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KR102001662B1 - 루프스 안티코아귤란트 검출용 혈액 응고시간의 측정방법 - Google Patents

루프스 안티코아귤란트 검출용 혈액 응고시간의 측정방법 Download PDF

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KR102001662B1
KR102001662B1 KR1020137033385A KR20137033385A KR102001662B1 KR 102001662 B1 KR102001662 B1 KR 102001662B1 KR 1020137033385 A KR1020137033385 A KR 1020137033385A KR 20137033385 A KR20137033385 A KR 20137033385A KR 102001662 B1 KR102001662 B1 KR 102001662B1
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KR
South Korea
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blood coagulation
measuring
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blood
reagent
Prior art date
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KR1020137033385A
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English (en)
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KR20140033422A (ko
Inventor
마사히로 이에코
치즈루 모리카와
케이코 핫토리
Original Assignee
학교법인 히가시-니뽄-가쿠엔
세키스이 메디칼 가부시키가이샤
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Filing date
Publication date
Application filed by 학교법인 히가시-니뽄-가쿠엔, 세키스이 메디칼 가부시키가이샤 filed Critical 학교법인 히가시-니뽄-가쿠엔
Publication of KR20140033422A publication Critical patent/KR20140033422A/ko
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Publication of KR102001662B1 publication Critical patent/KR102001662B1/ko

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Abstract

와퍼린 복용자, 비타민 K결핍자 또는 간부전 환자의 혈액 시료에 있어서도, 혈액 응고 인자의 결핍의 영향을 받지 않고, ISTH의 추천법에 비해, 용이하고 감도 좋고, LA검출이 가능한 혈액 응고시간의 측정방법의 제공.
혈액 응고시간의 측정 전 또는 측정시에, 혈액 시료에, 혈액 응고 인자를 함유하는 완충액 조성물을 첨가해 혈액 응고시간을 측정하는 것을 특징으로 하는 루프스 안티코아귤란트 검출용 혈액 응고시간의 측정방법.

Description

루프스 안티코아귤란트 검출용 혈액 응고시간의 측정방법{METHOD OF MEASURING BLOOD COAGULATION TIME TO DETECT LUPUS ANTICOAGULANTS}
본 발명은 루프스 안티코아귤란트를 검출할 목적으로, 피검 혈액시료의 혈액 응고시간을 측정하는 방법에 관한 것이다.
혈액 응고시간 측정은 혈액 응고 인자의 활성화제(이하, 단순히 '활성화제'라고 하는 경우도 있다.) 및/또는 Ca2 ＋ 등으로 이루어진 혈액 응고시간 측정용 시약을, 검체 혈액 또는 검체 혈액 혼합물에 첨가한 시점으로부터, 검출 가능한 피블린 덩어리가 형성될 때까지의 시간(혈액 응고시간: 이하, 단순히 "응고시간"이라고 하는 경우도 있다. 또, 피블린 덩어리의 형성을, 단순히 "응고"라고 하는 경우도 있다.)을 측정함으로써 혈액 응고계의 이상의 유무의 스크리닝, 또는 개개 혈액 응고 인자의 활성 측정을 위해서 실시되고 있다. 전형적인 예로서는 프로트롬빈 시간(PT), 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간(APTT), 트롬빈 시간 등의 혈액 응고 시험이 있다. 이하, 본 명세서에서 혈액 응고 인자를, 단순히 응고 인자라고 하기도 한다.
PT란 피검 혈장에 조직 트롬보플라스틴 및 Ca2 ＋의 혼합액을 첨가한 후 응고할 때까지의 시간이고, 외인계 응고 메카니즘에 관계하는 제VII 인자, 제X인자, 제V인자, 프로트롬빈, 피브리노겐 등의 응고 활성을 종합적으로 검사하는 것이다. 또, APTT란 것은 피검 혈장에 충분한 양의 인지질 및 활성화제(카올린, 무수 규산, 에라그산(ellagic acid) 등)와 적량의 Ca2 ＋를 첨가한 후 응고할 때까지의 시간이고, 내인계 응고 기서에 관계하는 제XII인자, 제XI인자, 프리칼리크레인(prekallikrein), 고분자 키니노겐(kininogen), 제IX인자, 제VIII인자, 제X인자, 제V인자, 프로트롬빈, 피브리노겐 등의 응고 활성을 종합적으로 검사하는 것이다. 일반적으로, 이들 혈액 응고 시험에서의 이상이란, 응고시간이 연장되는 것을 가리킨다. 혈액 응고계의 이상은 생체 내에서의 출혈 경향 또는 혈전 경향(혈액 응고 경향)의 징조 또는 결과를 반영하고 있다.
당해 응고시간의 연장 원인으로서는 1) 혈액 응고 인자의 결핍 또는 저하, 2) 혈액 응고계를 구성하는 혈액 성분에 대한 항체의 존재, 3) 혈액 응고시간 측정용 시약 중의 성분에 대한 항체의 존재, 4) 혈액 응고계를 구성하는 혈액 성분과 혈액 응고시간 측정용 시약 중의 성분과의 복합체에 대한 항체의 존재, 5) 혈액 응고 반응을 저해하는 약제의 투여 등이 고려된다.
그러나, 혈액 응고시간의 측정을 행하는 것만으로는 응고시간의 연장 원인이, 예를 들면, 단지 응고 인자 결핍에 의한 혈액 응고 활성의 저하인가, 혈액 응고계를 구성하는 성분 또는 혈액 응고시간 측정용 시약 중의 성분 등에 대한 항체( 인히비터)가 응고 반응을 저해하는 것에 의한 혈액 응고 활성의 저하인지 등을 감별할 수 없다. 한편, 당해 연장 원인의 다름에 의해 치료 방침이 다르기 때문에, 당해 연장 원인의 감별은 중요하다. 여기서, 당해 연장 원인의 감별을 위해서, 피검 혈장에 정상 혈장을 첨가하고, 그 혈액 응고시간이 보정되는(정상화하는) 정도를 그래프화하여 판정하는 혈액 응고 보정 시험(이하, "혼합 시험" 또는 "믹싱 테스트"라고 하는 것도 있다)이 행하여지고 있다(비특허문헌 1).
