KR100609486B1

KR100609486B1 - 차가버섯에서4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 분리 방법

Info

Publication number: KR100609486B1
Application number: KR1020040026085A
Authority: KR
Inventors: 전효곤; 고영희; 양재영; 김선일; 정영철; 강신권; 전성식
Original assignee: 한국생명공학연구원
Priority date: 2004-04-16
Filing date: 2004-04-16
Publication date: 2006-08-08
Anticipated expiration: 2024-04-16
Also published as: KR20050100879A

Abstract

본 발명은 차가버섯(Inonotus Obliquus)에서 분리한 항산화 활성을 갖는 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 분리 방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 차가버섯을 (a) 알코올에 침지하여 추출액을 분리하는 단계; (b) 상기 추출액에 탄소수 5 내지 8의 알칸 및 물을 넣어 상분리하여 알칸층과 물층을 분리하는 단계; (c) 상기 물층을 에틸아세테이트로 추출하고 분획하여 에틸아세테이트층을 분리하는 단계; (d) 상기 에틸아세테이트층을 겔여과 크로마토그래피와 친수성 크로마토그래피로 순차적으로 분리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 분리 방법에 관한 것이다.

본 발명에 따른 차가버섯(Inonotus Obliquus)에서 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 분리 방법은 차가버섯으로부터 항산화제 활성을 갖는 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온을 높은 수율 및 저가로 제조할 수 있으며, 이로부터 기능성 식품 및 의약 소재, 생리활성 소재, 화장품의 원료 소재로서 다양한 용도에 활용할 수 있다. 또한 차가버섯에 포함되어 있는 면역증강활성을 나타내는 다당류을 얻고 남은 저분자 물질을 함유하는 분획으로부터 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온을 분리할 수 있어 산업적 응용가능성이 높다.

차가버섯, 항산화 활성

Description

차가버섯에서 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 분리 방법 {Process for preparing 4-(3,4-dihydroxy-phenyl)-but-3-en-2-one from Inonotus obliquus}

도1은 차가버섯으로부터 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온을 분리하는 과정을 나타내는 개요도이다.

도2는 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온과 알파-토코페롤의 항산화활성을 비교한 그래프이다.

본 발명은 차가버섯(Inonotus Obliquus)에서 분리한 항산화 활성을 갖는 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 분리 방법에 관한 것으로서, 상세하게는 항산화제 활성을 갖는 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온을 차가버섯으로부터 높은 수율 및 저가로 제조할 수 있으며, 또한 차가버섯에 포함되어 있는 면역증강활성을 나타내는 다당류을 얻고 남은 저분자 물질을 함유하는 분획으로부터 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온을 분리할 수 있어 산업적응용가능성이 높은 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 분리 방법에 관한 것이다.

현대인들은 대기오염, 불규칙한 식생활, 자외선 노출, 스트레스, 질병 등의 유해환경에 노출되어 자유 라디칼에 의한 산화적 스트레스(oxidative stress)를 충분히 소거하기 어려운 형편이다. 이러한 산화적 스트레스에 계속 노출되면 피부의 노화, 태양광에 의한 화상 및 염증, 접촉성 피부염, 주름 등이 발생하게 된다.

자유라디칼은 하나 이상의 짝을 이루지 못한 전자를 가지고 있는 원자 또는 분자로서 다른 분자로부터 전자를 뺏어 안정화하려는 특성을 지니고 있다. 자유라디칼의 수명은 수천분의 일초 정도로 매우 짧다. 이런 이유로 자유라디칼은 매우 불안정하며 공격적인 성질을 나타낸다. 피부의 노화에 관여하는 라디칼로는 히드록실 라디칼(hydroxy radical), 슈퍼옥사이드 라디칼(superoxide radical), 활성산소(singlet oxygen) 등이 있다. 또한 쉽게 히드록실 라디칼로 분해되는 과산화수소도 피부의 노화에 관여한다.

