본 발명은 하기식(Ⅰ) 을 갖는 신규한 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용가능한 그의 염을 제공한다.
(식중에서, A 및 B 는 아미노산이며, 이때 A 가 D- 또는 L-Pro 이면, B 는 Har 또는 Cit 이고, A 가 D-Pro 이면, B 는 D-Arg 이고, B 가 D- 또는 L-Arg 이면, A 는 Ser, Pip, Aze 또는 Arg 이다).
또한 본 발명은 약학적 활성 성분으로 상기 식(Ⅰ) 을 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염의 유효량 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 함유하는 항치매제를 제공한다.
본 발명은 또한 하기 식(Ⅱ)를 갖는 신규한 펩티드, 그의 작용성 유도체, 및 약학적으르 허용 가능한 그의 염을 제공한다.
(식중에서, A 는 Ser, Thr 또는 Ala 이고, n 은 1 또는 0 이다).
또한, 본 발명은 약학적 활성 성분으로 상기 식(Ⅱ)를 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염 유효량 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 함유하는 항치매제를 제공한다.
본 발명은 또한 하기식(Ⅲ)을 갖는 신규한 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용 가능한 그의 염을 제공한다 :
(식중에서, A 는 Pro-Asn-, Asn- 또는 Pro- 이다).
또한 본 발명은 약학적 활성 성분으로 상기 식(Ⅲ)을 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염 유효량 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 함유하는 항치매제를 제공한다.
본 발명은 하기 식(Ⅳ)를 갖는 신규한 펩티드 또는 하기식(Ⅳ)을 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용 가능한 그의 염을 제공한다 :
(식중, A 는 시클로펜틸카르보닐, Pro 또는 pGlu 이고, B 는 Gly 또는 Ala이고, W 는 수소원자 또는 식(Ⅴ)를 갖는 기를 표시한다).
또한 본 발명은 약학적 활성 성분으로 상기 식(Ⅳ)을 갖는 펩티드. 그의 작용성 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염 유효량 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 함유하는 항치매제를 제공한다.
본 발명은 또한 하기식(Ⅶ) 을 갖는 신규한 펩티브, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용 가능한 그의 염을 제공한다 :
(식중, A 는 Aze, D- 또는 L-Pro, Pip 또는 Sar 이고, B 는 D- 또는 L-Arg, Cit, Har, Lys 또는 Orn 을 나타내고, N 은 1 또는 0 이다).
또한, 본 발명은 약학적 활성 성분으로 상기식(Ⅶ)를 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염 유효량 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 함유하는 항치매제를 제공한다.
본 발명은 또한 하기식(Ⅷ) 를 갖는 신규한 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용 가능한 그의 염을 제공한다.
(식중에서, m 및 n 은 독립적으로 0 또는 1 이다).
또한, 본 발명은 약학적 활성 성분으로 상기 식(Ⅷ) 를 갖는 펩티드, 그의 작용성 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염 유효량 및 약학적으로 허용 가능한 그의 염 유효량 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 함유하는 항치매제를 제공한다.
상술된 펩티드, 그의 작용성 유도체 및 약학적으로 허용가능한 그의 염은 쥐를 사용한 수동 회피 시험에서 현저한 향지능 작용을 나타내고, 노인성 치매(알츠하이머 치매), 대뇌혈관성 치매 및 기타 치매 질병의 예방 및 치료용 약제의 활성 성분으로 눈에 띠에 효과적이다.
본 발명의 상기 식을 갖는 펩티드 및 펩티드 유도체는 아미노산 서열이 상술된 공지의 펩티드의 아미노산 서열과 다른 화합물이다.
본 명세서에선 펩티드 및 펩티드 유도체의 "작용성 유도체"라는 용어는 하기 유도체를 의미한다 :
a) N-아실기 (들) 를 갖는 N-아실유도체 [이때 N- 아실기는 1 ∼ 6 의 탄소 원자를 갖는 지방족 카르복실산으로 부터 유도된, 바람직하게는 아세트산으로부터 유도된 것으로, N-아실기를 -NHCOR (식중, R 은 1 ∼ 5 의 탄소원자를 갖는 알킬기이다) 로 표시할 수 있다.],
b) -CONH2, -CONHR, 또는 -CONR2(식중, R 은 1 ∼ 6 의 탄소원자를 갖는 알킬기이다) 로 표시할 수 있는 아미드, 또는 1 ∼ 6 탄소원자의 알킬 사슬(들)을 갖는 모노알킬 또는 디알킬 치환 아미드 형태의 기를 갖는 유도체, 및
c) -COOR (식중, R 은 1 ∼ 18 의 탄소원자, 바람직하게는 1 ∼ 6 의 탄소원자를 갖는 알킬기이다) 로 표시할 수 있는, 1 ∼ 18 의 탄소원자를 갖는 알코올로부터 유도된 에스테르, 바람직하게는 1 ∼ 6 의 탄소원자를 갖는 지방족 알코올로 부터 유도된 에스테르 형태의 기를 갖는 유도체.
본 발명의 약학적으로 허용 가능한 펩티드 및 펩티드 유도체의 염의 예로 알칼리 금속염 및 암모늄 염과 같은 산부가염 및 염기성 염을 언급할 수 있다. 이러한 산부가염의 예는 무기산 (예. 황산, 염산 및 인산) 의 염 또는 유기산 (예. 아세트산, 프로피온산, 시트르산, 타르타르산, 말레산, 옥살산 및 메탄술폰산) 의 염을 포함한다. 염기성 염의 예는 나트륨염, 칼륨염 및 트리에틸아민염을 포함한다.
명세서에 아미노산, 펩티드, 보호기 및 용매를 화학 분야에서 관용적으로 사용되는 약자 또는 IUPAC-IUB 생화학 명명 위원회에서 사용되는 약자에 의해 기재한다. 예를 들어, 하기 기호를 명세서에서 사용한다. 아미노산이 광학 배치에 대한 특별한 표시없이 기재되면, 아미노산을 L-타입으로 해석해야 한다.
β-Ala : β-알라닌
Arg : 아르기닌
Ala : 알라닌
Asn : 아스파라긴
Aze : 아제티딘-2-카르복실산
Cit : 시투룰린
Cys : 시스테인
Gly : 글리신
Har : 호모아르기닌
Lys : 리신
Orn : 오르니틴
pGlu : 피로글루탐산
Pip : 피페콜산
Pro : 프롤린
Sar : 사르코신
Ser : 세린
Thr : 트레오닌
Boc : t-부톡시카르보닐
Z : 벤질옥시카르보닐
Fmoc : 9-플루오르에닐메톡시카르보닐
But : t-부틸
Mbs : p-메톡시벤젠술포닐
MBzl : p-메톡시벤질
Acm : 아세트아미도메틸
Scm : S-카르보메톡시술페닐
Mtr : 4-메톡시, 2,3,6-트리메틸벤젠술포닐
NO2: 니트로
Bzl : 벤질
OBzl : 벤질에스테르
Osu : N-히드록시숙신이미드 에스테르
DCC : N,N'-디시클로헥실카르보디이미드
DCUrea : N,N'-디시클로헥실우레아
DIC : N,N'-디이소프로필카르보디이미드
HOBt : 1-히드록시벤조트리아졸
Et2N : 트리에틸아민
Trt : 트리틸
NMM : N-메틸모르폴린
TFA : 트리플루오로아세트산
MSA : 메탄술폰산
AcOEt : 에틸 아세테이트
AcOH : 아세트산
THF : 테트라히드로푸란
DMF : N,N-디메틸포름아미드
MeOH : 메탄올
본 발명의 화합물을 펩티드 화학에서 통상적으로 사용되는 방법에 의해 제조한 수 있다. 예를 들어, 펩티드를 Schroder and Lubke 저, 「The Peptides」제 1 권, Acadmeic Press, New York (1965) 및 Nobuo Izumiya 등 저, 「펩티드 합성의 기초 및 실험」Maruzen, Tokyo (1985)에 기재된 방법에 의해 제조할 수 있고, 용액상 합성 또는 고체상 합성 둘 중 하나에 의해 제조할 수 있다.
