JPH08506493A - 免疫原または診断試薬の製造法、およびその方法によって得られる免疫原または診断試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 疾病に特異的な抗原または病原性生物に類似した免疫原または診断試薬の製造法において、本質的に下記の操作を特徴とするもの。疾病に特異的な抗原または病原性生物と反応する少なくとも１種類の抗体の同定、遺伝子操作技術を用いてファージキャプシドをコードする遺伝子に導入されるランダム配列オリゴヌクレオチドインサートから発現される、キャプシドオリゴペプチドの表面に現れるファージライブラリーの構築、前記抗体によって、場合によっては第一の病原性血清を用いて選定した後、第二の異なる病原性血清を用いるスクリーニングおよび健康人からの血清のパネルを用いる対抗スクリーニングによって認識されるキャプシド抗原性オリゴペプチドの表面に現れるファージの選定、特定の病原性物質、または一般的には既知または未知の病因および／または病原によるいわゆる自己免疫疾患に代表される免疫学的疾患などの疾病についての診断用キットの処方を目的とした選定されたファージおよび／またはそのフラグメントおよび／またはそれらの誘導体の随意使用、前記抗原によって誘発される疾病の治療のための抗原−抗体反応の拮抗薬の処方を目的とする選定されたファージおよび／またはそのフラグメントおよび／またはそれらの誘導体の随意使用、化合物および／または天然または合成製剤に対する過敏症および／またはアレルギーの現象の耐性を誘発するための選定されたファージおよび／またはそのフラグメントおよび／またはそれらの誘導体の随意使用、選定されたファージおよび／またはそのフラグメントおよび／またはそれらの誘導体による、生物の随意免疫感作、および免疫感作した生物の血清中における、疾病に特異的な前記抗原または生物を認識する抗体の存在の随意証明。

Description

【発明の詳細な説明】 免疫原または診断試薬の製造法、およびその方法によって得られる免疫原または 診断試薬 本発明の主題は、疾病が特性決定されていてもまたは知られていなくとも（従 って、病因および／または病原が知られているまたは知られていない自己免疫疾 患を含む）、疾病に特異的な抗原または病原性生物に似ている免疫原または診断 試薬の製造法である。この方法は、モノクローン性またはポリクローン性の抗体 、または感染症を引き起こす生物と特異的に反応する抗体を含む血清の存在およ び利用可能性に基づくものである。 本発明の方法に用いるのに好適な抗体は、目的とする任意の抗原に似ている免 疫原または診断試薬を模索している抗原に特異的であることができる。この抗原 は、天然供給源から誘導されるまたは組換えにより生成される合成のタンパク質 またはペプチド、炭水化物、多糖類、糖タンパク質、ホルモン、レセプター、抗 体、ウイルス、基質、代謝物、遷移状態の類似物、補因子、薬物、染料、栄養物 、生長因子、細胞成分、腫瘍遺伝子生成物、細菌およびそれらの細胞外生成物、 哺乳動物細胞、および腫瘍細胞、ウイルス感染細胞および正常細胞などの哺乳動 物細胞からの抽出物、寄生虫、原生動物、マラリア抗原、蠕虫、菌類、リケッチ ア、または花粉、埃、フケまたはそれらの抽出物などのこれらに限定されないア レルゲン、または毒液、毒物、毒素または類毒素、ＤＮＡなどの核酸、または制 限のない任意の他の抗原であることができる。本発明に用いるのに好適なウイル スの抗原としては、ポリオウイルス、インフルエンザウイルス、ＨＩＶ、ＨＴＬ Ｖ、パピローマウイルス、アデノウイルス、パラインフルエンザウイルス、麻疹 ウイルス、オタフクカゼウイルス、呼吸器系シンシチウムウイルス、船積熱ウイ ルス、西部および東部脳脊髄炎ウイルス、日本Ｂ型脳脊髄炎ウイルス、ロシア春 −夏脳脊髄炎ウイルス、ブタコレラウイルス、肝炎ウイルス、ポックスウイルス 、狂犬病ウイルス、ジステンバーウイルス、ヘルペスウイルス、サイトメガロウ イルス、口蹄疫ウイルス、ライノウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシ ニアウイ ルス、および仮性狂犬病ウイルスなどのウイルスの抗原が挙げられるが、これら に限定されるものではない。似たものとしては、免疫原、ワクチン、阻害剤また は活性剤などを挙げることができるが、これらに限定されない。 知られているように、現在発売されておりまたは臨床試験が行なわれている全 てのワクチンおよび診断試薬は、病原性生物またはその成分の操作、修飾および ／または調節に基づいた方法によって得られるのが普通である。これらの方法か らは良好な結果が得られているが、問題がないわけではない。これらの方法に関 する最も大きな制限は、病原性生物またはその成分から直接誘導される情報およ び／または材料の利用可能性によって変わるという事実と結び付いている。 前記のような制限を解決するための従来の試みは、これまでのところは効率的 で且つ再現性のある実験法がなかったため成功しなかったのであり、特にこれら の試みでは、診断やワクチン療法に用いられる免疫原類似物を同定し特性決定す るのに十分な情報が提供されなかった。本発明は、従来提案されてきた方法の概 念および技術上の不適合性を解決する目的で新たな技術を開発することに主眼を おいていることを強調しなければならない。 本発明の主要な特徴は、患者からの血清試料を試薬として用いることに基づい た抗原および免疫原類似体の選定、および健康人からの血清試料を用いる対抗選 定段階の新規な方策である。 本発明による製造法を用いることにより、この制限を解決することができ、更 に下記の説明から明らかになる他の利点も提供される。 （本発明による）疾病に特異的な抗原または病原性生物に類似した免疫原また は診断試薬の製造法は、本質的に下記の操作を特徴とするものである。 疾病に特異的な抗原または病原性生物と反応する少なくとも１種類の抗体の同 定、 遺伝子操作技術を用いてファージキャプシドをコードする遺伝子に導入される ランダム配列オリゴヌクレオチドインサートから発現される、キャプシドオリゴ ペプチドの表面に現れるファージライブラリーの構築、 前記抗体によって、場合によっては第一の病原性血清を用いて選定した後、第 二の異なる病原性血清を用いるスクリーニングおよび健康人からの血清のパネル を用いる対抗スクリーニングによって認識されるキャプシド抗原性オリゴペプチ ドの表面に現れるファージの選定、 特定の病原性物質、または一般的には既知または未知の病因および／または病 原によるいわゆる自己免疫疾患に代表される免疫学的疾患などの疾病についての 診断用キットの処方を目的とした選定されたファージおよび／またはそのフラグ メントおよび／またはそれらの誘導体の随意使用、 前記抗原によって誘発される疾病の治療のための抗原−抗体反応の拮抗薬の処 方を目的とする選定されたファージおよび／またはそのフラグメントおよび／ま たはそれらの誘導体の随意使用、 化合物および／または天然または合成製剤に対する過敏症および／またはアレ ルギーの現象の耐性を誘発するための選定されたファージおよび／またはそのフ ラグメントおよび／またはそれらの誘導体の随意使用、 選定されたファージおよび／またはそのフラグメントおよび／またはそれらの 誘導体による、生物の随意免疫感作、および 免疫感作した生物の血清中における、疾病に特異的な前記抗原または生物を認 識する抗体の存在の随意証明。 前記病原性物質に特異的な抗体が予防的または中和性のものではあるが、この 免疫感作に用いられる材料は、前記の特異的な病原性物質に対するワクチンを処 方するのに用いることができる。 本発明によるファージライブラリーの構築は、線状ファージＭ１３、Ｆ１およ びＦｄ、またはそれらの誘導体を用いて有利に行うことができる。この理由は、 下記の通りである。 線状ファージは、分子生物学および遺伝子工学の分野で分子ベクターとして普 通に用いられる。例えば、単一ＤＮＡヘリックスを有するゲノムを含むその特徴 を利用することによって、それらは、特に、ＤＮＡ配列決定実験、直接的部位突 然変異誘発実験、およびタンパク質およびペプチドの発現に用いられており、 一本鎖ＤＮＡゲノムのキャプシド化に必要且つ十分な情報が、十分に特性決定 され、且つ他の分子ベクターに移行させることができ、 更に、追加のアミノ酸配列の添加または挿入によって、線状ファージのキャプ シドの少なくとも２種類のタンパク質を修飾することができることが示されてい る。生成するファージは、キャプシド化されており、複製およびほとんどの場合 に細菌細胞に感染する能力を保持している。異種アミノ酸配列はファージの表面 に現われ、抗体または場合により他の特異的な分子との相互作用によって認識す ることができる。 本発明による免疫原および診断試薬の製造法に用いることができる抗体は、モ ノクローン性抗体、ポリクローン性抗体、または血清に含まれる抗体であること ができる。後者の形態の態様が特に興味深いが、これは、天然および病原性抗原 の構造および特性について全く情報がない状態で、新規な抗原性および免疫原性 類似物を同定するための再現性のある実験適法策を初めて提供しているからであ る。 ランダム配列オリゴヌクレオチドインサートを有するファージキャプシドをコ ードする遺伝子は、ファージキャプシドのタンパク質VIIIをコードする遺伝子ま たは前記キャプシドのタンパク質IIIをコードする遺伝子であることができる。 本発明による方法は、疾患に関与するあらゆる抗体または生物に、制限なしに 適用することができる。モノクローン性抗体またはヒトＢ型肝炎ウイルスの表面 抗原（ＨＢｓＡｇ）に特異的な血清を用いて、良好な結果が得られている。 用いた抗体によって認識される抗原性オリゴヌクレオチドは、ベクターとして プラスミドｐＣ８９などを用いてランダム配列オリゴヌクレオチドインサートか らの発現によって得ることができる。 本発明による免疫原および診断試薬の製造法において、キャプシドの制限酵素 ＥｃｏＲＩを同定する部位（ＧＡＡＴＴＣ）から制限酵素ＢａｍＨＩを同定する 部位（ＧＧＡＴＣＣ）までのキャプシド中に、アミノ酸配列、 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９〜６８の一つを含むフ ァージを選定することができる。 本発明は、特定の病原性物質に対する免疫原または診断試薬の製造法に限定さ れるものではなく、前記の方法を用いて得られる免疫原および診断試薬、および 前記の方法で用いられるファージにも及ぶものである。 更に、本発明は、配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、Ｓ ＥＱ ＩＤ ＮＯ：６およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８を含んでなる群から選択さ れるヌクレオチド配列を全部または一部含むプラスミドｐＣ８９にも及ぶ。 本発明の方法から得られる免疫原は、診断試薬として有用であるだけでなく、 ワクチンまたは免疫感作剤としても有用である。ワクチンまたは免疫感作剤は、 当業界で知られている標準的方法によって、そのような治療を必要とする患者に 投与される。ワクチンまたは免疫感作剤は、単独でまたは組み合わせてのいずれ で投与し、用いることもできる。本発明のワクチンおよび免疫原は、ファージ、 またはそれから単離されるタンパク質およびペプチドを含むことができる。 本発明の方法から得られる免疫原を含むキットを、製造することができる。