JPS5898142A

JPS5898142A - 悪性物質吸着材

Info

Publication number: JPS5898142A
Application number: JP56193735A
Authority: JP
Inventors: Naokuni Yamawaki; 山脇　直邦; Katsunori Horikoshi; 堀越　克則
Original assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd; Asahi Kasei Kogyo KK
Current assignee: Asahi Kasei Corp; Asahi Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1981-12-03
Filing date: 1981-12-03
Publication date: 1983-06-10
Also published as: JPH035821B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、生体免疫機能に起因する各種疾患と密接な関
係をもつと考えられている自己抗体および／または免疫
複合体を特異的に吸着除去する吸着材、および該吸着材
を利用した吸着器に関する。

周知の如く、血液中に発現する自己抗体および／または
免疫複合体は、癌、免疫増殖性症候群、慢性関節リウマ
チ、全身性エリテマトーデス等の自己免疫疾患、あるい
はアレルギー、臓器移植時の拒絶反応等の生体免疫機能
に関係１〜だ疾患および現象の原因あるいは進行と密接
な関係をもっていると考えられている。

そこで、血液、血漿等の体液成分から、上記自己抗体お
よび／または免疫複合体を特異的に吸着除去することに
よって、上記の如き疾患の進行を防上し、症状を軽減せ
しめ、さらには治癒を早めることが期待されていた。

本発明者らは、上記要請に沿って鋭意研究した結果、実
に驚くべきことには、不溶性担体に結合したプリン塩基
またはピリミジン塩基を構成要素として含む低分子量の
物質ないしはその誘導体の少なくとも１種および／また
は糖リン酸（ｉｌ−構成要素として含む低分子量の物質
ないしはその誘導体の少なくとも１種が極めて高活性に
自己抗体、免疫複合体を吸着すること、特に全身性エリ
テマトーデスの抗ＤＮＡ抗体、抗核抗体、免反複合体を
特異的に吸着することを見い出し、先に特許出願したく
特願昭５６−７６７７６）。

本発明は、先の発明に関して担体についてより詳細に検
討した結果なされたものであり、担体の改良に関する。

従来、本目的を対象として特別に設計されだ担体は知ら
れていない。したがって、通常アフイニテイクロマトグ
ラフイ用として公知の担体を転用する他はなかった。公
知の担体としては、アガロース系担体、デキストラン系
担体、セルロース系担体等の天然高分子系担体、ポリア
クリルアミド系担体、ガラス系担体等が知られている。

しかしながら、天然高分子系担体は治療用に用いる時、
以下の欠点を有する。

（１）機械的強度が不十分なために操作上の制約が多い
。たとえば活性化、固定化等の吸着体の調製時に破壊さ
れたり、輸送、使用時に担体のカケ、クダケが生じる。

（２）軟質ゲルであるため、カラムに充填し体外循環に
用いる場合に、除去すべき物質を含む体液を高流速で流
すことができない。体液のような高粘度、高溶質濃度液
を高流速で流すと、軟質ゲルであるため、充填体積が減
少し、目づまりと流量低下をおこし、ついには流れなく
なる場合もある。

（３）軟質ゲルでありパーマネントボアーではないだめ
、体外循環治療用吸着材の必須要件である滅菌操作も容
易に行えない。例えばエチレンオキサイドガス滅菌のよ
うに薬剤滅菌の場合、凍結乾燥して滅菌されるが、凍結
乾燥によって細孔が破壊され、再び水系媒体に分散して
も元にもどらない。

凍結乾燥時その体積は約半量まで減少し、再び水系媒体
に分散しても元の体積のたかだか８０％程度にしかもど
らず、吸着能力も減少するのが常である。凍結乾燥時細
孔を保護するため、添加剤を混入して行う方法もあるが
、添加剤が体液に入るのを防ぐため、使用前に徹底的な
洗浄を施さなければならない。また高圧蒸気滅菌のよう
な熱滅菌も細孔を破壊するので用いることができない。

同様に放射線滅菌もその骨格および細孔を破壊するので
用いることができない。

（４）さらには天然高分子系担体は体外循環治療用に用
いる時、補体系の活性化、凝固系の活性化がおこす、ロ
イコペニア、スロンボサイトベニア等を生来するといわ
れ、あまり好ましくない０ポリアクリルアミド系担体は
、物理的、化学的に比較的安定であるという長所を有す
るものの、血漿タンパクの非特異的吸着が生じ、またア
クリルアミドの残留毒性も無視し得ない。ガラス系担体
は物理的、化学的に安定であるが、血漿タンパクの非特
異的吸着が著しく、また全血に用いる場合には血栓形成
を起こし、用いられない。

