JPS58175490A - 生理活性物質ｓｓ１２５３８ａ及びその製造法並びにこれを産生する新規な微生物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 不発明は新規な生理活性物質ｓｓ　１２５３８Ａ及びそ
の製造法並びにこれｔ産生する新規な微生物に関する。

不発明言らは天然の土壌より数多くの微生物を琳離し、
その生産物について檀々研究をおこなった結果、千葉系
さつきが丘の土壌から分離した菌株、Ｅ１１２５３８は
新規な微生物であり、新らしい生理活性物質８８１２５
３８ａを生産すること並びにこの生理活性物質は優れた
血管拡張作用と一部のダラム陽性ｉ！！！及び糸状菌に
対する抗１作用ケ有することｔ見出し本発明を児成した
。

すなわち、本発明は新規な生理活性物質８８１２５３８
Ａ及びその製造法並びにこれを渉生する＃ｆｒ蜆な微生
物を提供するものである。

本発明の生理活性物質１３５１２５３８Ａ′（！−産生
する菌は、次のような菌学的性質を有する。

１、形態 胞子形成菌糸は、気園糸より単純分枝し、その先端部は
らせん形である。輪生糸は認められない。

成熟した分生胞子は、１０個以上が連鎖し、胞子の形は
、短円筒形〜橢円形で、その大きさは、０．５〜０．８
　Ｘ　Ｏ，８〜１．５μｍである。胞子表面栴造は、毛
状である。胞子のう、鞭毛胞子、菌核は、いずれも認め
られない。また、基中菌糸の分断も認められない。

２、各種培地における生育状態（２７°Ｃ１１４日間培
養） 以下全白 ３、生理的性状 （１）生育温度範囲 生育可能温度　１６〜６９℃ 生育至適温度　２６〜６５℃ （２）ゼラチンの製作　陽性 （３）＃粉の加水分ｐｓ　　陽性 （４）脱脂牛乳のｌＩｌ向　陽性 （５）脱脂牛乳のペプトン化　陽性 （６）　　メラニン様色素の生成　陰性（７）硝酸塩の
還元　　陽性 （８）　　セルロースの分解　陰性 （９）　　辰素源の利用 Ｄ〜グルコース　　＋ Ｌ−アラビノース　− シュークロース Ｄ−キシロース　　− Ｌ−イノシトール　− Ｄ−マンニトール　− Ｄ−フラクトース　− ラムノース　　　　− ラフィノース　　　＋ セルロース　　　　− ガラクトース　　　士 サリシン　　　　　− ラクトース　　　　＋ Ｄ−ソルビトール　＋ Ｄ−マンノース　　＋ イヌリン　　　　　− （注）＋：利用する 一：利用しない 以上の性状および細胞壁組成として、Ｌ−ジアミノピメ
リン酸を含むことより、８１２５３８株がストレプトミ
セス属ＫＪｌｉｔｊることは明らかである。さらに、同
菌株の菌学的性状をワックスマン著［ジ・アクチノミセ
テス（Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｓｔｅｓ）Ｊ第２巻
（１９６１年）、シャーリングとプツトＩＪ−デの工８
Ｆ報告［インターナショナル書ジャーナル・オプ・シス
テラティック０バクテリオロジ−（工ｎｔｅｒｎａｔｉ
ｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　８ｙａｔａｍａｔｉ
ｃＢａｃｔｅｒｉｏｌＯｇ７　）Ｊ　ｔＪ　１８巻６９
Ｂ、２７９頁（１９６８年）、同第１９巻６９１真（１
９６９年）、同第２２巻２６５頁（１９７２年）および
［バーシーズ・マニュアル・オデΦデイターミネイティ
ブ・バクテリオロジ−（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａ
ｌ　ｏｆＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌｏｇｙ　）　Ｊ第８版（１９７４年）より検索する
と、本８１２５３８株のように、気菌糸の色がグレイ・
カラー・シリーズ、胞子鎖がらせん状、胞子表面構造が
毛状、メラニン様色素ケ生成せず、炭素源の利用範囲が
せまい株としては、ストレプトミセスーカルナタケンシ
ス （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｋａｒｎａｔａｋｅｎａ
ｉｓ　）とストレプトミセス・バクタム（８，ｐａｃｔ
ｕｍ　）　　の種が認められる。これら２薗株と、８１
２５５８株との比較を行ったＭ！Ｊヶ示すと次表のとお
りである。

