JPH09509164A

JPH09509164A - 免疫グロブリンａを用いた炎症を予防及び治療するための組成物並びに方法

Info

Publication number: JPH09509164A
Application number: JP7521588A
Authority: JP
Inventors: アイブル，マルタ; ボルフ，ヘルマン; マンハルター，ヨーゼフ・ベー; ライブル，ハインツ; リンナウ，イエンドラ
Original assignee: イムノ・アクテイエンゲゼルシヤフト
Priority date: 1994-02-18
Filing date: 1995-02-16
Publication date: 1997-09-16
Also published as: EP0744957A1; US5833984A; ES2135703T3; DE69511245D1; ITTO950112A1; GR3031691T3; DK0744957T3; ITTO950112A0; AU1809495A; WO1995022350A1; DE69511245T2; ATA29495A; DE19505287A1; CA2183566A1; IT1281188B1; EP0744957B1; AT402790B; ATE182793T1

Abstract

(57)【要約】炎症は、ＩｇＡを含む製剤を投与することにより完全に治療又は予防し得る。該製剤は、免疫調節をも行い得る。該製剤が、多量体ＩｇＡからなり、種々の形態のＩｇＧを実質的に含まないのが好ましい。他の化合物、例えば、抗生物質、消炎剤及び制酸薬を投与してもよい。免疫グロブリンＡを炎症予防用ワクチンに用いてもよい。さらに、抗炎症性を評価するための改良型アッセイも提供する。

Description

【発明の詳細な説明】免疫グロブリンＡを用いた炎症を予防及び治療するための組成物並びに方法発明の背景本発明は、免疫グロブリンＡ（「ＩｇＡ」）を含む薬剤を投与することによる急性及び慢性炎症性反応の予防又は治療法に関する。本発明はさらに、予防接種コースにおいて、炎症性反応を治療、回避又は改善するために多量体ＩｇＡを含む薬剤を使用することにも関する。さらに本発明は、ある物質の抗炎症性及び免疫調節活性を評価するためのｉｎｖｉｔｒｏテストに関する。有害な炎症性現象は身体全体に発生し得る。例えば、上気道の炎症及びアフタ性口内炎のような粘膜表面でも発症し得る。炎症性現象は、気道並びに胃腸管全体でも発生し得る。ある種の粘膜炎症性現象は感染性因子によって直接媒介されるのではなく、むしろ微生物感染に応答した免疫系の過剰反応の結果発生する。この疾患の例としては、急性閉塞性気管支炎及び喘息により悪化した気道感染症がある。有害な炎症は、粘膜表面以外の部位にも発生し得る。そのような非粘膜部位での疾患には、リウマチ性関節炎（全身性若年性リウマチ性関節炎及び乾せん性関節炎）、ライター症候群、強直性脊椎炎、関節炎を伴うクローン病及びウィップル病、並びに全身性エリテマトーデスが含まれる。有害な炎症は一般に、免疫系において制御不能な反応が生じた結果である。特定の抗原が炎症プロセスにおいてある役割を果たし、この役割によって損傷が起こる。例えば、全身性グラム陰性感染症及び内毒素血症の毒性作用の殆どは、免疫系の細胞、特にマクロファージとの相互作用によって媒介される。単球／マクロファージ系の細胞は、腫瘍壊死因子−α（「ＴＮＦ−α」）及びインターロイキン−６（「ＩＬ−６」）のような炎症性サイトカインの主要源である。炎症性サイトカインは、種々の生物学的刺激、例えば、グラム陰性菌由来のリポ多糖体（「ＬＰＳ」）に応答して産生される。ＴＮＦ−α及びＩＬ−６は、炎症及び免疫応答の間宿主の有効な防御に必要な多重エフェクター機能及び細胞相互作用において中心的な役割を果たす。しかし、炎症性サイトカインが無制御に産生されると、宿主が損傷を起こす。例えば、ＬＰＳ誘発により無制御に放出されたＴＮＦ−αは、グラム陰性内毒素性ショックを含むＬＰＳ誘発毒性の中心的媒介因子となることが示された。高用量のＴＮＦ−αをラット又はマウスに注射すると、敗血症性ショック症候を誘発し、致死率が高まる。さらに、高血清レベルのＴＮＦ−αは髄膜炎球菌菌血症又は敗血症性ショックによる患者の致死率と相関関係を有する。高レベルのＴＮＦ−αは、壊死性全腸炎を起こした新生児にも見られ、これは、ＴＮＦ−α が該疾患の病因に係わりがあり得ることを示唆している。確かに、内毒素チャレンジ及びＴＮＦ−αの投与により、新生児壊死性全腸炎の実験モデルでは腸炎が誘発された。細菌及びウイルス性髄膜炎並びにＨＩＶ感染症を含む種々の臨床症状においてＩＬ−６レベルの増大が認められた。内毒素がＩＬ−６合成を誘発することは公知であり、熱損傷のような内毒素血症に係わる症状ではＩＬ−６の血清レベルが増大する。細菌毒素の有害な作用は、しばしば死を招く炎症を引き起こすこれらの化合物の肥大した自己増幅放出に係わりがある。グラム陰性菌又は内毒素による致死性は、特定の抗ＴＮＦ抗体を投与することにより防止された。免疫系の種々の成分が炎症性現象に係わっている。免疫系の主成分の一つは免疫グロブリンである。免疫グロブリンを含む薬剤は細菌性及びウイルス性感染症の予防及び治療に既に用いられている。例えば、米国特許第４，３３５，０９９号において、ＩｇＡ及び免疫グロブリンＧ（「ＩｇＧ」）を含む経口製剤が腸管感染症の治療に用いられた。さらに、総免疫グロブリン含量に対して７３％のＩｇＡと２６％のＩｇＧを含む製剤を未熟児に予防的に投与すると、壊死性全腸炎の発生率を低減させ得る。Ｅｉｂｌら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍ．１０（６）：７２Ｓ−７９Ｓ（１９９０）参照。この作用は、多数の潜在的病原体及びそれらの毒素と高力価のその抗体との抗原抗体複合体の形成の結果と考えられる。そのような病原体には、百日咳、破傷風及びジフテリアを引き起こす細菌類並びにポリオウイルス、コクサッキィーウイルス、ロタウイルス及びエコーウイルスのようなウイルス類が含まれる。ＩｇＡ、ＩｇＧ及びトランスフェリンは、細菌の増殖に対して相乗的に作用することが示された（ＥＰ０５０６６５１号参照）。活性成分の割合は、ＩｇＡ１重量部当たり、ＩｇＧが０．４０〜０．８０重量部、トランスフェリンが０．１５〜０．４５重量部である。ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＭは他の薬理上活性な化合物、例えば抗生物質と相乗的に作用することが示された。これらの免疫グロブリンは、感染性微生物に結合し、それによって凝集反応又は食作用の誘発が生起されると推定される。ＥＰ０１６８８３０号参照。従って、免疫グロブリンは、特定の抗体が特定の抗原を認識・結合して該抗原を中和するので有用であり得ることは周知である。しかし、特定の免疫複合体が特定の炎症性プロセスにおいて役割を果たすと考えられていた。例えば、炎症性腸疾患及び強直性脊椎炎に罹患している患者にＩｇＡ免疫複合体が見いだされたという報告があった。これらの疾患に罹患している患者は、高濃度の血清ＩｇＡ／循環性ＩｇＡ免疫複合体を有していた。Ｐｅｅｔｅｒｓら、ＡｎｎＲｈｅｕｍａｔ．Ｄｉｓ．４９：６３８−６４０（１９９０）参照。特定のＩｇＧ抗体を含む製剤が、細菌毒素（スーパー抗原）により誘発されたＴ細胞活性化を抑制することにより、ぶどう球菌性感染に起因する全身性疾患を防護することが知見された。Ｔａｋｅｉら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：６０２−６０７（１９９３）参照。ＩｇＧ製剤のこの防護作用は、抗体を中和すると弱まり得る。これらの抗体の作用は、細菌性スーパー抗原によるＴ細胞の活性化を抑制することにより発生すると考えられ、さもなければ、全身性炎症性反応が伝播・増強され得る。従って、抗スーパー抗原仮説によれば、抗体欠乏障害以外の種々の免疫学的疾患に対して特定のＩｇＧ抗体を使用することは実現可能であり得る。Ｒｉｃｈ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：３７８（１９９３）参照。他の主要免疫グロブリンであるＩｇＡも免疫系において重要な役割を果たす。