JPS63501876A

JPS63501876A - 樹木状重合体の複合体

Info

Publication number: JPS63501876A
Application number: JP62505281A
Authority: JP
Inventors: トマリア，ドナルド・エイ; カプラン，ドナルド・エイ; クルパー，ウイリアム・ジエイ; チエン，ロバータ・シー; トムリンソン，イアン・エイ; フアジオ，マイケル・ジエイ; ヘツドストランド，デビツド・エム
Original assignee: ザ・ダウ・ケミカル・カンパニー
Priority date: 1986-08-18
Filing date: 1987-08-18
Publication date: 1988-07-28
Anticipated expiration: 2010-06-21
Also published as: ATE89743T1; NO176306B; KR880701564A; JPH0757735B2; FI105693B; KR970011151B1; JPH069778A; IE61356B1; JPH06219966A; IE872210L; WO1988001178A1; HU209252B; FI881768A0; FI103410B; IL83567A; HUT55245A; JPH0757736B2; DE3786000D1; HU220205B; DE3786000T3

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】スターバーストコンジュゲート本発明は、密なスターポリ？　（ｄｅｎｓｅ　５ｔａｒ　ｐｏｌｙｍｅｒ）を製薬学的物質のための坦体として使用することに関する。最近、密なスターポリマーまたはスターバーストポリマー（ｓｔａｒｂｕｒｓｔ　ｐｏｌｙｍｅｒ）と呼ぶポリマーが開発された。これらの密なスターポリマーまたはスターバーストポリマーの大きさ、形状および性質は、特殊化された最終用途の合致するように分子的に調整可能であることが発見された。ポリマーの単位につき高い濃度の担持された物質の放出（ｄｅｌｉｖｅｒｙ）　、コントロールされた放出、ターゲテッド（ｔａｒｇｅｔｅｄ）放出および／または多数の種の放出または使用のための手段を提供できるスターバーストポリマーは、有意な利点を有する。

その最も広い面において、所望の物質とアソシエーション（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）　した密なスターポリマーまたはスターバーストポリマーを含んでなるポリマーのコンジュゲー）　（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）物質（以後、これらのポリマーのコンジュゲートを、しばしば、「スターバーストコンジュゲート」または「コンジュゲート」と呼ぶ）、これらのコンジュゲートを調製する方法、コンジュゲートを含有する組成物およびコンジュゲートおよび前記組成物を使用する方法に関する。

本発明のコンジュゲートは、特別の放出を望む種々の用途における使用に適しそして、とくに、生物学的に活性な因子の放出に適する。本発明の好ましい実施態様において、スターバーストコンジュゲートは１種または２種以上の生物活性因子とアソシエーションした１種または２種以上のスターバーストポリマーから構成されている。

スターバーストコンジュゲートは、スターバーストポリマーの有利な性質のために、この技術的に知られた他の坦体を越えた有意の利益を提供する。スターバーストポリマーは、半径方向の対称性をもつ規則正しい樹枝状の枝によって特徴づけられる、分子の構成を示す。これらの半径方向に対称な分子は、「スターバーストの形態（ｓｔａｒｂｕｒｓｔ　ｔｏｐｏｌｏｇｙ）」を有すると呼ばれる。

これらのポリマーは、開始コア（ｉｎｉｔｉａｔｉ。

ｎ　ｃｏｒｅ）のまわりに同心の樹枝状の列（ｃｏｎｃｅｎｔｒｉｃ　ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ　ｔｉｅｒＳ）を提供できる方法でつくられる。スターバーストの形態は、開始コアのまわりの同心の樹枝状の列で有機反復単位が整然として集成されることによって達成される；これは、ある数の分子のジェネレイション（ｇｅｎｅｒａｔ　１ｏｎ）を通る幾何学的に進展する方法で、多重度（ｍｕｌｔｉｐｌ　１ｃｉｔｙ）および自己複製（ｓｅｌｆ−ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）を導入することによって（各列内で）達成される。得られる高度に官能化された分子は、それらの枝分れした（木に似た）構造ならびにそれらのオリゴマーの性質と異なり「デンドリマー（ｄｅｎｄｒｉｍｅｒ）　Ｊと名付けられた。こうして、用語スターバーストオリゴマーおよびスターバーストデンドリマーは、用語スターバーストポリマー内に包含される。形態的ポリマー、大きさおよび形状がコントロールされた領域をもつ、は、それらの反応性末端基を通して共有的に架橋されているデンドリマーであり、これらはスターバースト「架橋されたデンドリマー」と呼ばれる。用語架橋されたデンドリマーは、また、用語「スターバーストポリマー」の範囲内に包含される。

図面の次の説明は、本発明の理解に役立つであろう。

第１図は、スターバーストデンドリマーの種々のジェネレイションを示す。

第２Ａ図は、非対称の（等しくない）枝の接合を有するデンドリマーを示す。

第２Ｂ図は、対称の（等しい）枝の接合を有するデンドリマーを示す。

第３図は、抗体の寸法に関するデンドリマーの大きさを示す。

第４図は、種々のジエネレイションの中に組込まれたアスピリンについての炭素 −１３のスピン格子緩和時間（Ｔｌ）を示す。（実施例１）第５図は、実施例２の力学的分析の結果を示す。

第６図は、実施例２からのｐＨ９，５におけるプソイドエフェドリンの透析速度へのジェネレイション６．５のデンドリマーの影響を示す。

第７図は、実施例３のグツイドエフェドリンの透過性へのデンドリマーの加水分解の影響を示す。

実施例８は、ｐＨ５，０および６．６５におけるスターバーストポリマー（Ｇ− ４，０）の存在下にレセプター区画の中へ解放されたサリチル酸のパーセントとサリチル酸の対照との比較、実施例４、を示す。

第９図は、ｐＨａ、ｏにおけるレセプター区画におけるスターバーストポリマー（Ｇ−４，０）を有する共与体区画から失われたサリチル酸のパーセントととサリチル酸の対照との比較、実施例４、を示す。

第１０図は、スターバーストポリマー（Ｇ−４，５）の存在下に共与体区画から失われたサリチル酸のパーセントととサリチル酸の対照との比較、実施例４、を示す。

スターバーストポリマーは第１図によって図解され、ここで　は開始コアを表わす（この図面において、３官能性開始コアは一番左の図に示されている）；ｚは末端基を表わし、最初の場合において左から２番目の図面に示されており、スターブランチド（ｓｔａｒｂｒａｎｃｈｅｄ）オリゴマーと呼ぶ、Ａ、Ｂ５Ｃ５ＤおよびＥはスターバーストデンドリマーの特定の分子のジェネレイションを表わす；そして（Ａ）　ｎ、（Ｂ）　ｎ、　（Ｃ）ｎ。

（Ｄ）ｎおよび（Ｅ）ｎはスターバースト架橋デンドリマーを表わす。

スターバーストデンドリマーは、３つの区別されうる構成の特徴、すなわち、（ａ）開始コア、（ｂ）開始コアに半径方向に取り付けられた反復単位から構成された内部の層（ジエネレイション、Ｇ）、および（ｃ）最も外側のジェネレイションに取り付けられた末端の官能性（すなわち、末端の官能基）の外側表面、を有する単一の分子の集合体（ａｓｓｅｎｍｂｌａｇｅ）である。スターバーストデンドリマーの分子の大きさおよび形状およびデンドリマー分子中に存在する官能基は、開始コアの選択、デンドリマーをつくるとき使用するジェネレイション［すなわち、列０ｉｅｒ）　］の数、および各ジエネレイションで使用する反復単位の選択によってコントロールすることができる。デンドリマーは任意の特定のジェネレイションにおいて容易に単離することができるので、所望の性質を有するデンドリマーを得る手段が提供される。

スターバーストデンドリマーの成分の選択は、デンドリマーの性質に影響を及ぼす。開始コアのタイプは、デンドリマーの形状に影響を及ぼすことがあり、例えば、回転楕円体のデンドリマー、円筒形または棒状のデンドリマー、楕円状のデンドリマー、またはマツシュルーム状のデンドリマーを生成する（開始コアの選択に依存して）。ジエネレイションの順次の組立て（すなわち、ジェネレイションの数および反復単位の大きさおよび性質）は、デンドリマーの寸法およびそれらの内部の性質を決定する。

スターバーストデンドリマーは、枝の周辺に分布した官能基を有する樹枝状の枝を含有する枝分れしたポリマーであるため、種々の性質をもって調製できる。例えば、第２Ａ図に示される高分子、およびスターバーストデンドリマー、例えば、第２Ｂ図に示すものは、枝の長さのため明確な性質を有することができる。第２Ａ図に示すデンドリマーのタイプは非対称（等しくはいセグメント）の枝の接合、外部（すなわち、表面）内部の空所の空間が非常に少ない。第２Ｂ図に示す好ましいデンドリマーのタイプは、表面の基（Ｚ″で表わされる）をもつ対称（等しいセグメント）の枝の接合、ジエネレイション（Ｇ）の関数として変化する内部の空所の空間をもつ２つの異なる内部の部分（それぞれＸおよびＺで表わされる）を有する。デンドリマー、例えば、第２Ｂ図に示すものは、十分なジエネレイションを通して、空所の空間を完全に閉じかつ含有して、主として中間の内部および高度の密集した表面をもつ実在因子（ｅｎｔｉｔｙ）を与える。また、スターバーストデンドリマーは、十分なジェネレイションを通して進展するとき、［スターバーストの密な充填」を示し、ここでデンドリマーの表面は十分な末端部分を含有し、こうしてデンドリマーの表面は密集するようになり、そしてデンドリマーの内部内の空所の空間を取囲む。この密集は分子のレベルのバリヤーを提供することができ、そしてこのバリヤーはデンドリマーの内部に入りあるいはそこから外に出る物質の拡散をコントロールするために使用できる。

デンドリマーの表面の化学は、前もって決定した方法で、所望の化学的官能性を含有する反復単位を選択することによって、あるいは新しい表面の官能性をつくる表面の官能性のすべであるいは一部を化学的に変更することによって、コントロールすることができる。これらの表面は、竹表昭６３−５０１８７６　（４）特定の部位に向かってターゲティングすることができるが、あるいは特定の器官または細胞による、例えば、細網内皮系細胞による、吸収に対して抵抗性とすることができる。

スターバーストデンドリマーの別の使用において、デンドリマーは、それら自体、−緒に連結して、多樹技状部分（スターバースト「架橋デンドリマー」）をつくることができ、そしてこれらの多樹技状部分は、また、坦体として適する。

さらに、デンドリマーは特定のジエネレイションにおいて均一な枝分れからの変動をを有するように調製することができ、こうして不連続性（すなわち、デンドリマー内の特定の位置における均一な枝分れからの変動）を付加する手段および異なる性質をデンドリマーに与えることができる。

本発明のスターバーストコンジュゲートにおいて使用するスターバーストポリマーは、技術的に知られている方法、例えば、米国特許第４゜５８７．３２９号に従って調製することができる。

面積の単位当りより大きい官能基の数を可能とし、そしてスターバーストポリマーと同一の分子量、同一のコアおよび七ツマー成分、および同一のコアの枝分れの数を有する多のポリマーに比較して、分子の体積の単位当り、より大きい数の官能基を有することができる。密なスターバーストポリマーの官能基密度の増大は、デンドリマー当り、より大きい量の物質の担持を可能とする。デンドリマー使用の官能基の数は表面上においておよび内部においてコントロールできるので、それは、また、デンドリマー当りに放出すべき生物活性因子の量をコントロールするための手段を提供する。本発明のとくに好ましい実施態様において、スターバーストポリマー、とくにスターバーストデンドリマーは、生物活性因子を特定の標的有機体に、あるいは標的有機体中の特定の決定基または位置に放出することのできる生物活性因子のターゲテッド坦体Ｑａｒｇｅｔｅｄ　ｃａｒｒｉｅｒ）である。

早期のジェネレイションのスターバーストデンドリマ−（すなわち、ジェネレイシコンーｌ〜７）および古典的球状ミセルとの間の類比を行うことができう。デンドリマーーミセルの類比は、それらが球道して有する特徴、例えば、形状、大きさおよび表面を比較することによって誘導した。

表■ 球状　球状　球状大きさく直径　２０〜６０人２　１７〜６７人２表面　４〜２０２　Ｚ＝６−１９２　（Ｚは表凝集の数　面の基の数である）（ジエネレイション＝２〜７）面積／表面ノ基　１３０−８０人”　１２７−７５人２（入り（ｌ　Ａ＝　Ｉ　Ｏ−”ｎｍ　；　ｌ　Ａ”−１０−’ｎｍ”）表Ｉにおいて、形状は走査透過型電子顕微鏡写真（ＳＴＥＭ）および固有粘度（Ｖ）の測定によって評価した。大きさは固有粘度（Ｖ）および大きさ排除クロマトグラフィー（Ｓ　Ｅ　Ｃ）の測定によって評価した。

表面の凝集の数は、タイターメトリー（ｔｉｔｒｅｍｅｔｒｙ）および高い場のＮＭＲによって評価した。面積（ａｒｅａ）　／表面の基はＳＥＣの流体力学的測定から計算した。

スターバーストポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーの最初の５つのジエネレイションは、はとんどすべての面（すなわち、形状、大きさ、表面の基、および／または面積／表面の基）において古典的球状ミセルを非常に密接に模倣した微小領域（ｍｉｃｒｏｄｏｍａｉｎ）である。しかしながら、主要な差は、それらがミセルの力学的に平衡化する性質に比べて共有的に固定しかつ強固であるということである。この差は、これらの微小領域をカプセル化装置として使用するとき、１つの有意な利点である。

５を越えてジエネレイションを同心的にさらに加えるき、表面の密集化が起こる。この密集化は表面におけるバリヤーの特性を増加することができ、そして、表ＩＩに示すように、それ自体ヘッド（表面）基当りより小さい表面積を表わす。

例えば、アミン末端ジエネレイション５．０，６．０，７．０，８゜０および９．０は、それぞれ、１０４．９２．７３．４７および３２人：の増加した表面積を有する。この特性は、より低く密集したミセル様表面から、通常小胞（リポソーム）まｔ；はラングミュア−・プロジェット（Ｌｎｇｍｕｉｒ　−Ｂ　ｌｏｄｇｅｔｔ）型膜とアソシエーションした、より高く密集した２層／１層バリヤ一様表面への遷移に相当する。

この表面の密集が発生している場合、物理的特性および形態の変化は、中間のジェネレイシコン（６〜８）からより進行したジエネレイション（９または１０）へのジェネレイションの増加として観察されるであろう。ジェネレイションー７．０．８．０および９．０についての捜査透過型電子顕微鏡写真（ＳＴＥＭ）は、メタノール溶媒を試料の各々から除去して無色、単黄色の固体のフィルムを得、そしてこれを四酸化オスミウムで着色することによって得た。予測した形態学的変化はジエネレイションー９．０の段階で起こった。ジェネレイシ３ン譚９．０における微小領域は、直径が約３３人２であると測定され、そして厚さが約２５人２である無色のへりによって囲まれている。明らかにメタノール溶媒は２５人２の外側の膜様バリヤー内の捕捉されて、暗色に着色された内部を与えた。こうして、ジェネレイションー９．０において、スターバーストＰＡＭＡＭは形態的に小胞（リポソーム）のように挙動していきさが１桁小さくかつ非常に単分散している。結局、本発明のデジトリマーは、直径が約３３人２（体積約１８．０００Åりまたはそれ以上の程度の大きさの、溶媒充填された空所の空間を分子的にカプセル化するために使用できる。これらのミセル大きさの原型（ｐｒｏｔｏｔｙｐｅ）は、この進展したジェネレイションの段階で、共有的に固定されたリポソームのように挙動するように見えある。この挙動は、これらのｗ、をが、薬物放出因子として、あるいは種々の哺乳動物の病気の処置のためのスターバースト抗体コンジュゲートにおいて、非キレート化放射性核種のための坦体として、働くことを可能とする。

本発明のフンシュゲートにおいて使用するために適当なデジトリマーは、米国特許第４．５０７．４６６号、米国特許第４．５５８．１２０号、米国特許第４．５６８．７３７号および米国特許第４，５８７．３２９号に記載されている密なスターポリマーまたはスターバーストポリマーである。

とくに、本発明は、少なくとも１単位の少なくとも１種の担持された製薬学的物質とアソシエーションして少なくとも１種のスターパーストポリマーを含んでなるスターバーストコンジュゲートに関する。本発明の範囲内に包含されるスターバーストコンジュゲートは、式：式：（Ｐ）　ｘ＊　（Ｍ）　ｙ　（１）式中、各Ｐはデジトリマーを表わし、Ｘは１またはそれより大きい整数を表わし、各Ｍは担持された製薬学的物質の単位（例えば、分子、原子、イオンおよび／または他の基本単位）を表わし、前記担持された製薬学的物質は同一の担持された製薬学的物質または異なる担持された製薬学的物質であることができ、ｙは１またはそれより大きい整数を表わし、そして＊は前記担持された製薬学的物質が前記デジトリマーとアソシエーシヨンしていることを示す、によって表わされるものを包含する。

式（Ｉ）の好ましいスターバーストコンジュゲートは、Ｍが、薬物、放射性核種、キレート剤、キレート化金属、トキシン（ｔｏｘｉｎ）　、抗体、抗体断片、抗原、シグナル発生因子（ｓｉｇｎａｌ　ｇｅｎｅｒａｉｏｒ）、シグナル反射因子（ｓｉｇｎａｌ　ｒｅｆｌｅｃｔｏｒ）　、またはシグナル吸収因子（ｓｉｇｎａｌ　ａｂｓｏｒｂｅｒ）であるもの、とくに好ましくはｘ−１であり、かっｙ−２またはそれより大であるものである。

また、スターバーストデジトリマーが、多謝枝状構成体（すなわち、Ｘ＞１）を形成するように、必要に応じて連結基を介して、−緒に共有的に連結したスターバースト架橋デジトリマーである式（Ｉ）のスターバーストコンジュゲートが包含される。スターバースト架橋デジトリマーの使用は、局所的にコントロールされた解放因子（ｒｅｌｅａｓｅ　ａｇｅｎｔ）、放射線滑膜切除術などを包含する。

