice", Cancer Immunol. Immunother. 63:947-958; Melero, I. et al. (2008) "Multilayered Action Mechanisms Of CD137 (4-1BB)-Targeted Immunotherapies", Trends Pharmacol Sci. 29:383-390; Ramakrishna, V. et al. (2015) "Characterization Of The Human T Cell Response To In Vitro CD27 Costimulation With Varlilumab", J. Immunother. Canc. 2:37; pp.1-13). 단백질은 짧은 N-말단 세포질 부분, 경막 영역, 및 3개의 시스테인-풍부 모티프를 가진 세포외 도메인을 가지는 255개 아미노산 단백질로 구성된다 (Schwarz, H. et al. (1993) "A Receptor Induced By Lymphocyte Activation (ILA): A New Member Of The Human Nerve-Growth-Factor/Tumor-Necrosis-Factor Receptor Family", Gene 134:295-298).
배타적인 것은 아니지만, 주로 항원-제공 세포 (APC) 상에서 발현된 CD137의 리간드 CD137L (4-1BBL; TNFSF9)에 의한 CD137의 결찰은 세포 팽창, 증가된 사이토카인 분지 및 활성화-유도된 세포 사망의 방지와 같은 다양한 T 세포 반응을 불러일으킨다 (Qian, Y. et al. (2015) "CD137 Ligand-Mediated Reverse Signaling Inhibits Proliferation And Induces Apoptosis In Non-Small Cell Lung Cancer", Med. Oncol. 32:44; pp.1-10); Sallin, M.A. et al. (2014) "The Anti-Lymphoma Activities Of Anti-CD137 Monoclonal Antibodies Are Enhanced In FcγIII -/- Mice", Cancer Immunol. Immunother. 63:947-958; Lee, S.W. et al. (2009) "4-1BB As A Therapeutic Target For Human Disease", Adv. Exp. Med. Biol. 647:120-129; Thum, E. et al. (2009) "CD137, Implications In Immunity And Potential For Therapy", Front. Biosci. (Landmark Ed). 14:4173-4188; Wang, C. et al. (2009) "Immune Regulation By 4-1BB And 4-1BBL: Complexities And Challenges", Immunol. Rev. 229(1):192-215; Long, A.H. et al. (2015) "4-1BB Costimulation Ameliorates T Cell Exhaustion Induced By Tonic Signaling Of Chimeric Antigen Receptors", Nature Med. 21(6):581; pp. 1-13). 그러므로, 이러한 결찰은 면역 체계를 활성화시키는 작용을 한다. 그러나, CD137과 CD137L 사이의 시스-상호작용 또한 CD137의 발현을 강력하게 하향조절한다 (Kwon, B. (2015) "Is CD137 Ligand (CD137L) Signaling a Fine Tuner of Immune Responses?", Immune Network. 15(3): 121-124). CD137 리간드는 그러므로 CD137-매개된 면역 체계 활성화의 정도 및 동역학을 제어하는 기능을 한다 (Kwon, B. (2015) "Is CD137 Ligand (CD137L) Signaling a Fine Tuner of Immune Responses?", Immune Network. 15(3): 121-124; Shuford WW et al. (1997) "4-1BB Costimulatory Signals Preferentially Induce CD8+ T Cell Proliferation And Lead To The Amplification In Vivo Of Cytotoxic T Cell Responses", J. Exp. Med. 186:47-55).
중요하게, 인간 NK 세포 상에서 발현된 CD137은 종양 세포에 결합하게 되는 항-종양 항체에 결합될 때 상향조절된다 (즉, 종양 항원 ("TA")에 결합하는 항체) (Houot, R. et al. (2012) "Boosting Antibody-DependenT Cellular Cytotoxicity Against Tumor Cells With A CD137 Stimulatory Antibody", Oncoimmunology. 1:957-958; Kohrt, H.E. et al. (2014) "Targeting CD137 Enhances The Efficacy Of Cetuximab", J. Clin. Invest. 124(4):2668-2682; Lin, W. et al. (2008) "Fc-Dependent Expression Of CD137 On Human NK Cells: Insights Into "Agonistic" Effects Of Anti-CD137 Monoclonal Antibodies", Blood 112(3):699-707; Mittal, P. et al. (2015) "Tumor-Unrelated CD4 T Cells Help Augments CD134 Plus CD137 Dual Costimulation Tumor Therapy", J. Immunol. Nov 11. pii: 1502032; pp.1-14; Sanchez-Paulete, A.R. et al. (2015) "Cancer Immunotherapy With Immunomodulatory Anti-CD137 And Anti-PD-1 Monoclonal Antibodies Requires Batf3-Dependent Dendritic Cells", Cancer Discov. Oct 22. pii: CD-15-0510; pp. 1-28; Wei, H. et al. (2014) "Dual Targeting Of CD137 Co-Stimulatory And PD-1 Co-Inhibitory Molecules For Ovarian Cancer Immunotherapy", OncoImmunology 3:e28248; pp. 1-3; Seo, S.K. et al. (2004) "4-1BB-Mediated Immunotherapy Of Rheumatoid Arthritis", Nat. Med. 10:1088-1094).
이러한 인식은 CD137에 대해 면역특이적인 항체가 면역 체계를 활성화하기 위해 사용될 수 있고 그로써 암에 대한 치료법을 제공할 수 있을 것이라는 개념으로 이어졌다 (Melero I. et al. (1997) "Monoclonal Antibodies Against The 4-1BB T-Cell Activation Molecule Eradicate Established Tumors", Nat Med. 3:682-385; Sun, Y. et al. (2002) "Costimulatory Molecule-Targeted Antibody Therapy Of A Spontaneous Autoimmune Disease", Nature Med. 8:1405-1413; Kammer, G.M. et al. (2002) "Immunotherapy Tackles Lupus", Nat. Med. 8(12):1356-1358; Foell, J. et al. (2003) "CD137 Costimulatory T Cell Receptor Engagement Reverses Acute Disease In Lupus-Prone NZB x NZW F1 Mice", J. Clin. Invest. 111(10):1505-1518; Mittler, R.S. et al. (2004) "Anti-CD137 Antibodies In The Treatment Of Autoimmune Disease And Cancer", Immunol. Res. 29(1-3):197-208; Foell, J.L. et al. (2004) "Engagement of The CD137 (4-1BB) Costimulatory Molecule Inhibits And Reverses The Autoimmune Process In Collagen-Induced Arthritis And Establishes Lasting Disease Resistance", Immunology 113(1):89-98; Sytwu, H.K. et al. (2003) "Anti-4-1BB-Based Immunotherapy For Autoimmune Diabetes: Lessons From A Transgenic Non-Obese Diabetic (NOD) Model", J. Autoimmun. 21(3):247-254; Hernandez-Chacon JA et al. (2011) "Costimulation Through The CD137/4-1BB Pathway Protects Human Melanoma Tumor-Infiltrating Lymphocytes From Activation Induced Cell Death And Enhances Antitumor Effector Function", J. Immunother. 34:236-250; Morales-Kastresana, A. et al. (2014) "Combinations Of Immunostimulatory Antibodies With Synergistic Effects Against Spontaneous Cancer", OncoImmunology 3:2, e27812, pp.1-4; Sanmamed, M.F. et al. (2015) "Agonists of Co-stimulation in Cancer Immunotherapy Directed Against CD137, OX40, GITR, CD27, CD28, and ICOS", Seminars Oncol. 42(4):640-655; Tongu, M. et al. (2015) "Intermittent Chemotherapy Can Retain The Therapeutic Potential Of Anti-CD137 Antibody During The Late Tumor-포함 State", Cancer Sci. 106(1):9-17; Takeda, K. et al. (2007) "Combination Antibody-Based Cancer Immunotherapy", Cancer Sci. 98(9):1297-1302). 항-CD137 항체는 미국 특허 번호 2014/0274909; 2013/0280265; 2013/0273078; 2013/0071403; 2012/0058047; 2011/0104049; 2011/0097313; 2008/0166336; 2008/0019905; 2006/0188439; 2006/0182744; 2006/0121030; 및 2003/0223989에서 개시된다.
그러나, 모든 이러한 선행 진보에도 불구하고, 신체의 면역 시스템이 암 세포 또는 병원체-감염 세포를, 특히 더 낮은 치료 농도에서 공격하도록 보다 활발하게 지시할 수 있는 개선된 조성물에 대한 필요성이 남아 있다. 비록 적응성 면역 체계가 암 및 질환에 대한 강력한 방어 기작일 수 있긴 하지만, 종종 CD137의 감소된/부재하는 동시 자극 활성에 의해 매개된, 종양 미세환경에서의 면역 억제성/회피 메커니즘에 의해 방해를 받는다. 나아가, 종양 환경에서 종양 세포, 면역 세포, 및 간질 세포에 의해 발현된 동시 자극성 분자는 암 세포에 대한 T-세포 반응을 우선적으로 약화시킬 수 있다.
하기에서 상세하게 기술되는 것과 같이, 본 발명은 이러한 필요성을 CD137 x TA 결합 분자를 제공함으로써 해결한다. 이러한 이중특이적 분자는 종양 세포의 표면에서 발현되는 종양 항원에 결합할 수 있고, 이러한 종양 세포로 CD137-발현 NK 세포를 동시 국지화할 수 있다. 이러한 동시 국지화는 NK 세포가 면역 체계의 활성화 또는 지속적인 활성화를 촉진하도록 상향조절한다 (예컨대, 종양 세포에 대한 세포독성 T 세포 반응을 자극함). 이런 특성은 이러한 이중특이적 분자가 면역 체계를 자극하는데, 특히 암 및 병원체-관련 질환 및 상태의 치료에 활용되는 것을 허용한다. 본 발명은 이런 목표 및 기타 목표에 관련된다.
본 발명은 CD137의 에피토프에 특이적인 하나 이상의 에피토프-결합 부위 및 종양 항원 ("TA")의 에피토프에 특이적인 하나 이상의 에피토프-결합 부위를 가지는 결합 분자 (예컨대, "CD137 x TA 결합 분자")에 관한 것이다. 한 구체예에서, 이러한 CD137 x TA 결합 분자는 2, 3, 4개 또는 4개 이상의 폴리펩타이드 사슬로 구성되고 각각이 CD137의 에피토프에 특이적인 2개의 에피토프-결합 부위 및 각각이 TA의 에피토프에 특이적인 2개의 에피토프-결합 부위를 가지는 이중특이적 분자, 특히 이중특이적 사가 디아바디일 것이다. 대안적으로, 이러한 CD137 x TA 결합 분자는 3개 이상의 폴리펩타이드 사슬로 구성되고 각각이 CD137의 에피토프에 특이적인 1개 또는 2개의 에피토프-결합 부위 및 각각이 TA의 에피토프에 특이적인 1개 또는 2개의 에피토프-결합 부위를 가지는 이중특이적 분자, 특히 이중특이적 삼가 결합 분자일 것이다. 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 CD137, 및 TA에 동시에 결합할 수 있다. 발명은 임의의 이러한 CD137 x TA 결합 분자를 함유하는 제약학적 조성물에 관련된다. 발명은 추가적으로 암 및 기타 질환 및 상태의 치료에서 이러한 분자의 사용 방법에 관련된다. 발명은 또한 신규한 CD137-결합 분자, 및 HER2/neu-결합 분자, 뿐만 아니라 그것들의 유도체 및 그것들의 용도를 제공한다.
본 발명은 CD137의 에피토프의 단지 한 개의 복사물 및 TA의 에피토프의 단지 한 개의 복사물에 결합할 수 있다는 점에서 일가이지만, 이러한 단일 디아바디가 CD137의 에피토프 및 TA의 에피토프에 동시에 결합할 수 있다는 점에서 이중특이적인 CD137 x TA 결합 분자를 제공한다. 그러나, 본 발명은 특히 서로 헤테로다이머 방식으로 회합하여 각각 CD137의 에피토프에 특이적인 2개의 결합 부위 및 각각 TA의 에피토프에 특이적인 2개의 결합 부위를 형성하는 폴리펩타이드 사슬로 구성된 CD137 x TA 결합 분자에 관련된다. 발명의 이러한 바람직한 CD137 x TA 결합 분자는 "이중특이적 사가"로 언급된다. 본 발명은 또한 특히 서로 헤테로다이머 방식으로 회합하여 각각 CD137의 에피토프에 특이적인 2개의 결합 부위 및 각각 TA의 에피토프에 특이적인 하나의 결합 부위를 형성하는 폴리펩타이드 사슬로 구성된 CD137 x TA 결합 분자에 관련된다. 발명의 이러한 바람직한 CD137 x TA 결합 분자는 "이중특이적 삼가"로 언급된다.
본 발명은 3개의 폴리펩타이드 사슬 ("제1", "제2" 및 "제3" 폴리펩타이드 사슬)을 포함하는 CD137 x TA 결합 분자를 제공하는데, 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬이 서로 공유적으로 결합되고 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬이 서로 공유적으로 결합된다. 발명의 바람직한 CD137 x TA 결합 분자는 4개의 폴리펩타이드 사슬 ("제1", "제2", "제3", 및 "제4" 폴리펩타이드 사슬)로 구성되는데, 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬이 서로 공유적으로 결합되고, 제3 및 제4 폴리펩타이드 사슬이 서로 공유적으로 결합되며, 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬이 서로 공유적으로 결합된다. 또한 바람직한 것은 5개의 폴리펩타이드 사슬 ("제1", "제2", "제3", "제4", 및 "제5" 폴리펩타이드 사슬)을 포함하는 발명의 CD137 x TA 결합 분자이며, 여기서 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬이 서로 공유적으로 결합되고, 제3 및 제4 폴리펩타이드 사슬이 서로 공유적으로 결합되며, 제3 및 제5 폴리펩타이드 사슬이 서로 공유적으로 결합되고, 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬이 서로 공유적으로 결합된다.
상세하게 설명하면, 발명은 CD137 x TA 결합 분자를 제공하며, 상기 결합 분자는 CD137의 에피토프 및 종양 항원 (TA)의 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있고, 상기 CD137 x TA 결합 분자는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 제1 경쇄 가변 도메인, 및 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 제1 중쇄 가변 도메인을 포함하며;
(A) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL15 (SEQ ID NO:222)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(B) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL14 (SEQ ID NO:221)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(C) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL11 (SEQ ID NO:218)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(D) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL10 (SEQ ID NO:217)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(E) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL6 (SEQ ID NO:213)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(F) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL4 (SEQ ID NO:211)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(G) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH (SEQ ID NO:74)의 중쇄 CDR이거나;
(H) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-4 VL (SEQ ID NO:91)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-4 VH (SEQ ID NO:90)의 중쇄 CDR이거나;
(I) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-5 VL (SEQ ID NO:97)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-5 VH (SEQ ID NO:96)의 중쇄 CDR이거나;
(J) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1A (SEQ ID NO:83)의 중쇄 CDR이거나;
(K) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(L) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1C (SEQ ID NO:85)의 중쇄 CDR이거나;
또는
(M) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1D (SEQ ID NO:86)이다.
본 발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서 제1 중쇄 가변 도메인은 :
(A) hCD137 MAB-3 (SEQ ID NO:77); 또는
(B) hCD137 MAB-4 (SEQ ID NO:92)의 아미노산 서열을 포함하거나;
및/또는 제1 경쇄 가변 도메인은:
(A) hCD137 MAB-3 (SEQ ID NO:82); 또는
(B) hCD137 MAB-4 (SEQ ID NO:93)의 아미노산 서열을 포함한다.
발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서 제1 중쇄 가변 도메인은:
(A) hCD137 MAB-3 VH1E (SEQ ID NO:208);
(B) hCD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84);
(C) hCD137 MAB-3 VH1A (SEQ ID NO:83);
(D) hCD137 MAB-3 VH1 (SEQ ID NO:76);
(E) hCD137 MAB-3 VH1C (SEQ ID NO:85);
(F) hCD137 MAB-3 VH1D (SEQ ID NO:86);
(G) hCD137 MAB-3 VH1F (SEQ ID NO:209);
(H) hCD137 MAB-3 VH1G (SEQ ID NO:210); 또는
(I) hCD137 MAB-4 VH1 (SEQ ID NO:92)의 아미노산 서열을 포함한다.
발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서 제1 경쇄 가변 도메인은:
(A) hCD137 MAB-3 VL15 (SEQ ID NO:222);
(B) hCD137 MAB-3 VL14 (SEQ ID NO:221);
(C) hCD137 MAB-3 VL1 (SEQ ID NO:87);
(D) hCD137 MAB-3 VL2 (SEQ ID NO:88);
(E) hCD137 MAB-3 VL3 (SEQ ID NO:89);
(F) hCD137 MAB-3 VL4 (SEQ ID NO:211);
(G) hCD137 MAB-3 VL5 (SEQ ID NO:212);
(H) hCD137 MAB-3 VL6 (SEQ ID NO:213);
(I) hCD137 MAB-3 VL7 (SEQ ID NO:214);
(J) hCD137 MAB-3 VL8 (SEQ ID NO:215);
(K) hCD137 MAB-3 VL9 (SEQ ID NO:216);
(L) hCD137 MAB-3 VL10 (SEQ ID NO:217);
(M) hCD137 MAB-3 VL11 (SEQ ID NO:218);
(N) hCD137 MAB-3 VL12 (SEQ ID NO:219);
(O) hCD137 MAB-3 VL13 (SEQ ID NO:220);
(P) hCD137 MAB-4 VL1 (SEQ ID NO:94); 또는
(Q) hCD137 MAB-4 VL2 (SEQ ID NO:95)의 아미노산 서열을 포함한다.
발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서 종양 항원 (TA)은 19.9; 종양태아성 단백질(oncofetal protein) 5T4; 항원 4.2; A33; AFP; ALCAM; BAGE; 베타-카테닌; CA125; 카르복시펩티다제 M; B1;CD5; CD19; CD20; CD22; CD23; CD25; CD27; CD30; CD33; CD36; CD46; CD52; CD79a/CD79b; CD123; CD317; CEA; CEACAM5; CEACAM6; CO-43; CO-514; CTLA-1; CTLA-4; 사이토케라틴 8; E1 시리즈; EGF-R; 에프린(Ephrin) 수용체; Erb; F3; FC10.2; GAGE GD2; GD3; GD49; GM2; GM3; GICA 19-9; gp37; gp75; gp100; HER-2/neu; 인간 B-림프종 항원-CD20; 인간 유지방 소구체 항원; 인간 유두종바이러스-E6/인간 유두종바이러스-E7; HMW-MAA; I 항원; ITGB6; IL13Rα2; JAM-3; KID3; KID31; KS 1/4 pan-암종 항원; KS 1/4; KSA; L6; L20; LEA; LUCA-2; M1:22:25:8; M18; M39; MAGE; MART; Myl; MUC-1; MUM-1; N-아세틸글루코사미닐트랜스페라제; 네오당단백질; NS-10; OFA-1; OFA-2; 온코스타틴 M; p15; PSA; PSMA; PEMA; PIPA; 전립선산 포스페이트; R24; ROR1; SSEA-1; SSEA-3; SSEA-4; sTn; T 세포 수용체 유도 펩타이드; TAG-72; TL5; TNF-α 수용체; TNF-β 수용체; TNF-γ 수용체; TRA-1-85; 트랜스페린 수용체; TSTA; 및 VEGF-R로 이루어지는 종양 항원의 군으로부터 선택된다.
발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서 종양 항원 (TA)은 표 1의 종양 향원으로부터 선택되고, 특히 종양 항원 (TA)은: HER2/neu, EphA2 또는 5T4이다.
발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서, 종양 항원 (TA)은 HER2/neu이고 CD137 x TA 결합 분자는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 제2 경쇄 가변 도메인, 및 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 제2 중쇄 가변 도메인을 포함하며;
(A) 제2 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 HER2 MAB-1 VL (SEQ ID NO:63)의 경쇄 CDR이고; 및
(B) 제2 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 HER2 MAB-1 VH (SEQ ID NO:62)의 중쇄 CDR이다.
발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서
(A) (1) 제2 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 hHER2 MAB-1 VL1 (SEQ ID NO:67)의 경쇄 CDR이거나;
(2) 제2 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 hHER2 MAB-1 VL2 (SEQ ID NO:68)의 경쇄 CDR이거나; 또는
(3) 제2 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 hHER2 MAB-1 VL3 (SEQ ID NO:69)의 경쇄 CDR이고;
및
(B) (1) 제2 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 hHER2 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:64)의 중쇄 CDR이거나;
(2) 제2 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 hHER2 MAB-1 VH2 (SEQ ID NO:65)의 중쇄 CDR이거나; 또는
(3) 제2 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 hHER2 MAB-1 VH3 (SEQ ID NO:66)의 중쇄 CDR이다.
발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서 제2 중쇄 가변 도메인은:
(A) hHER2 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:64);
(B) hHER2 MAB-1 VH2 (SEQ ID NO:65); 또는
(C) hHER2 MAB-1 VH3 (SEQ ID NO:66)의 아미노산 사열을 포함한다.
발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서 제2 경쇄 가변 도메인은:
(A) hHER2 MAB-1 VL1 (SEQ ID NO:67);
(B) hHER2 MAB-1 VL2 (SEQ ID NO:68); 또는
(C) hHER2 MAB-1 VL3 (SEQ ID NO:69)의 아미노산 서열을 포함한다.
발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서 종양 항원 (TA)은 5T4이고 CD137 x TA 결합 분자는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 제2 경쇄 가변 도메인, 및 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 제2 중쇄 가변 도메인을 포함하고;
(I) (A) 제2 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 5T4 MAB-1 VL (SEQ ID NO:135)의 경쇄 CDR이고; 및
(B) 제2 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 5T4 MAB-1 VH (SEQ ID NO:134)의 중쇄 CDR이거나; 또는
(II) (A) 제2 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 5T4 MAB-2 VL (SEQ ID NO:137)의 경쇄 CDR이고; 및
(B) 제2 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 5T4 MAB-2 VH (SEQ ID NO:136)의 중쇄 CDR이다.
발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서 제2 중쇄 가변 도메인은 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:135)의 아미노산 서열을 포함한다.
발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서 제2 경쇄 가변 도메인은 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:136)의 아미노산 서열을 포함한다.
발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서 분자는 제1, 제2, 제3, 및 제4 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 이중특이적 사가 Fc-포함 디아바디이고, 폴리펩타이드 사슬은 공유 결합된 복합체를 형성한다.
발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서 종양 항원 (TA)은 HER2/neu이고,
(I) (A) 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:100의 아미노산 서열을 가지며; 및
(B) 제2 및 제4 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:101의 아미노산 서열을 가지거나;
또는
(II) (A) 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:102의 아미노산 서열을 가지며; 및
(B) 제2 및 제4 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:103의 아미노산 서열을 가진다.
발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서 분자는 이중특이적이고 사가이며, 제1, 제2, 제3, 제4, 및 제5 폴리펩타이드 사슬을 포함하고, 폴리펩타이드 사슬은 공유 결합된 복합체를 형성한다.
발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서 종양 항원 (TA)은 HER2/neu이고,
(I) (A) 제1 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:104의 아미노산 서열을 가지며;
(B) 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:105의 아미노산 서열을 가지고;
(C) 제3 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:106의 아미노산 서열을 가지며; 및
(D) 제4 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:107의 아미노산 서열을 가지거나;
또는
(II) (A) 제1 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:104의 아미노산 서열을 가지며;
(B) 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:105의 아미노산 서열을 가지고;
(C) 제3 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:117, 또는 SEQ ID NO:118의 아미노산 서열을 가지며; 및
(D) 제4 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:120, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:122, 또는 SEQ ID NO:123의 아미노산 서열을 가진다.
발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서 상기 분자는 이중특이적이고 삼가이며, 제1, 제2, 제3, 및 제4, 폴리펩타이드 사슬을 포함하고, 상기 폴리펩타이드 사슬은 공유 결합된 복합체를 형성한다.
발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서 상기 종양 항원 (TA)은 HER2/neu이고:
(A) 상기 제1 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:192, SEQ ID NO:193, SEQ ID NO:194, SEQ ID NO:195, 또는 SEQ ID NO:196의 아미노산 서열을 가지며;
(B) 상기 제2 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:197, SEQ ID NO:198, SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:200, 또는 SEQ ID NO:201의 아미노산 서열을 가지며;
(C) 상기 제3 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:104의 아미노산 서열을 가지며; 및
(D) 상기 제4 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:105의 아미노산 서열을 가진다.
발명은 추가로 이러한 CD137 x TA 결합 분자에 관련되며, 여기서 상기 종양 항원 (TA)은 5T4이고,
(A) 상기 제1 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:192, SEQ ID NO:193, SEQ ID NO:194, SEQ ID NO:195, SEQ ID NO:196, 또는 SEQ ID NO:229의 아미노산 서열을 가지며;
(B) 상기 제2 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:197, SEQ ID NO:198, SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:200, SEQ ID NO:201, 또는 SEQ ID NO:230의 아미노산 서열을 가지고;
(C) 상기 제3 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:231의 아미노산 서열을 가지며; 및
(D) 상기 제4 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:232의 아미노산 서열을 가진다.
발명은 추가로 상기 기술된 CD137 x TA 결합 분자들 중 임의의 것과 생리적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약학적 조성물에 관련된다.
발명은 추가로 종양 항원 (TA)의 발현과 관련된 또는 종양 항원 (TA)의 발현을 특징으로 하는 질환 또는 상태의 치료에서의, 상기 기술된 CD137 x TA 결합 분자들 중 임의의 것 또는 이러한 제약학적 조성물의 용도에 관련되며, 특히 종양 항원 (TA)의 발현과 관련된 또는 종양 항원 (TA)의 발현을 특징으로 하는 질환 또는 상태는 암이다.
발명은 추가로 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 도메인, 및 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 CD137 결합 분자에 관련되며, 여기서
(A) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL15 (SEQ ID NO:222)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(B) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL14 (SEQ ID NO:221)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(C) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL11 (SEQ ID NO:218)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(D) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL10 (SEQ ID NO:217)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(E) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL6 (SEQ ID NO:213)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(F) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL4 (SEQ ID NO:211)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(G) (1) 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH (SEQ ID NO:74)의 중쇄 CDR이거나;
(H) (1) 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-4 VL (SEQ ID NO:91)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-4 VH (SEQ ID NO:90)의 중쇄 CDR이거나;
(I) (1) 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-5 VL (SEQ ID NO:97)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-5 VH (SEQ ID NO:96)의 중쇄 CDR이거나;
(J) (1) 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1A (SEQ ID NO:83)의 중쇄 CDR이거나;
(K) (1) 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(L) (1) 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1C (SEQ ID NO:85)의 중쇄 CDR이거나;
또는
(M) (1) 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1D (SEQ ID NO:86)이다.
발명은 추가로 이러한 CD137 결합 분자의 구체예에 관련되며, 여기서 중쇄 가변 도메인은:
(A) hCD137 MAB-3 (SEQ ID NO:77); 또는
(B) hCD137 MAB-4 (SEQ ID NO:92)의 아미노산 서열을 포함한다.
발명은 추가로 이러한 CD137 결합 분자의 구체예에 관련되며, 여기서 경쇄 가변 도메인은:
(A) hCD137 MAB-3 (SEQ ID NO:82); 또는
(B) hCD137 MAB-4 (SEQ ID NO:93)의 아미노산 서열을 포함한다.
발명은 추가로 이러한 CD137 결합 분자의 구체예에 관련되며, 여기서 중쇄 가변 도메인은:
(A) hCD137 MAB-3 VH1 (SEQ ID NO:76);
(B) hCD137 MAB-3 VH1A (SEQ ID NO:83);
(C) hCD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84);
(D) hCD137 MAB-3 VH1C (SEQ ID NO:85);
(E) hCD137 MAB-3 VH1D (SEQ ID NO:86);
(F) hCD137 MAB-3 VH1E (SEQ ID NO:208);
(G) hCD137 MAB-3 VH1F (SEQ ID NO:209);
(H) hCD137 MAB-3 VH1G (SEQ ID NO:210); 또는
(I) hCD137 MAB-4 VH1 (SEQ ID NO:92)의 아미노산 서열을 포함한다.
발명은 추가로 이러한 CD137 결합 분자의 구체예에 관련되며, 여기서 경쇄 가변 도메인은:
(A) hCD137 MAB-3 VL15 (SEQ ID NO:222);
(B) hCD137 MAB-3 VL14 (SEQ ID NO:221);
(C) hCD137 MAB-3 VL1 (SEQ ID NO:87);
(D) hCD137 MAB-3 VL2 (SEQ ID NO:88);
(E) hCD137 MAB-3 VL3 (SEQ ID NO:89);
(F) hCD137 MAB-3 VL4 (SEQ ID NO:211);
(G) hCD137 MAB-3 VL5 (SEQ ID NO:212);
(H) hCD137 MAB-3 VL6 (SEQ ID NO:213);
(I) hCD137 MAB-3 VL7 (SEQ ID NO:214);
(J) hCD137 MAB-3 VL8 (SEQ ID NO:215);
(K) hCD137 MAB-3 VL9 (SEQ ID NO:216);
(L) hCD137 MAB-3 VL10 (SEQ ID NO:217);
(M) hCD137 MAB-3 VL11 (SEQ ID NO:218);
(N) hCD137 MAB-3 VL12 (SEQ ID NO:219);
(O) hCD137 MAB-3 VL13 (SEQ ID NO:220);
(P) hCD137 MAB-4 VL1 (SEQ ID NO:94); 또는
(Q) hCD137 MAB-4 VL2 (SEQ ID NO:95)의 아미노산 서열을 포함한다.
발명은 추가로 이러한 CD137 결합 분자의 구체예에 관련되며, 여기서 분자는 항체 또는 그것의 항원 결합 단편이다.
발명은 추가로 상기 기술된 CD137 결합 분자들 중 임의의 것, 및 생리적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약학적 조성물에 관련된다.
발명은 추가로 억제된 면역 체계와 관련된 또는 종양 항원 (TA)의 발현을 특징으로 하는 질환 또는 상태의 치료에서의, 상기 기술된 CD137 x TA 결합 분자들 중 임의의 것, 또는 이러한 제약학적 조성물의 용도에 관련된다.
발명은 추가로 면역 체계와 관련된 또는 종양 항원 (TA)의 발현을 특징으로 하는 상태가 암인, 이러한 용도에 관련된다.
발명은 추가로 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 도메인, 및 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 HER2/neu 결합 분자에 관련되며; 여기서
(A) 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 HER2 MAB-1 VL (SEQ ID NO:63)의 경쇄 CDR이고; 및
(B) 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 HER2 MAB-1 VH (SEQ ID NO:62)의 중쇄 CDR이다.
발명은 추가로:
(A) (1) 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 hHER2 MAB-1 VL1 (SEQ ID NO:67)의 경쇄 CDR이거나;
(2) 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 hHER2 MAB-1 VL2 (SEQ ID NO:68)의 경쇄 CDR이거나; 또는
(3) 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 hHER2 MAB-1 VL3 (SEQ ID NO:69)의 경쇄 CDR이고;
및
(B) (1) 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 hHER2 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:64)의 중쇄 CDR이거나;
(2) 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 hHER2 MAB-1 VH2 (SEQ ID NO:65)의 중쇄 CDR이거나; 또는
(3) 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 hHER2 MAB-1 VH3 (SEQ ID NO:66)의 중쇄 CDR인
그러한 HER2/neu 결합 분자의 구체예에 관련된다.
발명은 추가로 중쇄 가변 도메인이:
(A) hHER2 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:64);
(B) hHER2 MAB-1 VH2 (SEQ ID NO:65); 또는
(C) hHER2 MAB-1 VH3 (SEQ ID NO:66)의 아미노산 서열
을 포함하는 그러한 HER2/neu 결합 분자의 구체예에 관련된다.
발명은 추가로 경쇄 가변 도메인이:
(A) hHER2 MAB-1 VL1 (SEQ ID NO:67);
(B) hHER2 MAB-1 VL2 (SEQ ID NO:68); 또는
(C) hHER2 MAB-1 VL3 (SEQ ID NO:69)의 아미노산 서열
을 포함하는 그러한 HER2/neu 결합 분자의 구체예에 관련된다.
발명은 추가로 분자가 항체 또는 그것의 항원 결합 단편인 그러한 HER2/neu 결합 분자의 구체예에 관련된다.
발명은 추가로 상기 기술된 HER2/neu 결합 분자들 중 임의의 것 및 생리적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약학적 조성물에 관련된다.
발명은 추가로 HER2/neu의 발현과 관련된 또는 HER2/neu의 발현을 특징으로 하는 질환 또는 상태의 치료에서의, 상기 기술된 HER2/neu 결합 분자들 중 임의의 것, 또는 이러한 제약학적 조성물의 용도에 관련되며, 특히 HER2/neu의 발현과 관련된 또는 HER2/neu의 발현을 특징으로 하는 상태는 암이다.
발명은 추가로 상기 기술된 CD137 x TA 결합 분자들 중 임의의 것과 함께, 또는 그것을 포함하는 제약학적 조성물과 함께 이러한 종양 표적제를 투여하는 단계를 포함하는, 종양 표적화제의 활성을 증강시키는 방법에 관련된다. 발명은 추가로 PD-1/PD-L1 체크포인트 억제제를 투여하는 단계를 더 포함하는 그러한 방법에 관련되며, 특히 여기서 이러한 체크포인트 억제제는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체이다. 발명은 특히 종양 표적제가 항체, 항체의 에피토프 결합 단편, 또는 표적 세포의 T-세포 재지시된 살해를 매개하는 제제인 그러한 방법에 관련된다.
발명은 추가로 상기 기술된 CD137 x TA 결합 분자들 중 임의의 것, 또는 그것을 포함하는 제약학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 억제된 면역 체계와 관련된 또는 종양 항원 (TA)의 발현을 특징으로 하는 질환 또는 상태의 치료 방법에 관련된다. 발명은 특히, 억제된 면역 체계와 관련된 또는 종양 항원 (TA)의 발현을 특징으로 하는 상태가 암인, 그러한 방법에 관련된다. 발명은 또한 종양 표적화제를 투여하는 단계를 더 포함하는 그러한 방법에 관련되며, 특히 여기서 종양 표적제는 항체, 항체의 에피토프 결합 단편, 또는 표적 세포의 T-세포 재지시된 살해를 매개하는 제제이다. 발명은 추가로 PD-1/PD-L1 체크포인트 억제제를 투여하는 단계를 더 포함하는 그러한 방법에 관련되며, 특히 여기서 이러한 체크포인트 억제제는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체이다.
발명은 추가로 암이 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 상기 용도 및 방법에 관련된다: 급성 골수성 백혈병, 부신 종양, AIDS-관련 암, 포상 연부 육종(alveolar soft part 육종), 성상세포 종양(astrocytic tumor), 방광암, 골암, 뇌 및 척수암, 전이성 뇌 종양, 유방암, 경동맥 소체 종양(carotid body tumor), 자궁경부암, 연골 육종(chondro육종), 척삭종(chordoma), 혐색소성 신장세포 암종(chromophobe 신장 세포 암종), 투명 세포 암종(clear cell carcinoma), 결장암, 대장암, 피부 양성 섬유 조직구종(cutaneous benign fibrous histiocytoma), 결합조직성 소원형 세포 종양(desmoplastic small round cell tumor), 뇌실막세포종(ependymoma), 유윙 종양, 골외 점액성 연골 육종, 골성 불완전 섬유생성증(fibrogenesis imperfecta ossium), 골 섬유 이형성(fibrous dysplasia of the bone), 방광 또는 담관암, 위암, 임신성 영양막 질환(gestational trophoblastic disease), 생식 세포 종양, 두경부암, 간세포 암종, 교모세포종(glioblastoma), 섬세포 종양, 카포시 육종, 신장암, 백혈병, 지방종/양성 지방종증 종양, 지방육종/악성 지방종증 종양, 간암, 림프종, 폐암, 수모세포종(medulloblastoma), 흑색종, 수막종(meningioma), 악성 중피종(malignant mesothelioma), 다발성 내분비샘 신생물(multiple endocrine neoplasia), 다발성 골수종, 골수이형성 증후군, 신경모세포종(neuroblastoma), 신경내분비 종양, 비-소세포 폐암, 난소암, 췌장암, 인두암(pharyngeal cancer), 유두상 갑상선 암종(papillary thyroid carcinoma), 부갑상선 종양(parathyroid tumor), 소아과 암, 말초 신경초 종양(peripheral nerve sheath tumor), 크롬 친화세포종(phaeochromocytoma), 뇌하수체 종양, 전립선암, 후방 포도막 흑색종, 희귀성 혈액 장애, 신장 세포 암종, 전이성 신장암, 횡문근양 종양(rhabdoid tumor), 횡문근육종(rhabdomysarcoma), 육종, 피부암, 연조직 육종, 편평 세포암, 위암, 활막 육종, 고환암, 흉선 암종, 가슴샘종(thymoma), 전이성 갑상선암, 및 자궁암.
발명은 특히 암이 다음으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 용도 및 방법에 관련된다: 방광암, 유방암, 대장암, 위암, 교모세포종, 신장암, 폐암, 흑색종, 신경모세포종, 난소암, 췌장암, 인두암, 전립선암, 신장 세포 암종, 횡문근육종, 및 두경부의 편평 세포암 (SCCHN).
도 1A 및 1B는 각각이 E-코일 또는 K-코일 헤테로다이머-촉진 도메인을 가진, 2개의 폴리펩타이드 사슬로 구성된 2개의 에피토프-결합 부위를 가지는 대표적인 공유 결합된 디아바디의 개략도를 제공한다 (대안적인 헤테로다이머-촉진 도메인이 하기에 제공됨). 시스테인 잔기는 링커에 (도 1A) 및/또는 헤테로다이머-촉진 도메인에 (도 1B) 존재할 수 있다. 동일한 에피토프를 인식하는 VL 및 VH 도메인은 동일한 음영 또는 채우기 패턴을 사용하여 도시된다. 이 도면 및 결합 분자 도메인의 개략적인 표시를 제공하는 모든 도면에서 파선 (
Figure 112019099061144-pct00001
)은 바람직하게 존재하는, 하나 이상의 선택적인 헤테로다이머-촉진 도메인을 나타낸다.
도 2는 각각이 CH2 및 CH3 도메인을 가진 2개의 폴리펩타이드 사슬로 구성되어서, 회합된 사슬이 Fc 영역의 전부 또는 일부를 형성하게 되는 대표적인 공유 결합된 디아바디 분자의 개략도를 제공한다. 동일한 에피토프를 인식하는 VL 및 VH 도메인은 동일한 음영 또는 채우기 패턴을 사용하여 도시된다.
도 3A 내지 3E는 2쌍의 폴리펩타이드 사슬 (즉, 전부 4개의 폴리펩타이드 사슬)로 구성된 4개의 에피토프-결합 부위를 가지는 대표적인 공유 결합된 사가 디아바디를 보여주는 개략도를 제공한다. 각 쌍의 하나의 폴리펩타이드 사슬은 CH2 및 CH3 도메인을 가져서, 회합된 사슬은 Fc 영역의 전부 또는 일부를 형성하게 된다. 동일한 에피토프를 인식하는 VL 및 VH 도메인은 동일한 음영 또는 채우기 패턴을 사용하여 도시된다. 2쌍의 폴리펩타이드 사슬은 동일할 수 있다. 2쌍의 폴리펩타이드 사슬이 동일하고 VL 및 VH 도메인이 상이한 에피토프를 인식하는 그런 구체예에서 (도 3A 및 3B에서 도시된 것처럼), 결과적으로 얻어지는 분자는 4개의 에피토프-결합 부위를 가지며 각각의 결합된 에피토프와 관련하여 이중특이적이고 이가이다. VL 및 VH 도메인이 동일한 에피토프를 인식하는 그런 구체예에서 (예컨대, 동일한 VL 도메인 CDR들 및 동일한 VH 도메인 CDR들이 양 사슬에서 사용되는 경우), 결과적으로 얻어지는 분자는 4개의 에피토프-결합 부위를 가지며 단일 에피토프와 관련하여 단일특이적이고 사가이다. 대안적으로, 2쌍의 폴리펩타이드는 상이할 수 있다. 2쌍의 폴리펩타이드 사슬이 상이하고 폴리펩타이드의 각 쌍의 VL 및 VH 도메인이 상이한 에피토프를 인식하는 그런 구체예에서 (도 3C에서 상이한 음영 및 패턴에 의해 도시된 것처럼), 결과적으로 얻어지는 분자는 4개의 에피토프-결합 부위를 가지며 각각의 결합된 에피토프와 관련하여 사중특이적이고 일가이다. 도 3A는 시스테인 잔기를 포함하는 펩타이드 헤테로다이머-촉진 도메인을 함유하는 Fc 영역-함유 디아바디를 도시한다. 도 3B는 시스테인 잔기 및 링커 (선택적인 시스테인 잔기를 포함함)를 포함하는 E-코일 및 K-코일 헤테로다이머-촉진 도메인을 함유하는, Fc 영역-함유 디아바디를 도시한다. 도 3C는 항체 CH1 및 CL 도메인을 함유하는, Fc 영역-함유 디아바디를 도시한다. 도 3D 및 3E는 도 3B에 도시된 결합 도메인의 선택이 CD137의 에피토프에 특이적인 2개의 결합 부위 및 TA의 에피토프에 특이적인 2개의 결합 부위를 가지는 CD137 x TA 결합 분자를 어떻게 초래할 수 있는지를 도시한다. 도 3D 및 3E는 상이한 배향을 가진 CD137 x TA 결합 분자를 생성하기 위하여 도메인이 선택될 수 있는 방법을 도시한다 (즉, 도 3D는 결합 분자의 VL1 도메인으로서 VL CD137 도메인, 결합 분자의 VH1 도메인으로서 VH CD137 도메인, 결합 분자의 VL2 도메인으로서 VL TA 도메인, 및 결합 분자의 VH2 도메인으로서 VH TA 도메인을 사용한다. 대조적으로, 도 3E는 결합 분자의 VL1 도메인으로서 VL TA 도메인, 결합 분자의 VH1 도메인으로서 VH TA 도메인, 결합 분자의 VL2 도메인으로서 VL CD137 도메인, 및 결합 분자의 VH2 도메인으로서 VH CD137 도메인을 사용한다). 하기에서 제공되는 바와 같이, 폴리펩타이드 사슬의 회합에 의해 형성된 VL/VH 결합 부위는 단일특이적, 이중특이적, 삼중특이적 또는 사중특이적인 사가 결합을 허용하기 위하여 동일하거나 상이할 수 있다.
도 4A 및 4B는 3개의 폴리펩타이드 사슬로 구성된 2개의 에피토프-결합 부위를 가지는 대표적인 공유 결합된 디아바디 분자의 개략도를 제공한다. 2개의 폴리펩타이드 사슬은 CH2 및 CH3 도메인을 가져서, 회합된 사슬은 Fc 영역의 전부 또는 일부를 형성하게 된다. VL 및 VH 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬은 추가로 헤테로다이머-촉진 도메인을 포함한다. 동일한 에피토프를 인식하는 VL 및 VH 도메인은 동일한 음영 또는 채우기 패턴을 사용하여 도시된다.
도 5A 내지 5D는 5개의 폴리펩타이드 사슬로 구성된 4개의 에피토프-결합 부위를 가지는 대표적인 공유 결합된 결합 분자의 개략도를 제공한다. 도 5A는 이러한 CD137 x TA 결합 분자의 일반적인 구조를 나타낸다. 2개의 폴리펩타이드 사슬은 CH2 및 CH3 도메인을 가져서, 회합된 사슬은 Fc 영역의 전부 또는 일부를 포함하는 Fc 영역을 형성하게 된다. 연결된 VL 및 VH 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬은 추가로 헤테로다이머-촉진 도메인을 포함한다. 동일한 에피토프를 인식하는 VL 및 VH 도메인은 동일한 음영 또는 채우기 패턴을 사용하여 도시된다. 도 5B는 도 5A에 도시된 가변 도메인이 예시되는 TA, HER2/neu에 특이적인 2개의 비-디아바디형 결합 도메인, 및 CD137에 특이적인 2개의 디아바디형 결합 도메인을 가지는 결과적으로 얻어지는 CD137 x TA 결합 분자를 생성하기 위하여 선택된 바람직한 대체 CD137 x TA 결합 분자의 구조를 도시한다. 도 5C는 도 5A에 도시된 가변 도메인이 CD137에 특이적인 2개의 비-디아바디형 결합 도메인 및 HER2/neu에 특이적인 2개의 디아바디형 결합 도메인을 가지는 결과적으로 얻어지는 CD137 x TA 결합 분자를 생성하기 위하여 선택된 바람직한 대체 CD137 x TA 결합 분자의 구조를 도시한다. 도 5D는 도 5A에 도시된 가변 도메인이 CD137의 에피토프에 특이적인 2개의 비-디아바디형 결합 도메인, HER2/neu의 에피토프에 특이적인 하나의 디아바디형 결합 도메인 및 CD137의 에피토프에 특이적인 제2 디아바디형 결합 도메인을 가지는 결과적으로 얻어지는 CD137 x TA 결합 분자를 생성하기 위하여 선택된 바람직한 대체 CD137 x TA 결합 분자의 구조를 도시한다. 이러한 CD137 에피토프들은 동일하거나 상이할 수 있다. 인지되는 것과 같이, 도 5A에 도시된 결합 도메인의 적절한 선택에 의하여, 임의의 3개의 결합 도메인이 CD137의 에피토프에 결합하기 위하여 선택될 수 있다. 마찬가지로, 임의의 3개의 결합 도메인이 HER2/neu의 에피토프에 결합하기 위하여 선택될 수 있다. 하기에서 제공되는 것과 같이, 폴리펩타이드 사슬의 회합에 의해 형성된 VL/VH 결합 부위는 단일특이적, 이중특이적, 삼중특이적 또는 사중특이적인 사가 결합을 허용하기 위하여 동일하거나 상이할 수 있다.
도 6A 내지 6F는 3개의 에피토프-결합 부위를 가지는 대표적인 Fc 영역-함유 삼가 결합 분자의 개략도를 제공한다. 도 6A는 디아바디형 결합 도메인이 Fc 영역의 C-말단에 있는 상이한 도메인 방향을 가지는, 2개의 디아바디형 결합 도메인 및 Fab-형 결합 도메인을 포함하는 삼가 결합 분자의 도메인을 개략적으로 도시한다. 도 6B 및 6C는 도 6A에 도시된 가변 도메인이 CD137에 특이적인 비-디아바디형 결합 도메인, 예시되는 TA, HER2/neu에 특이적인 디아바디형 결합 도메인, 및 CD137에 특이적인 제2 디아바디형 결합 도메인을 가지는 결과적으로 얻어지는 CD137 x TA 결합 분자를 생성하기 위하여 선택된 바람직한 대체 CD137 x TA 결합 분자의 구조를 도시한다. 도 6D는 디아바디형 결합 도메인들이 Fc 영역에 대해 C-말단에 있는, 상이한 도메인 방향을 가지는 2개의 디아바디형 결합 도메인 및 Fab-형 결합 도메인을 포함하는 삼가 결합 분자의 도메인을 개략적으로 도시한다. 도 6A 내지 6D의 분자들은 4개의 사슬을 포함한다. 도 6E 및 6F는 각각, Fc 영역에 대해 N-말단인 2개의 디아바디형 결합 도메인, 및 경쇄 및 중쇄가 폴리펩타이드 스페이서를 통해 연결된 Fab-형 결합 도메인, 또는 scFv-형 결합 도메인을 포함하는 삼가 결합 분자의 도메인을 개략적으로 도시한다. 도 6G 및 6H의 삼가 결합 분자는 각각, Fc 영역에 대해 C-말단인 2개의 디아바디형 결합 도메인, 및 경쇄 및 중쇄가 폴리펩타이드 스페이서를 통해 연결된 Fab-형 결합 도메인, 또는 scFv-형 결합 도메인을 포함하는 삼가 결합 분자의 도메인을 개략적으로 예시한다. 도 6E 내지 6F의 삼가 결합 분자는 3개의 사슬을 포함한다. 동일한 에피토프를 인식하는 VL 및 VH 도메인은 동일한 음영 또는 채우기 패턴을 사용하여 도시된다.
도 7은 항-CD137 항체 우렐루맙(urelumab) 및 우토밀루맙(utomilumab) (각각 CD137 MAB-1 및 CD137 MAB-2) 및 몇몇 신규한 키메릭 CD137 mAb (chCD137 MAB-3; chCD137 MAB-4 및 chCD137 MAB-5)의 활성화된 CD8+ T 세포에 대한 결합 곡선을 도시한다.
도 8은 4x hFc F(ab)'2와 가교결합되어 있는 항-CD137 항체 우렐루맙 또는 우토밀루맙 (각각 CD137 MAB-1 또는 CD137 MAB-2) 또는 신규한 키메릭 항-CD137 항체 (chCD137 MAB-3, chCD137 MAB-4 또는 chCD137 MAB-5)의 존재 하에 건식-코팅된 항-CD3 항체 (3 μg/mL 내지 50 μg/mL)로의 자극시 pan T 세포에 의한 IL-2 분비의 72시간 후 유도를 도시한다. 가교결합된 항체 (Ab + αhFc)는 0.1, 1.0 또는 10 μg/mL로 사용되었다. 다음의 대고준이 또한 도표화된다: 아이소타입 대조군 항체로 처리된 자극된 pan T 세포, hFc F(ab)'2 단독, 또는 미처리 세포.
도 9는 리간드 (1 μg/mL CD-137L-His)의 존재 또는 부재 하에, 가교결합된 키메릭 항-CD137 항체 (chCD137 MAB-3 또는 chCD137 MAB-5) (1 μg/mL CD-137 항체 + 4 μg/mL hFc F(ab)'2) ± JIMT-1(HER2/neu++) 표적 세포의 존재 하에서 항-CD3 비즈로의 자극시 pan T 세포에 의한 IFN-γ 분비의 72시간 후 유도를 도시한다. 다음의 대조군 샘플이 또한 표적화된다: 자극된 pan T 세포 ± JIMT-1 세포, ± hFc F(ab)'2, 및 미처리/미자극 pan T 세포 및 JIMT-1 세포.
도 10A 및 10B는 FITC-표지된 CD8 및 αhFc APC를 사용하는 FACS에 의해 측정된 활성화된 CD8+ T 세포의 CD137에 대한 CD137 x TA 결합 분자의 결합 능력을 도시한다. 도 10A: DART-B 및 DART-C (hCD137 MAB-3 및 hHER2 MAB-1 도메인을 포함함), DART-D 및 DART-E (CD137 MAB-3 및 hHER2 MAB-1 도메인을 포함함), 및 대조군 분자, DART-3 (hHER2 MAB-1 및 변종 팔리비주맙(palivizumab) 도메인을 포함함) 및 DART-6 (변종 팔리비주맙 및 CD137 MAB-3 도메인을 포함함). 도 10B: DART-D (CD137 MAB-3 및 hHER2 MAB-1 도메인을 포함함), DART-F (CD137 MAB-4 및 hHER2 MAB-1 도메인을 포함함), DART-1, 및 DART-4 (CD137 MAB-1 및 hHER2 MAB-1 도메인을 포함함), DART-2 및 DART-5 (CD137 MAB-2 및 hHER2 MAB-1 도메인을 포함함) 및 대조군 결합 분자 DART-6 (CD137 MAB-3 및 변종 팔리비주맙 도메인을 포함함).
도 11A 및 11B는 평균 형광 세기 (MFI)에 의해 측정되는 바 표적 N87 (HER2+++) 위암 세포의 표면에서 예시된 TA, HER2/neu에 결합하는 CD137 x TA 결합 분자의 능력을 도시한다. 도 11A: DART-B, DART-C, DART-D, DART-E, 및 대조군 결합 분자 DART-3 및 DART-6. 도 11B: DART-D, DART-F, DART-1, DART-2, DART-4, DART-5, 및 DART-6.
도 12A 및 12B는 조작된 CHO 세포에 의해 발현된 CD137에 결합하는 (도 12A) 및 활성화된 세포에 의해 발현된 CD137에 결합하는 (도 12B) CD137 x TA 결합 분자 DART-B, DART-D, 및 DART-G, 및 대조군 분자 DART-3, 및 DART-6의 결합 능력을 도시한다.
도 13A 및 13B는 표적 N87 (HER2+++) 위암 세포 (도 13A) 및 표적 JIMT-1 (HER2++) 세포 (도 13B)에 의해 발현된 예시된 TA, HER2/neu에 결합하는 CD137 x TA 결합 분자 DART-B, DART-D, 및 DART-G, 및 대조군 분자 DART-3, 및 DART-6의 결합 능력을 도시한다.
도 14A 및 14B는 T 세포 사이토카인 방출 검정에서 동시 자극 활성을 매개하는 CD137 x TA 결합 분자의 능력의 제1 대표 검정의 결과를 제공한다 (IFN-γ의 방출에 의해 예시됨). 도면들은 HER2/neu-발현 N87 (HER2+++) (도 14A) 또는 JIMT-1 (HER2++) 표적 세포 (도 14B)의 존재 하에 테스트된, DART-1, DART-2, DART-4, DART-5, DART-A, DART-D, DART-E 및 DART-F, 및 대조군 분자, DART-3 및 DART-6에 대한 결과를 도시하며, HER2/neu-음성 Hs700T 표적 세포를 사용하거나, 또는 표적 세포가 없을 때 동시 자극 활성은 볼 수 없었다.
도 15A 및 15B는 T 세포 사이토카인 방출 검정에서 동시 자극 활성을 매개하는 CD137 x TA 결합 분자의 능력의 제2 대표 검정의 결과를 제공한다 (IFN-γ의 방출에 의해 예시됨). 도면들은 HER2/neu-발현 N87 (HER2+++) (도 15A) 또는 JIMT-1 (HER2++) 표적 세포 (도 15B)의 존재 하에 테스트된, DART-1, DART-2, DART-4, DART-5, DART-B, DART-D 및 DART-G, 및 대조군 분자 DART-3 및 DART-6에 대한 결과를 도시하며, HER2/neu-음성 Hs700T 표적 세포를 사용하거나, 또는 표적 세포가 없을 때 동시 자극 활성은 볼 수 없었다.
도 16A 및 16B는 증가된 루시페라제 발현에 의해 증명되는 바 CD137 발현 리포터 세포주 (Jurkat-NF-κB-Luc)에서 NF/kB 경로의 용량 및 표적 의존성 신호 변환을 매개하는 CD137 x TA 결합 분자의 능력을 도시한다. 도면들은 HER2/neu 발현 JIMT-1 세포 (도 16A) 또는 HER2/neu-음성 KG-1 세포 (도 16B)와 공동 배양된 CD137 발현 Jurkat-NF-κB-Luc 세포에 대한 DART-G, 및 대조군 결합 분자 DART-3 및 DART-6에 대한 결과를 도시한다.
도 17, 패널 A 내지 O는 TA 발현 표적 세포와의 공동 배양에서 CD137 x TA 결합 분자의 능력이 어떻게 T 세포를 증강시키는지를 도시한다. CFSE-표지된 인간 T 세포 ± 차선의 αCD3/αCD28 자극이, DART-A (도 17, 패널 A, D 및 G), DART-3 (도 17, 패널 B, E 및 H), DART-6 (도 17, 패널 C, F 및 I)의 존재하에서, 또는 분자의 부재시에 (도 17, 패널 J, L 및 N), HER2/neu-고 N87 표적 세포 (도 17, 패널 A-C 및 J-K), HER2/neu-저 MCF-7 표적 세포 (도 17, 패널 D-F 및 L-M)와, 또는 표적 세포 없이 (도 17, 패널 G-I 및 N-O) 공동 배양 되었고, T 세포 증식에 대해 모니터링되었다.
도 18A 및 18B는 세포-결부 루시페라제 활성에 의해 측정되는 바 (도 18A) N87 표적 세포의 항-TA 항체 마르게툭시맙(margetuximab)-매개된 ADCC 살해를 증강시키는 및 CD69 발현에 의해 측정되는 바 (도 18B) 마르게툭시맙-매개된 NK 세포 활성화를 증강시키는 CD137 x TA 결합 분자 DART-1의 능력을 도시한다.
도 19A 및 19B는 T 세포 사이토카인 방출 검정에서 동시 자극 활성을 매개하는 CD137 x TA 결합 분자 DART-7, 및 대조군 분자 DART-8의 능력의 대표적인 검정 결과를 도시한다 (IFN-γ의 방출에 의해 예시됨). 사이토카인 방출은 EphA2-발현 Hs700T 표적 세포 (도 19A), 또는 EphA2-음성 Hs700T (EphA2.KO) 표적 세포 (도 19B)의 존재하에, 또는 존재하는 표적 세포 없이 측정되었다. 다음의 대조군 샘플이 또한 도표화된다: 자극된 pan T 세포 + 표적 세포, 및 미처리/미자극 pan T 세포.
도 20A 및 20B는 조작된 CHO 세포 (도 20A) 또는 CD8+ T 세포 (도 20B)의 표면에서 발현된 CD137에 결합하는, 최적화된 CDRH3을 갖는 DART-G 유도체의 능력을 도시한다.
도 21A 내지 21C는 T 세포 사이토카인 방출 검정에서 동시 자극 활성을 매개하는 CD137 x TA 결합 분자 DART-B, DART-D, DART-G, DART-G2, DART-G3 및 DART-G4, 및 대조군 분자 DART-3, DART-6의 능력의 대표적인 검정 결과를 도시한다 (IFN-γ의 방출에 의해 예시됨). 사이토카인 방출은 HER2/neu-발현 N87 표적 세포 (도 21A), JIMT-1 표적 세포 (도 21B), 또는 MDA-231 (도 21C) 표적 세포의 존재 하에서, 또는 존재하는 표적 세포 없이 측정되었다.
도 22는 세포-결부 루시페라제 활성에 의해 측정되는 바 N87 (HER2+++) 표적 세포의 재지시된 세포 살해를 매개하는 CD137 x TA 결합 분자 DART-B, DART-G, DART-G1, DART-G2, DART-G3 및 DART-G4, 및 대조군 분자 DART-3, DART-6의 능력의 대표적인 검정 결과를 도시한다.
도 23A 내지 23C는 평균 형광 세기 (MFI)에 의해 측정되는 바, 예시되는 TA, HER2/neu를 발현하는 상이한 세포에 결합하는 CD137 x TA 결합 분자의 능력을 도시한다. 도 23A: N87 (HER2+++) 위암 세포에 대한 결합. 도 23B: JIMT-1 (HER2++) 유방 암종 세포에 대한 결합. 도 23C: MCF-7 (HER2+) 유방암 세포에 대한 결합. TRIDENT-A, TRIDENT-A2, TRIDENT-A3, TRIDENT-A4, DART-G, DART-G2, DART-G3, DART-G4, 및 대조군 결합 분자 TRIDENT-1 및 TRIDENT-2에 대한 결합이 두 패널에 도시된다.
도 24A 및 24B는 활성화된 CD8+ T 세포에 의해 발현된 CD137에 결합하는 CD137 x TA 결합 분자의 능력을 도시한다. 도 24A: TRIDENT-A, TRIDENT-A2, TRIDENT-A3, TRIDENT-A4, 및 대조군 결합 분자 TRIDENT-1 및 TRIDENT-2. 도 24B: DART-G, DART-G2, DART-G3, DART-G4, 및 대조군 결합 분자 TRIDENT-1 및 TRIDENT-2.
도 25A 내지 25C는 CD137을 발현하는 CHO 세포와 예시된 TA, HER2/neu, FACS를 발현하는 세포 사이의 세포-세포 콘쥬게이션을 매개하는 CD137 x TA 결합 분자의 능력을 도시한다. 도 25A: N87 (HER2+++) 위암 세포와의 세포-세포 콘쥬게이션. 도 25B: JIMT-1 (HER2++) 유방 암종 세포와의 세포-세포 콘쥬게이션. 도 25C: MCF-7 (HER2+) 유방암 세포와의 세포-세포 콘쥬게이션. TRIDENT-A, TRIDENT-A2, TRIDENT-A3, TRIDENT-A4, DART-G4, 및 TRIDENT-2 대조군 결합 분자의 활성은 두 패널에 도시된다.
도 26A 내지 26C는 T 세포 사이토카인 방출 검정에서 동시 자극 활성을 매개하는, CD137 x TA 결합 분자 TRIDENT-A, TRIDENT-A2, TRIDENT-A3, TRIDENT-A4, DART-G, DART-G2, DART-G3, DART-G4, 및 대조군 결합 분자 TRIDENT-1 및 TRIDENT-2의 능력의 대표적인 검정 결과를 도시한다 (IFN-γ의 방출에 의해 예시됨). 사이토카인 방출은 HER2/neu-발현 N87 표적 세포 (도 26A), JIMT-1 표적 세포 (도 26B)의 존재 하에, 또는 존재하는 표적 세포 없이 (도 26C) 측정되었다.
도 27은 대조군 분자 (TRIDENT-1)와 비교하여, 세포-결부된 루시페라제에 의해 측정되는 바, Colo205/Luc 표적 세포의 TA x CD3 디아바디-매개된 재지시된 T-세포 살해를 증강시키는 예시의 CD137 x TA 결합 분자 (TRIDENT-A2)의 능력을 도시한다.
도 28A 내지 28C는 비히클 대조군 (●); TRIDENT-A2 (▼); TA x CD3 디아바디 (■); TRIDENT-A2와 TA x CD3 디아바디의 조합 (◆); 항-PD-1 mAb (▼); 또는 TRIDENT-A2, TA x CD3 디아바디, 및 항-PD-1 mAb의 조합으로의 처치 후 1 mg의 종양 샘플에 존재하는 T-세포 마커의 발현을 도시한다. 도 28A: CD4 발현, 도 28B: CD8 발현, 도 28C: CD69 발현, 도 28D: PD-1 발현.
도 29는 PBMC-재구성 쥐과 이종이식 모델에서 난소 암종의 종양 성장 또는 발달을 억제하는, 비히클 대조군 (●); TRIDENT-A2 (▼); TA x CD3 diabody (■); TRIDENT-A2와 TA x CD3 디아바디의 조합 (◆); 항-PD-1 mAb (▼); 및 TRIDENT-A2, TA x CD3 디아바디, 및 항-PD-1 mAb의 조합의 능력을 도시한다.
도 30은 시노몰구스 원숭이 T 세포 사이토카인 방출 검정에서 동시 자극 활성을 매개하는, CD137 x TA 결합 분자 TRIDENT-A2, TRIDENT-B2, 및 대조군 결합 분자 TRIDENT-1 및 TRIDENT-2의 능력을 도시한다 (IFN-γ의 방출에 의해 예시됨).
도 31A 및 31B는 hCD137 MAB-3 VH1B (도 30A, SEQ ID NO:84) 및 hCD137 MAB-3 VL3 (도 30B, SEQ ID NO:89)의 아미노산 서열을 도시한다. 밑줄은 CDR 잔기를 나타낸다. 치환의 위치는 박스로 표시되고 Kabat 번호는 화살표로 나타낸다; 순차적인 아미노산 잔기 넘버링은 서열 위에 표시된다.
도 32A 및 32B는 V510-표지된 CD4+ 및 αhFc APC (도 32A) 또는 FITC-표지된 CD8 및 αhFc APC (도 32B)를 사용하는 FACS에 의해 측정되는 바 활성화된 CD4+ T 세포 또는 CD8+ T 세포의 CD137에 결합하는 탈면역화된 VH 및 VL 도메인을 포함하는 항-CD137 항체의 능력을 도시한다.
도 33A 및 33B는 가교 결합이 없이 (도 33A) 또는 4x hFc F(ab)'2와 가교 결합된 (도 33B) 최적화된/탈면역화된 항-CD137 항체 CD137 MAB-3 (1b.3), CD137 MAB-3 (1E.15) 및 CD137 MAB-3 (1G.15)의 존재 하에 건식-코팅된 항-CD3 항체 (3 μg/mL 내지 50 μg/mL)로의 자극시에 pan T 세포에 의한 IFN-γ의 72시간 후 유도를 도시한다.
도 34A 내지 34C는 JIMT-1 (5T4hi) (도 34B) 또는 SKOV-3 (5T4lo) 표적 세포 (도 34C)의 표면에서 FITC-표지된 CD8 및 αhFc APC (도 34A), 및 예시된 TA, 5T4를 사용하는 FACS에 의해 측정되는 바 활성화된 CD8+ T 세포의 표면에서 CD137에 결합하는 CD137 x TA 결합 분자 TRIDENT-B2, TRIDENT-B5, 및 대조군 분자 TRIDENT-1, TRIDENT-3, 및 TRIDENT-4의 능력을 도시한다.
도 35A 내지 35C는 T 세포 사이토카인 방출 검정에서 동시 자극 활성을 매개하는 CD137 x TA 결합 분자의 능력을 도시한다 (IFN-γ의 방출에 의해 예시됨). 도면들은 5T4-발현 JIMT-1 (5T4hi) (도 35A) 또는 SKOV-3 (5T4lo) (도 35B) 표적 세포의 존재 하에 테스트된, TRIDENT-B2, TRIDENT-B5, 및 대조군 분자 TRIDENT-1, TRIDENT-3, 및 TRIDENT-4에 대한 결과를 도시하며, 표적 세포의 부재시에 동시 자극 활성은 볼 수 없었다 (도 35C).
본 발명은 CD137의 에피토프에 특이적인 하나 이상의 에피토프-결합 부위 및 종양 항원 ("TA")의 에피토프에 특이적인 하나 이상의 에피토프-결합 부위를 가지는 결합 분자 (예컨대, "CD137 x TA 결합 분자")에 관한 것이다. 한 구체예에서, 이러한 CD137 x TA 결합 분자는 2, 3, 4개 또는 4개 이상의 폴리펩타이드 사슬로 구성되고 각각 CD137의 에피토프에 특이적인 2개의 에피토프-결합 부위 및 TA의 에피토프에 특이적인 2개의 에피토프-결합 부위를 가지는 이중특이적 분자, 특히 이중특이적 사가 디아바디일 것이다. 대안적으로, 이러한 CD137 x TA 결합 분자는 3개 이상의 폴리펩타이드 사슬로 구성되고 각각 CD137의 에피토프에 특이적인 1개 또는 2개의 에피토프-결합 부위 및 각각 TA의 에피토프에 특이적인 1개 또는 2개의 에피토프-결합 부위를 가지는 이중특이적 분자, 특히 이중특이적 삼가 결합 분자일 것이다. 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 CD137, 및 TA에 동시에 결합할 수 있다. 발명은 임의의 이러한 CD137 x TA 결합 분자를 함유하는 에 관한 것이다. 발명은 추가적으로 암 및 다른 질환 및 상태의 치료에서 이러한 분자의 사용 방법에도 관한 것이다. 발명은 또한 신규한 CD137-결합 분자, 및 HER2/neu-결합 분자, 뿐만 아니라 이것들의 유도체 및 이것들의 용도를 제공한다.
I. 항체 및 기타 결합 분자
항체는 분자, 예컨대 탄수화물, 폴리뉴클레오타이드, 지질, 폴리펩타이드, 등 ("항원")의 표적 영역 ("에피토프")에, 면역글로불린 분자의 가변 영역에 위치한 적어도 하나의 "에피토프-결합 부위"를 통해 특이적으로 결합할 수 있는 면역글로불린 분자이다. 본원에서 사용되는 바, 용어 "항체" 및 "항체들"은 단클론성 항체, 다중특이적 항체, 인간 항체, 인간화된 항체, 카멜화된 항체, 단일 사슬 Fvs (scFv), 단일 사슬 항체, Fab 단편, F(ab') 단편, 이황화-결합 이중특이적 Fvs (sdFv), 인트라바디(intrabodies), 및 상기 중 임의의 것의 에피토프-결합 단편을 나타낸다. 특히, 용어 "항체"는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적으로 활성인 단편, 즉, 에피토프-결합 부위를 함유한 분자를 포함한다. 면역글로불린 분자는 임의의 유형의 것 (예컨대, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 부류의 것 (예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위부류의 것일 수 있다. 항체는 폴리펩타이드 또는 단백질 또는 비단백질 분자에, 이런 분자 상의 특정 도메인 또는 모이어티 또는 형태 ("에피토프")의 존재로 인해 "면역학적으로 결합"할 수 있다. 본원에서 사용되는 바, "항체의 에피토프-결합 단편"은 에피토프에 면역학적으로 결합할 수 있는 항체의 부분을 나타내기 위해 의도된다. 본원에서 사용되는 바, 이러한 용어는 단편 (예컨대 Fab, Fab', F(ab')2 Fv), 및 단일 사슬 (scFv), 뿐만 아니라 디아바디의 에피토프-결합 도메인을 다 아우른다. 본원에서 사용되는 바, 항체 또는 그것의 에피토프-결합 단편은 다른 분자의 영역 (즉, 에피토프)에, 보다 빈번하게, 보다 신속하게, 더 큰 기간 및/또는 더 큰 친화도 또는 결합력으로, 대체 에피토프에 비해 그 에피토프와 반응 또는 회합한다면 "면역학적으로" 결합한다고 말할 수 있다. 또한 본 정의를 판독함으로써, 예를 들어, 제1 표적에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 그것의 에피토프-결합 단편이 제2 표적에 특이적으로 또는 우선적으로 결합할 수 있거나 결합하지 않을 수 있는 것이 인지된다. 에피토프-함유 분자는 면역원성 활성을 가져서, 동물에서 항체 생성 반응을 유도할 수 있게 된다; 이러한 분자는 "항원"으로 명명된다. 천연 항체는 단지 하나의 에피토프 종에 결합할 수 있지만 (즉, 그것들은 "단일특이적"임), 그 종의 다수의 복사물에 결합할 수 있다 (즉, "이가" 또는 "다가"를 나타냄).
용어 "단클론성 항체"는 단클론성 항체가 항원의 선택적 결합에 관여된 아미노산 (자연적으로 발생하는 또는 자연적으로 발생하지 않는)으로 구성되는 경우의 균일한 항체 집단을 나타낸다. 단클론성 항체는 고도로 특이적이고, 단일 에피토프 (또는 항원 부위)에 대해 지시된다. 용어 "단클론성 항체"는 온전한 단클론성 항체 및 전장(full-length) 단클론성 항체뿐만 아니라, 그것들의 단편 (예컨대 Fab, Fab', F(ab')2 Fv), 단일 사슬 (scFv), 이것들의 돌연변이, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질, 인간화된 단클론성 항체, 키메릭 단클론성 항체, 및 필요한 특이성 및 항원에 결합하는 능력의 항원 인식 부위를 포함하는 면역글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 형태를 다 아우른다. 항체의 공급원 또는 그것이 제조되는 방식 (예컨대, 하이브리도마, 파지 선택, 재조합 발현, 형질전환 동물, 등에 의한)에 관련하여 제한하려는 의도는 없다. 용어는 "항체"의 정의 하에 상기 기술된 단편 등등뿐만 아니라 전체 면역글로불린을 포함한다. 단클론성 항체의 제조 방법은 당업계에 알려져 있다. 사용될 수 있는 한 가지 방법은 Kohler, G. 등의 방법 (Kohler, G. et al. (1975) "Continuous Cultures Of Fused Cells Secreting Antibody Of Predefined Specificity", Nature 256:495-497) 또는 그것의 변형 방법이다. 전형적으로, 단클론성 항체는 마우스, 래트 또는 토끼에서 발생된다. 항체는 동물을 원하는 에피토프를 함유한 세포, 세포 추출물, 또는 단백질 조제물의 면역원성 양으로 면역화함으로써 제조된다. 면역원은, 한정하는 것은 아니지만, 일차 세포, 배양된 세포주, 암성 세포, 단백질, 펩타이드, 핵산, 또는 조직일 수 있다. 면역화에 사용된 세포는 그것들의 면역원으로서의 사용 전에 일정 시간 (예컨대, 적어도 24시간) 동안 배양될 수 있다. 세포는 자체로서 면역원으로서 또는 비변성 보조제, 예컨대 Ribi와 조합되어 사용될 수 있다 (예컨대, Jennings, V.M. (1995) "Review of Selected Adjuvants Used in Antibody Production", ILAR J. 37(3):119-125 참조). 일반적으로, 세포는 온전하게 유지되어야 하고 바람직하게는 면역원으로서 사용될 때 생존해야 한다. 온전한 세포는 항원이 면역화된 동물에 의해 파열된 세포보다 더 좋은 상태로 검출되는 것을 허용할 수 있다. 변성 또는 엄격한 보조제, 예컨대, 프로인트 보조제의 사용은 세포를 파열시킬 수 있고, 그러므로 권장되지 않는다. 면역원은 주기적인 간격으로 여러 번, 예컨대 격주로, 또는 주마다 투여될 수 있거나, 또는 동물에서 생존성을 유지하기 위한 그런 방식으로 (예컨대, 재조합 조직에) 투여될 수 있다. 대안적으로, 기존의 단클론성 항체 및 원하는 병원성 에피토프에 면역특이적인 임의의 다른 동등한 항체는 서열이 분석될 수 있고 당업계에 알려져 있는 임의의 수단에 의해 재조합방식으로 제조될 수 있다. 한 구체예에서, 이러한 항체는 서열분석되고, 그런 후 폴리뉴클레오타이드 서열이 발현 및 또는 증식을 위해 벡터로 클로닝된다. 관심 있는 항체를 암호화하는 서열은 숙주 세포에서 벡터에 유지될 수 있고 숙주는 그런 후 팽창되고 미래의 사용을 위해 냉동될 수 있다. 이러한 항체의 폴리뉴클레오타이드 서열은 항체의 친화도, 또는 다른 특성들을 개선하기 위하여, 발명의 단일특이적 또는 다중특이적 (예컨대, 이중특이적, 삼중특이적 및 사중특이적) 분자뿐만 아니라 친화도 최적화된, 키메릭 항체, 인간화된 항체, 및/또는 개과화된 항체를 생성하기 위한 유전자 조작에 사용될 수 있다. 항체를 인간화하는 데 일반적인 원칙은 항체의 에피토프-결합 부분의 염기 서열을 보유하는 한편, 항체의 비-인간 나머지 부분을 인간 항체 서열로 교환하는 것을 포함한다. 단클론성 항체를 인간화하기 위한 4가지 일반적인 단계가 있다. 이것들은 다음과 같다: (1) 출발 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 도메인의 뉴클레오타이드 및/또는 예측된 아미노산 서열을 결정하는 단계; (2) 인간화된 항체 또는 개과화된 항체를 설계하는 단계, 즉, 인간화 또는 개과화 과정 중에 사용하기 위한 항체 프레임워크 영역(들)을 결정하는 단계; (3) 실제 인간화 또는 개과화 방법/기법을 적용하는 단계; 및 (4) 인간화된 또는 개과화된 항체의 트랜스펙션 및 발현 (예를 들어, 미국 특허 제 4,816,567호; 5,807,715호; 5,866,692호; 및 6,331,415호 참조).
지난 수십년은 항체의 치료적 잠재력에 관심이 회복되었고, 항체는 생명공학-유래 약물의 선두 부류들 중 하나가 되었다 (Chan, C.E. et al. (2009) "The Use Of Antibodies In The Treatment Of Infectious Diseases", Singapore Med. J. 50(7):663-666). 200개가 넘는 항체-기반 약물이 사용 승인이 되었거나 개발 중에 있다.
A. 항체의 일반적인 구조적 특성
자연적으로 발생하는 면역글로불린 (예컨대, IgG)의 기본적인 구조 단위는 2개의 더 긴 "중쇄"와 복합체를 형성한 2개의 더 짧은 "경쇄"로 구성된 테트라머이고 보통 약 150,000 Da의 당단백질로서 표시된다. 각 사슬은 "가변 도메인"을 포함한 아미노-말단 ("N-말단") 부분 및 적어도 하나의 "불변 도메인"을 포함하는 카르복시-말단 ("C-말단")으로 구성된다. IgG 경쇄는 단일 "경쇄 가변 도메인" ("VL") 및 단일 "경쇄 불변 도메인" ("CL")으로 구성된다. 그러므로, IgG 분자의 경쇄는 n-VL-CL-c이다 (n 및 c는 각각, 폴리펩타이드의 N-말단 및 C-말단을 나타냄). IgG 중쇄는 단일 "중쇄 가변 도메인" ("VH"), 3개의 "중쇄 불변 도메인" ("CH1", "CH2" 및 "CH3"), 및 CH1과 CH2 도메인 사이에 위치한 "힌지" 영역 ("H")으로 구성된다. 그러므로, IgG 중쇄의 구조는 n-VH-CH1-H-CH2-CH3-c이다 (n 및 c는 각각, 폴리펩타이드의 N-말단 및 C-말단을 나타냄). 온전한, 미변형 항체 (예컨대, IgG 항체)의 항원의 에피토프에 결합하는 능력은 가변 도메인의 존재 및 서열에 좌우된다.
1. 불변 도메인
(a) 경쇄 불변 도메인
바람직한 CL 도메인은 인간 IgG CL 카파 도메인이다. 예시의 인간 CL 카파 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:1)이다:
RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQESVTEQD
SKDSTYSLSS TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGEC
대안적으로, 예시의 CL 도메인은 인간 IgG CL 람다 도메인이다. 예시의 인간 CL 람다 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:2)이다:
QPKAAPSVTL FPPSSEELQA NKATLVCLIS DFYPGAVTVA WKADSSPVKA GVETTPSKQS
NNKYAASSYL SLTPEQWKSH RSYSCQVTHE GSTVEKTVAP TECS
(b) 중쇄 CH1 도메인
예시의 CH1 도메인은 인간 IgG1 CH1 도메인이다. 예시의 인간 IgG1 CH1 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:3)이다:
ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS
GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKRV
예시의 CH1 도메인은 인간 IgG2 CH1 도메인이다. 예시의 인간 IgG2 CH1 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:4)이다:
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS
GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTV
예시의 CH1 도메인은 인간 IgG3 CH1 도메인이다. 예시의 인간 IgG3 CH1 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:5)이다:
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS
GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YTCNVNHKPS NTKVDKRV
예시의 CH1 도메인은 인간 IgG4 CH1 도메인이다. 예시의인간 IgG4 CH1 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:6)이다:
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS
GLYSLSSVVT VPSSSLGTKT YTCNVDHKPS NTKVDKRV
(c) 중쇄 힌지 영역
예시의 힌지 영역은 인간 IgG1 힌지 영역이다. 예시의 인간 IgG1 힌지 영역의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:7)이다:
EPKSCDKTHT CPPCP
또 다른 예시의 힌지 영역은 인간 IgG2 힌지 영역이다. 예시의 인간 IgG2 힌지 영역의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:8)이다:
ERKCCVECPP CP
또 다른 예시의 힌지 영역은 인간 IgG3 힌지 영역이다. 예시의 인간 IgG3 힌지 영역의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:9)이다:
ELKTPLGDTT HTCPRCPEPK SCDTPPPCPR CPEPKSCDTP PPCPRCPEPK SCDTPPPCPR CP
또 다른 예시의 힌지 영역은 인간 IgG4 힌지 영역이다. 예시의 인간 IgG4 힌지 영역의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:10)이다:
ESKYGPPCPS CP
본원에서 기술되는 것과 같이, IgG4 힌지 영역은 S228P 치환 (Kabat에서 나타낸 것과 같은 EU 인덱스에 의한 넘버링)과 같은 안정화 돌연변이를 포함할 수 있다. 예시의 안정화된 IgG4 힌지 영역의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:11)이다:
ESKYGPPCPP CP
(d) 중쇄 CH2 및 CH3 도메인
2개의 중쇄의 CH2 및 CH3 도메인은, 한정하는 것은 아니지만 Fc 감마 수용체 (FcγR)를 포함하는, 세포의 Fc 수용체에 의해 인식되는 IgG 항체의 "Fc 영역"을 형성하기 위하여 상호작용한다. 본원에서 사용되는 바, 용어 "Fc 영역"은 IgG 중쇄의 C-말단 영역을 규정하기 위해 사용된다. Fc 영역의 일부 (전체 Fc 영역을 포함하는 부분을 포함하여)는 본원에서 "Fc 도메인"으로서 언급된다. Fc 영역은 만약 그것의 아미노산 서열이 다른 IgG 아이소타입과 관련하여 그 아이소타입에 가장 상동한다면 특정 IgG 아이소타입, 부류 또는 아류의 것으로 말할 수 있다. 진단 분야에서 알려진 용도 외에, 항체는 치료제로서 유용할 것으로 나타났다.
예시의 인간 IgG1의 CH2-CH3 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:12)이다:
231 240 250 260 270 280
APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD
290 300 310 320 330
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA
340 350 360 370 380
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE
390 400 410 420 430
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
440 447
ALHNHYTQKS LSLSPG X
Kabat에서 나타낸 것과 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링되고, 여기서 X는 리신 (K)이거나 없는 것이다.
예시의 인간 IgG2의 CH2-CH3 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:13)이다:
231 240 250 260 270 280
APPVA-GPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVQFNWYVD
290 300 310 320 330
GVEVHNAKTK PREEQFNSTF RVVSVLTVVH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPA
340 350 360 370 380
PIEKTISKTK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDISVE
390 400 410 420 430
WESNGQPENN YKTTPPMLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
440 447
ALHNHYTQKS LSLSPG X
Kabat에서 나타낸 것과 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링되고, 여기서 X는 리신 (K)이거나 없는 것이다.
예시의 인간 IgG3의 CH2-CH3 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:14)이다:
231 240 250 260 270 280
APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVQFKWYVD
290 300 310 320 330
GVEVHNAKTK PREEQYNSTF RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA
340 350 360 370 380
PIEKTISKTK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE
390 400 410 420 430
WESSGQPENN YNTTPPMLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NIFSCSVMHE
440 447
ALHNRFTQKS LSLSPG X
Kabat에서 나타낸 것과 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링되고, 여기서 X는 리신 (K)이거나 없는 것이다.
예시의 인간 IgG4의 CH2-CH3 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:15)이다:
231 240 250 260 270 280
APEFLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD
290 300 310 320 330
GVEVHNAKTK PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS
340 350 360 370 380
SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE
390 400 410 420 430
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE
440 447
ALHNHYTQKS LSLSLG X
Kabat에서 나타낸 것과 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링되고, 여기서 X는 리신 (K)이거나 없는 것이다.
본 명세서 전체에서, IgG 중쇄의 불변 영역의 잔기들의 넘버링은 Kabat 등에서와 같이 EU 인덱스의 넘버링이다 (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, NH1, MD (1991) ("Kabat"), 분명하게 본원에 참조로 포함됨), 용어 "Kabat에서와 같은 EU 인덱스"는 인간 IgG1 EU 항체의 불변 도메인의 넘버링을 나타낸다.
다형태는 항체 불변 영역 내에서 많은 상이한 위치 (예컨대, 한정하는 것은 아니지만, Kabat에서 나타낸 것과 같은 EU 인덱스에 의해 넘버링되는 위치 270, 272, 312, 315, 356, 및 358을 포함한 Fc 위치)에서 관찰되었고, 그로써 선행 기술에서 제공된 서열 및 서열들 사이에 약간의 차이가 있을 수 있다. 인간 면역글로불린의 다형태적 형태는 특성화가 잘 되어 있다. 현재, 18 Gm의 알로타입이 알려져 있다: G1m (1, 2, 3, 17) 또는 G1m (a, x, f, z), G2m (23) 또는 G2m (n), G3m (5, 6, 10, 11, 13, 14, 15, 16, 21, 24, 26, 27, 28) 또는 G3m (b1, c3, b3, b0, b3, b4, s, t, g1, c5, u, v, g5) (Lefranc, et al., "The Human IgG Subclasses: Molecular Analysis Of Structure, Function And Regulation." Pergamon, Oxford, pp. 43-78 (1990); Lefranc, G. et al., 1979, Hum. Genet.: 50, 199-211). 구체적으로 본 발명의 항체는 임의의 면역글로불린 유전자의 임의의 알로타입, 아이소알로타입, 또는 할로타입을 통합할 수 있고, 본원에 제공된 서열의 알로타입, 아이소알로타입, 또는 할로타입에 한정되지 않는 것으로 고려된다. 나아가, 일부 발현 시스템에서 CH3 도메인의 C-말단 아미노산 잔기 (상기 진한 부분)는 번역 후에 제거될 수 있다. 따라서, CH3 도메인의 C-말단 잔기는 발명의 CD137 x TA 결합 분자의 선택적인 아미노산 잔기이다. 본 발명에 의해 구체적으로 포함되는 것은 CH3 도메인의 C-말단 잔기가 없는 CD137 x TA 결합 분자이다. 또한 본 발명에 의해 구체적으로 포함되는 것은 CH3 도메인의 C-말단 리신 잔기를 포함한 구성물이다.
2. 가변 도메인
IgG 분자의 가변 도메인은 3개의 "상보성 결정 영역" ("CDR")으로 구성되는데, 그것들은 일반적으로 이러한 접촉을 허용하기 위하여 CDR 루프의 구조를 유지하고 위치를 결정한다 (비록 특정 프레임워크 잔기가 또한 에피토프와 접촉할 수 있지만). 그러므로, VL 및 VH 도메인은 구조 n-FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-c를 가진다. CDR의 아미노산 서열은 항체가 특정 에피토프에 결합할 수 있을지를 결정한다. 항체 경쇄와 항체 중쇄와의 상호작용, 및, 특히 그것들의 VL 도메인과 VH 도메인의 상호작용은 항체의 에피토프-결합 부위를 형성한다.
면역글로불린의 성숙한 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인으로부터의 아미노산은 사슬의 아미노산의 위치에 의해 표시된다. Kabat (Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, NH1, MD (1991))은 항체에 대한 수많은 아미노산 서열을 기술하였고, 각 하위그룹에 대한 아미노산 공통 서열을 확인하였으며, 각 아미노산에 대한 잔기 번호를 배정하였고, CDR 및 FR은 Kabat에 의해 규정된 것과 같이 확인된다 (Chothia, C. & Lesk, A. M.에 의해 규정된 ((1987) "Canonical Structures For The Hypervariable Regions Of Immunoglobulins", J. Mol. Biol. 196:901-917) CDRH1은 5개 잔기만큼 앞에서 시작하는 것이 인지될 것이다). Kabat의 넘버링 도식은 보존된 아미노산을 참조로 Kabat에서의 공통 서열들 중 하나와 의문의 항체를 정렬함으로써 그의 개요서에 포함되지 않은 항체에도 확장될 수 있다. 잔기 번호를 배정하는 이 방법은 해당 분야에서 표준이 되었고 키메릭 또는 인간화된 변종을 포함하여, 상이한 항체들의 동등한 위치에서의 아미노산을 쉽게 확인할 수 있다. 예를 들어, 인간 항체 경쇄의 위치 50에 있는 아미노산은 마우스 항체 경쇄의 위치 50에 있는 아미노산에 동등한 위치를 차지한다.
항체의 경쇄의 제1, 제2 및 제3 CDR인 (또는 그것들로서 작용할 수 있는) 폴리펩타이드는 본원에서 각각 CDR L 1 도메인, CDR L 2 도메인, 및 CDR L 3 도메인으로서 표시된다. 유사하게, 항체의 중쇄의 제1, 제2 및 제3 CDR인 (또는 그것들로서 작용할 수 있는) 폴리펩타이드는 본원에서 각각 CDR H 1 도메인, CDR H 2 도메인, 및 CDR H 3 도메인으로서 표시된다. 그러므로, 용어 CDRL1 도메인, CDRL2 도메인, CDRL3 도메인, CDRH1 도메인, CDRH2 도메인, 및 CDRH3 도메인은 단백질에 통합될 때 이러한 단백질이 경쇄 및 중쇄를 가지고 있는지 또는 디아바디이거나 또는 단일 사슬 결합 분자 (예컨대, scFv, BiTe, 등)이거나, 또는 또 다른 유형의 단백질이거나에 관계없이 그 단백질이 특이적 에피토프에 결합할 수 있게 되는 것을 유발하는 폴리펩타이드에 관련된다. 따라서, 본원에서 사용되는 바, 용어 "에피토프-결합 단편"은 에피토프에 면역특이적으로 결합할 수 있는 분자의 단편을 나타낸다. 에피토프-결합 단편은 항체의 임의의 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 CDR 도메인을 함유하거나, 또는 항체의 전부 6개의 CDR 도메인을 함유할 수 있지만, 이러한 에피토프에 면역특이적으로 결합할 수 있고, 이러한 항체의 것과 상이한 이러한 에피토프를 향한 면역특이성, 친화도 또는 선택성을 나타낼 수 있다. 그러나, 바람직하게, 에피토프-결합 단편은 이러한 항체의 전부 6개의 CDR 도메인을 함유할 것이다. 항체의 에피토프-결합 단편은 단일 폴리펩타이드 사슬 (예컨대, scFv)이거나, 또는 각각이 아미노 말단 및 카르복시 말단을 가지는 둘 이상의 폴리펩타이드 사슬을 포함할 수 있다 (예컨대, 디아바디, Fab 단편, Fab2 단편, 등). 구체적으로 언급되지 않는 한, 본원에 기술된 단백질 분자의 도메인의 순서는 "N-말단에서 C-말단" 방향으로 있다.
에피토프-결합 부위는 불변 도메인에 융합된 완전한 가변 도메인 또는 적절한 프레임워크 영역에 그라프트된 그러한 가변 도메인의 상보성 결정 영역 (CDR)만을 포함할 수 있다. 에피토프-결합 부위는 야생형이거나 하나 이상의 아미노산 치환에 의해 변형될 수 있다. 이것은 인간 개체에서 면역원으로서 불변 영역을 제거하지만, 외래 가변 도메인에 대한 면역 반응의 가능성은 남아 있다 (LoBuglio, A.F. et al. (1989) "Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody In Man: Kinetics And Immune Response", Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86:4220-4224). 다른 접근법은 인간-유래 불변 영역을 제공하는 것뿐만 아니라, 가변 도메인을 또한 인간 형태에 가능한 밀접하게 변경하기 위해 변형시키는 것에 초점을 맞춘다. 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 문제의 항원에 대한 반응으로 달라지는 3개의 상보성 결정 영역을 함유하고 결합 능력을 결정하며, 주어진 종에서 상대적으로 보존되고 잠정적으로 CDR에 대한 스캐폴딩을 제공하는 4개의 프레임워크 영역 (FR)에 의해 플랭킹되는 것으로 알려져 있다. 비인간 항체가 특정 항원과 관련하여 제조될 때, 가변 도메인은 변형될 인간 항체에 존재하는 FR 상의 비인간 항체로부터 유래된 CDR을 그라프팅함으로써 "변경"되거나 "인간화"될 수 있다. 다양한 항체에의 이런 접근법의 적용은 다음 문헌에 보고되어 있다: Sato, K. et al. (1993) Cancer Res 53:851-856. Riechmann, L. et al. (1988) "Reshaping Human Antibodies for Therapy", Nature 332:323-327; Verhoeyen, M. et al. (1988) "Reshaping Human Antibodies: Grafting An Antilysozyme Activity", Science 239:1534-1536; Kettleborough, C. A. et al. (1991) "Humanization Of A Mouse Monoclonal Antibody By CDR-Grafting: The Importance Of Framework Residues On Loop Conformation", Protein Engineering 4:773-3783; Maeda, H. et al. (1991) "Construction Of Reshaped Human Antibodies With HIV-Neutralizing Activity", Human Antibodies Hybridoma 2:124-134; Gorman, S. D. et al. (1991) "Reshaping A Therapeutic CD4 Antibody", Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:4181-4185; Tempest, P.R. et al. (1991) "Reshaping A Human Monoclonal Antibody To Inhibit Human Respiratory Syncytial Virus Infection in vivo", Bio/Technology 9:266-271; Co, M. S. et al. (1991) "Humanized Antibodies For Antiviral Therapy", Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:2869-2873; Carter, P. et al. (1992) "Humanization Of An 항-p185her2 Antibody For Human Cancer Therapy", Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 89:4285-4289; 및 Co, M.S. et al. (1992) "Chimeric And Humanized Antibodies With Specificity For The CD33 Antigen", J. Immunol. 148:1149-1154. 일부 구체예에서, 인간화된 항체는 모든 CDR 서열을 보존한다 (예를 들어, 마우스 항체로부터의 모든 6개의 CDR을 함유하는 인간화된 마우스 항체). 다른 구체예에서, 인간화된 항체는 원래 항체와 비교하여 서열이 상이한 하나 이상의 CDR (1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개)을 가진다.
B. 항체의 인간화
발명은 특히 인간화된 항체의 VL 및/또는 VH 도메인을 포함하는 결합 분자 (항체 및 디아바디를 포함함)를 아우른다. 용어 "인간화된" 항체는, 일반적으로 재조합 기법을 사용하여 제조된, 비인간 종으로부터의 면역글로불린의 에피토프-결합 부위 및 인간 면역글로불린의 구조 및/또는 서열을 기반으로 한 분자의 나머지 면역글로불린 구조를 가지는 키메릭 분자를 나타낸다. 이러한 항체의 가변 도메인의 폴리뉴클레오타이드 서열은 이러한 유도체를 생성하고 친화도, 또는 이러한 항체의 다른 특성을 개선하기 위한 유전자 조작에 대해 사용될 수 있다. 항체를 인간화하는 데 있어 일반적인 원칙은 항체의 에피토프-결합 부분의 염기 서열을 보유하는 한편, 항체의 비인간 나머지와 인간 항체 서열을 교환하는 것을 포함한다. 단클론성 항체를 인간화하기 위한 4가지 일반적인 단계가 있다. 이것들은 다음과 같다: (1) 출발 항체 경쇄 및 중쇄 가변 도메인의 뉴클레오타이드 및 예측된 아미노산 서열을 결정하는 단계; (2) 인간화된 항체 또는 개과화된 항체를 설계하는 단계, 즉, 인간화 또는 개과화 과정 중에 사용하기 위한 항체 프레임워크 영역을 결정하는 단계; (3) 실제 인간화 또는 개과화 방법/기법; 및 (4) 인간화된 항체의 트랜스펙션 및 발현. 예를 들어, 미국 특허 제 4,816,567호; 5,807,715호; 5,866,692호; 및 6,331,415호 참조.
인간 불변 도메인에 융합된 설치류 또는 변형된 설치류 가변 도메인 및 그것들의 관련된 상보성 결정 영역 (CDR)을 가지는 키메릭 항체를 포함한, 비인간 면역글로불린으로부터 유래된 에피토프-결합 부위를 포함하는 많은 인간화된 항체 분자가 기술되어 있다 (예를 들어, Winter et al. (1991) "Man-made Antibodies", Nature 349:293-299; Lobuglio et al. (1989) "Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody In Man: Kinetics And Immune Response", Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86:4220-4224 (1989), Shaw et al. (1987) "Characterization Of A Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody (17-1A) To Colon Cancer Tumor-Associated Antigen", J. Immunol. 138:4534-4538, 및 Brown et al. (1987) "Tumor-Specific Genetically Engineered Murine/Human Chimeric Monoclonal Antibody", Cancer Res. 47:3577-3583 참조). 다른 참고문헌들은 적절한 인간 항체 불변 도메인과의 융합 전에 인간 지지 프레임워크 영역 (FR)으로 그라프팅된 설치류 CDR을 기술한다 (예를 들어, Riechmann, L. et al. (1988) "Reshaping Human Antibodies for Therapy", Nature 332:323-327; Verhoeyen, M. et al. (1988) "Reshaping Human Antibodies: Grafting An Antilysozyme Activity", Science 239:1534-1536; and Jones et al. (1986) "Replacing The Complementarity-Determining Regions In A Human Antibody With Those From A Mouse", Nature 321:522-525 참조). 또 다른 참고문헌은 재조합에 의해 붙여진 설치류 프레임워크 영역에 의해 지지된 설치류 CDR을 기술한다. 예를 들어, 유럽 특허 공개 번호 519,596호 참조. 이런 "인간화된" 분자는, 인간 수령체에서 그러한 모이어티의 치료적 적용 기간 및 유효성을 제한하는, 설치류 항-인간 항체 분자를 향한 원치 않는 면역학적 반응을 최소화하기 위해 설계된다. 또한 활용될 수 있는 항체의 인간화의 다른 방법은 문헌: Daugherty et al. (1991) "Polymerase Chain Reaction Facilitates The Cloning, CDR-Grafting, And Rapid Expression Of A Murine Monoclonal Antibody Directed Against The CD18 Component Of Leukocyte Integrins", Nucl. Acids Res. 19:2471-2476 및 미국 특허 제 6,180,377호; 6,054,297호; 5,997,867호; 및 5,866,692호에서 개시된다.
이러한 성공에도 불구하고, 치료 용도에 최적화된 안정적이고, 기능적으로 헤테로다이머적이며, 비-단일특이적인 디아바디의 제조는 추가로 폴리펩타이드 사슬에 사용된 도메인들의 세심한 고려 및 배치에 의해 개선될 수 있다. 본 발명은 그러므로, 공유 결합을 통하여, CD137 및 TA에 동시에 결합할 수 있는 안정적이고 치료적으로 유용한 헤테로다이머 디아바디 및 헤테로다이머 Fc 디아바디를 형성하기 위하여 특별히 설계된 특이적 폴리펩타이드의 제공에 관련된다.
C. 이중특이적 항체, 다중특이적 디아바디 및 DART® 디아바디
상기에서 표시된 것과 같이, 천연 항체는 단지 하나의 에피토프 종에 결합할 수 있지만, 그 종의 다수의 복사물에 결합할 수 있다. 당업계는 이중특이적 항체를 제조하는 것의 바람직함을 인식하였고, 광범위한 재조합 이중특이적 항체 포맷이 이러한 이중특이적 항체를 제조하기 위해 개발되었다 (예컨대, PCT 출원 공개 번호s. WO 2008/003116, WO 2009/132876, WO 2008/003103, WO 2007/146968, WO 2009/018386, WO 2012/009544, WO 2013/070565 참조). 이러한 접근법의 대부분은 추가의 결합 도메인 (예컨대 scFv, VL, VH, 등)을 항체 코어 (IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM)에 또는 그 안에 융합시키기 위하여, 또는 다수의 항체 결합 부분을 서로에게 (예컨대 2개의 Fab 단편 또는 scFv) 융합시키기 위하여 링커 펩타이드를 사용한다. 대안적인 포맷은 결합 단백질 (예컨대, scFv, VL, VH, 등)을 다이머화 도메인, 예컨대 CH2-CH3 도메인 또는 대체 폴리펩타이드에 융합시키기 위하여 링커 펩타이드를 사용한다 (WO 2005/070966, WO 2006/107786A WO 2006/107617A, WO 2007/046893). 전형적으로, 이러한 접근법은 타협과 절충을 포함한다. 예를 들어, PCT 출원 공개 번호 WO 2013/174873, WO 2011/133886 및 WO 2010/136172는 링커의 사용이 치료적 환경에서 문제를 유발할 수 있음을 개시하고, CL 및 CH1 도메인이 그것들의 각각의 천연 위치로부터 스위칭되고 VL 및 VH 도메인이 하나 이상의 항원에 결합하는 것을 허용하기 위해 다양해진 (WO 2008/027236; WO 2010/108127) 삼중 특이적 항체를 교시한다. 그러므로, 이들 문헌에 개시된 분자는 추가적인 항원 종에 결합하는 능력을 결합 특이성과 맞바꾼다. PCT 출원 공개 번호 WO 2013/163427 및 WO 2013/119903은 결합 도메인을 포함하는 융합 단백질 부가물을 함유하기 위하여 CH2 도메인을 변형시키는 것을 개시한다. 문헌은 CH2 도메인이 이펙터 기능을 매개하는 데 있어 최소한의 역할을 수행하는 가능성이 있음을 주지한다. PCT 출원 공개 번호 WO 2010/028797, WO2010028796 및 WO 2010/028795는 Fc 영역이 추가적인 VL 및 VH 도메인과 교체되어서, 삼가 결합 분자를 형성하게 되는 재조합 항체를 개시한다. PCT 출원 공개 번호 WO 2003/025018 및 WO2003012069는 개별적인 사슬이 scFv 도메인을 함유하는 재조합 디아바디를 개시한다. PCT 출원 공개 번호 WO 2013/006544는 단일 폴리펩타이드 사슬로서 합성된 후 단백질 가수분해를 받아 헤테로다이머 구조물이 생성되는 다가 Fab 분자를 개시한다. 그러므로, 이들 문헌에 개시된 분자들은 이펙터 기능을 매개하는 능력의 전부 또는 일부를 추가적인 항원 종에 결합하는 능력과 맞바꾼다. PCT 출원 공개 번호 WO 2014/022540, WO 2013/003652, WO 2012/162583, WO 2012/156430, WO 2011/086091, WO 2008/024188, WO 2007/024715, WO 2007/075270, WO 1998/002463, WO 1992/022583 및 WO 1991/003493은 추가적인 결합 도메인 또는 기능설 기를 항체 또는 항체 부분에 첨가하는 것 (예컨대, 디아바디를 항체의 경쇄에 첨가하는 것, 또는 추가적인 VL 및 VH 도메인을 항체의 경쇄 및 중쇄에 첨가하는 것, 또는 이종성 융합 단백질을 첨가하는 것 또는 다수의 Fab 도메인을 서로에게게 연장시키는 것)을 개시한다.
