JPH10310555A

JPH10310555A - 多価不飽和脂肪酸エステルの分離精製方法

Info

Publication number: JPH10310555A
Application number: JP9137706A
Authority: JP
Inventors: Takaharu Yamamura; 隆治山村; Yasushi Shimomura; 泰志下村; Isao Sogo; 功十合; Satohiro Tanaka; 悟広田中; Toshiaki Yaguchi; 敏昭矢口
Original assignee: Y M SHII KK; Nagase and Co Ltd; Suntory Ltd
Current assignee: Y M SHII KK; Nagase and Co Ltd; Suntory Ltd
Priority date: 1997-05-12
Filing date: 1997-05-12
Publication date: 1998-11-24
Also published as: WO1998051656A1

Abstract

(57)【要約】【課題】ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、ドコサペン
タエン酸（ＤＰＡ）などの多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦ
Ａ）のエステル体を、高効率かつ低コストで、高純度ま
で精製し得る方法を提供すること。【解決手段】多価不飽和脂肪酸エステルを分離精製す
る方法であって、多価不飽和脂肪酸エステルの２種以上
を含有する脂質混合物を、高速液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）によって精製する工程を含む方法。ここ
で、高速液体クロマトグラフィーは、アルキルシランで
誘導化された多孔性粒状基材を充填剤として用いる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、多価不飽和脂肪酸
エステルの分離精製方法に関する。特に、本発明は、ド
コサヘキサエン酸（ＤＨＡ）およびドコサペンタエン酸
（ＤＰＡ）を含む、医薬品および機能性食品の素材とし
て有用な多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）のエステルを、
高純度にかつ効率的に分離精製する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）
は、特異な生理活性を有する化合物として注目を浴びて
いる。代表的なＰＵＦＡとしてα−リノレン酸（ＡＬ
Ａ）、γ−リノレン酸（ＧＬＡ）、ジホモ−γ−リノレ
ン酸（ＤＧＬＡ）、アラキドン酸（ＡＡ）、エイコサペ
ンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサペンタエン酸（ＤＰ
Ａ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）などがある。ＰＵ
ＦＡはプロスタグランジン類などの生理活性物質の前駆
体であることより研究が進み、様々な生理作用が報告さ
れている。魚油由来のＥＰＡエチルエステルは、約９２
％の純度の精製品が、閉塞性動脈硬化症を適応症とした
医薬品として１９９０年に市販された。

【０００３】一方、ＤＨＡは、その生理活性機能として
コレステロール低下作用、抗血液凝固作用、制癌作用、
さらには脳代謝系に関連して記憶学習能力の向上作用、
老人性痴呆症の予防作用、アルツハイマー疾病の治療作
用、稚魚の成長必須因子としての作用などが示されてい
る。そのため、健康食品やベビーミルク等の素材として
使用されるとともに、医薬品としての研究が進められて
いる。また、ＤＰＡは、生体間でＤＨＡの欠乏に対する
代償となることが報告され、何らかの生理活性機能があ
ると考えられている。従って、ＤＰＡも医薬品として利
用できる可能性がある。なお、ＤＰＡには不飽和結合の
位置によって（ｎ−３）系と（ｎ−６）系とがあるが、
本明細書中で単に「ＤＰＡ」という場合、（ｎ−６）系
のＤＰＡを指す。

【０００４】これらのＰＵＦＡは、一般に化学合成の困
難な化合物である。一方、天然において、これらはトリ
グリセリドやリン脂質中の脂肪酸残基として存在する。
従って従来から、天然の素材からの抽出、精製が行われ
てきた。例えば、ＥＰＡおよびＤＨＡは海産魚の魚油中
に含有されており、従来はイワシ油、マグロの眼窩油な
ど、比較的複雑な脂肪酸組成を有する魚油から取り出さ
れていた。

【０００５】今後、ＰＵＦＡを医薬品としての使用に供
するためには、少なくとも９５％以上の純度、望ましく
は９８％以上の純度が要求されるといわれる。遊離の脂
肪酸の状態では、そのような、試薬や医薬品として適切
なレベルの純度にまで精製することは困難である。その
ため、エステル体、特にエチルエステルとして精製する
ことが一般的に行われる。