종래, 믹싱 테스트는 예를 들면, 다음과 같이 하여 실시되고 있다.
피검 혈장에 대해서, 정상 혈장의 혼합 비율이 0%, 20%, 50%, 80%, 100%가 되도록 정상 혈장을 첨가, 혼합하여 조제한 시료를 준비하고, APTT의 측정을 행한다. 그 결과를 그래프(가로축: 혼합한 정상 혈장의 비율 또는 피검 혈장의 비율(%), 세로축: 응고시간(초))에 플로팅하여 당해 그래프의 형상으로부터 시각적으로 응고시간의 연장 원인을 감별, 판정한다. 예를 들면, 피검 혈장이 응고 인자 결핍의 경우, 소량의 정상 혈장의 첨가(도 1(A)에서는 20%)에서는 응고시간은 크게 단축하여 정상 혈장 100%를 측정했을 경우의 값에 근접하기 때문에, 피검 혈장 100%과 정상 혈장 100%의 점을 이은 직선(파선)보다 아래에 볼록(凸) 커브를 나타낸다(도 1(A)).
피검 혈장 중에 응고 인자 인히비터가 존재하는 경우는 정상 혈장의 첨가 비율을 높게 하여도 첨가한 정상 혈장 중의 응고 인자를 당해 응고 인자 인히비터가 실활시키기 때문에, 정상 혈장의 첨가에 의한 응고시간의 개선 정도가 작고, 위에 볼록의 커브를 나타낸다(도 1(B)).
혈액 응고시간 측정용 시약의 감수성에 영향을 주는 응고 인자 인히비터로서 루프스 안티코아귤란트(이하, LA)가 알려져 있다. LA는 개개의 응고 인자 활성을 저해하지 않고, in 　ｖ itro에서의 인지질 의존성의 응고 반응을 저해하는 면역 글로블린으로 정의되고 있어 단일의 항체는 아니다. 응고 반응에는 인지질의 존재가 필수이기 때문에, 통상, 많은 혈액 응고시간 측정용 시약에는 인지질이 풍부하게 포함되어 있다. LA는 당해 시약중의 인지질과 반응하여 이것을 소비하고, 결과적으로 응고 반응을 저해하여 응고시간을 연장시키기 때문에, PT나 APTT와 같은 응고 검사의 결과가 이상(異常)으로 되어 발견되는 것이 많다. 그러나, LA는 인지질의 종류(유래, 인지질의 조성 등)에 의해 반응 강도가 다르기 때문에, 사용하는 혈액 응고시간 측정용 시약에 의해도 LA 양성·음성의 판정 결과가 다른 것이 알려져 있다.
비특허문헌 1: 검사와 기술, Vol. 34, no. 8, 2006년 8월, p735－742 detection, Journal　of　Thrombosis　and　Haemostasis, 7: pp1737－1740, 2009
항응고요법으로서 긴급시에는 즉효성이 있으며, 정맥내 투여가 가능한 헤파린, 장기 투여에 의한 예방에는 경구 항응고약인 와퍼린이 이용되고 있다. 이 중, 와퍼린은 생체 내에서의 비타민 K의 작용에 길항하는 것으로서, 혈액 응고 인자중 제II인자(프로트롬빈), 제VII 인자, 제IX인자, 제X인자의 간장에서의 생합성을 억제하는 것이 알려져 있다. 그러므로, 와퍼린 복용자, 비타민 K결핍자, 또는 간부전 환자(간경변, 위중한 간염, 또는 만성 간염 환자 등)의 경우, 종래의 믹싱 테스트에 의한 혈액 응고시간의 연장 원인의 확인 방법에서는 LA 등의 항인지질 항체에 의한 응고시간의 연장인지, 와퍼린의 작용, 비타민 K의 결핍, 또는 간부전에 의한혈액 응고 인자의 결핍에 의한 응고시간의 연장인지가 불명확이고, 원인의 감별이 곤란했다. 이 문제는 와퍼린 투여를 받고 있으며, 더욱이 LA 양성인 경우에, 보다 심각하다. 왜냐면, LA 양성을 확인 또는 의심하여 항응고 요법을 개시했을 경우에는 LA의 검출과 그의 성쇠의 감시, 추적이 중요하지만, 그것을 정확하게 할 수 없는 것이 되기 때문이다.
국제혈전지혈학회(ISTH)에서는 LA검출 때, 부족한 응고 인자를 보충하기 위해, 피검 혈장에 대해서 등량의 통상의 건강한 사람 혈장을 혼합한 후에 측정하는 것이 추천되고 있다. 여기서, 사용하는 통상의 건강한 사람 혈장에 대해서는 혈소판 수가 107/㎖를 하회하도록 이중으로 원심 처리를 하고, 또한 모든 혈액 응고 인자의 활성이 거의 100%인 것을 각 시설에서 자가 조제하여 이용하는 것으로 되어 있다(비특허문헌 2). 그러나, 혈액 응고 인자 중에는 활성이 매우 불안정하여 실활하기 쉬운 것도 있기 때문에, 모든 혈액 응고 인자의 활성을 거의 100%로 유지한 채로 통상의 건강한 사람 혈장을 조제하는 것은 매우 곤란하고, 안정한 입수가 용이하지 않다는 문제를 가지고 있었다. 또, 통상의 건강한 사람 혈장의 조제에 대해서는 저장(pool), 혼합하는 인원수가 많을수록, 응고 인자 활성의 개인별 격차를 평균화할 수 있지만, 시설에 따라서는 통상의 건강한 사람의 인원수를 확보할 수 d없고, 혈장 제공자에게 편향이 생기기 때문에 뱃치 사이의 품질에 차이가 나는 문제도 있다. 더욱이 통상의 건강한 사람 혈장을 이용하는 방법은 피검 혈장 중의 LA를 희석하여 버릴 뿐 아니라, 통상의 건강한 사람 혈장에 포함되는 LA측정을 방해하는 물질(인지질, 혈소판 유래의 막 파쇄물 등)을 첨가하는 경우도 있으며, 특히 LA가 약한 양성인 경우는 위음성화(僞陰性化)해 버릴 가능성이 있다고 하는 문제도 있었다.
