JPS60126093A - 新規抗生物質ｓｓ７３１３ｂ及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗生物質Ｅ１８７３１３Ｂ及びその製造
法に関する。

本発明者らは天然の土壌１夛数多くの微生物を単離し、
その生産物について種々研究を行なった結果、福岡県北
九州市の土壌から分離した菌株が、抗腫瘍作用を有し、
かつ植物病原菌に対して抗菌力を有する新規な抗生物質
８８７３１３Ｂを生産することを見出し本発明を完成し
た。

すなわち、本発明は新規な抗生物質８８７３１３Ｂ及び
その製造法を提供するものである。

本発明の抗生物質５ｓ７３１３Ｂ’を産生する８７３１
３株は次のような菌学的性質を有する。

（１）　形態 胞子形成菌糸は気菌糸ニジ単純分枝し、車軸分枝は認め
られない。気菌糸の先端部は直状又は波状である。胞子
のり、鞭毛胞子、菌核はいずれも認められない。また基
中菌糸の分断も認められない。電子顕微鏡観察によると
、胞子の表面は平滑でろり、形は円筒形である。胞子の
大きさは０．５〜０．７Ｘ０．７〜０．９μｍであシ、
通常５０個以上が連鎖している。

（２）各種培地における生育状態（２７℃。

１４日間培養） Ｅ１７３１３株の各種培地上での生育状態は次表のとお
シである。

（３）　生理的性質 ■生育温度範囲（酵母エキス・麦芽エキス寒天培地、１
４日培養） 生育可能温度　８〜３７Ｃ 生育至適温度　２７〜３０℃ ■ゼラチンの液化　陽性 ■澱粉の加水分解　陽性 ■脱脂牛乳の凝固　陰性 ■脱脂牛乳のベゾトン化　陽性 ■メラニン様色素の生成　陽性 ■硝酸塩の還元　陽性 ■セルロースの分解　陰性 （４）炭素源の利用　（ｆリドハム・ゴドリープ寒天培
地、２７℃、１４日培養） ■Ｄ−グルコース　＋ ■Ｌ−アラビノース　− ■シュクロース　− ■Ｄ−キシロース　＋ ■イノシトール　− ■Ｄ〜マンニトール　＋ ■Ｄ−フラクトース　＋ ■Ｌ−ラムノース　− ０ラフイノース　− ［相］ガラクトース　モ ０サリシン　＋ （注）＋は利用する、−は利用しない。

以上の性状、及び細胞壁組成としてＬＬ−シアミノピメ
リンＷ１を含むことよ’）、Ｅ１７３１３株がストレプ
トミセス―に鴎することは明らかである。さらに同菌株
の菌学的性状をワックスマン著「ゾ・アクチノミセテス
（Ｔｈθａｃｔ１ｎｏｍｙｃｅｔａｓ）　Ｊ第２巻（１
９６１年）、シャーリングとゴツトリープの工ｓｐ報告
「インターナショナル嗜ジャーナル・オプφシステマテ
イック・バクテリオロゾー （Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
　ａｙｓ℃θｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒ１ｏ１ｏｇｙ）　
Ｊ第１８巻、６９頁、２７９頁（１９６８年）、同第１
９巻、３９１頁（１９６９年）、同第２２巻、２６５頁
（１９７２年）及び「パーシーズ・マニュ７Ｊ／・オブ
・デイターミネイティブ・バクテリオロゾー（Ｂｅｒｇ
ｅｙ′ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｔｏｉｎａ
ｔｉｖｅａａｃｔａｒｉｏｌｏｇｙ）　Ｊ第８版（１９
７４年）エル８フ３１３株の近縁種を検索すると８７３
１３株のように気菌糸の色がイエロー・カラー−シリー
ズ、胞子鎖が直状又は波状で５０個以上の胞子が連鎖し
、胞子表面が平滑で、メラニン様色素を生成する株とし
ては、ストレゾトミセスーカボウレンシス（Ｓｔｒｓｐ
ｔｏｍｙｃｅｓＱａＶＯｕｒｅｎ日１８）とストレプト
ミセス・グリセオプルネウス（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ　ｇｒｉｓｍｂｒｕｎｏｕｓ）等の稲が認められる。

