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JPS62502941A - 新規プロコアギュラント蛋白質 - Google Patents

新規プロコアギュラント蛋白質

Info

Publication number
JPS62502941A
JPS62502941A JP61502448A JP50244886A JPS62502941A JP S62502941 A JPS62502941 A JP S62502941A JP 61502448 A JP61502448 A JP 61502448A JP 50244886 A JP50244886 A JP 50244886A JP S62502941 A JPS62502941 A JP S62502941A
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JP
Japan
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ser
pro
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lys
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Granted
Application number
JP61502448A
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JPH0788399B2 (ja
Inventor
トゥール，ジョン・ジェイ，ジュニアー
Original Assignee
ジェネティックス・インスチチュ−ト・インコ−ポレ−テッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=24914180&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JPS62502941(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by ジェネティックス・インスチチュ−ト・インコ−ポレ−テッド filed Critical ジェネティックス・インスチチュ−ト・インコ−ポレ−テッド
Publication of JPS62502941A publication Critical patent/JPS62502941A/ja
Publication of JPH0788399B2 publication Critical patent/JPH0788399B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 α〔宿主細胞が哺乳類、酵母または細菌の細胞である請求の範囲第９項記載の遺 伝子工学的処理を受けた宿主細胞。
αＢ　蛋白質を発現させるのに適した条件下で請求の範囲第９項記載の遺伝子工 学的処理を受けた細胞を培養することからなるプロコアギラント活性を示す蛋白 質を生産する方法。
ａ２　請求の範囲第１項記載の蛋白質を医薬として適当な担体と混合した無菌製 品からなる血友病Ａ型の治療処置に有用な医薬製品。
口３　請求の範囲第２項の蛋白質を医薬として適当な担体と混合した無菌製品か らなる血友病Ａ型の治療処置に有用な医薬製品。
α４　請求の範囲第３項記載の蛋白質を医薬として適当な担体と混合した無菌製 品からなる血友病Ａ型の治療処置に有用な医薬製品。
α！１９　請求の範囲第４項記載の蛋白質を医薬として適当な担体と混合した無 菌製品からなる血友病Ａ型の治療処置に有用な医薬製品。
ａＱ　請求の範囲第１２項記載の製品の有効投与量を患者に投与することからな る血友病Ａ型の治療方法。
（１７）　請求の範囲第１３項記載の製品の有効投与量を患者に投与することか らなる血友病ｆｉｆｊｌの治療方法。
ａ８　請求の範囲第１４項記載の製品の有効投与量を患者に投与することからな る血友病Ａ型の治療方法。
■　請求の範囲第１５項記載の製品の有効投与量を患者に投与することからなる 血友病Ａｍの治療方法。
明　細　書 新規プロコアギュラント蛋白質 本発明はプロコアギュラント活性を示す一連の新規蛋白質に関する。本蛋白質は ヒト第■：Ｃ因子とは構造的には著しく異なるが、類似のプロ血液凝固（プロコ アギュラン）　：　ｐｒｏｃｏａ−ｇｕｌａｎｔ　）活性を持つ 第■：Ｃ因子は血友病Ａ型に欠損または欠除している血漿蛋白質である。本疾患 は男子２万人に約１人がかかる遺伝性の出血性疾病である。第■：Ｃ因子の構造 は１９８３年１０月２８日付で出願された米国特許出願番号第５４６，６５０号 および１９８４年８月２４日付の第６４４，０３６号（これらは本明細書に参考 文献として添付されている）およびネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、　３１２　： ３０６、３０７．３２６および３４２に記載されている。
ヒト第■：Ｃ因子を血友病の治療に使用するのに現在直面している問題の一つは その抗原性からのものである。がなりの割合の血友病患者において、治療に使用 される第〜Ｚ：Ｃ因子への免疫反応の先進が起こる。非血友病患者も、その免疫 系が■：Ｃ因子に過敏になって、第■：Ｃ因子への循環性の抗体または「阻害剤 」が生産される場合には、血友病になり得る。何れの場合にも、その結果は患者 に存在する第■：Ｃ因子全てを中和し、治療を極めて困難にする。現在まで、本 問題を持つ血友病患者の治療に選択される方法は、重度の出血性の事例において は処理済み／タ第ｖｌ：ｃ因子のような非ヒト第■：Ｃ因子の投与である。カー ノア　（Ｋｅｒｎｏｆｆ　）らによるブラッド（Ｂｌｏｏｄ　）６３：　３１　 （１９８４）を参照せよ。しかしヒト第■：Ｃ因子の凝表　１．（続き） Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｐｒｏ　Ｃ１ｕＣＡＡ　Ａ ＡＡ　ＧＴＡ　ＧＣＡ　ＡＣＣＴＧＴ　ＣＯＡ　ＯＡＣ！Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｇｌ ｕ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　ＡｓｐＯＡＡ　ＯＣＣＣＡＡ　ＧＡＣＴ ＡＴ　ＧＡＴ　ＯＡＴ　ＣＡＴＰｈｅ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｓｅ ｒ　Ｐｒｏ　５ｅｒＴＴＴ　ＯＡＴ　Ｃ！ＡＴ　（１！Ａ（：！　ＡＡＣＴＣＴ 　Ｃ１：！Ｔ　Ｔｏ。
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例えば、本発明の１つの化合物はＳｅｒ　−７６０からＰｒｏ　−１０００のア ミノ酸配列と次にＡｓｐ　−１５８２からＡｒｇ　−１７０８のアミノ酸配列か らなるＸ領域を含んでいる。従ってこの化合物はアミノ酸Ａｓｐ　−１５８２か らＴｙｒ　−２３５１にＡｌａ　−２０からＰｒｏ　−１０００がはプチド結合 によって共有結合したポリペプチド配列からなる。もう一つの典型的な化合物は Ｓｅｒ　−７６０からＴｈｒ　−７７８のアミノ酸配列とＰｒｏ−１６５９から Ａｒｇ　−１７０８のアミノ酸配列からなるＸ領域を含んでいる。従って、この 化合物はＰｒｏ　−１６５９からＴｙｒ　−２３５１の配列にＡｈａ−２０から Ｔｈｒ　−７７８がペプチド結合によって共有結合したポリはプチド配列からな る。