따라서, 와퍼린 복용자, 비타민 K결핍자 또는 간부전 환자에 있어도, 혈액 응고 인자의 결핍의 영향을 받지 않고, 전술한 ISTH의 추천법에 비해, 용이하고 감도 좋고, LA검출이 가능한 혈액 응고시간의 측정방법의 개발이 강하게 요망되어 왔다.
본 발명자들은 예의 연구한 결과, 통상의 건강한 사람의 혈장에서는 아니고, 특정의 혈액 응고 인자를 피검시료(예를 들면, 혈장)에 첨가한 후에 혈액 응고시간을 측정함으로써 통상의 건강한 사람 혈장을 이용하지 않아도, 간편하고 예민하게 검출용 혈액 응고시간의 측정이 가능한 것을 발견하고, 본 발명을 완성했다.
즉, 본 발명은 혈액 응고시간의 측정 전 또는 측정시에, 혈액 시료에, 혈액 응고 인자를 함유하는 완충액 조성물을 첨가하여 혈액 응고시간을 측정하는 것을 특징으로 하는 LA검출용 혈액 응고시간의 측정방법을 제공하는 것이다.
또, 본 발명은 혈액 응고 인자를 함유하는 완충액 조성물을 주성분으로 하는 루프스 안티코아귤란트 검출용 혈액 응고시간 측정용 시약과 조합하여 사용하는 보조 시약을 제공하는 것이다.
더욱이 본 발명은 이하의(A), (B)를 포함한 루프스 안티코아귤란트 검출용 혈액 응고시간 측정용 시약 킷을 제공하는 것이다.
(A) 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 측정용 시약 또는 희석 러셀 뱀독시간 측정용 시약
(B) 혈액 응고인자를 함유하는 완충액 조성물을 주성분으로 하는 보조 시약.
본 발명 방법에 의하면, 와퍼린 복용자, 비타민 K 결핍자 또는 간부전 환자(간경변, 위중한 간염, 또는 만성 간염 환자 등) 유래의 혈액 시료 등의 비타민 K의존성 응고 인자(FII, FVII, FIX 및 FX)가 결핍되어 있는 경우에도, LA 유무를 간편하고 예민하게 확인하는 것이 가능하다. 따라서, LA를 가지는 환자의 올바른 치료 방침을 결정할 수 있다. 또, 통상의 건강한 사람 혈장을 준비할 필요가 없기 때문에, 종래 문제로 되어 있던 통상의 건강한 사람 혈장의 뱃치간 차이나, 안정하게 입수하기 어렵다는 문제도 해소할 수 있다. 더욱이 본 발명 방법의 특필해야 하는 바는 지금까지 통상의 건강한 사람 혈장의 혼합 시험에 의해서도 간과될 가능성이 있던 LA를, 간편하고 예민하게 검출할 수가 있게 된 것이다. 이것은 종래의 정상 혈장의 첨가를, 개개의 혈장 성분으로 치환 첨가한다고 하는 단순한 발상으로부터는 예측할 수 없는 완전히 의외의 효과이다.
본 발명의 LA검출용 혈액 응고시간의 측정방법은 혈액 응고시간의 측정 전 또는 측정시에, 혈액 시료에, 혈액 응고 인자를 함유하는 완충액 조성물을 첨가하는 것을 특징으로 한다.
본 발명 방법에서 이용되는 혈액 시료는 전혈(全血) 또는 혈장이 바람직하고, 통상, 피검자로부터 채취한 혈액에, 시트르산나트륨 등의 항응고제를 가하여 조제된다. 이들의 혈액 시료 가운데, 종래 LA검출이 곤란하였던 피검자 유래의 혈액 시료를 대상으로 하는 경우에, 본 발명 방법은 특히 유용하다. 그러한 혈액 시료로서는 와퍼린 복용자, 비타민 K결핍자, 간부전 환자 유래의 혈액 시료를 들 수 있다.
혈액 응고시간의 측정 수단, 즉, 혈액 응고시간 측정용 시약으로서는 LA에 감수성을 나타내는 인지질 의존성의 혈액 응고시간 측정용 시약 또는 측정 수단이면 어느 것이라도 좋고, 프로트롬빈 시간(PT), 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간(APTT), 희석 PT(dPT), 희석 APTT(dAPTT), 카올린 응고시간(KCT) 및 희석 러셀 뱀독시간(dRVVT) 등을 측정하는 공지의 시약을 이용할 수가 있다. 이들 시약 중, 예를 들면, 프로트롬빈 시간(PT)을 측정하는 시약의 주성분은 칼슘 및 조직 트롬보플라스틴이고, 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간(APTT)을 측정하는 시약의 주성분은 인지질, 접촉 인자 활성화제(카올린, 무수 규산, 에라그산 등의 음성 하전체) 및 칼슘이고, 카올린 응고시간(KCT)을 측정하는 시약의 주성분은 카올린 및 칼슘이고, 희석 러셀 뱀독시간(dRVVT)을 측정하는 시약의 주성분은 러셀 뱀독, 인지질이다. 이들 성분은 적당히 독립적인 시약으로서 또는 혼합된 시약으로서 사용할 수 있다. 또, 상기 시약으로서는 모두 시판품을 사용할 수 있다. PT측정용 시약으로서는 예를 들면, COAGPIA(등록상표) PT－S(SEKISUI MEDICAL CO., LTD.), 트롬보체크 PT플러스(Sysmex Corp.) 및 STA 시약 시리즈 PT(Roche Diagnostics GmbH) 등이 시판되고 있다. APTT 측정용 시약으로서는 예를 들면 COAGPIA(등록상표) APTT－N(SEKISUI MEDICAL CO., LTD.), 트롬보체크 APTT－SLA(Sysmex Corp.), APTT 리퀴드 RD 및 PTT　LA시약 "RD"(Roche Diagnostics GmbH) 등이 시판되고 있다. 시약의 형태로서는 사용시에 용해되는 건조 형태, 또는 용액 형태를 들 수가 있다.
