CN108761104A - 凝血激活剂及其应用 - Google Patents
凝血激活剂及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108761104A CN108761104A CN201810488554.9A CN201810488554A CN108761104A CN 108761104 A CN108761104 A CN 108761104A CN 201810488554 A CN201810488554 A CN 201810488554A CN 108761104 A CN108761104 A CN 108761104A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- coagulation
- activator
- optionally
- kit
- present
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 title claims abstract description 72
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 title claims abstract description 72
- 230000004913 activation Effects 0.000 title claims abstract description 68
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims abstract description 47
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 46
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 claims abstract description 10
- -1 phosphatide Substances 0.000 claims abstract description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 29
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 26
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 23
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 14
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 12
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 claims description 11
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical group O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 claims description 9
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 9
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 9
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 claims description 7
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 claims description 7
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 claims description 7
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 claims description 7
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 claims description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 3
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 2
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 claims description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 2
- 229940067626 phosphatidylinositols Drugs 0.000 claims description 2
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 claims description 2
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 claims description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 2
- 229940031098 ethanolamine Drugs 0.000 claims 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 claims 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 claims 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N monoethanolamine hydrochloride Natural products NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 55
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 abstract 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 48
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 38
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 22
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 238000007820 coagulation assay Methods 0.000 description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 10
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 10
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 10
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 6
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 6
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 6
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 6
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 5
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 5
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 5
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 5
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- CEAZRRDELHUEMR-UHFFFAOYSA-N gentamicin Chemical class O1C(C(C)NC)CCC(N)C1OC1C(O)C(OC2C(C(NC)C(C)(O)CO2)O)C(N)CC1N CEAZRRDELHUEMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AFSDNFLWKVMVRB-UHFFFAOYSA-N Ellagic acid Chemical compound OC1=C(O)C(OC2=O)=C3C4=C2C=C(O)C(O)=C4OC(=O)C3=C1 AFSDNFLWKVMVRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ATJXMQHAMYVHRX-CPCISQLKSA-N Ellagic acid Natural products OC1=C(O)[C@H]2OC(=O)c3cc(O)c(O)c4OC(=O)C(=C1)[C@H]2c34 ATJXMQHAMYVHRX-CPCISQLKSA-N 0.000 description 2
- 229920002079 Ellagic acid Polymers 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035992 Postmortem Changes Diseases 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229960002852 ellagic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000004132 ellagic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000006624 extrinsic pathway Effects 0.000 description 2
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 2
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- FAARLWTXUUQFSN-UHFFFAOYSA-N methylellagic acid Natural products O1C(=O)C2=CC(O)=C(O)C3=C2C2=C1C(OC)=C(O)C=C2C(=O)O3 FAARLWTXUUQFSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 2
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 2
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 2
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 208000004221 Multiple Trauma Diseases 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000006502 antiplatelets effects Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005660 chlorination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000005260 corrosion Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000006623 intrinsic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 125000001095 phosphatidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 238000013102 re-test Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/22—Haematology