本発明の目的は、上記の如き従来技術に基づく担体の問
題点に鑑み、一般的に普及可能であり、自己抗体および
／または免疫複合体を高活性かつ特異的に吸着し、安定
な活性を保持し、安全性があり、滅菌操作も簡易に行な
うことができ、体液浄化あるいは再生用に適した吸着材
およびそれを利用した吸着器を提供せんとするものであ
る。

本発明者らは、上記目的に沿って研究を進め、各種の担
体にプリン塩基またはピリミジン塩基を構成要素として
含む低分子量の物質ないしはその誘導体および糖リン酸
を構成要素として含む低分子量の物質ないしはその誘導
体を結合し、自己抗体、免疫複合体に対する結合活性お
よび血漿タンバクの非特異吸着と全血に対する使用性を
評価したところ、実に驚くべきことには、ビニルアルコ
ール単位を主構成成分とする共重合体が、担体として極
めて好結果を与えることを見い出し、本発明を完成する
に至った。

すなわち、本発明は、ビニルアルコール単位を主構成成
分とする架橋共重合体からなる担体に、プリン塩基また
はピリミジン塩基を構成要素として含む低分子量の物質
ないしはその誘導体の少なくとも１種および／または糖
リン酸を構成要素として含む低分子量の物質ないしはそ
の誘導体の少なくとも１種が結合していることを特徴と
する自己抗体および／または免疫複合体の吸着材に係り
、また、前記の吸着剤を流体の導出入口を有する容器内
に収容してなることを特徴とする自己抗体および／また
は免疫複合体の吸着器に係る。

本目的に用いる担体としては、■血漿タンパクの非特異
吸着が少ない、■補体系、凝固系を活性化しない等の血
漿タンパクとの相互作用特性および吸着特性が要求され
る。また安全性の面では、■滅菌可能であること、■物
理的強度があり、担体のカケやクダケが発生しないこと
、■担体より溶出物がないことが要求される。さらに全
面用吸着材として用いる場合には、血球成分との相互作
用、すなわち、血栓形成や血球成分の非特異結石残血等
が問題になる。デキストラン、アガロース、セルロース
等の糖を含む天然高分子系担体は、血球、血漿成分と相
互作用し、補体系の活性化、凝固系の活性化を起こす。

一方、合成高分子系担体は、比較的これらの問題を起こ
さないとされている。本発明者らは、合成高分子担体に
ついて検討した結果、ビニルアルコール単位を主構成成
分とする共重合体からなる担体は、以上の未解決の問題
をみごとに解決することを見い出した。

ビニルアルコール単位を主構成成分とする架橋共重合体
からなる担体は、その親水性のため、血漿中のタンパク
質等溶質との相互作用が小さく、非特異吸着を最小限に
低下させる。また血漿中の袖体系、凝固系と相互作用し
ない等の極めて優れた特性を有する。物理的特性の而で
も、耐熱性を有１〜、熱滅菌を可能ならしめ、さらには
合成高分子の特性である物理的機械的強度に優れている
。

全面用吸着材の担体として用いる場合にも、血球成分と
の相互作用が少なく、血栓形成や血球成分の非特異粘着
、残血等を最少限におさえる等の極めて優れた特性を併
せ持っている。

本発明の架橋共重合体の水酸基の密度は、高くなればな
るほどその親水性が増加し、血液成分との相互作用を最
小にする上では好都合であり、壕だ活性化試薬で活性化
した場合の活性基密度も高水準に保持でき好捷しいが、
一方、架橋密度（架橋剤含量）との関係で、物理的、機
械的強度が低下する。したがって、水酸基密度としては
５〜１７ｍｅｑ／りが好ましく、より好ましくは６〜１
５ｍｅＱ／シである。

水酸基密度は、担体をピリジン溶媒中で無水酢酸と反応
させて、水酸基と反応して消費した無水酢酸の量または
相体のボ量変化を測定し、これから求めることができる
。乾燥担体ＩＱが１ｍｍｏｔの無水酢酸と反応したとき
の水酸基密度が１　ｍｅｑ／９である。