이들 시약의 1종 이상과 본 발명의 혈액 응고 인자를 함유하는 완충액 조성물(보조 시약)을 조합하여 킷으로 할 수도 있다.
이들의 혈액 응고시간 측정용 시약 중, PT, APTT 또는 dRVVT가 LA검출 감도의 점에서 바람직하다. 또한, PT 또는 APTT를 측정하는 경우에는 정상 혈장과 피검 혈장의 믹싱 테스트를 채용하는 것이 바람직하다. dRVVT를 측정하는 경우에는 특히 믹싱 테스트를 행하지 않아도 좋다.
본 발명에 이용되는 혈액 응고 인자를 함유하는 완충액 조성물로서는 피검혈액 시료가 결핍하고 있는 것으로 생각되는 혈액 응고 인자의 적어도 1종을 함유하는 완충액 조성물을 들 수 있으며, FII, FVII, FVIII, FIX, FX, FXI 및 FXII로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상을 함유하는 완충액 조성물이 바람직하고, 더욱이 적어도 FII, FVII, FIX 및 FX로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상을 함유하는 완충액 조성물이 바람직하다. 또한 더욱이 PT를 측정하는 경우에는 FII, FVII 및 FX로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상을 함유하는 완충액이 바람직하다. APTT를 측정하는 경우에는 FII, FVIII, FIX, FX, FXI 및 FXII로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상을 함유하는 완충액 조성물이 바람직하고, 특히 FIX 및 FX로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상을 함유하는 완충액 조성물이 바람직하다. 또 dRVVT를 측정하는 경우에는 FII 및 FX로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상을 함유하는 완충액 조성물이 바람직하다. 또, 피검시료에 본 발명의 완충액 조성물을 첨가했을 때에, 당해 완충액 조성물에 의해 시료가 희석되어 시료 중의 혈액 응고 인자 농도가 묽게 함으로써 응고시간에 영향을 주는 것 같은 경우에는, 전술한 완충액 조성물에, 이용하는 시약에 따라 보충이 필요한 혈액 응고 인자를 함유시켜 놓을 수 있다. 예를 들면, APTT, dAPTT 및 KCT에 대해 FVIII, FXI 및 FXII를, PT에 대해 FVII를, dRVVT에 대해 FX를 함유시켜 놓을 수 있다.
여기서 완충액으로서는 HEPES 등의 Good 완충액 등, 공지의 완충액을 적의 이용할 수 있다. 완충액의 pH는 완충액 조성물에 함유되는 혈액 응고 인자를 실활 하지 않는 pH이면 좋고, pH 6~9가 바람직하고, pH 6.5~8.0이 보다 바람직하다. 또 완충액의 농도는 보존중의 완충능이 유지되고 있으면 좋고, 5mM~100mM가 바람직하고, 5mM~50mM가 보다 바람직하다.
당해 완충액 조성물 중의 혈액 응고 인자의 농도는 혈액 시료에 당해 완충액 조성물을 첨가한 후의 혈액 응고 인자의 농도로서 0.01U/㎖~10U/㎖의 범위가 바람직하고, 더욱이 0.1U/㎖~5U/㎖의 범위가 바람직하다. 혈액 시료와 완충액 조성물의 혼합 비율은 완충액 조성물 중의 혈액 응고 인자의 농도를 고려하여 적의 설정하면 좋다. 완충액 조성물에 의한 혈액 시료의 희석 배율로서는 3배 이하가 바람직하고, 2배 이하가 보다 바람직하다.
또, 당해 완충액 조성물에는 혈액 응고 인자의 안정화제로서 공지의 것을 적의 첨가해도 좋다. 예를 들면, 일본국특허공개평 06－050999호 공보에 개시되어 있는 글리시르글리신이나 글리시르글리시르글리신 등을 첨가해도 좋다. 또, 본 발명의 효과를 해치지 않는 한, 보존제나 이온 강도 조정제 등을 적의 첨가해도 좋다.
본 발명 방법에 대해서는 혈액 응고시간의 측정 전 또는 측정시에, 혈액 시료에, 상기 혈액 응고 인자를 함유하는 완충액 조성물을 첨가한다. 여기서, 혈액 응고시간의 측정 전에 완충액 조성물을 첨가하는 것은 혈액 시료의 전처리에 상당한다. 즉, 혈액 시료에 상기 완충액 조성물을 첨가하여 혈액 시료를 전처리하고, 이어서 혈액 응고 측정용 시약을 이용하여 혈액 응고시간을 측정한다. 한편, 혈액 응고시간의 측정시에 첨가하는 것은 혈액 응고 측정용 시약의 일부에 상기 완충액 조성물을 첨가하여, 혈액 응고시간을 측정하는 것에 상당한다. 이들의 첨가 시기 중, 혈액 응고시간의 측정 전에, 혈액 시료에 상기 완충액 조성물을 첨가하는 쪽이, 완충액 조성물에 함유시키는 응고 인자의 보존 안정성을 확보하기 쉬운 점에서 바람직하다.
