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JPS61103829A - 抗菌組成物およびグリコペプチドの製造法 - Google Patents

抗菌組成物およびグリコペプチドの製造法

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JPS61103829A
JPS61103829A JP60238555A JP23855585A JPS61103829A JP S61103829 A JPS61103829 A JP S61103829A JP 60238555 A JP60238555 A JP 60238555A JP 23855585 A JP23855585 A JP 23855585A JP S61103829 A JPS61103829 A JP S61103829A
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Nestle SA
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Societe des Produits Nestle SA
Nestle SA
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は活性成分としてグリコペプチドおよび　　Ｉ／
又はオリゴサツカライド金倉み、工型線毛（ｔｙｐｅ　
Ｉ、ｆｉｍｂｒｉａｅ　）　ｆ有する病原菌に対−Ｔｂ
抗菌組成物およびこれらの活性成分の製造方法に関する
。
大部分の自然感染は病原性因子を移植させ、動物組織を
コロニー化することができる粘膜の上皮細胞に病原性因
子が固着することにより開始されることはほとんど疑い
がない。「工型線毛」として既知のタン白構造を供され
た細菌による感染プロセスでは、動物細胞に対するこれ
らの細菌の固着は「マンノースに過敏」と称され、これ
らの構造は複合グリコシド基、恐らく細胞膜の表面にグ
リコ配合体の部分を形成するオリゴマンノシドである特
定受容体を認識させるものであろう。
工型線毛を供された細菌の上皮細胞に対する固着現象お
よびモルモットに赤血球の血球凝集を生じさせるこれら
の能力に膜受容体の特定構造に似た成る種のオリゴサツ
カライドの存在で阻止できることが最近示された（下記
参考Ｉ参照）。こうして細菌はこの゛オリゴサツカライ
ドにおびきよせられ選択的に固定される。これらのオリ
ゴサツカライドは合成によって得るか又は酵素的欠陥を
有する患者の尿から単離される。。
同じ線で、例えば公表されたヨーロッパ特許出願第８９
９４０号明細書は構造Ｇａｌα１４３　Ｇａｌを含む組
成物に関する。これは化学的に得られ、若い豚の腸管細
胞に対する大腸菌（Ｅ３ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏ１１
　）　Ｋ　８８＋の固着を「試験管内」で阻止すること
ができる。
本発明の目的は活性成分として酵素的に得た植物又は動
物起源のグリコペプチドおよび／又はオリゴサツカライ
ドを含み、工型線毛により認識される正規の受容体に代
わり、こうしてこれらの線毛を有する病原菌の動物細胞
に対する固着全阻止又は交替することができる組成物を
供することである。
本発明による組成物は活性成分として次式：（Ｉ） 〔式中、Ｒ１は水素原子、残基４　Ｇ１ＣＮＡＣβ１→
ＡＳＮは同−又は異り、アミノ酸残基又はポリペプチド
を表わす）であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は同−又は異
り、水素原子、マンノース残基又はオリゴマンノシド鎖
である〕に相当するグリコペプチドおよび／又はオリゴ
サツカライドを含むことを特徴とする。
