JPH07145161A - 新規セスキテルペン誘導体 - Google Patents
新規セスキテルペン誘導体Info
- Publication number
- JPH07145161A JPH07145161A JP26539491A JP26539491A JPH07145161A JP H07145161 A JPH07145161 A JP H07145161A JP 26539491 A JP26539491 A JP 26539491A JP 26539491 A JP26539491 A JP 26539491A JP H07145161 A JPH07145161 A JP H07145161A
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- JP
- Japan
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- substance
- sesquiterpene derivative
- formula
- culture
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- Granted
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- Furan Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 式
【化１】
式中、Ｒ１はヒドロキシメチル基であり且つＲ２は水酸
基であるか、或いはＲ１はヒドロキシメチル基又はホル
ミル基であり且つＲ２は水素原子である、で示されるセ
スキテルペン誘導体。 【効果】 本化合物は優れたＡＭＶプロテアーゼ阻害活
性を有しており、レトロウイルスプロテアーゼ阻害剤と
して有用である。
基であるか、或いはＲ１はヒドロキシメチル基又はホル
ミル基であり且つＲ２は水素原子である、で示されるセ
スキテルペン誘導体。 【効果】 本化合物は優れたＡＭＶプロテアーゼ阻害活
性を有しており、レトロウイルスプロテアーゼ阻害剤と
して有用である。
Description
【０００１】本発明は新規なセスキテルペン誘導体に関
し、さらに詳しくは、レトロウイルスプロテアーゼ阻害
活性を有する下記一般式
し、さらに詳しくは、レトロウイルスプロテアーゼ阻害
活性を有する下記一般式
【０００２】
【化５】
【０００３】式中、Ｒ1はヒドロキシメチル基であり且
つＲ2は水酸基であるか、或いはＲ1はヒドロキシメチル
基又はホルミル基であり且つＲ2は水素原子である、で
示されるセスキテルペン誘導体、及びその製造法に関す
る。
つＲ2は水酸基であるか、或いはＲ1はヒドロキシメチル
基又はホルミル基であり且つＲ2は水素原子である、で
示されるセスキテルペン誘導体、及びその製造法に関す
る。
【０００４】後天性免疫不全症候群（Aquired immuno D
eficiency Syndrome：AIDS）はレトロウイルスの一種で
あるヒト免疫不全ウイルス（Human Immunodeficiency V
irus：HIV）によつて引き起こされる免疫不全症であ
る。
eficiency Syndrome：AIDS）はレトロウイルスの一種で
あるヒト免疫不全ウイルス（Human Immunodeficiency V
irus：HIV）によつて引き起こされる免疫不全症であ
る。
【０００５】ＨＩＶに関する研究の進展に伴い本ウイル
スに特異的な酵素が明らかとなり、抗ＨＩＶ薬をめざし
た阻害剤開発が行われている。特に逆転写酵素の阻害剤
アジドチミジン（ＡＺＴ）は、現在臨床使用されている
数少ない抗ＨＩＶ薬の一つである。しかし、ＡＺＴ副作
用が強く、また耐性獲得ウイルスの出現などが問題とな
つている。
スに特異的な酵素が明らかとなり、抗ＨＩＶ薬をめざし
た阻害剤開発が行われている。特に逆転写酵素の阻害剤
アジドチミジン（ＡＺＴ）は、現在臨床使用されている
数少ない抗ＨＩＶ薬の一つである。しかし、ＡＺＴ副作
用が強く、また耐性獲得ウイルスの出現などが問題とな
つている。
【０００６】ＨＩＶプロテアーゼは、ＨＩＶの成熟感染
に必須な酵素で、その構造はほぼ解明され、酸性プロテ
アーゼに属することなどが明らかとなつた。そこでその
阻害物質を見いだすことによつて新しい抗ＨＩＶ薬の開
発がすすめられている［例えば、Sham ら、Biochemical
and Biophysical Research Communications、vol.１７
５、９１４−９１９（１９９１）等参照］。
に必須な酵素で、その構造はほぼ解明され、酸性プロテ
アーゼに属することなどが明らかとなつた。そこでその
阻害物質を見いだすことによつて新しい抗ＨＩＶ薬の開
発がすすめられている［例えば、Sham ら、Biochemical
and Biophysical Research Communications、vol.１７
５、９１４−９１９（１９９１）等参照］。
【０００７】レトロウイルスの一種であるニワトリ骨髄
芽球症ウイルス（Avian Myeloblastosis Virus：AMV）
プロテアーゼは、酵素的性質ならびにその基質認識切断
部位がＨＩＶプロテアーゼと類似しているため、ＨＩＶ
プロテアーゼ阻害剤のスクリーニングに応用可能である
［Skalka,Cell,Vol.５６、９１１〜９１３（１９８９）
等参照］。
芽球症ウイルス（Avian Myeloblastosis Virus：AMV）
プロテアーゼは、酵素的性質ならびにその基質認識切断
部位がＨＩＶプロテアーゼと類似しているため、ＨＩＶ
プロテアーゼ阻害剤のスクリーニングに応用可能である
［Skalka,Cell,Vol.５６、９１１〜９１３（１９８９）
等参照］。
【０００８】本発明者らは、新しい抗ＨＩＶ薬の開発を
めざし、微生物の生産する二次代謝産物にＡＭＶプロテ
アーゼの阻害物質を求めて、各種微生物が生産するＡＭ
Ｖプロテアーゼ阻害物質の探索を続けていたところ、カ
ビに属する或る種の菌株の培養物中にＡＭＶプロテアー
ゼ阻害活性を有する物質が生産されていることを見いだ
し、その活性物質を単離し、その理化学性状及び構造を
確定することにより、本発明を完成した。
めざし、微生物の生産する二次代謝産物にＡＭＶプロテ
アーゼの阻害物質を求めて、各種微生物が生産するＡＭ
Ｖプロテアーゼ阻害物質の探索を続けていたところ、カ
ビに属する或る種の菌株の培養物中にＡＭＶプロテアー
ゼ阻害活性を有する物質が生産されていることを見いだ
し、その活性物質を単離し、その理化学性状及び構造を
確定することにより、本発明を完成した。
【０００９】本発明により提供される前記一般式（Ｉ）
には、次の３つの化合物が包含される。
には、次の３つの化合物が包含される。
【００１０】
【化６】
【００１１】以下、この化合物を「ＮＦ５００３−Ｂ物
質」と称する。
質」と称する。
【００１２】
【化７】
【００１３】以下、この化合物を「ＮＦ５００３−Ｅ物
質」と称する。
質」と称する。
【００１４】
【化８】
【００１５】以下、この化合物を「ＮＦ５００３−Ｆ物
質」と称する。
質」と称する。
【００１６】これらの化合物の理化学的性状は次のとお
りである。
りである。
【００１７】［ａ］ ＮＦ５００３−Ｂ物質の塩化メチ
レン１／２分子を含む結晶は下記の特性を有する。
レン１／２分子を含む結晶は下記の特性を有する。
【００１８】（1） 色および形状：白色微細結晶 （2） 融点：２１５℃から徐々に分解し、明確な融点を
示さない。
示さない。
【００１９】（3） 分子式：Ｃ23Ｈ32Ｏ6・１／２ＣＨ2
Ｃｌ2 （4） マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ，マトリツクス
３−ニトロベンジルアルコール）： 正イオンモード ｍ／ｚ ４０５（Ｍ＋１）+ 負イオンモード ｍ／ｚ ４０３（Ｍ−１）- （5） 比旋光度（２４℃）：［α］D −７１°（ｃ０.
３１，ＭｅＯＨ） （6） 紫外部吸収スペクトル：図１に示す。
Ｃｌ2 （4） マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ，マトリツクス
３−ニトロベンジルアルコール）： 正イオンモード ｍ／ｚ ４０５（Ｍ＋１）+ 負イオンモード ｍ／ｚ ４０３（Ｍ−１）- （5） 比旋光度（２４℃）：［α］D −７１°（ｃ０.
