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KR0161652B1 - 신규한 펩티드, 및 그것을 함유하는 항치매제 - Google Patents

신규한 펩티드, 및 그것을 함유하는 항치매제 Download PDF

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KR0161652B1
KR0161652B1 KR1019980014948A KR19980014948A KR0161652B1 KR 0161652 B1 KR0161652 B1 KR 0161652B1 KR 1019980014948 A KR1019980014948 A KR 1019980014948A KR 19980014948 A KR19980014948 A KR 19980014948A KR 0161652 B1 KR0161652 B1 KR 0161652B1
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KR
South Korea
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pro
arg
solution
peptide
residue
Prior art date
Application number
KR1019980014948A
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Inventor
미쯔오 마사끼
마사끼 우에하라
겐지 히라떼
요시까즈 이소와
요시아끼 사또
요시하루 나까시마
Original Assignee
나까무라 하루후미
닛뽕 케미파 가부시끼가이샤
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Publication date
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Priority claimed from JP1095917A external-priority patent/JP2640778B2/ja
Priority claimed from JP1095921A external-priority patent/JPH0826069B2/ja
Priority claimed from JP1095919A external-priority patent/JPH0832722B2/ja
Priority claimed from JP1095922A external-priority patent/JPH0826070B2/ja
Priority claimed from JP1095920A external-priority patent/JPH0826067B2/ja
Application filed by 나까무라 하루후미, 닛뽕 케미파 가부시끼가이샤 filed Critical 나까무라 하루후미
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Abstract

본 발명은 향지능 작용을 가지며 통상적인 의약품, 특히 항치매제로 유용한 하기식(Ⅱ)를 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용 가능한 그의 염 :
(식중, A는 Ser, Thr 또는 Ala 이고, n은 1 또는 0이다), 및 하기식(Ⅳ)를 갖는 펩티드 또는 하기식(Ⅵ)를 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용 가능한 그의 염 :
(식중, A는 시클로펜틸카르보닐, Pro 또는 pGlu 이고, B는 Gly 또는 β-Ala이고, W는 수소원자 또는 식(Ⅴ)

Description

신규한 펩티드, 및 그것을 함유하는 항치매제
본 발명은 향지능 작용을 가지며 통상적인 의약품, 특히 항치매제로 유용한 신규한 펩티드에 관한 것이다.
바소프레신은 향지능 작용 즉, 지능을 개발하는 작용을 갖는 화합물로 이미 공지되어 있다. 최근, 바소프레신 단편과 유사한 펩티드, 예를 들면 하기 식을 갖는 펩티드가 바소프레신과 동일한 향지능 작용을 가짐은 「Science」221, 페이지 1310∼1312(1983) 및 「Brain Research」371, 17(1986)에 보고되어 있다 :
또는
또한 하기 식을 갖는 펩티드가 향지능 작용을 가짐도 일본곡 특허 공개 제59(1984)-93036호에 보고되어 있다:
본 발명의 목적은 향지능 작용면에서 공지된 바소프레신뿐만 아니라 공지된 바소프레신 단면에 해당하는 펩티드보다 더 우수한 신규한 펩티드 유도체를 제공하는 것이다.
본 발명은 하기식(Ⅰ) 을 갖는 신규한 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용가능한 그의 염을 제공한다.
(식중에서, A 및 B 는 아미노산이며, 이때 A 가 D- 또는 L-Pro 이면, B 는 Har 또는 Cit 이고, A 가 D-Pro 이면, B 는 D-Arg 이고, B 가 D- 또는 L-Arg 이면, A 는 Ser, Pip, Aze 또는 Arg 이다).
또한 본 발명은 약학적 활성 성분으로 상기 식(Ⅰ) 을 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염의 유효량 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 함유하는 항치매제를 제공한다.
본 발명은 또한 하기 식(Ⅱ)를 갖는 신규한 펩티드, 그의 작용성 유도체, 및 약학적으르 허용 가능한 그의 염을 제공한다.
(식중에서, A 는 Ser, Thr 또는 Ala 이고, n 은 1 또는 0 이다).
또한, 본 발명은 약학적 활성 성분으로 상기 식(Ⅱ)를 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 유효량 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 함유하는 항치매제를 제공한다.
본 발명은 또한 하기식(Ⅲ)을 갖는 신규한 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용 가능한 그의 염을 제공한다 :
(식중에서, A 는 Pro-Asn-, Asn- 또는 Pro- 이다).
또한 본 발명은 약학적 활성 성분으로 상기 식(Ⅲ)을 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염 유효량 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 함유하는 항치매제를 제공한다.
본 발명은 하기 식(Ⅳ)를 갖는 신규한 펩티드 또는 하기식(Ⅳ)을 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용 가능한 그의 염을 제공한다 :
(식중, A 는 시클로펜틸카르보닐, Pro 또는 pGlu 이고, B 는 Gly 또는 Ala이고, W 는 수소원자 또는 식(Ⅴ)를 갖는 기를 표시한다).
또한 본 발명은 약학적 활성 성분으로 상기 식(Ⅳ)을 갖는 펩티드. 그의 작용성 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염 유효량 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 함유하는 항치매제를 제공한다.
본 발명은 또한 하기식(Ⅶ) 을 갖는 신규한 펩티브, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용 가능한 그의 염을 제공한다 :
(식중, A 는 Aze, D- 또는 L-Pro, Pip 또는 Sar 이고, B 는 D- 또는 L-Arg, Cit, Har, Lys 또는 Orn 을 나타내고, N 은 1 또는 0 이다).
또한, 본 발명은 약학적 활성 성분으로 상기식(Ⅶ)를 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염 유효량 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 함유하는 항치매제를 제공한다.
본 발명은 또한 하기식(Ⅷ) 를 갖는 신규한 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용 가능한 그의 염을 제공한다.
(식중에서, m 및 n 은 독립적으로 0 또는 1 이다).
또한, 본 발명은 약학적 활성 성분으로 상기 식(Ⅷ) 를 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염 유효량 및 약학적으로 허용 가능한 그의 염 유효량 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 함유하는 항치매제를 제공한다.
상술된 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용가능한 그의 염은 쥐를 사용한 수동 회피 시험에서 현저한 향지능 작용을 나타내고, 노인성 치매(알츠하이머 치매), 대뇌혈관성 치매 및 기타 치매 질병의 예방 및 치료용 약제의 활성 성분으로 눈에 띠에 효과적이다.
본 발명의 상기 식을 갖는 펩티드 및 펩티드 유도체는 아미노산 서열이 상술된 공지의 펩티드의 아미노산 서열과 다른 화합물이다.
본 명세서에선 펩티드 및 펩티드 유도체의 "작용성 유도체"라는 용어는 하기 유도체를 의미한다 :
a) N-아실기 (들) 를 갖는 N-아실유도체 [이때 N- 아실기는 1 ∼ 6 의 탄소 원자를 갖는 지방족 카르복실산으로 부터 유도된, 바람직하게는 아세트산으로부터 유도된 것으로, N-아실기를 -NHCOR (식중, R 은 1 ∼ 5 의 탄소원자를 갖는 알킬기이다) 로 표시할 수 있다.],
b) -CONH2, -CONHR, 또는 -CONR2(식중, R 은 1 ∼ 6 의 탄소원자를 갖는 알킬기이다) 로 표시할 수 있는 아미드, 또는 1 ∼ 6 탄소원자의 알킬 사슬(들)을 갖는 모노알킬 또는 디알킬 치환 아미드 형태의 기를 갖는 유도체, 및
c) -COOR (식중, R 은 1 ∼ 18 의 탄소원자, 바람직하게는 1 ∼ 6 의 탄소원자를 갖는 알킬기이다) 로 표시할 수 있는, 1 ∼ 18 의 탄소원자를 갖는 알코올로부터 유도된 에스테르, 바람직하게는 1 ∼ 6 의 탄소원자를 갖는 지방족 알코올로 부터 유도된 에스테르 형태의 기를 갖는 유도체.
본 발명의 약학적으로 허용 가능한 펩티드 및 펩티드 유도체의 염의 예로 알칼리 금속염 및 암모늄 염과 같은 산부가염 및 염기성 염을 언급할 수 있다. 이러한 산부가염의 예는 무기산 (예. 황산, 염산 및 인산) 의 염 또는 유기산 (예. 아세트산, 프로피온산, 시트르산, 타르타르산, 말레산, 옥살산 및 메탄술폰산) 의 염을 포함한다. 염기성 염의 예는 나트륨염, 칼륨염 및 트리에틸아민염을 포함한다.