- G01N2800/224—Haemostasis or coagulation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明具体涉及一种凝血激活剂及其应用，尤其涉及一种凝血激活剂以及一种试剂盒。所述凝血激活剂包括：内源性凝血激活剂，外源性凝血激活剂，磷脂、缓冲盐和保护剂。所述试剂盒包括所述的凝血激活剂。本发明激活凝血剂能够有效解决了现有同类试剂保质期短、需要冻干操作、试剂复溶不完全、液体试剂干涸等问题。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断试剂技术领域，具体涉及一种凝血激活剂及其应用，尤其涉及一种凝血激活剂、凝血激活剂的制备方法以及一种试剂盒。
背景技术
凝血是一个涉及多种因子相互作用的动态过程，包括凝血因子、酶、纤维蛋白、激活剂、抑制剂和血液细胞等，人体凝血功能评估是治疗出血患者和血栓患者的必备环节。在临床上，凝血仪可以检测患者的凝血酶原时间、部分凝血活酶时间、凝血酶时间和纤维蛋白原，为医生用药提供一定依据，但是不能直观的观测患者整体凝血全貌，也不涉及血液细胞成分和纤维蛋白溶解活性，造成传统凝血四项检测具有其局限性。随着临床体外诊断技术的研究和发展，凝血检测也越来越受重视，血栓弹力图作为凝血检测的重要手段，已被广泛应用于临床诸多领域。
血栓弹力图是由血栓弹力图仪描绘的血样凝结过程的特殊图形，利用全血样本即可检验，无需特殊处理血样，是一种方便、快捷、准确、床旁即可操作检测的血液流变学检测方法。通过对血栓弹力图的监测和分析，可以评估患者的凝血特性，协助临床医师对患者凝血状况做出准确判断。血栓弹力图提供了由凝血启动到纤维蛋白形成、血小板聚集、纤维蛋白联结至血凝块形成及纤维蛋白溶解的全过程信息，对凝血因子、纤维蛋白原、血小板聚集功能以及纤维蛋白溶解等方面进行凝血全貌的检测和评估，其作为一种监测凝血全貌的床旁快速检测系统，通过微量血样的检测，广泛应用于临床各科室，主要针对凝血状态的研究，具有真实还原凝血全貌、敏感度高、检测精准、结果直观和数据详细等特点，较常规凝血检查能更灵敏、更快速反映凝血异常。血栓弹力图在抗血小板功能的抑制情况及预测抗血小板药物治疗下的缺血事件能力不亚于金标准比浊法，甚至更优于比浊法同时具有试剂统一、操作标准化、易于推广的优点。
然而现有的利用血栓弹力图检测凝血的时间较长，会病人的病情有所耽误，不适于急诊治疗。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于快速检测人体血液凝集的血栓弹力图激活凝血检测试剂盒。为此，该发明还将提供该试剂盒的制备方法及使用方法。
本发明是基于发明的如下发现所实现的：
血栓弹力图激活凝血也称快速血栓弹力图(r-TEG)，相对于血栓弹力图普通杯只激发内源性凝血机制进行凝血，r-TEG能同时激活内源性和外源性凝血通路，时间更短，因此可能更适合用于急诊科外伤后凝血功能的异常的诊断和实时地检测。瑞士伯尼尔大学医院对多发外伤的患者进行r-TEG、传统TEG和传统凝血检测进行对比检测，结果表明r-TEG出结果中位时间为19.2min明显快于传统TEG的29.9min和传统血凝检测的34.1min。
而目前常见的血栓弹力图激活凝血试剂盒有乐普医疗的激活凝血检测试剂盒(粘度测定法)和Haemonetics的激活凝血检测试剂盒(凝固法)，乐普医疗的激活凝血检测试剂盒(粘度测定法)有效期12个月，采用了冻干工艺，使用时需要复溶，在生产和使用过程中操作复杂，成本高，复溶不完全的不足。而Haemonetics的激活凝血检测试剂盒(凝固法)的有效期只有7个月，保质期太短。
因此，如果能找到合适的凝血激活剂，则能够实现快速凝血，利用血栓弹力图反映凝血状况，进行凝血检测，可以极大的节省凝血检测的时间，尤其是适于对急诊病人进行检测。
基于上述目的，本发明提供了如下技术方案：
根据本发明的第一方面，本发明提供了一种凝血激活剂，所述凝血激活剂包括：内源性凝血激活剂，外源性凝血激活剂，磷脂、缓冲盐和保护剂。
本发明提供了一种凝血激活剂，用来作为血栓弹力图激活凝血检测试剂，所述激活剂中同时含有内源性凝血激活剂以及外源性凝血激活剂，能够同时激活内源性和外源性凝血机制，同时在激活剂中同时加入盐类、磷脂、保护剂等成分，能够起到保障凝血的功能。采用本发明的凝血激活剂进行血栓弹力图激活凝血检测，在普通杯中即可以进行，而且不需要进行其他特殊处理，例如冻干成粉末，方便快捷。
根据本发明的一些实施例，本发明所述凝血激活剂可以进一步附加如下技术特征：
根据本发明的一些实施例，所述内源性凝血激活剂选自高岭土、鞣花酸、白陶土和硅藻土中的一种或几种。
根据本发明的一些实施例，所述内源性凝血激活剂的浓度为0.5-10mg/mL。
根据本发明的一些实施例，所述外源性凝血激活剂为组织因子。
根据瀑布学说，血液凝固分为外源性和内源性两条途径，本发明通过内源性凝血激活剂激活内源性途径，通过外源性凝血激活剂利用组织因子激活外源性途径。通过激活内源性和外源性两条途径，可以更快的凝血，缩短凝血快速检测的时间。而且由于内源性激活的凝血时间较外源性长，通过对比凝血时间，在临床上可以用来分析外源性凝血因子或者是内源性凝血因子对于血凝的影响。
根据本发明的一些实施例，所述外源性凝血激活剂的浓度为0.1-1mg/mL。由此，可以很好的激活外源性凝血途径。
根据本发明的一些实施例，所述磷脂选自磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇中的一种或几种，优选为含有磷脂酰胆碱：磷脂酰乙醇胺以及磷脂酰丝氨酸质量比为1：1的磷脂混合物。通过这几类磷脂，可以很好的激活凝血内源途径，尤其是利用含有磷脂酰胆碱：磷脂酰乙醇胺以及磷脂酰丝氨酸质量比为1：1的磷脂混合物，经验证对于内源性凝血激活的效果很好。
根据本发明的一些实施例，所述磷脂的浓度为1-10mg/L。
根据本发明的一些实施例，所述保护剂选自牛血清白蛋白、酪蛋白、人血清白蛋白中的一种或几种。在凝血激活剂中加入蛋白质成分做为保护剂，蛋白质具有一定的缓冲能力，同时能够提供一种很好的稳定性环境，以保护凝血激活剂中的其他成分不被氧化或者造成基团失活。
根据本发明的一些实施例，所述保护剂的浓度为1-20mg/mL。
根据本发明的一些实施例，所述缓冲盐中含有盐分的质量百分比为0.1％～1％。盐分在该缓冲盐中的浓度(即质量百分比)为0.1～1％时，可以发挥缓冲盐的效果。
根据本发明的一些实施例，所述盐分选自氯化钠、氯化钾和氯化钙中的一种或几种。
根据本发明的一些实施例，所述缓冲盐中进一步包括缓冲液，所述缓冲液选自Tris、HEPES、PBS、甘氨酸、MOPS中的一种或几种。
根据本发明的一些实施例，所述缓冲液的浓度为10-100mmol/L。
根据本发明的一些实施例，所述激活剂进一步包括防腐剂。
根据本发明的一些实施例，所述防腐剂选自Proclin300、山梨酸钾和对羟基苯甲酸甲酯一种或几种。
根据本发明的一些实施例，所述防腐剂的质量百分比为0.01％-0.1％。防腐剂在激活剂中的浓度(即质量百分比)为0.01％-0.1％，可以发挥极好的防腐效果。