３１，ＭｅＯＨ） （6） 紫外部吸収スペクトル：図１に示す。
【００２０】 極大吸収波長（ｎｍ） 分子吸光係数 ３２８ ４,７００ ２８１ ９,４１０ ２２９ １２,２００ （7） 赤外部吸収スペクトル：図２に示す。
【００２１】（8） 薄層シリカゲルクロマトグラフイー 溶媒 Ｒｆ 酢酸エチル：ヘキサン（２：１） ０.０３ トルエン ：アセトン（１：１） ０.１７ （9） 呈色反応 陰性：ギブスの反応 陽性：２,４−ジニトロフエニルヒドラジン試薬 （10） 1ＨＮＭＲスペクトル：図３に示す。
【００２２】（11） 13ＣＮＭＲスペクトル：図４に示
す。
す。
【００２３】（12） 溶解性：メタノール、アセトン、
クロロホルム、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド
に可溶、水、ｎ−ヘキサンに不溶。
クロロホルム、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド
に可溶、水、ｎ−ヘキサンに不溶。
【００２４】（13） 塩基性、中性、酸性の区別：酸性
物質 ［ｂ］ ＮＦ５００３−Ｅ物質の塩化メチレン１／２分
子を含む結晶は下記の特性を有する。
物質 ［ｂ］ ＮＦ５００３−Ｅ物質の塩化メチレン１／２分
子を含む結晶は下記の特性を有する。
【００２５】（1） 色および形状：無色板状結晶 （2） 融点：１７３℃から徐々に分解し、明確な融点を
示さない。
示さない。
【００２６】（3） 分子式：Ｃ23Ｈ32Ｏ5・１／２ＣＨ2
Ｃｌ2 （4） マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ，マトリツクス
３−ニトロベンジルアルコール）： 正イオンモード ｍ／ｚ ３８９（Ｍ＋１）+ 負イオンモード ｍ／ｚ ３８７（Ｍ−１）- （5） 比旋光度（２４℃）：［α］D −６８°（ｃ０.
２７，ＭｅＯＨ） （6） 紫外部吸収スペクトル：図５に示す。
Ｃｌ2 （4） マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ，マトリツクス
３−ニトロベンジルアルコール）： 正イオンモード ｍ／ｚ ３８９（Ｍ＋１）+ 負イオンモード ｍ／ｚ ３８７（Ｍ−１）- （5） 比旋光度（２４℃）：［α］D −６８°（ｃ０.
２７，ＭｅＯＨ） （6） 紫外部吸収スペクトル：図５に示す。
【００２７】 極大吸収波長（ｎｍ） 分子吸光係数 ３２８ ５,４３０ ２８６ １０,８００ ２２５ １５,１００ （7） 赤外部吸収スペクトル：図６に示す。
【００２８】（8） 薄層シリカゲルクロマトグラフイー 溶媒 Ｒｆ 酢酸エチル：ヘキサン（２：１） ０.１６ トルエン ：アセトン（１：１） ０.４１ （9） 呈色反応 陰性：ギブスの反応 陽性：２,４−ジニトロフエニルヒドラジン試薬 （10） 1ＨＮＭＲスペクトル：図７に示す。
【００２９】（11） 13ＣＮＭＲスペクトル：図８に示
す。
す。
【００３０】（12） 溶解性：メタノール、アセトン、
クロロホルム、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド
に可溶、水、ｎ−ヘキサンに不溶。
クロロホルム、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド
に可溶、水、ｎ−ヘキサンに不溶。
【００３１】（13） 塩基性、中性、酸性の区別：酸性
物質 ［ｃ］ ＮＦ５００３−Ｆ物質は下記の特性を有する。
物質 ［ｃ］ ＮＦ５００３−Ｆ物質は下記の特性を有する。
【００３２】（1） 色および形状：淡黄色粉末 （2） 融点：１８０℃から徐々に分解し、明確な融点を
示さない。
示さない。
【００３３】（3） 分子式：Ｃ23Ｈ30Ｏ5 （4） マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ，マトリツクス
３−ニトロベンジルアルコール）： 正イオンモード ｍ／ｚ ３８７（Ｍ＋１）+ 負イオンモード ｍ／ｚ ３８５（Ｍ−１）- （5） 比旋光度（２４℃）：［α］D −４０°（ｃ０.
２７，ＭｅＯＨ） （6） 紫外部吸収スペクトル：図９に示す。
３−ニトロベンジルアルコール）： 正イオンモード ｍ／ｚ ３８７（Ｍ＋１）+ 負イオンモード ｍ／ｚ ３８５（Ｍ−１）- （5） 比旋光度（２４℃）：［α］D −４０°（ｃ０.
２７，ＭｅＯＨ） （6） 紫外部吸収スペクトル：図９に示す。
【００３４】 極大吸収波長（ｎｍ） 分子吸光係数 ３５２ ４,０９０ ３０１ ５,６１０ ２４５ １４,９００ （7） 赤外部吸収スペクトル：図１０に示す。
【００３５】（8） 薄層シリカゲルクロマトグラフイー 溶媒 Ｒｆ 酢酸エチル：ヘキサン（２：１） ０.４６ トルエン ：アセトン（１：１） ０.６３ （9） 呈色反応 陽性：キブスの反応 ２,４−ジニトロフエニルヒドラジン試薬 （10） 1ＨＮＭＲスペクトル：図１１に示す。
【００３６】（11） 13ＣＮＭＲスペクトル：図１２に
示す。
示す。
【００３７】（12） 溶解性：メタノール、アセトン、
クロロホルム、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド
に可溶、水、ｎ−ヘキサンに不溶。
クロロホルム、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド
に可溶、水、ｎ−ヘキサンに不溶。
【００３８】（13） 塩基性、中性、酸性の区別：酸性
物質 本発明のＮＦ５００３−Ｂ，ＮＦ５００３−ＥおよびＮ
Ｆ５００３−Ｆ物質は、前記式（Ｉ−ａ）、（Ｉ−ｂ）
及び（Ｉ−ｃ）で示されるとおり、セスキテルペン骨格
をもつ化合物群である。本化合物群は、抗補体化合物と
してスタキボトリス・コンプレメンテイ、ｎｏｖ.ｓｐ.
Ｋ−７６（Stachybotrys complementi，nov.sp.K−76）
の培養液から単離されている既知のセスキテルペン化合
物Ｋ−７６と構造上の類似性を有している［Miyazaki
ら、Microbiology and Immunology，Vol.２４，１０９
１−１１０８（１９８０）および Kaise ら、Journal o
f Chemistry Chemical Communication，Vol.１９７９，
７２６−７２７（１９７９）参照］。しかしながら、Ｎ
Ｆ５００３−Ｂ、ＮＦ５００３−ＥおよびＮＦ５００３
−Ｆ物質はそれらの分子式、物理化学的性質および構造
上の特徴によつて、既知の化合物Ｋ−７６とは区別され
る新規物質である。
物質 本発明のＮＦ５００３−Ｂ，ＮＦ５００３−ＥおよびＮ
Ｆ５００３−Ｆ物質は、前記式（Ｉ−ａ）、（Ｉ−ｂ）
及び（Ｉ−ｃ）で示されるとおり、セスキテルペン骨格
をもつ化合物群である。本化合物群は、抗補体化合物と
してスタキボトリス・コンプレメンテイ、ｎｏｖ.ｓｐ.
Ｋ−７６（Stachybotrys complementi，nov.sp.K−76）
の培養液から単離されている既知のセスキテルペン化合
物Ｋ−７６と構造上の類似性を有している［Miyazaki
ら、Microbiology and Immunology，Vol.２４，１０９
１−１１０８（１９８０）および Kaise ら、Journal o
f Chemistry Chemical Communication，Vol.１９７９，
７２６−７２７（１９７９）参照］。しかしながら、Ｎ
Ｆ５００３−Ｂ、ＮＦ５００３−ＥおよびＮＦ５００３
−Ｆ物質はそれらの分子式、物理化学的性質および構造
上の特徴によつて、既知の化合物Ｋ−７６とは区別され
る新規物質である。
【００３９】本発明の前記一般式（Ｉ）の化合物（ＮＦ
５００３−Ｂ、ＮＦ５００３−Ｅ及びＮＦ５００３−
Ｆ）は、例えば、スタキボトリス属に属する一般式
（Ｉ）のセスキテルペン誘導体生産能を有する微生物を
培地で培養し、その培養物から該セスキテルペン誘導体
を採取することにより製造することができる。
５００３−Ｂ、ＮＦ５００３−Ｅ及びＮＦ５００３−
Ｆ）は、例えば、スタキボトリス属に属する一般式
（Ｉ）のセスキテルペン誘導体生産能を有する微生物を
培地で培養し、その培養物から該セスキテルペン誘導体
を採取することにより製造することができる。
【００４０】一般式（Ｉ）のセスキテルペン誘導体生産
能を有する微生物の探索は、例えば以下のようにして行
なうことができる。１０コのアミノ酸からなる合成ペプ
チド（Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｐｒ
ｏ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ａｌａ）をＡＭＶプロテ
アーゼによつて加水分解を行なう反応系中に種々の微生
物の培養液を加え、加水分解反応の進行を高速液体クロ
マトグラフイーなどで検出する。微生物培養液を加えな
い場合の加水分解反応に比べて、反応が阻害されている
微生物培養液から活性物質を単離、確認することによ
り、目的の酵素阻害物質を生産する能力のある微生物を
得ることができる。
能を有する微生物の探索は、例えば以下のようにして行
なうことができる。１０コのアミノ酸からなる合成ペプ
チド（Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｐｒ
ｏ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ａｌａ）をＡＭＶプロテ
アーゼによつて加水分解を行なう反応系中に種々の微生
物の培養液を加え、加水分解反応の進行を高速液体クロ
マトグラフイーなどで検出する。微生物培養液を加えな
い場合の加水分解反応に比べて、反応が阻害されている
微生物培養液から活性物質を単離、確認することによ
り、目的の酵素阻害物質を生産する能力のある微生物を
得ることができる。
【００４１】そのようにして発見された一般式（Ｉ）の
セスキテルペン誘導体生産能を有する微生物の１つとし
て、沖縄県、八重山郡竹富町の土壌から単離されたスタ
キボトリス・エスピーＭｅｒ−ＮＦ５００３菌株（以
下、Ｍｅｒ−ＮＦ５００３菌と略称する）が挙げられ
る。
セスキテルペン誘導体生産能を有する微生物の１つとし
て、沖縄県、八重山郡竹富町の土壌から単離されたスタ
キボトリス・エスピーＭｅｒ−ＮＦ５００３菌株（以
下、Ｍｅｒ−ＮＦ５００３菌と略称する）が挙げられ
る。
【００４２】Ｍｅｒ−ＮＦ５００３菌の菌学的性状は次
のとおりである。
のとおりである。
【００４３】１．各種培地における生育形態 培養はすべて２６℃で実施し、寒天平板培地上での生育
形態を記載した。
形態を記載した。
【００４４】（１） ツアペツク寒天培地 生育は大変遅く、２６℃１０日間の培養でコロニーの直
径は２０ｍｍである。コロニーの生育は薄く、気中菌糸
（Aerial mycelium）はほとんど認められず、菌糸は培
地中でのみ生育するが、菌糸の量は少ない。コロニーの
色はうす黄色〜うす黄茶色であり、菌糸のみの生育が認
められ、胞子形成はほとんど無い。有性生殖器官、厚膜
胞子（Chlamydospore）は認められない。
径は２０ｍｍである。コロニーの生育は薄く、気中菌糸
（Aerial mycelium）はほとんど認められず、菌糸は培
地中でのみ生育するが、菌糸の量は少ない。コロニーの
色はうす黄色〜うす黄茶色であり、菌糸のみの生育が認
められ、胞子形成はほとんど無い。有性生殖器官、厚膜
胞子（Chlamydospore）は認められない。
【００４５】（２） 麦芽エキス寒天培地 生育は大変遅く、２６℃１０日間の培養でコロニーの直
径は１５ｍｍである。コロニーの生育は薄く、気中菌糸
は僅かに認められ、コロニー表面の色はうす黄茶色であ
る。胞子形成は少しではあるが認められ、粘液質で球形
の分生子頭（Conidial head）を培地面より発生した分
生子柄（Conidiophore）の先端に着生する。分生子頭は
初期には無色であるが成熟すると灰黒色に変化する。有
性生殖器官、厚膜胞子の形成は認められない。
径は１５ｍｍである。コロニーの生育は薄く、気中菌糸
は僅かに認められ、コロニー表面の色はうす黄茶色であ
る。胞子形成は少しではあるが認められ、粘液質で球形
の分生子頭（Conidial head）を培地面より発生した分
生子柄（Conidiophore）の先端に着生する。分生子頭は
初期には無色であるが成熟すると灰黒色に変化する。有
性生殖器官、厚膜胞子の形成は認められない。
【００４６】（３）オートミール寒天培地 生育は中程度で、２６℃１０日間の培養で、コロニーの
直径は３５ｍｍである。コロニーの生育は薄く気中菌糸
の生育は少ないが、多量の胞子形成が認められ、培地面
より多くの分生子柄が分枝しないで単独で発生し、先端
には粘液質で球状の分生子頭を着生する。分生子頭は初
期には無色であるが成熟すると暗い灰色に変化する。コ
ロニー表面の色はうす黄茶色であるが、分生子が成熟し
てくると灰黒色の点が無数に確認される。有性生殖器
官、厚膜胞子の形成は認められない。
直径は３５ｍｍである。コロニーの生育は薄く気中菌糸
の生育は少ないが、多量の胞子形成が認められ、培地面
より多くの分生子柄が分枝しないで単独で発生し、先端
には粘液質で球状の分生子頭を着生する。分生子頭は初
期には無色であるが成熟すると暗い灰色に変化する。コ
ロニー表面の色はうす黄茶色であるが、分生子が成熟し
てくると灰黒色の点が無数に確認される。有性生殖器
官、厚膜胞子の形成は認められない。
【００４７】２．形態的性状 オートミール寒天培地上で多くの胞子形成が認められ、
分生子柄は培地面の菌糸より直立する。
分生子柄は培地面の菌糸より直立する。
【００４８】分生子柄（Conidiophore）は単独で発生
し、分枝は無く、無色で隔壁（Septum）がある。分生子
柄の大きさは３５〜７５μ×２.０〜２.５μで比較的小
さく、先端の方は細くなつていて表面は平滑である。頂
端部は膨らみがあり頂嚢（Vesicle）状の形態を示す。
し、分枝は無く、無色で隔壁（Septum）がある。分生子
柄の大きさは３５〜７５μ×２.０〜２.５μで比較的小
さく、先端の方は細くなつていて表面は平滑である。頂
端部は膨らみがあり頂嚢（Vesicle）状の形態を示す。
【００４９】梗子（Phialide）は分生子柄先端の頂嚢様
部の上に３〜７個群生し、表面が平滑で無色の棍棒形
で、大きさは２.５〜３.０μ×６.５〜８.０μである。
部の上に３〜７個群生し、表面が平滑で無色の棍棒形
で、大きさは２.５〜３.０μ×６.５〜８.０μである。
【００５０】分生子（Conidium）は梗子の先端より発生
し、多数の楕円形の細胞が直径１５〜２５μの球形をし
た粘液質の分生子頭（Conidial head）を形成する。分
生子は１細胞性で発生の初期は無色であるが、成熟する
と茶灰色になり表面は僅かに粗面で、大きさは３.０〜
４.５μ×６.５〜７.５μである。
し、多数の楕円形の細胞が直径１５〜２５μの球形をし
た粘液質の分生子頭（Conidial head）を形成する。分
生子は１細胞性で発生の初期は無色であるが、成熟する
と茶灰色になり表面は僅かに粗面で、大きさは３.０〜
４.５μ×６.５〜７.５μである。
【００５１】以上の菌学的性状からＭｅｒ−ＮＦ５００