명세서에 아미노산, 펩티드, 보호기 및 용매를 화학 분야에서 관용적으로 사용되는 약자 또는 IUPAC-IUB 생화학 명명 위원회에서 사용되는 약자에 의해 기재한다. 예를 들어, 하기 기호를 명세서에서 사용한다. 아미노산이 광학 배치에 대한 특별한 표시없이 기재되면, 아미노산을 L-타입으로 해석해야 한다.
β-Ala : β-알라닌
Arg : 아르기닌
Ala : 알라닌
Asn : 아스파라긴
Aze : 아제티딘-2-카르복실산
Cit : 시투룰린
Cys : 시스테인
Gly : 글리신
Har : 호모아르기닌
Lys : 리신
Orn : 오르니틴
pGlu : 피로글루탐산
Pip : 피페콜산
Pro : 프롤린
Sar : 사르코신
Ser : 세린
Thr : 트레오닌
Boc : t-부톡시카르보닐
Z : 벤질옥시카르보닐
Fmoc : 9-플루오르에닐메톡시카르보닐
But : t-부틸
Mbs : p-메톡시벤젠술포닐
MBzl : p-메톡시벤질
Acm : 아세트아미도메틸
Scm : S-카르보메톡시술페닐
Mtr : 4-메톡시, 2,3,6-트리메틸벤젠술포닐
NO2: 니트로
Bzl : 벤질
OBzl : 벤질에스테르
Osu : N-히드록시숙신이미드 에스테르
DCC : N,N'-디시클로헥실카르보디이미드
DCUrea : N,N'-디시클로헥실우레아
DIC : N,N'-디이소프로필카르보디이미드
HOBt : 1-히드록시벤조트리아졸
Et2N : 트리에틸아민
Trt : 트리틸
NMM : N-메틸모르폴린
TFA : 트리플루오로아세트산
MSA : 메탄술폰산
AcOEt : 에틸 아세테이트
AcOH : 아세트산
THF : 테트라히드로푸란
DMF : N,N-디메틸포름아미드
MeOH : 메탄올
본 발명의 화합물을 펩티드 화학에서 통상적으로 사용되는 방법에 의해 제조한 수 있다. 예를 들어, 펩티드를 Schroder and Lubke 저, 「The Peptides」제 1 권, Acadmeic Press, New York (1965) 및 Nobuo Izumiya 등 저, 「펩티드 합성의 기초 및 실험」Maruzen, Tokyo (1985)에 기재된 방법에 의해 제조할 수 있고, 용액상 합성 또는 고체상 합성 둘 중 하나에 의해 제조할 수 있다.
펩티드 결합을 형성하기 위한 방법의 예는 아지드법 , 산클로라이드법, 대칭적 무수물법, 혼합 무수물법, 카르보디이미드법, 카르보디이미도-부가물법, 활성에스테르법, 카르보디이미다졸법, 산화-환원법, 및 Woodward 시약 K 를 사용하는 방법을 포함한다.
펩티드의 합성에서, 본 발명의 펩티드를 형성하는 아미노산인 시스틴 부위를 시스틴 유도체를 사용함으로써 또는 펩티드 사슬을 형성시킨 후 펩티드의 시스테인 잔기를 통상적인 방법에 의해 시스틴 잔기로 전환시킴으로써 형성시킬 수 있다.
축합 반응을 수행하기 전에, 반응에 관여하지 않은 카르복실기, 아미노기, 구아니도기, 히드록실기, 메르캅토기 등을 보호시킬 수 있고, 축합 반응에 관여하는 카르복실기 및 아미노기를 당 분야에 공지된 방법으로 활성화시킬 수 있다.
카르복실기를 보호하는 기의 예는 메틸, 에틸, 벤질, p-니트로벤질, t-부틸 및 시클로헥실과 같은 에스테르-형성기를 포함한다.
아미노기를 보호하는 기의 예는 벤질옥시카르보닐, t-부톡시카르보닐, 이소보르닐옥시카르보닐, 및 9-플루포로에닐메틸옥시카르보닐을 포함한다.
구아니디노기를 보호하는 기의 예는 니트로, 벤질옥시카르보닐, 토실, p-메톡시벤젠술포닐 및 4-메톡시-2,3,6-트리메틸벤젠술포닐을 포함한다.
히드록실기를 보호하는 기의 예는 t-부틸, 벤질, 테트라히드로피라닐 및 아세틸을 포함한다.
데르캅토기를 보호하는 기의 예는 트리틸, 아세트아미도메틸, 벤질, p-메톡시벤질 및 3-니트로-2-피리딘술페닐을 포함한다.
카르복실기의 활성 형태의 예는 대칭적인 무수물, 아지드 및 활성 에스테르[알코올 (예.펜타클로로페놀, 2,4-디니트로페놀, 시아노메틸알코올, p-니트로페놀, N-히드록시-5-노르보르넨-2,3-디카르복실이미드, N-히드록시숙신이미드, N-히드로옥시프탈아미드 및 1-히드록시벤조트리아졸)과의 에스테르] 를 포함한다. 활성화 아미노기의 예는 아미드 포스페이트이다.
반응을 클로로포름, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, N,N-디메틸포름아미드, 디메틸슬폭시드, 피리딘, 디옥산, 테트라히드로푸란, 물, 메탄올 및 이 매들의 혼합물과 같은 용매에서 수행한다.
반응 온도는 반응에 일반적으로 사용되는 약 -30℃∼50℃의 범위일 수 있다.
본 발명의 펩티드 보호기를 제거하는 반응은 보호기의 종류에 따라 다르지만, 펩티드 결합에 아무런 영향을 주지 않고 보호기를 이탈시킬 수 있는 것이어야 한다.
보호기를 산처리 예를 들어, 염화 수소, 브롬화수소, 플루오르화수소, 메탄술폰산, 트리플루오로메탄술폰산, 트리플루오로아세트산 및 이들 산의 혼합물로 처리함으로써 제거시킬 수 있다. 또한, 액체 암모니아에서 나트륨 금속을 사용하는 환원 또는 팔라듐-탄소를 사용하는 촉매성 환원을 사용할 수 있다.
상기 산처리로 보호기를 제거하는 반응을 수행할 때, 아니솔, 페놀 및 티오아니솔과 같은 양이온 보족제의 첨가를 유리하게 선택한다.
반응 완결후, 본 발명의 제조된 펩티드를 통상적인 펩티드 정제 방법 예를 들어, 추출, 분배, 재침전, 재결정 또는 컬럼 크로마트그래피에 의해 회수할 수 있다.
또한, 본 발명의 펩티드를 통상적인 방법에 따라 상술된 그의 작용성 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염으로 전환시킬 수 있다.
본 발명의 화합물은 후술되는 쥐를 사용한 수동 회피 시험에서 강한 향지능 작용을 나타낸다.
본 발명의 펩티드 및 펩티드 유도체는 하기 질병에 효과적이며 그의 예방 및 치료에 사용된다 : 노인성 치매(알츠하이머치매), 대뇌혈관성 치매 및 알츠하이머 질병, 픽크 질병, 헌팅톤 질병, 크로이츠 필드 - 야콥 질병, 파킨슨 질병 및 소뇌성 척수 변성 질병에 기초한 치매.
본 발명의 펩티드는 극히 적은 독성을 지니며, 그의 효과적인 투여량을 훨씬 상회하는 투여량에도 불구하고 사망을 일으킨 예가 없다.
본 발명의 펩티드를 상술된 식의 펩티드, 그의 작용성 유도체 또는 그의 염의 형태로 투여하기도 한다. 그들의 형태가 어떠하든지간에 상술된 식의 펩티드의 투여량은 바람직하게는 0.1ng/1일∼1㎎/1 일의 범위내에 있다. 비경구 투여 및 경구 투여의 경우, 투여량은 바람직하게는 0.1ng/1일∼100㎍/1일의 범위내이다. 경구 투여 및 직장 투여의 경우, 투여량은 비경구 투여량의 10∼100배 이어야 한다. 본 발명의 펩티드를 주로 비경구적 (예. 정맥 또는 피하주사, 대뇌실내 또는 척수강내투여, 경비투여 및 직장 투여)으로 투여한다. 또한, 이를 경우에 따라 경구적으로 투여할 수 있다.
본 발명의 펩티드를 주사제, 좌제, 분말, 점비제, 과립 및 정제 형태의 약학 조성물로 배합할 수 있다. 본 발명의 펩티드를 생리 식염수 용액으로 보관할 수 있고 만니톨 또는 소르비톨의 첨가후 앰플(ample)에 동결 건조시킬 수 있으며 이것을 투여하기 위해 사용할때는 용해시킨다.
이하에 실시예를 기재한다.