こ のようなキットは、試料中の抗原の存在を検出するのに用いられる。このような 特性決定は、法医学分析、および疫学的検討などの様々な目的に用いられるが、 これらに限定されるものではない。このようなキットは、少なくとも１個の容器 にきっちり閉じ込めるのに好適な分類されたキャリヤーを含む。このキャリヤー は更に、免疫原、および抗原を検出するのに好適な抗体などの試薬も含んでいる 。キャリヤーは、標識した抗原または酵素基質などの検出手段も含むことができ る。 本発明の免疫原およびワクチンを含んでなる薬学上有用な組成物は、薬学上許 容可能なキャリヤーの混合物によるなどの既知の方法によって処方することがで きる。このようなキャリヤーの例および処方の方法は、Remington's Pharmaceut ical Sciencesに見いだすことができる。有効な投与に好適な薬学上許容可能な 組成物を形成するには、このような組成物は本発明のワクチンまたは免疫原の有 効量を含む。 本発明の治療または診断組成物は、関連疾患を治療または診断するのに十分な 量で患者に投与される。有効量は、患者の症状、体重、性別および年齢などの各 種の要因によって変化することができる。他の要因としては、投与様式が挙げら れる。医薬組成物は、皮下、局所、経口および筋肉内などの様々な経路で患者に 提供することができる。 本発明のもう一つの目的は、本発明の新規な治療法に用いる好適な局所、経口 全身性および非経口の医薬処方を提供することである。本発明によって同定され るワクチンまたは免疫原を活性成分として含む組成物は、投与のための通常のビ ヒクル中で多種多様な治療投与形態で投与することができる。例えば、ワクチン および免疫原は、錠剤、カプセル（それぞれ、時限放出性（timed release）お よび徐放性製剤を含む）、丸剤、散剤、顆粒、エリキシル、チンキ、溶液、懸濁 液、シロップ、およびエマルジョンのような経口投与形態で、または注射によっ て投与することができる。同様に、それらは、静脈内（ボーラスおよび輸液）、 腹腔内、皮下、閉塞のあるまたはない局所、または筋肉内の形態で投与すること もでき、いずれも、製薬技術分野において通常の技術を有する者には周知の形態 を用いる。ワクチンおよび免疫原の有効且つ無毒性量を用いることができる。 ワクチンおよび免疫原の一日投与量は、成人当たり一日当たり０．０１〜１， ０００ｍｇの広範囲に亙って変化することができる。経口投与には、ワクチンお よび免疫原は、治療を行う患者に対して投与量を対症的に調整するため、活性成 分を０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０ 、１５．０、２５．０および５０．０ｍｇを含む刻み目を付けた（scored）また は刻み目を付けていない（unscored）錠剤の形態で提供するのが好ましい。ワク チンおよび免疫原の有効量は、通常は体重１ｋｇ当たり一日当たり約０．０００ １ｍｇ〜約１００ｍｇの投与量水準で供給される。この範囲は、更に詳細には、 体重１ｋｇ当たり一日当たり約０．００１ｍｇ〜約１０ｍｇである。ワクチンお よび免疫原の投与量は、所望な効果を得る目的で合わせるときに、調整される。 一方、これらの各種薬剤の投与量は、独立に最適にし且つ合わせて相乗的結果を 得て、それぞれの薬剤を単独で用いる場合と比較して病変を減少させることがで きる。 本発明のワクチンまたは免疫原は、単回投与量または一日一回投与量で投与す るか、または一日総投与量を２、３、または４回に分けて投与するのが有利であ る。また、本発明のワクチンまたは免疫原を、適当な鼻内ビヒクルを局所的に使 用して鼻内形態で、または当該技術分野で通常の技術を有する者には周知の経皮 用皮膚パッチの形態を用いて経皮的に投与することができる。経皮的輸送系の形 態で投与するには、投与は当然のことながら、投与法において断続的であるより は連続的になる。 ２種類以上の活性薬剤で組み合わせ処理を行うには、活性な薬剤同士が別の投 与処方にある場合、活性薬剤は同時に投与することができ、またはそれぞれを別 個にずらした時間に投与することもできる。 本発明のワクチンまたは免疫原を用いる投与法は、患者の型、種類、年齢、体 重、性別および医学的条件、治療を行う症状の重さ、投与経路、患者の腎および 肝機能、および用いる特定のワクチンまたは免疫原などの各種の要因に従って選 択される。通常の技術を有する医師または獣医であれば、症状の新興を防止し、 計測しまたは抑えるのに要する本発明のワクチンまたは免疫原の有効量を容易に 決定しおよび処方することができる。毒性のない効果を生じる範囲内で本発明の ワクチンまたは免疫原の濃度を得る場合の最適精度は、標的部位に利用可能な本 発明のワクチンまたは免疫原の速度論に基づいた方法が必要である。これは、本 発明のワクチンまたは免疫原の分布、平衡および除去が考慮される。 本発明の方法では、本明細書で詳細に記載されるワクチンまたは免疫原は活性 成分を形成することができ、典型的には、目的とする投与形態、すなわち、経口 用錠剤、カプセル、エリキシル、シロップなどに関して適当に選択され且つ通常 の製薬用実施と矛盾しない好適な薬学用希釈剤、賦形剤またはキャリヤー（本明 細書では集合的に「キャリヤー」材料と呼ぶ）と混合して投与される。 例えば、錠剤またはカプセルの形態での経口投与には、活性なワクチンまたは 免疫原成分を、エタノール、グリセロール、水などの経口用の毒性のない薬学上 許容可能な不活性なキャリヤーと組み合わせることができる。更に、所望である かまたは必要であるときには、適当な結合剤、滑剤、崩壊剤、および着色料を混 合物に配合することもできる。適当な結合剤としては、澱粉、ゼラチン、グルコ ースまたはβ−ラクトースのような天然砂糖、アラビアゴム、トラガカントゴム またはアルギン酸ナトリウムのような天然および合成ゴム、カルボキシメチルセ ルロース、ポリエチレングリコール、ワックスなどが挙げられるが、これらに限 定されるものではない。これらの投薬形態に用いられる滑剤としては、オレイン 酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸 ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられるが、これらに限 定されない。崩壊剤としては、澱粉、メチルセルロース、寒天 ベントナイト、 キサンタンゴムなどが挙げられるが、これらに限定されない。 液体形態に対しては、活性ワクチンまたは免疫原成分を、合成および天然ゴム 、例えばトラガカントゴム、アラビアゴム、メチルセルロースなどの適当に香味 を付けた懸濁剤または分散剤中で組み合わせることができる。用いることができ る他の分散助剤としては、グリセリンなどが挙げられる。非経口投与には、滅菌 懸濁液および溶液が望ましい。静脈内投与が望ましいときには、一般に適当な防 腐剤を含む等張製剤が用いられる。 活性なワクチンまたは免疫原成分を含む局所製剤は、当該技術分野で周知の各 種キャリヤー材料、例えばアルコール、アロエ・ベラ・ゲル、アラントイン、グ リセリン、ビタミンＡおよびＥ油、鉱油、ＰＰＧ２プロピオン酸ミリスチルなど と混合して、例えばアルコール性溶液、局所用清浄剤、スキンゲル、スキンロー ション、およびクリームまたはゲル処方物でのシャンプーを形成することができ る。 本発明のワクチンまたは免疫原は、リポソーム配送系の形態、例えば小型の単 一ラメラ小胞、大型の単一ラメラ小胞および多ラメラ小胞で投与することもでき る。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコ リンなどの各種のリン脂質から形成することができる。 本発明のワクチンまたは免疫原は、このワクチンまたは免疫原分子が結合して いる個々のキャリヤーとしてモノクローン性抗体を用いることによって配送する こともできる。本発明のワクチンまたは免疫原は、標的を設定することができる ワクチンまたは免疫原キャリヤーとしての可溶性ポリマーとカップリングするこ ともできる。このようなポリマーとしては、ポリビニル−ピロリドン、ピランコ ポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリル−アミドフェノール、ポリヒドロ キシ−エチルアスパルトアミドフェノール、またはパルミトイル残基で置換した ポリエチレンオキシドポリリシンが挙げられる。更に、本発明のワクチンまたは 免疫原は、ワクチンまたは免疫原の制御放出を行うのに有用な生分解性ポリマー のクラス、例えばポリ乳酸（polyactic acid）、ポリユプシロンカプロラクトン 、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロ− ピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋したまたは両親媒性 の ブロックコポリマーにカップリングすることができる。 この時点までは、本発明の主題について一般的説明を行ってきた。下記の例を 用いれば、本願の目的、特徴、利点および方法を一層よく理解する目的で、本発 明の具体的な態様について更に詳細な説明がなされる。下記の例は、それぞれ、 本発明による特定の病原性薬剤に対する免疫原および診断試薬の製造法の態様、 単一クローンを用いて免疫感作した試験動物からの血清の試料によって生じた効 果に基づいた免疫原の製造のために選定されたクローンの有効性の説明、および ＨＢｓＡｇで免疫感作した個体の血清との特定の反応に基づいて診断試薬の製造 のために選定されたクローンの有効性の説明に関するものである。 添付の唯一の図は、本発明の目的で設計されたプラスミドｐＣ８９の遺伝子地 図の一部を示している。制限部位のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配 列は、前記遺伝子地図の一部の下に示されている。成熟したｐＶＩＩＩのアミノ 末端の野生型アミノ酸配列を修飾して、単一ＥｃｏＲＩおよびＢａｍＨＩ部位を 導入した。 例１ ヒトＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）によって引き起こされる疾患に対する特定の診 断薬および免疫原の製造法 下記の方法を、本発明にしたがって用いた。 ファージキャプシドのタンパク質ＶＩＩＩをコードする遺伝子に導入したラン ダム配列のオリゴヌクレオチドインサートによって発現される、キャプシドの表 面に現われる９アミノ酸のオリゴヌクレオチドを有するファージからなるエピト ープの第一の「ライブラリー」を調製した。エピトープを含む組換えタンパク質 の発現のために、F．Feliciら、多価展示ベクターで発現したオリゴヌクレオチ ドの大ライブラリーから抗体リガンドの選択（Selection of Antibody Ligandsf rom a Large Library of Oligopeptides Expressed on a Multivalent Expositi on Vector），J．Mol．Biol.，（1991），222，301-310に記載の方法で設計した プラスミドｐＣ８９を用いた。その一部の遺伝子地図を図に示す。 A．Luzzagoら、ファージによって示されるペプチドによる不連続エピトープの 模倣、Ｉ．コントレインド・ペプチドのファージライブラリーを用いるヒトＨフ ェリチンのエピトープ地図（Mimicking of discontinuous epitopes by phage d isplayed peptides，I．