【０００６】従来、遊離の脂肪酸またはそのエステル体
（以下、−Ｅで表す）の複数の種類を含む混合物から、
特定の脂肪酸を分離するための方法として、主として炭
素数の差を利用する蒸留法および超臨界流体抽出法、主
として二重結合数の差を利用する低温分別法、尿素添加
法、および溶剤分別法の他、イオン交換樹脂によるクロ
マトグラフィーなどが知られている。これらの方法の組
合せによって、９０〜９２％程度までの高純度化は達成
できるようになってきた。

【０００７】特に、ＤＨＡエステル（ＤＨＡ−Ｅ）につ
いては、工業的規模での高純度化を指向した方法とし
て、精密蒸留と分取液体クロマトグラフィーとを組み合
わせた方法（ＤＨＡ高度精製抽出技術開発事業研究報告
書(平成４〜６年度)、p.213、ＤＨＡ高度精製抽出技術
研究組合発行(平成７年１１月)）の他に、銀イオン交換
粘土鉱物を用いる吸着クロマトグラフィー（同報告書，
p.231；山口ら、油化学、第40巻、第10号、p.959(199
1)）、硝酸銀水溶液中での錯体形成を利用した液相抽出
法（同報告書，p.247；三澤ら、日本化学会第６１春期
年会予稿集、p.1245(1991)）などが開発されている。し
かしこれらの方法によっても、一回の精製工程によって
得られるＤＨＡ−Ｅの純度は、９５％程度までであっ
た。より高い純度、例えば医薬品としての使用に適切な
９８％以上の純度で、ＤＨＡ−Ｅや他のＰＵＦＡエステ
ルを得るためには、装置、試薬、原料素材などとして特
に高価なものを使用したり、複雑な精製操作を組み合わ
せることが要求された。

【０００８】このように従来の精製方法は、工業的な規
模において、合理的なコストで、再現性良く、高純度の
ＰＵＦＡエステルを得るためには、満足のいくものでは
なかった。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記問題点
の解決を意図するものである。その目的は、ＤＨＡ、Ｄ
ＰＡなどのＰＵＦＡのエステル体を、高効率かつ低コス
トで、高純度まで精製し得る方法を提供することにあ
る。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明の方法は、ＰＵＦ
Ａエステルを分離精製する方法であって、ＰＵＦＡエス
テルの２種以上を含有する脂質混合物を、高速液体クロ
マトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって精製する工程を含
む。ここで、高速液体クロマトグラフィーは、アルキル
シランで誘導化された多孔性粒状基材を充填剤として用
いる。

【００１１】上記多孔性粒状基材は、１０から１０００
μｍまでの範囲の粒子径、および６０から３０００オン
グストロームまでの範囲の細孔径を有し得る。また、上
記多孔性粒状基材は、４％から３０％までの範囲の炭素
含有率を有するオクタデシルシラン（ＯＤＳ）誘導化シ
リカゲルであり得る。

【００１２】上記高速液体クロマトグラフィーには、溶
離液としてメタノール、エタノール、またはそのいずれ
かを８０％以上含有する水溶液を用い得る。

【００１３】上記脂質混合物は、ＰＵＦＡを産生する微
生物の培養菌体抽出物をエステル化することによって得
られ得る。この微生物は、ＤＨＡおよび／またはＤＰＡ
を産生する微生物であり得る。

【００１４】上記高速液体クロマトグラフィーによっ
て、９５％以上の純度のＤＨＡエステルおよび／または
ＤＰＡエステルが得られ得る。

【００１５】

【発明の実施の形態】

（ＨＰＬＣによる精製）本発明の方法において、ＨＰＬ
Ｃのカラムに用いる充填剤は、アルキルシランで誘導化
された多孔性粒状基材である。本発明者らは、アルキル
シランで誘導化された充填剤が、適切な条件下、ＰＵＦ
Ａエステルの炭素数および不飽和結合数の違いを、従来
予測された程度を著しく越えるレベルの精度をもって識
別し得ることを発見し、これに基づいて本発明を完成し
た。