更にもう一つの典型的な化合物はＳｅｒ　−７６０からＴｈｒ　−７７８のアミ ノ酸配列とＧｌｕ　−１６９４からＡｒｇ　−１７０８のアミノ酸配列からなる Ｘ領域を含んでいる。従ってこの化合物はＧｌｕ−１６９４から’ｒｙｒ　−２ ３５１の配列にＡｈａ　−２０からＴｈｒ　−７７８かにプチト結合によって共 有結合したポリペプチド配列からなる。
これらの典型的化合物を表２に概略的に記述する。
Ｘで表わされるアミノ酸配列は分子のプロコアギュラント活性（活性は従来の方 法によって都合よく分析できる）を実質的に減じないよ５に選択されるべきであ る。表２の化合物（２）は現時点で好適な実施態様である。
通常の組換えＤＮＡの技法と類似の種々の位置特異的突然変異形成法を使用して 特異的に変えられた■：Ｃ因子ＤＮＡによって形質転換した適当な宿主細胞によ り、このプロコアギュジント蛋白質を合成できる。
出発物質は表１に示したような完全なヒト第■：Ｃ因子のような完全な第■：Ｃ 因子分子、またはその配列の末端が切断されたものをコードするＤＮＡ配列であ るか、または出発物質が少なくとも目的の詣りハプチドのアミノ酸配列を暗号に するのに十分なりＮＡを含んでいる限りは、そのＤ　Ｎ　Ａ配列セグメントでも 良い。
ヒト第■：Ｃ因子の重要なアミノ酸セグメントが欠除しているのに加えて、本発 明のプロコアギュラント蛋白質はヒト第■：Ｃ因子よりもＮ−グリコジル化可能 部位が少ない。好適なのは、少なくとも１個のＮ−グリコジル化部位が欠失して いるものである。より好適なのは、２５個のＮ−グリコジル化可能部位のうち１ ８個が分子中に欠けているものである。更により好適なのは、２５個のＮ−グリ コジル化可能部位のうち１９個までが除去されているものである。理論に束縛さ れたくないが、本発明に従って欠失される蛋白質セグメントすなわちアミノ酸セ グメントそれ自身またはグリコジル化蛋白質の炭水化物部位に含まれる抗原性決 定因子に対する第■：Ｃ因子への抗体は本発明の凝血促進蛋白質を中和しないと 現時点では考えられている。更に本発明の凝血促進剤がその蛋白質の生産に使用 する非ヒト哨乳類または他の細胞による非ヒトグリコジル化部位の多くを欠損す るという事実も本蛋白質の抗原性を減じ、凝血促進剤への抗体を発達させる見込 みを少なくすると考えられる。このことが凝血促進剤による治療、を必要とする 患者の治療を容易にする可能性がある。
ヒト第〜ｉ［因子の生産を実行するよりも、かなり安い費用で本化合物を組換え ＤＮＡ技法によって合成し得ると発明者は期待している。宿主生物は本質的によ り簡単な本発明の化合物をより効果的にプロセシングし、発現しなければならな い。
本発明の化合物は既知の方法に従って非経口に適した賦形剤と一緒にして医薬と １、て適当な製品に処方され得る。
非経口投与に適した本発明の医薬製品としては受血者の血液と等張の溶故を製造 するために滅菌水を添加して再構成され得る蛋白質の滅菌凍結乾燥製品が挙げら れる。その製品は封入アンプルまたはビンのようなユニットまたはマルチ投与容 器中に入れることができる。その使用はヒト第〜■因子の使用と同様であり、効 能を適当に別箇する。
これらの蛋白質を発現させる一方法は適当な制限酵素によって全長大の第■：Ｃ 因子ＤＮＡを切断してヒト第〜［：Ｃ因子のアミノ酸７６０から１７０８を暗号 にする部分のＤＮＡ配列を除去して作製されるＤＮＡを使用するものである。次 にその切断ＤＮＡをオリゴヌクレオチドと連結し、切断ＤＮＡを切除して正しい 翻訳読み′Ｉ？−（ｒｅａｄｉｎｌＥ　ｆｒａｍｅ　）を保持する。
ｃＤＮＡの製造は上記の米国特許出願番号第５４６，６５０および６４４．’０ ８６号に詳しく示されている。表１に記述されたヌクレオチド配列を含む９８２ ６４組換えクローン（ｐＳＰ６４−＼■と表示）はアメリカンタイプカルチャー コレクション（ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅ　Ｃｕ’１ｔｕｒｅ　Ｃ０１ｌｅｃｔ ｉｏｎ）に受入れ誉号ＡＴＣＣ３９８１２として寄託されている。
制限エンドヌクレアーゼを用いてヒト第＋、１　：　ｃ因子ｃＤＮＡ（以下にお いてＤＮＡ源配列）のヌクレオチド°配列の適当な部位を切断する。他に述べて いない限り、制限エンドヌクレアーゼをその販売供給者によって推奨される条件 および方法で使用する。本明細書で選択された制限エンドヌクレアーゼは切り取 るのが望ましい第■：Ｃ因子分子の部分をコード化する特定の配列を切り取るこ とが可能なものである。ＢａｍＨＩおよび５ａｃＩは特ニ有効なエンドヌクレア ーゼである。しかし、当業者は従来の選択方法で選択した他の制限エンドヌクレ アーゼを決用することも可能である。欠失されるヌクレオチドの数は変動し得る が、根本的なＣＤＮＡ配列の読み枠が影響を受けないことを確実にするように注 意すべきである。
次に生じたＤＮＡフラグメントをマニアチス（）＆ｎ１ａｔｉｓ　）らプリング ハーバ−ラボラトリ−（Ｃ：ｏｘａ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒ ａ　−ｔｏｒｙ）　１９８２　；　この開示は本明細書に参考文献として含まれ カ）　（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、（Ｕ、　Ｓ、　Ａ、） 　〕７６　：　６１５−６１９　（１９７９）に記載されたような従来手法を用 いてｎＭする。
次に精製したＤＮＡを連結して、好適な本発明のポリペプチドをコード化する配 列を形成する。必要または望ましい時には、通常の連結条件を用いて、切１ｆｒ ＤＮＡを再切除して、正しい翻訳読み枠を保持するオリゴヌクレオチド内で連結 を行なう。連結反応は上記でマニアチスらによって２４５３−６に記載されたよ うにし、２４６−’−ジに記載された緩衝液を用い、１−１００μｆ／／ｒｄの ＤＮＡ１度で、プラントエンドのＤＮＡでは２３℃、粘着末端のＤＮＡでは１６ ℃の温度で実施する。下記のようにＢａ１ＩＩ／５ａｃＩ欠失がある時には、次 の二本鎖オリゴヌクレオチドが有用である。
５’Ｐ−ＣＡＴＧＧＡＣＣＧ−３’ ３−ＴＣＣＡＧＴＡＣＣＴＧＧＣＣＴＡＧ５’　；しかし作製される欠失および 反応条件によって当業者が他のオリゴヌクレオチドを選択することも可能である 。
他の方法に加えて、新規なプロコアギュラントポリはプテドをコード化するＤＮ Ａ配列は例えばモリナガ（Ｍｏｒｉｎａｇａ、　Ｙ、　）らがバイオテクノロジ ー（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、　２　：　６３６−６３９（１９８４）に 記載したようなオリゴヌクレオチド媒介欠失突然変異形成（しばしばループアウ ト突然変異形成と呼ばれる）を適用してヒト第ＶＩＩ：Ｃ因子ＤＮＡから誘導さ れ得る。
種々の欠失を含む新規ＤＮＡ配列を唾乳類の細胞に発現するために適当なベクタ ーに導入する。一時的にトランスフェクションまたは安定に形質転換した宿主細 胞によって生産されるプロコアギュラント活性は血漿試料用の標準的分析を用い て測定され得る。
本明細書に記載される真核細胞発現ベクターは当業者によく知られた技法によっ て合成され得る。細菌レプリコン、選択遺伝子、エンハンサ−、プロモーターな どのベクターの成分は天然材料から入手したり既知の方法によって合成する。カ ーフマン（Ｋａｕｆｍａｎ）らのジャーナルオブモレキュラーバイオロジ−（Ｊ 、　ＭＯ：Ｌ、　Ｂｌｏｌ、）、　１５９　：　５１−５２１　（１９８２）　 ：カーフマン、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、　８２　：　 ６８９−６９３　（１９８５）を参照せよ。