上記式（Ｉ）において、４　ＧｌｃＮＡｃβ１→ＡＳＮ
は２−位置にアセチルアミノ基を有し、４−位置で末端
グルコサミンに結合し、β−配位を有する１−位置でア
ミノ酸又はポリペプチド鎖と置換することができるアス
パラギンに結合する２−デンキシグルコースを表わす。
特に病原性コリ形の腸内細菌の固着阻止効果に対し好ま
しい基は、上記式Ｉのグリコペプチド〔式中、Ｒ工は４
　Ｇ１．６ＮＡｃβ１→ＡＳＮ又は全有する）であり、
Ｒ３およびＲ４は水素原子およびＲ２は水素原子又はマ
ンノース残基である〕により懺わされる。
特に病原性フリ形の腸内細菌の固着阻止効果に対し好ま
しいオリゴサツカライドは式■（式中、Ｒ工、Ｒ５およ
びＲ４は水素原子であり、Ｒ２は水素原子又はマンノー
ス残基である）のオリコサツカライドである。
本発明は又植物起源のグリコタン白金タン自分解酵素に
より消化させ、得たグリコペプチドを任意にはオリゴサ
ツカライドにエンド−β一旦−アセチルグルコサミニダ
ーゼＨの作用により変換させ、得たグリコペプチド又は
オリゴサツカライドを任意にはエキノーα−マンノシダ
ーゼにより調整消化して２個のマンノース残基間のα１
→２結合ケ選択的に開裂させることを特徴とする式Ｉの
化合物の製造方法に関する。
オリゴマンノシドの豊富な貯蔵グリコタン白を含むこと
が既知の任意、の植物穀粉は出発材料として使用するこ
とができる。脱脂大豆又は豆粉を使用することが有利で
ある。
脱脂粉をアルカリ性ｐ）ｉ（８〜９）で抽出し、続いて
例えば文献記載の方法（下記参考２および４参照）と同
じ方法を使用し、ｐＨ４，５〜５でグリコタン白を選択
的に沈澱させることにより、大豆グリコタン白７Ｓ又は
豆グリコタン白ｉｔ豊富化した単離物を使用することが
好ましい。
グリコペプチドを得るために、グリコタン白金豊富化し
たフラクションはタン自分解酵素により、例えば文献（
下記参考３参照）記載の方法と同じ方法を使用して消化
させる。
酵素消化は酸性、中性又はアルカリ性−で任意の活性タ
ン自分解酵素により行なう。酵素はかび起源、微生物起
源（例えばプロナーゼ、アルカラーゼ）、植物起源（例
えばブロメリン、アイシン、ハハイン）又は動物起源（
例えばトリジシン、ペプシン、パンクレアチン）のもの
でよい。
グリコペプチドからオリゴサツカライドを製造するため
に本発明方法の第一態様では、上記消化物はエンド−β
一旦−アセチルグルコサミニダーゼＨにより処理し、式
Ｉの２個の亙−アセチルグルコサミン残基間のβ１→４
結合を選択的に開裂し、こうしてＲｌｉ　Ｈに変換する
。
本発明方法の第一態様の好ましい変法では、上記オリゴ
サツカライドのオリザマンノシド鎖を短縮しこれらの活
性を増加させるために、オリゴサツカライドを例えば文
献（下記参考５参照）記載の方法と同じ方法を使用して
マンノース残基間のα１→２結合を選択的に開裂する酵
素、エキノーα−マンノシ汐゛−ゼにより調整処理する
。
゛′本発明方法の第二態様では、オリビマンノシげｔｉ
［上記グリコペプチド全エキソ−α−マンノシダーゼに
より調整処理することにより短縮されるが、この方法は
第一態様で得られるものより高い活性を示す生成物が得
られるので好ましい。別法では相当するオリゴサツカラ
イドはこれらのグリコペプチドをエンドＨにより処理す
ることにより製造してもよい。本発明組成物は工型線毛
を有する細菌により惹起される感染病、特に例えば大腸
菌のようなコリ形の腸内細菌により惹起される胃腸病の
予防、治療又は診断に対し使用することができ、投与様
式に適応した形で供することができる。
例えば経口又は経腸投与に対しては、活性成分はシラツ
ブ、丸剤、カプセル、タブレット、糖衣丸、溶液、サス
ペンション、エマルジョン又ハ水性媒体の添加により再
構成することができる粉末、例えば好ましくは療養食製
品形で、例えば粉乳として処方することができる。