펩티드 결합을 형성하기 위한 방법의 예는 아지드법 , 산클로라이드법, 대칭적 무수물법, 혼합 무수물법, 카르보디이미드법, 카르보디이미도-부가물법, 활성에스테르법, 카르보디이미다졸법, 산화-환원법, 및 Woodward 시약 K 를 사용하는 방법을 포함한다.
펩티드의 합성에서, 본 발명의 펩티드를 형성하는 아미노산인 시스틴 부위를 시스틴 유도체를 사용함으로써 또는 펩티드 사슬을 형성시킨 후 펩티드의 시스테인 잔기를 통상적인 방법에 의해 시스틴 잔기로 전환시킴으로써 형성시킬 수 있다.
축합 반응을 수행하기 전에, 반응에 관여하지 않은 카르복실기, 아미노기, 구아니도기, 히드록실기, 메르캅토기 등을 보호시킬 수 있고, 축합 반응에 관여하는 카르복실기 및 아미노기를 당 분야에 공지된 방법으로 활성화시킬 수 있다.
카르복실기를 보호하는 기의 예는 메틸, 에틸, 벤질, p-니트로벤질, t-부틸 및 시클로헥실과 같은 에스테르-형성기를 포함한다.
아미노기를 보호하는 기의 예는 벤질옥시카르보닐, t-부톡시카르보닐, 이소보르닐옥시카르보닐, 및 9-플루포로에닐메틸옥시카르보닐을 포함한다.
구아니디노기를 보호하는 기의 예는 니트로, 벤질옥시카르보닐, 토실, p-메톡시벤젠술포닐 및 4-메톡시-2,3,6-트리메틸벤젠술포닐을 포함한다.
히드록실기를 보호하는 기의 예는 t-부틸, 벤질, 테트라히드로피라닐 및 아세틸을 포함한다.
데르캅토기를 보호하는 기의 예는 트리틸, 아세트아미도메틸, 벤질, p-메톡시벤질 및 3-니트로-2-피리딘술페닐을 포함한다.
카르복실기의 활성 형태의 예는 대칭적인 무수물, 아지드 및 활성 에스테르[알코올 (예.펜타클로로페놀, 2,4-디니트로페놀, 시아노메틸알코올, p-니트로페놀, N-히드록시-5-노르보르넨-2,3-디카르복실이미드, N-히드록시숙신이미드, N-히드로옥시프탈아미드 및 1-히드록시벤조트리아졸)과의 에스테르] 를 포함한다. 활성화 아미노기의 예는 아미드 포스페이트이다.
반응을 클로로포름, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, N,N-디메틸포름아미드, 디메틸슬폭시드, 피리딘, 디옥산, 테트라히드로푸란, 물, 메탄올 및 이 매들의 혼합물과 같은 용매에서 수행한다.
반응 온도는 반응에 일반적으로 사용되는 약 -30℃∼50℃의 범위일 수 있다.
본 발명의 펩티드 보호기를 제거하는 반응은 보호기의 종류에 따라 다르지만, 펩티드 결합에 아무런 영향을 주지 않고 보호기를 이탈시킬 수 있는 것이어야 한다.
보호기를 산처리 예를 들어, 염화 수소, 브롬화수소, 플루오르화수소, 메탄술폰산, 트리플루오로메탄술폰산, 트리플루오로아세트산 및 이들 산의 혼합물로 처리함으로써 제거시킬 수 있다. 또한, 액체 암모니아에서 나트륨 금속을 사용하는 환원 또는 팔라듐-탄소를 사용하는 촉매성 환원을 사용할 수 있다.
상기 산처리로 보호기를 제거하는 반응을 수행할 때, 아니솔, 페놀 및 티오아니솔과 같은 양이온 보족제의 첨가를 유리하게 선택한다.
반응 완결후, 본 발명의 제조된 펩티드를 통상적인 펩티드 정제 방법 예를 들어, 추출, 분배, 재침전, 재결정 또는 컬럼 크로마트그래피에 의해 회수할 수 있다.
또한, 본 발명의 펩티드를 통상적인 방법에 따라 상술된 그의 작용성 유도체 또는 약학적으로 허용 가능한 그의 염으로 전환시킬 수 있다.
본 발명의 화합물은 후술되는 쥐를 사용한 수동 회피 시험에서 강한 향지능 작용을 나타낸다.
본 발명의 펩티드 및 펩티드 유도체는 하기 질병에 효과적이며 그의 예방 및 치료에 사용된다 : 노인성 치매(알츠하이머치매), 대뇌혈관성 치매 및 알츠하이머 질병, 픽크 질병, 헌팅톤 질병, 크로이츠 필드 - 야콥 질병, 파킨슨 질병 및 소뇌성 척수 변성 질병에 기초한 치매.
본 발명의 펩티드는 극히 적은 독성을 지니며, 그의 효과적인 투여량을 훨씬 상회하는 투여량에도 불구하고 사망을 일으킨 예가 없다.
본 발명의 펩티드를 상술된 식의 펩티드, 그의 작용성 유도체 또는 그의 염의 형태로 투여하기도 한다. 그들의 형태가 어떠하든지간에 상술된 식의 펩티드의 투여량은 바람직하게는 0.1ng/1일∼1㎎/1 일의 범위내에 있다. 비경구 투여 및 경구 투여의 경우, 투여량은 바람직하게는 0.1ng/1일∼100㎍/1일의 범위내이다. 경구 투여 및 직장 투여의 경우, 투여량은 비경구 투여량의 10∼100배 이어야 한다. 본 발명의 펩티드를 주로 비경구적 (예. 정맥 또는 피하주사, 대뇌실내 또는 척수강내투여, 경비투여 및 직장 투여)으로 투여한다. 또한, 이를 경우에 따라 경구적으로 투여할 수 있다.
본 발명의 펩티드를 주사제, 좌제, 분말, 점비제, 과립 및 정제 형태의 약학 조성물로 배합할 수 있다. 본 발명의 펩티드를 생리 식염수 용액으로 보관할 수 있고 만니톨 또는 소르비톨의 첨가후 앰플(ample)에 동결 건조시킬 수 있으며 이것을 투여하기 위해 사용할때는 용해시킨다.
이하에 실시예를 기재한다.
각 실시예에서, 얇은 막 크로마토그래피에 사용하는 용리액은 다음과 같다. 고체상용으로 메르크사 제품 TLC 플레이트 실리카겔 60 F254를 사용한다.
Rf1 : 클로로포름 - 메탄올 - 아세트산 - 물(80 : 20 : 2.5 : 5) 하층
Rf2 : 클로로포름 - 메탄올 - 물 (70 : 30 : 5)
Rf3 : n-부탄올-아세트산-물 (2 : 1 : 1)
또한, 고성능액체 크로마토그래피에 의한 정제를 하기 재료를 사용하여 수행한다.
컬럼 : μBondapak C181.9×15 ㎝
이동상 : A) 0.05 % TFA, B) 아세토니트릴 고체상에서 펩티드의 제조는 펩티드 사슬을 1g (0.24 밀리몰 NH2/g) 의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민 수지를 사용하는 하기 방법에 따라 순차로 연장시키는 방법에 의해 수행한다 [J. Org. Chem., 52, (1987), 1197]
축합반응을 카이저 시험에서 확인한다. 필요하면, 상기 단계 1∼5를 반복한다.
[실시예 1]
Fmoc-Gly-OH- 수지를 측합 반응의 단계 1∼5 에 의해 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민 수지, 214㎎의 Fmoc-Gly-OH, 110㎎의 HOBt 및 0.12㎖의 DIC로부터 제조한다. 그 후 보호기를 Nα-탈보호 방법의 단계 6∼10에 의해 제거하여 H-Gly-수지를 축합 및 Nα- 탈보호 방법을 동일한 방법으로 반복하여 H-Asn-Cys(Trt)-Sar-Arg(Mtr)-Gly- 수지를 제조한 후 pGlu-OH 를 사용하는 또 다른 축합 반응에 의해 pGlu-Asn-Cys(Trt)-Sar-Arg(Mtr)-Gly- 수지를 수득한다. 건조시킨 후, 수지를 TFA-아니솔-티오페놀(10-1-1㎖) 에서 4 시간 동안 교반하고, 여과하고 TFA 로 세척한다.