【００１６】多孔性粒状基材としては、クロマトグラフ
ィー用基材として適切な任意の基材を用い得る。好まし
い基材には、水和酸化金属または水和酸化メタロイドが
含まれる。その例としては、水和酸化アルミナ、水和酸
化チタニウム、水和酸化ジルコニウム、水和酸化ケイ
素、水和酸化スズなどが挙げられる。より具体的には、
シリカゲル、ヒドロキシアパタイト、アルミナ、シリカ
・アルミナ、チタニア、ケイソウ土、ケイ酸ガラス、ア
ルミノケイ酸塩、クレーカオリン、タルク、ゼオライト
などが例示できる。ガラスビーズ表面にシリカゲル微粒
子などをまぶした基材も、ここに含まれる。また、ポリ
スチレン、ポリメチルメタクリレート、およびそれらの
誘導体を含むポリマー粒子も、好ましい基材として用い
得る。シリカゲルが特に好ましい。この基材は、粒子径
および細孔径が適切な範囲にあるものが選択される。こ
こで、粒子径および細孔径は、シランで誘導化される前
の状態で測定される値をいう。この測定値は、例えば、
基材を走査型電子顕微鏡などで観察したときの、粒子の
平均値である。

【００１７】粒子径の上限は、代表的には１０００μ
ｍ、好ましくは３００μｍ、より好ましくは１００μｍ
である。粒子径の下限は、代表的には１０μｍ、好まし
くは２０μｍ、より好ましくは４０μｍである。粒子径
が大きすぎる場合、カラムの分離能が低下する傾向があ
るため、ＰＵＦＡエステルを高純度化することが困難に
なる。粒子径が小さすぎる場合、ＨＰＬＣにおいて溶離
液を輸送する圧力が高くなりすぎるため、ＰＵＦＡエス
テルを大量に分取することが困難になり、実用上好まし
くない。なお、適切な粒子径は、ＨＰＬＣに用いるカラ
ムのサイズ（内径×長さ）にも依存して変化することに
留意すべきである。

【００１８】細孔径の上限は、代表的には３０００オン
グストローム、好ましくは３００オングストローム、よ
り好ましくは１５０オングストロームである。細孔径の
下限は、代表的には６０オングストローム、好ましくは
８０オングストロームである。細孔径が大きすぎるか、
小さすぎる場合、溶質であるＰＵＦＡエステルの拡散、
保持挙動を最適化しにくくなる。なお上記の細孔径を有
する基材は、一般的に約１〜１０００ｍ²／ｇの範囲内
の比表面積を有する。

【００１９】多孔性粒状基材は、アルキルシランで誘導
化される。アルキルシランの鎖長の上限は、代表的には
炭素数４０、好ましくは炭素数３０、より好ましくは炭
素数２０である。鎖長の下限は、代表的には炭素数１、
好ましくは炭素数８である。炭素数が多すぎると、カラ
ムの分離能が低下する傾向がある。入手の容易さの点か
ら、炭素数１８のオクタデシル基を有するオクタデシル
シラン（ＯＤＳ）が特に好ましい。

【００２０】多孔性粒状基材のアルキルシランによる誘
導化は、当該シランに由来する炭素含有率が適切な範囲
になるように行われる。この炭素含有率は、得られた充
填剤の疎水性を示す目安となる値であり、一般に元素分
析法によって測定される。ポリマーを基材として用いる
場合には、誘導化反応の仕込み量に基づいて、化学量論
的に算出することができる。炭素含有率の上限は、代表
的には３０％、好ましくは２５％、より好ましくは２２
％である。炭素含有率の下限は、代表的には４％、好ま
しくは１０％、より好ましくは１２％である。炭素含有
率が高すぎるか、低くすぎると、カラムの分離能が低下
する傾向がある。

【００２１】上記の誘導化のための反応は、所望のアル
キル基（例えば、トリアコンチル基、エイコシル基、オ
クタデシル基、オクチル基、ｎ−ブチル基など）を有す
る適切なシラン化合物（例えば、クロロシラン化合物、
アルコキシシラン化合物など）を用いて、公知の方法に
よって行うことができる。また、粒子径、細孔径、およ
び炭素含有率が上述した適切な範囲にある、オクタデシ
ルシラン（ＯＤＳ）および他のアルキルシランで誘導化
された種々のシリカゲルが、例えば、(株)ワイエムシィ
社より「ＹＭＣ＊ＧＥＬ」の商品名で市販されている。