根据本发明的第二方面，本发明提供了一种激活剂的制备方法，所述激活剂为根据本发明第一方面所述的激活剂，所述制备方法包括如下步骤：
向缓冲液中加入盐、保护剂以及磷脂，搅拌均匀；
然后加入内源性凝血激活剂和外源性凝血激活剂，搅拌均匀；
加入防腐剂，搅拌均匀，得到所述激活剂。
根据本发明的第三方面，本发明提供了一种试剂盒。所述试剂盒包括根据本发明第一方面的激活剂。
根据本发明的一些实施例，本发明所述的试剂盒可以进一步附加如下技术特征：
根据本发明的一些实施例，所述试剂盒进一步包括氯化钙溶液。
根据本发明的一些实施例，所述氯化钙的浓度为0.1mol/L-1mol/L。
根据本发明的一些实施例，所述试剂盒进一步包括样品杯。试剂盒中含有用来装载检测样品的样品杯，可以方便检测。
本发明通过研制配套试剂，利用激活剂同时激活内源性和外源性凝血途径，在血栓弹力图仪上快速准确地检测出血液的完整凝集过程，本发明试剂盒有性能稳定、重复性好、保质期长、操作简单等特点。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1为根据本发明的一个实施例提供的激活凝血试剂检测血液样本血栓弹力图的方法流程示意图；
图2为根据本发明的一个实施例提供的激活凝血试剂与普通杯检测血样样本对比叠加示意图；
图3为根据本发明的一个实施例提供的激活凝血试剂与乐普公司生产的激活凝血试剂检测血液样本对比叠加示意图；
图4为根据本发明的一个实施例提供的激活凝血试剂检测质控的血栓弹力图示意图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
为了使本领域技术人员更容易理解本发明，下面对本发明中的某些术语进行解释。本领域技术人员应该理解的是，这些术语的解释仅仅是为了更好的理解本发明，而不应作为对本发明的限制。
凝血级联由被认为是启动正常凝血的主要方式的“外源性”途径和有助于扩大凝血响应的“内源性”途径组成。当血液与一种创伤后暴露于或表达在组织上的凝血因子的辅因子——组织因子接触时，启动外源性途径的活化。
在本文中，所述“内源性凝血激活剂”指的是能够启动内源性凝血因子凝血活性的成分，例如高磷土，鞣花酸等。
在本文中，所述“外源性凝血激活剂”指的是能够启动外源性凝血活性的成分，例如组织因子。
在本发明的一种具体实施方式中，本发明提供了一种激活剂的制备方法，包括如下步骤：
向缓冲盐中加入保护剂以及磷脂，搅拌均匀；
然后加入内源性凝血激活剂和外源性凝血激活剂，搅拌均匀；
加入防腐剂，搅拌均匀，得到所述激活剂。
在本发明的一种具体实施方式中，本发明提供了一种凝血激活剂的制备方法，包括如下步骤：
S1，配制10-100mmol/L的缓冲溶液，调节pH值至6-8；
S2，向上述S1中依次加入0.1％-1％盐，1-20mg/ml保护剂，1-10mg/L磷脂混合物，搅拌均匀；
S3，在上述S2中加入0.5-10mg/ml内源性激活剂和0.1-1mg/ml组织因子，搅拌均匀；
S4，在上述S3中加入0.01％-0.1％防腐剂，搅拌均匀后进行分装，存放在2-8℃环境。
在本发明的又一种具体实施方式中，本发明提供了一种氯化钙溶液的制备方法，包括：称取氯化钙配制成最终浓度0.1mol/L-1mol/L溶液，再加入0.01％-0.1％防腐剂，得到氯化钙溶液。
在本发明的一种具体实施方式中，本发明提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括凝血激活剂、氯化钙溶液、以及样品杯。由此，可以利用本发明的试剂盒实现对于血栓弹力图激活凝血检测。在实际应用过程中，对于氯化钙溶液，本领域技术人员也可以根据需要现配现用，对于样品杯也可以用其他合适的空的容器代替。
在本发明另一种具体实施方式中，本发明提供了一种试剂盒在血栓弹力图激活凝血检测领域中的应用，所述应用包括：
(1)将血栓弹力图仪测试通道上装载上样品杯；
(2)将凝血激活剂和氯化钙加入到样品杯杯底；
(3)将枸橼酸钠抗凝全血加入样品杯中，混合均匀，测试。
利用本发明的试剂盒进行血栓弹力图激活凝血检测，整个测试过程仅需要10-20min，如需观察纤溶过程，时间应延长至1h。可以大大节省凝血检测时间。采用本发明的试剂盒可以配合已有的血栓弹力图仪进行检测，例如可以配合UD-T5000血栓弹力图仪进行检测，方便快捷。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
其中，液体生物防腐剂(Proclin 300)，含量98％，厂家：Sigma；
牛血清白蛋白，厂家：Proliant Biologicals,Inc；
高岭土试剂，厂家：深圳优迪生物技术有限公司；
市购的血栓弹力图检测试剂盒，厂家：北京乐普医疗科技有限责任公司；
组织因子，厂家：太原博奥特生物技术有限公司
磷脂，Sigma。
实施例1
本实施例提供了按照如下配方配制凝血激活剂，包括如下各组：
实验组1按照如下步骤制备得到凝血激活剂：
步骤(1)：PBS缓冲液的制备：称取磷酸氢二钠5g，磷酸二氢钠0.6g，氯化钠8g，氯化钾0.2g，加入1000mL纯化水，搅拌使其充分溶解，调节pH值至7.0；
步骤(2)：在步骤(1)的缓冲液中加入20g牛血清白蛋白，10g磷脂混合物(包含磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸的质量比为1：1：1)搅拌使其充分溶解；
步骤(3)：在步骤(2)的溶液中加入5.0g高岭土和1.0g组织因子，搅拌使其充分溶解，调节pH为7.0；
步骤(4)：在步骤(3)中的溶液中加入Proclin300 1.0g和0.5g庆大霉素，搅拌使其充分溶解，制成凝血激活剂。其中庆大霉素主要是用来防止杂菌的污染。
将制备得到的凝血激活剂分装成20μL/支。
实验组2按照如下步骤制备得到凝血激活剂：
步骤(1)：Tris缓冲液的制备：称取三羟甲基氨基甲烷2.4g，氯化钠8g，氯化钾0.2g，加入1000ml纯化水，搅拌使其充分溶解，调节pH值至7.0；
步骤(2)：在步骤(1)的缓冲液中加入15g牛血清白蛋白，10g磷脂混合物(包含磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸的质量比为1：1：1)搅拌使其充分溶解；
步骤(3)：在步骤(2)的溶液中加入3.0g高岭土和1.5g组织因子，搅拌使其充分溶解，调节pH为7.0；
步骤(4)：在步骤(3)中的溶液中加入Proclin300 1.0g和0.5g庆大霉素，搅拌使其充分溶解，制成凝血激活剂。
将制备得到的凝血激活剂分装成20μL/支。
实验组3按照如下步骤制备得到凝血激活剂：
步骤(1)：HEPES缓冲液的制备：称取4-羟乙基哌嗪乙磺酸4.7g，氯化钠7g，氯化钾0.5g，加入1000ml纯化水，搅拌使其充分溶解，调节pH值至8.0；