ビニルアルコール単位を主構成４分とする架橋重合体は
、水酸基を有するモノマーの重合まだはポリマーの化学
反応による水酸基の導入により合成できる。両者を併用
して合成することもできる。

重合方法としては、ラジカル重合法を用いることができ
る。架橋剤は重合時共重合により導入してもよいし、ま
たポリマーの化学反応（ポリマー間、ポリマーと架橋剤
）で導入してもよく、両者を併用してもよい。

−ｆｌあげろと、ビニル系モノマーとビニル系またはア
リル系架橋剤との共重合により作ることができる。この
場合のビニル系モノマーとしては、酢酸ビニル、プロピ
オン酸ビニル等のカルボン酸のビニルエステル類、メチ
ルビニルエーテル、エチルビニルエーテル等のビニルエ
ーテル類ヲ例示することができる。

架橋剤としては、トリアリルイソシアヌレート、トリア
リルシアヌレート等のアリル化合物類、エチレングリコ
ールジメタアクリレート、ジェチレングリコールジメタ
アクリレート等のジ（メタ）アクリレート類、ブタンジ
オールジビニルエーテル、ジエチレングリコールジビニ
ルエーテル、テトラビニルグリオキザール等のポリビニ
ルエーテル類、ジアリリデンペンタエリスリット、テト
ラアリロキシエタンのようなポリアリルエーテル類、グ
リシジルメタクリレート等のグリシジルアクリレート類
を用いることができる。また必要に応じて、他のコモノ
マーを共重合したものも用いることができる。

ビニル系共重合体の場合には、カルボン酸のビニルエス
テルとイソシアヌレート環を有するビニル化合物（アリ
ル化合物）を共重合し、共重合体を茶水分解して得られ
るポリビニルアルコールのトリアリルイソシアヌレート
架橋体が、強度、化学的安定性の面で特に良好な担体を
与える。

以上ビニル系共重合体の場合を例示したが、本発明は、
これに限定されるものではない。

本担体の形状としては、球状、粒状、糸状、中空糸状、
平膜状等いずれも有効に用いられるが、その担体表面積
（吸着材としての吸着能力）および体外循環時の体液の
流通面より、球状または粒状が特に好ましく用いられる
。したがって、担体の合成法としては、公知の懸濁重合
法が特に有効に用いられる。

球状または粒子状担体の平均粒径は２５〜２５００μｍ
のものを利用できるが、その比表面４＊（吸着材として
の吸着能力）と体液の流通面より、１５０〜１５００μ
ｍのものが特に好ましい。

本発明においては、架橋共重合体の比表面積が少なくと
も５ヴシを保持するものが好ましい。

比表面積とは、乾燥架橋共重合体単位重量当りに吸着し
た窒素ガスが占有する表面でもって表示したものである
。つまり比表面積は単位重量の架橋共重合体を構成する
物質が乾燥状態でいかに有効に表面を形成しているかを
表示している。

一般に架橋共重合体は、その架橋共重合体と親和性のあ
る媒体中で膨潤し、乾燥すると収縮する。

膨潤時に媒体が満たされているボアーが架橋の網目のみ
で維持されている軟質ゲルの場合は、乾燥すると網目が
つぶれてし捷い、ボアーはほとんど消失する。この場合
の比表面積は、はとんど粒子の外側だけの値になるため
、一般に１φ以下の低い値を示す０従来アフイニテイク
ロマトグラフイ用として知られているアガロースは軟質
ゲルであるため、乾燥によってボアーが消失してしまう
。

したがって、滅菌操作も容易に行えず、さらにはつぶれ
やすい軟質の網目を持っているため、カラムに充填し体
外循環に用いる場合にも、体液を長時間、高流速で流す
ことができない。

一方、ボアーがしつかりした構造をもち、凍結乾燥や熱
滅菌に耐える硬質ゲル（架橋共重合体）の場合には、乾
燥した際にボアーは多少収縮するものの、膨潤時の状態
をほとんど維持する。つまりパーマネントボアーを有し
、比表面積は軟質ゲルより高い値を示し、少なくとも５
吟′シ以上の値を示した。

本発明の比表面積の測定は、最も一般的な窒素ガスによ
るベット法（ＢＥＴ法）で求めた。また比表面積測定に
用いるサンプルは、十分乾燥しておかなければならない
が、本発明の架橋共重合体は乾燥しにくいこともあり、
水にぬれた担体をアセトンで平衡にした後、６０℃以下
で減圧乾燥して測定に供した。