３菌は不完全菌類（Deuteromycotina）に属するカビで
あり、J.A.von Arx“The Genera of Fungi Sporulating
in Pure Culture、１９７４より検索したところスタキ
ボトリス属（Stachybotrys）の菌であつた。G.R.Bisby
“Stachybotrys”Trans.Brit.Mycol.Soc.２６、１３３
〜１４３、M.B.Ellis“Dematiaceous Hyphmycetes”１
９７１、J.C.Gilman“A Manual of Soil Fungi”１９５
７などを参考に既知菌種の記載と比較したところスタキ
ボトリス・アトラ（Stachybotrys atra）に類似する
が、分生子柄の色、先端部に頂嚢状に膨らみのある形態
を示すこと、梗子の大きさや形、分生子の大きさや形態
などから明瞭な違いがあり既知菌種の中に該当するもの
はなかつた。従つて、Ｍｅｒ−ＮＦ５００３菌をスタキ
ボトリス・エスピーＭｅｒ−ＮＦ５００３（Stachybotr
ys sp．Ｍｅｒ−ＮＦ５００３）と命名した。
３菌は不完全菌類（Deuteromycotina）に属するカビで
あり、J.A.von Arx“The Genera of Fungi Sporulating
in Pure Culture、１９７４より検索したところスタキ
ボトリス属（Stachybotrys）の菌であつた。G.R.Bisby
“Stachybotrys”Trans.Brit.Mycol.Soc.２６、１３３
〜１４３、M.B.Ellis“Dematiaceous Hyphmycetes”１
９７１、J.C.Gilman“A Manual of Soil Fungi”１９５
７などを参考に既知菌種の記載と比較したところスタキ
ボトリス・アトラ（Stachybotrys atra）に類似する
が、分生子柄の色、先端部に頂嚢状に膨らみのある形態
を示すこと、梗子の大きさや形、分生子の大きさや形態
などから明瞭な違いがあり既知菌種の中に該当するもの
はなかつた。従つて、Ｍｅｒ−ＮＦ５００３菌をスタキ
ボトリス・エスピーＭｅｒ−ＮＦ５００３（Stachybotr
ys sp．Ｍｅｒ−ＮＦ５００３）と命名した。
【００５２】本発明者らは、本菌をスタキボトリス・エ
スピーＭｅｒ−ＮＦ５００３として工業技術院微生物工
業技術研究所にＦＥＲＭ ｐ−１２３４４の番号で寄託
している。
スピーＭｅｒ−ＮＦ５００３として工業技術院微生物工
業技術研究所にＦＥＲＭ ｐ−１２３４４の番号で寄託
している。
【００５３】Ｍｅｒ−ＮＦ５００３菌の培養は例えば次
のようにして行なうことができる。培地の栄養源とし
て、例えば、炭素源としては、グルコース、シユクロー
ス、水あめ、糖みつ、デキストリン、澱粉、グリセロー
ル、動物油、植物油等を使用することができ、また窒素
源としては、大豆粉、小麦胚芽、コーンステイープリカ
ー、綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸ア
ンモニウム、尿素等を使用することができる。その他、
必要に応じ、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグ
ネシウム、コバルト、塩素、リン酸、硫酸およびその他
のイオンを生成しうる無機塩類を添加することが有効で
ある。
のようにして行なうことができる。培地の栄養源とし
て、例えば、炭素源としては、グルコース、シユクロー
ス、水あめ、糖みつ、デキストリン、澱粉、グリセロー
ル、動物油、植物油等を使用することができ、また窒素
源としては、大豆粉、小麦胚芽、コーンステイープリカ
ー、綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸ア
ンモニウム、尿素等を使用することができる。その他、
必要に応じ、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグ
ネシウム、コバルト、塩素、リン酸、硫酸およびその他
のイオンを生成しうる無機塩類を添加することが有効で
ある。
【００５４】培養法としては、好気的条件での培養法が
適しており、培養に適当な温度は約１５〜３０℃の範囲
内であるが、多くの場合２８℃付近で培養する。ＮＦ５
００３−Ｂ、ＮＦ５００３−ＥおよびＮＦ５００３−Ｆ
物質の生産は培地や培養条件により異なるが、振とう培
養、タンク培養のいずれにおいても通常２〜１０日の間
でその蓄積が最高に達する。培養中のＮＦ５００３−
Ｂ、ＮＦ５００３−ＥおよびＮＦ５００３−Ｆ物質の蓄
積量が最高になつた時に培養を停止し、培養物から目的
物質を単離精製する。
適しており、培養に適当な温度は約１５〜３０℃の範囲
内であるが、多くの場合２８℃付近で培養する。ＮＦ５
００３−Ｂ、ＮＦ５００３−ＥおよびＮＦ５００３−Ｆ
物質の生産は培地や培養条件により異なるが、振とう培
養、タンク培養のいずれにおいても通常２〜１０日の間
でその蓄積が最高に達する。培養中のＮＦ５００３−
Ｂ、ＮＦ５００３−ＥおよびＮＦ５００３−Ｆ物質の蓄
積量が最高になつた時に培養を停止し、培養物から目的
物質を単離精製する。
【００５５】ＮＦ５００３−Ｂ、ＮＦ５００３−Ｅおよ
びＮＦ５００３−Ｆ物質の培養物からの採取にあたつて
はその性状を利用した通常の分離手段、例えば、溶剤油
出法、吸着または分配クロマトグラフ法、ゲルろ過法、
結晶化法等を単独または適宜組み合わせて用いることが
できる。
びＮＦ５００３−Ｆ物質の培養物からの採取にあたつて
はその性状を利用した通常の分離手段、例えば、溶剤油
出法、吸着または分配クロマトグラフ法、ゲルろ過法、
結晶化法等を単独または適宜組み合わせて用いることが
できる。
【００５６】例えば培養液中に蓄積されたＮＦ５００３
−Ｂ、ＮＦ５００３−ＥおよびＮＦ５００３−Ｆ物質は
合成吸着剤であるダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化成社
製）等に吸着される。また、水と混和しない有機溶剤、
例えば、酢酸エチル、ブタノール等で抽出すればＮＦ５
００３−Ｂ、ＮＦ５００３−ＥおよびＮＦ５００３−Ｆ
物質は有機溶剤層に抽出される。
−Ｂ、ＮＦ５００３−ＥおよびＮＦ５００３−Ｆ物質は
合成吸着剤であるダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化成社
製）等に吸着される。また、水と混和しない有機溶剤、
例えば、酢酸エチル、ブタノール等で抽出すればＮＦ５
００３−Ｂ、ＮＦ５００３−ＥおよびＮＦ５００３−Ｆ
物質は有機溶剤層に抽出される。
【００５７】ＮＦ５００３−Ｂ、ＮＦ５００３−Ｅおよ
びＮＦ５００３−Ｆ物質をさらに精製するには、シリカ
ゲル等の吸着剤やセフアデツクスＬＨ−２０（フアルマ
シア社製）等のゲルろ過剤を用いるクロマトグラフイー
を行うとよい。また、逆相高速液体クロマトグラフイー
も有効な手法である。さらに、ＮＦ５００３−Ｂ、ＮＦ
５００３−ＥおよびＮＦ５００３−Ｆ物質は、塩化メチ
レン−ヘキサン、アセトン−ヘキサンなどの溶媒系によ
る結晶化法によつて精製することもできる。
びＮＦ５００３−Ｆ物質をさらに精製するには、シリカ
ゲル等の吸着剤やセフアデツクスＬＨ−２０（フアルマ
シア社製）等のゲルろ過剤を用いるクロマトグラフイー
を行うとよい。また、逆相高速液体クロマトグラフイー
も有効な手法である。さらに、ＮＦ５００３−Ｂ、ＮＦ
５００３−ＥおよびＮＦ５００３−Ｆ物質は、塩化メチ
レン−ヘキサン、アセトン−ヘキサンなどの溶媒系によ
る結晶化法によつて精製することもできる。
【００５８】本発明の前記一般式（Ｉ）のセスキテルペ
ン誘導体は、優れたＡＭＶプロテアーゼ阻害活性を有し
ており、レトロウイルスプロテアーゼ阻害剤としての使
用が期待される。
ン誘導体は、優れたＡＭＶプロテアーゼ阻害活性を有し
ており、レトロウイルスプロテアーゼ阻害剤としての使
用が期待される。
【００５９】本発明の化合物のＡＭＶプロテアーゼ阻害
活性は以下に述べる如くして測定することができる。
活性は以下に述べる如くして測定することができる。
【００６０】ＡＭＶプロテアーゼ（Molecular Genetic
Resources 社製）と、ＡＭＶプロテアーゼのｐｏｌ領域
内の切断部位（ＲＴα−ＩＮ）を含む１０アミノ酸残基