각 실시예에서, 얇은 막 크로마토그래피에 사용하는 용리액은 다음과 같다. 고체상용으로 메르크사 제품 TLC 플레이트 실리카겔 60 F254를 사용한다.
Rf1 : 클로로포름 - 메탄올 - 아세트산 - 물(80 : 20 : 2.5 : 5) 하층
Rf2 : 클로로포름 - 메탄올 - 물 (70 : 30 : 5)
Rf3 : n-부탄올-아세트산-물 (2 : 1 : 1)
또한, 고성능액체 크로마토그래피에 의한 정제를 하기 재료를 사용하여 수행한다.
컬럼 : μBondapak C181.9×15 ㎝
이동상 : A) 0.05 % TFA, B) 아세토니트릴 고체상에서 펩티드의 제조는 펩티드 사슬을 1g (0.24 밀리몰 NH2/g) 의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민 수지를 사용하는 하기 방법에 따라 순차로 연장시키는 방법에 의해 수행한다 [J. Org. Chem., 52, (1987), 1197]
축합반응을 카이저 시험에서 확인한다. 필요하면, 상기 단계 1∼5를 반복한다.
[실시예 1]
Fmoc-Gly-OH- 수지를 측합 반응의 단계 1∼5 에 의해 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민 수지, 214㎎의 Fmoc-Gly-OH, 110㎎의 HOBt 및 0.12㎖의 DIC로부터 제조한다. 그 후 보호기를 Nα-탈보호 방법의 단계 6∼10에 의해 제거하여 H-Gly-수지를 축합 및 Nα- 탈보호 방법을 동일한 방법으로 반복하여 H-Asn-Cys(Trt)-Sar-Arg(Mtr)-Gly- 수지를 제조한 후 pGlu-OH 를 사용하는 또 다른 축합 반응에 의해 pGlu-Asn-Cys(Trt)-Sar-Arg(Mtr)-Gly- 수지를 수득한다. 건조시킨 후, 수지를 TFA-아니솔-티오페놀(10-1-1㎖) 에서 4 시간 동안 교반하고, 여과하고 TFA 로 세척한다.
TFA 용액을 실온에서 2 시간 동안 방치한 후, TFA 를 증류제거한다. 잔류물에 에테르 및 물의 혼합물을 가한다. 수성 부분을 수거하고 동결 건조한다.
수득한 동결-건조된 펩티드를 10㎖의 0.05 % TFA 수용액에 용해시킨다. 40㎎의 시스틴 S-모노옥시드를 빙냉하에 용액에 가하고 수득한 혼합물을 30 분간 교반한다.
그후, 수득한 용액을 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20분 직선 구배 (A)(이동상) 에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고, Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조하여 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 2]
pGlu-Asn-Cys(Trt)-Pro-Har(Mtr)-Gly- 수지를 실시예 1 과 동일한 방법에 따라 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민 수지로부터 제조한다. TFA 처리후, 수득한 수지를 실시예 1 과 동일한 방법으로 시스틴 S-모노옥시드와 반응시킨다.
그후 정제를 고성능액체 크로마토그래피로 수행하고, 이온교환 처리를 실시예 1과 동일한 방법에 따라 수행한 후, 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 3]
pGlu-Asn-Cys(Trt)-Pro-Cit-Gly- 수지를 실시예 1 과 동일한 방법으로 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민 수지로부터 제조한다. TFA 처리 후, 수득한 수지를 실시예 1과 동일한 방법으로 시스틴 S-모노옥시드와 반응시킨다.
그후 정제를 고성능 액체 크로마토그래피로 수행하고, 이온 교환 처리를 실시예 1과 동일한 방법에 따라 수행한 후, 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 4]
pGlu-Asn-Cys(Trt)-Arg(Mtr)-Arg(Mtr)-Cly- 수지를 실시예 1과 동일한 방법으로 1g 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민 수지로부터 제조한다. TFA 처리 후, 수득한 수지를 실시예 1 과 동일한 방법으로 시스틴 S-모노옥시드와 반응시킨다.
그후 정제를 고성능 액체 크로마토그래피로 수행하고, 이온 교환 처리를 실시예 1과 동일한 방법에 따라 수행한 후, 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 5]
pGlu-Asn-Cys(Trt)-Pip-Arg(Mtr)-Gly- 수지를 실시예 1과 동일한 방법에 따라 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민 수지로부터 제조한다. TFA 처리 후, 수득한 수지를 실시예 1과 동일한 방법으로 시스틴 S-모노옥시드와 반응시킨다.
그후 정제를 고성능 액체크로마토그래피로 수행하고, 이온 교환처리를 실시예 1과 동일한 방법에 따라 수행한 후, 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 6]
pGlu-Asn-Cys(Trt)-Aze-Arg(Mtr)-Gly- 수지를 실시예 1 과 동일한 방법에 따라 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민 수지로부터 제조한다. TFA 처리 후, 수득한 수지를 실시예 1과 동일한 방법으로 시스틴 S-모노옥시드와 반응시킨다.
그후 정제를 고성능 액체 크로마토그래피로 수행하고, 이온 교환처리를 실시예 1과 동일한 방법에 따라 수행한 후, 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 7]
[H-Asn-Ser-Pro-Arg-OH 아세테이트]
(1) Boc-Pro-Arg(NO2)-OBzl
250㎖의 THF에 용해시킨 15g의 H-Arg(NO2)-OBzl 의 용액에 15g의 Boc-Pro-OSu를 빙냉하에 가한 후 실온에서 18시간 동안 교반한다.
THF 를 증류 제거한 후, 잔류물을 AcOEt에 용해시킨다. AcOEt 용액을 묽은 염산, NaHCO3포화수용액 및 물로 차례대로 세척한 후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt 를 증류 제거한다. 잔류물을 CHC13-MeOH에 용해시키고 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 오일상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(2) Boc-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl
22g의 Boc-Pro-Arg(NO2)-OBzl 을 110㎖의 4NHCl-AcOEt에 실온으로 30분간 넣은 후, 용매를 증류 제거한다.
감압하에 건조시킨 후, 잔류물을 150㎖의 DMF에 용해시킨다. 용액에 9㎖의 Et3N, 12.8g 의 Boc-Ser(Bzl)-OH, 10g의 HOBt 및 9.4g의 DCC를 빙냉하에 가한 후, 실온에서 18시간동안 교반한다.
DCUrea를 여과로 제거하고, DMF를 증류 제거한다. 산류물을 AcOEt에 용해시킨다. 그후 AcOEt 용액을 묽은 염산, NaHCO3포화 수용액 및 물로 차례대로 세척한 후, 무수Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt를 증류 제거하고, 잔류물을 AcOEt-에테르로 처리하여 결정상 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
4.0g의 Boc-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzL 를 실온에서 30분간 15㎖의 4N HCl-AcOEt 에 넣고 용매를 증류 제거한다.
잔류물에, 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1 v/v) 및 NaHCO3포화수용액을 가한다. 유기성 부분을 수거하고 NaCl 포화 수용액으로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거하고, 잔류물을 50㎖의 DMF에 용해시킨다. 용액에 1.55g의 Z-Asn-OH, 1.3g 의 HOBt 및 1.3g의 DCC를 빙냉하에 가한다.
실온에서 18시간 동안 교반한 후, DCUrea 를 여과로 제거하고 DMF를 증류 제거한다.
잔류물을 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1 v/v) 에 용해시킨다. 그후, 용액을 NaHCO3포화 수용액, NaCl 로 포화된 묽은 HCl, NaCl 포화수용액으로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거하고, 잔류물을 에테르로 처리하여 결정상 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
수량 : 4.5g
20㎖의 80% 아세트산에 용해시킨 150㎎의 Z-Asn-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl의 용액을 10% 팔라듐-탄소존재하에 수소기체 기류에서 18시간동안 교반한다.
팔라듐-탄소를 여과로 제거하고 용매를 증류 제거한다. 잔류물을 물에 용해시킨 후, 동결 건조시킨다.
그후 수득한 생성물 120㎖/분(유속), 0∼10% (B) 20분 직선 구배 (A)(이동상)에서 고성능액체크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입) 처리하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 8]
[H-Asn-Thr-Arg-OH 아세테이트]
(1) Boc-Thr-Pro-Arg(NO2)-OBzl
9.6g의 Boc-Pro-Arg-(NO2)-OBzl 을 실온에서 30 분간 50㎖의 4N HCl-AcOEt에 넣은 후, 용매를 증류 제거한다.
감압하에 건조시킨 후, 잔류물을 100㎖의 DMF에 용해시킨다. 용액에, 4㎖의 Et3N, 6g의, Boc-Thr-Osu를 빙냉하에 가한 후, 실온에서 18시간 동안 교반한다.