以下余白 上表にみられるように８１２５３８ａと、ストレプトミ
セス・カルナタケンシスエ５Ｐ５５４５株とは、気菌糸
の色調、硝酸塩の還元、ラフィノースの利用能の点で大
きく異なる。他方、ストレプトミセス・パクタムエ５ｐ
５５３０＆とは、硝酸塩の還元、ラフィノースの利用能
で異なるが、他の菌学的性状がほぼ一欽する。したがっ
て、Ｓ　１２５！１８株は、ストレプトミセス・バクタ
ムに属する一菌株であると同定した。

本発明者は、８１２５６８株を公知の菌株と区別するた
めに、ストレプトミセス・バクタムｓ　１２５３８　（
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｐａｃｔｕｍ　Ｓ　１２５
３８　）と命名し、工業技術院微生物工業技術研究所に
受託番号微工研菌寄第６４６３号（ＦＩＲＭ　Ｐ−６４
５３）として寄託した。

本発明の生理活性物質８Ｓ１２５３８Ａは、上記菌株を
栄養源含有培地に接種し、好気的に培養せしめることに
より製造される。

生８！活性物質８８１２５３８人生題株としては、Ｆ記
菌株はもとより、その人工並びに自然変異株も同様に使
用できる。

培養に用いられる培地としては、当ｈシ菌が利用する栄
養源を曾むものであれば、合成培地、事合成培地、天然
培地の倒れでもよい。

培地中の栄養源のうち、炭素源としては、例えばグルコ
ース、グリセロール、テキストリン、澱初、水あめ、砧
みつ、大豆油等あるいはこれらの混合例がイナ用される
。また窒素源としては、大豆粉、小麦肝芽、肉エキス、
ペプトン、乾燥酵母、綿実かす、魚粉、コーンステイー
プリカー、俳酸アンモニウム、硝酸ナトリウム等あるい
はこれらの混合物を使用することができる。

またその他必要に応じて炭酸カルシウム、堪化ナトＩＪ
ウム、＠酸塩等の無機増類を添加したり、隋の発育を助
け、物質５ｓ１２５３８Ａの生産ケ促進Ｔろ如き、有機
物、無機物及びシリコン油又はアデカノール（商品名）
等の一般的涌泡剤を適宜添加することができる。

培養法としては、一般抗生物質の生理と同じく液体培養
法、特に深部培養法が最も適している。

培養は好気的粂件下で行われ、セ寮に適当な温陵深部培
養共に２〜７日でその蓄積が最高圧達する。

斯くして得られた培養物中から生理活性＠誓Ｓ８１２５
３１３Ａを単離するには、佼記実施例に示す如く、不生
理活性物質Ｂｅ　１２５３８Ａの埋イヒ学的性状馨考慮
して種々の方法′％：ｉ１当に組合せることによって行
う。

すなわち、生理活性物質５ｓ１２５５８Ａは通常菌体及
び培養ｆ液中に存在するので、遠心分離又は１過等の手
段によって培養物から菌体Ｙ分離し、その菌体及び培養
ｆ液から通常の分離方法、例えば溶媒抽出法、沈殿法、
イオン交換樹脂法、ｒルｆ’過法、吸着若しくは分配カ
ラムクロマト法、透析法など適宜組合せて生理活性物質
８８１２５５８Ａを分離８１＆−ｆ’る。

好ましい分離精製法の例としては次の方法が埜げられる
。

すなわち、培養液を遠心分離等により＃ｉ体とＣ液に分
ける。次いで菌体及び１液を適当な溶媒、例えばメタノ
ール、酢酸エチル等で抽出する。菌体抽出液と１液袖出
液を合わせ溶媒を留去する。