ここで使用するとき、　「アソシエーションする（ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｅ　ｗｉｔｈ）Ｊは、１種または２種以上の担持された物質がデジトリマーのコア内にカプセル化または捕捉され、デジトリマーを通じて部分的にまたは完全に分散し、あるいはデジトリマーに取り付けられまｔ；は連結されることができること、あるいはそれらの組み合わせを意味する。１種または２種以上の担持された物質（ｃａｒｒｉｅｄ　＋ｎａｔｅｒｉａｌ）および１種または２種以上のデジトリマーのアソシエーション（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）は、必要に応じて、コネクター（ｃｏｎｎｅｃｔｏｒ）および／またはスペーサー（ｓｐａｃｅｒ）を使用して、スターバーストコンジュゲートの調製または使用を促進することができる。適当なコネクターの基（ｃｏｎｎｅｃｔｉｎｇ　ｇｒｏｕｐ）は、夕一ゲティングディレクターＱａｒｇｅｔｉｎｇ　ｄｉｒｅｃｔｏｒ）　（すなわち、Ｔ）の有効性またはスターバーストフンシュゲート中に存在する１種または２種以上の他の担持された物質（すなわち、Ｍ）の有効性を有意に損傷しないで、ターゲティングディレクターをデンドリマー（すなわち、Ｐ）に連結（ｌ　１ｎｋ）する基である。これらのコネクターの基は、切離しが可能であるかあるいは不可能であることができ、そして典型的にはターゲティングディレクターとデンドリマーとの間の立体的障害を回避するように使用され、好ましくはコネクターの基は安定（すなわち、切離し不可能）である。スターバーストデンドリマーの大きさ、形状および官能基の密度は厳格にコントロールできるので、担持された物質をデンドリマーのアソシエーションさせることのできる多くの方法が存在する。例えば、（ａ）　１種または２種以上の担持された物質とデンドリマーの表の、共有的、クーロン的、疎水性的またはキレート的なタイプのアソシ工−ションが存在することができる；　（ｂ）　１種または２種以上とデンドリマー内部内に位置する部分との間の、共有的、クーロン的、疎水性的またはキレート的なタイプのアソシエーションが存在することができる；（Ｃ）デンドリマーは、担持された物質を内部（空所の体積）内に物理的に捕捉することを可能とするように、主として中空である内部を有するように調製することができ、ここで担持された物質の解放は、必要に応じて、デンドリマーの表面を拡散コントロール性部分と密集（ｃ。

ｎｇｅｓｔｉｎｇ）させることによって、必要にに応じてコントロールすることができる：あるいは、（ｄ）前述の減少の種々の組み合わせを使用することができる。

デンドリマー、ここで「Ｐ」で表わす、は、米国特許第４，５０７゜４６６号、米国特許第４．５５８，１２０号、米国特許第４．５６８゜７３７号または米国特許第４，５８７．３２９号に記載されている密なスターポリマーを包含する。

担持された製薬学的物質、ここで「Ｍ」で表わす、は、次の物質を包含する：デンドリマーの物理的一体性を感知しうる程度に乱さないで、密なスターポリマーとアソシエーションさせることのできる、゛診断または治療の処置のために生体内または生体外で使用する任意の物質、例えば、薬物、例えば、抗体、鎮痛剤、高血圧剤、強心剤など１、アセトアミノフェン、アシクロビア（ａｃｙｃｌｏｖｉｒ）　、アルケラン、アミカシン、アムピシリン、アスピリン、ビスアントレン、プレオマイシン、ネオカージオスタチン、タロルアムブシル、クロルアンフェニコール、サイトアラビン、ダウノマイシン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、ゲンタマイシン、イブプロフェン、カナマイシン、メプロバメート、メトトレキセート、ノバントロン、二スタチン、オンコビン、フエノバルピタール、ポリミキシン、プロブコール、プロ力ルバビジン、す７アンビシン、ストレプトマイシン、スペクチノマイシン、シムメトレル、チオグアニン、トブラマイシン、トリメトプリム、パルパン；トキシン、例えば、ジフテリアトキシン、ゲロニン、エクソトキシン　Ａ１アブリン、モデシン、リシン、またはそれらのトキシン断片：金属イオン、例えば、アルカリ金属およびアルカリ土類金属；放射性核種、例えば、アクチニドまｔ；はランタニドまたは他の同様な遷移元素から、あるいは次のような他の元素から発生するもの、６７Ｃｕ、　９０Ｙ％ｌ　ｌ　Ｉ　Ｉｎ、ｌ　３１１゜１８６Ｒｅ、ｌ　０５Ｒｈ、９９ｍＴｅ、６７Ｇｄ％　ｌ　５３５ｍ、ｌ　５９Ｇｄ。

１７５Ｙｂ、１７７Ｌｕ、８８Ｙ、１６６Ｈｏ、１１５ｍＩｎ、ｌ　０９　Ｐｄ。

８２Ｒｂ、１９４　ＩｒＳ　１４０Ｂａ、ｌ　４９Ｐｍ、、ｌ　９９Ａｕ、ｌ　４０Ｌａ。

および１８８Ｒｅ；シグナル発生因子、例えば、蛍光性実在因子；シグナル反射因子、例えば、常磁性実在因子、例えば、５６Ｆｅ、Ｇｄ、５５Ｍｎ：キレート化金属、例えば、キレート剤とアソシエーションしたとき、それらが放射性であるか否かにかかわらず、上に記載した任意のもの；シグナル吸収因子、例えば、電子ビーム不透明化剤；抗体、例えば、モノクローナル抗体および抗イデイオタイプ抗体；抗体断片；ホルモン；生物学的に応答性の修飾因子、例えば、インターロイキン、インターフェロン、ウィルスおよびウィルス断片；診断用不透明化剤：および蛍光性部分。担持された製薬学的物質は、掃去因子（ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｇｅｎｔ）、例えば、キレート剤、抗原、抗体、あるいは治療用または診断用の因子を選択的に掃去できる他の部分を包含する。

好ましくは、担持された製薬学的物質は生物活性因子である、ここで使用するとき、「生物活性（ｂｉｏａｃｔｉｖｅ）　Ｊは、活性実在因子、例えば、分子、原子、イオンおよび／または他の実在因子を呼び、それらは、ターゲテッド（ｔａｒｇｅｔｅｄ）実在因子、例えば、蛋白質、糖蛋白質、リポ蛋白質、脂質、ターゲテッド細胞、ターゲテッド器官、ターゲテッド有機体［例えば、微生物または動物（１’ｉｌｉ乳動物、例えば、ヒトを包含する）］または他のターゲテッド部分を検出、同定、阻害、処理、触媒、コントロール、殺す、増強または修飾（ｍｏｄｉｆｙ）することができる。

式（Ｉ）のスターバーストコンジュゲートは、ＰをＭと、通常適当な溶媒中で、担持された物質（Ｍ）とスターバーストデンドリマ−（Ｐ）とのアソシエーションを促進する温度において、反応させることによって調製される。

適当な溶媒は、ＰおよびＭが少なくとも部分的に混和性でありかつコンジュゲートの生成に対して不活性である溶媒である。ＰおよびＭが互いに少なくとも部分的に混和性である場合、溶媒は不必要である。必要なとき、適当な溶媒の混合物を利用できる。このような適当な溶媒の例ハ、水、メタノール、エタノール、クロロホルム、アセトニトリル、トルエン、ジメチルスルホキシドまたはジメチルホルムアミドである。

式（Ｉ）のスターバーストコンジュゲートの生成のための反応条件は、特定のデンドリマー（Ｐ）、所望の製薬学的物質（Ｍ）、および生成する結合（＊）の性質に依存する。例えば、Ｐがメチレンカルボキシレートの表面をもつＰＥＩ（ポリエチレンイミン）スターバーストデンドリマーであり、Ｍが放射性核種、例えば、イツトリウムである場合、反応は室温において水中で実施される。しかしながら、Ｐがエステル末端ＰＡＭＡＭスターバーストデンドリマーであり、Ｍがアスピリンである場合、反応は室温においてクロロホルム中で実施する。典型的には、反応は室温ないし還流温度の範囲内であることができる。特定の溶媒および温度の選択は当業者にとって明らかであろう。

Ｍ：Ｐの比は、デンドリマーの大きさおよび担持された物質の量に依存する。例えば、イオンのＭ対Ｐのモル比（モルの比）は通常０．１〜１．０００：　１．好ましくは１〜５０：１、より好ましくは２〜６：１である。薬物またはトキシンのＭ対Ｐの重量比は通常０．１〜５：１１好ましくは０．５〜３：ｌである。

Ｍが放射性核種であるとき、スターバーストコンジュゲートを調製する３つの方法が存在する。すなわち、（１）Ｐをキレート剤として使用できる。例えば、メチレンカルボキシレートの表面のＰＥＩまたはＰＡＭＡＭは金属、例えば、イツトリウムまたはインジウムをキレート化するであろう。（２）キレートをＰに共有的に結合することができる。例えば、アミン末端ＰＥＩスターバーストデンドリマーを１−（ｐ−インチ、１シアナトベンジル）ジエチレントリアミンペンタ酢酸と反応させ、次いでキレート化することができるか、あるいは複合体、例えば、インチオシアナトベンジル−２，３，２−ｔｅｔとキレート化した塩化ロジウムを反応させることができる。（３）前もってキレート化した放射性核種をＰど疎水性またはイオンの相互作用によってアソシエーションさせることができる。

とくに好ましいスターバーストコンジュゲートは、標的ディレクター（ここでｒ −１−Ｊと表示する）を含有しかつ式：％式％（）式中、各Ｔは標的ディレクターを表わし、ｅは１またはそれより大きい整数を表わし、そしてＰＳｘ、＊、Ｍおよびｙは前に定義した通りである、によって表わされるコンジュゲートである。式（Ｉ　Ｉ）のスターバーストコンジュゲートのうちで、Ｍが、薬物、放射性核種、キレート剤、キレート化金属、トキシン、抗体、抗体断片、抗原、シグナル発生因子、シグナル反射因子、またはシグナル吸収因子であるものは好ましい。また、好ましいフンシュゲートはｅ”ｌまたは２であるコンジュゲート、およびｘ＝１でありかつｙ−２またはそれより大であるものである。とくに好ましいフンシュゲートは、Ｘ−１％　ｅ−２、ｙ−２またはそれより大であり、およびＭ８よびＴがポリマーと同一もしくは相異なるコネクターを介してアソシエーションしているものでアル。

式（Ｉｌ、）のスターバーストコンジュゲートは、Ｔ＊Ｐを形成し、次いでＭを加えることによって、あるいはＰＧＭを形成し、次いでＴを加えることによって調製する。いずれの反応計画も、特定のフンシュゲートの成分に悪影響を及ぼさない反応において、かつ必要なとき適当な溶媒の存在下に、実施する。ｐＨをコントロールするＩ；めに、緩衝剤または適当な酸または塩基の添加を用いる。反応条件は、形成するアソシエーション（＊）のタイプ、使用するスターバーストデンドリマー（Ｐ）、担持された製薬学的物質（Ｍ）、および標的ディレクター（Ｔ）に依存する。例えば、Ｔがモノクローナル抗体でありかつＭが放射性核種であるとき、Ｔ＊Ｐのアソシエーションは、官能基、例えば、イソチオシアネートを介して、水中で、あるいは有機変性剤、例えば、アセトニトリルまたはジメチルホルムアミドおよび水の中で、実施する。通常、コンジュゲーション（ｃｏｎ３ｇａｔｉｏｎ）は緩衝液中でｐＨ７〜１０、好ましくはｐＨ８，５〜９．５において実施する。次いで、形成したコンジュゲートを放射性核種、例えば、酢酸イツトリウムと、好ましくは室温においてキレート化する。あるいは、ＰおよびＭは、通常水中で、Ｔへのコンジュゲーシヨン前に、キレート化することができる。Ｔとのコンジュゲーションは適当な緩衝液中で実施する。

Ｔ：Ｐの比は、ことにＴが抗体または断片であるとき、好ましくはｌ：１である。Ｍ：Ｐの比は前の通りであろう。

スターバーストコンジュゲートをターゲティング（ｔａｒｇｅｔ　ｉｎｇ）できる標的ディレクターは、本発明のスターバーストコンジュゲートにおいテ使用したとき、スターバーストコンジュゲートの少なくとも一部を所望の標的（例えば、蛋白質、糖蛋白質、リポ蛋白質、脂質、ターゲテッド細胞、ターゲテッド器官、ターゲテッド有機体または他のターゲテッド部分）に放出する実在因子であり、そして抗体、好ましくはモノクローナル抗体、抗体断片、例えば、Ｆａｂ、　Ｆ　（ａｂ″）２断片または要求する標的特異性を有する他の抗体断片、ホルモン、生物学的に応答性の修飾因子；標的特異性を示す化学的官能性などを包含する。

ここに記載する好ましいスターバーストコンジュゲートにおいて使用できる抗体または抗体断片は、この分野においてよ（知られた技術によって調製できる。高度の特異的なモノクローナル抗体は、この分野においてよく知られたハイブリダイゼーション技術、例えば、コウラー（Ｋｏｈｌｅｒ）およびミルスティン（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ）　［ｌ　９７５、ネイチャー（凡鮎思１）又旦旦二４９５−４９７；および１９７６、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｅｕｒ、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、）６：５１１−５１９１、によって生成することができる。このような抗体は通常高度に特異的な反応性を有する。

抗体ターゲテッドスターバーストコンジュゲートにおいて、抗原またはハプテンに対して向けられた抗体を使用できる。普通のポリクローナル抗体を使用できるが、モノクローナル抗体はいくつかの利点を提供する。各モノクローナル抗体は単一のエピトープに対して高度に特異的である。さらに、大量の各モノクローナル抗体を生成することができる。

本発明において使用する抗体は、例えば、腫瘍、バクテリア、真菌（ｆｕｎｇ＋）　、ウィルス、寄生体、マイコプラズマ、分化および他の細胞膜抗原、病原性表面抗原、トキシン、酵素、アレルゲン、薬物および生物学的に活性な分子に対して向けることができる。抗原のより完全なリストについては、米国特許第４．１９３，９８３号を参照。

さらに抗体または断片をデンドリマーに結合すること、および特定の場合において、異なる特異性の抗体を結合することが望ましいことがある。例えば、腫瘍を局在化しかつそれの結合し、次いで循環する細胞毒性化合物、診断の化合物または生体静力学的化合物を掃去する能力を有する２官能性フンシユゲートを設計することができる。

標的ディレクターの不存在下に（または必要に応じて標的ディレクターの存在下に）、デンドリマーの表面にあるいはその付近に位置できる官能基の数のために、このような官能基のすべてまたは実質的な部分を、アニオン性、カチオン性または疎水性として、反対電荷の所望の標的へ、あるいは疎水性もしくは親水性の適合性標的へ、スターバーストコンジュゲートを放出することを効果的に促進することができる。

保護されたハンドル（ｈａｎｄｌｅ）　（Ｓ　）をもつＰを使用する式（Ｉ　Ｉ）のコンジュゲートの調製は、また、式（１１）のフンシュゲートを調製するあめの１つの方法として意図する。この反応の概要を下に示す：添加　脱保護Ｓ＊Ｐは保護されたデンドリマーを表わし、Ｓ＊Ｐ＊ＭはＭとコンジュゲーションした保護されたデンドリマーを表わし、Ｐ＊ＭはＭ（スターバーストコンジュゲート）とコンジュゲーシヨンしたデンドリマーを表わし、そしてＴ＊Ｐ＊Ｍは標的ディレクターに連結したスターバーストコンジュゲートを表わす。

Ｐ＊Ｍに影響を及ぼさない適当な溶媒を使用できる。例えば、ＳがＬ−ブトキシカルバメートであるとき、Ｓは水性酸によって除去することができる。

また、ポリマーが直接に、あるいはコネクターを介してアソシエーションしているスターバーストコンジュゲートを調製する；これらのスターバーストコンジュゲートは、式：％式％（［［）式中、各Ｃ′は同一もしくは相異なる結合基を表わし、各Ｃ″は同一もしくは相異なる結合基を表わし、ｇおよびｋの各々は個々に１またはそれより大きい整数を表わし、ｆおよびｈの各々は個々にＯまたはそれより大きい整数を表わし、−は結合基が存在する場合共有結合を示し、そしてＰ、ｘ、＊、Ｍ、ｙ、Ｔおよびｅは前に定義した通りである。

式（Ｉ　Ｉ　Ｉ）のスターバーストコンジュゲートのうちで、Ｍが、放射性核種、薬物、トキシン、シグナル発生因子、シグナル反射因子またはシグナル吸収因子であるものは好ましい。まｔ；、ｘ−１であるものは好ましいフンシュゲートである。とくに好ましいコンジュゲートは、ｘｓ　ｅｓｆＳｈおよびｙの各々が１であり、ｇが１またはそれより大であり、そしてｋが各々独立に２またはそれより大きいものである。ｘＳｅ、　ｆ、　ｈ％ｙおよびｇの各々が１であり、そしてｋが２またはそれより大きいコンジュゲートは最も好ましい。また、Ｍが生物活性因子、例えば、放射性核種、薬物またはトキシンを表わすスターバーストコンジュゲートはとくに好ましい。

ＣＨによって表わされる適当な結合基は、担持された製薬学的物質の有効性またはスターバーストコンジュゲート中に存在する標的ディレクターの有効性を有意に損傷しないで、担持された製薬学的物質をデンドリマーに連結する基である。

これらのコネクターは、担持された製薬学的物質の活性のモードに依存して、安定（すなわち、切離し不可能）または切離し可能でなくてはならず、そして、典型的には、担持された製薬学的物質とポリマーとの間の立体障害を回避するために使用される。

デンドリマーが直接にあるいはコネクターを介して、抗体または抗体断片にアソシエーションしているコンジュゲートは最も好ましい。これらの好ましいコンジュゲート中のポリマーは、さらに、必要に応じて直接にあるいはコネクターを介して、１種または２種以上の担持された物質、好ましくは放射性核種にアソシエーションできる。このようなスターバーストコンジュゲートは、式：％式％（）式中、各抗体は所望のエピトープと相互作用できる抗体または抗体断片を表わし、 −は結合基が存在する場合共有結合またはクーロン的結合を示し、そしてＰ、ｘ、本、Ｍｓ　Ｔｓ　ｅｓ　１％　Ｃ’　、Ｃ″、ｇ％に％ｆおよびｈは前　に定義した通りである。