히드록실 라디칼은 강력한 산화력을 가지고 있으며, 반응 시간도 10-11초로 매우 짧다. 히드록실 라디칼은 생체의 모든 물질과 반응할 수 있으며, 지질(lipid)을 공격하여 지질과산화물(lipid peroxide)을 생성시키며, 단백질간의 비정상적인 교차결합을 생성시키며, 유전자(DNA)를 공격한다. 히드록실 라디칼은 노화의 주된 요인중의 하나이다.

슈퍼옥사이드 라디칼은 요소와 세포막(cell membrane)을 공격하며, 특히 세 포막의 주요성분중의 하나인 불포화 지방산(unsaturated fatty acid)을 공격하여 분해시켜 세포막의 성질을 변화시킨다. 세포막의 성질변화는 세포막을 통한 물질들의 전달체계의 변화로 이어져 노화를 촉진시킨다. 또한 불포화 지방산의 분해물은 황색물질인 리포푸신(lipofucin)이 되는데 이는 피부를 칙칙한 황갈색으로 보이게 하며, 좀 더 늙어 보이게 한다. 슈퍼옥사이드 라디칼의 지방산 공격은 연속적으로 진행된다.

활성산소는 히드록실 라디칼과 같이 매우 공격적인 라디칼로서 피부세포의 모든 성분들을 변화시킨다.

과산화수소는 라디칼에 비해 산화력은 약하지만 매우 강력한 반응성을 지니고 있다. 과산화수소는 확산력이 강하여 세포막을 쉽게 투과하며, 철(Fe) 성분과 접촉하면 쉽게 히드록실 라디칼로 변한다. 과산화수소는 세포핵의 DNA를 공격하며, 단백질과 반응하여 변성시키거나, 정상적인 기능을 발휘하지 못하도록 한다.

인체에는 자유라디칼에 의한 손상을 방지하기 위한 방어 시스템을 갖추고 있다. 비타민 E, 비타민 C, 슈퍼옥사이드 디스뮤타제(superoxide dismutase: SOD), 카탈라제(catalase) 및 여러종류의 산화효소(oxydase) 등이 자유라디칼을 소거시킨다.

그러나 유해환경으로 인하여 자유라디칼을 쉽게 소거할 수 없는 현대인에게 자유라디칼을 소거할 수 있는 물질은 피부에 대한 산화적 스트레스를 제거하여 피부의 노화를 방지 또는 지연할 수 있도록 해준다. 종래, 자유라디칼 소거제로서 알려진 물질로는 아스코르빈산(ascorbic acid), 디부틸 히드록실 톨루엔(BHT), 디 엘-알파-토코페롤(dl-α-tocopherol), 베타-카로틴(β-carotene), 모린(morine) 및 갈릭산(Gallic acid) 등이 있다. 그러나 이러한 종래의 자유라디칼 소거제는 식품이나 화장료 등에 사용하기에는 안전성에 다소 문제가 있는 것이다.

이러한 이유로 보다 안전하면서 자유라디칼 소거 효과가 높은 물질 개발은 식품 및 화장품 분야에서 중요한 과제로 대두되어 많은 연구가 진행되고 있다.