TFA 용액을 실온에서 2 시간 동안 방치한 후, TFA 를 증류제거한다. 잔류물에 에테르 및 물의 혼합물을 가한다. 수성 부분을 수거하고 동결 건조한다.
수득한 동결-건조된 펩티드를 10㎖의 0.05 % TFA 수용액에 용해시킨다. 40㎎의 시스틴 S-모노옥시드를 빙냉하에 용액에 가하고 수득한 혼합물을 30 분간 교반한다.
그후, 수득한 용액을 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20분 직선 구배 (A)(이동상) 에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고, Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조하여 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 2]
pGlu-Asn-Cys(Trt)-Pro-Har(Mtr)-Gly- 수지를 실시예 1 과 동일한 방법에 따라 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민 수지로부터 제조한다. TFA 처리후, 수득한 수지를 실시예 1 과 동일한 방법으로 시스틴 S-모노옥시드와 반응시킨다.
그후 정제를 고성능액체 크로마토그래피로 수행하고, 이온교환 처리를 실시예 1과 동일한 방법에 따라 수행한 후, 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 3]
pGlu-Asn-Cys(Trt)-Pro-Cit-Gly- 수지를 실시예 1 과 동일한 방법으로 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민 수지로부터 제조한다. TFA 처리 후, 수득한 수지를 실시예 1과 동일한 방법으로 시스틴 S-모노옥시드와 반응시킨다.
그후 정제를 고성능 액체 크로마토그래피로 수행하고, 이온 교환 처리를 실시예 1과 동일한 방법에 따라 수행한 후, 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 4]
pGlu-Asn-Cys(Trt)-Arg(Mtr)-Arg(Mtr)-Cly- 수지를 실시예 1과 동일한 방법으로 1g 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민 수지로부터 제조한다. TFA 처리 후, 수득한 수지를 실시예 1 과 동일한 방법으로 시스틴 S-모노옥시드와 반응시킨다.
그후 정제를 고성능 액체 크로마토그래피로 수행하고, 이온 교환 처리를 실시예 1과 동일한 방법에 따라 수행한 후, 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 5]
pGlu-Asn-Cys(Trt)-Pip-Arg(Mtr)-Gly- 수지를 실시예 1과 동일한 방법에 따라 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민 수지로부터 제조한다. TFA 처리 후, 수득한 수지를 실시예 1과 동일한 방법으로 시스틴 S-모노옥시드와 반응시킨다.
그후 정제를 고성능 액체크로마토그래피로 수행하고, 이온 교환처리를 실시예 1과 동일한 방법에 따라 수행한 후, 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 6]
pGlu-Asn-Cys(Trt)-Aze-Arg(Mtr)-Gly- 수지를 실시예 1 과 동일한 방법에 따라 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민 수지로부터 제조한다. TFA 처리 후, 수득한 수지를 실시예 1과 동일한 방법으로 시스틴 S-모노옥시드와 반응시킨다.
그후 정제를 고성능 액체 크로마토그래피로 수행하고, 이온 교환처리를 실시예 1과 동일한 방법에 따라 수행한 후, 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 7]
[H-Asn-Ser-Pro-Arg-OH 아세테이트]
(1) Boc-Pro-Arg(NO2)-OBzl
250㎖의 THF에 용해시킨 15g의 H-Arg(NO2)-OBzl 의 용액에 15g의 Boc-Pro-OSu를 빙냉하에 가한 후 실온에서 18시간 동안 교반한다.
THF 를 증류 제거한 후, 잔류물을 AcOEt에 용해시킨다. AcOEt 용액을 묽은 염산, NaHCO3포화수용액 및 물로 차례대로 세척한 후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt 를 증류 제거한다. 잔류물을 CHC13-MeOH에 용해시키고 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 오일상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(2) Boc-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl
22g의 Boc-Pro-Arg(NO2)-OBzl 을 110㎖의 4NHCl-AcOEt에 실온으로 30분간 넣은 후, 용매를 증류 제거한다.
감압하에 건조시킨 후, 잔류물을 150㎖의 DMF에 용해시킨다. 용액에 9㎖의 Et3N, 12.8g 의 Boc-Ser(Bzl)-OH, 10g의 HOBt 및 9.4g의 DCC를 빙냉하에 가한 후, 실온에서 18시간동안 교반한다.
DCUrea를 여과로 제거하고, DMF를 증류 제거한다. 산류물을 AcOEt에 용해시킨다. 그후 AcOEt 용액을 묽은 염산, NaHCO3포화 수용액 및 물로 차례대로 세척한 후, 무수Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt를 증류 제거하고, 잔류물을 AcOEt-에테르로 처리하여 결정상 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
4.0g의 Boc-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzL 를 실온에서 30분간 15㎖의 4N HCl-AcOEt 에 넣고 용매를 증류 제거한다.
잔류물에, 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1 v/v) 및 NaHCO3포화수용액을 가한다. 유기성 부분을 수거하고 NaCl 포화 수용액으로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거하고, 잔류물을 50㎖의 DMF에 용해시킨다. 용액에 1.55g의 Z-Asn-OH, 1.3g 의 HOBt 및 1.3g의 DCC를 빙냉하에 가한다.
실온에서 18시간 동안 교반한 후, DCUrea 를 여과로 제거하고 DMF를 증류 제거한다.
잔류물을 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1 v/v) 에 용해시킨다. 그후, 용액을 NaHCO3포화 수용액, NaCl 로 포화된 묽은 HCl, NaCl 포화수용액으로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거하고, 잔류물을 에테르로 처리하여 결정상 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
수량 : 4.5g
20㎖의 80% 아세트산에 용해시킨 150㎎의 Z-Asn-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl의 용액을 10% 팔라듐-탄소존재하에 수소기체 기류에서 18시간동안 교반한다.
팔라듐-탄소를 여과로 제거하고 용매를 증류 제거한다. 잔류물을 물에 용해시킨 후, 동결 건조시킨다.
그후 수득한 생성물 120㎖/분(유속), 0∼10% (B) 20분 직선 구배 (A)(이동상)에서 고성능액체크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입) 처리하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 8]
[H-Asn-Thr-Arg-OH 아세테이트]
(1) Boc-Thr-Pro-Arg(NO2)-OBzl
9.6g의 Boc-Pro-Arg-(NO2)-OBzl 을 실온에서 30 분간 50㎖의 4N HCl-AcOEt에 넣은 후, 용매를 증류 제거한다.
감압하에 건조시킨 후, 잔류물을 100㎖의 DMF에 용해시킨다. 용액에, 4㎖의 Et3N, 6g의, Boc-Thr-Osu를 빙냉하에 가한 후, 실온에서 18시간 동안 교반한다.
DMF를 증류 제거하고, 잔류물을 AcOEt에 용해 시킨다. 그후 AcOEt 용액을 NaHCO3포화 수용액, 묽은 HCl 및 물로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt를 증류 제거하고 잔류물을 CHCl3-아세톤을 사용하여 실리카겔 컬럼프로마토그래피로 정제한 후, 에테르로 처리하여 결정상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
목적 화합물을 실시예 7-(3)과 동일한 방법으로 3.0g의 Boc-Thr-Pro-Arg(NO2)-OBzl, 15㎖의 4N HCl-AcOEt, 1.2g의 Z-Asn-OH, 1.2g의 HOBt 및 1.1g의 DCC로부터 제조한다.
(3) H-Asn-Thr-Pro-Arg-OH 아세테이트
150㎎의 Z-Asn-Thr-Pro-Arg(NO2)-OBzl을 실시예 7-(4)와 동일한 방법으로 팔라듐-탄소존재하에 환원시킨다. 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고, Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 9]
[H-Asn-Ala-Pro-Arg-OH 아세테이트]
(1) Boc-Ala-Pro-Arg(NO2)-OBzl
목적화합물을 실시예 8 - (1)과 동일한 방법으로 28.9g의 Boc-Pro-Arg(NO2)-OBzl, 150㎖의 HCl-AcOEt, 8㎖의 Et3N 및 16.3g의 Boc-Ala-OSu 로부터 제조한다.
