JPS6035355B2 - アデノシン誘導体のナトリウム塩の製法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、医薬および生化学研究用試薬として用途が開
発されつ）あるＮ６・２−０−ジブチリル・ァデノシン
ー３・５一環状燐酸（以下Ｄ技−ＡＭＰと略称する）ナ
トリウム塩の製造法に関するものであり、その特徴とす
るところはアデノシンー３′・６一環状燐酸（以下ｃ−
Ａ八岬と略称）からＤＢｃ−ＡＭＰの製造工程において
反応混合物から選択的にＤ技‐ＡＭ円ァミン塩類のみを
ハロゲン化炭化水素で抽出・精製し、次いでこの精製Ｄ
Ｂ−ＡＭＰ・ァミン塩類を適当な有機酸または無機酸の
ナトリウム塩と反応させて塩を交換し、高純度のＤＢｃ
−ＡＭＰ・ナトリウム塩を製造する方法である。

従来Ｄ＆−ＡＭＰのナトリウム塩の製造法としては次の
三つの方法が知られている。

【１｝ バリウム塩を経由する方法（ＢｉｏｃｈｉｍＢ
ｉｏｐｈ＄．Ａｃｔｅ．１４８ ９９（１９６７）この
方法は、たとえばｃ−ＡＭＰのトリヱチルアミン（以下
ＴＥＡと略称）塩を無水ｎ−酪酸と反応させて得られた
ＤＢ−ＡＭ円・ＴＥＡ塩にョウ化バリウムを加え、エタ
ノールおよびエーテルを順次加えることにより、ＤＢｃ
−ＡＭＰ・バリウム塩を析出せしめ、次いでこのバリウ
ム塩をナトリウム塩に交換せしめるものであるが、この
方法は収率が低く、劉生した着色物質を除去することが
極めて困難な欠点がある。

‘２’イオン交換樹脂による方法（特関昭４８一５２７
９６）ＤＢｃ−ＡＭＰを塩基性陰イオン交換樹脂に吸着
せしめて適当な脱着剤で脱着する方法か、Ｄ氏−ＡＭＰ
・ＴＥＡ塩をナトリウム型酸性陽イオン交換樹脂で処理
する方法であるが、いずれの方法も操作に長時間を要し
、常温で化学的に分解されやすいＤＢｃ−ＡＭＰを安定
に保つために、吸着液、イオン交換樹脂充填カラム、脱
着液剤、脱着液等を冷却する必要があり、経済的、工業
的に有利な方法ではない。

｛３’中和による方法（特開昭４８−４９８）反応液に
水を加え、無水ｎ−酪酸を加水分解し、水酸化カルシウ
ムで中和、ｎ−酪酸カルシウムとして分離後、イオン交
換樹脂でカルシウムを除去し、苛性ソーダでナトリウム
塩に交換後、アルカリ塩類を添加してＤＢｃ−ＡＭＰ・
ナトリウム塩を析出せしめ、濠取、有機溶媒による抽出
を繰り返してアルカリ塩類を除去、精製する方法である
。

しかしながらこの方法は、苛性ソーダでナトリウム塩に
交換するときＤＢ−ＡＭＰが分解し、Ｄ技−ＡＭ円・ナ
トリウム塩中にアルカリ塩が混入し、アルカリ塩を完全
に除去しようとすると収率が低下し、その上操作が煩雑
である等の欠点を有しており、工業的に実施するには必
ずしも得策ではない。一般に、ｃ−ＡＭＰを無水ｎ−酪
酸と反応後反応液に水を加え過剰の無水ｎ−酪酸をｎ−
酪酸に加水分解し、エーテル、メチルィソブチルケトン
等の適当な有機溶媒で洗浄してｎ−酪酸を除去した反応
混合物は、通常目的とするＤＢｃ−ＡＭ円の他に副生物
として２′−０−モノプチリル・アデノシン−３・５一
環状燐酸（以下ＯＭｃ−ＡＭ円と略称）、Ｎ６ーモノブ
チリル・アデノシン−３・６一環状燐酸（以下ＮＭｃ−
ＡＭＰと略称）、ｃ−ＡＭＰ等を含有している。