【００２２】ＨＰＬＣの溶離液としては、逆相クロマト
グラフィーに適切な任意の極性溶媒を用い得る。例え
ば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセ
トニトリル、塩化メチレン、クロロホルム、テトロヒド
ロフラン、これらの組み合わせ、および、これらと水と
の組み合わせが挙げられる。メタノール、エタノール、
またはそのいずれかを８０％以上（好ましくは９０％以
上、より好ましくは９５％以上）含有する水溶液は、好
ましい溶離液の例である。溶媒の種類および混合比は、
高純度化されるべきＰＵＦＡエステルの種類に応じて、
適宜選択される。溶離液の最適化は、当業者には容易で
ある。

【００２３】例えば、メタノール、またはメタノールを
８０％以上（好ましくは９０％以上、より好ましくは９
５％以上）含有する水溶液は、ＤＨＡ−ＥとＤＰＡ−Ｅ
とを、同時に高純度で分取する場合に、好ましい溶離液
である。一方、エタノール、またはエタノールの８０％
以上（好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以
上）の水溶液は、ＤＨＡ−Ｅのみを高純度に分取する場
合に、好ましい溶離液である。

【００２４】本発明の方法において、充填剤を充填した
カラムへの、脂質混合物の一回のチャージ（負荷）量
は、脂質混合物中の、高純度化されるべきＰＵＦＡエス
テルの含有量、ならびに、ＨＰＬＣ上で当該エステルと
近接した保持時間を示す不要な化合物の含有量などに依
存して決定される。チャージ量は特に限定されるもので
はないが、通常、カラム容積１リットル当たり、約１ｇ
から約１０ｇ程度まで可能である。従って、本発明によ
れば、工業的規模での実施に適用する場合でも十分に実
用的な効率で、ＰＵＦＡエステルを分離精製することが
できる。

【００２５】溶離液の流速など、ＨＰＬＣの他の操作条
件は、当業者により適宜設定される。ＨＰＬＣの装置と
しては、市販の適切な装置を利用し得る。工業的規模で
の実施は、サンプル溶解タンク、サンプル供給タンク、
溶出タンク、溶離液回収システムなどを含む適切なプラ
ントを設置して行うことができる。

【００２６】カラムからの溶出物の検出には、紫外（Ｕ
Ｖ）検出器、屈折率（ＲＩ）検出器など、任意の適切な
手段を利用し得る。

【００２７】（ＰＵＦＡエステルを含む脂質混合物の調
製）本発明の方法によって、エステル体として分離精製
されるＰＵＦＡの範囲は、特に限定されない。医薬品ま
たは機能性食品としての応用の観点から、天然由来のＰ
ＵＦＡが好ましい。特に、炭素数１８以上で、不飽和結
合３カ所以上を有するＰＵＦＡが好ましい。ＤＨＡ、
ＤＰＡ、ＥＰＡ、ＡＡ、およびＧＬＡは、好ましいＰＵ
ＦＡの例である。

【００２８】ＰＵＦＡの供給源も、目的とする脂肪酸を
含有するものであれば、特に限定されない。魚油、肝油
などの動物油、果実油などの植物油、菌類、藻類などに
由来する微生物油などから、目的とする脂肪酸に応じて
選択される。例えば、上述のように、ＤＨＡおよびＥＰ
Ａは魚油に多く含まれることが知られている。また、Ｄ
ＰＡはサフラワー油に、ＧＬＡは月見草エキスに多く含
まれることがそれぞれ知られている。適切な供給源の選
択は、当業者には容易である。

【００２９】ある種の微生物、特に海洋性の菌類または
藻類を培養することによって、ＤＨＡ、ＥＰＡ、ＡＡな
どの１種以上を含む油脂が得られることが知られている
（例えば、特開平７−８７９８８および特開平７−８２
６８、特開平７−７５５５６、および特開平１−３０４
８９２号を参照）。これらの微生物油脂は、魚油などと
比較して脂肪酸組成が単純である場合が多いため、本発
明の分離精製方法をより効率的に適用し得る。従って、
ＰＵＦＡを産生する微生物の培養菌体は、好ましい供給
源の例である。