形質転換した細胞系を含めた樹立細胞系が宿主として適している。正常二倍体細 胞およびインビトロの初代培養から導かれた細胞株も（造血系幹細胞のような比 較的未分化の細胞を含めた）初代移層片とともに適している。選択遺伝子が優先 的に作動する限り、候補細胞はジェノタイプ的に不完全である必要はない。
宿主細胞は哺乳類の細胞系で樹立されたものが好適である。
染色体ＤＮＡにベクターＤＮＡを安定に融合させたり、融合したベクターＤＮＡ を増幅するためには、ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）細胞が現在は好適 である。米国特許第４，３９９，２１６号を参照せよ。他にはウシパピローマ（ 乳頭腫）ウィルスゲノム〔ラスキー（Ｌｕｓｌｃｙ）ら、セル（Ｃｅ１１）、　 ３６　：　３９１−４０１（１９８４）、〕の全体または一部が（フタ−ＤＮＡ として挙げられ、安定な二−ソーム成分としてｃ１２７マウス細胞系のような細 胞系に用いられる。他の使用可能な哺乳類細胞系としてはＨｅＬａ、　ＣＯ８− １サル細胞、Ｂｏｗｅｓ細胞のようなメラノーマ（黒色腫）細胞、マウスＬ　− ９２９細胞、スイス、Ｂａｒｂ　−ｃまたはＮＩＨからの３Ｔ３系、およびＢＨ ＫやＨａＫハムスター細胞系などが挙げられる。
次に安定なトランス７オーマントを通常の免疫または酵素分析によりプロコアギ ュラント生成物の発現を調べる。凝血促進蛋白質を暗号に書き直すｆ）ＮＡの存 在はサザーンプロットのような標準的技法によって検出され得る。００３−１サ ル細胞のような適当な宿主細胞に発現ベクターＤＮＡを導入した後数日間一時的 に発現するプロコアギュラント遺伝子は選別することなく、培養地中の蛋白質を 酵素的または免疫的に分析して測定する。
本発明は以下に例証する実施態様（純粋に典型的なものである）を参考にすれば 更に理解されるであろうし、請求の範囲に記述したように本発明の本当の範囲を 限定すると解釈すべきでヒト第■：Ｃ因子（ヌクレオチ）＃１はＡＴＧイニシエ ーターメチオニンコドンのＡである）のヌクレオチド５６２−７２６９を含むプ ラスミ）’ｐＡＧＫ　（ｐｓｐ　６４　（プロメガバイオチック（Ｐｒｏｍｅｇ ａ　Ｂｉｏｔｅｃ）、　マジツク（Ｍａｄｉｓｏｎ）、　Ｗｉｓ、　）誘導体） （１０μｇ）を５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ、　ＨＣＪ　（ｐＨ８，０）、　５０ｍＭ　 Ｍ５’Ｃ１２および２，４ユニツトのＢａｍＨＩ　にューイングランドバイオラ ボ（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｂｉｏｌａｂｓ　）　）を含んだ溶液（１００μ り中で３７℃で３０分間保持してＢａｍＨＩを部分的に分解した。ＥＤＴＡを２ ０ｍＭになるように添加して反応を止め、フェノールで１回、クロロホルムで１ 回抽出し、エタノールで沈殿させて遠心分離によりベレットにした。ＤＮＡを溶 解し、　４０ユニツトの５ａｃＩ（５０μｌ）中で３７℃、１．５時間かけて完 全に付着させた。
次［ＤＮＡ＝Ｊ４衝化した０、６チアガロースゲルで電気泳動を行った。第〜■ ：Ｃ因子配列のヌクレオチ）’２９９２−４７７４に相当する配列だけが欠除し たｐＡｃＥの部分的ＢａｍＨＩ　−５ａｃＩフラを用いてゲルから精製した。精 製したＤＮＡを通常の連結条件を用いて下記の二本鎖オリゴヌクレオチド５’Ｐ −ＣＡＴＧＧＡＣ；ＣＧ−３’ ３’−ＴＣＧＡＧＴＡＣＣＴＧＧＣＣＴＡＧ５’（１００ｐｍｏｌｅｓ　）と連 結した。除去されるＤＮＡ配列はアミノ酸９９８から１５８１−ｔでの５８４個 のアミノ酸の欠失を表わす。しかし挿入されるオリゴヌクレオチドは９９８−１ ０００に相当するアミノ酸をコード化している。従ってコート９化されたポリイ プチト９は５８１個のアミノ酸の欠失を含む。
次に競合する大腸菌（二匹見）を形質転換するのにＤＮＡを使用し、目的のＳａ ｃ　Ｉ　−ＢａｍＨＩ欠失ミュータントを保護するシラスミドを同定するため、 いくつかのアンビシリン耐性トランスフォーマントからのＤＮＡを制限酵素地図 法で分析した。
このプラスミドからのＤＮＡは第■：Ｃ因子配列のヌクレオチド１８１６に特異 的にそのプラスミドを付着させるＫｐｎＩｉ完全に分解した。このＤＮＡを第〜 ｇ：ｃ因子ＤＮＡのヌクレオチド１−１８１５を含むＫｐｎＩＤＮＡ；ｙラグメ ントおよび合成Ｓａｌ工部工部−１１から−５のヌクレオチド９で連結し競合す る大腸菌を形質転換するのに使用した。
プラスミドＤＮＡを単離し、制限酵素地図法により方位を測定してＫｐｎＩ挿大 の５′から３′への正確な定位を含むプラスミドｐＢｓｄＫを同定した。そのプ ラスミド９からの全ポリペプチド暗号化範囲を切除する５ａｌＩ消化を行ない、 ＤＮＡを緩衝化した０、６％アガロースゲルで電気泳動を行なった。５．３ｋｂ ＳａＩＩフラグメントを上述のようにしてゲルから精製した。このＤＮＡ７ラグ メントをＸｈｏＩ切＃ｐＸＭＴ２ＤＮＡと連結してプラスミドｐＤＧＲ−２を得 た。ｐＸＭＴ２はＣ０８−１アフリ力場合に異種遺伝子を発現できるプラスミド であり、上記のカー７マンのｅｓｃ＋−９３−＝−ジに記述された発現ベクター の誘導体である。発現成分はアデノウィルス・メジャー・レイト・プロモーター の転写開始位置について−４５から＋１５６にわたるアデノウィルス・メジャー ・レイトプロモーターの欠失があること以外はプラスミドｐＱ２に記述されたも のと同様である。
ｐＸＭＴにおけるｍＲＮＡ発現はＳＶ４０レイトプロモーターによって誘導され る。しかし細菌レプリコンはテトラサイクリンよりもむしろアンピシリンに耐性 であるベクターを含む細菌を複製するように代えられる。ｐＸＭＴ２はＳＶ４０ レイトプロモーターから挿入されたｃＤＮＡを発現させる位置に独特のＸｈ。
工部位を含む。５ＩＬＬ　Ｉ部位が側面にあるのでこのＸｈｏＩ部位は第■：Ｃ 因子ｃＤＮＡ構造を挿入するのに都合がよい。
トランス７オーマントの制限酵素地図化にＸす、５ｖ４ｏレイトプロモーターか らの転写の方向に関するポリイプチト９暗号化配列の５′から３′への正確な定 位を含むプラスミド、ｐＤＧＲ−２、が同定された。ｐＤＧＲ−２はアメリカン タイプカルチャーコレクションに受入れ番号ＡＴＣＣ５３１００として寄託され ている。
実施例　Ｚ 他の新規凝血促進蛋白質は例えば上記のモリナガらによって記述されたループア ウト突然変異形成法を用いたオリゴヌクレオチド媒介欠失突然変異形成によって 産生される構造物から得られる。欠失突然変異形成は発現プラスミドｐＤｃＲ− ２または他の適当なプラスミドやバクテリオファージイクターを用いて実行され る。Ｍ１３ベクターなどＫよって生産される一本鎖ＤＮＡを用いるオリゴヌクレ オチド媒介突然変異形成の他の方ツズリサーチ（Ｎｕｃ’１．　Ａｃ１ｄｓ　Ｒ ｅｓ、）、　１０　：　６４８７−６５００（１９８２）を参照せよ。例えばこ れらの欠失はオリゴヌクレオチド（Ａ）５’ＡＡＡＡＧＣＡＡＴＴＴＡＡＴＧＣ ＣＡＣＣＣＧＡＣＣＡＧＴＣＴＴＧＡＡＡＣＧｃＯＡ（Ｂ）５’　ＡＡＡＡＧＣ ＡＡＴＴＴＡＡＴＧ（？ＣＡｃＣＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＡＣＡＴＴＴＡＴＧＡを 用いてヌクレオチド（Ａ）２３３４〜４９７４または（Ｂ）　２３３４〜５０７ ９から第■：Ｃ因子ｃＤＮＡ中で欠失を起こして導入できる。これらの構造物に よって暗号に書き直される蛋白質は第■：Ｃ因子に関しては（Ａ）で８８０個、 （Ｂ）で９１５個のアミノ酸の欠失をともなう。
新規蛋白質がプロコアギヤラント活性がＭるか否かを決定するため欠失された蛋 白質を直接または適当な発現イクターにサブクローニングした後試験した。凝血 活性は実施例３および４に記述したようにして分析した。
