JPH08283166A - 感染防御剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】エンテロコッカス属に属する微生物の菌体又は
その処理物を有効成分として含有し、又はこれにムコ多
糖類を添加することを特徴とする感染防御剤。 【効果】薬剤耐性ブドウ球菌等の細菌感染症、とりわけ
免疫不全による感染防御能の低下に対して予防又は治療
効果を有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、エンテロコッカス（En
terococcus）属に属する微生物の菌体又はその超音波破
砕物を含有し、又は、これにムコ多糖類を添加すること
及び経口で用いられることを特徴とする感染防御剤に関
するものである。

【０００２】

【従来の技術】出生率の低下や医療の進歩等による平均
余命の伸長によって、老齢人口の割合は増加の一途をた
どっている。これに加えて、精神的ストレスの多い社会
的生活環境の複合的悪化や食生活の変化、すなわち偏っ
た栄養摂取や摂取エネルギー過多による肥満、および運
動不足等が、いわゆる成人病の羅患率を増大させてい
る。

【０００３】抗癌剤、免疫抑制剤、ステロイド剤等の使
用あるいは放射線療法は、患者の白血球（好中球）の著
しい減少による免疫不全状態や、シュウドモナス、アシ
ネトバクター等の細菌の他、真菌やウイルス等による日
和見感染症によって、更に重篤な事態に至る例が多い。

【０００４】又、多くの細菌感染症の治療に際して、多
種多様な抗菌薬剤が使用されているが、これら抗菌薬剤
の繁用に基づく薬剤耐性菌、とりわけ、ＭＲＳＡ（meth
icillin-resistant Staphylococcus aureus：メチシリ
ン耐性黄色ブドウ球菌）等の出現は臨床における深刻な
問題となっており、又、他の日和見感染菌とともに院内
感染菌として厄介な問題である。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】日和見感染症を含む細
菌感染症の治療には、多くの抗菌薬剤の中から、適宜選
択された抗菌剤が用いられている。しかしながら、抗菌
剤の抗菌作用に引き替え、ショック症状、腎障害、肝障
害、白血球減少、神経障害、菌交代症等多くの副作用が
挙げられており、したがって、感染防御作用が強く、且
つ、副作用のない予防又は治療剤が求められている。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らはエンテロコ
ッカス属に属する微生物、特にエンテロコッカス・フェ
カリス及びエンテロコッカス・カセリフラブスの菌体、
又は、その処理物にムコ多糖類を添加した標品が、種々
の病原菌による感染症、とりわけ、ＭＲＳＡや緑膿菌等
による日和見感染症を防御することを見いだし、本発明
を完成させた。又、本発明剤に使用される菌種は、健常
者の腸内およびサイレージから分離された乳酸菌の一種
であるので、副作用の無い安全な菌種である。

【０００７】エンテロコッカス・フェカリスは、腸内に
存在する常在菌の一種である（Bergey's Manual of Sys
tematic Bacteriology. 2(1986)）。本発明においては
この菌種に属する種々の菌株を用いることができるが、
特に感染防御作用が高い点において、ＮＦ−１０１１菌
株を用いることが好ましい。該菌株は工業技術院微生物
工業技術研究所に微工研菌寄第１２５６４号として寄託
されている。

【０００８】エンテロコッカス・カセリフラブスは、サ
イレージ内に存在する菌の１種である（Bergey's Manua
l of Systematic Bacteriology. 2(1986)）。本発明に
おいてはこの菌種に属する種々の菌株を用いることがで
きるが、特に感染防御作用が高い点において、ＮＦ−１
００４菌株を用いることが好ましい。該菌株は工業技術
院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第１４３７８号と
して寄託されている。

【０００９】以下にエンテロコッカス・フェカリスＮＦ
−１０１１及びエンテロコッカス・カセリフラブスＮＦ
−１００４の分離手段及び同菌株の菌学的及び生理学的
性質を示す。

【００１０】（１）エンテロコッカス・フェカリスＮＦ
−１０１１の分離手段 健常者の糞便の加熱滅菌水による１０倍希釈物を適切な
選択培地（ＫＭＮ寒天平板及びＳＦ寒天平板）に塗抹
し、好気条件下３７℃で、４８〜７２時間培養し、菌集
落を出現させた。この菌集落を別の同種平板培地に画線
塗布し、同様に培養して菌集落を再び出現させた。同様
の操作を数回繰り返し、単一の菌種だけからなる単一集
落を分離した。この新分離菌株について、菌学的（形態
的、生化学的及び血清学的）性状を調べ、エンテロコッ
カス・フェカリス（Enterococcusfaecalis）に属すると
分類同定した。 （２）エンテロコッカス・カセリフラブスＮＦ−１００
４の分離手段 サイレージの加熱滅菌水による１０倍希釈物を適切な選
択培地（1.5％寒天含ＭＲＳ培地）に塗抹し、好気条件
下３７℃で、４８〜７２時間培養し、菌集落を出現させ
た。この菌集落を別の同種平板培地に画線塗布し、同様
に培養して菌集落を再び出現させた。同様の操作を数回
繰り返し、単一の菌種だけからなる単一集落を分離し
た。この新分離菌株について、菌学的（形態的、生化学
的及び血清学的）性状を調べ、エンテロコッカス・カセ
リフラブス（Enterococcuscasseliflavus）に属すると
分類同定した。

【００１１】 （３）菌学的及び生理学的性質 ──────────────────────────── 性状 NF-1011 NF-1004 ──────────────────────────── グラム染色性 ＋ ＋ 菌形態 球形 球形 カタラーゼ − − 溶血性 α α 血清群 Ｄ Ｄ 増殖性 １０℃ ＋ ＋ ４５℃ ＋ ＋ ５０℃ ＋ ＋ 熱耐性 ６０℃ ３０分 ＋ ＋ 胆汁エスクリン添加培地での生育 ＋ ＋ ｐＨ９．６培地での生育 ＋ ＋ ６．５％食塩添加培地での生育 ＋ ＋ メチレンブルー染色性 ＋ ＋ ゼラチン液化 − − ０．０１％ＴＴＣ添加培地での生育 ＋ ＋ テルライト添加培地での生育 ＋ ＋ 酸生成の有無 グリセロール ＋ ＋ Ｌ−アラビノース − ＋ Ｄ−リボース ＋ ＋ Ｄ−キシロース − ＋ Ｄ−グルコース ＋ ＋ Ｄ−ガラクトース ＋ ＋ Ｄ−フラクトース ＋ ＋ Ｄ−マンノース ＋ ＋ マルトース ＋ ＋ マンニトール ＋ ＋ シュクロース ＋ ＋ Ｌ−ソルボース − − Ｄ−ソルビトール ＋ − Ｌ−ラムノース ＋ ＋ ラクトース ＋ ＋ アミグダリン ＋ ＋ エスクリン ＋ ＋ セロビオース ＋ ＋ メリビオース − ＋ イヌリン − ＋ メレジトース ＋ − ──────────────────────────── ＋；陽性、−；陰性 ＴＴＣ；２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムクロリド

【００１２】本発明に使用するエンテロコッカス・フェ
カリス及びエンテロコッカス・カセリフラブスを培養し
て得られる菌体は死菌体又は生菌体、或いは菌体を磨
砕、超音波破砕、水抽出等の処理をしたものを用いるこ
とができる。これらを製剤するにはデンプン、乳糖、大
豆蛋白等の担体、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安
定剤、矯味矯具剤等の添加物を用いて、周知の方法で錠
剤や顆粒剤にされる。

【００１３】使用量は、症状、年齢等により異なるが、
有効成分として１日0.002〜0.1g/kg体重を通常成人に対
して１日１回又は数回に分けて投与することができる。

【００１４】

【実施例】以下実施例を示すが、本発明はこれらの実施
例の記載によって何ら制限されるものではない。

【００１５】実施例１．（エンテロコッカスの培養） エンテロコッカス・フェカリス（Enterococcus faecali
s）ＮＦ−１０１１及びエンテロコッカス・カセリフラ
ブス（Enterococcus casseliflavus）ＮＦ−１００４
を、代表的培地として以下に示す組成のロゴサ液体培地
に接種し、（菌数：１０⁶個/ml）、３７℃で１０〜１６
時間培養し、生菌数約１０⁹個/mlの培養液を得た。得ら
れた培養液を１２，０００rpmで２０分間遠心分離して
集菌し、蒸留水で２回洗浄して菌体を得た。この菌体を
蒸留水で懸濁し、１１０℃で１０分間加熱して死菌体懸
濁液を得た。次に、熱風乾燥法あるいは凍結乾燥法等適
当な方法で乾燥処理し、乾燥死菌体（以下菌体標品）を
得た。

【００１６】ロゴサ液体培地の組成を示す。 トリプチケース １０ｇ 酵母エキス ５ｇ トリプトース ３ｇ リン酸一カリウム ３ｇ リン酸二カリウム ３ｇ クエン酸三アンモニウム ２ｇ ツイーン８０（界面活性剤） １ｇ グルコース ２０ｇ システイン塩酸塩 ０．２ｇ 塩類溶液（１のとおり） ５ｍｌ 蒸留水 １０００ｍｌ （ｐＨ７．０に調整、１２１℃で１５分間加熱滅菌） （１）塩類溶液：ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ １１．５ｇ ＦｅＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０．６８ｇ ＭｎＳＯ₄・２Ｈ₂Ｏ ２．４ｇ 蒸留水 １００ｍｌ

【００１７】実施例２．（超音波破砕物の調製） 実施例１で調製した菌体標品を生理的食塩水（0.85％食
塩水）に懸濁又は溶解した。この菌液を超音波破砕装置
で処理して菌体を砕破した。破砕処理条件は、例えば、
クボタ製２０１Ｍ型超音波破砕装置で、周波数９kHz、
低温（５〜７℃）で５０分間処理、とした。超音波破砕
した菌液を熱風乾燥法あるいは凍結乾燥法等適当な方法
で乾燥処理し、超音波破砕物を得た。

【００１８】実施例３．（易感染モデルマウスにおける
ＭＲＳＡ感染に対する防御） ＩＣＲマウス（日本チャールス・リバー）５週齢、雌性
を１群８匹（対照群は１群１０匹）で使用した。マウス
の感染防御力を低下させるために、シクロホスファミド
（エンドキサン：塩野義製薬）200mg/kg体重を腹腔内に
投与した。翌日から３日間、実施例１で調製した菌体標
品の生理的食塩水懸濁液（菌体標品群）、実施例２で調
製した超音波破砕物（ソニック群）及び、ムチン（Muci
nBacteriological:Difco）を５％濃度になるように添加
した超音波破砕物（ソニック＋ムチン群）各々菌体標品
20mg相当量をマウスに胃ゾンデで経口投与した。対照群
には生理的食塩水を経口投与した。

【００１９】シクロホスファミド投与から４日後、ＭＲ
ＳＡ ３２（ＣＦ）株３×１０⁷個／マウスを、尾静脈
内に接種した。以後８日間にわたって、マウスの生死を
対照動物群と比較した。結果を表１に示す。ソニック群
及びソニック＋ムチン群は、対照群に比較して、有意
（p<0.05）に高い生存率を示した。

【００２０】

【表１】 ──────────────────────────────────── ＭＲＳＡ接種後の日数 ───────────────────────── 0 1 2 3 4 6 8 ──────────────────────────────────── 対照群 10/10^a) 10/10 2/10 0/10 菌体標品群 8/8 8/8 4/8 1/8 0/8 ソニック群 8/8 8/8 6/8 3/8 1/8 1/8 1/8 ソニック＋ムチン群 8/8 8/8 4/8 3/8 3/8 3/8 1/8 ──────────────────────────────────── a)；生存率（生存匹数／１群匹数）

【００２１】実施例４．（製剤例） （１）実施例１で得た菌体標品150mgを精製デンプン末1
50mg及び乳糖700mgと混合して錠剤／又は顆粒剤にす
る。 （２）実施例２で得た超音波破砕物150mgを精製デンプ
ン末150mg及び乳糖700mgと混合して錠剤／又は顆粒剤に
する。 （３）実施例２で得た超音波破砕物150mgをムチン150m
g、精製デンプン末150mg及び乳糖550mgと混合して錠剤
／又は顆粒剤にする。

【００２２】

【発明の効果】薬剤耐性ブドウ球菌等の細菌感染症、と
りわけ免疫不全による感染防御能の低下に対して予防又
は治療効果を有する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 山本 哲郎 三重県阿山郡阿山町大字円徳院1406番地の 69 (72)発明者 山口 英世 神奈川県川崎市多摩区栗谷２丁目15番５号

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】エンテロコッカス属に属する微生物の菌体
   又はその超音波破砕物等の処理物を有効成分として含有
   する感染防御剤
2. 【請求項２】エンテロコッカス属に属する微生物がエン
   テロコッカス・フェカリス又はエンテロコッカス・カセ
   リフラブスである請求項１に記載の感染防御剤
3. 【請求項３】エンテロコッカス属に属する微生物がエン
   テロコッカス・フェカリスＮＦ−１０１１又はエンテロ
   コッカス・カセリフラブスＮＦ−１００４である請求項
   １に記載の感染防御剤
4. 【請求項４】菌体の処理物にムコ多糖類を添加すること
   を特徴とする請求項１記載の感染防御剤