得られた残渣を少量の水に俗解した懐、酢酸エチルで数
回抽出し、直圧乾固すると暗褐色の油状物χ得る。この
油状物をシリカデルを用いる吸着クロマトグラフィーに
付す。活性画分ｔｊ！：集め、減圧濃縮すると８Ｓ１２
５３８Ａは無色の油状物質として単離される。

以上の如くして得られた８Ｓ１２５３８Ａは次のような
理（Ｐ学的性質および生物学的性質含有する。

１、理イヒ学的性′鐙 ■　物質の色・性状：無色の油状物質 ■　分子量（８１３１２５り８Ａのアセテートのマスス
ペクトルより） ００ ■　４４クロマトグラフイー 担体ニジリカゲルグレートＦ２５４ （メルク社製） ■　呈色反応 ２．４−ジニトロフェニルヒーラジン試楽で黄色ケ呈す
る。アニスアルデヒｆ４ｍ酸で濃紫色を呈する。塙（ヒ
第２鉄反応は嘱性である。

■　溶剤に対する溶解性 り０口ホルム％　酢酸エチル、アセトン、エチルエーテ
ル、エタノール、メタノール、ピリジン、ベンゼン、ジ
メチルスルホキシＶにｃＩｒ溶。水に難溶。

（６）紫外Ｍａ＠収スペクトル 一〇Ｈ２３９Ｋ　　　８４５　　（第１図）１張 ｍａｗ　　　　　　　１　ｃｍ ■　赤外線吸収スペクトル（液Ｊｉｌり＠２図 ■　”Ｈ・−ＮＭＲＸベクトル（６０ＭｋｉＺ　）電ク
ロロホルム溶液中ＴＭＳを基準物置として測定した。第
３図 ■　１３Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトル 東りロロホルム浴液中ＴＭＳン基準吻誓として＃ｊ足し
た。

δ（ｐｐ＋ｎ）１ｄ１．０　、１６２．１　、１５６．
８．１３８．０　、１３６．５　。

１３５、’７１　、１５５．１　、１６４．ｏ　、　１
２５．０　、１２２．９　。

１１７．９　、１１７．ピ、　　９９．３．８２．６．
　５５．１　。

４２．８．　６６．８．　２９．９．　１７．４．　１
６．５゜１３．０．　１３．０．　１０．６．　９．８
．　６．８６０　　分子式（ＮＭＲ及びマススペクトル
より）０２５Ｈ３６０４ ６）構造式 上記の理イヒ学的測定噸より、本発明物質８８１２５３
８Ａは下記の式で表わされる構造のものと決定した。

ＯＨ３ＣＨ３Ｃ！Ｈ３０Ｈ５ ２生物学的性質 （１）　　血管拡張作用 実験ｗＪ物として体厘１５〜２５ゆの雄性雑犬（１群４
ｄ）’に用い、ベントパルビタールナトリウム（５０■
／に９１．ｖ、）で解酔した彼、人口呼吸下に左上状動
脈ｔＩＩ出し、血＆ｔＹ演１１定するための電ｆｆｉ流
量針のｆｏ−グン装着し、また、左大！５ｊｉＩＪ脈内
にはポリエチレンカニユーレを挿入した。

被検化合物は、少量のジメチルスルホキ７ドに溶解し、
注射用滅菌生理食塩水にて希釈し、静脈内圧投与した。

実験動物の血流量は、前記電磁流量計により、血圧は／
　ＩＪエチレンカニユーレカラ圧トランジューサーを介
することにより、また心拍数は心電図のＰＲ間隔から瞬
時心拍計より測定し、ポリグラフ上忙記碌し、被検化合
物の投与前後の変動を調べた。

この結果ン第１表に示す。

（２）抗菌作用 生理活性物！８Ｓ１２５３８Ａの各種微生物に対する最
小発育阻止嬢度（Ｍ工Ｃ）を第２表に示す。

第　　２　　表 以上述べ１こ諸性質から本発明化合物に類似する既知生
理活性物質のそれと比威し定がＫｌ！鋤する物質はなく
８８１２５３８Ａは新規な生理活性物質と判断された。