당업계는 추가적으로 둘 이상의 상이한 에피토프 종에 결합할 수 있는 천연 항체와 상이한 디아바디를 생성하는 (즉, 이가 또는 다가에 더불어 이중특이성 또는 다중특이성을 나타내는) 능력에 주의를 기울였다 (예컨대, Holliger et al. (1993) "'Diabodies': Small Bivalent And Bispecific Antibody Fragments", Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 90:6444-6448; US 2004/0058400 (Hollinger et al.); US 2004/0220388 (Mertens et al.); Alt et al. (1999) FEBS Lett. 454(1-2):90-94; Lu, D. et al. (2005) "A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity", J. Biol. Chem. 280(20):19665-19672; WO 02/02781 (Mertens et al.); Olafsen, T. et al. (2004) "Covalent Disulfide-Linked Anti-CEA Diabody Allows Site-Specific Conjugation And Radiolabeling For Tumor Targeting Applications", Protein Eng Des Sel. 17(1):21-27; Wu, A. et al. (2001) "Multimerization Of A Chimeric Anti-CD20 Single Chain Fv-Fv Fusion Protein Is Mediated Through Variable Domain Exchange", Protein Engineering 14(2):1025-1033; Asano et al. (2004) "A Diabody For Cancer Immunotherapy And Its Functional Enhancement By Fusion Of Human Fc Domain", Abstract 3P-683, J. Biochem. 76(8):992; Takemura, S. et al. (2000) "Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System", Protein Eng. 13(8):583-588; Baeuerle, P.A. et al. (2009) "Bispecific T Cells Engaging Antibodies For Cancer Therapy", Cancer Res. 69(12):4941-4944 참조).
비-단일특이적 "디아바디"의 제공은 항체를 능가하는 중요한 장점: 상이한 에피토프를 발현하는 세포들을 동시 결찰하고 동시 국지화하는 능력을 제공한다. 그러므로 이중특이적 디아바디는 치료법 및 면역진단을 포함하여 광범위한 적용을 가진다. 이중특이성은 다양한 적용에서 디아바디의 설계 및 조작에 대단한 유연성을 허용하여, 멀티머 항원에 대한 증강된 결합력, 상이한 항원의 가교 결합, 및 두 표적 항원의 존재에 의존하는 특이적 세포 유형에 대해 지시된 표적화를 제공한다. 그것의 이가성(bivalency)으로 인해, 낮은 해리 속도 및 순환으로부터의 신속한 소멸 (약 50 kDa 이하의 작은 크기의 디아바디의 경우)로 인해, 당업계에 알려져 있는 디아바디 분자는 또한 종양 영상화 분야에서 특정 용도를 나타냈다 (Fitzgerald et al. (1997) "Improved Tumour Targeting By Disulphide Stabilized Diabodies Expressed In Pichia pastoris", Protein Eng. 10:1221). 특별히 중요한 것은 상이한 세포의 동시 결찰, 예를 들어, 세포독성 T 세포의 종양 세포에의 가교 결합 (Staerz et al. (1985) "Hybrid Antibodies Can Target Sites For Attack By T Cells", Nature 314:628-631, 및 Holliger et al. (1996) "Specific Killing Of Lymphoma Cells By Cytotoxic T Cells Mediated By A Bispecific Diabody", Protein Eng. 9:299-305) 내지 그로써 종양 세포 부위로의 T 세포의 동시 국지화이다.
이러한 디아바디의 T 세포에의 결합을 위한 표적화에 대한 대안으로, 디아바디 에피토프 결합 도메인은 B 세포의 표면 결정기, 예컨대 CD19, CD20, CD22, CD30, CD37, CD40, 및 CD74에 대해 지시될 수 있다 (Moore, P.A. et al. (2011) "Application Of Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T Cell Killing Of B-Cell Lymphoma", Blood 117(17):4542-4551; Cheson, B.D. et al. (2008) "Monoclonal Antibody Therapy For B-Cell Non-Hodgkin's Lymphoma", N. Engl. J. Med. 359(6):613-626; Castillo, J. et al. (2008) "Newer Monoclonal Antibodies For Hematological Malignancies", Exp. Hematol. 36(7):755-768). 많은 연구에서, 이펙터 세포 결정기, 예컨대 Fcγ 수용체 (FcγR)에 결합하는 디아바디는 또한 이펙터 세포를 활성화시키는 것으로 나타났다 (Holliger et al. (1996) "Specific Killing Of Lymphoma Cells By Cytotoxic T Cell Mediated By A Bispecific Diabody", Protein Eng. 9:299-305; Holliger et al. (1999) "Carcinoembryonic Antigen (CEA)-Specific T Cells Activation In Colon Carcinoma Induced By Anti-CD3 x Anti-CEA Bispecific Diabodies And B7 x Anti-CEA Bispecific Fusion Proteins", Cancer Res. 59:2909-2916; WO 2006/113665; WO 2008/157379; WO 2010/080538; WO 2012/018687; WO 2012/162068). 정상적으로, 이펙터 세포 활성화는 Fc 도메인 - FcγR 상호작용을 통해 이펙터 세포에 대한 항원-결합 항체의 결합에 의해 촉발된다; 그러므로, 이런 관점에서, 디아바디 분자는 그것이 Fc 도메인을 포함하는지 또는 아닌지와 무관하게 Ig-유사 기능성을 나타낼 수 있다 (예컨대, 당업계에 알려져 있는 임의의 이펙터 기능 검정에서 검정된 것과 같이 또는 본원에 예시된 것과 같이 (예컨대, ADCC 검정)). 종양과 이펙터 세포의 가교 결합에 의해, 디아바디는 이펙터 세포를 종양 세포와 근접하게 가져올뿐만 아니라 효과적인 종양 살해를 유도한다 (예컨대, Cao et al. (2003) "Bispecific Antibody Conjugates In Therapeutics", Adv. Drug. Deliv. Rev. 55:171-197 참조).
그러나, 상기 장점들은 가장 중요한 비용과 부딪힌다. 그러한 비-단일특이적 디아바디의 형성은 둘 이상의 구별되고 상이한 폴리펩타이드의 성공적인 조립을 필요로 한다 (즉, 그러한 형성은 상이한 폴리펩타이드 사슬 종의 헤테로다이머화를 통해 디아바디가 형성되는 것을 필요로 한다). 이런 사실은 단일특이적 디아바디와는 대조적인데, 그것은 동일한 폴리펩타이드 사슬의 헤테로다이머화를 통해 형성된다. 적어도 2개의 같지 않은 폴리펩타이드 (즉, 2개의 폴리펩타이드 종)가 비-단일특이적 디아바디를 형성하기 위해 제공되어야 하고, 그러한 폴리펩타이드의 단일다이머화는 비활성 분자를 유발하기 때문에 (Takemura, S. et al. (2000) "Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System", Protein Eng. 13(8):583-588), 이러한 폴리펩타이드의 생성은 동일한 종의 폴리펩타이드 사이의 공유 결합을 설명하기 위한 (즉, 단일다이머화를 최소화하기 위한) 방식으로 달성되어야 한다 (Takemura, S. et al. (2000) "Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System", Protein Eng. 13(8):583-588). 당업계는 그러므로 그러한 폴리펩타이드의 비공유 회합을 교시한다 (예컨대, Olafsen et al. (2004) "Covalent Disulfide-Linked Anti-CEA Diabody Allows Site-Specific Conjugation And Radiolabeling For Tumor Targeting Applications", Prot. Engr. Des. Sel. 17:21-27; Asano et al. (2004) "A Diabody For Cancer Immunotherapy And Its Functional Enhancement By Fusion Of Human Fc Domain", Abstract 3P-683, J. Biochem. 76(8):992; Takemura, S. et al. (2000) "Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System", Protein Eng. 13(8):583-588; Lu, D. et al. (2005) "A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity", J. Biol. Chem. 280(20):19665-19672 참조).
그러나, 당업계는 비공유적으로 회합된 폴리펩타이드로 구성된 이중특이적 디아바디가 불안정하고 비-기능성 단일 폴리펩타이드 사슬 모노머로 쉽게 분리될 수 있음을 인식하였다 (예컨대, Lu, D. et al. (2005) "A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity", J. Biol. Chem. 280(20):19665-19672 참조).
이런 도전에 직면하여, 당업계는 DART® 디아바디로 명명된, 안정적이고, 공유 결합된 헤테로다이머 비-단일특이적 디아바디를 개발하는데 성공하였다 (예컨대, Chichili, G.R. et al. (2015) "A CD3xCD123 Bispecific DART For Redirecting Host T Cell To Myelogenous Leukemia: Preclinical Activity And Safety In Nonhuman Primates", Sci. Transl. Med. 7(289):289ra82; Johnson, S. et al. (2010) "Effector Cell Recruitment With Novel Fv-Based Dual-Affinity Re-Targeting Protein Leads To Potent Tumor Cytolysis And In Vivo B-Cell Depletion", J. Molec. Biol. 399(3):436-449; Veri, M.C. et al. (2010) "Therapeutic Control Of B Cell Activation Via Recruitment Of Fcgamma Receptor IIB (CD32B) Inhibitory Function With A Novel Bispecific Antibody Scaffold", Arthritis Rheum. 62(7):1933-1943; Moore, P.A. et al. (2011) "Application Of Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T Cells Killing Of B-Cell Lymphoma", Blood 117(17):4542-4551; 미국 특허 제 8,044,180호; 8,133,982호; 8,187,593호; 8,193,318호; 8,530,627호; 8,669,349호; 8,778,339호; 8,784,808호; 8,795,667호; 8,802,091호; 8,802,093호; 8,946,387호; 8,968,730호; 및 8,993,730호; 미국 특허출원 공개 번호 2009/0060910; 2010/0174053; 2011/0081347; 2011/0097323; 2011/0117089; 2012/0009186; 2012/0034221; 2012/0141476; 2012/0294796; 2013/0149236; 2013/0295121; 2014/0017237; 및 2014/0099318; 유럽 특허출원 문서 번호 EP 1868650; EP 2158221; EP 2247304; EP 2252631; EP 2282770; EP 2328934; EP 2376109; EP 2542256; EP 2601216; EP 2714079; EP 2714733; EP 2786762; EP 2839842; EP 2840091; 및 PCT 출원 공개 번호 WO 2006/113665; WO 2008/157379; WO 2010/027797; WO 2010/033279; WO 2010/080538; WO 2011/109400; WO 2012/018687; WO 2012/162067; WO 2012/162068; WO 2014/159940; WO 2015/021089; WO 2015/026892; 및 WO 2015/026894 참조). 이러한 디아바디는 둘 이상의 공유적으로 복합체를 형성한 폴리펩타이드를 포함하며 하나 이상의 시스테인 잔기를 사용된 폴리펩타이드 종의 각각에 조작하는 것을 포함한다. 예를 들어, 시스테인 잔기의 그러한 구성물의 C-말단에의 첨가는 폴리펩타이드 사슬 사이의 이황화 결합을 허용하여서, 이가 분자의 결합 특성을 간섭하지 않으면서 결과적으로 얻어지는 헤테로다이머를 안정화시키는 것으로 나타났다.
가장 간단한 DART® 디아바디는 각각이 3개의 도메인을 포함하는 2개의 폴리펩타이드 사슬을 포함한다 (도 1). 제1 폴리펩타이드 사슬은: (i) 제1 면역글로불린의 경쇄 가변 도메인의 결합 영역을 포함하는 제1 도메인 (VL1), (ii) 제2 면역글로불린의 중쇄 가변 도메인의 결합 영역을 포함하는 제2 도메인 (VH2), 및 (iii) 제2 폴리펩타이드 사슬과의 헤테로다이머화를 촉진하고 ("헤테로다이머-촉진 도메인") 디아바디의 제1 폴리펩타이드를 제2 폴리펩타이드 사슬에 공유 결합시키기 위한 제3 도메인을 포함한다. 제2 폴리펩타이드 사슬은 상보하는 제1 도메인 (VL2 도메인), 상보하는 제2 도메인 (VH1 도메인) 및 헤테로다이머화를 촉진하고 ("헤테로다이머-촉진 메인") 제1 폴리펩타이드 사슬과의 공유 결합을 촉진하기 위하여 제1 폴리펩타이드 사슬의 제3 도메인과 복합체를 형성하는 제3 도메인을 함유한다. 이러한 분자는 안정적이고, 강력하며 둘 이상의 항원에 동시에 결합하는 능력을 가진다. 한 구체예에서, 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬의 제3 도메인은 각각, 이황화 결합을 통해 함께 폴리펩타이드에 결합하는 작용을 하는, 시스테인 (
Figure 112019099061144-pct00002
) 잔기를 함유한다. 폴리펩타이드 사슬의 하나 또는 둘 다의 제3 도메인은 추가적으로 CH2-CH3 도메인의 서열을 가질 수 있어서, 디아바디 폴리펩타이드의 복합체화는 세포 (예컨대 B 림프구, 수지상 세포, 천연 살해 세포, 대식세포, 호중구, 호산성 세포, 호염기성 세포 및 비만 세포)의 Fc 수용체에 결합할 수 있는 Fc 도메인을 형성할 수 있다. 이러한 분자의 많은 변종이 기술되어 있고 (예컨대, 미국 특허출원 공개 번호 2013-0295121; 2010-0174053; 2007-0004909; 2009-0060910; 유럽 특허출원 공개 번호 EP 2714079; EP 2601216; EP 2376109; EP 2158221 및 PCT 출원 공개 번호 WO 2012/162068; WO 2012/018687; WO 2010/080538; WO 2006/113665 참조) 본원에 제공된다.
II. 본 발명의 바람직한 CD137 x TA 결합 분자의 구성요소들
본 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 폴리펩타이드로 구성되며, 2, 3, 4개 또는 4개 이상의 폴리펩타이드 사슬로 구성될 수 있다. 본원에서 사용되는 바, 용어 "~로 구성되는"은 단부가 열려져 있어서, 2개의 폴리펩타이드 사슬로 구성된 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자가 추가적인 폴리펩타이드 사슬을 가질 수 있는 것으로 의도된다. 이러한 사슬은 결합 분자의 또 다른 폴리펩타이드 사슬과 동일한 서열을 가지거나, 또는 결합 분자의 임의의 다른 폴리펩타이드 사슬로부터의 서열이 상이할 수 있다.
A. 바람직한 "링커" 펩타이드
본 발명의 CD137 x TA 결합 분자의 폴리펩타이드는 서로에 의해 선행되거나, 서로에 이어지거나, 및/또는 "링커" 펩타이드, 예컨대 링커 1, 링커 2, 링커 3, 등에 의해 연결되는 도메인들을 포함한다. 비록 발명이 바람직한 "링커" 펩타이드를 활용하지만, 본원에 제공된 교시의 관점에서, CD137 x TA 결합 분자를 이루기 위하여 대체 링커가 쉽게 확인될 수 있고 사용될 수 있다.
가장 바람직하게, 폴리펩타이드 사슬의 이러한 VL 및 VH 도메인을 분리시키는 링커 1의 길이는 이러한 VL 및 VH 도메인이 서로와 결합하는 것을 실질적으로 또는 완전하게 방지하도록 선택된다 (예컨대 12개 이하의 아미노산 잔기의 길이). 그러므로, 제1 폴리펩타이드 사슬의 VL1 및 VH2 도메인은 서로에게 실질적으로 또는 완전하게 결합할 수 없고, 제1 또는 제2 항원 중 어느 하나에 실질적으로 결합할 수 있는 에피토프-결합 부위를 형성하지 못한다. 마찬가지로, 제2 폴리펩타이드 사슬의 VL2 및 VH1 도메인은 서로에게 실질적으로 또는 완전하게 결합할 수 없고, 제1 또는 제2 항원 중 어느 하나에 실질적으로 결합할 수 있는 에피토프-결합 부위를 형성하지 못한다. 바람직한 개재 스페이서 펩타이드 (링커 1)는 서열 (SEQ ID NO:16): GGGSGGGG를 가지며, 동일한 폴리펩타이드 사슬의 VL 및 VH 도메인이 함께 복합체를 형성하는 것을 허용하기에는 너무 짧다 (scFv 분자를 생성하기 위해 사용된 더 긴 개재 스페이서 펩타이드 (예컨대, GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:17)와 대조적임).
링커 2의 목적은 폴리펩타이드 사슬의 최적으로 존재하는 헤테로다이머-촉진 도메인으로부터 그 폴리펩타이드 사슬의 VH 도메인을 분리시키는 것이다. 다양한 링커 중 어느 것이든지 링커 2의 목적에 대해 사용될 수 있다. 이러한 링커 2에 대한 바람직한 서열은 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬을 이황화 결합을 통하여 서로에게 공유 결합시키기 위해 사용될 수 있는 시스테인 잔기를 가진 아미노산 서열 GGCGGG (SEQ ID NO:18), 또는 IgG CH1 도메인으로부터 유래된 ASTKG (SEQ ID NO:19)를 가진다. 링커 2, ASTKG (SEQ ID NO:19)는 이러한 시스테인을 갖지 않기 때문에, 이러한 링커 2의 사용은 바람직하게는 시스테인-함유 헤테로다이머-촉진 도메인, 예컨대 SEQ ID NO:38의 E-코일 또는 SEQ ID NO:39의 K-코일의 사용과 연합된다 (하기 참조).
링커 3의 한 가지 목적은 폴리펩타이드 사슬의 Fc 도메인으로부터 그 폴리펩타이드 사슬의 헤테로다이머-촉진 도메인을 분리하는 것이다. 제2 목적은 시스테인-함유 폴리펩타이드 도메인을 제공하는 것이다. 다양한 링커 중 어느 것이든지 링커 3의 목적을 위해 사용될 수 있다. 링커 3의 바람직한 서열은 아미노산 서열: DKTHTCPPCP (SEQ ID NO:20)를 가진다. 링커 3에 대한 또 다른 바람직한 서열은 아미노산 서열: GGGDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:21)를 가진다.
링커 4의 목적은 VL 도메인의 N-말단으로부터 Fc 영역의 CH2-CH3 도메인 ("Fc 도메인")의 C-말단을 분리하는 것이다. 다양한 링커 중 어느 것이든지 링커 4의 목적을 위해 사용될 수 있다. 이러한 링커 4에 대한 바람직한 서열은 아미노산 서열: APSSS (SEQ ID NO:22) 또는 아미노산 서열: GGGSGGGSGGG (SEQ ID NO:24)를 가진다.
본 발명의 Fc 영역-함유 분자는 추가적인 개재 스페이서 펩타이드 (링커)를 포함할 수 있고, 일반적으로 이러한 링커는 헤테로다이머-촉진 도메인 (예컨대, E-코일 또는 K-코일)과 CH2-CH3 도메인 사이 및/또는 CH2-CH3 도메인과 가변 도메인 (즉, VH 또는 VL) 사이에 포함될 것이다. 전형적으로, 추가적인 링커는 3 내지 20개의 아미노산 잔기를 포함할 것이고, 선택적으로 IgG 힌지 영역의 전부 또는 일부 (바람직하게는 IgG 힌지 영역의 시스테인-함유 부분)를 함유할 수 있다. 본 발명의 이중특이적 Fc 영역-함유 디아바디 분자에 사용될 수 있는 링커로는 다음을 들 수 있다: GGC, GGG, ASTKG (SEQ ID NO:19), DKTHTCPPCP (SEQ ID NO:20), APSSS (SEQ ID NO:22), APSSSPME (SEQ ID NO:23), GGGSGGGSGGG (SEQ ID NO:24), LGGGSG (SEQ ID NO:25), GGGS (SEQ ID NO:26), LEPKSS (SEQ ID NO:27), VEPKSADKTHTCPPCP (SEQ ID NO:28), LEPKSADKTHTCPPCP (SEQ ID NO:29). LEPKSS (SEQ ID NO:27)가 클로닝을 용이하게 하기 위해 GGG 또는 GGC 대신 사용될 수 있다. 추가적으로, 아미노산 GGG, 또는 LEPKSS (SEQ ID NO:27)에는 대체 링커: GGGDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:21); 및 LEPKSSDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:30)를 형성하기 위하여 DKTHTCPPCP (SEQ ID NO:20)가 이어질 수 있다. 본 발명의 이중특이적 Fc 영역-함유 분자는 IgG 힌지 영역, 예컨대 인간 gG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체, 또는 이것들의 일부의 IgG 힌지 영역을 포함할 수 있다.
B. 바람직한 헤테로다이머-촉진 도메인
상기에서 지적된 것과 같이, 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자의 형성은 둘 이상의 상이한 폴리펩타이드 사슬의 어셈블리 (즉, 헤테로다이머화)를 포함한다. 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬의 헤테로다이머의 형성은 "헤테로다이머-촉진 도메인"의 포함에 의해 유도될 수 있다. 헤테로다이머-촉진 도메인은 한 폴리펩타이드 사슬 상의 IgG의 힌지 영역의 도메인 (또는 힌지 영역으로부터 유래된 폴리펩타이드, 예컨대 GVEPKSC (SEQ ID NO:31), VEPKSC (SEQ ID NO:32) 또는 AEPKSC (SEQ ID NO:33)) 또는 다른 폴리펩타이드 사슬 상의 CL 도메인 (또는 CL 도메인으로부터 유래된 폴리펩타이드, 예컨대 GFNRGEC (SEQ ID NO:34) 또는 FNRGEC (SEQ ID NO:35))일 수 있다 (US2007/0004909).
그러나, 보다 바람직하게, 본 발명의 헤테로다이머-촉진 도메인은 나란히 반복된 반대 전하의 코일 도메인을 포함할 것인데, 예를 들어 그것의 글루타메이트 잔기가 pH 7에서 음전하를 형성할 "E-코일" 나선형 도메인 (SEQ ID NO:36: E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K)과, 한편 헤테로다이머-촉진 도메인의 다른 것은 4개의 나란한 "K-코일" 도메인 (SEQ ID NO:37: K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E)을 포함할 것이고, 그것의 리신 잔기는 pH 7에서 양전하를 형성할 것이다. 이러한 대전된 도메인의 존재는 제1 및 제2 폴리펩타이드 사이의 회합을 촉진하고, 그로써 헤테로다이머화를 강화시킨다. 다른 바람직한 구체예에서, SEQ ID NO:36의 4개의 나란한 "E-코일" 나선형 도메인 중 하나가 시스테인 잔기를 함유하도록 변형되어 있는 헤테로다이머-촉진 도메인: E VAAC E K- E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K (SEQ ID NO:38)가 사용된다. 마찬가지로, 또 다른 바람직한 구체예에서, 4개의 나란한 "K-코일" 나선형 도메인 중 하나가 시스테인 잔기를 함유하도록 변형되어 있는 헤테로다이머-촉진 도메인: K VAAC K E- K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E (SEQ ID NO:39)가 사용된다.
C. 폴리펩타이드 사슬의 공유 결합
본 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 이것의 폴리펩타이드 사슬의 쌍이 공유적으로 회합된 분자 복합체를 생성하기 위하여 그것의 길이를 따라 위치한 하나 이상의 시스테인 잔기를 통해 서로에게 공유 결합되도록 조작된다. 이러한 시스테인 잔기는 폴리펩타이드의 VL 및 VH 도메인을 분리시키는 재개 링커에 도입될 수 있다. 대안적으로, 링커 2 또는 링커 3, 또는 대체 링커가 시스테인 잔기를 함유할 수 있다. 가장 바람직하게는, 코일-함유 헤테로다이머-촉진 도메인의 하나 이상의 코일 도메인이 SEQ ID NO:38 또는 SEQ ID NO:39에서와 같이 시스테인 잔기를 포함하는 아미노산 치환을 포함할 것이다.
D. 바람직한 Fc 도메인
본 발명의 Fc-포함 CD137 x TA 결합 분자의 Fc 도메인은 완전한 Fc 영역 (예컨대, 완전한 IgG Fc 영역) 또는 단지 완전한 Fc 영역의 단편만을 포함할 수 있다. 본 발명의 Fc-포함 CD137 x TA 결합 분자의 Fc 도메인은 그러므로 완전한 Fc 영역의 CH2 도메인의 일부 또는 전부 및/또는 CH3 도메인의 일부 또는 전부를 포함하거나, 또는 변종 CH2 및/또는 변종 CH3 서열 (예를 들어, 완전한 Fc 영역의 CH2 또는 CH3 도메인과 관련하여 하나 이상의 삽입 및/또는 하나 이상의 삭제를 포함할 수 있음)을 포함할 수 있다. 본 발명의 이중특이적 Fc 디아바디의 Fc 도메인은 비-Fc 폴리펩타이드 부분을 포함하거나, 또는 자연적으로 완전하지 않은 Fc 영역의 부분들을 포함하거나, 또는 CH2 및/또는 CH3 도메인의 자연적으로 발생하지 않는 방향을 포함할 수 있다 (예컨대, 2개의 CH2 도메인 또는 2개의 CH3 도메인, 또는 N-말단에서 C-말단 방향으로, CH2 도메인에 연결된 CH3 도메인, 등).
비록 본 발명의 Fc-포함 CD137 x TA 결합 분자의 Fc 도메인이 자연적으로 발생하는 FC 도메인의 아미노산 서열을 포함할 수 있을지라도, 이러한 Fc 도메인을 형성하는 CH2-CH3 도메인은 하나 이상의 치환을 포함하여서 결과적으로 얻어진 FC 도메인이 FcγRIA (CD64), FcγRIIA (CD32A), FcγRIIB (CD32B), FcγRIIIA (CD16a) 또는 FcγRIIIB (CD16b)에 대해 (야행셩 Fc 영역에 의해 나타난 결합과 비교하여) 감소된 (예컨대, 자연적으로 발생하는 Fc 영역의 아미노산 서열을 가지는 Fc 도메인을 갖는다면 이러한 분자에 의해 나타난 결합의 50% 미만, 40% 미만, 30% 미만, 20% 미만, 또는 10% 미만의) 결합을 나타내거나, 결합이 실질적으로 검출되지 않는 것이 바람직하다. 이러한 변경된 결합을 매개할 수 있는 Fc 변종 및 돌연변이 형태는 당업계에 잘 알려져 있고 234, 235, 265, 및 297로 이루어지는 군으로부터 선택된 하나 이상의 위치에서의 아미노산 치환을 포함하며, 이때 상기 넘버링은 Kabat에서와 같이 EU 인덱스의 넘버링이다 (예를 들어 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제 5,624,821호 참조). 한 구체예에서, 발명의 Fc-포함 분자의 제1 및/또는 제3 폴리펩타이드 사슬의 CH2-CH3 도메인은 치환: L234A, L235A, D265A, N297Q, 및 N297G 중 임의의 1, 2, 3, 또는 4개의 치환을 포함한다. 대안적으로, FcγRIIIA (CD16a)에 대해 감소된 (또는 실질적으로는 없는) 결합 및/또는 감소된 이펙터 기능 (야생형 IgG1 Fc 영역 (SEQ ID NO:12)에 의해 나타난 결합 및 이펙터 기능과 비교하여)을 고유하게 나타내는 자연적으로 발생하는 Fc 영역의 CH2-CH3 도메인이 사용된다. 특정 구체예에서, 본 발명의 Fc-포함 분자는 IgG2 Fc 영역 (SEQ ID NO:13) 또는 IgG4 Fc 영역 (SEQ ID:NO:15)을 포함한다. IgG4 Fc 영역이 사용될 때, 본 발명은 또한 안정화 돌연변이, 예컨대 상기 기술된 힌지 영역 S228P 치환 (예컨대, SEQ ID NO:11 참조)의 도입을 포함한다.
바람직한 구체예에서, 본 발명의 Fc-포함 CD137 x TA 결합 분자의 사용된 CH2-CH3 도메인은 위치 234에서 알라닌으로의 치환 및 235에서 알라닌으로의 치환을 포함하며, 여기서 상기 넘버링은 Kabat에서와 같이 EU 인덱스의 넘버링이다 (SEQ ID NO:40):
APE AA GGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK
PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT
LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL
TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG X
여기서, X는 리신 (K)이거나 없는 것이다.
Fc 영역을 포함하는 단백질의 혈청 반감기는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합 친화도를 증가시킴으로써 증가될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "반감기"는 분자의 투여 후 분자의 평균 생존 시간의 척도인 분자의 약물동역학적 특성을 의미한다. 반감기는 대상체의 신체 (예컨대, 인간 환자 또는 다른 포유류) 또는 그의 특정 구획으로부터의 분자의 알고 있는 양의 50 퍼센트 (50%)를 제거하기 위해 필요한 시간으로서, 예를 들어, 혈청에서, 즉 순환하는 반감기로, 또는 다른 조직에서 측정되는 바와 같이, 표시될 수 있다. 일반적으로, 반감기의 증가는 투여된 분자에 대한 순환에서의 평균 체류 시간 (MRT)의 증가를 초래한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 Fc-포함 CD137 x TA 결합 분자는 변종 Fc 영역을 포함하며, 여기서 상기 변종 Fc 영역은 야생형 Fc 영역에 비해 적어도 하나의 아미노산 변형을 포함하여서, 상기 분자는 (야생형 Fc 영역을 포함하는 분자에 비해) 증가된 반감기를 갖게 된다. 일부 구체예에서, 본 발명의 Fc-포함 CD137 x TA 결합 분자는 변종 Fc 영역을 포함하며, 여기서 상기 변종 Fc 영역은 반감기를 연장시키는 아미노산 치환을 포함한다. Fc-포함 분자의 반감기를 증가시킬 수 있는 수많은 아미노산 치환이 미국 특허 제 6,277,375호, 7,083,784호; 7,217,797호, 8,088,376호; 미국 특허출원 공개 번호 2002/0147311; 2007/0148164; 및 PCT 출원 공개 번호 WO 98/23289; WO 2009/058492; 및 WO 2010/033279에서 기술되며, 이 문헌들은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 증강된 반감기를 가진 Fc-포함 CD137 x TA 결합 분자는 T250Q, M252Y, S254T, T256E, K288D, T307Q, V308P, A378V, M428L, N434A, H435K, 및 Y436I로부터 선택된 두개 이상의 치환을 포함할 수 있고, 여기서 상기 넘버링은 Kabat에서와 같이 EU 인덱스의 넘버링이다.
특히, 사용된 CH2-CH3 도메인은 다음 치환을 포함할 수 있다:
(A) M252Y, S254T 및 T256E;
(B) M252Y 및 S254T;
(C) M252Y 및 T256E;
(D) T250Q 및 M428L;
(E) T307Q 및 N434A;
(F) A378V 및 N434A;
(G) N434A 및 Y436I;
(H) V308P 및 N434A; 또는
(I) K288D 및 H435K,
여기서 상기 넘버링은 Kabat에서와 같이 EU 인덱스의 넘버링이다.
CH2 및 CH3 도메인에 대한 바람직한 서열은 삼중 아미노산 치환: M252Y/S254T/T256E (YTE)을 포함하며, 이것은 IgG1 CH2-CH3 도메인의 변종인 SEQ ID NO:41 또는 SEQ ID NO:42에서와 같이, 또는 IgG4 CH2-CH3 도메인의 변종인 SEQ ID NO:43에서와 같이, 혈청 반감기를 상당히 증강시킨다 (Dall'Acqua, W.F. et al. (2006) "Properties of Human IgGs Engineered for Enhanced Binding to the Neonatal Fc Receptor (FcRn)", J. Biol. Chem. 281(33):23514-23524):
SEQ ID NO:41:
APELLGGPSV FLFPPKPKDT L Y I T R E PEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK
PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT
LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL
TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG X
여기서, X는 리신 (K)이거나 없는 것이다.
SEQ ID NO:42:
APE AA GGPSV FLFPPKPKDT L Y I T R E PEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK
PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT
LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL
TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG X
여기서, X는 리신 (K)이거나 없는 것이다.
SEQ ID NO:43:
APEFLGGPSV FLFPPKPKDT L Y I T R E PEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK
PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT
LPPSQEEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL
TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSLG X
여기서, X는 리신 (K)이거나 없는 것이다.
발명은 또한 NK 의존성 또는 대식세포 의존성 검정, 등에서 검정되는 바 변경된 이펙터 기능, 변경된 혈청 반감기, 변경된 안정성, 세포 효소들에 대한 변경된 민감성 또는 변경된 이펙터 기능을 나타내는 변종 Fc 도메인을 포함하는 Fc-포함 CD137 x TA 결합 분자를 포함한다. 활성화 수용체 (예컨대, FcγRIIA (CD16A))에 대한 결합을 증가시키고 억제성 수용체 (예컨대, FcγRIIB (CD32B))에 대한 결합을 감소시키는 변형을 포함하여, 이펙터 기능을 변경시키는 것으로서 확인된 Fc 도메인 변형은 당업계에 알려져 있다 (예컨대, Stavenhagen, J.B. et al. (2007) "Fc Optimization Of Therapeutic Antibodies Enhances Their Ability To Kill Tumor Cells In Vitro And Controls Tumor Expansion In Vivo Via Low-Affinity Activating Fcgamma Receptors", Cancer Res. 57(18):8882-8890 참조). CD32B에 대한 감소된 결합 및/또는 CD16A에 대한 증가된 결합을 가진 인간 IgG1 Fc 도메인의 예시적인 변종은 F243L, R292P, Y300L, V305I 또는 P296L 치환을 함유한다. 이들 아미노산 치환은 인간 IgG1 Fc 도메인에 임의의 조합으로 존재할 수 있다. 한 구체예에서, 인간 IgG1 Fc 도메인 변종은 F243L, R292P 및 Y300L 치환을 함유하며, 여기서 상기 넘버링은 Kabat에서와 같이 EU 인덱스의 넘버링이다. 다른 구체예에서, 인간 IgG1 Fc 도메인 변종은 F243L, R292P, Y300L, V305I 및 P296L 치환을 포함하고, 여기서 상기 넘버링은 Kabat에서와 같이 EU 인덱스의 넘버링이다.
본 발명의 CD137 x TA 결합 분자의 CH2 및/또는 CH3 도메인은 서열이 동일할 필요는 없고, 유리하게 두개의 CH2-CH3-포함 폴리펩타이드 사슬 사이의 헤테로다이머화를 촉진하기 위해 변형된다. 예를 들어, 아미노산 치환 (바람직하게 "놉(knob)"을 형성하는 벌키한 측쇄를 포함하는 아미노산, 예컨대 트립토판으로의 치환)은 CH2 또는 CH3 도메인에 도입되어 입체적인 간섭이 유사하게 돌연변이된 도메인과의 상호작용을 방지하게 될 것이고 돌연변이된 도메인이 그것과 상보하는, 또는 조작된 돌연변이를 수용하는 도메인, 즉 "구멍(hole)"과 쌍을 이루는 것을 강요하게 될 것이다 (예컨대, 글리신으로의 치환). 이러한 돌연변이 세트는 이중특이적 Fc-포함 디아바디 분자를 포함하는 폴리펩타이드의 임의의 쌍으로 조작되고, 추가로 상기쌍의 폴리펩타이드 사슬의 임의의 부분으로 조작될 수 있다. 호모다이머화를 뛰어넘는 헤테로다이머화를 선호하게 하는 단백질 조작 방법은, 특히 면역글로불린-유사 분자의 조작과 관련하여 당업계에 잘 알려져 있고, 본원에 포함된다 (예컨대, Ridgway et al. (1996) "'Knobs-Into-Holes' Engineering Of Antibody CH3 Domains For Heavy Chain Heterodimerization", Protein Engr. 9:617-621, Atwell et al. (1997) "Stable Heterodimers From Remodeling The Domain Interface Of A Homodimer Using A Phage Display Library", J. Mol. Biol. 270: 26-35, 및 Xie et al. (2005) "A New Format Of Bispecific Antibody: Highly Efficient Heterodimerization, Expression And Tumor Cell Lysis", J. Immunol. Methods 296:95-101; 이들 문헌은 각각 그 전문이 본원에 참조로 포함됨). 한 구체예에서, 놉은 제1 폴리펩타이드 사슬의 CH2-CH3 도메인 안으로 조작되고 홀은 제3 폴리펩타이드 사슬의 CH2-CH3 도메인 안으로 조작된다. 그러므로, 놉은 제1 폴리펩타이드 사슬의 두 분자가 그것들의 CH2 및/또는 CH3 도메인을 통해 호모다이머화되는 것을 방지하는 것을 돕는다. 이 구체예의 제3 폴리펩타이드 사슬이 바람직하게 홀 치환을 함유하기 때문에 그것은 자체로 호모다이머화되는 능력뿐만 아니라 제1 폴리펩타이드 사슬과 헤테로다이머화되는 능력을 가질 것이다 (그러나, 이런 호모다이머화는 에피토프-결합 부위를 가지는 분자를 형성하지 않는다). 바람직한 놉은 천연 IgG Fc 도메인을 변형 T366W를 함유하도록 변형시킴으로써 생성된다. 바람직한 구멍은 천연 IgG Fc 도메인을 변형 T366S, L368A 및 Y407V를 함유하도록 변형시킴으로써 생성된다. 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬의 헤테로다이머를 포함하는 최종 이중특이적 Fc-포함 디아바디로부터 제3 폴리펩타이드 사슬 호모다이머를 정제하는 것을 보조하기 위하여, 제3 폴리펩타이드 사슬의 CH2 및 CH3 도메인의 단백질 A 결합 부위는 바람직하게 위치 435에서의 아미노산 치환 (H435R)에 의해 돌연변이된다. 그러므로, 제3 폴리펩타이드 사슬 호모다이머는 단백질 A에 결합하지 않을 것인 반면, 적절하게 어셈블링된 이중특이적 Fc-포함 디아바디는 제1 폴리펩타이드 사슬 상의 단백질 A 결합 부위를 통해 단백질 A에 결합하는 능력을 보유할 것이다.
SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:45 및 SEQ ID NO:46은 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자에 사용될 수 있는 "놉-포함" CH2 및 CH3 도메인에 대한 예시의 바람직한 서열을 제공한다:
SEQ ID NO:44:
APE AA GGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK
PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT
LPPSREEMTK NQVSL W C L VK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFL Y SKL
TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHN H YTQKS LSLSPGX
여기서, X는 리신 (K)이거나 없는 것이고,
SEQ ID NO:45:
APEFLGGPSV FLFPPKPKDT LYITREPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK
PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT
LPPSQEEMTK NQVSLWC L VK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL
TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSLGX
여기서, X는 리신 (K)이거나 없는 것이며,
SEQ ID NO:46:
APE AA GGPSV FLFPPKPKDT L Y I T R E PEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK
PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT
LPPSREEMTK NQVSL W C L VK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL
TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG X
여기서, X는 리신 (K)이거나 없는 것이다.
SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:48 및 SEQ ID NO:49는 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자에 사용될 수 있는 "구멍-포함" CH2 및 CH3 도메인에 대한 예시의 바람직한 서열을 제공한다:
SEQ ID NO:47:
APE AA GGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK
PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT
LPPSREEMTK NQVSL S C A VK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFL V SKL
TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHN R YTQKS LSLSPG X
여기서, X는 리신 (K)이거나 없는 것이고,
SEQ ID NO:48:
APEFLGGPSV FLFPPKPKDT L Y I T R E PEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK
PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT
LPPSQEEMTK NQVSL S CA V K GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFL V SRL
TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE ALHN R YTQKS LSLSLG X
여기서, X는 리신 (K)이거나 없는 것이며,
SEQ ID NO:49:
APEAAGGPSV FLFPPKPKDT LYITREPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK
PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT
LPPSREEMTK NQVSLSCAVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLVSKL
TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNRYTQKS LSLSPG X
여기서, X는 리신 (K)이거나 없는 것이다.
주지되는 바와 같이, SEQ ID NO:45 및 48의 CH2-CH3 도메인은 IgG4 도메인인 한편, SEQ ID NO:44, 46 47 및 49의 CH2-CH3 도메인은 IgG1 도메인이다. SEQ ID NO:44, 46 47 및 49는 (야생형 Fc 영역 (SEQ ID NO:12)에 의해 나타난 결합에 비하여) 감소된 (또는 실질적으로는 없는) FcγRIA (CD64), FcγRIIA (CD32A), FcγRIIB (CD32B), FcγRIIIA (CD16a) 또는 FcγRIIIB (CD16b)에 대한 결합을 나타내는 Fc 도메인을 형성한다. 나아가, 본 발명에 의해 구체적으로 포함되는 것은 상기 표시된 C-말단 리신 잔기가 없는 CD137 x TA 결합 분자 구성물이다.
상기 기술된 구체예에서, 제1 폴리펩타이드 사슬은 "놉-포함" CH2-CH3 서열, 예컨대 SEQ ID NO:44의 서열을 가질 것이다. 그러나, 앞으로 인지하게 되는 것과 같이, "구멍-포함" CH2-CH3 도메인 (예컨대, SEQ ID NO:47)은 제1 폴리펩타이드 사슬에 사용될 수 있을 것이고, 그 경우에, "놉-포함" CH2-CH3 도메인 (예컨대, SEQ ID NO:44)은 제3 폴리펩타이드 사슬에 사용될 수 있을 것이다.
E. 알부민-결합 도메인
WO 2012/018687에서 개시되는 바, 디아바디의 생체내 약물동역학적 특성을 개선하기 위해서는, 디아바디는 디아바디의 하나 이상의 말단에서 혈청-결합 단백질의 폴리펩타이드 부분을 함유하도록 변형될 수 있다. 이러한 고려사항은 또한 본 발명의 삼중특이적 결합 분자에도 적용될 수 있다. 가장 바람직하게, 혈청-결합 단백질의 폴리펩타이드 부분이 본 발명의 삼중특이적 결합 분자에 통합되는 것이 요구될 때, 이러한 폴리펩타이드 부분은 삼중특이적 결합 분자의 폴리펩타이드 사슬 중 하나의 C-말단에서 있게 될 것이다.
알부민은 혈장에서 가장 풍부한 단백질이고 인간에서 19일의 반감기를 가진다. 알부민은 다른 단백질에 비공유적으로 결합하는 것을 허용하고 그로써 혈청 반감기를 연장시키는 여러 개의 작은 분자 결합 부위를 가진다. 스트렙토코쿠스 균주 G418의 단백질 G의 알부민-결합 도메인 3 (ABD3)은 안정적인 3-헬릭스 번들을 형성하는 46개의 아미노산 치환 잔기로 구성되고 넓은 알부민-결합 특이성을 가진다 (Johansson, M.U. et al. (2002) "Structure, Specificity, And Mode Of Interaction For Bacterial Albumin-Binding Modules", J. Biol. Chem. 277(10):8114-8120. 그러므로, 디아바디의 생체내 약물동역학적 특성을 개선하기 위한 혈청-결합 단백질의 특히 바람직한 폴리펩타이드 부분은 스트렙토코쿠스 단백질 G로부터의 알부민-결합 도메인 (ABD)이고, 보다 바람직하게는 스트렙토코쿠스 균주 G418의 단백질 G의 알부민-결합 도메인 3 (ABD3) (SEQ ID NO:50): LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNLIDNAKS AEGVKALIDE ILAALP이다.
WO 2012/162068 (본원에 참조로 포함됨)에서 개시되는 바와 같이, SEQ ID NO:50의 "탈면역화된" 변종은 MHC 클래스 II 결합을 약화시키거나 제거하는 능력을 가진다. 조합된 돌연변이 결과를 기준으로, 다음의 치환의 조합이 이러한 탈면역화된 알부민-결합 도메인을 형성하기에 바람직한 치환인 것으로 여겨진다: 66S/70S +71A; 66S/70S +79A; 64A/65A/71A+66S; 64A/65A/71A+66D; 64A/65A/71A+66E; 64A/65A/79A+66S; 64A/65A/79A+66D; 64A/65A/79A+66E. 변종 ABD는 변형 L64A, I65A 및 D79A 또는 변형 N66S, T70S 및 D79A를 가진다. 이러한 탈면역화된 알부민-결합 도메인이 실질적으로 야생형 결합을 나타내는 한편 약화된 MHC 클래스 II 결합을 제공하기 때문에 SEQ ID NO:51, 52 또는 53의 아미노산 서열을 가지는 변종 탈면역화된 ABD가 특히 바람직하다:
SEQ ID NO: NO:51:
LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNLI D 66NAK S 70 A 71EGVKALIDE ILAALP
SEQ ID NO: NO:52:
LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKN A 64 A 65NNAKT VEGVKALI A 79E ILAALP
SEQ ID NO: NO:53:
LAEAKVLANR ELDKYGVSDY YKNLI S 66NAK S 70 VEGVKALI A 79E ILAALP
비록 이러한 알부민-결합 도메인이 본 발명의 삼중특이적 결합 분자의 임의의 폴리펩타이드 사술에 포함될 수 있을지라도, 이러한 도메인을 제1 또는 제3 폴리펩타이드 사슬의 E-코일 (또는 K-코일) 도메인에 대해 C-말단쪽으로 위치시키는 것이 바람직하다 (E-코일 (또는 K-코일) 도메인과 알부민-결합 도메인 (바람직하게 탈면역화된 알부민-결합 도메인임) 사이에 개재하는 링커를 통해). 이러한 링커의 바람직한 서열은 SEQ ID NO:26: GGGS이다.
F. 바람직한 종양 항원 (TA) 및 예시의 가변 도메인
본 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 종양 항원의 에피토프에 특이적인 적어도 하나의 에피토프-결합 부위를 포함한다. 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자에 의해 결합될 수 있는 종양 항원 ("TA")의 예로는, 한정하는 것은 아니지만 다음의 것들을 포함한다: 결장암 항원 19.9; 종양태아성 단백질 5T4; 위암 뮤신 항원 4.2; 대장 암종 항원 A33 (Almqvist, Y. 2006, Nucl Med Biol. Nov;33(8):991-998); ADAM-9 (미국 특허출원 공개 번호 2006/0172350; PCT 출원 공개 번호 WO 06/084075; AFP 종양태아성 항원-알파-태아단백질 (Malaguarnera, G. et al. (2010) "Serum markers of hepatocellualr carcinoma", Dig. Dis. Sci. 55(10):2744-2755); ALCAM (PCT 출원 공개 번호 WO 03/093443); BAGE (Bodey, B. 2002 Expert Opin Biol Ther. 2(6):577-84); 베타-카테닌 (Prange W. et al. 2003 J Pathol. 201(2):250-9); CA125 (Bast, R.C. Jr. et al. 2005 Int J Gynecol Cancer 15 Suppl 3:274-81); 카르복시펩티다아제 M (미국 특허출원 공개 번호 2006/0166291); B1 (Egloff, A.M. et al. 2006, Cancer Res. 66(1):6-9); CD5 (Calin, G.A. et al. 2006 Semin Oncol. 33(2):167-73; CD19 (Troussard, X. et al. 1998 Hematol Cell Ther. 40(4):139-48); CD20 (Thomas, D.A. et al. 2006 Hematol Oncol Clin North Am. 20(5):1125-36); CD20 (Cang, S. et al. (2012) "Novel CD20 Monoclonal Antibodies For Lymphoma Therapy", J. Hematol. Oncol. 5:64 pp.1-9); CD22 (Kreitman, R.J. 2006 AAPS J. 18;8(3):E532-51); CD23 (Rosati, S. et al. 2005 Curr Top Microbiol Immunol. 5;294:91-107); CD25 (Troussard, X. et al. 1998 Hematol Cell Ther. 40(4):139-48); CD27 (Bataille, R. 2006 Haematologica 91(9):1234-40); CD28 (Bataille, R. 2006 Haematologica 91(9):1234-40); CD30 (Muta, H. et al. (2013) "CD30: From Basic Research To Cancer Therapy", Immunol. Res. 57(1-3):151-158); CD33 (Walter, R.B. et al. (2012) "Acute myeloid leukemia stem cells and CD33-targeted immunotherapy", Blood 119(26):6198-6208); CD36 (Ge, Y. 2005 Lab Hematol. 11(1):31-7); CD40/CD154 (Messmer, D. et al. 2005 Ann N Y Acad Sci. 1062:51-60); CD45 (Jurcic, J.G. 2005 Curr Oncol Rep. 7(5):339-46); CD56 (Bataille, R. 2006 Haematologica 91(9):1234-40); CD46 (미국 특허 제 7,148,038호; PCT 출원 공개 번호 WO 03/032814; Russell, S. et al. (2004) "CD46: A Complement Regulator And Pathogen Receptor That Mediates Links Between Innate And Acquired Immune Function", Tissue Antigens 64(2):111-118); CD52 (Hoelzer, D. et al. (2013) "Targeted therapy with monoclonal antibodies in acute lymphoblastic leukemia", Curr. Opin. Oncol. 25(6):701-706); CD79a/CD79b (Troussard, X. et al. 1998 Hematol Cell Ther. 40(4):139-48; Chu, P.G. et al. 2001 Appl Immunohistochem Mol Morphol. 9(2):97-106); CD103 (Troussard, X. et al. 1998 Hematol Cell Ther. 40(4):139-48); CD123 (Taussig, D. et al. (2005) "Hematopoietic Stem Cells Express Multiple Myeloid Markers: Implications For The Origin And Targeted Therapy Of Acute Myeloid Leukemia", Blood　106:4086-4092); CD317 (Palma, G. et al. (2012) "Plasmacytoids Dendritic Cells Are A Therapeutic Target In Anticancer Immunity", Biochim. Biophys. Acta. 1826(2):407-414; CDK4 (Lee, Y.M. et al. 2006 Cell Cycle 5(18):2110-4); CEA (암종배아 항원; Mathelin, C. 2006 Gynecol Obstet Fertil. 34(7-8):638-46; Tellez-Avila, F.I. et al. 2005 Rev Invest Clin. 57(6):814-9); CEACAM5 및 CEACAM6 (PCT 출원 공개 번호 WO 2011/034660; Zheng, C. et al. (2011) "A Novel Anti-CEACAM5 Monoclonal Antibody, CC4, Suppresses Colorectal Tumor Growth and Enhances NK Cells-Mediated Tumor Immunity", PLoS One 6(6):e21146, pp. 1-11); CO17-1A (Adkins, J.C. et al. (1998) "Edrecolomab (Monoclonal Antibody 17-1A)", Drugs 56(4):619-626; CO-43 (혈액군 Leb) 및 CO-514 (혈액군 Lea) (Garratty, G. (1995) "Blood Group Antigens As Tumor Markers, Parasitic/Bacterial/Viral Receptors, And Their Association With Immunologically Important Proteins", Immunol. Invest. 24(1-2):213-232; CTLA-1 및 CTLA-4 (Peggs, K.S. et al. 2006 Curr Opin Immunol. 18(2):206-13); 사이토케라틴 8 (PCT 출원 공개 번호 WO 03/024191); 항원 D1.1 (Dao, T. et al. (2009) "Identification Of A Human Cyclin D1-Derived Peptide That Induces Human Cytotoxic CD4 T Cells", PLoS One. 4(8):e6730); DR5 (Abdulghani, J. et al. (2010) "TRAIL Receptor Signaling And Therapeutics", Expert Opin. Ther. Targets 14(10):1091-1108; Andera, L. (2009) "Signaling Activated By The Death Receptors Of The TNFR Family", Biomed. Pap. Med. Fac. Univ. Palacky Olomouc Czech. Repub. 153(3):173-180; Carlo-Stella, C. et al. (2007) "Targeting TRAIL Agonistic Receptors for Cancer Therapy", Clin, Cancer 13(8):2313-2317; Chaudhari, B.R. et al. (2006) "Following the TRAIL to Apoptosis", Immunologic Res. 35(3):249-262); E1 시리즈 (혈액군 B); EGF-R (표피 성장 인자 수용체; Adenis, A. et al. 2003 Bull Cancer. 90 Spec No:S228-32); 에프린 수용체 (및 특히 EphA2 (미국 특허 제 7,569,672호; PCT 출원 공개 번호 WO 06/084226); Erb (ErbB1; ErbB3; ErbB4; Zhou, H. et al. 2002 Oncogene 21(57):8732-40; Rimon, E. et al. 2004 Int J Oncol. 24(5):1325-38); 폐 선암종 항원 F3 (Greulich, H. et al. (2012) "Functional analysis of receptor tyrosine kinase mutations in lung cancer identifies oncogenic extracellular domain mutations of ERBB2", Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 109(36):14476-14481); 항원 FC10.2 (Loveless, W. et al. (1990) "Developmental Patterning Of The Carbohydrate Antigen FC10.2 During Early Embryogenesis In The Chick", Development 108(1):97-106); GAGE (GAGE-1; GAGE-2; Akcakanat, A. et al. 2006 Int J Cancer. 118(1):123-8); GD2/GD3/GD49/GM2/GM3 (Livingston, P.O. et al. 2005 Cancer Immunol Immunother. 54(10):1018-25); GICA 19-9 (Herlyn et al. (1982) "Monoclonal Antibody Detection Of A Circulating Tumor-Associated Antigen. I. Presence Of Antigen In Sera Of Patients With Colorectal, Gastric, And Pancreatic Carcinoma", J. Clin. Immunol. 2:135-140); gp37 (human leukemia T 세포 antigen ((Bhattacharya-Chatterjee et al. (1988) "Idiotype Vaccines Against Human T Cell Leukemia. II. Generation And Characterization Of A Monoclonal Idiotype Cascade (Ab1, Ab2, and Ab3)", J. Immunol. 141:1398-1403); gp75 (흑색종 항원) (Vijayasardahl et al. (1990) "The Melanoma Antigen Gp75 Is The Human Homologue Of The Mouse B (Brown) Locus Gene Product", J. Exp. Med. 171(4):1375-1380); gp100 (Lotem, M. et al. 2006 J Immunother. 29(6):616-27); HER-2/neu (Kumar, Pal S et al. 2006 Semin Oncol. 33(4):386-91); 인간 B-림프종 항원-CD20 (Reff et al. (1994) "Depletion Of B Cells In Vivo By A Chimeric Mouse Human Monoclonal Antibody To CD20", Blood 83:435-445); 인간 유지방 구상체 항원; 인간 유두종바이러스-E6/인간 유두종바이러스-E7 (DiMaio, D. et al. 2006 Adv Virus Res. 66:125-59; HMW-MAA (고분자량 흑색종 항원) (Natali et al. (1987) "Immunohistochemical Detection Of Antigen In Human Primary And Metastatic Melanomas By The Monoclonal Antibody 140.240 And Its Possible Prognostic Significance", Cancer 59:55-63; Mittelman et al. (1990) "Active Specific Immunotherapy In Patients With Melanoma. A Clinical Trial With Mouse Antiidiotypic Monoclonal Antibodies Elicited With Syngeneic Anti-High-Molecular-Weight-Melanoma-Associated Antigen Monoclonal Antibodies", J. Clin. Invest. 86:2136-2144); I 항원 (분화 항원) (Feizi (1985) "Demonstration By Monoclonal Antibodies That Carbohydrate Structures Of Glycoproteins And Glycolipids Are Onco-Developmental Antigens", Nature 314:53-57), 예컨대 위 선암종에서 발견되는 I(Ma); 인티그린 알파-V-베타-6 인티그린β6 (ITGB6) (PCT 출원 공개 번호 WO 03/087340); JAM-3 (PCT 출원 공개 번호 WO 06/084078); 인터류킨-13 수용체 α2 (IL13Rα2) (Bodhinayake, I. et al. (2014) "Targeting A Heterogeneous Tumor: The Promise Of The Interleukin-13 Receptor α2", Neurosurgery 75(2):N18-9); JAM-3 (PCT 출원 공개 번호 WO 06/084078); KID3 (PCT 출원 공개 번호 WO 05/028498); KID31 (PCT 출원 공개 번호 WO 06/076584); KS 1/4 pan-암종 항원 (Perez et al. (1989) "Isolation And Characterization Of A cDNA Encoding The Ks1/4 Epithelial Carcinoma Marker", J. Immunol. 142:3662-3667; Mφller et al. (1991) "Bispecific-Monoclonal-Antibody-Directed Lysis Of Ovarian Carcinoma Cells By Activated Human T Lymphocytes", Cancer Immunol. Immunother. 33(4):210-216; Ragupathi, G. 2005 Cancer Treat Res. 123:157-80); KS 1/4 pan-carcinoma antigen (Perez et al. (1989) "Isolation And Characterization Of A cDNA Encoding The Ks1/4 Epithelial Carcinoma Marker", J. Immunol. 142:3662-3667; Moller et al. (1991) "Bispecific-Monoclonal-Antibody-Directed Lysis Of Ovarian Carcinoma Cells By Activated Human T Lymphocytes", Cancer Immunol. Immunother. 33(4):210-216; Ragupathi, G. 2005 Cancer Treat Res. 123:157-80); KSA (17-1A) (Ragupathi, G. 2005 Cancer Treat Res. 123:157-80); 인간 폐 암종 항원 L6 및 L20 (Hellstrom et al. (1986) "Monoclonal Mouse Antibodies Raised Against Human Lung Carcinoma", Cancer Res. 46:3917-3923); LEA (Velazquez-Marquez, N. et al. (2012) "Sialyl Lewis x expression in cervical scrapes of premalignant lesions", J. Biosci. 37(6):999-1004); LUCA-2 (미국 특허출원 공개 번호 2006/0172349; PCT 출원 공개 번호 WO 06/083852); M1:22:25:8, M18, M39 (Cambier, L. et al. (2012) "M19 Modulates Skeletal Muscle Differentiation And Insulin Secretion In Pancreatic B-Cells Through Modulation Of Respiratory Chain Activity", PLoS One 7(2):e31815; Pui, C.H. et al. (1991) "Characterization of childhood acute leukemia with multiple myeloid and lymphoid markers at diagnosis and at relapse", Blood 78(5):1327-1337); MAGE (MAGE-1; MAGE-3; (Bodey, B. 2002 Expert Opin Biol Ther. 2(6):577-84); MART (Kounalakis, N. et al. 2005 Curr Oncol Rep. 7(5):377-82; Myl, MUC-1 (Mathelin, C. 2006 Gynecol Obstet Fertil. 34(7-8):638-46); MUM-1 (Castelli, C. et al. 2000 J Cell Physiol. 182(3):323-31); N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 (Dennis, J.W. 1999 Biochim Biophys Acta. 6;1473(1):21-34); 네오당단백질 (Legendre, H. et al. (2004) "Prognostic Stratification Of Dukes B Colon Cancer By A Neoglycoprotein", Int. J. Oncol. 25(2):269-276); NS-10; OFA-1 및 OFA-2 (Takahashi, M. (1984) "A Study On Clinical Significance Of Oncofetal Antigen-1 In Gynecologic Tumors", Nihon Sanka Fujinka Gakkai Zasshi. 36(12):2613-2618); 온코스타틴 M (온코스타틴 수용체 베타) (미국 특허 제 7,572,896; PCT 출원 공개 번호 WO 06/084092); p15 (Gil, J. et al. 2006 Nat Rev Mol Cell Biol. 7(9):667-77); PSA (전립선 특이적 항원; Cracco, C.M. et al. 2005 Minerva Urol Nefrol. 57(4):301-11); PSMA (Ragupathi, G. 2005 Cancer Treat Res. 123:157-80); PEMA (다형태성 상피 뮤신 항원) (Chu, N.J. et al. (2015) "Nonviral Oncogenic Antigens and the Inflammatory Signals Driving Early Cancer Development as Targets for Cancer Immunoprevention", Clin. Cancer Res. 21(7):1549-1557); PIPA (미국 특허 제 7,405,061; PCT 출원 공개 번호 WO 04/043239); 전립선 산 포스페이트 (Tailor et al. (1990) "Nucleotide Sequence Of Human Prostatic Acid Phosphatase Determined From A Full-Length cDNA Clone", Nucl. Acids Res. 18(16):4928); R24 (Zhou, M. et al. (2008) "Constitutive Overexpression Of A Novel 21 Kda Protein By Hodgkin Lymphoma And Aggressive Non-Hodgkin Lymphomas", Mol. Cancer 7:12); ROR1 (미국 특허 제 5,843,749호); Rabbani, H. et al. (2010) "Expression Of ROR1 In Patients With Renal Cancer--A Potential Diagnostic Marker", Iran Biomed. J. 14(3):77-82); 스핑고지질 (Hakomori, S. (1998) "Cancer-Associated Glycosphingolipid Antigens: Their Structure, Organization, And Function", Acta Anat. (Basel) 161(1-4):79-90; SSEA-1, SSEA-3 및 SSEA-4 (Muramatsu, T. et al. (2004) "Carbohydrate Antigens Expressed On Stem Cells And Early Embryonic Cells", Glycoconj. J. 21(1-2):41-45); sTn (Holmberg, L.A. 2001 Expert Opin Biol Ther. 1(5):881-91); T 세포 수용체 유래 펩타이드 (Edelson (1998) "Cutaneous T-Cell Lymphoma: A Model For Selective Immunotherapy", Cancer J Sci Am. 4:62-71); T5A7 (Hogg, R.J. et al. (1991) "A monoclonal antibody exhibiting reactivity with both X-hapten- and lactose-bearing glycolipids", Tissue Antigens 37(1):33-38); TAG-72 (Yokota et al. (1992) "Rapid Tumor Penetration Of A Single-Chain Fv And Comparison With Other Immunoglobulin Forms", Cancer Res. 52:3402-3408); TL5 (혈액군 A) (Gooi, H.C. et al. (1983) "Monoclonal antibody reactive with the human epidermal-growth-factor receptor recognizes the blood-group-A antigen", Biosci. Rep. 3(11):1045-1052); TNF-수용체 (TNF-α 수용체, TNF-β 수용체; 또는 TNF-γ 수용체 (van Horssen, R. et al. 2006 Oncologist. 11(4):397-408; Gardnerova, M. et al. 2000 Curr Drug Targets. 1(4):327-64); TRA-1-85 (blood group H) (Williams, B.P. et al. (1988) "Biochemical and genetic analysis of the OKa blood group antigen", Immunogenetics 27(5):322-329); 트랜스페린 수용체 (미국 특허 제 7,572,895호; PCT 출원 공개 번호 WO 05/121179); TSTA 종양-특이적 이식 항원 (Hellstrφm et al. (1985) "Monoclonal Antibodies To Cell Surface Antigens Shared By Chemically Induced Mouse Bladder Carcinomas", Cancer. Res. 45:2210-2188); VEGF-R (O'Dwyer. P.J. 2006 Oncologist. 11(9):992-8); 및 Y 합텐, Ley (Durrant, L.G. et al. (1989) "Development Of An ELISA To Detect Early Local Relapse Of Colorectal Cancer", Br. J. Cancer 60(4):533-537).
이러한 종양 항원들을 인식하는 항체들은 업계에 알려져 있거나 잘 알려진 방법, 이를테면 WO 2002/014870에 기술되어 있는 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 종양 항원에 결합할 수 있는 VL 및 VH 도메인을 포함하는 예시의 항체, 및 그것들의 서열 또는 폴리펩타이드 사슬은 따라서 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자의 구성에 사용될 수 있고, 하기 표 1에 열거된다. 여러 종양 항원에 결합하는 항체들에 대한 예시의 VH 및 VL 도메인이 하기에 제시된다.
항체 명칭 종양 항원(들) 치료 표적 적용
3F8 Gd2 신경모세포종
8H9 B7-H3 신경모세포종, 육종, 전이성 뇌암
아바고보맙(Abagovomab) CA-125 난소암
아데카투무맙(Adecatumumab) Epcam 전립선암 및 유방암
아푸투주맙(Afutuzumab) CD20 림프종
알라시주맙(Alacizumab) VEGFR2 암
알투모맙(Altumomab) CEA 대장암
아마툭시맙(Amatuximab) 메소텔린 암
아나투모맙 마페나톡스(Anatumomab Mafenatox) TAG-72 비소세포 폐 암종
아니프롤루맙(Anifrolumab) 인터페론 A/B 수용체 전신성 홍반 루푸스
안루킨주맙(Anrukinzumab) IL-13 암
아폴리주맙(Apolizumab) HLA-DR 혈액암
아르시투모맙(Arcitumomab) CEA 위장암
아티누맙(Atinumab) RTN4 암
벡투모맙(Bectumomab) CD22 비-호지킨 림프종 (검출)
벨리무맙(Belimumab) BAFF 비-호지킨 림프종
베바시주맙(Bevacizumab) VEGF-A 전이성 암, 미숙아 망막병증
비바투주맙(Bivatuzumab ) CD44 V6 편평 세포 암종
블리나투모맙(Blinatumomab) CD19 암
브렌툭시맙(Brentuximab) CD30 (TNFRSF8) 혈액암
칸투주맙(Cantuzumab) MUC1 암
칸투주맙 메르탄신(Cantuzumab Mertansine) 뮤신 Canag 대장암
카플라시주맙(Caplacizumab) VWF 암
카프로맙(Capromab) 전립선 암종 세포 전립선암 (검출)
카를루맙(Carlumab) MCP-1 종양학/면역 적응증
카투막소맙(Catumaxomab) Epcam, CD3 난소암, 악성 복수, 위암
Cc49 Tag-72 종양 검출
세툭시맙(Cetuximab) EGFR 전이성 대장암 및 두경부암
Ch.14.18 측정되지 않음 신경모세포종
시타투주맙(Citatuzumab) Epcam 난소암 및 기타 고체 종양
식수투무맙(Cixutumumab) IGF-1 수용체 고체 종양
클리바투주맙(Clivatuzumab ) MUC1 췌장암
코나투무맙(Conatumumab) TRAIL-R2 암
다세투주맙(Dacetuzumab) CD40 혈액암
달로투주맙(Dalotuzumab) 인슐린-유사 성장 인자 I 수용체 암
다라투무맙(Daratumumab) CD38 암
뎀시주맙(Demcizumab) DLL4 암
데투모맙(Detumomab) B-림프종 세포 림프종
드로지투맙(Drozitumab) DR5 암
둘리고투맙(Duligotumab) HER3 암
두시기투맙(Dusigitumab) ILGF2 암
에크로멕시맙(Ecromeximab) GD3 강글리오시드 악성 흑색종
에쿨리주맙(Eculizumab) C5 발작성 야간 혈색소뇨증
에드레콜로맙(Edrecolomab) Epcam 대장 암종
엘로투주맙(Elotuzumab) SLAMF7 다발성 골수종
엘실리모맙(Elsilimomab) IL-6 암
에나바투주맙(Enavatuzumab) TWEAK 수용체 암
엔리모맙(Enlimomab) ICAM-1 (CD54) 암
에노키주맙(Enokizumab) IL9 천식
에노티쿠맙(Enoticumab) DLL4 암
엔시툭시맙(Ensituximab) 5AC 암
에피투모맙 시툭세탄(Epitumomab Cituxetan) 에피시알린 암
에프라투주맙(Epratuzumab) CD22 암, SLE
에르투막소맙(Ertumaxomab) HER2/Neu, CD3 유방암
에타라시주맙(Etaracizumab) 인티그린 Avβ3 흑색종, 전립선암, 난소암
파랄리모맙(Faralimomab) 인터페론 수용체 암
파를레투주맙(Farletuzumab) 엽산 수용체 1 난소암
파시누맙(Fasinumab) HNGF 암
Fbta05 CD20 만성 림프구성 백혈병
피클라투주맙(Ficlatuzumab) HGF 암
피기투무맙(Figitumumab) IGF-1 수용체 부신피질 암종, 비-소세포 폐 암종
플란보투맙(Flanvotumab) TYRP1 (당단백질 75) 흑색종
폰톨리주맙(Fontolizumab) IFN-γ 크론병
프레솔리무맙(Fresolimumab) TGF-B 특발성 폐 섬유증, 국소 분절 사구체경화증, 암
푸툭시맙(Futuximab) EGFR 암
갈릭시맙(Galiximab) CD80 B 세포 림프종
가니투맙(Ganitumab) IGF-I 암
겜투주맙 오조가미신(Gemtuzumab Ozogamicin) CD33 급성 골수성 백혈병
게보키주맙(Gevokizumab) IL-1β 당뇨병
기렌툭시맙(Girentuximab) 탄산 탈수효소 9 (CA-IX) 투명 세포 신장 세포 암종
글렘바투무맙 베도틴(Glembatumumab Vedotin) GPNMB 흑색종, 유방암
골리무맙(Golimumab) TNF-A 류머티스양 관절염, 건선성 관절염, 강직성 척추염
이브리투모맙 티욱세탄(Ibritumomab Tiuxetan) CD20 비-호지킨 림프종
이크루쿠맙(Icrucumab) VEGFR-1 암
이고보맙(Igovomab) CA-125 난소암 (진단)
Imab362 Cldn18.2 위장 선암종 및 췌장 종양
임가투주맙(Imgatuzumab) EGFR 암
인클라쿠맙(Inclacumab) 셀렉틴 P 암
인다툭시맙 라브탄신(Indatuximab Ravtansine) SDC1 암
이노투주맙 오조가미신(Inotuzumab Ozogamicin) CD22 암
인테투무맙(Intetumumab) CD51 고체 종양 (전립선암, 흑색종)
이필리무맙(Ipilimumab) CD152 흑색종
이라투무맙(Iratumumab) CD30 (TNFRSF8) 호지킨 림프종
이톨리주맙(Itolizumab) CD6 암
라베투주맙(Labetuzumab) CEA 대장암
람브롤리주맙(Lambrolizumab) PDCD1 항신생물제
람팔리주맙(Lampalizumab) CFD 암
렉사투무맙(Lexatumumab) TRAIL-R2 암
리비비루맙(Libivirumab) B형 간염 표면 항원 B형 간염
리겔리주맙(Ligelizumab) IGHE 암
린투주맙(Lintuzumab) CD33 암
리릴루맙(Lirilumab) KIR2D 암
로르보투주맙(Lorvotuzumab) CD56 암
루카투무맙(Lucatumumab) CD40 다발성 골수종, 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종
루밀릭시맙(Lumiliximab) CD23 만성 림프구성 백혈병
마파투무맙(Mapatumumab) TRAIL-R1 암
마르게툭시맙 Ch4d5 암
마투주맙(Matuzumab) EGFR 대장, 폐 및 위암
밀라투주맙(Milatuzumab) CD74 다발성 골수종 및 다른 혈액 악성종양
민레투모맙(Minretumomab) TAG-72 암
미투모맙(Mitumomab) GD3 강글리오시드 소세포 폐 암종
모가물리주맙(Mogamulizumab) CCR4 암
모롤리무맙(Morolimumab) 레수스 인자 암
모세투모맙 파수도톡스(Moxetumomab Pasudotox) CD22 암
나콜로맙 타페나톡스(Nacolomab Tafenatox) C242 항원 대장암
나밀루맙(Namilumab) CSF2 암
납투모맙 에스타페나톡스(Naptumomab Estafenatox) 5T4 비-소세포 폐 암종, 신장 세포 암종
나르나투맙(Narnatumab) RON 암
네바쿠맙(Nebacumab) 내독소 패혈증
네시투무맙(Necitumumab) EGFR 비-소세포 폐 암종
네렐리모맙(Nerelimomab) TNF-A 암
네스바쿠맙(Nesvacumab) 안지오포이에틴 2 암
니모투주맙(Nimotuzumab) EGFR 편평 세포 암종, 두경부암, 비인두암, 교종
니볼루맙(Nivolumab) PD-1 암
노페투모맙 메르펜탄(Nofetumomab Merpentan) 측정되지 않음 암
오카라투주맙(Ocaratuzumab) CD20 암
오파투무맙(Ofatumumab) CD20 만성 림프구성 백혈병
올라라투맙(Olaratumab) PDGF-R A 암
올로키주맙(Olokizumab) IL6 암
오나르투주맙(Onartuzumab) 인간 산재 인자 수용체 키나아제 암
온툭시주맙(Ontuxizumab) TEM1 암
오포르투주맙 모나톡스(Oportuzumab Monatox) Epcam 암
오레고보맙(Oregovomab) CA-125 난소암
오르티쿠맙(Orticumab) Oxldl 암
오틀레르투주맙(Otlertuzumab) CD37 암
파니투무맙(Panitumumab) EGFR 대장암
판코맙(Pankomab) MUC1의 종양 특이적 글리코실화 난소암
파르사투주맙(Parsatuzumab) EGFL7 암
파트리투맙(Patritumab) HER3 암
펨브롤리주맙 PD-1 암
펨투모맙(Pemtumomab) MUC1 암
페라키주맙(Perakizumab) IL17A 관절염
페르투주맙 HER2/Neu 암
피딜리주맙(Pidilizumab) PD-1 암 및 감염성 질환
피나투주맙 베도틴(Pinatuzumab Vedotin) CD22 암
핀투모맙(Pintumomab) 선암종 항원 선암종
플라쿨루맙(Placulumab) 인간 TNF 암
폴라투주맙 베도틴(Polatuzumab Vedotin) CD79B 암
프리톡삭시맙(Pritoxaximab) 대장균 시가 독소 유형-1 암
프리투무맙(Pritumumab) 비멘틴 뇌암
퀼리주맙(Quilizumab) IGHE 암
라코투모맙(Racotumomab) N-글리코실뉴라민산 암
라드레투맙(Radretumab) 피브로넥틴 엑스트라 도메인-B 암
라무시루맙(Ramucirumab) VEGFR2 고체 종양
릴로투무맙(Rilotumumab) HGF 고체 종양
리툭시맙 CD20 림프종, 백혈병, 일부 자가면역 질환
로바투무맙(Robatumumab) IGF-1 수용체 암
롤레두맙(Roledumab) RHD 암
사말리주맙(Samalizumab) CD200 암
사투모맙 펜데티드(Satumomab Pendetide) TAG-72 암
세리반투맙(Seribantumab) ERBB3 암
세톡삭시맙(Setoxaximab) 대장균 시가 독소 유형-1 암
Sgn-CD19a CD19 급성 림프모세포성 백혈병 및 B 세포 비-호지킨 림프종
Sgn-CD33a CD33 급성 골수성 백혈병
시브로투주맙(Sibrotuzumab) FAP 암
실툭시맙(Siltuximab) IL-6 암
솔리토맙(Solitomab) Epcam 암
손투주맙(Sontuzumab) 에피시알린 암
타발루맙(Tabalumab) BAFF B 세포 암
타카투주맙 테트락세탄(Tacatuzumab Tetraxetan) 알파-태아단백질 암
타플리투모맙 팝톡스(Taplitumomab Paptox) CD19 암
텔리모맙(Telimomab) 측정되지 않음 암
테나투모맙(Tenatumomab) 테나신 C 암
테넬릭시맙(Teneliximab) CD40 암
테프로투무맙(Teprotumumab) CD221 혈액 종양
티실리무맙(Ticilimumab) CTLA-4 암
티가투주맙(Tigatuzumab) TRAIL-R2 암
Tnx-650 Il-13 호지킨 림프종
토시투모맙(Tositumomab) CD20 여포성 림프종
토베투맙(Tovetumab) CD140a 암
트라스투주맙 HER2/Neu 유방암
Trbs07 Gd2 흑색종
트레멜리무맙(Tremelimumab) CTLA-4 암
투코투주맙 셀모레우킨(Tucotuzumab Celmoleukin) Epcam 암
우블리툭시맙(Ublituximab) MS4A1 암
우렐루맙 4-1BB 암
반틱투맙(Vantictumab) 프리즐 수용체 암
바팔릭시맙(Vapaliximab) AOC3 (VAP-1) 암
바텔리주맙(Vatelizumab) ITGA2 암
벨투주맙(Veltuzumab) CD20 비-호지킨 림프종
베센쿠맙(Vesencumab) NRP1 암
볼로식시맙(Volociximab) 인테그린 A5β1 고체 종양
보르세투주맙(Vorsetuzumab ) CD70 암
보투무맙(Votumumab) 종양 항원 CTAA16.88 대장 종양
잘루투무맙(Zalutumumab) EGFR 두경부의 편평세포 암종
자툭시맙(Zatuximab) HER1 암
지랄리무맙(Ziralimumab) CD147 암
1. HER2/neu에 결합하는 항체
HER2/neu는 원래 화학적으로 처치된 래트의 신경모세포종으로부터의 형질전환 유전자의 생성물로서 확인된 185 kDa 수용체 단백질이다. HER2/neu는 몇몇 인간 암종에서 및 포유류 발달에서의 역할 때문에 광범위하게 조사되었다 (Hynes et al. (1994) "The Biology of erbB-2/neu/HER-2 and its Role in Cancer", Biochim. Biophys. Acta 1198:165-184; Dougall et al. (1994) "The neu-Oncogene: Signal Transduction Pathways, Transformation Mechanisms and Evolving Therapies", Oncogene 9:2109-2123; Lee et al. (1995) "Requirement for Neuregulin Receptor erbB2 in Neural and Cardiac Development", Nature 378:394-398).
임의의 항-HER2/neu 항체의 에피토프-결합 부위는 본 발명에 따라 사용될 수 있고, 본 발명의 원리는 HER2/neu 종양 항원과 관련하여 예증된다. 인간 HER2/neu에 결합하는 예시의 항체로는 "마르게툭시맙", "트라스투주맙(Trastuzumab)" 및 "페르투주맙(Pertuzumab)"을 들 수 있다. 마르게툭시맙 (MGAH22로도 알려짐; CAS Reg No. 1350624-75-7, 예를 들어, 미국 특허 제 8,802,093호 참조)은 HER2/neu에 결합하고 증강된 ADCC 활성을 매개하는 Fc-최적화된 단클론성 항체이다. 트라스투주맙 (또한 rhuMAB4D5로도 알려지고, Herceptin®으로서 시판됨; CAS Reg No 180288-69-1; 미국 특허 제 5,821,337호 참조)은 IgG1/카파 불변 영역을 가진, 항체 4D5의 인간화된 버전이다. 페르투주맙 (또한 rhuMAB2C4로도 알려지고, PerjetaTM로서 시판됨; CAS Reg No 380610-27-5; 예를 들어, WO2001/000245 참조)은 IgG1/카파 불변 영역을 가진, 항체 2C4의 인간화된 버전이다. 추가적인 항-HER2/neu 항체들이 또한 제공된다.
(a) 마르게툭시맙
마르게툭시맙의 VH 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:54)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
QVQLQQSGPE LVKPGASLKL SCTASGFNIK DTYIH WVKQR PEQGLEWIG R IYPTNGYTRY
DPKFQD KATI TADTSSNTAY LQVSRLTSED TAVYYCSR WG GDGFYAMDY W GQGASVTVSS
마르게툭시맙의 VL 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:55)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨):
DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITC KASQDVN TA VA WYQQKP GHSPKLLIY S ASFRYT GVPD
RFTGSRSGTD FTFTISSVQA EDLAVYYC QQ HYTTPPT FGG GTKVEIK
마르게툭시맙의 완전한 중쇄 및 경쇄의 아미노산 치환 서열은 당업계에 알려져 있다 (예컨대, WHO Drug Information, 2014, Recommended INN: List 71, 28(1):93-94 참조).
(b) 트라스투주맙
트라스투주맙의 VH 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:56)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFNIK DT Y IH WVRQA PGKGLEWVA R IY PTN G Y T R Y
ADSVKG RFTI SADTSKNTAY LQMNSLRAED TAVYYCSR WG GDG F Y A MD Y W GQGTLVTVSS
트라스투주맙의 VL 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:57)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RASQ DVN TA VA WYQQKP GKAPKLLIY S AS F L Y SGVPS
RFSGSRSGTD FTLTISSLQP EDFATYYC QQ H Y T TPPT FGQ GTKVEIK
(c) 페르투주맙
페르투주맙의 VH 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:58)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFT DYTMD WVRQA PGKGLEWVA D VNPNSGGSIY
NQRFKG RFTL SVDRSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAR NL GPSFYFDY WG QGTLVTVSS
페르투주맙의 VL 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:59)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC KASQDVS IGVA WYQQKP GKAPKLLIY S ASYRYT GVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYC QQ YYIYPYT FGQ GTKVEIK
(d) HER2-MAB-1
항체 HER2-MAB-1은 마르게툭시맙, 트라스투주맙 및 페르투주맙에 의해 인식된 에피토프와는 구별되는 HER2/neu의 에피토프에 결합하는 쥐과 항-HER2/neu 단클론성 항체이다. HER2-MAB-1의 VH 도메인 (본원에서 HER2 MAB-1 VH로 언급됨)의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:60)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
EVQLQESGPE LKKPGETVKI SCKASGYTFT NYGMN WVKQA PGKGLKWMG W INTNIGEPTY
TEEFKG RFAF SLGTSASTAF LQINNLKNED TATYFCAR DD GYGNRVSY WG QGTLVTVSA
HER2 MAB-1 VH의 CDRH의 아미노산 서열은 다음과 같다:
CDRH1 (SEQ ID NO:177): NYGMN
CDRH2 (SEQ ID NO:178): WINTNIGEPTYTEEFKG
CDRH3 (SEQ ID NO:179): DDGYGNRVSY
HER2-MAB-1의 VL 도메인 (본원에서 HER2 MAB-1 VL로서 언급됨)의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:61)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨):
DILMTQSPLS MYTSLGERVT ITC KASQDIN SYLS WFQQKP GKSPKTLIY R ANRLVD GVPS
RFSGSGSGQD YSLTISSLEY EDMGIYYC LQ HDEFPWT FGG GTKLEIK
HER2 MAB-1 VL의 CDRLs의 아미노산 서열은 다음과 같다:
CDRL1 (SEQ ID NO:180): KASQDINSYLS
CDRL2 (SEQ ID NO:181): RANRLVD
CDRL3 (SEQ ID NO:182): LQHDEFPWT
(e) 인간화된 HER2-MAB-1
항체 HER2-MAB-1은 항체 hHER2-MAB-1을 형성하기 위하여 인간화되었다. 이러한 인간화된 항체의 VH 도메인 (hHER2-MAB-1 VH)의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:62)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMN WVRQA PGQGLEWMG W INTNIGEPTY
TEEFKG RVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCAR DX 1 X 2 YGNRVSY WG QGTLVTVSS
상기에서 X1은 D 또는 E이고 X2는 G 또는 I이다.
이러한 인간화된 항체의 VL 도메인 (hHER2 MAB-1 VL)의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:63)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC KASQDIX 3 X 4 YLS WFQQKP GKAPKTLIY R
ANRLX 5 X 6 GVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYC LQ HDEFPWT FGQ
GTKLEIK
상기에서 X3은 N 또는 S이고; X4는 S, T 또는 N이며; X5는 V 또는 Q이고 X6은 D, E 또는 S이다.
3개의 변종 hHER2-MAB-1 VH 도메인이 분리되었다: hHER2 MAB-1 VH1, hHER2 MAB-1 VH2, 및 hHER2 MAB-1 VH3. 이러한 변종 hHER2 MAB-1 VH 도메인의 아미노산 서열은 하기에서 제시된다.
hHER2 MAB-1 VH1의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:64)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; CDR H 3의 제2 및 제3 잔기는 각각 D 및 G임이 주지된다):
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMN WVRQA PGQGLEWMG W INTNIGEPTY
TEEFKG RVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCAR DD GYGNRVSY WG QGTLVTVSS
hHER2 MAB-1 VH2의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:65)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; CDR H 3의 제2 및 제3 잔기는 각각 E 및 G임이 주지된다):
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMN WVRQA PGQGLEWMG W INTNIGEPTY
TEEFKG RVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCAR DE GYGNRVSY WG QGTLVTVSS
hHER2 MAB-1 VH3의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:66)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; CDR H 3의 제2 및 제3 잔기는 각각 D 및 I임이 주지된다):
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMN WVRQA PGQGLEWMG W INTNIGEPTY
TEEFKG RVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCAR DD IYGNRVSY WG QGTLVTVSS
그러므로, hHER2 MAB-1 VH1, hHER2 MAB-1 VH2 및 hHER2 MAB-1 VH3의 CDRH1의 아미노산 서열은 동일하고 (NYGMN; SEQ ID NO:177) hHER2 MAB-1 VH1, hHER2 MAB-1 VH2 및 hHER2 MAB-1 VH3의 CDRH2의 아미노산 서열은 동일하다 (SEQ ID NO:178). 그러나, hHER2 MAB-1 VH1, hHER2 MAB-1 VH2 및 hHER2 MAB-1 VH3의 CDRH3의 아미노산 서열은 상이하다:
hHER2 MAB-1 VH1 CDRH3 (SEQ ID NO:183): DDGYGNRVSY
hHER2 MAB-1 VH2 CDRH3 (SEQ ID NO:184): DEGYGNRVSY
hHER2 MAB-1 VH3 CDRH3 (SEQ ID NO:185): DDIYGNRVSY.
3개의 변종 hHER2-MAB-1 VL 도메인이 분리되었다: hHER2 MAB-1 VL1, hHER2 MAB-1 VL2, 및 hHER2 MAB-1 VL3. 이러한 변종 hHER2 MAB-1 VH 도메인의 아미노산 서열은 하기에 제시된다.
hHER2 MAB-1 VL1의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:67)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨; CDR L 1의 제7 및 제8 잔기는 각각 N 및 S이고, CDR L2 의 제6 및 제7 잔기는 각각 V 및 D임이 주지된다):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC KASQDIN SYLS WFQQKP GKAPKTLIY R ANRLVD GVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYC LQ HDEFPWT FGQ GTKLEIK
hHER2 MAB-1 VL2의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:68)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨; CDR L 1의 제7 및 제8 잔기는 각각 N 및 T이고, CDR L2 의 제6 및 제7 잔기는 각각 V 및 E임이 주지된다):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC KASQDIN TYLS WFQQKP GKAPKTLIY R ANRLVE GVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYC LQ HDEFPWT FGQ GTKLEIK
hHER2 MAB-1 VL3의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:69)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨; CDR L 1의 제7 및 제8 잔기는 각각 S 및 N이고, CDR L2 의 제6 및 제7 잔기는 각각 Q 및 S임이 주지된다):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC KASQDIS NYLS WFQQKP GKAPKTLIY R ANRLQS GVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYC LQ HDEFPWT FGQ GTKLEIK
그러므로, hHER2 MAB-1 VL1, hHER2 MAB-1 VL2 및 hHER2 MAB-1 VL3의 CDRL3의 아미노산 서열은 동일하다 (LQHDEFPWT; SEQ ID NO:182). 그러나, hHER2 MAB-1 VL1, hHER2 MAB-1 VL2 및 hHER2 MAB-1 VL3의 CDRL1 및 CDRL2의 아미노산 서열은 상이하다:
hHER2 MAB-1 VL1 CDRL1 (SEQ ID NO:186): KASQDINSYLS
hHER2 MAB-1 VL2 CDRL1 (SEQ ID NO:187): KASQDINTYLS
hHER2 MAB-1 VL3 CDRL1 (SEQ ID NO:188): KASQDISNYLS
hHER2 MAB-1 VL1 CDRL2 (SEQ ID NO:189): RANRLVD
hHER2 MAB-1 VL2 CDRL2 (SEQ ID NO:190): RANRLVE
hHER2 MAB-1 VL3 CDRL2 (SEQ ID NO:191): RANRLQS
상기 제시된 hHER2-MAB-1 VH 및/또는 VL 도메인의 일반적인 서열(들) 내에 포함된 임의의 것을 포함하는, 이러한 임의의 인간화된 VH 및 VL hHER2-MAB-1 도메인은 Her2/neu에 결합할 수 있는 항체, 디아바디 또는 결합 분자를 형성하기 위하여 사용될 수 있다.
(f) 다른 항-HER2/neu 항체
상기 확인된 바람직한 항-HER2/neu 결합 분자 외에, 발명은 다음의 항-Her-2 결합 분자: 1.44.1; 1.140; 1.43; 1.14.1; 1.100.1; 1.96; 1.18.1; 1.20; 1.39; 1.24; 및 1.71.3 (미국 특허 제 8,350,011호; 8,858,942호; 및 PCT 특허 공개공보 WO 2008/019290); F5 및 C1 (미국 특허 제 7,892,554호; 8,173,424호; 8,974,792호; 및 PCT 특허 공개공보 WO 99/55367); 및 또한 미국 특허출원 공개공보 2011/0097323, 2013/017114, 2014/0328836, 2016/0130360 및 2016/0257761, 및 PCT 특허 공개공보 WO2011/147986의 항-Her-2 결합 분자 중 임의의 것의 DDY도를 포함하며, 이들 공개물은 모두 본원에 항-HER2/neu 결합 분자의 개시에 대해 참조로 포함된다.
본 발명은 구체적으로 마르게툭시맙, 트라스투주맙, 페르투주맙, hHER2-MAB-1, 또는 본원에 제공된 임의의 다른 항-HER2/neu 항체 중 임의의 항체의 VL 및/또는 VH 도메인, 및/또는 VL 영역의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRL 및/또는 VH 도메인의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRH를 포함하며; 보다 바람직하게 이러한 항-HER2/neu 단클론성 항체의 VL 영역의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRL 및/또는 VH 도메인의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRH를 가지는 CD137 x HER2/neu 결합 분자를 예로 들고 포함한다.
2. EphA2에 결합하는 항체
[0029] The 수용체 티로신 키나아제, 에프린 A형 수용체 2 (EphA2)는 성인 상피 조직에서 세포-대-세포 접촉 자리에서 정상적으로 발현되지만, 최근의 연구로 그것이 또한 다양한 유혀의 상피 암종에서, 전이성 병변에서 관찰되는 가장 큰 수준의 EphA2 발현으로 과다발현되는 것으로 나타났다. EphA2의 고발현 수준은 광범위한 암에서 및 수많은 종양 세포주, 이를테면 전립선암, 유방암, 비-소세포 폐암 및 흑색종에서 발견되었다 (Xu, J. et al. (2014) "High EphA2 Protein Expression In Renal Cell Carcinoma Is Associated With A Poor Disease Outcome", Oncol. Lett. Aug 2014; 8(2): 687-692; Miao, B. et al. (2014) "EphA2 is a Mediator of Vemurafenib Resistance and a Novel Therapeutic Target in Melanoma", Cancer Discov. pii: CD-14-0295). EphA2는 단순히 암에 대한 마커인 것으로 나타나는 것이 아니라, 오히려 수많은 인간 암에서 끊임없이 과다발현되고 기능적으로 변화되는 것으로 나타난다 (Chen, P. et al. (2014) "EphA2 Enhances The Proliferation And Invasion Ability Of LnCap Prostate Cancer Cells", Oncol. Lett. 8(1):41-46). 임의의 항-EphA2 항체의 에피토프-결합 부위는 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 하기에서 특히 바람직한 몇몇 예시의 쥐과 항-EphA2 항체, 이러한 항체의 인간화된 유도체가 제시된다.
(a) EphA2 MAB-1
항체 EphA2 MAB-1은 쥐과 항-EphA2 단클론성 항체이다. EphA2 MAB-1의 VH 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:128)이다 (CDR 잔기는 밑줄로 표시됨):
QVQLKESGPG LVAPSQSLSI TCTVSGFSLS RYSVH WVRQP PGKGLEWLG M IWGGGSTDYN
SALKS RLSIS KDNSKSQVFL KMNSLQTDDT AMYYCAR KHG NYYTMDY WGQ GTSVTVSS
EphA2 MAB-1의 VL 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:129)이다 (CDR 잔기는 밑줄로 표시됨):
DIQMTQTTSS LSASLGDRIT ISC RASQDIS NYLN WYQQKP DGTVKLLIY Y TSRLHS GVPS
RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ EDIATYFC QQ GYTLYT FGGG TKLEIK
(b) EphA2 MAB-2
항체 EphA2 MAB-2는 쥐과 항-EphA2 단클론성 항체이다. EphA2 MAB-2의 VH 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:130)이다 (CDR 잔기는 밑줄로 표시됨):
QIQLVQSGPE LKKPGETVKI SCKASGFTFT NYGMN WVKQA PGKGLKWMG W INTYIGEPTY
ADDFKG RFVF SLETSASTAY LQINNLKNED MATYFCAR EL GPYYFDY WGQ GTTLTVSS
EphA2 MAB-2의 VL 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:131)이다 (CDR 잔기는 밑줄로 표시됨):
DVVMTQTPLS LPVSLGDQAS ISC RSSQSLV HSSGNTYLH W YLQKPGQSPK LLIY KVSNRF
S GVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YFC SQSTHVP T FGSGTKLEI K
(c) EphA2 MAB-3
항체 EphA2 MAB-3은 쥐과 항-EphA2 단클론성 항체이다. EphA2 MAB-3의 VH 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:132)이다 (CDR 잔기는 밑줄로 표시됨):
EVQLVESGGG SVKPGGSLKL SCAASGFTFT DHYMY WVRQT PEKRLEWVA T ISDGGSFTSY
PDSVKG RFTI SRDIAKNNLY LQMSSLKSED TAMYYCTR DE SDRPFPY WGQ GTLVTVSS
EphA2 MAB-3의 VL 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:133)이다 (CDR 잔기는 밑줄로 표시됨):
DIVLTQSHRS MSTSVGDRVN ITC KASQDVT TAVA WYQQKP GQSPKLLIF W ASTRHA GVPD
RFTGSGSGTD FTLTISSVQA GDLALYYC QQ HYSTPYT FGG GTKLEIK
(d) 다른 EphA2 항체
상기 확인된 항-EphA2 항체 외에, 발명은 다음의 항-EphA2 항체들 중 임의의 것을 고려한다: SPL1, LUCA19, SG5, 또는 LUCA40 (PCT 특허 공개공보 WO 2006/084226 참조); B13 (미국 특허 제 7,101,976호 참조); D7 (미국 특허 제 7,192,698호 참조); B-233, 및 EA2 (PCT 특허 공개 공보 WO 2003/094859 참조).
본 발명은 구체적으로 항-EphA2 단클론성 항체 EphA2 MAB-1, EphA2 MAB-2 및 EphA2 MAB-3의 VL 및/또는 VH 도메인, 및/또는 VL 영역의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRL 및/또는 VH 도메인의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRH를 포함하는 CD137 x EphA2 결합 분자를 예로 들고 포함한다.
3. 5T4 에 결합하는 항체
종양태아성 단백질, 5T4는 신장, 결장, 전립선, 폐 암종을 포함한 많은 암종의 세포막에서 및 급성 림프모세포성 백혈병에서 나타나는 종양 관련 단백질이다 (Boghaert, E.R. et al. (2008) "The Oncofetal Protein, 5T4, Is A Suitable Target For Antibody-Guided Anti-Cancer Chemotherapy With Calicheamicin", Int. J. Oncol. 32(1):221-234; Eisen, T. et al. (2014) "Naptumomab Estafenatox: Targeted Immunotherapy with a Novel Immunotoxin", Curr. Oncol. Rep. 16:370, pp. 1-6 참조). 임의의 항-5T4 항체의 에피토프-결합 부위는 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 하기에서 2개의 예시의 항-5T4 항체, "5T4 MAB-1", 및 "5T4 MAB-2"가 제시된다. 추가적인 항-5T4 항체는 당업계에 기술되어 있다 (예컨대, 미국 특허 제: 8,084,249호; 8,409,577호; 8,759,495호; 8,409,577호; PCT 출원 공개 번호: WO 2013/041687; WO 2014/137931; WO 2016/022939 참조)
(a) 5T4 MAB-1
5T4 MAB-1의 VH 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:134)이다 (CDR 잔기는 밑줄로 표시됨):
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SFWMH WVRQA PGQGLEWMG R IDPNRGGTEY
NEKAKS RVTM TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAG GN PYYPMDY WGQ GTTVTVSS
5T4 MAB-1의 VL 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:135)이다 (CDR 잔기는 밑줄로 표시됨):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RASQGIS NYLA WFQQKP GKAPKSLIY R ANRLQS GVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDVATYYC LQ YDDFPWT FGQ GTKLEIK
(b) 5T4 MAB-2
5T4 MAB-2의 VH 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:136)이다 (CDR 잔기는 밑줄로 표시됨):
QVQLQQPGAE LVKPGASVKM SCKASGYTFT SYWIT WVKQR PGQGLEWIG D IYPGSGRANY
NEKFKS KATL TVDTSSSTAY MQLSSLTSED SAVYNCAR YG PLFTTVVDPN SYAMDY WGQG
TSVTVSS
5T4 MAB-2의 VL 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:137)이다 (CDR 잔기는 밑줄로 표시됨):
DVLMTQTPLS LPVSLGDQAS ISC RSSQSIV YSNGNTYLE W YLQKPGQSPK LLIY KVSNRF
S GVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YYC FQGSHVP FT FGSGTKLE IK
본 발명은 구체적으로 항-5T4 단클론성 항체 5T4 MAB-1 또는 5T4 MAB-2, 또는 WO 2007/106744; WO 2013/041687 또는 WO 2015/184203에서 제시된 임의의 항-5T4 항체의 VL 및/또는 VH 도메인, 및/또는 VL 영역의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRL 및/또는 VH 도메인의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRH를 포함하는 CD137 x 5T4 결합 분자를 예를 들고 포함한다.
4. B7-H3에 결합하는 항체
B7-H3은 광범위한 고체 종양 유형에서 과다 발현되는 종양 항원이고 면역 ㅈ절에 관여하는 분자들의 B7 패밀리의 구성원이다 (미국 특허 제 8,802,091호; US 2014/0328750; US 2013/0149236; Loo, D. et al. (2012) "Development Of An Fc-Enhanced Anti-B7-H3 Monoclonal Antibody With Potent Antitumor Activity", Clin. Cancer Res. 18(14):3834-3845 참조). 특히, 몇몇 독립적인 연구는 인간 악성 종양 세포 (예컨대, 신경모세포종 및 위, 난소 및 비-소세포 폐 암의 종양 세포)가 B7-H3 단백질의 발현에서 현저한 증가를 나타내고 이런 증가된 발현은 증가된 질환 중증도와 관련이 있었음을 보여주었다 (Zang, X. et al. (2007) "The B7 Family And Cancer Therapy: Costimulation And Coinhibition", Clin. Cancer Res. 13:5271-5279), suggesting that B7-H3 is exploited by tumors as an immune evasion pathway (Hofmeyer, K. et al. (2008) "The Contrasting Role Of B7-H3", Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 105(30):10277-10278).
임의의 항-B7-H3 항체의 에피토프-결합 부위는 본 발명에 다라 사용될 수 있다. 인간 B7-H3에 결합하는 한 예시의 항체는 "에노블리투주맙(Enoblituzumab)"이다. 에노블리투주맙 (또한 MGA271로도 알려짐; CAS Reg No. 1353485-38-7; 예를 들어, 미국 특허 제 8,802,091호 참조)은 B7-H3에 결합하여 증강된 ADCC 활성을 매개하는 Fc-최적화된 단클론성 항체이다. 추가적인 예시의 항-B7-H3 항체가 또한 제시된다.
(a) 에노블리투주맙
에노블리투주맙의 VH 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:138)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SFGMH WVRQA PGKGLEWVA Y ISSDSSAIYY
ADTVKG RFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRDED TAVYYCGR GR ENIYYGSRLD Y WGQGTTVTV SS