実施例　３゜ ＣｏＳサル細胞におけるプロコアギラント分子の発現実施例１または２で生産さ れる修飾ｃ　Ｄ　Ｎ　Ａおよび全体長のｃＤＮＡを含めた発現プラスミドをＤＥ ＡＥ−デキストラントランスフェクション手頃に従ってＣ０８−１細胞に導入し た。ンンベイラック（Ｓｏｉｐａｙｒａｃ　）およびディナ（Ｄａｎａ　）によ るＰｒｏｃ。
ＮａｔＬ　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、　７８　：　７５７５−７５７８　（１９８ １）を参照せよ。トランスフェクション後４８時間で順化培地を回収し、ツー　 ル（Ｔｏｏｌ）らによりネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、　３１２　：　３４２− ３４７　（１９８４）に記載されたようにして第〜■因子型活性を分析する。実 験結果を表３に要約した。修飾ｃＤＮＡを含む両方のプラスミドはプロコアギラ ント活性を生じ、この活性は野生型のｃＤＮＡを用いて得たものよりも強かった 。これらのデータより、ヒト第■因子の限定された範囲内の８８０個までのアミ ン９（９５，０００ダルトン）の除去は補助因子活性を消失しないと結論された 。更にこれらの短縮されたプロコアギヤラント活性質はトロンビンによる活性化 を受けてもその活性を維持する。
表３：短縮化第■因子分子の発現 Ｎ０ＤＮＡ　−Ｏ ｐＸＭＴ−ｖ１１１５　：　１　４５０ｐＤＧＲ−２５８１１１４２５０５７５ ０（２３Ｘ）ｐＬＡ−２８８０１６２３３０９２４０（２８Ｘ）示したプラスミ ドをＣＯ８細胞にトランスフェクションし、４８時時間順化培地をカビコアテス ト（Ｋａｂｉ　Ｃｏａｔｅｓｔ）第〜１：Ｃ因子法（色原体活性）およびツール らによりネイチャー（１９８４）に記載された第〜竹：Ｃ因子欠乏血漿を用いる 一段階の部分的トロンボプラスチン活性化時間（ＡＰＴＴ）凝血分析（クロチッ ク活性）を行なった。トロンビン（■ユ）活性化には、試料を０．２　ｕｎｉｔ ｓ　１　ｒｔｌ　）　０７ビ７（Ｉｌ＆）で室温で１−１０分前処現した。活性 化率を括弧内に示す。野生型（ｐＸＭＴ−Ｘ［））ランスフエクションの培地か らの活性は低く過ぎてトロンビン活性前のクロチック活性を直接測定することは できなかった。
野生型第■因子活性を濃縮した他の実験から約３０倍活性であることが示された 。
実施例　４゜ ＣＨＯ細胞におけるプロコアギヤラント活性の発現Ａ）ｐＤＧＲ−２の発現 （第■：Ｃ因子ｃＤＮＡに関して）５８１個のアミノ酸（ｐＤＧＲ−２）の欠失 を含む、プロコアギラントの発現イクターをＣａ　ＰＯ４共沈法により：／ラス ミ）’ｐＡａＤ２６ｓＶ（Ａ）＋３　（１０／’ｇｐＤＧＲ−２：　１１１１ｐ ＡａＤ２６ＳＶ（Ａ）＋３）　と−ｇにａＨｏ　０ＨＦＲ欠乏細胞（ＤＵＫＸ− Ｂｌｌ）にトランスフェクションし、トランス７オーマントを単離して、カー７ マンら（１９８５）によって記述されたようにＭＴＸｆｉ度を高くして増殖させ た。Ｊｌと表示されたトランスフォーマントはＭＴＸの濃度上昇への耐性機能と して以下の活性を示した。
０、０２　３２２ ０、１　４９９ Ｂ）　ｐＬＡＪの発現 ８８０個のアミノ酸（ｐＬＡ−２）の欠失があるプロコアギュラント発現ベクタ ーをサンドリーゴルジン（５ａｎａｒｉ　−Ｇｏｌｄｉｎ　）ドプラスト融合法 によってＣＨＯＤＨＦＲ欠乏、［１］胞（ＤＵＫＸ−８１１、チャシン（Ｃｈａ ｓｉｎ）およびウルロープ（Ｕｒｌａｕｂ）、　ＰＮＡＳ。
７７　：　４２１６−４２２０．（１９８０））に導入した。融合後、各プレー トにカナマイシン（１００μ９／ｒｄ）およびチミジン、アデノシン、チオキシ アデノシン、ペニシリン、ストレプトマイシン（各１０μυ賃）および１０％透 析ウシつ児血清を含む新鮮な培地を加えた。カナマイシンはプロトプラストへの 変化を逃避させる細胞が生育するのを防止するために添加した。４日後、細胞を １０％透析ウシつ児血清、ペニシリンおよびストレプトマイシン（ヌクレオチド は除外）を含んだアルファ培地に１：１５で継代培養した。選択性培地に細胞を 継代して１０−１２日後にコロニーが出現した。Ｂトランスフォーマントのグル ープを集め、ＭＴＸの開始濃度を０．０２μＭから０．１．０．２および１．０ μＭと段階的に上げて増殖させた。ＭＴＸ濃度の上昇への細胞耐性における第〜 ■因子型活性の結果を下記に示した。
０．０２　５３０ １．０　１８９０ 米　第■因子活性はカビコアテスト第■：Ｃ因子法（色原体活性）によって決定 した。
手続補正書彷式） １、事件の表示 ＰＣＴ／ＵＳ８６１００７７４ ２、発明の名称 新規プロコアギュラント蛋白質 ３、補正をする者 事件との関係　出　願　人 住所 名　称　ジエネティックス・インスチチュート赤住　所　東京都千代田区大手町 二丁目２番１号新大手町ビル　２０６号室 ６、補正の対象 タイプ印書により浄書した明細書及び請求の範囲の翻訳文７、補正の内容 別紙の通り（尚、翻訳文の内容には変更なし）国際調査報告 ’−１−ず一＋１６−ｌＡｍ１ｃ”−ＡＮ−、ＰＣＴ／ＴＪＳＢ６１００７７４

Claims (19)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）アミノ酸配列 Ａ−Ｘ−Ｂ （式中Ａ領域は表１に示したように本質的にはＡ１ａ−２０からＡｒｇ−７５９ までのポリペプチド配列を表わし；Ｂ領域表１に示したように本質的にはＳｅｒ −１７０９からＴｙｒ−２３５１までのポリペプチド配列を表わし；Ｘ領域は表 １の配列Ｓｅｒ−７６０からＡｒｇ−１７０８内の本質的には二重のアミノ酸配 列である９４９個までのポリペプチド配列を表わし、Ｘのアミノ末端はＡのカル ボキシ末端にペプチド結合を介して共有結合し、Ｘのカルボキシ末端はＢのアミ ノ末端と同様にして共有結合している）のプロコァギエラント活性を示す蛋白質 。
  2. （２）表１に示したように本質的にはアミノ酸配列Ａ１ａ−２０からＰｒｏ−１ ０００、次にＡｓｐ−１５８２からＴｙｒ−２３５１（Ｐｒｏ−１０００がＡｓ ｐ−１５８２にペプチド結合を介して共有結合している）からなる請求の範囲第 １項記載の蛋白質。
  3. （３）表１に示したように本質的にはアミノ酸配列Ａ１ａ−２０からＴｈｒ−７ ７８、次にＰｒｏ−１６５９からＴｙｒ−２３５１（Ｔｈｒ−７７８がＰｒｏ− １６５９にペプチド結合を介して共有結合している）からなる請求の範囲第１項 記載の蛋白質。
  4. （４）表１に示したように本質的にはアミノ酸配列Ａｌａ−２０からＴｈｒ−７ ７８、次にＧｌｕ−１６９４からＴｙｒ−２３５１（Ｔｈｒ−７７８がＧｌｕ− １６９４にペプチド結合を介して共有結合している）からなる請求の範囲第１項 記載の蛋白質。
  5. （５）請求の範囲第１項記載の蛋白質をコード化するＤＮＡ分子。
  6. （６）請求の範囲第２項記載の蛋白質をコード化するＤＮＡ分子。
  7. （７）請求の範囲第３項記載の蛋白質をコード化するＤＮＡ分子。
  8. （８）請求の範囲第４項記載の蛋白質をコード化するＤＮＡ分子。
  9. （９）請求の範囲第１項記載の蛋白質をコード化するＤＮＡ分子を含み、かつそ れを発現できるように遺伝子工学的処理を受けた宿主細胞。
  10. （１０）宿主細胞が哺乳類、酵母または細菌の細胞である請求の範囲第９項記載 の遺伝子工学的処理を受けた宿主細胞。
  11. （１１）蛋白質を発現させるのに適した条件下で請求の範囲第９項記載の遺伝子 工学的処理を受けた細胞を培養することからなるプロコアギラント活性を示す蛋 白質を生産する方法。
  12. （１２）請求の範囲第１項記載の蛋白質を医薬として適当な担体と混合した無菌 製品からなる血友病Ａ型の治療処置に有用な医薬製品。
  13. （１３）請求の範囲第２項の蛋白質を医薬として適当な担体と混合した無菌製品 からなる血友病Ａ型の治療処置に有用な医薬製品。
  14. （１４）請求の範囲第３項記載の蛋白質を医薬として適当な担体と混合した無菌 製品からなる血友病Ａ型の治療処置に有用な医薬製品。
  15. （１５）請求の範囲第４項記載の蛋白質を医薬として適当な担体と混合した無菌 製品からなる血友病Ａ型の治療処置に有用な医薬製品。
  16. （１６）請求の範囲第１２項記載の製品の有効投与量を患者に投与することから なる血友病Ａ型の治療方法。
  17. （１７）請求の範囲第１３項記載の製品の有効投与量を患者に投与することから なる血友病Ａ型の治療方法。
  18. （１８）請求の範囲第１４項記載の製品の有効投与量を患者に投与することから なる血友病Ａ型の治療方法。
  19. （１９）請求の範囲第１５項記載の製品の有効投与量を患者に投与することから なる血友病Ａ型の治療方法。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS62282594A (ja) * 1986-01-27 1987-12-08 カイロン　コーポレイション ヒト第８：ｃ因子活性を有する組換えタンパク複合体の生産
JPS63503275A (ja) * 1986-08-01 1988-12-02 バイオジェン　エヌ　ブイ ファクター８：ｃの製造方法

Families Citing this family (142)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4965199A (en) * 1984-04-20 1990-10-23 Genentech, Inc. Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection
US5198349A (en) * 1986-01-03 1993-03-30 Genetics Institute, Inc. Method for producing factor VIII:C and analogs
US5595886A (en) 1986-01-27 1997-01-21 Chiron Corporation Protein complexes having Factor VIII:C activity and production thereof
US5422260A (en) * 1986-05-29 1995-06-06 Genetics Institute, Inc. -Legal Affairs Human factor VIII:c muteins
US5451521A (en) * 1986-05-29 1995-09-19 Genetics Institute, Inc. Procoagulant proteins
IL84168A0 (en) * 1986-10-15 1988-03-31 Rorer Int Overseas Human factor viii-c analogs,process for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing the same
US6060447A (en) * 1987-05-19 2000-05-09 Chiron Corporation Protein complexes having Factor VIII:C activity and production thereof
US6346513B1 (en) 1987-06-12 2002-02-12 Baxter Trading Gmbh Proteins with factor VIII activity: process for their preparation using genetically-engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
AU627150B2 (en) * 1987-06-12 1992-08-20 Immuno Ag Novel proteins with factor viii activity: process for their preparation using genetically-engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
EP0690126B1 (en) * 1987-06-12 2001-11-28 Baxter Aktiengesellschaft Novel proteins with factor VIII activitiy: process for their preparation using genetically-engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
IE69026B1 (en) * 1987-06-12 1996-08-07 Immuno Ag Novel proteins with factor VIII activity process for their preparation using genetically-engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
FR2619314B1 (fr) * 1987-08-11 1990-06-15 Transgene Sa Analogue du facteur viii, procede de preparation et composition pharmaceutique le contenant
JPH0387173A (ja) * 1987-09-10 1991-04-11 Teijin Ltd ヒト活性化天然型ファクター８ｃの製造方法及びそれに用いる形質転換体
AU656311B2 (en) * 1989-11-17 1995-02-02 Chiron Corporation Protein complexes having factor VIII:C activity and production thereof
US20050209121A1 (en) * 1990-12-05 2005-09-22 Novozymes A/S Proteins with changed epitopes and methods for the production thereof
US20060122376A1 (en) * 1991-02-07 2006-06-08 Chiron Corporation Protein complexes having factor VIII:C activity and production thereof
US5661008A (en) * 1991-03-15 1997-08-26 Kabi Pharmacia Ab Recombinant human factor VIII derivatives
US6180371B1 (en) * 1996-06-26 2001-01-30 Emory University Modified factor VIII
US5888974A (en) * 1992-04-07 1999-03-30 Emory University Hybrid human/animal factor VIII
US5663060A (en) * 1992-04-07 1997-09-02 Emory University Hybrid human/animal factor VIII