천연 항산화제 중에서 특히 각종 향신료 스피어민트(speamint), 마르조람(marjoram), 스위트 바실(sweet basil), 개늠교의 추출물에서 토코페롤, BHA(Butylated Hydroxyanisole)와 비슷한 항산화효과를 보고했으며, 참깨의 항산화성분으로 세사미놀(sesaminol), γ-토코페롤, 트랜스-페루릭산(trans-ferulic acid), 비스에폭실리간(bisepoxyligan) 동족체 등이 함유되어 있는 것으로 보고하였다. 식용식물로부터의 항산화 효과에 대한 연구로는 더덕의 에탄올 추출물로부터 항산화 효과가 있음이 밝혀졌다. 칡뿌리로부터는 플라보노이드성 푸에라린(puerarin)이 항산화성분임이 밝혀졌고, 식용 해조류로부터 벤젠계열의 항산화 물질이 분리되었으며, 인삼으로부터 살리실산(salicylic acid), ρ-쿠마르산(ρ-cumaric acid), 젠티식산(gentisic acid), 카페인산(caffeic acid) 등의 페놀성 항산화 물질이 분리되었다. 왕겨의 메탄올 추출물에는 플라보노이드계의 물질이 존재하고 이들이 항산화 효과를 나타내는데, 그 활성물질은 C-글리코실 플라보노이드(C-glycosyl flavonoid)임이 밝혀졌다. 한약재로 사용하고 있는 붉나무의 에탄올 추출물 또한 강한 항산화 효과를 나타내었는데 토코페롤과 같이 사용했을 때 상승효과를 보였다. 그 외에 각종 식용식물로는 오미자, 각과 겨자, 산사 등에서 항 산화 활성이 보고되었다.

한편, 차가버섯은 시베리아 및 동유럽 지역에서 아주 오랫동안 민간 비약으로 전해 내려오고 있는 버섯으로 대체의학이 발달한 러시아와 동유럽 등지에서 수 십 년에 걸쳐 과학적으로 연구 분석되고 임상 실험까지 마친 상태이다. 특히 항암, 항종양의 효능과 혈당 강하 효능에 대해 널리 알려져 왔다. 조안 에이치 윈터스등의 논문 "차가버섯의 폴란드 및 미국 변이들의 비교 식물화학 연구(플로리다 대학, 약학부, 1960)"에는 차가버섯의 항암효과에 대해 기재되어 있으며, 다카시 미즈노 등의 논문 "차가버섯의 균핵 및 균사체 유래의 다당류의 항종양 및 저혈당 활성(International Jounal of Medicinal Mushrooms, Vol.1, pp.301-306, 1999)"에서는 암 및 당뇨병 치료에 대한 차가버섯의 효능에 대해 기술하고 있다. 이외에도 에이즈 및 위장관의 질병들에도 효능이 있는 것으로 알려져 있다.

일반적으로 식용가능한 버섯의 경우 버섯 자실체를 직접 갈아서 섭취할 수도 있으나, 일반 식용버섯과는 달리 독특한 고유의 향이 있는 식용버섯의 경우 비록 식용버섯이라 하더라도 탈취공정이 필요할 수도 있으며, 또한 대부분의 약용버섯은 자실체가 목질화된 목질부후균에 속한 버섯들로서 균체 내 물질들의 추출이 제한적이라 추출물의 회수율이 낮은 것이 사실이다. 이러한 문제점을 극복하기 위한 방안으로 열수 추출법 또는 유기용매법에 대한 연구가 진행되어 왔으며, 열수 혹은 용매추출한 성분만으로도 항암, 면역증강, 고혈압 및 당뇨치료 등의 효과를 지닌 것으로 보고되고 있다.

차가버섯의 경우에도, 차가버섯으로부터 약리성분을 추출하는 방법으로 열수 추출법, 유기용매법 등이 이용되고 있다. 예를 들면, 대한민국 특허등록 제385739호에는 버섯을 포함하는 건강보조식품을 제조하기 위하여 버섯의 균사체 또는 균핵을 분말로 조제하고 열수에서 추출하거나, 유기용매인 에탄올 또는 메탄올, 부탄올을 이용하여 약리성분을 용출하고 유기용매을 감압 증발시켜 건조시키는 방법이 기술되어 있다. 대한민국 특허공개 제2003-65964호에는 전립증 비대증 등에 효능이 있는 성분을 추출하기 위하여 차가버섯의 균사를 PBS용액, 부탄올, 에탄올, 초산에틸 또는 아세톤으로 처리하고, 그 각각의 불용물로부터 활성성분을 추출하는 방법이 기술되어 있다. 대한민국 특허등록 제340663호에는 차가버섯으로부터 항암면역활성 다당류를 추출하기 위한 열수추출방법이 기술되어 있다.