すなわちＤ＆−ＡＭＰは酸性またはアルカリ性で極めて
容易に分解されやすく、酸性ではＯＭｃ−ＡＭＰが、ア
ルカリ性ではＮＭｃ−ＡＭＰが発生するため、反応混合
物には通常これらの創生物の共存は避けられない。しか
も副生物として、たとえばＯＭｃ− ＡＭＰ・ＴＥＡ塩、ＮＭｃ−ＡＭＰ・ＴＥＡ塩、ｃ−Ａ
ＭＰ・ＴＥＡ塩等を共存するＤＢｃ一ＡＭＰ・ＴＥＡ塩
は工業的に常用される再結晶では精製困難である。

さらに本発明者等はこれらのＴＥＡ塩をナトリウム塩に
交換後再結晶を試みたが物性が極めて類似しているため
、到底副性物を分離除去することは不可能であった。以
上述べたように精製ＤＢ−ＡＭＰ・ナトリウム塩の製造
法は極めて困難であり、工業的に有利な方法は殆んど見
出されていない。

そこで本発明者等は精製ＤＢｃ−ＡＭＰ・ナトリウム塩
を効率的に製造する工業的方法について鋭意研究を重ね
た結果、ＤＢｃ−ＡＭＰおよび副生物（ＯＭｃ−ＡＭ円
、ＮＭｃ−ＡＭＰ、ｃ−ＡＭＰ等）のＴＥＡ塩水溶液を
クロロホルム等のハロゲン化炭化水素溶媒と接触させる
と、おどろくべきことにＤＢ−ＡＭＰ・ＴＥＡ塩のみが
選択的に有機溶媒に移行するのでこの有機層を分取、溶
媒を留去し、ｎ−酪酸ナトリウム等と塩交換により、高
純度のＤ母−ＡＭＰ・ナトリウム塩を収率よく得ること
を見出し、これらの見知に基づいて本発明を完成した。

本発明をさらに詳細に述べるならば、ｃ−ＡＭＰを無水
ｎ−酪酸と反応後反応液に水を加え過剰の無水ｎ−酪酸
を加水分解し、生成したｎ−酪酸を、エーテル、ィソプ
ロピルェーテル、メチルィソブチルケトン等の適当な第
一の有機溶媒で洗浄除去した反応混合物は通常目的とす
るＤ技−ＡＭＰ・アミン塩類の他に副生物してＯＭｃ−
ＡＭＰ、ＮＭｃ−ＡＭＰ、ｃ−ＡＭＰ等のアミン塩類を
含有している。

この反応混合物を濃縮し、二塩化メタン、二塩化ェタン
、クロロホルム等のすなわち、ハロゲン化炭化水素と接
触せしめると創生物ＯＭｃ一ＡＭＰ、ＮＭｃ一ＡＭＰ、
ｃ−ＡＭＰ等のアミン塩類は水溶液にそのま）残存し、
ＤＢｃ−ＡＭＰ・アミン塩類のみが選択的にハロゲン化
炭炭化水素に抽出される。アミン塩としては、メチルア
ミン、エチルアミン、ｎープロピルアミン、シクロヘキ
シルアミン等の一級アミン、ジメチルアミン、ジエチル
アミン、ピベリジン、ピロリジン、ピベラジン、モルホ
リン等の二級アミン、トリメチルアミン、トリエチルア
ミン、トリーｎ−プロピルアミン、トリ−ｎーブチルア
ミン等の三級アミン及びアンモニアの塩が用いられてい
る。第一の有機溶媒はｎ−酸酸のみを抽出し、ＤＢ−Ａ
ＭＰ・アミン塩類を抽出しないものが好ましい。また、
ＤＢｃ−ＡＭＰ・アミン塩類の抽出効率が低い場合には
、適宜有機または無機の塩類を溶解してＤＢｃ−ＡＭＰ
・アミン塩類の抽出効率を向上させることもできる。