혈액 응고시간의 측정방법으로서는 예를 들면, 혈액 시료에 칼슘 및 인지질을 함유하는 시약(혈액 응고시간 측정용 시약)을 첨가하여 생기는 혈액 응고 반응에 수반하여 변화하는 투과광 변화, 또는 산란광 변화 등의 광학적 변화나 측정 시료의 점도를 물리적으로 측정함으로써, 응고를 검출하는 방법을 바람직하게 이용할 수 있다.
칼슘으로서는 무기산과 칼슘과의 염을 이용하는 것이 바람직하다. 이러한 칼슘염으로서는 염화칼슘 등을 들 수 있다. 또, 무기산과 칼슘과의 염 이외의 칼슘염으로서는 젖산칼슘을 들 수 있다. 혈액 응고시간 측정용 시약 중의 칼슘의 농도는 혈액 응고시간 측정법의 종류에 따라 적의 설정할 수가 있다. 예를 들면 APTT 측정법의 경우, 20mM~25mM정도이고, PT측정법의 경우, 10mM~12.5mM인 것이 바람직하다.
인지질로서는 종래부터 혈액 응고시간 측정용 시약에 이용되는 것을 바람직하게 이용할 수가 있다. 인지질의 지방산 측쇄는 특히 한정되지 않지만, 팔미틴산, 올레인산, 스테아린산이 바람직하다. 당해 인지질로서는 포스파디딜세린, 포스파디딜에탄올아민, 포스파디딜콜린 등을 들 수 있다. 또, 인지질은 소뇌 유래, 토끼뇌 유래, 사람 태반 유래, 대두 유래 등의 천연의 것, 또는 유전자 조작에 의해 제작된 것이어도 좋다. 측정 시료 중의 인지질의 농도는 예를 들면 APTT 시약중에서 1㎍/㎖~200㎍/㎖, PT시약으로 10㎍/㎖~300㎍/㎖이고, dRVVT 측정 시약으로 1㎍/㎖~300㎍/㎖인 것이 바람직하다.
혈액 응고시간 측정용 시약의 pH는 본 발명의 완충액 조성물과 혼합되었을 때의 pH를 고려하여 적의 설정할 수 있지만, 당해 측정용 시약 자체의 pH로서는 pH 6.0~8.0이 바람직하고, 보다 바람직하기로는 pH 7.0~7.6이고, 종래의 혈액 응고시간 측정용 시약에 이용되는 완충제를 이용하여 적당히 조정할 수 있다. 당해 완충제로서는 예를 들면, HEPES, 또는 TRIS 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
상기의 혈액 응고시간 측정용 시약에는 상기의 성분 이외에, 종래 공지의 혈액 응고시간 측정용 시약에 포함되는 성분을 포함할 수가 있다. 이러한 성분으로서는 예를 들면, 활성화제, 뱀독, 조직 인자 등을 들 수 있다. 활성화제로서는 에라그산, 카올린, 셀라이트, 콜로이드 실리카, 무수 규산, 알루미나, 마그네슘 등을 들 수 있다. 뱀독으로서는 러셀 뱀독, 텍스타린 뱀독(Textarin snake venom), 에커린 뱀독(Ecarin snake venom) 등을 들 수 있다. 조직 인자로서는 토끼뇌 유래, 사람 태반 유래, 소뇌 유래 등의 천연 및 유전자 재조합의 조직 트롬보플라스틴을 들 수 있다.
본 발명 방법은 비특허문헌 1 기재의 혈액 응고 보정 시험(믹싱 테스트)에도 적용할 수가 있다. 즉, 피검혈액 시료에 정상 혈액 시료를 첨가하고, 그 혈액 응고시간이 보정되는 정도를 그래프화해 판정하는 방법으로 적용할 수 있다.
보다 상세하게는 예를 들면, 피검 혈장에, 정상 혈장으로서 Pooled　Normal　Plasma(Precision　Biologic　Inc제; 이하, 'PNP'라고 약칭한다) 또는 본 발명의 완충액 조성물을 1:1로 가하고 희석한 것을 피검시료로 한다. 이 피검시료에 정상 혈장을 첨가하여, 정상 혈장의 비율이 0%, 20%, 50%, 80%, 100%가 되도록 혼합해 조제한 시료를 준비하고, APTT의 측정을 행한다. 그 결과를 그래프(가로축: 혼합한 정상 혈장의 비율 또는 피검 혈장의 비율(%), 세로축: 응고시간(초))에 플로팅하여 당해 그래프의 형상으로부터 시각적으로 판정할 수가 있다.
본 발명 방법을 이용하면, 단순히 앞에서 본 완충액 조성물의 첨가를 실시하는 이외는 종래의 혈액 응고시간의 측정을 행하는 것만으로 와퍼린 복용자, 비타민 K 결핍자 또는 간부전 환자 유래의 혈액 시료이어도, 정확하게 LA의 유무를 검출, 판정할 수가 있다.
상기 혈액 응고 인자를 함유하는 완충액 조성물은 루프스 안티코아귤란트 검출용 혈액 응고시간 측정용 시약과 조합하여 사용하는 보조 시약으로서 이용할 수가 있다.
또, (A) 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 측정용 시약 또는 희석 러셀 뱀독시간 측정용 시약과 (B) 혈액 응고 인자를 함유하는 완충액 조성물을 주성분으로 하는 보조 시약과의 조합은 루프스 안티코아귤란트 검출용 혈액 응고시간 측정용 시약 킷으로서 유용하다.