DMF를 증류 제거하고, 잔류물을 AcOEt에 용해 시킨다. 그후 AcOEt 용액을 NaHCO3포화 수용액, 묽은 HCl 및 물로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt를 증류 제거하고 잔류물을 CHCl3-아세톤을 사용하여 실리카겔 컬럼프로마토그래피로 정제한 후, 에테르로 처리하여 결정상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
목적 화합물을 실시예 7-(3)과 동일한 방법으로 3.0g의 Boc-Thr-Pro-Arg(NO2)-OBzl, 15㎖의 4N HCl-AcOEt, 1.2g의 Z-Asn-OH, 1.2g의 HOBt 및 1.1g의 DCC로부터 제조한다.
(3) H-Asn-Thr-Pro-Arg-OH 아세테이트
150㎎의 Z-Asn-Thr-Pro-Arg(NO2)-OBzl을 실시예 7-(4)와 동일한 방법으로 팔라듐-탄소존재하에 환원시킨다. 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고, Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 9]
[H-Asn-Ala-Pro-Arg-OH 아세테이트]
(1) Boc-Ala-Pro-Arg(NO2)-OBzl
목적화합물을 실시예 8 - (1)과 동일한 방법으로 28.9g의 Boc-Pro-Arg(NO2)-OBzl, 150㎖의 HCl-AcOEt, 8㎖의 Et3N 및 16.3g의 Boc-Ala-OSu 로부터 제조한다.
목적화합물을 실시예 7-(3)과 동일한 방법으로 2.9g의 Boc-Ala-Pro-Arg(NO2)-OBzl, 15㎖의 4N HCl-AcOEt, 1.4g의 Z-Asn-OH, 1.0g, 1.0g의 HOBt 및 1.1g의 DCC로부터 제조한다.
150㎎의 Z-Asn-Ala-Pro-Arg(NO2)-OBzl을 실시예 7-(4) 와 동일한 방법으로 팔라듐-탄소존재하에 환원시킨다. 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0 ∼ 10% (B) 20 분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다
[실시예 10]
[H-Asn-Ser-D-Pro-Arg-OH 아세테이트]
(1) Boc-D-Pro-Arg(NO2)-OBzl
목적화합물을 실시예 7-(1)과 동일한 방법으로 9g의 H-Arg(NO2)-OBzl 및 9g의 Boc-D-Pro-Osu 로 부터 오일상의 생성물로 제조한다.
목적화합물을 실시예 7-(2) 와 동일한 방법으로 12g의 Boc-D-Pro-Arg(NO2)-OBzl, 60㎖의 4N HCl-AcOEt, 3.3㎖의 Et3N, 7g의 Boc-Ser(Bzl)-OH, 4.2g의 HOBt 및 5.1g의 DCC 로부터 오일상의 생성물로 제조한다.
(3) Z-Asn-Ser(Bzl)-D-Pro-Arg(NO2)-OBzl
목적화합물을 실시예 7-(3)과 동일한 방법으로 3.0g의 Boc-Ser(Bzl)-D-Pro-Arg(NO2)-OBzl, 10㎖의 4N-HCl-AcOEt, 1.2g의 Z-Asn-OH, 0.9g의 HOBt 및 0.95g의 DCC로부터 제조한다.
(4) H-Asn-Ser-D-Pro-Arg-OH 아세테이트
100㎎의 Z-Asn-Ser(Bzl)-D-Pro-Arg(NO2)-OBzl을 실시예 7-(4)와 동일한 방법으로 팔라듐-탄소존재하에 환원시킨다. 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능액체 크로마토그래피 정제하고 Dowex 1 × 2 (아세테이트형) 처리를 하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 11]
[H-Asn-Ser-Pro-Arg-Gly-NH2아세테이트]
Fmoc-Gly- 수지를 상술된 축합 방법에 의해 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민 수지, 214㎎의 Fmoc-Gly-OH, 110㎎의 HOBt 및 0.12㎖의 DIC 로부터 제조한다.
그후 보호기를 Nα-탈보호 방법에 의해 제거하여 H-Gly- 수지를 수득한다.
축합 및 Nα-탈보호 방법을 동일한 방법으로 반복하여 H-Asn-Ser-(But)-Pro-Arg(Mtr)Gly-수지를 제조한다.
건조시킨 후, 수지를 TFA-아니솔(10∼1㎖) 에서 실온으로 4 시간동안 교반한다. 수지를 여과로 제거하고 TFA 로 세척한다.
TFA 용액을 실온에서 2 시간동안 방치한 후, TFA를 증류제거한다. 잔류물에 에테르 및 물의 혼합물을 가한다. 수성부분을 수거하고 Dowex 1 × 2 (아테테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조시킨다.
그후, 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20 분 직선 구배(A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조시켜서 목적 화합들을 수득한다.
[실시예 12]
[H-Asn-Ser-Pip-Arg-OH 아세테이트]
(1) Boc-Pip-Arg(NO2)-OBzl
100㎖의 DMF에 용해시킨 10.6g의 H-Arg (NO2)-OBzl 의 용액에, 7.1g의 Boc-Pip-OH, 7.1g의 HOBt 및 6.7g의 DCC를 빙냉하에 가한다. 혼합물을 실온에서 18시간도안 교반한다. 생성된 DCUrea를 여과로 제거하고 DMF 를 증류제거 한다.
잔류물을 AcOEt에 용해시킨다. 수득한 용액을 NaHCO3포화수용액, 묽은 HCl 및 물로 차례대로 세척한후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt 를 증류제거하고 잔류물을 CHCl3- 아세톤을 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 오일상의 생성물로 목적화합물을 수득한다.
(2) Boc-Ser(Bzl)-Pip-Arg(NO2)-OBzl
5.2g의 Boc-Pip-Arg(NO2)-OBzl 을 25㎖의 4N HCl-AcOEt 에 실온에서 30분간 넣은 후, 용매를 증류 제거한다.
잔류물을 감압하에 건조시킨 후 50㎖의 DMF에 용해시킨다. 수득한 용액에 1.4㎖의 Et3N 및 3.9g의 Boc-Ser(Bzl)-OSu를 빙냉하에 실온에서 18 시간 동안 교반한다.
DMF를 증류제거하고 잔류물을 AcOEt에 용해시킨다.
수득한 용액을 NaHCO3포화수용액, 묽은 HCl 및 물로 차례대로 세척한 후 무수 Ha2SO4로 건조시킨다.
AcOEt 를 증류제거하고, 잔류물을 CHCl- 안세톤을 사용하는 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 정제하여 오일상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
1.6g의 Boc-Ser(Bzl)-Pip-Arg(NO2)-OBzl 을 6㎖의 4N HCl-AcOEt에 실온으로 30 분간 넣은 후, 용매를 증류 제거한다.
잔류물에 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1 v/v) 및 NaHCO3포화수용액을 가한다. 유기성 부분을 수거한 후 용액을 NaCl 포화 수용액으로 세척한 후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류제거한 후, 잔류물을 20㎖의 DMF에 용해시킨다. 수득한 용액에 0.53g의 Boc-Asn-OH, 0.53g의 HOBt 및 0.52g의 DCC를 빙냉하에 가한다.
수득한 용액을 실온에서 18 시간동안 교반한 후 DCUrea 를 여과로 제거하고 DMF 를 증류 제거한다.
잔류물을 AcOEt 에 용해시키고, 용액을 NaHCO3포화수용액, 묽은 염산 및 NaCl 포화 수용액으로 차례대로 세척한 후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거하고, 잔류물을 CHCl3-MeOH를 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여서 오일상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(4) H-Asn-Ser-Pip-Arg-OH 아세테이트
150㎎의 Boc-Asn-Ser(Bzl)-Pip-Arg(NO2)-OBzl 을 0.5㎖의 4N HCl-AcOEt에 실온으로 30 분간 넣은 후 용매를 증류 제거한다.
잔류물에 20㎖의 80 % 아세트산을 가한 후 수득한 혼합물을 10% 팔라듐 -탄소 존재하의 수소기류에서 18 시간 동안 교반한다.
팔라듐 - 탄소를 여과로 제거하고 용매를 증류제거한다. 잔류물을 물에 용해시킨 후 동결 건조시킨다.
그후, 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0 ∼ 10% (B) 20 분 직선 구배(A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조하여 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 13]
[H-Pro-Ser-Pip-Arg-OH 아세테이트]
(1) Z-Pro-Ser(Bzl)-Pip-Arg(NO2)-OBzl
목적화합물을 실시예 12-(1) 과 동일한 방법으로 1.0g의 Boc-Ser(Bzl)-Pip-Arg(No2)-OBzl, 5㎖의 4N HCl-AcOEt, 0.2㎖의 Et3N 및 0.49g의 Z-Pro-OSu로부터 제조한다.