標的ディレクター（Ｌａｒｇｅｔｉｎｇ　ｄｉｒｅｃｔｏｒ）　（Ｔ）との連結に有効な官能基（Ｃ″またはＣ”）を有するスターバーストデンドリマ−（Ｐ）の上の合成のために、好ましい方法は反応性官能性が合成前駆体として保護されることを必要とする。この保護は非常に高い品質のデンドリマーまたはコンジュゲートの合成を可能とするので、好ましい。この方法は、そうでなければ、また、連結官能基との反応を生じ、こうして標的ディレクター（Ｔ）への取り付けを不可能とするであろう方法において、１単位の担持された製薬学的物質（Ｍ）をスターバーストデンドリマー（Ｐ）の末端官能基への化学的結合を可能とする。

引続く脱保護または所望の連結官能基への合成的転化は、こうして、スターバーストコンジュゲートの標的ディレクターへの連結を可能とする。

好ましい「連結（ｌｉｎｋｉｎｇ）のための官能基」　（以後「ハンドル」と呼ぶ）の１つは、アニリン部分である。この基は標的ディレクターへの連結に直接使用できるか、あるいは標的ディレクターとの反応に適当な他の官能基、例えば、インチオシアネート、インシアネート、セミチオカルバジド、セミカルバジド、ブロモアセトアミド、ヨードアセトアミドおよびマレイミドに容易に変更できるので、好ましい。アニリン部分はスターバーストデンドリマーの合成において使用するために容易に保護することができるので、また、標的ディレクターとの連結のためのハンドルとして好ましく、あるいはニトロ基を前駆体として使用でき、次いでこれを合成の終りにおいて所望のアミン官能に転化することができる。

スターバーストデンドリマーの合成の間にアニリノアミノ官能性を保護するために適当な、ある数の保護基が存在する。［参照、チオドラ（Ｔｈｅｏｄｏｒａ）　Ｗ、グリーン（Ｇｒｅｅｎ）　、有機合成における保護基（旦ご少匹Ｌｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　Ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、　）　、発行、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ・インコーホレーテッド（Ｊ　ｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆５ｏｎｓ、Ｉｎｃ、　）　、ニューヨーク、１９８１］、保護基の好ましいクラスは、下に示すカーバメートである。

多くのカーバメートがアミンの保護に使用されてきている。スターバーストデンドリマーの合成に最も好ましいカーバメートはＬ−ブトキシカルバメート、Ｒ− −Ｃ（ＣＨＩ）３、である。脱保護は穏和な酸加水分解によって達成される。ベンジルカルバメート保護基、は、また、好ましく、これはデンドリマーが酸加水分解に感受性であるとき好ましい。脱保護は接触水素化のよって達成される。また、９−フルオレニルメチルカルバメート、は好ましい。

フタルイミド保護基、例えば、は、また、好ましい。

文献においてよく知られているアミンのために使用される他の保護基は、また、この合成の計画において使用できる。使用の好ましさは、例示として与えただけであり、使用できる保護基のみではない。反応条件下に安定でありかつスターバーストデンドリマーの一体性を変更しないで除去できる保護基を使用できる。

上の方法は、アミノフェニル官能性をアミノ基含有因子の中に導入することができ、次いでこれをある生物活性因子、例えば、モノクローナル抗体または酵素とコンジュゲーションすることができる。この因子は酸化的カップリング（ｃｏｕｐｌ　ｉｎｇ）によって生物活性因子、例えば、抗体ル基は、また、生物活性因子上のリジン残留物のペンダント（ｐｅｎｄａｎｔ）アミノ基との引続く反応のために、インチオシアネートまたはインシアネートに転化することができる。

別の方法は、活性化ハロゲン化アリール、例えば、４−ニトロフルオロベンゼン、と、コンジュゲーションのための因子、例えば、スターバーストポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、の上のアミノ−官能との友応、および引続くフンジュゲーションのためのニトロ基のアニリン官能性への引続く接触水素化を包含する。それは因子、例えば、ポリアミンのためにとくに有用であり、これは、すべての非還元性反応の条件に対してニトロフェニル官能性の相対的化学的不活性のために、使用前にそれ以上の修飾に必要である。より普通の２官能性連結因子、例えば、活性なエステルまたはジイソシアネート（これらは多数の反応条件下に反応性でありかつそれらをコンジュゲーションのために使用不可能とするであろう）は、次のものを包含する：本発明は、また、ニトロ置換アリールスルホニルハライドを使用して、例えば、スルホンアミド、を生成することを包含する。

コンジュゲーションのためにアミノフェニル基を導入する既知の方法を越えたこの方法の利点は、それが合成の後期の段階で起こるということである。ガンショウ（Ｇａｎｓｏｗ）ら、米国特許第４．４７２．５０９号は、彼の方法において、ニトロフェニル基を長い合成の手順の最初の段階で導入し、これによって利用可能な化学について制限を有する。

この方法は、また、分子の残部と明瞭に区別可能であるハンドルを導入する。マナベ（Ｍａｎａｂｅ）らは、残留アミンによるコノ１り酸無水物の開環がカップリング基を与え、これを通して抗体へのコンジュゲーションが可能であることを開示した。しかしながら、この方法は、キレート剤が連結基と同一であるので、ポリマー上のキレート化しない部位の間を区別する手段を与えなかった。

本発明の方法は、また、好ましくはＰＥＩアセテートデンドリマーにより、スターバーストデンドリマーを使用するランタニドの直接の合成を提供する。対照的に、デンケウオルタ−（Ｄｅｎｋｅｗａｌｔｅｒ）　、米国特許第４．２８９．８７２号は、表面上のアセテートの適切な配置がはたらくことを述べている。しかしながら、本発明の反応は、ＰＥＩアセテートがＰＡＭＡＭより非常によくはたらく、すなわち、イミノアセテートの表面はこの物語の一部のみであり、主鎖および枝分れの性質は同様によく非常に重要であることを示す。ＰＥＩアセテートはＰＡＭＡＭアセテートよりもすぐれたキレート化性質を有する。

ＰＥＩ式（ＩＶ）のスターバーストコンジュゲートのうちで、Ｍが、放射性核種、薬物、トキシン、シグナル発生因子、シグナル反射因子またはシグナル吸収因子であるものは好ましい。また、！−１であるコンジュゲートは好ましい。Ｘ％ｅＳｆ、　ｈおよびｙの各々が１であり、ｇが１またはそれより大であり、モしてｋの各々が２またはそれより大であるコンジュゲートはとくに好ましい。Ｘ１ｅ１ｆｓ　ｈｓ　Ｖおよびｋの各々が１であり、そしてｋが２またはそれより大であるコンジュゲートは最も好ましい。また、「抗体」がモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合性断片を表わすスターバーストコンジュゲートはとくに好ましい；Ｍが生物活性因子、例えば、放射性核種、薬物またはトキシンを表わすものはことに好ましい。

スターバーストコンジュゲートは、種々の生体外または生体内の診断の応用、例えば、ラジオイムノアッセイ、核磁気共鳴分光分析、コントラスト像影（ｃｏｎｔｒａｓｔ　ｉｍａｇｉｎｇ）およびイムノシントゲラフイー（ｉｍｍｎｏｓｃｉｎｔｏｇｒａｐｈｙ）のため、分析的応用、治療の応用において、抗体、放射性核種、薬物または病気の状態、例えば、癌、自己免疫病、中枢神経系の疾患、伝染病および心臓疾患の処置における使用に適する他の因子の坦体として使用することができ、あるいは他の有用な因子の製造のための出発物質として使用できる。

本発明は、また、スターバーストコンジュゲートが他の適当なビヒクルと配合されたスターバーストコンジュゲート組成物に関する。スターバーストコンジュゲートの組成物は、必要に応じて、他の活性成分、添加剤および／または希釈剤を含有する。

本発明のスターバーストコンジュゲートにおいて使用するために好ましいスターバーストポリマーは、コアから発する、少なくとも１つの枝分れ（以後、コアの枝分れと呼ぶ）、好ましくは２またはそれより多い枝分れを有するスターバーストポリマーとして記載することができるポリマーであり、前記枝分れは少なくとも１つの末端基を有し、ただしく１）末端基体コアの枝分れの比はｌより大であり、好ましくは２またはそれより大であり、（２）ポリマーにおける単位体積当りの末端基の密度は、同様なコアおよびモノマー部分および匹敵する分子量および数のコアの枝分れを有する延長した従来のスターポリマーのそれの少なくとも１．５倍であり、延長した従来のスターポリマーのこような枝分れの各々は１つだけの末端基を有し、そして（３）分子の体積は、目盛付きコラレイ−パラリング（Ｃｏｒｅｙ　−Ｐａｕｌｉｎｇ）の分子モデルを使用する寸法の研究によって決定して、前記延長した従来のスターポリマーの分子体積の約８０％より多くない。ここで使用するとき、用語「密な」は、「スターポリマー」または「デンドリマー」を修飾するとき、それが同一の分子量を有する延長した従来のスターポリマーより小さい分子体積を有することを意味する。密なスターポリマーと比較するためのベースとして使用する延長した従来のスターポリマーは、密なスターポリマーと同一の分子量、同一のコアおよびモノマー成分および同一の数のコアの枝分れを有するものである。「延長した（ｅｘｔｅｎｄｅｄ）　Ｊとは、従来のスターポリマーの個々の枝分れがそれらの最大の長さに延長または伸張されていること、例えば、スターポリマーがそのための理想の溶媒中に完全に溶媒和されているとき、このような枝分れが存在することを意味する。さらに、末端基の数は従来のスターポリマーの分子よりも密なスターポリマーの分子について大きいが、末端基の化学的構造は同一である。

本発明のコンジュゲート中に使用するデンドリマーは、この分野において知られている方法によって調製できる。上のデンドリマー、種々の共反応成分およびコア成分、およびそれらの調製方法は、米国特許第４゜５８７．３２９号におけるように定義することができる。

本発明のコンジュゲート中に使用するためのデンドリマーは、付加反応および置換反応を行なうために十分に反応性である末端基を有することができる。このような末端基の例は、アミノ、ヒドロキシ、メルカプト、カルボキシ、アルケニル、アリル、ビニル、アミド、ハロ、尿素、オキシラニル、アジリジニル、オキサゾリニル、イミダゾリニル、スル　。

ホナト、ホスホナト、インシアナトおよびインチオシアナトを包含する。

末端基は修飾して、それを生物学的に不活性とすることができ、例えば、それを免疫原性とすることができるか、あるいは肝臓、牌臓または他の器官における非特異的吸収を回避することができる。デンドリマーは従来のスターまたはスター −枝分れポリマート異なり、デンドリマーは等しい数のコアの枝分れおよび等しいコアの枝分れの長さを有する従来の延長したスターポリマーよりも、分子体積の単位当りの末端基の濃度が大きい。こうして、デンドロマー中の単位体積当りの末端基の密度は、通常、従来の延長したスターポリマーにおける末端基の密度の少なくとも１．５倍、好ましくは少なくとも５倍、より好ましくは少なくとも１０倍、最も好ましくは１５〜５０倍である。密なポリマー中のコアの枝分れ当りの末端基の比は、好ましくは少なくとも２、より好ましくは少なくとも３、最も好ましくは４〜１０２４である。好ましくは、所定のポリマーの分子量について、密なスターポリマーの分子体積は、従来の延長したスターポリマーの分子体積の７０容量％より小、より好ましくは１６〜６０容量％、最も好ましくは７〜５０容量％である。

本発明のフンシュゲート中に使用する好ましいデンドリマーは、樹枝状の枝に共有結合した１価または多価のコアを有するとして特徴づけられる。このような規則正しい枝分れは次の順序によって例示され、ここでＧはジエネレイションの数を表わす：Ｇ−Ｉ　Ｇ−２数学的に社、樹枝状の核使用の末端基の数（＃）および枝分れのジェネレイションの数との間の関係は次のように表わすことができる：末端基の＃／樹枝状の枝 − ｒＧ式中、Ｇはジエネレイションの数であり、Ｎｒはアミンの場合において少なくとも２である反復単位の多重度（ｍｕｌｔｉｐｌ　１ｃｉｔｙ）である。デンドロマー中の末端基の合計の数は、次によって決定される：式中、ＧおよびＮｒは上に定義した通りであり、そしてＮｃはコア化合物の原子価（しばしばコアの官能性と呼ばれる）を表わす。したがって、本発明のデンドリマーはその成分部分において次のように表わすことができる：式中、コア、末端部分、ＧおよびＮｃは上に定義した通りであり、そして反復単位はＮｒ＋１の原子価または官能性を有し、ここでＮｒは上に定義した通りである。

本発明の目的に対して好ましいデンドリマーであるコポリマーのデンドリマーは、高度に枝分れした（樹枝状の）列（ａｒｒａｙ）で多官能性モノマー単位から構成された独特の化合物である。デンドリマーの分子は、多官能性開始単位（コアの化合物）、多官能性反復単位および末端単位から調製され、そして末端単位は反復単位と同一であるかあるいは異なることができる。コアの化合物は弐〇（ＺつＮｃによって表わされ、ここで■はコアを表わし、Ｎ３は■に結合した官能基であり、モしてＮｃはコア官能性を表わし、この官能性は好ましくは２またはそれより大であり、最も好ましくは３またはそれより大である。こうして、デンドリマー分子はある数（Ｎｃ）の官能基、Ｎ８、に結合した多官能性コア、■、からなり、それらの各々は第１ジエネレイシヨンの反復単位　Ｘ　Ｉ　Ｙ　１（Ｚ’）Ｎ’、の単官能性テイル（ｔａｉｌ）に化合物しており、１つのジェネレイシＢンの反復単位のＺ基の各々は、末端のジェネレイションに到達するまで、次のジェネレイションの反復単位の単官能性テイルに結合している。

デンドリマーの分子において、反復単位は単一のジエネレイション内で同一であるが、ジェネレイションごとに異なることができる。反復単位、Ｘ’Ｙ’　（Ｚ ’）Ｎ’、において、Ｘｌは第１ジエネレイシヨンの反復単位の単官能性テイルを表わし、Ｙ′は第１ジエネレイシヨンを構成する部分を表わし　ｚｌは第１ジエネレイシヨンの反復単位の多官能性ヘッド（ｈｅａｄ）の官能基を表わし、そしてコアの化合物、■（ＺつＮｃ、または他のジェネレイションの官能基と同一であるか異なることができる；そしてＮｌは２またはそれより大きい、好ましくは２．３または４の数であり、これは第１ジエネレイシヨンにおける反復単位の多官能性ヘッドの多重度を表わす。一般に、反復単位は式Ｘ’Ｙ’　（Ｚ’）Ｎ ’によってネレイションを表わす。こうして、好ましいデンドリマー分子において、第１ジエネレイシヨンの反復単位の各ｚｌは第２ジエネレイシヨンの反復単位のＮ２に結合しており、そしてジェネレイションを通して進行して、ジエネレイションの数「ｉ」における反復単位Ｘ’Ｙ’　（Ｚ’）Ｎ’についての各Ｚｌ基はジェネレイションの数ｒｉ＋ｌＪの反復単位のテイル（Ｘ　”’）に結合している。好ましいデンドリマー分子の最後または末端は末端単位、Ｘ’Ｙ’　（Ｚ’）Ｎ“からなり、式中ｔは末端のジェネレイションを表わし、そしてＸ’、Ｙ’、ＺｌおよびＮｒはＸ’１Ｙ’、ＺｌおよびＮ’と同一であるかあるいは異なることができ、ただしＺｌ基に結合した連続するジェネレイションは存在せず、そしてＮｌは２より小さく、例えば、０またはｌであることができる。したがって、好ましいデンドリマーは、ｉは１−ｔ−１であり、そして記号は前に定義した通りである、によって表わされる分子式を有する。■関数はその規定された限界の間のすべての値の積である。こうして、Ｉ１１は１つの樹枝状の枝の第１番目おジェネレイションからなる、反復単位、Ｘ’Ｙ ’　（Ｚ’）Ｎ’、の数であり、そしてｉが１であるとき、ｎ　ｏ　＝　１ｎ”ｌ。

コポリマーのデンドリマーにおいて、１つのジエネレイションのために反復単位は少なくとも１つの他のジェネレイション中の反復単位から異なる。好ましいデンドリマーは、下に記載する構造式に例示するように非常に対称である。好ましいデンドリマーは他の試薬との接触によって官能化されたデンドリマーに転化することができる。例えば、酸塩化物との反応によって末端のジエネレイション中のヒドロキシルのエステルへの転化は、エステル末端官能化デンドリマーが得られる。この官能化は利用可能な官能基の数によって規定される理論的最大まで実施する必要はなく−こうして、官能化されたデンドリマーは、好ましいデンドリマーの場合におけるように、非常に高い対称性または精確に規定された分子式を有しないことがある。

ホモポリマーのデンドリマーの場合において、反復単位、ｘＩＹｌ（ｚつＮ１１のすべては同一である。すべてのＮ　の値は等しい（Ｎｒとして定義して）ので、反復単位の数を表わする積の関数は簡単な指数の形になる。したがって、分子式は次のようにいっそう簡単な式で表わすことができる：式中、１＝１−ｔ−１である。

この形は、なお、各々がＮｃＮｒ（”）反復単位、ＸＩＹＩ　（Ｚｌ）Ｎｌ。

から成る、異なるジェネレイションｉの間の区別を示す。ジェネレイションを１つ項に結合すると、次が得られる：または式中、Ｘ’Ｙ’　（Ｚ’）Ｎｒはすべてのジェネレイションｉにおいて使用する反復単位である。

結局、ポリマー化合物がこれらの上の式に適合する場合、ポリマーはスターバーストポリマーである。逆に、ポリマー化合物がこれらの上の式に適合しない場合、ポリマーはスターバーストポリマーではない。まｔ；、ポリマーがスターバーストポリマーであるか否かを決定するため、それを調製するために用いた方法を知る必要はなく、そえが上の式に合致するかどうかのみを知ればよい。これらの式は、また、デンドリマーのジエネレイション（Ｇ）または列形成（ｔｉｉｒｉｎｇ）を立証している。