그러나, 상술한 공지의 방법들은 차가버섯으로부터 전립성 비대증 등과 관련된 약리성분, 항암효과가 있는 다당류를 추출하고자 하는 것이었으며, 본 발명과 같은 항산화 물질을 추출하는 방법은 공지되어 있지 않으며, 또한 차가버섯이 함유하고 있는 항산화 활성 성분 중에서 특정 단일화합물만을 추출하여 분리정제하는 방법에 대하여는 전혀 개시된 바 없다.

본 발명자들은 차가버섯으로부터 항산화 활성이 있는 천연물질인 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온을 매우 효율적으로 추출하여 분리할 수 있는 방법을 발견하여, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

본 발명의 목적은 차가버섯(Inonotus Obliquus)에서 분리한 항산화 활성을 갖는 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 분리 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 다른 목적은 차가버섯에서 분리한 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 차가버섯을 (a) 알코올에 침지하여 추출액을 분리하는 단계; (b) 상기 추출액에 탄소수 5 내지 8의 알칸 및 물을 넣어 상분리하여 알칸층과 물층을 분리하는 단계; (c) 상기 물층을 에틸아세테이트로 추출하고 분획하여 에틸아세테이트층을 분리하는 단계; (d) 상기 에틸아세테이트층을 겔여과 크로마토그래피와 친수성 크로마토그래피로 순차적으로 분리하는 단계를 포함하는, 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 분리 방법 및 상기 분리방법으로 분리한 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온을 제공하는 것을 특징으로 한다.

이하 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.

차가버섯의 학명은 이노노투스 오블리쿠아(Inonotus obliqua) 또는 퍼스코포리아 오블리쿠아(Fuscoporia obliqua)이다. 러시아에서는 차가(Chaga)로 불리우며, 일본에서는 카바노아나타케로 불리운다. 균핵 형태는 표면이 검고, 종횡으로 균열이 많으며, 내부는 황갈색이다. 균사가 조밀하게 모여 만드는 딱딱한 덩어리인 균 핵이 주로 약용으로 사용하는 부분이다. 균핵의 직경은 10 내지 20cm 정도로 대형이다. 자실체의 두께는 2 내지 8mm 정도이고 전면에 관공이 있으며 강모체는 여러개이다. 차가버섯은 자작나무류(Betula sp.), 특히 자작나무(Betula platyphylla var. japonica)에서 발생한다. 자작나무류에 검은 암 덩어리처럼 붙어 있다가 그 덩어리가 점차 커지면서 자작나무류가 점차 죽어가는 반활물, 반사물 기생버섯이다.

본 발명에서 이용되는 차가버섯은 자연산 또는 인공배양에 의한 것이다. 인공배양은 액체배양법과 고체배양법을 모두 사용할 수 있다. 액체배양은 차가버섯 균주를 포도당, 펩톤, 효모추출액을 필수 성분으로 포함하는 액체배지에서 3 내지 30일간 배양하여 균사체를 얻는다. 배지에는 상기 필수 성분 외에 인산제2칼륨, 황산마그네슘, 염화칼슘 등의 무기물과 황산철, 황산아연, 황산구리 등의 미량원소를 첨가하여 균사체의 발육을 돕도록 할 수 있다. 배지의 pH는 5~7, 온도는 20℃ 내지 30℃ 정도로 조절한다. 고체배양법으로는 원목배양법을 이용하는데, 차가버섯 균주를 원목에서 배양하여 자실체를 얻는다, 원목배양을 위한 종균제조를 위하여 원목 톱밥에 미강을 첨가한 배지에, 맥아추출물배지에서 배양된 차가버섯균사를 떼어내 접종하고 20 내지 30 일간 25℃ 내지 30℃ 암조건하에서 배양한다.

본 발명에서 대상으로 하는 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온은 하기 화학식 1로 표현되는 물질이다.