(2) H-Pro-Ser-Pip-Arg-OH 아세테이트
150㎎의 Z-Pro-Ser(Bzl)-Pip-Arg(NO2)-OBzl 을 실시예 12-(4)와 동일한 방법으로 팔라듐-탄소 존재하에 환원시킨다. 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0 ∼ 10%(B) 20 분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
FAB 질량 스펙트럼 (M+1) : 470
[실시예 14]
[H-Pro-Asn-Ser-Pip-Arg-OH 아세테이트]
(1) Z-Pro-Asn-Ser(Bzl)-Pip-Arg(NO2)-OBzl
목적화합물을 실시예 12-(2) 와 동일한 방법으로 0.68g의 Boc-Asn-Ser(Bzl)-Pip-Arg(NO2)-OBzl, 3㎖의 4N HCl-AcOEt, 0.14㎖의 NMM 및 0.32g의 Z-Pro-OSu 로부터 제조한다.
(2) H-Pro-Asn-Ser-Pip=Arg-OH 아세테이트
150㎎의 Z-Pro-Asn-Ser(Bzl)-Pip-Arg(NO2)-OBzl 을 실시예 12-(4)와 동일한 방법으로 팔라듐-탄소 존재하에 환원시킨다. 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0 ∼ 10% (B) 20분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 15]
(1) Z-Arg(Mbs)-Cly-NH2
100㎖의 AcOEt 및 70㎖의 5 % 수성 시트르산의 혼합물에 10g의 Z-Arg(Mbs)-OH 디시클로헥실아민 염을 교반하에 용해시킨다. AcOEt 부분을 물로 세척하고 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거한다. 잔류물을 100㎖의 DMF에 용해시킨다. DMF용액에 1.7g의 H-gly-NH2히드로클로라이드, 1.7㎖ NMM, 2g의 HOBt 및 3.4g의 DCC를 빙냉하에 가한다. 혼합물을 실온에서 18시간동안 교반한다. 생성된 DCUrea를 여과로 제거하고 DMF 를 증류제거한다.
잔류물을 2-부탄올 및 CH2Cl2의 혼합물 (5 : 1 v/v) 에 용해시킨다. 수득한 용액을 NaHCO3포화 수용액, NaCl 로 포화된 묽은 염산 및 NaCl 포화 수용액으로 차례대로 세척한 후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류제거한다. 잔류물을 MeOH- 에테르로 처리하여 결정성 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(2) Boc-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2
200㎖의 80 % AcOH 에 용해시킨 20.8g의 Z-Arg(Mbs)-Gly-NH2의 용액을 10% 팔라듐-탄소존재하에 수소 기류에서 6 시간동안 교반한다.
팔라듐-탄소를 여과로 제거하고 용매를 여과액으로 부터 증류 제거한다. 잔류물을 감압하에 건조시킨 후 200㎖의 DMF에 용해시킨다. 수득한 용액 4.3㎖의 NMM 및 12.1g의 Boc-Pro-OSu 를 가하고 혼합물을 실온에서 18 시간동안 교반한다.
DMF를 증류제거한다. 잔류물을 2-부탄올 및 CH2Cl2(5 : 1 v/v) 의 혼합물에 용해시킨다. 수득한 응액을 NaHCO3포화 수용액, NaCl 로 포화된 묽은 염산 및 NaCl 포화 수용액으로 차례대로 세척한 후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거한다. 잔류물을 에테르로 처리하여 결정상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
9.8g의 Boc-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2를 100㎖의 THF 및 100㎖의 4N HCl-AcOEt 에 실온으로 30 분간 넣은 후, 용매를 증류 제거한다.
잔류물을 감압하에 건조시킨 후 100㎖의 DMF에 용해시킨다. DMF 용액에 3.6㎖의 NMM, 5.2g의 Boc-Cys(Acm)-OH, 2.7g의 HOBt 및 3.7g의 DCC 를 빙냉하에 가한다. 혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반한다.
DCUrea를 여과로 제거하고 DMF 를 증류 제거한다. 잔류물을 2-부탄올 및 CH2Cl2(5 : 1, v/v) 의 혼합물에 용해시킨다. 수득한 용액을 NaHCO3포화 수용액, NaCl로 포화된 묽은 HCl 및 NaCl 포화수용액으로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거한다. 잔류물을 에테르로 처리하여 결정상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(4) Z-pGlu-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2
1.6g의 Boc-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2를 10㎖의 4N HCl-AcOEt 에 실온으로 30 분간 넣은 후 용매를 증류 제거한다.
잔류물을 감압하에 건조시킨 후 20㎖의 DMF에 용해시킨다. 혼합물에 22㎖의 NMM 및 0.86g의 Z-pGlu-OSu를 빙냉하에 가한다. 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반한다.
DMF를 증류제거한다. 잔류물을 2-부탄올 및 CH2Cl2(5 : 1, v/v) 의 혼합물에 용해시킨다. 수득한 용액을 NaHCO3포화수용액, NaCl 포화된 묽은 HCl 및 NaCl 포화 수용액으로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거한다. 잔류물을 에테르로 처리하여 결정상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
5) Z-pGlu-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2
80㎖ CH2Cl2-MeOH (1 : 1, v/v) 에 용해시킨 1.3g의 Z-pGlu-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2의 용액에 0.22㎖의 Cl-Scm을 빙냉하에 가한다. 수득한 혼합물을 20분간 교반한다.
용매를 증류 제거한다. 잔류물을 CHCl3-MeOH를 사용하는 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하여서 결정상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(6)히드로클로라이드
10㎖의 DMF 에 용해시킨 500㎎의 Z-pGlu-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2의 용액에 210㎎의 시스테인 히드로클로라디드를 가하고 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반한다.
용매를 증류 제거한다. 잔류물을 CHCl3-MeOH를 사응하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 에테르로 처리하여서 결정상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
히드로클로라이드를 2㎖의 MSA 및 0.2㎖의 아니솔의 혼합물에 넣고 수득한 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반한다. 에테르를 첨가한 후 상층액 부분을 제거한다.
침전물을 물에 용해시킨다. 용액을 Dowex 1×2 (아세테이트 타입) 처리시키고 물을 증류 제거한다.
잔류물을 0.05% TFA 에 용해시키고 12㎖/분 (유속) 0∼10% (B) 2 분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체크로마토그래피로 정제하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
FAB 질량 스펙트럼 (M+1) : 661
[실시예 16]
(cypent :시클로펜틸기)
(1) Cypent-CO-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2
1.5g의 Boc-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2를 10㎖의 4N HCl-AcOEt 에 실온으로 30분간 넣고 용매를 증류 제거한다.
잔류물을 감압하에 건조시키고 15㎖의 DMF에 용해시킨다. 용액에 0.32㎖의 NMM 및 2㎖의 DMF에 용해시킨 무수 시클로펜탄카르복실산 (0.48g의 시클로펜탄카르복실산 및 0.43g의 DCC 로부터 제조됨)을 빙냉하에 가한다. 혼합물을 실온에서 4 시간 동안 교반하고 DMF를 증류 제거한다.
잔류물을 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1, v/v) 에 용해시킨다. 수득한 용액을 NaHCO3포화 수용액, NaCl 포화된 묽은 HCl 및 NaCl 포화 수용액으로 차례대로 세척한 후, 두수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거한다. 잔류물을 CHCl3-MeOH을 사용하는 실리카겔컬럼크로마토그래피로 정제하고 에테르로 처리하여서 결정상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(2) cyPent-CO-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2
목적 화합물을 실시예 15-(5) 와 동일한 방법으로 700㎎의 cyPent-CO-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2및 0.14㎖의 C1-Scm으로부터 제조한다.
목적 화합물을 실시예 15-(6)과 동일한 600㎎의 cyPent-CO-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2및 335㎎ 의 시스테인 히드로클로라이드로부터 제조한다.
(4)
60㎎의히드로클로라이드를 실시예 15-(7)과 동일한 방법에 따라 MSA-아니솔로 처리하고, 12㎖/분 (유속), 5∼25% (B) 20분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1×2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 17]
아세테이트
(1) Boc-Pro-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2
1.5g의 Boc-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2를 10㎖ 의 4N HCl-AcOEt 에 실온으로 30 분간 넣고 용매를 증류 제거한다.
잔류물을 감압하에 건조시키고 20㎖의 DMF에 용해시킨다. 용액에 0.32㎖의 NMM 및 0.67g의 Boc-Pro-OSu를 빙냉하에 가한다. 혼합물을 실온에서 18시간동안 교반한 후 DMF를 증류 제거한다.
