JPH07304762A

JPH07304762A - 抗腫瘍性物質ｂｅ−４０６４４類

Info

Publication number: JPH07304762A
Application number: JP7060695A
Authority: JP
Inventors: Koichiro Torigoe; 浩一郎鳥越; Naomi Wakasugi; なおみ若杉; Nami Sakaizumi; 奈巳酒泉; Takashi Ikejima; 喬池島; Hajime Suzuki; 肇鈴木; Hiroyuki Suda; 寛之須田
Original assignee: Banyu Phamaceutical Co Ltd
Current assignee: MSD KK
Priority date: 1994-03-16
Filing date: 1995-03-03
Publication date: 1995-11-21

Abstract

(57)【要約】【構成】式：【化１】［式中、Ｒは水素原子、低級アルキル基、低級アルカノ
イル基を示す］で表される化合物。【発明の効果】本発明に記載するＢＥ−４０６４４類
は、マウス及びヒトの癌細胞に対して強い増殖抑制効果
を示し、またＨＩＶの増殖抑制効果を示すことから、医
薬の分野で有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は医薬の分野で有用であ
り、より具体的には腫瘍細胞やウイルスによる癌化細胞
に対し、その増殖を阻害し制癌効果を発揮し、またヒト
免疫不全症候群ウイルスの増殖を抑制する新規化合物
群、その製造法及び用途並びに本化合物群を産生する新
規なアクチノプラネス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ）属
に属する微生物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】癌化学療法の分野においては、既に多く
の化合物が医薬品として実用化されている。

【０００３】しかしながらさまざまな種類の腫瘍に対し
てその効果は必ずしも充分ではなく、また臨床上これら
の薬剤に対する腫瘍細胞の耐性現象が明らかにされるに
連れ、その臨床的応用性はより複雑化している［第４７
回日本癌学会総会記事、１２頁−１５頁（１９８８年）
等参照］。

【０００４】ヒト癌と直接の関連が証明されているウイ
ルスに、バーキットリンパ腫、鼻咽喉癌に於けるエプス
タイン−バーウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒｖ
ｉｒｕｓ）、子宮頚癌におけるパピローマウイルス（ｐ
ａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ）、肝癌におけるＣ型肝
炎ウイルス、成人型Ｔリンパ性白血病（ａｄｕｌｔＴ
ｃｅｌｌｌｅｕｋｅｍｉａ）に於けるＨＴＬＶ−１等
が挙げられる［がんのバイオサイエンス２「ヒトのがん
ウイルス」、吉田光昭編、東京大学出版会（１９９１
年）等参照］。これらの癌に対しては従来の化学療法に
よって対応しているが、その効果には耐性現象等による
限界、副作用などの深刻な問題点がある。

【０００５】一方、ＨＩＶ（ヒト免疫不全症候群ウイル
ス）はヒトの免疫系の破壊によりＡＩＤＳ（後天性免疫
不全症候群）を惹起し、その効果的な治療法の創製が熱
望されている［セル（Ｃｅｌｌ）５８卷、４２３−４３
６頁、（１９８９年）等参照］。現在ＡＩＤＳに対して
使用されている逆転写酵素阻害剤は、ウイルスが変異す
るために数カ月で耐性が現れ、治療の継続が困難とな
る。ヒトの細胞に組み込まれたＨＩＶは、その細胞に何
らかの刺激が加わると転写が開始され再活性化される
が、その際細胞が持つ転写調節因子ＮＦｋＢ等が関与す
ることが報告されている（Ｎａｔｕｒｅ、３２６巻７１
１−７１３頁、１９８７年等参照）。このような観点か
ら、耐性の出易い逆転写酵素阻害剤ではなく、耐性の出
ないことが期待される、細胞側のＨＩＶ増強因子抑制作
用による抗ＨＩＶ物質が強く希求されている。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、上記
の希求に応える新規制癌物質及び抗ＨＩＶ作用を有する
物質を提供することであり、既存の制癌物質が充分に効
果を発揮できない種類の癌、ウイルスによる癌化または
免疫系の破壊に係る機序を標的とした優れた制癌活性、
抗ＨＩＶ活性を有する化合物を見出すことが、本発明が
解決しようとする課題である。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決すべくウイルスによる癌化やＮＦｋＢ、Ｆｏｓ
／Ｊｕｎ等の転写調節因子の活性化に関するチオレドキ
シン（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ．，８７巻，８２８２−８２８６頁，１９９０年；Ｎ
ｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ，２０巻
３８２１−３８３０頁，１９９２年等参照）の酵素活
性を抑制し、抗腫瘍活性を有する物質について、微生物
二次代謝産物を広くスクリーニングした結果、下記一般
式［Ｉ］で表される化合物が優れた抗腫瘍作用及び抗Ｈ
ＩＶ作用を示すことを見出し本発明を完成した。

【０００８】即ち、本発明は新規な一般式

【０００９】

【化９】［式中、Ｒは水素原子、低級アルキル基、低級アルカノ
イル基又はベンゾイル基を示す］で表される化合物、そ
の製法及び用途、並びに一般式［Ｉ］の化合物を産生す
る能力を有するアクチノプラネス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａ
ｎｅｓ）属に属する微生物に関するものである。

【００１０】次に本明細書において使用する用語につい
て説明する。本明細書において使用する「低級」なる語
は、この語の付された基または化合物の炭素数が６個以
下、好ましくは４個以下であることを意味する。

【００１１】低級アルキル基とは、炭素数が１乃至６個
の直鎖状または分岐状のアルキル基を示し、例えば、メ
チル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチ
ル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブ
チル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル
基、ヘキシル基等が挙げられる。

【００１２】低級アルカノイル基とは、炭素数が１乃至
６個の直鎖状または分岐状のアルカノイル基を示し、ホ
ルミル基、アセチル基、プロパノイル基、ブチリル基、
イソブチリル基、ペンタノイル基、ヘキサノイル基等が
挙げられる。

【００１３】以下に本発明に係る新規な抗腫瘍性及び抗
ＨＩＶ性物質ＢＥ−４０６４４類の物理化学的な性状を
示す。

【００１４】ここで、一般式［Ｉ］でＲが水素原子であ
る化合物をＢＥ−４０６４４と称し、Ｒがアセチル基で
あるものＢＥ−４０６４４アセテートと称する。下記に
ＮＭＲ測定における略号の意味を示す。ｓ：シングレットｄ：ダブレットｔ：トリプレットｑ：カルテットｄｔ：ダブルトリプレットｍ：マルチプレットｂｒ：ブロードＪ：カップリング定数Ｈｚ：ヘルツＣＤＣｌ₃：重クロロホルムＢＥ−４０６４４の物理化学的性状性状：黄色アモルファス状固体又は結晶分子式：Ｃ₂₂Ｈ₃₀Ｏ₄ 質量分析：［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｃ₂₂Ｈ₃₀Ｏ₄＋２Ｈ）⁺として：計算値３６０．２３
０１：実測値３６０．２３１４比旋光度：［α］²⁰ _D＝−４８．５°（ｃ０．８８７，
ＭｅＯＨ）紫外吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ，ｎｍ）２０
４，２６５，４００赤外吸収スペクトル：（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）２９４５，２
９２６，１６７６，１６５１，１６３３，１６１０，
１３６９，９６０¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，
δ ｐｐｍ）０．７２（３Ｈ，ｓ），０．８０（３Ｈ，
ｓ），０．８２−０．９２（２Ｈ，ｍ），０．８８
（３Ｈ，ｓ），１．１３（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１３．７Ｈ
ｚ，４．６Ｈｚ），１．１９（３Ｈ，ｓ），１．３７−
１．４５（３Ｈ，ｍ），１．４７−１．６２（４Ｈ，
ｍ），１．７６−２．０２（１Ｈ，ｍ），２．２１（１
Ｈ，ｂｒｓ），２．３２−２．３８（１Ｈ，ｍ），
２．３６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１９．８Ｈｚ，８．２Ｈ
ｚ），２．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１９．８Ｈｚ），４．
５１（２Ｈ，ｂｒｓ），６．６４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝
１．８Ｈｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，
δ ｐｐｍ）１３．７（ｑ），１６．６（ｔ），１８．
０（ｔ），１８．２（ｔ），２１．８（ｑ），２７．１
（ｑ），３３．１（ｓ），３３．５（ｑ），３８．３
（ｓ），３９．６（ｔ），３９．８（ｔ），４１．５
（ｔ），４８．４（ｄ），５５．０（ｄ），５９．４
（ｔ），７９．６（ｓ），１１９．９（ｓ），１３１．
５（ｄ），１４４．１（ｓ），１５３．５（ｓ），１
８１．９（ｓ），１８６．６（ｓ）溶解性：クロロホルム、メタノール、ジメチルスルホ
キシド等の有機溶媒に溶け易く、水に溶けにくい。酸性、中性、塩基性物質の区別：中性薄層クロマトグラフィー：［メルク社製キーゼルゲル６
０Ｆ₂₅₄］Ｒｆ値０．６０［展開溶媒：クロロホルム／メタノー
ル（２０：１）］呈色反応：硫酸反応陽性、リンモリブデン酸反応陽
性ＢＥ−４０６４４アセテートの理化学的性状性状：黄色アモルファス状固体又は結晶分子式：Ｃ₂₄Ｈ₃₂Ｏ₅ 質量分析：［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｃ₂₄Ｈ₃₂Ｏ₅）⁺ として：計算値４００．２２５０：実測値４００．２２６５比旋光度：［α］²⁰ _D＝−８６．７°（ｃ０．６２３，
ＭｅＯＨ）紫外吸収スペクトル：λｍａｘ（ＭｅＯＨ，ｎｍ）２０
５，２６２，４００赤外部吸収スペクトル：（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）２９４５，
２９２６，１７５１，１６７６，１６７０，１６５５，
１６３７，１６１２，１３６９，１２８２，１２２３，
１１３４，１１１９，１０８８，９６２¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：（４００ＭＨｚ，ＣＤ₃ＯＤ，
δ ｐｐｍ）０．７３（３Ｈ，ｓ），０．８３（３Ｈ，
ｓ），０．９１（３Ｈ，ｓ），０．９３−０．９７（１
Ｈ，ｍ），１．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１
０．３Ｈｚ），１．１５−１．２３（１Ｈ，ｍ），１．
１９（３Ｈ，ｓ），１．３９−１．４５（２Ｈ，ｍ），
１．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），１．５２−
１．６８（４Ｈ，ｍ），１．７６−１．８２（１Ｈ，
ｍ），２．１１（３Ｈ，ｓ），２．２７（１Ｈ，ｄｔ，
Ｊ＝１３．７Ｈｚ，２．９Ｈｚ），２．３８（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２０．０Ｈｚ），２．５６（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝２０．０Ｈｚ），４．９２（２Ｈ，ｄ，Ｊ
＝２．０Ｈｚ），６．５６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝２．０Ｈ
ｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ，ＣＤ₃ＯＤ，
δ ｐｐｍ）１４．４（ｑ），１７．５（ｔ），１９．
２（ｔ），１９．４（ｔ），２０．５（ｑ），２２．３
（ｑ），２７．５（ｑ），３４．１（ｑ），３４．１
（ｓ），３９．５（ｓ），４０．６（ｔ），４１．０
（ｔ），４２．８（ｔ），４９．５（ｄ），５６．１
（ｄ），６０．５（ｔ），８１．１（ｓ），１２１．１
（ｓ），１３３．２（ｄ），１４２．０（ｓ），１５
４．９（ｓ），１７１．９（ｓ），１８１．９（ｓ），
１８７．５（ｓ）溶解性：クロロホルム、メタノール、ジメチルスルホ
キシド等の有機溶媒に溶け易く、水に溶けにくい。酸性、中性、塩基性物質の区別：中性薄層クロマトグラフィー：［メルク社製キーゼルゲル６
０Ｆ₂₅₄］Ｒｆ値０．８５［展開溶媒：クロロホルム／メタノー
ル（２０：１）］呈色反応：硫酸反応陽性、リンモリブデン酸反応陽性ＢＥ−４０６４４類の生物学的活性１．抗腫瘍作用抗腫瘍性物質類ＢＥ−４０６４４類のマウス実験腫瘍細
胞に対する増殖阻止作用を決定するため、ｉｎｖｉｔ
ｒｏで試験を行なった。マウス白血病細胞Ｐ３８８に対
する抗腫瘍作用試験は、ＢＥ−４０６４４類をジメチル
スルホキシドに溶解した後、牛胎児血清１０％含有ＲＰ
ＭＩ１６４０培地（２０μＭの２−メルカプトエタノー
ルを含む）で逐次希釈し、２×１０³ 個の腫瘍細胞を
含む細胞培養培地（牛胎児血清１０％含有ＰＲＭＩ１６
４０培地、２０μＭの２−メルカプトエタノールを含
む）５０μｌに対し５０μｌを加えた。３７℃で７２時
間、５％ＣＯ₂下で培養後、ＭＴＴ測定法により対照群
と比較した。