Epitope mapping of human H Ferritin using a phagel ibrary of contrained peptides），Gene，（1993），128，51-57に記載のよう に、２個のシステイン残基がインサートの２つの末端に存在する点が異なる以外 は、第一のライブラリーと同様にして第二のエピトープ「ライブラリー」を調製 した。 ＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の組換え形態を用いて免疫感作した個体からの 血清の試料を、ＨｂｓＡｇに対する特異的抗体の存在について試験した。次に、 ＨＢｓＡｇに対する高抗体含量を有する血清を用いた。 これらの血清に含まれる抗体を固形マトリックス上で固定して、ファージライ ブラリーと共にインキュベーションした。次に、これらの抗体によって特異的に 保持されたファージを溶出して、増幅した。 前記のようにして選択されたファージに感染した細菌を固形培地で培養し、ニ トロセルロースフィルターに移した。次に、これらのフィルターを、第一の濃厚 化に用いた血清とは異なるＨＢｓＡｇに対して免疫感作した個体からの血清でイ ンキュベーションした。これらの血清に含まれる抗体によって特異的に認識され るファージを同定し、単離した。 前記のように同定したファージを、ＥＬＩＳＡ試験を用いて、ＨＢｓＡｇには 免疫感作しない個体の血清に含まれる抗体に対する反応性について対抗選択した 。 この対抗選択から生じるファージを、ＥＬＩＳＡ試験における競争によって、 抗ＨＢｓＡｇ抗体に対する反応の特異性についてチェックした。 次に、この方法で同定したエピトープをコードするヌクレオチド配列を決定し た（配列番号：４，５，６，８）。 例２ ヒト肝炎ウイルス（ＨＢＶ）によって引き起こされる疾病についての特異的な免 疫原として選定されたファージの有効性の説明 下記の方法を用いた。 前記のようにして選択したファージを増幅し、精製した。 精製したファージを、V.F．de la Cruzら、遺伝子操作を行った線状ファージ による異種配列の免疫原性およびエピトープ地図作成（Immunogenicity and Epi tope Mapping of Foreign Sequences via Genetically Engineered Filamentous Phage），J．Biol．Chem.，（1988），263，9，4318-4322、およびJ．Greenwoo dら、線状バクテリオファージ上の異種ペプチドの多重展示（Multiple Display of Foreign Peptides on a Filamentous Bacteriophage），J．Mol．Biol.，（1 991），220，821-827に記載の方法によって、試験動物（マウス、ラット、およ びウサギ）に注射した。 前記のようにして免疫感作した動物の血清を、ＥＬＩＳＡ試験を用いてＨＢｓ Ａｇと相互作用することができる抗体の存在について試験した。この方法により 、前記のようにして免疫感作した試験動物の血清中に抗−ＨＢｓＡｇ抗体が高濃 度で存在することを示した。 前記の操作法によって同定したエピトープのアミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ Ｎ Ｏ：１〜３およびＮＯ：７）を再現する合成オリゴヌクレオチドを免疫原として 用いて、同じ免疫感作法を採用した。この方法により、前記のようにして免疫感 作した試験動物の血清中に抗−ＨＢｓＡｇ抗体を高濃度で含むことを示した。 前記の操作法に従って同定したエピトープのアミノ酸配列を再現する合成オリ ゴペプチドを表面上に示すヒトフェリチンの重鎖の細菌中に生成した免疫原組換 え形態を用いて、同じ免疫感作した方法を採用した。この方法により、前記と同 様にして免疫感作した試験動物の血清中に抗−ＨＢｓＡｇ抗体を高濃度で含むこ とを示した。 例３ 血清中における抗−ＨＢｓＡｇ抗体の存在を計測するための診断試薬としての選 択されたファージの有効性の説明 下記の操作法を含んでなる方法を用いた。 ＨＢｓＡｇに対して予防接種した個体からの２０個のヒト血清を、記載したペ プチド配列（配列番号：１〜３および７）を示す例１に記載の通りに同定したフ ァージクローンを具体的に認識する能力についてＥＬＩＳＡ試験で分析した。結 果は、血清の８０％が、選択された４個の配列の少なくとも１個を具体的に認識 することを示している。 Ｂ型肝炎に罹っており且つ抗−ＨＢｓＡｇ抗体を含む患者からの１６個のヒト 血清を、記載したペプチド配列（配列番号：１〜３および７）を示す例１に記載 の通りに同定したファージクローンを具体的に認識する能力についてＥＬＩＳＡ 試験で分析した。結果は、血清の４４％が、選択された４個の配列の少なくとも １個を具体的に認識することを示している。 ＨＢｓＡｇに対して予防接種していない個体からの２０個のヒト血清を、記載 したペプチド配列（配列番号：１〜３および７）を示す例１に記載の通りに同定 したファージクローンを具体的に認識する能力についてＥＬＩＳＡ試験で分析し た。結果は、血清は、選択された４個の配列のいずれについても具体的に認識し ないことを示している。 例４ ヒトＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によって生じる疾病についての特異的な診断試 薬および免疫原の製造法 下記の方法を本発明にしたがって用いた。 ファージキャプシドのタンパク質ＶＩＩＩをコードする遺伝子に導入したラン ダム配列のオリゴヌクレオチドインサートによって発現される、キャプシドの表 面に現われる９アミノ酸のオリゴヌクレオチドを有するファージからなるエピト ープの第一の「ライブラリー」を調製した。エピトープを含む組換えタンパク質 の発現のために、F．Feliciら、多価展示ベクターで発現したオリゴヌクレオチ ドの大ライブラリーから抗体リガンドの選択（Selection of Antibody Ligandsf rom a Large Library of Oligopeptides Expressed on a Multivalent Expositi on Vector），J．Mol．Biol.，（1991），222，301-310に記載の方法で設計した プラスミドｐＣ８９を用いた。その一部の遺伝子地図を図に示す。 A．Luzzagoら、ファージによって示されるペプチドによる不連続エピトープの 模倣、Ｉ．コントレインド・ペプチドのファージライブラリーを用いるヒトＨフ エリチンのエピトープ地図（Mimicking of discontinuous epitopes by phage d isplayed peptides，I．Epitope mapping of human H Ferritin using a phagel ibrary of contrained peptides），Gene，（1993），128，51-57に記載のよう に、２個のシステイン残基がインサートの２つの末端に存在する点が異なる以外 は、第一のライブラリーと同様にして第二のエピトープ「ライブラリー」を調製 した。 Ｃ型肝炎に感染したことを臨床的特徴とする患者からの血清を次に、用いた。 これらの血清に含まれる抗体を固形マトリックス上で固定して、ファージライ ブラリーと共にインキュベーションした。次に、これらの抗体によって特異的に 保持されたファージを溶出して、増幅した。 前記のようにして選択されたファージに感染した細菌を固形培地で培養し、ニ トロセルロースフィルターに移した。次に、これらのフィルターを、第一の濃厚 化に用いた血清とは異なるＨＣＶに感染した患者からの血清と共にインキュベー ションした。これらの血清に含まれる抗体によって特異的に認識されるファージ を同定し、単離した。 前記ファージと抗−ＨＣＶ抗体との反応特異性を、下記のようにして統計的に 評価する。ＨＣＶに感染した患者からの血清の有意数がファージクローンを認識 する頻度を、ＥＬＩＳＡ試験で計測する。同時に、これもまたＥＬＩＳＡ試験を 用いて、ＨＣＶに感染していない個体からの血清の有意数によって、同じファー ジクローンが認識されないことを試験する。それぞれのファージクローンについ て、ＨＣＶに感染した患者からの血清による認識の頻度を、感染していない個体 からの血清の認識頻度と比較することによって、特異性を評価する。 次に、この方法で同定したエピトープペプチド配列を決定した（配列番号：９ 〜３０）。 例５ 血清中の抗−ＨＣＶ抗体の存在を計測するための診断試薬として選択されたファ ージの有効性の説明 下記の操作法を含んでなる方法を用いた。 Ｃ型肝炎に感染していない個体からの４０個のヒト血清を、記載したペプチド 配列（配列番号：９〜２３）を示す、例４に記載した通りに同定したファージク ローンを特異的に認識する能力についてＥＬＩＳＡ試験で分析した。結果は、血 清は選択された配列を全く認識しないことを示している。 ＨＣＶに感染した患者からの４２個のヒト血清を、記載したペプチド配列 （配列番号：９〜２３）を示す、例４に記載した通りに同定したファージクロー ンを特異的に認識する能力についてＥＬＩＳＡ試験で分析した。結果は、それぞ れのファージクローンは、選択された血清によって特異的に認識され、頻度は１ ５〜６５％である（表Ｉ）ことを示している。同じ結果は、試験した４２個の血 清のそれぞれが、選択された配列の少なくとも１個を特異的に認識することも示 している。 選択された配列は、検討を行った総ての患者の血液に抗−ＨＣＶ抗体が含まれ ることを効果的に示し、感染していない個体からの血液とは反応しない。これら のデーターは、選択されたファージクローンの群は、Ｃ型肝炎ウイルスによる感 染の診断についての信頼し得る系を形成することを示している。 例６ ヒトＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によって引き起こされおよび／または関連した 疾病であるＩＩ型のクリオグロブリン血症のための特異的な診断試薬および免疫 原の製造法 下記の方法を、本発明にしたがって用いた。 ファージキャプシドのタンパク質ＶＩＩＩをコードする遺伝子に導入したラン ダム配列のオリゴヌクレオチドインサートによって発現される、キャプシドの表 面に現われる９アミノ酸のオリゴヌクレオチドを有するファージからなるエピト ープの第一の「ライブラリー」を調製した。エピトープを含む組換えタンパク質 の発現のために、F．Feliciら、多価展示ベクターで発現したオリゴヌクレオチ ドの大ライブラリーから抗体リガンドの選択（Selection of Antibody Ligandsf rom a Large Library of Oligopeptides Expressed on a Multivalent Expositi on Vector），J．Mol．Biol.，（1991），222，301-310に記載の方法で設計した プラスミドｐＣ８９を用いた。その一部の遺伝子地図を図に示す。 A．Luzzagoら、ファージによって示されるペプチドによる不連続エピトープの 模倣、Ｉ．コントレインド・ペプチドのファージライブラリーを用いるヒトＨフ ェリチンのエピトープ地図（Mimicking of discontinuous epitopes by phagedi splayed peptides，I．