목적화합물을 실시예 7-(3)과 동일한 방법으로 2.9g의 Boc-Ala-Pro-Arg(NO2)-OBzl, 15㎖의 4N HCl-AcOEt, 1.4g의 Z-Asn-OH, 1.0g, 1.0g의 HOBt 및 1.1g의 DCC로부터 제조한다.
150㎎의 Z-Asn-Ala-Pro-Arg(NO2)-OBzl을 실시예 7-(4) 와 동일한 방법으로 팔라듐-탄소존재하에 환원시킨다. 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0 ∼ 10% (B) 20 분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다
[실시예 10]
[H-Asn-Ser-D-Pro-Arg-OH 아세테이트]
(1) Boc-D-Pro-Arg(NO2)-OBzl
목적화합물을 실시예 7-(1)과 동일한 방법으로 9g의 H-Arg(NO2)-OBzl 및 9g의 Boc-D-Pro-Osu 로 부터 오일상의 생성물로 제조한다.
목적화합물을 실시예 7-(2) 와 동일한 방법으로 12g의 Boc-D-Pro-Arg(NO2)-OBzl, 60㎖의 4N HCl-AcOEt, 3.3㎖의 Et3N, 7g의 Boc-Ser(Bzl)-OH, 4.2g의 HOBt 및 5.1g의 DCC 로부터 오일상의 생성물로 제조한다.
(3) Z-Asn-Ser(Bzl)-D-Pro-Arg(NO2)-OBzl
목적화합물을 실시예 7-(3)과 동일한 방법으로 3.0g의 Boc-Ser(Bzl)-D-Pro-Arg(NO2)-OBzl, 10㎖의 4N-HCl-AcOEt, 1.2g의 Z-Asn-OH, 0.9g의 HOBt 및 0.95g의 DCC로부터 제조한다.
(4) H-Asn-Ser-D-Pro-Arg-OH 아세테이트
100㎎의 Z-Asn-Ser(Bzl)-D-Pro-Arg(NO2)-OBzl을 실시예 7-(4)와 동일한 방법으로 팔라듐-탄소존재하에 환원시킨다. 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능액체 크로마토그래피 정제하고 Dowex 1 × 2 (아세테이트형) 처리를 하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 11]
[H-Asn-Ser-Pro-Arg-Gly-NH2아세테이트]
Fmoc-Gly- 수지를 상술된 축합 방법에 의해 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민 수지, 214㎎의 Fmoc-Gly-OH, 110㎎의 HOBt 및 0.12㎖의 DIC 로부터 제조한다.
그후 보호기를 Nα-탈보호 방법에 의해 제거하여 H-Gly- 수지를 수득한다.
축합 및 Nα-탈보호 방법을 동일한 방법으로 반복하여 H-Asn-Ser-(But)-Pro-Arg(Mtr)Gly-수지를 제조한다.
건조시킨 후, 수지를 TFA-아니솔(10∼1㎖) 에서 실온으로 4 시간동안 교반한다. 수지를 여과로 제거하고 TFA 로 세척한다.
TFA 용액을 실온에서 2 시간동안 방치한 후, TFA를 증류제거한다. 잔류물에 에테르 및 물의 혼합물을 가한다. 수성부분을 수거하고 Dowex 1 × 2 (아테테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조시킨다.
그후, 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20 분 직선 구배(A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조시켜서 목적 화합들을 수득한다.
[실시예 12]
[H-Asn-Ser-Pip-Arg-OH 아세테이트]
(1) Boc-Pip-Arg(NO2)-OBzl
100㎖의 DMF에 용해시킨 10.6g의 H-Arg (NO2)-OBzl 의 용액에, 7.1g의 Boc-Pip-OH, 7.1g의 HOBt 및 6.7g의 DCC를 빙냉하에 가한다. 혼합물을 실온에서 18시간도안 교반한다. 생성된 DCUrea를 여과로 제거하고 DMF 를 증류제거 한다.
잔류물을 AcOEt에 용해시킨다. 수득한 용액을 NaHCO3포화수용액, 묽은 HCl 및 물로 차례대로 세척한후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt 를 증류제거하고 잔류물을 CHCl3- 아세톤을 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 오일상의 생성물로 목적화합물을 수득한다.
(2) Boc-Ser(Bzl)-Pip-Arg(NO2)-OBzl
5.2g의 Boc-Pip-Arg(NO2)-OBzl 을 25㎖의 4N HCl-AcOEt 에 실온에서 30분간 넣은 후, 용매를 증류 제거한다.
잔류물을 감압하에 건조시킨 후 50㎖의 DMF에 용해시킨다. 수득한 용액에 1.4㎖의 Et3N 및 3.9g의 Boc-Ser(Bzl)-OSu를 빙냉하에 실온에서 18 시간 동안 교반한다.
DMF를 증류제거하고 잔류물을 AcOEt에 용해시킨다.
수득한 용액을 NaHCO3포화수용액, 묽은 HCl 및 물로 차례대로 세척한 후 무수 Ha2SO4로 건조시킨다.
AcOEt 를 증류제거하고, 잔류물을 CHCl- 안세톤을 사용하는 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 정제하여 오일상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
1.6g의 Boc-Ser(Bzl)-Pip-Arg(NO2)-OBzl 을 6㎖의 4N HCl-AcOEt에 실온으로 30 분간 넣은 후, 용매를 증류 제거한다.
잔류물에 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1 v/v) 및 NaHCO3포화수용액을 가한다. 유기성 부분을 수거한 후 용액을 NaCl 포화 수용액으로 세척한 후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류제거한 후, 잔류물을 20㎖의 DMF에 용해시킨다. 수득한 용액에 0.53g의 Boc-Asn-OH, 0.53g의 HOBt 및 0.52g의 DCC를 빙냉하에 가한다.
수득한 용액을 실온에서 18 시간동안 교반한 후 DCUrea 를 여과로 제거하고 DMF 를 증류 제거한다.
잔류물을 AcOEt 에 용해시키고, 용액을 NaHCO3포화수용액, 묽은 염산 및 NaCl 포화 수용액으로 차례대로 세척한 후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거하고, 잔류물을 CHCl3-MeOH를 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여서 오일상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(4) H-Asn-Ser-Pip-Arg-OH 아세테이트
150㎎의 Boc-Asn-Ser(Bzl)-Pip-Arg(NO2)-OBzl 을 0.5㎖의 4N HCl-AcOEt에 실온으로 30 분간 넣은 후 용매를 증류 제거한다.
잔류물에 20㎖의 80 % 아세트산을 가한 후 수득한 혼합물을 10% 팔라듐 -탄소 존재하의 수소기류에서 18 시간 동안 교반한다.
팔라듐 - 탄소를 여과로 제거하고 용매를 증류제거한다. 잔류물을 물에 용해시킨 후 동결 건조시킨다.
그후, 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0 ∼ 10% (B) 20 분 직선 구배(A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조하여 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 13]
[H-Pro-Ser-Pip-Arg-OH 아세테이트]
(1) Z-Pro-Ser(Bzl)-Pip-Arg(NO2)-OBzl
목적화합물을 실시예 12-(1) 과 동일한 방법으로 1.0g의 Boc-Ser(Bzl)-Pip-Arg(No2)-OBzl, 5㎖의 4N HCl-AcOEt, 0.2㎖의 Et3N 및 0.49g의 Z-Pro-OSu로부터 제조한다.
(2) H-Pro-Ser-Pip-Arg-OH 아세테이트
150㎎의 Z-Pro-Ser(Bzl)-Pip-Arg(NO2)-OBzl 을 실시예 12-(4)와 동일한 방법으로 팔라듐-탄소 존재하에 환원시킨다. 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0 ∼ 10%(B) 20 분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
FAB 질량 스펙트럼 (M+1) : 470
[실시예 14]
[H-Pro-Asn-Ser-Pip-Arg-OH 아세테이트]
(1) Z-Pro-Asn-Ser(Bzl)-Pip-Arg(NO2)-OBzl
목적화합물을 실시예 12-(2) 와 동일한 방법으로 0.68g의 Boc-Asn-Ser(Bzl)-Pip-Arg(NO2)-OBzl, 3㎖의 4N HCl-AcOEt, 0.14㎖의 NMM 및 0.32g의 Z-Pro-OSu 로부터 제조한다.