より成る合成ペプチド（Ｔｈｒ−Ｒｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｌ
ａ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ａｌ
ａ）を基質として、以下に示す方法によつて酵素反応の
阻害活性測定を行なう。
Resources 社製）と、ＡＭＶプロテアーゼのｐｏｌ領域
内の切断部位（ＲＴα−ＩＮ）を含む１０アミノ酸残基
より成る合成ペプチド（Ｔｈｒ−Ｒｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｌ
ａ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ａｌ
ａ）を基質として、以下に示す方法によつて酵素反応の
阻害活性測定を行なう。
【００６１】 試験試料４μｌに２ＭＮａＣｌを含む
０.２Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５.５）３０μ
ｌ及び５ＭＮａＣｌ水溶液６μｌを順に加え、さらにＡ
ＭＶプロテアーゼ酵素液（５０μｇ／ｍｌ）２０μｌを
添加して３７℃で１０分間加温する。
０.２Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５.５）３０μ
ｌ及び５ＭＮａＣｌ水溶液６μｌを順に加え、さらにＡ
ＭＶプロテアーゼ酵素液（５０μｇ／ｍｌ）２０μｌを
添加して３７℃で１０分間加温する。
【００６２】 本混合液に２ＭＮａＣｌを含む上述の
合成基質水溶液（１.２ｍｇ／ｍｌ）１０μｌを添加
し、３７℃にてさらに２０分間加温する。
合成基質水溶液（１.２ｍｇ／ｍｌ）１０μｌを添加
し、３７℃にてさらに２０分間加温する。
【００６３】 反応液を沸騰水中で３分間加熱して酵
素を失活させる。
素を失活させる。
【００６４】 １４０μｌの０.１Ｍトリス塩酸緩衝液
（ｐＨ７.５）を加え、その４０μｌを高速液体クロマ
トグラフイーにて分析する。
（ｐＨ７.５）を加え、その４０μｌを高速液体クロマ
トグラフイーにて分析する。
【００６５】高速液体クロマトグラフイー分析カラムは
逆相系カラム（ＯＤＳ−１２０Ｔ、東ソー社製）を使用
した。流速１.０ｍｌ／ｍｉｎの条件下で２０％アセト
ニトリル水（０.１％ＴＦＡ）−４０％アセトニトリル
水（０.１％ＴＦＡ）の直線的濃度勾配法で９分間、４
０％アセトニトリル水（０.１％ＴＦＡ）で１分間、さ
らに、２０％アセトニトリル水（０.１％ＴＦＡ）で１
０分間の展開を行い、２１０ｎｍの吸収にて合成基質を
検出した。
逆相系カラム（ＯＤＳ−１２０Ｔ、東ソー社製）を使用
した。流速１.０ｍｌ／ｍｉｎの条件下で２０％アセト
ニトリル水（０.１％ＴＦＡ）−４０％アセトニトリル
水（０.１％ＴＦＡ）の直線的濃度勾配法で９分間、４
０％アセトニトリル水（０.１％ＴＦＡ）で１分間、さ
らに、２０％アセトニトリル水（０.１％ＴＦＡ）で１
０分間の展開を行い、２１０ｎｍの吸収にて合成基質を
検出した。
【００６６】本条件下で、基質は１１から１２分付近
に、また酵素による分解産物はそれ以前に溶出された。
クロマトグラム上の基質のピーク面積を測定し、以下の
式に従つて各試料の酵素阻害度（％）を算出した。
に、また酵素による分解産物はそれ以前に溶出された。
クロマトグラム上の基質のピーク面積を測定し、以下の
式に従つて各試料の酵素阻害度（％）を算出した。
【００６７】［１−（試料添加時の酵素による基質ピー
ク面積減少量／試料無添加の時の酵素のみによる基質ピ
ーク面積減少量）］×１００（％） ＮＦ５００３−Ｂ、ＮＦ５００３−ＥおよびＮＦ５００
３−Ｆ物質のＡＭＶプロテアーゼ阻害活性を下記第１表
に示す。
ク面積減少量／試料無添加の時の酵素のみによる基質ピ
ーク面積減少量）］×１００（％） ＮＦ５００３−Ｂ、ＮＦ５００３−ＥおよびＮＦ５００
３−Ｆ物質のＡＭＶプロテアーゼ阻害活性を下記第１表
に示す。
【００６８】
【表１】 本発明の化合物は、レトロウイルスプロテアーゼ阻害剤
として、経口、局所または非経口的に投与することがで
き、その際、該化合物は単独でまたは１種類以上の製薬
上許容しうるキヤリヤーまたは賦形剤と組み合わせて投
与することができる。
として、経口、局所または非経口的に投与することがで
き、その際、該化合物は単独でまたは１種類以上の製薬
上許容しうるキヤリヤーまたは賦形剤と組み合わせて投
与することができる。
【００６９】意図される投与形態に応じて、本発明の化
合物は固体形態、半固形形態または液状の投与形態、例
えば錠剤、丸薬、カプセル、粉末、液体、懸濁液等の形
態に製剤化することができる。
合物は固体形態、半固形形態または液状の投与形態、例
えば錠剤、丸薬、カプセル、粉末、液体、懸濁液等の形
態に製剤化することができる。
【００７０】本発明の化合物を含む製剤は、通常の製薬
キヤリアーまたは賦形剤を含み、更に他の医薬化合物、
製薬剤等を含んでいてもよい。
キヤリアーまたは賦形剤を含み、更に他の医薬化合物、
製薬剤等を含んでいてもよい。
【００７１】次に実施例により本発明をさらに具体的に
説明する。
説明する。
【００７２】
【実施例】実施例１ 種母培地として、ポテト澱粉２.０％、グルコース１.０
％、エスサンミート２.０％、リン酸第一カリウム０.１
％、硫酸マグネシウム（７水塩）０.０５％の組成から
なる培地を用い、５００ｍｌ容三角フラスコに５０ｍｌ
ずつ分注して殺菌した。これにＭｅｒ−ＮＦ５００３菌
の斜面培地（ポテトデキストロース寒天培地）から一白
金耳を接種し、２８℃で３日間回転振とう機上で培養し
て種母培養液を得た。
％、エスサンミート２.０％、リン酸第一カリウム０.１
％、硫酸マグネシウム（７水塩）０.０５％の組成から
なる培地を用い、５００ｍｌ容三角フラスコに５０ｍｌ
ずつ分注して殺菌した。これにＭｅｒ−ＮＦ５００３菌
の斜面培地（ポテトデキストロース寒天培地）から一白
金耳を接種し、２８℃で３日間回転振とう機上で培養し
て種母培養液を得た。
【００７３】生産培地として、じやがいも２ｋｇを１０
Ｌの熱水（１００℃）で１時間抽出した上澄みにグルコ
ース１.０％、ポテト澱粉１.０％を加えた培地を用い、
５００ｍｌ容三角フラスコに５０ｍｌずつ分注して殺菌
した。上記種母培養液を生産培地を含む三角フラスコ中
に１ｍｌずつ接種し、２８℃で４日間回転振とう機上で
培養して培養液を得た。
Ｌの熱水（１００℃）で１時間抽出した上澄みにグルコ
ース１.０％、ポテト澱粉１.０％を加えた培地を用い、
５００ｍｌ容三角フラスコに５０ｍｌずつ分注して殺菌
した。上記種母培養液を生産培地を含む三角フラスコ中
に１ｍｌずつ接種し、２８℃で４日間回転振とう機上で
培養して培養液を得た。
【００７４】培養液（８Ｌ）を遠心分離により菌体と上
清に分け、６.５Ｌの培養上清を回収した。この培養上
清をダイヤイオンＨＰ−２０の５００ｍｌのカラムに通
過させて活性成分を樹脂に吸着させた。このカラムを水
１Ｌおよび３０％メタノール水１Ｌで洗浄したのち、５
０％−６５％のアセトン水で活性成分を溶出させた。活
性フラクシヨンを減圧濃縮してアセトンを留去したの
ち、残つた水層を等量の酢酸エチルで２回抽出し、酢酸
エチル層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。酢酸エチル
層を濾過し、濃縮乾固して黄色油状物２.４ｇを得た。
清に分け、６.５Ｌの培養上清を回収した。この培養上
清をダイヤイオンＨＰ−２０の５００ｍｌのカラムに通
過させて活性成分を樹脂に吸着させた。このカラムを水
１Ｌおよび３０％メタノール水１Ｌで洗浄したのち、５
０％−６５％のアセトン水で活性成分を溶出させた。活
性フラクシヨンを減圧濃縮してアセトンを留去したの
ち、残つた水層を等量の酢酸エチルで２回抽出し、酢酸
エチル層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。酢酸エチル
層を濾過し、濃縮乾固して黄色油状物２.４ｇを得た。
【００７５】上記黄色油状物をあらかじめメタノールで
充填したセフアデツクスＬＨ−２０の５００ｍｌのカラ
ムに付し、メタノールで展開して活性部分を分取し、乾
固して１.４ｇの黄色固型物を得た。この粗精製物をク
ロロホルムで充填したシリカゲル６０（メルク社製、Ａ
ｒｔ７７３４）の６０ｍｌのカラムに付し、クロロホル
ム：メタノール（５０：１−１０：１）で展開した。活
性成分は大きく２つの部分に分けられた。
充填したセフアデツクスＬＨ−２０の５００ｍｌのカラ
ムに付し、メタノールで展開して活性部分を分取し、乾
固して１.４ｇの黄色固型物を得た。この粗精製物をク
ロロホルムで充填したシリカゲル６０（メルク社製、Ａ
ｒｔ７７３４）の６０ｍｌのカラムに付し、クロロホル
ム：メタノール（５０：１−１０：１）で展開した。活
性成分は大きく２つの部分に分けられた。
【００７６】シリカゲルカラムから先に溶出された活性
部分をさらに逆相高速液体クロマトグラフイーを用いて
分取精製を行つた。分取用カラムとしてはワイエムシー
パツクＳ−３４３ Ｉ−１５ ＯＤＳ（株式会社ワイエム
シー製、内径２ｃｍ、長さ２５ｃｍ）を用い、移動相と
して５５％アセトニトリル水を用いて７ｍｌ／ｍｉｎの
流速でクロマトグラフイーを行つた。活性部分を濃縮乾
固し、得られた淡黄色粉末を塩化メチレン−ヘキサンか
ら結晶化して無色板状のＮＦ５００３−Ｅ物質の塩化メ
チレン１／２分子を含む結晶を１８.２ｍｇ得た。
部分をさらに逆相高速液体クロマトグラフイーを用いて
分取精製を行つた。分取用カラムとしてはワイエムシー
パツクＳ−３４３ Ｉ−１５ ＯＤＳ（株式会社ワイエム
シー製、内径２ｃｍ、長さ２５ｃｍ）を用い、移動相と
して５５％アセトニトリル水を用いて７ｍｌ／ｍｉｎの
流速でクロマトグラフイーを行つた。活性部分を濃縮乾
固し、得られた淡黄色粉末を塩化メチレン−ヘキサンか
ら結晶化して無色板状のＮＦ５００３−Ｅ物質の塩化メ
チレン１／２分子を含む結晶を１８.２ｍｇ得た。
【００７７】シリカゲルカラムから後に溶出された活性
部分をさらに逆相高速液体クロマトグラフイーを用いて
分取精製を行つた。分取用カラムとしてはワイエムシー
パツクＳ−３４３ Ｉ−１５ ＯＤＳを用い、移動相とし
て５２％アセトニトリル水を用いて７ｍｌ／ｍｉｎの流
速でクロマトグラフイーを行つた。活性部分を濃縮乾固
し、得られた淡黄色粉末を塩化メチレン−ヘキサンから
結晶化して白色のＮＦ５００３−Ｂ物質の塩化メチレン
１／２分子を含む結晶を１１.２ｍｇ得た。
部分をさらに逆相高速液体クロマトグラフイーを用いて
分取精製を行つた。分取用カラムとしてはワイエムシー
パツクＳ−３４３ Ｉ−１５ ＯＤＳを用い、移動相とし
て５２％アセトニトリル水を用いて７ｍｌ／ｍｉｎの流
速でクロマトグラフイーを行つた。活性部分を濃縮乾固
し、得られた淡黄色粉末を塩化メチレン−ヘキサンから
結晶化して白色のＮＦ５００３−Ｂ物質の塩化メチレン
１／２分子を含む結晶を１１.２ｍｇ得た。
【００７８】実施例２ 種母培地として、ポテト澱粉２.０％、グルコース１.０
％、エスサンミート２.０％、リン酸第一カリウム０.１
％、硫酸マグネシウム（７水塩）０.０５％の組成から
なる培地を用い、５００ｍｌ容三角フラスコに５０ｍｌ
ずつ分注して殺菌した。これにＭｅｒ−ＮＦ５００３菌
の斜面培地（ポテトデキストロース寒天培地）から一白
金耳を接種し、２８℃で３日間回転振とう機上で培養し
て種母培養液を得た。
％、エスサンミート２.０％、リン酸第一カリウム０.１
％、硫酸マグネシウム（７水塩）０.０５％の組成から
なる培地を用い、５００ｍｌ容三角フラスコに５０ｍｌ
ずつ分注して殺菌した。これにＭｅｒ−ＮＦ５００３菌
の斜面培地（ポテトデキストロース寒天培地）から一白
金耳を接種し、２８℃で３日間回転振とう機上で培養し
て種母培養液を得た。
【００７９】生産培地として、じやがいも２ｋｇを１０
Ｌの熱水（１００℃）で１時間抽出した上澄みにグルコ
ース１.０％、ポテト澱粉１.０％を加えた培地を用い、
１０Ｌ容ジヤーフアーメンター２基に５Ｌずつ分注して
殺菌した。上記種母培養液をジヤーフアーメンター中に
１００ｍｌずつ接種し、２８℃で６５時間通気撹はん培
養（通気量５ｍｌ／ｍｉｎ、撹はん３００ｒｐｍ）を行
つて培養液を得た。
Ｌの熱水（１００℃）で１時間抽出した上澄みにグルコ
ース１.０％、ポテト澱粉１.０％を加えた培地を用い、
１０Ｌ容ジヤーフアーメンター２基に５Ｌずつ分注して
殺菌した。上記種母培養液をジヤーフアーメンター中に
１００ｍｌずつ接種し、２８℃で６５時間通気撹はん培
養（通気量５ｍｌ／ｍｉｎ、撹はん３００ｒｐｍ）を行
つて培養液を得た。
【００８０】培養液（７Ｌ）を遠心分離により菌体と上
清に分け、５.５Ｌの培養上清を回収した。この培養上
清をダイヤイオンＨＰ−２０の５００ｍｌのカラムに通
過させて活性成分を樹脂に吸着させた。このカラムを水
１Ｌおよび３０％メタノール水１Ｌで洗浄したのち、５
０％−７０％のアセトン水で活性成分を溶出させた。活
性フラクシヨンを減圧濃縮してアセトンを留去したの
ち、残つた水溶液をシラナイズドシリカゲル６０（メル
ク社製、Ａｒｔ７７１９）の１５０ｍｌのカラムに通過
させて活性成分を担体に吸着させた。このカラムを５０
０ｍｌの水で洗つた後、２０％−６５％のアセトニトリ
ル水の直線的濃度勾配溶液を用いて活性成分を溶出させ
た。活性成分は大きく２つの部分に分けられた。
清に分け、５.５Ｌの培養上清を回収した。この培養上
清をダイヤイオンＨＰ−２０の５００ｍｌのカラムに通
過させて活性成分を樹脂に吸着させた。このカラムを水
１Ｌおよび３０％メタノール水１Ｌで洗浄したのち、５
０％−７０％のアセトン水で活性成分を溶出させた。活
性フラクシヨンを減圧濃縮してアセトンを留去したの
ち、残つた水溶液をシラナイズドシリカゲル６０（メル
ク社製、Ａｒｔ７７１９）の１５０ｍｌのカラムに通過
させて活性成分を担体に吸着させた。このカラムを５０
０ｍｌの水で洗つた後、２０％−６５％のアセトニトリ
ル水の直線的濃度勾配溶液を用いて活性成分を溶出させ
た。活性成分は大きく２つの部分に分けられた。
【００８１】シラナイズドシリカゲルカラムから先に溶
出された活性部分をさらに逆相高速液体クロマトグラフ
イーを用いて分取精製を行つた。分取用カラムとしては
ワイエムシーパツクＳ−３４３ Ｉ−１５ ＯＤＳを用
い、移動相として５５％アセトニトリル水を用いて７ｍ
ｌ／ｍｉｎの流速でクロマトグラフイーを行つた。活性
部分を濃縮乾固し、白色粉末状のＮＦ５００３−Ｅを２
２.５ｍｇ得た。
出された活性部分をさらに逆相高速液体クロマトグラフ
イーを用いて分取精製を行つた。分取用カラムとしては
ワイエムシーパツクＳ−３４３ Ｉ−１５ ＯＤＳを用
い、移動相として５５％アセトニトリル水を用いて７ｍ
ｌ／ｍｉｎの流速でクロマトグラフイーを行つた。活性
部分を濃縮乾固し、白色粉末状のＮＦ５００３−Ｅを２
２.５ｍｇ得た。
【００８２】シラナイズドシリカゲルカラムから後に溶
出された活性部分をさらに逆相高速液体クロマトグラフ
イーを用いて分取精製を行つた。分取用カラムとしては
ワイエムシーパツクＳ−３４３ Ｉ−１５ ＯＤＳを用
い、移動相として６０％アセトニトリル水を用いて７ｍ
ｌ／ｍｉｎの流速でクロマトグラフイーを行つた。活性
部分を濃縮乾固し、淡黄色のＮＦ５００３−Ｆ物質を１
０.２ｍｇ得た。
出された活性部分をさらに逆相高速液体クロマトグラフ
イーを用いて分取精製を行つた。分取用カラムとしては
ワイエムシーパツクＳ−３４３ Ｉ−１５ ＯＤＳを用
い、移動相として６０％アセトニトリル水を用いて７ｍ
ｌ／ｍｉｎの流速でクロマトグラフイーを行つた。活性
部分を濃縮乾固し、淡黄色のＮＦ５００３−Ｆ物質を１
０.２ｍｇ得た。
【図１】ＮＦ５００３−Ｂ物質のアセトニトリル中（３
１μｇ／ｍｌ）での紫外部吸収スペクトルを示す。
１μｇ／ｍｌ）での紫外部吸収スペクトルを示す。
【図２】ＮＦ５００３−Ｂ物質の臭化カリウム錠での赤
外部吸収スペクトルを示す。
外部吸収スペクトルを示す。
【図３】ＮＦ５００３−Ｂ物質の重メタノール中での４
００ＭＨｚ 1ＨＮＭＲスペクトルを示す。
００ＭＨｚ 1ＨＮＭＲスペクトルを示す。
【図４】ＮＦ５００３−Ｂ物質の重メタノール中での１
００ＭＨｚ 13ＣＮＭＲスペクトルを示す。
００ＭＨｚ 13ＣＮＭＲスペクトルを示す。
【図５】ＮＦ５００３−Ｅ物質のアセトニトリル中（３
３μｇ／ｍｌ）での紫外部吸収スペクトルを示す。
３μｇ／ｍｌ）での紫外部吸収スペクトルを示す。
【図６】ＮＦ５００３−Ｅ物質の臭化カリウム錠での赤
外部吸収スペクトルを示す。
外部吸収スペクトルを示す。
【図７】ＮＦ５００３−Ｅ物質の重アセトン中での４０