例えば、分泌性ＩｇＡ(「ＳＩｇＡ」)は、気道、胃腸管及び尿路の粘膜表面を介して侵入する病原性微生物による感染からの宿主の保護に主要な役割を果たす。ＩｇＡ抗体は、毒素及びウイルス粒子を中和し、細菌性病原体の付着を阻害し、病原性微生物による粘膜表面でのコロニー形成及び侵入を防止することにより、粘膜表面からの病原性細菌、ウイルス又は寄生微生物及び種々の摂取又は吸入抗原の排除に関与する。実質的にＩｇＧを含まないＩｇＡを含む製剤の抗感染作用は、特公昭５６−５３６２２号及び同５７−５９８１５号に開示されている。これらの製剤は、９２％のＩｇＡと６％のＩｇＧを含むものであった。該製剤は、マウスにおいて、緑膿菌(Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ)に起因する致死率を減少させた。該製剤は、非重合ＩｇＡを含んでおり、ロタウイルス、大腸菌(Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ)及びチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉ)に対する中相作用を有していることが示された。種々の製剤をテストしてみると、一般にＩｇＧの総含量が低くなるに従って、抗感染作用が強くなることが示された。ＩｇＡを得る方法も公知である。例えば、イオン交換クロマトグラフィーによる１０％を超えるＩｇＡを含む免疫グロブリン製剤の製造法がＤＥ３９２７１１１Ｃ２号に開示されている。ＩｇＭを排除する溶離条件を選択すると、３０〜６０％のＩｇＡと７０〜４０％のＩｇＧを含む生成物を得ることができる。この製剤の抗補体活性は比較的低い。血清からＩｇＡを得るためのかつての手順は、免疫グロブリンの重合を阻止して多量体ＩｇＡの形成を回避することに集中していた。一般にＩｇＡの重合は、実際にはダイマーであるＳＩｇＡを分離する際にも回避される。かつてはＳＩｇＡのモノマー分画が最も価値あるものと考えられていた。ＳＩｇＡ製剤の製造法はＥＰ０４７９５９７Ａ２号に記載されている。約８０％という非重合ＩｇＡ収率を得るために安定剤が用いられた。次いで、ポリエチレングリコールを用い、分別沈殿により免疫グロブリンポリマーを分離する。しかし、従来技術における多量体ＩｇＡの回避は、ＩｇＡの臨床使用に限定されていた。この限定使用は、ウイルスの不活化と重合の回避とを拮抗させようとした結果である。例えば、ＩｇＡ製剤は一般に約６０℃に加熱して汚染ウイルスを不活化した。この加熱によっても、免疫グロブリンの変性及びその後の重合により多量体ＩｇＡが形成される。ウイルス不活化の際の重合を回避するために、免疫グロブリン含有溶液に安定剤が加えられた。しかし、安定剤は、汚染ウイルスをも安定化し、それによって汚染ウイルスが不活化から保護される。発明の要旨本発明の目的は、被験者、例えばヒト患者における急性及び慢性炎症性反応の治療及び予防法を提供することである。本発明の別の目的は、被験者にＩｇＡを投与することによる急性及び慢性炎症性反応の治療及び予防法を提供することである。本発明のさらに別の目的は、被験者に多量体（マルチマー）形態のＩｇＡを投与することによる急性及び慢性炎症性反応の治療及び予防法を提供することである。本発明のさらに別の目的は、炎症性反応の予防及び治療に適した種々の形態のＩｇＡを含む薬剤を提供することである。ＩｇＡを投与して炎症を最小限に抑えることによる改良型予防接種を提供することが本発明のさらに別の目的である。本発明のさらに別の目的は、抗炎症性化合物のスクリーニング用アッセイを提供することである。本発明のさらに別の目的は、特定のサイトカインの放出のような免疫応答を調節する製剤を提供することである。上記及び他の目的を達成するために、ＩｇＡを含む製剤を予防又は治療を要する患者に投与する段階を含む炎症の予防又は治療法が提供される。該製剤が多量体ＩｇＡからなり、実質的にＩｇＧを含まないのが好ましい。さらに該製剤はウイルスのような生存可能な感染性因子を含まないのが好ましい。汚染ウイルスを熱処理して不活化するのが好ましい。他の化合物、例えば、抗生物質、消炎剤及び制酸薬を患者に投与してもよい。本発明により、多量体ＩｇＡからなる薬剤も提供される。本発明により、さらにＩｇＡを含む製剤が提供される。該製剤が多量体ＩｇＡからなり、実質的にＩｇＧを含まないのが好ましい。該製剤は、抗生物質、消炎剤及び制酸薬のような他の化合物を含んでいてもよい。１種以上のこれらの化合物が抗炎症剤キットの一部を構成してもよい。抗炎症剤キットは、炎症の予防又は治療用の該製剤の使用説明書を含んでいなければならない。使用説明書には、用量及び投与経路も記載されている。本発明により、テスト物質の抗炎症活性を評価する方法が提供され、該方法は、不活化細菌(Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ)由来の抗原のような炎症性刺激及びテスト物質の存在下に、無血清培地中でサイトカイン産生細胞をインキュベートする段階及びインキュベートした細胞のサイトカイン産生能を評価する段階を含む。細胞が単球であり、評価されるサイトカインがＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＩＬ−１又はＩＬ−６からなるのが好ましい。その結果を、炎症性刺激とは接するがテスト物質には接しない単球のような対照のサイトカイン産生能と比較する。本発明により、ＩｇＡ及び抗原を投与することを含む予防接種法が提供される。投与は同時又は順次であってよい。ＩｇＡが多量体ＩｇＡからなり、製剤が実質的にＩｇＧを含まないのが好ましい。アジュバントを投与してもよい。１種以上のこれら化合物が予防接種キットの一部を構成してもよい。予防接種キットは、予防接種の前、間及び後の炎症の予防又は治療用製剤の使用説明書を含んでいなければならない。全ての成分又は製剤は、潜在的に汚染性の病原性微生物、例えば血液媒介ウイルスを排除又は不活化するように処理する必要がある。本発明の他の目的、特徴及び利点は、以下の説明、表及び図面から明らかになるであろう。図面の簡単な説明図１は、ヒト血清ＩｇＡが、インフルエンザ菌(ＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａＢ型)によって活性化されたヒト単球におけるＴＮＦ−α及びＩＬ−６の放出をダウンレギュレートすることをグラフで示している。図２は、ヒト血清ＩｇＡが、ヒト単球におけるＨｉｂ誘発ＴＮＦ−α及びＩＬ −６の放出をダウンレギュレートするのに対し、Ｈｉｂ刺激後のＧＭ−ＣＳＦ産生は不変のままであることをグラフで示している。図３は、精製ＬＰＳで刺激した単球におけるＴＮＦ−α及びＩＬ−６の放出に対するヒト血清ＩｇＡの効果をグラフで示している。図４は、サイトカインの放出に対する多量体ＩｇＡ（熱凝集）及び非重合ＩｇＡの効果をグラフで示している。図５は、ヒト血清ＩｇＡがヒト単球におけるＴＮＦ−α及びＩＬ−６の放出をダウンレギュレートするのに対し、ヒト血清ＩｇＧは効果を示さないことをグラフで示している。図６は、ＩｇＡ及びＩｇＧ抗体とインフルエンザ菌(ＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａＢ型)との結合をグラフで示している。図７は、Ｈｉｂで刺激した単球におけるサイトカインの誘発及び放出に対するヒト血清ＩｇＡの効果をグラフで示している。発明の詳細な説明有害な炎症の結果を考えると、急性及び慢性炎症に伴う有害な局所的及び全身的続発症をダウンレギュレートする機構が必要である。本発明は、かつては知られていなかったＩｇＡの特性を有利に用いて有害な炎症性反応を予防又は治療する。この特性は、特定の外来抗原の抗体中和という周知モデルとは異なる。この特性の存在及び抗炎症性因子としてのＩｇＡの有用性は、Ｐｅｅｔｅｒｓら，前出及び他の知見を考えて見れば驚異的である。従って、本発明は、有効量のＩｇＡを用い、急性及び慢性炎症性反応、例えば、全身的又は局所的炎症性反応を予防又は治療するための組成物及び方法に関する。免疫グロブリンＡは、炎症を発症する恐れのある被験者に予防的に投与し得る。そのような被験者には、予防接種を受けようとするもの並びに最近予防接種を受けたか、あるいは炎症性刺激又はサイトカインを受けたものが含まれる。ＩｇＡの予防的使用により、有害な炎症性反応の発生は抑制又は最小限に抑えられるであろう。