【００１５】マウス大腸癌細胞ｃｏｌｏｎ２６に対する
抗腫瘍試験は、ＢＥ−４０６４４類をジメチルスルホキ
シドに溶解した後、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６
４０培地で逐次希釈し、１×１０³個の腫瘍細胞を含む
細胞培養培地（牛胎児血清１０％含有ＰＲＭＩ１６４０
培地）１００μｌに対し１００μｌを加えた。３７℃で
７２時間、５％ＣＯ₂下で培養後、５０％トリクロロ
酢酸で固定し、０．４％スルホローダミンＢで染色後、
１０ｍＭトリス緩衝液を用いて細胞から色素を抽出し
た。４５０ｎｍを対照波長として５５０ｎｍに於ける吸
光度を測定して対照群と比較した。その結果、ＢＥ−４
０６４４類は両癌細胞に対し、強い増殖阻止活性を示
し、５０％増殖阻害濃度（ＩＣ₅₀）は第１表の通りで
あった。

【００１６】更に、ＢＥ−４０６４４類のヒト癌細胞に
対する抗腫瘍活性をｉｎｖｉｔｒｏで試験した。細胞
は、ヒト大腸癌細胞ＤＬＤ−１、ヒト肺癌細胞ＰＣ−１
３及びヒト胃癌細胞ＭＫＮ−４５を使用し、細胞培養用
培地は、全ての癌細胞共に牛胎児血清１０％含有ＲＰＭ
Ｉ１６４０培地を用いた。ＢＥ−４０６４４類をまずジ
メチルスルホキシドに溶解し、次に牛胎児血清１０％含
有ＲＰＭＩ１６４０培地で逐次希釈して検液とした。癌
細胞増殖阻害の検定は、１×１０³ 個の癌細胞を含む
細胞培養用の培地１００μｌを９６穴マイクロプレート
に分注し、３７℃で２４時間、５％ＣＯ₂下で培養した
後、上記検液１００μｌを加えた。更に、７２時間培養
後細胞を５０％トリクロロ酢酸で固定し、以下ｃｏｌｏ
ｎ２６細胞と同様の方法を用い対照群と比較検討し
た。その結果、ＢＥ−４０６４４類はヒト腫瘍細胞にお
いても強い増殖阻害活性を示し、その５０％増殖阻止濃
度（ＩＣ₅₀）は第１表の通りであった。

【００１７】

【表１】上述したようにＢＥ−４０６４４類はマウス及びヒトの
癌細胞に対し顕著な増殖阻止作用を示す。従って、本発
明はヒトをはじめとする哺乳動物の抗腫瘍剤として有用
である。

【００１８】２．抗ＨＩＶ作用ヒトのＴ細胞株Ｍｏｌｔ４にＨＩＶを感染後、その１週
間後にＢＥ４０６４４を各種の濃度で加え、その１日後
（○）及び２日後（●）に培養上清からポリエチレング
リコールを用いてウイルスを沈殿させ、その逆転写酵素
活性を測定しウイルスの残存量を求めた結果を図１示
す。次にＢＥ−４０６４４類の製造法について説明す
る。本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−４０６４４類の製造に
使用する微生物又はその変異株は、抗腫瘍性物質ＢＥ−
４０６４４を生産するものならばいずれでも良いが、例
えば以下の菌学的性状を有する微生物が挙げられる。１．形態Ａ４０６４４株は気菌糸を着生せず、分岐する基生菌糸
に生ずる胞子のう柄の先端に胞子のうを１個ずつ形成す
る。胞子のうの表面は毛髪状で、その形状は瓶状であり
大きさは４〜６μｍ×８〜１２μｍ位である。胞子の
うには多数の胞子が内蔵され、成熟した胞子のうを水中
に投じると胞子が放出され、その胞子は遊走性を示す。
胞子の大きさは０．５〜０．７μｍ×１．５〜２．０
μｍ位である。２．各種寒天平板培地における培養性状（２８゜Ｃ、１
４日間培養）