【００３０】Thraustochytrium属およびSchizochytrium
属などの菌は、その菌体中にＤＨＡおよびＤＰＡを含む
脂質を蓄積することが報告されている（J. Am. Oil Che
m. Soc., Vol.73, No.11, p.1421 (1996））。本発明に
おいて、ＤＨＡおよび／またはＤＰＡを高純度化する場
合、上記微生物および類似する種の微生物の培養菌体を
有利に使用し得る。もちろん、培養菌体は例示したもの
に限らず、ＤＨＡまたはＤＰＡを生産する菌種由来であ
れば何れでも良い。

【００３１】培養する微生物の種類に応じて、培地組
成、温度、ｐＨなどの培養条件が選択される。適切な培
養条件の選択は、当業者には容易である。例えば、Thra
ustochytrium属およびSchizochytrium属は、５０％の人
工海水を含み、グルコース、コーンステープリカーを基
本とした培地を用いた、室温付近の温度、弱酸性のｐＨ
の下、好気的条件での液体培養により、ＤＨＡおよびＤ
ＰＡを含む脂質成分を蓄積する。

【００３２】微生物の培養菌体を、必要に応じて乾燥
し、常法に従い、菌体の粉砕などの操作をした後、脂質
を抽出する。動植物油などの他の供給源を利用する場合
も、供給源の種類に応じた前処理の後、脂質を抽出する
ことができる。

【００３３】このようにして抽出された脂質をエステル
化することによって、ＰＵＦＡエステルを含有する脂質
混合物が得られる。ＰＵＦＡエステルのエステル基は、
代表的にはアルキル基である。もっとも、ビニルなどの
アルケニル基、フェニルなどのアリール基、およびベン
ジルなどのアリールアルキル基などでもよい。アルキル
基としては、炭素数１から６までのアルキル基が好まし
く、炭素数１から４までのアルキル基がより好ましい。
ヒトに直接投与する医薬品または機能性食品としては、
エチルエステルが特に好ましい。

【００３４】エステル化の適切な反応条件は、当業者に
は公知である。例えば、脂質をヘキサンなどの有機溶媒
に溶解した後、アルカリ（例えば１Ｎの水酸化カリウム
を含むエタノール）を添加し、１０〜２５℃程度の温度
でエステル化を行うことができる。有機相を分液した
後、常法に従って濃縮すれば、エステル体を含む脂質混
合物が得られる。

【００３５】この脂質混合物を、上述のように、ＨＰＬ
Ｃに供する。本発明の方法によれば、一回のＨＰＬＣの
操作によって、目的とするＰＵＦＡエステルが高純度で
得られる。従って、上記のエステル化反応の後、予備的
な精製操作を行う必要はなく、直ちにＨＰＬＣを行うこ
とができる。

【００３６】本明細書中でＰＵＦＡエステルの純度と
は、ＨＰＬＣまたはＧＣの少なくとも一方によって測定
される純度をいうものとする。本発明によれば、代表的
には９５％以上、好ましくは９８％以上、より好ましく
は９９％以上の純度が達成できる。従って、得られたＰ
ＵＦＡエステルは、医薬品および機能性食品などの製造
に直ちに使用できる。

【００３７】

【実施例】以下の実施例により本発明をさらに詳しく説
明する。本発明はこれらの実施例に限定されるものでは
ない。

【００３８】なお、以下の実施例において、ＤＨＡ−Ｅ
およびＤＰＡ−Ｅの純度は、高速液体クロマトグラフィ
ー（ＨＰＬＣ）による場合、分析用カラムとして(株)ワ
イエムシィ社製ＹＭＣ−ＰａｃｋＡＭ−３０３を用
い、溶離液としてアセトニトリル／水（９７．５／２．
５；容積比）を流速１ｍｌ／分で流通させ、ＵＶ（２２
０ｎｍ）で検出することによって測定した。一方、ガス
クロマトグラフィー（ＧＣ）による場合、分析用カラム
として、(株)ＧＬサンエンス社製のキャピラリーカラ
ム、ＴＣ−７０（直径０．２５ｍｍ×長さ３０ｍ）を用
い、キャリアーガスとして窒素ガスを流速：０．８ｍｌ
／分、１００ｋＰａ(カラム頭部圧力)で流通させ、カラ
ム温度：１７０〜２２０℃(４℃／分)の昇温モードにて
ＦＩＤで検出することによって測定した。