予防の場合には、炎症性刺激に暴露される前又は該刺激に暴露された直後に被験者にＩｇＡを投与する必要がある。例えば、アレルギー性鼻炎のようなアレルギー性疾患の場合、花粉のようなアレルゲンに暴露される前に被験者を治療すべきである。さらに、結果として炎症を伴う上気道感染症に罹患する恐れのある被験者には、通常の寒冷期にはＩｇＡを繰り返し投与する必要がある。免疫グロブリンＡは、既に有害な炎症性反応を起こしている被験者にも投与し得る。炎症性反応は、蜂に刺されたり、あるいは炎症性刺激に暴露された被験者に発生し得る。こうした場合に、１ｇＡは進行中の炎症性反応を治癒、改善又は最小限に抑えるであろう。ＩｇＡは、局所的、経口又は全身的経路で投与し得る。実質的にＩｇＧを含まない薬剤中にＩｇＡを用いるのが好ましい。また、多量体ＩｇＡを含む製剤を用いるのも好ましい。ＩｇＭの存在も最小限に抑えるか、又は完全に排除する必要がある。用量は、投与の経路及び頻度、並びに炎症の程度及び原因に応じて異なる。ＩｇＡの総用量が多い場合、１日の間にＩｇＡを数回に分割して投与するのが好ましい場合が多い。当業者には、これらの用量及び投与経路は容易に考え得るものである。例えば、ＩｇＡは、経口的に（通常１〜１０ｇ／日、重症の場合にはそれ以上）、好ましくは３回以上に分けて制酸薬と同時に投与する。さらに、ＩｇＡは静脈注射（濃縮、連続注入又はその両方による）のような手段により全身的に投与し得る。典型的には、５０〜２０００ｍｇのＩｇＡ／ｋｇ／日を投与する。通常、約５０〜１００ｍｇ用量のＩｇＡ／ｋｇ／日を筋肉内投与することも希にはあり得る。免疫グロブリンＡは、吸入（最高１０ｍｇ／日、１０〜１００ｍｇのＩｇＡ／ｍｌ；経鼻的には：スプレー又は点鼻により５０〜２００ｍｇ／ｍｌ）のような経路、又は関節内注射（必要に応じ、１０〜１０００ｍｇＩｇＡ／ｍｌで１〜５ｍｌ）により局所的にも投与し得る。他の経路には、座薬（１００〜１０００ｍｇＩｇＡ／用量）及び経皮パッチが含まれる。皮膚の炎症（乾せん又はにきび）の治療に経皮パッチを用いることができる。かつては、病原体に対するＩｇＡの効果は、特定の抗体によってのみ媒介されると考えられていた。例えば、抗体が、微生物の付着の阻害及び細菌毒素及びウイルス粒子の中和に係わることは公知であった。従って、ＩｇＡの一般的な抗炎症及び免疫調節作用の発見は驚くべきことであった。特定のＩｇＧ抗体の抗スーパー抗原作用に関する現行の仮説に反して、同様にテストを行ってみると、ＩｇＧはＩｇＡに匹敵し得る作用を有していない。むしろＩｇＧは実際には炎症性活性を増強するように見え、これは望ましくないことである。従って、実質的にＩｇＧを含まないＩｇＡを用いるのが好ましい。本発明によれば、炎症性反応の予防及び治療には、予防又は治療を必要とする被験者にＩｇＡを投与することが含まれる。そのような被験者は、炎症にかかりやすいか、又は実際に有害な炎症性現象に罹患しているものである。適切な抗生物質及び／又は消炎剤をそのような被験者に投与してもよい。制酸薬が含まれる場合もあり得る。１種以上のこれらの成分を用量及び投与方式を指示し得る適切な使用説明書と共にパッケージしてもよい。該成分はそれぞれ実質的にＩｇＧを含んでいないのが好ましい。「実質的にＩｇＧを含まない」という用語は、免疫グロブリン総量に対して最大でも２０％、好ましくは１０％以下のＩｇＧしか含まないことを意味する。免疫グロブリン分画が実質的にＩｇＭを含まない（５％以下、好ましくは３％以下）であるのも好ましい。従って、本発明の実施に際して、ＩｇＧ及びＩｇＭの存在を最小限に抑えるか又は排除するのが好ましい。本発明の方法及びそのキットにアジュバントを組み合わせるのも有用である。アジュバントは典型的には、予防接種に用いられる抗原に対する免疫応答の増強に用いられる不活化微生物又は毒素である。ＩｇＡをアジュバントと共に投与すると、該アジュバントにより誘発される望ましくない炎症が確実に最小限に抑えられるか又は完全に排除される。本発明の他の態様は、少なくとも５％、好ましくは少なくとも１０％の多量体ＩｇＡを含む薬剤に関する。該製剤は、実質的に重合ＩｇＧを含まないものでなければならない。「実質的に重合ＩｇＧを含まない」とは、免疫グロブリン総量に対して最大でも１０％の重合ＩｇＧしか含まないことを指す。免疫グロブリン総量に対して５％以下の重合ＩｇＧしか含まないのが好ましい。さらに、多量体ＩｇＡからなる免疫グロブリン製剤が実質的にＩｇＭを含まないのも好ましい。多量体ＩｇＡが望ましいのは、ＩｇＡの重合度（例えば、熱凝集による）が低くとも、ＩｇＡの抗炎症作用が増強されるという驚くべき知見に基づいている。多量体ＩｇＡのこの作用は、非特異的且つ過剰な抗補体活性に係わる重合ＩｇＧの周知の危険な作用を考えて見れば予想外のことである。本発明の薬剤は、主成分としてＩｇＡを含み、場合によって少なくとも実質的にＩｇＧを含まないのが好ましい。種々の形態のＩｇＧ及びＩｇＭの存在を最小限に抑えるか又は排除するのが好ましい。ある物質の抗炎症力価は、新規且つ信頼し得るｉｎｖｉｔｒｏアッセイにより測定され得る。本発明アッセイは、テストすべき物質の存在下無血清培地中で単球（サイトカイン産生細胞）をインキュベーションすることを含む。次いで、典型的には単球に炎症性サイトカインを発現させる炎症性刺激に単球を暴露する。次いで、発現したサイトカイン、例えば、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＩＬ−１及びＩＬ−６の量を測定する。テスト物質と共にインキュベートした単球中で発現したサイトカインの量を、該テスト物質の不在下に実施する対照と比較し、テスト物質の抗炎症活性を正確に測定する。このアッセイにリンパ球及び顆粒球を用いてもよい。本発明アッセイに用いられる炎症性刺激は、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａ）のような不活化細菌、又はその構成成分であるのが好ましい。他の適当な刺激には、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＬＰＳ又は髄膜炎多糖体が含まれる。上記の新規なアッセイは、ＩｇＡが、周知の抗体機能モデルとは異なる一般的な抗炎症活性を有していることを示した。この抗炎症活性は、単球及び顆粒球による酸素ラジカル放出の抑制によっても示され得る。炎症性反応においてこれらのラジカルが放出されると、炎症部位に有意な組織損傷が生じる。この現象は、「呼吸バースト」（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｂｕｒｓｔ）として知られ、向神経性顆粒球の存在下にインキュベートしたＨｉｂを用いるｉｎｖｉｔｒｏモデルにより測定し得る。抗炎症活性は、スーパー抗原（例えば、ブドウ球菌エンテロトキシン、毒性ショック症候群毒素１）及びリコール抗原（例えば、破傷風トキソイド）応答におけるＴリンパ球活性化の抑制によっても測定し得る。ＩｇＡの抗炎症性作用は、必ずしも特定の中和抗体の存在のみに基づくわけではない。これは、間接免疫蛍光法を用いるフローサイトメトリーによって示された。この分析は、ＩｇＡ製剤及びＩｇＧ製剤が共に、Ｈｉｂに結合する同等の力価の抗体を含んでいるが、ＩｇＡのみがＴＮＦ−α及びＴＬ−６の産生レベルを減少させることを示している。同様の実験において同様な濃度で検査したＩｇＧ製剤は、Ｈｉｂ誘発サイトカイン放出に対してダウンレギュレート作用を有していない。ＩｇＡが特定の中和活性に依存しないということは、ＩｇＡ抗体とＨｉｂを、該混合物を単球に加える前にインキュベートする実験でも実証された。このインキュベーションにより抗原抗体複合体が形成される。しかし、ＨｉｂをＩｇＡと共にインキュベートしても炎症性サイトカイン放出の抑制は増強されない。本発明によれば、主としてモノマーであるヒト血清ＩｇＡは、単球のサイトカインの放出を抑制する。多量体ＩｇＡを形成する熱凝集により、ＴＮＦ−αの放出に対するＩｇＡの抑制作用が増強される。本発明の薬剤は、多量体ＩｇＡからなるのが好ましく、該マルチマーは、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％のＩｇＡを溶液又は凍結乾燥形態で含む製剤を加熱することにより得ることができる。