步骤(2)：在步骤(1)的缓冲液中加入10g牛血清白蛋白，12g磷脂混合物(包含磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸的质量比为1：1：1)搅拌使其充分溶解；
步骤(3)：在步骤(2)的溶液中加入6.0g高岭土和0.5g组织因子，搅拌使其充分溶解，调节pH为7.0；
步骤(4)：在步骤(3)中的溶液中加入Proclin300 1.0g和0.5g庆大霉素，搅拌使其充分溶解，制成凝血激活剂。
将制备得到的凝血激活剂分装成20μL/支。
同时发明人在实验过程中发现，如果在所制备的激活剂中不含有保护剂，即例如不含有牛血清白蛋白，经过长期放置以后进行长期稳定性测试，激活剂的功能大大降低。
实施例2
本实施例2提供了几种试剂盒，所述试剂盒包括凝血激活剂、氯化钙溶液以及样品杯。
其中，所述凝血激活剂分别为实验组1-3制备得到的凝血激活剂。
所述氯化钙溶液的浓度为0.2M：称取22.2g氯化钙加入到1000mL生理盐水中，搅拌使其充分溶解，配成终浓度为0.2M的氯化钙溶液。然后分装成1mL/支。
样品杯为空的容器，用来装载检测样本以及检测试剂，包括血液样本，凝血激活剂以及氯化钙溶液。
分别按照如上，得到第一试剂盒，第二试剂盒，第三试剂盒，第四试剂盒，第五试剂盒以及第六试剂盒。
然后将试剂盒4℃冷藏放置。
实施例3激活凝血检测试剂的有效性检测
选取不同凝血速度的5份新鲜全血样本，分别用本发明实施例2制备得到的试剂盒和已上市的血栓弹力图试剂盒(普通杯)对样本进行测定，将所得结果进行对比。
其中，血栓弹力图(普通杯)检测试剂盒(对比试剂)：R1为高岭土试剂，R2为CaCl2试剂，以及普通杯，厂家为北京乐普医疗科技有限责任公司，试剂盒批号为17SH0212。普通杯含有一些基本的用于血栓弹力图检测的试剂，通常含有高岭土试剂。
对比试剂采用其试剂盒对应的流程进行操作。
针对实施例2中获得的试剂盒，如前所述，测定流程参照图1所示，具体如下：
S1.将冷藏的试剂常温放置，恢复至室温。
S2.打开UD-T5000的相应软件，输入测试样本信息，并在测试类型中选择“CRT-CitratedRapidTEG”。
S3.在血栓弹力图仪测试通道上装载样品杯。
S4.移取20μL氯化钙溶液和10μL凝血激活剂加入样品杯杯底。
S5.移取340μL枸橼酸钠抗凝全血加入样品杯中，用移液枪吸打3次。
S6.将样品杯推至测试位置，测试杆拨至测试位，并在软件上点击“开始”按钮进行测试。
以第一试剂盒为例，测定R值，5份样本的结果如表1。其中R(min)指的是血液放入血栓弹力图仪开始到第一块纤维蛋白凝块形成(描记图幅度达2mm)所需的时间(min)。
表1激活凝血检测试剂的有效性检测结果
从表1中，可以看出本发明试剂和对比试剂的R值有显著差异，本发明试剂R值远小于对比试剂，说明本发明激活凝血检查试剂盒可有效检测不同凝血水平样本，并快速出结果。
以样本1为例，分别利用本发明的试剂以及对比试剂(普通杯)，所得到的血栓弹力图如图2所示，从图2可以看出，采用本发明的试剂相比较于对比试剂，起始时间更短，凝血更快速。
实施例4激活凝血检测试剂的准确性检测
选取不同凝血速度的5份新鲜全血样本和质控水平1、质控水平2(厂家：北京乐普医疗科技有限公司)，分别用本发明检测试剂盒和已上市的血栓弹力图激活凝血检测试剂盒对样本进行测定，将所得结果进行对比。其中质控水平中的血液样本为全血处理后得到的血浆产品，是血栓弹力图仪专用质控品，可以用来作为标准检测激活凝血检测试剂的准确性。
其中，血栓弹力图激活凝血检测试剂盒(对比试剂)：R1为激活凝血试剂，R2为CaCl2试剂，厂家为北京乐普医疗科技有限责任公司，试剂盒批号为17SH0212。
对比试剂采用其试剂盒对应的流程进行操作。
针对实施例2中获得的试剂盒，如前所述，测定流程参照图1所示，具体如下：
S1.将冷藏的试剂常温放置，恢复至室温。
S2.打开UD-T5000的相应软件，输入测试样本信息，并在测试类型中选择“CRT-Citrated RapidTEG”。
S3.在血栓弹力图仪测试通道上装载样品杯。
S4.移取20μL氯化钙溶液和10μL凝血激活剂加入样品杯杯底。
S5.移取340μL枸橼酸钠抗凝全血加入样品杯中，用移液枪吸打3次。
S6.将样品杯推至测试位置，测试杆拨至测试位，并在软件上点击“开始”按钮进行测试。
以第一试剂盒为例，样本的检测结果如表2所示。其中，ACT指的是自检测开始至最初的纤维蛋白形成的时间。Angle(deg)是从血凝块形成点至描记图最大曲线弧度作切线与水平线的夹角，反映了血凝块聚合的速率；MA是血栓弹力图上的最大振幅，即最大切应力系数(mm)；K是指从血凝形成点至弹力图振幅所需时间，即血凝块形成的速率。
表2激活凝血检测试剂的准确性检测结果
从表2中，可以看出本发明试剂和对比试剂的ACT、K、Angle、MA值无显著差异，说明本发明激活凝血检查试剂盒可准确检测不同凝血水平样本。
以全血样本1为例，分别利用本发明的试剂以及对比试剂，所得到的血栓弹力图如图3所示。
以质控水平1为例，分别采用本发明的试剂进行血栓弹力图凝血检测，所得到的血栓弹力图如图4所示。
实施例5激活凝血检测试剂的精密度测试
取质控水平1，用本发明试剂盒分别重复测试10次，计算在不同凝血水平本发明的测试精密度。
针对实施例2制备得到的试剂盒，如前所述，测定流程参照图1所示，具体如下：
S1.将冷藏的试剂常温放置，恢复至室温。
S2.打开UD-T5000的相应软件，输入测试样本信息，并在测试类型中选择“CRT-Citrated RapidTEG”。
S3.在血栓弹力图仪测试通道上装载样品杯。
S4.移取20μL氯化钙溶液和10μL凝血激活剂加入样品杯杯底。
S5.移取340μL枸橼酸钠抗凝全血加入样品杯中，用移液枪吸打3次。
S6.将样品杯推至测试位置，测试杆拨至测试位，并在软件上点击“开始”按钮进行测试。
以第一试剂盒为例，样本的检测结果如表3。
表3激活凝血检测试剂的精密度测试结果
从表3中，可以看出本发明试剂的ACT、K、Angle、MA值的CV都在10％以内，说明本发明激活凝血检查试剂盒检测精密度良好。
实施例6激活凝血检测试剂的加速稳定性测试
针对实施例2制备得到的试剂盒，分别在37℃恒温箱中加速0、2、4、6、8、10天，取质控水平1、质控水平2，用加速后的试剂进行血栓弹力图测试。
针对实施例2制备的试剂盒，如前所述，测定流程参照图1所示，具体如下：
S1.将试剂盒室温放置，恢复至室温。
S2.打开UD-T5000的相应软件，输入测试样本信息，并在测试类型中选择“CRT-CitratedRapidTEG”
S3.在血栓弹力图仪测试通道上装载样品杯。
S4.移取20μL氯化钙溶液和10μL凝血激活剂加入样品杯杯底。