잔류물을 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1 v/v)에 용해시킨다. 수득한 용액을 NaHCO3포화수용액, NaCl 포화된 묽은 HCl 및 NaCl 포화 수용액으로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거한다. 잔류물을 CHCl3-MeOH을 사용하는 실리카겔컬럼크로마토그래피로 정제하고 에테르로 처리하여서 결정상의 목적 화합물을 수득한다.
(2) Boc-Pro-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2
목적 화합물을 실시예 15-(5)와 동일한 방법으로 450㎎의 Boc-Pro-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-Cly-NH2및 0.08㎖ 의 C1-Scm 로부터 제조한다.
(3)히드로클로라이드
목적 화합물을 실시예 15-(6) 과 동일한 방법으로 400㎎의 Boc-Pro-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbs)-Cly-NH2및 197㎎의 시스테인 클로라이드로부터 제조한다.
(4)아세테이트
63㎎의히드로클로라이드를 실시예 15-(7) 과 동일한 방법에 따라 MSA-아니솔로 처리하고 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20 분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 18]
아세테이트
(1) Boc-Arg(Mbs)-β -Ala-OBzl
50㎖ 의 DMF에 용해시킨 3.5g의 H-β-Ala-OBzl p-톨루엔-술포네이트의 용액에 1.4㎖의 Et3N, 3.0g 의 Boc-Arg(Mbs)-OH, 1.3g의 HOBt 및 1.5g의 DCC를 빙냉하에 가한다.
혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반하고 DCUrea를 여과로 제거하고 DMF를 증류 제거한다.
잔류물을 AcOEt에 용해시키고, 수득한 용액을 NaHCO3포화 수용액, 묽은 염산 및 물로 차례대로 세척한 후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt를 증류 제거하여서, 오일상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(2) Boc-Pro-Arg(Mbs)-β-Ala-OBzl
3.6g의 Boc-Arg(Mbs)-β-Ala-OBzl을 15㎖ 의 4N HCl-AcOEt에 실온으로 30분간 넣고 용매를 증류 제거한다.
잔류물을 감압하에 건조시키고 50㎖ 의 DMF에 용해시킨다. 용액에 1.0㎖의 NMM 및 2.0g 의 Boc-Pro-Osu를 빙냉하에 가하고 혼합물을 실온에서 18 시간동안 교반한다.
DMF를 증류제거한다. 잔류물을 AcOEt 에 용해시키고, NaHCO3포화 수용액, 묽은 염산 및 NaCl 포화 수용액으로 차례대로 세척한 후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt를 증류제거하여 오일상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
목적 화합물을 실시예 16-(1) 과 동일한 방법으로 3.5g 의 Boc-Pro-Arg(Mbs)-β-Ala-OBzl, 15㎖ 의 4N HCl-AcOEt, 0.82㎖의 NMM 및 Boc-Cys(Acm)-OH 대칭적 산무수물 (3.2g의 Boc-Cys(Acm)-OH 및 1.1g의 DCC 로부터 제조됨) 로부터 제조한다.
(4) Z-pGlu-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-β-Ala-OBzl
목적 화합물을 실시예 15-(4) 와 동일한 방법으로 1.7g 의 Boc-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-β-Ala-OBzl, 10㎖의 4N HCl-AcOEt, 0.3㎖의 NMM 및 0.83g 의 Z-pGlu-Osu 로부터 제조한다.
(5) Z-pGlu-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbs)-β -Ala-OBzl
목적 화합물을 실시예 15-(5) 와 동일한 방법으로 1.9g 의 Z-pGlu-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-β-Ala-OBzl 0.29㎖ 의 C1-Scm 으로부터 오일상의 생성물로 제조한다.
(6)히드로클로라이드
목적 화합물을 실시예 15-(6) 과 동일한 방법으로 1.0g 의 Z-pGlu-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbs)-β-Ala-OBzl 및 0.4g의 시스테인 히드로클로라이드로부터 제조한다.
(7)아세테이트
70㎎의히드로클로라이드를 실시에 15-(7)과 동일한 방법으로 MSA-아니솔로 처리하고, 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20 분 직선 구배 (A) (이동상) 에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고, Dowex 1 × 2 (아세테이트타입) 처리를 하고 동결건조하여 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 19]
[H-Pro-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2아세테이트]
(1) Z-Pro-Cys(MBzl)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2
목적 화합물을 실시예 15-(4) 와 동일한 방법으로 2.4g의 Boc-Cys(MBzl)-Pro-Arg(Mbs)-Cly-NH2, 10㎖의 4N HCl-AcOEt, 0.6㎖의 NMM 및 1.3g의 Z-Pro-OSu로부터 제조한다.
(2) H-Pro-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2아세테이트
150㎎의 Z-Pro-Cys(MBzl)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2를 실시예 15-(7) 과 동일한 방법으로 MSA- 아니솔로 처리하고, 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20 분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고, Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입)처리를 하고 동결건조하여 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 20]
[pGlu-Asn-Ser-Pro-Arg-Cly-NH2아세테이트]
2㎖의 물에 30㎎ 의 H-Pro-Cys-Pro-Arg-Cly-NH2아세테이트를 용해시킨다. 수득한 용액을 묽은 수성 암모늄을 사용하여 pH 7 로 조절하고, 실온에서 7 일간 동안 교반한 후 아세트산 부가물을 사용하여 산성화하고 동결 건조시킨다.
수량 : 28 mg
Rf3 : 0.02
[α]D: -142.9°(c=0.5, 물)
FAB : 질량 스펙트럼 (M+1) : 1054
[실시예 21]
[pGlu-Asn-Ser-Pro-Arg-Cly-NH2아세테이트 ]
Fmoc-Gly-수지를 상술된 축합방법에 의해 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민수지, 214㎎ 의 Fmoc-Cly-OH, 110㎎의 HOBt 및 0.12㎖ 의 DIC 로부터 제조한다.
그후 보호기를 Nα-탈보호 방법에 의해 제거하여 H-Gly-수지를 수득한다.
축합 및 Nα-탈보호 방법을 동일한 방법으로 반복하여 H-Asn-Ser(But)-Pro-Arg(Mtr)-Gly-수지를 제조한 후 pGLu-OH를 사용하는 축합 반응을 수행하여 pGlu-Asn-Ser(But)-Pro-Arg(Mtr)-Gly-수지를 수득한다. 건조 시킨 후, 수지를 TFA-아니솔 (10-l㎖)에서 실온으로 4시간 동안 교반한다. 수지를 여과로 제거하고 TFA 로 세척한다.
TFA 용액을 실온에서 2시간동안 방치한 후, TFA를 증류제거한다. 잔류물에 에테르-물을 가한다. 수성부분을 수거하고 Dowex 1×2 (아세테이트 타입)처리를 하고 동결 건조한다.
그후, 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20 분 직선구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고, Dowex 1×2 (아세테이트형) 처리를 하고 동결 건조하여 목적 화합물을 수득한다.
수량 : 69 mg
Rf3 : 0.14
[α]D: -91.8°(c=0.5, 물)
FAB : 질량 스펙트럼 (M+1) : 640
[실시예 22]
[pGlu-Asn-Ser-D-Pro-Arg-Gly-NH2아세테이트]
pGlu-Asn-Ser(But)-D-Pro-Arg(Mtr)-Gly-수지를 실시예 21 과 동일한 방법에 따라 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민수지로부터 제조한 후 TFA 처리, 고성능액체 크로마토그래피에 의한 정제, 이온 교환 처리 및 동결 건조를 실시예 21과 동일한 방법에 따라 수행하여 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 23]
[pGlu-Asn-Ser-Pro-D-Arg-Gly-NH2아세테이트]
pGlu-Asn-Ser(But)-Pro-D-Arg(Mtr)-Gly-수지를 실시예 21 과 동일한 방법에 따라 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민수지로부터 제조한 후 TFA 처리, 고성능액체 크로마토그래피에 의한 정제, 이온 교환 처리 및 동결 건조를 실시예 21 과 동일한 방법에 따라 수행하여 목적'화합물을 수득한다.
수량 : 49 mg
Rf3 : 0.15
[α]D: -67.4°(c=0.5, 물)
FAB : 질량 스펙트럼 (M+1) : 640
[실시예 24]
[pGlu-Asn-Ser-D-Pro-D-Arg-Gly-NH2아세테이트]
pGlu-Asn-Ser(But)-D-Pro-D-Arg(Mtr)-Gly-수지를 실시예 21 과 동일한 방법에 따라 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민수지로부터 제조한다 TFA 처리, 고성능액체 크로마토그래피에 의한 정제, 이온 교환 처리 및 등결 건조를 실시예 21과 동일한 방법에 따라 수행하여 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 25]
[pGlu-Asn-Ser-Pro-Arg-OH]
(1) Boc-Pro-Arg(NO2)-OBzl
250㎖ THF에 용해시킨 15g의 H-Arg(NO2)-OBzl 의 용액에 15g의 Boc-Pro-Osu 를 빙냉하에 가한후 실온에서 18시간 동안 교반한다.