(2) H-Pro-Asn-Ser-Pip=Arg-OH 아세테이트
150㎎의 Z-Pro-Asn-Ser(Bzl)-Pip-Arg(NO2)-OBzl 을 실시예 12-(4)와 동일한 방법으로 팔라듐-탄소 존재하에 환원시킨다. 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0 ∼ 10% (B) 20분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 15]
(1) Z-Arg(Mbs)-Cly-NH2
100㎖의 AcOEt 및 70㎖의 5 % 수성 시트르산의 혼합물에 10g의 Z-Arg(Mbs)-OH 디시클로헥실아민 염을 교반하에 용해시킨다. AcOEt 부분을 물로 세척하고 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거한다. 잔류물을 100㎖의 DMF에 용해시킨다. DMF용액에 1.7g의 H-gly-NH2히드로클로라이드, 1.7㎖ NMM, 2g의 HOBt 및 3.4g의 DCC를 빙냉하에 가한다. 혼합물을 실온에서 18시간동안 교반한다. 생성된 DCUrea를 여과로 제거하고 DMF 를 증류제거한다.
잔류물을 2-부탄올 및 CH2Cl2의 혼합물 (5 : 1 v/v) 에 용해시킨다. 수득한 용액을 NaHCO3포화 수용액, NaCl 로 포화된 묽은 염산 및 NaCl 포화 수용액으로 차례대로 세척한 후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류제거한다. 잔류물을 MeOH- 에테르로 처리하여 결정성 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(2) Boc-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2
200㎖의 80 % AcOH 에 용해시킨 20.8g의 Z-Arg(Mbs)-Gly-NH2의 용액을 10% 팔라듐-탄소존재하에 수소 기류에서 6 시간동안 교반한다.
팔라듐-탄소를 여과로 제거하고 용매를 여과액으로 부터 증류 제거한다. 잔류물을 감압하에 건조시킨 후 200㎖의 DMF에 용해시킨다. 수득한 용액 4.3㎖의 NMM 및 12.1g의 Boc-Pro-OSu 를 가하고 혼합물을 실온에서 18 시간동안 교반한다.
DMF를 증류제거한다. 잔류물을 2-부탄올 및 CH2Cl2(5 : 1 v/v) 의 혼합물에 용해시킨다. 수득한 응액을 NaHCO3포화 수용액, NaCl 로 포화된 묽은 염산 및 NaCl 포화 수용액으로 차례대로 세척한 후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거한다. 잔류물을 에테르로 처리하여 결정상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
9.8g의 Boc-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2를 100㎖의 THF 및 100㎖의 4N HCl-AcOEt 에 실온으로 30 분간 넣은 후, 용매를 증류 제거한다.
잔류물을 감압하에 건조시킨 후 100㎖의 DMF에 용해시킨다. DMF 용액에 3.6㎖의 NMM, 5.2g의 Boc-Cys(Acm)-OH, 2.7g의 HOBt 및 3.7g의 DCC 를 빙냉하에 가한다. 혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반한다.
DCUrea를 여과로 제거하고 DMF 를 증류 제거한다. 잔류물을 2-부탄올 및 CH2Cl2(5 : 1, v/v) 의 혼합물에 용해시킨다. 수득한 용액을 NaHCO3포화 수용액, NaCl로 포화된 묽은 HCl 및 NaCl 포화수용액으로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거한다. 잔류물을 에테르로 처리하여 결정상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(4) Z-pGlu-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2
1.6g의 Boc-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2를 10㎖의 4N HCl-AcOEt 에 실온으로 30 분간 넣은 후 용매를 증류 제거한다.
잔류물을 감압하에 건조시킨 후 20㎖의 DMF에 용해시킨다. 혼합물에 22㎖의 NMM 및 0.86g의 Z-pGlu-OSu를 빙냉하에 가한다. 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반한다.
DMF를 증류제거한다. 잔류물을 2-부탄올 및 CH2Cl2(5 : 1, v/v) 의 혼합물에 용해시킨다. 수득한 용액을 NaHCO3포화수용액, NaCl 포화된 묽은 HCl 및 NaCl 포화 수용액으로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거한다. 잔류물을 에테르로 처리하여 결정상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
5) Z-pGlu-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2
80㎖ CH2Cl2-MeOH (1 : 1, v/v) 에 용해시킨 1.3g의 Z-pGlu-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2의 용액에 0.22㎖의 Cl-Scm을 빙냉하에 가한다. 수득한 혼합물을 20분간 교반한다.
용매를 증류 제거한다. 잔류물을 CHCl3-MeOH를 사용하는 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하여서 결정상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(6)히드로클로라이드
10㎖의 DMF 에 용해시킨 500㎎의 Z-pGlu-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2의 용액에 210㎎의 시스테인 히드로클로라디드를 가하고 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반한다.
용매를 증류 제거한다. 잔류물을 CHCl3-MeOH를 사응하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하고 에테르로 처리하여서 결정상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
히드로클로라이드를 2㎖의 MSA 및 0.2㎖의 아니솔의 혼합물에 넣고 수득한 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반한다. 에테르를 첨가한 후 상층액 부분을 제거한다.
침전물을 물에 용해시킨다. 용액을 Dowex 1×2 (아세테이트 타입) 처리시키고 물을 증류 제거한다.
잔류물을 0.05% TFA 에 용해시키고 12㎖/분 (유속) 0∼10% (B) 2 분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체크로마토그래피로 정제하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
FAB 질량 스펙트럼 (M+1) : 661
[실시예 16]
(cypent :시클로펜틸기)
(1) Cypent-CO-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2
1.5g의 Boc-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2를 10㎖의 4N HCl-AcOEt 에 실온으로 30분간 넣고 용매를 증류 제거한다.
잔류물을 감압하에 건조시키고 15㎖의 DMF에 용해시킨다. 용액에 0.32㎖의 NMM 및 2㎖의 DMF에 용해시킨 무수 시클로펜탄카르복실산 (0.48g의 시클로펜탄카르복실산 및 0.43g의 DCC 로부터 제조됨)을 빙냉하에 가한다. 혼합물을 실온에서 4 시간 동안 교반하고 DMF를 증류 제거한다.
잔류물을 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1, v/v) 에 용해시킨다. 수득한 용액을 NaHCO3포화 수용액, NaCl 포화된 묽은 HCl 및 NaCl 포화 수용액으로 차례대로 세척한 후, 두수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거한다. 잔류물을 CHCl3-MeOH을 사용하는 실리카겔컬럼크로마토그래피로 정제하고 에테르로 처리하여서 결정상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(2) cyPent-CO-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2
목적 화합물을 실시예 15-(5) 와 동일한 방법으로 700㎎의 cyPent-CO-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2및 0.14㎖의 C1-Scm으로부터 제조한다.
목적 화합물을 실시예 15-(6)과 동일한 600㎎의 cyPent-CO-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2및 335㎎ 의 시스테인 히드로클로라이드로부터 제조한다.
(4)
60㎎의히드로클로라이드를 실시예 15-(7)과 동일한 방법에 따라 MSA-아니솔로 처리하고, 12㎖/분 (유속), 5∼25% (B) 20분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1×2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 17]
아세테이트
(1) Boc-Pro-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2
1.5g의 Boc-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2를 10㎖ 의 4N HCl-AcOEt 에 실온으로 30 분간 넣고 용매를 증류 제거한다.
잔류물을 감압하에 건조시키고 20㎖의 DMF에 용해시킨다. 용액에 0.32㎖의 NMM 및 0.67g의 Boc-Pro-OSu를 빙냉하에 가한다. 혼합물을 실온에서 18시간동안 교반한 후 DMF를 증류 제거한다.
잔류물을 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1 v/v)에 용해시킨다. 수득한 용액을 NaHCO3포화수용액, NaCl 포화된 묽은 HCl 및 NaCl 포화 수용액으로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거한다. 잔류물을 CHCl3-MeOH을 사용하는 실리카겔컬럼크로마토그래피로 정제하고 에테르로 처리하여서 결정상의 목적 화합물을 수득한다.
(2) Boc-Pro-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2
목적 화합물을 실시예 15-(5)와 동일한 방법으로 450㎎의 Boc-Pro-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-Cly-NH2및 0.08㎖ 의 C1-Scm 로부터 제조한다.