S5.移取340μL枸橼酸钠抗凝全血加入样品杯中，用移液枪吸打3次。
S6.将样品杯推至测试位置，测试杆拨至测试位，并在软件上点击“开始”按钮进行测试。
以第一试剂盒为例，样本的检测结果如表4。
表4激活凝血检测试剂的加速稳定性测试结果
从表4中，可以看出本发明试剂的测试ECT、K、Angle、MA值在加速10天后，结果偏差都在10％以内，说明本发明激活凝血检查试剂盒加速稳定性良好。
实施例7激活凝血检测试剂的长期稳定性测试
针对实施例2制备得到的试剂盒，分别在2-8℃冷藏环境下贮存0、3、6、9、12、15、18个月，取同一批质控水平1和质控水平2，用实验的试剂进行血栓弹力图测试。
针对实施例2制备得到的试剂盒，如前所述，测定流程参照图1所示，具体如下：
S1.将冷藏的试剂常温放置，恢复至室温。
S2.打开UD-T5000的相应软件，输入测试样本信息，并在测试类型中选择“CRT-Citrated RapidTEG”。
S3.在血栓弹力图仪测试通道上装载在样品杯。
S4.移取20μL氯化钙溶液和10μL凝血激活剂加入样品杯杯底。
S5.移取340μL枸橼酸钠抗凝全血加入样品杯中，用移液枪吸打3次。
S6.将样品杯推至测试位置，测试杆拨至测试位，并在软件上点击“开始”按钮进行测试。
以第一试剂盒为例，样本的检测结果如表5。
表5激活凝血检测试剂的长期稳定性测试结果
从表5中，可以看出本发明试剂的测试ACT、R、K、Angle、MA值在2-8℃存放18个月后，结果偏差都在10％以内，说明本发明激活凝血检查试剂盒长期稳定性良好。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (10)
1.一种凝血激活剂，其特征在于，所述凝血激活剂包括：
内源性凝血激活剂，外源性凝血激活剂，磷脂、缓冲盐和保护剂。
2.根据权利要求1所述的激活剂，其特征在于，所述内源性凝血激活剂选自高岭土、鞣花酸、白陶土和硅藻土中的一种或几种；
任选地，所述内源性凝血激活剂的浓度为0.5-10mg/mL。
3.根据权利要求1或2所述的激活剂，其特征在于，所述外源性凝血激活剂为组织因子；
任选地，所述外源性凝血激活剂的浓度为0.1-1mg/mL。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的激活剂，其特征在于，所述磷脂选自磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇中的一种或几种，优选为含有磷脂酰胆碱：磷脂酰乙醇胺以及磷脂酰丝氨酸质量比为1：1的磷脂混合物；
任选地，所述磷脂的浓度为1-10mg/L。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的激活剂，其特征在于，所述保护剂选自牛血清白蛋白、酪蛋白、人血清白蛋白中的一种或几种；
任选地，所述保护剂的浓度为1-20mg/mL。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的激活剂，其特征在于，所述缓冲盐中含有盐分的质量百分比为0.1％～1％；
任选地，所述盐分选自氯化钠、氯化钾和氯化钙中的一种或几种。
7.根据权利要求6所述的激活剂，其特征在于，所述缓冲盐中进一步包括缓冲液，所述缓冲液选自Tris、HEPES、PBS、甘氨酸、MOPS中的一种或几种；
任选地，所述缓冲液的浓度为10-100mmol/L。
8.根据权利要求1～7中任一项所述的激活剂，其特征在于，所述激活剂进一步包括防腐剂；
任选地，所述防腐剂选自Proclin300、山梨酸钾和对羟基苯甲酸甲酯一种或几种；
任选地，所述防腐剂的浓度为0.01％-0.1％。
9.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1～8中任一项所述的激活剂；
任选地，所述试剂盒进一步包括氯化钙溶液；
任选地，所述氯化钙的浓度为0.1mol/L-1mol/L。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括样品杯；
任选地，所述试剂盒用于血栓弹力图凝血检测。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810488554.9A CN108761104A (zh) | 2018-05-21 | 2018-05-21 | 凝血激活剂及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810488554.9A CN108761104A (zh) | 2018-05-21 | 2018-05-21 | 凝血激活剂及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108761104A true CN108761104A (zh) | 2018-11-06 |
Family
ID=64008433
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810488554.9A Pending CN108761104A (zh) | 2018-05-21 | 2018-05-21 | 凝血激活剂及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108761104A (zh) |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109490557A (zh) * | 2018-11-23 | 2019-03-19 | 福州长庚医疗器械有限公司 | 一种运用血液凝固方式测量促凝剂效果的检测方法 |
| CN109709344A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-05-03 | 贵州金玖生物技术有限公司 | 一种活化凝血检测试剂、其制备方法及其应用 |
| CN109884327A (zh) * | 2019-03-27 | 2019-06-14 | 深圳优迪生物技术有限公司 | 功能性纤维蛋白原激活剂检测及其应用 |
| CN110824154A (zh) * | 2019-10-15 | 2020-02-21 | 常熟常江生物技术有限公司 | 用于血栓弹力图仪的激活剂 |
| CN111381051A (zh) * | 2019-05-27 | 2020-07-07 | 郑州普湾医疗技术有限公司 | 一种凝血激活试剂盒及其制备方法 |