次に８７３１３株と上記２種の標準様との比較を行なっ
た結果を示すと次表のとおりである。

以下余白 上衣にみられるように８７３１３株とストレプトミセス
・グリセオプルネウスとは、気菌糸の色調、裏面の色調
、可溶性色素の点で異なる。他方、ストレプトミセス・
力〆ウレンシスとは裏面の色調、可溶性色素がやや異な
るがその他の菌学的性状で両者はよく一致する。したが
って、８７３１３株はストレプトミセス・力ぎウレンシ
スに属する一菌株であると同定した。

本発明者らは８’７３１３株を公知の菌株と区別するた
めにストレゾトミセスΦ力ＩウレンシスＢ　７３１３　
（８ｔｏｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｃａｖｏｕｒｅｎｓｉ
ｅ８７３１３）と命名し、工業技術院微生物工業技術研
究所に受託番号機工研菌寄第７３５７号（ｙｉｃｎｙ　
ｐ−７３５７）として寄託した。

本発明の抗生物質８８７３１３ａは、上記菌株を栄養源
含有培地に接種し、好気的に培養することによシ製造さ
れる。抗生物質日８７３１３Ｂ生産株としては上記８７
３１３株はもとよシ、その人工変異株あるいは自然変異
株であっても抗生物質８８７３１３Ｂを主属する能力を
有するものであれば、すべて不発１３１に使用すること
ができる。上記８７３１３株の人工変異株は、他の放線
菌同様、例えば紫外線、コバルト６０照射、化学変！Ａ
誘起剤等によシ容易に得ることができる。

次に抗生物質８８７３１３Ｂの製造における菌株の培養
について説明する。すなわち、ストレゾトミセス檎に楓
する抗生物質８８７３１３Ｂ生産菌株の培養には通常の
放線菌の培養法が用いられる。

栄養培地としては、資化しうる炭素源、窒素源、無機物
などを適当に含有する限り合成培地、半合成培地あるい
は天然培地のいずれでも使用可能でおる。

炭素源としては、し１」えはグルコース、フラクトース
、キシロース、ガラクトース、澱粉、グリセリン、デキ
ストリζ、糖蜜等が単独または組合せて用いられる。さ
らに菌の資化性によっては炭化水素、アルコール類、有
機酸等も用い得る。窒素源としては、無機もしくは有機
窒素化合物、例えば塩化アンモニウム、硫酸アンモニウ
ム、硝酸アンモニウム、尿素、硝酸ソーダ、グルタミン
酸ソーダなど、または天然物、例えば大豆抽出物、大豆
粉、酵母エキス、乾燥酵母、綿実粕、ベゾタプル・ゾロ
ティン、ソイトン等が単独または組合せて用いられる。

無機物として−は、例えば炭酸カルシウム、塩化ナトリ
ウム、硫酸銅、塩化マンガン、硫酸亜鉛等が単独または
組合せて用いられる。その他、８７３１３株の発Ｗを助
け８８７３１３Ｂの生産を促進する物質あるいはシリコ
ン油又はアデヵノール（間品名）等の一般的消泡剤を適
宜培地に添加することもできる。

培養法としては一般の抗生物質の生産に用いられる方法
が採用されるが、通常は液体培地による振盪培養あるい
ｉｉ深部通気培養が好ましい。培養は好気的条件下で行
なわれ、培養に適当な温度は２５〜３０℃であるが一般
に２７℃付近で培養するのが好ましい。抗生物質１３Ｅ
＋７３１３Ｂは振盪培養、深部通気培養のいずれの場合
もその生産量は２〜６日間の培養で最高に達する。抗生
物質５ｓ７３１３Ｂは、通常、菌体及び培養液中に存在
するので、その分離、精製は培養物をｐ過または遠心分
離などによって菌体と培養Ｆ液に分けた後、菌体及び培
養Ｆ液から通常の分離法、例えば、溶媒抽出法、沈殿法
、イオン交換樹脂法、グルｐ過性、吸着または分配カラ
ムクロマト法、透析法等の方法を適宜組合せて行なうの
が良い。

好ましい分離、精製法の例としては次の方法が挙げられ
る。すなわち、まず培養物を遠心分離に付し、菌体及び
培養Ｆ液を得る。培養炉液は有機溶媒、例えば酢酸エチ
ルを用いて抽出する。菌体はメチルアルコール、アセト
ンなどの親水性溶媒で抽出し、この抽出液を減圧濃縮し
、蒸留水を加えて溶解させ、水溶液とし、これを培養Ｐ
液と同様に酢酸エチルなどを用いて抽出し、Ｊ＠養Ｐ液
の酢酸エチル抽出液と合わせる。こうして得られた抽出
ばを減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラ
フィーに付す。得られた活性画分を減圧留去し、残渣を
セファデックスＬＪ（−２０カラムクロマトグラフイー
に付す。活性画分を集め減圧濃縮後、適当な溶媒、例え
ばエチルエーテルで再結晶すると抗生物質８Ｂ７３１３
　Ｂの無色柱状結晶が得られる。以上のようにして得ら
れた抗生物質８８７３１３８は次のような理化学的性質
及び生物学的性質を有する。

（１）理化学的性質 ■元素分析 ＣＨＢｌ 実験値（％）　４５．７０　４．３５　１５．１１理論
値←）　４５．６６　４．３８　１５．２１■ｍニーマ
ススペクトル（７０θＶ） Ｍ　ｍ／ｚ１８４ ■融　点 １００℃　（分解） ■比旋光度 〔α〕ゎ＝−１４，３°　（ｃ＝０．３７．メチルアル
コール） ■紫外線吸収スペクトル 第１図 ２９２ｎｍ（８４０） ■赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法） 第２図 ■ＩＨ−ＮＭＲスペクトル（９０ＭＨｚ）重アセトン溶
液中、ＴＭＢｔｌ−基準物質として測定した。第３図 δ（ｐｐｍ）：３．４０（ＩＨ，ｄｄ’、　Ｊ＝４．０
．１．３Ｈ２）、３．７０　（Ｉ　Ｈ、ｄ　ｄ　＃　Ｊ
二４−０−２．ＯＨ−ｚ　）、４．７９（ＩＨ。

ｂｒ、ｄ　、Ｊ＝＋３．２Ｈｚ）、５．６９　（Ｉ　Ｈ
、ｄ　、　Ｊ＝８．２Ｈｚ）、６．４３（ＩＨ，ｂｒ、
　）、８．００（ＩＨ，ｂｒ、　）、８．９８（ＩＨ，
ｂｒ、　）、１１．０４（ＩＨ，ｂｒ−）■”Ｏ−ＮＭ
Ｒスペクトル（２２，５ＭＨｚ）重ゾメチルスルホキシ
ド溶液中、ＴＭＥＩを基準物質として測定した。

δ（ｐＰｍ）　：１８９．８．１７０．４　ｅ　１７０
．２−９３．８，６５−９　。

５３．０　、５２．４ ■溶剤に対する溶解性 水、メチルアルコール、エチルアルコール、アセトンに
可溶。クロロホルム、酢酸エチルにやや可溶。ｎ−ヘキ
サンに難溶。

［相］呈色反応 ２．４−ゾニトロフェニルヒトラゾン試楽に陽性、バニ
リン−硫酸試薬で黄色を呈する。

■塩基性、散性、中性の区別 中性 （り物質の色及び性状 無色柱状晶（エチルエーテルエシ再結晶）◎薄層りｐマ
ドグラフィー 担体：シリカグルゾレートＦ□４ （メルク社製） ０分子式 ％式％ （１Φ構造式 上記の理化学的測定値及び別途研究により、本発明の抗
生物質８Ｓ７３１３Ｂは下記の平面構造式で表わされる
化合物と決定した。

なお、この化合物には下記構造のものと、その鏡像体と
の２つの異性体があるが、本多明社そのいずれをも包含
するものである。

（２）生理学的性質 ■抗腫瘍作用 抗生物質８Ｅ＋７３１３Ｂのマウスにおけエールリッヒ
・カルシノーマ（Ｅｈｒｌｉｃｈに対する治療効果を下
記方法にょ）試験した。その結果を第１衣に示す。なお
、表中の抗腫瘍活性は、無処置群の平均生存日数（０）
に対する治療群の平均生存日数（Ｔ）の比を百分率を以
って表わした。