에노블리투주맙의 VL 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:139)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨):
DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITC KASQNVD TNVA WYQQKP GKAPKALIY S ASYRYS GVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYC QQ YNNYPFT FGQ GTKLEIK
(b) BRCA69D
항체 BRCA69D는 쥐과 항-B7-H3 단클론성 항체이다. BRCA69D의 VH 도메인의 아미노산 서열 (SEQ ID NO:140)이 하기 제시된다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨).
QVQLQQSGAE LARPGASVKL SCKASGYTFT SYWMQ WVKQR PGQGLEWIG T IYPGDGDTRY
TQKFKG KATL TADKSSSTAY MQLSSLASED SAVYYCAR RG IPRLWYFDV W GAGTTVTVSS
BRCA69D의 VL 도메인의 아미노산 서열 (SEQ ID NO:141)이 하기 제시된다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨).
DIQMTQTTSS LSASLGDRVT ISC RASQDIS NYLN WYQQKP DGTVKLLIY Y TSRLHS GVPS
RFSGSGSGTD YSLTIDNLEQ EDIATYFC QQ GNTLPPT FGG GTKLEIK
(c) 인간화된 BRCA69D
항체 BRCA69D는 기능성 인간화된 결합 도메인을 얻기 위한 VH/VL의 임의의 조합에 사용될 수 있는, 2개의 변종 VH 도메인, hBRCA69D VH1 및 hBRCA69D VH2; 및 2개의 변종 VL 도메인 hBRCA69D VL1 및 hBRCA69D VL2를 얻기 위하여 인간화되었다. 이러한 인간화된 변종의 아미노산 서열이 하기에 제시된다.
hBRCA69D VH1의 VH 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:142)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWMQ WVRQA PGQGLEWMG T IYPGDGDTRY
TQKFKG RVTI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAR RG IPRLWYFDV W GQGTTVTVSS
hBRCA69D VH2의 VH 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:143)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWMQ WVRQA PGQGLEWMG T IYPGGGDTRY
TQKFQG RVTI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAR RG IPRLWYFDV W GQGTTVTVSS
hBRCA69D VL1의 VL 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:144)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨).
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RASQDIS NYLN WYQQKP GKAPKLLIY Y TSRLHS GVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDIATYYC QQ GNTLPPT FGG GTKLEIK
hBRCA69D VL2의 VL 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:145)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨).
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RASQSIS SYLN WYQQKP GKAPKLLIY Y TSRLQS GVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDIATYYC QQ GNTLPPT FGG GTKLEIK
(d) PRCA157
항체 PRCA157은 쥐과 항-B7-H3 단클론성 항체이다. PRCA157의 VH 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:146)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨).
EVQQVESGGD LVKPGGSLKL SCAASGFTFS SYGMS WVRQT PDKRLEW VAT INSGGSNTYY
PDSLKG RFTI SRDNAKNTLY LQMRSLKSED TAMYYCAR HD GGAMDY WGQG TSVTVSS
PRCA157의 VL 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:147) (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨).
DIQMTQSPAS LSVSVGETVT ITC RASESIY SYLA WYQQKQ GKSPQLLVY N TKTLPE GVPS
RFSGSGSGTQ FSLKINSLQP EDFGRYYC QH HYGTPPWT FG GGTNLEIK
(e) 인간화된 PRCA157
항체 PRCA157은 기능성 인간화된 결합 도메인을 생성하기 위하여 하나의 인간화된 인간화된 VH 도메인, hPRCA157 VH1 및 하나의 인간화된 VL 도메인 hPRCA157 VL1을 얻기 위하여 인간화되었다. 인간화된 PRCA157의 아미노산 서열은 하기에 제공된다.
hPRCA157 VH1의 VH 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:202)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
EVQLVESGGG LVKPGGSLRL SCAASGFTFS SYGMS WVRQA PGKGLEWVA T INSGGSNTYY
PDSLKG RFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR HD GGAMDY WGQG TTVTVSS
hPRCA157 VL1의 VL 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:203)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RASESIY SYLA WYQQKP GKAPKLLVY N TKTLPEGVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYC QH HYGTPPWT FG QGTRLEIK
(f) 다른 항-B7-H3 항체
상기 확인된 바람직한 항-B7-H3 결합 분자 외에, 발명은 다음의 항-B7-H3 결합 분자 중 임의의 것의 용도를 고려한다: LUCA1; BLA8; PA20; 또는 SKN2 (미국 특허 제 7,527,969호; 8,779,098호 및 PCT 특허 공개공보 WO 2004/001381 참조); M30; cM30; M30-H1-L1; M30-H1-L2; M30-H1-L3; M30-H1-L4; M30-H1-L5; M30-H1-L6; M30-H1-L7; M30-H4-L1; M30-H4-L2; M30-H4-L3; 및 M30-H4-L4 (미국 특허출원 공개 2013/0078234 및 PCT 특허 공개공보 WO 2012/147713 참조); 및 8H9 (미국 특허 제 7,666,424호; 7,737,258호; 7,740,845호; 8,148,154호; 8,414,892호; 8,501,471호; 9,062,110호; 미국 특허출원 공개 2010/0143245 및 PCT 특허 공개공보 WO 2008/116219 참조).
본 발명은 구체적으로 BRCA69D, 인간화된 BRCA69D, PRCA157, 인간화된 PRCA157, 또는 에노블리투주맙, 또는 본원에 제공된 임의의 다른 항-B7-H3 항체의 VL 및/또는 VH 도메인, 및/또는 VL 영역의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRL 및/또는 VH 도메인의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRH를 포함하며; 보다 바람직하게 이러한 항-B7-H3 단클론성 항체의 VL 영역의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRL 및/또는 VH 도메인의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRH를 가지는 CD137 x B7-H3 결합 분자를 예로 들고 포함한다.
5. GpA33에 결합하는 항체
43kD 경막 당단백질 A33 (gpA33)은 모든 대장 암종의 95%를 넘는 암종에서 발현된다 (Heath, J.K. et al. (1997) "The Human A33 Antigen Is A Transmembrane Glycoprotein And A Novel Member Of The Immunoglobulin Superfamily", Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 94(2):469-474; Ritter, G. et al. (1997) "Characterization Of Posttranslational Modifications Of Human A33 Antigen, A Novel Palmitoylated Surface Glycoprotein Of Human Gastrointestinal Epithelium", Biochem. Biophys. Res. Commun. 236(3):682-686; Wong, N.A. et al. (2006) "EpCAM and gpA33 Are Markers Of Barrett's Metaplasia", J. Clin. Pathol. 59(3):260-263). 임의의 항-gpA33 항체의 에피토프-결합 부위는 본 발명에 다라 사용될 수 있다. 예시의 항-gpA33 항체 ("gpA33 MAB-1")가 하기에 제시된다.
gpA33 MAB-1의 VH 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:148)이다 (CDR 잔기는 밑줄로 표시됨):
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT GSWMN WVRQA PGQGLEWIG R IYPGDGETNY
NGKFKD RVTI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAR IY GNNVYFDV WG QGTTVTVSS
gpA33 MAB-1의 VL 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:149)이다 (CDR 잔기는 밑줄로 표시됨):
DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITC SARSSIS FMY WYQQKPG KAPKLLIY DT SNLAS GVPSR
FSGSGSGTEF TLTISSLEAE DAATYYC QQW SSYPLT FGQG TKLEIK
본 발명은 구체적으로 항-gpA33 단클론성 항체 gpA33 MAB-1, 또는 WO 2015/026894에 제공된 임의의 항-gpA33 단클론성 항체의 VL 및/또는 VH 도메인, 및/또는 VL 영역의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRL 및/또는 VH 도메인의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRH를 포함하는 CD137 x gpA33 결합 분자를 예로 들고 포함한다.
6. CEACAM5 및 CEACAM6에 결합하는 항체
암종배아 항원-관련 세포 접착 분자 5 (CEACAM5) 및 6 (CEACAM6)은 갑상선 수질암, 대장암, 췌장암, 간세포 암종, 위암, 폐암, 두경부암, 비뇨기 방광암, 전립선암, 자궁암, 자궁내막암, 유방암, 조혈세포암, 백혈병 및 난소암 (PCT 출원 공개 번호 WO 2011/034660), 및 특히 대장, 위장, 췌장, 비-소세포 폐암 (NSCL), 유방, 갑상선, 위, 난소 및 자궁 암종 (Zheng, C. et al. (2011) "A Novel Anti-CEACAM5 Monoclonal Antibody, CC4, Suppresses Colorectal Tumor Growth and Enhances NK Cells-Mediated Tumor Immunity", PLoS One 6(6):e21146, pp. 1-11)을 포함하는 다양한 유형의 암과 관련이 있는 것으로 밝혀졌다. CEACAM5는 위장, 대장 및 췌장암의 90%에서, 비-소세포 폐암 세포의 70%에서 및 유방암의 50%에서 과다발현되는 것으로 나타났다 (Thompson, J.A. et al. (1991) "Carcinoembryonic Antigen Gene Family: Molecular Biology And Clinical Perspectives", J. Clin. Lab. Anal. 5:344-366). 과다발현된 암종배아 항원-관련된 세포 부착 분자 6 (CEACAM6)은 갑상선 수질암, 대장암, 췌장암, 간세포 암종, 위암, 폐암, 두경부암, 비뇨기 방광암, 전립선암, 자궁암, 자궁내막암, 유방암, 조혈세포암, 백혈병 및 난소암을 포함하는, 다양한 인간 암의 침입 및 전이에서 중요한 역할을 한다 (PCT 출원 공개 번호 WO 2011/034660; Deng, X., et al. (2014) "Expression Profiling Of CEACAM6 Associated With The Tumorigenesis And Progression In Gastric Adenocarcinoma", Genet. Mol. Res. 13(3):7686-7697; Cameron, S. et al. (2012) "Focal Overexpression Of CEACAM6 Contributes To Enhanced Tumourigenesis In Head And Neck Cancer Via Suppression Of Apoptosis", Mol. Cancer 11:74, pp. 1-11; Chapin, C. et al. (2012) "Distribution And Surfactant Association Of Carcinoembryonic Cell Adhesion Molecule 6 In Human Lung", Amer. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 302(2):L216-L25; Riley, C.J. et al. (2009) "Design And Activity Of A Murine And Humanized Anti-CEACAM6 Single-Chain Variable Fragment In The Treatment Of Pancreatic Cancer", Cancer Res. 69(5):1933-1940; Lewis-Wambi, J.S. et al. (2008) "Overexpression Of CEACAM6 Promotes Migration And Invasion Of Oestrogen-Deprived Breast Cancer Cells", Eur. J. Cancer 44(12):1770-1779; Blumenthal, R.D. et al. (2007) "Expression Patterns Of CEACAM5 And CEACAM6 In Primary And Metastatic Cancers", BMC Cancer. 7:2, pp. 1-15 참조). 임의의 항-CEACAM5 / CEACAM6 항체의 에피토프-결합 부위는 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 예시의 항-CEACAM5 / CEACAM6 항체가 하기에 제공된다.
(a) 16C3
인간화된 항-CEACAM5 / CEACAM6 항체 16C3 (EP 2585476)의 VH 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:150)이다 (CDR 잔기는 밑줄로 표시됨):
QVQLQQSGPE VVRPGVSVKI SCKGS GYTFT DYAMH WVKQS HAKSLEWIG L ISTYSGDTKY
NQNFKG KATM TVDKSASTAY MELSSLRSED TAVYYCAR GD YSGSRYWFAY WGQGTLVTVS S
인간화된 항-CEACAM5 / CEACAM6 항체 16C3 (EP 2585476)의 VL 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:151)이다 (CDR 잔기는 밑줄로 표시됨):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC GASENIY GALN WYQRKP GKSPKLLIW G ASNLAD GMPS
RFSGSGSGRQ YTLTISSLQP EDVATYY CQN VLSSPYT FGG GTKLEIK
(b) hMN15
인간화된 항-CEACAM5 / CEACAM6 항체 hMN15 (WO 2011/034660)의 VH 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:152)이다 (CDR 잔기는 밑줄로 표시됨):
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL SCSSSG FALT DYYMS WVRQA PGKGLEWLG F IANKANGHTT
DYSPSVKG RF TISRDNSKNT LFLQMDSLRP EDTGVYFCAR DMGIRWNFDV WGQGTPVTVS S
인간화된 항-CEACAM5 / CEACAM6 항체 hMN15 (WO 2011/034660)의 VL 도메인의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:153)이다 (CDR 잔기는 밑줄로 표시됨):
DIQLTQSPSS LSASVGDRVT MTC SASSRVS YIH WYQQKPG KAPKRWIY GT STLAS GVPAR
FSGSGSGTDF TFTISSLQPE DIATYYC QQW SYNPPT FGQG TKVEIKR
본 발명은 구체적으로 항-CEACAM5/CEACAM6 단클론성 항체 16C3 또는 hMN15의 VL 및/또는 VH 도메인, 및/또는 VL 영역의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRL 및/또는 VH 도메인의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRH를 포함하는 CD137 x CEACAM5/CEACAM6 결합 분자를 예로 들고 포함한다.
7. CD19에 결합하는 항체
CD19 (B 림프구 표면 항원 B4, Genbank 등록 번호 M28170)는 B 세포-수용체 (BCR)의 성분이고, B 세포 활성화에 대한 한계값 및 체액성 면역을 조절하는 B 세포 신호전달의 양성 조절자이다. CD19는 B 세포 계통에서 가장 보편적으로 발현되는 항원 중 하나이고 급성 림프모세포성 백혈병 (ALL), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 및 비-호지킨 림프종 (NHL)을 포함하는, 95%를 넘는 B 세포 악성에서 발현된다. 특히, CD19 발현은 항-CD20 요법에 대해 내성이 되는 B 세포 림프종에서 유지된다 (Davis et al. (1999) "Therapy of B-cell Lymphoma With Anti-CD20 Antibodies Can Result In The Loss Of CD20 Antigen Expression." Clin Cancer Res, 5:611-615, 1999). CD19는 또한 자가면역 질환을 치료하기 위한 표적으로서 제안되었다 (Tedder (2009) "CD19: A Promising B Cell Target For Rheumatoid Arthritis", Nat. Rev. Rheumatol. 5:572-577).
인간 CD19에 결합하고, 본 발명에 따라 사용될 수 있는 예시의 항체는 WO 2016/048938에 개시된 항-CD19 항체 (본원에서 "CD19 MAB-1"로서 언급됨)이다.
CD19 MAB-1의 VH 도메인의 아미노산 서열 (SEQ ID NO:204)이 하기에 제시된다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
QVTLRESGPA LVKPTQTLTL TCTFSGFSLS TSGMGVG WIR QPPGKALEWL A HIWWDDDKR
YNPALKS RLT ISKDTSKNQV FLTMTNMDPV DTATYYCAR M ELWSYYFDY W GQGTTVTVSS
CD19 MAB-1의 VL 도메인의 아미노산 서열 (SEQ ID NO:205)이 하기에 제시된다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨):
ENVLTQSPAT LSVTPGEKAT ITC RASQSVS YMH WYQQKPG QAPRLLIY DA SNRAS GVPSR
FSGSGSGTDH TLTISSLEAE DAATYYC FQG SVYPF TFGQG TKLEIK
본 발명은 구체적으로 항-CD19 단클론성 항체 CD19 MAB-1, 또는 미국 특허 US 7,112,324에 개시된, 또는 블리나투모맙 (BLINCYTO®; WHO Drug Information, 2009, Recommended INN: List 62, 23(3):240-241에서 찾아볼 수 있는 아미노산 서열) 및 두보르툭시주맙 (별칭, MGD011; WHO Drug Information, 2016, Proposed INN: List 116, 30(4):627-629에서 찾아볼 수 있는 아미노산 서열)에 존재하는 임의의 항-CD19 항체의 VL 및/또는 VH 도메인, 및/또는 VL 영역의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRL 및/또는 VH 도메인의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRH를 포함하는 CD137 x CD19 결합 분자를 예로 들고 포함한다.
8. CD123DP
CD123 (인터류킨 3 수용체 알파, IL-3Ra)은 40 kDa 분자로 인터류킨 3 수용체 복합체의 일부이다 (Stomski, F.C. et al. (1996) "Human Interleukin-3 (IL-3) Induces Disulfide-Linked IL-3 Receptor Alpha- And Beta-Chain Heterodimerization, Which Is Required For Receptor Activation But Not High-Affinity Binding", Mol. Cell. Biol. 16(6):3035-3046). 인터류킨 3 (IL-3)은 다능성 줄기 세포의 적혈구, 골수 및 림프구 전구체로의 초기 분화를 유발한다. CD123은 급성 골수성 백혈병 (AML) 및 골수이형성 증후군 (MDS)을 포함하는 광범우한 혈액 악성종양에서 악성 T 세포 상에서 과다발현되는 것으로 보고되었다 (Munoz, L. et al. (2001) "Interleukin-3 Receptor Alpha Chain (CD123) Is Widely Expressed In Hematologic Malignancies", Haematologica 86(12):1261-1269). CD123의 과다발현은 AML의 더 좋지 않은 예후와 관련된다 (Tettamanti, M.S. et al. (2013) "Targeting Of Acute Myeloid Leukaemia By Cytokine-Induced Killer Cells Redirected With A Novel CD123-Specific Chimeric Antigen Receptor", Br. J. Haematol. 161:389-401).
인간 CD123에 결합하고, 본 발명에 따라 사용될 수 있는 예시의 항체는 "CD123 MAB-1"이다 (예컨대, PCT 특허 공개공보 WO 2015/026892 참조).
CD123 MAB-1의 VH 도메인의 아미노산 서열 (SEQ ID NO:206)이 하기에 제시된다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
EVQLVQSGAE LKKPGASVKV SCKASGYTFT DYYMK WVRQA PGQGLEWIG D IIPSNGATFY
NQKFKG RVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAR SH LLRASWFAY W GQGTLVTVSS
CD123 MAB-1의 VL 도메인의 아미노산 서열 (SEQ ID NO:207)이 하기에 제시된다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨):
DFVMTQSPDS LAVSLGERVT MSC KSSQSLL NSGNQKNYLT WYQQKPGQPP KLLIY WASTR
ES GVPDRFSG SGSGTDFTLT ISSLQAEDVA VYYC QNDYSY PYT FGQGTKL EIK
본 발명은 구체적으로 항-CD123 단클론성 항체 CD123 MAB-1, 또는 US 2017/081424 및 WO 2016/036937에 개시된, 또는 JNJ-63709178 (Johnson & Johnson, 또한 WO 2016/036937 참조) 및 XmAb14045 (Xencor, 또한 US 2017/081424 참조)에 존재하는 임의의 항-CD123 항체의 VL 및/또는 VH 도메인, 및/또는 VL 영역의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRL 및/또는 VH 도메인의 1, 2 또는 전부 3개의 CDRH를 포함하는 CD137 x CD123 결합 분자를 예로 들고 포함한다.
G. 바람직한 CD137 가변 도메인
임의의 항-CD137 항체의 에피토프-결합 부위은 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 인간 CD137에 결합하는 예시의 항체는 "우렐루맙", 및 현재 인간 임상 실험에서 평가되고 있는 "우토밀루맙"을 예로 들 수 있다. 우렐루맙 (또한 BMS-663513으로서 알려짐, 본원에서 "CD137 MAB-1"로 표시됨)은 IgG4/카파 불변 영역을 가지는 전체 인간 단클론성 항체이다 (미국 특허 제 8,137,667 참조). 우토밀루맙 (또한 PF-05082566으로서 알려짐, 본원에서 "CD137 MAB-2"로 표시됨)은 IgG2/람다 불변 영역을 가지는 전체 인간 단클론성 항체이다 (미국 특허 제 8,337,850 참조). 인간 CD137에 면역특이적인 추가적인 예시의 항체 ("CD137 MAB-3", "CD137 MAB-4" 및 "CD137 MAB-5"로 표시됨)가 하기에 제공된다.
1. CD137 MAB-1
CD137 MAB-1의 VH 도메인 (CD137 MAB-1 VH)의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:70)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
QVQLQQWGAG LLKPSETLSL TCAVYGGSFS GYYWS WIRQS PEKGLEWIG E INHGGYVTYN
PSLES RVTIS VDTSKNQFSL KLSSVTAADT AVYYCAR DYG PGNYDWYFDL WGRGTLVTVS S
CD137 MAB-1의 VL 도메인 (CD137 MAB-1 VL)의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:71)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨):
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSC RASQSVS SYLA WYQQKP GQAPRLLIY D ASNRAT GIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYC QQ RSNWPPALT F GGGTKVEIK
2. CD137 MAB-2
CD137 MAB-2의 VH 도메인 (CD137 MAB-2 VH)의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:72)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
EVQLVQSGAE VKKPGESLRI SCKGSGYSFS TYWIS WVRQM PGKGLEWMG K IYPGDSYTNY
SPSFQG QVTI SADKSISTAY LQWSSLKASD TAMYYCAR GY GIFDY WGQGT LVTVSS
CD137 MAB-2의 VL 도메인 (CD137 MAB-2 VL)의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:73)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨):
SYELTQPPSV SVSPGQTASI TC SGDNIGDQ YAH WYQQKPG QSPVLVIY QD KNRPS GIPER
FSGSNSGNTA TLTISGTQAM DEADYYC ATY TGFGSLAV FG GGTKLTVL
3. CD137 MAB-3
CD137 MAB-3 은 신규한 쥐과 단클론성 항체이다. CD137 MAB-3의 VH 도메인 (CD137 MAB-3 VH)의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:74)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
QVQLQQPGAE LVRPGASVKL SCKASGYTFT SYWIN WVKQR PGQGLEWIG N IYPSDSYTNY
NQKFKD KATL TVDKSSSTAY MQLSSPTSED SAVYYCTR DY GSSYSFDY WG QGTTLTVSS
CD137 MAB-3 VH의 CDRH의 아미노산 서열은 다음과 같다:
CDRH1 (SEQ ID NO:154): SYWIN
CDRH2 (SEQ ID NO:155): NIYPSDSYTNYNQKFKD
CDRH3 (SEQ ID NO:156): DYGSSYSFDY
CD137 MAB-3의 VL 도메인 (CD137 MAB-3 VL)의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:75)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨):
DIQMTQTTSS LSASLGDRVT ISC RPSQDIS NYLN WYQQKP DGTVKLLIY Y TSRLRS GVPS
RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ EDIATYFC QQ GDTLPYT FGG GTKLEIK
CD137 MAB-3 VL의 CDRL의 아미노산 서열은 다음과 같다:
CDRL1 (SEQ ID NO:157): RPSQDISNYLN
CDRL2 (SEQ ID NO:158): YTSRLRS
CDRL3 (SEQ ID NO:159): QQGDTLPYT
4. hCD137 MAB-3
항체 CD137 MAB-3은 항체 hCD137 MAB-3을 형성하기 위하여 인간화되었다. 이러한 인간화된 항체의 VH 도메인 (hCD137 MAB-3 VH1)의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:76)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWIN WVKQA PGQGLEWIG N IYPSDSYTNY
NQKFKD KATI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTR DY GSSYSFDY WG QGTTVTVSS
인간화된 항체 hCD137 MAB-3의 VH 도메인 (hCD137 MAB-3 VH1)은 SEQ ID NO:77의 아미노산 서열을 가지는 VH 도메인을 생성하기 위하여 최적화되었다:
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWIN WVKQA PGQGLEWIG N IYPSDSYTNY
NQKFKD KATI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTR DY GSX 10 X 11 X 12 X 13 X 14 X 15 WG
QGTTVTVSS
상기에서: X10X11X12X13X14X15는
AYSFHP (1A; SEQ ID NO:78), 또는
AYSMST (1B; SEQ ID NO:79), 또는
AYSYSL (1C; SEQ ID NO:80), 또는
SYSYNV (1D; SEQ ID NO:81)이다.
상기에서 나타낸 것과 같이, 상응하는 모 서열(parental sequence) (SEQ ID NO:74에 존재하는)은 SYSFDY (SEQ ID NO:160)이다.
인간화된 항체 hCD137 MAB-3의 VL 도메인 (hCD137 MAB-3 VL)은 SEQ ID NO:82의 아미노산 서열을 가지는 VL 도메인을 생성하기 위하여 최적화되었다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RPSQDIS NYLN WYQQKP X7X8TVKLLIY Y TSRLRS GVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFC QQ GDTLPYT FGQ GTKLEIK
상기에서 X7은 D 또는 G이고; X8은 G 또는 K이다.
4개의 변종 hCD137 MAB-3 VH1 도메인이 분리되었다: hCD137 MAB-3 VH1A, hCD137 MAB-3 VH1B, hCD137 MAB-3 VH1C 및 hCD137 MAB-3 VH1D. 이러한 변종 hCD137 MAB-3 VH1 도메인의 아미노산 서열은 하기에 제시된다.
hCD137 MAB-3 VH1A의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:83)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; CDR3H의 잔기 5 내지 10은 AYSFHP (SEQ ID NO:78)인 것이 주지된다_:
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWIN WVKQA PGQGLEWIG N IYPSDSYTNY
NQKFKD KATI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTR DY GSAYSFHP WG QGTTVTVSS
hCD137 MAB-3 VH1B의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:84)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; CDR3H의 잔기 5 내지 10은 AYSMST (SEQ ID NO:79)인 것이 주지된다):
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWIN WVKQA PGQGLEWIG N IYPSDSYTNY
NQKFKD KATI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTR DY GSAYSMST WG QGTTVTVSS
hCD137 MAB-3 VH1C의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:85)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; CDR3H의 잔기 5 내지 10은 AYSYSL (SEQ ID NO:80)인 것이 주지된다):
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWIN WVKQA PGQGLEWIG N IYPSDSYTNY
NQKFKD KATI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTR DY GSAYSYSL WG QGTTVTVSS
hCD137 MAB-3 VH1D의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:86)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; CDR3H의 잔기 5 내지 10은 SYSYNV (1D; SEQ ID NO:81)인 것이 주지된다):
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWIN WVKQA PGQGLEWIG N IYPSDSYTNY
NQKFKD KATI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTR DY GSSYSYNV WG QGTTVTVSS
그러므로, hCD137 MAB-3 VH1A, hCD137 MAB-3 VH1B, hCD137 MAB-3 VH1C, 및 hCD137 MAB-3 VH1D의 CDRH1의 아미노산 서열은 동일하고 (SEQ ID NO:154) hCD137 MAB-3 VH1A, hCD137 MAB-3 VH1B, hCD137 MAB-3 VH1C, 및 hCD137 MAB-3 VH1D의 CDRH2의 아미노산 서열은 동일한다 (SEQ ID NO:155). 그러나, hCD137 MAB-3 VH1A, hCD137 MAB-3 VH1B, hCD137 MAB-3 VH1C, 및 hCD137 MAB-3 VH1D의 CDRH3의 아미노산 서열은 상이하다:
hCD137 MAB-3 VH1A CDRH3 (SEQ ID NO:161): DYGSAYSFHP
hCD137 MAB-3 VH1B CDRH3 (SEQ ID NO:162): DYGSAYSMST
hCD137 MAB-3 VH1C CDRH3 (SEQ ID NO:163): DYGSAYSYSL
hCD137 MAB-3 VH1D CDRH3 (SEQ ID NO:164): DYGSSYSYNV
3개의 변종 hCD137 MAB-3 VL 도메인이 분리되었다: hCD137 MAB-3 VL1, hCD137 MAB-3 VL2 및 hCD137 MAB-3 VL3. 이러한 변종 hCD137 MAB-3 VL 도메인의 아미노산 서열은 하기에 제시된다.
hCD137 MAB-3 VL1의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:87)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨; 잔기 41 및 42는 각각 D 및 G인 것이 주지된다):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RPSQDIS NYLN WYQQKP DGTVKLLIY Y TSRLRS GVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFC QQ GDTLPYT FGQ GTKLEIK
hCD137 MAB-3 VL2의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:88)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨; 잔기 41 및 42는 둘 다 G인 것이 주지된다):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RPSQDIS NYLN WYQQKP GGTVKLLIY Y TSRLRS GVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFC QQ GDTLPYT FGQ GTKLEIK
hCD137 MAB-3 VL3의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:89)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨; 잔기 41 및 42는 각각 D 및 K인 것이 주지된다):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RPSQDIS NYLN WYQQKP DKTVKLLIY Y TSRLRS GVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFC QQ GDTLPYT FGQ GTKLEIK
VH 도메인 hCD137 MAB-3 VH1B는 하기 실시예에서 기술된 것과 같이 탈면역화되었다. Kabat 잔기 38 및/또는 48에서 아미노산 치환을 가지는, hCD137 MAB-3 VH1E, hCD137 MAB-3 VH1F, 및 hCD137 MAB-3 VH1G로 표시된, 결과적으로 탈면역화된 VH 도메인의 3개의 아미노산 서열이 하기에 제공된다. 특히 확인된 치환, R38K 및/또는 I48A가 개시된 임의의 hCD137 MAB-3 VH 도메인에 포함될 수 있는 것으로 고려된다. 특정 구체예에서, K38R 아미노산 치환은 SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:85, 또는 SEQ ID NO:86에 포함된다.
K38R을 포함하는 hCD137 MAB-3 VH1E의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:208)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; 치환은 이중으로 밑줄쳐짐):
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWIN WVRQA PGQGLEWIG N IYPSDSYTNY
NQKFKD KATI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTR DY GSAYSMST WG QGTTVTVSS
I48A를 포함하는 hCD137 MAB-3 VH1F의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:209)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; 치환은 이중으로 밑줄쳐짐):
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWIN WVKQA PGQGLEWAG N IYPSDSYTNY
NQKFKD KATI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTR DY GSAYSMST WG QGTTVTVSS
K38R/I48A를 포함하는 hCD137 MAB-3 VH1G의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:210)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; 치환은 이중으로 밑줄쳐짐):
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWIN WVRQA PGQGLEWAG N IYPSDSYTNY
NQKFKD KATI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTR DY GSAYSMST WG QGTTVTVSS
VL 도메인 hCD137 MAB-3 VL3은 하기 실시예에서 기술되는 대로 탈면역화되었다. Kabat 잔기 24, 25, 44, 48, 52, 및/또는 54에서 아미노산 치환을 가지는, hCD137 MAB-3 VL4-VL15로 표시된, 결과적으로 탈면역화된 VL 도메인 중 12개의 아미노산 서열이 하기에 제공된다. 특히 확인된 치환, R24Q, P25A, V44A, I48A, S52T, S52G, 및/또는 L54A는 탈면역화된 VL 도메인을 생성하기 위하여 상기 제공된 개시된 hCD137 MAB-3 VL 도메인 중 임의의 것에 포함될 수 있다. 특정 구체예에서, R24Q, P25A, I48A, S52G, 및 L54A 아미노산 치환은 SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88 또는 SEQ ID NO: 89에 포함된다. 다른 특정 구체예에서, R24Q, P25A, I48A, S52T, 및 L54A 아미노산 치환은 SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88 또는 SEQ ID NO: 89에 포함된다.
R24Q/P25A를 포함하는 hCD137 MAB-3 VL4의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:211)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; 치환은 이중으로 밑줄쳐짐):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCQA SQDIS NYLN WYQQKP DKTVKLLIY Y TSRLRS GVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFC QQ GDTLPYT FGQ GTKLEIK
V44A를 포함하는 hCD137 MAB-3 VL5의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:212)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; 치환은 이중으로 밑줄쳐짐):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RPSQDIS NYLN WYQQKP DKTAKLLIY Y TSRLRS GVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFC QQ GDTLPYT FGQ GTKLEIK
L54A를 포함하는 hCD137 MAB-3 VL6의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:213)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; 치환은 이중으로 밑줄쳐짐):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RPSQDIS NYLN WYQQKP DKTVKLLIY Y TSR A RS GVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFC QQ GDTLPYT FGQ GTKLEIK
R24Q/P25A/V44A를 포함하는 hCD137 MAB-3 VL7의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:214)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; 치환은 이중으로 밑줄쳐짐):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCQA SQDIS NYLN WYQQKP DKTAKLLIY Y TSRLRS GVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFC QQ GDTLPYT FGQ GTKLEIK
R24Q/P25A/V44A/L54A를 포함하는 hCD137 MAB-3 VL8의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:215)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; 치환은 이중으로 밑줄쳐짐):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCQA SQDIS NYLN WYQQKP DKTAKLLIY Y TSR A RS GVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFC QQ GDTLPYT FGQ GTKLEIK
R24Q/P25A/L54A를 포함하는 hCD137 MAB-3 VL9의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:216)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; 치환은 이중으로 밑줄쳐짐):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCQA SQDIS NYLN WYQQKP DKTVKLLIY Y TSR A RS GVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFC QQ GDTLPYT FGQ GTKLEIK
S52T를 포함하는 hCD137 MAB-3 VL10의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:217)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; 치환은 이중으로 밑줄쳐짐):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RPSQDIS NYLN WYQQKP DKTVKLLIY Y T T RLRS GVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFC QQ GDTLPYT FGQ GTKLEIK
S52G를 포함하는 hCD137 MAB-3 VL11의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:218)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; 치환은 이중으로 밑줄쳐짐):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RPSQDIS NYLN WYQQKP DKTVKLLIY Y T G RLRS GVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFC QQ GDTLPYT FGQ GTKLEIK
I48A/S52T를 포함하는 hCD137 MAB-3 VL12의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:219)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; 치환은 이중으로 밑줄쳐짐):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RPSQDIS NYLN WYQQKP DKTVKLLAY Y T T RLRS GVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFC QQ GDTLPYT FGQ GTKLEIK
I48A/S52G를 포함하는 hCD137 MAB-3 VL13의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:220)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; 치환은 이중으로 밑줄쳐짐):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RPSQDIS NYLN WYQQKP DKTVKLLAY Y T G RLRS GVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFC QQ GDTLPYT FGQ GTKLEIK
R24Q/P25A/S52T/L54A를 포함하는 hCD137 MAB-3 VL14의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:221)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; 치환은 이중으로 밑줄쳐짐):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCQA SQDIS NYLN WYQQKP DKTVKLLIY Y T T R A RS GVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFC QQ GDTLPYT FGQ GTKLEIK
R24Q/P25A/S52G/L54A를 포함하는 hCD137 MAB-3 VL15의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:222)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨; 치환은 이중으로 밑줄쳐짐):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCQA SQDIS NYLN WYQQKP DKTVKLLIY Y T G R A RS GVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFC QQ GDTLPYT FGQ GTKLEIK
그러므로, hCD137 MAB-3 VL3-VL15의 CDRL3의 아미노산 서열은 동일하다 (QQGDTLPYT; SEQ ID NO:159). 그러나, hCD137 MAB-3 VL4, 및 hCD137 MAB-3 VL6-VL15의 CDRL1 및/또는 CDRL2의 아미노산 서열은 상이하다:
hCD137 MAB-3 VL4, VL7, VL8, VL9, VL14, 및 VL15 CDRL1 (SEQ ID NO:223):
QASQDISNYLN
hCD137 MAB-3 VL6, VL8, 및 VL9 CDRL2 (SEQ ID NO:224): YTSRARS
hCD137 MAB-3 VL10, 및 VL12 CDRL2 (SEQ ID NO:225): YTTRLRS
hCD137 MAB-3 VL11, 및 VL13 CDRL2 (SEQ ID NO:226): YTGRLRS
hCD137 MAB-3 VL14 CDR L 2 (SEQ ID NO:227): YTTRARS
hCD137 MAB-3 VL15 CDR L 2 (SEQ ID NO:228): YTGRARS.
상기 제공된 hCD137 MAB-3 VH 및/또는 VL 도메인의 일반적인 서열(들) 내에서 포함된 임의의 것을 포함하는, 이러한 인간화된, 최적화된, 및/또는 탈면역화된 VH 및 VL hCD137 MAB-3 도메인 중 임의의 것의 CDR, VL 도메인, 및/또는 VH 도메인이 CD137에 결합할 수 있는 항체, 디아바디 또는 결합 분자를 형성하기 위해 사용될 수 있다.
5. CD137 MAB-4
CD137 MAB-4는 신규한 쥐과 단클론성 항체이다. CD137 MAB-4의 VH 도메인 (CD137 MAB-4 VH)의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:90)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
QVQLQQPGAE LVRPGASVKL SCKASGYTFT SYWIN WVKQR PGQGLEWIG N IYPSDSYTNY
DQKFKD KATL TVDKSSSTAY MQLSSPTSED SAVYYCTK SG EYGKIGYYAM DY WGQGTSVT VSS
CD137 MAB-4 VH의 CDRH의 아미노산 서열은 다음과 같다:
CDRH1 (SEQ ID NO:165): SYWIN
CDRH2 (SEQ ID NO:166): NIYPSDSYTNYDQKFKD
CDRH3 (SEQ ID NO:167): SGEYGKIGYYAMDY
CD137 MAB-4의 VL 도메인 (CD137 MAB-4 VL)의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:91)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨):
DIQMTQTTSS LSASLGDRVT ISC RASQDIS NYLN WYQQKP DGTVKLLIY Y TSRLHS GVPS
RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ EDIATYFC QQ GNTLPYT FGG GTKLEIK
CD137 MAB-4 VL의 CDRL의 아미노산 서열은 다음과 같다:
CDRL1 (SEQ ID NO:168): RASQDISNYLN
CDRL2 (SEQ ID NO:169): YTSRLHS
CDRL3 (SEQ ID NO:170): QQGNTLPYT
6. hCD137 MAB-4
항체 CD137 MAB-4는 항체 hCD137 MAB-4를 형성하기 위하여 인간화되었다. 인간화된 항체 hCD137 MAB-4의 VH 도메인 (hCD137 MAB-4 VH1)의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:92)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWIN WVRQA PGQGLEWMG N IYPSDSYTNY
DQKFKD RVTM TRDTSTSTVY MELSSLRSED TAVYYCTK SG EYGKIGYYAM DY WGQGTTVT VSS
인간화된 항체 hCD137 MAB-4의 VL 도메인은 SEQ ID NO:93의 아미노산 서열을 가지는 VL 도메인 (hCD137 MAB-3 VL)을 생성하기 위하여 인간화되었고 최적화되었다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RASQDIS NYLN WYQQKP DKTVKLLIY Y
TSRLHS GVPS RFSGSGSGTD YTLTISSLQP EDIATYX9C QQ GNTLPYT FGQ GTKLEIK
상기에서 X9는 F 또는 Y이다.
2개의 변종 hCD137 MAB-4 VL 도메인이 분리되었다: hCD137 MAB-4 VL1 및 hCD137 MAB-4 VL2. 이러한 변종 hCD137 MAB-4 VL 도메인의 아미노산 서열은 하기에 제시된다.
hCD137 MAB-4 VL1의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:94)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨; 잔기 87이 F인 것이 주지된다):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RASQDIS NYLN WYQQKP DKTVKLLIY Y TSRLHS GVPS
RFSGSGSGTD YTLTISSLQP EDIATYFC QQ GNTLPYT FGQ GTKLEIK
hCD137 MAB-4 VL2의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:95)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨; 잔기 87은 Y인 것이 주지된다):
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RASQDIS NYLN WYQQKP DKTVKLLIY Y TSRLHS GVPS
RFSGSGSGTD YTLTISSLQP EDIATYYC QQ GNTLPYT FGQ GTKLEIK
7. CD137 MAB-5
CD137 MAB-5는 신규한 쥐과 단클론성 항체이다. CD137 MAB-5의 VH 도메인 (CD137 MAB-5 VH)의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:96)이다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
QVQLKESGPG LVAPSQSLSI TCTVSGFSLT SYDIS WIRQP PGKGLEWLG V VWTGGGTNYN
SAFMS RLSIS KDNSKSQVFL KMNSLQTDDT AIYYCER VDY WGQGTSVTVS S
CD137 MAB-5 VH의 CDRH의 아미노산 서열은 다음과 같다:
CDRH1 (SEQ ID NO:171): SYDIS
CDRH2 (SEQ ID NO:172): VVWTGGGTNYNSAFMS
CDRH3 (SEQ ID NO:173): VDY
CD137 MAB-5의 VL 도메인 (CD137 MAB-5 VL)의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:97)이다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨):
DVVMTQTPLS LPVSLGDQAS ISC RSSQSLV HSNGNTYLH W YLQKPGQSPK LLIY KVSNRF
S GVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YFC SQSTHVP WT FGGGTKLE IK
CD137 MAB-5 VL의 CDRL의 아미노산 서열은 다음과 같다:
CDRL1 (SEQ ID NO:174): RSSQSLVHSNGNTYLH
CDRL2 (SEQ ID NO:175): KVSNRFS
CDRL3 (SEQ ID NO:176): SQSTHVPWT
III. 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자
본 발명은 특히 Fc 도메인, CD137 및 TA에 동시에 결합할 수 있는 Fc-포함 CD137 x TA DART® 디아바디, 및 CD137 및 TA에 동시에 결합할 수 있는 다른 Fc-포함 CD137 x TA 결합 분자를 포함하는 삼가 CD137 x TA 결합 분자에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 암 및 기타 질환 및 상태의 치료에서 이러한 분자들의 용도에도 관련된다. 비록 비-최적화된 CD137 x TA 결합 분자가, 코돈 최적화를 통한 유전자 발현에서 얻어진 개선과 유사하게 충분히 기능성이지만 (예컨대, Grosjean, H. et al. (1982) "Preferential Codon Usage In Prokaryotic Genes: The Optimal Codon-Anticodon Interaction Energy And The Selective Codon Usage In Efficiently Expressed Genes" Gene 18(3):199-209), 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자의 안정성 및/또는 기능을 그것의 서열을 변형 또는 정제함으로써 추가로 증강시키는 것이 가능하다.
A. CD137 x TA Fc-포함 DART® 디아바디
본 발명은 특히 CD137 및 TA에 동시에 결합할 수 있는 광범위한 Fc-포함 DART® 디아바디를 포함한다. 예시의 CD137 x TA Fc-포함 DART® 디아바디는 하기에서 기술된다.
한 구체예에서, 이러한 Fc-포함 디아바디는 2개의 폴리펩타이드 사슬을 포함할 것이다. 도 2에서 나타낸 것과 같이, 이러한 폴리펩타이드 사슬의 제1 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, "제1" 항원 (VL1) (CD137 또는 TA 중 어느 하나)의 에피토프에 결합할 수 있는 경쇄 가변 도메인 (VL), "제2" 항원 (VH2) (만약 VL1이 CD137의 에피토프에 결합하도록 선택된다면 TA; 만약 VL1이 TA의 에피토프에 결합하도록 선택된다면 CD137)의 에피토프에 결합할 수 있는 중쇄 가변 도메인 (VH), 시스테인-함유 링커, CH2-CH3 도메인, 및 C-말단을 함유할 수 있다. 이러한 폴리펩타이드 사슬의 제2 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, "제2" 항원 (VL2) (만약 제1 항원이 CD137이었으면 TA; 만약 제1 항원이 TA였으면 CD137)의 에피토프에 결합할 수 있는 경쇄 가변 도메인 (VL), "제2" 항원 (VH2) (만약 VL2가 CD137의 에피토프에 결합하도록 선택되었다면 TA; 만약 VL2가 TA의 에피토프에 결합하도록 선택되었다면 CD137)의 에피토프에 결합할 수 있는 중쇄 가변 도메인 (VH), 시스테인-함유 링커, CH2-CH3 도메인, 및 C-말단을 함유할 수 있다. 개재 링커 펩타이드 (링커 1)는 경쇄 가변 도메인 (VL1 또는 VL2)을 중쇄 가변 도메인 (VH1 또는 VH2)으로부터 분리시킨다.
다른 구체예에서, 본 발명의 Fc-포함 디아바디는 3개의 폴리펩타이드 사슬을 포함하며, 도 4A 및 4B에 도시된다. 이러한 디아바디의 제1 폴리펩타이드 사슬은 4개의 도메인을 함유한다: (i) VL1-함유 도메인, (ii) VH2-함유 도메인, (iii) 헤테로다이머화 및 디아바디의 제2 폴리펩타이드 사슬과의 공유 결합을 촉진하는 도메인 ("헤테로다이머-촉진 도메인"), 및 (iv) CH2-CH3 서열을 함유하는 도메인. 이러한 Fc-포함 디아바디의 제2 폴리펩타이드 사슬은: (i) VL2-함유 도메인, (ii) VH1-함유 도메인 및 (iii) 헤테로다이머화 및 디아바디의 제1 폴리펩타이드 사슬과의 공유 결합을 촉진하는 도메인 ("헤테로다이머-촉진 도메인")을 포함한다. 이러한 Fc-포함 디아바디의 제3 폴리펩타이드 사슬은 CH2-CH3 서열을 포함한다. 그러므로, Fc-포함 디아바디의 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬은 함께 회합되어 제1 에피토프 (1)에 결합할 수 있는 VL1/VH1 결합 부위, 뿐만 아니라 제2 에피토프 (2)에 결합할 수 있는 VL2/VH2 결합 부위를 형성한다. 본 발명의 바람직한 Fc-포함 디아바디는 CD137 또는 TA 중 어느 하나일 수 있는 "제1 에피토프", 및 제1 에피토프가 CD137일 때 TA이고, 제1 에피토프가 TA일 때 CD137인 "제2 에피토프"에 결합할 수 있는 CD137 x TA 이중특이적 디아바디이다. 제1 및 제2 폴리펩타이드는 그것들의 각각의 링커 및/또는 제3 도메인에 시스테인 잔기를 포함하고 있는 하나 이상의 이황화 결합을 통해 서로에게 결합된다. 특히, 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬은 서로와 복합체를 형성하여 이황화 결합으로 안정화된 Fc 도메인을 형성한다. 이러한 디아바디는 증강된 효능을 가진다. 본 발명의 바람직한 Fc-포함 디아바디는 2개 방향 중 어느 하나를 가질 수 있다 (표 2).
제1 방향 제3 사슬 NH2 -
Figure 112019096428115-pct00003
- CH2 - CH3 - COOH
제1 사슬 H2 - VL2 - VH1 - - HPD - - CH2 - CH3 - COOH
제2 사슬 NH2 - VL1 - VH2 - - HPD - COOH
제2 방향 제3 사슬 NH2 - - CH2 - CH3 - COOH
제1 사슬 NH2 - - CH2 - CH3 - VL2 - VH1 - - HPD - COOH
제2 사슬 NH2 - VL1 - VH2 - - HPD - COOH
( - - 1개, 2개, 또는 2개 이상의 시스테인 잔기를 가지는 시스테인-함유 폴리펩타이드 도메인을 나타낸다. 표시는 예시적이고 비제한적인 것으로 의도된다. 시스테인 잔기는 추가의 또는 대체 도메인에, 예컨대 헤테로다이머-촉진 도메인 (HPD) 내에 존재할 수 있다)
도 4A에서 나타낸 것과 같이, 제1 구체예에서, 이러한 3개의 폴리펩타이드 사슬 중 제1 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, "제1" 항원 (VL1) (CD137 또는 TA)의 에피토프에 결합할 수 있는 경쇄 가변 도메인 (VL), "제2" 항원 (VH2) (만약 제2 항원이 CD137이었으면 제1 항원으로서 TA; 만약 제2 항원이 TA였으면 제 항원으로서 CD137)의 에피토프에 결합할 수 있는 중쇄 가변 도메인 (VH), 시스테인-함유 도메인, 헤테로다이머-촉진 도메인, 제2 시스테인-함유 도메인, CH2-CH3 도메인 및 C-말단을 함유할 수 있다. 개재 링커 펩타이드 (링커 1)가 경쇄 가변 도메인 (VL1)을 중쇄 가변 도메인 (VH2)으로부터 분리시킨다. 바람직하게, 중쇄 가변 도메인 (VH1)은 개재 링커 펩타이드 (링커 2)에 의하여 헤테로다이머-촉진 도메인에 연결된다. 바람직한 CD137 x TA 이중특이적 Fc-포함 디아바디 구체예에서, 헤테로다이머-촉진 도메인의 C-말단은 개재 링커 펩타이드 (링커 3)에 의해 또는 개재 스페이서 펩타이드 (링커 3)에 의해 Fc 영역의 CH2-CH3 도메인 ("Fc 도메인")에 연결된다. 가장 바람직하게, 3개의 폴리펩타이드 사슬 중 제1 사슬은 그러므로, N-말단에서 C-말단 방향으로: VL1 - 링커 1 - VH2 - 링커 2 - 헤테로다이머-촉진 도메인 - 링커 3 - Fc 도메인을 함유할 것이다.
이러한 3개의 폴리펩타이드 사슬 중 제2 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, "제2" 항원 (VL2)의 에피토프에 결합할 수 있는 경쇄 가변 도메인 (VL), "제1" 항원 (VH1)의 에피토프에 결합할 수 있는 중쇄 가변 도메인 (VH), 시스테인-함유 도메인, 헤테로다이머-촉진 도메인 및 C-말단을 함유할 것이다. 개재 링커 펩타이드 (링커 1)는 경쇄 가변 도메인 (VL2)을 중쇄 가변 도메인 (VH1)으로부터 분리시킨다. 바람직하게, 중쇄 가변 도메인 (VH1)은 개재 링커 펩타이드 (링커 2)에 의하여 헤테로다이머-촉진 도메인에 연결된다. 가장 바람직하게, 3개의 폴리펩타이드 사슬 중 제2 사슬은 그러므로, N-말단에서 C-말단 방향으로: VL2 - 링커 1 - VH1 - 링커 2 - 헤테로다이머-촉진 도메인을 함유할 것이다.
이러한 3개의 폴리펩타이드 사슬 중 제3 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, 시스테인-함유 펩타이드 (예컨대 링커 3), 및 Fc 영역의 CH2-CH3 도메인 ("Fc 도메인")을 함유할 것이다. 제3 폴리펩타이드 사슬이 VL 도메인 또는 VH 도메인을 포함하지 않기 때문에, 제3 폴리펩타이드 사슬은 본 발명의 둘 이상의 상이한 CD137 x TA 이중특이적 Fc 디아바디 사이에서 동일할 수 있다.
대안적으로, 도 4B에서 나타낸 것과 같이, 제2 구체예에서, 이러한 3개의 폴리펩타이드 사슬 중 제1 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, 시스테인-함유 펩타이드 (예컨대 링커 3), Fc 영역의 CH2-CH3 도메인 ("Fc 도메인"), 개재 스페이서 펩타이드 (링커 4), "제1" 항원 (VL1) (CD137 또는 TA 중 어느 하나)의 에피토프에 결합할 수 있는 경쇄 가변 도메인 (VL), "제2" 항원 (VH2) (만약 제1항원이 CD137이었으면 TA; 만약 제1 항원이 TA였으면 CD137)의 에피토프에 결합할 수 있는 중쇄 가변 도메인 (VH), 시스테인-함유 링커, 헤테로다이머-촉진 도메인, 및 C-말단을 함유할 것이다. 개재 링커 펩타이드 (링커 1)는 경쇄 가변 도메인 (VL1)을 중쇄 가변 도메인 (VH2)으로부터 분리시킨다. 바람직하게, 중쇄 가변 도메인 (VH2)은 개재 링커 펩타이드 (링커 2)에 의하여 헤테로다이머-촉진 도메인에 연결된다. 가장 바람직하게, 이러한 대체 방향으로, 3개의 폴리펩타이드 사슬 중 제1 사슬은 그러므로, N-말단에서 C-말단 방향으로: 링커 3 - Fc 도메인 - 링커 4 - VL1 - 링커 1 - VH2 - 링커 2 - 헤테로다이머-촉진 도메인을 함유할 것이다. 이러한 대체 디아바디의 제2 및 제3 폴리펩타이드 사슬은 제1 구체예의 제2 및 제3 폴리펩타이드 사슬과 동일할 수 있다.
상기 구체예의 각각에서, 제1 폴리펩타이드 사슬의 경쇄 가변 도메인 (VL1)은 제2 폴리펩타이드 사슬의 중쇄 가변 도메인 (VH1)과 상호작용하는 것을 허용함으로써 제1 항원 (즉, TA 또는 CD137 중 어느 하나)의 에피토프에 면역특이적으로 결합할 수 있는 기능성 에피토프-결합 부위를 형성하기 위하여 대등하게 선택된다. 마찬가지로, 제2 폴리펩타이드 사슬의 경쇄 가변 도메인 (VL2)은 제1 폴리펩타이드 사슬의 중쇄 가변 도메인 (VH2)과 상호작용하는 것을 허용함으로써 제2 항원 (즉, TA 또는 CD137 중 어느 하나)의 에피토프에 면역특이적으로 결합할 수 있는 기능성 에피토프-결합 부위를 형성하기 위하여 대등하게 선택된다. 그러므로, 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인의 선택은 협조적이어서, 2개의 폴리펩타이드 사슬이 CD137 및 TA에 결합할 수 있는 에피토프-결합 부위를 종합적으로 포함한다.
본 발명의 바람직한 Fc-포함 디아바디는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 4개의 에피토프-결합 부위를 가지는 공유 결합된 사가 디아바디이고, 도 3A 내지 3C에 도시된다. 이러한 디아바디의 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬은: (i) VL1-함유 도메인, (ii) VH2-함유 도메인, (iii) 헤테로다이머-촉진 도메인 및 (iv) CH2-CH3 서열을 함유하는 도메인을 함유한다. 제2 및 제4 폴리펩타이드 사슬은: (i) VL2-함유 도메인, (ii) VH1-함유 도메인 및 (iii) 헤테로다이머-촉진 도메인을 함유하며, 여기서 헤테로다이머-촉진 도메인은 제1/제3 폴리펩타이드 사슬의 제2/제4 폴리펩타이드 사슬과의 다이머화 및 공유 결합을 촉진한다. 바람직하게, VH 도메인은 개재 링커 펩타이드 (링커 2)에 의해 헤테로다이머-촉진 도메인에 연결된다. 바람직한 CD137 x TA 이중특이적 Fc-포함 디아바디 구체예에서, 제1 폴리펩타이드 사슬의 헤테로다이머-촉진 도메인의 C-말단은 개재 링커 펩타이드 (링커 3)에 의해 또는 개재 스페이서 펩타이드 (링커 3)에 의해 CH2-CH3 도메인에 연결된다. 제3 및 제4 폴리펩타이드 사슬의 VL 및/또는 VH 도메인, 및 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬의 VL 및/또는 VH 도메인은 단일특이적이거나, 이중특이적이거나 또는 사중특이적인 사가 결합을 허용하기 위하여 동일하거나 상이할 수 있다. 표기 "VL3" 및 "VH3"은 각각, 이러한 디아바디의 "제3" 에피토프에 결합하는 경쇄 가변 도메인 및 가변 중쇄 도메인을 나타낸다. 유사하게, 표기 "VL4" 및 "VH4"는 각각, 이러한 디아바디의 "제4" 에피토프에 결합하는 경쇄 가변 도메인 및 가변 중쇄 도메인을 나타낸다. 발명의 대표적인 4-사슬 이중특이적 Fc 영역-함유 디아바디의 폴리펩타이드 사슬의 일반적인 구조는 표 3에 제공된다:
이중특이적 제2 사슬 NH2-VL2-VH1--HPD-COOH
제1 사슬 NH2-VL1-VH2--HPD--CH2-CH3-COOH
제1 사슬 NH2-VL1-VH2--HPD--CH2-CH3-COOH
제2 사슬 NH2-VL2-VH1--HPD-COOH
사중특이적 제2 사슬 NH2-VL2-VH1--HPD-COOH
제1 사슬 NH2-VL1-VH2--HPD-
Figure 112019096428115-pct00020
-CH2-CH3-COOH
제3 사슬 NH2-VL3-VH4--HPD-
Figure 112019096428115-pct00022
-CH2-CH3-COOH
제4 사슬 NH2-VL4-VH3--HPD-COOH
( - - 1개, 2개, 또는 2개 이상의 시스테인 잔기를 가지는 시스테인-함유 폴리펩타이드 도메인을 나타낸다. 표시는 예시적이고 비제한적인 것으로 의도된다. 시스테인 잔기는 추가의 또는 대체 도메인에, 예컨대 헤테로다이머-촉진 도메인 (HPD) 내에 존재할 수 있다)
바람직한 구체예에서, 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 총 4개의 폴리펩타이드 사슬로 구성된 이중특이적, 사가 (즉, 4개의 에피토프-결합 부위를 가짐), Fc-포함 디아바디이다 (도 3A 내지 3C). 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 CD137에 대해 면역특이적인 2개의 에피토프-결합 부위 (동일한 CD137의 에피토프 또는 CD137의 상이한 에피토프에 결합할 수 있음), 및 종양 항원에 대해 면역특이적인 2개의 에피토프-결합 부위 (동일한 TA의 에피토프 또는 TA의 상이한 에피토프 또는 상이한 TA의 상이한 에피토프에 결합할 수 있음)를 포함하는 이중특이적, 사가, Fc-포함 디아바디이다.
본 발명의 추가적인 바람직한 Fc-포함 디아바디는 5개의 폴리펩타이드 사슬을 포함하며, 도 5A 내지 5D에 도시된다. 이러한 디아바디의 제1 폴리펩타이드 사슬은: (i) VH1-함유 도메인, (ii) CH1-함유 도메인, 및 (iii) CH2-CH3 서열을 함유하는 도메인을 함유한다. 이러한 디아바디의 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬은: (i) VL1-함유 도메인, 및 (ii) CL-함유 도메인을 함유한다. 이러한 디아바디의 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬은 제1/제3 폴리펩타이드 사슬의 VH1에 상보하는 VL1을 함유하는 항체의 경쇄일 수 있다. 제1, 제2 및/또는 제5 폴리펩타이드 사슬은 자연적으로 발생하는 항체로부터 분리될 수 있다. 대안적으로, 이것들은 재조합에 의해 구성될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬은 동일한 아미노산 서열을 가진다. 이러한 디아바디의 제3 폴리펩타이드 사슬은: (i) VH1-함유 도메인, (ii) CH1-함유 도메인, (iii) CH2-CH3 서열을 함유하는 도메인, (iv) VL2-함유 도메인, (v) VH3-함유 도메인 및 (vi) 헤테로다이머-촉진 도메인을 함유하고, 여기서 헤테로다이머-촉진 도메인은 제3 사슬의 제4 사슬과의 다이머화를 촉진한다. 이러한 디아바디의 제4 폴리펩타이드는: (i) VL3-함유 도메인, (ii) VH2-함유 도메인 및 (iii) 헤테로다이머화 및 디아바디의 제3 폴리펩타이드 사슬과의 공유 결합을 촉진하는 도메인을 함유한다. 바람직하게, 제3 및 제4 폴리펩타이드 사슬의 VH3- 및 VH2-함유 도메인의 C-말단은 개재 링커 펩타이드 (링커 2)에 의해 헤테로다이머-촉진 도메인에 연결되며, 제3 폴리펩타이드 사슬의 CH2-CH3 도메인의 C-말단은 개재 링커 펩타이드 (링커 4)에 의해 VL2-함유 도메인에 연결된다.
그러므로, 이러한 디아바디의 제1 및 제2, 및 제3 및 제5 폴리펩타이드 사슬은 함께 회합되어 제1 에피토프에 결합할 수 있는 2개의 VL1/VH1 결합 부위를 형성한다. 이러한 디아바디의 제3 및 제4 폴리펩타이드 사슬은 함께 회합되어 제2 에피토프에 결합할 수 있는 VL2/VH2 결합 부위뿐만 아니라, 제3 에피토프에 결합할 수 있는 VL3/VH3 결합 부위를 형성한다. 제1 및 제3 폴리펩타이드는 그것들의 각각의 불변 영역에 시스테인 잔기를 포함하는 이황화 결합을 통하여 서로에게 결합된다. 특히, 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬은 Fc 영역을 형성하기 위하여 서로와 복합체를 형성한다. 이러한 이중특이적 디아바디는 증강된 효능을 가진다. 도 5A 내지 5D는 이러한 디아바디의 구조를 예시한다. VL1/VH1, VL2/VH2, 및 VL3/VH3 도메인은 단일특이적, 이중특이적 또는 삼중특이적인 결합을 허용하기 위하여 동일하거나 상이할 수 있는 것으로 인지될 것이다. 그러나, 본원에서 제공되는 것과 같이, 이들 도메인은 바람직하게 CD137 및 TA에 결합하기 위해 선택된다.
폴리펩타이드 사슬의 VL 및 VH 도메인은 원하는 에피토프에 특이적인 VL/VH 결합 부위를 형성하기 위하여 선택된다. 폴리펩타이드 사슬의 회합에 의해 형성된 VL/VH 결합 부위는 단일특이적, 이중특이적, 삼중특이적 또는 사중특이적인 사가 결합을 허용하기 위하여 동일하거나 상이할 수 있다. 특히, VL 및 VH 도메인은 이중특이적 디아바디가 제1 에피토프에 대한 2개의 결합 부위 및 제2 에피토프에 대한 2개의 결합 부위, 또는 제1 에피토프에 대한 3개의 결합 부위 및 제2 에피토프에 대한 한 개의 결합 부위, 또는 제1 에피토프에 대한 2개의 결합 부위, 제2 에피토프에 대한 한 개의 결합 부위 및 제3 에피토프에 대한 한 개의 결합 부위를 포함하도록 선택될 수 있다 (도 5A 내지 5D에 도시됨). 발명의 대표적인 5-사슬 Fc 영역-함유 디아바디의 폴리펩타이드 사슬의 일반적 구조는 표 4에 제공된다:
이중특이적 (2x2) 제2 사슬 NH2-VL1―CL--COOH
제1 사슬 NH2-VH1-CH1---CH2-CH3-COOH
제3 사슬 NH2-VH1-CH1---CH2-CH3-VL2-VH2--HPD-COOH
제5 사슬 NH2-VL1―CL--COOH
제4 사슬 NH2-VL2-VH2--HPD-COOH
이중특이적 (3x1) 제2 사슬 NH2-VL1―CL--COOH
제1 사슬 NH2-VH1-CH1---CH2-CH3-COOH
제3 사슬 NH2-VH1-CH1---CH2-CH3-VL1-VH2-ⓒ-HPD-COOH
제5 사슬 NH2-VL1―CL--COOH
제4 사슬 NH2-VL2-VH1--HPD-COOH
삼중특이적 (2x1x1) 제2 사슬 NH2-VL1―CL--COOH
제1 사슬 NH2-VH1-CH1---CH2-CH3-COOH
제3 사슬 NH2-VH1-CH1---CH2-CH3-VL2-VH3--HPD-COOH
제5 사슬 NH2-VL1―CL--COOH
제4 사슬 NH2-VL3-VH2--HPD-COOH
( - - 1개, 2개, 또는 2개 이상의 시스테인 잔기를 가지는 시스테인-함유 폴리펩타이드 도메인을 나타낸다. 표시는 예시적이고 비제한적인 것으로 의도된다. 시스테인 잔기는 추가의 또는 대체 도메인에, 예컨대 헤테로다이머-촉진 도메인 (HPD) 내에 존재할 수 있다)
바람직한 구체예에서, 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 CD137에 대해 면역특이적인 2개의 에피토프-결합 부위 (동일한 CD137의 에피토프 또는 CD137의 상이한 에피토프에 결합할 수 있음), 및 TA에 대해 면역특이적인 2개의 에피토프-결합 부위 (동일한 TA의 에피토프 또는 TA의 상이한 에피토프 또는 상이한 TA의 상이한 에피토프에 결합할 수 있음)를 가지는 총 5개의 폴리펩타이드 사슬로 구성된 이중특이적, 사가 (즉, 4개의 에피토프-결합 부위를 포함함), Fc-포함 디아바디이다. 또 다른 구체예에서, 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 CD137에 대해 면역특이적인 3개의 에피토프-결합 부위 (동일한 CD137의 에피토프 또는 CD137의 둘 이상의 상이한 에피토프에 결합할 수 있음), 및 TA에 대해 특이적인 한 개의 에피토프-결합 부위를 포함하는 이중특이적, 사가, Fc-포함 디아바디이다.
B. 삼가 CD137 x TA 결합 분자
한 구체예에서, 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 삼가이며 제1 에피토프-결합 부위 (예컨대, VL1 및 VH1), 제2 에피토프-결합 부위 (예컨대, VL2 및 VH2), 및 제3 에피토프-결합 부위 (예컨대, VL3 및 VH3)를 포함할 것이고, 그러므로 TA의 에피토프, CD137의 에피토프, 및 제3 에피토프에 결합할 수 있을 것이고, 제3 에피토프는:
(a) TA의 동일하거나 상이한 에피토프이거나;
(b) CD137의 동일하거나 상이한 에피토프이거나; 또는
(c) 상이한 TA의 에피토프일 수 있다.
바람직하게, 본 발명의 이러한 "삼가 CD137 x TA 결합 분자"는 CD137의 에피토프 (에피토프는 동일하거나 상이할 수 있음)에 대한 2개의 에피토프-결합 부위, 및 TA의 에피토프에 대한 한 개의 에피토프-결합 부위를 포함할 것이다.
일반적으로, 본 발명의 이러한 삼가 CD137 x TA 결합 분자는, 폴리펩타이드의 쌍 사이의 하나 이상의 이황화 결합에 의하여, "디아바디형 결합 도메인" 및 "비-디아바디형 결합 도메인"을 포함하는 공유 결합된 분자 복합체를 형성하는 그러한 3, 4, 5개 또는 5개 이상의 폴리펩타이드 사슬로 구성된다.
"디아바디형 결합 도메인"은 디아바디, 특히 DART® 디아바디의 에피토프-결합 도메인이다. 용어 "디아바디" 및 "DART® 디아바디"는 상기에서 논의되었다. "비-디아바디형" 결합 도메인은 디아바디형 결합 도메인의 구조를 갖지 않는 결합 도메인을 나타내기 위해 의도된다. 바람직하게, 비-디아바디형 결합 도메인은 Fab-형 결합 도메인 또는 ScFv-형 결합 도메인이다. 본원에서 사용되는 바, 용어 "Fab-형 결합 도메인"은 면역글로불린 경쇄의 VL 도메인과 면역글로불린 중쇄의 상보하는 VH 도메인의 상호작용에 의해 형성되는 에피토프-결합 도메인을 나타낸다. Fab-형 결합 도메인은 Fab-형 결합 도메인을 형성하는 2개의 폴리펩타이드 사슬이 단일 에피토프-결합 도메인만을 포함하는 반면, 디아바디형 결합 도메인을 형성하는 2개의 폴리펩타이드 사슬은 적어도 2개의 에피토프-결합 도메인을 포함한다는 점에서 디아바디형 결합 도메인과 상이하다. ScFv-형 결합 도메인은 동일한 폴리펩타이드 사슬의 VL 및 VH 도메인이 에피토프-결합 도메인을 형성하기 위하여 상호작용한다는 점에서 디아바디형 결합 도메인과 상이하다. 그러므로, 본원에서 사용되는 바, Fab-형 결합 도메인 및 ScFv-형 결합 도메인은 디아바디형 결합 도메인과 구별된다.
그러므로, 본 발명은 삼가 CD137 x TA 결합 분자는 바람직하게 다음을 포함한다:
(I) "제1" 에피토프에 면역특이적으로 결합할 수 있는 "제1" 에피토프-결합 도메인;
(II) "제2" 에피토프에 면역특이적으로 결합할 수 있는 "제2" 에피토프-결합 도메인;
(III) "제3" 에피토프에 면역특이적으로 결합할 수 있는 "제3" 에피토프-결합 도메인; 및
(IV) 두 CH2-CH3 도메인의 서로에 대한 회합에 의해 형성되는 Fc 도메인;
여기서:
(A) "제1" 에피토프-결합 도메인 및 "제2" 에피토프-결합 도메인은 둘 다 "디아바디형 결합 도메인"이고;
(B) "제3" 에피토프-결합 도메인은 비-디아바디형 결합 도메인이며; 및
(C) 이러한 "제1", "제2", 또는 "제3" 에피토프-결합 도메인 중 하나는 TA의 에피토프에 결합하고, "제1", "제2", 또는 "제3" 에피토프-결합 도메인의 또 다른 하나는 CD137의 에피토프에 결합한다.
나머지 에피토프-결합 도메인에 의해 결합되는 에피토프는 임의의 원하는 에피토프, 바람직하게는 CD137의 에피토프일 수 있다. 이러한 에피토프는 분자의 다른 에피토프-결합 도메인에 의해 결합되는 CD137에피토프와 동일하거나 상이할 수 있다.
도 6A 내지 6H는 바람직한 삼가 CD137 x TA 결합 분자의 도메인의 대표적인 도면을 제공한다. 도 6A 내지 6D는 4개의 폴리펩타이드 사슬의 공유 복합체형성으로부터 구성되고 한 개의 비-디아바디형 결합 부위 (VL3/VH3 및 그로써 이러한 에피토프에 대해 일가가 됨), 및 두 개의 디아바디형 결합 부위 (VL1/VH1 및 VL2/VH2, 및 그로써 이러한 에피토프들의 각각에 대해 일가가 됨)를 가지는 바람직한 삼가 CD137 x TA 결합 분자의 도메인을 개략적으로 예시한다. 도 6E 내지 6H는 3개의 폴리펩타이드 사슬의 공유 복합체형성으로부터 구성되고 한 개의 비-디아바디형 결합 부위 (VL3/VH3 및 그로써 이러한 에피토프에 대해 일가가 됨), 및 두 개의 디아바디형 결합 부위 (VL1/VH1 및 VL2/VH2, 및 그로써 이러한 에피토프들의 각각에 대해 일가가 됨)를 가지는 바람직한 삼가 CD137 x TA 결합 분자의 도메인을 개략적으로 예시한다. 도 6A 내지 6H에 도시된 비-디아바디형 결합 부위는 도 6A 내지 6D에서의 Fab-형 결합 도메인이고 도 6E 내지 6H에서의 scFv-형 결합 도메인이다. 하기에서 제공되는 것과 같이, 폴리펩타이드 사슬의 회합에 의해 형성된 VL/VH 결합 부위는 단일특이적, 이중특이적, 또는 삼중특이적인 삼가 결합을 허용하기 위하여 동일하거나 상이할 수 있다.
IV. 예시의 CD137 x TA 결합 분자
발명은 CD137 및 TA에 동시에 및 특이적으로 결합할 수 있는 이중특이적 사가 Fc 디아바디인 CD137 x TA 결합 분자를 제공한다. 상기에서 표시된 것과 같이, 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 4개 또는 5개의 폴리펩타이드 사슬을 포함할 수 있다. 7개의 예시의 CD137 x TA 결합 분자의 폴리펩타이드 사슬은 CD137 및 TA에 결합할 수 있고, HER2/neu가 하기에서 제공된다 (각각 "DART-A", "DART-B", "DART-C", "DART-D", "DART-E", "DART-F", "DART-G", "DART-G1", "DART-G2", "DART-G3", 및 "DART-G4"로 표시됨). 발명은 추가로 CD137 및 TA에 동시에 및 특이적으로 결합할 수 있는 이중특이적 삼가 Fc 디아바디인 CD137 x TA 결합 분자를 제공한다. 상기에서 표시된 것과 같이, 본 발명의 삼가 CD137 x TA 결합 분자는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 포함할 수 있다. 예시의 CD137 x TA 결합 분자의 폴리펩타이드 사슬은 CD137 및 TA에 결합할 수 있고, HER2/neu, 및 그것의 최적화된 변종이 하기에서 제공된다 (각각 "TRIDENT-A", "TRIDENT-A1", "TRIDENT-A2", "TRIDENT-A3", "TRIDENT-A5", "TRIDENT-B", "TRIDENT-B2", 및 "TRIDENT-B5"로 표시됨).
A. DART-A
DART-A는 4개의 폴리펩타이드 사슬로 구성되고, 여기서 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬이 동일하며 제2 및 제4 폴리펩타이드 사슬이 동일하다 (도 3B 참조).
DART-A의 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, HER2/neu에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLHER2/neu) (hHER2 MAB-1 VL2 (SEQ ID NO:68)), 개재 링커 펩타이드 (링커 1; GGGSGGGG (SEQ ID NO:16)), CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137) (hCD137 MAB-3 VH1 (SEQ ID NO:76)), 개재 링커 펩타이드 (링커 2; GGCGGG (SEQ ID NO:18)), 헤테로다이머-촉진 (E-코일) 도메인 ( E VAAC E K- E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K (SEQ ID NO:38)), 링커 (LEPKSADKTHTCPPCP (SEQ ID NO:30)), 이펙터 기능이 실질적으로 없는 예시의 인간 IgG1의 CH2-CH3 도메인 (SEQ ID NO:40), 및 C-말단을 포함한다.
DART-A의 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:98)이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDIN TYLSWFQQKP GKAPKTLIYR ANRLVEGVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCLQ HDEFPWTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGSSYS FDYWGQGTTV TVSSGGCGGG
EVAACEKEVA ALEKEVAALE KEVAALEKLE PKSADKTHTC PPCPAPEAAG GPSVFLFPPK
PKDTLMISRT PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL
TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT
CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS
VMHEALHNHY TQKSLSLSPG
그러므로, DART-A의 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:68 -- SEQ ID NO:16 ─- SEQ ID NO:76 ─- SEQ ID NO:18 ─- SEQ ID NO:38 ─- SEQ ID NO:30 ─- SEQ ID NO:40으로 구성된다.
DART-A의 제2 및 제4 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLCD137 (hCD137 MAB-3 VL1 (SEQ ID NO:87)), 개재 링커 펩타이드 (링커 1; GGGSGGGG (SEQ ID NO:16)), HER2/neu에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHHER2/neu (hHER2 MAB-1 VH1, SEQ ID NO:64)), 개재 링커 펩타이드 (링커 2; GGCGGG (SEQ ID NO:18)), 헤테로다이머-촉진 (K-코일) 도메인 ( K VAAC K E- K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E (SEQ ID NO:39), 및 C-말단을 포함한다.
그러므로, DART-A의 제2 및 제4 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:87 -- SEQ ID NO:16 ─ SEQ ID NO:64 ─ SEQ ID NO:18 ─ SEQ ID NO:39로 구성된다.
DART-A의 제2 및 제4 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:99)이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DGTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTNYGMN WVRQAPGQGL EWMGWINTNI GEPTYTEEFK
GRVTMTRDTS ISTAYMELSR LRSDDTAVYY CARDDGYGNR VSYWGQGTLV TVSSGGCGGG
KVAACKEKVA ALKEKVAALK EKVAALKE
B. DART-B
DART-B는 4개의 폴리펩타이드 사슬로 구성되며, 여기서 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬이 동일하고 제2 및 제4 폴리펩타이드 사슬이 동일하다 (도 3B 참조).
DART-B의 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, HER2/neu에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLHER2/neu) (hHER2 MAB-1 VL3 (SEQ ID NO:69)), 개재 링커 펩타이드 (링커 1; GGGSGGGG (SEQ ID NO:16)), CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137) (hCD137 MAB-3 VH1 (SEQ ID NO:76)), 개재 링커 펩타이드 (링커 2; GGCGGG (SEQ ID NO:18)), 헤테로다이머-촉진 (E-코일) 도메인 ( E VAAC E K- E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K (SEQ ID NO:38)), 링커 (LEPKSADKTHTCPPCP (SEQ ID NO:30)), 이펙터 기능이 실질적으로 없는 예시의 인간 IgG1의 CH2-CH3 도메인 (SEQ ID NO:40), 및 C-말단을 포함한다.
그러므로, DART-B의 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:69 -- SEQ ID NO:16 ─- SEQ ID NO:76 ─- SEQ ID NO:18 ─- SEQ ID NO:38 ─- SEQ ID NO:30 ─- SEQ ID NO:40으로 구성된다.
DART-B의 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:100)이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDIS NYLSWFQQKP GKAPKTLIYR ANRLQSGVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCLQ HDEFPWTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGSSYS FDYWGQGTTV TVSSGGCGGG
EVAACEKEVA ALEKEVAALE KEVAALEKLE PKSADKTHTC PPCPAPEAAG GPSVFLFPPK
PKDTLMISRT PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL
TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT
CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS
VMHEALHNHY TQKSLSLSPG
DART-B의 제2 및 제4 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLCD137 (hCD137 MAB-3 VL3 (SEQ ID NO:89)), 개재 링커 펩타이드 (링커 1; GGGSGGGG (SEQ ID NO:16)), HER2/neu에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHHER2/neu (hHER2 MAB-1 VH1, SEQ ID NO:64)), 개재 링커 펩타이드 (링커 2; GGCGGG (SEQ ID NO:18)), 헤테로다이머-촉진 (K-코일) 도메인 ( K VAAC K E- K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E (SEQ ID NO:39), 및 C-말단을 포함한다.
그러므로, DART-B의 제2 및 제4 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:89 -- SEQ ID NO:16 ─- SEQ ID NO:64 ─- SEQ ID NO:18 ─- SEQ ID NO:39로 구성된다.
DART-B의 제2 및 제4 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:101)이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTNYGMN WVRQAPGQGL EWMGWINTNI GEPTYTEEFK
GRVTMTRDTS ISTAYMELSR LRSDDTAVYY CARDDGYGNR VSYWGQGTLV TVSSGGCGGG
KVAACKEKVA ALKEKVAALK EKVAALKE
C. DART-C
DART-C는 4개의 폴리펩타이드 사슬로 구성되며, 여기서 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬이 동일하고 제2 및 제4 폴리펩타이드 사슬이 동일하다 (도 3B 참조).
DART-C의 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLCD137 (hCD137 MAB-3 VL3 (SEQ ID NO:89)), 개재 링커 펩타이드 (링커 1; GGGSGGGG (SEQ ID NO:16)), HER2/neu에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHHER2/neu) (hHER2 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:64)), 개재 링커 펩타이드 (링커 2; GGCGGG (SEQ ID NO:18)), 헤테로다이머-촉진 (E-코일) 도메인 ( E VAAC E K- E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K (SEQ ID NO:38)), 링커 (LEPKSADKTHTCPPCP (SEQ ID NO:30)), 실질적으로 이펙터 기능이 없는 예시의 인간 IgG1의 CH2-CH3 도메인 (SEQ ID NO:40), 및 C-말단을 포함한다.
그러므로, DART-C의 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:89 -- SEQ ID NO:16 ─- SEQ ID NO:64 ─- SEQ ID NO:18 ─- SEQ ID NO:38 ─- SEQ ID NO:30 ─- SEQ ID NO:40으로 구성된다.
DART-C의 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:102)이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTNYGMN WVRQAPGQGL EWMGWINTNI GEPTYTEEFK
GRVTMTRDTS ISTAYMELSR LRSDDTAVYY CARDDGYGNR VSYWGQGTLV TVSSGGCGGG
EVAACEKEVA ALEKEVAALE KEVAALEKLE PKSADKTHTC PPCPAPEAAG GPSVFLFPPK
PKDTLMISRT PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL
TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT
CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS
VMHEALHNHY TQKSLSLSPG
DART-C의 제2 및 제4 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, HER2/neu에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLHER2/neu (hHER2 MAB-1 VL3, SEQ ID NO:69)), 개재 링커 펩타이드 (링커 1; GGGSGGGG (SEQ ID NO:16)), CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137 (hCD137 MAB-3 VH1 (SEQ ID NO:76)), 개재 링커 펩타이드 (링커 2; GGCGGG (SEQ ID NO:18)), 헤테로다이머-촉진 (K-코일) 도메인 ( K VAAC K E- K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E (SEQ ID NO:39), 및 C-말단을 포함한다.
그러므로, DART-C의 제2 및 제4 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:69 -- SEQ ID NO:16 ─- SEQ ID NO:76 ─- SEQ ID NO:18 ─- SEQ ID NO:39로 구성된다.
DART-C의 제2 및 제4 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:103)이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDIS NYLSWFQQKP GKAPKTLIYR ANRLQSGVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCLQ HDEFPWTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGSSYS FDYWGQGTTV TVSSGGCGGG
KVAACKEKVA ALKEKVAALK EKVAALKE
D. DART-D
DART-D는 5개의 폴리펩타이드 사슬로 구성되며, 그 중에서 제2 및 제5 사슬이 동일하다 (도 5A 참조, 여기서 VL2/VH2는 VL3/VH3과 동일함, 및 도 5B 참조).
DART-D의 제1 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, HER2/neu에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHHER2/neu) (hHER2 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:64)), 인간 IgG1 CH1 도메인 (SEQ ID NO:3), 인간 IgG1 힌지 영역 (SEQ ID NO:7), 및 "구멍-포함" CH2 및 CH3 도메인 (SEQ ID NO:47)을 포함한다.
그러므로, DART-D의 제1 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:64 -- SEQ ID NO:3 ─- SEQ ID NO:7 ─- SEQ ID NO:47로 구성된다.
DART-D의 제1 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:104)이다:
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW INTNIGEPTY
TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDD GYGNRVSYWG QGTLVTVSSA
STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG
LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP
SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM
TKNQVSLSCA VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLVS KLTVDKSRWQ
QGNVFSCSVM HEALHNRYTQ KSLSLSPGK
DART-D의 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, HER2/neu에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLHER2/neu) (hHER2 MAB-1 VL3 (SEQ ID NO:69)), 인간 IgG CL 카파 도메인 (SEQ ID NO:1), 및 C-말단을 포함한다.
그러므로, DART-D의 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:69 -- SEQ ID NO:1로 구성된다.
DART-D의 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:105)이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDIS NYLSWFQQKP GKAPKTLIYR ANRLQSGVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCLQ HDEFPWTFGQ GTKLEIKRTV AAPSVFIFPP
SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT
LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
DART-D의 제3 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, HER2/neu에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHHER2/neu) (hHER2 MAB-1 VH1, SEQ ID NO:64)), 인간 IgG1 CH1 도메인 (SEQ ID NO:3), 인간 IgG1 힌지 영역 (SEQ ID NO:7), "놉-포함 CH2 및 CH3 도메인 (SEQ ID NO:44), 개재 링커 펩타이드 (GGGSGGGSGGG (SEQ ID NO:24)), CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLCD137) (CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)), 개재 링커 펩타이드 (링커 1; GGGSGGGG (SEQ ID NO:16)), CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137) (CD137 MAB-3 VH (SEQ ID NO:74)), 개재 링커 펩타이드 (링커 2; GGCGGG (SEQ ID NO:18)), 헤테로다이머-촉진 (E-코일) 도메인 ( E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K (SEQ ID NO:36), 및 C-말단을 포함한다.
그러므로, DART-D의 제3 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:64 -- SEQ ID NO:3 ─- SEQ ID NO:7 ─- SEQ ID NO:44─- SEQ ID NO:24 ─- SEQ ID NO:75 -- SEQ ID NO:16 ─- SEQ ID NO:74─- SEQ ID NO:18 ─- SEQ ID NO:36으로 구성된다.
DART-D의 제3 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:106)이다:
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW INTNIGEPTY
TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDD GYGNRVSYWG QGTLVTVSSA
STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG
LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP
SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM
TKNQVSLWCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ
QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGGG GSGGGSGGGD IQMTQTTSSL SASLGDRVTI
SCRPSQDISN YLNWYQQKPD GTVKLLIYYT SRLRSGVPSR FSGSGSGTDY SLTISNLEQE
DIATYFCQQG DTLPYTFGGG TKLEIKGGGS GGGGQVQLQQ PGAELVRPGA SVKLSCKASG
YTFTSYWINW VKQRPGQGLE WIGNIYPSDS YTNYNQKFKD KATLTVDKSS STAYMQLSSP
TSEDSAVYYC TRDYGSSYSF DYWGQGTTLT VSSGGCGGGE VAALEKEVAA LEKEVAALEK
EVAALEK
DART-D의 제4 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLCD137) (CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)), 개재 링커 펩타이드 (링커 1; GGGSGGGG (SEQ ID NO:16)), CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137) (CD137 MAB-3 VH (SEQ ID NO:74)), 개재 링커 펩타이드 (링커 2; GGCGGG (SEQ ID NO:18)), 헤테로다이머-촉진 (K-코일) 도메인 ( K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E) (SEQ ID NO:37) 및 C-말단을 포함한다.
그러므로, DART-D의 제4 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:75 -- SEQ ID NO:16 ─ SEQ ID NO:74 ─- SEQ ID NO:18─- SEQ ID NO:37로 구성된다.
DART-D의 제4 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:107)이다:
DIQMTQTTSS LSASLGDRVT ISCRPSQDIS NYLNWYQQKP DGTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ EDIATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEIKGGG SGGGGQVQLQ
QPGAELVRPG ASVKLSCKAS GYTFTSYWIN WVKQRPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATLTVDKS SSTAYMQLSS PTSEDSAVYY CTRDYGSSYS FDYWGQGTTL TVSSGGCGGG
KVAALKEKVA ALKEKVAALK EKVAALKE
E. DART-E
DART-E는 5개의 폴리펩타이드 사슬로 구성되며, 그 중에서 제2 및 제5 사슬이 동일하다 (도 5A 참조, VL2/VH2는 VL3/VH3과 동일함, 및 도 5C 참조).
DART-E의 제1 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137) (CD137 MAB-3 VH (SEQ ID NO:74)), IgG1 CH1 도메인 (SEQ ID NO:3), IgG1 힌지 도메인 (SEQ ID NO:7), "구멍-포함 CH2 및 CH3 도메인 (SEQ ID NO:47), 및 C-말단을 포함한다.
그러므로, DART-E의 제1 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:74 -- SEQ ID NO:3 ─- SEQ ID NO:7 ─- SEQ ID NO:47로 구성된다.
DART-E의 제1 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:108)이다:
QVQLQQPGAE LVRPGASVKL SCKASGYTFT SYWINWVKQR PGQGLEWIGN IYPSDSYTNY
NQKFKDKATL TVDKSSSTAY MQLSSPTSED SAVYYCTRDY GSSYSFDYWG QGTTLTVSSA
STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG
LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP
SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM
TKNQVSLSCA VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLVS KLTVDKSRWQ
QGNVFSCSVM HEALHNRYTQ KSLSLSPGK
DART-E의 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLCD137u) (CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)), 인간 IgG CL 카파 도메인 (SEQ ID NO:1), 및 C-말단을 포함한다.
그러므로, DART-E의 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:75 -- SEQ ID NO:1로 구성된다.
DART-E의 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:109)이다:
DIQMTQTTSS LSASLGDRVT ISCRPSQDIS NYLNWYQQKP DGTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ EDIATYFCQQ GDTLPYTFGG GTKLEIKRTV AAPSVFIFPP
SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT
LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
DART-E의 제3 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137) (CD137 MAB-3 VH, SEQ ID NO:74)), 인간 IgG1 CH1 도메인 (SEQ ID NO:3), 인간 IgG1 힌지 영역 (SEQ ID NO:7), "놉-포함 CH2 및 CH3 도메인 (SEQ ID NO:44), 개재 링커 펩타이드 (GGGSGGGSGGG (SEQ ID NO:24)), HER2/neu에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLHER2/neu) (hHER2 MAB-1 VL3 (SEQ ID NO:69)), 개재 링커 펩타이드 (링커 1; GGGSGGGG (SEQ ID NO:16)), HER2/neu에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHHER2/neu) (hHER2 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:64)), 개재 링커 펩타이드 (링커 2; GGCGGG (SEQ ID NO:18)), 헤테로다이머-촉진 (E-코일) 도메인 ( E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K (SEQ ID NO:36), 및 C-말단을 포함한다.
그러므로, DART-E의 제3 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:74 -- SEQ ID NO:3 ─- SEQ ID NO:7 ─- SEQ ID NO:44─- SEQ ID NO:24 ─- SEQ ID NO:69 -- SEQ ID NO:16 ─- SEQ ID NO:64─- SEQ ID NO:18 ─- SEQ ID NO:36으로 구성된다.
DART-E의 제3 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:110)이다:
QVQLQQPGAE LVRPGASVKL SCKASGYTFT SYWINWVKQR PGQGLEWIGN IYPSDSYTNY
NQKFKDKATL TVDKSSSTAY MQLSSPTSED SAVYYCTRDY GSSYSFDYWG QGTTLTVSSA
STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG
LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP
SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM
TKNQVSLWCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ
QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGGG GSGGGSGGGD IQMTQSPSSL SASVGDRVTI
TCKASQDISN YLSWFQQKPG KAPKTLIYRA NRLQSGVPSR FSGSGSGTDF TLTISSLQPE
DFATYYCLQH DEFPWTFGQG TKLEIKGGGS GGGGQVQLVQ SGAEVKKPGA SVKVSCKASG
YTFTNYGMNW VRQAPGQGLE WMGWINTNIG EPTYTEEFKG RVTMTRDTSI STAYMELSRL
RSDDTAVYYC ARDDGYGNRV SYWGQGTLVT VSSGGCGGGE VAALEKEVAA LEKEVAALEK
EVAALEK
DART-E의 제4 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, HER2/neu에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLHER2/neu) (hHER2 MAB-1 VL3 (SEQ ID NO:69)), 개재 링커 펩타이드 (링커 1; GGGSGGGG (SEQ ID NO:16)), HER2/neu에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHHER2/neu) (hHER2 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:64)), 개재 링커 펩타이드 (링커 2; GGCGGG (SEQ ID NO:18)), 헤테로다이머-촉진 (K-코일) 도메인 ( K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E) (SEQ ID NO:37) 및 C-말단을 포함한다.