[실시예]
하기 실시예에 의해 본 발명을 한층 더 상세히 설명하나, 본 발명은 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1
피검 혈장을 표 1 기재의 보조 시약에서 1:1에 희석한 것을 샘플로 하고, 통상의 혼합 시험을 실시하여, 그래프에 있어서의 커브의 형상을 비교했다.
＜측정 항목＞
(1) APTT 스크리닝 시험
PTT　LA시약 "RD"(Roche Diagnostics GmbH)을 사용하여 혈액 응고 자동 분석 장치 STA－R(Roche Diagnostics GmbH)에서 측정을 실시했다. 판정에는 시약의 첨부 문서에 기재되어 있는 컷 오프값을 사용했다. 당해 시약은 인지질인 세파린, 접촉 인자 활성화제(음성 하전체)인 실리카를 함유하는 PTT　LA시약과 별도, 자체 제작한 염화칼슘 용액을 사용하여 측정을 행하는 것이고, 본 발명의 혈액 응고 인자 함유 완충액 조성물(보조 시약)과 조합하여 본 발명의 방법으로 사용하는 것이 가능한 것이다.
(2) dRVVT 시험
LA테스트 「GRADIPORE」(Medical & Biological Laboratories Co., Ltd.) 시약을 사용하여 혈액 응고 자동 분석 장치 STA－R에서 측정을 실시했다. 판정에는 시약의 첨부 문서에 기재되어 있는 컷 오프값을 사용했다. 당해 시약은 러셀 뱀독과 인지질을 함유하는 시약 1, 러셀 뱀독과 과잉량의 인지질을 함유하는 시약 2로 구성되고 있으며, 본 발명의 혈액 응고 인자 함유 완충액 조성물(보조 시약)과 조합하여 본 발명의 방법에 사용하는 것이 가능한 것이다.
(3) 인지질 중화법시험
STACLOT LA(Roche Diagnostics GmbH) 시약을 사용하여 혈액 응고 분석 장치 ST4(Roche Diagnostics GmbH)에서 측정을 실시했다. 판정에는 시약의 첨부 문서에 기재되어 있는 컷 오프값을 사용했다.
(4) 혼합 시험
PTT　LA시약 "RD"(Roche Diagnostics GmbH)을 사용하여, 혈액 응고 자동 분석 장치 CP2000(SEKISUI MEDICAL CO., LTD.)에서 측정을 실시했다. 정상 혈장으로서 Pooled　Normal　Plasma(이하 PNP, Precision　Biologic　Inc.)를 사용했다. 샘플 혼합 비율은 0%, 10%, 20%, 50%, 100%로 설정하고, CP2000의 믹싱 테스트 기능을 사용하여 자동 희석에서 측정을 행했다. 판정은 그래프를 묘화하고, 위쪽이 볼록이면 양성으로 했다. 판정이 곤란한 것은 판정 보류로 했다.
(5) 혼합 시험 변법
피검 혈장을 PNP 또는 후술의 보조 시약 1－4에서 1:1 희석한 것을 샘플 컵으로 취하고, CP2000에 세팅하고, (4)와 동일하게 측정을 실시했다. 판정은 그래프를 묘화하고, 위쪽이 볼록하면 양성으로 했다. 판정이 곤란한 것은 판정 보류로 했다.
＜본 발명의 완충액 조성물: 보조 시약＞
　HBS(50 mM　HEPES　pH 7.5, 150mM 염화나트륨)을 베이스로 하고, 표 1에 나타낸 혈액 응고 인자를 첨가하여 각 보조 시약을 조제했다. 혈액 응고 인자는 모두 Haematologic　Technologies　Inc. 의 것을 사용했다.
[표 1]
Figure 112013114945866-pct00001

보조 시약 조성
＜피검 혈장＞
피검 혈장은 A, B 모두 와퍼린의 투여를 받고 있는 환자로부터 채취한 혈장이다.
＜결과＞
표 2에 나타난 바와 같이, 혈장 A는 APTT 스크리닝 시험, dRVVT 시험 및 인지질 중화법의 모든 LA검사에서 양성으로 되었다. 혈장 B는 APTT 스크리닝 시험, dRVVT 시험에서 양성으로 되었다.
[표 2]
Figure 112013114945866-pct00002
표 3중 미처리의 란, 도 2 좌도, 도 3 좌도에 나타낸 바와 같이, 혈장 A, B 모두 혼합 시험은 아래쪽으로 볼록한 모양의 경향으로 되어, LA 음성이었다. 혼합 시험 변법 중, 일반적으로 추천되고 있는 정상 혈장(PNP)을 사용하는 방법에서는 혈장 A는 거의 직선에 가까운 S자형의 그래프로 되어 위쪽으로 볼록한지 또는 아래쪽으로 볼록한 판정하기 곤란했다 (표 3 중, 정상혈장 첨가의 란, 도 2 우도). 이것에 대해, 본 발명의 보조 시약 1－4를 사용했을 경우는 혈장 A는 명료한 위쪽으로 볼록한 그래프로 되어, 용이하게 양성으로 판정할 수 있었다(표 3 중, 보조 시약의 란, 도 4). 혈장 B에 대해서는 어느 경우도 명료하게 아래쪽으로 볼록하게 되어 음성으로 판정할 수 있었다(표 3중 보조 시약의 란, 도 5).
[표 3]
혼합시험 및 혼합시험 변법
Figure 112013114945866-pct00003
본 발명에 의해, 혈장 A의 혼합 시험의 음성 판정은 와퍼린 투여에 의한 위음성이고, 실제로는 LA 양성인 것이 용이하게 판단할 수 있었다. 이것은 종래의 혼합 시험 또는 혼합 시험 변법으로 될 수 없었던 것이다. 또, 혈장 B에 대해서는 APTT 스크리닝 시험, dRVVT 시험에서 양성으로 되었지만, 어느 것도 와퍼린 투여에 의한 위양성(僞陽性, false positive)이고, 실제로는 LA 음성인 것이 판단할 수 있었다.