さらに、本発明者等の方法は公知の方法で製造し、ＯＭ
ｃ−ＡＭＰ、ＮＭｃ−ＡＭｍ、ｃ一ＡＭＰ等のナトリウ
ム塩の副生物を含んだＤＢｃ−ＡＭ円・ナトリウム塩も
これらを水に溶解し、等モルのアミン鉱酸塩を加えてァ
ミン塩類に変換後上述の処理を行うことによりＤＢｃ−
ＡＭＰを精製することができる。

すなわちＤＢＣ−ＡＭＰおよび副生物がアミン塩以外の
金属塩類例えばナトリウム、カリウム等のアルカリ金属
塩、カルシウム、バリウム等のアルカリ士金属塩の場合
にも精製が可能である。抽出に用いられるハロゲン化炭
化水素としては二塩化メタン、二塩化ェタン、クロロホ
ルム等が適当である。

沸点の高い溶媒の場合には、これらの溶媒区分を分取し
、次いでこの溶媒区分を水性溶媒の存在下に炭化水素系
の少なくとも一種の溶媒に接触させて、Ｄ成一ＡＭＰ・
ァミン塩類を水性溶媒に転溶させることも可能である。

このようにして精製したＤＢｃ−ＡＭＰ・アミン塩類は
溶媒を留去、少量の水に溶解し適当な有機酸または無機
酸のナトリウム塩類を加え、アセトン、アセトニトリル
、メチルエチルケトン等の親水性有機溶媒を加えて塩の
交換を行なうことにより高純度のＤＲ−ＡＭ円・ナトリ
ウム塩を高収率で得ることができる。これらのナトリウ
ム塩類としては例えば酢酸ナトリウム、プロピオン酸ナ
トリウム、ｎ−酪酸ナトリウム、ョウ化ナトリウム、ベ
ンゼンスルホン酸ナトリウム、ｐートルェンスルホン酸
ナトリウムが好適に用いられる。このナトリウム塩類の
塩交換によるＤＢ‐ＡＭＰ・ナトリウム塩の製法は、公
知の方法のようなアルカリによる中和とか濃縮操作の必
要がないので、Ｄ技−ＡＭＰの分解が著しく抑制され、
高純度のＤ技−ＡＭＰ・ナトリウム塩が得られる利点を
有している。以上述べたことから明らかなように、本発
明者等の方法はＤ＆−ＡＭＰおよび副生物のアミン塩類
の反応混合物を適当なハロゲン化炭化水素と接触せしめ
ることにより、ＤＢ−ＡＭＰ・アミン塩類を精製し、次
いでこの精製Ｄ氏−ＡＭＰ・ァミン塩を適当な有機酸ナ
トリウム塩と塩交換することにより、容易かつ効率的な
高純度のＤ欧−ＡＭＰ・ナトリウム塩の製造法を提供す
るものである。

本発明によれば、従来分離精製が極めて困難であった○
成一ＡＭＰ・ナトリウム塩を簡単な抽出と塩交換により
、効率的に純度よく製造しうる特徴を有するもので、し
かも経済的、工業的に優れた方法を提供するものである
。