그러므로, DART-E의 제4 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:69 -- SEQ ID NO:16 ─- SEQ ID NO:64 ─- SEQ ID NO:18─- SEQ ID NO:37로 구성된다.
DART-E의 제4 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:111)이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDIS NYLSWFQQKP GKAPKTLIYR ANRLQSGVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCLQ HDEFPWTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTNYGMN WVRQAPGQGL EWMGWINTNI GEPTYTEEFK
GRVTMTRDTS ISTAYMELSR LRSDDTAVYY CARDDGYGNR VSYWGQGTLV TVSSGGCGGG
KVAALKEKVA ALKEKVAALK EKVAALKE
F. DART-F
DART-F는 5개의 폴리펩타이드 사슬로 구성되며, 그 중 제2 및 제5 사슬이 동일하다 (도 5A, 여기서 VL2/VH2는 VL3/VH3과 동일함, 및 도 5B 참조).
DART-F의 제1 폴리펩타이드 사슬은 DART-D의 제1 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO:104)과 동일하다.
DART-F의 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬은 DART-D의 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO:105)과 동일하다.
DART-F의 제3 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, HER2/neu에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHHER2/neu) (hHER2 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:64)), IgG1 CH1 도메인 (SEQ ID NO:3), IgG1 힌지 도메인 (SEQ ID NO:7), "놉-포함 CH2 및 CH3 도메인 (SEQ ID NO:44), 개재 링커 펩타이드 (GGGSGGGSGGG (SEQ ID NO:24)), CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLCD137) (CD137 MAB-4 VL (SEQ ID NO:91)), 개재 링커 펩타이드 (링커 1; GGGSGGGG (SEQ ID NO:16)), CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137) (CD137 MAB-4 VH (SEQ ID NO:90)), 개재 링커 펩타이드 (링커 2; GGCGGG (SEQ ID NO:18)), 헤테로다이머-촉진 (E-코일) 도메인 ( E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K (SEQ ID NO:36), 및 C-말단을 포함한다.
그러므로, DART-F의 제3 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:64 -- SEQ ID NO:3 ─- SEQ ID NO:7 ─- SEQ ID NO:44 ─- SEQ ID NO:24 ─- SEQ ID NO:91 -- SEQ ID NO:16 ─- SEQ ID NO:90 ─- SEQ ID NO:18 ─- SEQ ID NO:36으로 구성된다.
DART-F의 제3 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:112)이다:
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW INTNIGEPTY
TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDD GYGNRVSYWG QGTLVTVSSA
STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG
LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP
SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM
TKNQVSLWCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ
QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGGG GSGGGSGGGD IQMTQTTSSL SASLGDRVTI
SCRASQDISN YLNWYQQKPD GTVKLLIYYT SRLHSGVPSR FSGSGSGTDY SLTISNLEQE
DIATYFCQQG NTLPYTFGGG TKLEIKGGGS GGGGQVQLQQ PGAELVRPGA SVKLSCKASG
YTFTSYWINW VKQRPGQGLE WIGNIYPSDS YTNYDQKFKD KATLTVDKSS STAYMQLSSP
TSEDSAVYYC TKSGEYGKIG YYAMDYWGQG TSVTVSSGGC GGGEVAALEK EVAALEKEVA
ALEKEVAALE K
DART-F의 제4 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLCD137) (CD137 MAB-4 VL (SEQ ID NO:91)), 개재 링커 펩타이드 (링커 1; GGGSGGGG (SEQ ID NO:16)), CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137) (CD137 MAB-4 VH (SEQ ID NO:90)), 개재 링커 펩타이드 (링커 2; GGCGGG (SEQ ID NO:18)), 헤테로다이머-촉진 (K-코일) 도메인 ( K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E) (SEQ ID NO:37) 및 C-말단을 포함한다.
그러므로, DART-F의 제4 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:91 -- SEQ ID NO:16 ─- SEQ ID NO:90─- SEQ ID NO:18 ─- SEQ ID NO:37로 구성된다.
DART-F의 제4 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:113)이다:
DIQMTQTTSS LSASLGDRVT ISCRASQDIS NYLNWYQQKP DGTVKLLIYY TSRLHSGVPS
RFSGSGSGTD YSLTISNLEQ EDIATYFCQQ GNTLPYTFGG GTKLEIKGGG SGGGGQVQLQ
QPGAELVRPG ASVKLSCKAS GYTFTSYWIN WVKQRPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYDQKFK
DKATLTVDKS SSTAYMQLSS PTSEDSAVYY CTKSGEYGKI GYYAMDYWGQ GTSVTVSSGG
CGGGKVAALK EKVAALKEKV AALKEKVAAL KE
G. DART-G
DART-G는 5개의 폴리펩타이드 사슬로 구성되며, 그 중 제2 및 제5 사슬이 동일하다 (도 5A, 여기서 VL2/VH2는 VL3/VH3과 동일함, 및 도 5B 참조).
DART-G의 제1 폴리펩타이드 사슬은 DART-D의 제1 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO:104)과 동일하다.
DART-G의 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬은 DART-D의 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO:105)과 동일하다.
DART-G의 제3 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, HER2/neu에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHHER2/neu) (hHER2 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:64)), IgG1 CH1 도메인 (SEQ ID NO:3), IgG1 힌지 도메인 (SEQ ID NO:7), "놉-포함 CH2 및 CH3 도메인 (SEQ ID NO:44), 개재 링커 펩타이드 (GGGSGGGSGGG (SEQ ID NO:24)), CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLCD137) (hCD137 MAB-3 VL3 (SEQ ID NO:89)), 개재 링커 펩타이드 (링커 1; GGGSGGGG (SEQ ID NO:16)), CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137) (hCD137 MAB-3 VH1 (SEQ ID NO:76)), 개재 링커 펩타이드 (링커 2; GGCGGG (SEQ ID NO:18)), 헤테로다이머-촉진 (E-코일) 도메인 ( E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K (SEQ ID NO:36), 및 C-말단을 포함한다.
그러므로, DART-G의 제3 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:64 -- SEQ ID NO:3 ─- SEQ ID NO:7 ─- SEQ ID NO:44 ─- SEQ ID NO:24 ─- SEQ ID NO:89 -- SEQ ID NO:16 ─- SEQ ID NO:76 ─- SEQ ID NO:18 ─- SEQ ID NO:36으로 구성된다.
DART-G의 제3 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:114)이다:
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW INTNIGEPTY
TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDD GYGNRVSYWG QGTLVTVSSA
STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG
LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP
SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM
TKNQVSLWCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ
QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGGG GSGGGSGGGD IQMTQSPSSL SASVGDRVTI
TCRPSQDISN YLNWYQQKPD KTVKLLIYYT SRLRSGVPSR FSGSGSGTDF TFTISSLQPE
DIATYFCQQG DTLPYTFGQG TKLEIKGGGS GGGGQVQLVQ SGAEVKKPGA SVKVSCKASG
YTFTSYWINW VKQAPGQGLE WIGNIYPSDS YTNYNQKFKD KATITADKST STAYMELSSL
RSEDTAVYYC TRDYGSSYSF DYWGQGTTVT VSSGGCGGGE VAALEKEVAA LEKEVAALEK
EVAALEK
SEQ ID NO:76 (CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137))의 아미노산 잔기가 SEQ ID NO:83 (hCD137 MAB-3 VH1A), SEQ ID NO:84 (hCD137 MAB-3 VH1B), SEQ ID NO:85 (hCD137 MAB-3 VH1C), 또는 SEQ ID NO:86 (hCD137 MAB-3 VH1D)의 잔기로 교체된 대체 DART-G 제3 폴리펩타이드 사슬이 사용될 수 있다. 이러한 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 최적화된 분자가 하기에서 기술된다.
DART-G의 제4 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLCD137) (hCD137 MAB-3 VL3 (SEQ ID NO:89)), 개재 링커 펩타이드 (링커 1; GGGSGGGG (SEQ ID NO:16)), CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137) (hCD137 MAB-3 VH1 (SEQ ID NO:76)), 개재 링커 펩타이드 (링커 2; GGCGGG (SEQ ID NO:18)), 헤테로다이머-촉진 (K-코일) 도메인 ( K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E) (SEQ ID NO:37) 및 C-말단을 포함한다.
그러므로, DART-G의 제4 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:89 -- SEQ ID NO:16 ─- SEQ ID NO:76─- SEQ ID NO:18 ─- SEQ ID NO:37로 구성된다.
DART-G의 제4 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:119)이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGSSYS FDYWGQGTTV TVSSGGCGGG
KVAALKEKVA ALKEKVAALK EKVAALKE
SEQ ID NO:76 (CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137))의 아미노산 잔기가 SEQ ID NO:83 (hCD137 MAB-3 VH1A), SEQ ID NO:84 (hCD137 MAB-3 VH1B), SEQ ID NO:85 (hCD137 MAB-3 VH1C), 또는 SEQ ID NO:86 (hCD137 MAB-3 VH1D)의 아미노산 잔기로 교체되어 있는 대체 DART-G 제4 폴리펩타이드 사슬이 사용될 수 있다. 이러한 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 최적화된 분자가 하기에서 기술된다.
H. 최적화된 DART-G
"DART-G1", "DART-G2", "DART-G3", 및 "DART-G4"로 표시된 DART-G의 최적화된 변종은 5개의 폴리펩타이드 사슬로 구성되며, 항체 hHER2 MAB-1 (1.3)의 HER2/neu 결합 도메인 및 임의의 항체 hCD137 MAB-3 (1A.3)-(1D.3)의 CD137 결합 도메인을 함유한다.
DART-G의 이러한 최적화된 변종의 제1 폴리펩타이드 사슬은 DART-G의 제1 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO:104)과 동일한 아미노산 서열을 가진다.
DART-G의 이러한 최적화된 변종의 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬은 DART-G의 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO:105)과 동일한 아미노산 서열을 가진다.
DART-G의 이러한 최적화된 변종의 제3 및 제4 폴리펩타이드 사슬은, 하기에서 제공되는 바, SEQ ID NO:115 및 SEQ ID NO:120 (DART-G1)의 아미노산 서열; SEQ ID NO:116 및 SEQ ID NO:121 (DART-G2)의 아미노산 서열; SEQ ID NO:117 및 SEQ ID NO:122 (DART-G3)의 아미노산 서열; 또는 SEQ ID NO:118 및 SEQ ID NO:123 (DART-G4)의 아미노산 서열을 가진다.
SEQ ID NO:83 (hCD137 MAB-3 VH1A)을 포함하는, 최적화된 DART-G1의 제3 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:115이다:
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW INTNIGEPTY
TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDD GYGNRVSYWG QGTLVTVSSA
STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG
LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP
SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM
TKNQVSLWCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ
QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGGG GSGGGSGGGD IQMTQSPSSL SASVGDRVTI
TCRPSQDISN YLNWYQQKPD KTVKLLIYYT SRLRSGVPSR FSGSGSGTDF TFTISSLQPE
DIATYFCQQG DTLPYTFGQG TKLEIKGGGS GGGGQVQVQL VQSGAEVKKP GASVKVSCKA
SGYTFTSYWI NWVKQAPGQG LEWIGNIYPS DSYTNYNQKF KDKATITADK STSTAYMELS
SLRSEDTAVY YCTRDYGS AY SFHP WGQGTT VTVSSGGCGG GEVAALEKEV AALEKEVAAL
EKEVAALEK
SEQ ID NO:84 (hCD137 MAB-3 VH1B)을 포함하는, 최적화된 DART-G2의 제3 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:116이다:
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW INTNIGEPTY
TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDD GYGNRVSYWG QGTLVTVSSA
STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG
LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP
SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM
TKNQVSLWCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ
QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGGG GSGGGSGGGD IQMTQSPSSL SASVGDRVTI
TCRPSQDISN YLNWYQQKPD KTVKLLIYYT SRLRSGVPSR FSGSGSGTDF TFTISSLQPE
DIATYFCQQG DTLPYTFGQG TKLEIKGGGS GGGGQVQVQL VQSGAEVKKP GASVKVSCKA
SGYTFTSYWI NWVKQAPGQG LEWIGNIYPS DSYTNYNQKF KDKATITADK STSTAYMELS
SLRSEDTAVY YCTRDYGS AY SMST WGQGTT VTVSSGGCGG GEVAALEKEV AALEKEVAAL
EKEVAALEK
SEQ ID NO:85 (hCD137 MAB-3 VH1C)을 포함하는, 최적화된 DART-G3의 제3 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:117이다:
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW INTNIGEPTY
TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDD GYGNRVSYWG QGTLVTVSSA
STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG
LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP
SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM
TKNQVSLWCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ
QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGGG GSGGGSGGGD IQMTQSPSSL SASVGDRVTI
TCRPSQDISN YLNWYQQKPD KTVKLLIYYT SRLRSGVPSR FSGSGSGTDF TFTISSLQPE
DIATYFCQQG DTLPYTFGQG TKLEIKGGGS GGGGQVQVQL VQSGAEVKKP GASVKVSCKA
SGYTFTSYWI NWVKQAPGQG LEWIGNIYPS DSYTNYNQKF KDKATITADK STSTAYMELS
SLRSEDTAVY YCTRDYGS AY SYSL WGQGTT VTVSSGGCGG GEVAALEKEV AALEKEVAAL
EKEVAALEK
SEQ ID NO:86 (hCD137 MAB-3 VH1D)을 포함하는, 최적화된 DART-G4의 제3 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:118이다:
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLEWMGW INTNIGEPTY
TEEFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDD GYGNRVSYWG QGTLVTVSSA
STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG
LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKRVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGGP
SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM
TKNQVSLWCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ
QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGGG GSGGGSGGGD IQMTQSPSSL SASVGDRVTI
TCRPSQDISN YLNWYQQKPD KTVKLLIYYT SRLRSGVPSR FSGSGSGTDF TFTISSLQPE
DIATYFCQQG DTLPYTFGQG TKLEIKGGGS GGGGQVQVQL VQSGAEVKKP GASVKVSCKA
SGYTFTSYWI NWVKQAPGQG LEWIGNIYPS DSYTNYNQKF KDKATITADK STSTAYMELS
SLRSEDTAVY YCTRDYGS SY SYNV WGQGTT VTVSSGGCGG GEVAALEKEV AALEKEVAAL
EKEVAALEK
SEQ ID NO:83 (hCD137 MAB-3 VH1A)을 포함하는, 최적화된 DART-G1의 제4 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:120이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGS AYS FHP WGQGTTV TVSSGGCGGG
KVAALKEKVA ALKEKVAALK EKVAALKE
SEQ ID NO:84 (hCD137 MAB-3 VH1B)를 포함하는, 최적화된 DART-G2의 제4 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:121이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGS AYS MST WGQGTTV TVSSGGCGGG
KVAALKEKVA ALKEKVAALK EKVAALKE
SEQ ID NO:85 (hCD137 MAB-3 VH1C)를 포함하는, 최적화된 DART-G3의 제4 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:122이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGS AYS YSL WGQGTTV TVSSGGCGGG
KVAALKEKVA ALKEKVAALK EKVAALKE
SEQ ID NO:86 (hCD137 MAB-3 VH1D)을 포함하는, 최적화된 DART-G4의 제4 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:123이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGS SYS YNV WGQGTTV TVSSGGCGGG
KVAALKEKVA ALKEKVAALK EKVAALKE
I. TRIDENT-A
TRIDENT-A는 예시의 TA, HER2/neu에 대한 2개의 CD137 결합 부위 및 한 개의 결합 부위를 가지는 삼가 CD137 x CD137 x TA 결합 분자이다. TRIDENT-A는 4개의 폴리펩타이드 사슬로 구성된다 (도 6A 참조, 여기서 VL1/VH1 (부위 A)은 VL2/VH2 (부위 B)와 동일하고 CD137에 결합하며, VL3/VH3 (부위 C)은 HER2/neu에 결합한다).
TRIDENT-A의 제1 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLCD137) (hCD137 MAB-3 VL3 (SEQ ID NO:89)), 개재 링커 펩타이드 (링커 1; GGGSGGGG (SEQ ID NO:16)), CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137) (hCD137 MAB-3 VH1 (SEQ ID NO:76)), 개재 링커 펩타이드 (링커 2; ASTKG (SEQ ID NO:19)), 시스테인-함유 헤테로다이머-촉진 (E-코일) 도메인 ( E VAAC E K- E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K (SEQ ID NO:38)), 개재 링커 펩타이드 (GGGDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:21)), "놉-포함 CH2 및 CH3 도메인 (SEQ ID NO:44), 및 C-말단을 포함한다.
그러므로, TRIDENT-A의 제1 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:89 -- SEQ ID NO:16 ─- SEQ ID NO:76 ─- SEQ ID NO:19 ─- SEQ ID NO:38 ─- SEQ ID NO:21 ─- SEQ ID NO:44로 구성된다.
TRIDENT-A의 제1 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:192)이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGS SYS FDY WGQGTTV TVSSASTKGE
VAACEKEVAA LEKEVAALEK EVAALEKGGG DKTHTCPPCP APEAAGGPSV FLFPPKPKDT
LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH
QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLWCLVK
GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
ALHNHYTQKS LSLSPGK
TRIDENT-A의 제2 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLCD137) (hCD137 MAB-3 VL3 (SEQ ID NO:89)), 개재 링커 펩타이드 (링커 1; GGGSGGGG (SEQ ID NO:16)), CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137) (hCD137 MAB-3 VH1 (SEQ ID NO:76)), 개재 링커 펩타이드 (링커 2; ASTKG (SEQ ID NO:19)), 시스테인 함유 헤테로다이머-촉진 (K-코일) 도메인 ( K VAAC K E- K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E (SEQ ID NO:39)), 및 C-말단을 포함한다.
그러므로, TRIDENT-A의 제2 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:89 -- SEQ ID NO:16 ─- SEQ ID NO:76 ─- SEQ ID NO:19 ─- SEQ ID NO:39로 구성된다.
TRIDENT-A의 제2 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:197)이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGS SYS FDY WGQGTTV TVSSASTKGK
VAACKEKVAA LKEKVAALKE KVAALKE
SEQ ID NO:76 (CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137))의 아미노산 잔기가 SEQ ID NO:83 (hCD137 MAB-3 VH1A), SEQ ID NO:84 (hCD137 MAB-3 VH1B), SEQ ID NO:85 (hCD137 MAB-3 VH1C), SEQ ID NO:86 (hCD137 MAB-3 VH1D), SEQ ID NO:208 (hCD137 MAB-3 VH1E), SEQ ID NO:209 (hCD137 MAB-3 VH1F), 또는 SEQ ID NO:210 (hCD137 MAB-3 VH1G)의 아미노산 잔기로 교체된 및/또는 SEQ ID NO:89 (CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VHCD137))의 아미노산 잔기가 SEQ ID NO:211 (hCD137 MAB-3 VL4), SEQ ID NO:212 (hCD137 MAB-3 VL5), SEQ ID NO:213 (hCD137 MAB-3 VL6), SEQ ID NO:214 (hCD137 MAB-3 VL7), SEQ ID NO:215 (hCD137 MAB-3 VL8), SEQ ID NO:216 (hCD137 MAB-3 VL9), SEQ ID NO:217 (hCD137 MAB-3 VL10), SEQ ID NO:218 (hCD137 MAB-3 VL11), SEQ ID NO:219 (hCD137 MAB-3 VL12), SEQ ID NO:220 (hCD137 MAB-3 VL13), SEQ ID NO:221 (hCD137 MAB-3 VL14), 또는 SEQ ID NO:222 (hCD137 MAB-3 VL15)의 아미노산 잔기로 교체된 대체 TRIDENT-A 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬이 사용될 수 있다. 이러한 많은 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 최적화된/탈면역화된 분자가 하기에서 기술된다.
TRIDENT-A의 제3 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, HER2/neu에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHHER2/neu) (hHER2 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:64)), 인간 IgG1 CH1 도메인 (SEQ ID NO:3), 인간 IgG1 힌지 영역 (SEQ ID NO:7), 및 "구멍-포함" CH2 및 CH3 도메인 (SEQ ID NO:47)을 포함한다. 그러므로, TRIDENT-A의 제3 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:64 -- SEQ ID NO:3 ─- SEQ ID NO:7 ─- SEQ ID NO:47로 구성되며, 상기 제공된 DART-D의 제1 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO:104)과 동일한 아미노산 서열을 가진다.
TRIDENT-A의 제4 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, HER2/neu에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLHER2/neu) (hHER2 MAB-1 VL3 (SEQ ID NO:69)), 인간 IgG CL 카파 도메인 (SEQ ID NO:1), 및 C-말단을 포함한다. 그러므로, TRIDENT-A의 제4 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:69 -- SEQ ID NO:1로 구성되며, 상기 제공된 DART-D의 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO: 105)과 동일한 아미노산 서열을 가진다.
1. TRIDENT-A의 최적화된 변종
"TRIDENT-A1", "TRIDENT-A2", "TRIDENT-A3", 및 "TRIDENT-A4"로 표시된 TRIDENT-A의 최적화된 변종은 4개의 폴리펩타이드 사슬로 구성되며, 항체 hHER2 MAB-1 (1.3)의 HER2/neu 결합 도메인 및 임의의 항체 hCD137 MAB-3 (1A.3)-(1D.3)의 CD137 결합 도메인을 함유한다.
이러한 최적화된 TRIDENT-A의 제3 폴리펩타이드 사슬은 상기 주지된 것과 같이 DART-D의 제1 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO:104)과 동일한 TRIDENT-A의 제3 폴리펩타이드 사슬과 동일한 아미노산 서열을 가진다.
이러한 최적화된 TRIDENT-A의 제4 폴리펩타이드 사슬은, 상기 주지된 것과 같이, DART-D의 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO:105)과 동일한 TRIDENT-A의 제4 폴리펩타이드 사슬과 동일한 아미노산 서열을 가진다.
TRIDENT-A의 이러한 최적화된 변종의 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬은, 하기에서 제공되는 바, SEQ ID NO:193 및 SEQ ID NO:198 (TRIDENT-A1); SEQ ID NO:194 및 SEQ ID NO:199 (TRIDENT-A2); SEQ ID NO:195 및 SEQ ID NO:200 (TRIDENT-A3); 또는 SEQ ID NO:196 및 SEQ ID NO:201 (TRIDENT-A4)의 아미노산 서열을 가진다.
SEQ ID NO:83 (hCD137 MAB-3 VH1A)을 포함하는, TRIDENT-A1의 제1 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:193이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGS AYS FHP WGQGTTV TVSSASTKGE
VAACEKEVAA LEKEVAALEK EVAALEKGGG DKTHTCPPCP APEAAGGPSV FLFPPKPKDT
LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH
QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLWCLVK
GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
ALHNHYTQKS LSLSPGK
SEQ ID NO:84 (hCD137 MAB-3 VH1B)를 포함하는, TRIDENT-A2의 제1 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:194이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGS AYS MST WGQGTTV TVSSASTKGE
VAACEKEVAA LEKEVAALEK EVAALEKGGG DKTHTCPPCP APEAAGGPSV FLFPPKPKDT
LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH
QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLWCLVK
GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
ALHNHYTQKS LSLSPGK
SEQ ID NO:85 (hCD137 MAB-3 VH1C)를 포함하는, TRIDENT-A3의 제1 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:195이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGS AYS YSL WGQGTTV TVSSASTKGE
VAACEKEVAA LEKEVAALEK EVAALEKGGG DKTHTCPPCP APEAAGGPSV FLFPPKPKDT
LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH
QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLWCLVK
GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
ALHNHYTQKS LSLSPGK
SEQ ID NO:86 (hCD137 MAB-3 VH1D)을 포함하는, TRIDENT-A4의 제1 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:196이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGS SYS YNV WGQGTTV TVSSASTKGE
VAACEKEVAA LEKEVAALEK EVAALEKGGG DKTHTCPPCP APEAAGGPSV FLFPPKPKDT
LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH
QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLWCLVK
GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
ALHNHYTQKS LSLSPGK
SEQ ID NO:83 (hCD137 MAB-3 VH1A)을 포함하는, TRIDENT-A1의 제2 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:198이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGS AYS FHP WGQGTTV TVSSASTKGK
VAACKEKVAA LKEKVAALKE KVAALKE
SEQ ID NO:84 (hCD137 MAB-3 VH1B)를 포함하는, TRIDENT-A2의 제2 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:199이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGS AYS MST WGQGTTV TVSSASTKGK
VAACKEKVAA LKEKVAALKE KVAALKE
SEQ ID NO:85 (hCD137 MAB-3 VH1C)를 포함하는, TRIDENT-A3의 제2 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:200이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGS AYS YSL WGQGTTV TVSSASTKGK
VAACKEKVAA LKEKVAALKE KVAALKE
SEQ ID NO:86 (hCD137 MAB-3 VH1D)을 포함하는, TRIDENT-A4의 제2 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:201이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRPSQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TSRLRSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVKQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGS SYS YNV WGQGTTV TVSSASTKGK
VAACKEKVAA LKEKVAALKE KVAALKE
2. TRIDENT-A의 탈면역화된 변종
TRIDENT-A의 탈면역화된 변종은 4개의 폴리펩타이드 사슬로 구성되며, 항체 hHER2 MAB-1 (1.3)의 HER2/neu 결합 도메인 및 임의의 hCD137 MAB-3 VH1E-VH1G의 CD137 VH 도메인 및 임의의 hCD137 MAB-3 VL4-VL15의 CD137 VL 도메인을 함유한다.
"TRIDENT-A5"로 표시된 TRIDENT-A의 예시의 탈면역화된 변종은 4개의 폴리펩타이드 사슬로 구성되며, 항체 hHER2 MAB-1 (1.3)의 HER2/neu 결합 도메인 및 임의의 항체 hCD137 MAB-3 (1E.15)의 CD137 결합 도메인을 함유한다.
TRIDENT-A5의 제1 폴리펩타이드 사슬 (hCD137 MAB-3 VH1E 및 hCD137 MAB-3 VL15를 포함함)의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:229)이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCQASQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TGRARSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVRQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGSAYS MSTWGQGTTV TVSSASTKGE
VAACEKEVAA LEKEVAALEK EVAALEKGGG DKTHTCPPCP APEAAGGPSV FLFPPKPKDT
LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH
QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLWCLVK
GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
ALHNHYTQKS LSLSPGK
TRIDENT-A5의 제2 폴리펩타이드 사슬 (hCD137 MAB-3 VH1E 및 hCD137 MAB-3 VL15를 포함함)의 아미노산 서열은 SEQ ID NO:230이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCQASQDIS NYLNWYQQKP DKTVKLLIYY TGRARSGVPS
RFSGSGSGTD FTFTISSLQP EDIATYFCQQ GDTLPYTFGQ GTKLEIKGGG SGGGGQVQLV
QSGAEVKKPG ASVKVSCKAS GYTFTSYWIN WVRQAPGQGL EWIGNIYPSD SYTNYNQKFK
DKATITADKS TSTAYMELSS LRSEDTAVYY CTRDYGSAYS MSTWGQGTTV TVSSASTKGK
VAACKEKVAA LKEKVAALKE KVAALKE
이러한 탈면역화된 TRIDENT-A5의 제3 폴리펩타이드 사슬은, 상기에서 주지된 것과 같이 DART-D의 제1 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO:104)과 동일한, TRIDENT-A의 제3 폴리펩타이드 사슬과 동일한 아미노산 서열을 가진다.
이러한 탈면역화된 TRIDENT-A5의 제4 폴리펩타이드 사슬은, 상기에서 주지된 것과 같이 DART-D의 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬과 동일한, TRIDENT-A의 제4 폴리펩타이드 사슬과 동일한 아미노산 서열을 가진다.
J. TRIDENT-B
TRIDENT-B는 예시의 TA, 5T4에 대한 2개의 CD137 결합 부위 및 한 개의 결합 부위를 가지는 삼가 CD137 x CD137 x TA 결합 분자이다. TRIDENT-B는 4개의 폴리펩타이드 사슬로 구성된다 (도 6A 참조, 여기서 VL1/VH1 (부위 A)은 VL2/VH2 (부위 B)와 동일하고 CD137에 결합하며, VL3/VH3 (부위 C)은 5T4에 결합한다).
TRIDENT-B의 제1 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLCD137) (hCD137 MAB-3 VL3 (SEQ ID NO:89)), 개재 링커 펩타이드 (링커 1; GGGSGGGG (SEQ ID NO:16)), CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137) (hCD137 MAB-3 VH1 (SEQ ID NO:76)), 개재 링커 펩타이드 (링커 2; ASTKG (SEQ ID NO:19)), 시스테인 함유 헤테로다이머-촉진 (E-코일) 도메인 ( E VAAC E K- E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K (SEQ ID NO:38)), 개재 링커 펩타이드 (GGGDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:21)), "놉-포함 CH2 및 CH3 도메인 (SEQ ID NO:44), 및 C-말단을 포함한다. 그러므로, TRIDENT-B의 제1 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:89 -- SEQ ID NO:16 ─- SEQ ID NO:76 ─- SEQ ID NO:19 ─- SEQ ID NO:38 ─- SEQ ID NO:21 ─- SEQ ID NO:44로 구성되며, 상기에서 제공된 TRIDENT-B의 제1 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO: 192)과 동일한 아미노산 서열을 가진다.
TRIDENT-B의 제2 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLCD137) (hCD137 MAB-3 VL3 (SEQ ID NO:89)), 개재 링커 펩타이드 (링커 1; GGGSGGGG (SEQ ID NO:16)), CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137) (hCD137 MAB-3 VH1 (SEQ ID NO:76)), 개재 링커 펩타이드 (링커 2; ASTKG (SEQ ID NO:19)), 시스테인 함유 헤테로다이머-촉진 (K-코일) 도메인 ( K VAAC K E- K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E (SEQ ID NO:39)), 및 C-말단을 포함한다. 그러므로, TRIDENT-B의 제2 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:89 -- SEQ ID NO:16 ─- SEQ ID NO:76 ─- SEQ ID NO:19 ─- SEQ ID NO:39로 구성되며, 상기 제공된 TRIDENT-A의 제2 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO: 197)과 동일한 아미노산 서열을 가진다.
SEQ ID NO:76 (CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD137))의 아미노산 잔기가 SEQ ID NO:83 (hCD137 MAB-3 VH1A), SEQ ID NO:84 (hCD137 MAB-3 VH1B), SEQ ID NO:85 (hCD137 MAB-3 VH1C), SEQ ID NO:86 (hCD137 MAB-3 VH1D), SEQ ID NO:208 (hCD137 MAB-3 VH1E), SEQ ID NO:209 (hCD137 MAB-3 VH1F), 또는 SEQ ID NO:210 (hCD137 MAB-3 VH1G)의 아미노산 잔기로 교체되어 있는 및/또는 SEQ ID NO:89 (CD137에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VHCD137))의 잔기가 SEQ ID NO:211 (hCD137 MAB-3 VL4), SEQ ID NO:212 (hCD137 MAB-3 VL5), SEQ ID NO:213 (hCD137 MAB-3 VL6), SEQ ID NO:214 (hCD137 MAB-3 VL7), SEQ ID NO:215 (hCD137 MAB-3 VL8), SEQ ID NO:216 (hCD137 MAB-3 VL9), SEQ ID NO:217 (hCD137 MAB-3 VL10), SEQ ID NO:218 (hCD137 MAB-3 VL11), SEQ ID NO:219 (hCD137 MAB-3 VL12), SEQ ID NO:220 (hCD137 MAB-3 VL13), SEQ ID NO:221 (hCD137 MAB-3 VL14), 또는 SEQ ID NO:222 (hCD137 MAB-3 VL15)의 아미노산 잔기로 교체되어 있는 대체 TRIDENT-B 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬이 사용될 수 있다. 많은 이러한 폴리펩타이드 사슬을 포함하고 있는 최적화된/탈면역화된 분자가 본원에서 기술되며 최적화된/탈면역화된 TRIDENT-A 분자 (예컨대, TRIDENT-A1 - TRIDENT-A5)의 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬과 동일한 아미노산 서열을 가진다.
TRIDENT-B의 제3 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, 5T4에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VH5T4) (h5T4 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:134)), 인간 IgG1 CH1 도메인 (SEQ ID NO:3), 인간 IgG1 힌지 영역 (SEQ ID NO:7), 및 "구멍-포함" CH2 및 CH3 도메인 (SEQ ID NO:47)을 포함한다. 그러므로, TRIDENT-B의 제1 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:134 -- SEQ ID NO:3 ─- SEQ ID NO:7 ─- SEQ ID NO:47로 구성된다.
TRIDENT-B의 제3 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:231)이다:
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SFWMHWVRQA PGQGLEWMGR
IDPNRGGTEY NEKAKSRVTM TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAGGN
PYYPMDYWGQ GTTVTVSSAS TKGPSVFPLA PSSKSTSGGT AALGCLVKDY
FPEPVTVSWN SGALTSGVHT FPAVLQSSGL YSLSSVVTVP SSSLGTQTYI
CNVNHKPSNT KVDKRVEPKS CDKTHTCPPC PAPEAAGGPS VFLFPPKPKD
TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST
YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY
TLPPSREEMT KNQVSLSCAV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD
SDGSFFLVSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNRYTQK SLSLSPGK
TRIDENT-B의 제4 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, 5T4에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VL5T4) (h5T4 MAB-1 VL1 (SEQ ID NO:135)), 인간 IgG CL 카파 도메인 (SEQ ID NO:1), 및 C-말단을 포함한다. 그러므로, TRIDENT-B의 제4 폴리펩타이드 사슬은: SEQ ID NO:135 -- SEQ ID NO:1로 구성된다.
TRIDENT-B의 제4 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열은 (SEQ ID NO:232)이다:
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQGIS NYLAWFQQKP GKAPKSLIYR ANRLQSGVPS
RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDVATYYCLQ YDDFPWTFGQ GTKLEIKRTV AAPSVFIFPP
SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT
LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
1. 최적화된 및 탈면역화된 변종 TRIDENT-B
TRIDENT-B의 최적화된 및 탈면역화된 변종은 4개의 폴리펩타이드 사슬로 구성되며, 항체 h5T4 MAB-1의 5T4 결합 도메인 및 임의의 hCD137 MAB-3 VH1A-VH1G의 CD137 VH 도메인 및 임의의 hCD137 MAB-3 VL3-VL15의 CD137 VL 도메인을 함유한다.
"TRIDENT-B2", 및 "TRIDENT-B5"로 표시된, TRIDENT-B의 예시의 최적화된 및 탈면역화된 변종은 4개의 폴리펩타이드 사슬로 구성되며, 항체 h5T4 MAB-1의 5T4 결합 도메인 및 항체 hCD137 MAB-3 (1B.3), 및 hCD137 MAB-3 (1E.15)의 CD137 결합 도메인을 각각 함유한다.
TRIDENT-B2의 제1 폴리펩타이드 사슬은 상기에서 제공된 바, TRIDENT-A2의 제1 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO:194)과 동일한 아미노산 서열을 가진다.
TRIDENT-B2의 제2 폴리펩타이드 사슬은 상기에서 제공된 바, TRIDENT-A2의 제2 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO:199)와 동일한 아미노산 서열을 가진다.
TRIDENT-B5의 제1 폴리펩타이드 사슬은 상기에서 제공된 바, TRIDENT-A5의 제1 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO:229)과 동일한 아미노산 서열을 가진다.
TRIDENT-B5의 제2 폴리펩타이드 사슬은 상기에서 제공된 바, TRIDENT-A5의 제2 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO:230)과 동일한 아미노산 서열을 가진다.
TRIDENT-B의 예시의 최적화된 및 탈면역화된 변종 둘 다의 제3 폴리펩타이드 사슬은 TRIDENT-B의 제3 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO:231)과 동일한 아미노산 서열을 가진다.
TRIDENT-B의 예시의 최적화된 및 탈면역화된 변종 둘 다의 제4 폴리펩타이드 사슬은 TRIDENT-B의 제4 폴리펩타이드 사슬 (SEQ ID NO:232)과 동일한 아미노산 서열을 가진다.
K. 대체 CD137 x TA 결합 분자
본 발명의 관점에서 인지되는 것과 같이, 상기 예시의 분자들 중 임의의 분자의 일반적인 구조를 가지고 대체 종양 항원에 대한 결합 부위를 포함하며 및/또는 최적화된/탈면역화된 CD137 결합 부위를 가지는 추가적인 CD137 x TA 결합 분자는 본원에 개시된 항-HER2/neu 또는 항-5T4 항체의 VL 및 VH 도메인 및/또는 임의의 최적화된/탈면역화된 CD137 항체의 VL 및 VH 도메인 대신에 대체 종양 항원 항체의 VL 및 VH 도메인을 사용함으로써 구성될 수 있다. 유사하게, 본원에서 제공되는 것과 같이, 대체 CD137 x TA 결합 분자는 마찬가지로 대체 링커 및/또는 헤테로다이머 촉진 도메인을 포함하여 구성될 수 있다.
V. 대조군 분자
본 발명의 CD137 x TA 결합 분자의 특성을 보다 의미있게 증명하기 위하여, 그것의 VL 및 VH 도메인이 대조군 Fc-포함 디아바디 및 다른 대조군 분자를 제조하기 위해 사용될 수 있는 대조군 항체가 하기에 제시된다.
항-플루오레세인 항체 4-4-20 (Gruber, M. et al. (1994) "Efficient Tumor Cell Lysis Mediated By A Bispecific Single Chain Antibody Expressed In Escherichia coli", J. Immunol. 152(11):5368-5374; Bedzyk, W.D. et al. (1989) "Comparison Of Variable Region Primary Structures Within An Anti-Fluorescein Idiotype Family", J. Biol. Chem. 264(3): 1565-1569)은 적합한 대조군 항체, 디아바디이다. 항-플루오레세인 항체 4-4-20의 가변 경쇄 및 가변 중쇄 도메인의 아미노산 서열은 다음과 같다:
항-플루오레세인 항체 4-4-20의 VH 도메인의 아미노산 서열 (SEQ ID NO:124)이 하기에 제시된다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
EVKLDETGGG LVQPGRPMKL SCVASGFTFS DYWM NWVRQS PEKGLEWVA Q IRNKPYNYET
YYSDSVKG RF TISRDDSKSS VYLQMNNLRV EDMGIYYCTG SYYGMDY WGQ GTSVTVSS
항-플루오레세인 항체 4-4-20의 VL 도메인의 아미노산 서열 (SEQ ID NO:125)이 하기에 제시된다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨):
DVVMTQTPFS LPVSLGDQAS ISC RSSQSLV HSNGNTYLR W YLQKPGQSPK VLIY KVSNRF
S GVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDLGV YFC SQSTHVP W TFGGGTKLE IK
팔리비주맙(Palivizumab) (예컨대, Protein Data Bank (PDB) ID No. 2HWZ 참조)은 RSV의 F 단백질의 A 항원 부위에서의 에피토프에 대해 지시된 인간화된 단클론성 항체 (IgG)이며, 그것의 VL 및 VH 도메인이 대조군 디아바디 및 다른 대조군 결합 분자를 제조하기 위해 사용될 수 있는 적합한 대조군 항체이다. 대체 항-RSV 당단백질 F 항체로는 모타비주맙(motavizumab) (예컨대, PDB ID No. 3IXT 참조) 및 경쇄의 CDR 1로부터 시스테인 잔기를 제거하기 위해 조작된 팔리비주맙의 변종을 들 수 있다. 팔리비주맙의 변종은 하기에서 대조군 분자의 생성을 위해 사용되었다.
팔리비주맙의 변종의 VH 도메인의 아미노산 서열 (SEQ ID NO:126)이 하기에 제시된다 (CDRH 잔기는 밑줄로 표시됨):
QVTLRESGPA LVKPTQTLTL TCTFSGFSLS TSGMSVG WIR QPPGKALEWL AD IWWDDKKD
YNPSLKS RLT ISKDTSKNQV VLKVTNMDPA DTATYYCAR S MITNWYFDV W GAGTTVTVSS
팔리비주맙 및 변종의 VL 도메인의 아미노산 서열 (SEQ ID NO:127)이 하기에 제시된다 (CDRL 잔기는 밑줄로 표시됨):
DIQMTQSPST LSASVGDRVT ITC RASQSVG YMH WYQQKPG KAPKLLIY DT SKLAS GVPSR
FSGSGSGTEF TLTISSLQPD DFATYYC FQG SGYPFT FGGG TKLEIK
VI. CD137 x TA 결합 및 대조군 분자의 요약
표 5는 DART-A - DART-G, TRIDENT-A-A5의 도메인 특성을 요약한 것이다:
명칭
(사슬의 수) 		모 mAbs Fc 도메인 사슬 번호 SEQ ID NO. 기타 구성요소
DART-A
(4개 사슬) 		hHER2 MAB-1 (1.2)
hCD137 MAB-3 (1.1) 		IgG1 (AA) 1 98 E/K 코일
2 99
3 98
4 99
DART-B
(4개 사슬) 		hHER2 MAB-1 (1.3)
hCD137 MAB-3 (1.3) 		IgG1 (AA) 1 100 E/K 코일
2 101
3 100
4 101
DART-C
(4개 사슬) 		hCD137 MAB-3 (1.3)
hHER2 MAB-1 (1.3) 		IgG1 (AA) 1 102 E/K 코일
2 103
3 102
4 103
DART-D
(5개 사슬) 		hHER2 MAB-1 (1.3)
CD137 MAB-3 		IgG1 (AA) (놉/구멍) 1 104 CL/CH1 및 E/K 코일
2 105
3 106
4 107
5 105
DART-E
(5개 사슬) 		CD137 MAB-3
hHER2 MAB-1 (1.3) 		IgG1 (AA) (놉/구멍) 1 108 CL/CH1 및 E/K 코일
2 109
3 110
4 111
5 109
DART-F
(5개 사슬) 		hHER2 MAB-1 (1.3)
CD137 MAB-4 		IgG1 (AA) (놉/구멍) 1 104 CL/CH1 및 E/K 코일
2 105
3 112
4 113
5 105
DART-G
(5개 사슬) 		hHER2 MAB-1 (1.3)
hCD137 MAB-3 (1.3) 		IgG1 (AA) (놉/구멍) 1 104 CL/CH1 및 E/K 코일
2 105
3 114
4 119
5 105
최적화된 DART-G1-G4
(5개 사슬) 		hHER2 MAB-1 (1.3)
hCD137 MAB-3 (1A.3)-(1D.3)
IgG1 (AA) (놉/구멍)		 1 104 CL/CH1 및 E/K 코일
2 105
3/4 115/120
3/4 116/121
3/4 117/122
3/4 118/123
5 105
TRIDENT-A
(4개 사슬) 		hHER2 MAB-1 (1.3)
hCD137 MAB-3 (1.3) 		IgG1 (AA) (놉/구멍) 1 192 CL/CH1 및 E/K 코일
2 197
3 104
4 105
최적화된 TRIDENT-A1-A4
(4개 사슬) 		hHER2 MAB-1 (1.3)
hCD137 MAB-3 (1A.3)-(1D.3) 		IgG1 (AA) (놉/구멍) 1/2 193/198 CL/CH1 및 E/K 코일
1/2 194/199
1/2 195/200
1/2 196/201
3 104
4 105
탈면역화된 TRIDENT A5
(4개 사슬) 		hHER2 MAB-1 (1.3)
hCD137 MAB-3 (1E.15) 		IgG1 (AA) (놉/구멍) 1 229 CL/CH1 및 E/K 코일
2 230
3 104
4 105
TRIDENT-B h5T4 MAB-1
hCD137 MAB-3 (1.3) 		IgG1 (AA) (놉/구멍) 1 192 CL/CH1 및 E/K 코일
2 197
3 231
4 232
최적화된 TRIDENT-B2 h5T4 MAB-1
hCD137 MAB-3 (1B.3) 		IgG1 (AA) (놉/구멍) 1 194 CL/CH1 및 E/K 코일
2 199
3 231
4 232
탈면역화된 TRIDENT-B5 h5T4 MAB-1
hCD137 MAB-3 (1E.15) 		IgG1 (AA) (놉/구멍) 1 229 CL/CH1 및 E/K 코일
2 230
3 231
4 232
표 6은 제조된 추가적인 DART 및 TRIDENT 분자의 특성을 나타낸다:
명칭
(사슬의 수) 		모 mAbs Fc 도메인 기타 구성요소
DART-1
(4개 사슬) 		hHER2 MAB-1 (1.2)
CD137 MAB-1 		IgG1 (AA) hCD137 MAB-3(1.1)의 VH/VL 대신 CD137 MAB-1의 VH/VL을 포함하는 것을 제외하고 DART-A와 동일함
DART-2(4개 사슬) hHER2 MAB-1 (1.2)
CD137 MAB-2 		IgG1 (AA) hCD137 MAB-3(1.1)의 VH/VL 대신 CD137 MAB-2의 VH/VL을 포함하는 것을 제외하고 DART-A와 동일함
DART-3(4개 사슬) hHER2 MAB-1 (1.2)
변종 팔리비주맙 		IgG1 (AA) hCD137 MAB-3(1.1)의 VH/VL 대신 변종 팔리비주맙의 VH/VL을 포함하는 것을 제외하고 DART-A와 동일함
DART-4(5개 사슬) hHER2 MAB-1 (1.3)
CD137 MAB-1 		IgG1 (AA) (놉/구멍) CD137 MAB-3의 VH/VL 대신 CD137 MAB-1의 VH/VL을 포함하는 것을 제외하고 DART-D와 동일함
DART-5(5개 사슬) hHER2 MAB-1 (1.3)
CD137 MAB-2 		IgG1 (AA) (놉/구멍) CD137 MAB-3의 VH/VL 대신 CD137 MAB-2의 VH/VL을 포함하는 것을 제외하고 DART-D와 동일함
DART-6(5개 사슬) 변종 팔리비주맙
CD137 MAB-3 		IgG1 (AA) (놉/구멍) hHER2 MAB-1(1.3)의 VH/VL 대신 변종 팔리비주맙의 VH/VL을 포함하는 것을 제외하고 DART-D와 동일함
DART-7(4개 사슬) 인간화된 EphA2 MAB-3
CD137 MAB-1 		IgG1 (AA) hHER2 MAB-1 (1.2) 대신 EphA2 MAB-3의 인간화된 변종의 VH/VL을 포함하는 것을 제외하고 DART-1과 동일함
DART-8(4개 사슬) 인간화된 EphA2 MAB-3
변종 팔리비주맙 		IgG1 (AA) hHER2 MAB-1 (1.2) 대신 EphA2 MAB-3의 인간화된 변종의 VH/VL을 포함하는 것을 제외하고 DART-3과 동일함
TRIDENT-1(4개 사슬) 변종 팔리비주맙
CD137 MAB-3 (1B.3) 		IgG1 (AA) (놉/구멍) hHER2 MAB-1 (1.3)의 VH/VL 대신 변종 팔리비주맙의 VH/VL을 포함하는 것을 제외하고 TRIDENT A2와 동일함
TRIDENT-2(4개 사슬) hHER2 MAB-1 (1.3)
4-4-20
변종 팔리비주맙 		IgG1 (AA) (놉/구멍) CD137 MAB-3 (1.3) VH 및 VL 도메인이 변종 팔리비주맙의 VH/VL, 및 4-4-20의 VH/VL로 교체된 것을 제외하고 TRIDENT-A와 동일함
TRIDENT-3(4개 사슬) 5T4 MAB-1
4-4-20
팔리비주맙 		IgG1 (AA) (놉/구멍) hHER2 MAB-1 (1.3) VH 및 VL 도메인이 5T4 MAB-1의 VH/VL로 교체된 것을 제외하고 TRIDENT-2와 동일함
TRIDENT-4(4개 사슬) 팔리비주맙
CD137 MAB-3 (1E.15) 		IgG1 (AA) (놉/구멍) hHER2 MAB-1 (1.3)의 VH/VL 대신 변종 팔리비주맙의 VH/VL을 포함하는 것을 제외하고 TRIDENT A5와 동일함
VII. 제약학적 조성물
발명의 조성물은 제약학적 조성물의 제조에 유용한 벌크 약물 조성물 (예컨대, 순수하지 않거나 비멸균성 조성물) 및 단위 투여 형태의 조제에 사용될 수 있는 제약학적 조성물 (즉, 대상체 또는 환자에게 투여하기에 적합한 조성물)을 포함한다. 이러한 조성물은 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자, 또는 이러한 제제와 제약학적으로 허용되는 담체의 조합을 포함한다. 바람직하게, 발명의 조성물은 예방학적으로 또는 치료적으로 유효한 양의 발명의 CD137 x TA 이중특이적 Fc-포함 디아바디 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함한다.
발명은 또한 발명의 CD137 x TA 결합 분자 및 면역 반응을 자극하는데 효과적인 하나 이상의 추가적인 분자 (예컨대, 면역 체크포인트 억제제) 및/또는 적어도 하나의 특정 종양 항원 (상기에서 기술된 바, TA)에 대해 특이적인 종양 항원에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 추가적인 분자 (예컨대, 종양 특이적 단클론성 항체 또는 디아바디)와 조합되고, 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약학적 조성물을 포함한다.
특정 구체예에서, 용어 "제약학적으로 허용되는"은 미국 연방정부 또는 주정부의 규제기관에 의해 승인된 또는 미국 약전 또는 동물, 보다 구체적으로는 인간에서의 사용을 위해 일반적으로 인식된 기타 약전에 열거된 것을 의미한다. 용어 "담체"는 희석제, 보조제 (예컨대, 프로인트 보조제 (완전 및 불완전)), 부형제, 또는 치료제와 함게 투여되는 비히클을 나타낸다. 이러한 제약학적 담체는 멸균된 액체일 수 있다. 제약학적 조성물이 정맥내로 투여될 때 수성 담체, 예컨대 식염수 용액, 수성 덱스트로오스 및 글리세롤 용액이 바람직하다.
일반적으로, 발명의 조성물의 성분들은, 예를 들어, 활성제의 양을 표시하는 앰풀 또는 사쉐(sachette)와 같은 밀폐 밀봉 용기 중의 건식 동결건조 분말 또는 수분 없는 농축물로서, 별도로 또는 단위 투여 형태로 함께 혼합되어 공급된다. 조성물이 주입에 의해 투여되는 경우에, 조성물은 멸균된 제약학적 등급의 물 또는 식염수가 들어있는 주입 보틀로 분배될 수 있다. 조성물이 주사에 의해 투여되는 경우에, 성분들이 투여 전에 혼합될 수 있도록 주사용 멸균수 또는 식염수 앰풀이 제공될 수 있다.
발명은 또한 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자를 단독으로 또는 다른 작용제, 바람직하게는 제약학적으로 허용되는 담체와 함께 함유하는 하나 이상의 용기를 포함하는 제약학적 팩 또는 키트를 제공한다. 추가적으로, 질환의 치료에 유용한 하나 이상의 다른 예방제 또는 치료제 또한 제약학적 팩 또는 키트에 포함될 수 있다. 발명은 또한 발명의 제약학적 조성물의 하나 이상의 성분들로 채워진 하나 이상의 용기를 포함하는 제약학적 팩 또는 키트를 제공한다. 이러한 용기(들)과 선택적으로 결부되는 것은 약제 또는 생물학적 생성물의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 처방된 형태의 주의사항일 수 있고, 이런 주의사항은 인간 투여를 위한 제조, 사용 또는 판매의 정부기관에 의한 승인을 반영한다.
키트는 발명의 CD137 x TA 결합 분자를 포함할 수 있다. 키트는 암 치료에 유용한 하나 이상의 다른 예방제 및/또는 치료제를, 하나 이상의 용기에 더 포함할 수 있고; 및/또는 키트는 하나 이상의 종양 항원 (TA)에 결합하는 하나 이상의 세포독성 항체를 더 포함할 수 있다. 특정 구체예에서, 다른 예방제 또는 치료제는 화학치료제이다. 다른 구체예에서, 예방제 또는 치료제는 생물학적 또는 호르몬 치료제이다.
VIII. 투여 방법
본 발명의 조성물은 대상체에게 발명의 분자, 또는 발명의 분자를 포함하는 제약학적 조성물의 유효량을 투여함으로써 암 또는 다른 질환, 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상의 치료, 예방, 및 개선을 위해 제공될 수 있다. 바람직한 측면으로, 이러한 조성물은 실질적으로 정제된다 (즉, 실질적으로 조성물의 효과를 제한하거나 바람직하지 못한 부작용을 유발하는 물질이 없다). 특정 구체예에서, 대상체는 동물, 바람직하게는 포유류, 예컨대 비영장류 (예컨대, 소, 말, 고양이, 개, 설치류, 등) 또는 영장류 (예컨대, 시노몰구스 원숭이와 같은 원숭이, 인간, 등)이다.
다양한 전달 시스템, 예컨대, 리포솜에의 캡슐화, 미세입자, 미세캡슐, 항체 또는 융합 단백질을 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체-매개된 세포내이입 (예컨대, Wu et al. (1987) "Receptor-Mediated In Vitro Gene Transformation By A Soluble DNA Carrier System", J. Biol. Chem. 262:4429-4432), 레트로바이러스 또는 다른 벡터의 일부로서 핵산의 구성, 등이 알려져 있고 발명의 분자 및 조성물을 투여하기 위해 사용될 수 있다.
발명의 분자의 투여 방법으로는, 한정하는 것은 아니지만, 비경구 투여 (예컨대, 피내, 근육내, 복강내, 정맥내 및 피하), 경막외, 및 점막 (예컨대, 비내 및 구강 경로) 투여를 포함한다. 특정 구체예에서, 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 근육내로, 정맥내로, 또는 피하로 투여된다. 조성물은 임의의 편리한 경로에 의해, 예를 들어, 주입 또는 볼루스 주사에 의해, 상피 또는 점막 라이닝 (예컨대, 구강 점막, 직장 및 장 점막, 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있고 다른 생물학적으로 활성인 작용제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신적이거나 국소적일 수 있다.
발명은 또한 발명의 CD137 x TA 결합 분자가 분자의 양을 표시하는 앰풀 또는 사쉐와 같은 밀폐 밀봉된 용기에 포장되는 것을 제공한다. 한 구체예에서, 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 밀폐 밀봉된 용기 중의 건식 멸균된 동결건조 분말 또는 수분 없는 농축물로서 공급되고, 예컨대 물 또는 식염수로 대상체에게 투여하기 위한 적절한 농도로 재구성될 수 있다. 바람직하게, 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 밀폐 밀봉된 용기 중의 건식 멸균된 동결건조 분말로서 공급된다.
본 발명의 동결건조된 CD137 x TA 결합 분자는 그것의 원래 용기에 2 내지 8℃에서 보관되어야 하고 분자는 재구성된 후 12시간 이내에, 바람직하게는 6시간 이내에, 5시간 이내에, 3시간 이내에, 또는 1시간 이내에 투여되어야 한다. 대체 구체예에서, 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 분자, 융합 단백질, 또는 콘쥬게이트된 분자의 양 및 농도를 표시하는 밀폐 밀봉된 용기에 액체 형태로 공급된다. 바람직하게, 발명의 CD137 x TA 결합 분자의 액체 형태는 밀폐 밀봉된 용기로 공급된다.
장애와 관련된 하나 이상의 증상의 치료, 예방 또는 개선에 효과적일 발명의 조성물의 양은 표준 임상 기법에 의해 결정될 수 있다. 제제에 사용될 정확한 용량은 또한 투여 경로, 및 상태의 중증도에 따라 좌우될 것이고, 의사의 판단 및 각 환자의 상황에 따라 결정되어야 한다. 유효량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유래된 용량-반응 곡선으로부터 외삽될 수 있다.
본원에서 사용되는 바, 제약학적 조성물의 "유효량"은, 한 구체예에서, 제한 없이, 질환의 증상을 약화시키는 질환으로부터 유발되는 증상들 (예컨대, 암세포의 증식, 종양 존재, 종양 전이, 등)을 감소시키고, 그로써 질환에 걸린 사람들의 삶의 질을 증가시키고, 질환을 치료하기 위해 필요한 다른 약물의 용량을 감소시키며, 표적화 및/또는 내부화를 통해서와 같이 또 다른 약물의 효과를 증강시키고, 질환의 진행을 지연시키며, 및/또는 개체의 생존율을 연장시키는 것과 같은 임상 결과를 포함하는, 유익하거나 바람직한 결과를 이루기에 충분한 양이다.
이러한 유효량은 하나 이상의 투여로 투여될 수 있다. 본 발명의 목적에 대해, 약물, 화합물, 또는 제약학적 조성물의 유효량은 직접적으로나 간접적으로 바이러스 존재의 증식 (또는 효과)를 감소시키고 질환 (예컨대, 암)의 발달을 감소 및/또는 지연시키기에 충분한 양이다. 일부 구체예에서, 약물, 화합물, 또는 제약학적 조성물의 유효량은 또 다른 약물, 화합물, 또는 제약학적 조성물과 함께 이루어질 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 그러므로, "유효량"은 하나 이상의 화학요법제를 투여하는 맥락에서 고려될 수 있고, 단일 작용제는 만약, 하나 이상의 다른 작용제와 함께, 바람직한 결과가 이루어질 수 있거나 이루어진다면 유효량으로 제공된 것으로 고려될 수 있다. 개별적인 요구는 다르지만, 각 성분의 유효량의 최적 범위의 결정은 당업계의 기술수준 내에 있다.
발명에 포함된 CD137 x TA 결합 분자의 경우, 환자에게 투여되는 투여량은 바람직하게는 수령 대상체의 체중 (kg)을 기준으로 결정된다. 투여되는 투여량은 전형적으로 대상체의 체중의 약 0.01 μg/kg 내지 약 150 mg/kg, 또는 그 이상이다.
본 발명의 CD137 x TA 결합 분자의 투여량 및 투여 빈도는, 예를 들어, 지질화와 같은 변형에 의해 CD137 x TA 결합 분자의 흡수 및 조직 침투를 증강시킴으로써 감소되거나 변경될 수 있다.
환자에게 투여되는 발명의 CD137 x TA 결합 분자의 투여량은 단일 작용제 요법으로서의 사용을 위해 계산될 수 있다. 대안적으로, 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 상기 분자가 단일 작용제 요법으로서 사용될 때보다 환자에게 투여되는 투여량이 더 적도록 다른 치료 조성물과 함께 사용된다.
발명의 CD137 x TA 결합 분자의 치료적으로 또는 예방학적으로 유효한 양으로의 대상체의 치료는 단일 치료를 포함하거나, 또는 바람직하게는, 일련의 치료를 포함할 수 있다. 바람직한 예에서, 대상체는 그러한 디아바디로 약 1 내지 52주 동안 주 1회, 격주로 1회 (즉, 2주마다 1회), 또는 3주마다 1회 치료된다. 발명의 제약학적 조성물은 하루에 1회, 하루에 2회, 또는 하루에 3회 투여될 수 있다. 대안적으로, 제약학적 조성물은 주 1회, 주 2회, 2주마다 1회, 월 1회, 6주마다 1회, 2개월마다 1회, 년 2회 또는 년 1회 투여될 수 있다. 치료를 위해 사용된 분자의 효과적인 투여량은 특정 치료 과정에 걸쳐 증가하거나 감소할 수 있는 것 또한 인지될 것이다.
IX. 발명의 조성물의 용도
본 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 T 세포 (APC)에 결합하는 능력을 가지며 (예를 들어, 이러한 T 세포의 표면에서 발현된 CD137에 결합함으로써), TA-발현 종양 세포에 결합하는 능력을 가진다 (예를 들어, 이러한 종양 세포의 표면에서 발현된 TA에 결합함으로써). 그러므로, 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 T 세포 내지 TA-발현 종양 세포에 동시 국지화하는 능력을 가지며, 그로써 TA의 발현과 관련된 또는 TA의 발현을 특징으로 하는 임의의 질환 또는 상태를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 그러므로, 제한 없이, 이러한 분자를 포함하는 제약학적 조성물은, 한정하는 것은 아니지만, 급성 골수성 백혈병, 부신 종양, AIDS-관련 암, 포상 연부 육종, 성상세포 종양, 방광암, 골암, 뇌 및 척수암, 전이성 뇌 종양, 유방암, 경동맥 소체 종양, 자궁경부암, 연골 육종, 척삭종, 혐색소성 신장세포 암종, 투명 세포 암종, 결장암, 대장암, 피부 양성 섬유 조직구종, 결합조직성 소원형 세포 종양, 뇌실막세포종, 유윙 종양, 골외 점액성 연골 육종, 골성 불완전 섬유생성증, 골 섬유 이형성, 방광 또는 담관암, 위암, 임신성 영양막 질환, 생식 세포 종양, 두경부암, 간세포 암종, 교모세포종, 섬세포 종양, 카포시 육종, 신장암, 백혈병, 지방종/양성 지방종증 종양, 지방육종/악성 지방종증 종양, 간암, 림프종, 폐암, 수모세포종, 흑색종, 수막종, 악성 중피종, 다발성 내분비샘 신생물, 다발성 골수종, 골수이형성 증후군, 신경모세포종, 신경내분비 종양, 비-소세포 폐암, 난소암, 췌장암, 인두암, 유두상 갑상선 암종, 부갑상선 종양, 소아과 암, 말초 신경초 종양, 크롬 친화세포종, 뇌하수체 종양, 전립선암, 후방 포도막 흑색종, 희귀성 혈액 장애, 신장 세포 암종, 전이성 신장암, 횡문근양 종양, 횡문근육종, 육종, 피부암, 연조직 육종, 편평 세포암, 위암, 활막 육종, 고환암, 흉선 암종, 가슴샘종, 전이성 갑상선암, 또는 자궁암의 암세포를 포함하는, 암세포의 존재를 특징으로 하는 이러한 암을 포함한, TA를 발현하는 암의 진단 또는 치료에 사용될 수 있다.
특히, 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자는, 각각이 고도로 TA를 발현하는, 두경부의 편평 세포암 (SCCHN), 방광암, 유방암, 대장암, 위암, 교모세포종, 신장암, 비-소세포 폐암 (NSCLC)을 포함한 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 인두암, 전립선암, 신장 세포 암종, 및 신경모세포종 및 횡문근육종을 포함한 아동기의 작은 둥근 청색 세포 종양의 치료에 유용하다.
본 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 추가적으로 상기 기술된 상태의 치료를 위한 약물의 제조에 사용될 수 있다.
본원에서 입증되는 바와 같이, 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 종양 표적화제의 활성을 증강시킨다. 따라서, 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 추가적으로, 한정하는 것은 아니지만, 원하는 TA에 결합할 수 있는 항체, 항체의 항원 결합 단편 (예컨대, scFv, Fab, F(ab)2, 등), TandAb, 등), 다중특이적 결합 분자 (예컨대, 디아바디, 이중특이적 항체, 삼가 결합 분자, 등)를 포함한 다른 종양 표적화제와 함께 사용될 수 있다. 구체적으로, 종양 표적화제는 이러한 조합에 사용된 CD137 x TA 결합 분자와 동일하거나 상이한 TA에 결합할 수 있는 것으로 고려된다. 특정 구체예에서, 종양 표적화제는 TA 및, 예를 들어, CD3, 및/또는 CD8을 포함한, T-세포상에서 발현된 에피토프에 결합하는 다중특이적 분자이다. 예시의 종양 표적화제로는, 한정하는 것은 아니지만, TA 및 CD3 ("TA x CD3")에 결합하는 분자를 들 수 있다. 예시의 TA x CD3 결합 분자 (예컨대, 이중특이적 항체, DART® 분자, BiTe® 분자, TandAb, 등), 및 그러한 조합에 사용될 수 있는 TA x CD3 결합 분자의 제조 방법은 당업계에 잘 알려져 있다 (예를 들어, WO2013026835, WO2013158856, WO2014047231; WO2014110601; WO2014131711; WO 2015/026894; WO2015026892; WO 2015/184203; WO 2016/036937; WO2016182751; WO2017091656; WO2017/142928; WO2017118675 참조).
본원에서 제공되는 바, 종양 표적화제 (예컨대, TA x CD3 결합 분자)와 조합된 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자의 사용은 억제성 면역 조절제 프로그램화된 사멸-1 ("PD-1", 또한 "CD279"로서 알려짐)의 상향 조절로 이어질 수 있다. PD-1은 PD-L1 및 PD-L2 (또한 B7-H1 및 B7-DC로서 알려짐)에 결합함으로써 면역 체계의 억제를 매개한다 (Flies, D.B. et al. (2007) "The New B7s: Playing a Pivotal Role in Tumor Immunity", J. Immunother. 30(3):251-260; 미국 특허 제 6,803,192호; 제 7,794,710호; 미국 특허 출원 공개 번호 2005/0059051; 2009/0055944; 2009/0274666; 2009/0313687; PCT 출원 공개 번호 WO 01/39722; WO 02/086083). 그러한, 본원에서 입증되는 바와 같이, PD-1의 억제 활성을 억제하는 제제 ("PD-1/PD-L1 체크포인트 억제제")의 추가의 첨가는 PD-1의 발현을 하향 조절하고 추가로 TA x CD3 결합 분자와 같은 CD137 x TA 및 종양 표적화제의 활성을 증강시킨다. 발명은 구체적으로 PD-1에 결합하는 항체의 에피토프-결합 부위를 포함하는 PD-1/PD-L1 체크포인트 억제제를 포함한다.
따라서, 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 추가적으로 다른 종양 표적화제와 조합하여, 추가로 PD-1/PD-L1 체크포인트 억제제와 조합하여 사용될 수 있다. PD-1/PD-L1 체크포인트 억제제로는, 한정하는 것은 아니지만, PD-1 및/또는 PD-L1에 결합할 수 있는 항체, 항체의 항원 결합 단편 (예컨대, scFv, Fab, F(ab)2, 등), TandAb, 등), 다중특이적 결합 분자 (예컨대, 디아바디, 이중특이적 항체, 삼가 결합 분자, 등)를 들 수 있다. 예시의 PD-1/PD-L1 체크포인트 억제제 및, 그러한 조합에 사용될 수 있는, 그것의 제조 방법은 당업계에 잘 알려져 있다 (예를 들어, 미국 특허 제 9,617,338호; 9,273,135호, 9,062,112호, 8,981,063호, 8,779,108호, 8,609,089호; 8,552,154호; 8,460,927호; 8,008,449호; 미국 특허출원 공개 번호: 2015/0197571; 2016/0075782; 2016/0159905; 2016/0319019; 2017/0044259; PCT 특허 공개공보 번호 WO 2004/056875; WO 2006/121168; WO 2008/156712; WO 2012/135408; WO 2012/145549; WO 2013/014668; WO 2014/055897; WO 2013/079174; WO 2014/179664; WO 2014/194302; WO 2015/109124; WO 2015/112800; WO 2015/112805; WO 2016/000619; WO 2016007235; WO 2016/061142; WO 2016/111645; WO 2016/210262; WO 2016/014688; WO 2016/077397; WO 2017/019846; WO 2017/079112; WO 2017/087547; 및 WO 2017/106656 참조).
이러한 조합이 사용되는 경우, 구체적으로, 하나 이상의 분자가 대상체에게 동시에" 투여될 수 있거나 (예컨대, CD137 x TA 결합 분자는 TA x CD3 결합 분자 및/또는 PD-1/PD-L1 체크포인트 억제제가 투여되는 것과 동시에 투여될 수 있음) 및/또는 하나 이상의 분자가 "순차적으로" 투여될 수 있는 것 (예컨대, CD137 x TA 결합 분자가 투여되고, 나중에, TA x CD3 결합 분자 및/또는 PD-1/PD-L1 체크포인트 억제제가 투여되거나, 또는 그 반대로 투여됨)으로 고려된다.
X. 발명의 특별한 구체예
이제 일반적으로 발명을 기술하자면, 발명은 다음의 번호를 매긴 구체예들 ("E")을 참조함으로써 보다 쉽게 이해될 것이고, 구체예들은 예시로 제공되는 것이며 명시되지 않는 한 본 발명을 제한하는 것으로 의도되지 않는다:
E1. CD137 x TA 결합 분자, 이러한 결합 분자는 CD137의 에피토프 및 종양 항원 (TA)의 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있고, 이러한 CD137 x TA 결합 분자는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 제1 경쇄 가변 도메인, 및 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 제1 중쇄 가변 도메인을 포함하며;
(A) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL15 (SEQ ID NO:222)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(B) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL14 (SEQ ID NO:221)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(C) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL11 (SEQ ID NO:218)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(D) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL10 (SEQ ID NO:217)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(E) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL6 (SEQ ID NO:213)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(F) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL4 (SEQ ID NO:211)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(G) (1) 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH (SEQ ID NO:74)의 중쇄 CDR이거나;
(H) (1) 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-4 VL (SEQ ID NO:91)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-4 VH (SEQ ID NO:90)의 중쇄 CDR이거나;
(I) (1) 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-5 VL (SEQ ID NO:97)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-5 VH (SEQ ID NO:96)의 중쇄 CDR이거나;
(J) (1) 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1A (SEQ ID NO:83)의 중쇄 CDR이거나;
(K) (1) 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(L) (1) 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1C (SEQ ID NO:85)의 중쇄 CDR이거나;
또는
(M) (1) 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1D (SEQ ID NO:86)의 중쇄 CDR이다.
E2. E1의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 제1 중쇄 가변 도메인은:
(A) hCD137 MAB-3 (SEQ ID NO:77); 또는
(B) hCD137 MAB-4 (SEQ ID NO:92)의 아미노산 서열을 포함한다.
E3. E1 또는 E2의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 제1 경쇄 가변 도메인은:
(A) hCD137 MAB-3 (SEQ ID NO:82); 또는
(B) hCD137 MAB-4 (SEQ ID NO:93)의 아미노산 서열을 포함한다.
E4. E1 내지 E3 중 어느 하나의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 제1 중쇄 가변 도메인은:
(A) hCD137 MAB-3 VH1E (SEQ ID NO:208);
(B) hCD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84);
(C) hCD137 MAB-3 VH1A (SEQ ID NO:83);
(D) hCD137 MAB-3 VH1 (SEQ ID NO:76);
(E) hCD137 MAB-3 VH1C (SEQ ID NO:85);
(F) hCD137 MAB-3 VH1D (SEQ ID NO:86);
(G) hCD137 MAB-3 VH1F (SEQ ID NO:209);
(H) hCD137 MAB-3 VH1G (SEQ ID NO:210); 또는
(I) hCD137 MAB-4 VH1 (SEQ ID NO:92)의 아미노산 서열을 포함한다.
E5. E1 내지 E4 중 어느 하나의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 제1 경쇄 가변 도메인은:
(A) hCD137 MAB-3 VL15 (SEQ ID NO:222);
(B) hCD137 MAB-3 VL14 (SEQ ID NO:221);
(C) hCD137 MAB-3 VL1 (SEQ ID NO:87);
(D) hCD137 MAB-3 VL2 (SEQ ID NO:88);
(E) hCD137 MAB-3 VL3 (SEQ ID NO:89);
(F) hCD137 MAB-3 VL4 (SEQ ID NO:211);
(G) hCD137 MAB-3 VL5 (SEQ ID NO:212);
(H) hCD137 MAB-3 VL6 (SEQ ID NO:213);
(I) hCD137 MAB-3 VL7 (SEQ ID NO:214);
(J) hCD137 MAB-3 VL8 (SEQ ID NO:215);
(K) hCD137 MAB-3 VL9 (SEQ ID NO:216);
(L) hCD137 MAB-3 VL10 (SEQ ID NO:217);
(M) hCD137 MAB-3 VL11 (SEQ ID NO:218);
(N) hCD137 MAB-3 VL12 (SEQ ID NO:219);
(O) hCD137 MAB-3 VL13 (SEQ ID NO:220);
(P) hCD137 MAB-4 VL1 (SEQ ID NO:94); 또는
(Q) hCD137 MAB-4 VL2 (SEQ ID NO:95)의 아미노산 서열을 포함한다.
E6. E1 내지 E5 중 어느 하나의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 종양 항원 (TA)은: 19.9; 종양태아성 단백질 5T4; 항원 4.2; A33; AFP; ALCAM; BAGE; 베타-카테닌; CA125; Carboxypeptidase M; B1;CD5; CD19; CD20; CD22; CD23; CD25; CD27; CD30; CD33; CD36; CD46; CD52; CD79a/CD79b; CD123; CD317; CEA; CEACAM5; CEACAM6; CO-43; CO-514; CTLA-1; CTLA-4; 사이토케라틴 8; E1 시리즈; EGF-R; 에프린 수용체; Erb; F3; FC10.2; GAGE GD2; GD3; GD49; GM2; GM3; GICA 19-9; gp37; gp75; gp100; HER-2/neu; 인간 B-림프종 항원-CD20; 인간 유지방 구상체 항원; 인간 유두종바이러스-E6/인간 유두종바이러스-E7; HMW-MAA; I 항원; ITGB6; IL13Rα2; JAM-3; KID3; KID31; KS 1/4 pan-암종 항원; KS 1/4; KSA; L6; L20; LEA; LUCA-2; M1:22:25:8; M18; M39; MAGE; MART; Myl; MUC-1; MUM-1; N-아세틸글루코사미닐트랜스페라제; 네오당단백질; NS-10; OFA-1; OFA-2; 온코스타틴 M; p15; PSA; PSMA; PEMA; PIPA; 전립선 산 포스페이트; R24; ROR1; SSEA-1; SSEA-3; SSEA-4; sTn; T 세포 수용체 유래 펩타이드; TAG-72; TL5; TNF-α 수용체; TNF-β 수용체; TNF-γ 수용체; TRA-1-85; 트랜스페린 수용체; TSTA; 및 VEGF-R로 구성되는 종양 항원의 군으로부터 선택된다.
E7. E1 내지 E5 중 어느 하나의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 종양 항원 (TA)은 표 1의 종양 항원으로부터 선택된다.
E8. E1 내지 E7 중 어느 하나의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 종양 항원 (TA)은 HER2/neu, EphA2 또는 5T4이다.
E9. E8의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 종양 항원 (TA)은 HER2/neu이고 CD137 x TA 결합 분자는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 제2 경쇄 가변 도메인, 및 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 제2 중쇄 가변 도메인을 포함하며; 및
(A) 제2 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 HER2 MAB-1 VL (SEQ ID NO:63)의 경쇄 CDR이고; 및
(B) 제2 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 HER2 MAB-1 VH (SEQ ID NO:62)의 중쇄 CDR이다.
E10. E9의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서:
(A) (1) 제2 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 hHER2 MAB-1 VL1 (SEQ ID NO:67)의 경쇄 CDR이거나;
(2) 제2 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 hHER2 MAB-1 VL2 (SEQ ID NO:68)의 경쇄 CDR이거나; 또는
(3) 제2 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 hHER2 MAB-1 VL3 (SEQ ID NO:69)의 경쇄 CDR이고;
및
(B) (1) 제2 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 hHER2 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:64)의 중쇄 CDR이거나;
(2) 제2 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 hHER2 MAB-1 VH2 (SEQ ID NO:65)의 중쇄 CDR이거나; 또는
(3) 제2 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 hHER2 MAB-1 VH3 (SEQ ID NO:66)의 중쇄 CDR이다.
E11. E10의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 제2 중쇄 가변 도메인은:
(A) hHER2 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:64);
(B) hHER2 MAB-1 VH2 (SEQ ID NO:65); 또는
(C) hHER2 MAB-1 VH3 (SEQ ID NO:66)의 아미노산 서열을 포함한다.
E12. E10 또는 E11의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 제2 경쇄 가변 도메인은:
(A) hHER2 MAB-1 VL1 (SEQ ID NO:67);
(B) hHER2 MAB-1 VL2 (SEQ ID NO:68); 또는
(C) hHER2 MAB-1 VL3 (SEQ ID NO:69)의 아미노산 서열을 포함한다.
E13. E8의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 종양 항원 (TA)은 5T4이고 CD137 x TA 결합 분자는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 제2 경쇄 가변 도메인, 및 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 제2 중쇄 가변 도메인을 포함하며; 및
(I) (A) 제2 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 5T4 MAB-1 VL (SEQ ID NO:135)의 경쇄 CDR이고; 및
(B) 제2 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 5T4 MAB-1 VH (SEQ ID NO:134)의 중쇄 CDR이거나; 또는
(II) (A) 제2 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 5T4 MAB-2 VL (SEQ ID NO:137)의 경쇄 CDR이고; 및
(B) 제2 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 5T4 MAB-2 VH (SEQ ID NO:136)의 중쇄 CDR이다.
E14. E13의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 제2 중쇄 가변 도메인은 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:135)의 아미노산 서열을 포함한다.
E15. E13 또는 E14의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 제2 경쇄 가변 도메인은 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:136)의 아미노산 서열을 포함한다.
E16. E1 내지 E15 중 어느 하나의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 분자는 제1, 제2, 제3, 및 제4 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 이중특이적 사가 Fc-포함 디아바디이고, 여기서 폴리펩타이드 사슬은 공유 결합된 복합체를 형성한다.
E17. E16의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 종양 항원 (TA)은 HER2/neu이고 및:
(I) (A) 제1 및 the 제3 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:100의 아미노산 서열을 가지며; 및
(B) 제2 및 제4 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:101의 아미노산 서열을 가지거나;
또는
(II) (A) 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:102의 아미노산 서열을 가지며; 및
(B) 제2 및 제4 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:103의 아미노산 서열을 가진다.
E18. E1 내지 E15 중 어느 하나의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 분자는 이중특이적 및 사가이고, 제1, 제2, 제3, 제4, 및 제5 폴리펩타이드 사슬을 포함하며, 폴리펩타이드 사슬은 공유 결합된 복합체를 형성한다.
E19. E15의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 종양 항원 (TA)은 HER2/neu이고 및:
(I) (A) 제1 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:104의 아미노산 서열을 가지고;
(B) 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:105의 아미노산 서열을 가지며;
(C) 제3 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:106의 아미노산 서열을 가지고; 및
(D) 제4 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:107의 아미노산 서열을 가지거나;
또는
(II) (A) 제1 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:104의 아미노산 서열을 가지고;
(B) 제2 및 제5 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:105의 아미노산 서열을 가지며;
(C) 제3 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:116, SEQ ID NO:117, 또는 SEQ ID NO:118의 아미노산 서열을 가지고; 및
(D) 제4 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:119, SEQ ID NO:120, SEQ ID NO:121, SEQ ID NO:122, 또는 SEQ ID NO:123의 아미노산 서열을 가진다.
E20. E1 내지 E15 중 어느 하나의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 상기 분자는 이중특이적 및 삼가이고, 제1, 제2, 제3, 및 제4, 폴리펩타이드 사슬을 포함하며, 상기 폴리펩타이드 사슬은 공유 결합된 복합체를 형성한다.
E21. E20의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 상기 종양 항원 (TA)은 HER2/neu이고 및:
(I) (A) 상기 제1 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:192, SEQ ID NO:193, SEQ ID NO:194, SEQ ID NO:195, SEQ ID NO:196, 또는 SEQ ID NO:229의 아미노산 서열을 가지고;
(B) 상기 제2 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:197, SEQ ID NO:198, SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:200, SEQ ID NO:201, 또는 SEQ ID NO:230의 아미노산 서열을 가지며;
(C) 상기 제3 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:104의 아미노산 서열을 가지고; 및
(D) 상기 제4 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:105의 아미노산 서열을 가진다.
E23. E20의 CD137 x TA 결합 분자, 여기서 상기 종양 항원 (TA)은 5T4이고 및:
(A) 상기 제1 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:192, SEQ ID NO:193, SEQ ID NO:194, SEQ ID NO:195, SEQ ID NO:196, 또는 SEQ ID NO:229의 아미노산 서열을 가지고;
(B) 상기 제2 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:197, SEQ ID NO:198, SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:200, SEQ ID NO:201, 또는 SEQ ID NO:230의 아미노산 서열을 가지며;
(C) 상기 제3 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:231의 아미노산 서열을 가지고; 및
(D) 상기 제4 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:232의 아미노산 서열을 가진다.
E24. E1 내지 E23 중 하나의 CD137 x TA 결합 분자, 및 생리적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약학적 조성물.
E25. 종양 항원 (TA)의 발현과 관련된 또는 종양 항원 (TA)의 발현을 특징으로 하는 질환 또는 상태의 치료에서의, E1 내지 E23 중 하나의 CD137 x TA 결합 분자, 또는 E24의 제약학적 조성물의 용도.
E26. E25, 여기서 종양 항원 (TA)의 발현과 관련된 또는 종양 항원 (TA)의 발현을 특징으로 하는 질환 또는 상태는 암이다.
E27. CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 도메인, 및 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 CD137 결합 분자; 여기서:
(A) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL15 (SEQ ID NO:222)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(B) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL14 (SEQ ID NO:221)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(C) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL11 (SEQ ID NO:218)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(D) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL10 (SEQ ID NO:217)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(E) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL6 (SEQ ID NO:213)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(F) (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL4 (SEQ ID NO:211)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(G) (1) 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH (SEQ ID NO:74)의 중쇄 CDR이거나;
(H) (1) 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-4 VL (SEQ ID NO:91)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-4 VH (SEQ ID NO:90)의 중쇄 CDR이거나;
(I) (1) 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-5 VL (SEQ ID NO:97)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-5 VH (SEQ ID NO:96)의 중쇄 CDR이거나;
(J) (1) 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1A (SEQ ID NO:83)의 중쇄 CDR이거나;
(K) (1) 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 중쇄 CDR이거나;
(L) (1) 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1C (SEQ ID NO:85)의 중쇄 CDR이거나; 또는
(M) (1) 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
(2) 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 CD137 MAB-3 VH1D (SEQ ID NO:86)의 중쇄 CDR이다.
E28. E27의 CD137 결합 분자, 여기서 중쇄 가변 도메인은:
(A) hCD137 MAB-3 (SEQ ID NO:77); 또는
(B) hCD137 MAB-4 (SEQ ID NO:92)의 아미노산 서열을 포함한다.
E29. E27 또는 E28의 The CD137 결합 분자, 여기서 경쇄 가변 도메인은:
(A) hCD137 MAB-3 (SEQ ID NO:82); 또는
(B) hCD137 MAB-4 (SEQ ID NO:93)의 아미노산 서열을 포함한다.
E30. E27 내지 E29 중 어느 하나의 CD137 결합 분자, 여기서 중쇄 가변 도메인은:
(A) hCD137 MAB-3 VH1 (SEQ ID NO:76);
(B) hCD137 MAB-3 VH1A (SEQ ID NO:83);
(C) hCD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84);
(D) hCD137 MAB-3 VH1C (SEQ ID NO:85);
(E) hCD137 MAB-3 VH1D (SEQ ID NO:86);
(F) hCD137 MAB-3 VH1E (SEQ ID NO:208);
(G) hCD137 MAB-3 VH1F (SEQ ID NO:209);
(H) hCD137 MAB-3 VH1G (SEQ ID NO:210); 또는
(I) hCD137 MAB-4 VH1 (SEQ ID NO:92)의 아미노산 서열을 포함한다.
E31. E27 내지 E30 중 어느 하나의 CD137 결합 분자, 여기서 경쇄 가변 도메인은:
(A) hCD137 MAB-3 VL15 (SEQ ID NO:222);
(B) hCD137 MAB-3 VL14 (SEQ ID NO:221);
(C) hCD137 MAB-3 VL1 (SEQ ID NO:87);
(D) hCD137 MAB-3 VL2 (SEQ ID NO:88);
(E) hCD137 MAB-3 VL3 (SEQ ID NO:89);
(F) hCD137 MAB-3 VL4 (SEQ ID NO:211);
(G) hCD137 MAB-3 VL5 (SEQ ID NO:212);
(H) hCD137 MAB-3 VL6 (SEQ ID NO:213);
(I) hCD137 MAB-3 VL7 (SEQ ID NO:214);
(J) hCD137 MAB-3 VL8 (SEQ ID NO:215);
(K) hCD137 MAB-3 VL9 (SEQ ID NO:216);
(L) hCD137 MAB-3 VL10 (SEQ ID NO:217);
(M) hCD137 MAB-3 VL11 (SEQ ID NO:218);
(N) hCD137 MAB-3 VL12 (SEQ ID NO:219);
(O) hCD137 MAB-3 VL13 (SEQ ID NO:220);
(P) hCD137 MAB-4 VL1 (SEQ ID NO:94); 또는
(Q) hCD137 MAB-4 VL2 (SEQ ID NO:95)의 아미노산 서열을 포함한다.
E32. E27 내지 E31 중 어느 하나의 CD137 결합 분자, 여기서 분자는 항체 또는 그것의 항원 결합 단편이다.
E33. E27 내지 E32 중 어느 하나의 CD137 결합 분자, 및 생리적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약학적 조성물.
E34. 억제된 면역 체계와 관련된 또는 종양 항원 (TA)의 발현을 특징으로 하는 질환 또는 상태의 치료에서의, E27 내지 E31 중 어느 하나의 CD137 결합 분자, 또는 E33의 제약학적 조성물의 용도.
E35. E34의 용도, 여기서 억제된 면역 체계와 관련된 또는 종양 항원 (TA)의 발현을 특징으로 하는 상태는 암이다.
E36. CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 도메인, 및 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항-HER2/neu 결합 분자; 여기서
(A) 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 HER2 MAB-1 VL (SEQ ID NO:63)의 경쇄 CDR이고; 및
(B) 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 HER2 MAB-1 VH (SEQ ID NO:62)의 중쇄 CDR이다.
E37. E36의 항-HER2/neu 결합 분자, 여기서:
(A) (1) 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 hHER2 MAB-1 VL1 (SEQ ID NO:67)의 경쇄 CDR이거나;
(2) 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 hHER2 MAB-1 VL2 (SEQ ID NO:68)의 경쇄 CDR이거나; 또는
(3) 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 hHER2 MAB-1 VL3 (SEQ ID NO:69)의 경쇄 CDR이고;
및
(B) (1) 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 hHER2 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:64)의 중쇄 CDR이거나;
(2) 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 hHER2 MAB-1 VH2 (SEQ ID NO:65)의 중쇄 CDR이거나; 또는
(3) 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 hHER2 MAB-1 VH3 (SEQ ID NO:66)의 중쇄 CDR이다.
E38. E37의 항-HER2/neu 결합 분자, 여기서 중쇄 가변 도메인은:
(A) hHER2 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:64);
(B) hHER2 MAB-1 VH2 (SEQ ID NO:65); 또는
(C) hHER2 MAB-1 VH3 (SEQ ID NO:66)의 아미노산 서열을 포함한다.
E39. E37 및 E38의 항-HER2/neu 결합 분자, 여기서 경쇄 가변 도메인은:
(A) hHER2 MAB-1 VL1 (SEQ ID NO:67);
(B) hHER2 MAB-1 VL2 (SEQ ID NO:68); 또는
(C) hHER2 MAB-1 VL3 (SEQ ID NO:69)의 아미노산 서열을 포함한다.
E40. E36 내지 E39 중 어느 하나의 항-HER2/neu 결합 분자, 여기서 분자는 항체 또는 그것의 항원 결합 단편이다.
E41. E36 내지 E40 중 어느 하나의 항-HER2/neu 결합 분자 및 생리적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약학적 조성물.