非経口投与に対しては、物理的に安定で、無菌、無発熱
性浴液又はサスペンションとして処方することができる
。
局所投与、例えば眼科学の適用に対してハ、溶液、エア
ロゾル、又は軟膏として処方するごとかでざる。
活性成分が診断、確認又は病原菌の単離に対するもので
ある場合、巨大分子支持体に、好ましくは共有結合によ
り結合させることが有利である。
最後に、本発明組成物は表面殺菌に、例えばコンタクト
レンズ処置に対し浴液又はエマルジョン　　Ｊ形で使用
することができる。
これらの組成物では、活性成分は０．１〜９０重量％を
表わす。
本発明は次側により例示される。例中、特記しない限り
部および％は重量による。
下記例１〜６でに、式■の活性成分の構造の証明は次の
特徴に基づく： ＋ａ＋　　出発グリコタン白のグルサイド組成の分析は
２個のみのモノサンカライド成分、すなわちマンノース
およびグルコサミンの存在を示す。これらの２個の成分
から形成されるオリゴサツカライドはアスパラインの窒
素によりポリペプチド鎖に結合しく旦−グリコシド結合
）、従ってこれらのオリ２”サンカライドの「エンド」
部分は次の構造二ｅこ相当する。
（１）ｌ　　すべてのグリコペプチド物質はエンド−β
−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼＨ（エンドＨ）によ
り完全に加水分解される事実は、これらすべてがこのよ
うな酵素分解に必要な最小構造に相当することを証明す
る（下記参考６参照）：上記２つの構造を重ねると提案
した一般構造の公式になる。
例　　１ （ａｌ　　グリコタン白：グリコタン白７Ｓｔ−豊富化
したフラクションは脱脂大豆粉″ｆｃ０．５ミリモルＮ
’２日０３　溶液によりｐ）′１８．ｏテ抽出シ、Ｐｌ
″１５．７テ沈澱させて第１フラクシヨン（１１ｓの豊
富な）を除去し、ｐＨ４，５で第２沈澱させ、続いて同
じ詣で２回洗滌し、７Ｓの豊富なフラクションを得るこ
とにより製造する。
ｆｌ）ｌ　　グリコペプチド：タン白７ラクシヨンの酵
素消化はトルエンの存在で２１のトリス−塩酸緩衝溶液
（０，０５モル、ｐＨ８，０）中テ４０℃テ２４ＦＥｆ
間６０［］ＩＮｉのプロナーゼＥ（メルクＡＧ）を使用
し、次に４８時間別の６ｏｏＩｎ９酵素を使用して３０
ｇの夕／白により行なう。グリコペプチドはこの溶液の
濾過後、爵出液をダウエックス５０Ｗ−Ｘ８　（商標）
樹脂（Ｈ＋形）上全通し、グルサイドが洗滌水から消失
するまで樹脂を蒸溜水により洗滌し、合せたフラクショ
ンをアンバーイトエＲＡ　４００　（商標）樹脂（ＣＯ
３−形）ニより中和して単離する。最終ｍ液は濃縮し、
凍結乾燥する。
生成物は最後にセファデックスＧ−２５（商標）カラム
で分画して精製してもよい。方法の全体の収量は８８％
である（グリコペプチド混合物に含まれるマンノースの
最終量を規準にして）。上記（下記参考７に記載の方法
により）により得た混合物のグルサイド組成の分析はＮ
−アセチルグルコサミンの２単位に対し平均７．６単位
のマンノースの存在を示した。
（Ｃ）　　オリゴサツカライド：上記のように単離した
グリコペプチドはエンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミ
ニダーゼＨ（エンドＨ１生化学工業株式会社）により完
全に消化されることが証明された。
この後の性質はオリゴサツカライドを得るために使用す
る方法の基礎を形成するニア、５Ｉｎ９のオリゴマンノ
シド金含むグリコペプチド試料ｔ１０−のクエン酸塩−
リン酸堪緩衝爵液（ｐＨ６，０，１０ミリモル）に耐解
し、そして１００ミリ単位のエンドＨ（製造者規定の単
位）および０．５−のトルエンを生成浴液に添加する。
３７℃で２４時間インキュベーション後、酵素は加熱し
て変性させる。
こうして得た加水分解物は血液凝集反応試験（例４参照