０ＭＨｚ 1ＨＮＭＲスペクトルを示す。
０ＭＨｚ 1ＨＮＭＲスペクトルを示す。
【図８】ＮＦ５００３−Ｅ物質の重アセトン中での１０
０ＭＨｚ 13ＣＮＭＲスペクトルを示す。
０ＭＨｚ 13ＣＮＭＲスペクトルを示す。
【図９】ＮＦ５００３−Ｆ物質のアセトニトリル中（３
３μｇ／ｍｌ）での紫外部吸収スペクトルを示す。
３μｇ／ｍｌ）での紫外部吸収スペクトルを示す。
【図１０】ＮＦ５００３−Ｆ物質の臭化カリウム錠での
赤外部吸収スペクトルを示す。
赤外部吸収スペクトルを示す。
【図１１】ＮＦ５００３−Ｆ物質の重アセトン中での４
００ＭＨｚ 1ＨＮＭＲスペクトルを示す。
００ＭＨｚ 1ＨＮＭＲスペクトルを示す。
【図１２】ＮＦ５００３−Ｆ物質の重アセトン中での１
００ＭＨｚ 13ＣＮＭＲスペクトルを示す。
００ＭＨｚ 13ＣＮＭＲスペクトルを示す。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成３年１１月１４日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００４】 後天性免疫不全症候群（Ａｑｕｉｒｅｄ
Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ Ｓｙｎｄｒｏｍ
ｅ：ＡＩＤＳ）はレトロウイルスの一種であるヒト免疫
不全ウイルス（Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉ
ｅｎｃｙＶｉｒｕｓ：ＨＩＶ）によつて引き起こされる
免疫不全症である。
Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ Ｓｙｎｄｒｏｍ
ｅ：ＡＩＤＳ）はレトロウイルスの一種であるヒト免疫
不全ウイルス（Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉ
ｅｎｃｙＶｉｒｕｓ：ＨＩＶ）によつて引き起こされる
免疫不全症である。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００５】 ＨＩＶに関する研究の進展に伴い本ウイ
ルスに特異的な酵素が明らかとなり、抗ＨＩＶ薬をめざ
した阻害剤開発が行われている。特に逆転写酵素の阻害
剤アジドチミジン（ＡＺＴ）は、現在臨床使用されてい
る数少ない抗ＨＩＶ薬の一つである。しかし、ＡＺＴは
副作用が強く、また耐性獲得ウイルスの出現などが問題
となつている。
ルスに特異的な酵素が明らかとなり、抗ＨＩＶ薬をめざ
した阻害剤開発が行われている。特に逆転写酵素の阻害
剤アジドチミジン（ＡＺＴ）は、現在臨床使用されてい
る数少ない抗ＨＩＶ薬の一つである。しかし、ＡＺＴは
副作用が強く、また耐性獲得ウイルスの出現などが問題
となつている。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正内容】
【００３８】（１３） 塩基性、中性、酸性の区別：酸
性物質 本発明のＮＦ５００３−Ｂ，ＮＦ５００３−ＥおよびＮ
Ｆ５００３−Ｆ物質は、前記式（Ｉ−ａ）、（Ｉ−ｂ）
及び（Ｉ−ｃ）で示されるとおり、セスキテルペン骨格
をもつ化合物群である。本化合物群は、抗補体化合物と
してスタキボトリス・コンプレメンテイ、ｎｏｖ．ｓ
ｐ．Ｋ−７６（Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓｃｏｍｐｌｅ
ｍｅｎｔｉ，ｎｏｖ．ｓｐ．Ｋ−７６）の培養液から単
離されている既知のセスキテルベン化合物Ｋ−７６と構
造上の類似性を有している［Ｍｉｙａｚａｋｉら、Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ，Ｖｏｌ．２４，１０９１−１１０８（１９８０）お
よびＫａｉｓｅ ら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍ
ｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１９７９，７２６−７
２７（１９７９）参照］。しかしながら、ＮＦ５０Ｏ３
−Ｂ、ＮＦ５００３−ＥおよびＮＦ５００３−Ｆ物質は
それらの分子式、物理化学的性質および構造上の特徴に
よつて、既知の化合物Ｋ−７６とは区別される新規物質
である。
性物質 本発明のＮＦ５００３−Ｂ，ＮＦ５００３−ＥおよびＮ
Ｆ５００３−Ｆ物質は、前記式（Ｉ−ａ）、（Ｉ−ｂ）
及び（Ｉ−ｃ）で示されるとおり、セスキテルペン骨格
をもつ化合物群である。本化合物群は、抗補体化合物と
してスタキボトリス・コンプレメンテイ、ｎｏｖ．ｓ
ｐ．Ｋ−７６（Ｓｔａｃｈｙｂｏｔｒｙｓｃｏｍｐｌｅ
ｍｅｎｔｉ，ｎｏｖ．ｓｐ．Ｋ−７６）の培養液から単
離されている既知のセスキテルベン化合物Ｋ−７６と構
造上の類似性を有している［Ｍｉｙａｚａｋｉら、Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ，Ｖｏｌ．２４，１０９１−１１０８（１９８０）お
よびＫａｉｓｅ ら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍ
ｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１９７９，７２６−７
２７（１９７９）参照］。しかしながら、ＮＦ５０Ｏ３
−Ｂ、ＮＦ５００３−ＥおよびＮＦ５００３−Ｆ物質は
それらの分子式、物理化学的性質および構造上の特徴に
よつて、既知の化合物Ｋ−７６とは区別される新規物質
である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正内容】
【００６０】 ＡＭＶプロテアーゼ（Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ社製）と、Ａ
ＭＶプロテアーゼのｐｏｌ領域内の切断部位（ＲＴα−
ＩＮ）を含む１０アミノ酸残基より成る合成ペプチド
（Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−
Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ａｌａ）を基質として、以下
に示す方法によつて酵素反応の阻害活性測定を行なう。
ｒ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ社製）と、Ａ
ＭＶプロテアーゼのｐｏｌ領域内の切断部位（ＲＴα−
ＩＮ）を含む１０アミノ酸残基より成る合成ペプチド
（Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−
Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ａｌａ）を基質として、以下
に示す方法によつて酵素反応の阻害活性測定を行なう。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７９
【補正方法】変更
【補正内容】
【００７９】 生産培地として、じやがいも２ｋｇを
１０Ｌの熱水（１００℃）で１時間抽出した上澄みにグ
ルコース１．０％、ポテト澱粉１．０％を加えた培地を
用い、１０Ｌ容ジヤーフアーメンター２基に５Ｌずつ分
注して殺菌した。上記種母培養液をジヤーフアーメンタ
ー中に１００ｍｌずつ接種し、２８℃で６５時間通気撹
はん培養（通気量５Ｌ／ｍｉｎ、撹はん３００ｒｐｍ）
を行つて培養液を得た。 ─────────────────────────────────────────────────────
１０Ｌの熱水（１００℃）で１時間抽出した上澄みにグ
ルコース１．０％、ポテト澱粉１．０％を加えた培地を
用い、１０Ｌ容ジヤーフアーメンター２基に５Ｌずつ分
注して殺菌した。上記種母培養液をジヤーフアーメンタ
ー中に１００ｍｌずつ接種し、２８℃で６５時間通気撹
はん培養（通気量５Ｌ／ｍｉｎ、撹はん３００ｒｐｍ）
を行つて培養液を得た。 ─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成４年１０月２３日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正内容】
【化１】 式中、Ｒ１はヒドロキシメチル基であり且つＲ２は水酸
基であるか、或いはＲ１はヒドロキシメチル基又はホル
ミル基であり且つＲ２は水素原子である、で示されるセ
スキテルペン誘導体。
基であるか、或いはＲ１はヒドロキシメチル基又はホル
ミル基であり且つＲ２は水素原子である、で示されるセ
スキテルペン誘導体。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００２】
【化５】 式中、Ｒ１はヒドロキシメチル基であり且つＲ２は水酸
基であるか、或いはＲ１はヒドロキシメチル基又はホル
ミル基であり且つＲ２は水素原子である、で示されるセ
スキテルペン誘導体、及びその製造法に関する。
基であるか、或いはＲ１はヒドロキシメチル基又はホル
ミル基であり且つＲ２は水素原子である、で示されるセ
スキテルペン誘導体、及びその製造法に関する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１４】
【化８】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 渡辺 吉雄 神奈川県藤沢市藤が岡２−22−３ (72)発明者 熊本 俊彦 神奈川県藤沢市鵠沼桜が岡１−９−12 (72)発明者 西田 浩史 神奈川県横須賀市津久井568 グリーンハ イツ11−３−503 (72)発明者 岡本 六郎 神奈川県藤沢市花の木２−18 (72)発明者 赤川 久義 東京都品川区上大崎２−10−35 国立予防 衛生研究所内 (72)発明者 水野 左敏 東京都品川区上大崎２−10−35 国立予防 衛生研究所内
Claims (6)
- 【請求項１】 一般式 【化１】 式中、Ｒ1はヒドロキシメチル基であり且つＲ2は水酸基
であるか、或いはＲ1はヒドロキシメチル基又はホルミ
ル基であり且つＲ2は水素原子である、で示されるセス
キテルペン誘導体。 - 【請求項２】 式 【化２】 で示されるＮＦ５００３−Ｂ物質である請求項１記載の
セスキテルペン誘導体。 - 【請求項３】 式 【化３】 で示されるＮＦ５００３−Ｅ物質である請求項１記載の
セスキテルペン誘導体。 - 【請求項４】 式 【化４】 で示されるＮＦ５００３−Ｆ物質である請求項１記載の
セスキテルペン誘導体。 - 【請求項５】 スタキボトリス属に属する請求項１記載
の一般式（Ｉ）のセスキテルペン誘導体生産能を有する
微生物を培地で培養し、その培養物から該セスキテルペ
ン誘導体を採取することを特徴とする請求項１記載の一
般式（Ｉ）で示されるセスキテルペン誘導体の製造法。 - 【請求項６】 請求項１記載の一般式（Ｉ）で示される
セスキテルペン誘導体を有効成分として含有するレトロ
ウイルスプロテアーゼ阻害剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26539491A JP3026864B2 (ja) | 1991-09-18 | 1991-09-18 | 新規セスキテルペン誘導体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26539491A JP3026864B2 (ja) | 1991-09-18 | 1991-09-18 | 新規セスキテルペン誘導体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07145161A true JPH07145161A (ja) | 1995-06-06 |
| JP3026864B2 JP3026864B2 (ja) | 2000-03-27 |
Family
ID=17416565
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26539491A Expired - Fee Related JP3026864B2 (ja) | 1991-09-18 | 1991-09-18 | 新規セスキテルペン誘導体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3026864B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997011947A1 (fr) * | 1995-09-27 | 1997-04-03 | Shionogi & Co., Ltd. | Derives de sesquiterpene a activite antivirale |
| WO1998042694A1 (fr) * | 1997-03-21 | 1998-10-01 | Shionogi & Co., Ltd. | Derives de benzoxanthene possedant une activite antivirale |
| WO1998042714A1 (fr) * | 1997-03-21 | 1998-10-01 | Shionogi & Co., Ltd. | Nouveaux derives de sesquiterpene |
| WO2001054729A1 (en) * | 2000-01-25 | 2001-08-02 | The Government Of The United States Of America, Asrepresented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Treatment of neuropsychiatric disease with protease and neuraminidase inhibitors |
-
1991
- 1991-09-18 JP JP26539491A patent/JP3026864B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997011947A1 (fr) * | 1995-09-27 | 1997-04-03 | Shionogi & Co., Ltd. | Derives de sesquiterpene a activite antivirale |
| EP0855398A1 (en) * | 1995-09-27 | 1998-07-29 | Shionogi & Co., Ltd. | Sesquiterpene derivatives having antiviral activity |
| EP0855398B1 (en) * | 1995-09-27 | 2003-04-16 | Shionogi & Co., Ltd. | Sesquiterpene derivatives having antiviral activity |
| WO1998042694A1 (fr) * | 1997-03-21 | 1998-10-01 | Shionogi & Co., Ltd. | Derives de benzoxanthene possedant une activite antivirale |
| WO1998042714A1 (fr) * | 1997-03-21 | 1998-10-01 | Shionogi & Co., Ltd. | Nouveaux derives de sesquiterpene |
| US6143732A (en) * | 1997-03-21 | 2000-11-07 | Shionogi & Co., Ltd. | Sesquiterpene derivatives |
| WO2001054729A1 (en) * | 2000-01-25 | 2001-08-02 | The Government Of The United States Of America, Asrepresented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Treatment of neuropsychiatric disease with protease and neuraminidase inhibitors |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3026864B2 (ja) | 2000-03-27 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |