JPS61502210A - 白血球の３つの母集団についての血液学規準コントロール流体懸濁物およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 白血球の３つの母集団についての血液学コントロール組成物およびその調製方法 並びに全血液コントロール　システムにおける使用本発明は血液学コントロール 組成物、および該組成物をクールタータイプの粒子分析手段についての標準品に 使用する方法に関する。特に、本発明は大白血球の３つの主成分、すなわち、リ ンパ球、単核球（ｍｏｍｏｎｕｃｌｅａｒ　ｃｅｌｌｓ　）および顆粒球、およ び必要に応じて既知の赤血球および小板コントロールと適合するそのサブ−区分 （ｓｕｂ　ｄｉｖｉｓｉｏｎ）を模擬する３成分システムに関する。

単核球は単球、および多数の成熟および未熟形態のリンパ球および未熟骨髄法お よび赤血球を包含する単一有核血球である。変形クールター　カウンター　モデ ルＳ　プラス（ＣＯ［］ＬＴＥＲＣ０ＵＮＴＥＲＭｏｄｅｌ　Ｓ　Ｐｌｕｓ　） は正常および病理学的条件下における循環血液に見出される単核球の普通グルー プからの成熟リンパ球および多形顆粒球の範囲を定めることができる。これらの 循環単核球血球は前骨髄球、骨髄法および芽細胞並びに単球を包含している。血 球は通常の造血条件下でもっとも普及されている単核球の母集団であるから、９ ０〜１６０　ｆＬ領領域単球領域として称することができる。

血液学において電子粒子計数器を使用することはよく知られている。米国特許第 ２，６５６．５０８号明細書にはこの目的のためにクールター原理を利用する基 本装置が記載されている。米国特許第３，７５７，２１３号明細書には限界値回 路（ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ　ｃｉｒｃｕｉｔｒｙ）を組込んだ数個の上記基本装置 について記載されている。限界値回路は悲濁液における重要でない粒子の雑音や バックグランド残部（ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ　ｄｅｂｒｉｓ）により生ずる無作 為な振巾信号を排斥する。また、計算された粒子の大きさ範囲を制限するのに用 いられることができる。数理的に関連したダイアル　セッテング（ｄｉａｌ　ｓ ｅｔｔｉｎｇｓ）に区分されたダイアルを有する調節しうる限界値回路が一般に 使用されている。

この事はクールター　タイプの電子粒子計数器の使用を包含する例に主として指 向されるけれども、ここに記載されている粒子コントロール（ｒａｒｔｉｃｌｅ 　ｃｏｎｔｒｏｌｓ）およびその使用方法は、一般に粒子計数器に広く利用され ている。

４以外に、粒子の大きさ、質量または粒子体積の信号表示に電子的に応答する電 子ジスクリミネーター回路（「限界値」）を用いて種々の大きさの粒子を区別す る任意の他のタイプの計数器を包含することを理解すべきである。［クールター （ＣＯＵＬＴＥＲ）　Ｊおよび「クールター　カウンター（ＣＯ１ｌＬＴＥｌ？ 　Ｃ０１ｌＮＴＢＲ）　ＪはＣｏｕｌｔｅｒ　Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ　、　Ｉ ｎｃ。

の登録商標である。

赤血球、白血球および小板（血小板）を計算する検度チェ７り技術（Ｃａｌｉｂ ｒａｔｉｏｎ　ｃｈｅｃｋ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）は良く開発されている。ま た、検度をチェックするのに用いる材料（以後、コントロールと称する）を血液 学器機を目盛定めするのに用いることができる。一般に、コントロールを用いる 技術は、計算する前に、通常、稀釈剤で実質的に稀釈するコントロール調整にお ける液体賦形剤に懸濁する粒子の既知の母集団を計算することを包含している。

しかしながら、これまでは、白血球の３・つのサブ−グループ、すなわち、リン パ球、単核球および顆粒球を自動的に計算する装置が開発されていないことから 、これらの３つのサブ−グループを用いる場合のコントロールが開発されていな かった。

コントロール生成物は、新鮮な血液の試験試料が問題とする測定に対してどのよ うな成分からなるかを比較基準上に正確に指示できるようにする必要がある。更 に、赤血球の如き血液成分が徐々に溶血を起こし、かつ供血者から採取後時間内 に大きさおよび形状に変化を生ずるから、コントロール生成物に対して新鮮な血 液を模擬することが大切である。同様に、白血球は退化変化（ｄｅｇｅｎｅｒａ ｔｉｖｅ　ｃｈａｎｇｅｓ）を受ける。

品質制御長さくｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｌｏｎｇ）は臨床血液学にお いて必要な常用手段である。赤血球および白血球の計算における正確さおよび患 者の血清のヘマトクリットおよびヘモグロビン測定における正確さは適当な制御 標準の使用によって、いくぶん、影響を受ける。このために、顕微鏡の古典的な 方法によるような粒子計算の手動技術の正確さは、測定すべき未知試料と比較す る既知濃度の粒子を含有する、いわゆる「盲（ｂｌｉｎｄ）　Ｊ試料または対照 標準を技術者に与えることによってチェックすることができる。現在、利用しう る種々のタイプの粒子計算用の自動装置による場合、いままでは器機の障害の生 ずる可能性があることから、また制御標準の使用による品質制御が必要である。

この結果、患者の診断に使用される血液学的測定において正確で、かつ確実にチ ェックできることが重要である。自動粒子計算装置に対する品質制御プログラム を維持する慣習方法は全血液標準として新鮮な人血液を得ることからなる。しか しながら、この新鮮な血液は１日しか使用できない。この結果、新鮮な人血液を 必要としない長時間維持できる血液製品が開発されている。

米国特許第４．４８５．１７５号明細書には、クールター　カウンター　モデル 　Ｓ　プラス自動血液計数器を用いる白血球の３つの母集団の示差測定について 記載されている。従って、現在市販されているクールター　カウンターの分析計 によって代表される電子粒子計数器については、限界検定（ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ 　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ）および付加作動性能の信頬しうるチェックが必要と なる。更に、操作者は白血球の３つの母集団を機械的に計算する体積範囲を同定 および証明することができる。更に、当業技術において、長い時間使用期間にわ たって装置安定性を証明する確実な方法が必要とされている。

人リンパ球、単核球および顆粒球は特定の大きさ分布範囲を有しており、安定化 後、（例えばホルムアルデヒドの如き固定剤による）、稀釈剤におけるこれらの 応答性は適当な大きさジスクリミネーターを応答することができない。

この事は適当な器機操作の評価を無能にする。白血球の各母集団についての上限 および下限の大きさ限界値は基準コントロール材料に示されるようにする必要が ある。更に、基準コントロール材料における各白血球母集団の平均血球体積は通 常の人血液のかかる平均血球体積に著しく近づけるようにする。それ故、上限お よび下限の大きさ限界値および平均血球体積を特定する場合には、コントロール 材料の体積分布ヒストグラムに対する実質的必要性を新鮮な大細胞の通常の分布 に近づけるようにする。この体積分布は、全白血球数、および大白血球に対する 異常に低い１１通常のおよび異常に高い条件を示すすべての３つの母集団にいて の割合の範囲に関係なく比較的に一定に維持する必要がある。それ故、基準コン トロール懸濁物の製造に用いる保存プロセスでは血球（ｃｅｌｌｓ）の有意な収 縮または膨張を生じないようにする必要がある。また、基準コントロール材料の 老化が体積分布ヒストグラム特性または他のパラメータ・−を悪くしないように する必要がある。多パラメーター器機についての全血液基準コントロールにおけ る白血球成分に対する他の要件としては、血球が溶解剤（ｌｙｔｉｃｒｅａｇｅ ｎｔ）により完全に溶解しないようにすることである。

多数個にわたる血液学的測定を実施できる自動装置の高められた使用によって、 および自動細胞計算技術の導入によって、問題に対する解決には「現実の」大白 血球を安定化するもっとも効果的な手段をめないが、しかし生成物を生成する仕 様書を満たす代用物で１替える。このために、有用なコントロールまたはカリブ レーク−に転化できる動物細胞が考察されている。

従来技術に対する種々の引用例を本明細書に示す。かかる従来技術に関する他の 情報を本発明の十分な理解に必要とする程度に説明するために、次に示す引用例 ：米国特許第４，１７９，３９８　；４，２１３，８７６　；４，２６４．４７ ０　；４，２９９，７２６　ｉｄ、３８９，４９０　；　４．４０５，７１９お よび４，４８５，１．７５号明細書をここに記載する。

本発明の新規な特徴は白血球の３つの母集団に対する安定で、再生しうる血液学 コントロールを調整することである。本発明の３成分白血球システムにおいて、 哺乳動物、例えば人の赤血球からの模擬リンパ球；鳥類、例えば七面鳥の赤血球 からの模擬単核球；および魚類、例えばツノザメ（ｎ＋ｕｒｓｅ　５ｈａｒｋ） （ギングリモストマ　サータム）（Ｇｔｎｇｌｙｍｏｓｔｏｍａｃｉｒｒａｔｕ ｍ）の赤血球からの模擬顆粒球を調整する方法を提供する。更に、本発明におい ては処理前における赤血球の老化および固定剤の温度および濃度の制御による限 界内に予め定めされた大きさの変質赤血球を調整する新規な方法を包含する。

本発明においては、ツノザメ　（キングリモストマ　サータム）が大顆粒球より 僅かに大きい大きさ範囲に通常存在する赤血球を有すること、および人顆粒球基 準コントロールとして使用するために、これらの赤血球を体積分布において全血 液中の大顆粒球の体積分布に等しくするように変質および固定できることを見出 した。かように調整された顆粒球類似物は、使用の際に、基準コントロールに単 独で維持できるように、または入車核球を模擬する変質および固定七面鳥赤血球 および人リンパ球を模擬する変質および固定人界血球を含有する３形態自車球組 成物のように安定で、かつ再生することができる。また、白血球類似物は、白血 球成分のみならず赤血球および小板パラメーターを定める単一の多くの分析血液 学基準コントロールに含めることができる。３つの白血球母集団に対する割合お よび全血球数は人血液において病理学的および正常の条件を示すように調節でき る。これらの組成物は、特に、クールター原理を用いる自動粒子分析器機に対す るコントロールおよびキャリブレータ−組成物に用いることができる。

本発明の方法により処理した血球およびこの血球を含む組成物は血液学的測定に 必要とされているようなチェ７りおよびバランスの優れたシステムを得るこがで きる。

本発明の具体例を次に示す添付図面を参照して説明する：第１Ａおよび１８図は クールター　カウンター　モデル　Ｓプラス自動血球計数器において得た試料の 白血球分布ヒストグラムを比較的に示している。

第１Ａ図は正常の血液試料がら得たヒストグラムを示している。

第１Ｂ図は本発明の血液学コントロール　システムおよび方法から得たヒストグ ラムを示している。

本発明は十分な融通性を有し、第１Ｂ図に示すより大きくまたは小さくできるリ ンパ球、単核球および顆粒球母集団を調製できる。それ故、大きさの変化は大病 理学的条件に特徴づけられる異常な白血球大きさ分布を招く。特有の大きさ範囲 および体積分布を基礎として血液中の他の血球から白血球の３つの母集団を識別 する大白血球の自動示差計算のための任意のシステムは、使用される基準コント ロール材料を正常の人血液における個々の血球の大きさ範囲および体積分布特性 に密接に模擬することが必要となる。問題は自動計算装置の場合、使用する際に 、コントロールに必要とされるように利用するのに十分可能な量で与えられる大 きさの血球を正確に生成する方法を見出すことである。

米国特許第４．４８５．１７５号明細書にはモデル　Ｓ　プラス■　シフ（Ｍｏ ｄｅｌ　Ｓ　ＰＬＩＩＳ　ＩＶ　ｄｉｆｆ）およびモデ７Ｌ／　Ｓ　プラス■と して現在、市販されている１つのタイプの改良型クールター　カウンター　モデ ル　Ｓ　プラス器機を用いて白血球のリンパ球、単核球および顆粒球母集団の３ 一体積示差測定（ｔｈｒｅｅ−ｖｏｌｕｍｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ、ｉｄ　ｄｅ ｔｅｒｍｉｎ＋ａｔｉｏｎ）のための方法および試薬システムが記載されている 。本発明の手順により、白血球の３クラスをほぼフェムトリフドル（ｆＬ）で計 算すると次のようである：リンパ球　３５〜９０±３　ｆＬ 単核球　９０〜１６０±３　ｆＬ 顆粒球　１６０〜４５０±３　ｆＬ 「単核球」として指定される範囲に分類され、かつ計算される白血球は単球を含 んでいる。

本発明の手順は、異なる供給源から処理された赤血球をおおくのタイプの血球計 算器機のために約２５ｆＬ〜７００ｆｌの範囲の多くの限界値設定に一致するよ うにする。本発明を利用できる他のクールター　カウンター器機はモデル　Ｓお よびモデル　Ｓ　プラス　タイプである。クールターカウンター　モデル　Ｓは ２５ｆＬから無限の白血球を計算することができる。他のタイプのクールター　 カウンター　モデル　Ｓ　プラス器機は約４５ｆＬ〜約９９ｆＬのリンパ球を計 算し、および約９９ｆＬから無限の単核球および顆粒球を計算することができる 。

すべての白血球を単一の、全母集団として計算する自動計数器機のためのコント ロール組成物を調製する方法は知られているけれども、白血球母集団の個々の成 分を示差計算（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｃｏｕｎｔｉｎｇ）するための血球 コントロールを調製する方法について記載されていない。電子粒子計数器の限界 値設定をチェックするために、リンパ球、単核球および顆粒球を含む主な白血球 成分のそれぞれに対する類似体を作る必要がある。

全血液コントロールにおける粒子分析器機の性能特性をチェックするための従来 入手しうる基準コントロール生成物は全白血球計算を評価することであった。唯 一の要件は最小限界値、例えは３５〜４５　ｆ　Ｌ以上の大部分の粒子を有する 安定な非溶解性（ｎｏｎ−１ｙｓｉｂｌｅ）成分であった。しかしながら、広く 知られている多くの白血球母集団分析は特定大きさ増分（ｓｐｅｃｉｆｉｃ　５ ｉｚｅ　ｉｎｃｒｅｍｅｎｔｓ）の粒子を必要とする。

更に、これから得られる基準値において実質的に変化することなく長時間にわた って使用できる上記基準コントロールを必要とする。

米国特許第３，８７３，４６７号明細書には血漿の代わりに、安定化媒体および 存在するすべての白血球の代わりに高められた平均血球体積を有する固定膨張赤 血球を用いて安定化した赤血球を用いる白血球に対するコントロール組成物がｔ ８ＦｊＢＨ６１−５０２２１０（５）記載されている。約５０％以上の体積に膨 張する場合には、血球の比重は１．０６〜１．０８の範囲に減少する。

本発明においては、固定人界血球を白血球の少ないリンパ球部分で置換し、この 場合これらの模擬リンパ球を２種の大きい大きさの白血球、すなわち、単核球お よび顆粒球を示す大きい固定動物赤血球と混ぜ合わせる。この手段において、白 血球のすべての３つの母集団は同一である。すべての場合において、３種のを推 動物からの赤血球を固定し、このために同じ血液コントロール試料における白血 球パラメーターを定める場合に、かがる赤血球を溶解しないようにする。更に、 ３つの母集団のそれぞれについての計算は元の体積分布において大部分移動させ ないように他方に対する割合に変化を与えるようにできる。

リンパ球類似物の大きさを制御する本発明の第一の方法では非固定人赤血球の大 きさ、固定液の容量オスモル濃度および固定温度の変化を適当に選択する。固定 前にその浸透環境を処理することにより血球の収縮または膨張は、混合物中の未 処理人界血球の溶解中に変化した血球の安定性を維持するのに必要とされる固定 方法の臨界性による制限を有する。

また、かかる赤血球は必要とする大きさに近づける過剰血球の会合または溶血さ せることな（収縮または膨張させるように処理する必要がある。

本発明においては、人リンパ球を模擬する固定人界血球、入車核球を模擬する七 面鳥からの固定赤血球の懸濁物および大顆粒球を模擬するツノザメからの安定化 赤血球の懸濁物を混合して調製した組成物を例示でき、これらすべては液体媒体 において大白血球を模擬する単一組成物を得るような割合で混合する（第１Ｂ図 参照）。次いで、この白血球類似組成物を溶解すべき大赤血球と混ぜ合わせ、小 板または小板類似物を安定化して単一の多くの分析基準コントロールを得る。模 擬白血球母集団の割合は模擬白血球の各タイプの大きさ分布に影響を与えない異 常に低い、通常のおよび高い条件を示すように調節できる。生成工程は異常な大 白血球条件で特徴づけられる白血球の異なるタイプを示す粒子を生成できるよう に変更する。

また本発明の好適例においては、媒体を米国特許第４．２９９，７２６および４ ，３５８，３９４号明細書に記載するようにして作り、および小板を米国特許第 ４，２６４，４７０　ｉ４，３８９，４９０　；または４，４０５，７１９号明 細書に記載されている方法のいずれか一つの方法によって安定化する。上記米国 特許のすべてはクールター　エレクトロ二フク　ィンコーボレーテット（Ｃｏｕ ｌｔｅｒ　Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ　Ｉｎｃ、）に譲渡されている。

本発明は１種または２種以上の動物源からの赤血球についての選択および特定処 理工程を含んでいる。一般に、赤血球全体で約３０〜５０％以上収縮または膨張 することはできない。このために、第１八および１８図に示すような各母集団に 近い血球で出発させる必要がある。本発明の要点は上述する供給源からの赤血球 が狭い範囲の平均血球体積を有する相当する人血法の大きさに近づける過剰の血 球会合および溶血させることなく収縮または膨張および固定させる適当な特性を 有することを見出したことにある。

採血工程において、赤血球を生理的食塩溶液（塩化ナトリウム）に溶解したエチ レンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のアルカリ金属塩の如き抗凝固剤に懸濁させる 。過度の溶血または血球会合を起こさない限り、他の抗凝固剤および塩を用いる ことができる。

ＥＤＴＡについて、本発明においては、抗凝固剤が濃度およびさらされる時間の 関数として血球の大きさに影響を与え゛ることを見出した。例えば、２．５〜１ ０ｍＨのＥＤＴＡに懸濁した血球は、同じ大きさを採血後２４時間までに保持す る。１０ｍＭ以上、例えば、２０ＩＩＭのＥＤＴＡ濃度において、血球は２４時 間前に膨張し始める。２４時間後、血球の大きさはＥ　Ｄ　Ｔ　Ａ　濃度および さらされる時間によって増加する。ＥＤＴＡｗＬ度およびさらされる時間の作用 による血球大きさの維持または増加は固定によって保持できる。ＥＤＴＡは細胞 膜構造の有意に破壊でき、この破壊は時間の関数によって増大するものと思われ る。それ故、固定前に抗凝固剤濃度およびさらされる時間を制御することによっ て血球大きさを操作することができる。

すべての白血球類似物母集団に対して一般的な生成手順を用いるために、固定前 に収縮する赤血球を用いるのが好ましい。固定時において、高張性（ｈｙｐｅｒ ｔｏｎｉｃｉｔｙ）を維持して血球の如何なる膨張をも防止することが重要であ る。

食塩溶液の有効な最終濃度は特定白血球母集団を模擬するのに必要とする収縮程 度により影響されるが、正常の血清の濃度と同等かまたはそれより４倍までの範 囲にする必要がある。固定剤の添加は固定溶液の緊張性（容量オスモル濃度）を 高める。

収縮血球の固定は細胞膜を強硬にし、かつ膜の生成分解（ｂ　ｉ　］　ｄｅｇｒ ａ　ｔ　１ｏｎ）を抑制するのに重要である。この事は血球の懸濁物をホルムア ルデヒドの如きモノアルデヒドまたはグルタルアルデヒドの如きジアルデヒドを 包含する有機アルデヒドの溶液と接触させることによって達成する。グルタルア ルデヒドはホルムアルデヒドより速やかに反応するから、好ましいアルデヒドで ある。グルダルアルデヒドは、その最終濃度を約０．１〜１．０％の範囲にする 限りにおいて、最終濃度より高い濃度で添加することができる。上述する例にお いて、グルタルアルデヒドの代わりにホルムアルデヒドを用いる場合にはホルム アルデヒドの最終濃度を２．５〜１０％にし、好ましい濃度は５％である。適当 なアルデヒドおよびその濃度を選択する場合における唯一の実際的制限としては 過度の血球会合および溶血、および潜在的に望ましくない電解作用を避けること である。各白血球成分に対して推薦できる特定条件は後述する実施例において示 す。

本発明においては、狭い分布中の赤血球の最小の大きさを新鮮な血球、または静 脈切開後４日までに老化した血球を有する任意の種類の血液によって、新鮮血の 採血に用いられる低濃度の抗凝固剤によって得られることを見出した。

高濃度のＥＤＴＡば、特定の大きさ範囲を探求するための判定基準に適合しない 大きい非固定および固定血球を生ずる。

好適例においては、血球をグルタルアルデヒドを含有する冷却した高張食塩水に 添加する。低温度ではクールターカウンター分析器の如き分粒装置ｆ（ｓｉｚｉ ｎｇ　ａｐｐａｒａｔｕｓ）で測定されるように定量的示差血球（ｑｕａｌｉｔ ａｔｉｖｅｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｙｔｔｅｌｌ）が得られる。定量的示差には 常温での固定と比較して低いするまで明確にならない。「ライス　Ｓ」および「 イソトン」はクールター　エレクトリックス　インコーボレーテントの登録商標 である。

固定後、血球は重力によって沈降し、液相から分離し、次いでりん酸塩緩衝食塩 溶液で洗浄し、貯蔵溶液に入れる。

全体で３種の白血球成分は、使用する場合に、赤血球に対して知られている溶解 剤と単一基準コントロールに組み合わせるから、稀釈剤に対する処方は白血球類 似物の全３成分を測定する場合と同様である。この稀釈剤についての好ましい処 方および白血球全体に後で添加する未処理赤血球を溶解するのに使用する溶解剤 についての処方を次に示す： 稀　釈　剤　好適範囲　一般的範囲 １、塩酸プロ力イン　０．１１　ｇ　／Ｉ、０．０５〜０．２５ｇ　／Ｌ３、ジ メチロール尿素　１．０　ｇ／Ｌ　Ｏ，５〜２．５　ｇ　／Ｌ溶解剤 ２、テトラデシルトリメル　３．７　ｇ／Ｌ　２　〜６ｇ／Ｌアンモニウム　ロ マイド ３、’ｙ７７化カリウム３００　ｍ　ｇ　／Ｌ　１２Ｓ　〜１２５０ｍｇ／Ｌ４ 、十分量〜１１の蒸留水 ６ケ月間までの安定性を有する血液学的基準コントロールについての媒体はラク トース、殺菌剤および抗生物質、およびプリン　ヌクレオシド、胆汁酸塩、およ びコール酸誘導体、抗ヒスタミン特性を有するフェノサイアジン化合物およびそ の塩、および麻酔特性を有する４−アミノ安息香酸エステルおよび誘導体および その塩、またはその混合物の如き補充剤を含んでいる。上記媒体については米国 特許第４，２１３，８７６　；４，２９９．７２６　；および４，３５８，３９ ４号明細書に記載されている。

次に示す特定の例については米国特許第４，２９９，７２６号明細書に記載され ている： 赤血球−好適配合における長期間安定性を付与する安定化媒体 概算量　リフドル配合 １、蒸留水　５００　ｎ＋β ２、プロピル　パラベン　０．３〜１．０　ｇｍ３、メチルハラヘン０．５〜１ ．０ｇ１１４、塩酸プロカイ７　０．１〜０．５　ｇｌ１１５、デスオキシコー ル酸　０．１〜０．９　ｇＩｍ６、ラクトース　１０．０〜５０．０ｇｎ＋７、 アクチジオン　０．１〜０．６　ｇｍ８、三ナトリンムクエン酸二水塩　３．０ 〜８．０　ｇｍ９、クエン酸−水塩　０．３〜０．９　ｇｍｌｏ、リン酸二水素 ナトリウムニ水塩　０．８〜２．５　ｇｍｌｌ、塩酸フェネルガン　０．１〜１ ．０　ｇｍ１２、コリスチメテアート、ナトリウム　０．２〜−０．９　ｇｍ（ Ｃｏｌｉｓｔｉｍｅｔｈａｔｅ、５ｏｄｉｕＩｌり１３、　ヘ＝シＩＪ　ｙｃ、 、　ｆ−）　＋Ｊ　ラムｏ、５〜ＸＩＯ’−３ｘｌＯｂ単位１４、硫酸カナマイ シン　０．２〜０．８　ｇｍ１５、硫酸ネオマイシン　０．２〜１．０　ｇｍ１ ６、　５’−ＡＭＰ　Ｏ，４〜１．０　ｇｎ＋１７、アデニン　０．２〜０．８ 　ｇｍ１８、イノシン　０．４〜１．０　ｇｍ１９、　硫ｅジヒドロストレプト マイシン　０．２〜１．０　ｇｍ２０、塩酸テトラサイクリン０．２〜１．０ｇ Ｉｍ２１、３０％生＋７）　７　／Ｌ／ブミ７　１００−３５０　ｗｒｉ！２２ 、十分量〜１βの蒸留水 リンパ球類似物を作る場合には、実施例１に記載する手順により大赤血球をグル タルアルデヒドで固定し、次いで単核球類似物（実施例２）および顆粒球類似物 （実施例３）と共に予定量の基準コントロールまたはキャブレーク−に、または リンパ球類似物以外に洗浄する赤血球、または洗浄赤血球および小板を含有する 全血液コントロールに含ませる。

新鮮な大赤血球は洗浄して供与体特異性血漿蛋白質を除去する必要がある。この 事は、多血法供与体からの赤血球を混合する場合に、血球凝集の可能性を低下す る。

大体、固定は２時間以内に生ずるけれども、クールターカウンタ・−自動血液学 機器に使用する普通の赤血球溶解剤に完全に耐える赤血球の場合には長時間を必 要とする。標準りん酸塩緩衝液において人界血球の注意深い選択およびその希釈 を行う場合には、グルタルアルデヒドで固定するのに要する時間は４８〜７２時 間の範囲が好ましい。４８時間以下の固定では正常人リンパ球の場合より低い平 均血球体積を有する部分的に固定された赤血球を生ずる。部分固定ば、イソトン ■希釈剤における１０容量％のライスＳ■試薬を転化した後、部分固定母集団に おいて左側への推移を検出（血球体の滴）することによって測定することができ る。

モデルＳプラス　クールターカウンター　シリーズ（例えばモデルＳプラスｎ、 　ＩＩＩおよび■）用に指示された希釈剤に溶解剤を転化することによって同じ 結果かえられる。これらの希釈剤および溶解剤についての処方については後で説 明する。完全に固定された人界血球（例えば４８時間固定）は粒子大きさ分布に おいて左側に僅かに推移するか、ま・　たは推移しない（すなわち、見掛は体積 が増加する。〉赤血球をグルタルアルデヒドで固定する場合、７２〜９６時間後 では４８時間固定人赤血球における上述する赤血球溶解剤の作用に関係しない粒 子大きさの滴で示される。所望量の固定ではクールター　カウンター　モデルＳ プラス　タイプ分析器を用いて約３５〜９０±３ｆＬの範囲で計算できる血球を 生ずる。

人事核球はリンパ球と顆粒球との中間の大きさである白血球であり、９０〜１６ ０±３ｆＬの範囲の大きさ、または単球区域で計算する。これらの血球は固定人 界血球より大きい。

鳥類赤血球は固定サメ血球より大きく、入車核球細胞の大きさに近い。本発明の 目的のために、ガチョウ、ニワトリ、カモおよび七面鳥の如き家畜赤血球、好ま しくは七面鳥赤血球が人事核球の大きさおよび形状によく適合し、これら自体ア ルデヒド安定化プロセスに指向できる。これらの安定化「模擬」卓球は本発明の コントロール組成物における人事核球に対する満足な代用物になる。

七面鳥赤血球からの単核球類似物を造るプロセスはクールター　カウンター　モ デルＳプラス自動血球計数器によって現在計算されている３つの白血球母集団の 最大の大きさを示す。顆粒球は約１６０〜４５０±３ｆＬの大きさの範囲で計算 され゛る。

ツノメザ（ギングリモストマ　サータム）の赤血球を適当に処理することによっ て大顆粒球に類似する大きさが得られる。一般に、これらの赤血球は優れた懸濁 安定性、高い再生しうる堆積分布特性を示し、工業規模で入手することができる 。グルタル　アルデヒドの如き架橋剤で固定した場合には、これらの赤血球は大 顆粒球白血球に電子的に類似する。

大顆粒球に対して望ましい大きさ範囲の赤血球を有するとして知られている他の 人間以外の他のを椎動物には他の魚類、特にサメ科およびワニのような爬虫類の メンバーを含んでいる。人間以外のこれら、すべてのを椎動物は使用できる有核 赤血球を有している。しかしながら、量的に利用できるようにするには相当の経 費を要するものと思われる。ツノサメの赤血球は量的に入手しやすい。最近、ワ ニは政府当局によって「保護−」されている動物であるために、ワニの赤血球は 入手することが困難になっている。

ワニおよびツメサメの血球は有核であるが、しかし核の存在は本発明の目的とす る大白血球の代用品として使用するためには必要欠くべからざるものでない。サ メ赤血球における核の存在は、血球が細胞膜および細胞質を溶解中核から取り除 かれることから抑制するグルタル　アルデヒドの如き架橋剤で安定化するから存 置でない。新鮮な大白血球の示差分析の原理は、特に各タイプの白血球母集団に 対して特有の細胞質膜破壊の時間に基づいている。

固定前のその浸透環境を操作することによって赤血球の収縮または膨張は変えら れた血球の安定性を維持するのに必要とされる固定のプロセスの臨界性（ｃｒｉ ｔｉｃａｌ　ｔｙ）による制限を有している。一般に、赤血球はこの目的のため に約３０〜５０％以上収縮または膨張することはできない。それ故、大顆粒球代 用物として使用する場合に最°終的に必要とする大きさに近い動物赤血球から出 発する必要がある。

代用物顆粒球としてツノサメ赤血球の存用性は、顆粒球をその大きさ範囲内に収 縮させる必要性によって制限される。赤血球を低−または高・浸透圧環境にさら す主な効果としては、大きさ分布ヒストグラムの幅を僅かに増加または減少する が、しかし大きさ分布ヒストグラムの対称上にとるに足らない効果のみを生ずる 平均赤血球体積を変化することである。

ッノサメからの標準化および安定化赤血球組成物はこれからクールター原理によ って操作する機器を用いる自動手段により、または照明または位相差法の如き大 顆粒球の算出に役立つ適当な基準コントロールが得られる。

本発明によれば、ツノサメ赤血球を変え、かつ安定化してフェムトリフドル（ｆ Ｌ）による堆積およびミクロリットル（ｕＬ）当たりｌＸｌ０’としての計算に 関する大顆粒球類似物を模擬する。これらの固定サメ血球は堆積分布および計算 に基づいて４ケ月以上にわたって安定する。生成物は新鮮な大顆粒球を出来るだ け緊密に模擬するような挙動を与える。更に、生成物は新鮮な通常の顆粒球にお いては見出されない特性、すなわち、使用する血球計数器により測定されるパラ メーターの安定性の高いレベルを保有している。

実施例３はサメ血球を処理する好ましい試薬および技術の特定例を示しているが 、処方のみを説明している。また、記載している試薬および／または技術はサメ 以外の動物からの赤血球に適用できる。上述するように他の成分および割合を用 いることができる。しかしながら、緩衝剤におけるように非溶解溶液における血 球の大きさは本発明において用いる処理の全効果を視覚的に見ることができない 。かプロセスは次に示す制御を必要とする：１、血球を採集する場合における抗 凝固剤の濃度；２、　抗凝固した非固定血球の老化； ３、　固定中における血球の濃度； ４、　固定溶液の容量オスモル濃度： ５、　固定溶液の温度；および ６、　固定する前における冷たい高浸透圧溶液にさらされる時間 本発明において、一番狭い分布幅を有する赤血球の最小の大きさは新鮮な血球、 または静脈切開後４日までに老化した血球を用い低濃度のＥＤＴＡで得られるこ とを見出した。２４時間以上にわたり老化した血球に高濃度のＥＤＴＡを用いる 場合には、人顆粒球に対する１６０〜４５０±３フ工ムトリツトル判定基準に適 合しない大きい非固定および固定血球が得られる。

冷却した抗凝固血液の添加前および添加後に、固定溶液を０〜１０℃、好ましく は４℃に維持することによって、本発明において使用する小さい血球を得ること ができる。

上記方法により処理したツノサメ血球は本発明の基準コントロール生成物に用い た場合に極めて安定している。

模擬顆粒球は維持する単独の（ｓｔａｎｄ　ａｎｏｎ）顆粒球フントロールに、 または他の血液パラメーターを測定する複合のおよび一つのコントロール標準に おいて用いることができる。特に、この新規な顆粒球コントロールはリンパ球お よび単核球細胞の如き白血球成分に対して適合するコントロールと組み合わせで 用い、赤血球および小板パラメーターに対する基準コントロールと組合せて用い る白血球コントロールを与えるつ 次の実施例１〜３は白血球基準コントロールの３成分のそれぞれを調製する１つ の方法について詳述している。実施例４は３“つの白血球母集団の全体を示して いる。これらの手順は、血球を損傷することなく、および固定血球を普通赤血球 溶解試薬に対し又はぼ完全に耐えるようにするために十分注意して制御する。処 方のみを説明しているが、他の成分および割合は上述するように用いることがで きる。

大流■Ｊ ７、血球からのリンパ球類イ゛ 次に、大赤血球を処理して普通の大きさのリンパ球類似物を得るのに好ましい試 薬の特定例および推薦しうる特定手順工程について説明する。処方およよび手順 のみを説明するが、他の成分、割合および手順は本発明において記載するように 用いることができる。

全血液を採血を擾ための韮〜還１υ牲 １種または２主以上の次に示す抗凝固剤を当業者により定めるように用いること ができる。

１、標準ＡＣＤ　（酸−クエン酸塩−デキストロース）２、　標準ＣＰＤ　（ク エン酸塩〜りん酸塩−デキスドロー？ス） ３、　二ナトリウムＥＤＴＡ　（エチレン　ジアミン四酢酸塩）　、２ｍｇｈｓ βの血液 宋ＪＪＬ本」β　配澄り 上述している、および米国特許第４．２９９．７２６号明細書に記載している媒 体。

一級鮮ス田火■Ｉ−圧閏足腹罠９〜丸ΔΔ匹愁りＡ麓−−ユＷＲ３）（りん酸基 ｌ衝鷹−１ニヱβ）と１、　りん酸ナトリウムー塩基　０．２　ｇ２゜　りん酸 ナトリウムニ塩基ＩＬ０　０．２　ｇ３、　アジカナトリウム　０．１ｇ ４、　塩化ナトリウム　９．４ｇ ５、十分量〜１ｅの蒸溜水 ｐＨ７，３〜７．５ 容量オスモル濃度３２０〜３４０　ｍ０５ｍ／ｋｇ赤１１すＩ臣迂搬 １、　塩化ナトリウム　６．９６　ｇ ２、　塩化カリウム　０．３０　ｇ ３、　りん酸ナトリウム　一塩基　１．３１　ｇ４、　りん酸ナトリウム　ニ塩 基７Ｈｚ０　１０．８５　ｇ５、　十分量〜１７！の蒸溜水 ｐ）１７．３〜７．５ 容量オスモル濃度３２０〜３４０１１Ｏｓｍ／　ｋｇ手順 １、　約８１〜８９ｆＬの平均血球体積範囲および１８ｆＬ以下の赤血球分布幅 を有する大赤血球を選択した。

パンクド（ｐａｃｋｅｄ）大赤血球を新鮮な血液洗浄溶液で洗浄した。

２、洗浄したパックド血球を赤血球希釈溶液でＩ　Ｘ１０６ｕＬの数に希釈した 。

３、市販の２５％グルタルアルデヒド生成物を赤血球希釈溶液に転移かして約１ ．０〜１０％のグルタルアルデヒド含有量を有するグルタルアルデヒド固定試薬 を作った。

好ましい濃度は５％である。

４、測定量の上記工程３で得た固定試薬を洗浄赤血球懸濁物に添加して０．１〜 １．０％の採集グルタルアルデヒド濃度を得、約２０分間にわたり混合した。１ ２〜７２時間にわたって徐々に巻取る密封コンテナーに移した。

５、固定血球を約４ＯＲＣＦで約５分間にわたって遠心分離した。上澄液を除去 し、血球を新鮮な血液洗浄溶液（ＷＲＳ）で数回洗浄し、次いで洗浄および再懸 濁溶液（ＷＲＳ）中に再懸濁させた。

６゜　平均血球体積を測定して固定の完了したことを確かめた。上述するように １０％ライスＳ■試薬をイソトン■希釈剤に添加した後、部分固定は体積で滴を 示した。

全固定赤血球は見掛体積で５ｆＬ以下を示した。

７、　維持する単独のリンパ球コントロールの場合には、洗浄固定血球を再懸濁 溶液に再懸濁し、濃度を正常人血液中の大リンパ球の濃度に模擬するように調節 した。

多血液学的コントロールの場合には、洗浄固定血球　。

を多くのパラメーター血液学コントロールのための媒体に再懸濁し、血球計算を 適当に行ってリンパ球を測定した。

９゜　固定血球は約６ケ月までの期間にわたって貯蔵できた。

グルタルアルデヒドの代わりにホルムアルデヒドを用いて上述すると同様に行い 、この場合ホルムアルデヒドの最終濃度を２．５〜１０％にした。ホルムアルデ ヒドで固定するのに要する時間はクルタルアルデヒドによる場合より長かった。

他のタイプの哺乳動物の赤血球から出発する以外は上述すると同様に行い、匹敵 する結果を得た。

大施斑主 七面鳥赤血球からの単核球類似物 次に、七面鳥赤血球を処理して単核球類似物を得るのに好ましい試薬の特定例お よび推薦しうる特定手順工程について説明する。単核球として上述する範囲に区 分され−かつ計算される白血球は単球を含んでいる。処方および手順のみを説明 するが、他の成分、割合および手順は本発明において記載するように用いること ができる。

Ｕ癒坦血するな妙列朋 １種または２種以上の次に示す抗凝固剤を当業者により定められる適当な量で使 用した。

１、　標準ＡＣＤ　（酸−クエン酸塩−デキストロース）２、標準ＣＰＤ　（ク エン酸塩−りん酸塩〜デキストロース） ３、　二ナトリウムＥＤＴＡ、（エチレンジアミン四酢酸塩）、２　ａａｇ／ｍ ｌの血液 ヌ１」」口（±（−β、金Ｙ 上述している、および米国特許第４．２９９．７２６号明細書に記載している媒 体。

・　上里扁Ｊ血球洗浄および希板擢丞ＴＥＷＤＳ）（Ｎ配匈し１、　りん酸ナト リウム　一塩基　１．３Ｌ　ｇ２、　りん酸ナトリウム　ニ塩基　１０．３５　 ｇ３、　塩化ナトリウム　２゜５０　ｇ ４、　塩化カリウム　０．３ｇ ５、十分量〜１！の蒸溜水 ｐＨ７，３±０．１ 容量オスモル濃度２００±１０清Ｏｓｍ／ｋｇ固定血球の洗浄赤血球懸濁物（Ｗ Ｒ３）実施例１に記載すると同様 王−１ １゜　七面鳥の新鮮な全血液を７ＯＲＣＦにおいて常温で１０分間にわたり遠心 した。パックド赤血球を撹乱しないように注意して軟層と共に上澄液を除去した 。

２、　七面鳥赤血球を４〜１０容量の七面鳥赤血球洗浄および希釈溶液（ＴＥＷ ＤＳ）で２回洗浄した。

３、　七面鳥赤血球洗浄および希釈溶液（ＴＢＷＤＳ）で希釈し、赤血球数（０ ，３３Ｘ　１０６／ｕＬ）測定および平均血球体積（約１５５　ｆＬ）評価のた めに２１１βの試料を採取した。

４゜市販の２５％グルタルアルデヒドを七面鳥赤血球洗浄および希釈溶液（ＴＥ ＷＤＳ）に添加して約１．０〜１０ｏＯ％のグルタルアルデヒド含有量を有する グルタルアルデヒド固定試薬を調製した。好ましい濃度は５％である。

５．１容積の１．０〜１０．０％グルタルアルデヒド固定溶液を９容積の洗浄赤 血球懸濁物に添加し、約３〜４分間にわたり十分に混合した。２０〜２８時間に わたって徐々に巻取る密封コンテナーに移した。

６ｏ　固定血球を約４００ＯＲＣＦで約５分間にわたって遠心分離した。上澄液 を除去し、洗浄溶液（ＷＲ３）で数回洗浄した。

７、維持される単独の単核球コントロールの場合には、洗浄固定血球を再懸濁溶 液に再懸濁し、濃度を調節して単核球の数を正常な人血液に模擬した。

８、多血液学的コントロールの場合には、洗浄固定血球を多コントロールについ て上述するように安定化媒体に再懸濁して単核球細胞を測定した。

９、　固定血球は約６ケ月までの期間にわたって貯蔵できた。

去考Ｉ引影 ノノサメの赤血球からの顆粒球類似物 次に、ツノサメ　（ギングリモストス　サータム）の赤血球を処理して顆粒球類 似物を得るのに好ましい試薬の特定例および推薦しうる特定手順工程について説 明する。処方および手順のみを説明するが、他の成分、割合および手順１、　二 ナトリウムＥＤＴＡ、（エチレンジアミン四酢酸塩）１６．８　ｇ ２、　塩化ナトリウム　１７ｇ ３、　尿素　２１　ｇ ４、　十分量〜１１の蒸溜水 通常、赤血球の浸透平衡を維持するために、サメはその血液に高濃変の尿素を含 有している。この理由のために、生成浸透条件を模擬することから、尿素をサブ 配合物（ｓｕｂａｓｓｅｍｂｌｙ）に添加した。

〜定化媒体（β　配合） 上記と同様である。

固定血球の洗浄および再ジ溶液（ＷＲ３）−上記と同様である。

１、　塩化ナトリウム　１００　ｇ ２、　十分量〜１１の蒸溜水 ３、容量オスモル濃度　３００±１００　ｍ０５ｍ／ｋｇ最終固　試薬（ｌ　配 合） １゜　サメ固定溶液　０．９４ＯＬ ２．２５％グルタルアルデヒド溶液　０．０４ＯＬ３、パックドサメ赤血球　０ ．０２ＯＬ壬−厘 １、　ツノサメからの新鮮な全血液を２．５〜３０１（代表的には５ｍＭ）の最 終濃度を有するエチレンジアミン四酢酸　（ＥＤＴＡ）抗凝固溶液に採取した。

これは１０３０±３抛Ｏｓｍ／ｋｇの容量オスモ濃度および７．０±１のｐＨを 有する濾過ＥＤＴＡ溶液である。

２、　抗凝固した全血液混合物を静脈切開２４時間内に遠心し；パックド赤血球 を撹乱しないように注意して白血球を含有する上澄液および軟層を除去した。血 液を２０１のＥＤＴＡに貯蔵する場合には、血液のグルタルアルデヒド固定処理 を４日以内に行うことができ；および２０〜ｂ 以内に行うことができる。

３．１０％のグルタルアルデヒド４度および１０００〜４０００ｍｏｓｍ／ｋｇ の容量オスモル濃度（好ましい濃度は３０００±１００　ｎｌ０５ｍ／ｋｇ）を 有するグルタルアルデヒド固定溶液を調製し、約Ｏ〜１０℃に冷却した。

４、遠心：遠心分離後６０分以内に、非洗浄パックド赤血球を冷却した固定溶液 （最終固定試薬の項を参照）に攬拌しながら添加して１０％のグルタルアルデヒ ド濃度を与えた。固定操作を０〜１０℃で最小６時間にわたって、必要に応じ４ ８時間まで継続した。

５、固定血球を約５容積のりん酸塩緩衝食塩溶液で２または３回洗浄した。

６、　血球を洗浄および再懸濁溶液に６０日まで貯蔵した。

７、　維持される単独の顆粒球コントロールの場合には、洗浄固定血球を再懸濁 溶液に再懸濁し、血球濃度を調製して正常の人血液の顆粒球の血球濃度を模擬し た。

８、　多血法華的コントロールの場合には、洗浄固定血球を多コントロールにつ いて上述する安定化媒体に適当な濃度で再懸濁して顆粒球を測定した。

９、　固定血球は約６ケ月までの期間にわたって貯蔵できた。

上述する手順および技術により、サメ赤血球の代わりに他の供給源の赤血球を用 いて、顆粒球を模擬する外に、他の目的のために有用な変性血球を与えて同様の 結果を得た。

大施炭土 正常人の血液試料の全白血球含有量を測定するサブ−配合物において、次に示す 分量の各成分を使用した：原料溶液 ０．０］、４６Ｌ　実施例】　リンパ球　３．５　Ｘ　１０’／ｕＬＯ，０１０ ５Ｌ　実施例２　単核球　］、、８　Ｘ　１．０’／ｕＬＯ，９７５Ｌ　実施例 ３　顆粒球　０．４　Ｘ　１０’／ｕＬＯ，０Ｏ０４Ｌ　希釈剤　りん酸塩緩衝 食塩このサブ配合物は約６ケ月まで貯蔵することができた。

上述する媒体に９４することによって安定化した未処理の人界血球から、目的の 組成物赤血球成分を満足に得られることを見出した。未処理赤血球は白血球計算 および次のヘモグロビン測定のための前の処理工程において容易に溶血した。

未処理の人界血球、模擬白血球、および安定化または模擬小板の懸濁物を最終赤 血球、白血球および小板数、およびヘモグロビン含有量およびヘマトクリットが 正常人の血液と思われる範囲に存在するような割合に混合した。

安定化小板は当業者により知られている方法で供給した。

有用な方法は次のものを含んでいる： １、　ヨードアセトアミドおよびイミノジ酢酸またはその塩を相溶性制菌剤と共 に、米国特許第４，４０５．７１９号明細書に記載しているｐｌ＋および容量オ スモル濃度の予定範囲に維持した水溶液に混合した混合物。

２゜０．１〜５％濃度のクルクルアルデヒド、および米国特許第４　、３８９　 、４９０号明細書に記載しているある種の異性線状アルコールのエトキシレート の混合物である非イオン表面活性剤を含有する固定−安定組成物。

３ｏ　米国特許第４，２６４，４７０号明細書に記載するように大小板に近い大 きさ範囲および体積分布を有するように安定化、配合おらび混合したヤギ赤血球 からなる大小板類似物。

小板を溶解する未固定赤血球を含む処理用コントロールとして用いる場合には、 固定血球を白血球類似物として用いる必要がある。これらは、例えば米国特許第 ４，１７９，３９８号明細書に記載されている方法によって作ることができる。

各血液学的パラメーターに対する値は異常に低いおよび異常に高い条件を示すよ うに変えることができる。正常人の血液の白血球数はミクロリットル当たりｓ、 　ｏｏｏ〜１１，０００で、２０〜４０％のリンパ球、１０％以下の単核球値お よび６０〜８０％の顆粒球値を有している。赤血球についての人血液の普通範囲 はハミロリソトル当たり４，０００，０００〜５，０００，０００である。普通 のヘモグロビン値は１２〜１６ｇ／１００１ｍ！である。

用語「ヘマトクリット」とはバフクド赤血球の体積対全血液の体積の比を意味し ている。人において、普通の比は約４５％である。平均赤血球体積は血液！当た りａｌｔのバンクド赤血球の体積対ミクロリットル当たり１００万の赤血球の比 である。平均血球ヘモクロビン濃度はバフクド赤血球１゜Ｏｍｌ当たりのへモグ ロビンの平均重量を示す指数である。

平均血球ヘモグロビンはヘモグロビン含有量（ｇへ〇対赤血球（１００万／ミク ロリツトル）の比である。

コントロール生成物は、新鮮な全血液の試験試料が上述するすべての測定につい て、いかに構成されているかを比較基準に正確に指示する必要がある。コントロ ール生成物について正常人血球を抗凝固剤において模擬することが大切である。

本発明は主として粒子分析機器に電気的に設定されるような、白血球の各クラス またはサブ−クラスに対する予じめ定められた下限おらび上限限界値設定をチェ ックするための測定大きさ分布の３つのタイプの固定赤血球からなる血液学基準 コントロール溶液、その白血球コントロール部分に指向する。白血球の各クラス に対する上限および下限電子限界値設定は既知の値に匹敵する各ジスクリミネー ター区域の粒子数に関してチェックする。各タイプの模擬白血球は１または２以 上のタイプの８ｉ擬白自車母集団に対する全血球数およびその比例関係に関係な く大きさを維持する必要がある。

ここに記載する方法で処理した血球は血液学的測定において必要とされるチェッ クおよびバランスの優れたシステムを得ることができる。

本発明を上述において説明したが、本発明は本発明の範囲を逸脱しなり限り当業 者により種々変更を加えることが　。

できる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．自動血球計算および分粒機器において多数の血液学的バラメーターを測定す るための血液学的基準コントロール流体懸濁物において、前記基準コントロール は相容しうる水性で、かつ実質的に等張安定化媒体において少なくとも２つの次 の近似する大きさ範囲：３５〜９０±３ｆＬ ９０〜１６０±３ｆＬ １６０〜４５０±３ｆＬ に計算される予定数の処理赤血球からなり、各大きさ範囲の前記血球は人血液の ３つの白血球サブー母集団、すなわち、リンパ球、単球または顆粒球の１つに対 する置換物として作用することを特徴とする血液学基準コントロール流体懸濁物 。 ２．前記処理赤血球は、前記機器によって３５〜９０±３ｆＬの大きさ範囲で測 定する体積を有し、哺乳動物血液から誘導し、かつ人エリンパ球を模擬する作用 を有する赤血球を含む請求の範囲第１項記載の血液学基準コントロール流体懸濁 物。 ３．前記処理赤血球は前記機器によって９０〜１６０±３ｆＬの大きさ範囲で測 定する体積を有し、家禽から誘導し、かつ人単核球細胞を模擬する作用を有する 赤血球を含む請求の範囲第１または２項記載の血液学基準コントロール流体懸濁 物。 ４．前記処理赤血球は、前記機器によって１６０〜４５０±３ｆＬの大きさ範囲 で測定する体積を有し、爬虫類および魚類からなる群から選択する人間以外の脊 椎動物から誘導し、かつ人顆粒球を模擬する作用をする赤血球を含む請求の範囲 第１，２または３項記載の血液学基準コントロール流体懸濁物。 ５．前記安定化媒体はラクトース、殺菌剤および抗生物質、およびプリンヌクレ オシド、胆汁酸塩およびコール酸誘導体、抗ヒスタミン特性を有するフェノサイ アジン化合物およびその塩、および局部麻酔特性を有する４−アミノ安息香酸エ ステル誘導体およびその塩からなる群がら選択する補充剤を含む請求の範囲第１ 〜４項のいずれか一つの項記載の血液学基準コントロール流体懸濁物。 ６．前記基準コントロールは６ケ月までの貯蔵寿命を有する請求の範囲第１〜５ 項のいずれか一つの項記載の血液学基準コントロール流体懸濁物。 自動血球計算機器に用いる血液学基準コントロール流体懸濁物において、前記基 準コントロールは人顆粒球を模擬する作用をし、かつ爬虫類および魚類からなる 群がら選択する人間以外の脊椎動物から誘導する予定数の処理赤血球としたこと を特徴とする血液学基準コントロール流体懸濁物。 ８．前記爬虫類をワニ（アリゲータミシシッピエニス（Ａｌｌｉｇａｔｏｒ　ｍ ｉｓｓｉｓｓｉｐｉｅｎｓｉｓ）とした特許請求の範囲第４〜７項のいずれか一 つの項記載の血液学基準コントロール流体懸濁物。 ９．前記魚類をツノザメ（ギングリモストマサータム）とした請求の範囲第４〜 ７項のいずれか一つの項記載の血液学基準コントロール流体懸濁物。 １０．自動血球計算機器に用いる維持する単独の血液学基準コントロール流体懸 濁物において、前記基準コントロールを人顆粒球を模擬する作用をする予定数の ツノザメの処理赤血球としたことを特徴とする血液学基準コントロール流体懸濁 物。 １１．前記基準コントロールには人単核球を模擬する作用をし、かつ家禽から誘 導する予定の処理赤血球を含む請求の範囲第７〜１０項のいずれか一つの項記載 の血液学基準コントロール流体懸濁物。 １２．前記基準コントロールには人リンパ球を模擬する作用をし、かつ哺乳動物 から誘導する予定数の処理赤血球を含む請求の範囲第７〜１１項のいずれか一つ の項記載の血液学基準コントロール液体懸濁物。 前記基準コントロールにはヘモグロビン測定のための水性媒体に安定化赤血球を 懸濁した懸濁物を含み、前記赤血球は間質溶解によって溶解剤に応答する能力を 保持する請求の範囲第１〜１２項のいずれか一つの項記載の血液学基準コントロ ール流体懸濁物。 １４．前記基準コントロールは小板コントロール組成物を含む請求の範囲１〜１ ３項のいずれか一つの項記載の血液学基準コントロール流体懸濁物。 １５．前記小板コントロール組成物は、０．１〜５％の濃度のグルタルアルデヒ ド、および異性線状アルコールのエトキシレート混合物である非イオン表面活性 剤を含有する固定・安定化組成物で処理することにより安定化した小板の懸濁物 を含む請求の範囲第１４項記載の血液学基準コントロール流体懸濁物。 １６．前記小板コントロール組成物は、ヨードアセトアミド、およびイミノジ酢 酸およびその緩衝塩からなる群から選択する１または２種以上の化合物を含む組 成物により予定範囲のｐＨおよび容量オスモル濃度で処理して安定化した小板の 懸濁物を含む請求の範囲第１４〜１６項記載の血液学基準コントロール流体懸濁 物。 １７．前記小板コントロール組成物はヤギ赤血球から誘導した人小板類似物の懸 濁物を含む請求の範囲第１４項記載の血液学基準コントロール流体懸濁物。 １８．少なくとも２つのタイプの模擬白血球からなり、各タイプの模擬白血球は 大きさを全血球数におよび１または２以上のタイプの模擬白血球母集団に対する 全白血球数の比例に関係しないで維持するようにたことを特徴とする血液学基準 コントロール。 １９．自動白血球計算および分粒機器において多数の血液学的バラメーターを測 定するための血液学基準コントロール流体懸濁物において、ヘモグラビン測定の ための間質溶解により溶解剤に応答する能力を保持する安定化赤血球を水性媒体 に懸濁させた懸濁物；リンパ球、単球および顆粒球を測定するための模擬白血球 ；および安定化または模擬小板血球からなり、これらのすべての血球は赤血球、 白血球および小板血球に対する最終バラメーターが特定人の正常および疾病条件 に対して予期される予定範囲からなるような割合にしたことを特徴とする血液学 基準コントロール流体懸濁物。 ２０．自動血球計算機器に用いる維持する単独血液学基準コントロール流体懸濁 物において、前記基準コントロールを人単核球を模擬する作用とし、かつ七面鳥 から誘導する予定数の処理赤血球としたことを特徴とする血液学基準コントロー ル流体懸濁物。 ２１．血液学基準コントロール組成物の調製方法において、血液を抗凝固剤中に おいて予定濃度で採取し、採取血液を遠心分離してバックド赤血球を得、および このバックド赤血球を冷却固定溶液と静脈切開後納４日以内に反応させることを 特徴とする血液学基準コントロール組成物の調製方法。 血液を爬虫類および魚類からなる群から選択する人間以外の脊椎動物から誘導す る請求の範囲第２１項記載の方法。 ２３．前記冷却固定溶液は約０〜１０℃の温度を有する請求の範囲第２１または ２２項記載の方法。 ２４．前記抗凝固剤エチレンジアミン四酢酸およびその緩衝塩からなる群から選 択する請求の範囲第２１，２２または２３項記載の方法。 ２５．前記抗凝固剤の濃度を２．５〜３０ｍＭの範囲にする請求の範囲第２１〜 ２４項のいずれか一つの項記載の方法。 ２６．前記固定溶液をグルタルアルデヒドとする請求の範囲第２１〜２５項のい ずれか一つの項記載の方法。 ２７．前記固定溶液をホルムアルデヒドとする請求の範囲第２１〜２５項のいず れか一つの項記載の方法。 ２８．前記固定溶液による前記反応を高浸透圧で、ほぼ中性条件に対して僅かに 酸性で行う請求の範囲第２１〜２７項のいずれか一つの項記載の方法。 ２９．前記高浸透圧条件を約１０００〜４０００ｍ０ｓｍ／ｋｇにし、およびｐ Ｈを４．０〜８．０にする請求の範囲第２８項記載の方法。