Epitope mapping of human H Ferritin using a phageli brary of contrained peptides），Gene，（1993），128，51-57に記載のように 、２個のシステイン残基がインサートの２つの末端に存在する点が異なる以外は 、第一のライブラリーと同様にして第二のエピトープ「ライブラリー」を調製し た。 ヒトＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によって引き起こされおよび／または関連し たＩＩ型クリオグロブリン血症に罹っている個体からの抗体の試料を固形マトリ ックス上で固定して、ファージライブラリーと共にインキュベーションした。次 に、これらの抗体によって特異的に保持されたファージを溶出して、増幅した。 前記のようにして選択されたファージに感染した細菌を固形培地で培養し、ニ トロセルロースフィルターに移した。次に、これらのフィルターを、第一の濃厚 化に用いた血清とは異なるヒトＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によって引き起こさ れおよび／または関連したＩＩ型クリオグロブリン血症に罹っている患者からの 血清と共にインキュベーションした。これらの血清に含まれる抗体によって特異 的に認識されるファージを同定し、単離した。 前記のように同定したファージを、ＥＬＩＳＡ試験を用いて、ヒトＣ型肝炎ウ イルス（ＨＣＶ）によって引き起こされおよび／または関連したＩＩ型クリオグ ロブリン血症に罹っていない個体の血清に含まれる抗体に対する反応性について 対抗選択（counter-selected）した。 この対抗選択から生じるファージとヒトＣ型肝炎ウイルスによって引き起こさ れおよび／または関連したＩＩ型クリオグロブリン血症に特異的な抗体との反応 の特異性について下記のようにして統計的に評価する。ヒトＣ型肝炎ウイルスに よって引き起こされおよび／または関連したＩＩ型クリオグロブリン血症に罹っ ている患者からの血清の有意数がファージクローンを認識する頻度を、ＥＬＩＳ Ａ試験で決定する。同時に、これもまたＥＬＩＳＡ試験を用いて、罹患していな い個体からの血清の有意数によって、同じファージクローンが認識されないこと を試験する。それぞれのファージクローンについて、罹患した患者からの血清に よる認識の頻度を、健康な個体からの血清の認識頻度と比較することによって、 特異性を評価する。 次に、この方法で同定したエピトープペプチド配列を決定した（配列番号：３ １〜４２）。 例７ ヒトＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によって引き起こされおよび／または関連した 疾病であるＩＩ型クリオグロブリン血症に特異的な抗体の血清中における存在を 計測するための診断試薬としての選択されたファージの有効性の説明 下記の操作を含んでなる方法を用いた。 ヒトＣ型肝炎（ＨＣＶ）によって引き起こされおよび／または関連したＩＩ型 クリオグロブリン血症に感染していない個体からの１６個のヒト血清を、記載し たペプチド配列（配列番号：３１〜４２）を示す、例６に記載した通りに同定し たファージクローンを特異的に認識する能力についてＥＬＩＳＡ試験で分析した 。結果は、血清は選択された配列を全く認識しないことを示している。ヒトＣ型 肝 炎（ＨＣＶ）によって引き起こされおよび／または関連したＩＩ型クリオグロブ リン血症に感染した患者からの８０個のヒト血清を、記載したペプチド配列（配 列番号：３１〜４２）を示す、例６に記載した通りに同定したファージクローン を特異的に認識する能力についてＥＬＩＳＡ試験で分析した。結果は、それぞれ のファージクローンは、選択された血清によって特異的に認識され、頻度は１５ 〜６０％であることを示している。 選択された配列は、検査したすべての患者の血液中に、ヒトＣ型肝炎ウイルス （ＨＣＶ）によって引き起こされおよび／または関連したＩＩ型クリオグロブリ ン血症に特異的な抗体の存在を有効に示すものであり、その疾患に罹患していな い個体からの血液とは反応しない。これらのデータは、選択されたファージクロ ーンのグループが、ヒトＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によって引き起こされおよ び／または関連したＩＩ型クリオグロブリン血症の診断のための信頼できる系を 形成する。 選択された配列は、Ｔリンパ球および「ナチュラルキラー」細胞によって特異 的に発現されるＬＡＧ−３遺伝子配列と有意な類似性を示している。ファージク ローンを選択するのに用いた同じ抗体は、選択されたファージクローンの配列と 類似しているタンパク質ＬＡＧ−３の一部と反応する。この認識は、選択された ファージクローンとの競争によって廃止することができる。これらの結果は、選 択されたファージクローンは、タンパク質ＬＡＧ−３に対する自己抗体を遮断す るのに用いることができることを示している。 例８ Ｉ型の糖尿病自己免疫疾患の診断試薬の製造法、および自己免疫疾患を特性決定 する自己抗体の血液中における存在を計測するための診断試薬としての選択され たファージの有効性の説明 下記の方法を本発明によって用いた。 ファージキャプシドのタンパク質ＶＩＩＩをコードする遺伝子に導入したラン ダム配列のオリゴヌクレオチドインサートによって発現される、キャプシドの表 面に現われる９アミノ酸のオリゴヌクレオチドを有するファージからなるエピト ープの第一の「ライブラリー」を調製した。エピトープを含む組換えタンパク質 の発現のために、F．Feliciら、多価展示ベクターで発現したオリゴヌクレオチ ドの大ライブラリーから抗体リガンドの選択（Selection of Antibody Ligandsf rom a Large Library of Oligopeptides Expressed on a Multivalent Expositi on Vector），J．Mol．Biol.，（1991），222，301-310に記載の方法で設計した プラスミドｐＣ８９を用いた。 A．Luzzagoら、ファージによって示されるペプチドによる不連続エピトープの 模倣、Ｉ．コントレインド・ペプチドのファージライブラリーを用いるヒトＨフ ェリチンのエピトープ地図（Mimicking of discontinuous epitopes by phagedi splayed peptides，I．Epitope mapping of human H Ferritin using a phageli brary of contrained peptides），Gene，（1993），128，51-57に記載のように 、２個のシステイン残基がインサートの２つの末端に存在する点が異なる以外は 、第一のライブラリーと同様にして第二のエピトープ「ライブラリー」を調製し た。 Ｉ型の糖尿病の臨床的病歴の最初における糖尿病患者からの血清の試料を、抗 インシュリンおよびＩＣＡ抗体、またはランゲルハンス島に対する抗体などの疾 患に特徴的なある主の既知のマーカーに特異的な抗体の存在について試験した。 次に、高抗体含量を有する血清を用いて選択した。 この血清に含まれる抗体を固形マトリックス上で固定して、ファージライブラ リーと共にインキュベーションした。次に、これらの抗体によって特異的に保持 されたファージを溶出して、増幅した。 前記のようにして選択されたファージに感染した細菌を固形培地で培養し、ニ トロセルロースフィルターに移した。次に、これらのフィルターを、第一の濃厚 化に用いた血清とは異なる糖尿病患者からの血清と共にインキュベーションした 。これらの血清に含まれる抗体によって特異的に認識されるファージを同定し、 単離した。 前記のように同定したファージを、ＥＬＩＳＡ試験を用いて、Ｉ型糖尿病に罹 っていない患者の血清に含まれる抗体に対する反応性について対抗選択した。 この対抗選択から生じるファージを、様々な段階の疾患での糖尿病患者からの 結成を用いて大規模スクリーニングによって反応の特異性をチェックした。次に 、このやり方で同定されたエピトープをコードするヌクレオチド配列を決定した 。 Ｉ型糖尿病の第一の臨床症状の時点で患者から採取した２５個のヒト血清を、 ＥＬＩＳＡ試験を用いて、記載された通りに同定され且つ記載されたペプチド配 列（配列番号：４３、配列番号：４４、配列番号：４５、配列番号：４６、配列 番号：４７）を示すファージクローンを特異的に認識する能力について分析した 。結果は、血清の３６％が、選択された５個の配列の少なくとも１個を特異的に 認識したことを示している。 糖尿病以外の自己免疫疾患の患者から採取された１６個の血清を、ＥＬＩＳＡ 試験を用いて、例８に記載した通りに同定され且つ記載されたペプチド配列（配 列番号：４３、配列番号：４４、配列番号：４５、配列番号：４６、配列番号： ４７）を示すファージクローンを特異的に認識する能力について分析した。結果 は、血清の１８％が、選択された５個の配列の少なくとも１個を特異的に認識し たことを示している。 糖尿病または他の事故免疫疾患に罹患していない個体から採取した５０個のヒ ト血清を、ＥＬＩＳＡ試験を用いて、例８に記載した通りに同定され且つ記載さ れたペプチド配列（配列番号：４３、配列番号：４４、配列番号：４５、配列番 号：４６、配列番号：４７）を示すファージクローンを特異的に認識する能力に ついて分析した。結果は、血清のいずれも、選択された５個の配列を全く特異的 に認識しないことを示している。 例９ ヒト腫瘍タンパク質ＮＥＵ（ｐ１８５^HER2）の免疫応答の検出および誘導に特異 的な診断試薬および免疫原の製造法 下記の方法を、本発明によって使用した。 モノクローン性抗体ＭＧｒ２およびＭＧｒ６を、ヒト腫瘍性タンパク質ＮＥＵ （ｐ１８５^HER2）を特異的に認識するものとして同定した。 （例１に記載したように）キャプシドの表面にオリゴヌクレオチドを現わすフ ァージからなる２つのエピトープ「ライブラリー」を作成した後、これをバイオ パンニング（biopanning）法を用いて検討して（V．Parmley，S.F．& Smith，G. P．抗体選択性の線状ｆｄファージベクター：標的遺伝子のアフィニティ精製（A ntibody-selectable filamentous fd phage vectors：affinity purification o f target genes），Gene，（1988），73，305-318）、前記の抗体と特異的に反 応するクローンを選択した。 前記のように選択したファージによって感染した細菌を固形培地上で培養し、 ニトロセルロースフィルター上に移した。次に、これらのフィルターをモノクロ ーン性抗体ＭＧｒ２およびＭＧｒ６と共にインキュベーションした。この方法で 同定したファージの反応特異性を、ＥＬＩＳＡ試験を用いて制御した。 次に、前記のように同定したエピトープのペプチド配列を、対応するヌクレオ チドコード配列を分析することによって決定した（ＭＧｒ２については、配列番 号：４８〜５６、ＭＧｒ６については、配列番号：５７〜６８）。 前記のように選択されたファージを増幅し、精製し、例２に記載の操作法にし たがって試験動物に注射した。この方法で免疫感作した動物からの血清を、免疫 組織化学試験を用いて、ＮＥＵと相互作用することができる抗体の存在について 試験した。 この方法は、この方法で免疫感作した試験動物の血液中の抗−ＮＥＵ抗体の有 意な濃度の存在を示していた。 