| CN112162103A (zh) * | 2020-09-03 | 2021-01-01 | 北京汇文源美生物科技有限公司 | 一种全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂及其制备方法和应用 |
| CN112322583A (zh) * | 2020-09-28 | 2021-02-05 | 上海思路迪生物医学科技有限公司 | 基于凝血的细胞外囊泡捕获技术 |
| CN113848332A (zh) * | 2021-09-17 | 2021-12-28 | 广州徕西姆医学诊断技术有限公司 | 一种血栓弹力图检测试剂及其制备方法和应用 |
| CN114113641A (zh) * | 2021-10-28 | 2022-03-01 | 中科精瓒(武汉)医疗技术有限公司 | 一种活化凝血检测试剂及其制备方法 |
| CN115219292A (zh) * | 2022-06-09 | 2022-10-21 | 常熟常江生物技术有限公司 | 全自动血栓弹力图仪质控品及其制备方法、应用方法 |
| CN117368454A (zh) * | 2023-12-08 | 2024-01-09 | 普迈德（北京）科技有限公司 | 一种血栓弹力图快速激活凝血试剂卡、及制备方法和应用 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6733985B1 (en) * | 1999-05-19 | 2004-05-11 | International Technidyne Corporation | Preparation of stable liquid and dried synthetic prothrombin time reagents |
| US20090061468A1 (en) * | 2007-08-31 | 2009-03-05 | Sysmex Corporation | Reagent and method for measuring coagulation time of blood sample |
| CN101410049A (zh) * | 2006-01-31 | 2009-04-15 | 芝加哥大学 | 用于检验凝血的方法和设备 |
| CN103649751A (zh) * | 2011-02-15 | 2014-03-19 | 海默索尼克斯有限公司 | 用于评估止血的装置、系统和方法 |
| CN103688177A (zh) * | 2011-06-17 | 2014-03-26 | 学校法人东日本学园 | 狼疮抗凝物检测用血液凝固时间的测定方法 |
| CN105424945A (zh) * | 2015-11-20 | 2016-03-23 | 重庆贝羿生物科技有限公司 | 一种凝血激活检测试剂及其制备方法与用途 |
| CN106290923A (zh) * | 2016-08-01 | 2017-01-04 | 重庆鼎润医疗器械有限责任公司 | 一种活化凝血检测试剂及其应用 |
| CN106885895A (zh) * | 2017-02-27 | 2017-06-23 | 常熟常江生物技术有限公司 | 血小板功能检测方法 |
| CN107561295A (zh) * | 2017-08-16 | 2018-01-09 | 北京乐普医疗科技有限责任公司 | 一种血栓弹力图普通杯检测试剂盒及其使用方法 |
-
2018
- 2018-05-21 CN CN201810488554.9A patent/CN108761104A/zh active Pending
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6733985B1 (en) * | 1999-05-19 | 2004-05-11 | International Technidyne Corporation | Preparation of stable liquid and dried synthetic prothrombin time reagents |
| CN101410049A (zh) * | 2006-01-31 | 2009-04-15 | 芝加哥大学 | 用于检验凝血的方法和设备 |
| US20090061468A1 (en) * | 2007-08-31 | 2009-03-05 | Sysmex Corporation | Reagent and method for measuring coagulation time of blood sample |
| CN103649751A (zh) * | 2011-02-15 | 2014-03-19 | 海默索尼克斯有限公司 | 用于评估止血的装置、系统和方法 |
| CN103688177A (zh) * | 2011-06-17 | 2014-03-26 | 学校法人东日本学园 | 狼疮抗凝物检测用血液凝固时间的测定方法 |
| CN105424945A (zh) * | 2015-11-20 | 2016-03-23 | 重庆贝羿生物科技有限公司 | 一种凝血激活检测试剂及其制备方法与用途 |
| CN106290923A (zh) * | 2016-08-01 | 2017-01-04 | 重庆鼎润医疗器械有限责任公司 | 一种活化凝血检测试剂及其应用 |
| CN106885895A (zh) * | 2017-02-27 | 2017-06-23 | 常熟常江生物技术有限公司 | 血小板功能检测方法 |
| CN107561295A (zh) * | 2017-08-16 | 2018-01-09 | 北京乐普医疗科技有限责任公司 | 一种血栓弹力图普通杯检测试剂盒及其使用方法 |
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109490557A (zh) * | 2018-11-23 | 2019-03-19 | 福州长庚医疗器械有限公司 | 一种运用血液凝固方式测量促凝剂效果的检测方法 |
| CN109709344A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-05-03 | 贵州金玖生物技术有限公司 | 一种活化凝血检测试剂、其制备方法及其应用 |
| CN109884327A (zh) * | 2019-03-27 | 2019-06-14 | 深圳优迪生物技术有限公司 | 功能性纤维蛋白原激活剂检测及其应用 |
| CN111381051A (zh) * | 2019-05-27 | 2020-07-07 | 郑州普湾医疗技术有限公司 | 一种凝血激活试剂盒及其制备方法 |