실시예 2
피검 혈장 9.5용량에 대해, 후기 보조 시약 0.5용량을 첨가, 혼합하여 측정 시료를 조제하고, dRVVT 시험을 실시하여 응고시간의 비를 구했다.
＜측정 항목＞
(1) dRVVT 시험
혈액 응고시간 측정용 시약으로서 DVVtest(등록상표) 및 DVVconfirm(모두 Sekisui Diagnostics, LLC)를 사용하고, 혈액 응고 자동 분석 장치 CP2000(SEKISUI MEDICAL CO., LTD.)에서, 측정 시료의 인큐베이션 시간 216초, APTT 응고점 파라미터를 사용하여, dRVVT 시험을 행했다. 본 실시예에서의 컷 오프값(t/c)은 1.3 이하로 하여, LA의 검출, 판정을 행했다. 당해 시약은 러셀 뱀독, 인지질 및 칼슘을 함유하는 DVVtest(등록상표) 시약, 러셀 뱀독, 과잉량의 인지질 및 칼슘을 함유하는 DVVconfirm 시약으로부터 구성되어 있으며, 본 발명의 혈액 응고 인자 함유 완충액 조성물(보조 시약)과 조합하여 본 발명의 방법에 사용하는 것이 가능한 것이다.
＜본 발명의 완충액 조성물: 보조 시약＞
FX의 농도가 표 4의 행에 기재된 농도의 20배 농후, FII의 농도가 표 4의 열에 기재된 농도의 20배 농후하게 되도록, FX, FII를 조합하고, HBS에 용해하여 28 같은 보조 시약을 조제했다. FX, FII도 Haematologic　Technologies　Inc. 의 것을 사용했다.
＜피검 혈장＞
LA 음성에서 와퍼린의 투여가 없는 혈장: L(－) W(－) 혈장으로서 AK CALIBRANT A(Sysmex Corp.)를, LA 음성 와퍼린의 투여가 있는 혈장: L(－) W(＋) 혈장으로서 AK CALIBRANT D(Sysmex Corp.)를, LA 양성으로 와퍼린의 투여가 없는 혈장: L(＋) W(－) 혈장으로서 Lupus　anticoagulant　plasma(TRINA 사제)를, LA 양성으로 와퍼린의 투여가 있는 혈장: L(＋) W(－) 혈장으로서 Lupus　anticoagulant　plasma(Busicom, Inc.)를 사용했다.
＜결과＞
결과를 표 4에 나타냈다.
FII, FX도 첨가되어 있지 않은(0U/㎖) 경우,
L(－) W(－)의 혈장은 LA 음성;
L(－) W(＋)의 혈장은 LA 음성;
L(＋) W(－)의 혈장은 LA 양성;
L(＋) W(＋)의 혈장은 LA 음성;
으로 판정되고, L(＋) W(＋)의 혈장에 대해서, LA 위음성(false negative)의 결과가 얻어졌다.
또한, L(－) W(＋)의 혈장은 LA 음성인 것도 있었지만, t/c값이 0.62로 이상(異常) 값을 나타냈다.
이것에 대해서, 각 피검 혈장에 FII, FX의 어느 1종 이상을 첨가했을 경우, L(－) W(－)의 혈장, L(－) W(＋)의 혈장, 및 L(＋) W(－)의 혈장의 판정 결과를 유지한 채로, L(＋) W(＋)의 혈장의 t/c값만을 컷 오프값 이상으로 증가시켜, 얻어져야 하는 LA 양성의 결과가 얻어졌다.
또, L(－) W(＋)의 혈장에 FII, FX의 어느 1종 이상을 첨가했을 경우, t/c값이 1 부근에 가까워져 와퍼린 투여의 영향을 저감할 수 있는 것이 확인되었다. 이 성적과 L(＋) W(＋)의 혈장의 성적을 감안하면, 본 발명의 방법을 이용하는 dRVVT 시험은 와퍼린 투여중에서도 LA를 정확하게 검출할 수 있는 것을 나타내고 있으며, 예를 들면, 와퍼린 투여중의 LA치료 효과의 모니터 등에 지극히 유용하다.
[표 4]
Figure 112013114945866-pct00004
본 발명의 방법에 의하면, dRVVT 시험에서 음성(위음성)으로 판정되는 일이 있는 LA 양성(＋)에서, 또한 와퍼린의 투여가 있는(＋) 피검자의 혈장(L(＋) W(＋)의 혈장)를 측정했을 경우에도, 와퍼린 투여의 영향을 받지 않고, LA 양성이라고 하는 본래의 판정을 하는 것이 가능했다.

Claims (9)

  1. 혈액 응고시간의 측정 전 또는 측정시에 혈액 시료에 FII, FVII, FVIII, FIX, FX, FXI 및 FXII로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혈액 응고 인자를 함유하는 완충액 조성물을 첨가하여 혈액 응고 시간을 측정하는 것을 특징으로 하는 루프스 안티코아귤란트의 검출용 혈액 응고 시간의 측정방법.
  2. 삭제
  3. 제1항에 있어서, 혈액 시료가 전혈 또는 혈장인 루프스 안티코아귤란트의 검출용 혈액 응고 시간의 측정방법.
  4. 제1항 또는 제3항에 있어서, 혈액 응고시간의 측정 전에, 혈액 시료에 FII, FVII, FVIII, FIX, FX, FXI 및 FXII로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혈액 응고 인자를 함유하는 완충액 조성물을 첨가하는 루프스 안티코아귤란트의 검출용 혈액 응고 시간의 측정방법.
  5. 제1항 또는 제3항에 있어서, 혈액 시료가 와퍼린 복용자, 비타민 K결핍자 및 간부전 환자로부터 선택되는 사람 유래인 루프스 안티코아귤란트의 검출용 혈액 응고 시간의 측정방법.