叙上の如く、本発明の生理活性物質８８１２５３８Ａは
血圧降下作用を示すほか、冠動脈血流量を則者ＶＣ４７
１０させ、しかもその力価は現在一般に使用されている
ジビリダモールのおよそ６０倍である力１ら、例えば虚
血性心疾患に対する治療薬及び血圧降下剤として有用な
ものである。また、８８１２５３８　Ａは、一部のダラ
ム陽性１Ｉ）ｌｔび糸状菌に対しての抗菌作用が認めら
れることから抗菌剤としても有用なものである。

次に’）Ｂ１５例を挙げ、本発明を説明する。

’＋施何例 １生物の純粋分離及び再現性試験： （１）採取した土壌を滅菌水で１０００倍に希釈し、そ
の１肩ξを下記分離用寒天培地（１）９ｍｚに混伸し、
滅菌シャーレ内に入れ、２７℃で数日間培養する。

分離用寒天培地（１） オートミール　　　　　　２０．９ （オートミール２０＆を蒸留水１０００紅中で２０分間
煮た後チーズｆ布でｆし、減敵分′ｆｉ！：蒸留水で補
う） 酵母エキス　　　　　　　４ｇ グルコース　　　　　　　　２ｙ 微鎗墳液　　　　　　　　１ｍｌ 寒　　　天　　　　　　　　　　　２０ｇｐＨ７，２ 上記培養により発生するコロニーを白金耳にて下記組成
の斜面寒天培地（Ｉｔ）に移し、２７ｔで１４日間培養
する。

斜面寒天培地（ＩＩ） オー　ト　ミ　−　ル　　　　　　　　　　　　　２０
　メ７（オートミール２０９’４を蒸留水１０００　Ｔ
ｌｌ中で２０分間煮た後チーズ１布で１し、減量分を蒸
留水で補う） 微を塩液　　　　　　　　１ｍｌ 殊　　　天　　　　　　　　　　　１８ｇｐ）１７．２ 一ヒ記培養により培地上に発生する菌の１白金耳を生理
食塩水で１０，０００倍希釈し、そのｉ　ｍｌを分離用
寒天培地（［）の９紅と混合して滅菌シャーレ内で２７
℃で１４日間培養した。出来た複数のコロニーはこれら
が相互間に相異しないことを肉眼的及び顕微鏡的に確認
する。

ｈ記コロニーの内１０イーのコロニーを夫々斜面寒天培
地（ＩＩ）に接種し、２７℃で１４日間培養し、１０本
の斜面培地（Ｉｆ）上の菌が肉眼的及び顕微鏡的に同じ
菌であること１￥：確認し、またこれら１０本の培養−
についての各培地上の性状及び生理学的性質が同一であ
ることヲ確認した。上記各培地上の性状及び生理学的性
質は前述した通りである。

上記試験の結果各１０本の培養菌はすべて自然昇より分
離された単−菌であることが判る。

（２）次いで上記で純粋ｊ＠％された斜面寒天培地（Ｉ
ｌｌ上の菌に保穫剤（スキムミルク１０チ及びグルタミ
ン酸ナトリウム１チの水溶液）を力【１え、斜［ｉｉ瞭
大培地（ＩＩ　）上にて胞子懸濁液’ｒａｎ整する。こ
の胞子懸濁液乞凍結乾燥アンプルに約Ｑ、５ｙｓｌずつ
分注し、凍結乾燥を行う。該凍結乾燥は胞子５８ｋｌ液
のはいったアンプルをｒライアイス−アセトン中にて角
稗凍結し、これＹ連結乾燥機にセットし、真空度が眠（
〕３トール以下とすることにより行なわれる。次いでが
スバーナーで真空溶封後４℃で保存する。かくして得ら
れる凍結乾燥＃１（１１品）ｔ６ケ月保存後、アンプル
を開封し、＃２１１ミニスパーチルを用いて滅菌試験管
に移し、これに復元剤（滅菌水）ケ加え、１時間以上放
置した後、前記と同条件下に各培地上での性状及び生理
学的性・イを調べた。この結果、凍結前のｉｌ　（”標
品）と常住は、遣められなかった。