）に対しこの形（粗製）で使用することができる。同じ
加水分解物はこうして遊離したオリゴサツカライドを単
離するためにアンバーライトＭＢ３（商標）樹脂（Ｈ＋
およびＯＨ−形）により処理することもできる：樹脂の
添加、撹拌およびデカンテーション後、グルサイドが洗
滌水から消失するまで蒸溜水により洗滌し、合せたフラ
クションは濃縮する。こうして精製したオリゴサツカラ
イドの分析は８５％マンノースを含む生成物に対し旦−
アセチルグルコサミン１単位について７〜８マンノ一ス
単位の存在を示した。酵素加水分解およびオリゴサツカ
ライド単雅の全体収量は実　　１質的に定量的である。
エンドＨによる消化粗生成物および精製オリゴサツカラ
イド混合物の高性能薄層クロマトグラフィ（ＨＰＴＬＣ
）による分析では同じｇ果を得た：酵素はＧｌｃＮＡｃ
（Ｍａｎ）６（１８％）、ＧＩＣＮＡＣ（Ｍａｎ）？（
２６％）およびＧＩＣＮＡＣ（Ｍａｎ）ｓ（５６％）に
相当する異る６種の生成物を遊離する（　Ｍａｎはマン
ノース残基全表わす）。これらの炭水化物は出発グリコ
ペプチドから完全に遊離する。
例　　２ （ａｌ　　グリコタン白：グリコタン白用を豊富化した
フラクションは粉砕、脱脂インゲン豆（ニアゼオラス　
プルがリス、　　Ｐｈａｓｅｏｌａａ　ｖｕｌｇａｒｉ
ｓ　）’　ｔ−ｐ）１９．０で抽出し、ｐＨ５，０で酸
性化した水に対し透析し、グリコタン白フラクションを
沈澱させ、分離しＰＨ８，０で再醇解し、グリコタン白
■の豊富なフラクションを合せた上泄液を２回遠心分離
し、凍結乾燥して曲ることにより製造する。
（１）ｌ　　グリコペプチド：・タン白フラクションの
酵素消化は大豆グリコタン白７Ｓと同じ方法（例１１）
）で正確に行なう。祠だ混合物のグルサイド組成の分析
（参考７参照）は旦−アセチルグルコサミン２単位に対
し平均７．８単位のマンノースの存在を示した。
（Ｃ）　　オリゴサツカライド：上記のように単離した
グリコペプチドはエンドＨにより完全に消化されること
がわかった。オリゴサツカライドの酵素加水分解および
単＋ａは大豆グリコペプチドと同じ方法で正確に行なう
（例１Ｃ参照）。この場合、ＨＰＴＬＣによる分析はＧ
ｘｃＮＡｃ−（Ｍａｎ）ｓ　（５％）、ｃｎｃＮＡｃ−
（Ｍａｎ）ｓ　（１０％）、ＧＩＣＮＡＣ−（Ｍａｎ）
　７（２６％）、ＧｌｃＮＡｃ−（Ｍａｎ）Ｂ　（１５
％）およびＧＩＣＮＡＣ−（Ｍａｎ）＊　　（４４％）
に相当する異る５種の生成物の遊離ヲ示した。
例　　６ 例１および２の生成物から構造の小さいグリコペプチド
およびオリゴサツカライドを製造するために、Ｍａｎα
１→２結合全優先的にＭＯｎα１→６Ｍ６１１結合に開
裂するα−マンノシダーゼ（カナバリア属植物、　　（
：ａｎａｖａｌｉａから、シグマケミカル社）の能力全
利用する。
大豆グリコタン白７８（例１ｂ）由来の３５０ダのオリ
ゴマンノシドを含むグリコペプチド試料を７５ＩＩＬｔ
のクエン酸塩緩衝耐液＜　ｏ、ｏ　ｉモル、−４，５）
に靜解し、１９０単位のα−マンノシダーゼ（カナバリ
アから、製造者規定の単位）を生成浴液に添加する。２
５°Ｃで１時間インキュベーション後、混合物を加熱処
理し、冷却し、濾過する。
次に濾液は凍結乾燥する。凍結乾燥生成物は血球凝集反
応試験（下記例４参照）に対しそのままで（粗製）使用
することができる。グリコペプチド混合物および酵素に
より遊離したマンノースを効果的に分離するためにセフ
ァデックスＧ−２５（商標）カラムで精製してもよい。
生成物のグルサイド組成の分析（参考７参照）は２１（
ロ）の旦−アセチルグルコサミ／に対し４．８単位のマ
ンノースの存在を示した。
植物起源（例１Ｃおよび２ｃ）の相当するオリゴサンカ
ライドから上記のように得た生成物の：ｒｌＰＴＬＣに
よる分析は、式ａ１ｃＮｈｃ　−（Ｍａｎ　）　５に相
当する化合物が実際に得た混合物の主要成分であること
を確証する。