THF를 증류 제거한 후, 잔류물을 AcOEt 에 용해시킨다. AcOET 용액을 묽은 염산, NaHCO3포화 수용액 및 물로 차례대로 세척한 후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt를 증류 제거한다. 잔류물을 CHCl3-MeOH 에 용해시키고 실리카겔컬럼크로마토그래피로 정제하여 오일상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(2) Boc-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl
22g의 Boc-Pro-Arg(NO2)-OBzl을 실온에서 30분간 110㎖ 의 4N HCl-AcOEt 에 넣은 후, 용매를 증류 제거한다.
감압하에 건조시킨 후, 잔류물을 150㎖ 의 DMF에 용해시킨다. 용액에 9㎖의 Et3N, 12.8g의 Boc-Ser (Bzl)-OH, 10g의 HOBt 및 9.4g 의 DCC를 빙냉하에 가한 후, 실온에서 18시간동안 교반한다.
DCUrea를 여과로 제거하고, DMF를 증류 제거한다. 잔류물을 AcOEt 에 용해시킨다. 그후 AcOEt 용액을 묽은 HCl, NaHCO3포화 수용액, 묽은 HCl 및 물로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt를 증류 제거하고 잔류물을 AcOEt로 처리하여 결정상 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(3) Z-pGlu-Asn-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl
2.3g 의 Boc-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl를 10㎖의 4N HCl-AcOEt 에 실온으로 30분간 넣은 후, 용매를 증류 제거한다.
잔류물에, 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1 v/v) 및 NaHCO3포화 수용액을 가한다. 유기성 부분을 수거하고 NaCl 포화 수용액으로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용액을 증류 제거하고, 잔류물을 20㎖ 의 DMF에 용해시킨다. 용액에 1.4g의 Z-pGlu-Asn-OH, 0.7g의 HOBt 및 0.8g의 DCC를 빙냉하에 가한다.
실온에서 18시간동안 교반한 후, DCUrea를 여과로 제거하고 DMF를 증류 제거한다.
잔류물을 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1 v/v) 에 용해시킨 후 용액을 NaHCO3포화 수용액, NaCl로 포화된 물은 HCl 및 NaCl 포화 수용액으로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거하고, 잔류물을 CHCl3-MeOH 에 용해시키고 실리카겔컬럼크로마토그래피로 정제하여서 오일상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
20㎖의 80% 아세트산에 용해시킨 100㎎의 Z-pGlu-Asn-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl 의 용액을 10% 팔라듐-탄소 존재하의 수소 기체류에서 18시간동안 교반한다.
팔라듐-탄소를 여과로 제거하고 용매를 증류 제거한다. 잔류물을 물에 용해시킨 후, 동결 건조시킨다.
그후 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20분 직선구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1×2 (아세테이트타입)처리하고 동결건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 26]
[H-Pro-Asn-Ser-Pro-Arg-OH 아세테이트]
(1) Boc-Pro-Arg(NO2)-OBzl
250㎖ 의 THF에 용해시킨 15g의 H-Arg(NO2)-OBzl 의 용액에 15g의 Boc-Pro-Osu를 빙냉하에 가한후 실온에서 18시간동안 교반한다.
THF를 증류 제거한 후, 잔류물을 AcOEt 에 용해시킨다. AcOEt 용액을 묽은 염산, NaHCO3포화 수용액 및 물로 차례대로 세척한 후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt를 증류 제거한다. 잔류물을 CHCl3-MeOH에 용해시키고 실리카겔컬럼크로마토그래피로 정제하여 오일상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(2) Boc-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl
22g의 Boc-Pro-Arg(NO2)-OBzl을 실온에서 30분간 110㎖ 의 4N HCl-AcOEt 에 넣은 후, 용매를 증류 제거한다.
감압하에 건조시킨 후, 잔류물을 150㎖ 의 DMF에 용해시킨다. 용액에 9㎖의 Et3N, 12.8g의 Boc-Ser (Bzl)-OH, 10g의 HOBt 띤 9.4g 의 DCC를 빙냉하에 가한 후, 실온에서 18시간동안 교반한다.
DCUrea를 여괴로 제거하고, DMF를 증류 제거한다. 잔류물을 AcOEt 에 용해시킨다. 그후 AcOEt 용액을 NaHCO3포화 수용액, 묽은 HCl 및 물로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt를 증류 제거하고 잔류물을 AcOEt-에테르로 처리하여 결정상 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(3) Boc-Asn-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl
4g의 Boc-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl를 실온에서 30분간 20㎖ 의 4N HCl-AcOEt 에 넣은 후 용매를 증류 제거한다.
잔류물에, 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1 v/v) 및 NaHCO3포화 수용액을 가한다. 유기성 부분을 수거하고 NaCl 포화 수용액으로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용액을 증류 제거하고, 잔류물을 60㎖의 DMF에 용해시킨다. 용액에 1.34g의 Boc-Asn-OH, 1.34g의 HOBt 및 1.32g의 DCC를 빙냉하에 가한다.
실온에서 18시간동안 교반한 후, DCUrea를 여과로 제거하고 DMF를 증류 제거한다.
잔류물을 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1 v/v) 에 용해시킨 후 용액을 NaHCO3포화 수용액, NaCl로 포화된 묽은 HCl 및 NaCl 포화 수용액으로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거하고, 잔류물에 AcOEt를 가하여 결정상 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
수량 : 4.3g
융점 : 186~187℃
Rf1 : 0.55, Rf2 : 0.73
[α]D: -34.6°(c=1.0, DMF)
(4) Z-Pro-Asn-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl
3.5g의 Boc-Asn-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl을 15㎖ 의 4N HCl-AcOEt에 실온으로 30분간 넣고 용매를 증류 제거한다.
감압하에 건조시킨 후, 잔류물을 DMF에 용해시킨다. 용액에 0.8㎖ 의 NMM 및 1.52g의 Z-Pro-Osu를 빙냉하에 가한 후, 실온에서 18시간동안 교반한다.
DMF를 증류 제거한다. 잔류물을 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1, v/v) 에 용해시킨 후, 용액을 NaHCO3포화 수용액, NaCl 포화된 묽은 HCl 및 NaCl 포화수용액으로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류제거한다. 잔류물을 CHCl3-MeOH을 사용하는 실리카겔컬럼크로마토그래피로 정제하고 에테르로 처리하여서 결정상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(5) H-Pro-Asn-Ser-Pro-Arg-OH 아세테이트
20㎖ 의 80% 아세트산에 용해시킨 150㎎의 Z-Pro-Asn-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl 의 용액을 10% 팔라듐-탄소 존재하에 수소 기체기류에서 18시간 동안 교반한다.
팔라듐-탄소를 여과로 제거하고 용매를 증류 제거한다.
잔류물을 물에 용해시킨 후, 동결건조시킨다.
그후 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1×2 (아세테이트 타입) 처리하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
FAB 질량 스펙트럼 (M+1) : 570
[실시예 27]
[H-Pro-Ser-Pro-Arg-OH 아세테이트]
(1) Z-Pro-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl
목적 화합물을 실시예 26-(4)와 동일한 방법으로 4.0g 의 Boc-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl, 20㎖ 의 4N HCl-AcOEt, 1㎖의 NMM 및 2.2g의 Z-Pro-Osu 로 부터 제조한다. 에테르 처리를 수행하여 결정상의 생성물로 목적화합물을 수득한다.
(2) H-Pro-Ser-Pro-Arg-OH 아서테이트
150㎎의 Z-Pro-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl을 실시예 26-(5)와 동일한 방법으로 팔라듐-탄소 존재하에 환원시킨다. 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20 분 직선구배 (A) (이동상)에서 고성능액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1×2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 28]
[H-Pro-Ser-Pro-Arg-Gly-NH2아세테이트]
(1) Boc-Arg(NO2)-Gly-NH2
80㎖ 의 DMF에 용해시킨 10g의 Boc-Arg(NO2)-OH의 용액에 3.5㎖ 의 NMM 및 3.1㎖ 의 에틸클로로카르보네이트를 빙냉하에 가한 후 15분간 교반한다.
수득한 용액에 20㎖의 DMF에 용해시킨 3.5㎖ 의 NMM 및 3.5g의 H-Gly-NH2히드로클로라이드의 혼합물을 가한 후 수득한 혼합물을 빙냉하에 3시간 동안 교반한다.