実施例２ ８８１２５３８Ａの生産園ストレゾトミセス・バクタム
８１２５３８（微１研薗寄第６４６５号）をグリセロー
ル２．０％、デキストリン２．０　％、ソイトン１．０
４、酵母エキス０．５’ｌｙ、ｍ酸アンモニウム０．２
４、炭酸カルシウム０．２チ（ｐＨ７，０）の液体培地
に接種し、２７℃でＡ８時間振盪して種培養を得た。次
いで上記液体垢地１６１′ｆ；！ｒ：６０１容のジャー
ファメンター中にメれ、この培地中に前記種培養５００
１Ｊ’Ｙ接種し、通気量１６１／分、攪拌ａ　４００　
ｒ、ｐ、ｍ、培養温度２７°Ｃの粂件下で９６時間培養
した。培養終了会、培養液を遠心分離し、得られたｆ液
に等量の酢酸エチルｔ７１Ｉ＋え、３回抽出する。一方
菌体にはメタノール５１７加えて攪拌した彼１遇する（
この操作を２回行なった）。この抽出液のメタノールヲ
減圧留去した後、残音の水溶液を酢酸エチル１１で６回
抽出した。

これを前記のｆ液からの抽出液と合わせ、溶媒を減圧留
去すると粗５８１２５３８Ａが得られる。

この粗８８１２５！＋８Ａを少量のクロロホルムに溶解
し、同溶媒でシリカゲル（メルク社製；キーゼルｒル６
０）カラムクロマトグラフィー（カラムサイズ６　ａｒ
ｒ、　Ｘ　３０　ｃｍ　）　Ｋ付した。クロロホルムで
溶出されてくる８８１２５５８Ａｌｌ！ＩＪ分を分取し
、溶媒を留去すると淡黄色油状の８６１１２５５８Ａの
粗精製物的４ｇが得られた。この８Ｓ１２５５８Ａ粗檀
製物約４ｙを９嫌のベンゼン／酢酸エチル（６：１）ｖ
ｃ溶解し、同溶媒でシリカゲル（メルク社製；キーゼル
ｒル６０）カラムクロマトグラフィー（カラムサイズ２
　ｃＩｒｌＸ　３０　ｃｍ　）　Ｋ付した。

５ｓ１２５５８Ａの溶出区分を集め溶媒な留去すると純
粋な８８１２５３８Ａの無色油状物的２ｙが得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の生理活性物質８８１２５３８人の紫外
線吸収スペクトル（溶ａｌ：メタノール）である。 ４２図は本発明の生理活性＠質５ｓ１２５３８Ａの赤外
゛線吸収スペクトル（液膜法）である。 第６図は本発明の生ｆ！Ｉ活性物質ｓｓ１２５５８Ａの
”Ｈ−ＮＭＲスペクトル（浴媒：淑クロロホルム）であ
・る。 ｉｌ４図は不発明の微生物、ストレプトミセス・バクタ
ム８１２５３８の嗣微鏡写真である。 以上 出願人　ニスニス製薬株式会社 麺１０顆 一闇一一 第１頁の続き ［相］発　明　者　横井好− 相市相７−３−３コーポ金子２０ ３号 ０発　明　者　中島利章 千葉県印施郡酒々井町東酒々井 ４−４−７２