本発明に用いる架橋共重合体の保水量（以下Ｗ。

という）は０．５〜１６ｇ／りの範囲にあるのが適当で
あり、好ましくは１．０〜１５．０９／りの範囲である
０ＷＩｌとは、架橋共重合体を生理食塩水と平衡にした時
、粒子内に含みうる生理食塩水の量を架橋共重合体乾燥
重量あた９の値として表示したものである。つまりＷ８
は架橋共重合体内の重量の目安になる。ＷＲが大きくな
ると、水中において架橋共重合体単位体積あたりの骨格
を形成する部分、つまシ架橋共重合体そのものの重量が
相対的に低下し、そのため生理食塩水中さらには体液中
において、架橋共重合体の機械的強度が低下する。ま７
’ｃＷ。

が小さくなると、吸着に有効な単位重量（または単位体
積）あたりの重量が少なくなるので吸着能力が低下する
。したがって、ＷＲが適当な範囲にあることか本目的の
担体にとって好ましい。

Ｗ、は予め十分に乾燥した架橋共重合体の重量（Ｗ２）
を測定した後に、生理食塩水と十分平衡にした架橋共重
合体を遠心分離器にかけて架橋共重合体表面に付着して
いる生理食塩水を除去した後、その重ｉ　（Ｗ＋）を測
定し、次式によって求めることができる。

担体の排除限界分子量（タンパク質）としては、本発明
の目的吸着物質の分子量が１５万（ＩｇＧ　）より免疫
複合体特にＩｇＭ免疫複合体の場合には１０００万に達
するので、１５〜１０００万が好ましい。本発明の目的
に最も汎用的な排除限界分子量は１００〜５００万であ
る。

本発明で吸着除去対象とする物質は、抗ＤＮＡ抗体（例
えば、ネイティブＤＮＡ抗体、ダブルストランドＤＮＡ
抗体、シングル玄トランドＤＮＡ抗体）、抗核抗体その
他の抗核抗原抗体、抗原形質抗原抗体等の自己抗体およ
び／！ｆ、たはその免疫複合体である０対象疾患として
は、上記物質のいずれかが出現するものであれば適用で
きる。具体的には、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）
、混合性結合織病（ＭＣＴＤ）、全身性硬化症、シェー
グレン症候群、皮膚筋炎（多発性筋炎）、ケイハイ症、
慢性関節リウマチ、悪性関節リウマチ、橋本病、慢性肝
炎、糖尿病、気管支拡張症などに適用される。

本発明に用いられるプリン塩基およびピリミジ／塩基を
構成する低分子物質とは、アデニン、シ　・トラン、グ
アニン、ウラシル、チミン、ヒボキサンチン、キサンチ
ンなどの塩基、アデノシン、シチジン、グアノシン、ウ
リジン、イノシン、キサントシン、デオキシアデノシン
、デオキシシチジン、デオキシグアノシン、デオキシウ
リジン、チミンジンなどのヌクレオシド、アデノシン５
′−リン酸、シチジン５′−リン酸、グアノシン５′−
リン酸、イノシン５′−リン酸、ウリジン５′−リン酸
、およびこれらのリボースがデオキシリボースになった
もの、およびニリン酸、三リン酸、また、２′　１５− 位、３′位にリン酸がついたものなどのヌクレオチド、
ヌクレオチドにグルコース、マンノース等の糖が結合し
たもの、ヌクレオチド数１０以下のオリゴヌクレオチド
、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）、
７ラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、コエンザ
イムＡ１コエンザイムＢＩ２などのヌクレオチド補酵素
、およびこれらすべての誘導体をさす。このうち特に、
塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチドが好ましく、さらに
は塩基が良く、その中でもプリン塩基のアデニン、グア
ニンがより好ましい。これらを単に一つだけ固定するの
ではなく、複数の種類を担体に固定してもよい。

本発明に用いられる糖リン酸を構成要素として含む低分
子量の物質とは、エリトロース、トレオース等のテトロ
ース類、アラビノース、キシａ−ス、リキソース、リボ
ース等のアルドペントース類、キシルロース、ペンツロ
ース、リグロース等のケトペントース類、ガラクトース
、グルコース、クロース、マンノース等のアルドヘキソ
ース類、　１６− ソルボース、タガトース、プシコース、フルクトース等
のケトヘキソース類、Ｎ−アセチル−グルコサミン等へ
キノサミン類、アルドヘプトース、ケトヘプトース、ケ
トヘプトース、ケトノノース等の多年糖類、２−デオキ
シペントース、６−デオキシヘキソース、２−デオキシ
ヘキソース、２．６−シブオキシヘキソース、３，６−
シブオキシヘキソース等のデオキシ糖類、糖アルコール
無水物類、ウロン酸、ケトアルドン酸、アスコルビン酸
等の酸性糖類、糖メチルエーテル類、分岐糖類、アミノ
糖類、シアル酸類のモノまたはジ正リン酸エステル、モ
ノまたはジピロリン酸エステル、トリフオスフェート等
がある。これらの糖はり、Ｌ体、スレオ、エリスロ体に
が５ゎりなく用いることができる。また、重合度１０以
下のホモまたはへテロオリゴ糖に正リン酸、ピロリン酸
、トリフオスフェート基が結合したものも用いることが
できる。さらに、重合度１０以下の糖リン酸のホモまた
はへテロ重合体も用いることができる。

これらすべての誘導体も用いることができる。このうち
特に、ルボース、デオキシリボースのリン酸エステルが
好ましく、さらに、デオキシリボースの３，５ジ正リン
酸およびそのオリゴマーがより好ましい。

本発明において低分子量の物質とは、分子量１万以下の
物質、よシ好ましくは分子量ｘｏｏｏ以下の物質である
。これによシブロチインＡ（分子量４２０００）のよう
な天然高分子に比較して固定化時の取扱い、固定化後の
保存も容易に行えるものである。また、当該物質が担体
から溶出した場合にも、分子量１万以下の物質は、生体
に対する抗原性が無視できるほど小さく安全であり、滅
菌操作も容易に行えるものである。

上記低分子量の物質をビニルアルコール単位を主構成成
分とする架橋共重合体からなる担体に結合する方法は、
共有結合、イオン結合、物理吸着、包埋あるいは重合体
表面への沈殿不溶化等あらゆる公知の方法を用いること
ができるが、結合物の溶出性よりみて、共有結合により
固定、不溶化して用いることが好ましい。そのため通常
固定化酵素、アフイニティクロマトグラフィで用いられ
る公知の担体の活性化方法を用いることができる。

活性化方法を例示すると、ハロゲン化シアン法、エピク
ロルヒドリン法、ビスエポキシド法、ハロゲン化トリア
ジン法、ブロモアセチルプロミド法、エチルクロロホル
マー）法、１．１’−カルボニルジイミダゾール法等を
あげることができる。本発明の活性化方法は、結合物の
アミン基、水酸基、カルボキシル基、チオール基等の活
性水素を有する求核反応基と置換および／または付加反
応できればよく、上記の例示に限定されるものではない
。

また必要に応じて、架橋共重合体（担体）と該低分子量
の物質の間に、任意の長さの分子（スペーサー）を導入
して使用することもできる。例えば担体の水酸基とへキ
サメチレンジイソシアナートの片側のインシアナート基
を反応、結合させ、残ったインシアナート基と結合物の
アミン基、ヒドロキシル基、チオール基、カルボキシル
基等を反応、結合させるごと〈実施することができる。

スペーサー長さとしては、スペーサーのないものから、
その中に含まれる原子数で２０までが特に好ましい結果
を与える。

本発明で担体に結合させるリガンドの′量は、担体１ｇ
（乾燥重量）当りＯ１μｍａｔないしは１０００μｍＯ
１の範囲であり、より好ましくは０．５μｍａｔないし
は１００μｍｏｌの範囲である。

担体と結合させるリガンド（低分子量の物質）の部分は
、水酸基、アミン基、リン酸基等を用いることができる
。

該吸着材の作用機構は、抗原抗体反応に近いものと考え
られるが、本来の抗原である生体高分子または類似した
合成高分子を用いずに、万一体内にはいっても何ら支障
がなく、体内で代謝される低分子によって、充分な吸着
除去能力を呈することは驚くべきことといえる。

本発明の吸着器は、上記説明の吸着器を、流体の導出入
口を有する容器内に充填し、体液が吸着材と接触しつつ
通過するようにしたものである。

これの具体例を第１図と第２図に示す。第１図は吸着器
（１）で、円筒（２）の両端開口部に、内側にフィルタ
ー（３）　、　（３勺を張ったバッキング（４）　、　
（４’）を介して体液導出入口（５）　、　（５勺を有
するキャップ（６）。

“　（６つをネジ（７）　、　（７つで嵌合し、両端の
フィルターの間隙に吸着材（８）を充填保持させてなる
ものである０吸着材としては、本発明の前記吸着材を単独で充填して
もよく、他の吸着材と混合もしくは積層してもよい。吸
着材層の容積は、体外循環に用いル場合、５０〜４０〇
−程度が適当である。

本発明の吸着器を体外循環で用いる場合には、大路次の
二通りの方法がある。一つには、体内から取り出しだ血
液を遠心分離機もしくは原型血漿分離器を使用して、血
漿成分と血球成分とに分離したのち、血漿成分を本発明
の吸着器に通過させ、浄化した後、血球成分と合わせて
体内にもどす方法であり、他の−っは体内から取シ出し
た血液を直接本発明の吸着器に通過させ、浄化する方法
である。

また、血液もしくは血漿の通過速度については、該吸着
材の吸着能率が非常に高いため、吸着材の粒度を粗くす
ることができ、また充填度を低くできるので、吸着材層
の形状の如何にかメわらず、高い通過速度を与えること
ができる。そのため多量の体液処理をすることができる
。

体液の通液方法としては、臨床上の必要に応じ、あるい
は設備の設置状況に応じて、連続的に通液してもよいし
、また断続的に通液使用してもよい。

本発明の吸着材および吸着器は、以上述べてきたように
、体液中の抗ＤＮＡ抗体（ネイティブＤＮＡ抗体、ダブ
ルストランドＤＮＡ抗体、シングルスランドＤＮＡ抗体
）、抗核抗体等の自己抗体および免疫複合体を高率かつ
特異的に吸着除去し、非常にコンパクトであると共に簡
便かつ安全である。

ビニルアルコール単位を主構成成分とする加橋共重合体
を担体に用いたため、血漿タンパクの非特異吸着が少な
く、補体系、凝固系との相互作用も小さいという極めて
優れた特性を有する上に、物理的、機械的強度に優れ、
吸着材の調製、取扱いによるカケ、クダケが極めて少な
い０また硬質であるため高流速で体液を流すことができ
る。その上、耐熱性を有するため、通常の滅菌法（エチ
レンオキサイドガス滅菌、高圧蒸気等熱滅菌、γ線滅菌
等）も容易に、かつ確実に実施できるという効果を併せ
もっている。さらには全血用吸着材として用いる場合に
も、血球成分との相互作用が小さいだめ、血栓形成や血
球成分の非特異粘着、残血等を最小限におさえられるメ
リットを有する。

本発明は、自己血漿等の体液を浄化、再生する一般的な
用法に適用可能であり、生体免疫機能に関係した疾患の
安全で確実な治療、特に全身性エリテマトーデス等の自
己免疫疾患の治療に有効である。

また、本発明の吸着材は、装置に充填して治療器として
用いられるにとどまらず、抗ＤＮＡ抗体、抗核抗体等の
自己抗体および免疫複合体の分離、精製用吸着材および
これらの測定用基材としても極めて有効に利用できる。

以下、実施例により、本発明の実施の態様をより詳細に
説明する。

実施例１酢酸ビニル１００ｇ、トリアリルイソシアヌレート２４
．１９　（Ｘ＝０．２０　）、酢酸エチル１２４り、ヘ
プタン１２４９、ポリ酢酸ビニル（重合度５００）３．
１９および２，２′　　−アゾビスイソブチロニトリル
３．１９よりなる均一混合液と、ポリビニルアルコール
１重量％、リン酸二水素ナトリウムニ水和物０．０５重
量％およびリン酸水素二ナトリウム十二水和物１５重量
％を溶解した水４０〇−とをフラスコに入れ、十分攪拌
した後、６．５°Ｃで１８時間、さらに７５゛Ｃで５時
間加熱攪拌して懸濁基金を行い、粒状共重合体を得た。

濾過、水洗、ついでアセトン抽出後、カセイソーダ４６
．５ｑおよびメタノール２ｔよりなる溶液中で、４０”
Ｃで１８時間、共重合体のエステル交換反応を行った。

得られた粒子の平均粒径は１５０μｍであった。前記方
法で水酸基密度（ｑＯＨ）を求めたところ、１３　ｍｅ
ｑ／９であった。

このゲルを内径７．５１１Ｊｌ、長さ２５ｃｍのステン
レス製カラムに充填して、種々の分子量を持つデキスト
ランやポリエチレングリコールの水溶液およびアルブミ
ン、イムのグロブリンＧ１イムノグロブリンＭ、βニリ
ボプロテインのリン酸緩衝塩溶液を測定したところ、そ
れぞれ分子量の大きい順に溶出された。デキストランの
排除限界分子量は約３×１０５、タンパク質の排除限界
分子量は約１８Ｘ１０５であった。まだ０．３Ｍ塩化ナ
トリウムおよび０．１　Ｍリン酸ナトリウムを含む水溶
液を溶媒として、ヒトーγ−グロブリン、ヒト−アルブ
ミンの溶液を流したところ、はとんど１００％の回収率
で回収され、ゲルの非特異的吸着は非常に少なかった。

サンプルの測定はすべて流速１　ｒｒ４／ｍで実施した
。

つぎにエステル交換され、水で十分に洗浄されたゲル５
’ＯＣＣを２００−の水に懸濁し、３りの臭化シアンを
加え、攪拌する。２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を用いて
ｐＨを１０〜１１に保ち８分間反応させた。反応終了後
はすみやかにガラスフィルターで濾過し、ついで水２ｔ
で洗浄して活性化ゲルを得た。該活性化ゲルに通常の方
法によってアデニン〔ヤマサ醤油（株）製〕を結合せし
め、過剰の活性基をグリシンでブロッキングした。保持
量は６Ｎ塩酸で室温２４時間処理した後、リガンドを遊
離させ、２６０ｎｍの吸収から算出した。吸着材は生理
食塩水で充分に洗浄した後、脱水して実験に使用した。

吸着実験は、全身性エリテマトーデス患者血漿３容と吸
着材１容を混合し、３７℃、３時間インキュベーション
により行った。また、対照として、未活性化セファロー
ズ４Ｂを用いた。

抗ＤＮＡ抗体価は、ホルマリン固定鶏血球にＤＮＡを感
作したものと、処理まだは未処理の患者血漿の段階希釈
液との混オロによって生じる凝集反応（室温）の有無に
より、陽性か陰性かを判断し、陽性を示す最高希釈倍数
をもって抗体価を求めた。測定には１ＤＮＡテスト」〔
富士臓器製薬（株）製〕のキットを用いた。

抗核抗体価は、細胞を塗抹したスライドガラスに段階希
釈した検体（−次抗体）を滴下し、抗原−抗体反応を行
い。ペルオキシダーゼ標識抗ヒト免疫グロブリン抗体（
二次抗体）を滴下し、酵素の呈色反応を光学顕微鏡で観
察した。測定には、［エンザイムＡＮＡテスト］［（株
）医学生物学研究新製〕のキットを用いた。陽性を示す
最高希釈倍数をもって抗体価を表示した。

免疫複合体量の測定には、ポリエチレングリコール（Ｐ
ＥＧ）により免疫複合体を沈降させ、補体溶血反応と組
合わせる方法を用いた。この方法の操作方法、条件は次
のようにして行った。

（１）検体０．３−を分離管に注ぐ。次に、０．２　Ｎ
ＥＤＴＡ　　５０μｔを加えて攪拌し、さらにほう酸緩
衝液を５０μノ加えて攪拌する。１２．５％ＰＥＧ（分
子量６０００　）を０．１　ｍｌ加えて攪拌し、４゛Ｃ
１９０分静置する。

（２）　　４−Ｃ，１７００９で１０分間遠心し、沈澱
を２．５％ＰＥＧ１．０−で洗う。１７０（ｌで１５分
間遠心し、上清を捨てる。

（３）　　３７−ＣＯＧＶＢ＋＋（２価陽イオンを含む
ゼラチンベロナール緩衝液）３０μｔを加え、沈澱を溶
解する。補体源としてプール健康人血清１０μｔを加え
る。３７−Ｃ，３０分間、免疫複合体と補体とを反応さ
せる。

（４）　　１．５Ｘ１０’／ｎｔＥＡ（抗体感作赤血球
）１．０−を加え、３７”Ｃ，６０分間、振とうさせて
、残存補体による溶血反応を促進させる。

（５）反応後、４℃の生理食塩水６．５−を加えて遠心
し、上清の吸光度（ＯＤ４．＋４　）を測定する。

（６）健康人血清を対照とし、これに対する溶血の阻止
率を算出する。単位をＰＥＧ−ＣＣ％とする。

ＥＡは日本凍結乾燥研究新製の補体価測定用感作赤血球
（ＫＷ）を用いた。

アルブミン量はブロムクレゾールグリーン（ＢＣＧ）を
用いるアルブミン測定法を利用し、試薬は［Ａ／Ｇ　　
Ｂ−テスト　ヮコー、和光純薬工業（株）製〕を用いた
。吸着実験後のアルブミンの減少敵の患者血漿に対する
割合を除去率としだ。

結果を表−１に示した。

表−１より、ビニルアルコール単位を主構成４分とする
架橋共重合体に結合したアデニンが、特異的かつ高率に
抗ＤＮＡ抗体、抗核抗体、免疫複合体を吸着することが
明らかである。

表−１実施例２実施例１の活性化ゲルに、通常の方法によってデオキシ
リボース３，５−シリン酸を結合せしめ（″実験と応用
アフィニティクロマトグラフィー゛Ｐ４８．１９７６講
談社サイエンティフィック刊）、通常の活性基をトリス
ハイドロオキシメチルアミノメタンでブロッキングした
。保持量は６０μｍｏｌ／’；１であった○吸着材は生
理食塩水で充分に洗浄した後、脱水して実験に供した。

抗ｄｓ−ＤＮＡ抗体価はクリチデア　ルシリア（ｃｒｉ
ｔｈｉｄｉａ　１ｕｃｉｌｉａｅ）を用いる螢光抗体間
接法を用いた。他は実施例１と同様に行った。

結果を表−２に示した。

表−２より、ビニルアルコール単位を主構成成分とする
架橋共重合体に結合したデオキシリボース３，５−シリ
ン酸が、特異的かつ高率に抗ダブルストランドＤＮＡ抗
体、抗核抗体、免疫複合体を吸着することが明らかであ
る。また吸着前後の補体価を測定したが、その減少はわ
ずかであった。

表−２実施例３実施例１，２の吸着材を各２．５　ｇＸｔ計５−第１図
の如き容器内に収納し、吸着器を作成し、第２図に示す
実験系を用い吸着実験を行った。

すなわち、容器（９）に全身性エリテマトーデス患者血
漿（１０）を２０−入れ、ポンプ（１１）により毎分０
、５　ｔｄの流速で汲み出し、吸着器（１）に送り、ド
リップキャンバ−（１４）およびサンプリング口（１２
）を経て、容器（９）に返送されるようにチューブ（１
３）を配設した。

上記装置により、血漿を１時間循環させた後、血漿をサ
ンプリングし、血漿中のタンパク成分を測定した。結果
を表−３に示した。

表−３

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の吸着器の１例を示す断面図、第２図は
実施例におけるモデル実験説明図である。１・・・吸着除去器、２・・・円筒、３　、３’・・フ
ィルター、４，４′・・・バッキング、５，５′・・・
体液導出入１］、６．６′・・・キャップ、７　、７’
・・・ネジ、８・・・吸着材、９・・・容器、１０・・
・血漿、１１・・ポンプ、１２・・・サンプリング口、
１３・・・チューブ、１４・・・ドリップチャンバー。第１図

Claims

【特許請求の範囲】１、　ビニルアルコール単位を主構成成分とする架橋共
重合体からなる担体に、プリン塩基またはピリミジン塩
基を構成要素として含む低分子量の物質ないしはその誘
導体の少なくとも１種が結合していることを特徴とする
自己抗体、免疫複合体の吸着材。２、　ビニルアルコール単位を主構成成分とする架橋共
重合体からなる担体に、糖リン酸を構成要素として含む
低分子量の物質ないしはその誘導体の少なくとも１種が
結合していることを特徴とする自己抗体、免疫複合体の
吸着材。３、　ビニルアルコール単位を主構成成分とする架橋共
重合体が、カルボン酸のビニルエステルとインシアヌレ
ート環を有するビニル化合物の共重合体を加水分解して
得られる架橋ポリビニルアルコールである特許請求の範
囲第１，２項記載の吸着材。４　ビニルアルコール単位を主構成成分とする架橋共重
合体からなる担体に、プリン塩基またはピリミジン塩基
を構成要素として含む低分子量の物質ないしはその誘導
体の少なくとも１種および／または糖リン酸を構成要素
として含む低分子量の物質ないしはその誘導体の少なく
とも１種が結合している吸着材を、流体の導出入口を有
する容器内に収容してなることを特徴とする自己抗体、
免疫複合体の吸着器。