次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。

実施例 １ ｃ−ＡＭＰ６．５９夕を無水ｎ−酪酸と反応後反応液に
水を加え、過剰の無水ｎ−酪酸を加水分解し、メチルィ
ソブチルケトンで洗浄してｎ−酪酸を除去する。

才由残液（高速液体クロマトグラフィーによる分析値：
ＤＢｃ−ＡＭ円・ＴＥＡ塩９３．７％、ＯＭｃ−ＡＭＰ
・ＴＥＡ塩２．３％、ＮＭｃ−ＡＭＰ・ＴＥＡ塩３．６
％、ｃ−ＡＭＰ・ＴＥＡ塩０．４％）を濃縮し、全量４
０泌とし、クロロホルム２００の‘で３回抽出し、クロ
ロホルムを留去すると残澄９．１５夕（分析値、ＤＢｃ
−ＡＭＰ・ＴＥＡ塩９９．７％、ＯＭｃ−ＡＭＰ・ＴＥ
Ａ塩０．３％、ＮＭｃ−ＡＭＰ・ＴＥＡ塩０．０％、ｃ
−ＡＭＰ・ＴＥＡ塩０．０％）を得る。この残溝を水１
２私に溶解、ｎ−酪酸ナトリウム１．７７夕を加え熔解
し、アセトニトリル５００双｛を加え、冷凍室に一夜放
置後析出結晶を猿取するとＤ成一ＡＭＰ・ナトリウム塩
６．５５夕（分析値：ＤＢｃ−ＡＭＰ・Ｎａ塩９９．５
％、ＯＭｃ−ＡＫ仲・Ｎａ塩０．３％、ＮＭｃ−ＡＭＰ
・Ｎａ塩０．１％、ｃ−ＡＭＰ・Ｎａ塩０．０％）を得
る。収率６６．３％。本品は別途合成したＤＢｃ−ＡＭ
Ｐ・ナトリウム塩の標品とＩＲが完全に一致する。なお
母液より二次晶が得られる。実施例 ２ 不純物としてＯＭｃ−Ａ八作・Ｎａ塩３．７％、ＮＭｃ
−ＡＭＰ・Ｎａ塩５．４％、ｃ−ＡＭＰ・Ｎａ塩４．１
％を含有する粗Ｄ＆−ＡＭＰ・Ｎａ塩２．１７夕（Ｄ技
−ＡＭＰ・Ｎａ塩として１．８８夕）を水１０机上に溶
解し、ＴＥＡ・塩酸塩０．６３夕を加え溶解する。

次いでクロロホルム５０泌で３回抽出し、クロロホルム
を蟹去すると残湾２．０５夕（分析値；ＤＢｃ−ＡＭＰ
・ＴＥＡ塩９９．５％、ＯＭｃ−ＡＭＰ・ＴＥＡ塩０．
４％、ＮＭｃ−ＡＭＰ・ＴＥＡ塩０．１％、ｃ−ＡＭ円
・ＴＥＡ塩０．０％）を得る。この残総を水２．５の【
に溶解、ｎ−酪酸ナトリウム０．４０夕を加え溶解し、
アセトニトリル１５０の‘を加え冷凍室に一夜放置、析
出結晶を猿取するとＤ氏−ＡＭＰ・Ｎａ塩１．５１夕（
分析値；Ｄ弦‐ＡＭＰ・Ｎａ塩９９．４％、ＯＭｃ−Ａ
ＭＰ・Ｎａ塩０．４％、ＮＭｃ−ＡＭ円・Ｎａ塩０．２
％、ｃ−ＡＭ円・Ｎａ塩０．０％）を得る。

本品は別途合成したＤ氏−ＡＭ０・Ｎａ塩の標品とＩＲ
が完全に一致する。実施例 ３ 不純物としてＤＭｃ−ＡＭＰ・Ｎａ塩２．３％、ＮＭｃ
−ＡＭＰ・Ｎａ塩３．６％、ｃ−ＡＭＰ・Ｎａ塩１．８
％を含有する粗Ｄ＆−ＡＭＰ・Ｎａ塩２．０４夕（ＯＲ
−ＡＭＰ・Ｎａ塩として１．８８夕）を水１０叫に溶解
、ＴＥＡ・ＨＣＩ塩０．５９夕を加え溶解する。

次いで二塩化メタン１００地で３回抽出し、溶媒を留去
すると残澄１．９６夕（分析値；ＤＢｃ−ＡＭＰ・ＴＥ
Ａ塩９９．８％、ＯＭｃ−ＡＭＰ・ＴＥＡ塩０．２％、
ＮＭｃ−ＡＭＰ・ＴＥＡ塩０．０％、ｃ−ＡＭｍ・ＴＥ
Ａ塩０．０％）を得る。この残澄をィソプロピルェーテ
ルで結晶化すると元素分析値Ｃ２４日船Ｎ６０８Ｐ‐裏
日２０として理論値（％）：Ｃ４９．７４、日６．９６
、Ｎ１４．５０分析値（％）：Ｃ４９．８３、日６．９
２、Ｎ１４．５７この残盤を水２．５のとに溶解、ｐ−
トルェンスルホン酸ナトリウム０．６７夕を加え熔解し
、アセトン１７０の上を加え冷凍室に一夜放置、析出結
晶を猿取するとＤＢｃ−ＡＭ円・Ｎａ塩１．４３夕（分
析値；ＤＢｃ−ＡＭ円・Ｎａ塩９９．７％、ＯＭｃ−Ａ
ＭＰ・Ｎａ塩０．３％、ＮＭｃ−ＡＭ円・Ｎａ塩０．０
％、ｃ−ＡＭＰ・Ｎａ塩０．０％）を得る。