この例に記載のファージで得られた結果は、ヒト腫瘍タンパク質ＮＥＵの置換 された抗原性および免疫原性として前記ファージの有効性を示す。これにより、 このようにして得られたファージまたはその誘導体を、腫瘍に罹っている患者か らの血清中において抗−ＮＥＵ抗体を検出するための試薬として、および／また は抗−ＮＥＵ抗体応答を促進する特異的免疫原として用いることができる。 配列表 一般的情報 （i） 出願人：ISTITUTO DI RICERCHE DI BIOLOGIA MOLECOLARE P．ANGELETTI S.p.A． （ii） 発明の名称：免疫原および診断試薬の製造法、およびそれによって得ら れる免疫原および診断試薬 （iii） 配列の数：６８ （iv） 問合わせ宛先： （A） 住所：Societa Italiana Brevetti （B） 町名：Piazza di Pietra，39 （C） 都市名：ローマ （D） 国名：イタリア （E） 郵便番号：Ｉ−００１８６ （viii）代理人情報 （A）名称：DI CERBO，Mario（Dr.） （B） 参照番号：ＲＭ／０９００４１／ＭＤＣ （ix） 電話通信情報 （A） 電話：０６／６７８５９４１ （B） ファクシミリ：０６／６７９４６９２ （C） テレックス：６１２２８７ ＲＯＰＡＴ （1） 配列番号：１に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：１ （2） 配列番号：２に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：２ （3） 配列番号：３に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：３ （4） 配列番号：４に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：４７塩基対 （B） 型：ヌクレオチド性 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：ＤＮＡ （iii） ハイポセティカル配列：no （iv） アンチセンス：no （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリヌクレオチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：４ （5） 配列番号：５に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：４７塩基対 （B） 型：ヌクレオチド性 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：ＤＮＡ （iii） ハイポセティカル配列：no （iv） アンチセンス：ｎｏ （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリヌクレオチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：５ （6） 配列番号：６に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：４７塩基対 （B） 型：ヌクレオチド性 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：ＤＮＡ （iii） ハイポセティカル配列：no （iv） アンチセンス：no （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリヌクレオチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：６ （7） 配列番号：７に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：７ （8） 配列番号：８に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：４７塩基対 （B） 型：ヌクレオチド性 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：ＤＮＡ （iii） ハイポセティカル配列：no （iv） アンチセンス：no （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリヌクレオチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：８ （9） 配列番号：９に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：９ （10） 配列番号：１０に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 列：配列番号：１０ （11） 配列番号：１１に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：１１ （12） 配列番号：１２に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：１２ （13） 配列番号：１３に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：１３ （14） 配列番号：１４に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：１４ （15） 配列番号：１５に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：１５ （16） 配列番号：１６に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：１６ （17） 配列番号：１７に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：１７ （18） 配列番号：１８に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：１８ （19） 配列番号：１９に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：１９ （20） 配列番号：２０に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：２０ （21） 配列番号：２１に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：２１ （22） 配列番号：２２に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１２アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：２２ （23） 配列番号：２３に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１２アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：２３ （24） 配列番号：２４に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１２アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：２４ （25） 配列番号：２５に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１２アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：２５ （26） 配列番号：２６に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１２アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質（iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：２６ （27） 配列番号：２７に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１２アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：２７ （28） 配列番号：２８に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１２アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特0011徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：２８ （29） 配列番号：２９に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１２アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：２９ （30） 配列番号：３０に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１２アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：３０ （31） 配列番号：３１に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：３１ （32） 配列番号：３２に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１４アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：３２ （33） 配列番号：３３に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：３３ （34） 配列番号：３４に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：３４ （35） 配列番号：３５に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B）同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：３５ （36） 配列番号：３６に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：３６ （37） 配列番号：３７に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：３７ （38） 配列番号：３８に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：３８ （39） 配列番号：３９に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：３９ （40） 配列番号：４０に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：４０ （41） 配列番号：４１に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：４１ （42） 配列番号：４２に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：４２ （43） 配列番号：４３に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：４３ （44） 配列番号：４４に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：４４ （45） 配列番号：４５に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：４５ （46） 配列番号：４６に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：４６ （47） 配列番号：４７に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：４７ （48） 配列番号：４８に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：４８ （49） 配列番号：４９に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：４９ （50） 配列番号：５０に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：５０ （51） 配列番号：５１に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：５１ （52） 配列番号：５２に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：５２ （53） 配列番号：５３に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：５３ （54） 配列番号：５４に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：ｙｅｓ （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：５４ （55） 配列番号：５５に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：５５ （56） 配列番号：５６に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：５６ （57） 配列番号：５７に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：５７ （58） 配列番号：５８に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：５８ （59） 配列番号：５９に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：５９ （60）配列番号：６０に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：６０ （61） 配列番号：６１に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：６１ （62） 配列番号：６２に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：６２ （63） 配列番号：６３に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：６３ （64） 配列番号：６４に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：６４ （65） 配列番号：６５に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：６５ （66） 配列番号：６６に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：６６ （67） 配列番号：６７に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：６７ （68） 配列番号：６８に対する情報 （i） 配列の特徴 （A） 長さ：１５アミノ酸 （B） 型：アミノ酸 （C） 鎖の数：一本鎖 （D） トポロジー：直鎖状 （ii） 分子の型：組換えタンパク質 （iii） ハイポセティカル配列：yes （v） フラグメント型：中間部 （vii） 直接の供給源 （A） ライブラリー：ファージ上の組換えペプチド （B） クローン：ファージ性 （ix） その他の特徴 （A） 名称：ポリペプチド （B） 同定法：特異抗体を用いて選択 （xi） 配列：配列番号：６８

【手続補正書】特許法第１８４条の７第１項 【提出日】１９９５年３月２３日 【補正内容】 請求の範囲 １． 疾病に特異的な病原性生物の抗原の性質および／または同定についての 情報なしで、且つ特異抗体の性質および／または構造および／または特性につい ての情報なしで実行することができる操作法を用いて、疾病に特異的な抗原また は病原性生物に類似した免疫原または診断試薬の製造法において、下記の操作を 含む製造法： このような抗原および／または病原性生物を特性決定しておらずまたは未知で ある場合でも、疾病に特異的な抗原または病原性生物と反応する特性決定されて いない抗体を含む少なくとも２種類の血清の同定、 遺伝子操作技術を用いてファージキャプシドタンパクをコードする遺伝子に導 入されるランダム配列オリゴヌクレオチドインサートから発現される、キャプシ ドオリゴペプチドの表面に現れるファージライブラリーの構築、 第一の病原性血清を用い、続いて第二の異なる病原性血清を用いるスクリーニ ングおよび健康人からの血清のパネルを用いる対抗スクリーニングによってキャ プシド抗原性オリゴペプチドの表面に現れるファージの選定、 特定の病原性物質、または一般的には既知または未知の病因および／または病 原によるいわゆる自己免疫疾患に代表される免疫学的疾患を含む疾病についての 診断用キットの処方を目的とした選定されたファージおよび／またはそのフラグ メントおよび／またはそれらの誘導体の随意使用、 前記抗原によって誘発される疾病の治療のための抗原−抗体反応の拮抗薬の処 方を目的とする、選定されたファージおよび／またはそのフラグメントおよび／ またはそれらの誘導体の随意使用、 化合物および／または天然または合成製剤に対する過敏症および／またはアレ ルギーの現象の耐性を誘発するための選定されたファージおよび／またはそのフ ラグメントおよび／またはそれらの誘導体の随意使用、 選定されたファージおよび／またはそのフラグメントおよび／またはそれらの 誘導体による、生物の随意免疫感作、および 免疫感作した生物の血清中における、疾病に特異的な前記抗原または生物を認 識する抗体の存在の随意証明。 ２． 前記病原性薬剤に特異的な抗体が予防的または中和性のものである場合 に、前記免疫感作に用いられる材料を用いて、前記の特異的な病原性薬剤に対す るワクチンを処方する、請求の範囲第１項に記載の疾患に特異的な抗原または病 原性生物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ３． ファージライブラリーの構築を、Ｍ１３、Ｆ１、Ｆｄおよびそれらの誘 導体からなる群から選択される線状ファージを用いて行う、請求の範囲第１〜２ のいずれか１項に記載の疾患に特異的な抗原または病原性生物を模倣する免疫原 および診断試薬の製造法。 ４． ランダム配列オリゴヌクレオチドインサートを有するファージキャプシ ドをコードする遺伝子が、ファージキャプシドのタンパク質ＶＩＩＩをコードす る遺伝子である、請求の範囲第１〜３項のいずれか１項に記載の疾患に特異的な 免疫原または病原性生物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ５． ランダム配列オリゴヌクレオチドインサートを有するファージキャプシ ドをコードする遺伝子が、ファージキャプシドのタンパク質ＩＩＩをコードする 遺伝子である、請求の範囲第１〜３項のいずれか１項に記載の、疾患に特異的な 免疫原または病原性生物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ６． 病原性薬剤がヒトＢ型肝炎ウイルス（ＨＢｓＡｇ）、ヒトＣ型肝炎ウイ ルスおよび糖尿病のような自己免疫疾患に病理学的に結合した抗原の表面抗原か らなる群から選択される、請求の範囲第１〜５項のいずれか１項に記載の、疾患 に特異的な抗原または病原性生物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ７． 病原性試薬の面における活性を中和しまたは予防性である抗体が、ヒト Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢｓＡｇ）のウイルスの表面抗原を用いて免疫感作した個 体の血清に、またはヒトＣ型肝炎ウイルスに感染した個体の血清に含まれる、請 求の範囲第６項に記載の疾患に特異的な抗原または病原性生物を模倣する免疫原 および診断試薬の製造法。 ８． 用いられる抗体によって認識される抗原性オリゴペプチドがプラスミド ｐＣ８９をベクターとして用いてランダム配列オリゴヌクレオチドインサートの 発現から得られる、請求の範囲第１〜７項のいずれか１項に記載の、疾患に特異 的な抗原または病原性生物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ９． ファージライブラリーの構築のために、線状ファージが、そのキャプシ ド、タンパク質ＶＩＩＩまたはタンパク質ＩＩＩに、制限酵素ＥｃｏＲＩ（ＧＡ ＡＴＴＣ）を同定する部位からＢａｍＨＩ制限酵素（ＧＧＡＴＣＣ）を同定する 部位までにおいて、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：７ および配列番号９〜４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求の 範囲第１〜８項のいずれか１項に記載の疾患に特異的な抗原または病原性生物を 模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 １０． キャプシドの表面に抗原性オリゴペプチドを示し、且つ請求の範囲第 １〜９項のいずれか１項に記載の疾患に特異的な抗原または病原性生物を模倣す る免疫原または診断試薬の製造過程において得られることを特徴とする、ファー ジ。 １１． 請求の範囲第１〜９項のいずれか１項に記載の方法を用いて得られる ことを特徴とする、特異的な病原性薬剤に対するワクチン。 １２． 請求の範囲第１〜９項のいずれか１項に記載の方法で用いられ、且つ 配列番号：４配列番号：５、配列番号：６、および配列番号：８からなる群から 選択されるヌクレオチド配列を全部または部分的に含むことを特徴とする、修飾 ｐＣ８９プラスミド。 【手続補正書】特許法第１８４条の８ 【提出日】１９９５年７月５日 【補正内容】 請求の範囲 １． 疾病に特異的な病原性生物の抗原の性質および／または同定についての 情報なしで、且つ特異抗体の性質および／または構造および／または特性につい ての情報なしで実行することができる操作法を用いて、疾病に特異的な抗原また は病原性生物に類似した免疫原または診断試薬の製造法において、下記の操作を 含む製造法： このような抗原および／または病原性生物を特性決定しておらずまたは未知で ある場合でも、疾病に特異的な抗原または病原性生物と反応する特性決定されて いない抗体を含む少なくとも２種類の血清の同定、 遺伝子操作技術を用いてファージキャプシドタンパクをコードする遺伝子に導 入されるランダム配列オリゴヌクレオチドインサートから発現される、キャプシ ドオリゴペプチドの表面に現れるファージライブラリーの構築、 第一の病原性血清を用いてキャプシド抗原性オリゴペプチドの表面に現われる ファージを選択し、続いて追加の病原性血清を用いるスクリーニングを行って、 試験した血清の総てまたはほとんどと反応するオリゴペプチドを示すファージを 同定し、およびコントロールとして採取した個体の別の組からの血清のパネルを 用いる対抗スクリーニングによって、コントロールの個体からの総てのまたはほ とんどの血清と反応しないオリゴペプチドを同定すること、 特定の病原性物質、または一般的には既知または未知の病因および／または病 原によるいわゆる自己免疫疾患に代表される免疫学的疾患を含む疾病についての 診断用キットの処方を目的とした選定されたファージおよび／またはそのフラグ メントおよび／またはそれらの誘導体の随意使用、 前記抗原によって誘発される疾病の治療のための抗原−抗体反応の拮抗薬の処 方を目的とする、選定されたファージおよび／またはそのフラグメントおよび／ またはそれらの誘導体の随意使用、 化合物および／または天然または合成製剤に対する過敏症および／またはアレ ルギーの現象の耐性を誘発するための選定されたファージおよび／またはそのフ ラグメントおよび／またはそれらの誘導体の随意使用、 選定されたファージおよび／またはそのフラグメントおよび／またはそれらの 誘導体による、生物の随意免疫感作、および 免疫感作した生物の血清中における、疾病に特異的な前記抗原または生物を認 識する抗体の存在の随意証明。 ２． ファージライブラリーの構築を、Ｍ１３、Ｆ１、Ｆｄおよびそれらの誘 導体からなる群から選択される線状ファージを用いて行う、請求の範囲第１項に 記載の疾患に特異的な抗原または病原性生物を模倣する免疫原および診断試薬の 製造法。 ３． ランダム配列オリゴヌクレオチドインサートを有するファージキャプシ ドをコードする遺伝子が、ファージキャプシドのタンパク質ＶＩＩＩをコードす る遺伝子である、請求の範囲第１項または第２項に記載の、疾患に特異的な免疫 原または病原性生物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ４． ランダム配列オリゴヌクレオチドインサートを有するファージキャプシ ドをコードする遺伝子が、ファージキャプシドのタンパク質ＩＩＩをコードする 遺伝子である、請求の範囲第１項または第２項に記載の、疾患に特異的な免疫原 または病原性生物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ５． 病原性薬剤がヒトＢ型肝炎ウイルス（ＨＢｓＡｇ）、ヒトＣ型肝炎ウイ ルスおよび糖尿病のような自己免疫疾患に病理学的に結合した抗原の表面抗原か らなる群から選択される、請求の範囲第１〜４項のいずれか１項に記載の、疾患 に特異的な抗原または病原性生物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ６． 病原性試薬の面における活性を中和しまたは予防性である抗体が、ヒト Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢｓＡｇ）のウイルスの表面抗原を用いて免疫感作した個 体の血清に、またはヒトＣ型肝炎ウイルスに感染した個体の血清に含まれる、請 求の範囲第５項に記載の疾患に特異的な抗原または病原性生物を模倣する免疫原 および診断試薬の製造法。 ７． 用いられる抗体によって認識される抗原性オリゴペプチドがプラスミド ｐＣ８９をベクターとして用いてランダム配列オリゴヌクレオチドインサートの 発現から得られる、請求の範囲第１〜６項のいずれか１項に記載の疾患に特異的 な抗原または病原性生物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ８． ファージライブラリーの構築のために、線状ファージが、そのキャプシ ド、タンパク質ＶＩＩＩまたはタンパク質ＩＩＩに、制限酵素ＥｃｏＲＩ（ＧＡ ＡＴＴＣ）を同定する部位からＢａｍＨＩ制限酵素（ＧＧＡＴＣＣ）を同定する 部位までにおいて、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：７ および配列番号９〜４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求の 範囲第１〜７項のいずれか１項に記載の疾患に特異的な抗原または病原性生物を 模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ９． 請求の範囲第１〜９項のいずれか１項に記載の方法によって得られるオ リゴペプチドであって、血清を、請求の範囲第１項に記載の前記オリゴペプチド を表わすファージの選択およびスクリーニングに用いた患者に影響を与える同じ 疾患によって影響を与えられる個体からの病原性血清と反応し、且つ同じ疾患に よって影響されない個体からの血清とは反応しない、オリゴペプチド。 １０． 請求の範囲第９項に記載のオリゴペプチドであって、健康な個体から の血清とよりも病原性血清と一層頻繁に反応して、病原性および健康な血清との 反応性の頻度分布が統計学的に均質である確率が、０．０５未満であるようにす る、オリゴペプチド。 １１． 天然抗原に対して免疫応答を生体に誘導することができる、請求の範 囲第９または１０項に記載のオリゴペプチド。 １２． 生体にＨＣＶに対する抗体を誘導することができる、請求の範囲第９ または１０項に記載のオリゴペプチド。 １３． 生体にＨＢＶに対する抗体を誘導することができる、請求の範囲第９ または１０項に記載のオリゴペプチド。 １４． 例えば、感染性病原のような特異な病原性抗原に対して抗体応答を誘 導し、前記の誘導した抗体は予防的または中和性でもある場合には、前記の特異 的な病原性薬剤に対してワクチンを処方するための免疫原としての、請求の範囲 第９〜１３項のいずれか１項に記載のオリゴペプチドの使用。 【手続補正書】 【提出日】１９９５年１１月１０日 【補正内容】 １．請求の範囲を別紙のように補正する。 ２．明細書を下記のように補正する。 （1）第２頁第２８〜第３頁第２行の「前記抗体によって…ファージの選定、 」を以下のように補正する。 『第一の病原性血清を用いてキャプシド抗原性オリゴペプチドの表面に現れる ファージを選定し、続いて追加の病原性血清を用いるスクリーニングを行って、 試験した血清の総てまたはほとんどと反応するオリゴペプチドを示すファージを 同定し、およびコントロールとして採取した個体の別の組からの血清のパネルを 用いる対抗スクリーニングによって、コントロールの個体からの総てのまたはほ とんどの血清と反応しないオリゴペプチドを同定すること、』 （2）第４頁第１行の「ことが」と「示されて」の間に『同様に』を加入する 。 （3）第４頁第１８行の「オリゴヌクレオチド」を『オリゴペプチド』に訂正 する。 （4）第４頁第２１行の「キャプシドの」を削除する。 （5）第４頁第２５行の「６８」を『４７』に訂正する。 （6）第５頁第３行と第４行の間に以下の文章を加入する。 『本発明はまた上記方法によって得られるオリゴペプチドであって、そのオリ ゴペプチドを表すファージを選択しスクリーニングするために血清を用いた患者 に影響を与える同じ疾患によって影響を与えられる個体からの病原性血清と反応 し、且つ同じ疾患によって影響されない個体からの血清とは反応しない上記オリ ゴペプチドに関する。上記オリゴペプチドは生物に、天然抗原に対して免疫応答 を誘導することができる、またはＨＣＶに対する抗体を誘導することができる、 またはＨＢＶに対する抗体を誘導することができる。 本発明の主題はまた、例えば感染性病原のような特異な病原性抗原に対して抗 体応答を誘導し、そしてその誘導された抗体がまた予防的または中和的でもある 場合には、前記の特異的な病原性物質に対してワクチンを処方するための、免疫 原としての、上記オリゴペプチドの使用にも関する。』 （7）第５頁第１４行の「分類された」を『区画された』に訂正する。 （8）第２０頁第１３行の「例９」を『例９（参考）』に訂正する。 （9）第２２頁第１行の「ＲＭ／０９００４１／ＭＤＣ」を『ＲＭ／Ｘ８８１ ７９／ＤＣ』に訂正する。 （10）第２４頁第６行、第２４頁第２３行、第２５頁第１１行及び第２６頁第 １７行の「ヌクレオチド性」を『核酸』に訂正する。 『 請求の範囲 １．疾病に特異的な病原性生物の抗原の性質および／または同定についての情 報なしで、且つ特異抗体の性質および／または構造および／または特性について の情報なしで実行することができる操作法を用いて、疾病に特異的な抗原または 病原性生物に類似した免疫原または診断試薬の製造法において、下記の操作を含 む製造法： このような抗原および／または病原性生物を特性決定しておらずまたは未知で ある場合でも、疾病に特異的な抗原または病原性生物と反応する特性決定されて いない抗体を含む少なくとも２種類の血清の同定、 遺伝子操作技術を用いてファージキャプシドタンパクをコードする遺伝子に導 入されるランダム配列オリゴヌクレオチドインサートから発現される、キャプシ ドオリゴペプチドの表面に現れるファージライブラリーの構築、 第一の病原性血清を用いてキャプシド抗原性オリゴペプチドの表面に現われる ファージを選択し、続いて追加の病原性血清を用いるスクリーニングを行って、 試験した血清の総てまたはほとんどと反応するオリゴペプチドを示すファージを 同定し、およびコントロールとして採取した個体の別の組からの血清のパネルを 用いる対抗スクリーニングによって、コントロールの個体からの総てのまたはほ とんどの血清と反応しないオリゴペプチドを同定すること、 特定の病原性物質、または一般的には既知または未知の病因および／または病 原によるいわゆる自己免疫疾患に代表される免疫学的疾患を含む疾病についての 診断用キットの処方を目的とした選定されたファージおよび／またはそのフラグ メントおよび／またはそれらの誘導体の随意使用、 前記抗原によって誘発される疾病の治療のための抗原−抗体反応の拮抗薬の処 方を目的とする、選定されたファージおよび／またはそのフラグメントおよび／ またはそれらの誘導体の随意使用、 化合物および／または天然または合成製剤に対する過敏症および／またはアレ ルギーの現象の耐性を誘発するための選定されたファージおよび／また はそのフラグメントおよび／またはそれらの誘導体の随意使用、 選定されたファージおよび／またはそのフラグメントおよび／またはそれらの 誘導体による、生物の随意免疫感作、および 免疫感作した生物の血清中における、疾病に特異的な前記抗原または生物を認 識する抗体の存在の随意証明。 ２．ファージライブラリーの構築を、Ｍ１３、Ｆ１、Ｆｄおよびそれらの誘導 体からなる群から選択される線状ファージを用いて行う、請求項１に記載の疾患 に特異的な抗原または病原性生物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ３．ランダム配列オリゴヌクレオチドインサートを有するファージキャプシド をコードする遺伝子が、ファージキャプシドのタンパク質ＶＩＩＩをコードする 遺伝子である、請求項１または２に記載の、疾患に特異的な免疫原または病原性 生物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ４．ランダム配列オリゴヌクレオチドインサートを有するファージキャプシド をコードする遺伝子が、ファージキャプシドのタンパク質ＩＩＩをコードする遺 伝子である、請求項１または２に記載の、疾患に特異的な免疫原または病原性生 物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ５．病原性薬剤がヒトＢ型肝炎ウイルス（ＨＢｓＡｇ）、ヒトＣ型肝炎ウイル スおよび糖尿病のような自己免疫疾患に病理学的に結合した抗原の表面抗原から なる群から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の、疾患に特異的な 抗原または病原性生物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ６．病原性試薬の面における活性を中和しまたは予防性である抗体が、ヒトＢ 型肝炎ウイルス（ＨＢｓＡｇ）のウイルスの表面抗原を用いて免疫感作した個体 の血清に、またはヒトＣ型肝炎ウイルスに感染した個体の血清に含まれる、請求 項５に記載の疾患に特異的な抗原または病原性生物を模倣する免疫原および診断 試薬の製造法。 ７．用いられる抗体によって認識される抗原性オリゴペプチドがプラスミドｐ Ｃ８９をベクターとして用いてランダム配列オリゴヌクレオチドインサ ートの発現から得られる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の疾患に特異的な 抗原または病原性生物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ８．ファージライブラリーの構築のために、線状ファージが、そのキャプシド 、タンパク質ＶＩＩＩまたはタンパク質ＩＩＩに、制限酵素ＥｃｏＲＩ（ＧＡＡ ＴＴＣ）を同定する部位からＢａｍＨＩ制限酵素（ＧＧＡＴＣＣ）を同定する部 位までにおいて、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：７お よび配列番号９〜４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１ 〜７のいずれか１項に記載の疾患に特異的な抗原または病原性生物を模倣する免 疫原および診断試薬の製造法。 ９．請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法によって得られるオリゴペプチ ドであって、血清を、請求の範囲第１項に記載の前記オリゴペプチドを表わすフ ァージの選択およびスクリーニングに用いた患者に影響を与える同じ疾患によっ て影響を与えられる個体からの病原性血清と反応し、且つ同じ疾患によって影響 されない個体からの血清とは反応しない、オリゴペプチド。１０ ．天然抗原に対して免疫応答を生体に誘導することができる、請求項９に記 載のオリゴペプチド。１１ ．生体にＨＣＶに対する抗体を誘導することができる、請求項９に記載のオ リゴペプチド。１２ ．生体にＨＢＶに対する抗体を誘導することができる、請求項９に記載のオ リゴペプチド。１３ ．例えば、感染性病原のような特異的な病原性抗原に対して抗体応答を誘導 し、前記の誘導した抗体は予防的または中和性でもある場合には、前記の特異的 な病原性物質に対してワクチンを処方するための免疫原としての、請求項９〜１ ２のいずれか１項に記載のオリゴペプチドの使用。』

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 8310−2Ｊ 33/569 Ｚ 8310−2Ｊ 33/576 Ｂ 8310−2Ｊ Ｚ 8310−2Ｊ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＪＰ，ＲＵ， ＵＳ (72)発明者 ニコシア，アルフレド イタリア国 アイ ― 00144 ローマ, ビア ベアタ ベルギネ デル カルメ ロ，54 (72)発明者 モナシ，パオロ イタリア国 アイ ― 00181 ローマ, ビア アピア ヌオバ，420 (72)発明者 コルテセ，リカルド イタリア国 アイ ― 00144 ローマ, ビア マシミリアノ マシモ，16 【要約の続き】 の拮抗薬の処方を目的とする選定されたファージおよび ／またはそのフラグメントおよび／またはそれらの誘導 体の随意使用、化合物および／または天然または合成製 剤に対する過敏症および／またはアレルギーの現象の耐 性を誘発するための選定されたファージおよび／または そのフラグメントおよび／またはそれらの誘導体の随意 使用、選定されたファージおよび／またはそのフラグメ ントおよび／またはそれらの誘導体による、生物の随意 免疫感作、および免疫感作した生物の血清中における、 疾病に特異的な前記抗原または生物を認識する抗体の存 在の随意証明。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 疾病に特異的な抗原または病原性生物に類似した免疫原または診断試薬 の製造法において、本質的に下記の操作を特徴とする製造法： 疾病に特異的な抗原または病原性生物と反応する少なくとも１種類の抗体の同 定、 遺伝子操作技術を用いてファージキャプシドタンパクをコードする遺伝子に導 入されるランダム配列オリゴヌクレオチドインサートから発現される、キャプシ ドオリゴペプチドの表面に現れるファージライブラリーの構築、 前記抗体によって、場合によっては第一の病原性血清を用いて選定した後、第 二の異なる病原性血清を用いるスクリーニングおよび健康人からの血清のパネル を用いる対抗スクリーニングによって認識されるキャプシド抗原性オリゴペプチ ドの表面に現れるファージの選定、 特定の病原性物質、または一般的には既知または未知の病因および／または病 原によるいわゆる自己免疫疾患に代表される免疫学的疾患を含む疾病についての 診断用キットの処方を目的とした選定されたファージおよび／またはそのフラグ メントおよび／またはそれらの誘導体の随意使用、 前記抗原によって誘発される疾病の治療のための抗原−抗体反応の拮抗薬の処 方を目的とする選定されたファージおよび／またはそのフラグメントおよび／ま たはそれらの誘導体の随意使用、 化合物および／または天然または合成製剤に対する過敏症および／またはアレ ルギーの現象の耐性を誘発するための選定されたファージおよび／またはそのフ ラグメントおよび／またはそれらの誘導体の随意使用、 選定されたファージおよび／またはそのフラグメントおよび／またはそれらの 誘導体による、生物の随意免疫感作、および 免疫感作した生物の血清中における、疾病に特異的な前記抗原または生物を認 識する抗体の存在の随意証明。 ２． 前記病原性薬剤に特異的な抗体が予防的または中和性のものである場合 に、前記免疫感作に用いられる材料を用いて、前記の特異的な病原性薬剤に対す るワクチンを処方する、請求の範囲第１項に記載の疾患に特異的な抗原または病 原性生物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ３． 抗体が、モノクローン性抗体、ポリクローン性抗体、および血清に含ま れる抗体からなる群から選択される、請求の範囲第１または２項に記載の方法。 ４． 抗体が、血清に含まれる抗体である、請求の範囲第３項に記載の方法。 ５． ファージライブラリーの構築を、Ｍ１３、Ｆ１、Ｆｄおよびそれらの誘 導体からなる群から選択される線状ファージを用いて行う、請求の範囲第１〜４ のいずれか１項に記載の疾患に特異的な抗原または病原性生物を模倣する免疫原 および診断試薬の製造法。 ６． ランダム配列オリゴヌクレオチドインサートを有するファージキャプシ ドをコードする遺伝子が、ファージキャプシドのタンパク質ＶＩＩＩをコードす る遺伝子である、請求の範囲第１〜５項のいずれか１項に記載の、疾患に特異的 な免疫原または病原性生物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ７． ランダム配列オリゴヌクレオチドインサートを有するファージキャプシ ドをコードする遺伝子が、ファージキャプシドのタンパク質ＩＩＩをコードする 遺伝子である、請求の範囲第１〜５項のいずれか１項に記載の、疾患に特異的な 免疫原または病原性生物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ８． 病原性薬剤がヒトＢ型肝炎ウイルス（ＨＢｓＡｇ）、ヒトＣ型肝炎ウイ ルスおよび糖尿病のような自己免疫疾患に病理学的に結合した抗原の表面抗原か らなる群から選択される、請求の範囲第１〜７項のいずれか１項に記載の、疾患 に特異的な抗原または病原性生物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 ９． 病原性試薬の面における活性を中和しまたは予防性である抗体が、ヒト Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢｓＡｇ）のウイルスの表面抗原を用いて免疫感作した個 体の血清に、またはヒトＣ型肝炎ウイルスに感染した個体の血清に含まれる、請 求の範囲第８項に記載の疾患に特異的な抗原または病原性生物を模倣する免疫原 および診断試薬の製造法。 １０． 用いられる抗体によって認識される抗原性オリゴペプチドがプラスミ ドｐＣ８９をベクターとして用いてランダム配列オリゴヌクレオチドインサート の発現から得られる、請求の範囲第１〜９項のいずれか１項に記載の、疾患に特 異的な抗原または病原性生物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 １１． ファージライブラリーの構築のために、線状ファージが、そのキャプ シド、タンパク質ＶＩＩＩまたはタンパク質ＩＩＩに、制限酵素ＥｃｏＲＩ（Ｇ ＡＡＴＴＣ）を同定する部位からＢａｍＨＩ制限酵素（ＧＧＡＴＣＣ）を同定す る部位までにおいて、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号： ７および配列番号９〜６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求 の範囲第１〜１０項のいずれか１項に記載の疾患に特異的な抗原または病原性生 物を模倣する免疫原および診断試薬の製造法。 １２． キャプシドの表面に抗原性オリゴペプチドを示し、且つ請求の範囲第 １〜１１項のいずれかＩ項に記載の疾患に特異的な抗原または病原性生物を模倣 する免疫原または診断試薬の製造過程において得られることを特徴とする、ファ ージ。 １３． 請求の範囲第１〜１１項のいずれか１項に記載の方法を用いて得られ ることを特徴とする、特異的な病原性薬剤に対するワクチン。 １４． 請求の範囲第１〜１１項のいずれか１項に記載の方法で用いられ、且 つ配列番号：４配列番号：５、配列番号：６、および配列番号：８からなる群か ら選択されるヌクレオチド配列を全部または部分的に含むことを特徴とする、修 飾ｐＣ８９プラスミド。