明らかなように、Ｐ＊Ｍのアソシエーションが起こる方法および場所に依存する、因子（Ｍ）対デンドリマ−（Ｐ）の比を決定するためにいくつかの方法が存在する。内部のカプセル化が存在するとき、ＭＡＰの重量比は通常１ｏｌｌ、好ましくは８：１１より好ましくは５：１１最も好ましくは３：１である。この比はＯ，Ｓ：ｔ〜０．１：ｌ程度に低いことができる。内部の化学量論を用いるとき、Ｍ：Ｐの重量比は内部にカプセル化についてと同一である。外部の化学量論を用いるとき、Ｍ：Ｐのモル１モルの比は次の式によって与えられる：Ｍ：Ｐ（Ａ）　５　ＮｃＮｔＮｒ”　１（Ｂ）　３　ＮｃＮＬＮｒ’−’　１（Ｃ）　ｌ　ＮｃＮｔＮｒ”　１ここでＮｃはコアの多重度を意味し、Ｎｔは末端基の多重度を意味し、モしてＮｒは枝の接合の多重度を意味する。ＮｃＮｔＮｒＧ−１の項はＺ基の数を生ずるであろう。こうして、例えば、上の（Ａ）は蛋白質、酵素または高度に帯電した分子が表面上に存在するとき、生ずることができ、上の（Ｂ）はそれがアスピリンまたはオクタン酸であるとき、生ずることができ、そして上の（Ｃ）は表面のエステル基をカルボキシレートのイオンまたは基に転化するとき、生ずることができる。

もちろん、種々のデンドリマーの他の構造体は、当業者によれば、使用するデンドリマーの成分およびジェネレイションの数を適当に変化させることによって容易に調製できる。ＩｇＧ抗体に関する３つの異なるデンドリマーの系列のおおまかに目盛り定めした比較は、第３図に示されている。第３（Ｂ）図■によって示されている図面の系列はスターバーストポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）を示し、１１によってスターバーストポリエーテル（Ｐ　Ｅ）を示し；そしてＩＩＩによってスターバーストポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を示す。第１図のそれに類似する方法において、すべての３つの系列（１、ＩＩおよびｒｚ）＋ｉ開始コアを示すそれらの一番左の図面を有゛し、その左から次の図面はスターブランチ（ｓｔａｒｂｒａｎｃｈ）オリゴマーを示し、そして残りの図面はスターバーストオリゴマーおよびそれぞれのスターバースト架橋デンドリマーを示す。これらの系列の目盛り図面において、デンドリマーが■ｇＧ抗体第３（Ａ）図について認められているものに密接することが理解できる。

ＩｇＧ抗体は第３図において一番左に示されている。目盛は１ｍｍ−３゜５人２である。第３（Ａ）図において、変動可能な領域は（Ａ）で示されている；一定の領域は（Ｂ）によって示されている；そして炭水化物の取り付は部位は（Ｃ）によって示されている。第３図上に示されるおおよその測定値は、（１）が３５〜４０人２であり；（２）が７０人２であり；そして（３）が６０人２である。

これらの寸法の性質は、ターゲティングが脈管系からの出ることを包含する場合に好ましい。しＩ；がって、１２５オングストロ一ム単位またはそれより小さいデンドリマーの直径は、連続のまたは窓のある毛管によって供給されるターゲテッド器官から出ることを可能とするので、とくに好ましい。これらの寸法は、潜在的なターゲティング成分、例えば、抗体の大きさに比較して小さいということにおいて意味がある（第３図）。匹敵する分子量の線状のポリマーは、旋回の半径（その完全に延長した形態で）を有し、それは同一分子量のデンドリマーよりも非常に大きいであろう。このタイプの線状ポリマーは、多くの受入れられたターゲテイング成分の分子の認識性質に悪影響を及ぼすことが期待されるであろう。また、コンジュゲートは、例えば、Ｆａｂｓ　Ｆａｂ’　または他の適当な抗体断片を低分子体積のデンドリマーにカップリングすることによって、遊出（ｅｘｔｒａｖａｓａｔ　１ｏｎ）をディスカレッジ（ｄｉｃｃｏｕｒａｇｅ）　Ｌないように、最小の分子量をもつことが望ましい。

デンドリマーは、小さい体積の空間内のある数の金属イオンをキレート化する能力をもつｔ；め、放射性核種または強く常磁性の金属イオンを腫瘍部位に放出するための望ましい。腫瘍に対して特異的な抗体または抗体断片へのカップリングは、抗体に対して単一の修飾で、抗体当りある数の金属を放出することができる。

標的ディレクター（ｔａｒｇｅｔ　ｄｉｒｅｃｔｏｒ）をデンドリマーへ連結することは、本発明の他の面である。本発明の好ましい実施態様において、とくに抗体を標的ディレクターとして使用する場合、反応性官能基、例えば、カルボキシル、スルフヒドリル、反応性アルデヒド、反応性オレフィン系誘導体、インチオシアナト、イソシアナト、アミノ、反応性アリールハライド、または反応性アルキルハライドをデンドリマーについて便利に用いることができる。反応性官能基は、既知の技術、例えば、次の技術を使用してデンドリマーに導入することができる：（１）異なる反応性の官能基を内部に組込んで有するヘテロ官能性開始剤（デンドリマーを合成するだめの出発物質として）の使用。このようなヘテロ官能性開始剤において、官能基の少なくとも１つはデンドリマーの形成のための開始部位として働き、そして他の官能基の少なくとも１つは標的ディレクターへの連結に利用可能であるが、デンドリマーの合成を開始するＩ；めに使用可能である。例えば、保護されたアニリンの使用は、アニリンのＮＨ２を反応させないで、分子内のＮＨ，基のそれ以上の修飾を可能とする。

標的ディレクターへの連結に利用可能である官能基は、３つの形態の１つにおいて開始剤分子の一部であることができる；すなわち：（ａ）　それを標的ディレクターとの連結において使用する形態において。これは、デンドリマーの合成に含まれる合成の工程のいずれもこの中心において反応を生じることができないとき、可能である。

（ｂ）　ターゲティングディレクターへの連結のために使用した官能基がデンドリマーの合成に含まれる合成工程において反応性であるとき、それは保護基を使用することによって保護することができ、その保護基は含まれる合成の手順に対してその基を非反応性とするが、それ自体高分子の残部の一体性を変更しない方法で容易に除去できる。

（Ｃ）　ターゲティングディレクターとの連結のために使用すべき反応性の官能性のために簡単な保護基を形成できない場合、デンドリマーの合成において使用する合成手順のすべてにおいて非反応性である合成の前駆体を使用することができる。合成が完結したとき、この官能基は、この分子の残部の一体性を変更しない方法で、所望の連結基に容易に転化することができなくてはならない。

（２）　所望の反応性官能基を前もって形成しＩ；デンドリマー上にカップリング（共有的に）するとき、使用する試薬はデンドリマーの末端官能基と容易に反応する官能性を含有しなくてはならない。ターゲティング因子と連結するために究極的に使用すべき官能基は、その最終の形態において、保護された官能性として、あるいは合成の前駆体として存在することができる。この連結官能性を使用する形態は、利用すべき合成手順の間のその一体性、およびこの基を連結のために利用可能とするために必要な条件に最終の高分子が耐えることのできる能力に依存する。例えば、ＰＥＩについて好ましいルートは、を使用する。

上の（１）において使用するためのへテロ官能性開始剤の例は、次の例示的例を包含する：とくに重要ないくつかの化学が存在する：ｌ）スターバーストポリアミドアミド（ｒＰＡＭＡＭＪ　）の化学：２）スターバーストポリエチレンイミン（ｒＰＥ　ＩＪ　）の化学：３）ＰＡＭＡＭの表面をもつスターバーストＰＥＩ化合物；４）スターバーストポリエーテル（ｒＰＥＪ　’）の化学。

デンドリマーの表面の官能性の修飾は、他の有用な官能基、例えば、次のものを提供できる：ＯＰ　Ｏｓ　Ｈ２、−ＰＯ，Ｈ，、−ＰＯ，Ｈ−’、−Ｐ　Ｏ、−”、−ｃｏ、 −’１−３Ｏ，Ｈ，−５ｏ、−１、−３ｏ！Ｈ，−５ｏ３−’、−ＮＲ’Ｒ”、　Ｒ１゜式中、Ｒはアルキル、アリールまたは水素を表わし、Ｒ１はアルキル、アリール、水素、またはを表わし、Ｒ２はアルキル、アリール、またはを表わし、Ｒ３は−ＯＨ１Ｓ　Ｈ１−ＣＯｚ　Ｈ１Ｓ　Ｏ２Ｈ１または一５０３Ｈを表わし、Ｒ′４はアルキル、アリール、アルコキシ、ヒドロキシル、メルカプト、カルボキシ、ニトロ、水素、ブロモ、クロロ、ヨード、またはフルオロを表わし、Ｒ８はアルキルを表わし、ＸはＮＲ’、ＯまたはＳを表わし、そしてｎは１．２または３の整数を表わす；ポリエーテル：または他のイムノ不感受性部分。

官能基の選択は、デンドリマーを設計するための特定の最終用途に依存する。

抗体のデンドリマーへの連結は本発明の他の面である。典型的には、抗体または抗体断片は、この分野においてよく知られている技術により、例えば、デンドロマー上の官能基と抗体または抗体断片中に存在する部分、例えば、炭水化物、アミノ、カルボキシルまたはスルフヒドリル官能性との間の結合によって、デンドリマーへ連結することができる。ある場合において、結合基はデンドリマーと抗体または抗体断片との間のコネクターまたはスペーサーとして使用できる。抗体または抗体断片へのデンドリマーの取り付けは、抗体または抗体断片の免疫活性を湯居の妨害しない方法で、すなわち、抗原認識部位村よび結合部位の一部でない抗体または抗体断片中の官能性を介して、抗体または抗体断片を結合することによって実施すべきである。

次の実施例により、本発明をさらに説明するが、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。文字の実施例は出発物質の調製に関し、そして数字の実施例は生成物の調製に関する。

実施例Ａ２−カルボキシアミ）’−３−（４°−ニトロフェニル）−プロパンアミドの調製ｐ−ニトロベンジルマロネートジエチルエステル（２，４ｇ、　８．　１３ミリモル）を３５ｍ１のメタノール中に溶解した。この溶液を５０〜５５℃に撹拌しながら加熱し、そして無水アンモニアの流れをこの溶液を通して６４時間泡立てて通入した。この溶液を冷却し、白色の凝集した生成物をろ過し、そして２２５ｍ１の瀦騰するメタノールから再結晶化すると、１．８５ｇ（７，８０ミリモル）のビスアミドが９６％の収率で得られた（融点＝２３５．６℃（分解）。

構造はＭＳ、ＩＨおよび１３ｃ　ＮＭＲ分光分析によって確証された。

分析：　Ｃｌｏ　Ｈ＋　、０４　Ｎ　ｓについて計算ＣＨＮ理論値：５０．６３　．４．６９　１７．７２計算値：５０．７５　４．８１　１７．９４実施例Ｂｌ−アミノ−２−（アミノメチル）−３−（４’　−二トロフェニル）プロパンの調製２−カルボキシアミド−３−（４’−二トロフェニル）プロパンアミド（２，０ｇ、８．４３ミリモル）を、３５ｍ１の乾燥テトラヒドロフラン中で窒素の雰囲気下に撹拌しながらスラリー化した。この混合物にボラン／テトラヒドロ７ラン錯体（１０６ｍ１．　１０６ミリモル）を注射器で添加した。次いで、この反応混合物を４８時間還流加熱し、その間懸濁したアミドは溶解した。この溶液を真空冷却し、そしてテトラヒドロフランを回転蒸発器で真空除去した。粗生成物およびポランの残留物を無水塩化水素ガスでパージした。この溶液を１時間還流し、そして溶媒を真空除去した。粗製の塩酸塩を１５ｍ１の脱イオン水中に溶解し、２×５０ｍ１部分の塩化メチレンで抽出した。水性相を水浴中でアルゴンのブランケットの下で冷却し、そして５０％の水酸化ナトリウムを塩基性ｐＨ−１１，７となるまでゆっくり添加した。塩基性の水相を４Ｘ２５ｍｌの部分の塩化メチレンで抽出し、そしてこれらの−緒にした抽出液を蒸発（回転）すると、１．４５ｇの琥珀色の油が得られた。こお油をジエチルエーテル（５０ｍｌ）で粉砕し、そして短いシリカゲル（等級６２アルドリッヒ）カラムを通して加圧下にろ過した。このカラムを１００ｍ１のエーテルで洗浄し、そして−緒にしたろ過を真空蒸発すると、１．０５ｇ（５，０２ミリモル）の標題ジアミンが透明な油として得られた（融点−２７５〜２７８°Ｃ（分解）ビスＨＣＩ塩）。

構造はＭＳ、ＩＨおよび１３ｅ　ＮＭＲ分光分析によって確証された。

分析：Ｃ１ｏＨｒｔＮｓＯ２Ｃ１２について計算ＣＨＮ理論値：４２．５７　６．０？　１４．８９計算値：４３．００　６．１４　１５．３１実施例Ｃ１−アミノ−２−（アミノメチル）　−３−（４’　−アミノフェニル）プロパンの調製ポラン／テトラヒドロフラン溶液（７ｅｍｌ、７Ｑミリモル）を、４−アミノ− ベンジルマロンアミド（１５ｇ、７．２４ミリモル）を含存する７ラスフに撹拌しながらカニユーレで窒素下に添加した。この溶液を４０時間還流させた。無色の溶液を冷却し、そして過剰のテトラヒドロフランを回転蒸発によらて除去すると、透明なゼラチン採油が得られた。メタノール（５０ｍｌ）をこの油に注意して添加し、ガスの発生が認められた。乾燥塩化水素をこの懸濁液中に泡立てて通入して溶解を実施し、次いでこの溶液を１分間還流した。メタノール／ＨＣＩを回転蒸発し、そして溶離られる塩酸塩を同一の溶解／還流手順に再び通した。得られた塩酸塩を１０ｍ１の水中に溶解し、そして水浴中でアルゴン下に冷却した。濃水酸化ナトリウム（５０％）を撹拌しながらゆっくり添加してｐＨ＝１１にした。次いで、この水溶液を２Ｘ１００ｍｌの部分のクロロホルムで抽出し、これらを−緒にし、そして乾燥せずに短いシリカゲルのプラグを通してろ過した。

溶媒を真空（回転）除去すると、標題化合物（０，９０ｇ、５．０２ミリモル）が７０％の収率で得られた（Ｒｆ＝　０．６５　ＣＨＣＩｓ／　ＭｅＯＨ／　Ｎ　Ｈｉ　ＯＨ濃−２／２／ｌ）、この構造はＭＳ％　ｌＨおよび１３ｃ　ＮＭＲによって確証され、そしてそれ以上精製しないで使用した。

実施例Ｄ６−（４−アミノベンジル）−１，４，８，１１−テトラアザ−５゜７−シオキソウンデカンの調製４−アミノベンジルマロネートジメチルエステル（２，０３ｇ、８゜４３ミリモル）を１ｏｉｌのメタノール中に溶解した。この溶液を１ｏｉｌのメタノール中の新しく蒸留したエチレンジアミン（６，００ｇ、１０３．４ミリモル）の撹拌した溶液に、窒素下に２時間かけて嫡々添加した。この透明溶液を４日間撹拌し、そして薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析はジエステル（Ｒｒ−０，９１）がビスアミド（Ｒｆ−０，４２−２０％の濃ＮＨ，ＯＨ／８０％のエタノール）に完全に転化したことを示した。この物質は強くニンヒドリン陽性であった。

メタノールおよび過剰のジアミンを回転蒸発器で除去し、そして得られた白色固体を一夜真空（ｌ　Ｏ−”ｍｍ、　５　ＱｏＣ）乾燥すると、粗生成物（２，４５ｇ、８゜３６ミリモル））が９９％の収率で得られた。分析試料をクロロホルム／ヘキサンから再結晶化した、融点１６０−１６１’ｃ。質量分析、ＩＨおよび１丁ｃ　ＮＭＲのデータは提案する構造と一致した。

実施例Ｅメシルアジリジンと１−アミノ−２−（アミノメチル”）−３−（４−ニトロフェニル）プロパンとの反応ｌ−アミノ−２−（アミノメチル）−３−（４−ニトロフェニル）プロパン（４００ｍｇ、１．９１ミリモル、〉９６％の純度）を、ｌ０６５ｍ１の無水エタノール中に窒素下に溶解した。メシルアジリジン（９５０ｍｇ、７．８５ミリモル）を撹拌したジアミン溶液に固体として添加した。

得られた反応混合物を２５℃で１４時間磁気撹拌機を使用して撹拌し、そしてこの期間の間に白色のゴム状反応溶液がフラスコの側面に形成した。エタノールをデカンテーションし、そして残留物を他の１５ｍ１の部分のエタノールで粉砕して未反応のアジリジンを除去した。ゴム状生成物を真空（１０−’ｍｍ、　２５ ℃）乾燥すると、テトラキスメチルスルホンアミド（１，０ｇ、１．４４ミリモル）が７５％の収率ＣＲｆ＝０．７４−ＮＨ，ＯＨ／エタノール−２０／８０）で得られた。構造はＭＳＳ　ＩＨおよび１３Ｃの核磁気共鳴ＮＭＲ分光分析によって確証された。

実施例Ｆ２−（４−ニトロベンジル）−１，３−（ビスーＮ、Ｎ−アミノエチル）ジアミノプロパンの調製粗製メチルスルホンアミド（６５０ｍｇ、０．９４ミリモル）を５ｍｌの窒素でパージした濃硫酸（９８％）中に溶解した。この溶液を窒素下に維持し、そして１４３〜１４６℃に２７分間激しく撹拌しながら加熱した。わずかの暗色化が認められ、そして冷却した溶液をエーテル（６０ｍｌ）の撹拌した溶液中に注いだ。沈殿した白色塩ケークをろ過し、モしてｌｏｍｌの脱イオン水中に直ちに溶解した。この溶液のｐＨを５０％のＮａＯＨでアルゴン下に冷却しながらｐＨ１ｌに調節した。得られる溶液を９０ｍ１のエタノールと混合し、そして沈殿した無機塩をろ過した。

溶媒を粗製アミンから減圧下に除去し、そしてこの得られた淡褐色の油に１９０ｍ１のトルエンを窒素下に添加した。この混合物を激しく撹拌し、そして残留するトルエンが淡黄色を獲得するまで（ポット中に３０〜４０ｍ１が残留する）水を共沸蒸留（ディーンースタークのトラップ）により除去した。トルエンを冷却し、そして暗色の取扱いにくい残留物および塩からデカンテーションした。この溶液から溶媒を真空ストリッピングし、そして得られる淡黄色の油を一夜真空乾燥（０−２ｍｍ１３５°Ｃ）すると、２１０ｍｇの生成物（６０％）が得られ、これをＭＳ、ＩＨおよび１３ＣＮＭＲによって特性づけた。

実施例Ｇ次の反応式によって表わされる０、５ジエネレイシヨンのスターバーストポリマー（アニリン誘導体を含有する）の調製化合物　＃ｌ化合物　＃２メチルアクリレート（２，０９ｇ、２４ミリモル）をメタノール（１５ｍｌ）中に溶解した。化合物６−（４−アミノベンジル’）−１，４，８゜ＩＩ−テトラアザ−５，７−シオキソウンデカン（１，１ｇ、３．８ミリモル）（すなわち、化合物＃１）をメタノール（ｌｏｍｌ）中に溶解し、そして激しく撹拌しながらメチルアクリレートの溶液に２時間かけてゆっくり添加した。この反応混合物を４８時間周囲温度において撹拌した。

溶媒を４０℃以下の温度に維持した回転蒸発器で除去した。エステル（化合物＃２）が黄色油（２，６ｇ）として得られた。アニリン官能のカルボエトキシル化は観測されなかった。

実施例Ｈ次の反応式によって表わされるｌジェネレイションのスターバーストポリマー（アニリン部分を含有する）の調製化合物　＃３エステル（化合物＃２）（２，６ｇｓ　３．７ミリモル）をエタノール（１００ｍｌ）中に溶解した。これをエチレンジアミン（２５０ｇ、４゜１８ミリモル）およびメタノール（ｌｏｏｍｌ）の激しく撹拌した溶液に、温度が４０６０を越えないような速度で、注意した添加した。添加の完結後、この反応混合物を３５〜４０°Ｃ（加熱マントル）で２８時間撹拌した。２８時間後、赤外分光分析によってエステル基は検出できなかった。

溶媒を回転蒸発器で６０℃において除去した。トルエン−メタノール−エチレンジアミンの３成分共沸蒸留によって、過剰のエチレンジアミンを除去した。最後にすべての残留するトルエンをメタノールとともに共沸蒸留した。すべてのメタノールを除去すると、３．Ｏｌｇの生成物（化合物＃３）がオレンジ色のガラス状固体として得られた。

実施例Ｉ次の反応式によって表わされる１、５ジエネレイシヨンのスターバーストポリマー（アニリン部分を含有する）の調製化合物　＃４アミン（化合物＃３）（２，７ｇ、３．６ミリモル）をメタノール（７ｍｌ）中に溶解し、そしてメタノール（１５ｍｌ）中のメチルアクリレート（３，８ｇ、４４ミリモル）の撹拌した溶液に周囲温度において１時間かけてゆっくり添加した。この溶液のわずかの加温が添加の間に観測された。この溶液を周囲温度で１６時間撹拌した。溶媒を回転蒸発器で４０℃において除去した。すべての溶媒および過剰のメチルアクリレートの除去後、エステル（化合物＃４）が４．５ｇの収量でオレンジ油として得られた。

実施例Ｊ次の反応式によって表わされる０、５ジエネにイションのスターバーストポリマー（アニリン部分を含有する）の調製化合物　＃５トリアミン（化合物＃５、この化合物の調製は実施例Ｃに示されている）ＣＯ− ４２ｇ、２．３ミリモル）をメタノール（１０ｍｌ）中に溶解し、そしてメタノール（ｌｏｍｌ）中のメチルアクリレート（１，９８ｇ。

２３ミリモル）に１時間かけて滴々添加した。この混合物を周囲温度で４８時間撹拌した。溶媒を４０°Ｃより高くない温度に維持した回転蒸発器で除去した。

過剰のメチルアクリレートを反復したメタノールとの共済蒸留によって除去した。エステル（化合物＃６）はオレンジ色油（１゜２４ｇ）として単離された。

実施例に次の反応式によって表わされる１ジエネレイシヨンのスターバーストポリマー（アニリン部分を含有する）の調製化合物　＃７エステル（化合物＃６）（１，２４ｇ、２．３ミリモル））をメタノール（５０ｍ１）　中に溶解し、そしてメタノール（１００ｍｌ）中のエチレンジアミン（７３，４ｇ、１．２２モル）に２時間かけて滴々添加した。

わずかの発熱が認められ、激しい撹拌を維持した。この溶液を周囲温度で７２時間撹拌したまま放置した。溶媒を回転蒸発器で６０°Ｃにおいて除去した。トルエン−メタノール−エチレンジアミンの３成分共沸蒸留するトルエンをメタノールとともに除去し、次いで真空ポンプで４８時間トルエンでポンピングすると、アミン（化合物＃’７）（１，８６ｇ）が黄色／オレンジ油として得られた。

実施例し次の反応式によって表わされる１、５ジエネレイシヨンのスターバーストポリマー（アニリン部分を含有する）の調製化合物　＃８アミン（化合物＃７）（１，４５ｇ、微量のメタノールが残留した）をメタノール（１００ｍｌ）中に溶解し、そしてメタノール（２０ｍｌ）中のメチルアクリレ−）（５，８０ｇ）の撹拌した溶液に１．５時間かけてゆっくり添加した。この溶液を室温で２４時間撹拌した。溶媒を除去し、次いでメタノールとの共沸蒸留を反復すると、すべての過剰のメチルアクリレートを除去できた。真空ポン１１４８時間ポンピングすると、エステル（化合物＃８）がオレンジ色油（：２．５８ｇ、１．８ミ！Ｊモル）として単離された。

実施例Ｍ４．５ジエネレイシヨンのデンドリマーの加水分解およびカルシウム塩の調製４．５ジエネレイシヨンのＰＡＭＡＭ　（エステル末端、ＮＨ，で開始された）（２，ｌ　１ｇ％　１０．９２ミリ当量）を２５ｍ１のメタノール中に溶解し、そしてこれに１０％のＮａＯＨ（４，３７ｍ１．１０．９２ミリ当量）（ｐＨ− １１，５〜１２）を添加した。室温で２４時間後、ｐＨは約９．５であった。さらに２０時間後、この溶液を回転蒸発し、５０ｍ１のトルエンを添加し、そして再び回転蒸発した。

得られる油を２５ｍ１のメタノール中に溶解し、そして７５ｍ１のジエチルエーテルを添加すると、白色ガムとして沈殿した。液体をデカンテーションし、そしてガムを回転蒸発すると、非常に微細な灰色の粉末が得られ、これをさらに乾燥すると、２．１６ｇの生成物（９８％の収率）が得られた。エステル基はＮＭＲおよび赤外分析で発見されなかった。

４．５ジエネレイシヨンのＰＡＭＡＭのナトリウム塩（エステル末端、ＮＨ，で開始された）をカルシウム塩の代わりに使用した。このナトリウム塩（１，０３ｇ）を１００ｍ１の水中に溶解し、そして中空繊維の透析チュウーブ（カットオフ−５０００）に３ｍ１／分で通過させた。チューブの外側は５％のＣａＣｌ２溶液中に浸漬した。次いで、この手順を反復した。

得られた溶液を再び透析し、この時は水に対してして透析し、次いでさらに２回反復した。

蒸発する０、６ｇの湿った固体が得られ、これをメタノール中に対してり（完全には可溶性でない）そして乾燥すると、０．４５ｇの灰色結晶が得られた。

Ｃ３，、Ｈ５ＢＯ，、、Ｎ、、Ｃａ２゜計算値　−１０，１０％のＣａ” 不織＝９５２６．３　計算値−〇−４４３２，Ｌ　Ｈ−６０１，８，０−２２５５，９理論値：Ｃ−４５，５、Ｈ−６，３２、Ｎ−１３，３８、Ｃａ−１０、ｌＯ実測値：Ｃ−４７，３、Ｈ−７，００、Ｎ−１３，５５、Ｃａ−８゜実施例Ｎ末端カルボキシレート基をもつデンドリマーの調製０．５ジエネレイシヨンのスターバーストポリアミドアミンを加水分解して、それらの末端メチルエステル基をカルボキシレートの転化した。

これにより、周辺上に分散した陰性の電荷をもつ、回転楕円形の分子が発生した。加水分解したデンドリマーは０．５ジエネレイシヨン（３カルボキシレート）ないし６．５ジエネレイシヨン（１９２カルボキシレート）の範囲であった。

生成物はＮａ”、Ｋ”、Ｃｓ＋またはＲｈ＋として発生させることができた。

実施例０Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４−アミノベンジルマロネートジメチルエステル４−アミノマロネートジメチルエステル（ｌ　１．６２ｇ、４９ミリモル）を、５０ｍ１の【−ブタノール：水（６０：４０）中に撹拌しながら溶解した。ジーＬ−ブトキシジカーボネート（１９，７９ｇ、９０ミリモル）を添加し、そしてこの反応混合物を一夜撹拌した。ブタノールを回転蒸発器で除去すると、水中の生成物の黄色懸濁液が得られた。塩化メチレン中に抽出し、乾燥（ＭｇＳ　Ｏ４）　シそして蒸発すると、黄色油（２１，５ｇ、ジ−ｔ−ブトキシジカーボネートで汚染されている）が得られた。２−プロパツール：水（７５：２５）から再結晶化すると、淡黄色結晶（１１−１ｇ、３３ミリモル、６７％）が得られた。

この１３ＣＮＭＨによって確証され、そして純度はＨＰＬＣ分析［スフエリソーブ（Ｓ　ｐｈｅｒｉｓｏｒｂ）　ＯＤ　Ｓ　−１，０，０５モルのＨ３Ｐ　０４　ｐＨ３：　ＣＨｓＣＮ　５５：４５］により検査した。この材料をそれ以上精製しないで使用した。

実施例ＰＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−６−（４−アミノベンジル）−１，４，８，ｌｌ −テトラアザ−５，７−ジオキソウンデカンＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−４− アミノベンジルマロネートジメチルエステル（８，８２ｇ、２５ミリモル）、実施例Ｏにおけるように調製した、を５０ｍ１のメタノール中に溶解した。この溶液を、新しく蒸留しＩ；エチレンジアミン（１８８ｇ、３．１３ミリモル）および２０ｍ１のメタノールの溶液、窒素雰囲気下に滴々（２時間）滴々添加した。

この溶液を２４時間撹拌した。エチレンジアミン／メタノール溶液を回転蒸発器で除去した。生成物をメタノール中に溶解し、そしてトルエンを添加した。溶媒を回転蒸発器で除去すると、素止酸物が白色固体（１０゜７０ｇ１エチレンジアミンで汚染されている）が白色固体として得られた。この試料を２つの試料に精製のために分割した。トルエンとともにエチレンジアミンを共沸蒸留除去し、シンプル中にスルホン化イオン交換ビーズを含むツクスレー抽出器を使用してエチレンジアミンを除去すると、生成物は部分的に分解して褐色油が得られｔ；。残留する生成物はトルエンから冷却すると白色固体として単離された（２．３ｇ、はぼ５０％）。メタノール中の１０％溶液をガスクロマトグラフィー（カラム、テナクス６０／８０）により分析すると、試料中にエチレンジアミンは検出順使用であった（＜０．１％）。第２分画をメタノール中に溶解して１０重量％の溶液を形成し、そしてエチレンジアミンから溶媒としてメタノールして逆浸透することによって精製した。［使用した膜はフイムテク（Ｆ　ｉｌｍｔｅａ）　Ｆ　Ｔ　−３０、アミコン（Ａｍｉｃｏｎ）　ＴＣＩ　Ｈの薄いチャンネルのセパレーター、エチレンジアミンはこの膜を横切る。］生成物は白色固体（２，７ｇ）として単離され、この中に検出可能な量のエチレジアミンはガスクロマトグラフィーによって発見できなかった。

１３ＣＮＭＨのデータおよびＨＰＬＣ分析（スフエリソーブ０ＤＳ−１，０，０５モルのＨ３Ｐ０．　ｐＨ３：ＣＨ３ＣＮ　５５：４５）は提案した構造と一致した。この生成物をそれ以上精製しないで使用した。

実施例ＱＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−６−（４−アミノベンジル）−１，４，８，ｌｌ −テトラアザ−５，７−シオキソウンデカンからの０．５ジエネレイシヨンのスターバーストデンドリマーの調製Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−６−（４−アミノベンジル）−１，４゜８．１１−テトラアザ−５，７−シオキソウンデカン（５，０ｇ、１３ミリモル）、実施例Ｐにおけるように調製しＩ；、を１００ｍ１のメタノール中に溶解しＩ；。メチルアクリレート（６，１２ｇ、６８ミリモル）を添加し、そしてこの溶液を周囲温度で７２時間撹拌した。この反応をＨＰＬＣ（スフエリソーブ０ＤＳ−１，アセトニトリル：０．０４モルの酢酸アンモニウム　６０：４０）によって監視して、所望生成物への転化を最適化した。この溶液を３０％の固体に濃縮し、そしてメチルアクリレートＡ　（３−Ｏｇ、３２ミリモル）を添加した。この反応混合物を周囲温度で、アルキル化生成物がＨＰＬＣによって検出できなくなるまで（２４時間）、撹拌した。溶媒を３０℃で回転蒸発によって除去し、そしてｌｍｍＨｇで２４時間ポンピングすると、生成物が黄色粘性油として得られた、収量７．８１ｇ、１３ＣＮＭＲデータは提案する構造と　。

一致した。生成物はそれ以上精製しないで使用した。

実施例ＲＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−６−（４−アミノベンジル）−１，４゜８．１１ −テトラアザ−５，７−シオキソウンデカンからのｌジェネレイションのスターバーストデンドリマーの調製０．５ジエネレイシヨンの生成物（実施例Ｑ）（７，７０ｇ、１０゜４５ミリモル）を７５ｍ１のメタノール中に溶解し、そしてエチレンジアミン（４００ｍｌ、　７．４１モル）およびメタノール（５０＋ｎｌ）の撹拌した溶液に２時間かけて滴々添加した。この反応混合物を周囲温度で４８時間撹拌した。エチレンジアミンおよびメタノールを回転蒸発によって除去すると、黄色油（１１，８ｇ、エチレンジアミンで汚染されている）が得られた・生成物を９０ｍ１のメタノール中に溶解し、そして逆浸透（フィルムチクＦＴ− ３０膜およびアミコンＴＣＩＲ薄いチャンネルのセパレーター、溶媒としてメタノール）によってエチレンジアミンから精製した。４８時間後、エチレンジアミンはガスクロマトグラフィー（カラム、テナクス６０／８０）によって検出できなかった。溶媒を回転蒸発器によって除去し、真空ラインで２４時間ポンピングすると、生成物は黄色ガラス状固体として得られた（６．７２ｇ）。ＨＰＬＣ（ＰＬＲＰ−Ｓカラム、アセトニトリル：０．０１５モルのＮａＯＨ，１０〜２０％の勾配、２０分）による分析および１３ＣＮＭＲ分析は、提案した構造と一致した。

実施例５Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−６−（４−アミノベンジル）−１，４゜８．１１ −テトラアザ−５，７−シオキソウンデカンからの１．５ジエネレイシヨンのスターバーストポリマーの調製ｌジェネレイションの生成物（実施例Ｒ）（２，１４ｇ、２５ミリモル）を１２．５ｍｌのメタノール中に溶解し、そして５ｍｌのメタノール中のエチレンジアミン（３，５ｇ、３９ミリモル）を添加した。この溶液を周囲温度で４８時間撹拌し、反応の進行をＨＰＬＣ（スフエリソーブ０ＤＳ−１１アセトニトリル：０．０４モルの酢酸アンモニウム　６０：４０）によって監視した。メチルアクリレートの第２アリコート（３゜５ｇ、３９ミリモル）を添加し、そしてこの反応混合物を周囲温度で７２時間撹拌した。溶媒を回転蒸発器で除去すると、生成物が黄色油（３゜９ｇ）として、真空ポンプによる一夜のボンピング後、得られた。この生成物をそれ以上精製しないで使用した。

実施例ＴＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−６−（４−アミノベンジル）−１，４゜８，１１ −テトラアザ−５，７−シオキソウンデカンからの２完全ジエネレイシヨンのスターバーストポリマーの調製１．５ジエネレイシヨンの生成物（実施例５）（３，９ｇ、２．５ミリモル）を５０ｍ１のメタノール中に溶解し、エチレンジアミン（６００ｇ１１０モル）およびメタノール（５０ｍｌ）の撹拌した溶液に２時間かけて滴々添加した。この溶液を周囲温度で窒素の雰囲気中で９時間撹拌した。エチレンジアミン／メタノールを回転蒸発器で除去すると、黄色のガラス状固体Ｃ４−４ｇ５エチレンジアミンで汚染されている）が得られた。この生成物の１０％の溶液をメタノール中でつくり、そしてエチレンジアミンがガスクロマトグラフィー（カラム、テナクス６０／８０）によって検出されなくなるまで、逆浸透（フィルムチクＦＴ−３０として使用した膜、アミコンＴＣＩＲ薄いチャンネルのセパレーター中）によってエチレンジアミンから精製した。溶媒を除去すると、生成物は黄色のガラス状固体（３，５２ｇ）として得られた。１３ｃ　ＮＭＲデータおよびＨＰＬＣ（ＰＬＲＰ−３，カラム、アセトニトリル：０．０１５ＮａＯＨ，１０〜２０％の勾配、２０分）は、提案した構造と一致した。

実施例Ｕ２ジエネレイシヨンのスターバーストとブロモ酢酸とのメチレンカルボキシレート末端スターバーストデンドリマーを製造する反応第２ジエネレイシヨンの生成物（実施例Ｔ）（０，２２ｇ、０．１３３ミリモル）ｗｏ１５ｍｌの脱イオン水中に溶解し、そして温度を４０．５°Ｃに平衡化した。ブロモ酢酸（０，４８ｇ、３．５ミリモル）および水酸化リチウム（０，１３ｇ、３．３ミリモル）を５ｍｌの脱イオン水中に溶解し、そして反応混合物に添加した。反応のｐＨは、ｐＨスタト（ｓｔａｔ）（０，ＩＮのＮａＯＨで滴定を使用して、４０．５℃で一夜注意して９に維持した。逆相ＨＰＬＣ（スフエリソーブ０ＤＳ−１、溶離剤０．０２５モルのＨｓＰＯ４［ＮａＯＨ］　ニアセトニトリル　８５：１５）の監視は、主として単一の成分の合成を確証した。