該製剤は、実質的にＩｇＧを含まず、検出し得るＩｇＭを含まないものでなければならない。ＩｇＧ及びＩｇＭは、単純放射状免疫拡散法（「ＲＩＤ」）により検出し得る。血漿分画をＩｇＡ源として用いるのが好ましい。例えば、ＩｇＡ分画は、血漿分画、例えばコーン分画IIIのイオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、親水性クロマトグラフィー又はアフィニティークロマトグラフィーによって得ることができる。ウイルスはコーン分画法により不活化及び／又は排除されるので、このプロセスは潜在的ウイルス感染性の低減にも役立つ。加熱は、４０〜７０℃、好ましくは６０〜６５℃で、数分〜２４時間、好ましくは１〜１０時間行ってよい。次いで、マクロ集塊を除去するために、該分画を遠心する。その後で、ゲル浸透クロマトグラフィー又は他の一般法により多重結合度を測定し得る。多量体ＩｇＡの相対量は、適切な加熱プロセス温度及び時間を選択することにより調節し得る。本発明の薬剤は、抗補体活性を含んでいてはならない。これは、重合ＩｇＧ含量を最小限に抑えることにより達成される。組成物の抗補体活性は、Ｋａｂａｔ及びＭａｙｅｒ，ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬＩＭＭＵＮＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ（Ｔｈｏｍａｓ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ１９６１）及びＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＭｏｎｏｇｒａｐｈ第７４号：ＳＴＡＮＤＡＲＡＤＩＺＥＤＤＩＡＧＮＯＳＴＩＣＣＯＭＰＬＥＭＥＮＴＦＩＸＡＴＩＯＮＭＥＴＨＯＤＡＮＤＡＤＯＰＴＩＯＮＴＯＭＩＣＲＯＴＥＳＴ（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，１９６５）（第４章，ＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｎｄＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔＦｉｘａｔｉｏｎ）による方法で測定し、Ｃ′Ｈ₅₀単位（５０％溶血に必要な補体の量と定義された５０％溶血単位）の中和に少なくとも１０ｍｇのタンパク質が必要である値と対応させて予測することができる。Ｃ′Ｈ₅₀単位の中和に少なくとも３５ｍｇのタンパク質を必要とするのが好ましい。被験者に投与されるＩｇＡは典型的には血液又はその種々の分画から得られるので、潜在的汚染性病原体、例えばウイルスを排除又は不活化するように処理する必要がる。血液製剤中のウイルスを不活化する手順は、ＥＰ０１５９３１１号及び米国特許出願第０７／９００，１６４号（該明細書の全文は本明細書に参照として組込むものとする）に開示されている。他のウイルス不活化法を用いてもよい。ウイルスの不活化により、ＩｇＡ製剤がウイルスに関して安全となる。上記のように、本発明のＩｇＡ製剤は、局所的又は全身的に投与し得る。従って、ＩｇＡ含有製剤は、経口、経鼻、静脈内、関節内、洞内、筋肉内、皮下、経皮、直腸内又は当業者には公知の他の経路で投与し得る。ＩｇＡは医薬上許容し得る担体と組み合わせるのが一般的である。そのような担体には、水溶液、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’ＳＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳＣＩＥＮＣＥＳ，第１５版．Ｅａｓｔｏｎ：ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．１４０５−１４１２ページ及び１４６１−１４８７ページ(１９７５)並びにＴＨＥＮＡＴＩＯＮＡＬＦＯＲＭＵＬＡＲＹＸＩＶ，第１４版．Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ：ＡｍｅｒｉｃａｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（１９７５）（これらの文献の内容は、本明細書に参照として組込むものとする）に記載のような、塩、保存剤、緩衝剤などを含む非毒性希釈剤が含まれる。非水性溶媒の例としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油及びエチルオレエートのような注射可能な有機エステルがある。水性担体には、水、アルコール／水溶液、塩溶液、非経口ビヒクル、例えば、塩化ナトリウム、リンゲルデキストロースなどが含まれる。静脈内ビヒクルには、流体及び栄養補充物が含まれる。保存剤には、抗菌剤、酸化防止剤、キレート化剤及び不活性ガスが含まれる。結合組成物の種々の成分のｐＨ及び正確な濃度は、当業者により調整される。ＧＯＯＤＭＡＮＡＮＤＧＩＬＭＡＮ'ＳＴＨＥＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬＢＡＳＩＳＦＯＲＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ（第７版）参照。以下の実施例は、本発明を詳細に説明するためのものであり、いかなる点においても本発明を限定するものではない。実施例Ｉ．ヒト血清ＩｇＡの精製血漿分画法により精製ヒト血清ＩｇＡ製剤を調製した。先ず、ＩｇＡをＥＰ０５０６６５１号に従って大型血漿プールの血清コーン分画IIから精製した。次いで、ＩｇＡ濃厚製剤をさらに精製し、単純放射状免疫拡散法で検査して、９５％を超えるＩｇＡを含み、検出可能なＩｇＧ又はＩｇＭを含まない最終ＩｇＡ産物を得た。比較実験に用いるためのＩｇＧ製剤も同様に血清コーン分画IIから調製した（純度＞９７％）。両方の免疫グロブリン製剤を凍結乾燥形態で４℃で貯蔵し、全ての実験を１ロットのＩｇＡ又はＩｇＧ製剤を用いて行った。細胞培養に用いる直前に、免疫グロブリン製剤を、市販のヒト血清アルブミン（ＰｌａｓｍａＰｒｏｔｅｉｎＦｒａｃｔｉｏｎＨｕｍａｎ３．５％ＩＭＭＵＮＯＡＧ，Ｖｉｅｎｎａ）１％を含む、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００ μｇ／ｍｌ）及びグルタミン（２ｍＭ，Ｇｉｂｃｏ，Ｐａｉｓｌｅｙ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）を補足したＲＰＭＩ１６４０培地（ＦｌｏｗＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＵＫ）（ＲＰＭＴ補足培地）に溶解した。この培地は、「ＲＰＭＩ−ＨＳＡ」として知られている。実施例II ．多量体ＩｇＡの調製ヒト血清ＩｇＡをＲＰＭＩ−ＨＳＡ中２０ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、６３℃ で２０分間加熱して凝集させた。次いで調製物を６００×ｇで１０分間遠心してマクロ集塊を除去した。実施例III ．ヒト単球の単分子層の形成及びサイトカイン放出の刺激ＢφｙｕｍＡＳｃａｎ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．２１（補遺９７）：７７（１９６８）の方法に従って、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ｎｙｅｇａａｒｄ＆Ｃｏ．Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）上の浮遊密度勾配遠心法により、健康なボランティアのヘパリン処理末梢血（１ミリリットル当たり７．５ＩＵの保存剤非含有ヘパリン）からヒト単核細胞（「ＭＮＣ」）を分離した。分裂間期からの細胞を吸引し、０．９％ＮａＣｌ中で３回洗浄した。最終洗浄段階の後、１０％のプール・熱不活化（５６℃で３０分）ヒトＡＢ血清又は１０％の熱不活化ウシ胎児血清（ＦＫＳ，ＦｌｏｗＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を含むＲＰＭＩ補足培地（完全培地）中に細胞を１×１０⁶／ｍｌの濃度で再懸濁した。