US5744446A (en) * 1992-04-07 1998-04-28 Emory University Hybrid human/animal factor VIII
US5364771A (en) * 1992-04-07 1994-11-15 Emory University Hybrid human/porcine factor VIII
DK53792D0 (da) * 1992-04-24 1992-04-24 Novo Nordisk As Fremgangsmaade til fremstilling af proteiner
AU4535893A (en) * 1992-06-15 1994-01-04 Regents Of The University Of California, The Screening assay for the identification of immunosuppressive drugs
US5563045A (en) 1992-11-13 1996-10-08 Genetics Institute, Inc. Chimeric procoagulant proteins
WO1994029471A1 (en) 1993-06-10 1994-12-22 Genetic Therapy, Inc. Adenoviral vectors for treatment of hemophilia
SE504074C2 (sv) * 1993-07-05 1996-11-04 Pharmacia Ab Proteinberedning för subkutan, intramuskulär eller intradermal administrering
AU7254894A (en) * 1993-07-23 1995-02-20 Baxter International Inc. Activated human factor viii and method of preparation
US5576291A (en) * 1993-09-13 1996-11-19 Baxter International Inc. Activated factor VIII as a therapeutic agent and method of treating factor VIII deficiency
US5874562A (en) * 1995-06-07 1999-02-23 Progenitor, Inc. Nucleic acid encoding developmentally-regulated endothelial cell locus-1
US7041801B1 (en) 1995-06-07 2006-05-09 Vanderbilt University Antibodies binding to polypeptides encoded by developmentally-regulated endothelial cell locus-1
US5910481A (en) * 1995-11-13 1999-06-08 Immuno Ag Hybrid proteins with modified activity
US20040092442A1 (en) * 1996-04-24 2004-05-13 University Of Michigan Inactivation resistant factor VIII
US8183344B2 (en) * 1996-04-24 2012-05-22 University Of Michigan Inactivation resistant factor VIII
EP1754718B1 (en) * 1996-04-24 2011-03-23 The Regents Of The University Of Michigan Inactivation resistant factor VIII
US6458563B1 (en) * 1996-06-26 2002-10-01 Emory University Modified factor VIII
US7560107B2 (en) 1996-06-26 2009-07-14 Emory University Modified factor VIII
AU735763B2 (en) 1997-12-05 2001-07-12 Immune Response Corporation, The Novel vectors and genes exhibiting increased expression
US7820796B2 (en) * 1998-03-12 2010-10-26 Genetics Institute, Llc. Methods for producing Factor VIII proteins
ATE222925T1 (de) 1998-03-12 2002-09-15 Inst Genetics Llc Verbessertes verfahren zur herstellung von faktor viii
SI20626A (sl) 1998-09-21 2002-02-28 Genetics Institute, Inc. Postopki za zaviralno moduliranje imunskega odziva na terapevtske proteine
US6358703B1 (en) * 1998-12-10 2002-03-19 Bayer Corporation Expression system for factor VIII
US6197526B1 (en) 1999-01-04 2001-03-06 Dyax Corp. Polypeptides for binding human factor VIII and fragments of human factor VIII
US7112438B2 (en) * 1999-01-04 2006-09-26 Dyax Corp. Binding molecules for human factor VIII and factor VIII-like proteins
ATE365052T1 (de) 1999-02-22 2007-07-15 Univ Connecticut Neue albuminfreie faktor viii formulierungen
US6517830B1 (en) * 1999-08-05 2003-02-11 Emory University Compositions and methods for the expression of factor VIII polypeptides and uses therefor
US7615622B2 (en) * 2001-01-12 2009-11-10 University Of Maryland, Baltimore Methods and compositions for reducing heparan sulfate proteoglycan-mediated clearance of factor VIII
DE60234193D1 (de) * 2001-06-14 2009-12-10 Scripps Research Inst Stabilisierte faktor viii mit gentechnisch konstruierten disulfidbindungen
MXPA04005079A (es) * 2001-11-30 2004-08-19 Univ Emory Variantes del dominio c2 del factor viii.