実施例Ｖインチオシアナト官能化第２ジエネレイシヨンのメチレン−カルボキシレート末端スターバーストデンドリマーの調製５ｍｌの２．８ミリモルの第２ジエネレイシヨンのメチレンカルボキシレート末端スターバーストデンドリマ−（実施例Ｕ）を２０ｍ１の水で希釈し、そしてｐＨを濃塩酸で０．５に調節した。室温において１時間後、この混合物をＨＰＬＣにより分析して、ブトキシジカルボニル基の除去を評価し、次いで５０％の水酸化ナトリウムで処理してｐＨを７にした。

ｐＨスタト（ｓｔａｔ）　（０、１ＮのＮａＯＨによう滴定）を使用してｐＨ７に維持し、そして２２５μｌのチオホスゲンを添加した。室温において１５分後、この混合物のｐＨをＩＮのＭＣＩで５に調節した。この混合物をクロロホルム（２０ｍｌｘ２）で洗浄し、次いで減圧下に回転蒸発器で濃縮した。０．９１ｇの回収された残留物はインチオシアネートと塩類との混合物である。

実施例Ｗ第２ジエネレイシヨンのスターバーストポリエチレンイミン−メタンスルホンアミドの調製５０ｍ１のエタノール中の１２５ｇのＮ−メタンスルホニルアジリジンの溶液に、２５．０ｇのトリス（２−アミノエチル）アミンを添加した。

この溶液を室温で４日間撹拌した。水を反応混合物に必要に応じて添加して、溶液の均質性を維持した。溶媒を真空蒸留により除去すると、第２ジエネレイシヨンのスターバーストＰＥｌ−メタンスルホンアミドが黄色ガラス（１６Ｌｇ）として得られｔ；。

実施例Ｘ第２ジエネレイシヨンのスターバーストポリエチレンイミンを形成するｔ；めのメタンスルホンアミドの切離し２０ｍ１の３８％のＭＣＩ中の５．０ｇの第２ジエネレイシヨンのスターバーストＰＥｌ−メタンスルホンアミド、実施例Ｗから、の溶液をガラスアンプル中に密閉した。このアンプルを１６０℃に１６時間加熱し、次いで水浴中で冷却し、そして開いた。溶媒を真空蒸発によって除去し、そして残留物を水中に溶解した。この溶液のｐＨをＩＯより大またはｌＯに５０％のＮａＯＨで調節した後、溶媒を真空蒸留によって除去した。

トルエン（１５０ｍｌ）を残留物に添加し、そしてこの混合物をディー−スタークトラップの下に、水がもはや除去されなくなるまで、還流加熱した。この溶液をろ過して塩類を除去し、モしてろ液を真空除去すると、１．９ｇの第２ジエネレイシコンのスターバーストＰＥＩが黄色油として得られた。

実施例Ｙ第３ジエネレイシヨンのスターバーストポリエチレンイミン−メタンスルホンアミドの調製１００ｍ１のエタノール中の１０．１ｇのスターバーストＰＥ　Ｉ、実施例Ｘから、の溶液に、３６−６ｇのＮ−メタンスルホニルアジリジンを添加した。この溶液を室温で１週間撹拌した。水を必要に応じて添加して、この溶液の均一性を維持した。溶媒を真空蒸留によって除去すると、第３ジエネレイシヨンのスターバーストＰＥｌ−メタンスルホンアミドが黄色ガラス（４５，３ｇ）として得られた。

実施例Ｚ第３ジエ不レイシヨンのスターバーストポリエチレンイミンを形成するためのメタンスルホンアミドの切離し第３ジエ不レイシヨンのスターバーストＰＥｌ−メタンスルホンアミ１’　（５，０ｇ）　、　実施９１１Ｙから、メタンスルホンアミド基を、実施例Ｘにおける第２ジエネレイシヨンの物質について記載しｔ；のと同一の手順によって除去して、２−３ｇの第３ジエネレイシヨンのスターバーストＰＥＩを黄色油として得られｔ；。

実施例ＡＡ第３ジエネレイシヨンのスターバーストポリエチレンイミンと４−フルオロ−ニトロベンゼンとの反応第３ジエネレイシヨンのスターバーストポリエチレンイミ（実施例Ｚ）（１−０６ｇＳ　１．２ミリモル）を１２ｍ１の無水エタノール中に溶解した。

（４−フルオロ）−二トロベンゼン（１２０μ＋、１．２ミリモル）全添加し、そして反応混合物を一夜還流加熱した。溶媒を回転蒸発器で除去し、そして輝いた黄色を水中に溶解した。水溶液をクロロホルムで洗浄して、未反応の（４−フルオロ）−二トロベンゼンを除去した。水を除去すると、生成物が深黄色油（０，８０ｇ）として得られた。”ＣＮＭＲスペクトルは提案した構造と一致した。

（統計学的分布の性質を蒸留する試みをしなかった。）生成物はそれ以上精製しないで使用した。

実施例ＢＢ第３ジエネレイシヨンのスターバーストポリエチレンイミンのニトロフェニル誘導体とグリコロニトリルとの反応第３ジエネレイシヨンのスターバーストポリエチレンイミンのニトロフェニル誘導体（ＡＡ）を、２０ｍ１の脱イオン水中に溶解した。水酸化ナトリウム（２，８０ｇ、５０％ｗ／ｗ）を撹拌した溶液に添加し、そしてこの溶液を窒素でパージし、水酸化ナトリウムのスクラバーを通して排出した。グリコロニトリル（２，８５ｍ１の７０％の水溶液）を周囲温度において添加した。黄色の沈殿は数分後に形成することが観察された。

２時間後、温度をゆっくり還流まで上昇させ、そして溶液を窒素でパージしながら還流温度に２４時間維持した。水を除去すると、生成物はクリコール酸および水酸化ナトリウムで汚染された黄色固体として得られた。”３ＣＮＭＲスペクトルは提案した構造と一致していた。生成物は精製しないで使用した。

実施例ＣＣニトロフェニル誘導体のアミノフェニルメチレンカルボキシレート末端第３ジエネレイシヨンのスターバーストポリエチレンイミンへの加水分解実施例ＢＢからの黄色固体（１，７０ｇ）をｌｏｍｌの脱イオン水中に溶解し、生じた溶液のｐＨはほぼ１１であった。木炭担持パラジウム（２００ｍｇの５％Ｐｄ／Ｃ）を、ガラス製パール（Ｐ　ａｒｒ）びん中の反応混合物に添加した。

反応混合物を４０ｐｓｉ　（２７５ｋＰａ）の水素圧下に置き、そしてパール水素化装置内で周囲温度において６時間振盪した。次いで、この反応混合物を０．５ｍのミリボア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）　ｙイルターでろ過してＰｄ／Ｃを除去し、溶媒を真空除去し、そしてバイオゲル（Ｂ　ｉｏｇｅｌ）Ｐ２樹脂（２５ｇの水膨潤）でゲルろ過した。ＨＣＩで酸性化すると、オレンジ褐色の溶液が生成し、これを窒素で一夜パージした。溶媒を真空除去すると、生成物が塩酸塩として得られ、これは淡褐色の固体（３゜９８　ｇｘ　Ｎ　ａ　ＣＩおよびグリコール酸で汚染されており、生成物の最大の理論量は１．１５ｇであつｔ；）が得られた。生成物はそれ以上精製しないで使用した。

実施例ＤＤ４−イソチオシアナトフェニルメチレンカルボキシレート末端第３ジエネレイシヨンのスターバーストポリエチレンイミンの調製実施例ＣＣかもの生成物（３，９８ｇ）を１５ｍ１の水中に溶解し、そしてこの溶液のアリコート（２，５ｍ１）を１０ｍ１の水で希釈した。この溶液のｐＨを水酸化ナトリウムで７に調節した。ｐＨスタト（ＩＮのＮａＯＨで滴定）を使用してｐＨを維持し、そして２００μｌのチオホスゲンを添加した。１０分後、この混合物のｐＨを塩酸で４に調節した。水を回転蒸発器で減圧下に除去した（少量のｎ−ブタノールを添加して発泡を防止した）。残留物を塩化メチレンで洗浄し、次いで乾燥した。粗生成物（０，９５ｇ）すなわちインチオシアネート（０，１４ｇ）と塩類との混合物はそれ以上精製しないで使用した。

実施例ＥＥメチレンカルボキシレート末端第２ジエネレイシヨンのスターバーストポリアミドアミンの調製第２ジエネレイシヨンのスターバーストポリアミドアミン（２，７１ｇ。

２．６ミリモル）およびブロモ酢酸（４，３９ｇ、３１．５ミリモル）を３・Ｑｍｌの脱イオン水中に溶解し、そしてｐＨを５ＮのＮａＯＨ１？ｐＨスタトを使用して９．７に調節した。この反応をこのｐＨに３０分刊維持し、そして温度を６０℃にゆっくり上昇させ、６０°Ｃに３時間一定のｐＨにおいて維持した。ｐＨは１Ｏ０３に上昇し、そしてこの反応混合物をｐＨスタトの制御下に周囲温度において一夜維持した。反応混合物をさらに４時間還流させた後処理した。溶媒を除去し、そして最後の微量の水をメタノールとともに共沸蒸留すると、生成物が淡黄色粉末（８、７ｇ、臭化ナトリウムで汚染されている）として得られた。

”３ＣＮＭＲスペクトルは提案した構造と一致していた（多少のモノアルキル化の結果として、少量の欠陥物質のために多少の汚染を伴っていた）。

実施例ＦＦメチレンカルボキシレート末端第２ジエネレイシヨンのスターバーストポリエチレンイミンの調製（アンモニアから開始した）第２ジエ不レイシヨンのスターバーストポリエチレンイミン（２，７３ｇ、６．７ミリモル）、実施例Ｘから、およびブロモ酢酸（１１，２９ｇ。

８１ミリモル）を３０ｍ１の脱イオン水中に溶解した。ｐＨをＰＨ９，５にゆっくり上昇させ、温度を３０℃以下に維持した。温度を５５℃にゆっくり上昇させ、そして反応のｐＨをｐＨスタト（５ＮのＮａＯＨで滴定）の助けにより９．５に６時間維持した。ｐＨを１Ｏ９２に上昇させ、そのｐＨに一夜維持した。溶媒を回転蒸発器で除去し、そして最後の微量の水をメタノールを使用して共沸蒸留すると、生成物は黄色粉末（１７゜９ｇｓ臭化ナトリウムで汚染されていた）として得られた。”３ＣＮＭＲスペクトルは提案した構造と一致していた（多少のモノアルキル化の結果として、少量の欠陥物質のために多少の汚染を伴っていた）。

実施例ＧＧ３．５．４．５．５．５および６．５ジエネレイシヨンのスターバー　ス）ＰＡＭＡＭの調製２．４６ｇの３ジエネレイシヨンのスターバーストＰＡＭＡＭの１０重量％のメタノール溶液に、２．３２ｇのメチルアクリレートを添加した。

この混合物を室温に６４時間放置した。溶媒および過剰のメチルアクリレートを除去した後、４．８２ｇの生成物が回収された（理論量の１０５％）。

より高いｌ／２ジエネレイシヨンのスターバーストＰＡＭＡＭの調製：ジェネレイション４．５．５．５および６．５は、記載するように、反応成分の濃度、反応成分のモル比または反応時間を有意に変化させないで調製した。

実施例ＨＨ４，５および６ジエネレイシヨンのスターバーストＰＡＭＡＭのＲ製２０００ｇの前もって蒸留したエチレンジアミンに、５．４ｇの４．５ジエネレイシヨンのスターバーストＰＡＭＡＭをメタノール中の１５重量％の溶液として添加した。

これを室温において４８時間放置した。メタノールおよび過剰のエチレンジアミンの大部分を回転蒸発器によって水の吸引減圧下に６０°Ｃ以下の温度で除去した。回収された生成物の合計重量は８．０７ｇであった。ガスクロマトグラフィーは、生成物が、なお、この時点で３４重量％のエチレンジアミンを含有することを示した。この生成物の５．９４ｇを１００ｍ１のメタノール中に溶解し、そして限外ろ過して残留エチレンジアミンを除去した。ろ過はアミコンＴＣＩＨの薄いチャンネル循環セパレーター、アミコンＹＭ２膜を装備する、を使用して実施した。インライン圧力解放弁を使用して、膜を横切って５５ｐｓｉｇ　（３８０ｋＰａ）の圧力を維持した。溶媒をもっばら膜に通して強制的に流すことによって、１００ｍ１をまず１５ｍ１に濃縮した。この最初の濃縮後、流れを体積レチンティト（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）再循環モードに１８時間変換した。この時間後、６０ｍ１のメタノールを膜に上に通して、このモジュールおよび関連するチューブになお存在する生成物を回収した。生成物から溶媒をストリッピングし、そして２．３５ｇの５ジエネレイシヨンのスターバーストＰＡＭＡＭを回収した。ガスクロマトグラフィーによる分析は、０．３％のエチレンジアミンが生成物中に残留することを示した。

ジェネレイション４および６の調製は、エチレンジアミン対出発物質の重量比をわずかに変更して、上のようにして実施した。第４ジエネレイシヨンを調製するため、この比は２００：１であり、そして第６ジエネレイシヨンを調製するため、この比は７３０：ｌであった。

実施例１２−（アセトキシ）安息香酸（アスピリン）のスターバーストデンドリマー中への組込み「プローブ分子」がミセルの内部に含まれているかどうかを確認するだめの広く受入れられている方法は、非ミセル化媒質中の対ミセル化媒質中のその炭素−１３−スピン格子緩和時間（Ｔ１）を比較することである。ミセル化媒質中のＴ、の実質的な減少は、ミセル中に「プローブ分子」が含まれていることを示す。スターバーストデンドリマーはミセルの「共有的に固定された」類似体であるので、このＴ、緩和時間の技術を使用して、種々の製薬学的タイプの分子がスターバーストポリアミドアミンとアソシエーションする度合／程度を確認した。以下の実施例において、（アセトキシ）安息香酸（Ｉ）（アスピリン）についてのＴ１値は、溶媒（Ｃ’ＤＣｈ）中で決定し、次いで種々の［Ｉ：デンドリマ−］のモル比においてＣＤＣｌ、中のＴ１値と比較した。

アスピリン（Ｉ）を種々のスターバーストポリアミドアミンデンドリマー中にジェネレイションの関数として含めること。

種々の０．５デンドリマ−（エステル末端、ＮＨ，から開始した）スターバーストポリアミドアミンデンドリマー（Ｇ−０，５→５．５）を、ＣＤＣ１，中において２−（アセチルオキシ）安息香酸と一緒にして、酸：第三アミンの比−１，０を得た。２−（アセチルオキシ）安息香酸についてのＴ１値対添加したスターバーストデンドリマーのプロット（参照第４図ここで・はＣ−４を表わし、■はｃ−６を表わし、ＯはＣ−５を表わす）は、Ｔ、が２−（アセチルオキシ）安息香酸において炭素４゜５および６について２．５→５．５のジェネレイション範囲にわたって最小に到達することを示す。これはデンドリマー（Ｇ−２，５−５，５）において２−（アセチルオキシ）安息香酸のアソシエーションを立証し、そしてさらにポリアミドアミンデンドリマー（Ｇ−２，５またはそれより大）が坦体分子として機能するこを確証する。

実施例２スターバーストデンドリマー−ＰＡＭＡＭからのプソイドエフェドリンの解放プソイドエフェドリン（０，８３ｍｇ／ｍｌ）およびスターバーストポリアミドアミンデンドリ−ｑ−ｒｌ、ｏｍｇ／ｍｌ；Ｇ−６，５；末端基（Ｚ）−１９２（メチルエステル）］を脱脱イオン蒸留水に溶解し、モして共与体相のｐＨを水酸化ナトリウム溶液で９．５に調節し、そして室温において約１２時間貯蔵した。プソイドエフェドリン単独の溶液を同一の方法で地理した（対照）。最初の実験後、薬物デンドリマー溶液を４０°Ｃで８時間貯蔵し、そして動的透析を実施した。使用した透析膜はスペクトル分離セル（半分のセル体積５および１０ｍｌ、セル寸法二両者のセルについて直径３８ｍｍおよび、それぞれ、５および１０ｍ１のセルについてｌＯおよび２０ｍｍのセル深さ）中のスペクトラ／ポル（Ｐａｒ）　？、ＭＷＣｏ　１．０００　２８．６ｍｍ直径であツタ。

試料をＨＰＬＣによって分析し、次のように、プソイドエフェドリンについて展開した：カラム：　ウポンダパク（ｕＢｏｎｄａｐａｋ）　Ｃ−１８移動相：ｐＨ３，２のリン酸塩緩衝液＋アセトニトリル（８０：２０）流速：　０．３ｍ１７分検　出：　ＵＶ、２１０ｎｍ保持時間：　１３．３分透析膜を脱イオン水で洗浄し、そして使用前受容体相中で少なくとも１２時間ソーキングして保持した。この透析膜を共与体および受容体の区画（ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）の間に配置し、区画を小さい磁気回転棒で撹拌した。既知体積の共与体溶液および受容体溶液をそれぞれの区画の中に導入し、そしてプソイドエフェドリンの受容体区画への移送を時間の関数として追跡した。シンク（ｓｉｎｋ）条件を維持するために、全受容体用を周期的に（３０分毎に）および新鮮な受容体用と置換した。プソイドエフェドリンの量を試料採取した受容体用においてアッセイした。実験は室温（２２℃）において実施した。受容体用は淡水の（ｐｌａｉｎ）脱イオン蒸留水であった。

動的分析の結果を第５図に示す。第５図において、・はプソイドエフェドリンのみ（対照）を表わし、　はプソイドエフェドリン＋デンドリマーを表わし、Ｏは透析前８時間４０℃におけるプソイドエフェドリン士デンドリマーを表わす。明らかなように、Ｇ−６，５のデンドリマーの存在下に、共与体区画において、プソイドエフェドリンの透析速度は減少する。共与体溶液を４０°Ｃで貯蔵すると、透析速度はさらに減少するように思われる。