単球の単分子層を形成するために、ＭＮＣ懸濁液の１ミリリットルアリコートを２４ウエル平底プラスチック組織培養プレート（Ｆａｌｃｏｎ３０４７ＭｕｌｔｉｗｅｌｌＴｉｓｓｕｅＣｕｌｔｕｒｅＰｌａｔｅ,ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎＬａｂｗａｒｅ，ＬｉｎｃｏｌｎＰａｒｋ，ＮＪ）にピペット添加した。ＣＯ₂インキュベーター（湿潤空気中５％ＣＯ₂）中３７℃で９０分間インキュベートした後、付着単球の単分子層を塩水で３回洗浄して、非付着細胞を除去した。次いで、付着細胞を完全培地中でさらに２４時間インキュベートし、非特異的バックグラウンドサイトカイン産生を減少させた。次いで、細胞を０．１５ＭのＮａＣｌで３回洗浄し、細胞培養株に、熱不活化した封入Ｈｉｂ株Ｅａｇａｎ（ストック２× １０⁹細菌／ｍｌ、最終濃度１×１０⁶細菌／ｍｌ）又は精製ＬＰＳ（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌｓＣｏ．，ＳｉｇｍａＮｏＬ−２６３０から得た、フェノール抽出によりＥ．ｃｏｌｉ血清型Ｏ１１１：Ｂ４から調製したリポ多糖体、最終濃度１ｎｇ／ｍｌ）を加え、サイトカインの放出を誘発させた。Ｈｉｂ（２×１０⁶／ｍｌ）又はＬＰＳ（２ｎｇ／ｍｌ）を含む５００μｌのＲＰＭＩ− ＨＳＡを、０．２〜２０ｍｇ／ｍｌの希釈範囲でＲＰＭＩ−ＨＳＡ中０．５ｍｌのＩｇＡ又はＩｇＧと混合した。この混合物１ｍｌを、付着単球を含む２４ウエルプラスチック組織培養プレートのウエルに加えた。選択実験においては、細菌と免疫グロブリンの混合物を３７℃で３０分間予備インキュベートしてから、細胞培養株に加えた。Ｈｉｂのみ、ＩｇＡ若しくはＩｇＧのみ、又は培地のみの存在下での単球培養株を対照とした。細胞に、Ｈｉｂ及び免疫グロブリン又はＨｉｂのみを添加した後、付着単球の単分子層をＣＯ₂インキュベーター中３７℃で２４時間インキュベートした。次いで、細胞上清を吸引し、９０００×ｇで３分間遠心して、汚染細胞物質を除去した。サイトカイン含量を測定した。同じ日にサイトカイン含量の測定が出来なかった場合には、上清をアリコートに分け、ＴＮＦ−α及びＩＬ−６濃度の測定まで、−２０℃で最長３日間冷凍保存した。ウエル毎の付着細胞の数及びＨｉｂによる２４時間刺激後の付着単球の純度を測定するために、付着細胞を丁寧にはがした。次いで、細胞を遠心し、コールターカウンターで細胞数を測定した。４回の実験において、２４時間のＨｉｂ刺激後に、１ウエル当たり１．０±０．３×１０⁵個の細胞（４回の測定の平均±ＳＥＭ）を回収することができた。細胞の生存率（トリパンブルー排除法により測定）は、７８±５．５％であった。直接免疫蛍光法におけるＣＤ１４特異的モノクローナル抗体（ＭＯ２，ＣｏｕｌｔｅｒＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ,Ｈｉａｌｅａｈ、ＦＬ）を用いたフローサイトメトリーにより検査したところ、付着細胞は、８６±４．９％の単球を含んでいた。実施例IV ．Ｈｉｂで予備処理した単球におけるサイトカイン放出検査上記付着単球を２４時間刺激する代わりに、ＩｇＡ（１０ｍｇ／ｍｌ）の存在下にＨｉｂ又はＨｉｂのみで３時間細胞を刺激した。次いで、単球の単分子層を塩水で２回洗浄して、遊離Ｈｉｂを除去し、次いで、ＩｇＡ（１０ｍｇ／ｍｌ）を含む新鮮な培地又は新鮮なＲＰＭＩ−ＨＳＡのみ（対照培地）中で細胞を２１時間培養した。次いで、単球上清を上記のようにして分取し、ＥＬＩＳＡによりサイトカイン濃度を測定した。実施例Ｖ．単球上清におけるＴＮＦ−α、ＩＬ−６及びＧＭ−ＣＳＦの測定市販のＥＬＩＳＡキット（ＴＮＦ−α−ＥＡＳＩＡ及びＩＬ−６−ＥＡＳＩＡ、ＭｅｄｇｅｎｉｘＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｆｌｅｕｒｕｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ及びＱｕａｎｔｉｋｉｎｅＨｕｍａｎＧＭ−ＣＳＦＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ,Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用い、ＴＮＦ−αの場合は１：３０、ＩＬ− ６の場合は１：５又はＧＭ−ＣＳＦの場合は１：２に希釈した単球上清中でＴＮＦ−α、ＩＬ−６及びＧＭ−ＣＳＦの濃度を測定した。ＴＮＦ−α及びＩＬ−６アッセイに用いたそれぞれのサイトカインに特異的なモノクローナル抗体は、レセプター結合部位とは異なるサイトカイン分子上のエピトープと反応する非中和抗体である。従って、これらのアッセイから得られる結果は、可溶性サイトカインレセプター又はインヒビターの存在に影響されてはならない。結果は、ＥＬＩＳＡキットにより供給されるサイトカイン基準のｌｏｇ形質転換濃度対それぞれのｌｏｇ形質転換ＥＬＩＳＡ光学密度の線形回帰により誘導された標準曲線から計算されるＩＬ−６、ＴＮＦ−α又はＧＭ−ＣＳＦのｐｇ／ｍｌとして表す。サイトカイン放出に対するＩｇＡ又はＩｇＧの効果を評価するために、免疫グロブリン誘発抑制を、免疫グロブリンの不在下にＨｉｂのみで刺激した細胞培養株（１００％陽性対照）で認められたサイトカイン放出に対する対照の百分率として、又は抑制％（即ち、１００−対照の％）として表す。対照の％は次式に従って計算した：対照の％＝（Ｘ−Ｉ）／（Ｃ−Ｂ）×１００〔ここで、Ｘは、実験試料（単球＋免疫グロブリン＋Ｈｉｂ又はＬＰＳ）のサイトカイン濃度であり、Ｉは、免疫グロブリンのみの存在下にインキュベートした単球の上清中のサイトカイン濃度であり、Ｂは、バックグラウンドサイトカイン放出（単球のみの培養株）であり、Ｃは免疫グロブリン無しでＨｉｂ又はＬＰＳの存在下にインキュベートした単球（１００％対照）から放出されたサイトカイン濃度である〕。実施例VI ．ヒト単球におけるＴＮＦ−α及びＩＬ−６の放出に対するＩｇＡの効果ヒト単球は、Ｈｉｂのようなグラム陰性菌によって誘発されると有意な量の炎症性サイトカインを放出する。Ｈｉｂ誘発ＴＮＦ−α及びＩＬ−６放出に対するＩｇＡの効果を調べた。先ず、ヒト単球を、２４ウエルプラスチック組織培養プレート（１×１０⁶ＭＮＣ／ウエル／ｍｌ完全培地）への付着により末梢血単核細胞から分離した。付着単球を、指示濃度でヒト血清ＩｇＡを含むＲＰＭＩ−ＨＳＡ中、Ｈｉｂ（１ ×１０⁶細菌／ｍｌ／ウエル）で２４時間刺激した。対照ウエルは、Ｈｉｂのみの存在下に培養した単球を含むものであった。２４時間インキュベートした後、細胞を含まない上清中のＴＮＦ −α及びＩＬ−６の濃度をＥＬＩＳＡにより測定した。結果をｐｇ／ｍｌ（８回の個別実験の平均±ＳＥＭ）として表す。培地のみ中で培養した単球は、１８± ９ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ−α及び６１±５０ｐｇ／ｍｌのＩＬ−６を含んでいた。ＩｇＡのみを含む培養株中のバックグラウンドサイトカイン放出は、３１±２０ｐｇ／ｍｌ（０．１ｍｇ／ｍｌ）であり、ＴＮＦ−αは５６２±２６３ｐｇ／ｍｌ（１０ｍｇ／ｍｌ）、ＩＬ−６は、２５５±１４８及び１２１±８２ｐｇ／ｍｌであった。図１に示されているデータは、無血清条件（１％ＨＳＡを含むＲＰＭＩ補足培地中）下に、Ｈｉｂ（１×１０⁶細菌／ｍｌ）の存在下で単球をインキュベートすると、有意なレベルのＴＮＦ−α（４３１９８±６９１２ｐｇ／ｍｌ）及びＩＬ−６（１０９９０±６６９ｐｇ／ｍｌ）の放出が誘発されたことを示している。アスタリスク（「＊」）は、ＩｇＡ処理細胞と対照細胞との間に統計的に有意な差があること(ｐ＜０.００５、Ｍａｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙＵテスト)を示す。単球及びＨｉｂの培養株に０．１〜１０ｍｇ／ｍｌの最終濃度でＩｇＡを添加すると、両方のサイトカインの放出に用量依存性減少が見られた（図１）。ＴＮＦ−α放出のＩｇＡ媒介抑制は、３ｍｇ／ｍｌで最大（抑制％、８回の実験の平均±ＳＥＭ：ＴＮＦ−α ６５±５）であり、Ｈｉｂのみを含む培養株に比べて有意な差は、ｐ＝０．