  6. 제1항 또는 제3항에 있어서, 혈액 응고시간의 측정 수단이 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 또는 희석 러셀 뱀독시간인 루프스 안티코아귤란트의 검출용 혈액 응고 시간의 측정방법.
  7. FII, FVII, FVIII, FIX, FX, FXI 및 FXII로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혈액 응고인자를 함유하는 완충액 조성물을 주성분으로 하는 루프스 안티코아귤란트 검출용 혈액 응고시간 측정용 시약과 조합하여 사용하는 보조 시약.
  8. 제7항에 있어서, 루프스 안티코아귤란트 검출용 혈액 응고시간 측정용 시약이 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 또는 희석 러셀 뱀독시간의 측정에 이용되는 것인 보조 시약.
  9. 이하의 (A) 및 (B)를 포함하는 루프스 안티코아귤란트 검출용 혈액 응고시간 측정용 시약 킷.
    (A) 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 측정용 시약 또는 희석 러셀 뱀독시간 측정용 시약,
    (B) 혈액 응고 인자를 함유하는 완충액 조성물을 주성분으로 하는 보조 시약.
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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107430139A (zh) 2015-03-20 2017-12-01 株式会社日立高新技术 自动分析装置以及自动分析方法
JP6871673B2 (ja) * 2015-03-31 2021-05-12 学校法人東日本学園 血液検体を判定するための方法、装置及びコンピュータプログラム、並びに血液検体分析装置
JP6499488B2 (ja) * 2015-03-31 2019-04-10 学校法人東日本学園 凝固時間の測定方法、ループスアンチコアグラントの存否の判定方法及びループスアンチコアグラント検出用試薬キット
AU2017257267B2 (en) 2016-04-25 2020-05-14 Instrumentation Laboratory Company Method and kit for identifying lupus anticoagulant (LA) associated with antiphospholipid syndrome
JP6837851B2 (ja) * 2017-01-31 2021-03-03 シスメックス株式会社 血液検体の判定方法、並びに血液検体の分析のための装置及びコンピュータプログラム
CN108761104A (zh) * 2018-05-21 2018-11-06 深圳优迪生物技术有限公司 凝血激活剂及其应用
CN109709344A (zh) * 2018-12-29 2019-05-03 贵州金玖生物技术有限公司 一种活化凝血检测试剂、其制备方法及其应用
JP7402468B2 (ja) * 2019-01-31 2023-12-21 積水メディカル株式会社 血液検体の血液凝固特性の分析方法
CN112557665B (zh) * 2020-11-10 2023-06-09 北京美创新跃医疗器械有限公司 一种狼疮抗凝物的确认试剂及其制备方法
CN114778858A (zh) * 2022-06-23 2022-07-22 深圳市帝迈生物技术有限公司 一种狼疮抗凝物检测试剂盒

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030044872A1 (en) 1999-12-24 2003-03-06 Masahiro Okuda Means of stabilizing compositions and reagents

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2461969A1 (de) 1974-12-31 1976-07-08 Behringwerke Ag Stabiles blutplasma, verfahren zu dessen herstellung und seine verwendung als vergleichsplasma bei gerinnungs- untersuchungen
JPH0650999B2 (ja) 1988-09-12 1994-07-06 日本商事株式会社 血液凝固因子安定化法
US4877741A (en) * 1988-10-24 1989-10-31 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Air Force Treatment of human plasma with brown recluse spider toxin to emulate a lupus anticoagulant
DE69033033T2 (de) 1989-07-20 1999-10-28 Analytical Control Systems, Inc. Verbesserte kontrollverfahren für stabile blutkoagulation
JPH06324048A (ja) * 1993-05-15 1994-11-25 Shimizu Seiyaku Kk 血液凝固能検査用試薬及び血液凝固能の検査方法
DE19749197A1 (de) * 1997-11-07 1999-05-12 Dade Behring Marburg Gmbh Verfahren zur Bestimmung des antikoagulatorischen Potentials einer Probe
CN1126758C (zh) * 2001-08-16 2003-11-05 四川高维系统工程技术有限公司 凝血因子ⅸ复合物的制备方法
CN101675991A (zh) * 2001-12-21 2010-03-24 诺和诺德医疗保健公司 因子ⅶ多肽的液体组合物
CN1761747A (zh) * 2003-03-18 2006-04-19 诺和诺德医疗保健公司 生产含有gla残基的丝氨酸蛋白酶的方法
EP1707634A1 (en) 2005-03-29 2006-10-04 Octapharma AG Method for isolation of recombinantly produced proteins
EP1920068A4 (en) 2005-07-28 2008-08-13 American Diagnostica Inc LUPIC ANTICOAGULANT TEST
CN101221189B (zh) * 2007-01-12 2012-08-15 上海太阳生物技术有限公司 一种用于测定活化部分凝血活酶时间aptt的体外诊断试剂盒
CN101861142A (zh) * 2007-11-22 2010-10-13 诺沃-诺迪斯克保健股份有限公司 含醛化合物对液体配制因子VII(a)多肽的稳定化
ES2427890T3 (es) * 2007-12-21 2013-11-04 Cangene Corporation Formulaciones estabilizadas de factor IX que contienen trehalosa
CA2727351C (en) * 2008-06-18 2017-10-31 Sekisui Medical Co., Ltd. Method for determining cause of the prolongation of blood coagulation time
SI2300497T1 (sl) 2008-06-24 2013-02-28 Octapharma Ag Postopek za äťiĺˇäťenje koagulacijskega faktorja viii

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030044872A1 (en) 1999-12-24 2003-03-06 Masahiro Okuda Means of stabilizing compositions and reagents

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Tumor biology, 2008, Vol. 29, pp 224-230.

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