DMF를 증류 제거한다. 잔류물을 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1, v/v) 에 용해시킨 후, 용액을 NaHCO3포화 수용액, NaCl 포화된 묽은 HCl 및 NaCl 포화수용액으로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거하고, 잔류물에 AcOEt를 가하여 결정상의 생성물로 목적 화합들을 수득한다.
(2) Boc-Pro-Arg(NO2)-Gly-NH2
목적 화합물을 실시예 26-(4)와 동일한 방법으로 6.0g의 Boc-Arg(NO2)-Gly-NH2, 40㎖의 4N HCl-AcOEt, 3.4㎖ 의 Et3N 및 5.1g의 Boc-Pro-Osu 로부터 제조한다.
(3) Boc-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-Gly-NH2
목적 화합물을 실시예 26-(4)와 동일한 방법으로 6.0g 의 Boc-Pro-Arg(NO2)-Cly-NH2, 35㎖의 4N HCl-AcOEt, 1.8㎖ 의 Et3N 및 5.1g의 Boc-Ser(Bzl)-Osu 로부터 제조한다.
(4) Z-Pro-Ser (Bzl)-Pro-Arg(NO2)-Gly-NH2
목적 화합물을 실시예 26-(4) 와 동일한 방법으로 1.0g의 Boc-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-Gly-NH2, 10㎖의 4N HCl-AcOEt, 0.34㎖ 의 NMM 및 0.54g의 Z-Pro-Osu로부터 제조한다.
(5) H-Pro-Ser-Pro-Arg-Gly-NH2아세테이트
150㎎ 의 Z-Pro-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-Gly-NH2를 실시예 26-(5) 와 동일한 방법으로 팔라듐-탄소 존재하에 환원시킨다. 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고, Dowex 1×2 (아세테이트 타입) 처리를 하고, 동결 건조하여 목적 화합물을 수득한다.
본 발명의 펩티드 및 펩티드 유도체의 효과를 나타내는 약리학적 시험의 예를 하기에 기재한다.
약리학적 시험 : 시클로헥스이미드에 의한 실험적인 역행성
[건망증을 개선시키는 효과에 대한 조사]
기억 고정에 대한 본 발명의 펩티드 및 펩티드 유도체의 효과를 Burbach 등의 『Sciences』제 221 권 페이지 1310∼1312(1983) 에 기술된 방법에 따라 Wistar 계 수컷쥐를 사용하는 일회-시행수동회피 실험을 수행함으로써 평가한다.
기구는 명실과 암실로 이루어지고 마루는 스테인레스 스틸 그리드(grid) 로 만들어진다. 명실에 들어있는 쥐는 자유롭게 암실로 이동할 수 있다. 암실로 들어갈 때 쥐는 전기쇼크를 받는다. 전기쇼크에 대한 수동회피 행동의 보유를 반응 잠재시간 즉, 전기쇼크를 경험한 쥐가 이미 결정된 간격후에 명실에서 암실로 다시 들어가는데 필요한 시간을 측정함으로써 결정한다.
쥐는 본 발명의 펩티드 또는 생리식염수 용액을 투여한지 1 시간 후에 전기 쇼크(0.5㎃)를 받는다. 전기쇼크를 경험시키고 그 즉시 쥐를 피하주사에 의해 2.7- 3.0㎎/㎏의 시클로헥스이미드 또는 생리식염수로 처리한다. 투여한지 48시간 후에, 쥐의 기억보유를 시험한다. 오직 생리 식염수만을 투여했던 쥐는 약 300 초의 반응 잠재시간을 나타내고, 시클로헥스이미드만을 투여한 대조군의 쥐는 약 50초의 반응 잠재시간을 나타내어 역행성 건망증을 발현한다.
본 발명의 각각의 펩티드를 투여한 쥐의 평균 반응 잠재시간을 대조군의 평균 반응 잠재시간과 비교한다. 각 군에 6 ∼ 8 마리의 쥐를 사용하여 시험한다. 반응 잠재시간을 최대로 600 초까지 측정한다.
각 실시예에서 수득된 펩티드의 투여량 및 효과(대조군의 반응 잠재시간에 대한 각 군의 반응 잠재시간의 비, % 로 나타냄)을 표 1 에 기재한다.
상기 실험 결과로부터 본 발명의 펩티드 및 펩티드 유도체가 역행성 건망증을 개선시키는 효과를 보임이 명백해진다.
본 발명의 펩티드 유도체를 함유하는 약제의 제조예를 하기에 기재한다.
[제조예 1(주사제)]
주사용 증류수 100㎖ 에 실시예 1에서 수득된 1.0㎎ 의 펩티드 유도체 및 0.9g 의 NaCl을 가하여 pH 가 NaOH를 사용하여 6.0 ∼ 8.0으로 조절된 수용액을 제조한다. 용액을 멸균 조건하에 여과하고 여과액을 1㎖ 앰플에 충진시킨다. 앰플을 녹여 가열에 의한 멸균 조건하에 봉인하여 주사제를 제조한다.
실시예 7, 12, 15, 21 및 26에서 수득된 각 펩티드에 대해 상술된 방법을 반복하여 각 펩티드를 함유하는 주사제를 제조한다.
[제조예 2(동결건조제제)]
주사용 증류수 100㎖ 에 실시예 1에서 수득된 5㎎ 의 펩티드 유도체 및 5g의 D-만니톨을 가하여 pH 가 인산염 완충액을 사용하여 6.0 ∼ 8.0 으로 조절된 수용액을 제조한다. 용액을 멸균 조건하에 여과하고, 여과액을 여러개의 1㎖ 바이알에 분할한다. 분할된 분량을 동결건조시켜서 주사용 동결건조제제를 제조한다.
[제조예 3(점비제)]
100㎖ 의 생리식염수 용액에 실시예 1에서 수득된 10㎎ 의 펩티드 유도체를 가한다. 혼합물의 pH를 시트르산 완충액을 사용하여 3.0 ∼ 6.0 으로 조절하여 투여량 0.5㎖ 내에 본 발명의 펩티드 50㎍을 함유하는 점비제를 제조한다.
실시예 7, 12, 15, 21 및 26에서 수득된 각 펩티드에 대해 상술된 방법을 반복하여 각 펩티드를 함유하는 점비제를 제조한다.
[제조예 4(좌제)]
98.5g의 하드지방 (포화 지방산의 트리글리페라이드)에 0.5g의 난황 레시틴을 가한다. 혼합물을 40 ∼ 45℃ 온도에서 용해시키고 용해된 혼합물에 실시예 1에서 수득된 5㎎의 펩티드 유도체를 1g의 PEG 400에 용해시킨 용액을 교반하면서 가한다. 수득한 분산액(1g)을 좌제용 주형에 채운다. 고화후 주형에서 성형품을 분리하여 좌제를 제조한다.
실시예 7, 13, 15, 21 및 26에서 수득된 각 펩티드에 대해 상술된 방법을 반복하여 각 펩티드를 함유하는 좌제를 제조한다.
본 발명의 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용가능한 염은 현저한 향지능 작용을 나타내고, 노인성 치매 (알츠하이머 치매), 대뇌혈관성 치매 및 기타 치매 질병의 예방 및 치료용 약제의 활성 성분으로 눈에 띄게 효과적이다.

Claims (6)

  1. 하기식(Ⅱ)를 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용 가능한 그의 염 :식중, A 는 Ser, Thr 또는 Ala 이고, n 은 1 또는 0 이다).
  2. 제1항에 있어서, 펩티드가 하기식중 하나를 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용 가능한 그의 염 :
  3. 약학적으로 활성 성분으로 하기식(Ⅱ)를 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용 가능한 그의 염을 함유하는 항치매제 :(식중, A 는 Ser, Thr 또는 Ala 이고, n 은 1 또는 0 이다).
  4. 하기식 (Ⅳ)를 갖는 펩티드 또는 하기식 (Ⅵ)를 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용 가능한 그의 염 :(식중, A는 시클로펜틸카르보닐, Pro 또는 pGlu 이고, B는 Gly 또는 β-Ala 이고, W는 수소원자 또는 식(Ⅴ)를 갖는 기를 나타낸다).
  5. 제4항에 있어서, 펩티트가 하기식중 하나를 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용가능한 그의 염 :
  6. 약학적 활성 성분으로 하기식(Ⅳ)를 갖는 펩티드 또는 하기식(Ⅵ)를 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용 가능한 그의 염을 함유하는 항치매제 :(식중, A는 시클로펜틸카르보닐, Pro 또는 pGlu이고, B는 Gly 또는 β-Ala 이고, W는 수소원자 또는 식(Ⅴ)를 갖는 기이다).
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