００１６３６（Ｍａｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙＵテスト）であり、ＩｇＡ濃度を１０ｍｇ／ｍｌに増大させてもそれ以上増強されなかった。ＩＬ−６の放出に対するＩｇＡの効果は、１０ｍｇ／ｍｌで最大（８１±５％の抑制率、ｐ＝０．０００３８９）であったが、３ｍｇ／ｍｌでも、５９±９％という統計的に有意な抑制率を認めることができた（ｐ＝０．００１１６１）。サイトカイン放出のＩｇＡ媒介抑制は、培養株中の単球数の減少によるものでも細胞生存率の減少によるものでもなかった。以下の表１に見られるように、培養株にＩｇＡ（１０ｍｇ／ｍｌ）を添加しても、ウエル当たりの単球数には何の効果も与えなかった。細胞の生存率（トリパンブルー排除法により測定）も不変であった（データは示さず）。これは、ＩｇＡが、当該サイトカインの産生及び／又は放出に対して効果を有することを示している。図２は、ヒト血清ＩｇＡが、ヒト単球におけるＨｉｂ誘発ＴＮＦ−α及びＩＬ −６の放出をダウンレギュレートするが、このモデルにおいてＨｉｂ刺激後のＧＭ−ＣＳＦ産生には何の効果も無いことを示している。先ず、図１の実験で説明したように、ＩｇＡ（１０ｍｇ／ｍｌ）の存在又は不在下に、付着単球をＨｉｂで２４時間刺激した。ＥＬＩＳＡにより、ＴＮＦ−α，ＩＬ−６及びＧＭ−ＣＳＦの濃度を測定し、結果をｐｇ／ｍｌ（８回の個別実験の平均±ＳＥＭ）として示す。ＴＮＦ−α及びＩＬ−６のバックグラウンドサイトカイン放出は図１の説明に記載されている。培地のみで培養した単球は、検出可能レベルのＧＭ−ＣＳＦを放出しなかったが、８回の実験中２回だけに、Ｈｉｂを含まずＩｇＡ（１００ｍｇ／ｍｌ）を含む培養株中に低バックグラウンドＧＭ−ＣＳＦ放出（５０ｐｇ／ｍｌ以下）が検出された。アスタリスク（「＊」）は、ＩｇＡ処理した細胞と対照細胞との間に統計的に有意な差（ｐ＜０．００５、Ｍａｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙＵテスト）がないことを示す。高濃度のＩｇＡ（１０ｍｇ／ｍｌ）でさえＨｉｂ刺激後のＧＭ−ＣＳＦ放出に対して何の抑制効果も示さなかったのに対して、同一上清中で測定したＴＮＦ− α及びＩＬ−６の放出は有意に減少した。従って、ＴＮＦ−α及びＴＬ−６放出のダウンモデュレーションは、Ｈｉｂで刺激した後の単球のサイトカイン放出能が全体的に減少したことによるものではなかった。ＩｇＡの存在下の単球上清中で測定したＴＮＦ−α及びＩＬ−６濃度の減少は、サイトカイン検出の抑制によるものではなく、特定のサイトカインの放出の真性ダウンレギュレーションによるものでった。以下の表２に示されている結果は、最大２５ｍｇ／ｍｌのヒト血清ＩｇＡ又はＩｇＧをＨｉｂ活性化単球上清に添加しても、検出されたＴＮＦ−α及びＩＬ−６の量には何ら有意な効果を与えなかったが、これは、ＥＬＩＳＡアッセイによりこれらのサイトカインを測定した場合のＩｇＡ又はＩｇＧ抗体の可能な干渉をあり得ないものとすることを示している。さらに、ＴＮＦ−α及びＩＬ−６の放出において認められたＩｇＡが媒介する減少は、ＩｇＡを含む培養株中の高タンパク質濃度による人為的な結果ではなかった。該培養株に等量のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を加えて２０ｍｇ／ｍｌ −ＨＳＡの最終濃度にしても、これらのサイトカインのＨｉｂ誘発放出に何の効果も与えなかった。結果は以下の通りであった：ＴＮＦ−αの放出、ｐｇ／ｍｌ〔対照の％〕：（ｉ）ＨＳＡ１０ｍｇ／ｍｌ１８５４０±５６７８、ＨＳＡ２０ｍｇ／ｍｌ１４９２２±５０４０〔８４±８％〕及び（ｉｉ）ＩＬ−６の放出、ｐｇ／ｍｌ：ＨＳＡ１０ｍｇ／ｍｌ２４２６±６８７、ＨＳＡ２０ｍｇ／ｍｌ２５６７±７６６〔１０９±１０％〕（４回の実験の平均±ＳＥＭ）。Ｈｉｂ誘発ＴＮＦ−α及びＩＬ−６放出のＩｇＡ媒介抑制は、ＩｇＡとＨｉｂの相互作用を助長させても増強されなかった。該データは、ＨｉｂをＩｇＡ（１０ｍｇ／ｍｌ）と共に予備インキュベートしても効果が増強されなかったことを示した〔サイトカイン放出の抑制％、平均±ＳＥＭ：（１）予備インキュベーションせずに細胞にＩｇＡ（１０ｍｇ／ｍｌ）及びＨｉｂを加えた場合（ｎ＝８）：ＴＮＦ−α ６３±７、ＩＬ−６７３±１１、並びに（２）細胞にＨｉｂ及びＩｇＡを加える前にＨｉｂをＩｇＡと共に３７℃で３０分間予備インキュベートした場合（ｎ＝１１）：ＴＮＦ−α ５９±９、ＩＬ−６５１±１８〕。図３に示されている実験は、ＩｇＡが、可溶性刺激、即ち、Ｅ．ｃｏｌｉから精製されたＬＰＳによる刺激に応答してＴＮＦ−α及びＩＬ−６の放出をもダウンレギュレートすることを示している。先ず、付着単球を、ヒト血清ＩｇＡ（０．１ｍｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌ）を含むＲＰＭＩ−ＨＳＡ中、ＬＰＳ（１ｎｇ／ｍｌ）で２４時間刺激した。対照ウエルは、単球とＬＰＳ、単球とＩｇＡ、又はＲＰＭＩ−ＨＳＡのみ中で培養した単球を含んでいた。２４時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡにより無細胞上清中でＴＮＦ−α及びＩＬ−６の放出を測定した。図３に示されている結果は、先に記載のように計算した（６回の実験の平均±ＳＥＭ）対照サイトカインの放出（ＩｇＡの不在下にＬＰＳで刺激した単球により放出されたサイトカイン）の百分率として表されている。ＬＰＳで刺激した対照細胞は、１６６５７±５５３６ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ−α及び１１１０±２９４ｐｇ／ｍｌのＩＬ−６を放出した。ＩｇＡ処理培養株と対照培養株とのサイトカインレベル（ｐｇ／ｍｌ）における差のウィルコクソンマッチペア符号付き順位検定：ｐ＝０．０２９５８６、＊＊）ｐ＝０．０１８０１６。図３の結果は、ＩｇＡ媒介抑制の用量応答がＴＮＦ−α及びＩＬ−６の放出に比較し得るものであったことを示している。実施例VII ．Ｈｉｂ誘発ＴＮＦ−α及びＩＬ−６放出に対する多量体ＩｇＡの効果図４のデータは、ＩｇＡが多量体形態で存在する場合にＴＮＦ−α放出に対するヒト血清ＩｇＡの免疫調節作用が有意に増強されることを示している。健康な大人のボランティアの末梢血単核細胞からプラスチック表面に付着させて分離したヒト単球を２４ウエルプラスチック組織プレート中で培養した。付着単球をＨｉｂ（１×１０⁶細菌／ｍｌ／ウエル）及び単量体又は熱凝集ＩｇＡ（最終濃度１０ｍｇ／ｍｌ）の存在下にインキュベートした。対照培養は、単球及びＨｉｂのみで実施した。２４時間後、無細胞上清を分取し、ＥＬＩＳＡによりＴＮＦ−α及びＩＬ−６の濃度を測定した。結果をｐｇ／ｍｌ（６回の個別実験の平均±ＳＥＭ）として表す。６回の実験で、非重合ＩｇＡはＴＮＦ−αの放出を４８±９％だけ減少させたのに対し、多量体（熱凝集させた）ＩｇＡにより誘発されたＴＮＦ−α放出の抑制率は７３±５％（平均±ＳＥＭ、ｎ＝６、Ｍａｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙＵテストによる、非重合ＩｇＡによる抑制％に比べてｐ＝０．０１８６８６）であった。熱凝集だけでは、ＩＬ−６放出に対するＩｇＡの抑制効果は僅かしか増強されなかった（抑制％、平均±ＳＥＭ：非重合ＩｇＡ７８± ８％、ＩｇＡポリマー８９±３％）。実施例VIII ．ＩｇＡ及びＩｇＧを用いた抑制実験図５は、ＩｇＡが、Ｈｉｂで刺激後の付着単球によりＴＮＦ−α及びＩＬ−６放出を有意に減少させたが、同様な濃度で調べたＩｇＧは、サイトカイン放出レベルに何の効果も与えなかったことを示している。先ず、健康なボランティアの末梢血からプラスチックに付着させて分離したヒト単球を、Ｈｉｂ（１×１０⁶ 細菌／ｍｌ／ウエル）及びＩｇＡ又はＩｇＧ（最終濃度１０ｍｇ／ｍｌ）の存在下に組織培養プレート（約１×１０⁵付着細菌／ウエル／ｍｌ）中で２４時間培養した。次いで、無細胞上清中のＴＮＦ−α及びＩＬ−６のレベルをＥＬＩＳＡにより測定した。結果をｐｇ／ｍｌ（８回の個別実験の平均±ＳＥＭ）で表す。陽性対照としての免疫グロブリン無しでＨｉｂの存在下に培養した単球、及びＨｉｂ無しで培地のみで培養した細胞を調べて、バックグラウンドサイトカイン放出（ＴＮＦ −α ２０２±１２３ｐｇ／ｍｌ、ＩＬ−６１５±８ｐｇ／ｍｌ）を測定した。