본 발명에서 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온을 분리하는 방법을 도 1을 참조하여 구체적으로 설명한다.

차가버섯을 알코올에 침지하여 2회 연속 추출하고 이를 여과하여 농축한다. 본 발명은 바람직하게는 상기 차가버섯이 차가버섯 분말이거나 차가버섯에 함유되어 있는 면역증강활성을 나타내는 다당류를 얻고 남은 저분자 물질을 함유하는 분획이 될 수 있다. 또한 본 발명에 있어서 용매로 사용되는 알코올은 바람직하게는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등이, 보다 바람직하게는 메탄올이 사용될 수 있다.

상기 농축한 차가버섯 추출물에 동량의 탄소수 5 내지 8의 알칸, 바람직하게는 헥산과 물을 넣어 분액여두로 상분리하여 얻어진 물층을 에틸아세테이트로 추출하여 에틸아세테이트 추출물을 얻는다. 추출된 물질내에 함유된 잔사 및 용매를 제거하기 위하여, 예를 들면 원심분리기 및 회전 증발농축기와 같은 분리, 농축기를 이용할 수 있다.

상기 과정을 거친 추출물에는 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온를 포함한 항산화 물질을 함유하고 있으므로 항산화활성 조성물로서 다양한 응용분야에 직접 사용할 수 있으나, 보다 높은 순도가 요구되는 경우에는 추가적인 분리, 정제과정을 거치는 것이 바람직하다.

구체적으로는, 에틸아세테이트 추출물을 겔 여과 크로마토그래피(gel filtration chromatography)에 통과시켜 DPPH에 의한 자유라디칼소거 활성을 나타내는 분획을 얻는다. 상기 겔 여과 크로마토그래피의 충진제로서는 덱스트란 겔, 폴리아크릴아마이드 겔, 아가로스 겔 등이 이용될 수 있다. 상기 겔 여과 크로마토그래피는 바람직하게는 세파덱스 엘에이치-20 컬럼 크로마토그래피가 사용될 수 있다.

이후에 이 구간의 물질을 고정상이 C18인 역상컬럼을 이용한 친수성 고속액체 크로마토그래피로 분석하여 DPPH의 소거작용이 탁월한 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온을 분리 정제한다. 상기 컬럼은 30% 아세토나이트릴용액으로 1.5ml/분으로 용리하여 수행하였다.

본 발명자들은 상기 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 동정을 위하여 핵자기공명수소 스펙트럼이나 핵자기공명 탄소 스펙트럼, 질량분석 스펙트럼을 수행하였고, 항산화 활성을 측정하기 위하여 디피피에이치(1,1-디페닐-2-피크릴하이드라질)를 이용하였다.

본 발명자들은 본 발명에 의하여 차가버섯으로부터 분리한 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 수율이 상황버섯으로부터 분리하는 경우보다 4배 이 상 향상되었다.

본 발명의 구성에 의하여 분리된 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온은 항산화작용이 우수하여 인체의 건강증진에 유용한 것이다. 식품으로는 건강식품보조제, 음료첨가제, 식품첨가제로 사용하여 질병예방과 건강증진을 위한 목적으로 사용되는 것이 바람직하다. 또한 활성산소의 산화력으로 인하여 야기되는 질병, 특히 성인병, 노화에 관한 예방 또는 치료제로 사용할 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

[실시예 1]

단단한 덩어리 상태로 되어있는 차가버섯 1kg을 갈거나 잘게 부수어서 10일간 10리터의 메탄올에 침지하여 1차 추출하고, 다시 5리터의 메탄올에 3일간 침지하여 2차 추출한 것을 모아서 여과하여 농축한 결과 건조중량 45g을 얻었다. 농축한 차가버섯 메탄올 추출물에 동량의 헥산과 물을 넣어 분액여두로 상분리하여 얻어진 물층을 에틸아세테이트로 추출하여 5.6g의 에틸아세테이트 추출물을 얻었다.

[실시예 2]

5.6g의 차가버섯 에틸아세테이트 추출물을 세파덱스 엘에이치-20 컬럼 크로마토그래피(컬럼크기 : 지름 2.8cm, 높이 75cm, 용매: 메탄올, 받은 양 14그램)한 결과, 디피피에이치에 의한 자유라디칼소거 활성을 나타내는 분획을 0.4g을 얻었다.

이 구간의 물질을 고속액체 크로마토그래피 (YMC-Pack-ODS-AQ 컬럼 300ㅧ10mm I.D, 아세토나이트릴 30%, 1.5ml/분)로 분석한 결과 24분 피크의 물질이 디피피에이치의 소거작용이 탁월하여 분리하였으며, 42mg의 화합물을 분리 정제할 수 있었다. 본 물질은 핵자기공명수소 스펙트럼이나 핵자기공명 탄소 스펙트럼, 질량분석 스펙트럼을 확인하여 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온인 것을 확인하였다.

[실시예 3]

분자내 자유기를 함유하고 있는 DPPH(1,1-디페닐-2-피크릴하이드라질)는 전자나 수소 라디칼을 쉽게 받아들여 안정한 분자가 되므로 유리 래디칼 제거제의 효능을 측정할 수 있다. 그러므로 분리한 시료에 일정량의 5×10^-4몰의 DPPH 용액을 제조하여 취한 뒤 15 내지 20분 후 517nm에서 흡광도를 측정하여 항산화 반응의 활성을 확인하였다. 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온을 DPPH 용액과 반응시킨 결과, 517nm에서 알파-토코페롤에 비해 더 우수한 항산화 활성을 나타내었다(도 2).

이상에서 상세히 설명하고 입증하였듯이, 본 발명은 항산화제 활성을 갖는 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온을 차가버섯으로부터 높은 수율 및 저가로 제조할 수 있으며, 이로부터 기능성 식품 및 의약 소재, 생리활성 소재, 화장품의 원료 소재로서 다양한 용도에 활용할 수 있다. 또한 차가버섯에 포함되어 있는 면역증강활성을 나타내는 다당류을 얻고 남은 저분자 물질을 함유하는 분획으로부터 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온을 분리할 수 있어 산업적 응용가능성이 높다.

Claims

차가버섯을 (a) 알코올에 침지하여 추출액을 분리하는 단계; (b) 상기 추출액에 탄소수 5 내지 8의 알칸 및 물을 넣어 상분리하여 알칸층과 물층을 분리하는 단계; (c) 상기 물층을 에틸아세테이트로 추출하고 분획하여 에틸아세테이트층을 분리하는 단계; (d) 상기 에틸아세테이트층을 겔여과 크로마토그래피와 친수성 크로마토그래피로 순차적으로 분리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 분리 방법.
제1항에 있어서, 차가버섯이 차가버섯 분말이거나 차가버섯에 함유되어 있는 다당류를 얻고 남은 저분자 물질을 함유하는 분획인 것을 특징으로 하는 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 분리 방법.
제1항에 있어서, 알코올이 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 분리 방법.
제1항에 있어서, 겔여과 크로마토그래피의 충진제는 덱스트란겔임을 특징으로 하는 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 분리 방법.
제1항에 있어서, 탄소수 5 내지 8의 알칸이 헥산인 것을 특징으로 하는 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 분리 방법.
제1항에 있어서, 친수성 크로마토그래피는 친수성 액체크로마토그래피임을 특징으로 하는 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 분리 방법.
제6항에 있어서, 친수성 크로마토그래피의 컬럼이 고정상이 C18인 역상 컬럼인 것을 특징으로 하는 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 분리 방법.
제6항에 있어서, 30% 아세토나이트릴을 사용하여 1.5ml/분으로 용출시킴을 특징으로 하는 4-(3,4-디하이드록시-페닐)-부트-3-엔-2-온의 분리 방법.
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