例　　４ グリコペプチドおよびオリゴサツカライドの存イー　コ
リの２種の同着菌株を血球凝集反応試験および血球凝集
反応阻止試験に体系的に使用した。すなわち、イー　コ
ＩＪ　１６３７５の臨床単離菌（ユニフエルシテート　
クリニク　７エル　キンデルハイルクンデ、インスプル
ツク）およヒ菌株イーコリ０１１９．に６９、Ｌ７４−
３０（［６９）である。これらの細菌は食塩水（ｏ、９
％ＮａＣ’ｌ　）により洗清し、サスペンションは１０
９細歯／プ濃度に調整した（光学Ｑ度測定により）。
モルモットの赤血球は１％一度で食塩水にサスペンドし
た。
血球凝集区応および血球凝集反応阻止試験は２５μ！（
ミクロりの細歯ザスペンジョン、５０μｊの赤血球サス
ペンションおよび２５μｌの食塩　　Ｊ水浴液を混合す
ることにより行なった（それぞれ阻止剤を含み又は含ま
す、その場合数種の異る濃度をシリーズで試験した〕。
４℃で２時間放置後読みを行なった。
結果は表Ｉに示す： 表１について： （ａ）　　最終混合物の最少阻止濃度は完全な血球凝集
阻止反応を生する。
［ｂｌ　　式からの阻止剤濃度の計算値（混合物の場合
平均）は生成物のグルサイド組成の分析から得られる。
（Ｃ１生成物Ｇ’Ｐ　■およびｖｈ文献（参考５参照）
に従って分離され、命名され、収得されたアスパラザン
に結合した炭水化物に相当する。卵アルブミンからのグ
リコペプチドの混合物は記載（参考５参照）のものに相
当する。
（ｄ）　　ハシス　パウルセン博士により提供された合
成生成物（インスチツート　フェル　オルガニツシエへ
ミン　ウントヒオへミー　デル　ユニフエルシテート　
ハングルグ）。
ｎ、ｔ、は試験しなかったことを意味する。
他の試験は植物グリコペプチドは腸内病原菌株るモルモ
ットの赤血球凝集反応に対し匹敵できる阻止効果を有す
ることを示す。
例　　５ 細胞は実験室の多数のスタッフの口から塗抹採取により
集め、す／酸塩−緩衝生理塩浴液（Ｎ！ＬＣＩ０．１５
モル、リン酸塩０．０１モル、（、ＰＢ８　）　）によ
り４回洗滌し、最後に１０６細胞／プの濃度べ稀釈した
。腸内病原細菌の臨床単離大腸菌１６３７５はＰＢ８に
より２回洗滌し、２・１０９細菌／−の濃度に稀釈した
。
インキュベーションは５００μノの細胞サスペンション
、２５０μノの細菌サスペンションおよび２５０μＥの
ＰＢ８　（固着測定に対し）又は阻止剤（異る一連の濃
度を阻止測定に試験した＞１−混合することにより行な
った。混合は環境温度で６０分間ゆっくり回転して行っ
た。塗抹収集およびグラム染色前にｐＢｓ（５ｄ）によ
り４回洗滌した。１細胞当りの細菌固着数は光学顕微鏡
下で計数し、１試験について５０細胞を分析する。結果
は下表用に示す： 表　　■ 阻　止　剤　　　　　　　　濃　度　　　固着阻止（ｐ
ｐｍ　当量　　　　　製 マンノシド） メチル−α−Ｄ−マンノシド：　　　　　１００　　　
　　　７０大豆グリコタン白７Ｓから　　　　１００　
　　　　６５のグリコペプチド（例１ｂ）　　　　　　
５０　　　　　３０α−マンノシダーゼにより、　　　
　　１００　　　　　９０消化された（１時間）大豆　
　　　　２５　　　　７７グリコタン白からのグリコ　
　　　　　５　　　　２１ペプチド（例６） 例　　６ 固体支持体に対するグリコペプチドの固着プロナーゼに
よる消化により製造したグリコペプチド（例１ｂおよび
２１））は次の方法によりセファロ−スプルに対し固定
することができる：ＣＮＢｒ　（ファーマシア　ファイ
ン　ケミカルズ）により活性化された２ｇのセファロー
ス６ＭＢ（商標）は塩酸醇液（１そル、４００ｍＡりに
より洗滌し、濾過した。同時に、豆グリコタン白■（例
２１３）からの６６■のグリコペプチド（乾燥重量、２
５ダのオリイマンノシド金倉む）はＮＥＬＣｌ（０，５
−１＝ル）ｔ−含むＮａＨＣＯ３緩衝ｍ液（０，１モル
、ｐＨ８，３）に溶解した。ポリペプチドら液と懸濁デ
ルの混合は環境温度で２時間ゆっくり回転して行なった
。ＮａＨＣＯ３／　ＮａＣ１緩衝液、エタノールアミン
溶液（環境温度で２時間）、さらにＮａＨＣＯ３／Ｎａ
Ｃ１緩衝液、Ｎａｃｘ　（０，５モル）を含むアセテ−
Ｊト緩衝晦液（０，１モル、ｐＨ４，０）および最後に
さらにＮａＨＣＯ３／　Ｎ＆Ｃ１緩衝液により連続洗滌
してデルをグリコペプチドに結合させる。反応の収量は
４８％の固定であった（マンノース用量規準で）。
例　　７ （ＩＬ）　　細菌は例４による血球凝集反応に対しモル
モットの赤血球と混合する。同時に、同じ混合物は生物
学的活性生成物の１種の溶液（表１により完全に阻止す
るのに十分な濃度で）′ｔ−添加して製造する。細菌サ
スペンションによる赤血球の凝集反応および１種の活性
成分の添加によるその阻止°を確認する読みは、細菌が
その成分の構造に対し特定受容体を有する証拠を供する
。
（１））　　別法では、細菌サスペンションおよびグリ
コペプチドに結合したセファロ−スプル（例６）の混合
物は顕微鏡のスライド上で製造することができる。１５
分間インキュベーション後、光学顕微鏡下の分析は細菌
が特定受容体を有する場合、これらはデル粒子を被覆す
るが、反対の場合には同じ粒子は細菌を全く固定しない
ことを示す。
例　　８ 活性成分の構造に対し特定受容体を有する細菌の単離 例６により得たグリコペプチドと結合したセファロース
デルをカラムに入れる。細菌混合物はカラムを通し、デ
ルと結合したグリコペプチドに対する特定受容体全有す
る細菌は保留されるが、一方他の細歯は直接溶離される
。すすいだ後、１種の活性成分を含む緩衝液は純粋形・
で特定受容体を有する細菌ｔｉ離するために使用される
。
参考 １、Ｎ、フイツク、工、オフェク　アンド　Ｎ、シャロ
ン、カーボハイドレート　リサーチ　１２０（１９８３
Ｌ　　２３５〜２４９゜ ２、Ｍ、シェーマ−１Ｈ，Ｌ、クレイニン、Ｒ，Ｋ、マ
クドナルド　アンド　ｗ、ｇ、アーウィン、セリアル　
ケミストリ　５５（１９７８Ｌ　　３８３〜６９１゜ ３、Ｅ、ヤマウチ、Ｍ、カワセ、Ｍ、カンベ　アンドに
、シバデキ、アグリカルチュラル　バイオロジカル　ケ
ミストリ　３９（１９７５）、８７６〜８７８゜ ４．Ａ、プッタイ　アンド　Ｗ、Ｂ、ワット、バイオケ
ミ、バイオフイジオロジー　アクタ　２０７（１９７９
）、４１３〜４６１゜ ５、Ｔ、タイ、Ｋ、ヤマシタ、Ｙ、イノウニ　アンドＡ
、コバタ、ジャーナル　オブ　バイオロジカル　　ケミ
ス　ト　リ　　２５０（１９７５）、８５６９〜８５７
５゜ ６、タレンチノ、Ｒ，Ｂ、　）リンプル　アンド　Ｆ。
マレイ、メンラド　イン　エンチモロシ−（ｖ、ｐシス
ブルグ、エディター、アカデミツク　プレス　ニューヨ
ーク）。
７、　　Ｊ、Ｒ，ニーサー　アンド　Ｔ、？、シュワイ
ツアー、アナリテイカル　バイオケミストリ（１９８４
）。

Claims (10)

    【特許請求の範囲】
  1. （１） I 型線毛を有する病原菌用抗菌組成物であって
    、活性成分として次式： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、Ｒ＿１は水素原子、残基４ＧｌｃＮＡｃβ１→
    ＡＳＮ又は残基４ＧｌｃＮＡｃβ１→▲数式、化学式、
    表等があります▼（Ｒ′およびＲ″は同一又は異り、ア
    ミノ酸残基又はポリペプチド鎖を表わす）であり、Ｒ＿
    ２、Ｒ＿３およびＲ＿４は同一又は異り、水素原子、マ
    ンノース残基又はオリゴマンノシド鎖を表わす〕に相当
    するグリコペプチドおよび／又はオリゴサッカライドを
    含むことを特徴とする、上記組成物。
  2. （２）活性成分として式 I 〔式中、Ｒ＿１は残基４Ｇ
    ｌｃＮＡｃβ１→ＡＳＮ又は残基４ＧｌｃＮＡｃβ１→
    ▲数式、化学式、表等があります▼（式中、Ｒ′および
    Ｒ″は同一又は異り、アミノ酸残基又はポリペプチド鎖
    を表わす）であり、Ｒ＿３およびＲ＿４は水素原子を表
    わし、Ｒ＿２は水素原子又はマンノース残基である〕を
    有する化合物を含む、特許請求の範囲第１項記載の組成
    物。
  3. （３）活性成分として式 I （式中、Ｒ＿１、Ｒ＿３お
    よびＲ＿４は水素原子であり、Ｒ＿２は水素原子又はマ
    ンノース残基である）を有する化合物を含む、特許請求
    の範囲第１項記載の組成物。
  4. （４）好ましくは巨大分子支持体に共有結合により結合
    した式 I 〔式中、Ｒ＿１は残基４ＧｌｃＮＡｃβ１→
    ＡＳＮ又は残基４ＧｌｃＮＡｃβ１→▲数式、化学式、
    表等があります▼であり、Ｒ′、Ｒ″およびＲ＿１、Ｒ
    ＿２、Ｒ＿３およびＲ＿４は特許請求の範囲第１項に規
    定した意味を有する）を有するグリコペプチドを含む、
    特許請求の範囲第１項記載の組成物。
  5. （５）療養食製品形、好ましくは粉乳形である、特許請
    求の範囲第１項から第３項のいずれか１項に記載の組成
    物。
  6. （６）式 I 〔式中、Ｒ＿１は水素原子、残基４Ｇｌｃ
    ＮＡｃβ１→ＡＳＮ又は残基４ＧｌｃＮＡｃβ１→▲数
    式、化学式、表等があります▼（Ｒ′およびＲ″は同一
    又は異り、アミノ酸残基又はポリペプチド鎖を表わす）
    であり、Ｒ＿２、Ｒ＿３およびＲ＿４は同一又は異り、
    水素原子、マンノース残基又はオリゴマンノシド鎖を表
    わす〕に相当するグリコペプチドの製造方法において、
    植物起源のグリコタン白をタン白分解酵素により消化さ
    せ、得たグリコペプチドを任意にはエンド−β−￥Ｎ￥
    −アセチルグルコースアミニダーゼＨの作用によりオリ
    ゴサッカライドに変換し、そして次に得たグリコペプチ
    ド又はオリゴサッカライドをエキソ−α−マンノシダー
    ゼにより調整消化して２個のマンノース残基間のα１→
    ２結合を選択的に開裂することを特徴とする、上記方法
    。
  7. （７）出発グリコタン白は脱脂植物穀粉から単離し、好
    ましくは大豆グリコタン白７Ｓ又は豆グリコタン白IIを
    豊富化した単離物形である、特許請求の範囲第６項記載
    の方法。
  8. （８）特許請求の範囲第４項記載の組成物の製造方法に
    おいて、活性巨大分子支持体はグリコペプチド溶液と反
    応させる、上記方法。
  9. （９） I 型線毛を供された特定細菌を確認し、および
    ／又は単離することに対する特許請求の範囲第１項から
    第４項のいずれか１項記載の組成物の使用。
  10. （１０）表面殺菌に対する特許請求の範囲第１項から第
    ３項のいずれか１項記載の組成物の使用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6176589B1 (en) 1996-10-15 2001-01-23 Kabushiki Kaisha Tokai Rika Denki Seisakusho Dial operating apparatus

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2605185B1 (fr) * 1986-10-17 1993-08-20 Meiji Seika Kaisha Procede de culture des plantes
DE68910212T2 (de) * 1988-07-12 1994-03-03 Aquaspersions Ltd Bekämpfung unerwünschter Schädlinge.