(3)히드로클로라이드
목적 화합물을 실시예 15-(6) 과 동일한 방법으로 400㎎의 Boc-Pro-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbs)-Cly-NH2및 197㎎의 시스테인 클로라이드로부터 제조한다.
(4)아세테이트
63㎎의히드로클로라이드를 실시예 15-(7) 과 동일한 방법에 따라 MSA-아니솔로 처리하고 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20 분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 18]
아세테이트
(1) Boc-Arg(Mbs)-β -Ala-OBzl
50㎖ 의 DMF에 용해시킨 3.5g의 H-β-Ala-OBzl p-톨루엔-술포네이트의 용액에 1.4㎖의 Et3N, 3.0g 의 Boc-Arg(Mbs)-OH, 1.3g의 HOBt 및 1.5g의 DCC를 빙냉하에 가한다.
혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반하고 DCUrea를 여과로 제거하고 DMF를 증류 제거한다.
잔류물을 AcOEt에 용해시키고, 수득한 용액을 NaHCO3포화 수용액, 묽은 염산 및 물로 차례대로 세척한 후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt를 증류 제거하여서, 오일상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(2) Boc-Pro-Arg(Mbs)-β-Ala-OBzl
3.6g의 Boc-Arg(Mbs)-β-Ala-OBzl을 15㎖ 의 4N HCl-AcOEt에 실온으로 30분간 넣고 용매를 증류 제거한다.
잔류물을 감압하에 건조시키고 50㎖ 의 DMF에 용해시킨다. 용액에 1.0㎖의 NMM 및 2.0g 의 Boc-Pro-Osu를 빙냉하에 가하고 혼합물을 실온에서 18 시간동안 교반한다.
DMF를 증류제거한다. 잔류물을 AcOEt 에 용해시키고, NaHCO3포화 수용액, 묽은 염산 및 NaCl 포화 수용액으로 차례대로 세척한 후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt를 증류제거하여 오일상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
목적 화합물을 실시예 16-(1) 과 동일한 방법으로 3.5g 의 Boc-Pro-Arg(Mbs)-β-Ala-OBzl, 15㎖ 의 4N HCl-AcOEt, 0.82㎖의 NMM 및 Boc-Cys(Acm)-OH 대칭적 산무수물 (3.2g의 Boc-Cys(Acm)-OH 및 1.1g의 DCC 로부터 제조됨) 로부터 제조한다.
(4) Z-pGlu-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-β-Ala-OBzl
목적 화합물을 실시예 15-(4) 와 동일한 방법으로 1.7g 의 Boc-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-β-Ala-OBzl, 10㎖의 4N HCl-AcOEt, 0.3㎖의 NMM 및 0.83g 의 Z-pGlu-Osu 로부터 제조한다.
(5) Z-pGlu-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbs)-β -Ala-OBzl
목적 화합물을 실시예 15-(5) 와 동일한 방법으로 1.9g 의 Z-pGlu-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mbs)-β-Ala-OBzl 0.29㎖ 의 C1-Scm 으로부터 오일상의 생성물로 제조한다.
(6)히드로클로라이드
목적 화합물을 실시예 15-(6) 과 동일한 방법으로 1.0g 의 Z-pGlu-Cys(Scm)-Pro-Arg(Mbs)-β-Ala-OBzl 및 0.4g의 시스테인 히드로클로라이드로부터 제조한다.
(7)아세테이트
70㎎의히드로클로라이드를 실시에 15-(7)과 동일한 방법으로 MSA-아니솔로 처리하고, 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20 분 직선 구배 (A) (이동상) 에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고, Dowex 1 × 2 (아세테이트타입) 처리를 하고 동결건조하여 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 19]
[H-Pro-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2아세테이트]
(1) Z-Pro-Cys(MBzl)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2
목적 화합물을 실시예 15-(4) 와 동일한 방법으로 2.4g의 Boc-Cys(MBzl)-Pro-Arg(Mbs)-Cly-NH2, 10㎖의 4N HCl-AcOEt, 0.6㎖의 NMM 및 1.3g의 Z-Pro-OSu로부터 제조한다.
(2) H-Pro-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2아세테이트
150㎎의 Z-Pro-Cys(MBzl)-Pro-Arg(Mbs)-Gly-NH2를 실시예 15-(7) 과 동일한 방법으로 MSA- 아니솔로 처리하고, 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20 분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고, Dowex 1 × 2 (아세테이트 타입)처리를 하고 동결건조하여 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 20]
[pGlu-Asn-Ser-Pro-Arg-Cly-NH2아세테이트]
2㎖의 물에 30㎎ 의 H-Pro-Cys-Pro-Arg-Cly-NH2아세테이트를 용해시킨다. 수득한 용액을 묽은 수성 암모늄을 사용하여 pH 7 로 조절하고, 실온에서 7 일간 동안 교반한 후 아세트산 부가물을 사용하여 산성화하고 동결 건조시킨다.
수량 : 28 mg
Rf3 : 0.02
[α]D: -142.9°(c=0.5, 물)
FAB : 질량 스펙트럼 (M+1) : 1054
[실시예 21]
[pGlu-Asn-Ser-Pro-Arg-Cly-NH2아세테이트 ]
Fmoc-Gly-수지를 상술된 축합방법에 의해 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민수지, 214㎎ 의 Fmoc-Cly-OH, 110㎎의 HOBt 및 0.12㎖ 의 DIC 로부터 제조한다.
그후 보호기를 Nα-탈보호 방법에 의해 제거하여 H-Gly-수지를 수득한다.
축합 및 Nα-탈보호 방법을 동일한 방법으로 반복하여 H-Asn-Ser(But)-Pro-Arg(Mtr)-Gly-수지를 제조한 후 pGLu-OH를 사용하는 축합 반응을 수행하여 pGlu-Asn-Ser(But)-Pro-Arg(Mtr)-Gly-수지를 수득한다. 건조 시킨 후, 수지를 TFA-아니솔 (10-l㎖)에서 실온으로 4시간 동안 교반한다. 수지를 여과로 제거하고 TFA 로 세척한다.
TFA 용액을 실온에서 2시간동안 방치한 후, TFA를 증류제거한다. 잔류물에 에테르-물을 가한다. 수성부분을 수거하고 Dowex 1×2 (아세테이트 타입)처리를 하고 동결 건조한다.
그후, 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20 분 직선구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고, Dowex 1×2 (아세테이트형) 처리를 하고 동결 건조하여 목적 화합물을 수득한다.
수량 : 69 mg
Rf3 : 0.14
[α]D: -91.8°(c=0.5, 물)
FAB : 질량 스펙트럼 (M+1) : 640
[실시예 22]
[pGlu-Asn-Ser-D-Pro-Arg-Gly-NH2아세테이트]
pGlu-Asn-Ser(But)-D-Pro-Arg(Mtr)-Gly-수지를 실시예 21 과 동일한 방법에 따라 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민수지로부터 제조한 후 TFA 처리, 고성능액체 크로마토그래피에 의한 정제, 이온 교환 처리 및 동결 건조를 실시예 21과 동일한 방법에 따라 수행하여 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 23]
[pGlu-Asn-Ser-Pro-D-Arg-Gly-NH2아세테이트]
pGlu-Asn-Ser(But)-Pro-D-Arg(Mtr)-Gly-수지를 실시예 21 과 동일한 방법에 따라 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민수지로부터 제조한 후 TFA 처리, 고성능액체 크로마토그래피에 의한 정제, 이온 교환 처리 및 동결 건조를 실시예 21 과 동일한 방법에 따라 수행하여 목적'화합물을 수득한다.
수량 : 49 mg
Rf3 : 0.15
[α]D: -67.4°(c=0.5, 물)
FAB : 질량 스펙트럼 (M+1) : 640
[실시예 24]
[pGlu-Asn-Ser-D-Pro-D-Arg-Gly-NH2아세테이트]
pGlu-Asn-Ser(But)-D-Pro-D-Arg(Mtr)-Gly-수지를 실시예 21 과 동일한 방법에 따라 1g의 2,4-디메톡시벤즈히드릴아민수지로부터 제조한다 TFA 처리, 고성능액체 크로마토그래피에 의한 정제, 이온 교환 처리 및 등결 건조를 실시예 21과 동일한 방법에 따라 수행하여 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 25]
[pGlu-Asn-Ser-Pro-Arg-OH]
(1) Boc-Pro-Arg(NO2)-OBzl
250㎖ THF에 용해시킨 15g의 H-Arg(NO2)-OBzl 의 용액에 15g의 Boc-Pro-Osu 를 빙냉하에 가한후 실온에서 18시간 동안 교반한다.