【００３９】（実施例１）Schizochytrium sp.の培養菌
体を乾燥し、クロロホルムとメタノールとの混合溶媒中
でガラスビーズを用いて菌体を粉砕し、濾過した後、ヘ
キサンで抽出することにより、脂質を得た。得られた脂
質を、ヘキサン中で、水酸化カリウムを含むエタノール
の添加によってエステル化した。常法に従って後処理す
ることにより、脂肪酸のエステル体を含む脂質混合物を
得た。この混合物は、ＧＣによる分析から、ＤＨＡ−
Ｅを約４３．７％、ＤＰＡ−Ｅを約１１．１％含有して
いた。

【００４０】粒子径５０μｍ、細孔径１２０オングスト
ローム、炭素含有率１７％の、オクタデシルシラン（Ｏ
ＤＳ）充填剤（ＹＭＣ＊ＧＥＬＯＤＳ−ＡＭ−１２０
−Ｓ５０）を用いた。この充填剤を充填した、内径４０
０ｍｍ、長さ２０００ｍｍのカラムを用いてＨＰＬＣを
行い、ＤＨＡ−ＥおよびＤＰＡ−Ｅを分取した。用いた
分取用ＨＰＬＣ装置は、(株)ワイエムシィ社製である。
溶離液としてメタノールを使用して、４．４リットル／
分の流速で通液させた。

【００４１】上記の脂質混合物１．４２ｋｇを、メタノ
ールの１０％溶液として、カラムにチャージした。予め
検討した結果に基づく各成分の保持時間を基に、各成分
のフラクションを分取した。各フラクションをエバポレ
ートして溶剤を留去し、ＤＨＡ−ＥおよびＤＰＡ−Ｅを
得た。得られたＤＨＡ−Ｅは０．３６ｋｇ、ＤＰＡ−Ｅ
は０．０７ｋｇであった。

【００４２】これらの純度を、ＨＰＬＣにより分析した
ところ、ＤＨＡ−Ｅは９８．９％、ＤＰＡ−Ｅは９７．
７％であった。

【００４３】（実施例２）充填剤（ＹＭＣ＊ＧＥＬＯ
ＤＳ−ＡＭ−１２０−Ｓ５０）を充填した内径４００ｍ
ｍ、長さ２０００ｍｍのカラムを用いてＨＰＬＣを行
い、ＤＨＡ−ＥおよびＤＰＡ−Ｅを分取した。用いた分
取用ＨＰＬＣ装置は(株)ワイエムシィ社製である。溶離
液としてメタノール／水（９８／２；容積比）の混合溶
液を使用して、４．４リットル／分の流速で通液させ
た。

【００４４】実施例１と同じ脂質混合物１．３３ｋｇ
を、メタノールの１０％溶液として、カラムにチャージ
した。各成分のフラクションを分取し、各フラクション
をエバポレートして溶剤を留去し、ＤＨＡ−ＥおよびＤ
ＰＡ−Ｅを得た。得られたＤＨＡ−Ｅは０．３０ｋｇ、
ＤＰＡ−Ｅは０．０７ｋｇであった。これらの純度をＨ
ＰＬＣにより分析したところ、ＤＨＡ−Ｅは９９．０
％、ＤＰＡ−Ｅは９９．７％であった。

【００４５】（実施例３）粒子径約２０μｍ、細孔径１
２０オングストローム、炭素含有率１７％の、ＯＤＳ充
填剤（ＹＭＣ＊ＧＥＬＯＤＳ−Ａ−１２０−Ｓ１５／
３０）を充填した内径６ｍｍ、長さ２０００ｍｍのカラ
ムを用いてＨＰＬＣを行い、ＤＨＡ−ＥおよびＤＰＡ−
Ｅを分取した。用いた分取用ＨＰＬＣ装置は(株)島津製
作所製ＬＣ−８Ａである。溶離液としてメタノール／水
（９０／１０；容積比）を使用して、１ｍｌ／分の流速
で通液させた。