US7041635B2 (en) 2003-01-28 2006-05-09 In2Gen Co., Ltd. Factor VIII polypeptide
EP2572732A1 (en) 2003-02-26 2013-03-27 Nektar Therapeutics Polymer-factor VIII moiety conjugates
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US20050123997A1 (en) * 2003-10-30 2005-06-09 Lollar John S. Modified fVIII having reduced immunogenicity through mutagenesis of A2 and C2 epitopes
US7211559B2 (en) 2003-10-31 2007-05-01 University Of Maryland, Baltimore Factor VIII compositions and methods
DK1750733T3 (da) * 2004-05-03 2014-01-20 Univ Emory FREMGANGSMÅDE TIL INDGIVELSE AF SVINE-B-DOMÆNELØS fVIII
US20060080848A1 (en) * 2004-10-19 2006-04-20 Lace Charles R Wheel blade sight
EP1707634A1 (en) 2005-03-29 2006-10-04 Octapharma AG Method for isolation of recombinantly produced proteins
EP1739179A1 (en) 2005-06-30 2007-01-03 Octapharma AG Serum-free stable transfection and production of recombinant human proteins in human cell lines
GB0606190D0 (en) 2006-03-28 2006-05-10 Isis Innovation Construct
US7645860B2 (en) 2006-03-31 2010-01-12 Baxter Healthcare S.A. Factor VIII polymer conjugates
JP2009542225A (ja) 2006-06-30 2009-12-03 ザ・リージエンツ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ミシガン 組換え法によりｆｖｉｉｉタンパク質を生産する方法
FR2913020B1 (fr) * 2007-02-23 2012-11-23 Biomethodes Nouveaux facteurs viii pour le traitement des hemophiles de type a
ES2427890T3 (es) 2007-12-21 2013-11-04 Cangene Corporation Formulaciones estabilizadas de factor IX que contienen trehalosa
SI2574677T1 (sl) 2007-12-27 2017-11-30 Baxalta GmbH Procesi celične kulture
KR100981092B1 (ko) 2008-02-29 2010-09-08 고려대학교 산학협력단 제8 혈액응고 인자와 폰 빌리 블란트 인자 변이체의 재조합발현 벡터 시스템
WO2010045321A2 (en) 2008-10-15 2010-04-22 Baxter International Inc. Pegylation of recombinant blood coagulation factors in the presence of bound antibodies
EA020843B1 (ru) 2009-02-03 2015-02-27 Амуникс Оперейтинг Инк. Удлиненные рекомбинантные полипептиды и содержащие их композиции
JP5936112B2 (ja) 2009-02-11 2016-06-15 アルブミディクス アクティーゼルスカブ アルブミン変異体及び複合体
US8691211B2 (en) * 2009-03-10 2014-04-08 Puget Sound Blood Center Suppression of immune response to factor VIII in hemophilia A patients
JP2013502458A (ja) 2009-08-24 2013-01-24 アムニクス オペレーティング インコーポレイテッド 凝固第ｖｉｉ因子組成物ならびにそれを製造および使用する方法
RU2607374C2 (ru) 2009-10-30 2017-01-10 Новозаймс Байофарма Дк А/С Варианты альбумина
US20130116182A1 (en) * 2009-11-13 2013-05-09 Kathleen Pratt Factor VIII B Cell Epitope Variants Having Reduced Immunogenicity
CN102791285A (zh) 2009-12-06 2012-11-21 比奥根艾迪克依蒙菲利亚公司 因子VIII-Fc嵌合多肽和杂交多肽及其使用方法
WO2011075185A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Oligasis Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates
WO2011095604A1 (en) 2010-02-04 2011-08-11 Octapharma Biopharmaceuticals Gmbh Half-life prolongation of proteins
EP2556087A1 (en) 2010-04-09 2013-02-13 Novozymes Biopharma DK A/S Albumin derivatives and variants
SG186875A1 (en) 2010-07-09 2013-02-28 Biogen Idec Hemophilia Inc Chimeric clotting factors
WO2012006623A1 (en) 2010-07-09 2012-01-12 Biogen Idec Hemophilia Inc. Systems for factor viii processing and methods thereof
SG10201509149VA (en) 2010-11-05 2015-12-30 Baxter Int A new variant of antihemophilic factor viii having increased specific activity
BRPI1105317A2 (pt) 2011-01-24 2013-04-30 Fundacco Hemoct De Ribeirco Preto produÇço estÁvel e em larga escala de fviii humano em linhagem celular humana sk-hep-1
EP2717898B1 (en) 2011-06-10 2018-12-19 Bioverativ Therapeutics Inc. Pro-coagulant compounds and methods of use thereof
PT2729161T (pt) 2011-07-08 2019-04-01 Bioverativ Therapeutics Inc Polipéptidos fator viii híbridos e quiméricos, e métodos de utilização dos mesmos
EP2737311B1 (en) 2011-07-25 2020-12-02 Bioverativ Therapeutics Inc. Assays to monitor bleeding disorders
EP2768522B1 (en) 2011-10-18 2016-07-27 CSL Behring GmbH Use of sulfated glycosaminoglycans for improving the bioavailability of factor viii
US9511123B2 (en) 2011-10-18 2016-12-06 Csl Behring Gmbh Combined use of a sulfated glycosaminoglycan and a hyaluronidase for improving the bioavailability of factor VIII
CA2850579A1 (en) 2011-10-18 2013-04-25 Carsten Horn Method for improving the stability of purified factor viii after reconstitution
US20140315817A1 (en) 2011-11-18 2014-10-23 Eleven Biotherapeutics, Inc. Variant serum albumin with improved half-life and other properties
CN108465106B (zh) 2012-01-12 2022-05-27 普吉特海湾血液中心 降低经受因子viii疗法的个体中针对因子viii的免疫原性的方法
PL2804623T3 (pl) 2012-01-12 2020-03-31 Bioverativ Therapeutics Inc. Chimeryczne polipeptydy czynnika viii i ich zastosowania
KR102097263B1 (ko) 2012-02-15 2020-04-06 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. Viii 인자 조성물 및 이를 제조하고 사용하는 방법
EP3549953A1 (en) 2012-02-15 2019-10-09 Bioverativ Therapeutics Inc. Recombinant factor viii proteins
PL2825556T3 (pl) 2012-03-16 2018-10-31 Albumedix A/S Warianty albuminy
CN104519897A (zh) 2012-06-08 2015-04-15 比奥根艾迪克Ma公司 促凝血化合物
EP2863940A4 (en) 2012-06-08 2016-08-10 Biogen Ma Inc CHIMERIC COAGULATION FACTORS
US10023628B2 (en) 2012-07-06 2018-07-17 Bioverativ Therapeutics Inc. Cell line expressing single chain factor VIII polypeptides and uses thereof
CN104661674A (zh) 2012-07-11 2015-05-27 阿穆尼克斯运营公司 具有xten和血管性血友病因子蛋白的因子viii复合物、及其用途
EP2877202A4 (en) 2012-07-25 2016-06-01 Biogen Ma Inc BLOOD FACTOR MONITORING TEST AND USES THEREOF
US10391152B2 (en) 2012-10-18 2019-08-27 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of using a fixed dose of a clotting factor
US20150266944A1 (en) 2012-10-30 2015-09-24 Biogen Idec Ma Inc. Methods of Using FVIII Polypeptide
CA2890766A1 (en) 2012-11-08 2014-05-15 Novozymes Biopharma Dk A/S Albumin variants
HRP20210185T4 (hr) 2013-02-15 2024-10-11 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimizirani gen faktora viii
TWI745671B (zh) 2013-03-15 2021-11-11 美商百歐維拉提夫治療公司 因子ｉｘ多肽調配物
JP6330026B2 (ja) 2013-03-15 2018-05-23 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 第ｖｉｉｉ因子ポリペプチド製剤
KR102714760B1 (ko) 2013-06-28 2024-10-11 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. Xten을 지닌 트롬빈 절단가능한 링커 및 이의 용도
EP3043813B1 (en) 2013-08-08 2021-01-13 Bioverativ Therapeutics Inc. Purification of chimeric fviii molecules
US10548953B2 (en) 2013-08-14 2020-02-04 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor VIII-XTEN fusions and uses thereof
WO2015035342A2 (en) 2013-09-08 2015-03-12 Oligasis Llc Factor viii zwitterionic polymer conjugates
EP3065769A4 (en) 2013-11-08 2017-05-31 Biogen MA Inc. Procoagulant fusion compound
EP4332839A3 (en) 2013-12-06 2024-06-05 Bioverativ Therapeutics Inc. Population pharmacokinetics tools and uses thereof
KR102409250B1 (ko) 2014-01-10 2022-06-14 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 인자 viii 키메라 단백질 및 이들의 용도
AU2015214245B2 (en) 2014-02-04 2020-09-10 Biogen Ma Inc. Use of cation-exchange chromatography in the flow-through mode to enrich post-translational modifications
MA40864A (fr) 2014-10-31 2017-09-05 Biogen Ma Inc Hypotaurine, gaba, bêta-alanine et choline pour la régulation de l'accumulation de sous-produits résiduaires dans des procédés de culture de cellules mammifères
CN104630131B (zh) * 2015-01-15 2017-08-15 上海交通大学 一种稳定表达人凝血八因子的cho细胞株及其应用
MX2018001497A (es) 2015-08-03 2018-05-15 Bioverativ Therapeutics Inc Proteinas de fusion de factor ix y metodos para producirlas y usarlas.