ＩｇＧ（１０ｍｇ／ｍｌ）のみの存在下に培養した単球は、４４９±１８２ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ−α及び９±５ｐｇ／ｍｌのＩＬ−６を放出した。ＩｇＡ（１０ｍｇ／ｍｌ）のみで処理した細胞の上清は、７２１±２４４ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ−α及び６±２ｐｇ／ｍｌのＩＬ−６を含んでいた。Ｍａｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙＵテストを用い、ＩｇＡ又はＩｇＧの存在下でのサイトカインの放出とＨｉｂのみの存在下に培養した細胞との差を統計的に評価した：＊ｐ＝０．００４３２６、＊＊ｐ＝０．００１６３８。実施例IX ．ＩｇＡ及びＩｇＧとＨｉｂとの結合ＩｇＧではなくＩｇＡのみがＨｉｂ誘発サイトカイン放出をダウンレギュレートするので、ＩｇＡ及びＩｇＧ製剤とＨｉｂとの結合を調べた。先ず、Ｈｉｂを精製ヒト血清ＩｇＡ又はＩｇＧの対数倍希釈液と共にインキュベートし、ＩｇＡ及びＩｇＧ抗体の結合を間接免疫蛍光法により検出し、サイトフルオログラフで評価した。培地対照は、ＦＩＴＣ結合抗ＩｇＡ又は抗ＩｇＧ試薬のみでの細菌の染色を表す。図６に示されている代表的なＦＡＣＳヒトスグラムにより、ＩｇＡ抗体もＩｇＧ抗体もＨｉｂに結合することが示され、半定量測定により、どちらの製剤も匹敵し得る力価のＨｉｂ特異抗体を含んでいたことが示されている。実施例Ｘ．Ｈｉｂで刺激した単球におけるサイトカイン誘発及びサイトカイン放出に対するヒト血清ＩｇＡの効果Ｈｉｂ誘発ＴＮＦ−α及びＩＬ−６の放出に対するＩｇＡの抑制作用についてはいくつかの解釈が存在し得る。例えば、ＩｇＡは、Ｈｉｂの単球表面膜への結合を遮断することによりサイトカイン放出のＨｉｂ誘発刺激を阻害し得る。それによって、サイトカイン放出レベルが減少する。ＩｇＡが媒介するＨｉｂ誘発ＴＮＦ−α及びＩＬ−６放出の減少は、Ｈｉｂ刺激単球におけるサイトカイン産生及び／又はサイトカイン放出の真性ダウンレギュレーションの結果でもあり得る。ＩｇＡの抗炎症機構をさらに究明するために以下の実験を行った。２４ウエルプラスチック組織プレート（１×１０⁶ＭＮＣ／ｍｌ／ウエル）に付着させて末梢血単核細胞（「ＭＮＣ」）からヒト単球を分離した。単球の単分子層を、１０ｍｇ／ｍｌのＩｇＡを含むＲＰＭＩ−ＨＳＡ中、Ｈｉｂ（１×１０⁶細菌／ｍｌ／ウエル）で３時間刺激した。次いで、付着単球を２回洗浄してＨｉｂを除去し、１０ｍｇ／ｍｌのヒト血清ＩｇＡを含む新鮮な培地（ＲＰＭＩ−ＨＳＡ）（Ｈｉｂ＋ＩｇＡ→ＩｇＡ）中又は新鮮なＲＰＭＩ−ＨＳＡのみ（Ｈｉｂ＋ＩｇＡ→培地）中でさらに２１時間インキュベートした。平行培養株をＨｉｂで３時間刺激して洗浄し、その後の２１時間のインキュベーション期間の間、１０ｍｇ／ｍｌのＩｇＡに暴露した（Ｈｉｂ→ＩｇＡ）。３時間のＨｉｂ刺激後２１時間インキュベートした後で、無細胞上清を分取し、ＥＬＩＳＡによりＴＮＦ− α及びＩＬ−６の濃度を測定した。Ｈｉｂで３時間刺激して洗浄し、次いでＩｇＡを含まないＲＰＭＩ−ＨＳＡ（Ｈｉｂ→培地）中で２１時間培養した対照細胞は、４９３９±１５８８ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ−α及び１６２６±７２８ｐｇ／ｍｌのＩＬ−６を放出した。ＩｇＡ処理した細胞中のサイトカイン放出を、上記のように計算した対照サイトカイン放出の百分率として表す（４回の個別実験の平均±ＳＥＭ）。Ｈｉｂで処理しないが、適切な培地変更を行い、ＩｇＡ又は培地のみに暴露した追加のウエルは、６５±５４（培地→ＩｇＡ）〜１１３±３８（ＩｇＡ→ＩｇＡ）ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ−α及び８±８（ＩｇＡ→培地）〜２１±１４（培地→ＩｇＡ）ｐｇ／ｍｌのＩＬ−６を含んでいた。Ｈｉｂで３時間刺激した直後に分取した上清は、極く微量のＴＮＦ−α（５０２±１７８ｐｇ／ｍｌ）及びＩＬ−６（２８８±１２４ｐｇ／ｍｌ、３回の実験の平均±ＳＥＭ）しか含んでいなかったのに対し、Ｈｉｂで３時間刺激した後２１時間インキュベートした（刺激を徹底的に洗浄して除去した後）後で分取した上清は、３３８５±４６３ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ−α及び１９００±９５３ｐｇ／ｍｌのＩＬ−６を含んでいたが、これは、Ｈｉｂでの３時間刺激により誘発された総ＴＮＦ−αの８８±３％及び総ＩＬ−６の８６±３％が刺激後２１時間の間に放出されることを示している。Ｈｉｂで２４時間連続刺激すると、３時間Ｈｉｂで予備処理した単球の２１時間培養株におけるこれらのサイトカインレベルに比べて２〜３倍高いレベルのＴＮＦ−α（１２８４９±２９０４ｐｇ／ｍｌ）及びＩＬ−６（４２７８±７６６ｐｇ／ｍｌ）が放出された。図７に示されているように、Ｈｉｂで３時間刺激した単球は、Ｈｉｂを徹底的に洗浄して除去した後、サイトカイン放出時間の間に該系にＩｇＡ（１０ｍｇ／ｍｌ）を加えると（Ｈｉｂ→ＩｇＡ）、著しく低レベルのＴＮＦ−α及びＩＬ−６を放出した。さらに、Ｈｉｂでの３時間刺激の間に細胞培養株に加えたＩｇＡも、ＩｇＡ及び刺激を徹底的に洗浄して除去してから刺激した後の２１時間の間にＴＮＦ−α及びＩＬ−６放出を減少させた（Ｈｉｂ＋ＩｇＡ→培地）。これらの結果は、ＩｇＡがサイトカイン産生の誘発及びサイトカイン放出のいずれをもダウンモデュレートすることを示している。サイトカイン誘発（最初の３時間）及び刺激の不在下のサイトカイン放出（その後の２１時間）のいずれの間にもＩｇＡが存在すると、ＴＮＦ−α及びＩＬ−６の放出に対する抑制効果が最大となった（Ｈｉｂ＋ＩｇＡ→ＩｇＡ）。結論として、ＩｇＡは、粒状刺激Ｈｉｂにより活性化されたヒト単球におけるＴＮＦ−α及びＩＬ−６の放出をダウンレギュレートする。ＴＮＦ−α及びＩＬ −６の放出は、Ｈｉｂでの単球の連続刺激時間中にＩｇＡが存在すると、ダウンレギュレートされる。ＩｇＡはさらに、サイトカイン誘発中に存在すると、ＴＮＦ−α及びＩＬ−６の放出をも抑制する。さらに、ＩｇＡは、サイトカイン産生の誘発後、サイトカイン放出中、さらに刺激を徹底的に洗浄して除去した後でさえ、Ｈｉｂで予備処理した単球に加えると抑制性となる。ＩｇＡがサイトカインの誘発及びサイトカインの放出のいずれの間にも存在すると、ＴＮＦ−α及びＩＬ−６産生のＩｇＡ媒介ダウンレギュレーションは最大になる。これは、ＩｇＡの炎症性反応に対する予防効果だけでなく、治療効果をも強力に示している。しかし、上記に提案された態様のＩｇＡ効果についての知識又は正確性は、本発明の実施には必要ではない。本発明の好ましい実施態様を示す説明、表、図面及び特定の実施例は、例示のために示されており、本発明を限定するものではないことを理解されたい。本発明の精神及び範囲内での種々の変更及び改変は本明細書に含まれている説明及びデータから当業者には明らかになるであろう。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９６年１月１５日【補正内容】本発明の薬剤は、抗補体活性を含んでいてはならない。これは、重合ＩｇＧ含量を最小限に抑えることにより達成される。組成物の抗補体活性は、Ｋａｂａｔ及びＭａｙｅｒ,ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬＩＭＭＵＮＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ（Ｔｈｏｍａｓ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ１９６１）及びＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＭｏｎｏｇｒａｐｈ第７４号:ＳＴＡＮＤＡＲＡＤＩＺＥＤＤＩＡＧＮＯＳＴＩＣＣＯＭＰＬＥＭＥＮＴＦＩＸＡＴＩＯＮＭＥＴＨＯＤＡＮＤＡＤＯＰＴＩＯＮＴＯＭＩＣＲＯＴＥＳＴ（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，１９６５）（第４章，ＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｎｄＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔＦｉｘａｔｉｏｎ）による方法で測定し、Ｃ′Ｈ₅₀単位（５０％溶血に必要な補体の量と定義された５０％溶血単位）の中和に少なくとも１０ｍｇのタンパク質が必要である値と対応させて予測することができる。Ｃ′Ｈ₅₀単位の中和に少なくとも３５ｍｇのタンパク質を必要とするのが好ましい。被験者に投与されるＩｇＡは典型的には血液又はその種々の分画から得られるので、潜在的汚染性病原体、例えばウイルスを排除又は不活化するように処理する必要がある。血液製剤中のウイルスを不活化する手順は、ＥＰ０１５９３１１号（該明細書の全文は本明細書に参照として組込むものとする）に開示されている。他のウイルス不活化法を用いてもよい。ウイルスの不活化により、ＩｇＡ製剤がウイルスに関して安全となる。上記のように、本発明のＩｇＡ製剤は、局所的又は全身的に投与し得る。従って、ＩｇＡ含有製剤は、経口、経鼻、静脈内、関節内、洞内、筋肉内、皮下、経皮、直腸内又は当業者には公知の他の経路で投与し得る。実施例II ．多量体ＩｇＡの調製ヒト血清ＩｇＡをＲＰＭＩ−ＨＳＡ中２０ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解し、６３℃ で２０分間加熱して凝集させた。次いで調製物を６００×ｇで１０分間遠心してマクロ集塊を除去した。実施例III ．ヒト単球の単分子層の調製及びサイトカイン放出の刺激ＢφｙｕｍＡＳｃａｎ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．２１（補遺９７）：７７（１９６８）の方法にｏ．Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）上の浮遊密度勾配遠心法により、健康なボランティアのヘパリン処理末梢血（１ミリリットル当たり７．５ＩＵの保存剤非含有ヘパリン）からヒト単核細胞（「ＭＮＣ」）を分離した。分裂間期からの細胞を吸引し、０．９％ＮａＣｌ中で３回洗浄した。最終洗浄段階の後、１０％のプール・熱不活化（５６℃で３０分）ヒトＡＢ血清又は１０％の熱不活化ウシ胎児血清（ＦＫＳ，ＦｌｏｗＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を含むＲＰＭＩ補足培地（完全培地）中に細胞を１×１０⁶／ｍｌの濃度で再懸濁した。請求の範囲１．炎症を予防する薬剤を製造するためのＩｇＡを含む製剤の使用。２．前記製剤がＩｇＧを実質的に含まない、請求項１に記載の使用。３．前記ＩｇＡが多量体ＩｇＡからなる、請求項１に記載の使用。４．前記製剤が重合ＩｇＧを実質的に含まない、請求項３に記載の使用。５．前記製剤が、抗生物質、消炎剤及び制酸薬からなる群から選択された化合物を含む、請求項１に記載の使用。６．炎症を治療又は軽減する薬剤を製造するためのＩｇＡを含む製剤の使用。７．前記製剤がＩｇＧを実質的に含まない、請求項６に記載の使用。８．前記ＩｇＡが多量体ＩｇＡからなる、請求項６に記載の使用。９．前記製剤が重合ＩｇＧを実質的に含まない、請求項８に記載の使用。１０．前記製剤が、抗生物質、消炎剤及び制酸薬からなる群から選択された化合物をさらに含む、請求項６に記載の使用。１１．医薬上許容し得る担体中にＩｇＡを含む製剤、及び炎症を予防又は治療するＩｇＡの投与についての使用説明書を含む抗炎症剤キット。１２．前記ＩｇＡが多量体ＩｇＡからなる、請求項１１に記載の抗炎症剤キット。１３．前記製剤が、抗生物質、消炎剤及び制酸薬からなる群から選択された化合物をさらに含む、請求項１１及び１２に記載の抗炎症剤キット。１４．ＩｇＧを実質的に含まない多量体ＩｇＡからなる抗炎症製剤。１５．前記製剤がウイルスに関して安全である、請求項１１に記載の抗炎症剤キット。１６．免疫グロブリンの抗炎症活性を評価する方法であって：無血清培地中、炎症性刺激及び前記免疫グロブリンの存在下に、単球、リンパ球及び顆粒球からなる群から選択されたサイトカイン産生細胞をｉｎｖｉｔｏｒｏインキュベートする段階；及び炎症性サイトカインの産生について前記インキュベーション段階の前記細胞を評価する段階からなる前記方法。１７．ワクチンを製造するためのＩｇＡ及び抗原の使用。１８．前記ワクチンがアジュバントをさらに含む、請求項１７に記載の使用。１９．前記ＩｇＡが多量体ＩｇＡからなる、請求項１７に記載の使用。２０．前記製剤がＩｇＧを実質的に含まない、請求項１９に記載の使用。２１．抗原及びＩｇＡを含む予防接種用製剤。２２．前記ＩｇＡが多量体ＩｇＡからなる、請求項２１に記載の予防接種用製剤。２３．前記製剤がＩｇＧを実質的に含まない、請求項２１に記載の予防接種用製剤。２４．アジュバントをさらに含む、請求項２１に記載の予防接種用製剤。２５．免疫調節用薬剤を製造するための１ｇＡを含む製剤の使用。２６．前記ＩｇＡが多量体ＩｇＡからなる、請求項２５に記載の使用。２７．医薬上許容し得る担体中にＩｇＡを含む製剤、及び免疫調節を実施するＩｇＡの投与についての使用説明書を含む免疫調節キット。２８．前記ＩｇＡが多量体ＩｇＡからなる、請求項２７に記載の免疫調節キット。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＧ０１Ｎ 33/53 0276−2ＪＧ０１Ｎ 33/53 Ｐ (72)発明者ライブル，ハインツオーストリア国、アー−1120・ビーン、キニンゲルガツセ・12 (72)発明者リンナウ，イエンドラオーストリア国、アー−1224・ビーン、ラベンデルベツク・24

Claims

【特許請求の範囲】１．ＩｇＡを含む製剤を患者に予防的に投与する段階を含む炎症の予防法。２．前記製剤が実質的にＩｇＧを含まない、請求項１に記載の方法。３．前記ＩｇＡが多量体ＩｇＡを含む、請求項１に記載の方法。４．前記製剤が実質的に重合１ｇＧを含まない、請求項３に記載の方法。５．抗生物質、消炎剤及び制酸薬からなる群から選択された化合物を投与する段階をさらに含む、請求項１に記載の方法。６．炎症を起こしている患者に該炎症を改善するに十分な量のＩｇＡを投与する段階を含む治療法。７．前記製剤が実質的にＩｇＧを含まない、請求項６に記載の方法。８．前記ＩｇＡが多量体ＩｇＡを含む、請求項６に記載の方法。９．前記製剤が実質的に重合ＩｇＧを含まない、請求項８に記載の方法。１０．抗生物質、消炎剤及び制酸薬からなる群から選択された化合物を投与する段階をさらに含む、請求項６に記載の方法。１１．医薬上許容し得る担体中にＩｇＡを含む製剤、及び炎症を予防又は治療するためのＩｇＡの投与についての使用説明書を含む抗炎症剤キット。１２．前記ＩｇＡが多量体ＩｇＡを含む、請求項１１に記載の抗炎症剤キット。１３．前記製剤が、抗生物質、消炎剤及び制酸薬からなる群から選択された化合物をさらに含む、請求項１１に記載の抗炎症剤キット。１４．実質的にＩｇＧを含まない多量体ＩｇＡを含む抗炎症製剤。１５．前記製剤がウイルス安全である、請求項１１に記載の抗炎症剤キット。１６．テスト物質の抗炎症性を評価する方法であって、炎症性刺激及び前記テスト物質の存在下にサイトカイン産生細胞をインキュベートする段階；及びサイトカインの産生について前記インキュベーション段階の前記細胞を評価する段階からなる前記方法。１７．ＩｇＡ及び抗原を投与する段階を含む予防接種法。１８．アジュバントを投与する段階をさらに含む、請求項１７に記載の予防接種法。１９．前記ＩｇＡが多量体ＩｇＡを含む、請求項１７に記載の予防接種法。２０．前記製剤が実質的にＩｇＧを含まない、請求項１９に記載の予防接種法。２１．抗原及びＩｇＡを含む予防接種用製剤。２２．前記ＩｇＡが多量体ＩｇＡを含む、請求項２１に記載の予防接種用製剤。２３．前記製剤が実質的にＩｇＧを含まない、請求項２１に記載の予防接種用製剤。２４．アジュバントをさらに含む、請求項２１に記載の予防接種用製剤。２５．ＩｇＡを含む製剤を免疫調節を要する患者に投与する段階を含む免疫調節法。２６．前記ＩｇＡが多量体ＩｇＡを含む、請求項２５に記載の方法。２７．医薬上許容し得る担体中にＩｇＡを含む製剤、及び免疫調節するためのＩｇＡの投与についての使用説明書を含む免疫調節キット。２８．前記ＩｇＡが多量体ＩｇＡを含む、請求項２７に記載の免疫調節キット。