【００４６】実施例１と同じ脂質混合物４８０ｍｇを、
メタノールの１０％溶液として、カラムにチャージし
た。各成分のフラクションを分取し、各フラクションを
エバポレートして溶剤を留去し、ＤＨＡ−ＥおよびＤＰ
Ａ−Ｅを得た。得られたＤＨＡ−Ｅは１１４．２ｍｇ、
ＤＰＡ−Ｅは１１．１ｍｇであった。これらの純度をＨ
ＰＬＣにより分析したところ、ＤＨＡ−Ｅは９９．３
％、ＤＰＡ−Ｅは９９．７％であった。

【００４７】（実施例４）粒子径５０μｍ、細孔径１２
０オングストローム、炭素含有率約１３％の、ＯＤＳ充
填剤（ＹＭＣ＊ＧＥＬＯＤＳ−ＡＱ−１２０−Ｓ５
０）を充填した内径６ｍｍ、長さ２０００ｍｍのカラム
を用いてＨＰＬＣを行い、ＤＨＡ−ＥおよびＤＰＡ−Ｅ
を分取した。用いた分取用ＨＰＬＣ装置は(株)島津製作
所製ＬＣ−８Ａである。溶離液としてエタノール／水
（９５／５；容積比）を使用して、１ｍｌ／分の流速で
通液させた。

【００４８】実施例１と同じ脂質混合物８０ｍｇを、メ
タノールの１０％溶液として、カラムにチャージした。
各成分のフラクションを分取し、各フラクションをエバ
ポレートして溶剤を留去し、ＤＨＡ−ＥおよびＤＰＡ−
Ｅを得た。得られたＤＨＡ−Ｅは２８ｍｇ、ＤＰＡ−Ｅ
は５ｍｇであった。これらの純度をＨＰＬＣにより分析
したところ、ＤＨＡ−Ｅは９６．５％、ＤＰＡ−Ｅは８
８．９％であった。

【００４９】

【発明の効果】本発明の方法によれば、ＤＨＡ、ＤＰＡ
などのＰＵＦＡのエステル体を、高効率、低コストで、
高純度まで精製することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩ //(Ｃ１２Ｐ 7/64 Ｃ１２Ｒ 1:645） (71)出願人 000001904 サントリー株式会社大阪府大阪市北区堂島浜２丁目１番40号 (72)発明者山村隆治京都府久世郡久御山町田井新荒見69−１株式会社ワイエムシィ分離センター内 (72)発明者下村泰志石川県小松市国府台５丁目28番株式会社ワイエムシィ技術開発センター内 (72)発明者十合功兵庫県神戸市西区美賀多台７丁目２−９ (72)発明者田中悟広京都府福知山市長田野町１丁目52番地ナガセ生化学工業株式会社内 (72)発明者矢口敏昭大阪府三島郡島本町若山台１丁目１番１号サントリー株式会社研究センター内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】多価不飽和脂肪酸エステルを分離精製す
る方法であって、多価不飽和脂肪酸エステルの２種以上を含有する脂質混
合物を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によ
って精製する工程を包含し、ここで、該高速液体クロマ
トグラフィーは、アルキルシランで誘導化された多孔性
粒状基材を充填剤として用いる、方法。
【請求項２】前記多孔性粒状基材が、１０から１００
０μｍまでの範囲の粒子径、および６０から３０００オ
ングストロームまでの範囲の細孔径を有する、請求項１
に記載の方法。
【請求項３】前記多孔性粒状基材が、４％から３０％
までの範囲の炭素含有率を有するオクタデシルシラン
（ＯＤＳ）誘導化シリカゲルである、請求項１または２
に記載の方法。
【請求項４】前記高速液体クロマトグラフィーが、溶
離液としてメタノール、エタノール、またはそのいずれ
かを８０％以上含有する水溶液を用いる、請求項１から
３までのいずれかに記載の方法。
【請求項５】前記脂質混合物が、多価不飽和脂肪酸を
産生する微生物の培養菌体抽出物をエステル化すること
によって得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】前記微生物が、ドコサヘキサエン酸（Ｄ
ＨＡ）および／またはドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）を
産生する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】前記高速液体クロマトグラフィーによっ
て、９５％以上の純度のドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）
エステルおよび／またはドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）
エステルが得られる、請求項１から６までのいずれかに
記載の方法。
【請求項８】前記多価不飽和脂肪酸エステルがエチル
エステルである、請求項１から７までのいずれかに記載
の方法。