JP7007261B2 (ja) 2015-08-20 2022-01-24 アルブミディクス リミティド アルブミン変異体及びコンジュゲート
EP3167877A1 (en) 2015-11-12 2017-05-17 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Method for the production of freeze-dried pellets comprising factor viii
TWI823830B (zh) 2015-11-13 2023-12-01 日商武田藥品工業股份有限公司 用於ａ型血友病基因治療之編碼表現增加之重組ｆｖｉｉｉ變異體之病毒載體
BR112018009717B1 (pt) 2015-11-13 2021-12-14 Takeda Pharmaceutical Company Limited Polinucleotídeo, vetor de vírus adeno-associado, partícula de um vírus adeno-associado, métodos para produzir uma partícula de vírus adeno-associado e para transduzir uma célula hospedeira, e, uso de uma partícula de vírus adeno-associado
JP7217630B2 (ja) 2016-02-01 2023-02-03 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 最適化第ｖｉｉｉ因子遺伝子
EP3476937A4 (en) 2016-06-24 2019-12-04 Mogam Institute for Biomedical Research CHIMERIC PROTEIN WITH FVIII AND VWF FACTORS AND USE THEREOF
JP2019536794A (ja) 2016-12-02 2019-12-19 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 凝固因子に対する免疫寛容を誘導する方法
US12161696B2 (en) 2016-12-02 2024-12-10 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of treating hemophilic arthropathy using chimeric clotting factors
CN111247251A (zh) 2017-08-09 2020-06-05 比奥维拉迪维治疗股份有限公司 核酸分子及其用途
EP3687580A1 (en) 2017-09-27 2020-08-05 Sigilon Therapeutics, Inc. Methods, compositions, and implantable elements comprising active cells
JP2021512126A (ja) 2018-02-01 2021-05-13 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 第ｖｉｉｉ因子を発現するレンチウイルスベクターの使用
EP3773517A1 (en) 2018-04-04 2021-02-17 Sigilon Therapeutics, Inc. Implantable particles and related methods
WO2019195056A1 (en) 2018-04-04 2019-10-10 Sigilon Therapeutics, Inc. Methods, compositions, and implantable elements comprising stem cells
MX2020012397A (es) 2018-05-18 2021-04-12 Bioverativ Therapeutics Inc Metodos de tratamiento de la hemofilia a.
BR112021000695A2 (pt) 2018-07-16 2021-04-20 Baxalta Incorporated métodos para tratar hemofilia a e para monitorar a eficácia da terapia gênica de fator viii de hemofilia a.
CN113227385B (zh) 2018-08-09 2024-12-24 比奥维拉迪维治疗股份有限公司 核酸分子及其用于非病毒基因疗法的用途
UY38389A (es) 2018-09-27 2020-04-30 Sigilon Therapeutics Inc Dispositivos implantables para terapia celular y métodos relacionados
TWI851647B (zh) 2019-01-16 2024-08-11 日商武田藥品工業股份有限公司 用於a型血友病基因治療之編碼表現增加之重組fviii變異體的病毒載體
AU2020298233A1 (en) 2019-06-19 2022-01-20 Bioverativ Therapeutics Inc. Recombinant factor VIII-Fc for treating hemophilia and low bone mineral density
CN114786731A (zh) 2019-10-10 2022-07-22 科达制药股份有限公司 治疗眼部病症的方法
WO2021119357A2 (en) 2019-12-12 2021-06-17 Baxalta Incorporated Gene therapy of hemophilia a using viral vectors encoding recombinant fviii variants with increased expression
CA3183557A1 (en) 2020-06-24 2021-12-30 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods for the removal of free factor viii from preparations of lentiviral vectors modified to express said protein
US20240269241A1 (en) 2021-06-14 2024-08-15 Takeda Pharmaceutical Company Limited Gene therapy of hemophilia a using viral vectors encoding recombinant fviii variants with increased expression
AR126846A1 (es) 2021-08-23 2023-11-22 Bioverativ Therapeutics Inc Genes del factor viii optimizados
CN118019758A (zh) 2021-09-30 2024-05-10 比奥维拉迪维治疗股份有限公司 编码免疫原性降低的因子viii多肽的核酸
WO2024081309A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Sigilon Therapeutics, Inc. Engineered cells and implantable elements for treatment of disease
WO2024081310A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Sigilon Therapeutics, Inc. Engineered cells and implantable elements for treatment of disease
WO2025008774A1 (en) 2023-07-05 2025-01-09 Takeda Pharmaceutical Company Limited Viral vectors encoding recombinant fviii variants with increased expression for gene therapy of hemophilia a

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0150735B2 (en) * 1984-01-12 2004-01-07 Chiron Corporation Protein composition exhibiting coagulation activity and method for the preparation thereof
ZA852099B (en) * 1984-03-26 1985-12-24 Meloy Lab Recombinant factor viii-c.
IL74909A (en) * 1984-04-20 1992-01-15 Genentech Inc Preparation of functional human factor viii and dna sequences,expression vectors,transformed microorganisms and cell lines used therein

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS62282594A (ja) * 1986-01-27 1987-12-08 カイロン　コーポレイション ヒト第８：ｃ因子活性を有する組換えタンパク複合体の生産
JPS63503275A (ja) * 1986-08-01 1988-12-02 バイオジェン　エヌ　ブイ ファクター８：ｃの製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP0218712A1 (en) 1987-04-22
EP0218712A4 (en) 1987-10-27
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DE3683980D1 (de) 1992-04-02
ES553935A0 (es) 1988-02-16
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US4868112A (en) 1989-09-19
DK601786A (da) 1986-12-12
EP0218712B1 (en) 1992-02-26
ES8801674A1 (es) 1988-02-16
JPH0788399B2 (ja) 1995-09-27
MX9203440A (es) 1992-07-01
CA1341174C (en) 2001-01-30
WO1986006101A1 (en) 1986-10-23
ATE72838T1 (de) 1992-03-15
DK166457B1 (da) 1993-05-24

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