E42. HER2/neu의 발현과 관련된 또는 HER2/neu의 발현을 특징으로 하는 질환 또는 상태의 치료에서의, E33 내지 E37 중 어느 하나의 항-HER2/neu 결합 분자, 또는 E41의 제약학적 조성물의 용도.
E43. E42의 용도, 여기서 HER2/neu의 발현과 관련된 또는 HER2/neu의 발현을 특징으로 하는 상태는 암이다.
E44. E1 내지 E23 중 어느 하나의 CD137 x TA 결합 분자, 또는 구체예 E24의 제약학적 조성물과 조합된 상기 종양 표적화제를 투여하는 단계를 포함하는 종양 표적화제의 활성을 증강시키는 방법.
E45. E1 내지 E23 중 어느 하나의 CD137 x TA 결합 분자, 또는 E24의 제약학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 억제된 면역 체계와 관련된 또는 종양 항원 (TA)의 발현을 특징으로 하는 질환 또는 상태의 치료 방법.
E46. E45의 방법, 여기서 억제된 면역 체계와 관련된 또는 종양 항원 (TA)의 발현을 특징으로 하는 상태는 암이다.
E47. 추가로 종양 표적화제를 투여하는 단계를 포함하는 E45 또는 E46의 방법.
E48. PD-1/PD-L1 체크포인트 억제제를 투여하는 단계는 더 포함하는 E44 내지 E47 중 어느 하나의 방법.
E49. E44 또는 E47의 방법, 여기서 상기 종양 표적화제는 항체, 항체의 에피토프 결합 단편, 또는 표적 세포의 T-세포 재지시된 사멸을 매개하는 작용제이다.
E50. E48 또는 E49의 방법, 여기서 상기 PD-1/PD-L1 체크포인트 억제제는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체이다.
E51. E48 내지 E50 중 어느 하나의 방법, 여기서 상기 PD-1/PD-L1 체크포인트 억제제는 표 7에 열거된 것들로부터 선택된 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함한다:
Figure 112019096428115-pct00049
Figure 112019096428115-pct00050
Figure 112019096428115-pct00051
Figure 112019096428115-pct00052
E52. E26, E35, E42의 용도 또는 E46 내지 E51 중 어느 하나의 방법, 여기서 암은 급성 골수성 백혈병, 부신 종양, AIDS-관련 암, 포상 연부 육종, 성상세포 종양, 방광암, 골암, 뇌 및 척수암, 전이성 뇌 종양, 유방암, 경동맥 소체 종양, 자궁경부암, 연골 육종, 척삭종, 혐색소성 신장세포 암종, 투명 세포 암종, 결장암, 대장암, 피부 양성 섬유 조직구종, 결합조직성 소원형 세포 종양, 뇌실막세포종, 유윙 종양, 골외 점액성 연골 육종, 골성 불완전 섬유생성증, 골 섬유 이형성, 방광 또는 담관암, 위암, 임신성 영양막 질환, 생식 세포 종양, 두경부암, 간세포 암종, 교모세포종, 섬세포 종양, 카포시 육종, 신장암, 백혈병, 지방종/양성 지방종증 종양, 지방육종/악성 지방종증 종양, 간암, 림프종, 폐암, 수모세포종, 흑색종, 수막종, 악성 중피종, 다발성 내분비샘 신생물, 다발성 골수종, 골수이형성 증후군, 신경모세포종, 신경내분비 종양, 비-소세포 폐암, 난소암, 췌장암, 인두암, 유두상 갑상선 암종, 부갑상선 종양, 소아과 암, 말초 신경초 종양, 크롬 친화세포종, 뇌하수체 종양, 전립선암, 후방 포도막 흑색종, 희귀성 혈액 장애, 신장 세포 암종, 전이성 신장암, 횡문근양 종양, 횡문근육종, 육종, 피부암, 연조직 육종, 편평 세포암, 위암, 활막 육종, 고환암, 흉선 암종, 가슴샘종, 전이성 갑상선암, 및 자궁암으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
E53. E26, E35, E42의 용도 또는 E46 내지 E51 중 어느 하나의 방법, 여기서 암은 방광암, 유방암, 대장암, 위암, 교모세포종, 신장암, 폐암, 흑색종, 신경모세포종, 난소암, 췌장암, 인두암, 전립선암, 신장 세포 암종, 횡문근육종, 및 두경부의 편평 세포암 (SCCHN)으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
실시예
다음의 실시예는 발명의 진단 또는 치료 방법에서의 조성물에 대한 다양한 방법을 예시한다. 실시예는, 제한하는 방법으로가 아니라, 발명의 범주를 예시하기 위해 의도된다.
실시예 1
HER2 MAB-1의 인간화
PCT 공개공보 WO 2001/036005는 이 문헌에서 "8H11"로서 표시된 항-HER2/neu 항체를 기술하지만, 문헌에서 제공된 VL 및 VH 도메인의 서열은 정확하지 않다. 8H11 항체는 트라스투주맙, 마르게툭시맙, 및 페르투주맙에 의해 결합된 에피토프와는 구별되는 HER2/neu 에피토프에 결합한다.
항-HER2/neu 항체 8H11의 VH 및 VL 도메인에 대한 정확한 서열을 추론하였고 (그로써 HER2-MAB-1 VH (SEQ ID NO:60) 및 HER2-MAB-1 VL (SEQ ID NO:61)을 제공하기 위함), 그런 다음 상기 기술된 인간화된 VH 도메인 "hHER2 MAB-1 VH1" (SEQ ID NO:64) 및 인간화된 VL 도메인 "hHER2 MAB-1 VL1" (SEQ ID NO:67)을 얻기 위하여 다수의 회기의 인간화를 시행하였다. 이러한 노력의 과정에서, 여러 잠재적인 서열 가변성이 hHER2 MAB-1 VH1 및 hHER2 MAB-1 VL1 도메인에서 확인되었고, 결합 친화도를 유지하는 한편 이들 가변성을 제거한 치환을 만들었다. 구체적으로 다음과 같다:
(1) 아스파르트산 이성질화 부위를 hHER2 MAB-1 VH1 도메인의 Kabat 위치 96에서 확인하였고, 각각 hHER2 MAB-1 VH2 (SEQ ID NO:65) 및 hHER2 MAB-1 VH3 (SEQ ID NO:66)에서와 같이, 치환 D96E에 의해 또는 치환 G97I에 의해 수정하였다;
(2) 잠재적인 아스파라긴 탈아민화 부위를 hHER2 MAB-1 VL1 도메인의 Kabat 위치 30에서 확인하였고, 각각 hHER2 MAB-1 VL3 (SEQ ID NO:69) 및 hHER2 MAB-1 VL2 (SEQ ID NO:68)에서와 같이, 치환 N30S에 의해 또는 치환 S31T에 의해 수정하였다;
(3) 잠재적인 아스파르트산 이성질화 부위를 hHER2 MAB-1 VL1 도메인의 Kabat 위치 D56에서 확인하였고, hHER2 MAB-1 VL3 (SEQ ID NO:69), 및 hHER2 MAB-1 VL2 (SEQ ID NO:68)에서와 같이 치환: V55Q, D56E, 또는 D56S에 의해 수정하였다.
hHER2 MAB-1의 인간화된 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 임의의 조합에 사용할 수 있고 인간화된 사슬의 특정 조합은 특이적 VH/VL 도메인을 참조하여 언급된다. 예를 들어, hHER2 MAB-1 VH1 및 hHER2 MAB-1 VL3을 포함하는 인간화된 항체는 본원에서 "hHER2 MAB-1 (1.3)"로서 언급된다.
모 쥐과 항체와 비교하여 개선된 결합 친화도를 가지도록 인간화된 변종을 선택하였고, 기술된 것과 같이 상기 기술된 것과 같은 서열 가변성 (예컨대, 이성질화, 탈인화 부위)을 제거하기 위하여 추가로 조작할 수 있었다. 인간화된 VH 및 VL 도메인의 여러 조합의 결합 친화도를 BIACORE®에 의해 조사하였다. 그러므로, 히스티딘-함유 펩타이드에 융합된 인간 HER2의 세포외 부분 ("huHER2")은 고정된 항체로 코팅된 표면을 통과하였다. 간단히 설명하면, 각각의 테스트 분자를 F(ab)2 염소-항-인간 Fc-코팅된 표면 위에 포획한 후 huHER2의 상이한 농도 (6.25 nM 내지 50 nM)의 존재 하에 인큐베이션하였다. 결합의 동역학을 BIACORE® 분석 결합 (표준화된 1:1 랑뮈에르 결합 모델)을 통하여 측정하였다. 이들 연구로부터 계산된 ka, kd 및 KD를 표 8에 제공한다.
항체 VH VL k a (M -1 s -1 ) k d (s -1 ) K D (nM)
HER2 MAB-1 쥐과 쥐과 5.1 x 105 6.54 x 10-4 1.27
hHER2 MAB-1 (1.2) 1 2 6.2 x 105 2.80 x 10-4 0.45
hHER2 MAB-1 (1.3) 1 3 6.18 x 105 2.23 x 10-4 0.36
별도의 연구로, CD137 x TA 이중특이적 디아바디, DART-B (상기 기술됨)의 결합 동역학을, 본질적으로 상기에서 기술된 것과 같이, 인간 HER2 및 시노몰구스 원숭이 HER2에 대한 결합에 대하여 측정하였다. 이들 연구로부터 계산된 ka, kd 및 KD를 표 9에 제공한다.
HER2/neu k a (M -1 s -1 ) k d (s -1 ) K D (nM)
인간 4.8 x 105 1.82 x 10-4 0.38
시노몰구스 원숭이 4.44 x 105 2.94 x 10-4 0.66
실시예 2
쥐과 항-CD137 mAb의 분리 및 특성화
인간 CD137에 대해 특이적인 쥐과 단클론성 항체의 패널을 고친화도 결합을 나타내는 항체에 대해 스크리닝하였다. 3개의 항체를 추가 연구를 위해 선택하였다. 이러한 평가에 대하여, 정제된 pan T-세포 (상기 참조)를 항-CD3/CD28 비즈로 (세포 : 비즈 = 1:1) 72시간 동안 IL-2 (100 U/mL)의 존재 하에 자극하였다. 100 μL의 활성화된 T 세포 (1.0 x 106 세포/mL) 및 100 μL의 연속 희석된 (5- 또는 10-배 희석) 테스트 물품 (항체 또는 이중특이적 디아바디)을 미세역가 검정 플레이트(들)의 각 웰에 첨가하고, 혼합한 후 실온에서 45분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 FACS 완충액으로 세척하고 이차 항체 (항-인간-Fc 영역-APC)를 그런 후 각 웰에 첨가하였고; 혼합하고 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 그런 후 세포를 FACS 완충액으로 세척한 다음 T 세포 표면 마커 항체 (V510으로 표지화된 항-CD4, 및 FITC로 표지화된 항-CD8)를 각 웰에 첨가하였고; 혼합하고 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 세척하고 100 μL FACS 완충액에 재현탁하고 세포 사건 집단에 대해 유동 세포분석 (BD LSR Fortessa 또는 FACSCanto ll)에 의해 분석하였다. 데이터 분석을 FloJo v10을 통해 수행하였다.
이러한 선택된 항체 중 2개, CD137 MAB-3 및 CD137 MAB-4가 인간 CD137에 대하여 강력한 결합을 나타내는 것으로 밝혀졌고 CD137과 이것의 천연 리간드 사이의 결합을 차단할 수 있었다. 이러한 선택된 항체의 세 번째, CD137 MAB-5는 인간 CD137에 대하여 낮은 결합을 나타냈고 CD137과 이것의 천연 리간드 사이의 결합을 차단할 수 없었다.
인간 IgG1 Fc 영역 및 쥐과 VH/VL 도메인을 가지는 키메릭 항체가 생성되었고 (각각 chCD137 MAB-1, chCD137 MAB-2, chCD137 MAB-3, chCD137 MAB-4 및 chCD137 MAB-5로 표시됨), 활성화된 CD8+ T 세포에 결합하는 이것들의 능력에 대하여 테스트하였다. 도 7에 도시된 것과 같이, 선택된 항체는 광범위한 결합 친화도를 나타냈다.
에피토프 비닝(binning)을 교차-경쟁 연구에 의해 수행하였다. 이들 및 리간드 결합 경쟁 연구의 결과는 다음을 나타낸다:
(1) CD137 MAB-2, CD137 MAB-3 및 CD137 MAB-4는 CD137에 대한 결합에 대해 CD137L과 경합하지만, CD137 MAB-2는 CD137 MAB-1, CD137 MAB-3, CD137 MAB-4 및 CD137 MAB-5에 의해 인식된 에피토프와는 구별되는 CD137의 에피토프를 인식한다;
(2) CD137 MAB-1 및 CD137 MAB-5는 CD137에 대한 결합에 대하여 CD137L과 경합하지 않는다;
(3) CD137 MAB-3 및 CD137 MAB-4는 CD137 MAB-1과의 경합을 나타내지만, 리간드 결합에 대한 경합 능력에 의해 증명되는 바와 같이 구별되는 에피토프에 결합한다;
(4) CD137 MAB-5는 CD137 MAB-1, CD137 MAB-2, CD137 MAB-3 또는 CD137 MAB-4에 의해 인식되는 에피토프와는 구별되는 에피토프를 인식한다.
키메릭 항체를 또한 리간드의 부재 하에 T 세포로부터의 사이토카인 (예컨대, IFN-γ, TNF-α) 방출 (즉, 이것들의 아고니스트 활성)을 유도하는 능력에 대하여 테스트하였다. 이러한 평가에 대하여, 정제된 pan T 세포 (상기 참조)를 검정 배지에 재현탁하고 조직 배양 인큐베이터에서 밤새 놓아두었다. 종양 표적 세포 (JIMT-1, N87을 포함함)를 배양으로부터 얻었다. 세척 후, 세포 펠릿을 1.0 x 105 세포/mL의 세포 밀도에서 배양 배지에 재현탁하였다. 104개 세포를 그런 후 조직 배양 인큐베이터에 밤새 놓인 백색 평평 바닥 검정 플레이트의 각 웰에 첨가하였다. 다음 날, 휴지기 인간 pan T 세포를 Beckman Coulter Vi-세포 카운터를 사용하여 트립판 블루 축출에 의해 밀도 및 생존성에 대해 측정하고 2 x 106 세포/mL의 밀도로 조정하였다. 플레이트 상에 사전에 시딩된 종양 표적 세포를 검정 배지로 한 번 세척하였다.
사이토카인 방출 검정에 대하여: 50 μL의 연속적으로 희석된 테스트 물품 (항체 (+/- 항-인간 Fc (Fab)'2와의 가교 결합), 디아바디, 삼가 분자, 등), 2 x 106 비즈/mL에서의 50 μL의 사전세척된 Dynabead αCD3 (REF 11151D; Invitrogen by Thermo Fisher Scientific), 2 x 106 세포/mL에서의 50 μL/웰의 인간 pan T 세포, 및 50 μL의 검정 배지 단독 또는 1.6 μg/mL의 αCD28 (Cat: 555725; BD Pharmigen)을 함유한 검정 배지를 검정 플레이트의 각 웰에 첨가하였다. 플레이트 상의 각 웰의 최종 부피는 200 μL였다. 테스트 물품 또는 αCD3 비즈를 함유하지 않은 대조군 웰에 대해서는, 검정 배지를 총 부피가 200 μL가 되도록 첨가하였고 플레이트를 72시간 동안 조직 배양 인큐베이터에서 인큐베이션하였다. 그런 다음 상층액을 각 웰로부터 수집하고 IFN-γ, TNF-α 및 IL-2R의 방출된 사이토카인을 R&D System으로부터의 사이토카인 ELISA 키트 (인간 IL-2 DuoSet ELISA (Cat: DY202), 인간 IFN-감마 DuoSet ELISA (Cat: DY285) 및 인간 TNF-알파 DuoSet ELISA (Cat: DY210)) 또는 유사한 상업적 시약을 사용하여 측정하였다. ELISA 방법은 키트와 함께 제공되었다. 마이크로소프트 엑셀 및 SoftMax 프로그램을 사이토카인 수준을 외삽하기 위한 데이터 분석에 사용하였고, 그것을 Prism으로 도표화하였다.
도 8에 나타낸 것과 같이, CD137 MAB-1, chCD137 MAB-3 및 chCD137 MAB-4는 각각 강력한 작용물질 활성을 나타냈고, CD137 MAB-2는 더 적은 작용물질 활성을 나타냈으며 CD137 MAB-5는 리간드가 없을 때 작용물질 활성을 나타내지 않았다.
키메릭 항체 chCD137 MAB-3 및 chCD137 MAB-4를 또한 리간드 및/또는 표적 세포의 부재 및 존재 하에서 pan T 세포로부터 사이토카인 (예컨대, IFN-γ, TNF-α) 방출을 유도하는 능력에 대하여 테스트하였다. 인간 pan T 세포를 도너 PBMC로부터 Dynabeads Untouched 인간 T 세포 키트 (Invitrogen Cat# 11344D)를 제조사의 프로토콜대로 사용하여 정제하였다. IFN-γ 방출에 대한 결과를 도 9에 나타낸다. 도 9는 1 μg/mL의 키메릭 항-CD137 항체 (chCD137 MAB-3 또는 chCD137 MAB-5)의 존재 또는 부재하에서, 및 1 μg/mL의 CD-137L-His 및 4 μg/mL hFc F(ab)'2의 존재 또는 부재하에서 CD3 코팅된 비즈로의 자극 후 72시간 후에 pan T 세포에 의한 IFN-γ의 유도를 보여준다. 도면은 CD137-His의 존재 또는 부재 하에서 IFN-γ가 유도되었고, 더 큰 유도가 pan T 세포 단독으로 관찰된 것과 비교하여 JIMT-1/pan T 세포로 관찰되었음을 보여준다. 유사한 결과를 TNF-α에 대해서도 볼 수 있다.
T-세포 및 표적 세포 둘 다, 또는 T-세포 단독의 존재 하에서, chCD137 MAB-3은 리간드의 존재 또는 부재하에서 유사한 강력한 작용물질 활성을 나타냈다. 대조적으로, chCD137 MAB-5는 리간드의 부재 하에서 최소한의 작용물질 활성을 나타냈고 리간드의 존재하에서 크게 증강된 작용물질 활성을 나타냈다.
실시예 3
쥐과 항-CD137 mAb의 인간화
항체 CD137 MAB-3 및 CD137 MAB를 인간화를 위해 선택하였다. 4회기의 인간화를 CD137 MAB-3에 대해 시행하였고, 그것으로 "hCD137 MAB-3 VH1" (SEQ ID NO:76)로서 표시된 하나의 인간화된 VH 도메인, 및 "hCD137 MAB-3 VL1" (SEQ ID NO:87), "hCD137 MAB-3 VL2" (SEQ ID NO:88) 및 "hCD137 MAB-3 VL3" (SEQ ID NO:89)으로서 표시된 3개의 인간화된 VL 도메인을 얻었다.
3회기의 인간화를 CD137 MAB-4에 대해 시행하였고, 그것으로 "hCD137 MAB-4 VH1" (SEQ ID NO:92)로서 표시된 하나의 인간화된 VH 도메인, 및 "hCD137 MAB-4 VL1" (SEQ ID NO:94) 및 "hCD137 MAB-4 VL2" (SEQ ID NO:95)로서 표시된 2개의 인간화된 VL 도메인을 얻었다.
특정 항-CD137 항체 (예컨대, CD137 MAB-3)의 인간화된 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 임의의 조합으로 사용할 수 있고 인간화된 사슬의 특정 조합은 특이적 VH/VL 도메인을 참조하여 언급되는데, 예를 들어 hCD137 MAB-3 VH1 및 hCD137 MAB-3 VL3을 포함하는 인간화된 항체는 본원에서 "hCD137 MAB-3 (1.3)"으로서 언급된다.
쥐과 가변 도메인 및 전체 인간화된 항체를 가지는 키메릭 항체의 결합 친화도를 Biacore에 의하여 조사하였다.
그로써, 히스티딘-함유 펩타이드 ("huCD137")에 융합된 인간 CD137의 세포외 부분을 고정된 항체로 코팅된 표면 위로 통과시켰다. 간단히 설명하면, 각각의 테스트 분자를 F(ab)2 염소-항-인간 Fc-코팅된 표면 상에 포획한 후 상이한 농도 (25 nM 및 100 nM)의 huCD137의 존재 하에 인큐베이션하였다. 결합의 동역학을 BIACORE® 분석 결합 (표준화된 1:1 랑뮈에르 결합 모델)을 통해 측정하였다. 이들 연구로부터 계산된 ka, kd 및 KD를 표 10에 제공하며, 인간화된 mAb가 쥐과 항체에 비해 결합 친화도에서 약 2-배 감소를 나타낸 것을 보여준다.
항체 VH VL k a (M -1 s -1 ) k d (s -1 ) K D (nM)
chCD137 MAB-3 쥐과 쥐과 8.9 x 105 0.020 23
chCD137 MAB-3 (1.1) 1 1 6.7 x 105 0.031 46
chCD137 MAB-3 (1.2) 1 2 6.1 x 105 0.030 49
chCD137 MAB-3 (1.3 1 3 6.6 x 105 0.033 50
chCD137 MAB-4 쥐과 쥐과 1.5 x 105 9.2 x 10-4 6.1
chCD137 MAB-4 (1.1) 1 1 1.3 x 105 2.1 x 10-3 16.2
chCD137 MAB-4 (1.2) 1 2 1.4 x 105 1.9 x 10-3 13.6
실시예 4
CD137 x TA 결합 분자의 특성화
상기 기술된 것과 같이 CD137에 결합할 수 있고 예시의 TA, HER2/neu에 결합할 수 있는 많은 예시의 CD137 x TA 결합 분자를 생성하였다. 특히, CD137 MAB-3 또는 hCD137 MAB-3 도메인을 포함하는 6개의 이중특이적 디아바디 ("DART-A", "DART-B", 및 "DART-C", "DART-D", "DART-E", 및 "DART-G"로 표시됨), CD137 MAB-4 도메인을 포함하는 한개의 이중특이적 디아바디 ("DART-F"로 표시됨), CD137 MAB-1 도메인을 포함하는 2개의 이중특이적 디아바디 ("DART-1", 및 "DART-4"로 표시됨), 및 CD137 MAB-2 도메인을 포함하는 2개의 이중특이적 디아바디 ("DART-2", 및 "DART-5"로 표시됨)를 생성하였고, 각각은 hHER2 MAB-1 도메인을 포함하였다. DART-A, DART-B, DART-C, DART-1, 및 DART-2는 도 3B에 도시된 일반 구조를 가진다 (DART-A, DART-B, DART-1 및 DART-2는 도 3E에 도시된 구조를 가지며; DART-C는 도 3D에 도시된 구조를 가진다). DART-D, DART-E, DART-F, DART-G, DART-4, 및 DART-5는 도 5A에 도시된 일반 구조를 가진다 (DART-D, DART-F, DART-G, DART-4, 및 DART-5는 도 5B에 도시된 구조를 가지며; DART-E는 도 5C에 도시된 구조를 가진다).
CD137에 결합할 수 있고 예시의 TA, EphA2에 결합할 수 있는 또 다른 예시의 CD137 x TA 결합 분자 ("DART-7"로 표시됨)를 생성하였다. DART-7은 CD137 MAB-1 인간화된 EphA2 MAB-3 도메인을 포함하는, 도 3B에 제시된 구조를 가지는 이중특이적 디아바디이다.
또한, 3개의 대조군 분자, hHER2 MAB-1 및 변종 팔리비주맙 도메인 (HER2 x RSV)을 포함하는 "DART-3", 변종 팔리비주맙 및 CD137 MAB-3 도메인 (RSV x CD137)을 포함하는 "DART-6", 및 인간화된 EphA2 MAB-3 및 변종 팔리비주맙 도메인 (EphA2 x RSV)을 포함하는 "DART-8"을 생성하였다.
CD137에 대한 2개의 결합 부위 및 HER2/neu에 대한 2개의 결합 부위를 가지는 CD137 x TA 결합 분자, 및 CD137 x RSV 대조군 분자 (DART-6)은 활성화된 T 세포의 표면에 존재하는 CD137에 결합하였다. 대조적으로, HER2/neu x RSV 대조군 분자 (DART-3)은 어떠한 결합도 나타내지 않았다. 이 검정에서 DART-1은 최고의 결합을 나타냈고 DART-5는 최저의 결합을 나타냈으며, 테스트한 나머지 분자들 (DART-B, DART-C, DART-D, DART-E, DART-F, DART-2, DART-4 및 DART-6)은 비숫한 결합을 나타냈다 (도 10). HER2/neu 및 CD137 결합 도메인의 상대적인 위치는 도 3B에 제공된 구조 (DART-B/DART-C와 비교) 또는 도 5B 및 5C에 제공된 구조 (DART-D/DART-E와 비교)를 가지는 분자의 경우 이 검정에서 CD137에 최소한의 영향을 주거나 영향을 주지 않았다.
유사하게, CD137 x TA 결합 분자를 표적 N87 위암 세포의 표면에 존재하는 HER2/neu에 결합하는 능력에 대하여 평가하였다 (도 11A 및 11B). RSV x CD137 대조군 분자 (DART-6)은 어떠한 결합도 나타내지 않았다. HER2/neu 및 CD137 결합 도메인의 상대적인 위치는 이 검정에서 도 3B에 제공된 구조 (DART-B/DART-C와 비교)를 가지는 분자의 경우 HER2/neu 결합에 대해 최소의 영향을 나타내거나 영향을 주지 않았다. 대조적으로, DART-E는 DART-D와 비교하여 감소된 HER2/neu 결합을 나타냈고, 이것은 도 5B 및 5C에 제공된 구조를 가지는 분자들의 경우 HER2/neu 결합에 대해 위치상의 영향일 수 있거나, 또는 특히 hHER2 MAB-1 (1.3)의 HER2/neu 결합 도메인에 의해 매개된 결합이 위치상의 영향을 나타낸 것을 시사한다.
CD137 x TA 결합 분자, DART-B, DART-D, DART-G 및 대조군 분자 DART-3 및 DART-6을 추가적으로 CHO 세포 (도 12A) 및 활성화된 T 세포 (도 12B)에 의해 발현된 CD137에 대해 결합하는 능력에 대하여 평가하였다.
CD137 x TA 결합 분자, DART-B, DART-D, DART-G 및 대조군 분자 DART-3 및 DART-6을 추가적으로 N87 세포 (도 13A) 및 JIMT-1 세포 (도 13B) 상에 발현된 HER2/neu에 결합하는 능력에 대하여 평가하였다. 이러한 평가를 위하여, 100 μL의 HER2/neu 발현 표적 세포 (1.0 x 106 세포/mL) 및 100 μL의 일련적으로 희석된 (5- 또는 10-배 희석) 테스트 물품 (이중특이적 디아바디)을 미세역가 검정 플레이트(들)의 각 웰에 첨가하고, 혼합하고 실온에서 45분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 FACS 완충액으로 세척한 후 이차 항체 (항-인간-Fc 영역-APC)를 각 웰에 첨가하고; 혼합하고 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 세척하고 100 μL의 FACS 완충액에 재현탁하고 유동 세포분석 (BD LSR Fortessa 또는 FACSCanto ll)에 의하여 세포 사건 집단에 대해 분석하였다. 데이터 분석을 FloJo v10을 통해 수행하였다. 도 3B에 제공된 구조를 가지는 HER2 x CD137 결합 분자는 도 5A 내지 5C (DART-B/DART-D와 비교)에 제공된 구조를 가지는 분자들보다 HER2/neu에 대해 약간 더 나은 결합을 나타냈다. RSV x CD137 대조군 분자 (DART-6)는 어떠한 결합도 나타내지 못하였다. 쥐과 또는 인간화된 CD137 결합 부위를 가지는 CD137 x TA 이중특이적 디아바디는 HER2/neu에 대해 유사한 결합을 나타냈다 (DART-D/DART-G와 비교).
도 14A 및 14B는 예시의 TA, HER2/neu를 발현하는 표적 세포의 존재 또는 부재 하에서 T 세포 사이토카인 방출 검정 (본질적으로 상기 실시예 2에서 기술된 것과 같이 수행되고, IFN-γ의 방출에 의해 예시됨)에서 동시 자극 활성을 매개히는 CD137 x TA 결합 분자의 능력의 대표적인 제1 검정 결과를 제공한다. 도면은 HER2/neu-발현 N87 (3+) (도 14A) 또는 JIMT-1 (2+) 표적 세포 (도 14B), HER2/neu-음성 Hs700T 표적 세포의 존재하에서, 또는 표적 세포의 부재 하에서 테스트된 (상기 기술된 프로토콜을 사용함) DART-1, DART-2, DART-3, DART-4, DART-5, DART-6, DART-A, DART-D, DART-E 및 DART-F에 대한 결과를 보여준다. 결과는 대조군 분자, DART-3 및 DART-6이 동시 자극 활성을 나타내지 않았음을 보여준다. CD137 x TA 결합 분자는 표적 세포의 부재 하에서 또는 HER2/neu-음성 표적 세포가 있을 때에 어떠한 관찰 가능한 동시 자극 활성을 나타내지 않았다. 신규한 항-CD137 항체를 포함하는 DART-D 및 DART-F (각각 CD137 MAB-3 및 MAB-4)는 어느 하나의 표적 세포 주의 존재 하에서 최고의 동시 자극 활성을 나타냈다. DART-E (스와핑된 HER2/neu 및 CD137 도메인을 포함함)는, 특히 N87 표적 세포의 존재 하에, 더 낮은 동시 자극 활성을 나타냈다. 유사한 패턴을 IL-2 및 TNF-β로 볼 수 있었다.
도 15A 및 15B는 T 세포 사이토카인 방출 검정 (본질적으로 상기 실시예 2에서 기술된 것과 같이 수행되고, IFN-γ의 방출에 의해 예시됨)에서 동시 자극 활성을 매개히는 CD137 x TA 결합 분자의 능력의 대표적인 제2 검정 결과를 제공한다. 도면은 HER2/neu-발현 N87 (도 15A) 또는 JIMT-1 표적 세포 (도 15B), HER2/neu-음성 Hs700T 표적 세포의 존재 하에서, 또는 표적 세포의 부재 하에서 테스트된 (상기 기술된 프로토콜을 사용함) DART-1, DART-2, DART-3, DART-4, DART-5, DART-6, DART-B, DART-D 및 DART-G에 대한 결과를 보여준다.
결과는 대조군 분자, DART-3 및 DART-6가 동시 자극 활성을 나타내지 않았음을 보여준다. CD137 x TA 결합 분자는 표적 세포의 부재시에 또는 HER2/neu-음성 표적 세포가 있을 때 임의의 관찰 가능한 동시 자극 활성을 나타내지 못하였다. 신규한 항-CD137 항체, CD137 MAB-3을 포함하는 DART-D 및 DART-G (각각 쥐과 및 인간화된)는 어느 하나의 표적 세포주의 존재 하에서 최고의 동시 자극 활성을 나타냈다. DART-G는 세포 표면 발현된 CD137에 대해 약간 더 낮은 결합을 나타냄에도 불구하고 최고의 동시 자극 활성을 나타냈다. 상기에서 설명된 것과 같이, DART-B 및 DART-G는 동일한 HER2 및 CD137 결합 부위를 포함하지만 각각 도 3B 및 도 5B에 나타낸 구조를 가진다. DART-G는 어느 하나의 표적 세포주의 존재 하에서 DART-B보다 더 높은 동시 자극 활성을 나타냈다.
CD137 x TA 결합 분자, DART-G 및 대조군 분자, DART-3 및 DART-6을 추가적으로 예시의 TA, HER2/neu에 대해 양성 또는 음성인 표적 세포의 존재 하에서 CD137 발현 리포터 세포주 (Jurkat-NF-κB-Luc)에서 NF/κB 경로의 용량 의존성 T-세포 신호 변환을 매개하는 능력에 대하여 평가하였다. 간단히 설명하면, CD137을 과다발현하는 Jurkat-NF-κB-Luc 리포터 세포를 HER2/neu 발현 JIMT-1 세포 (도 16A) 또는 HER2/neu-음성 KG-1 세포 (도 16B)와 증가하는 농도의 DART-G, DART-3, 또는 DART-6의 존재 하에서 공동 배양하였다. 인큐베이션 후에, 신호 변환을 판독으로서 발광 상대광 단위 (RLU)로 하여 발광에 의해 측정하였다. 결과는 DART-G와 같은 CD137 x TA 결합 분자가 TA-발현 표적 세포의 존재에 좌우되는 용량 의존성 T-세포 신호 변환을 매개하는 것을 보여준다.
CD137 x TA 결합 분자, DART-A 및 대조군 분자, DART-3 및 DART-6을 추가적으로, 상이한 수준의 예시의 TA, HER2/neu를 발현하는 세포의 존재 하에서 증강된 T-세포 증식을 매개하는 능력에 대하여 평가하였다. 간단히 설명하면, 차선적인 αCD3/αCD28 자극이 있거나 없는 CFSE-표지된 인간 T 세포를 DART-A (도 17, 패널 A, D 및 G), DART-3 (도 17, B, E 및 H), DART-6 (도 17, 패널 C, F 및 I)의 존재하에서, 또는 분자 없이 (도 17, 패널 J, L 및 N), HER2/neu-고 N87 표적 세포 (도 17, 패널 A 내지 C 및 J 내지 K), HER2/neu-저 MCF-7 표적 세포 (도 17, 패널 D 내지 F 및 L 및 M)와 공동 배양하거나, 또는 단독으로 배양하고 (도 17, 패널 G 내지 I 및 N 및 O) T 세포 증식에 대해 모니터링하였다. 결과는 DART-A와 같은 CD137 x TA 결합 분자가 T-세포 신호 증식을 증강시키는 것을 보여준다. 이러한 증강된 T 세포 증식은 TA-발현 의존적이고 TA 발현 수준과 상관이 있다.
마르게툭시맙은 표적 종양 세포에의 결합 후에 증강된 항체 의존성 세포-매개된 세포독성을 유도할 수 있는 Fc-최적화된 항-HER2/neu 단클론성 항체이다. 상기 주지된 것과 같이, HER2 MAB-1은 마르게툭시맙에 의해 결합된 것과 구별되는 HER2/neu 에피토프에 결합한다. 항-TA 항체 마르게툭시맙의 표적 세포 사멸 활성을 CD137 x TA 결합 분자 DART-1 또는 대조군 분자 DART-3 (HER2 x RSV)와 조합하여 조사하였다. 간단히 설명하면, 루시페라제 (luc) 리포터 유전자를 발현하도록 조작한 표적 N87 세포 (N87/GFP/Luc 세포)를 정제된 NK 이펙터 세포와 (2:1의 이펙터:표적 (E:T)비율로), 고정된 농도 (0.1 μg/mL)의 DART-1 또는 DART-3과 조합된 증가하는 농도의 마르게툭시맙의 존재하에 72시간 동안 인큐베이션하고, 세포독성을 판독으로서 발광 상대광 단위 (RLU)로 하여 표적 세포의 세포 루시페라제 활성을 측정하는 발광 (LUM) 검정에 의해 측정하였다 (도 18A). 또한, 이 검정으로부터의 NK 세포 (CD3-/CD56+)를 활성화 마커, CD69의 발현에 대하여 평가하였다 (도 18B). 이 연구의 결과는 CD137 x TA 결합 분자 DART-1이 HER2/neu 결합만을 가진 대조군 분자와 비교하여 N87/Luc 표적 세포에 대한 마르게툭시맙-매개된 ADCC 활성, 및 NK 세포에서의 마르게툭시맙-매개된 CD69 상향조절을 둘 다 증강시켰음을 증명한다.
예시적인 TA EphA2에 결합하는, "DART-7"로 표시된 CD137 x TA 결합 분자의, T 세포 사이토카인 방출 검정 (본질적으로 상기 실시예 2에서 기술된 것과 같이 수행하였고, IFN-γ의 방출에 의해 예시됨)에서 동시 자극 활성을 매개하는 능력을 조사하였다. CD137 x TA 결합 분자 DART-7 및 대조군 분자 DART-8을 EphA2-발현 Hs700T 표적 세포 (도 19A) 또는 EphA2-음성 Hs700T (EphA2.KO) 표적 세포 (도 19B)의 존재 하에서, 또는 표적 세포 없이 테스트하였다 (상기 기술된 프로토콜을 사용함). 결과는 CD137 x TA 결합 분자 DART-7이 EphA2-발현 세포의 존재 하에 동시 자극 활성을 나타냈지만 표적 세포의 부재시에 또는 EphA2-음성 표적 세포로는 어떠한 관찰 가능한 동시 자극 활성을 나타내지 않았음을 보여준다. 대조군 분자, DART-8은 동시 자극 활성을 나타내지 않았다.
T 세포 집단에서의 CD137 x TA 결합 분자의 동시 자극 활성을 중심 기억 T 세포 (Central Memory T Cell, Tcm) 및 이펙터 기억 T 세포 (Effector Memory T cell, Tem)의 기능을 평가함으로써 측정하였다. 간단히 설명하면, 인간 T 세포를 EphA2 양성 결장 선암종 Colo205 표적 세포와 5일 동안 CD137 x TA 결합 분자 DART-7 또는 대조군 분자 DART-8 또는 DART-6의 존재 하에서 차선적인 자극 조건 하에 공동 배양하였다. 공동 배양 후에, Tcm (CCR7+CD45RA-) 및 Tem (CCR7-CD45RA-) 세포의 백분율을 게이티드(gated) CD4+ 및 게이티드 CD8+ 하위세트에서 측정하였다. 표 11에 요약한 그 결과는 CD8+ Tcm 및 Tem 세포 유형의 분획에 실질적인 증가가 있고 이런 증가는 CD137 및 TA (예컨대, EphA2) 둘 다의 결합을 필요로 하는 것을 보여준다. 이런 결과는 CD137 x TA 결합 분자가 적절한 종양 항원 발현 세포의 존재 하에서 CD8+ Tcm 및 Tem 세포의 분획에서 실질적인 증가를 유도하는 것을 나타낸다. CD137 x TA 결합 분자에 의해 나타난 표적화된 T-세포 작용 (agonism)은 종양 세포 고정된 CD137 활성화를 유도하여, 전신적인 면역 세포 활성화 및 관련된 부작용을 제한시킬 기회를 제공할 수 있다.
처치 게이티드 CD4 + 게이티드 CD8 +
Tcm (%) (CCR7+CD45RA-) Tem (%)
(CCR7-CD45RA-)		 Tcm (%) (CCR7+CD45RA-) Tem (%)
(CCR7-CD45RA-)
DART-7 50.1 17.7 20.5 38.6
DART-8 44.8 10.4 6.10 23.5
DART-6 44.4 9.95 6.67 25.2
또한, CD137에 대한 하나의 결합 부위 및 HER2/neu에 대한 하나 이상의 결합 부위를 가지는 CD137 x TA 결합 분자 (예컨대, 도 4A, 5A, 및 6A 참조)를 구성하고 테스트하였다. 이러한 분자들은 CD137에 대해 일가이고, 이들의 감소된 결합력의 관점에서 예상했던 바와 같이 활성화된 T 세포에 대한 감소된 결합을 나타냈다. 이러한 분자들은 표적 N87 세포에 대한 광범위한 결합을 나타냈다. 그러나, CD137에 대하 일가인 분자들 중 어느 것도 T 세포 사이토카인 방출 검정에서 임의의 동시 자극 활성을 나타나지 않았다. 이 관찰은 적어도 2개의 CD137 결합 부위가 이들 검정에서 동시 자극 활성에 필요할 수 있음을 시사한다.
실시예 5
인간화된 CD137 MAB-3의 최적화
상기 주지된 바와 같이 CD137 MAB-3의 인간화는 결합 친화도에서 대략 2배의 손실을 초래하였다 (예컨대, 상기 표 9 참조). 최적화를 모 쥐과 항체와 유사한 또는 그것보다 더 나은 결합 친화도를 가지는 인간화된 CD137 MAB-3 클론을 확인하기 위하여 사용하였다. 간단히 설명하면, 무작위 돌연변이생성을 사용하여 치환을 hCD137 MAB-3 (1.3)의 중쇄 CDRH3 (Kabat 위치 99 내지 102) 도메인 내에 도입하였다. 증가하는 엄격성을 사용하는 선택 스크리닝을 3회기 사용하여 CD137에 대해 증강된 결합을 가진 클론을 확인하였다. 48개의 클론을 회기 2 및 3으로부터 선택하였고, 친화도에 대해 디아바디 (도 5B에서 나타낸 구조를 가짐)로서 평가하였다. 표 12는 hCD137에 대한 증강된 결합에 대해 선택된 4개의 클론으로부터 CDRH3 Kabat 잔기 99 내지 102의 아미노산 서열의 정렬을 제공한다.
클론 ID 클론
SEQ ID NO. 		CDR H 3
(Kabat 99-102) 		CDR H 3
SEQ ID NO.
hCD137 MAB-3 VH1 76 SYSFDY 160
hCD137 MAB-3 VH1A 83 AYSFHP 78
hCD137 MAB-3 VH1B 84 AYSMST 79
hCD137 MAB-3 VH1C 85 AYSYSL 80
hCD137 MAB-3 VH1D 86 SYSYNV 81
이들 클론의 아미노산 서열을 5개 사슬 디아바디 DART-G에 통합시켜서 최적화된 DART-G 분자 (DART-G1, DART-G2; DART-G3, 및 DART-G4로서 표시됨)를 생성하였다. DART-G2, DART-G3, 및 DART-G4의 결합 친화도를 BIAcore를 통해 평가하였다 (표 11). 이러한 평가를 위하여, His-태그된 가용성 인간 CD137 (huCD137) 또는 시노몰구스 원숭이 CD137 (cynoCD137) (히스티딘-함유 펩타이드에 융합된 인간 또는 시노몰구스 원숭이 CD137의 세포외 부분을 함유함)을 고정된 항체로 코팅된 표면 위로 통과시켰다. 간단히 설명하면, 각각의 테스트 분자를 F(ab)2 염소-항-인간 Fc-코팅된 표면 위로 포획한 후 상이한 농도 (6.25 내지 100 nM)의 huCD137 또는 cynoCD137의 존재 하에 인큐베이션하였다. 결합의 동역학을 BIACORE® 분석 결합 (표준화된 1:1 랑뮈에르 결합 모델)을 통해 측정하였다. 이들 결과로부터 계산된 ka, kd 및 KD를 표 13에 제공한다.
분자 hCD137 MAB-3
VH 도메인 		huCD137 cynoCD137
k a (x10 5 )
(M -1 s -1 ) 		k d (x10 -3 )
(s -1 ) 		KD
(nM) 		k a (x10 5 )
(M -1 s -1 ) 		k d (x10 -4 )
(s -1 ) 		KD
(nM)
DART-D 쥐과 4.7 25 53 4.6 31 67
DART-G VH1 3.7 42 114 3.9 45 115
DART-G2 VH1B 3.5 21 60 3.9 25 64
DART-G3 VH1C 2.2 14 64 2.3 18 78
DART-G4 VH1D 3.1 8.7 28 3.5 14 40
디아바디를 상기 기술된 것과 동일한 방식으로 CD137에 결합하는 능력에 대하여 평가하였다. 이 연구 결과를 도 20A 및 20B에 나타낸다. 상기 주지된 바와 같이, CD137에 대한 hCD137 MAB-3 (1.3) 결합 부위를 가진 DART-G는 동일한 구조를 갖지만 쥐과 CD137 MAB-3 (DART-6)의 CD137 결합 부위를 포함하는 구성물과 비교하여 약간 더 낮은 결합을 나타냈다. 최적화된 hCD137 MAB-3 VH 도메인을 포함하는 HER2 x CD137 디아바디는 더 높은 결합을 나타냈으며, 인간 CD137에 대한 분자의 상대적인 결합 활성은 DART-G4 > DART-G3 > DART-G2
Figure 112019099061144-pct00108
DART-6 > DART-G였다. DART-G 및 최적화된 변종은 모두 N87, JIMT-1 및 MDA-MB231 세포를 포함한 다수의 표적 세포 유형의 표면에서 HER2에 대한 거의 동일한 결합을 나타냈다.
도 21A 내지 21C는 T 세포 사이토카인 방출 검정 (본질적으로 상기 실시예 2에서 기술된 것과 같이 수행하였고, IFN-γ의 방출에 의해 예시됨)에서 동시 자극 활성을 매개하는 DART-3, DART-6, DART-B, DART-D, DART-G, DART-G2, DART-G3 및 DART-G4의 능력의 대표적인 검정 결과를 보여준다. 사이토카인 방출을 HER2/neu-발현 N87 표적 세포 (도 21A), JIMT-1 표적 세포 (도 21B), 또는 MDA-231 (도 21C) 표적 세포의 존재 하에, 또는 존재하는 표적 세포 없이 상기 기술된 것과 같이 측정하였다.
결과는 대조군 디아바디, DART-3 및 DART-6이 동시 자극 활성을 나타내지 않았음을 나타냈다. CD137 x TA 결합 분자는 표적 세포의 부재 하에 또는 HER2/neu-음성 표적 세포로 어떠한 관찰 가능한 동시 자극 활성을 나타내지 않았다. 신규한 항-CD137 인간화된 항체, hCD137 MAB-3을 포함하는 DART-G는 어느 하나의 표적 세포주의 존재 하에 최고의 동시 자극 활성을 나타냈다. TNF-α 및 IL-2는 유사한 방출 패턴을 보인다.
최적화된 변종 DART-G2, DART-G3 및 DART-G4의 동시 자극 활성은 세포 표면 발현된 CD137에 대해 증가된 결합과 역으로 관련된 것으로 나타났으며, 이는 더 높은 결합 친화도가 이 검정에서 동시 자극 활성과 직접적으로 상관이 있는 것으로 나타난 것은 아니라는 것을 나타낸다. 그러나, 하기에서 나타내는 것과 같이, 최적화된 변종은 다른 기능성 검정에서 비슷하게 수행한다. 이들 속성은 친화도 최적화된 변종을 동시 자극제로서의 그것의 용도에 더불어 CD137의 발현을 측정하는 CD137 발현의 검출 및 진단 검정에 특히 유용하게 만들어준다.
종양 표적 세포의 재지시된 세포 사멸을 매개하는 CD137 x TA 결합 분자의 능력을 조사하였다. 간단히 설명하면, N87/GFP/Luc 표적 세포 (루시페라제 (luc) 리포터 유전자를 발현하도록 조작됨)를, 본질적으로 동시 자극 검정에 대해 상기 기술된 것과 같이, 차선적인 자극 조건 하에서 72시간 동안 DART-B, DART-G, DART-G1, DART-G2, DART-G3, DART-G4 또는 대조군 분자 DART-3 또는 DART-6 (각각 0.001, 0.01, 0.1, 및 1 μg/mL)의 부재 또는 존재 하에 pan T 세포와 인큐베이션하였다. 인큐베이션이 종료되었을 때 세포독성을 판독으로서 발광 상대광 단위 (RLU)로 표적 세포의 세포 루시페라제 활성을 측정하는 발광 (LUM) 검정에 의해 측정하였다 (도 22). 조사된 CD137 x TA 결합 분자의 각각은 약간의 재지시된 세포 사멸 활성을 나타냈고, 이때 DART-G가 최고의 활성을 나타냈으며, DART-B가 최저 활성을 나타냈다. 대조적으로, 대조군 분자는 검출 가능한 재지시된 세포 사멸 활성을 나타내지 않았다. 이 연구 결과는 CD137 x TA 결합 분자가 종양 세포의 재지시된 세포 사멸을 매개할 수 있음을 증명한다.
실시예 6
삼가 CD137 x TA 결합 분자의 특성화
상기에서 주지된 것과 같이, CD137에 대한 하나의 결합 부위 및 HER2/neu에 대한 하나 이상의 결합 부위를 가지는 CD137 x TA 결합 분자는 T 세포 사이토카인 방출 검정에서 어떠한 동시 자극 활성을 나타내지 않았다. 이러한 관찰은 적어도 2개의 CD137 결합 부위가 동시 자극 활성에 필요할 수 있음을 시사한다. 이 의문을 해결하기 위하여, CD137에 결합할 수 있고 예시의 TA, HER2/neu에 결합할 수 있는 예시의 삼가 CD137 x TA 결합 분자 세트를 생성하였다. 이들 분자는 각각, 4개의 이중특이적 삼가 결합 분자 "TRIDENT-A", "TRIDENT-A2", "TRIDENT-A3", 및 "TRIDENT-A4"를 포함하였고, 이것들은 각각 2개의 hCD137 MAB-3 도메인 및 1개의 hHER2 MAB-1 도메인 (CD137 x CD137 x HER2)을 포함한다. 이들 예시의 CD137 x TA 결합 분자의 구조 및 서열은 상기에서 상세하게 제공된다. 또한, 2개의 대조군 분자, 각각 하나의 변종 팔리비주맙 도메인 및 2개의 최적화된 hCD137 MAB-3 도메인 (CD137 x CD137 x RSV)을 포함하는 "TRIDENT-1", 및 하나의 hHER2 MAB-1 도메인, 하나의 4-4-20 도메인, 및 하나의 변종 팔리비주맙 도메인 (RSV x FITC x HER2)을 포함하는 "TRIDENT-2"를 생성하였다. 삼가 분자는 도 6A에 나타낸 일반 구조를 가지며, 본질적으로 상기에서 기술된 것과 같이 FACS 분석에 의하여 표적 N87(3+), JIMT-1(2+) 및 MCF-7(1+)의 표면에 존재하는 HER2/neu에 결합하는 능력에 대하여 하기에서 상세하게 설명되는 것과 같이 생성하였고 특성화하였다. CD137에 대한 2개의 결합 부위 및 HER2/neu에 대한 2개의 결합 부위를 가지는 CD137 x TA 결합 분자 DART-G, DART-G2, DART-G3, 및 DART-G4)를 또한 평가하였다.
도 23A 내지 23C에서 나타낸 것과 같이, 하나 또는 2개의 HER2/neu 결합 도메인을 포함한 분자는 모두 3개의 표적 세포 유형에 결합하였다. 2개의 HER2/neu 결합 부위를 가지는 분자들 (DART-G, DART-G2, DART-G3, 및 DART-G4)의 결합 곡선은 특히 그들의 세포 표면에서 높은 수준의 HER2/neu를 가지는 세포에서 더 빨리 포화상태에 도달하는 것이 주지될 것이다. 이것은 일부 분자가 이가 결합 (즉, 표면에서 2개의 HER2/neu 분자에 결합함)을 나타낸 것을 가리킨다. 이가 결합은 고농도의 표적 리간드의 존재 하에서 더 가능성이 있다.
CD137에 대한 2개의 결합 부위 및 HER2/neu에 대한 1개의 결합 부위를 가지는 CD137 x TA 결합 분자 (TRIDENT-A, TRIDENT-A2, TRIDENT-A3 및 TRIDENT-A4), CD137 x CD137 x RSV 및 TA x FITC x RSV 대조군 분자 (TRIDENT-1 및 TRIDENT-2), 및 CD137에 대한 2개의 결합 부위 및 HER2/neu에 대한 2개의 결합 부위를 가지는 CD137 x TA 결합 분자 (DART-G, DART-G2, DART-G3, 및 DART-G4)를, 또한 본질적으로 상기 실시예 2에서 기술된 것과 같이 FACS 분석에 의해 활성화된 CD4+ (도 24A) 및 CD8+ (도 24B) T 세포의 표면에 존재하는 CD137에 결합하는 능력에 대해 평가하였다. 2개의 CD137 결합 도메인을 포함한 분자는 활성화된 T-세포에 대해 강력한 결합을 나타냈다. 개선된 결합이 상기 기술된 최적화된 hCD137 MAB-3 VH 도메인을 포함하는 예시의 HER2 x CD137 디아바디에 대해 관찰되었다. TA x FITC x RSV 대조군 분자 (TRIDENT-2)는 예상과 같이 활성화된 T-세포에 대해 어떠한 결합도 나타내지 않았다.
다른 연구로, CD137에 대한 2개의 결합 부위 및 HER2/neu에 대한 1개의 결합 부위를 가지는 CD137 x TA 결합 분자 (TRIDENT-A, TRIDENT-A2, TRIDENT-A3 및 TRIDENT-A4), CD137에 대한 2개의 결합 부위 및 HER2/neu에 대한 2개의 결합 부위를 가지는 CD137 x TA 결합 분자 (DART-G4) 및 TA x FITC x RSV 대조군 분자 (TRIDENT-2)를, CD137 발현 세포와 HER2/neu 발현 표적 세포 사이에서 세포-세포 콘쥬게이션을 매개하는 능력에 대하여 평가하였다. 이러한 평가를 위해, PKH26으로 표지된 1.5 x 104개의 CD137-발현 CHO 세포를 CFSE로 표지된 1.5 x 104개의 HER2/neu-발현 표적 세포 (N87(HER2 발현 수준: 3+), JIMT-1 (HER2 발현 수준: 2+), 또는 MCF-7(HER2 발현 수준: 1+))와 1:1 비율로 연속적으로 희석된 (10-배 희석) 테스트 물품의 존재 하에 30분 동안 실온에서 공동 인큐베이션하였다. 샘플을 그런 후 유동 세포분석에 의해 분석하여 콘쥬게이트된 세포 (CFSE+/PKH26+)의 백분율을 세포-세포 콘쥬게이션에 대한 판독으로서 측정하였다. 도 25A 내지 25C에서 나타낸 것과 같이, 적어도 하나의 HER2/neu 결합 도메인 및 2개의 CD137 결합 도메인을 포함하는 분자는 세포-세포 콘쥬게이션을 매개할 수 있었던 한편 대조군 분자는 비활성적이었다. 모든 활성 분자에 대해, 세포-세포 콘쥬게이션 활성은 HER2/neu 발현 수준과 상관이 있었다.
또 다른 연구로, CD137에 대한 2개의 결합 부위 및 HER2/neu에 대한 1개의 결합 부위를 가지는 CD137 x TA 결합 분자 (TRIDENT-A, TRIDENT-A2, TRIDENT-A3 및 TRIDENT-A4), CD137 x RSV 및 TA x FITC x RSV 대조군 분자 (TRIDENT-1 및 TRIDENT-2), 및 CD137에 대한 2개의 결합 부위 및 HER2/neu에 대한 2개의 결합 부위를 가지는 CD137 x TA 결합 분자 (DART-G, DART-G2, DART-G3, 및 DART-G4)를, T 세포 사이토카인 방출 검정 (본질적으로 상기 실시예 2에서 기술된 것과 같이 수행하였고, IFN-γ의 방출에 의해 예시됨)에서 예시의 TA, HER2/neu를 발현하는 표적 세포의 존재 또는 부재 하에서 동시 자극 활성을 매개하는 능력에 대하여 평가하였다. 사이토카인 방출을 상기 기술된 것과 같이 HER2/neu-발현 N87 표적 세포 (도 26A), JIMT-1 표적 세포 (도 26B)의 존재 하에, 또는 존재하는 표적 세포 없이 (도 26C) 측정하였다.
결과는 예시의 CD137 x TA 결합 분자가 어느 하나의 표적 세포주의 존재 하에서 동시 자극 활성을 나타냈고, 이때 활성은 HER2/neu 발현 수준과 상관이 있었음을 보여준다. TRIDENT-A, TRIDENT-A2, TRIDENT-A3 및 TRIDENT-A4 (각각 CD137에 대한 2개의 결합 부위 및 HER2/neu에 대한 1개의 결합 부위를 가짐)는 DART-G, DART-G2, DART-G3 또는 DART-G4 (CD137에 대한 2개의 결합 부위 및 HER2/neu에 대한 2개의 결합 부위를 가짐)보다 더 높은 JIMT-1 (HER2++) 세포에 대한 동시 자극 활성을 나타냈다. CD137 x TA 결합 분자는 표적 세포의 부재 하에 또는 HER2/neu-음성 표적 세포로 어떠한 관찰 가능한 동시 자극 활성을 나타내지 않았다. 대조군 분자, TRIDENT-1 및 TRIDENT-2는 동시 자극 활성을 나타내지 않았다.
실시예 7
CD137 x TA 결합 분자는 T-세포 활성화를 증강시킨다
상기에서 기술된 것과 같이, 본 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 T-세포 팽창 및 활성화 (예컨대, 도 17A 내지 17O 참조) 및 종양 표적화제-매개된 NK 이펙터 기능 (ADCC) (예컨대, 마르게툭시맙-매개된 ADCC의 증강, 도 18A 및 18B 참조)을 증강시킬 수 있다. TA 및 to CD3에 결합하는 TA x CD3 이중특이적 분자 (예컨대, DART 디아바디, BiTE® 분자, 등)는 TA를 발현하는 표적 세포의 T-세포 재지시된 사멸을 매개하고, T-세포 팽창 및 활성화를 자극하는 것으로 알려져 있다 (예컨대, PCT 출원 공개 번호 WO 2017/030926; WO 2016/048938; 및 WO 2015/026892 참조). 이러한 종양 표적화제에 의해 매개된 T-세포 활성화 및 T-세포 재지시된 사멸을 증강시키는 발명의 CD137 x TA 결합 분자의 능력을 여러 연구에서 예시의 TA x CD3 이중특이적 분자를 사용하여 평가하였다.
이러한 한 연구에서, 예시적인 TA gpA33에 결합하는 TA x CD3 디아바디에 의해 매개된 T-세포 재지시된 세포 사멸을 증강시키는 예시의 CD137 x TA 결합 분자 TRIDENT-A4의 능력을 루시페라제 기반 세포독성 T 림프구 (CTL) 검정을 사용하여 평가하였다. 간단히 설명하면, pan T 세포를, 루시페라제 (luc) 리포터 유전자 (Colo205/luc) 표적 세포를 발현하도록 조작된 Colo205 세포와 3:1의 이펙터:표적 (E:T) 비율로, TA x CD3 디아바디 또는 대조군 Irrel x CD3 이중특이적 디아바디 (gpA33 대신 무관한 결합 도메인 (4-4-20 내지 플루오레세인)을 포함함)와 조합된 TRIDENT-A4 또는 대조군 TRIDENT-1의 존재 하에 인큐베이션하였다. 인큐베이션이 종료되었을 대, 세포독성을 판독으로서 발광 상대광 단위 (RLU)로 표적 세포의 세포 루시페라제 활성을 측정하는 발광 (LUM) 검정에 의해 측정하였다 (도 27). 이 연구의 결과는 발명의 CD137 x TA 결합 분자가 TA x CD3 이중특이적 분자에 의해 매개된 T-세포 재지시된 사멸을 증강시킬 수 있음을 증명한다.
또 다른 연구로, 생체내 조합으로 T-세포 팽창 및 항-종양 활성을 증강시키는 예시의 CD137 x TA 결합 분자 TRIDENT-A2의 능력을 SK-OV3 난소 암종 모델 (TA HER2/neu 및 5T4를 발현함)에서 평가하였다. 이 연구에서, TRIDENT-A2의 활성을 단독으로 또는 예시적인 TA 5T4 (5T4 x CD3)에 결합하는 TA x CD3 디아바디와 조합하여, 및 선택적으로 추가로 항-PD-1 mAb (hPD-1 mAb 7(1.2) IgG4 (P), 예컨대 PCT 공보 WO 2017/019846의 SEQ ID NO:264 및 266 참조)와 조합하여 조사하였다.
간단히 설명하면, 새롭게 분리한 PBMC를 NSG.MHCI-/- 마우스 (종양 모니터링을 위해 그룹당 암컷 마우스 7마리; T-세포 및 종양 프로파일링을 위해 그룹당 3마리)에 제 0일에 안와후(retro-orbitally)에 주사하였다. SK-OV3 세포 (5 x 106)를 마트리겔과 1:1로 혼합하고 연구일 제0일에 피하로 주사하였다. 연구일 제7일에, 마우스를 항-CD4 항체 OKT4 (초기 용량 10 mg/kg을 피하로, 그런 후 주당 2회 IP로 5 mg/kg)로 처리하여 CD4+ T-세포를 제거하였다. 제22일에 시작하여, 마우스를 다음으로 정맥내 (IV) 주사에 의해 처리하였다: 비히클 대조군; TRIDENT-A2 (2.5 mg/kg, 주 1회); TA x CD3 디아바디 (0.01 mg/kg, 주 2회); TRIDENT-A2 (2.5 mg/kg, 주 1회) 및 TA x CD3 디아바디 (0.01 mg/kg, 주 2회)의 조합; 항-PD-1 mAb (5 mg/kg, 주 1회); 또는 TRIDENT-A2 (2.5 mg/kg; 주 1회), TA x CD3 디아바디 (0.01 mg/kg, 주 2회), 및 항-PD-1 mAb (5 mg/kg, 주 1회)의 조합.
T-세포 마커를 FACS 분석에 의하여 테스트 물품의 투여 후 7일 후에 평가하였고 종양 성장을 연구 과정 동안 모니터링하였다. 처리 후 7일 후 샘플링한 종양 1 mg에 존재하는 T-세포 마커 CD4, CD8, CD69, 및 PD-1의 발현을 도 28A, 도 28B, 도 28C, 및 도 28D에 각각 도표화한다. 이들 데이터는 CD137 x TA 결합 분자 TRIDENT-A2가 TA x CD3 디아바디에 의해 매개된 T-세포 활성화 및 팽창을 증강시켰음 (CD4, CD8 및 CD69의 증가된 발현에 의해 예시됨)을 보여준다. 면역 체크포인트 분자 PD-1의 발현은 TA x CD3 디아바디 단독으로 처리되었을 때 상향조절되었다. CD137 x TA 결합 분자 TRIDENT-A2와 TA x CD3 디아바디의 조합으로의 처리는 TA x CD3 디아바디 단독으로 처리되었을 때 관찰된 체크포인트 분자 PD-1의 발현을 추가로 증강시켰고 체크포인트 억제제의 첨가에 의해 조합의 활성의 증강될 수 있을 것임을 시사하였다. 실제로, 예시의 PD-1/PD-L1 체크포인트 억제제인 항-PD-1 mAb의 TRIDENT-A2/TA x CD3 디아바디 조합에의 첨가는 PD-1 발현의 상향조절을 억제하였고 T-세포 활성화 및 증식을 추가로 증강시켰다.
연구 과정 동안의 종양 성장을 도 29에 도표화하며, 그것은 CD137 x TA 결합 분자 TRIDENT-A2가 TA x CD3 디아바디의 항-종양 활성을 증강시켰음을 보여준다. 또한, PD-1/PD-L1 체크포인트 억제제, 항-PD-1 mAb의 조합에의 첨가는 추가로 그 조합의 항-종양 활성을 증강시켰다. 이 연구 결과는 발명의 CD137 x TA 결합 분자, 특히 CD137에 대한 2개의 결합 부위 및 TA에 대한 1개의 결합 부위를 가지는 것들이 종양 표적화제와 조합하여 T-세포 활성화, 증식 및 표적 세포 사멸을 증강시키는 것을 증명한다. 그러므로, 발명의 CD137 x TA 결합 분자는 종양 표적화제, 특히 T 세포 활성화, NK 세포 활성화를 매개하고, 및/또는 CD137 발현을 자극하는 것들과 조합하여 이러한 세포에서 유익하게 사용될 수 있다. 나아가, 이들 연구는 PD-1/PD-L1 체크포인트 억제제, 예컨대 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 첨가가 추가로 T-세포 활성화, 증식 및 표적 세포 사멸을 증강시킬 수 있음을 증명한다.
실시예 8
안정성 연구
예시의 삼가 CD137 x TA 결합 분자 TRIDENT-A (hCD137 MAB-3 (1.3)을 포함함), 및 최적화된 변종 TRIDENT-A1 (hCD137 MAB-3 (1A.3)을 포함함), TRIDENT-A2 (hCD137 MAB-3 (1B.3)을 포함함), TRIDENT-A3 (hCD137 MAB-3 (1C.3)을 포함함), 및 TRIDENT-A4 (hCD137 MAB-3 (1D.3)을 포함함)의 용융 온도 (Tm) 및 다른 안정성 매개변수들을 평가하였다. 정제된 물질 (고압 크기 축출 크로마토그래피 (HP-SEC)에 의해 측정되는 바 95%보다 큰)의 Tm을 시차 주사 열량분석법 (DSC)에 의해 평가하였다. 간단히 설명하면, 순도 수준을 Waters Acquity UPLC BEH 칼럼 (200Å 1.7 μm 4.6 x 150 mm)에 연결된 Agilent 1260 Infinity II HPLC를 사용하여 HPLC-SEC에 의해 측정하였다. 작동 완충액은 20 mM 인산 나트륨, 0.5 M NaCl, 0.02% 아지드화 나트륨, pH 7.2였다. 유량은 5분 동안 0.4 ml/분이었다. % 순도를 모노머 피크의 280 nm에서 추적한 흡광도의 % 면적으로부터 측정한다. 열 안정성 측정을 15 내지 95℃에서 1℃/분으로 올라가는 MicroCal VP-Capillary DSC (Malvern Instruments, Inc.) 상에서 수행하였다.
다른 안정성 매개변수를 평가하기 위하여, 정제된 CD137 x TA 결합 분자 (주지되지 않는 한 PBS pH7.2 중에 1 mg/mL)를 스트레스를 주고 HP-SEC에 의하여 재평가하고 값을 스트레스를 주지 않은 분자로부터 얻어진 값과 비교하였다. 다음의 스트레스 조건을 활용하였다: 냉동 (-80℃에서 1시간) 후 해동의 3회기; 25℃ 또는 40℃에서 2일 및 7일 보관 후; 25℃에서 20 mM 아세트산 나트륨 pH 5.5에서 0, 2, 7일 후; 25℃에서 10 mM 히스티딘 HCL pH 6.5에서 0, 2, 7일 보관. 이들 연구의 결과를 표 14에 요약한다.
TRIDENT-
검정 스트레스 유형 최적 값 A A2 A3 A4
HP-SEC
순수		 없음 (4℃ 보관) > 95%† 99.4 96.6 97.1 99.6
DSC 없음 Tm 시작 > 50℃ 62.19 54.72 48.57 48.35
없음 Tm1 > 60℃ 68.19 61.75 54.72 56.61
평가한
안정성		 냉동 해동 3회 변화 없음 변화 없음 변화 없음 변화 없음 변화 없음
25℃ 변화 없음 변화 없음 변화 없음 변화 없음 변화 없음
40℃ 변화 없음 민감함 변화 없음 민감함 매우
민감함
pH5.5
아세테이트		 변화 없음 민감함 변화 없음 변화 없음 민감함
pH6.5
히스티딘		 변화 없음 변화 없음 변화 없음 변화 없음 변화 없음
†는 P-SEC에 의해 측정된 바 샘플의 백분율 순도를 나타냄
민감함 : HP-SEC에 의해 측정된 바 < 95%의 원하는 생성물이 잔류함
매우 민감함 : HP-SEC에 의해 측정된 바 < 90%의 원하는 생성물이 잔류함
Tm 시작 및 CD137 결합 영역의 Tm (Tm1)은 TRIDENT-A 및 TRIDENT-A2의 경우 최적 범위에 있다. 그러나, Tm 시작 및 Tm1은 TRIDENT-A3 및 TRIDENT-A4 둘 다의 경우 더 낮다. TRIDENT-A2 만이 PBS에서 40℃에서 안정적이며, 나머지 분자들은 이 보관 조건에 민감하였다. TRIDENT-A 및 TRIDENT-A2는 둘 다 아세테이트 pH 5.5에서 안정적이었던 한편, TRIDENT-A3 및 TRIDENT-A4는 둘 다 아세테이트 pH 5.5 인큐베이션에 대해 민감하였다. 모든 테스트한 분자는 pH 6.5에서 히스티딘에서 안정적이었다. 이들 연구로부터의 결과를 기반으로, 테스트된 완충액에서 안정성에 대한 순위는 TRIDENT-A2 > TRIDENT-A > TRIDENT-A3 > TRIDENT-A4이다.
실시예 9
시노몰구스 T 세포로의 동시 자극 활성
상기 주지된 것과 같이, CD137 MAB-3의 결합 도메인 (또는 이것의 인간화된, 최적화된 변종)을 포함하는 분자들은 인간 및 시노몰구스 원숭이 CD137 둘 다에 결합한다. CD137에 대한 2개의 결합 부위 및 HER2/neu 또는 5T4에 대한 1개의 결합 부위를 가지는 대표적인 CD137 x TA 결합 분자 TRIDENT-A2 및 TRIDENT-B2를 시노몰구스 T 세포 사이토카인 방출 검정에서 동시 자극 활성을 매개하는 능력에 대해 평가하였다. 이들 예시의 CD137 x TA 결합 분자의 구조 및 서열은 상기에서 상세하게 제공된다. 대조군 분자, TRIDENT-1, 및 TRIDENT-2를 또한 포함시켰다. 본질적으로 상기 실시예 2에서 기술한 것과 같이 수행하였고, 시노몰구스 원숭이 pan T 세포를 제외한 표적 세포의 존재 또는 부재하에서 IFN-γ의 방출에 의해 예시한 사이토카인 방출 검정을 활용하였다. 이들 연구의 경우 HER2/neu 및 5T4를 둘 다 발현하는 JIMT-1 표적 세포를 활용하였다.
결과를 도 30에 도표화하며, 대조군 분자, TRIDENT-1 및 TRIDENT-2가 동시 자극 활성을 나타내지 않았음을 보여준다. 반면 CD137 x TA 결합 분자 TRIDENT-A2 및 TRIDENT-B2 (인간화된/최적화된 항-CD137 항체 hCD137 MAB-3 (1B.3)을 포함함)는 둘 다 용량 의존성 동시 자극 활성을 나타냈다.
실시예 10
CD137 탈면역화
hCD137 MAB-3 (1B.3)의 인실리코 분석은 VH 도메인에서 2개의 잠재적인 MHC 클래스 II 결합 펩타이드 (T-세포 에피토프) 및 VL 도메인에서 3개의 잠재적인 MHC 클래스 II 결합 펩타이드를 확인하였다. hCD137 MAB-3 (1B.3)에 대한 아미노산 치환의 패널을 조사하여 확인된 T-세포 에피토프의 잠재적 면역원성을 제거/감소하기 위한 치환 (단일 아미노산 치환이거나 치환들의 세트일 수 있음)을 확인하였다. 구체적으로, 아미노산 치환을, hCD137 MAB-3 VH1B를 탈면역화하기 위하여 최대 2개의 위치 (Kabat 잔기 38 및 48) 및 hCD137 MAB-3 VL3을 탈면역화하기 위하여 최대 6개의 위치 (Kabat 잔기 24, 25, 44, 48, 52, 및 54)에 도입하였다. VH 및 VL 도메인에서 치환된 아미노산 잔기를 박스로 표시하고 Kabat 넘버링을 도 31A 및 31B에서 각각 화살표로 표시한다. 이들 위치에서, 별도로 및/또는 조합하여 다양한 치환을 가지는 hCD137 MAB-3 (1B.3)의 VH 및/또는 VL 변종을 포함하는 IgG1 항체 (234A/235A Fc 도메인 (SEQ ID NO:40)을 가짐)를 생성하였고, 그것들의 CD137에 결합하는 능력을 Attana Cell A200 QCM에 의하여 특성화하였다. 간단히 설명하면, hCD137 MAB-3 (1B.3) 및 탈면역화된 변종을 토끼 항-인간 IgG Fc 다클론성 항체로 코팅된 Attana 센서 칩 상에 독립적으로 포획하고 가용성 인간 CD137-His 태그된 융합 단백질을 11.1, 33.3, 100, 및 300 mM에서 칩 위로 통과시켰다. 탈면역화된 변종의 센소그램을 hCD137 MAB-3 (1B.3)의 그것과 비교하여 채점하였다. 항체를 또한, 본질적으로 상기 실시예 8에서 기술된 것과 같이 수행한, DSC에 의해 열적 안정성에 대해 특성화하였다. 많은 이러한 변종에 대한 결과를 표 15에 요약하며, 이들 변종의 아미노산 서열은 상기에서 제공된다.
hCD137 MAB-3 Ref. VH1B 치환^ VL3 치환^ CD137
결합* 		DSC‡
(1B.3) 없음 없음 +++ 64.7
(1E.3) K38R (VH1E) 없음 +++ 65
(1F.3) I48A (VH1F) 없음 ++ 55.0
(1B.4) 없음 R24Q/P25A (VL4) +++ 65.5
(1B.5) 없음 V44A (VL5) +++ 62.6
(1B.6) 없음 L54A (VL6) +++ 64.7
(1G.7) K38R/I48A (VH1G) R24Q/P25A/V44A (VL7) + 45.2
(1G.8) K38R/I48A (VH1G) R24Q/P25A/V44A/L54A (VL8) + n.d.
(1E.4) K38R (VH1E) R24Q/P25A (VL4) +++ 64.5
(1G.4) K38R/I48A (VH1G) R24Q/P25A (VL4) +++ 55.1
(1B.10) 없음 S52T (VL10) +++ 65.2
(1B.11) 없음 S52G (VL11) +++ 64.4
(1B.11) 없음 I48A/S52T (VL12) +++ n.d.
(1B.13) 없음 I48A/S52G (VL13) ++- n.d.
(1E.9) K38R (VH1E) R24Q/P25A/L54A (VL9) +++ 64
(1E.14) K38R (VH1E) R24Q/P25A/S52T/L54A (VL14) +++ 64
(1E.15) K38R (VH1E) R24Q/P25A/S52G/L54A (VL15) +++ 62.9
(1G.14) K38R/I48A (VH1G) R24Q/P25A/S52T/L54A (VL14) ++ 51.9
(1G.15) K38R/I48A (VH1G) R24Q/P25A/S52G/L54A (VL15) + 50
^ VH1B 또는 VL3에 비교한 치환(들)이 열거되며, 표시된 치환을 포함하는, 결과적으로 얻어진 가변 영역의 표시는 괄호로 제공된다
* 결합 센소그램의 비교에 의해 결정된 hCD137 MAB-3 (1B.3) (+++로 설정함)에 비교한 상대적 결합
‡ Tm 시작 "없음"은 돌연변이가 존재하지 않음을 나타낸다 n.d. 측정되지 않음
다수의 탈면역화된 변종이 CD137 결합 활성 및 열적 안정성을 둘 다 보유한 것으로 확인되었다. VH 도메인 I48A 치환을 포함하는 대부분의 탈면역화된 변종은 CD137 결합 및 Tm의 시작에서 둘 다 약간의 감소를 나타냈다.
탈면역화된 hCD137 MAB-3 (1E.15) 및 hCD137 MAB-3 (1G.15), 및 모 인간화된 hCD137 MAB-3 (1B.3)을 본질적으로 상기에서 기술된 것과 같이 활성화된 CD4+ 및 CD8+ T 세포에 결합하는 능력에 대해 테스트하였다. 도 32A 및 32B에서 나타낸 것과 같이, 탈면역화된 항체 hCD137 MAB-3 (1E.15)의 결합 곡선에서 변화하지 않았던 한편, hCD137 MAB-3 (1G.15)은 CD4+ 및 CD8+ T 세포 둘 다에 대해 약간 감소된 결합을 나타냈다.
hCD137 MAB-3 (1E.15) 및 hCD137 MAB-3 (1G.15)의 시험관내 작용물질 활성을 T-세포 사이토카인 방출 검정 (본질적으로 상기 실시예 2에서 기술한 것과 같이 수행하였고, IFN-γ의 방출에 의해 예시됨)에서 가교 결합의 부재하에 또는 가교 결합이 있을 때에 평가하였다. hCD137 MAB-3 기반 항체는 어느 것도 활성을 나타내지 않은 것이 가교 결합의 부재 하에서 관찰되었고 (도 33A), hCD137 MAB-3 (1E.15)과의 가교 결합은 hCD137 MAB-3 (1B.3)에 대한 유사한 작용물질 활성을 나타낸 한편, hCD137 MAB-3 (1G.15)은 아마도 CD137에 대한 감소된 결합으로 인해 작용물질 활성에서 약간의 감소를 나타냈다 (도 33B). 상기에서 보고된 것과 같이, CD137 MAB-1은 가교 결합의 존재 및 부재 하에서 작용물질 활성을 나타냈다.
실시예 11
탈면역화된 CD137 결합 도메인을 가지는 삼가 CD137 x TA 결합 분자
상기에서 기술된 것과 같이 hCD137 MAB-3의 VH 및 VL 도메인을 인간화하고, 최적화하고 탈면역화하였다. 예시의 이중특이적 사가 및/또는 삼가 CD137 x TA 결합 분자를 이러한 VH 및 VL 도메인의 통합에 의해 생성하였다. hCD137 MAB-3 (1E.15)의 CD137 결합 도메인을 포함하는 하나의 이러한 이중특이적 삼가 결합 분자 "TRIDENT-B5"를 생성하였고 많은 검정으로 평가하였다. 이 예시의 CD137 x TA 결합 분자의 구조 및 서열을 상기에서 상세하게 제공된다. TRIDENT-B2 및 하나 이상의 대조군 분자: TRIDENT-1, TRIDENT-2, TRIDENT-3, TRIDENT-4를 이들 연구에 포함시켰다.
TRIDENT-B2, TRIDENT-B5, 및 대조군 분자 TRIDENT-1, TRIDENT-3, 및 TRIDENT-4를 본질적으로 상기에서 기술된 것과 같이 표적 세포 (고 발현 JIMT-1 유방 암종 세포 및 저 발현 SKOV-3 난소 암종 세포)의 표면에 존재하는 활성화된 CD8+ T 세포, 및/또는 5T4에 결합하는 능력에 대해 평가하였다. 도 34A에 나타낸 것과 같이, 2개의 CD137 결합 도메인을 포함하는 모든 분자 (TRIDENT-B2, TRIDENT-B5, 및 대조군 분자 TRIDENT-1 및 TRIDENT-4)는 활성화된 CD8+ T 세포에 대해 유사한 결합을 나타낸 한편, 임의의 CD137 결합 도메인이 없는 대조군 분자 (TRIDENT-3)는 결합하지 못하였다. 유사하게, 5T4 결합 도메인을 가지는 모든 분자 (TRIDENT-B2, TRIDENT-B5, 및 대조군 TRIDENT-3)는 고수준의 5T4를 발현하는 표적 세포에 대해 유사한 강력한 결합을 나타낸 한편 (JIMT-1, 도 34B), 5T4 결합 도메인이 없는 대조군 분자 (TRIDENT-1 및 TRIDENT-4)는 5T4 발현 표적 세포 중 어느 것에도 결합하지 못하였다.
TRIDENT-B2, TRIDENT-B5, 및 대조군 분자 TRIDENT-1, TRIDENT-3, 및 TRIDENT-4의 시험관내 작용물질 활성을 T-세포 사이토카인 방출 검정 (본질적으로 상기 실시예 2에서 기술한 것과 같이 수행하였고, IFN-γ의 방출에 의해 예시됨)에서 상이한 수준의 예시의 TA, 5T4를 발현하는 표적 세포 (JIMT-1 (5T4hi) 세포, 또는 SKOV-3 (5T4lo) 세포)의 존재 또는 부재하에 평가하였다.
도 35A 내지 35C에서 나타낸 것과 같이, TRIDENT-1, TRIDENT-4 (5T4 결합 도메인이 없음)는 동시 자극 활성을 나타내지 않았다. TRIDENT-3 (CD137 결합 도메인이 없음) 또한 어떠한 동시 자극 활성도 없는 것으로 나타났다. TRIDENT-B2, 및 TRIDENT-B5는 고 5T4-발현 JIMT-1 표적 세포의 존재 하에 용량 의존성 동시 자극 활성을 나타냈지만 (도 35A) 저 5T4-발현 SKOV-3 표적 세포의 존재 하에서 (도 35B), 또는 표적 세포가 없을 때 (도 35C) 동시 자극 활성을 거의 나타내지 않았거나 나타내지 않았다.
이들 연구 결과는 hCD137 MAB-3 (1E.15)의 탈면역화된 VH 및 VL 도메인을 포함하는 CD137 x TA 결합 분자가 hCD137 MAB-3 (1B.3)의 최적화된 VH 및 VL 도메인을 포함하는 CD137 x TA 결합 분자와 비슷한 결합 및 동시 자극 활성을 나타내는 것을 가리킨다.
본 명세서에서 언급된 모든 출판물 및 특허는 각각의 개별적인 출판물 또는 특허 출원이 구체적으로 및 개별적으로 그 전문이 참조로 포함되는 것으로 표시된 것과 동일한 정도로 참조로 본원에 포함된다. 발명이 발명의 구체적인 구체예와 관련하여 기술된 한편으로, 발명은 추가로 변형될 수 있고 본 출원은 일반적으로 발명의 원리를 따르며 본 개시로부터의 그러한 일탈을 포함하는 발명의 임의의 변화, 용도, 또는 적응을 발명이 속하는 기술분야 내에서의 공지된 또는 관례적인 실시 내에 포함되는 것으로서 및 지금까지 진술된 본질적인 특징에 대해 적용될 수 있는 것으로서 다 포함하는 것으로 의도된 것이 인지될 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> MacroGenics, Inc. Liu, Liqin Kao, Chia-Ying Diedrich, Gundo Johnson, Leslie Moore, Paul Bonvini, Ezio <120> Bispecific Binding Molecules That Are Capable of Binding CD137 and Tumor Antigens, and Uses Thereof <130> 1301.0149PCT <150> US 62/597,594 <151> 2017-12-12 <150> US 62/463,353 <151> 2017-02-24 <160> 232 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(107) <223> Human IgG CL Kappa Domain <400> 1 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 2 <211> 104 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(104) <223> Human IgG CL Lambda Domain <400> 2 Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 1 5 10 15 Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe 20 25 30 Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val 35 40 45 Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr 50 55 60 Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His 65 70 75 80 Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 85 90 95 Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 100 <210> 3 <211> 98 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(98) <223> Human IgG1 CH1 Domain <400> 3 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val <210> 4 <211> 98 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(98) <223> Human IgG2 CH1 Domain <400> 4 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Thr Val <210> 5 <211> 98 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(98) <223> Human IgG3 CH1 Domain <400> 5 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val <210> 6 <211> 98 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(98) <223> Human IgG4 CH1 Domain <400> 6 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val <210> 7 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(15) <223> Human IgG1 Hinge Region <400> 7 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 15 <210> 8 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(12) <223> Human IgG2 Hinge Region <400> 8 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 9 <211> 62 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(62) <223> Human IgG3 Hinge Region <400> 9 Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Arg Cys 1 5 10 15 Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro 20 25 30 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu 35 40 45 Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro 50 55 60 <210> 10 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(12) <223> Human IgG4 Hinge Region <400> 10 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro 1 5 10 <210> 11 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human IgG4 Hinge Region Variant Comprising S228P Substitution <400> 11 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 12 <211> 217 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(217) <223> Exemplary Human IgG1 CH2-CH3 Domain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (217)..(217) <223> Xaa is Lysine (K) or Is Absent <400> 12 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Xaa 210 215 <210> 13 <211> 216 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(216) <223> Exemplary Human IgG2 CH2-CH3 Domain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (216)..(216) <223> Xaa is Lysine (K) or Is Absent <400> 13 Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 1 5 10 15 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 20 25 30 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val 35 40 45 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 50 55 60 Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln 65 70 75 80 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly 85 90 95 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro 100 105 110 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 115 120 125 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 130 135 140 Asp Ile Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 145 150 155 160 Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 165 170 175 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 180 185 190 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 195 200 205 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Xaa 210 215 <210> 14 <211> 217 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(217) <223> Exemplary Human IgG3 CH2-CH3 Domain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (217)..(217) <223> Xaa is Lysine (K) or Is Absent <400> 14 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Xaa 210 215 <210> 15 <211> 217 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(217) <223> Exemplary Human IgG1 CH2-CH3 Domain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (217)..(217) <223> Xaa is Lysine (K) or Is Absent <400> 15 Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Xaa 210 215 <210> 16 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred Intervening Spacer Peptide (Linker 1) <400> 16 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 17 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Intervening Spacer Peptide (Linker 1) for scFv Molecules <400> 17 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 18 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred Intervening Spacer Peptide (Linker 2) <400> 18 Gly Gly Cys Gly Gly Gly 1 5 <210> 19 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Alternative Intervening Spacer Peptide (Linker 2) <400> 19 Ala Ser Thr Lys Gly 1 5 <210> 20 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred Heterodimer-Promoting Domain (Linker 3) <400> 20 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 21 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Alternative Heterodimer-Promoting Domain (Linker 3) <400> 21 Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 22 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred Intervening Spacer Peptide (Linker 4) <400> 22 Ala Pro Ser Ser Ser 1 5 <210> 23 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Alternative Preferred Intervening Spacer Peptide (Linker 4) <400> 23 Ala Pro Ser Ser Ser Pro Met Glu 1 5 <210> 24 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Alternative Preferred Intervening Spacer Peptide (Linker 4) <400> 24 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 1 5 10 <210> 25 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Alternative Linker <400> 25 Leu Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 <210> 26 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Alternative Linker <400> 26 Gly Gly Gly Ser 1 <210> 27 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Alternative Linker <400> 27 Leu Glu Pro Lys Ser Ser 1 5 <210> 28 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Alternative Linker <400> 28 Val Glu Pro Lys Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 15 <210> 29 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Alternative Linker <400> 29 Leu Glu Pro Lys Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 15 <210> 30 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Alternative Linker <400> 30 Leu Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 15 <210> 31 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred Heterodimer-Promoting Domain <400> 31 Gly Val Glu Pro Lys Ser Cys 1 5 <210> 32 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred Heterodimer-Promoting Domain <400> 32 Val Glu Pro Lys Ser Cys 1 5 <210> 33 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred Heterodimer-Promoting Domain <400> 33 Ala Glu Pro Lys Ser Cys 1 5 <210> 34 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred Heterodimer-Promoting Domain <400> 34 Gly Phe Asn Arg Gly Glu Cys 1 5 <210> 35 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred Heterodimer-Promoting Domain <400> 35 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 1 5 <210> 36 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> E-Coil Heterodimer-Promoting Domain <400> 36 Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val 1 5 10 15 Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys 20 25 <210> 37 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> K-Coil Heterodimer-Promoting Domain <400> 37 Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val 1 5 10 15 Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 20 25 <210> 38 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Cysteine-Containing E-Coil Heterodimer-Promoting Domain <400> 38 Glu Val Ala Ala Cys Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val 1 5 10 15 Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys 20 25 <210> 39 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Cysteine-Containing K-Coil Heterodimer-Promoting Domain <400> 39 Lys Val Ala Ala Cys Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val 1 5 10 15 Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 20 25 <210> 40 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human IgG1 CH2-CH3 Domain Variant Comprising Kabat L234A and L235A Substitutions <220> <221> MISC_FEATURE <222> (217)..(217) <223> Xaa is Lysine (K) or Is Absent <400> 40 Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Xaa 210 215 <210> 41 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human IgG1 CH2-CH3 Domain Variant Comprising Kabat M252Y, S254T and T256E Substitutions <220> <221> MISC_FEATURE <222> (217)..(217) <223> Xaa is Lysine (K) or Is Absent <400> 41 Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Xaa 210 215 <210> 42 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human IgG1 CH2-CH3 Domain Variant Comprising Kabat L234A, L235A, M252Y, S254T and T256E Substitutions <220> <221> MISC_FEATURE <222> (217)..(217) <223> Xaa is Lysine (K) or Is Absent <400> 42 Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Xaa 210 215 <210> 43 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human IgG4 CH2-CH3 Domain Variant Comprising Kabat M252Y, S254T and T256E Substitutions <220> <221> misc_feature <222> (217)..(217) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 43 Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Xaa 210 215 <210> 44 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary "Knob-Bearing" IgG1 CH2-CH3 Domain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (217)..(217) <223> Xaa is Lysine (K) or Is Absent <400> 44 Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Xaa 210 215 <210> 45 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary "Knob-Bearing" IgG1 CH2-CH3 Domain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (217)..(217) <223> Xaa is Lysine (K) or Is Absent <400> 45 Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Xaa 210 215 <210> 46 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary "Knob-Bearing" IgG1 CH2-CH3 Domain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (217)..(217) <223> Xaa is Lysine (K) or Is Absent <400> 46 Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Xaa 210 215 <210> 47 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary "Hole-Bearing" IgG1 CH2-CH3 Domain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (217)..(217) <223> Xaa is Lysine (K) or Is Absent <400> 47 Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Xaa 210 215 <210> 48 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary "Hole-Bearing" IgG1 CH2-CH3 Domain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (217)..(217) <223> Xaa is Lysine (K) or Is Absent <400> 48 Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Val Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Xaa 210 215 <210> 49 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary "Hole-Bearing" IgG1 CH2-CH3 Domain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (217)..(217) <223> Xaa is Lysine (K) or Is Absent <400> 49 Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 85 90 95 Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 100 105 110 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 115 120 125 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 145 150 155 160 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 165 170 175 Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 180 185 190 Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Xaa 210 215 <210> 50 <211> 46 <212> PRT <213> Streptococcus dysgalactiae <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(46) <223> Albumin-Binding Domain 3 (ABD3) of Protein G of Streptococcus Strain G148 <400> 50 Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly 1 5 10 15 Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asp Asn Ala Lys Ser Ala Glu 20 25 30 Gly Val Lys Ala Leu Ile Asp Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro 35 40 45 <210> 51 <211> 46 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Deimmunized Albumin-Binding Domain 3 (ABD3) of Protein G of Streptococcus Strain G148 <400> 51 Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly 1 5 10 15 Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Asp Asn Ala Lys Ser Ala Glu 20 25 30 Gly Val Lys Ala Leu Ile Asp Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro 35 40 45 <210> 52 <211> 46 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Deimmunized Albumin-Binding Domain 3 (ABD3) of Protein G of Streptococcus Strain G148 <400> 52 Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly 1 5 10 15 Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Ala Ala Asn Asn Ala Lys Thr Val Glu 20 25 30 Gly Val Lys Ala Leu Ile Ala Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro 35 40 45 <210> 53 <211> 46 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Deimmunized Albumin-Binding Domain 3 (ABD3) of Protein G of Streptococcus Strain G148 <400> 53 Leu Ala Glu Ala Lys Val Leu Ala Asn Arg Glu Leu Asp Lys Tyr Gly 1 5 10 15 Val Ser Asp Tyr Tyr Lys Asn Leu Ile Ser Asn Ala Lys Ser Val Glu 20 25 30 Gly Val Lys Ala Leu Ile Ala Glu Ile Leu Ala Ala Leu Pro 35 40 45 <210> 54 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain of Margetuximab <400> 54 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Val Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 55 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain of Margetuximab <400> 55 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly His Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 56 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain of Trastuzumab <400> 56 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 57 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain of Trastuzumab <400> 57 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 58 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain of Pertuzumab <400> 58 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 59 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain of Pertuzumab <400> 59 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 60 <211> 119 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(119) <223> Murine Anti-HER2/neu Monoclonal Antibody HER2-MAB-1 VH Domain <400> 60 Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Glu Glu Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Gly Thr Ser Ala Ser Thr Ala Phe 65 70 75 80 Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 61 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(107) <223> Murine Anti-HER2/neu Monoclonal Antibody HER2-MAB-1 VL Domain <400> 61 Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Met Tyr Thr Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr 65 70 75 80 Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asp Glu Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 62 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Anti-HER2/neu Monoclonal Antibody hHER2-MAB-1 VH Domain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (100)..(100) <223> Xaa is Asparatate (D) or Glutamate (E) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (101)..(101) <223> Xaa is Glycine (G) or Isoleucine (I) <400> 62 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Glu Glu Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Xaa Xaa Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 63 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Anti-HER2/neu Monoclonal Antibody hHER2-MAB-1 VL Domain <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> Xaa is Asparagine (N) or Serine (S) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> Xaa is Serine (S), Threonine (T) or Asparagine (N) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (55)..(55) <223> Xaa is Valine (V) or Glutamine (Q) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (56)..(56) <223> Xaa is Aspartate (D), Glutamate (E) or Serine (S) <400> 63 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Xaa Xaa Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Xaa Xaa Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asp Glu Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 64 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Anti-HER2/neu Monoclonal Antibody hHER2-MAB-1 VH1 Domain <400> 64 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Glu Glu Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 65 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Anti-HER2/neu Monoclonal Antibody hHER2-MAB-1 VH2 Domain <400> 65 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Glu Glu Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Glu Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 66 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Anti-HER2/neu Monoclonal Antibody hHER2-MAB-1 VH3 Domain <400> 66 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Glu Glu Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Asp Ile Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 67 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Anti-HER2/neu Monoclonal Antibody hHER2-MAB-1 VL1 Domain <400> 67 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asp Glu Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 68 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Anti-HER2/neu Monoclonal Antibody hHER2-MAB-1 VL2 Domain <400> 68 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asp Glu Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 69 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized Anti-HER2/neu Monoclonal Antibody hHER2-MAB-1 VL3 Domain <400> 69 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asp Glu Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 70 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain of CD137 MAB-1 (CD137 MAB-1 VH) <400> 70 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn His Gly Gly Tyr Val Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Glu 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Tyr Gly Pro Gly Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly 100 105 110 Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 71 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain of CD137 MAB-1 (CD137 MAB-1 VL) <400> 71 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro 85 90 95 Ala Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 72 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain of CD137 MAB-2 (CD137 MAB-2 VH) <400> 72 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Lys Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Tyr Gly Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 73 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain of CD137 MAB-2 (CD137 MAB-2 VL) <400> 73 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Asn Ile Gly Asp Gln Tyr Ala 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gln Asp Lys Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Tyr Thr Gly Phe Gly Ser Leu 85 90 95 Ala Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 74 <211> 119 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(119) <223> VH Domain of CD137 MAB-3 (CD137 MAB-3 VH) <400> 74 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 75 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(107) <223> VL Domain of CD137 MAB-3 (CD137 MAB-3 VL) <400> 75 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 76 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain of Humanized CD137 MAB-3 (hCD137 MAB-3 VH1) <400> 76 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 77 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain of Optimized Humanized CD137 MAB-3 (hCD137 MAB-3 VH1) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (103)..(103) <223> Xaa is Alanine (A) or Serine (S) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (104)..(104) <223> Xaa is Tyrosine (Y) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (105)..(105) <223> Xaa is Serine (S) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (106)..(106) <223> Xaa is Phenylalanine (F), Methionine (M) or Tyrosine (Y) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (107)..(107) <223> Xaa is Histidine (H), Serine (S) or Asparagine (N) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (108)..(108) <223> Xaa is Proline (P), Threonine (T), Leucine or Valine (V) <400> 77 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 78 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred Residues 103-108 of SEQ ID NO:77 Variant 1A <400> 78 Ala Tyr Ser Phe His Pro 1 5 <210> 79 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred Residues 103-108 of SEQ ID NO:77 Variant 1B <400> 79 Ala Tyr Ser Met Ser Thr 1 5 <210> 80 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred Residues 103-108 of SEQ ID NO:77 Variant 1C <400> 80 Ala Tyr Ser Tyr Ser Leu 1 5 <210> 81 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred Residues 103-108 of SEQ ID NO:77 Variant 1D <400> 81 Ser Tyr Ser Tyr Asn Val 1 5 <210> 82 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain of Optimized Humanized Antibody hCD137 MAB-3 (hCD137 MAB-3 VL) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> Xaa is Asparatate (D) or Glycine (G) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (42)..