【００１９】

【表２】３．生育温度（イースト・麦芽寒天培地、１４日間培養）９゜Ｃ：生育せず２２゜Ｃ：生育非常に良好１２゜Ｃ：生育僅少２６゜Ｃ：生育非常に良好１６゜Ｃ：生育良好２９゜Ｃ：生育非常に良好１８゜Ｃ：生育良好３７゜Ｃ：生育良好４０゜Ｃ：生育せず４．生理学的諸性質（１）ゼラチンの液化陰性（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地）（２）スターチの加水分解陽性（スターチ・無機塩寒天培地）（３）脱脂粉乳の凝固陰性（スキムミルク培地）（４）脱脂粉乳のペプトン化陰性（スキムミルク培地）（５）メラニン様色素の生成陰性（６）食塩耐性食塩含有量２％以下で生育（イースト・麦芽寒天培地）５．炭素源の利用能プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地とし、下記各種
糖を添加して２８゜Ｃ１４日間培養した。

【００２０】Ｄ−グルコース＋ラフィノース − Ｄ−キシロース＋Ｄ−マンニトール＋Ｌ−アラビノース＋イノシトール − Ｌ−ラムノース＋サリシン＋Ｄ−フルクトース＋シュクロース＋Ｄ−ガラクトース＋６．菌体成分細胞壁からは、ｍｅｓｏ−ジアミノピメリン酸およびグ
リシンが検出され、細胞壁タイプはＩＩ型であると考え
られる。また、分類上特徴ある全菌体糖成分はアラビノ
ースおよびキシロースであり、糖パターンはＤ−型であ
った。

【００２１】以上の菌学的諸性質よりＡ４０６４４株は
放線菌アクチノプラネス属に属すると考えられる。した
がってＡ４０６４４株をアクチノプラネスエスピー
Ａ４０６４４（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ．Ａ４
０６４４）と称することとした。

【００２２】尚、本菌株は通商産業省工業技術院生命工
学工業技術研究所に寄託されており、その受託番号はＦ
ＥＲＭＰ−１４１９６である。

【００２３】本発明で使用する抗腫瘍性物質ＢＥ−４０
６４４を生産する微生物の変異株は、例えばＸ線もしく
は紫外線などの照射処理、例えばナイトロジェンマスタ
ード、アザセリン、亜硝酸、２−アミノプリンもしくは
Ｎ−メチル−Ｎ´−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン
（ＮＴＧ）等の変異誘起剤による処理、ファージ接触、
形質転換、形質導入又は接合などの通常用いられる菌種
変換処理方法によりＢＥ−４０６４４生産菌を変異させ
た微生物である。

【００２４】本発明のＢＥ−４０６４４類を製造するに
あたり、ＢＥ−４０６４４の生産菌株を栄養源含有培地
に接種して好気的に発育させることにより、ＢＥ−４０
６４４を含む培養物が得られる。栄養源としては、放線
菌の栄養源として公知のものが使用できる。

【００２５】例えば、炭素源としては、市販されている
ブドウ糖、麦芽糖、デンプン、庶糖、糖密又はデキスト
リンなどを単独又は混合物として用いることができる。

【００２６】窒素源としては、市販されている大豆粉、
コーンステイープリカー、肉エキス、酵母エキス、乾燥
酵母、綿実粉、ペプトン、小麦胚芽、魚粉、ミートミー
ル、脱脂米ヌカ、脱脂肉骨粉、無機アンモニウム塩又は
硝酸ナトリウムなどを単独又は混合物として用いること
ができる。

【００２７】無機塩としては、市販されている炭酸カル
シウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシ
ウム、臭化ナトリウム、ホウ酸ナトリウム又は各種リン
酸塩などを用いることができる。

【００２８】その他必要に応じて、鉄、マンガン、亜
鉛、コバルト、モリブデンなどの重金属塩を微量添加す
ることもできる。

【００２９】また、発泡の激しい場合には消泡剤とし
て、例えば大豆油もしくは亜麻仁油などの植物油、オク
タデカノールなどの高級アルコール類又は各種シリコン
化合物などを適宜添加してもよい。

【００３０】これらのもの以外でも、該生産菌が利用
し、ＢＥ−４０６４４の生産に役立つもの例えば３−
（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸又はホウ酸ナト
リウムなどであれば、いずれも使用することができる。

【００３１】培養方法としては、一般の微生物代謝産物
の生産方法と同様に行なえばよく、固体培養でも液体培
養でもよい。液体培養の場合は、静置培養、攪拌培養、
振とう培養又は通気培養などのいずれを実施してもよい
が、特に振盪培養又は深部通気攪拌培養が望ましい。培
養温度は２７〜３７℃が適当であるが、好ましくは２５
〜３０℃である。好ましい培地のｐＨは４〜８の範囲
で、培養時間は７２時間〜３６０時間、好ましくは９６
時間〜２８８時間である。

【００３２】培養物から目的とするＢＥ−４０６４４を
採取するには、微生物の生産する代謝物から採取するの
に通常使用される分離手段が適宜利用される。

【００３３】ＢＥ−４０６４４類は培養濾液中及び菌体
中に存在するので、培養濾液または菌体より通常の分離
手段、例えば溶媒抽出法、イオン交換樹脂法又は吸着も
しくは分配クロマトグラフィー法及びゲル濾過法などを
単独又は組み合わせて行なうことにより精製できる。ま
た高速液体クロマトグラフィーや薄層クロマトグラフィ
ーなども抽出精製に適宜利用可能である。

【００３４】好ましい分離精製の例として次の方法が挙
げられる。まず培養液を濾過し、菌体を得る。得られた
菌体をメタノールまたはアセトンなどの有機溶媒を用い
て抽出する。得られた粗抽出物について、水−酢酸エチ
ル分配を行ない、酢酸エチルを留去後得られる抽出物に
ついてシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム／
メタノールで溶出）を行なう。ＢＥ−４０６４４を含む
フラクションを減圧下に濃縮し、更にゲル濾過（メタノ
ールで溶出）を行なう。ＢＥ−４０６４４を含むフラク
ションを減圧下で濃縮し、残留物を更に逆相カラムクロ
マトグラフィーに供することにより、ＢＥ−４０６４４
を黄色粉末として得ることができる。

【００３５】式［ＩＩ］の化合物（ＢＥ−４０６４４）
は、有機化学の分野で公知のアルキル化、アルカノイル
化又はベンゾイル化法により、Ｒが低級アルキル基、低
級アルカノイル基又はベンゾイル基である化合物に容易
に変換することができる。

【００３６】例えば塩基の存在下にＢＥ−４０６４４を
アルキル化剤で処理し、対応する低級アルキル誘導体に
容易に導くことができ、塩基存在下に、ＢＥ−４０６４
４を酸無水物又は酸ハロゲン化物で処理して低級アルカ
ノイル又はベンゾイル誘導体を容易に得ることができ
る。

【００３７】本発明の化合物ＢＥ−４０６４４類は腫瘍
細胞の増殖を阻害し、制癌効果を発揮するが、本発明化
合物を抗腫瘍剤として使用する際の投与形態としては各
種の形態を選択でき、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、
顆粒剤もしくは液剤などの経口剤、又は例えば溶液もし
くは懸濁液などの殺菌した液状の非経口剤が挙げられ
る。

【００３８】固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセル
剤、顆粒剤又は粉末の形態として製造することもできる
が、適当な添加物を使用して製造することもできる。そ
のような添加物としては、例えば乳糖もしくはブドウ糖
などの糖類、例えばトウモロコシ、小麦もしくは米など
のデンプン類、例えばステアリン酸などの脂肪酸類、例
えばメタケイ酸アルミン酸マグネシウムもしくは無水リ
ン酸カルシウムなどの無機塩類、例えばポリビニルピロ
リドンもしくはポリアルキレングリコールなどの合成高
分子類、例えばステアリン酸カルシウムもしくはステア
リン酸マグネシウムなどの脂肪酸塩類、例えばステアリ
ルアルコールもしくはベンジルアルコールなどのアルコ
ール類類、例えばメチルセルルース、カルボキシメチル
セルロース、エチルセルロースもしくはヒドロキシプロ
ピルメチルセルロースなどの合成セルロース誘導体、又
は水、ゼラチン、タルク、植物油、アラビアゴムなど通
常用いられる添加物が挙げられる。

【００３９】これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤及び粉
末などの固形製剤は一般的には０．１〜１００重量％、
好ましくは５〜１００重量％の有効成分を含む。

【００４０】液状製剤は、水、アルコール類又は例えば
大豆油、ピーナッツ油もしくはゴマ油などの植物由来の
油など液状製剤において通常用いられる適当な添加剤を
使用し、懸濁液、シロップ剤又は注射剤などの形態とし
て製造される。

【００４１】特に、非経口的に筋肉内注射、静脈注射又
は皮下注射で投与する場合の適当な溶剤としては、例え
ば注射用蒸留水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉注射
用）、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、静脈
内注射用液体（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリウム
などの水溶液）もしくは電解質溶液（点滴静注及び静脈
内注射用）など、又はこれらの混合溶液が挙げられる。

【００４２】これらの注射剤はあらかじめ溶解したもの
のほか、粉末のままあるいは適当な添加剤を加えたもの
を用時溶解する形態もとり得る。これらの注射液は通
常、０．１〜１０重量％、好ましくは１〜５重量％の有
効成分を含む。

【００４３】経口投与の懸濁剤又はシロップ剤などの液
剤は、０．５〜１０重量％の有効成分を含む。

【００４４】本発明の化合物の実際に好ましい投与量
は、使用される化合物の種類、配合された組成物の種
類、適用頻度及び治療すべき特定部位、患者の病状及び
腫瘍によって変化することに注意すべきである。例え
ば、１日あたりの成人の投与量は、経口投与の場合、１
０〜５００ｍｇであり、非経口投与、好ましくは静脈注
射の場合、１日あたり、１０〜１００ｍｇである。な
お、投与回数は投与方法及び症状によって異なるが、１
回ないし５回である。

【００４５】

【実施例】以下に本発明の化合物の製造実施例を示す
が、本発明はこれらによって何ら限定されるものではな
い。実施例１斜面軟寒天培地に接種した放線菌Ａ４０６４４株をグル
コース０．２％、デキストリン２％、ミートミール０．
５％、脱脂米ヌカ０．５％、脱脂肉骨粉０．１％、乾燥
酵母０．０５％、硫酸マグネシウム０．０２５％、臭化
ナトリウム０．０２５％、塩化ナトリウム０．２５％、
リン酸水素二カリウム０．０５％、硫酸第一鉄０．００
０２％、塩化第二銅０．００００４％、塩化マンガン
０．００００４％、塩化コバルト０．００００４％、硫
酸亜鉛０．００００８％、ホウ酸ナトリウム０．０００
０８％及びモリブデン酸ナトリウム０．０００２４％か
らなる培地（ｐＨ７．２）１００ｍＬを含む５００ｍＬ
容の三角フラスコ２本に接種し、２８℃で７２時間、回
転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。この培養液
を３ｍＬずつ上記の培地を１００ｍＬを含む５００ｍＬ
容の三角フラスコ５０本に接種し２８℃で２６４時間、
回転振盪機（１８０ｒｐｍ）上で培養した。

【００４６】このようにして得られた培養液（１０Ｌ）
から濾過により菌体を分離し、この菌体にメタノール４
Ｌを加え、数時間攪拌後濾過した。残渣に更に３Ｌのメ
タノールを加え攪拌後、濾過した。この濾液を減圧下で
３００ｍＬまで濃縮した後、酢酸エチル３００ｍＬを加
え液−液分配を行なった。水層を更に３００ｍＬの酢酸
エチルで抽出した。得られた酢酸エチル画分を減圧下に
濃縮し、残渣を２００ｍＬの９０％メタノール水溶液に
溶解し２００ｍＬのｎ−ヘキサンで２回洗浄した。この
９０％メタノール水溶液画分を減圧下に濃縮し７３０ｍ
ｇの粗抽出物を得た。この抽出物をシリカゲルカラム
（メルク社製キーゼルゲル６０、７０−２３０メッシ
ュ、２．０φ×３５ｃｍ）に吸着させ、クロロホルム／
メタノール（２０：１）で展開した。溶出した活性画分
を更にセファデックスＬＨ−２０カラム（ファルマシア
社製、１．５φ×４５ｃｍ）にかけメタノールで展開
し、ＢＥ−４０６４４を含む画分を集め、減圧下に濃縮
して得られたものをＯＤＳカラム（資生堂Ｃａｐｃｅｌ
ｌｐａｋ^TM Ｃ₁₈ ２０φ×２５０ｍｍ）に供した。
移動相としては５６％アセトニトリル水溶液を用い、毎
分５ｍＬで送液して分取高速液体クロマトグラフィーを
行なった結果、４１．３ｍｇのＢＥ−４０６４４を得
た。実施例２ＢＥ−４０６４４アセテートの製造室温でＢＥ−４０６４４６．７ｍｇを無水ピリジン
０．２ｍＬに溶解し、無水酢酸０．２ｍＬを加え室温に
て１時間攪拌した。反応混合物に１０ｍＬの水を加え、
１０ｍＬの酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を１０
ｍＬの水で４回洗浄した後減圧下に濃縮し、ＢＥ−４０
６４４アセテート６．３ｍｇを得た。

【００４７】以下に本発明の化合物の製剤例を示すが、
本発明の化合物の製剤は本製剤例に限定されるものでは
ない。製剤例１本物質（ＢＥ−４０６４４）１０（部）重質酸化マグネシウム１５乳糖７５以上を均一に混合して、３５０μｍ以下の粉末状又は細
粒状の散剤とする。この散剤をカプセル容器に入れカプ
セル剤とした。製剤例２本物質（ＢＥ−４０６４４）４５（部）澱粉１５乳糖１６結晶性セルロース２１ポリビニルアルコール３蒸留水３０以上を均一に混合した後、破砕造粒して乾燥し、次いで
篩別して直径１４１０〜１７７μｍの大きさの顆粒剤と
した。製剤例３製剤例２と同様の方法で顆粒剤を作製した後、この顆粒
剤９６部に対してステアリン酸カルシウム３部を加えて
圧縮成形し直径１０ｍｍの錠剤を作製した。製剤例４製剤例２の方法で得られた顆粒剤９０部に対して結晶性
セルロース１０部及びステアリン酸カルシウム３部を加
えて圧縮成形し、直径８ｍｍの錠剤とした後、これにシ
ロップゼラチン、沈降性炭酸カルシウム混合懸濁液を加
えて糖衣錠を作製した。製剤例５本物質（ＢＥ−４０６４４）０．６（部）非イオン系界面活性剤２．４生理的食塩水９７以上を加温混合してからアンプルに入れ、滅菌を行なっ
て注射剤を作製した。

【００４８】

【発明の効果】本発明に記載するＢＥ−４０６４４類
は、マウス及びヒトの癌細胞に対して強い増殖抑制効果
を示し、またＨＩＶの増殖抑制効果を示すことから、医
薬の分野で有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】第１図はＢＥ−４０６４４で処理されたＨＩＶ
感染ヒトＴ細胞株Ｍｏｌｔ４の培養上清中のウイルス量
を示す。ヒトＴ細胞株Ｍｏｌｔ４にＨＩＶを感染させ、
その１週間後に各種の濃度でＢＥ４０６４４を加え、そ
の１日後（○）及び２日後（●）にポリエチレングリコ
ールを用いて培養上清よりウイルスを沈殿させ、その合
計の逆転写酵素活性を測定しウイルスの残存量として求
めた。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:045） (Ｃ１２Ｐ 17/06 Ｃ１２Ｒ 1:045） (72)発明者池島喬茨城県つくば市大久保３番地萬有製薬株式会社つくば研究所内 (72)発明者鈴木肇茨城県つくば市大久保３番地萬有製薬株式会社つくば研究所内 (72)発明者須田寛之茨城県つくば市大久保３番地萬有製薬株式会社つくば研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式【化１】［式中、Ｒは水素原子、低級アルキル基、低級アルカノ
ル基又はベンゾイル基を示す］で表される化合物。
【請求項２】アクチノプラネス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎ
ｅｓ）属に属し、式【化２】の化合物を産生する能力を有する微生物又はその変異株
を培養し、その培養液及び菌体から式［ＩＩ］の化合物
を採取することを特徴とする、式［ＩＩ］【化３】の化合物の製造法。
【請求項３】アクチノプラネス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎ
ｅｓ）属に属し、式【化４】の化合物を産生する能力を有する微生物又はその変異株
を培養し、その培養液及びその菌体から式［ＩＩ］の化
合物を採取し、必要に応じて式［ＩＩ］の化合物をアル
キル化、アルカノイル化又はベンゾイル化することを特
徴とする、一般式［Ｉ］【化５】の化合物の製造法。
【請求項４】微生物又はその変異株が、アクチノプラネ
スエスピー（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ．）で
ある請求項２記載の製造法。
【請求項５】一般式【化６】［式中、Ｒは水素原子、低級アルキル基、低級アルカノ
イル基又はベンゾイル基を示す］で表される化合物を有
効成分とする抗腫瘍剤。
【請求項６】一般式【化７】［式中、Ｒは水素原子、低級アルキル基、低級アルカノ
イル基又はベンゾイル基を示す］で表される化合物を有
効成分とする抗ＨＩＶ剤。
【請求項７】式【化８】の化合物を産生する能力を有するアクチノプラネス（Ａ
ｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ）属に属する微生物又はその変
異株。
【請求項８】微生物が、アクチノプラネスエスピー
Ａ４０６４４（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ．Ａ４
０６４４）である請求項７記載の微生物又はその変異
株。