本品は別途合成したＤＢｃ−ＡＭＰ・Ｎａ塩の標品とＩ
Ｒが完全に一致する。なお母液より二次晶が得られる。
実施例 ４ 不純物としてＯＭｃ−ＡＭ円・Ｎａ塩３．７％、ＮＭｃ
−ＡＭＰ・Ｎａ塩５．４％、ｃ−ＡＭＰ・Ｎａ塩４．１
％を含有する粗Ｄ＆−ＮＭＰ・Ｎａ塩１．９６夕（ＤＢ
−ＡＭＰ・Ｎａ塩として１．７０夕）を水３０地に溶解
、トリーｎープチルアミン塩酸塩０．９２夕を加え溶解
する。

次いで二塩化ェタン３０机で３回抽出し、溶媒を留去す
ると残澄２．０９夕（分析値；ＤＢｃ−ＡＭＰ・トリー
ｎ−プチルアミン塩９８．９％、ＯＭｃ−ＡＭＰ・トリ
ーｎ−ブチルアミン塩０．９％、ＮＭｃ一ＡＭＰ・トリ
−ｎーブチルアミン塩０．２％、ｃ−ＡＭＰ・トリ−ｎ
ーブチルアミン塩０．０％）を得る。この残燈をイソプ
ロピルェーテルで結晶化すると元素分析値 Ｃ３は５，
Ｎ６０８Ｐとして理論値（％）：Ｃ５５．０３日７．８
５Ｎ１２．８４分析値（％）：Ｃ６５．１８日７．７３
Ｎ１２．６５この残経を水２．５の‘に溶解、ｎ−酪酸
ナトリウム０．３６夕を加え溶解し、アセトニトリル１
７０の‘を加え冷凍室に一夜放置、析出結晶を猿取する
と○氏−ＡＭＰ・Ｎａ塩１．１９夕（分析値；Ｄ氏−Ａ
ＭＰ・Ｎａ塩９８．８％、ＯＭｃ−ＡＭＰ・Ｎａ塩０．
９％、ＮＭｃ−ＡＭ円・Ｎａ塩０．３％、ｃ−ＡＭ円・
Ｎａ塩０．０％）を得る。

本品は別途合成したＤ＆−ＡＭＰ・Ｎａ塩の標品とＩＲ
が完全に一致する。なお母液より二次晶が得られる。実
施例 ５ 不純物としてＯＭｃ−ＡＭ円・Ｎａ塩３．７％、ＮＭｃ
−ＡＭＰ・Ｎａ塩５．４％、ｃ−ＡＭＰ・Ｎａ塩４．１
％を含有する粗ＤＢ−ＡＭＰ・Ｎａ塩２．０３夕（ＤＢ
−ＡＭＰ・Ｎａ塩として１．７６夕）を水１０机に溶解
、ピベリジン塩酸塩０．５３夕を加え溶解する。

次いでクロロホルム１００地で３回抽出し、溶媒を留去
すると残澄１．６９夕（分析値；ＤＢｃ−ＡＭＰ・ピベ
リジン塩９８．１％、ＯＭｃ−ＡＭＰ・ピベリジン塩１
．４％、ＮＭｃ−ＡＭＰ・ピベリジン塩０．５％、ｃ−
ＡＭＰ・ピベリジン塩０．０％）を得る。この残澄を水
２．５の【に溶解、ｎ−酪酸ナトリウム０．３４夕を加
え溶解し、アセトニトリル１５０の‘を加え、冷凍室に
一夜放置、析出結晶を櫨取するとＤＢ−ＡＭＰ・Ｎａ塩
１．０９夕（分析値；ＤＢ一ＡＭＰ・Ｎａ塩９８．０％
、ＯＭｃ−ＡＭＰ・Ｎａ塩１．４％、ＮＭｃ−ＡＭ円・
Ｎａ塩０．６％、ｃ−ＡＭｍ・Ｎａ塩０．０％）を得る
。

実施例 ６ 不純物としてＯＭｃ−ＡＭ円・Ｎａ塩２．３％、ＮＭｃ
−ＡＭＰ・Ｎａ塩３．６％、ｃ−ＡＭＰ・Ｎａ塩１．８
％を含有する粗Ｄ母−ＡＭＰ・Ｎａ塩３．２１夕（ＤＢ
一ＡＭＰ・Ｎａ塩として２．９６夕）を水５０の‘に溶
解、トリ−ｎ−ブチルアミン塩酸塩１．４８夕を加え溶
解する。

次いで二塩化ェタン５０地で３回抽出し、溶媒を留去す
ると残澄３．６９夕を得る。この残澄を水４．５叫に溶
解、ｐートルェンスルホン酸ナトリウム１．１０夕を加
え溶解し、アセトニトリル３００泌を加え、冷凍室に一
夜放置、析出結晶を櫨取すると精製ＤＢｃ−ＡＭＰ・Ｎ
ａ塩２．３４夕（分析値；ＤＢｃ−ＡＭＰ・Ｎａ塩９９
．５％、ＯＭＣ−ＡＭＰ・Ｎａ塩０．４％、ＮＭｃ−Ａ
ＭＰ・Ｎａ塩０．１％、ｃ−ＡＭＰ・Ｎａ塩０．０％）
を得る。

実施例 ７ 不純物としてＯＭｃ−ＡＭ円・Ｎａ塩２．３％、ＮＭＣ
−ＡＭＰ・Ｎａ塩３．６％、ｃ−ＡＭＰ・Ｎａ塩１．８
％を含有する粗○技−ＡＭＰ・Ｎａ塩３．１７夕（Ｄ母
−ＡＭＰ・Ｎａ塩として２．９８夕）を水１５の上に溶
解、ＴＥＡ・ＨＣＩ塩０．９１夕を加え溶解する。

次いで二塩化メタン１５０の【で３回抽出し、溶媒を蟹
去すると残澄３．０８夕を得る。この残糟を水４．０の
‘に溶解、プロピオン酸ナトリウム０．５２９を加え溶
解し、メチルエチルケトン２００の‘を加え、冷凍室に
一夜放置、析出結晶を櫨取すると精製ＤＢｃ−ＡＭ円・
Ｎａ塩２．１４夕（分析値；ＤＢ−ＡＭＰ・Ｎａ塩９９
．６％、ＯＭＣ−ＡＭＰ・Ｎａ塩０．３％、ＮＭｃ−Ａ
ＭＰ・Ｎａ塩０．１％、ｃ−ＡＭＰ・Ｎａ塩０．０％）
を得る。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ アデノシン−３′・５−環状燐酸アミン塩類、２′
   −０−モノブチリルアデノシン−３′・５′−環状燐酸
   アミン塩類、Ｎ＾６−モノブチリルアデノシン−３′・
   ５′−環状燐酸アミン塩類等を共存するＮ＾６・２′−
   ０−ジブチリルアデノシン−３′・５′−環状燐酸アミ
   ン塩類水溶液から、ハロゲン化炭化水素でＮ＾６・２′
   ０−ジブチリルアデノシン−３′・５′−環状燐酸アミ
   ン塩類を選択的に抽出し、次いでこのものを有機酸また
   は無機酸のナトリウム塩と反応させて塩を交換すること
   を特徴とするＮ＾６・２′−０−ジブチリルアデノシン
   −３′・５′−環状燐酸ナトリウム塩の製造法（ここで
   アミン類は鎖状もしくは環状脂肪族第一、第二または第
   三アミンならびにアンモニアを意味する）。