(42) <223> Xaa is Glycine (G) or Lysine (K) <400> 82 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Xaa Xaa Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 83 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hCD137 MAB-3 VH1A <400> 83 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Phe His Pro Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 84 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hCD137 MAB-3 VH1B <400> 84 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Met Ser Thr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 85 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hCD137 MAB-3 VH1C <400> 85 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Tyr Ser Leu Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 86 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hCD137 MAB-3 VH1D <400> 86 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Tyr Asn Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 87 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hCD137 MAB-3 VL1 <400> 87 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 88 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hCD137 MAB-3 VL2 <400> 88 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 89 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hCD137 MAB-3 VL3 <400> 89 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 90 <211> 123 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(123) <223> VH Domain of CD137 MAB-4 (CD137 MAB-4 VH) <400> 90 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asp Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Lys Ser Gly Glu Tyr Gly Lys Ile Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 91 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(107) <223> VL Domain of CD137 MAB-4 (CD137 MAB-4 VL) <400> 91 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 92 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain of Humanized CD137 MAB-4 (hCD137 MAB-4 VH1) <400> 92 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asp Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Lys Ser Gly Glu Tyr Gly Lys Ile Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 93 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain of Humanized CD137 MAB-4 (hCD137 MAB-4 VL) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (87)..(87) <223> Xaa is Phenylalanine (F) or Tyrosine (Y) <400> 93 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Xaa Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 94 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain of Humanized CD137 MAB-4 (hCD137 MAB-4 VL1) <400> 94 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 95 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain of Humanized CD137 MAB-4 (hCD137 MAB-4 VL2) <400> 95 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 96 <211> 111 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(111) <223> VH Domain of CD137 MAB-5 (CD137 MAB-5 VH) <400> 96 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr 20 25 30 Asp Ile Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Val Trp Thr Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Phe Met 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Glu 85 90 95 Arg Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 97 <211> 112 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(112) <223> VL Domain of CD137 MAB-5 (CD137 MAB-5 VL) <400> 97 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 98 <211> 500 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> First and Third Polypeptide Chains of DART-A <400> 98 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asp Glu Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly 225 230 235 240 Glu Val Ala Ala Cys Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val 245 250 255 Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Leu Glu Pro Lys 260 265 270 Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala 275 280 285 Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 290 295 300 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 305 310 315 320 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 325 330 335 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 340 345 350 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 355 360 365 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 370 375 380 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 385 390 395 400 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 405 410 415 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 420 425 430 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 435 440 445 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 450 455 460 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 465 470 475 480 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 485 490 495 Leu Ser Pro Gly 500 <210> 99 <211> 268 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Second and Fourth Polypeptide Chains of DART-A <400> 99 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr 165 170 175 Glu Glu Phe Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly 225 230 235 240 Lys Val Ala Ala Cys Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val 245 250 255 Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 260 265 <210> 100 <211> 500 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> First and Third Polypeptide Chain of DART-B <400> 100 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asp Glu Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly 225 230 235 240 Glu Val Ala Ala Cys Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val 245 250 255 Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Leu Glu Pro Lys 260 265 270 Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala 275 280 285 Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 290 295 300 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 305 310 315 320 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 325 330 335 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 340 345 350 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 355 360 365 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 370 375 380 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 385 390 395 400 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 405 410 415 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 420 425 430 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 435 440 445 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 450 455 460 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 465 470 475 480 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 485 490 495 Leu Ser Pro Gly 500 <210> 101 <211> 268 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Second and Fourth Polypeptide Chain of DART-B <400> 101 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr 165 170 175 Glu Glu Phe Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly 225 230 235 240 Lys Val Ala Ala Cys Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val 245 250 255 Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 260 265 <210> 102 <211> 500 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> First and Third Polypeptide Chains of DART-C <400> 102 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr 165 170 175 Glu Glu Phe Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly 225 230 235 240 Glu Val Ala Ala Cys Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val 245 250 255 Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Leu Glu Pro Lys 260 265 270 Ser Ala Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala 275 280 285 Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 290 295 300 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 305 310 315 320 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 325 330 335 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 340 345 350 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 355 360 365 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 370 375 380 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 385 390 395 400 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 405 410 415 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 420 425 430 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 435 440 445 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 450 455 460 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 465 470 475 480 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 485 490 495 Leu Ser Pro Gly 500 <210> 103 <211> 268 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Second and Fourth Polypeptide Chains of DART-C <400> 103 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asp Glu Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly 225 230 235 240 Lys Val Ala Ala Cys Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val 245 250 255 Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 260 265 <210> 104 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> First Polypeptide Chain of DART-D <400> 104 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Glu Glu Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser 355 360 365 Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 105 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Second and Fifth Polypeptide Chains of DART-D <400> 105 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asp Glu Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 106 <211> 727 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Third Polypeptide Chain of DART-D <400> 106 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Glu Glu Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Gln Met Thr 450 455 460 Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile 465 470 475 480 Ser Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln 485 490 495 Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg 500 505 510 Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 515 520 525 Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr 530 535 540 Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly 545 550 555 560 Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val 565 570 575 Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala Ser Val 580 585 590 Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Ile 595 600 605 Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Asn 610 615 620 Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp 625 630 635 640 Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln 645 650 655 Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg 660 665 670 Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 675 680 685 Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu 690 695 700 Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys 705 710 715 720 Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys 725 <210> 107 <211> 268 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fourth Polypeptide Chain of DART-D <400> 107 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly 225 230 235 240 Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val 245 250 255 Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 260 265 <210> 108 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> First Polypeptide Chain of DART-E <400> 108 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser 355 360 365 Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 109 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Second and Fifth Polypeptide Chain of DART-E <400> 109 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 110 <211> 727 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Third Polypeptide Chain of DART-E <400> 110 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Gln Met Thr 450 455 460 Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile 465 470 475 480 Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Ser Trp Phe Gln 485 490 495 Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Arg Ala Asn Arg 500 505 510 Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 515 520 525 Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr 530 535 540 Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asp Glu Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly 545 550 555 560 Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val 565 570 575 Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val 580 585 590 Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met 595 600 605 Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp 610 615 620 Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Glu Glu Phe Lys Gly 625 630 635 640 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu 645 650 655 Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 660 665 670 Asp Asp Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 675 680 685 Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu 690 695 700 Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys 705 710 715 720 Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys 725 <210> 111 <211> 268 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fourth Polypeptide Chain of DART-E <400> 111 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asp Glu Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr 165 170 175 Glu Glu Phe Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly 225 230 235 240 Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val 245 250 255 Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 260 265 <210> 112 <211> 731 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Third Polypeptide Chain of DART-F <400> 112 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Glu Glu Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Gln Met Thr 450 455 460 Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile 465 470 475 480 Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln 485 490 495 Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg 500 505 510 Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 515 520 525 Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr 530 535 540 Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly 545 550 555 560 Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val 565 570 575 Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala Ser Val 580 585 590 Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Ile 595 600 605 Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Asn 610 615 620 Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asp Gln Lys Phe Lys Asp 625 630 635 640 Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln 645 650 655 Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Lys 660 665 670 Ser Gly Glu Tyr Gly Lys Ile Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 675 680 685 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu 690 695 700 Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala 705 710 715 720 Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys 725 730 <210> 113 <211> 272 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fourth Polypeptide Chain of DART-F <400> 113 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asp 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Lys Ser Gly Glu Tyr Gly Lys Ile Gly Tyr Tyr Ala 210 215 220 Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly 225 230 235 240 Cys Gly Gly Gly Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu 245 250 255 Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 260 265 270 <210> 114 <211> 727 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Third Polypeptide Chain of DART-G <400> 114 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Glu Glu Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Gln Met Thr 450 455 460 Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile 465 470 475 480 Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln 485 490 495 Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg 500 505 510 Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 515 520 525 Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr 530 535 540 Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly 545 550 555 560 Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val 565 570 575 Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val 580 585 590 Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Ile 595 600 605 Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Asn 610 615 620 Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp 625 630 635 640 Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 645 650 655 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg 660 665 670 Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 675 680 685 Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu 690 695 700 Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys 705 710 715 720 Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys 725 <210> 115 <211> 729 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Third Polypeptide Chain of Optimized DART-G1 <400> 115 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Glu Glu Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Gln Met Thr 450 455 460 Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile 465 470 475 480 Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln 485 490 495 Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg 500 505 510 Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 515 520 525 Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr 530 535 540 Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly 545 550 555 560 Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val 565 570 575 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 580 585 590 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 595 600 605 Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 610 615 620 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 625 630 635 640 Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 645 650 655 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 660 665 670 Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Phe His Pro Trp Gly Gln Gly 675 680 685 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala 690 695 700 Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu 705 710 715 720 Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys 725 <210> 116 <211> 729 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Third Polypeptide Chain of Optimized DART-G2 <400> 116 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Glu Glu Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Gln Met Thr 450 455 460 Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile 465 470 475 480 Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln 485 490 495 Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg 500 505 510 Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 515 520 525 Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr 530 535 540 Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly 545 550 555 560 Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val 565 570 575 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 580 585 590 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 595 600 605 Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 610 615 620 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 625 630 635 640 Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 645 650 655 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 660 665 670 Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Met Ser Thr Trp Gly Gln Gly 675 680 685 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala 690 695 700 Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu 705 710 715 720 Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys 725 <210> 117 <211> 729 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Third Polypeptide Chain of Optimized DART-G3 <400> 117 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Glu Glu Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Gln Met Thr 450 455 460 Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile 465 470 475 480 Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln 485 490 495 Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg 500 505 510 Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 515 520 525 Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr 530 535 540 Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly 545 550 555 560 Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val 565 570 575 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 580 585 590 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 595 600 605 Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 610 615 620 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 625 630 635 640 Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 645 650 655 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 660 665 670 Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Tyr Ser Leu Trp Gly Gln Gly 675 680 685 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala 690 695 700 Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu 705 710 715 720 Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys 725 <210> 118 <211> 729 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Third Polypeptide Chain of Optimized DART-G4 <400> 118 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Glu Glu Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Asp Ile Gln Met Thr 450 455 460 Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile 465 470 475 480 Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln 485 490 495 Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg 500 505 510 Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr 515 520 525 Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr 530 535 540 Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly 545 550 555 560 Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val 565 570 575 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 580 585 590 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 595 600 605 Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 610 615 620 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 625 630 635 640 Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 645 650 655 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 660 665 670 Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Tyr Asn Val Trp Gly Gln Gly 675 680 685 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala 690 695 700 Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu 705 710 715 720 Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys 725 <210> 119 <211> 268 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fourth Polypeptide Chain of DART-G <400> 119 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly 225 230 235 240 Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val 245 250 255 Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 260 265 <210> 120 <211> 268 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fourth Polypeptide Chain of Optimized DART-G1 <400> 120 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Phe His Pro Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly 225 230 235 240 Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val 245 250 255 Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 260 265 <210> 121 <211> 268 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fourth Polypeptide Chain of Optimized DART-G2 <400> 121 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Met Ser Thr Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly 225 230 235 240 Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val 245 250 255 Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 260 265 <210> 122 <211> 268 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fourth Polypeptide Chain of Optimized DART-G3 <400> 122 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Tyr Ser Leu Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly 225 230 235 240 Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val 245 250 255 Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 260 265 <210> 123 <211> 268 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fourth Polypeptide Chain of Optimized DART-G4 <400> 123 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Tyr Asn Val Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Gly Gly Gly 225 230 235 240 Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val 245 250 255 Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 260 265 <210> 124 <211> 118 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(118) <223> VH Domain of Anti-Fluorescein Antibody 4-4-20 <400> 124 Glu Val Lys Leu Asp Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Pro Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Gln Ile Arg Asn Lys Pro Tyr Asn Tyr Glu Thr Tyr Tyr Ser Asp 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ser 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Val Glu Asp Met Gly Ile Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Gly Ser Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 125 <211> 112 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(112) <223> VL Domain of Anti-Fluorescein Antibody 4-4-20 <400> 125 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Phe Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Arg Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Val Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 126 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain of Palivizumab <400> 126 Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Asp Ile Trp Trp Asp Asp Lys Lys Asp Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ser Met Ile Thr Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 127 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain of Palivizumab <400> 127 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 128 <211> 118 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(118) <223> VH Domain of EphA2 MAB-1 <400> 128 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Arg Tyr 20 25 30 Ser Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Met Ile Trp Gly Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Lys His Gly Asn Tyr Tyr Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Ser Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 129 <211> 106 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(106) <223> VL Domain of EphA2 MAB-1 <400> 129 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Ile Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Tyr Thr Leu Tyr Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 130 <211> 118 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(118) <223> VH Domain of EphA2 MAB-2 <400> 130 Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Met Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Leu Gly Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 131 <211> 111 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(111) <223> VL Domain of EphA2 MAB-2 <400> 131 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser 20 25 30 Ser Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 132 <211> 118 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(118) <223> VH Domain of EphA2 MAB-3 <400> 132 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp His 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Ser Phe Thr Ser Tyr Pro Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ala Lys Asn Asn Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Glu Ser Asp Arg Pro Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 133 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(107) <223> VL Domain of EphA2 MAB-3 <400> 133 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser His Arg Ser Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Asn Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Phe Trp Ala Ser Thr Arg His Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Gly Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 134 <211> 118 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(118) <223> VH Domain of 5T4 MAB-1 <400> 134 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Phe 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Asn Arg Gly Gly Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Ala 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Gly Gly Asn Pro Tyr Tyr Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 135 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(107) <223> VL Domain of 5T4 MAB-1 <400> 135 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asp Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 136 <211> 127 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(127) <223> VH Domain of 5T4 MAB-2 <400> 136 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Arg Ala Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Asn Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Gly Pro Leu Phe Thr Thr Val Val Asp Pro Asn Ser Tyr 100 105 110 Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 137 <211> 112 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(112) <223> VL Domain of 5T4 MAB-2 <400> 137 Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 138 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain of Fc-Optimized Anti-Human B7-H3 Antibody Enoblituzumab <400> 138 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Ser Asp Ser Ser Ala Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Gly Arg Gly Arg Glu Asn Ile Tyr Tyr Gly Ser Arg Leu Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 139 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain of Fc-Optimized Anti-Human B7-H3 Antibody Enoblituzumab <400> 139 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ala Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Tyr Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 140 <211> 120 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(120) <223> VH Domain of Anti-Human B7-H3 Antibody BRCA69D <400> 140 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Thr Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Gly Ile Pro Arg Leu Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 141 <211> 107 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(107) <223> VL Domain of Anti-Human B7-H3 Antibody BRCA69D <400> 141 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Asp Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 142 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain of Humanized Anti-Human B7-H3 Antibody BRCA69D (hBRCA69D VH1) <400> 142 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Arg Tyr Thr Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Gly Ile Pro Arg Leu Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 143 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain of Humanized Anti-Human B7-H3 Antibody BRCA69D (hBRCA69D VH2) <400> 143 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Asp Thr Arg Tyr Thr Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Gly Ile Pro Arg Leu Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 144 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain of Humanized Anti-Human B7-H3 Antibody BRCA69D (hBRCA69D VL1) <400> 144 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 145 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain of Humanized Anti-Human B7-H3 Antibody BRCA69D (hBRCA69D VL2) <400> 145 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 146 <211> 117 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(117) <223> VH Domain of Anti-Human B7-H3 Antibody PRCA157 <400> 146 Glu Val Gln Gln Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Leu 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Arg Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Asp Gly Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 147 <211> 108 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(108) <223> VL Domain of Anti-Human B7-H3 Antibody PRCA157 <400> 147 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 35 40 45 Tyr Asn Thr Lys Thr Leu Pro Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Arg Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 148 <211> 119 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(119) <223> VH Domain of Anti-gpA33 Antibody gpA33 MAB-1 <400> 148 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Ser 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Glu Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ile Tyr Gly Asn Asn Val Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 149 <211> 106 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(106) <223> VL Domain of Anti-gpA33 Antibody gpA33 MAB-1 <400> 149 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Ile Ser Phe Met 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 150 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain of Humanized Anti-CEACAM5/CEACAM6 Antibody 16C3 <400> 150 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Arg Pro Gly Val 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Lys Gln Ser His Ala Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile Ser Thr Tyr Ser Gly Asp Thr Lys Tyr Asn Gln Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Val Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Asp Tyr Ser Gly Ser Arg Tyr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 151 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain of Humanized Anti-CEACAM5/CEACAM6 Antibody 16C3 <400> 151 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gly Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Trp Gly Ala Ser Asn Leu Ala Asp Gly Met Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Arg Gln Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Ser Ser Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 152 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain of Humanized Anti-CEACAM5/CEACAM6 Antibody hMN15 <400> 152 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ser Ser Gly Phe Ala Leu Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Phe Ile Ala Asn Lys Ala Asn Gly His Thr Thr Asp Tyr Ser Pro 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Phe Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr 85 90 95 Phe Cys Ala Arg Asp Met Gly Ile Arg Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 153 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain of Humanized Anti-CEACAM5/CEACAM6 Antibody hMN15 <400> 153 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Arg Val Ser Tyr Ile 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr 35 40 45 Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu 65 70 75 80 Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Tyr Asn Pro Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 154 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(5) <223> CDRH1 of Murine Anti-CD137 Monoclonal Antibody (CD137 MAB-3 VH) <400> 154 Ser Tyr Trp Ile Asn 1 5 <210> 155 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(17) <223> CDRH2 of Murine Anti-CD137 Monoclonal Antibody (CD137 MAB-3 VH) <400> 155 Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asp <210> 156 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(10) <223> CDRH3 of Murine Anti-CD137 Monoclonal Antibody (CD137 MAB-3 VH) <400> 156 Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 157 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(11) <223> CDRL1 of Murine Anti-CD137 Monoclonal Antibody (CD137 MAB-3 VL) <400> 157 Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 158 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(7) <223> CDRL2 of Murine Anti-CD137 Monoclonal Antibody (CD137 MAB-3 VL) <400> 158 Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser 1 5 <210> 159 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(9) <223> CDRL3 of Murine Anti-CD137 Monoclonal Antibody (CD137 MAB-3 VL) <400> 159 Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 160 <211> 6 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> 1MISC_FEATURE <222> (1)..(6) <223> Residues 103-108 of SEQ ID NO:74 <400> 160 Ser Tyr Ser Phe Asp Tyr 1 5 <210> 161 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH3 of hCD137 MAB-3 VH1A <400> 161 Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Phe His Pro 1 5 10 <210> 162 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH3 of hCD137 MAB-3 VH1B <400> 162 Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Met Ser Thr 1 5 10 <210> 163 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH3 of hCD137 MAB-3 VH1C <400> 163 Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Tyr Ser Leu 1 5 10 <210> 164 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH3 of hCD137 MAB-3 VH1D <400> 164 Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Tyr Asn Val 1 5 10 <210> 165 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(5) <223> CDRH1 of CD137 MAB-4 VH <400> 165 Ser Tyr Trp Ile Asn 1 5 <210> 166 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(17) <223> CDRH2 of CD137 MAB-4 VH <400> 166 Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asp Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asp <210> 167 <211> 14 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(14) <223> CDRH3 of CD137 MAB-4 VH <400> 167 Ser Gly Glu Tyr Gly Lys Ile Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 168 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(11) <223> CDRL1 of CD137 MAB-4 VL <400> 168 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 169 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(7) <223> CDRL2 of CD137 MAB-4 VL <400> 169 Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser 1 5 <210> 170 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(9) <223> CDRL3 of CD137 MAB-4 VL <400> 170 Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 171 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(5) <223> CDRH1 of CD137 MAB-5 VH <400> 171 Ser Tyr Asp Ile Ser 1 5 <210> 172 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(16) <223> CDRH2 of CD137 MAB-5 VH <400> 172 Val Val Trp Thr Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Phe Met Ser 1 5 10 15 <210> 173 <400> 173 000 <210> 174 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(16) <223> CDRL1 of CD137 MAB-5 VL <400> 174 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 175 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(7) <223> CDRL2 of CD137 MAB-5 VL <400> 175 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 176 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(9) <223> CDRL3 of CD137 MAB-5 VL <400> 176 Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 177 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(5) <223> CDRH1 of Murine Anti-HER2/neu Monoclonal Antibody HER2 MAB-1 VH <400> 177 Asn Tyr Gly Met Asn 1 5 <210> 178 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(17) <223> CDRH2 of Murine Anti-HER2/neu Monoclonal Antibody HER2 MAB-1 VH <400> 178 Trp Ile Asn Thr Asn Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Thr Glu Glu Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 179 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(10) <223> CDRH3 of Murine Anti-HER2/neu Monoclonal Antibody HER2 MAB-1 VH <400> 179 Asp Asp Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr 1 5 10 <210> 180 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(11) <223> CDRL1 of Murine Anti-HER2/neu Monoclonal Antibody HER2 MAB-1 VL <400> 180 Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser 1 5 10 <210> 181 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(7) <223> CDRL2 of Murine Anti-HER2/neu Monoclonal Antibody HER2 MAB-1 VL <400> 181 Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp 1 5 <210> 182 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(9) <223> CDRL3 of Murine Anti-HER2/neu Monoclonal Antibody HER2 MAB-1 VL <400> 182 Leu Gln His Asp Glu Phe Pro Trp Thr 1 5 <210> 183 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH3 of VH Domain of Humanized Anti-Human HER2/neu Antibody (hHER2 MAB-1 VH1) <400> 183 Asp Asp Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr 1 5 10 <210> 184 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH3 of VH Domain of Humanized Anti-Human HER2/neu Antibody (hHER2 MAB-1 VH2) <400> 184 Asp Glu Gly Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr 1 5 10 <210> 185 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRH3 of VH Domain of Humanized Anti-Human HER2/neu Antibody (hHER2 MAB-1 VH3) <400> 185 Asp Asp Ile Tyr Gly Asn Arg Val Ser Tyr 1 5 10 <210> 186 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL1 of VL Domain of Humanized Anti-Human HER2/neu Antibody (hHER2 MAB-1 VL1) <400> 186 Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser 1 5 10 <210> 187 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL1 of VL Domain of Humanized Anti-Human HER2/neu Antibody (hHER2 MAB-1 VL2) <400> 187 Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Thr Tyr Leu Ser 1 5 10 <210> 188 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL1 of VL Domain of Humanized Anti-Human HER2/neu Antibody (hHER2 MAB-1 VL3) <400> 188 Lys Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Ser 1 5 10 <210> 189 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL2 of VL Domain of Humanized Anti-Human HER2/neu Antibody (hHER2 MAB-1 VL1) <400> 189 Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp 1 5 <210> 190 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL2 of VL Domain of Humanized Anti-Human HER2/neu Antibody (hHER2 MAB-1 VL2) <400> 190 Arg Ala Asn Arg Leu Val Glu 1 5 <210> 191 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL2 of VL Domain of Humanized Anti-Human HER2/neu Antibody (hHER2 MAB-1 VL3) <400> 191 Arg Ala Asn Arg Leu Gln Ser 1 5 <210> 192 <211> 497 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> First Polypeptide Chain of TRIDENT-A <400> 192 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Glu 225 230 235 240 Val Ala Ala Cys Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala 245 250 255 Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Gly Gly Gly Asp Lys 260 265 270 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 275 280 285 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 290 295 300 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 305 310 315 320 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 325 330 335 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 340 345 350 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 355 360 365 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 370 375 380 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 385 390 395 400 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp 405 410 415 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 420 425 430 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 435 440 445 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 450 455 460 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 465 470 475 480 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 485 490 495 Lys <210> 193 <211> 497 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> First Polypeptide Chain of TRIDENT-A1 <400> 193 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Phe His Pro Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Glu 225 230 235 240 Val Ala Ala Cys Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala 245 250 255 Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Gly Gly Gly Asp Lys 260 265 270 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 275 280 285 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 290 295 300 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 305 310 315 320 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 325 330 335 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 340 345 350 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 355 360 365 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 370 375 380 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 385 390 395 400 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp 405 410 415 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 420 425 430 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 435 440 445 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 450 455 460 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 465 470 475 480 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 485 490 495 Lys <210> 194 <211> 497 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> First Polypeptide Chain of TRIDENT-A2 <400> 194 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Met Ser Thr Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Glu 225 230 235 240 Val Ala Ala Cys Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala 245 250 255 Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Gly Gly Gly Asp Lys 260 265 270 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 275 280 285 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 290 295 300 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 305 310 315 320 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 325 330 335 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 340 345 350 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 355 360 365 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 370 375 380 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 385 390 395 400 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp 405 410 415 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 420 425 430 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 435 440 445 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 450 455 460 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 465 470 475 480 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 485 490 495 Lys <210> 195 <211> 497 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> First Polypeptide Chain of TRIDENT-A3 <400> 195 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Tyr Ser Leu Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Glu 225 230 235 240 Val Ala Ala Cys Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala 245 250 255 Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Gly Gly Gly Asp Lys 260 265 270 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 275 280 285 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 290 295 300 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 305 310 315 320 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 325 330 335 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 340 345 350 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 355 360 365 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 370 375 380 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 385 390 395 400 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp 405 410 415 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 420 425 430 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 435 440 445 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 450 455 460 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 465 470 475 480 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 485 490 495 Lys <210> 196 <211> 497 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> First Polypeptide Chain of TRIDENT-A4 <400> 196 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Tyr Asn Val Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Glu 225 230 235 240 Val Ala Ala Cys Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala 245 250 255 Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Gly Gly Gly Asp Lys 260 265 270 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 275 280 285 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 290 295 300 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 305 310 315 320 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 325 330 335 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 340 345 350 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 355 360 365 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 370 375 380 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 385 390 395 400 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp 405 410 415 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 420 425 430 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 435 440 445 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 450 455 460 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 465 470 475 480 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 485 490 495 Lys <210> 197 <211> 267 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Second Polypeptide Chain of TRIDENT-A <400> 197 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Lys 225 230 235 240 Val Ala Ala Cys Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala 245 250 255 Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 260 265 <210> 198 <211> 267 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Second Polypeptide Chain of TRIDENT-A1 <400> 198 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Phe His Pro Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Lys 225 230 235 240 Val Ala Ala Cys Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala 245 250 255 Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 260 265 <210> 199 <211> 267 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Second Polypeptide Chain of TRIDENT-A2 <400> 199 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Met Ser Thr Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Lys 225 230 235 240 Val Ala Ala Cys Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala 245 250 255 Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 260 265 <210> 200 <211> 267 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Second Polypeptide Chain of TRIDENT-A3 <400> 200 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Tyr Ser Leu Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Lys 225 230 235 240 Val Ala Ala Cys Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala 245 250 255 Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 260 265 <210> 201 <211> 267 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Second Polypeptide Chain of TRIDENT-A4 <400> 201 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ser Tyr Ser Tyr Asn Val Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Lys 225 230 235 240 Val Ala Ala Cys Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala 245 250 255 Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 260 265 <210> 202 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain of hPRCA157 VH1 <400> 202 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Thr Ile Asn Ser Gly Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Leu 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Asp Gly Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 203 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain of hPRCA157 VL1 <400> 203 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val 35 40 45 Tyr Asn Thr Lys Thr Leu Pro Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 204 <211> 120 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(120) <223> VH Domain of CD19 MAB-1 <400> 204 Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ala 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Phe Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Met Glu Leu Trp Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 205 <211> 106 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(106) <223> VL Domain of CD19 MAB-1 <400> 205 Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Asp Ala Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp His Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser Val Tyr Pro Phe Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 206 <211> 120 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(120) <223> VH Domain of CD123 MAB-1 <400> 206 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Lys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Ile Pro Ser Asn Gly Ala Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser His Leu Leu Arg Ala Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 207 <211> 113 <212> PRT <213> Mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(113) <223> VL Domain of CD123 MAB-1 <400> 207 Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 208 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain oif of hCD137 MAB-3 VH1E <400> 208 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Met Ser Thr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 209 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain oif of hCD137 MAB-3 VH1F <400> 209 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ala 35 40 45 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Met Ser Thr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 210 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH Domain oif of hCD137 MAB-3 VH1G <400> 210 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ala 35 40 45 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Met Ser Thr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 211 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain oif of hCD137 MAB-3 VL4 <400> 211 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 212 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain oif of hCD137 MAB-3 VL5 <400> 212 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Ala Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 213 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain oif of hCD137 MAB-3 VL6 <400> 213 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Ala Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 214 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain oif of hCD137 MAB-3 VL7 <400> 214 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Ala Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 215 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain oif of hCD137 MAB-3 VL8 <400> 215 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Ala Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Ala Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 216 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain oif of hCD137 MAB-3 VL9 <400> 216 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Arg Ala Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 217 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain oif of hCD137 MAB-3 VL10 <400> 217 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Thr Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 218 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain oif of hCD137 MAB-3 VL11 <400> 218 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Gly Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 219 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain oif of hCD137 MAB-3 VL12 <400> 219 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ala 35 40 45 Tyr Tyr Thr Thr Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 220 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain oif of hCD137 MAB-3 VL13 <400> 220 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Pro Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ala 35 40 45 Tyr Tyr Thr Gly Arg Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 221 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain oif of hCD137 MAB-3 VL14 <400> 221 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Thr Arg Ala Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 222 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL Domain oif of hCD137 MAB-3 VL15 <400> 222 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Gly Arg Ala Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 223 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL1 of hCD137 MAB-3 VL4, hCD137 MAB-3 VL7, hCD137 MAB-3 VL8, hCD137 MAB-3 VL9, hCD137 MAB-3 VL14 and hCD137 MAB-3 VL15 <400> 223 Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 224 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL2 of hCD137 MAB-3 VL6, hCD137 MAB-3 VL8 and hCD137 MAB-3 VL9 <400> 224 Tyr Thr Ser Arg Ala Arg Ser 1 5 <210> 225 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL2 of hCD137 MAB-3 VL10 and hCD137 MAB-3 VL12 <400> 225 Tyr Thr Thr Arg Leu Arg Ser 1 5 <210> 226 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL2 of hCD137 MAB-3 VL11 and hCD137 MAB-3 VL13 <400> 226 Tyr Thr Gly Arg Leu Arg Ser 1 5 <210> 227 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL2 of hCD137 MAB-3 VL14 <400> 227 Tyr Thr Thr Arg Ala Arg Ser 1 5 <210> 228 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDRL2 of hCD137 MAB-3 VL15 <400> 228 Tyr Thr Gly Arg Ala Arg Ser 1 5 <210> 229 <211> 497 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> First Polypeptide Chain of TRIDENT-A5 <400> 229 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Gly Arg Ala Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Met Ser Thr Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Glu 225 230 235 240 Val Ala Ala Cys Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala 245 250 255 Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Gly Gly Gly Asp Lys 260 265 270 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 275 280 285 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 290 295 300 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 305 310 315 320 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 325 330 335 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 340 345 350 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 355 360 365 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 370 375 380 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 385 390 395 400 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp 405 410 415 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 420 425 430 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 435 440 445 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 450 455 460 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 465 470 475 480 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 485 490 495 Lys <210> 230 <211> 267 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Second Polypeptide Chain of TRIDENT-A5 <400> 230 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Lys Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Gly Arg Ala Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 115 120 125 Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 130 135 140 Thr Ser Tyr Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu 145 150 155 160 Glu Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn 165 170 175 Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser 180 185 190 Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 195 200 205 Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Tyr Gly Ser Ala Tyr Ser Met Ser Thr Trp 210 215 220 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Lys 225 230 235 240 Val Ala Ala Cys Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala 245 250 255 Ala Leu Lys Glu Lys Val Ala Ala Leu Lys Glu 260 265 <210> 231 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Third Polypeptide Chain of TRIDENT-B <400> 231 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Phe 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Asp Pro Asn Arg Gly Gly Thr Glu Tyr Asn Glu Lys Ala 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Gly Gly Asn Pro Tyr Tyr Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys 355 360 365 Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn Arg Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 232 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fourth Polypeptide Chain of TRIDENT-B <400> 232 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asp Phe Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210

Claims (41)

  1. CD137 x TA 결합 분자로서, 상기 결합 분자는 CD137의 에피토프 및 종양 항원 (TA)의 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있고, 상기 CD137 x TA 결합 분자는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 제1 경쇄 가변 도메인, 및 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 제1 중쇄 가변 도메인을 포함하며;
    여기서.
    (1) 상기 제1 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
    (2) 상기 제1 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 hCD137 MAB-3 VH1A (SEQ ID NO:83); hCD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84); hCD137 MAB-3 VH1C (SEQ ID NO:85); 또는 hCD137 MAB-3 VH1D (SEQ ID NO:86)의 중쇄 CDR인,
    CD137 x TA 결합 분자.
  2. 제1항에 있어서, 상기 제1 중쇄 가변 도메인은:
    (A) hCD137 MAB-3 VH1A (SEQ ID NO:83);
    (B) hCD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84);
    (C) hCD137 MAB-3 VH1C (SEQ ID NO:85); 또는
    (D) hCD137 MAB-3 VH1D (SEQ ID NO:86)
    의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 CD137 x TA 결합 분자.
  3. 제1항에 있어서, 상기 제1 중쇄 가변 도메인은 hCD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 CD137 x TA 결합 분자.
  4. 제1항에 있어서, 상기 제1 경쇄 가변 도메인은 hCD137 MAB-3 VL3 (SEQ ID NO:89)의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 CD137 x TA 결합 분자.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 종양 항원 (TA)은 19.9; 종양태아성 단백질 5T4; 항원 4.2; A33; AFP; ALCAM; BAGE; 베타-카테닌; CA125; 카르복시펩티다제 M; B1;CD5; CD19; CD20; CD22; CD23; CD25; CD27; CD30; CD33; CD36; CD46; CD52; CD79a/CD79b; CD123; CD317; CEA; CEACAM5; CEACAM6; CO-43; CO-514; CTLA-1; CTLA-4; 사이토케라틴 8; E1 시리즈; EGF-R; 에프린 수용체; Erb; F3; FC10.2; GAGE GD2; GD3; GD49; GM2; GM3; GICA 19-9; gp37; gp75; gp100; HER-2/neu; 인간 B-림프종 항원-CD20; 인간 유지방 구상체 항원; 인간 유두종바이러스-E6/인간 유두종바이러스-E7; HMW-MAA; I 항원; ITGB6; IL13Rα2; JAM-3; KID3; KID31; KS 1/4 pan-암종 항원; KS 1/4; KSA; L6; L20; LEA; LUCA-2; M1:22:25:8; M18; M39; MAGE; MART; Myl; MUC-1; MUM-1; N-아세틸글루코사미닐트랜스페라제; 네오당단백질; NS-10; OFA-1; OFA-2; 온코스타틴 M; p15; PSA; PSMA; PEMA; PIPA; 전립선 산 포스페이트; R24; ROR1; SSEA-1; SSEA-3; SSEA-4; sTn; T 세포 수용체 유래 펩타이드; TAG-72; TL5; TNF-α 수용체; TNF-β 수용체; TNF-γ 수용체; TRA-1-85; 트랜스페린 수용체; TSTA; 및 VEGF-R로 이루어지는 종양 항원의 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 CD137 x TA 결합 분자.
  6. 제5항에 있어서, 상기 종양 항원 (TA)은 HER2/neu이고 상기 CD137 x TA 결합 분자는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 제2 경쇄 가변 도메인, 및 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 제2 중쇄 가변 도메인을 포함하며;
    여기서,
    (A) 상기 제2 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 HER2 MAB-1 VL (SEQ ID NO:63)의 경쇄 CDR이고; 및
    (B) 상기 제2 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 HER2 MAB-1 VH (SEQ ID NO:62)의 중쇄 CDR인
    것을 특징으로 하는 CD137 x TA 결합 분자.
  7. 제6항에 있어서,
    (A) (1) 상기 제2 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 hHER2 MAB-1 VL1 (SEQ ID NO:67)의 경쇄 CDR이거나;
    (2) 상기 제2 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 hHER2 MAB-1 VL2 (SEQ ID NO:68)의 경쇄 CDR이거나; 또는
    (3) 상기 제2 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 hHER2 MAB-1 VL3 (SEQ ID NO:69)의 경쇄 CDR이고;
    및
    (B) (1) 상기 제2 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 hHER2 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:64)의 중쇄 CDR이거나;
    (2) 상기 제2 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 hHER2 MAB-1 VH2 (SEQ ID NO:65)의 중쇄 CDR이거나; 또는
    (3) 상기 제2 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 hHER2 MAB-1 VH3 (SEQ ID NO:66)의 중쇄 CDR인
    것을 특징으로 하는 CD137 x TA 결합 분자.
  8. 제7항에 있어서, 상기 제2 중쇄 가변 도메인은:
    (A) hHER2 MAB-1 VH1 (SEQ ID NO:64);
    (B) hHER2 MAB-1 VH2 (SEQ ID NO:65); 또는
    (C) hHER2 MAB-1 VH3 (SEQ ID NO:66)
    의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 CD137 x TA 결합 분자.
  9. 제7항에 있어서, 상기 제2 경쇄 가변 도메인은:
    (A) hHER2 MAB-1 VL1 (SEQ ID NO:67);
    (B) hHER2 MAB-1 VL2 (SEQ ID NO:68); 또는
    (C) hHER2 MAB-1 VL3 (SEQ ID NO:69)
    의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 CD137 x TA 결합 분자.
  10. 제5항에 있어서, 종양 항원 (TA)은 5T4이고 CD137 x TA 결합 분자는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 제2 경쇄 가변 도메인, 및 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 제2 중쇄 가변 도메인을 포함하며;
    여기서,
    (I) (A) 제2 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 5T4 MAB-1 VL (SEQ ID NO:135)의 경쇄 CDR이고; 및
    (B) 제2 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 5T4 MAB-1 VH (SEQ ID NO:134)의 중쇄 CDR이거나; 또는
    (II) (A) 제2 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 5T4 MAB-2 VL (SEQ ID NO:137)의 경쇄 CDR이고; 및
    (B) 제2 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 5T4 MAB-2 VH (SEQ ID NO:136)의 중쇄 CDR인
    것을 특징으로 하는 CD137 x TA 결합 분자.
  11. 제10항에 있어서, 제2 중쇄 가변 도메인은 5T4 MAB-1 VH (SEQ ID NO:134)의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 CD137 x TA 결합 분자.
  12. 제10항에 있어서, 제2 경쇄 가변 도메인은 5T4 MAB-1 VL (SEQ ID NO:135)의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 CD137 x TA 결합 분자.
  13. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분자는 제1, 제2, 제3, 및 제4 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 이중특이적 사가 Fc-포함 디아바디이고, 상기 폴리펩타이드 사슬은 공유 결합된 복합체를 형성하는 것을 특징으로 하는 CD137 x TA 결합 분자.
  14. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분자는 이중특이적이고 사가이며, 제1, 제2, 제3, 제4, 및 제5 폴리펩타이드 사슬을 포함하고, 상기 폴리펩타이드 사슬은 공유 결합된 복합체를 형성하는 것을 특징으로 하는 CD137 x TA 결합 분자.
  15. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분자는 이중특이적이고 삼가이고, 제1, 제2, 제3, 및 제4, 폴리펩타이드 사슬을 포함하며, 상기 폴리펩타이드 사슬은 공유 결합된 복합체를 형성하는 것을 특징으로 하는 CD137 x TA 결합 분자.
  16. 제15항에 있어서, 상기 종양 항원 (TA)은 HER2/neu이고 및:
    (A) 상기 제1 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:192, SEQ ID NO:193, SEQ ID NO:194, SEQ ID NO:195, SEQ ID NO:196, 또는 SEQ ID NO:229의 아미노산 서열을 가지며;
    (B) 상기 제2 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:197, SEQ ID NO:198, SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:200, SEQ ID NO:163, 또는 SEQ ID NO:230의 아미노산 서열을 가지고;
    (C) 상기 제3 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:104의 아미노산 서열을 가지며; 및
    (D) 상기 제4 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:105의 아미노산 서열을 가지는
    것을 특징으로 하는 CD137 x TA 결합 분자.
  17. 제15항에 있어서, 상기 종양 항원 (TA)은 5T4이고,
    여기서,
    (A) 상기 제1 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:192, SEQ ID NO:193, SEQ ID NO:194, SEQ ID NO:195, SEQ ID NO:196, 또는 SEQ ID NO:229의 아미노산 서열을 가지며;
    (B) 상기 제2 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:197, SEQ ID NO:198, SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:200, SEQ ID NO:201, 또는 SEQ ID NO:230의 아미노산 서열을 가지고;
    (C) 상기 제3 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:231의 아미노산 서열을 가지며; 및
    (D) 상기 제4 폴리펩타이드 사슬은 SEQ ID NO:232의 아미노산 서열을 가지는
    것을 특징으로 하는 CD137 x TA 결합 분자.
  18. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 CD137 x TA 결합 분자, 및 생리적으로 허용되는 담체를 포함하는 암 치료용 제약학적 조성물.
  19. 제18항에 있어서, 상기 암은 억제된 면역 체계와 관련되거나 상기 종양 항원 (TA)의 발현과 관련된 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  20. CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 도메인, 및 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 CD137 결합 분자로서,
    (1) 상기 경쇄 가변 도메인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3은 CD137 MAB-3 VL (SEQ ID NO:75)의 경쇄 CDR이고; 및
    (2) 상기 중쇄 가변 도메인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 hCD137 MAB-3 VH1A (SEQ ID NO:83); hCD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84); hCD137 MAB-3 VH1C (SEQ ID NO:85); 또는 hCD137 MAB-3 VH1D (SEQ ID NO:86)의 중쇄 CDR 인,
    CD137 결합 분자.
  21. 제20항에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은:
    (A) hCD137 MAB-3 VH1A (SEQ ID NO:83);
    (B) hCD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84);
    (C) hCD137 MAB-3 VH1C (SEQ ID NO:85); 또는
    (D) hCD137 MAB-3 VH1D (SEQ ID NO:86)
    의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 CD137 결합 분자.
  22. 제20항에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 hCD137 MAB-3 VH1B (SEQ ID NO:84)의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 CD137 결합 분자.
  23. 제20항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 hCD137 MAB-3 VL3 (SEQ ID NO:89)의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 CD137 결합 분자.
  24. 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분자는 항체 또는 그것의 항원 결합 단편인 것을 특징으로 하는 CD137 결합 분자.
  25. 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항의 CD137 결합 분자, 및 생리적으로 허용되는 담체를 포함하는 암 치료용 제약학적 조성물.
  26. 제25항에 있어서, 상기 암은 억제된 면역 체계 또는 종양 항원 (TA)의 발현과 관련된 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  27. 제25항에 있어서, 상기 암은 방광암, 유방암, 대장암, 위암, 교모세포종, 신장암, 폐암, 흑색종, 신경모세포종, 난소암, 췌장암, 인두암, 전립선암, 신장 세포 암종, 횡문근육종, 및 두경부의 편평 세포암 (SCCHN)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  28. 제25항에 있어서, 조성물을 종양 표적화제와 조합하여 투여하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  29. 제25항에 있어서, 조성물을 PD-1/PD-L1 체크포인트 억제제와 조합하여 투여하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  30. 제28항에 있어서, 상기 종양 표적화제는 항체, 항체의 에피토프 결합 단편, 또는 표적 세포의 T-세포 재지시된 사멸을 매개하는 작용제인 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  31. 제29항에 있어서, 상기 PD-1/PD-L1 체크포인트 억제제는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체인 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  32. 삭제
  33. 삭제
  34. 삭제
  35. 삭제
  36. 삭제
  37. 삭제
  38. 삭제
  39. 삭제
  40. 삭제
  41. 삭제
KR1020197027622A 2017-02-24 2018-02-22 Cd137 및 종양 항원에 결합할 수 있는 이중특이적 결합 분자, 및 그것의 용도 Active KR102585848B1 (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762463353P 2017-02-24 2017-02-24
US62/463,353 2017-02-24
US201762597594P 2017-12-12 2017-12-12
US62/597,594 2017-12-12
PCT/US2018/019188 WO2018156740A1 (en) 2017-02-24 2018-02-22 Bispecific binding molecules that are capable of binding cd137 and tumor antigens, and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20190121802A KR20190121802A (ko) 2019-10-28
KR102585848B1 true KR102585848B1 (ko) 2023-10-11

Family

ID=63252984

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197027622A Active KR102585848B1 (ko) 2017-02-24 2018-02-22 Cd137 및 종양 항원에 결합할 수 있는 이중특이적 결합 분자, 및 그것의 용도

Country Status (16)

Country Link
US (3) US11459394B2 (ko)
EP (2) EP4389226A3 (ko)
JP (1) JP7132232B2 (ko)
KR (1) KR102585848B1 (ko)
CN (1) CN110325209A (ko)
AU (1) AU2018224094B2 (ko)
BR (1) BR112019017628A2 (ko)
CA (1) CA3053803A1 (ko)
IL (1) IL268836B2 (ko)
MA (1) MA47612A (ko)
MX (1) MX2019009967A (ko)
NZ (1) NZ756758A (ko)
SG (1) SG11201907753TA (ko)
TW (1) TWI788327B (ko)
WO (1) WO2018156740A1 (ko)
ZA (1) ZA201905347B (ko)

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG11201609912TA (en) * 2014-05-29 2016-12-29 Macrogenics Inc Tri-specific binding molecules that specifically bind to multiple cancer antigens and methods of use thereof
CR20170109A (es) * 2014-09-26 2017-07-26 Macrogenics Inc Diacuerpos monovalentes biespecificos que son capaces de unir cd19 y cd3, y usos de los mismos
CA3220466A1 (en) 2014-10-29 2016-05-06 Bicyclerd Limited Bicyclic peptide ligands specific for mt1-mmp
NZ747029A (en) 2016-04-15 2025-05-02 Macrogenics Inc Novel b7-h3 binding molecules, antibody drug conjugates thereof and methods of use thereof
RU2018139339A (ru) * 2016-04-22 2020-05-22 Эллигейтор Биосайенс Аб Новые биспецифические полипептиды против cd137
IL268836B2 (en) * 2017-02-24 2024-04-01 Macrogenics Inc Bispecific binding molecules that are capable of binding cd137 and tumor antigens, and uses thereof
AU2018253176B2 (en) 2017-04-13 2023-02-02 Agenus Inc. Anti-CD137 antibodies and methods of use thereof
AU2018304585B2 (en) 2017-07-20 2023-07-06 Alligator Bioscience Ab Antigen binding proteins binding to 5T4 and 4-1BB and related compositions and methods
CN118772242A (zh) 2017-08-04 2024-10-15 拜斯科技术开发有限公司 Cd137特异性的双环肽配体
TWI825046B (zh) 2017-12-19 2023-12-11 英商拜西可泰克斯有限公司 Epha2特用之雙環胜肽配位基
IL279489B1 (en) 2018-06-22 2025-06-01 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4, a drug conjugate containing the peptide ligands and a pharmaceutical composition containing the drug conjugate
GB201810316D0 (en) 2018-06-22 2018-08-08 Bicyclerd Ltd Peptide ligands for binding to EphA2
WO2020051248A1 (en) * 2018-09-05 2020-03-12 Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University Oncolytic virus platform to treat hematological cancer
TWI839395B (zh) * 2018-10-09 2024-04-21 瑞士商Ｎｕｍａｂ治療公司 靶向cd137的抗體及其使用方法
CN112996809A (zh) * 2018-10-10 2021-06-18 酵活有限公司 结合4-1bb和肿瘤相关抗原的抗体构建体以及其用途
PE20211867A1 (es) * 2018-11-01 2021-09-21 Shandong New Time Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpos biespecificos y su uso
GB201820288D0 (en) 2018-12-13 2019-01-30 Bicycle Tx Ltd Bicycle peptide ligaands specific for MT1-MMP
MX2021012961A (es) 2019-04-24 2021-11-25 Heidelberg Pharma Res Gmbh Conjugados de anticuerpo y farmaco de amatoxina y usos de los mismos.
MX2021013669A (es) 2019-05-09 2021-12-10 Bicycletx Ltd Ligandos peptidicos biciclicos especificos para ox40.
TW202108629A (zh) * 2019-06-26 2021-03-01 圓祥生命科技股份有限公司 用於t細胞活化之抗體
MX2022001022A (es) * 2019-07-26 2022-04-18 Yuhan Corp Anticuerpo biespecifico anti-her2/anti-4-1bb y uso del mismo.
TWI860386B (zh) 2019-07-30 2024-11-01 英商拜西可泰克斯有限公司 異質雙環肽複合物
PT4464721T (pt) 2019-10-03 2025-06-24 Bicycletx Ltd Complexos peptídicos bicíclicos heterotandem
WO2021068841A1 (en) * 2019-10-11 2021-04-15 Nanjing Leads Biolabs Co., Ltd. Antibodies binding 4-1bb and uses thereof
CN110894238B (zh) * 2019-11-25 2021-01-19 华道(上海)生物医药有限公司 Car-t细胞的检测用单克隆抗体、试剂盒及应用
US20230113823A1 (en) * 2020-01-31 2023-04-13 Dyne Therapeutics, Inc. Anti-transferrin receptor (tfr) antibody and uses thereof
US12060434B2 (en) * 2020-02-25 2024-08-13 Gensun Biopharma Inc. Trispecific T cell engagers
US20230094162A1 (en) * 2020-02-21 2023-03-30 Macrogenics, Inc. Cd137 binding molecules and uses thereof
JP2023516941A (ja) * 2020-02-28 2023-04-21 上海復宏漢霖生物技術股▲フン▼有限公司 抗ｃｄ１３７コンストラクト、多重特異性抗体及びその使用
WO2021207827A1 (en) * 2020-04-15 2021-10-21 Zymeworks Inc. Antibody constructs binding 4-1bb and folate receptor alpha and uses thereof
EP4155319A4 (en) * 2020-06-30 2024-06-12 Nona Biosciences (Suzhou) Co., Ltd. 4-1BB BINDING PROTEIN AND ITS USE
CN112119977B (zh) * 2020-10-15 2021-10-19 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 Cd317诱导的抑郁和记忆损伤的小鼠模型的构建方法及其应用
JP2024504388A (ja) * 2021-01-25 2024-01-31 ユーハン・コーポレイション 抗４－１ｂｂ／抗ｈｅｒ２二重特異性抗体の精製方法
AU2023250166A1 (en) * 2022-04-07 2024-10-24 Yuhan Corporation Pharmaceutical composition for treating or preventing cancer with low expression level of her2
CN115368465A (zh) * 2022-07-19 2022-11-22 合肥天港免疫药物有限公司 双特异性抗体及其应用
CN120225562A (zh) * 2022-11-21 2025-06-27 广州百济神州生物制药有限公司 抗cd137抗体和使用方法
TW202421667A (zh) * 2022-11-29 2024-06-01 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 Ｃｌｄｎ１８．２／４－１ｂｂ結合蛋白及其醫藥用途
WO2024149381A1 (en) * 2023-01-13 2024-07-18 Shanghai Kaijin Biotechnology, Ltd Multi-specific polypeptide complexes
CN116693684A (zh) * 2023-04-19 2023-09-05 浙江正熙生物技术有限公司 一种抗人cd8抗体及其制备方法和应用
WO2025038668A1 (en) 2023-08-14 2025-02-20 Voro Therapeutics, Inc. Therapeutic binding agents that conditionally promote myeloid cell activity against target cells and uses thereof

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011147982A2 (en) 2010-05-27 2011-12-01 Genmab A/S Monoclonal antibodies against her2 epitope
WO2015184203A1 (en) 2014-05-29 2015-12-03 Macrogenics, Inc. Tri-specific binding molecules and methods of use thereof
WO2016115274A1 (en) * 2015-01-14 2016-07-21 Compass Therapeutics Llc Multispecific immunomodulatory antigen-binding constructs
WO2016200782A1 (en) * 2015-06-08 2016-12-15 Macrogenics, Inc. Lag-3-binding molecules and methods of use thereof

Family Cites Families (205)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
WO1991003493A1 (en) 1989-08-29 1991-03-21 The University Of Southampton Bi-or trispecific (fab)3 or (fab)4 conjugates
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
GB9112536D0 (en) 1991-06-11 1991-07-31 Celltech Ltd Chemical compounds
LU91067I2 (fr) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
GB9115364D0 (en) 1991-07-16 1991-08-28 Wellcome Found Antibody
US5843749A (en) 1991-07-26 1998-12-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ehk and Ror tyrosine kinases
CA2078539C (en) 1991-09-18 2005-08-02 Kenya Shitara Process for producing humanized chimera antibody
GB9225453D0 (en) 1992-12-04 1993-01-27 Medical Res Council Binding proteins
US6180377B1 (en) 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
US5922845A (en) 1996-07-11 1999-07-13 Medarex, Inc. Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
EP0846571B1 (en) 1996-12-04 2001-04-11 Agfa-Gevaert N.V. Method for the formation of an improved heat mode image
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
EP1012259B1 (en) 1997-06-04 2009-09-30 Oxford Biomedica (UK) Limited Tumor targeted vector
CA2326389C (en) 1998-04-21 2007-01-23 Micromet Gesellschaft Fur Biomedizinische Forschung Mbh Novel cd19xcd3 specific polypeptides and uses thereof
US7244826B1 (en) 1998-04-24 2007-07-17 The Regents Of The University Of California Internalizing ERB2 antibodies
BR122014028365B8 (pt) 1999-06-25 2021-07-06 Genentech Inc artigo industrializado compreendendo um primeiro recipiente que compreende uma composição de humab4d5-8 nele contida e um segundo recipiente que compreende uma composição rhumab 2c4 nele contida
US7192698B1 (en) 1999-08-17 2007-03-20 Purdue Research Foundation EphA2 as a diagnostic target for metastatic cancer
JP2003523178A (ja) * 1999-11-15 2003-08-05 ユニバーシティ・オブ・サザン・カリフォルニア 治療又は診断のための成分の攻撃目標を設定したデリバリー
EP1234031B2 (en) 1999-11-30 2021-11-24 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-h1, a novel immunoregulatory molecule
US6803192B1 (en) 1999-11-30 2004-10-12 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-H1, a novel immunoregulatory molecule
DK1252192T3 (da) 2000-02-11 2006-11-20 Merck Patent Gmbh Forbedring af antistofbaserede fusionsproteiners serumhalveringstid
WO2002002781A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw Heterodimeric fusion proteins
BR0113213A (pt) 2000-08-14 2003-07-08 Akzo Nobel Nv Método para diagnosticar uma doença auto-imune, anticorpo, composição de diagnóstico, e, uso do anticorpo
US7101976B1 (en) 2000-09-12 2006-09-05 Purdue Research Foundation EphA2 monoclonal antibodies and methods of making and using same
US7666424B2 (en) 2001-10-17 2010-02-23 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Methods of preparing and using single chain anti-tumor antibodies
US8501471B2 (en) 2000-10-18 2013-08-06 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Uses of monoclonal antibody 8H9
US7740845B2 (en) 2000-10-18 2010-06-22 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Uses of monoclonal antibody 8H9
US8414892B2 (en) 2000-10-18 2013-04-09 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Uses of monoclonal antibody 8H9
US7737258B2 (en) 2000-10-18 2010-06-15 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Uses of monoclonal antibody 8H9
US7229960B2 (en) * 2000-11-03 2007-06-12 University Of Vermont And State Agricultural College Methods and compositions for inhibiting GRB7
ATE489395T1 (de) 2000-12-12 2010-12-15 Medimmune Llc Moleküle mit längeren halbwertszeiten, zusammensetzungen und deren verwendung
US7794710B2 (en) 2001-04-20 2010-09-14 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods of enhancing T cell responsiveness
US6833441B2 (en) 2001-08-01 2004-12-21 Abmaxis, Inc. Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers
ES2276735T3 (es) 2001-09-14 2007-07-01 Affimed Therapeutics Ag Anticuerpos fv multimericos de cadena sencilla en tandem.
US20030138425A1 (en) 2001-09-21 2003-07-24 Mather Jennie Powell Antibodies that bind to cancer-associated antigen cytokeratin 8 and methods of use thereof
ATE435655T1 (de) 2001-10-09 2009-07-15 Mayo Foundation Verwendung von agonistischen 4-1bb antikörpern zur erhöhung der immunantwort
CA2463927A1 (en) 2001-10-16 2003-04-24 Raven Biotechnologies, Inc. Antibodies that bind to cancer-associated antigen cd46 and methods of use thereof
JP2006506323A (ja) 2002-04-12 2006-02-23 レイヴェン バイオテクノロジーズ， インコーポレイテッド インテグリンα−ｖ−β−６に結合する抗体およびその使用方法
US20030223989A1 (en) 2002-04-18 2003-12-04 Pluenneke John D. CD137 agonists to treat patients with IgE-mediated conditions
JP2005524399A (ja) 2002-05-03 2005-08-18 レイヴェン バイオテクノロジーズ， インコーポレイテッド Ａｌｃａｍおよびａｌｃａｍ調節因子
ATE525398T1 (de) 2002-05-10 2011-10-15 Medimmune Inc Epha2 monoklonale antikörper und deren anwendungsverfahren
PT1565489E (pt) 2002-06-19 2011-02-23 Raven Biotechnologies Inc Anticorpos internalizantes específicos para o alvo de superfície celular raag10
US8946387B2 (en) 2002-08-14 2015-02-03 Macrogenics, Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
US8530627B2 (en) 2002-08-14 2013-09-10 Macrogenics, Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
US8044180B2 (en) 2002-08-14 2011-10-25 Macrogenics, Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
US8187593B2 (en) 2002-08-14 2012-05-29 Macrogenics, Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
US8193318B2 (en) 2002-08-14 2012-06-05 Macrogenics, Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
US8968730B2 (en) 2002-08-14 2015-03-03 Macrogenics Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
EP1581096A4 (en) 2002-11-13 2006-06-21 Raven Biotechnologies Inc ANTIGEN PIPA AND BINDING ANTIBODIES THEREOF
WO2004055513A2 (en) 2002-12-16 2004-07-01 Herbert Schwarz Use of cd137 antagonists for the treatment of tumors
JP4511943B2 (ja) 2002-12-23 2010-07-28 ワイス エルエルシー Ｐｄ−１に対する抗体およびその使用
KR100500283B1 (ko) 2003-03-25 2005-07-11 이뮤노믹스 주식회사 인간 4-1비비 분자에 대한 인간화 모노클로날 폴리펩티드 및 이를 포함하는 약학 조성물
JP4621674B2 (ja) 2003-09-18 2011-01-26 レイベン バイオテクノロジーズ，インコーポレイティド Ｋｉｄ３およびｋｉｄ３に結合するｋｉｄ３抗体
US7288638B2 (en) 2003-10-10 2007-10-30 Bristol-Myers Squibb Company Fully human antibodies against human 4-1BB
EP1697415A1 (en) 2003-11-12 2006-09-06 Biogen Idec MA Inc. NEONATAL Fc RECEPTOR (FcRn)-BINDING POLYPEPTIDE VARIANTS, DIMERIC Fc BINDING PROTEINS AND METHODS RELATED THERETO
ATE504599T1 (de) 2004-01-16 2011-04-15 Regeneron Pharma Zur aktivierung von rezeptoren fähige fusionspolypeptide
WO2006107617A2 (en) 2005-04-06 2006-10-12 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Methods for generating stably linked complexes composed of homodimers, homotetramers or dimers of dimers and uses
JP2007536932A (ja) 2004-05-10 2007-12-20 マクロジェニクス，インコーポレーテッド ヒト化ＦｃγＲＩＩＢ特異的抗体とその利用法
JP4824025B2 (ja) 2004-06-07 2011-11-24 マクロジェニックス ウエスト，インコーポレイテッド トランスフェリンレセプター抗体
CN104104517B (zh) 2004-10-15 2017-11-07 弗里塞恩公司 一次性密码验证的方法和系统
US8802820B2 (en) 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
CA2593786A1 (en) 2005-01-12 2006-07-20 Raven Biotechnologies, Inc. Kid31 and antibodies that bind thereto
JP2008538173A (ja) 2005-01-31 2008-10-16 レイベン バイオテクノロジーズ，インコーポレイティド Ｌｕｃａ２およびそれに結合する抗体
US20060171952A1 (en) 2005-02-02 2006-08-03 Mather Jennie P JAM-3 and antibodies that bind thereto
KR101317358B1 (ko) 2005-02-02 2013-10-15 레이븐 바이오테크놀로지스, 인코퍼레이티드 Ａｄａｍ-9 조절자
JP5328156B2 (ja) 2005-02-03 2013-10-30 マクロジェニックス ウエスト， インコーポレイテッド オンコスタチンｍレセプターに対する抗体
KR101363252B1 (ko) 2005-02-04 2014-02-13 레이븐 바이오테크놀로지스, 인코퍼레이티드 Ｅｐｈａ2에 결합하는 항체 및 그것의 사용방법
US20080019905A9 (en) 2005-02-18 2008-01-24 Strome Scott E Method of using an anti-CD137 antibody as an agent for radioimmunotherapy or radioimmunodetection
US20060182744A1 (en) 2005-02-15 2006-08-17 Strome Scott E Anti-CD137 antibody as an agent in the treatment of cancer and glycosylation variants thereof
AU2006232310B9 (en) 2005-04-06 2011-07-21 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Improved stably tethered structures of defined compositions with multiple functions or binding specificities
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
ES2971647T3 (es) 2005-04-15 2024-06-06 Macrogenics Inc Diacuerpos covalentes y usos de los mismos
US9284375B2 (en) 2005-04-15 2016-03-15 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
WO2012018687A1 (en) 2010-08-02 2012-02-09 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
CA2607147C (en) 2005-05-09 2018-07-17 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
UA99701C2 (ru) 2005-07-01 2012-09-25 Медарекс, Инк. Человеческое моноклональное антитело, которое специфически связывается с лигандом-1 запрограммированной гибели клеток (pd-l1)
AU2006283532B2 (en) 2005-08-19 2012-04-26 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobin and uses thereof
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
EP1937851A4 (en) 2005-10-19 2010-08-25 Ibc Pharmaceuticals Inc METHOD AND COMPOSITIONS FOR PRODUCING BIOACTIVE GROUPS OF INCREASED COMPLEXITY AND THEIR USE
JP5090366B2 (ja) 2005-12-16 2012-12-05 アイビーシー ファーマスーティカルズ，インク． 多価イムノグロブリン系生物活性アセンブリー
CA2645097C (en) 2006-03-10 2019-09-17 Wyeth Anti-5t4 antibodies and uses thereof
NZ573646A (en) 2006-06-12 2012-04-27 Wyeth Llc Single-chain multivalent binding proteins with effector function
WO2008002933A2 (en) 2006-06-26 2008-01-03 Macrogenics, Inc. Combination of fcgammariib antibodies and cd20-specific antibodies and methods of use thereof
AT503889B1 (de) 2006-07-05 2011-12-15 Star Biotechnologische Forschungs Und Entwicklungsges M B H F Multivalente immunglobuline
AT503902B1 (de) 2006-07-05 2008-06-15 F Star Biotech Forsch & Entw Verfahren zur manipulation von immunglobulinen
MX2009001291A (es) 2006-08-04 2009-03-10 Astrazeneca Ab Anticuerpos para erbb2.
EP2471816A1 (en) 2006-08-30 2012-07-04 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
KR20100014527A (ko) 2007-03-22 2010-02-10 슬로안-케테링인스티튜트퍼캔서리서치 단일클론항체 8ｈ9의 용도
US8354509B2 (en) 2007-06-18 2013-01-15 Msd Oss B.V. Antibodies to human programmed death receptor PD-1
AU2009258063B2 (en) 2007-06-21 2014-09-25 Macrogenics, Inc. BCR-complex-specific antibodies and methods of using same
CN101821288A (zh) 2007-06-21 2010-09-01 宏观基因有限公司 共价双抗体及其用途
AU2008282218A1 (en) 2007-07-31 2009-02-05 Medimmune, Llc Multispecific epitope binding proteins and uses thereof
US7771720B2 (en) 2007-09-07 2010-08-10 Cisthera, Inc. Humanized PAI-1 antibodies
WO2009117030A2 (en) 2007-12-19 2009-09-24 Macrogenics, Inc. Improved compositions for the prevention and treatment of smallpox
EP3067063A1 (en) 2008-04-02 2016-09-14 MacroGenics, Inc. Her2/neu-specific antibodies and methods of using same
EP2113255A1 (en) 2008-05-02 2009-11-04 f-star Biotechnologische Forschungs- und Entwicklungsges.m.b.H. Cytotoxic immunoglobulin
US20110081347A1 (en) 2008-06-04 2011-04-07 Macrogenics, Inc. Antibodies with Altered Binding to FcRn and Methods of Using Same
NZ591130A (en) 2008-08-25 2012-09-28 Amplimmune Inc Compositions comprising a PD-1 antagonists and cyclophosphamide and methods of use thereof
JP2012501178A (ja) 2008-08-26 2012-01-19 マクロジェニクス，インコーポレーテッド Ｔ細胞受容体抗体およびその使用方法
WO2010028797A1 (en) 2008-09-10 2010-03-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Multivalent antibodies
WO2010028796A1 (en) 2008-09-10 2010-03-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Trispecific hexavalent antibodies
WO2010028795A1 (en) 2008-09-10 2010-03-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Multivalent antibodies
US8552154B2 (en) 2008-09-26 2013-10-08 Emory University Anti-PD-L1 antibodies and uses therefor
LT2786762T (lt) 2008-12-19 2019-06-10 Macrogenics, Inc. Kovalentiniai diakūnai ir jų panaudojimas
US20120121596A1 (en) 2009-03-20 2012-05-17 Germaine Fuh Bispecific anti-her antibodies
JP2010249130A (ja) 2009-03-27 2010-11-04 Sanden Corp 流体機械
CA2761233A1 (en) 2009-05-27 2010-12-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Tri- or tetraspecific antibodies
DE102009040716B4 (de) 2009-09-10 2011-07-14 Miltenyi Biotec GmbH, 51429 Verwendung von CD154 zur Identifizierung und Abtrennung von nicht-regulatorischen T-Zellen aus einem Gemisch mit regulatorischen T-Zellen
CN102482701B (zh) 2009-09-16 2015-05-13 免疫医疗公司 I类抗-cea抗体及其使用
KR101790767B1 (ko) 2009-11-24 2017-10-26 메디뮨 리미티드 Ｂ７―ｈ１에 대한 표적화된 결합 물질
SG10201501784YA (en) 2009-12-07 2015-05-28 Univ Leland Stanford Junior Methods for enhancing anti-tumor antibody therapy
GB201000467D0 (en) 2010-01-12 2010-02-24 Ucb Pharma Sa Antibodies
PT2542256T (pt) 2010-03-04 2019-09-05 Macrogenics Inc Anticorpos reativos com b7-h3, fragmentos imunologicamente ativos dos mesmos e sua utilização
PH12012501751A1 (en) 2010-03-04 2012-11-12 Macrogenics Inc Antibodies reactive with b7-h3, immunologically active fragments thereof and uses thereof
US8876892B2 (en) 2010-04-21 2014-11-04 Medtronic, Inc. Prosthetic heart valve delivery system with spacing
TWI586806B (zh) 2010-04-23 2017-06-11 建南德克公司 異多聚體蛋白質之製造
EP3539988A3 (en) 2010-05-27 2019-12-04 Genmab A/S Monoclonal antibodies against her2
CA2803391C (en) 2010-06-22 2021-11-09 Neogenix Oncology, Inc. Npc1 antibodies that bind a muc5ac epitope
WO2012009544A2 (en) 2010-07-14 2012-01-19 Amgen Inc. Domain insertion immunoglobulin
MY177065A (en) 2010-09-09 2020-09-03 Pfizer 4-1bb binding molecules
US9803210B2 (en) 2011-02-11 2017-10-31 Research Corporation Technologies, Inc. Fusion proteins comprising immunoglobulin constant domain-derived scaffolds
RU2633509C2 (ru) 2011-03-31 2017-10-12 Мерк Шарп И Доум Корп. Стабильные составы антител против рецептора программируемой смерти pd-1 человека и относящиеся к ним способы лечения
WO2012145493A1 (en) 2011-04-20 2012-10-26 Amplimmune, Inc. Antibodies and other molecules that bind b7-h1 and pd-1
KR102030987B1 (ko) 2011-04-25 2019-11-11 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항 ｂ７-ｈ３항체
US9750806B2 (en) 2011-05-17 2017-09-05 Trion Research Gmbh Vaccine preparation containing trifunctional antibodies with antigen immunogenicity enhancer properties
SG10201703425RA (en) 2011-05-21 2017-05-30 Macrogenics Inc Cd3-binding molecules capable of binding to human and non-human cd3
AU2012259162C1 (en) 2011-05-21 2020-05-21 Macrogenics, Inc. Deimmunized serum-binding domains and their use for extending serum half-life
WO2012162583A1 (en) 2011-05-26 2012-11-29 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Design and construction of novel multivalent antibodies
US20150045540A1 (en) 2011-06-28 2015-02-12 Sea Lane Biotechnologies, Llc Multispecific stacked variable domain binding proteins
US20140155581A1 (en) 2011-07-06 2014-06-05 Medimmune, Llc Methods For Making Multimeric Polypeptides
ES2664622T3 (es) 2011-07-24 2018-04-20 Cure Tech Ltd. Variantes de anticuerpos monoclonales inmunomodulatorios humanizados
US20130060011A1 (en) 2011-08-23 2013-03-07 Peter Bruenker Fc-free antibodies comprising two fab fragments and methods of use
AU2013201121A1 (en) 2011-09-20 2013-04-04 Vical Incorporated Synergistic anti-tumor efficacy using alloantigen combination immunotherapy
AU2012311492A1 (en) 2011-09-23 2014-03-06 Amgen Research (Munich) Gmbh Bispecific binding molecules for 5T4 and CD3
BR112014008849A2 (pt) 2011-10-20 2017-09-12 Us Health receptores quiméricos de antígeno anti-cd22
CN103906533A (zh) 2011-11-07 2014-07-02 米迪缪尼有限公司 多特异性和多价结合蛋白及其用途
HUE051954T2 (hu) 2011-11-28 2021-03-29 Merck Patent Gmbh ANTI-PD-L1 ellenanyagok és alkalmazásaik
SG10201608307WA (en) 2012-04-20 2016-11-29 Emergent Product Dev Seattle Cd3 binding polypeptides
WO2013163427A1 (en) 2012-04-25 2013-10-31 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Antibodies to treat hiv-1 infection
KR20150013188A (ko) 2012-05-24 2015-02-04 에프. 호프만-라 로슈 아게 다중특이적 항체
US20150203591A1 (en) 2012-08-02 2015-07-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mutivalent antigen-binding proteins
CN104936982B (zh) 2012-08-03 2020-04-24 丹娜法伯癌症研究院 抗-pd-l1和pd-l2双结合抗体单一试剂及其使用方法
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
AU2013326901B2 (en) 2012-10-04 2018-05-31 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Human monoclonal anti-PD-L1 antibodies and methods of use
US10738132B2 (en) 2013-01-14 2020-08-11 Xencor, Inc. Heterodimeric proteins
MX2015010843A (es) 2013-02-26 2016-04-04 Roche Glycart Ag Moleculas biespecificas de union al antigeno que activan celulas t.
WO2014137931A1 (en) 2013-03-06 2014-09-12 Imaginab, Inc. Antigen binding constructs to 5t4
HRP20211212T1 (hr) 2013-03-14 2021-11-12 Macrogenics, Inc. Bispecifične molekule koje su imunoreaktivne s imuno-efektorskim stanicama koje eksprimiraju aktivirajući receptor
PL2992017T3 (pl) 2013-05-02 2021-09-06 Anaptysbio, Inc. Przeciwciała skierowane przeciwko receptorowi programowanej śmierci-1 (pd-1)
KR101453462B1 (ko) * 2013-05-16 2014-10-23 앱클론(주) Her2에 특이적으로 결합하는 항체
CN105683217B (zh) 2013-05-31 2019-12-10 索伦托治疗有限公司 与pd-1结合的抗原结合蛋白
UA116479C2 (uk) 2013-08-09 2018-03-26 Макродженікс, Інк. БІСПЕЦИФІЧНЕ МОНОВАЛЕНТНЕ Fc-ДІАТІЛО, ЯКЕ ОДНОЧАСНО ЗВ'ЯЗУЄ CD32B I CD79b, ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ
EP2840091A1 (en) 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific diabodies that are capable of binding gpA33 and CD3 and uses thereof
EP2839842A1 (en) 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding CD123 and CD3 and uses thereof
HRP20220214T1 (hr) 2014-01-15 2022-04-29 Kadmon Corporation, Llc Imunomodulacijska sredstva
TWI681969B (zh) 2014-01-23 2020-01-11 美商再生元醫藥公司 針對ｐｄ-１的人類抗體
TWI680138B (zh) 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
US11485790B2 (en) * 2014-04-07 2022-11-01 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Immunoactivating antigen-binding molecule
KR102130600B1 (ko) 2014-07-03 2020-07-08 베이진 엘티디 Pd-l1 항체와 이를 이용한 치료 및 진단
AU2015288232B2 (en) 2014-07-11 2020-10-15 Ventana Medical Systems, Inc. Anti-PD-L1 antibodies and diagnostic uses thereof
EP3171892B1 (en) 2014-07-22 2021-11-24 Apollomics Inc. Anti-pd-1 antibodies
WO2016022939A1 (en) 2014-08-08 2016-02-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Human monoclonal antibodies specific for 5t4 and methods of their use
MX384424B (es) 2014-09-05 2025-03-14 Janssen Pharmaceutica Nv Agentes de unión al determinante de grupo 123 y usos de éstos.
CR20170109A (es) 2014-09-26 2017-07-26 Macrogenics Inc Diacuerpos monovalentes biespecificos que son capaces de unir cd19 y cd3, y usos de los mismos
US9988452B2 (en) 2014-10-14 2018-06-05 Novartis Ag Antibody molecules to PD-L1 and uses thereof
WO2016073860A1 (en) * 2014-11-06 2016-05-12 Medimmune, Llc Binding molecules specific for staphylococcus protein a and uses thereof
WO2016077397A2 (en) 2014-11-11 2016-05-19 Sutro Biopharma, Inc. Anti-pd-1 antibodies, compositions comprising anti-pd-1 antibodies and methods of using anti-pd-1 antibodies
US10259887B2 (en) 2014-11-26 2019-04-16 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens
US10526417B2 (en) 2014-11-26 2020-01-07 Xencor, Inc. Heterodimeric antibodies that bind CD3 and CD38
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
EP3916017A1 (en) 2014-12-22 2021-12-01 PD-1 Acquisition Group, LLC Anti-pd-1 antibodies
GB201500319D0 (en) 2015-01-09 2015-02-25 Agency Science Tech & Res Anti-PD-L1 antibodies
CA2977257A1 (en) 2015-02-22 2016-08-25 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody therapeutics that bind cd137
US20160257761A1 (en) 2015-03-06 2016-09-08 Macrogenics, Inc. HER2/neu-Specific Antibodies and Methods of Using Same
US10865250B2 (en) 2015-05-04 2020-12-15 Pieris Pharmaceuticals Gmbh Anti-cancer fusion polypeptide
SG11201708620QA (en) 2015-05-08 2017-11-29 Xencor Inc Heterodimeric antibodies that bind cd3 and tumor antigens
CN114181309B (zh) * 2015-05-21 2024-07-30 鳄鱼生物科学公司 新型多肽
ES2970117T3 (es) 2015-06-26 2024-05-27 Celgene Corp Métodos para el tratamiento de sarcoma de Kaposi o linfoma inducido por KSHV usando compuestos inmunomoduladores, y usos de biomarcadores
CN114591433A (zh) 2015-07-13 2022-06-07 西托姆克斯治疗公司 抗pd-1抗体、可活化抗pd-1抗体及其使用方法
PE20181151A1 (es) 2015-07-30 2018-07-17 Macrogenics Inc Moleculas de union a pd-1 y metodos de uso de las mismas
CN108350072B (zh) * 2015-08-03 2022-05-24 诺华股份有限公司 治疗fgf21相关病症的方法
HK1249423A1 (zh) 2015-08-17 2018-11-02 Macrogenics, Inc. 能夠結合b7-h3和cd3的雙特異性單價雙抗體及其用途
CN108473584B (zh) 2015-11-03 2022-01-14 詹森生物科技公司 特异性结合pd-1和tim-3的抗体及其用途
US20180346571A1 (en) 2015-11-17 2018-12-06 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Pd-l1-binding agents and uses thereof
AU2016369537B2 (en) 2015-12-17 2024-03-14 Novartis Ag Antibody molecules to PD-1 and uses thereof
AU2017205089B2 (en) 2016-01-08 2023-10-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods of treating CEA-positive cancers using PD-1 axis binding antagonists and anti-CEA/anti-CD3 bispecific antibodies
KR20180096789A (ko) 2016-01-11 2018-08-29 인히브릭스, 인크. 다가 및 다중특이적 41bb-결합 융합 단백질
WO2017142928A1 (en) 2016-02-17 2017-08-24 Macrogenics, Inc. Ror1-binding molecules, and methods of use thereof
IL262241B2 (en) 2016-04-13 2024-05-01 Sanofi Sa Trispecific and/or trivalent binding proteins with a crossover dual variable domain arm and a traditional antibody fab arm, pharmaceutical composition comprising said binding proteins and their uses in preventing and/or treating cancer or inflammatory diseases
JP7461741B2 (ja) 2016-06-20 2024-04-04 カイマブ・リミテッド 抗ｐｄ－ｌ１およびｉｌ－２サイトカイン
US9567399B1 (en) 2016-06-20 2017-02-14 Kymab Limited Antibodies and immunocytokines
UA127449C2 (uk) 2016-09-23 2023-08-30 Мерус Н.В. Зв'язувальна молекула, яка модулює біологічну активність, що експресується клітиною
IL268836B2 (en) 2017-02-24 2024-04-01 Macrogenics Inc Bispecific binding molecules that are capable of binding cd137 and tumor antigens, and uses thereof
KR20250020679A (ko) 2017-08-04 2025-02-11 젠맵 에이/에스 Pd-l1 및 cd137에 결합하는 결합제 및 그의 용도
JP7442443B2 (ja) 2017-10-10 2024-03-04 ヌマブ セラピューティクス アクチェンゲゼルシャフト 多重特異性抗体
MA50354A (fr) 2017-10-10 2020-08-19 Numab Therapeutics AG Anticorps ciblant le cd137 et leurs méthodes d'utilisation
WO2019104716A1 (en) 2017-12-01 2019-06-06 Adagene Inc. Methods for using cd137 ligand as biomarker for treatment with anti-cd137 antibody
EP3768711B1 (en) 2018-03-23 2023-05-03 Eli Lilly and Company Anti-cd137 antibodies for combination with anti-pd-l1 antibodies

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011147982A2 (en) 2010-05-27 2011-12-01 Genmab A/S Monoclonal antibodies against her2 epitope
WO2015184203A1 (en) 2014-05-29 2015-12-03 Macrogenics, Inc. Tri-specific binding molecules and methods of use thereof
WO2016115274A1 (en) * 2015-01-14 2016-07-21 Compass Therapeutics Llc Multispecific immunomodulatory antigen-binding constructs
WO2016200782A1 (en) * 2015-06-08 2016-12-15 Macrogenics, Inc. Lag-3-binding molecules and methods of use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
EP3585431A1 (en) 2020-01-01
US20200062854A1 (en) 2020-02-27
SG11201907753TA (en) 2019-09-27
IL268836B1 (en) 2023-12-01
ZA201905347B (en) 2021-03-31
US20240233818A1 (en) 2024-07-11
US20220406376A1 (en) 2022-12-22
EP4389226A3 (en) 2024-12-18
BR112019017628A2 (pt) 2020-07-07
TWI788327B (zh) 2023-01-01
CA3053803A1 (en) 2018-08-30
US11942149B2 (en) 2024-03-26
CN110325209A (zh) 2019-10-11
AU2018224094A1 (en) 2019-09-19
MA47612A (fr) 2020-01-01
WO2018156740A1 (en) 2018-08-30
EP4389226A2 (en) 2024-06-26
KR20190121802A (ko) 2019-10-28
AU2018224094B2 (en) 2025-04-17
RU2019128669A3 (ko) 2021-11-08
EP3585431A4 (en) 2020-12-16
NZ756758A (en) 2025-05-02
TW201831511A (zh) 2018-09-01
JP7132232B2 (ja) 2022-09-06
IL268836B2 (en) 2024-04-01
JP2020508334A (ja) 2020-03-19
MX2019009967A (es) 2019-12-02
US11459394B2 (en) 2022-10-04
RU2019128669A (ru) 2021-03-24
IL268836A (en) 2019-10-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11942149B2 (en) Bispecific binding molecules that are capable of binding CD137 and tumor antigens, and uses thereof
KR102364383B1 (ko) 삼중-특이적 결합 분자 및 그것의 사용 방법
US20200255524A1 (en) Combination therapy
US20240043537A1 (en) Variant CD3-Binding Domains and Their Use in Combination Therapies for the Treatment of Disease
US11795226B2 (en) Bispecific CD16-binding molecules and their use in the treatment of disease
TW202035453A (zh) Pd-l1-結合分子及其用於治療疾病的用途
US20230094162A1 (en) Cd137 binding molecules and uses thereof
RU2805648C2 (ru) Биспецифические связывающие молекулы, способные связывать cd137 и опухолевые антигены, и варианты их применения
EA046873B1 (ru) Cd137-связывающие молекулы и варианты их применения

Legal Events

Date Code Title Description
PA0105 International application

Patent event date: 20190920

Patent event code: PA01051R01D

Comment text: International Patent Application

PG1501 Laying open of application
PA0201 Request for examination

Patent event code: PA02012R01D

Patent event date: 20210122

Comment text: Request for Examination of Application

E902 Notification of reason for refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event date: 20221129

Patent event code: PE09021S01D

E701 Decision to grant or registration of patent right
PE0701 Decision of registration

Patent event code: PE07011S01D

Comment text: Decision to Grant Registration

Patent event date: 20230727

PG1601 Publication of registration