JPS60239670A - 凝集反応を利用した免疫化学的分析方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 凝集反応を利用した検査方法は、血液型の判定に用いら
れているが、最近は動物赤血球その他の担体粒子に種々
の抗原あるいは抗体等を感作することにより各種ウィル
ス感染症の検査さらには抗体あるいは抗原等の生理活性
物質の測定に広く利用されるようになってきている。本
発明は、この、免疫化学分野、生物化学分野など、とり
わけ臨床検査分野で多用されている、この凝集反応を利
用した分析方法を改良するものである。

（従来の技術） 従来の凝集反応には、血液型の判定などで利用されてい
る、粒子自ら具有している抗原等を利用した直接凝集反
応と、抗原等を担体粒子に感作させてこの感作粒子を凝
集させる間接凝集反応とがあるが、いずれの方法におい
ても凝集反応はマイクロプレートのウェルあるいは小試
験管内などで行なわれていた。この凝集反応を利用した
分析法では一番微量で測定できるマイクロプレート法で
も反応液量を５０〜１２５４程度要していた。これより
極微量の場合には、例えば血液型の判定には溶血反応な
どが利用されていた。

（発明が解決しようとする問題点） 溶血反応法は操作に５段階を要するなど煩雑であシ、か
つ分析対象が限定され、一方凝集反応法の場合には微量
とはいえ相当量の試料及び試薬を必要とするところから
、極微量しか試料を入手できない場合にはこの方法を利
用できなかった。

〔発明の構成〕

本発明は、凝集反応を流動パラフィン等の液体内に水滴
を導入してこの水滴内で凝集反応させることによって極
微量で分析しうるようにしたところに特徴があり、この
特定の液体を振盪しあるいは遠心するなどしても水滴が
分散などせず、凝集反応の場として充分利用できること
を見出してなされたものである。

（問題点を解決するだめの手段） 本発明は、凝集反応を利用した免疫化学的分析方法にお
いて、透明であり、水に不溶性であり、当該凝集反応に
不活性であシ、比重が１〜０７であシ、かつ不揮発性の
液体の内部に、少なくとも分析対象生理活性物質の存在
に応じて凝集反応する粒子と検体とが共存する水溶液の
場を形成し、当該場における当該粒子の凝集状態を検査
することを特徴とする生理活性物質の分析方法に関する
ものである。

水溶液の場を形成させる液体は、透明であること、水に
不溶性であること、当該凝集反応に不活性であること、
比重が１〜０７程度であること、及び不揮発性であるこ
とが少なくＬも必要である。

すなわち、この液体は凝集状態を検査するために透明で
なければならず、水溶液の場を形成させるために水に不
溶性でなければならない。また、非特異反応を防止する
ために当該凝集反応に不活性でなければならず、液体内
部に水溶液の場を形成させるために比重が１〜０７でな
ければならない。

さらに、この液体は凝集反応を終了して検査に至るまで
存在していなければならないから不揮発性でなければな
らない。この液体の比重は特に０．８５〜１程度が好ま
しい。この液体はさらに低粘度であることが好ましい。

このような液体の例として流動パラフィン及びこのよう
な条件を満たすシリコンオイルなどを挙げることができ
る。これらのなかで特に流動パラフィンが本発明の方法
に好適である。

液体を入れる容器は特に限定されないが、テラサキプレ
ートあるいはマイクロプレートのウェルなどを利用する
ことができる。各ウェルに入れる液量は一定でなくとも
よいが、例えばテラサキプレートの場合には１ウエルあ
た。！１ｌ１５〜ＩｏＮ３程度を入れればよい。

このような液体の内部に形成される場の水溶液は通常の
凝集反応と同様でよく、凝集反応の種類に応じて定めら
れる。本発明の方法を適用しうる凝集反応の種類は特に
制限されるものではなく、血液型の判定などに利用され
ている直接凝集反応のほか、梅毒トレポネーマ・・ｆ　
ＩＪダム、スト５ドブトリジン０１ストレプトキナーゼ
、マイコプラズマ、トキソプラズマなどの各種感染症に
よる抗体の検出、サイログロブリン、エリテマトーデス
、リーーマチファクターなど各種自己免疫性抗体の検出
、ＨＢｇなどのウィルス関連抗原の検出、ＨＣＧ、ＨＰ
Ｌ々どのＲブタイドホルモンの検出、ＡＦＰ、フェリチ
ン、β２−マイクログロブリンなどの癌関連抗原の検出
などに広く利用できる。

これらの分析対象生理活性物質の存在に応じて凝集反応
する粒子は凝集反応に通常使用される感作粒子等をその
まま用いればよく、例えば、抗原、抗体等を感作したゼ
ラチン粒子（特開昭５７−１５３６５８号公報など）、
ポリスチレンラテックス、ベントナイト、カオリン、炭
末、動物赤血球、細菌などを利用できる。粒径は小さい
ほうが好ましく、１〜３μｍ程度が特に好捷しい。これ
よりも粒径の大きなものを使用する場合には非特異反応
を防止するために粒子の濃度を通常の凝集反応の場合よ
りも低くすることが好ましい。非特異反応がほとんどな
く、また、１〜３μｍ程度の微粒子が容易に得られるこ
と、さらに着色が容易であシ凝集状態を判別しやすいこ
となどの点からゼラチン粒子が特に好ましい。

水溶液の場は０．５〜１０局、特に２〜３ａ程度の水溶
液を用いて水滴状態に形成する。この水滴は、例えば粒
子の懸濁液、検体、その他必要な液をマイクロシリンジ
に所定量づつ吸引して、この缶液を最初の液滴内に次々
と注入することによシ一つの液滴を形成させるようにす
ればよい。

注入後は振盪等により水溶液内を混合し、所定時間放置
後、凝集状態を検査すればよい。

検査は、光学顕微鏡等を利用して肉眼で観察してもよく
、オートアナライザー等を用いて自動化することもでき
る。

（作用） 水溶液の量が数４の場合には机上では瞬時に蒸発してし
まうが、流動ノ４ラフイン等の液体に包囲させることに
よってこの蒸発を防止している。また、この液体は水溶
液の液滴を分散させずに安定して存在させるという機能
も果たしている。

〔発明の効果〕

数頭という極微量の水溶液内で凝集反応させること力・
でき、その結果、検体量も試薬量も極微量で足シるよう
になった。溶血反応を利用した方法に比し、凝集反応法
は操作が格段に簡単であるところから、この極微量分析
を簡便に行なえるようになった。また、間接凝集反応法
においても直接凝集反応法のような凝集塊が形成される
ところから判断をより容易に行なえるようになった。

〔実施例〕

血清リン・ぞ球及び脳油出物についてリンパ球の型判定
を行なった。

各種血清検体をフィコール・コンレイ比重遠心法で分離
してリン・ぐ球を集め２８　ｋＨｚの超音波で５分間処
理した。この超音波処理したリン・ぐ球及び別途調製し
た脳油出物をいずれも粒径１〜３．２μｍの赤色に着色
されたゼラチン粒・子（富士レビオ株式会社製）又は粒
径０５μｍのポリスチレンラテックス粒子（武田薬品工
業（株）製）に感作した。

感作方法としては、ゼラチン粒子の場合には２ｐｐｍの
タンニン酸溶液を利用して行ない、ポリスチレンラテッ
クス粒子の場合には０．２　Ｍグリシン緩衝液ｐ）１８
．２に０，２５％濃度に浮遊させ、いずれも常法により
感作を行なった。

比重０８７５の流動−ｅラフインをテラサキプレートの
各ウェルに約５４宛入れ、これに抗血清１局及び上記の
０１２５％感作粒子浮遊液Ｉｎを一つの液滴を形成する
ようにマイクロシリンジで注入した。これをマイクロミ
キサーで５分間攪拌後室温で３０分間放置し、各ウェル
の凝集状態を４０〜１００倍の光学顕微鏡で検鏡して調
べ、型判定を行なった。

得られた結果を下表に示す。

崗、従来の溶血反応法の測定結果はゼラチン粒子の場合
と完全に一致した。

特許出願人　富士レビオ株式会社 同　相　手　宏　光 代理人弁理士田中政浩

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 凝集反応を利用した免疫化学的分析方法において、透明
   であシ、水に不溶性であり、当該凝集反応に不活性であ
   り、比重が１〜０．７であシ、かつ不揮発性の液体の内
   部に、少なくとも分析対象生理活性物質の存在に応じて
   凝集反応する粒子と検体とが共存する水溶液の場を形成
   し、当該場における当該粒子の凝集状態を検査すること
   を特徴とする生理活性物質の分析方法