THF를 증류 제거한 후, 잔류물을 AcOEt 에 용해시킨다. AcOET 용액을 묽은 염산, NaHCO3포화 수용액 및 물로 차례대로 세척한 후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt를 증류 제거한다. 잔류물을 CHCl3-MeOH 에 용해시키고 실리카겔컬럼크로마토그래피로 정제하여 오일상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(2) Boc-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl
22g의 Boc-Pro-Arg(NO2)-OBzl을 실온에서 30분간 110㎖ 의 4N HCl-AcOEt 에 넣은 후, 용매를 증류 제거한다.
감압하에 건조시킨 후, 잔류물을 150㎖ 의 DMF에 용해시킨다. 용액에 9㎖의 Et3N, 12.8g의 Boc-Ser (Bzl)-OH, 10g의 HOBt 및 9.4g 의 DCC를 빙냉하에 가한 후, 실온에서 18시간동안 교반한다.
DCUrea를 여과로 제거하고, DMF를 증류 제거한다. 잔류물을 AcOEt 에 용해시킨다. 그후 AcOEt 용액을 묽은 HCl, NaHCO3포화 수용액, 묽은 HCl 및 물로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt를 증류 제거하고 잔류물을 AcOEt로 처리하여 결정상 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(3) Z-pGlu-Asn-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl
2.3g 의 Boc-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl를 10㎖의 4N HCl-AcOEt 에 실온으로 30분간 넣은 후, 용매를 증류 제거한다.
잔류물에, 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1 v/v) 및 NaHCO3포화 수용액을 가한다. 유기성 부분을 수거하고 NaCl 포화 수용액으로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용액을 증류 제거하고, 잔류물을 20㎖ 의 DMF에 용해시킨다. 용액에 1.4g의 Z-pGlu-Asn-OH, 0.7g의 HOBt 및 0.8g의 DCC를 빙냉하에 가한다.
실온에서 18시간동안 교반한 후, DCUrea를 여과로 제거하고 DMF를 증류 제거한다.
잔류물을 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1 v/v) 에 용해시킨 후 용액을 NaHCO3포화 수용액, NaCl로 포화된 물은 HCl 및 NaCl 포화 수용액으로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거하고, 잔류물을 CHCl3-MeOH 에 용해시키고 실리카겔컬럼크로마토그래피로 정제하여서 오일상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
20㎖의 80% 아세트산에 용해시킨 100㎎의 Z-pGlu-Asn-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl 의 용액을 10% 팔라듐-탄소 존재하의 수소 기체류에서 18시간동안 교반한다.
팔라듐-탄소를 여과로 제거하고 용매를 증류 제거한다. 잔류물을 물에 용해시킨 후, 동결 건조시킨다.
그후 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20분 직선구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1×2 (아세테이트타입)처리하고 동결건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 26]
[H-Pro-Asn-Ser-Pro-Arg-OH 아세테이트]
(1) Boc-Pro-Arg(NO2)-OBzl
250㎖ 의 THF에 용해시킨 15g의 H-Arg(NO2)-OBzl 의 용액에 15g의 Boc-Pro-Osu를 빙냉하에 가한후 실온에서 18시간동안 교반한다.
THF를 증류 제거한 후, 잔류물을 AcOEt 에 용해시킨다. AcOEt 용액을 묽은 염산, NaHCO3포화 수용액 및 물로 차례대로 세척한 후 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt를 증류 제거한다. 잔류물을 CHCl3-MeOH에 용해시키고 실리카겔컬럼크로마토그래피로 정제하여 오일상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(2) Boc-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl
22g의 Boc-Pro-Arg(NO2)-OBzl을 실온에서 30분간 110㎖ 의 4N HCl-AcOEt 에 넣은 후, 용매를 증류 제거한다.
감압하에 건조시킨 후, 잔류물을 150㎖ 의 DMF에 용해시킨다. 용액에 9㎖의 Et3N, 12.8g의 Boc-Ser (Bzl)-OH, 10g의 HOBt 띤 9.4g 의 DCC를 빙냉하에 가한 후, 실온에서 18시간동안 교반한다.
DCUrea를 여괴로 제거하고, DMF를 증류 제거한다. 잔류물을 AcOEt 에 용해시킨다. 그후 AcOEt 용액을 NaHCO3포화 수용액, 묽은 HCl 및 물로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
AcOEt를 증류 제거하고 잔류물을 AcOEt-에테르로 처리하여 결정상 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(3) Boc-Asn-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl
4g의 Boc-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl를 실온에서 30분간 20㎖ 의 4N HCl-AcOEt 에 넣은 후 용매를 증류 제거한다.
잔류물에, 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1 v/v) 및 NaHCO3포화 수용액을 가한다. 유기성 부분을 수거하고 NaCl 포화 수용액으로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용액을 증류 제거하고, 잔류물을 60㎖의 DMF에 용해시킨다. 용액에 1.34g의 Boc-Asn-OH, 1.34g의 HOBt 및 1.32g의 DCC를 빙냉하에 가한다.
실온에서 18시간동안 교반한 후, DCUrea를 여과로 제거하고 DMF를 증류 제거한다.
잔류물을 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1 v/v) 에 용해시킨 후 용액을 NaHCO3포화 수용액, NaCl로 포화된 묽은 HCl 및 NaCl 포화 수용액으로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거하고, 잔류물에 AcOEt를 가하여 결정상 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
수량 : 4.3g
융점 : 186~187℃
Rf1 : 0.55, Rf2 : 0.73
[α]D: -34.6°(c=1.0, DMF)
(4) Z-Pro-Asn-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl
3.5g의 Boc-Asn-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl을 15㎖ 의 4N HCl-AcOEt에 실온으로 30분간 넣고 용매를 증류 제거한다.
감압하에 건조시킨 후, 잔류물을 DMF에 용해시킨다. 용액에 0.8㎖ 의 NMM 및 1.52g의 Z-Pro-Osu를 빙냉하에 가한 후, 실온에서 18시간동안 교반한다.
DMF를 증류 제거한다. 잔류물을 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1, v/v) 에 용해시킨 후, 용액을 NaHCO3포화 수용액, NaCl 포화된 묽은 HCl 및 NaCl 포화수용액으로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류제거한다. 잔류물을 CHCl3-MeOH을 사용하는 실리카겔컬럼크로마토그래피로 정제하고 에테르로 처리하여서 결정상의 생성물로 목적 화합물을 수득한다.
(5) H-Pro-Asn-Ser-Pro-Arg-OH 아세테이트
20㎖ 의 80% 아세트산에 용해시킨 150㎎의 Z-Pro-Asn-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl 의 용액을 10% 팔라듐-탄소 존재하에 수소 기체기류에서 18시간 동안 교반한다.
팔라듐-탄소를 여과로 제거하고 용매를 증류 제거한다.
잔류물을 물에 용해시킨 후, 동결건조시킨다.
그후 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1×2 (아세테이트 타입) 처리하고 동결 건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
FAB 질량 스펙트럼 (M+1) : 570
[실시예 27]
[H-Pro-Ser-Pro-Arg-OH 아세테이트]
(1) Z-Pro-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl
목적 화합물을 실시예 26-(4)와 동일한 방법으로 4.0g 의 Boc-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl, 20㎖ 의 4N HCl-AcOEt, 1㎖의 NMM 및 2.2g의 Z-Pro-Osu 로 부터 제조한다. 에테르 처리를 수행하여 결정상의 생성물로 목적화합물을 수득한다.
(2) H-Pro-Ser-Pro-Arg-OH 아서테이트
150㎎의 Z-Pro-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-OBzl을 실시예 26-(5)와 동일한 방법으로 팔라듐-탄소 존재하에 환원시킨다. 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20 분 직선구배 (A) (이동상)에서 고성능액체 크로마토그래피로 정제하고 Dowex 1×2 (아세테이트 타입) 처리를 하고 동결건조시켜서 목적 화합물을 수득한다.
[실시예 28]
[H-Pro-Ser-Pro-Arg-Gly-NH2아세테이트]
(1) Boc-Arg(NO2)-Gly-NH2
80㎖ 의 DMF에 용해시킨 10g의 Boc-Arg(NO2)-OH의 용액에 3.5㎖ 의 NMM 및 3.1㎖ 의 에틸클로로카르보네이트를 빙냉하에 가한 후 15분간 교반한다.
수득한 용액에 20㎖의 DMF에 용해시킨 3.5㎖ 의 NMM 및 3.5g의 H-Gly-NH2히드로클로라이드의 혼합물을 가한 후 수득한 혼합물을 빙냉하에 3시간 동안 교반한다.
DMF를 증류 제거한다. 잔류물을 2-부탄올-CH2Cl2(5 : 1, v/v) 에 용해시킨 후, 용액을 NaHCO3포화 수용액, NaCl 포화된 묽은 HCl 및 NaCl 포화수용액으로 차례대로 세척한 후, 무수 Na2SO4로 건조시킨다.
용매를 증류 제거하고, 잔류물에 AcOEt를 가하여 결정상의 생성물로 목적 화합들을 수득한다.
(2) Boc-Pro-Arg(NO2)-Gly-NH2
목적 화합물을 실시예 26-(4)와 동일한 방법으로 6.0g의 Boc-Arg(NO2)-Gly-NH2, 40㎖의 4N HCl-AcOEt, 3.4㎖ 의 Et3N 및 5.1g의 Boc-Pro-Osu 로부터 제조한다.
(3) Boc-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-Gly-NH2
목적 화합물을 실시예 26-(4)와 동일한 방법으로 6.0g 의 Boc-Pro-Arg(NO2)-Cly-NH2, 35㎖의 4N HCl-AcOEt, 1.8㎖ 의 Et3N 및 5.1g의 Boc-Ser(Bzl)-Osu 로부터 제조한다.
(4) Z-Pro-Ser (Bzl)-Pro-Arg(NO2)-Gly-NH2
목적 화합물을 실시예 26-(4) 와 동일한 방법으로 1.0g의 Boc-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-Gly-NH2, 10㎖의 4N HCl-AcOEt, 0.34㎖ 의 NMM 및 0.54g의 Z-Pro-Osu로부터 제조한다.
(5) H-Pro-Ser-Pro-Arg-Gly-NH2아세테이트
150㎎ 의 Z-Pro-Ser(Bzl)-Pro-Arg(NO2)-Gly-NH2를 실시예 26-(5) 와 동일한 방법으로 팔라듐-탄소 존재하에 환원시킨다. 수득한 생성물을 12㎖/분 (유속), 0∼10% (B) 20분 직선 구배 (A) (이동상)에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하고, Dowex 1×2 (아세테이트 타입) 처리를 하고, 동결 건조하여 목적 화합물을 수득한다.
본 발명의 펩티드 및 펩티드 유도체의 효과를 나타내는 약리학적 시험의 예를 하기에 기재한다.
약리학적 시험 : 시클로헥스이미드에 의한 실험적인 역행성
[건망증을 개선시키는 효과에 대한 조사]
기억 고정에 대한 본 발명의 펩티드 및 펩티드 유도체의 효과를 Burbach 등의 『Sciences』제 221 권 페이지 1310∼1312(1983) 에 기술된 방법에 따라 Wistar 계 수컷쥐를 사용하는 일회-시행수동회피 실험을 수행함으로써 평가한다.
기구는 명실과 암실로 이루어지고 마루는 스테인레스 스틸 그리드(grid) 로 만들어진다. 명실에 들어있는 쥐는 자유롭게 암실로 이동할 수 있다. 암실로 들어갈 때 쥐는 전기쇼크를 받는다. 전기쇼크에 대한 수동회피 행동의 보유를 반응 잠재시간 즉, 전기쇼크를 경험한 쥐가 이미 결정된 간격후에 명실에서 암실로 다시 들어가는데 필요한 시간을 측정함으로써 결정한다.
쥐는 본 발명의 펩티드 또는 생리식염수 용액을 투여한지 1 시간 후에 전기 쇼크(0.5㎃)를 받는다. 전기쇼크를 경험시키고 그 즉시 쥐를 피하주사에 의해 2.7- 3.0㎎/㎏의 시클로헥스이미드 또는 생리식염수로 처리한다. 투여한지 48시간 후에, 쥐의 기억보유를 시험한다. 오직 생리 식염수만을 투여했던 쥐는 약 300 초의 반응 잠재시간을 나타내고, 시클로헥스이미드만을 투여한 대조군의 쥐는 약 50초의 반응 잠재시간을 나타내어 역행성 건망증을 발현한다.
본 발명의 각각의 펩티드를 투여한 쥐의 평균 반응 잠재시간을 대조군의 평균 반응 잠재시간과 비교한다. 각 군에 6 ∼ 8 마리의 쥐를 사용하여 시험한다. 반응 잠재시간을 최대로 600 초까지 측정한다.
각 실시예에서 수득된 펩티드의 투여량 및 효과(대조군의 반응 잠재시간에 대한 각 군의 반응 잠재시간의 비, % 로 나타냄)을 표 1 에 기재한다.
상기 실험 결과로부터 본 발명의 펩티드 및 펩티드 유도체가 역행성 건망증을 개선시키는 효과를 보임이 명백해진다.
본 발명의 펩티드 유도체를 함유하는 약제의 제조예를 하기에 기재한다.
[제조예 1(주사제)]
주사용 증류수 100㎖ 에 실시예 1에서 수득된 1.0㎎ 의 펩티드 유도체 및 0.9g 의 NaCl을 가하여 pH 가 NaOH를 사용하여 6.0 ∼ 8.0으로 조절된 수용액을 제조한다. 용액을 멸균 조건하에 여과하고 여과액을 1㎖ 앰플에 충진시킨다. 앰플을 녹여 가열에 의한 멸균 조건하에 봉인하여 주사제를 제조한다.
실시예 7, 12, 15, 21 및 26에서 수득된 각 펩티드에 대해 상술된 방법을 반복하여 각 펩티드를 함유하는 주사제를 제조한다.
[제조예 2(동결건조제제)]
주사용 증류수 100㎖ 에 실시예 1에서 수득된 5㎎ 의 펩티드 유도체 및 5g의 D-만니톨을 가하여 pH 가 인산염 완충액을 사용하여 6.0 ∼ 8.0 으로 조절된 수용액을 제조한다. 용액을 멸균 조건하에 여과하고, 여과액을 여러개의 1㎖ 바이알에 분할한다. 분할된 분량을 동결건조시켜서 주사용 동결건조제제를 제조한다.
[제조예 3(점비제)]
100㎖ 의 생리식염수 용액에 실시예 1에서 수득된 10㎎ 의 펩티드 유도체를 가한다. 혼합물의 pH를 시트르산 완충액을 사용하여 3.0 ∼ 6.0 으로 조절하여 투여량 0.5㎖ 내에 본 발명의 펩티드 50㎍을 함유하는 점비제를 제조한다.
실시예 7, 12, 15, 21 및 26에서 수득된 각 펩티드에 대해 상술된 방법을 반복하여 각 펩티드를 함유하는 점비제를 제조한다.
[제조예 4(좌제)]
98.5g의 하드지방 (포화 지방산의 트리글리페라이드)에 0.5g의 난황 레시틴을 가한다. 혼합물을 40 ∼ 45℃ 온도에서 용해시키고 용해된 혼합물에 실시예 1에서 수득된 5㎎의 펩티드 유도체를 1g의 PEG 400에 용해시킨 용액을 교반하면서 가한다. 수득한 분산액(1g)을 좌제용 주형에 채운다. 고화후 주형에서 성형품을 분리하여 좌제를 제조한다.
실시예 7, 13, 15, 21 및 26에서 수득된 각 펩티드에 대해 상술된 방법을 반복하여 각 펩티드를 함유하는 좌제를 제조한다.