| CN110824154A (zh) * | 2019-10-15 | 2020-02-21 | 常熟常江生物技术有限公司 | 用于血栓弹力图仪的激活剂 |
| CN112162103A (zh) * | 2020-09-03 | 2021-01-01 | 北京汇文源美生物科技有限公司 | 一种全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂及其制备方法和应用 |
| CN112322583A (zh) * | 2020-09-28 | 2021-02-05 | 上海思路迪生物医学科技有限公司 | 基于凝血的细胞外囊泡捕获技术 |
| CN112322583B (zh) * | 2020-09-28 | 2024-02-02 | 上海思路迪生物医学科技有限公司 | 基于凝血的细胞外囊泡捕获技术 |
| CN113848332A (zh) * | 2021-09-17 | 2021-12-28 | 广州徕西姆医学诊断技术有限公司 | 一种血栓弹力图检测试剂及其制备方法和应用 |
| CN113848332B (zh) * | 2021-09-17 | 2024-04-19 | 广州徕西姆医学诊断技术有限公司 | 一种血栓弹力图检测试剂及其制备方法和应用 |
| CN114113641A (zh) * | 2021-10-28 | 2022-03-01 | 中科精瓒(武汉)医疗技术有限公司 | 一种活化凝血检测试剂及其制备方法 |
| CN114113641B (zh) * | 2021-10-28 | 2023-11-03 | 中科精瓒(武汉)医疗技术有限公司 | 一种活化凝血检测试剂及其制备方法 |
| CN115219292A (zh) * | 2022-06-09 | 2022-10-21 | 常熟常江生物技术有限公司 | 全自动血栓弹力图仪质控品及其制备方法、应用方法 |
| CN117368454A (zh) * | 2023-12-08 | 2024-01-09 | 普迈德（北京）科技有限公司 | 一种血栓弹力图快速激活凝血试剂卡、及制备方法和应用 |
| CN117368454B (zh) * | 2023-12-08 | 2024-04-23 | 普迈德（北京）科技有限公司 | 一种血栓弹力图快速激活凝血试剂卡、及制备方法和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108761104A (zh) | 凝血激活剂及其应用 | |
| US7754489B2 (en) | Protocol for risk stratification of ischemic events and optimized individualized treatment | |
| Laffan et al. | Investigation of haemostasis | |
| US7732213B2 (en) | Method of evaluating patient hemostasis | |
| US6448024B1 (en) | Method, reagent, cartridge, and device for determining fibrinogen | |
| EP2153235B1 (en) | Methods of measuring inhibition of platelet aggregation by thrombin receptor antagonists | |
| JP6526717B2 (ja) | 線維素溶解及び線溶亢進を検出するための方法及び試薬 | |
| US20090208988A1 (en) | Protocol and Apparatus for Determining Heparin-induced Thrombocytopenia | |
| JP5662802B2 (ja) | フォン−ビルブランド病ならびにフォン−ビルブランド病および血小板機能の後天性または先天性障害に関連する出血リスクの増加を評価するためのインビトロ診断法 | |
| JP2010518371A (ja) | 被験液の凝固特性の測定における診断用組成物及びその使用 | |
| CN109884326A (zh) | 血小板聚集功能检测试剂盒 | |
| von Meijenfeldt et al. | Fibrinolysis in patients with liver disease | |
| CN110108890A (zh) | 活化部分凝血活酶时间测定试剂及其应用 | |
| US8076144B2 (en) | Protocol for risk stratification of ischemic events and optimized individualized treatment | |
| CN109884327A (zh) | 功能性纤维蛋白原激活剂检测及其应用 | |
| US20220120768A1 (en) | Reagent for measuring fibrinogen | |
| JP7359538B2 (ja) | フィブリノゲン測定試薬 | |
| Genzen et al. | Presence of direct thrombin inhibitors can affect the results and interpretation of lupus anticoagulant testing | |
| JP7410652B2 (ja) | フィブリノゲンの定量方法 | |
| JP2021192009A (ja) | フィブリノゲン測定方法 | |
| CN115201499B (zh) | 一种稳定性强的活化凝血测定试剂的制备方法 | |
| EP2405274A1 (en) | Monitoring anticoagulant therapy and identifying reversible direct factor Xa inhibitors | |
| EP2035837B1 (en) | Protocol for monitoring direct thrombin inhibition | |
| CN117031047A (zh) | 血小板聚集功能检测花生四烯酸试剂及其制备方法 | |
| Loeliger | Laboratory reagents and coagulation assay procedures |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20181106 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |