JPS5942451A - エンドトキシンの定量分析法 - Google Patents
エンドトキシンの定量分析法Info
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- JPS5942451A JPS5942451A JP15234882A JP15234882A JPS5942451A JP S5942451 A JPS5942451 A JP S5942451A JP 15234882 A JP15234882 A JP 15234882A JP 15234882 A JP15234882 A JP 15234882A JP S5942451 A JPS5942451 A JP S5942451A
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/579—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving limulus lysate
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、任意の検液中におけるエンドトキシン含有渚
の定量分析法に関するものである、従来、細菌性内毒素
（エンドトキシンと称する）に起因する生体の発熱現象
は、このエントドキノンにより汚染された血液、輸液、
注射薬等の生体血管内への注入により不測の発熱やショ
ックなどの重篤な副作用を惹起するものとして認識され
−Ｃおり、このため、注射液やアンプル洗浄水の制式５
に際して原料水中の微量エンドトキシンを検出測定する
技術が、近時極めて重要視さｆｌるようになってきてい
る。例えば第十改正日本薬局方発熱性物質試験法による
と、家兎に検液を静注してその体温上列を測定すること
により、エンドトキシンの存在有無を検出する方法が示
されている。一方最近ではこのような中休試験に対して
、Ｎｉ１ｊ験宥反応で検液中のエンドトキシンを検出で
きるリノ・ラステストと称される測定方法が開発され、
血液。
の定量分析法に関するものである、従来、細菌性内毒素
（エンドトキシンと称する）に起因する生体の発熱現象
は、このエントドキノンにより汚染された血液、輸液、
注射薬等の生体血管内への注入により不測の発熱やショ
ックなどの重篤な副作用を惹起するものとして認識され
−Ｃおり、このため、注射液やアンプル洗浄水の制式５
に際して原料水中の微量エンドトキシンを検出測定する
技術が、近時極めて重要視さｆｌるようになってきてい
る。例えば第十改正日本薬局方発熱性物質試験法による
と、家兎に検液を静注してその体温上列を測定すること
により、エンドトキシンの存在有無を検出する方法が示
されている。一方最近ではこのような中休試験に対して
、Ｎｉ１ｊ験宥反応で検液中のエンドトキシンを検出で
きるリノ・ラステストと称される測定方法が開発され、
血液。
静脈注射液、輸液、／：＃：理液、製剤工業におりるア
ンプル洗滌や半導体工業ツノ品の洗滌水溶液中のエンド
トキシンの（小出に広く用いら）１．るようになってき
ている。
ンプル洗滌や半導体工業ツノ品の洗滌水溶液中のエンド
トキシンの（小出に広く用いら）１．るようになってき
ている。
ここでリノ・ラステストのイＩ！７要について説明−ｔ
ろと、エンドトキシン検出対象となる検水の一定量（例
：Ｑ、１ｍ／）をＰｌ（７，Ｏ付近に調整し１、これに
対してエンドトキシンと反応してグル化させる試薬とし
て知られるリムラス・アメーボサイト・ライセード（Ｌ
ｌｍｌｕｓ Ａｍｏｅｂｏｃｙｔｅ Ｌｙｓａｔ ：以
下ＬＡＬと略称（カプトが二面リンパ変形細胞アメーポ
ザイトの抽出物））系試薬の一定量（例： ０．１ ｚ
ｒｙ／）を注射用蒸留水に溶解したものを、細長試験管
中で混合させ、この後一定温度（一般的に３７℃±１℃
）で一定時間（一般的に一時間）静詔したときの内芥物
のケ゛ル化状態を観察して、検水中エンドトキシン含有
量を陽性（＋）、あるいは陰性（−）の桿ｒ５として判
定する方式のものである。
ろと、エンドトキシン検出対象となる検水の一定量（例
：Ｑ、１ｍ／）をＰｌ（７，Ｏ付近に調整し１、これに
対してエンドトキシンと反応してグル化させる試薬とし
て知られるリムラス・アメーボサイト・ライセード（Ｌ
ｌｍｌｕｓ Ａｍｏｅｂｏｃｙｔｅ Ｌｙｓａｔ ：以
下ＬＡＬと略称（カプトが二面リンパ変形細胞アメーポ
ザイトの抽出物））系試薬の一定量（例： ０．１ ｚ
ｒｙ／）を注射用蒸留水に溶解したものを、細長試験管
中で混合させ、この後一定温度（一般的に３７℃±１℃
）で一定時間（一般的に一時間）静詔したときの内芥物
のケ゛ル化状態を観察して、検水中エンドトキシン含有
量を陽性（＋）、あるいは陰性（−）の桿ｒ５として判
定する方式のものである。
ず庁わち、反応終了後の内容物は、エンドトキシン含イ
ｊ級の程度によシケ゛ル化の程度、したが−で粘ニ１：
の程度が異なるから、前記試験管を倒立あ／、いり」、
４５°に傾むけたときの反応液面の流動状態あるいに１
同化、白濁状態を観察し、これと予めエンドトキシンが
定量されている検体について行なったリムラステストの
結果とを対比することで、その陽性（＋）、陰性（−）
の程度を判定するので府）る。
ｊ級の程度によシケ゛ル化の程度、したが−で粘ニ１：
の程度が異なるから、前記試験管を倒立あ／、いり」、
４５°に傾むけたときの反応液面の流動状態あるいに１
同化、白濁状態を観察し、これと予めエンドトキシンが
定量されている検体について行なったリムラステストの
結果とを対比することで、その陽性（＋）、陰性（−）
の程度を判定するので府）る。
ところで、このリムラステストは試験管反応によること
ができるという利点をもつが、’ｔ’ｔ１定は専らり゛
°ル化に伴う粘性の程ＩＩの目視に頼らざるを得ないの
で、ｆ４１定する名の熟練度あるいけ視力の個人差が’
Ｉ’１１定結果に影響するという不確Ｔ性を伴う曲、定
常在り°ル化状傳に至る才で姓は比「餉的長い時間（例
えば３７（〕、１１時間が必歇であるため、迅速で連続
的なｆｉｌｌｌ定に二はイ、向きであった。とくに製薬
、製剤、電子工業噌σ）工業的規模での令水、造液装置
のオンライン測定への適用にに１未だ不充分とさｔする
。
ができるという利点をもつが、’ｔ’ｔ１定は専らり゛
°ル化に伴う粘性の程ＩＩの目視に頼らざるを得ないの
で、ｆ４１定する名の熟練度あるいけ視力の個人差が’
Ｉ’１１定結果に影響するという不確Ｔ性を伴う曲、定
常在り°ル化状傳に至る才で姓は比「餉的長い時間（例
えば３７（〕、１１時間が必歇であるため、迅速で連続
的なｆｉｌｌｌ定に二はイ、向きであった。とくに製薬
、製剤、電子工業噌σ）工業的規模での令水、造液装置
のオンライン測定への適用にに１未だ不充分とさｔする
。
本発明者ｖ」−１この７Ｌうな現状に鑑み、検液中のエ
ンドトキシン含有−ｓｌの常用分析を、正確かつ機械的
画一性をもって迅速に行なうことのできる方法につき神
々？ｉＪｆ究・開発を重ねた結果創案するに至ったもの
である。
ンドトキシン含有−ｓｌの常用分析を、正確かつ機械的
画一性をもって迅速に行なうことのできる方法につき神
々？ｉＪｆ究・開発を重ねた結果創案するに至ったもの
である。
すなわら、前記したリムラステストについてこれを詳細
に検ｆ？＝１すると、エンド）・キシンを含む検ｉｔｒ
； 、！ ＬＡＬ ｒｊ＋を桑を試験管内で混合した」
μ合に生イ゛る９１．９７反Ｌｒ、ｉ／：ｌ、ＬＡＬの
エンドトキシンに対する醇累話１＜ｌ：に卑づく分解・
凝固・グル化反応でｔ〕リク゛ル化に伴なってり一゛ル
が生長、集合、凝固し安定斤白濁台−呈するか、あるい
は白２蜀に至らすとも光パｔ゛的に検知しうる物質が形
成されることが観察される。
に検ｆ？＝１すると、エンド）・キシンを含む検ｉｔｒ
； 、！ ＬＡＬ ｒｊ＋を桑を試験管内で混合した」
μ合に生イ゛る９１．９７反Ｌｒ、ｉ／：ｌ、ＬＡＬの
エンドトキシンに対する醇累話１＜ｌ：に卑づく分解・
凝固・グル化反応でｔ〕リク゛ル化に伴なってり一゛ル
が生長、集合、凝固し安定斤白濁台−呈するか、あるい
は白２蜀に至らすとも光パｔ゛的に検知しうる物質が形
成されることが観察される。
そして、反応開始時点以後のケ゛ル化進行の状況をみる
と、これは検液中のエンドトキシン存在量と一定条件化
では部分的に定鋪的四係にあることが九−３！、的実験
結呆より知見され、行にり゛ル化進行のｌ！Ｊ−’ｆｘ
いを経時的な吸光度変化率として観察するノー、反Ｌｆ
８、Ｃト１始グリ・ら反応ＩＡ：成物の吸光１′！ｊ変
化率が次第に増大しだ後漸減して反応のＸ、′〈了した
ｌ＋、ｉ：：’常な状態にイ１−るという変化曲線を示
し７ていて、ｉかもイ市４’ｌｉｉの検液にお・りる反
応開始から変化率最大に至るオでの”＝％′１Ｔｉｌ
＆：Ｉ、エンドトキシンの存在量と有意な相関性？ｉ：
１侍つことか実験的に見い出されたのである。
と、これは検液中のエンドトキシン存在量と一定条件化
では部分的に定鋪的四係にあることが九−３！、的実験
結呆より知見され、行にり゛ル化進行のｌ！Ｊ−’ｆｘ
いを経時的な吸光度変化率として観察するノー、反Ｌｆ
８、Ｃト１始グリ・ら反応ＩＡ：成物の吸光１′！ｊ変
化率が次第に増大しだ後漸減して反応のＸ、′〈了した
ｌ＋、ｉ：：’常な状態にイ１−るという変化曲線を示
し７ていて、ｉかもイ市４’ｌｉｉの検液にお・りる反
応開始から変化率最大に至るオでの”＝％′１Ｔｉｌ
＆：Ｉ、エンドトキシンの存在量と有意な相関性？ｉ：
１侍つことか実験的に見い出されたのである。
而して本五と明は以上の知見に基づいて外されたもので
あり、その要旨ｄ１、エンドトキシン含ムに刺検液にリ
ムラス・アメーｄ″ザイト、ライ−Ｌ・−ト系試薬を混
合してリムラス反応を起こさせ、当該混合液を光学セル
中に充ｊｌｊｉ して反応生成物の吸光度を光学的に測
定することにより前Ｍ１２試料検液中のエンドトキシン
を定量゛するにあ／こり、一定の単位時間毎の吸光度変
化率を経時的に測定して、前記混合液を光学セル中に充
填した後前記吸光度の変化率が最大と々るまでの経過時
間を求め、予めエンドトキシン濃度既知検液につき求め
たｉ（（記吸光度変化率が最大となるに要する経過時間
との関係に基づき、前記試料検液中の含有エン１゛トキ
ンンを判定することを特長とするエンドトキシンの定量
分析法にある。
あり、その要旨ｄ１、エンドトキシン含ムに刺検液にリ
ムラス・アメーｄ″ザイト、ライ−Ｌ・−ト系試薬を混
合してリムラス反応を起こさせ、当該混合液を光学セル
中に充ｊｌｊｉ して反応生成物の吸光度を光学的に測
定することにより前Ｍ１２試料検液中のエンドトキシン
を定量゛するにあ／こり、一定の単位時間毎の吸光度変
化率を経時的に測定して、前記混合液を光学セル中に充
填した後前記吸光度の変化率が最大と々るまでの経過時
間を求め、予めエンドトキシン濃度既知検液につき求め
たｉ（（記吸光度変化率が最大となるに要する経過時間
との関係に基づき、前記試料検液中の含有エン１゛トキ
ンンを判定することを特長とするエンドトキシンの定量
分析法にある。
ここで、予め求めた濃度既知検液（借Ｊ準〃′≦度検液
とする）とその吸光度変化率最大に至る寸での経過時間
との関係に基づき、所定の前記経過時間が１ｆｌｌｌ定
をれた試料検液中のエンドトキシン含有柘を判定するに
は、次の手法に従えばよい。例えばいまエンドトキシン トドキシン含有量が０．０５ ｎｆ１７４ｎｌ 、 ０
．１０ ｎ９Ａｌｌ 、 ・・−。
とする）とその吸光度変化率最大に至る寸での経過時間
との関係に基づき、所定の前記経過時間が１ｆｌｌｌ定
をれた試料検液中のエンドトキシン含有柘を判定するに
は、次の手法に従えばよい。例えばいまエンドトキシン トドキシン含有量が０．０５ ｎｆ１７４ｎｌ 、 ０
．１０ ｎ９Ａｌｌ 、 ・・−。
０．５０ ｎｉ、Ａｎｅの多数のものを準備し、これの
０．２５ｍ１ないしく１．１ ｍｌとＬＡＩ、試薬の０
．２５ｍ１！ｆｘいし０．１ ｍｌを混合しまた後光学
士ル中に充填して前述した吸光度変化率を各り測定する
。そして各標準濃度検液についての反応開始（光学セル
への充填時点とする）から吸光度変化率最大に至るまで
の経過時間を求め、縦軸に当該経過時間、横軸にエンド
トキシン含有邦を対数目盛でとった片対紗グラフ上にゾ
ロットする。第１図はこのようにして得らノした図を示
し、前記試験結果の値は図示する傾きＡの置部１上に分
布することが昭められた。
０．２５ｍ１ないしく１．１ ｍｌとＬＡＩ、試薬の０
．２５ｍ１！ｆｘいし０．１ ｍｌを混合しまた後光学
士ル中に充填して前述した吸光度変化率を各り測定する
。そして各標準濃度検液についての反応開始（光学セル
への充填時点とする）から吸光度変化率最大に至るまで
の経過時間を求め、縦軸に当該経過時間、横軸にエンド
トキシン含有邦を対数目盛でとった片対紗グラフ上にゾ
ロットする。第１図はこのようにして得らノした図を示
し、前記試験結果の値は図示する傾きＡの置部１上に分
布することが昭められた。
このことから、リムラス反応においてはエンドトキシン
の濃度Ｘと、吸光度変化率最大に至る経過時間ｙとの間
には、 ｙ ＝ ３’ｏ −Ａ ｌｏｇ ｘ −＝ （
ｉ）なる関係が成立し、任意の試料検液について経過時
間ｙを実験的に求めれば、その試料検液中のエンドトキ
シンの濃度Ｘは として得ることができるのである。
の濃度Ｘと、吸光度変化率最大に至る経過時間ｙとの間
には、 ｙ ＝ ３’ｏ −Ａ ｌｏｇ ｘ −＝ （
ｉ）なる関係が成立し、任意の試料検液について経過時
間ｙを実験的に求めれば、その試料検液中のエンドトキ
シンの濃度Ｘは として得ることができるのである。
なお、前記光学セル中のＹＪｉ＋１合液について行なう
前述した吸）′ｒ１度変化率の測定に、）Ｙ、学セル中
を通過する透過）“Ｃ１都を連続的に検出した（：ｅｉ
の１１！１間成分の微１１＋値（均るいＱＪ連続する申
缶時間毎の検出ｆ１＾の差）として求めるものであるつ １す士の定Ｆｌｆ’、＞析法に従ズは、ｊＹｌ学十ル中
でｊＬ行するリムラス反応の状況を、吸光度の測定にょ
−て佛樟的かつ１＋ｌ１１−的に４１１握することがｉ
ｉｌ能となり、しかもり人ラス反しト３、が光分１１１
−行し７てケ゛ル化が定量な状卵に々る井でノル１ｒイ
する７π来方式ＣＣ比べて、実質的に制定シ（必要４一
時間に１゛１４減あるいし、１唄に知縮できる、１−い
う７唄点も得ることができるものとなった。
前述した吸）′ｒ１度変化率の測定に、）Ｙ、学セル中
を通過する透過）“Ｃ１都を連続的に検出した（：ｅｉ
の１１！１間成分の微１１＋値（均るいＱＪ連続する申
缶時間毎の検出ｆ１＾の差）として求めるものであるつ １す士の定Ｆｌｆ’、＞析法に従ズは、ｊＹｌ学十ル中
でｊＬ行するリムラス反応の状況を、吸光度の測定にょ
−て佛樟的かつ１＋ｌ１１−的に４１１握することがｉ
ｉｌ能となり、しかもり人ラス反しト３、が光分１１１
−行し７てケ゛ル化が定量な状卵に々る井でノル１ｒイ
する７π来方式ＣＣ比べて、実質的に制定シ（必要４一
時間に１゛１４減あるいし、１唄に知縮できる、１−い
う７唄点も得ることができるものとなった。
次ぎに第２図、第：３図をか閉じて、本算明方法による
エンドトキンン含有預の５．’ｉ” ？Ｗ分析の−（Ｌ
体重操作につき詳述する。第２図に不発明方法に月）い
る装置全体を模式的に示し、第３図は容器載置台部分の
ｆｒ、−Ｉ親図を示している。
エンドトキンン含有預の５．’ｉ” ？Ｗ分析の−（Ｌ
体重操作につき詳述する。第２図に不発明方法に月）い
る装置全体を模式的に示し、第３図は容器載置台部分の
ｆｒ、−Ｉ親図を示している。
図において１は固定容器載置台であり、台土にＩｒ、Ｊ
ｌ 、エンドトキシンフリー水を入れた洗浄液容器２、
検液試料を入れた容器３、アルカリ洗浄液（０５％ＮＩ
ＡＯＨ溶液）を入れた洗浄液容器４、が−列に配置ネ１
され、更にこれに隣接してＬＡＬ試薬を入れた試薬容器
５が、和、子冷却機６に収容された状態で２±０．２℃
にイ：＋１冷維持されて配置される。
ｌ 、エンドトキシンフリー水を入れた洗浄液容器２、
検液試料を入れた容器３、アルカリ洗浄液（０５％ＮＩ
ＡＯＨ溶液）を入れた洗浄液容器４、が−列に配置ネ１
され、更にこれに隣接してＬＡＬ試薬を入れた試薬容器
５が、和、子冷却機６に収容された状態で２±０．２℃
にイ：＋１冷維持されて配置される。
前記検液試料容器３は、本例では塩化ビニール製の２重
円筒で形成され、内側の円筒に下方よシ試８１水が連続
的に供給され、溢水は内、外筒間のη１゛１より糸外に
排出されるようになっており、９ ｉ、ｊ：胡水管、１
０は試料水供給管である。
円筒で形成され、内側の円筒に下方よシ試８１水が連続
的に供給され、溢水は内、外筒間のη１゛１より糸外に
排出されるようになっており、９ ｉ、ｊ：胡水管、１
０は試料水供給管である。
寸だ前記２つの洗浄液容器２，４は、それぞれブｒ１３
，１４を介して液貯槽１５．Ｉ６から溶液が供給され、
濡液は系外に排水されるようになっており、７ 、１１
ｒｌそれぞれ秋水管、８．Ｊ２はそれぞれ供給管で矛
、る。
，１４を介して液貯槽１５．Ｉ６から溶液が供給され、
濡液は系外に排水されるようになっており、７ 、１１
ｒｌそれぞれ秋水管、８．Ｊ２はそれぞれ供給管で矛
、る。
前記の如く一列に配置された各容器２，３，４゜および
５に対し、土Ｆおよび水平方向に移動■［酢な吸引ノズ
ル１７がその、−に方に配設さ）１、この吸引ノズル１
７Ｉ：Ｊ：、上丁駆動機構１８および水平駆ｍＩ機＄１
９の作動にょシＳｉｔ記各容器のｆ＋、 ｊ＝の右ン１
′イから各洗滌液、試料水、試薬を定量吸引シフ、フレ
キシブルチューブ２ Ｑ ｒ、−介して後記する吸光度
測定部２１に各液を送ることができるように設けられて
いる。
５に対し、土Ｆおよび水平方向に移動■［酢な吸引ノズ
ル１７がその、−に方に配設さ）１、この吸引ノズル１
７Ｉ：Ｊ：、上丁駆動機構１８および水平駆ｍＩ機＄１
９の作動にょシＳｉｔ記各容器のｆ＋、 ｊ＝の右ン１
′イから各洗滌液、試料水、試薬を定量吸引シフ、フレ
キシブルチューブ２ Ｑ ｒ、−介して後記する吸光度
測定部２１に各液を送ることができるように設けられて
いる。
前記吸引ノズル１７は、例えばステンレス製のパイプ部
と上部のガラス製部分とがらｌ’＋’ｆ成され、同上部
には光電１累子を用いた水頭感知部’％イ；Ｊ設して、
吸引時の側音８機能を治するようにしでいる。
と上部のガラス製部分とがらｌ’＋’ｆ成され、同上部
には光電１累子を用いた水頭感知部’％イ；Ｊ設して、
吸引時の側音８機能を治するようにしでいる。
なお、ＬＡＬ系試薬の吸引にＩＩＡ Ｌ−ｃ目１．その
吸引線速度を５０〜５５ ｍＪｓｅｃ ｌ♀朋と−むる
こノーが適尚でイ５る。これに能率の面からを」１νり
引速度）、１）＜庁ン。
吸引線速度を５０〜５５ ｍＪｓｅｃ ｌ♀朋と−むる
こノーが適尚でイ５る。これに能率の面からを」１νり
引速度）、１）＜庁ン。
ことがよいが、前記線速度を６０ ｍｒＶ／ｓｅｃ Ｊ
Ｊ、上と（７た場合にはリムラス反応が不均整に生ずる
ことが実験的に観察されたためである。ＬＡ Ｌが高速
で移送されると物理的構造変化をきたし７、反応基の配
位変化を招致する結果々イ６測さ！する。
Ｊ、上と（７た場合にはリムラス反応が不均整に生ずる
ことが実験的に観察されたためである。ＬＡ Ｌが高速
で移送されると物理的構造変化をきたし７、反応基の配
位変化を招致する結果々イ６測さ！する。
吸光度ｉｎｎ定部２１け、前記フレキシブルチューブ２
０を介して前記各液が所定の手順に従−い注入される混
合脱泡槽２２と、これに続いて接続された光学セル２３
と、この光学セル２３に対しその前後に配Ｉ負された赤
色発光ダイオード（最大波長６３５■）等の光源２４お
よびシリコンフォトセル等の受光部２５とから構成され
ている。なお、前記混合脱泡槽２２は別に吸引管２６、
吸引ポンプ２７を介して排出管２８に接続され、また前
記光学セル２３も同様に管２９、吸引；１センゾ３０を
介して１フ１出管３１に接続されている。
０を介して前記各液が所定の手順に従−い注入される混
合脱泡槽２２と、これに続いて接続された光学セル２３
と、この光学セル２３に対しその前後に配Ｉ負された赤
色発光ダイオード（最大波長６３５■）等の光源２４お
よびシリコンフォトセル等の受光部２５とから構成され
ている。なお、前記混合脱泡槽２２は別に吸引管２６、
吸引ポンプ２７を介して排出管２８に接続され、また前
記光学セル２３も同様に管２９、吸引；１センゾ３０を
介して１フ１出管３１に接続されている。
このような構成の吸光度測定部２】においで、ＲＷｉ
各部１ｒＪエンドトキシンフリーの純水にて充分洗浄さ
ｔしているものとして次の操作子１１［１に従い吸光度
が１ｌｌｌｌ定きれるう まず吸引ノズル１７をＬＡＬ試薬の容器５中に降下させ
て核ＬＡＩ、試薬の定量（例：０．２ｍ／りを吸引採取
し、これを混合脱泡槽２２に導く。次いで同様操作で試
料水の定量（例：０．２ｍ１）を吸引採取し、これを既
にＬＡＬ Ｋ薬の入っている混合脱泡槽２２に導き、こ
こで混合と脱泡を同時に待ない、反応系の温度は３５℃
以上４２℃付近迄藺整できるが例えば温度３７℃の条件
で一時貯溜される。
各部１ｒＪエンドトキシンフリーの純水にて充分洗浄さ
ｔしているものとして次の操作子１１［１に従い吸光度
が１ｌｌｌｌ定きれるう まず吸引ノズル１７をＬＡＬ試薬の容器５中に降下させ
て核ＬＡＩ、試薬の定量（例：０．２ｍ／りを吸引採取
し、これを混合脱泡槽２２に導く。次いで同様操作で試
料水の定量（例：０．２ｍ１）を吸引採取し、これを既
にＬＡＬ Ｋ薬の入っている混合脱泡槽２２に導き、こ
こで混合と脱泡を同時に待ない、反応系の温度は３５℃
以上４２℃付近迄藺整できるが例えば温度３７℃の条件
で一時貯溜される。
脱泡された（ ＬＡＩ、試薬）＋（記；料水）の混合液
（０，４ｍ１）は、ポンプ３０の吸引妬よって光学−（
ニル２３内に注入充填させ、この状態から光源２４かも
光学セル２３を通して受光部２５に入）Ｙ：する光、針
を検出することで、前ＭＬ混合液のり゛ル化白濁進行に
伴って変化する吸光度変化率を泪１１定することができ
る。
（０，４ｍ１）は、ポンプ３０の吸引妬よって光学−（
ニル２３内に注入充填させ、この状態から光源２４かも
光学セル２３を通して受光部２５に入）Ｙ：する光、針
を検出することで、前ＭＬ混合液のり゛ル化白濁進行に
伴って変化する吸光度変化率を泪１１定することができ
る。
前Ｍ１２光量検出は、連続的に検出してもよいし、学位
時間４ｅ、の受光光Ｍとして検出（７てもよい９々お、
彷・者の場合にｉ：ｓｉ川用即位時間間隔を２分以下望
オｔ、 ＜ ｒａｔ １分月下とし連続的に経時変化存
・測定ずＺｌ（、とが、Ｌいつ 而して前し［：検出結県に基づ＾、−子の１）１１間り
々分子１＾ないし４位時間毎の検出ｆｉｆｊの変化（１
ｔ４’、 （差分）を吸）Ｙ：度変化率−＝１−て経時
的にｉ’ｔｉｌｌ ５ターす／・こノーができ、リノ・
ラス反応開始から前ＨＩｉ変化率ＪＩｊ大に至る寸での
経過時間に求ｄ）ることができることになる。
時間４ｅ、の受光光Ｍとして検出（７てもよい９々お、
彷・者の場合にｉ：ｓｉ川用即位時間間隔を２分以下望
オｔ、 ＜ ｒａｔ １分月下とし連続的に経時変化存
・測定ずＺｌ（、とが、Ｌいつ 而して前し［：検出結県に基づ＾、−子の１）１１間り
々分子１＾ないし４位時間毎の検出ｆｉｆｊの変化（１
ｔ４’、 （差分）を吸）Ｙ：度変化率−＝１−て経時
的にｉ’ｔｉｌｌ ５ターす／・こノーができ、リノ・
ラス反応開始から前ＨＩｉ変化率ＪＩｊ大に至る寸での
経過時間に求ｄ）ることができることになる。
以上の手順により求められた経過時間（ｉ＞値を、エン
Ｐ ト、ｌ、、シンの標準濃度検液を用いて予め求めた
前記（１１）式に代入演算することで、試料水中のエン
ドトキシン含有量を９出できる。このような受′）γ二
溺検出からエンドトキシン含有量のｑ、出までに必要な
諸機器については特に図示していないが、これは既知の
電気回路技術で構成でき、更に前記や出値の表示、記録
、更には異常値検出時の警報のための手段も必要に応じ
て付設できることも当然である。
Ｐ ト、ｌ、、シンの標準濃度検液を用いて予め求めた
前記（１１）式に代入演算することで、試料水中のエン
ドトキシン含有量を９出できる。このような受′）γ二
溺検出からエンドトキシン含有量のｑ、出までに必要な
諸機器については特に図示していないが、これは既知の
電気回路技術で構成でき、更に前記や出値の表示、記録
、更には異常値検出時の警報のための手段も必要に応じ
て付設できることも当然である。
なお前記経過時間測定の起算時点となるリムラス反応開
始の時点は、各試料水（標準濃度検液の場合を含む）に
ついての前記した手順操作を、同一 のタイミングに従
って行なうことを条件として、例えば光栄セル２３中に
混合液を注入充填した時点とすることができる。
始の時点は、各試料水（標準濃度検液の場合を含む）に
ついての前記した手順操作を、同一 のタイミングに従
って行なうことを条件として、例えば光栄セル２３中に
混合液を注入充填した時点とすることができる。
次ぎに本発明方法に従って行なったエンドトキシン含有
量の定量分析の実施例について示す。
量の定量分析の実施例について示す。
実ＭＩｊ例
第２図および第３図により説明した実験装置により、各
供試液と１７′１″次のもσ）を用いた。
供試液と１７′１″次のもσ）を用いた。
ＬＡＬ ％、ｌ： ％ｊ２ ：感度０．０３ ｎ９ｙゲ
ｒ＋ｑ Ｅ Ｃ”、ａｌｌ ４（Ｍａｉｌ １ｎｃｒ
ｏｄｔ 製 （ＵＳＡ）ｌ 丁、ｏ ｔ Ｉ／ＣＦ：
Ｘ ｐ−８Ｍλｒ、’ ）＋ ３ ） エンドトキシン：（ＭＩＩｌｌｌｎｃｒｏｄｔ （Ｕ
ＳＪ ｌ、ｏｔ ＩＧＪ Ｅｘｐ。
ｒ＋ｑ Ｅ Ｃ”、ａｌｌ ４（Ｍａｉｌ １ｎｃｒ
ｏｄｔ 製 （ＵＳＡ）ｌ 丁、ｏ ｔ Ｉ／ＣＦ：
Ｘ ｐ−８Ｍλｒ、’ ）＋ ３ ） エンドトキシン：（ＭＩＩｌｌｌｎｃｒｏｄｔ （Ｕ
ＳＪ ｌ、ｏｔ ＩＧＪ Ｅｘｐ。
Ｎｏｖ、’８３’）
溶 媒：日本５＃局方注射用蒸溜水および０２９係生
理食塩水（非発熱性） 寸ず、エンドトキシン一度０．１ ｎｇ、＊ｌと０．５
ｎ、？７１ｎｌＯものについて試験を行ない、吸光度
変化率の最大となるまでの粁過時間ｙを求めると共に、
これら２つの濃度の間の任意のエンドトキンンｐ度のも
のについて同様の試験を行ない、これを図４−Ａ４−Ｊ
に示し、結果を下記表１に寸とめて示（７だ。
理食塩水（非発熱性） 寸ず、エンドトキシン一度０．１ ｎｇ、＊ｌと０．５
ｎ、？７１ｎｌＯものについて試験を行ない、吸光度
変化率の最大となるまでの粁過時間ｙを求めると共に、
これら２つの濃度の間の任意のエンドトキンンｐ度のも
のについて同様の試験を行ない、これを図４−Ａ４−Ｊ
に示し、結果を下記表１に寸とめて示（７だ。
表 １
なお、１′−１；、１−Ａ〜４−Ｊに示した試１届デー
タ（・」、；）ミ１１・５、開始かｒ＝ ］ ′７＋全
Ｑｉ位時間として吸）し度およびそく”、）裏°什−率
５＞諺鵠′（０分にわた。て泪・を定したものであ１ン
、１＜１中の〔ｌ：ｌ目ＴＩＭＥは反応開始時点からの
経過時間、Ｔ Ｅ Ｍ ｌ） ！ｒｔ反応侶度、Ｉ）Ａ
ＴＡ？−１□秀過光によるプリアンプ出力、ＭＥＡＳは
透過率（反応開始時点を１００として遮光状態を０とす
る）を示（７ていて、棒線グラフは前記透過率、白抜マ
〜りで表わした点グラフｔ」、（ｉｌぞれ前段からの吸
つＹ１度変化の大きさく吸光度変化率）を示している。
タ（・」、；）ミ１１・５、開始かｒ＝ ］ ′７＋全
Ｑｉ位時間として吸）し度およびそく”、）裏°什−率
５＞諺鵠′（０分にわた。て泪・を定したものであ１ン
、１＜１中の〔ｌ：ｌ目ＴＩＭＥは反応開始時点からの
経過時間、Ｔ Ｅ Ｍ ｌ） ！ｒｔ反応侶度、Ｉ）Ａ
ＴＡ？−１□秀過光によるプリアンプ出力、ＭＥＡＳは
透過率（反応開始時点を１００として遮光状態を０とす
る）を示（７ていて、棒線グラフは前記透過率、白抜マ
〜りで表わした点グラフｔ」、（ｉｌぞれ前段からの吸
つＹ１度変化の大きさく吸光度変化率）を示している。
また表１中のＰＥＡＫの項目は反応ｒｉｉＩ始から吸光
度変化率最大に至るまでの経過時間を７」、（７ている
。
度変化率最大に至るまでの経過時間を７」、（７ている
。
以上の表１に示されるか（験結果を、縦軸にＰＥＡＫ
ＴＩＭＥ （単位１分）、横軸にエンドトキシン濃度ｎ
ｌ／Ａｔ を計数目盛で表わした片ｒ１数グラフ（第５
図）上にそれぞ′れプロットすると、これＣ）は一定の
傾きをなす直線」二に略分布することがトｐめられる。
ＴＩＭＥ （単位１分）、横軸にエンドトキシン濃度ｎ
ｌ／Ａｔ を計数目盛で表わした片ｒ１数グラフ（第５
図）上にそれぞ′れプロットすると、これＣ）は一定の
傾きをなす直線」二に略分布することがトｐめられる。
そしてエンドトキシン濃度ｘ ＝ ０．１およびＸ？０
５のときのＰＦＪＡＫ ’Ｉ”Ｉへ１′ＦＪｙ≠１６４
およびｙ≠１１４の結果より、前記試薬を用いた場合の
ｉｊ［記０１）式６１（ ％式％（ として求めらｔｌだ。
５のときのＰＦＪＡＫ ’Ｉ”Ｉへ１′ＦＪｙ≠１６４
およびｙ≠１１４の結果より、前記試薬を用いた場合の
ｉｊ［記０１）式６１（ ％式％（ として求めらｔｌだ。
次きにエンドトキシン濃度が未知の試ネーｐ ｔにつぃ
て同様の庄（５＃を行ない、その測定結果は図４−にお
よび表１中に示しだ。
て同様の庄（５＃を行ない、その測定結果は図４−にお
よび表１中に示しだ。
このＲ’、’ ＃結果とし、で求められたＰＥＡＫ Ｔ
ＩＭＥ ｙ ＝１２４分を前記（ｌｉｒ：＞式に代入す
ることで、描該未知状刺のエンドトキシン濃度）ｃ ＝
： ０．２５１ ｎ９／ｊｕｇ ａｓＥ ｃｏｌｉ Ｅ
ｎｄＯｔｏｘｉｎが得られた。
ＩＭＥ ｙ ＝１２４分を前記（ｌｉｒ：＞式に代入す
ることで、描該未知状刺のエンドトキシン濃度）ｃ ＝
： ０．２５１ ｎ９／ｊｕｇ ａｓＥ ｃｏｌｉ Ｅ
ｎｄＯｔｏｘｉｎが得られた。
この試料について別に行なった轟該未知資料の希釈倍数
によるリムラス反応定量操作法によれば、前記／ｉｉｉ
＠’？結果ｘ ＝ ０．２５１ ｎＥ／ｌｖｌ ａ
ｓ Ｅ ｃｏｌｉｌｉ”ｊｎｄＱｌ、０Ｘｉｎの値は妥
当であることが確望された。
によるリムラス反応定量操作法によれば、前記／ｉｉｉ
＠’？結果ｘ ＝ ０．２５１ ｎＥ／ｌｖｌ ａ
ｓ Ｅ ｃｏｌｉｌｉ”ｊｎｄＱｌ、０Ｘｉｎの値は妥
当であることが確望された。
以」−言９明したように、本発明方法によれば、試１φ
５ＩＮ（先貸って使ＪｌｉするＬＡＬ系試薬の感度が口
、７１・ｆｊに異なっても、エンドトキシン濃度既知検
液を用いて前記した式（１１）の所定の定数を求めてお
くことで、一度泪１１定に必要な演算式を確定でき、こ
ｉｌに基づいて、任意の試料に関するエンドトキシン含
有斧の測定を光学的手法により、機械的画−恰をもって
しかも旬時間で迅速に行なうことができるものとなり、
例對−はエンドトキシンフリー水を工業的規模で造水す
る装置に本発明方法妬従つだ検査′＠置を＋Ｉ設干れば
、自動的作動１、冒〆ｌの併設とともに生産水中のエン
ドトキシン濃度Ｊ）異常検出に極めて顕著々効Ｊ４！：
４発揮することができるなど、その有用性１伜めて犬な
るもので才、る。
５ＩＮ（先貸って使ＪｌｉするＬＡＬ系試薬の感度が口
、７１・ｆｊに異なっても、エンドトキシン濃度既知検
液を用いて前記した式（１１）の所定の定数を求めてお
くことで、一度泪１１定に必要な演算式を確定でき、こ
ｉｌに基づいて、任意の試料に関するエンドトキシン含
有斧の測定を光学的手法により、機械的画−恰をもって
しかも旬時間で迅速に行なうことができるものとなり、
例對−はエンドトキシンフリー水を工業的規模で造水す
る装置に本発明方法妬従つだ検査′＠置を＋Ｉ設干れば
、自動的作動１、冒〆ｌの併設とともに生産水中のエン
ドトキシン濃度Ｊ）異常検出に極めて顕著々効Ｊ４！：
４発揮することができるなど、その有用性１伜めて犬な
るもので才、る。
第１図は本発明方法におけるエンドトキシン濃度と、吸
つ°ｆ；度変化率最大に至る経過時間の関係をｍｌ、明
−する図、第２図ｄ＊発明力法に用いる装置の４１！’
Ｉ略を何９明する図、第３図は同装置の載１色２台部の
構成を示す−＆１（ネ１視図、第４同人へ・Ｋ ｉ−ｊ
本発明方法にＵｆった実り布イ列に才（ｒｊる泪１１定
１ν？ ）Ｙ、度の−７＋−タを７ｉ’： −ｔ Ｉ’
Ｘｌ、第５ｒ＆ｌ ＆：Ｊ、同実Ｍ１（例にＪ：□ ｋ
’）’ ｌ＞ ｊ’ 、７ ）’ ｔ・□Ｐシン＃度と
吸光度変化率最大に至Ｚ）雪での経過時間の関係を示し
た１ツ１である。 ■・・・容器載（ｈ゛台 ２・・洗浄液容器３・
・・試料誓器 ４・・・洗浄液容器５・・しＡ
、Ｉ、 Ｋ芋容器 ６ 宵子玲凍機７．９．ｉｔ、
２８．３１・・・排水管８．１０．１２・・・供給管
１．３ 、１４ ・電磁弁１５．１６ ・液貯槽
１７・・・吸引ノズル１８・・・上下駆動機構 １
９・・・水平駆動機構２０・・フレキシブルチューブ ２１・・・吸光度測定部 ２２・・混合脱泡槽２３・
・・光学セル ２４・・光源２５・・・受光部
２６．２９・・管２７．３０・・・吸引Ｉンプ エンドトへシン含角量ｘｎ輸−−シ １４／ 手続補正書 １１召ｆｎｆｇイｒ、 ／Ｚｏ ／ ｕ３ 補正を
する名 事イ′１との関係 出 願 人 ４、代ｊ１］！ 人 イ１ 所 東京もｌｔＴ代１１１１１７丸の内２１０
６番２号丸の内へ重７１＋１ヒル３３０を卆 １ 補 正 ■ 本願明細■中上記事項を補正（・たし圧す。 記 １第３頁５１丁目に ［Ｌｉｍ１ｕｓ Ａｍｏｅｂｏｃｙｔｅ Ｌｙｓａｔ
Ｊとあろをｒ Ｌｉｍｕｌｏｓ Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ
Ｉ＋ｙｓａｔｅ Ｊと訂正する。 ２自”＋ ｓ １１ｔ Ｏ行目に （一定条件化」と））ろを 「一定σで１士Ｉ・」とｄＪ正才る。 ；３第１（）貞１４行目に ［５０〜５５ ｎｎｎ／ Ｓｅｅ Ｊとあるを１−１０
〜５５ ｍｍ／ｓｅｅ Ｊと訂正する０４第１ ｌＩ
ｒｔ ２行目に ｒ Ｃａ１ｉ ４ Ｊとあろを ［（’、ｏｌｉ ４ ｊと訂正する。 ５．４＋’４ＦＷ４行目に １−８ Ｍａｒ、 ’８３ Ｊ ドア６ヲｒ ８ Ｍａ
ｒ、 ’ ８３まテ有９ＪＪ Ｊ ト訂正−ｆ ７；）
。 ６、第１４貞６行目に ［Ｎｏｖ、 ’８３ Ｊとあろを １” Ｎｏｖ、 ’８３＊で有効」と訂正すイ）Ｑ７、
第１６頁１２行目に 「略分布」とあるな １分布」とｎ」正１−る。 ８、第】８頁２ ？Ｔ ［ｌに ［異常４す）出ｊとあるを ［微量検出−１とｉｉＪ’ ｉＥする。
つ°ｆ；度変化率最大に至る経過時間の関係をｍｌ、明
−する図、第２図ｄ＊発明力法に用いる装置の４１！’
Ｉ略を何９明する図、第３図は同装置の載１色２台部の
構成を示す−＆１（ネ１視図、第４同人へ・Ｋ ｉ−ｊ
本発明方法にＵｆった実り布イ列に才（ｒｊる泪１１定
１ν？ ）Ｙ、度の−７＋−タを７ｉ’： −ｔ Ｉ’
Ｘｌ、第５ｒ＆ｌ ＆：Ｊ、同実Ｍ１（例にＪ：□ ｋ
’）’ ｌ＞ ｊ’ 、７ ）’ ｔ・□Ｐシン＃度と
吸光度変化率最大に至Ｚ）雪での経過時間の関係を示し
た１ツ１である。 ■・・・容器載（ｈ゛台 ２・・洗浄液容器３・
・・試料誓器 ４・・・洗浄液容器５・・しＡ
、Ｉ、 Ｋ芋容器 ６ 宵子玲凍機７．９．ｉｔ、
２８．３１・・・排水管８．１０．１２・・・供給管
１．３ 、１４ ・電磁弁１５．１６ ・液貯槽
１７・・・吸引ノズル１８・・・上下駆動機構 １
９・・・水平駆動機構２０・・フレキシブルチューブ ２１・・・吸光度測定部 ２２・・混合脱泡槽２３・
・・光学セル ２４・・光源２５・・・受光部
２６．２９・・管２７．３０・・・吸引Ｉンプ エンドトへシン含角量ｘｎ輸−−シ １４／ 手続補正書 １１召ｆｎｆｇイｒ、 ／Ｚｏ ／ ｕ３ 補正を
する名 事イ′１との関係 出 願 人 ４、代ｊ１］！ 人 イ１ 所 東京もｌｔＴ代１１１１１７丸の内２１０
６番２号丸の内へ重７１＋１ヒル３３０を卆 １ 補 正 ■ 本願明細■中上記事項を補正（・たし圧す。 記 １第３頁５１丁目に ［Ｌｉｍ１ｕｓ Ａｍｏｅｂｏｃｙｔｅ Ｌｙｓａｔ
Ｊとあろをｒ Ｌｉｍｕｌｏｓ Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ
Ｉ＋ｙｓａｔｅ Ｊと訂正する。 ２自”＋ ｓ １１ｔ Ｏ行目に （一定条件化」と））ろを 「一定σで１士Ｉ・」とｄＪ正才る。 ；３第１（）貞１４行目に ［５０〜５５ ｎｎｎ／ Ｓｅｅ Ｊとあるを１−１０
〜５５ ｍｍ／ｓｅｅ Ｊと訂正する０４第１ ｌＩ
ｒｔ ２行目に ｒ Ｃａ１ｉ ４ Ｊとあろを ［（’、ｏｌｉ ４ ｊと訂正する。 ５．４＋’４ＦＷ４行目に １−８ Ｍａｒ、 ’８３ Ｊ ドア６ヲｒ ８ Ｍａ
ｒ、 ’ ８３まテ有９ＪＪ Ｊ ト訂正−ｆ ７；）
。 ６、第１４貞６行目に ［Ｎｏｖ、 ’８３ Ｊとあろを １” Ｎｏｖ、 ’８３＊で有効」と訂正すイ）Ｑ７、
第１６頁１２行目に 「略分布」とあるな １分布」とｎ」正１−る。 ８、第】８頁２ ？Ｔ ［ｌに ［異常４す）出ｊとあるを ［微量検出−１とｉｉＪ’ ｉＥする。
Claims (1)
- エンドトキシンを含む試料水溶液にリムラス・アメーボ
サイト・ライセード系試薬を混合してリムラス反応を起
こさせ、当該混合液を光学セル中に充填して反応生成物
の吸光度を光学的に測定することにより前記試料水溶液
中のエンドトキシンを定量するに当たり、前記混合液を
光学セル中に充填した後吸光度変化率を経時的に測定し
て前記吸光度変化率が最大となるまでの経過時間を求め
、予めエンドトキシン濃度既知検液につき求めた前記吸
光度変化率が最大となるに要する経過時間との関係に基
づき、前記試料検液中の含有エントド八・シンを判定す
ることを特徴とするエンドトキシンの定バ１分析法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15234882A JPS5942451A (ja) | 1982-09-01 | 1982-09-01 | エンドトキシンの定量分析法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15234882A JPS5942451A (ja) | 1982-09-01 | 1982-09-01 | エンドトキシンの定量分析法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5942451A true JPS5942451A (ja) | 1984-03-09 |
Family
ID=15538571
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15234882A Pending JPS5942451A (ja) | 1982-09-01 | 1982-09-01 | エンドトキシンの定量分析法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5942451A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0173021A2 (en) * | 1984-06-27 | 1986-03-05 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Process for measuring endotoxin |
| JPS6352062A (ja) * | 1986-08-22 | 1988-03-05 | Terumo Corp | リムラステストの自動化方法及びその装置 |
| EP1499643A2 (en) * | 2002-04-30 | 2005-01-26 | Biowhittaker Technologies, Inc. | Automated sequential injection analysis systems for the determination of trace endotoxin levels |
| WO2010104180A1 (ja) * | 2009-03-13 | 2010-09-16 | 興和株式会社 | 生物由来の生理活性物質の測定方法、それを実行するためのプログラム及び、生物由来の生理活性物質の測定装置 |
| JP2010216878A (ja) * | 2009-03-13 | 2010-09-30 | Kowa Co | 生物由来の生理活性物質の測定方法及び測定装置 |
| JP2011117812A (ja) * | 2009-12-02 | 2011-06-16 | Kowa Co | 生物由来の生理活性物質の測定方法、それを実行するためのプログラム及び、生物由来の生理活性物質の測定装置 |
| WO2020184482A1 (ja) | 2019-03-12 | 2020-09-17 | 国立大学法人東北大学 | エンドトキシン検出装置、及びエンドトキシンの検出方法 |
-
1982
- 1982-09-01 JP JP15234882A patent/JPS5942451A/ja active Pending
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0173021A2 (en) * | 1984-06-27 | 1986-03-05 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Process for measuring endotoxin |
| JPS6352062A (ja) * | 1986-08-22 | 1988-03-05 | Terumo Corp | リムラステストの自動化方法及びその装置 |
| EP1499643A2 (en) * | 2002-04-30 | 2005-01-26 | Biowhittaker Technologies, Inc. | Automated sequential injection analysis systems for the determination of trace endotoxin levels |
| EP1499643A4 (en) * | 2002-04-30 | 2008-04-16 | Biowhittaker Technologies Inc | AUTOMATED ANALYSIS SYSTEMS WITH SEQUENTIAL INJECTION FOR DETERMINING ENDOTOXIN CONTENT IN THE TRACE AREA |
| WO2010104180A1 (ja) * | 2009-03-13 | 2010-09-16 | 興和株式会社 | 生物由来の生理活性物質の測定方法、それを実行するためのプログラム及び、生物由来の生理活性物質の測定装置 |
| JP2010216878A (ja) * | 2009-03-13 | 2010-09-30 | Kowa Co | 生物由来の生理活性物質の測定方法及び測定装置 |
| US8507282B2 (en) | 2009-03-13 | 2013-08-13 | Kowa Company, Ltd. | Method for measuring physiologically active substance of biological origin, program for implementing the same, and apparatus for measuring physiologically active substance of biological origin |
| JP2011117812A (ja) * | 2009-12-02 | 2011-06-16 | Kowa Co | 生物由来の生理活性物質の測定方法、それを実行するためのプログラム及び、生物由来の生理活性物質の測定装置 |
| WO2020184482A1 (ja) | 2019-03-12 | 2020-09-17 | 国立大学法人東北大学 | エンドトキシン検出装置、及びエンドトキシンの検出方法 |
| CN113508285A (zh) * | 2019-03-12 | 2021-10-15 | 国立大学法人东北大学 | 内毒素检测装置、及内毒素的检测方法 |
| US11460437B2 (en) | 2019-03-12 | 2022-10-04 | Tohoku University | Endotoxin detection device and endotoxin detection method |
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