〔実験方法〕

２Ｘ１０ａ個のｂｔ劫細胞を工ＯＲマウス（♀２日本タ
レア）の腹腔内に移植し、２４時間抜ニジ８８７３１３
ｓを１日１回計１ｏ回腹腔内に投与した。

第　１　表 乙 ） ■抗菌作用 抗生物質８８７３１３Ｂは植物病原菌に対して抗菌活性
を有している。第２表に各種微生物に対する最小発Ｗ阻
止濃度（Ｍｌｃ）を示す。

〔試験菌培養条件〕

イノキュラムサイズ１０’セル／ｗＬｔ０バクテリアの
場合はミューラー・ヒントン・アガー（ＤｉｆｃＯ社１
８りで３７℃にて１８〜２０時間培養し、酵母、カビの
場合はグルコース・ペゾトン培地で２８℃にて１２０時
間培養した。

以下余白 第　２　表 以上述べた諸性質を本発明化合物に類似する既知抗生物
質のそれと比較したが、該当する物質はな（５Ｓ７３ｉ
３Ｂは新規な抗生物質と判断された。

これらの結果から明らかなように１抗生物質日Ｂ７３１
３Ｂはマウスにおけるエールリッヒ・カルシノーマ腹水
癌に対して頻者な治療効果を示している。また、植物病
原菌に対しても抗菌力を有している。これらの抗腫瘍活
性及び抗菌活性からみて抗生物質ｓｓ７〜３１３Ｂは抗
腫瘍性抗生物質として有用な物質であシ、また農薬とし
ても有用な物質である。

次に実施例を挙げて説明する。

実施例１ ８８７３１３Ｂの生産菌ストレプトミセス・カボウレン
シス８７３１３（倣工研菌寄第７３５７号）をグリセリ
ン１．５−１綿実粕１．５％、塩化ナトリウム０．３％
、Ｌ−７ス／。

ラギン０．２％（ｐＨ７，０）の液体培地に接種し、２
７℃で２日間振盪培養して種培養液を調製する。次いで
、グリセリン１．５％、グルコース１％、綿実粕１．５
　％　、塩化ナトリウム０．３％、Ｌ−アスノＱｙａｐ
ン０．２％、炭酸カルシウム０．３％（ｐＨ７，０）ｏ
液体培地１６Ｊｉ３０１容のゾヤーファメンター中に入
れこの培地中に前記種培養液２０ＯＮを接種し、通気１
１６１／分、攪拌数４００ｒ、ｐ−ｍ、培養温度２７℃
の条件下で４日間培養した。培養終了後、培養液を遠心
分離し、得られたＰ液（１３Ｊ）に１ＯＡ’の酢酸ニー
ＩＦ−Ａｆ加え、３回抽出すル。一方、菌体にはメチル
アルコール５１を加え、攪拌後Ｐ遇する。この抽出液の
メチルアルコールを減圧濃縮した後、残液に水１ｊを加
え、これを１ｊの酢酸エチルで３面抽出した。これを前
記のろ液からの抽出液と合せ、溶媒を減圧濃縮し、得ら
れた油状残渣にクロロホルム５００ｒｒｒｌｆ加え、不
溶物を除去した後シリカゲルカラムクロマトグラフィー
に供した。あらかじめクロロホルムで充填したキーゼル
グル６０（メルク社＃り４　ｃｍ　Ｘ　３０　ｃｍのカ
ラムに前記のクロロホルム　４゜溶液を通導し、クロロ
ホルムで溶出し、溶出される両分を除去した後、クロロ
ホルム−メチルアルコール混液（９６：４）で溶出した
。

溶出画分のうち５Ｅ１７３１３Ｂの含まれる両分を集め
減ＩＥ濃縮すると、粗８８７３１３Ｂの白色粉末１．２
ｆが得られた。次いで粗Ｅ１８７３１３Ｂの白色粉末を
少量のメチルアルコールに溶解させ、これをあらかじめ
メチルアルコールで充填したセファデックス−ＬＨ２α
のカラム（３６ＩＬＸ３０薗）に通導し、メチルアルプ
ールで溶出した。Ｅ１８７３１３Ｂの含まれる両分を集
め、減圧濃縮し、残渣をエチルエーテルによシ再結晶し
ｔ　ｆ３８７３１３ｓの無色柱状結晶３５０嘘を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質”８７３１３Ｂの紫外線吸収スペクト
ル（メチルアルコール溶液中）を示す。第２図は抗生物
質ＳＥ＋７３１３Ｂの赤外線吸収スペクトル（ｘｓｒ錠
剤）奢示す。第３図は抗生物質８１１１７３”１３Ｂの
”Ｈ−Ｎ　ＭＲスペクトル（重アセトン溶液中）′５ｃ
示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　下記の理化学的性質を有する新規抗生物質８８７
   ３１３Ｂ ０７ｃ素分析 ＣＨＮ 実験値６６）　４５．７０　４．３５　１５．１１理論
   値（→　４５．６６　４．３８　１５．２１■Ｅニーマ
   ススペクトル　（７０ｅＶ）Ｍ”　ｍ／ｚ　１８４ ■融　点 １００℃　（分解） ■比旋光度 〔α）−＝−１４，３°　（０＝０．３７゜メチルアル
   コール） ■紫外線吸収スペクトル 第１図 ２９２℃ｍ（８４０） ■赤外線吸収スペクトル（Ｋ険法） 第２図 ■１１１１−１Ｉスペクトル（，９０ＭＨ−ｚ）重アセ
   トン溶液中ＴＭＳを基準物質として側足した。第３図 δ（ｐｐｍ）：３．４０（Ｉｎ、　ａａ、　Ｉ＝４．０
   ．１．３Ｈｚ）、３．７０（ＩＨ，ａｄ　、Ｊ＝４．０
   ．２．０Ｌｌｚ）、４．７９（ＩＨ，ｂｒ、ｄ、Ｊ＝８
   ．２Ｈｚ）、５．６９（ＩＨ。 ａ　、　、Ｔ＝８．２Ｈｚ　）、６．４３（ＩＨ，ｂｒ
   、）８．００（ＩＨ，ｂｒ、）、５９ｓｃｘａ、ｂｒ、
   ）、１１．０４（ＩＨ，ｂτ、） ■Ｉｓ　Ｃ−ＮＭＲスペクトル（２２，５ＭＨｚ）１ｉ
   ７メチルスルホキシド溶液中ＴＭ８を基準物質として測
   定した。 δ（ＰＩ）ｍ　）　：１８９．８　、１７０．４　、１
   ７０．２．９３．８゜６５．９　、５３，０　、５２．
   ４　。 ■溶剤に対する溶解性 水、メチルアルコール、エチルアルコール、アセトンに
   可溶。クロロホルム、酢酸エチルにやや可溶。ｎ−ヘキ
   サンに難溶。 （Φ呈色反応 ２．４−ジニトロフェニルヒドラゾン 試薬に陽性、パニ’）７−Ｔｉｔ、酸試薬で黄色を呈す
   る。 ■塩基性、酸性、中性の区別 中性 ＠物質の色及び性状 無色柱状晶（エチルエーテルエシ再結 晶） σＨｇ）層クロマドグ、ラフイー 担体：シリカグルゾレートＦｚｓ４（メルク社製） ■分子式 ％式％ ２、　平面構造式が次の式 で表わされるものである特Ｆｌｆ請求の範囲第１項記載
   の新規抗生物質８Ｅ１７３１３ＢＯ３、ストレゾトミセ
   ス縞に稿する抗生物質８Ｅ１７３１３　Ｂ生産菌を培養
   し、その培養物から抗生物質８Ｓ７３１３Ｂを分離、採
   取するとと全特徴とする新規抗生物質８１３７３１３Ｂ
   の製造法。 ４、　８８７３１３Ｂ物質生産菌が、ストレプトミセス
   ・カゴウレンシス５５７３１３ｍでアル特許請求の範囲
   第３項記載の製造法。