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）下記の埋イヒ学的性質Ｙ！ｊる生理活性物質５ｓ
   １２５５８Ａ。 ■　物質の色及び性状二無色の油状物質（力　分子量（
   ＳＳ１２５３８Ａのアセテートのマススペクトルより） ００ ■　薄層クロマトグラフィー 担体ニジリカｒルデレートＦ意ｓ４ （メルク社！Ｊり ■　呈色反応 ２．４−ジニトロフェニルヒーラジン試業で黄色を呈す
   る。アニスアルデヒド硫酸で礫紫色を呈する。塩化＄２
   鉄反応は隙性である。 ■　溶剤に対する溶解性 クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、エチルエーテル
   、エタノール、メタノール、ピリジン、ベンゼン、ジメ
   チルスルホキシドに可溶。水に難溶。 ■　紫外線吸収スペクトル ＭｅＯＨ１４ λ　　２５９　　Ｅ　　　８４５　　（第１図）ｍａｘ
   　　　　　　　１ｃｒｒＬ ■　赤外線吸収スペクトル（液膜法） 第２図 ■　”Ｈ−ＮＭＲスペクトル（６０ＭＨｚ　）重クロロ
   ホルム溶液中ＴＭＢ７’ｆ基準物質として測定した。第
   ６図 ■　１３０−　Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトル １クロロホルム溶液中ＴＭＳを基準物質として測定した
   。 δ（ｐｐｍ）１８１．０　、１６２．１　、１５６．８
   　、１３８．０　、１３６．５　。 １３５．９　、１３５．１　、１３４．０　、１２５．
   ０　、１２２．９　。 １１７．９，１１７．８．９９．５．８２．６，５５．
   １゜４２．８．　６６．８．２９．９．　１７．４．　
   １６．５゜１．５．０．　１３．０．　１０．６．　　
   　ソ、８．　　６．８［相］　分子式（Ｎ　Ｍ　Ｒ及び
   マススペクトルより）０２５Ｈ３６０４ （２）構造が次の式、 ｃａ３　　　ＣＨ３０Ｈ３ｃ）Ｉ、。 で表わされるものである特許請求の範囲第１項記載の生
   理活性物質８８１２５！ｉ８ム。 （３）　　ストレプトミセス属に属する生理活性物質８
   ８１２５３８Ａ生産薗を培養し、その培養物から下記の
   理化学的性質を有する生理活性物質５ｓ１２５３８Ａ。 ■　物質の色及び性状：無色の油状物質■　分子量（８
   ８１２５３８Ａのアセテートのマススペクトルより） ００ ■　薄層クロマトグラフィー 担体ニジリカｒルデレートＦ２δ４ （メルク社製） ■　呈色反応 ２．４−ジニトロフェニルヒ「ラジン試薬で黄色を呈す
   る。アニスアルデヒド硫酸で濃紫色を呈する。塩イヒ第
   ２鉄反応は陰性である。 ■　溶剤に対する溶解性 クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、エチルエーテル
   、エタノール、メタノール、ぎリジン、ベンゼ、ン、ジ
   メチルスルホキシＰに６［浴。水に離溶。 ■　紫外線吸収スペクトル ＭｅＯＨ１１ λ　　２５９　　ｊｃ　　　８４５　　（第１図）ｍａ
   ｘ　　　　　　　　　　　１ｃＩｎ（７）　　赤外線吸
   収スペクトル（液層法）第２図 ■　”Ｈ−Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトル（６０ＭＨｇ　）重ク
   ロロホルム溶液中ＴＭ８を基準物質として測定した。第
   ６図 ■　１３０−　Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトル 重クロロホルム溶液中ＴＭＳＹ基準物質として測定した
   。 δ（ｐｐｍ）１８１．０　、１６２．１　、１５６−８
   　、１３８．０　、１３６−５　。 １３５．９　、１３５．１　、１３４．０　、１２５．
   ０　、１２２．９　。 １１７．９，１１７．８．９９．５．８２．６．５５．
   １　。 ４２．８．３６．８．２９．９．　１７．４．　１６．
   ５゜１ｓ、０．　１３．０．　１０゜６．　９．８．　
   ６．８６０　分子式（ＮＭＲ及びマススペクトルより）
   ０２５Ｈ３６０４ を採取すること１に：％像とする生理活性物質５Ｓ１２
   ５３８Ａの製造法。 （４）　　ストレプトミセス属に属し、微工研菌寄第６
   ４６３号（ｙｚｕＭ、ｐ　−６４３３）として′＃此さ
   れた新規な微生物。