US5041236A (en) * 1989-10-27 1991-08-20 The Procter & Gamble Company Antimicrobial methods and compositions employing certain lysozymes and endoglycosidases
EP0425016B1 (en) * 1989-10-27 1995-12-20 The Procter & Gamble Company Antimicrobial method and formulation employing type II endoglycosidase and antimicrobial agent
US5238843A (en) * 1989-10-27 1993-08-24 Genencor International, Inc. Method for cleaning a surface on which is bound a glycoside-containing substance
US5258304A (en) * 1989-10-27 1993-11-02 Genencor International, Inc. Method of removing microorganisms from surfaces with Type II endoglycosidase
US5141925A (en) * 1990-04-23 1992-08-25 Trustees Of Tufts College Vivo methods for treating coccidiosis
US5718909A (en) * 1991-02-18 1998-02-17 Medscand Ab Sheet containing carbohydrate derivative for removal of E. coli
US5500206A (en) * 1994-04-29 1996-03-19 The Procter & Gamble Company Oral compositions comprising actinomyces viscosus fimbriae
JP3061616B1 (ja) * 1999-04-09 2000-07-10 株式会社セラリカ野田 低カロリ―調製ロ―ヤルゼリ―
FR2802536B1 (fr) * 1999-11-23 2003-06-13 Chru Lille Oligomannosides de synthese, leur preparation et leur utilisation a la detection d'anticorps et a la prevention d'infections
ITMI20030391A1 (it) * 2003-03-04 2004-09-05 S I I T S R L Servizio Internaz Ionale Imballa Formulazioni anticarie a base di faseolamina.

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PH14773A (en) * 1976-01-01 1981-12-09 Kureha Chemical Ind Co Ltd Protein-bound polysaccharides
JPS5576818A (en) * 1978-12-06 1980-06-10 Hitoshi Ito Agent for improving hepatic function
AU6770981A (en) * 1980-01-28 1981-08-17 Svensson, S. E. Isolation of carbohydrates from cell tissue
AU561066B2 (en) * 1982-03-22 1987-04-30 Biocarb Ab Antibacterial composition containing an oligosaccharide
AU561067B2 (en) * 1982-03-22 1987-04-30 Biocarb Ab Anti-bacterial composition containing an oligosaccharide
EP0089940A1 (en) * 1982-03-23 1983-09-28 BioCarp AB Compositions for therapeutic or diagnostic use containing oligosaccharides
IT1168205B (it) * 1983-07-21 1987-05-20 Wellcome Italia Derivato di monsialo ganglioside dotato di attivita' antibatterica, antifungina ed antitumorale, composizioni che lo contengono e procedimento per la loro preparazione
US4613589A (en) * 1985-08-19 1986-09-23 Abbott Laboratories D-manno-2-octulosonic acid derivatives, pharmaceutical compositions and method of use
US4613590A (en) * 1985-08-19 1986-09-23 Abbott Laboratories Amino D-manno-2-octulopyranosidonate containing compounds, pharmaceutical compositions and method of use

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6176589B1 (en) 1996-10-15 2001-01-23 Kabushiki Kaisha Tokai Rika Denki Seisakusho Dial operating apparatus

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AU4851485A (en) 1986-05-01
EP0179324B1 (fr) 1991-10-16
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NO164719C (no) 1990-11-07

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