実験をより低い濃度で反復した（薬物分子末端基の数はの比は同一に保持した）。Ｇ＝６．５ジエ不レイシヨン、１２０μＩ／ｍｌのプソイドエフェドリン、ｌ　ＯＯｉｉ　１／ｍｌの（１２２，ｕｌ／ｍｌの塩）。

このより低い濃度におけるプソイドエフェドリン（単独）の動的透析は、より高い濃度におけるそれにほとんど同一であった。第６図は、この実験の結果を要約し、・はプソイドエフェドリンのみ（対照）を表わし、モしてＯ（まプソイドエフェドリン士デンドリマーを表わす。

実施例３実施例２の手順を反復したが、ただし次の変更を用いｔ；。

受容体用：　ｐＨ７，４のリン酸塩緩衝液許与体相：　ｐＨ７，４のリン酸塩緩衝液十次の比の薬物およびデンドリマー：１、Ｇ６．５　：薬物：：１：１９２２、Ｇ５．５　：薬物：：１：　９６３、Ｇ４．５　：薬物：：ｌ：　４８４、Ｇ６．５Ｈ：薬物：：ｌ：１９２５．　Ｇ５．５Ｈ：薬物：：ｌ：　９６６、Ｇ４．５Ｈ：薬物：：ｌ：　４８上の共与体相の組成物＋プソイドエフェドリン単独を動的透析にかけた。デンドリマーのジェネレイションの後に文字ｒｌ（Ｊは、加水分解したデンドリマーを意味する。加水分解は実施例ＭおよびＮに記載する手順によって達成した。

これらの実験の結果は第７図に要約してあり、ここで共与体区画および受容体区画はｐＨ７，５のリン酸塩緩衝液を含有しＩ；。プソイドエフェドリン単独（Ｐ）について、これらの実験の平均曲線をプロットしく実線で示す）、他の実験からの１つの典型的な試験を示す。第７図において、次の記号は示したデンドリマーのデンドリマーを表わす。

表ＩＩＩ記号　デンドリマーのデンドリマープソイドエフェドリンは、ｐＨ７，４においてデンドリマー（加水分解されていない）とアソシエーションしないように思われる。末端の官能基をカルボキシレートの形態に加水分解すると、透析速度に劇的な結果が起こる（減少）。ジェネレイションの数は透析速度に影響を及ぼさないように思われる。

実施例４サリチル酸とＰＡＭＡＭスターバーストデンドリマーとの相互作用の研究この実施例は、サリチル酸とＰＡＭＡＭスターバーストデンドリマーとの相互作用の特徴を評価した。これらのデンドリマーはアンモニア開始コアとＮ−（２− アミノエチル）アクリルアミドから誘導された反復単位から成っていた。完全（ｆｕｌｌ）　（アミン末端官能）ジエネレイションのポリマーおよび半分（エステル末端基）ジエネレイションポリマーの両者を、この研究に含めた。この実験において使用したサリチル酸対スターバーストデンドリマーの比は、完全ジエネレイションのポリマーについてほぼｌサリチル酸分子対１末端アミン官能基を生じた。半分ジエネレイションのポリマーの研究において、より高い分子量のポリマーについて変更を行なって同一の比を用いた。

実験は室温において平衡の静止セル透析方法に従い実施した。スペクトラポル（ＳｐｅｃｔｒａＰｏｒ）　６膜（分子量のカットオフ−１０００）によって分離したスペクトル静止透析セル（半分のセルの体積、１０ｍ１）を、すべての実験において使用した。サリチル酸の移送は、適当なセル区画からのアリコートを取り出すことによって時間の関数として監視し、モしてＨＰＬＣ分析により、２９６ｎｍにおいてＵＶ検出器を使用してアッセイした［ボンヅパク（Ｂｏｎｄｕｐａｋ）　Ｃ−１８カラム、アセトニトリル１０．１モルのリン酸塩緩衝液（ｐＨ３，２）の移動相を２０：８０（ｖ／ｖ）の比で溶離し、３０ｍ１／時間の流速に設定した］。

１ｍｇ／ｍｌのサリチル酸および２　、５　ｍｇ／＋ａｌのスターバーストポリマー（ジエネレイションー４．０）を含有し、ＨＣ１溶液でｐＨ６，６５および５．０の調節した溶液の１０ｍ１を、透析セルの共与体区画に入れ、そして等体積の精製したウェルを同−ｐＨに調節して受容体区画に入れた。

受容体区画中へのサリチル酸の移送を監視した。結果を第８図に記載する。第８図において、遊離酸は・で表わされ、酸中ジエネレイション４゜０のデンドリマー、ｐＨ６−６５、は○によって表わされ、そして酸＋ジエネレイシジン４．０のデンドリマー、ｐＨ５−００、は口で表わされている。

ｐＨ６におけるポリマー上のアミン基のイオン化％は低いため、サリチル酸とのより大きい相互作用の程度がｐＨ５において期待することができ、より低いｐＨにおいて移送される化合物はより少ないであろう。

第８図に記載する結果が示すように、サリチル酸の対照の研究に比較して、両者のｐＨにおけるポリマーの存在下に移送されるサリチル酸の百分率は非常に低い。また、より多くにサリチル酸は、予測されるように、ｐＨ５，０におけるよりもｐＨ６，６５において移送されることが観察される。データは、スターバーストポリマーとサリチル酸との相互作用はｐＨによってコントロールできることを立証している。ポリマーの存在下のサリチル酸のレベルは対照研究において観測されたほぼ１２時間の平衡点を過ぎて上昇しつづけるので、持続した放出の特徴が、また、このデータによって説明される。

サリチル酸とスターバーストポリマー（ｃ−４，０）との相互作用の特徴をさらに研究するために、実験をｐＨ８，８において計画した。この研究の計画は、サリチル酸溶液（１ｍｇ／ｍｌ）　、ｐＨ８，０に調節した、のみを共与体区画に入れ、そしてポリマー溶液（２、５ｍｇ／ｍ＋）を受容体区画に入れたことにおいて、前の実験と異なった。共与体区画からのサリチル酸の損失を、前述のように監視した。この実験の結果を第９図に記載する。第９図において、遊離酸は− ・−で表わし、そして酸＋ジェネレイシジン４．０のデンドリマー、ｐＨ８，０、は−−Δ−一で表わされている。

第９図に示すように、受容体区画中のサリチル酸と受容体区画中のスターバーストポリマーとの平衡の特徴はサリチル酸の対照の研究と異なる。ｐＨ８における分子のイオン化特性に基づ、いて、はぼ６〜７％の相互作用が期待される。観測された相互作用の程度は４〜５％程度であることが示される。観測されるより低いアソシエーションは、実験の変動性のため、あるいはｌより低いイオン定数のためであろう。

この実験は、この系の連続相からのポリマーによる遊離サリチル酸の吸収または除去を示す。このタイプの作用は、分子の反応性の抑制を生ずることがあり、ポリマーに関連するキレート化のタイプの性質の可能性を示唆している。

エステル末端官能基を有する半分のジェネレイションのスターバーストポリマー（Ｇ−４，５）とのｐＨ６，６５におけるサリチル酸の相互作用の特徴を評価した。サリチル酸（ｌ　ｍｇ／ｍｌ）をスターパーストポリマーＧ４．５）３．６ｍｇ／ｍｌとｐＨ６，６５において一緒にした。１０ｍ１のこの溶液を共与体区画中に入れ、モして共与体区画からの移送を前述のように監視した。結果を第１０図に記載する。第１Ｏ図において、遊離酸は−・−で表わされ、そして酸＋ポリマーは一一〇−一で表わされている。

これらの実験の条件下に、第三アミン基はｐＨ６，６５においてイオン化しないので、電荷の相互作用が起こることは予測されない。第１０図に示すように、ポリマー（Ｇ＝４．５）の存在下のサリチル酸の損失は、透析の最初の１０時間の間、サリチル酸の対照の研究のそれと事実上同一である。

この実施例において提供されたデータから、次の観察がなされる＝（１）　完全ジエネレイションのＰＡＭＡＭスターバーストポリマーは、・サリチル酸の坦体として機能する。

（２）　完全ジェネレイションのＰＡＭＡＭスターバーストポリマーは、サリチル酸について持続した解放官能性を有する。

（３）　完全ジェネレイションのＰＡＭＡＭスターバーストポリマーある。

実施例５ナトリウムグロピオネート末端第６ジエネレイシヨンのスターバーストポリアミドアミンによる鉄の多重キレート化の立証ナトリウムプロピオネート末端第６ジエネレイシヨンボリアミドアミン（アンモニアから開始したＸ９７．１ｍｇ、２．４５モル）を、１．５ｍｌの脱イオン水中に溶解した。０．５ｍｌの０．５ＮのＭＣＩを添加し、て、ｐＨを６．３に減少した。塩化第二鉄を（０，５ｍｌのＯ，１，２モルの溶液、０．０５１ミリモル）を添加すると、淡褐色のゼラチン状沈殿を生成した。６０℃に０．５時間加熱すると、ゼラチン状沈殿は可溶性となり、均質なオレンジ色の溶液が形成した。この溶液をバイオケル（Ｂ　ｉｏｇｅｌ）Ｐ２アクルアミドゲル（１０ｇ、２回）でろ過し、オレンジ色帯を単離した（ハロゲン化物を含有しない）。溶媒を真空除去すると、生成物はオレンジ色フィルム（３０ｍｇ）として得られた。分析はスターバーストデンドリマーの１モルにつきほぼ２０モルの第二鉄イオンのキレート化これらの結果は、スターバーストデンドリマーの１モル当り２０±２モルの第二鉄イオンのキレート化を確証する。

実施例６スターバーストポリマー当り１０ジウム原子より多くを含有する生成物の調製２．５ジエ不レイシヨンのＰＡＭＡＭ　（エステル末端、ＮＨ，から開始した）（０，１８ｇ、０．０８７ミリモル）およびＲｈＣｌ５　・３　ＨｚＯ（０。

中で混合し、そして７０°Ｃに４時間加熱した。深紅色に変わり、そしてロジウムの大部分は吸収された。未反応のロジウムをろ過によって除去し、そして溶媒を回転蒸発器で除去した。形成した油はクロロホルムに可溶性であった。これをウェルで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ＜）した後、溶媒を除去すると、赤色油（０，１８ｇ）が得られた。ＮＭＲスペクトルをＣＤＣｌ５中で記録し、キレート化スターバーストと非キレート化スターバーストとの間にほんのわずかの差が認められた。このＣＤＣｌ５の一部をエタノールで希釈し、次いでＮａＢＨａを添加すると、ロジウムの沈殿が生じた。ＲｈＣｌ、・３Ｈ２０はクロロホルム中およびクロロホルムのスターバースト溶液中に不溶性であり、こうしてキレート化が確認される。

実施例７スターバーストポリマーに対してキレート化したＰｄを含有する生成物の調製３．５ジエネレイシヨンのＰＡＭＡＭ　（エステル末端、ＮＨ３から開始した）（１，１ｇ、０．２４ミリモル）を、撹拌しなからアセトニトリル（５０ｍｌ）中に溶解した。塩化パラジウム（０，２４ｇ１１．４ミリモル）を添加し、そしてこの溶液を７０〜７５℃（水浴）に−夜加熱した。

ＰｄＣ１□はスターバースト中に吸収された。溶媒を除去した後、ＣＤＣ１，中のＮＭＲは、キレート化が起こったことを確証した。ＣＤＣＩ　、溶液をエタノールで希釈し、モしてＮａＢＨ，を添加すると、パラジウムが沈殿した。キレート化生成物（１，２３ｇ）は褐色油として単離された。

実施例８酢酸イツトリウムからのトランスキレート化（ｔｒａｎｓ　ｃｈｅｌ　ａｔｉｏｎ）によるメチレンカルボキシレート末端第２ジエネレイシヨンのスターバーストポリエチレンイミンによる、イツトリウムの多重キレート化の立証スターバーストポリエチレンイミンメチレンカルボキシレート末端物質（０，４６ｇ、５２．５％活性、残部臭化ナトリウム、０．１８ミリモルの活性スターバーストデンドリマー）、実施例ＦＦから、を４．５ｍｌの酸化シュウチリウム中に溶解した。生じたｐＨは１１．５〜１２であった。

酢酸イツトリウムの溶液は、塩化イツトリウム（０，１５ｇ、０．５ミリモル）および酢酸ナトリウム（０，４１ｇ、０．５ミリモル）を１．５ｍｌの酸化シュウチリウム中に溶解することによって調製した（デンドリマーの１モルにつき２．９モルのイツトリウム）。酢酸イツトリウムの０．５ｍｌのアリコートをデンドリマー溶液に添加し、そして１３３ＣＮＭＲスペクトルを７５．５ＭＨｚにおいて記録した。

酢酸イツトリウムの”３ＣＮＭＲスペクトルは、２つの共鳴、カルボキシル炭素について１８４．７ｐｐｍおよびメチル炭素について２３．７ｐｐｍを示し、これに比較して酢酸ナトリウムついて１８２．１および２４゜１　ｐｐｍ８よび酢酸について１７７．７村よび２０．７ｐｐｍを示す［サトラー（Ｓａｄｔｌｅｒ）　”３　ＣＮＭＲ標準スペクトラ］。これらのバンドの位置を監視すると、スターバーストデンドリマーとのキレート化の程度が示される。キレート化を指示するスターバーストデンドリマーについての最も有益なシグナルはα−ＣＨｘＣキレート化に酸化するメチレンカルボキシレート基の）であり、これはキレート化しないデンドリマーにおいて５８．４ｐｐｍに現われ、そしてキレート化したデンドリマーにおいて６３．８に現われる。イツトリウムとキレート化すると、時間σ−ＣＨ。

のスピン格子緩和時間は、期待するように、０．２４±０．０１秒から０゜１４ ±０．０１秒に短縮し、キレート化を指示する。

０．５ｍｌの酢酸イツトリウム溶液をスターバーストデンドリマーに添加した後、すべてのイツトリウムはデンドリマーによってキレート化されるように思われ、酢酸ナトリウムのそれである酢酸イツトリウムのシグナルによって確証される。同一の観測は、酢酸イツトリウム溶液の第２の０．５ｍｌのアリコートの添加によって認められた。酢酸イツトリウムの第３のアリコートを添加すると、イツトリウムのすべてはスターバーストのキレートとして吸収されることが観測されず、アセテートカルボキシル共鳴が１ｌ８３−８ｐｐにシフトすることが観測され、イツトリウムの一部が酢酸塩とアソシエーションすることが示された。デンドリマー上のキレート化−ＣＨ，基の積分した面積は増加し、添加したイツトリウムの第３モル当量の一部が事実デンドリマーとキレート化したことが示された。この結果が示すように、デンドリマーはデンドリマー分子の１つにつき２〜３個のイツトリウムイオンとキレート化することができる。

実施例９酢酸イツトリウムからのトランスキレート化（ｔｒａｎｓ　ｃｈｅｌ　ａｔｉｏｎ）によるメチレンカルボキシレート末端第２ジエネレイシヨンのスターバーストポリアミドアミンによる、イツトリウムの多重キレート化の立証実施例８において使用したのと同一の実験方法を、この研究に使用した。スターバーストポリアミドアミンメチレンカルボキシレート末端物質（０，４０ｇ、６２．５％活性、残部臭化ナトリウム、０．１２ミリモル）を、４〜５ｍｌの酸化シュウチリウム中に溶解した。生ずるｐＨ１１，５−１２であり、これを実験前に６ＮのＨＣＩで９．４に低下させた。酢酸イツトリウムの溶液は、塩化イツトリウム（０，１１２５ｇ、　０．３７ミリモル）および酢酸ナトリウム（０，０９１５ｇ、１．１ミリモル）を１．５ｍｌの酸化シュウチリウム中に溶解することによって調製し、こうして各０゜５ｍｌの溶液は１モル当量の金属を含有した。

最初の２モル当量の添加した酢酸イツトリウムを、スターバーストポリアミドアミンで完全にキレート化した。第３モル当量のイツトリウムを添加したとき、生成物が沈殿し、そしてそれままではＮＭＲのデータを得ることができなかった。

スターバーストデンドリマーによるキレート化について最良の有益な情報を与えるシグナルは、キレート化する窒素に隣接する２つの炭素のものであった。キレート化しないデンドリマーにおけるこれらの炭素の化学的シフトは、ａ−ＣＨｚについて５９．ｌｐｐｍ５および主鎖の最初のメチレン炭素について５３．７ｐｐｍにおいて起こった。キレート化すると、これらの２つの共鳴は、それぞれ、６０゜８および５５．ｌｐｐｍにダウンフィールドにシフトすることが観測された。

トランスキレート化は、デンドリマー分子につき２つの金属イオンが容易にキレート化されうることを示すが、第３モル当量のある未知の分画がキレート化すると、生成物は溶液から沈殿する。

実施例ＩＯメチレンカルボキシレート末端第２ジエネレイシヨンのスターバーストポリエチレンイミンによる”Ｙの多重キレート化の立証塩化イツトリウムの標準の溶液（３Ｘ１０−”モル、坦体を添加しない”Ｙを加えた）およびメチレンカルボキシレート末端第２ジエネレイシヨンのスターバーストポリエチレンイミンの標準の溶液（６ＸｌＯ−”モル）を調製した。これらをＨＥＰＥＳ緩衝液中で種々の金属ニスターバース−により、セファデックス（Ｓ　ｅｐｈａｄｅｘ）　Ｇ　５０イオン交換ビーズを使用し、１０％のＮａＣ１：ＮＨａＯＨ１４：　ｌ−ｐＨＩ　Ｏｌで溶離することによって決定した。錯化しない金属はこのカラム上に除去され、錯化した金属は溶離する。収率は、ウェルカウンター（ｗｅｌｌ　ｃｏｕｎｔｅｒ）使用して、溶離された放射能をカラム上のそれと比較することによって得た。

表　Ｖ２．５ジエネレイシヨンのＰＥＩアセテートと′。Ｙとのキレート比体積Ｙ千３　体積ＰＥｒ　体積ＨＥＰＥＳ　ＩＪ：Ｌ理論　％錯体　Ｍ：Ｌ酢酸塩５　３０　３７０　０．１　１１０　０．１１０　３０　３６０　０．２　１０１　０．２２０　３０　３５０　０．４　９５　０．４３０　３５　３４０　０．５　９７　０．５３０　３０　３４０　０．５　１０２　０．５６０　３０　３１０　１．０　９９　１．０１２０　３０　２５０　２．０　１００　２．０１８０　３０　１８０　３．０　９４　２．８２５０　３０　１２０　４．１　８０　３．３３００　２０　８０　７．５　４４　３．３３００　２０　７０　５．０　４０　２．０３００　２０　７０　°　５．０　４１　２．０表Ｖにおける体積はマイクロリットルの単位である。

実験の精度の範囲内で、これらの結果が示すように、２．５ジエネレイシヨンのスターバーストＰＥＩアセテートはポリマー当り２〜３金属をキレート化して可溶性の錯体を形成する。

実施例１１４−イソチオシアナトフェニルメチレンカルボキシレート末端第３ジエネレイシヨンのスターバーストポリエチレンイミンとＩｇＧモノクローナル抗体とのコンジュゲーションイソチオシアネート、１０ｍｇ（５０μｍ）、実施例ＤＤから、を、放射性塩化インジウム−Ｉｌｌを加えである、３ミリモル）の塩化インジウムの５００μｌ中に溶解し、そしてｐＨを６６０μｌのＩＮのＮａＯＨで９に調節した０次いで、全抗体１ｇＧ　ＣＣ−４６のアリコートをキレート化したスターバーストのアリコートと混合した。次いで、この混合物を１８時間振盪したまま放置した。次いで、この混合物をＨＰＬＣ［カラム、デュポン、ゾルパクス・パイオス７エアー（Ｚ　ｏｒｂａｘ　Ｂ　１ｏｓｐｈｅｒｅ）ＧＦ　２５０；溶離剤、０．０２５モルの酢酸ナトリウム、ｐＨ６１８よび２５４ｎｍにおいてＵＶ検出器および放射能検出器によって分析した。結果を表Ｖｌに示す。

表Ｖｌスターバースト＝ＩｇＧコンジュゲートｌ　２　３　４］ｇＧ溶液　２０　２０　２０　２０（μｍ）キレート化スターバースト溶液　５　２０　５０　１００（μｌ）ＩｇＧ上の放射能　６　５　５　３％コンシュゲージ　２　７　１７　２２ンしたＩｇＧ％実施例１２４−インチオシアナトフェニルメチレンカルボキシレート末端第３ジエネレイシヨンのスターバーストポリエチレンイミンとＩｇＧ七ツクｏ−ナル抗体とのコンジュゲーション実施例ＤＤからのインチオシアネート、４ｍｇｃ２０μモル）を２００μｌの３ミリモルの塩化インジウム（６０μモル）と混合した。次いで、この溶液の２０ μｌのアリコートに放射性塩化インジウム−１１１を加え、モしてｐＨを３０μ ｍのＮａＯＨおよび１０／７１の０．Ｉ　ＨＣＩの添加によって９に調節した。

このインジウムキレートを、１５０μｌのｃｃ−４９全抗体１ｇＧ、１０ｍｇ／ｍｌと、５０ミリモルのＨＥＰＥＳ緩衝液中でｐＨ９，５において混合した。室温において１８時間後、抗体を調製用ＨＰＬＣ［カラム、デュポン、ゾルバクス・バイオスフェア−（Ｚｏｒｂａｘ　Ｂ　１ｏｓｐｈｅｒｅ）　Ｇ　Ｆ　−２５０；溶離剤、０．０２５モルの酢酸ナトリウム、ｐＨ６］；および２５４ｎｍにおけるＵＶ検出器および放射能検出器によって回収した。回収した抗体をアミコン膜上で濃縮し、モしてＰＢＳ緩衝液中にｐＨ７，４において交換した。回収された抗体はほぼ０゜５μｃｉ／　ｌ　ＯＯμｇの比活性を有した。

実施例１３１１１１０標識スタ一バースト抗体コンジュゲートの生体内局在化実施例１２において調製した標識スターバースト抗体コンジュゲートの有用性は、無胸腺症のマウスにおけるヒト腫瘍異種移植片による、この物質の吸収を測定することによって立証された。メスの無胸腺症のマウスに、ヒト結腸癌細胞系、ＬＳ−１７４Ｔ（はぼ４ＸｌＯ’細胞／動物）を皮下的に接種した。接種後はぼ２週に、各動物の尾の静脈を経て注射した。マウスは１７および４８時間後に殺しく各時点において５匹の動物）、腫瘍および選択した組織を切除し、秤量し、そして放射能をガンマ線カウンターで測定した。１７時間後、組織１ｇにつき注射した投与量の１３．５％が腫瘍に局在化していた。４８時間後、組織１ｇにつき注射した投与量の２１．６％が腫瘍に局在化していた。

ＦＩＧ、　４ＦＩＧ、　５ＦＩＧ、６時間（吟Ｐ：１）ＦＩＧ、７ＦＩＧ、８時間（時間）ＦＩＧ、９吟開（時開）昭和６３年４月１８日ＰＣＴ／ＵＳ　８７１０２０７４２、発明の名称スターバーストコンジュゲート名　称　ザ・ダウ・ケミカル・カンパニー４、代理人　〒１０７住　所　東京都港区赤坂１丁目９番１５号５、補正書の提出年月日１９８８年１月８日６、添付書類の目録（１）　補正書の写しく翻訳文）　１通補正請求の範囲１１少なくとも１単位の少なくとも１種の担持された製薬学的物質とアソシエーションして少なくとも１種のスターバーストポリマーを含んでなるスターバーストコンジュゲート。

２、前記スターバーストポリマーはスターバーストデンドリマーである請求の範囲第１項記載のコンジュゲート。

３、前記少なくとも１種の担持されｊ；製薬学的物質は、薬物、放射性核種、キレート剤、キレート化金属、トキシン、抗体、抗体断片、抗原、シグナル発生因子、シグナル反射因子、またはシグナル吸収因子である請求の範囲第１または２項記載のコンジュゲート。

４、少なくとも２種の異なる担持された物質が存在し、それらの少なくとも１種は標的ディレクターであり、そしてそれらの少なくとも１種は生物活性因子である請求の範囲第２項記載のコンジュゲート。

５、前記標的ディレクターは１種または２種以上の標的レセプターに対して特異的である実在因子であり、そして前記生物活性因子は放射性核種、薬物、またはトキシンである請求の範囲第４項記載のコンジュゲート。

２３、前記掃去部分は、キレート剤、抗体または抗体である請求の範囲第２２項記載の方法。

２４、式％式％）式中、各０１は同一もしくは相異なる結合基を表わし、各Ｃ″は同一もしくは相異なる結合基を表わし、ｇおよびｋの各々は個々に１またはそれより大きい整数を表わし、ｆおよびｈの各々は個々にＯまたはそれより大きい整数を表わし、−は結合基が存在する場合共有結合を示し、各Ｐはデンドリマーを表わし、Ｘは１またはそれより大きい整数を表わし、Ｔは標的ディレクターを表わし、各Ｍは担持された製薬学的物質の単位（例えば、分子、原子、イオンおよび／または他の基本単位）を表わし、前記担持された製薬学的物質は同一の担持された製薬学的物質または異なる担持された物質であることができ、好ましくは前記担持された製薬学的物質は生物活性因子であり、ｙは１またはそれより大きい整数を表わし、そして＊は前記担持されｔ：製薬学的物質が前記デンドリマーとアソシエーションしていることを示す、のスターバーストコンジュゲートを調製する方法であって、反応性部分を有するＰを、保護されたＮＨ２基をもつことができる、結合基、例えば、アニリン部分と反応させることを含んでなる前記方法。

２５、反応性部分を有するＰを、保護されたＮＨ，基をもつことができる、結合基、例えば、アニリン部分と反応させることを含んでなる請求ノ範囲第１項記載のスターバーストコンジュゲートを調製する方法。

２６、前記保護基は、式を有する請求の範囲第２５項記載の方法。

２７、Ｒは、まに、式式中、ｎは１まｔ；は２であり、そしてｘはＦｓ　ＣＬ　Ｂｒｓ　１％　５０１Ｃ１であり、そしてｎがｌであるとき、Ｎｏ、基はパラ位置に存在する、の取り付けた結合基（ハンドル）を有する請求の範囲第２５ＸＪ記載の方法。

２８、前記結合基は４−フルオロニトロベンゼンである請求の範囲第２７項記載の方法。

２９、前記スターバーストクンシュゲートは、式式中、コアは末端基の＃／樹枝状の枝−Ｎｒ’ であり、Ｇはジェネレイシ諌ンの数であり、Ｎｒは少なくとも２である反復単位の多重度であり、Ｎｃはコア化合物の原子価であり、末端部分は次式によって決定される：式中、Ｎｒ、ＧおよびＮｃは上に定義した通りであり、そして反復単位はＮｒ＋Ｊの原子価または官能価を有し、ここでＮｒは上に定義した通りである、を有する請求の範囲第２項記載のコンジュゲート。

、３０、前記スターバーストクンシュゲートハ、式式中ｉは１−ｔ−１であり、そしてコアの化合物は式で表わされ、ここで ■ はクンを表わし、Ｚｏは ■ に結合した官能基を表わし、モしてＮｃはコアの原子価を表わし、反復単位は式ｘｊ　ｙ　！　（Ｚ　ｔ　）　Ｎ　Ｉによって表わされ、ここで「ｉ」は上に定義し１；通りであり、最後のすなわち末端の単位は弐ＸＹ（Ｚ）Ｈによって表わされ、ここでＬは末端のジェネレイションヲｉｔ）　Ｌ、そしてＸ　、Ｙ　、Ｚ　８よ（／Ｎ’ｌｉＸ’１Ｙ’、Ｚ’８よびＮｌと同一であるかあるいは真なることができ、ただしＺｔ基に結合した連続するジェイ、Ｖイシ１ンは存在せず、モしてＮｔは２より小さいことができ、ｎ官能性はその定義した限界の間のすべての値の積、例えば、　ｍ　ｌであり、これは反復単位、ｘ　ｌ　ｙ　ｌ　（ｚ　Ｉ　）　Ｎ　Ｉの数であり、前記反復単位は！つの樹枝状の枝のそのジェネレイシβンを含み、モしてｉが１であるとき、ｎ＊−１ｌである、を有する請求の範囲第２項記載のコンジュゲート。

３１、反応性部分を有するＰを、式のＮ−２タルイミドによって保護されたＮＨ，基をもつことができる、アニリン部分と反応させることを含んでなる請求の範囲第１項記載のスターバーストコンジュゲートを調製する方法。

３２、反応性部分を有するＰを、スターバーストの合成に使用する条件下で不活性であるアミンについて使用する保護基によって５１．護されたＮＨ！基をもつことができる、アニリン部分と反応させることを含んでなる請求の範囲第１項記載のスターバーストコンジュゲートを調製する方法。

３３、スターバーストポリエチレンイミンメタンスルホンアミドを塩酸と反応させることを含んでなるスターバーストポリエチレンイミンを調製する方法。

３４、膜を使用する限外ろ過によって溶媒を除去することを含んでなる存在する溶媒を有するスターバーストデンドリマーを精製する方法。

３５、前記溶媒はエチレンジアミンである請求の範囲第３４項記載の方法。

３６、ランタニドをスターバーストポリエチレンイミンアセテートとキレート化することを含んでなる、前記スターバーストポリマーがスターバーストデンドリマーであり、そして前記担持された物質がランクニドである請求の範囲第１項記載のスターバーストコンジュゲートを調製する方法。

国際調査報告１＋ｔｍ、１ａ＋ｉａ、ｌａｌ　１１＠ＩｌｌＣａｂＭ　Ｈｏｐｃで／υＳ　Ｉ ’１７１０２り７４

Claims

【特許請求の範囲】１、少なくとも１単位の少なくとも１種の担持された製薬学的物質とアソシエーションして少なくとも１種のスターバーストポリマーを含んでなるスターバーストコンジュゲート。２、前記スターバーストポリマーはスターバーストデンドリマーである請求の範囲第１項記載のコンジュゲート。３、前記少なくとも１種の担持された製薬学的物質は、薬物、放射性核種、キレート剤、キレート化金属、トキシン、抗体、抗体断片、抗原、シグナル発生因子、シグナル反射因子、またはシグナル吸収因子である請求の範囲第１または２項記載のコンジュゲート。４、少なくとも２種の異なる担持された物質が存在し、それらの少なくとも１種は標的ディレクターであり、そしてそれらの少なくとも１種は生物活性因子である請求の範囲第２項記数のコンジュゲート。５、前記標的ディレクターは１種または２種以上の標的レセプターに対して特異的である実在因子であり、そして前記生物活性因子は放射性核種、薬物、またはトキシンである請求の範囲第４項記載のコンジュゲート。６、前記標的ディレクターはポリクローナル抗体またはその断片である請求の範囲第４または５項記載のコンジュゲート。７、前記標的ディレクターはモノクローナル抗体またはその断片である請求の範囲第４または５項記載のコンジュゲート。８、前記デンドリマーは不連続性を含有する請求の範囲第１項記載のコンジュゲート。９、式：（Ｐ）ｘ＊（Ｍ）ｙ（Ｉ）式中、各Ｐはデンドリマーを表わし、ｘは１またはそれより大きい整数を表わし、各Ｍは担持された製薬学的物質の単位を表わし、前記担持された製薬学的物質は同一の担持された製薬学的物質または異なる担持された製薬学的物質であることができ、ｙは１またはそれより大きい整数を表わし、そして＊は前記担持された製薬学的物質が前記デンドリマーとアソシエーションしていることを示す、の請求の範囲第１項記載のスターバーストコンジュゲート。１０、Ｍは、薬物、有害生物防除剤、放射性核種、キレート剤、キレート化金属、トキシン、抗体、抗体断片、抗原、シグナル発生因子、シグナル反射因子、またはシグナル吸収因子である請求の範囲第９項記載のコンジュゲート。１１、ｘ＝１でありかつｙ＝２またはそれより大である請求の範囲第９項記載のコンジュゲート。１２、イオンのＭ対Ｐのモル比は０．１〜１．０００：１である請求の範囲第９項記載のスターバーストコンジュゲート。１３、薬物またはトキシンのＭ対Ｐの重量比は０．１〜５：１である請求の範囲第９項記載のスターバーストコンジュゲート。１４、（Ｐ）ｘ＊（Ｍ）ｙ（Ｉ）式中、各Ｐはデンドリマーを表わし、ｘは１またはそれより大きい整数を表わし、各Ｍは担持された製薬学的物質の単位を表わし、前記担持された製薬学的物質は同一の担持された製薬学的物質または異なる担持された製薬学的物質であることができ、ｙは１またはそれより大きい整数を表わし、そして＊は前記担持された製薬学的物質が前記デンドリマーとアソシエーションしていることを示す、を調製する方法であって、ＰをＭと、通常適当な溶媒中で、担持された物質（Ｍ）とスターバーストデンドリマー（Ｐ）とのアソシエーションを促進する温度において、反応させることからなる前記方法。１５、前記温度は室温ないし還流温度である請求の範囲第１４項記載の方法。１６、前記適当な溶媒は、水、メタノール、エタノール、クロロホルム、アセトニトリル、トルエン、ジメチルスルホキシドまたはジメチルホルムアミドである請求の範囲第１４項記載の方法。１７、また、少なくとも１種の存在する製薬学的に許容されうる希釈剤または坦体を有する請求の範囲第１〜１１項のいずれかに記載のスターバーストコンジュゲート。１８、また、存在する他の活性成分を有する請求の範囲第１７項記載のスターバーストコツジュゲート組成物。１９、診断剤として使用するための請求の範囲第１〜１１、１７および１８項のいずれかに記載のスターバーストコンジュゲート。２０、製薬学的坦体として使用するための請求の範囲第１〜１１、１７および１８項のいずれかに記載のスターバーストコンジュゲート。２１、少なくとも１種の担持された製薬学的物質を含有する請求の範囲第１〜１１、１７および１８項のいずれかに記載の少なくとも１種のスターバーストコンジュゲートを、標的位置にまたはその付近に投与することを含んでなる前記少なくとも１種の担持された製薬学的物質を放出する方法。２２、請求の範囲第４〜７項のいずれかに記載の標的ディレクターおよび掃去部分を含有する２官能性スターバーストコンジュゲートを投与することを含んでなり、前記標的ディレクターは前記コンジュゲートを標的位置に局在化し、そして前記掃去部分は二次的に投与される治療用化合物または診断用化合物と結合することができる、治療用化合物または診断用化合物を掃去する方法。２３、前記掃去部分は、キレート剤、抗体または抗体である請求の範囲第２２項記載の方法。２４、式［（Ｔ）ｅ−（Ｃ′）ｆ］ｇ＊（Ｐ）ｘ＊［（Ｃ′′）ｈ−（Ｍ）ｙ］ｋ（ＩＩＩ）式中、各Ｃ′は同一もしくは相異なる結合基を表わし、各Ｃ′′は同一もしくは相異なる結合基を表わし、ｇおよびｋの各々は個々に１またはそれより大きい整数を表わし、ｆおよびｈの各々は個々に０またはそれより大きい整数を表わし、−は結合基が存在する場合共有結合を示し、各Ｐはデンドリマーを表わし、ｘは１またはそれより大きい整数を表わし、Ｔは標的ディレクターを表わし、各Ｍは担持された製薬学的物質の単位（例えば、分子、原子、イオンおよび／または他の基本単位）を表わし、前記担持された製薬学的物質は同一の担持された製薬学的物質または異なる担持された物質であることができ、好ましくは前記担持された製薬学的物質は生物活性因子であり、ｙは１またはそれより大きい整数を表わし、そして＊は前記担持された製薬学的物質が前記デンドリマーとアソシエーションしていることを示す、のスターバーストコンジュゲートを調製する方法であって、反応性部分を有するＰを、保護されたＮＨ２基をもつことができる、結合基、例えば、アニリン部分と反応させることを含んでなる前記方法。２４、前記保護基は、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中Ｒは一Ｃ（ＣＨ３）３，▲数式、化学式、表等があります▼，▲数式、化学式、表等があります▼または▲数式、化学式、表等があります▼であるを有する請求の範囲第２３項記載の方法。２５、Ｒは、また、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、ｎは１または２であり、そしてＸはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＳＯ２Ｃｌであり、そしてｎが１であるとき、ＮＯ２基はパラ位置に存在する、の取り付けた結合基（ハンドル）を有する請求の範囲第２３項記載の方法。２６、前記結合基は４−フルオロニトロベンゼンである請求の範囲第２５項記載の方法。