JPH0477495A - オキセタノシン―３’―カルボン酸類およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は抗ウィルス作用などの生理活性を示すオキセタ
ノシン−３′−カルボン酸類に関するものである。

（従来の技術） 従来抗ウィルス剤として核酸誘導体が知られている。ま
たオキセタノシン自体は、ジャーナル・オブ・アンチバ
イオティックス（Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏ
ｔｉｃｓ）３９巻１１号１６２３−２５（１９８６）に
、オキセタノシンＡについて特開昭６１−２９３９９２
号に、オキセタノシン−ＨおよびＧ、　　２−アミノオ
キセタノシン−Ｇについては特開平１−１００１９２に
開示されている。

（発明が解決しようとする課題） 従来の抗ウィルス剤は細胞毒性などの様々な副作用を伴
う。副作用が可及的に軽微な抗ウィルス剤が望まれてい
る。

（課題を解決するための手段） 本発明者らは種々の研究の結果 一般式（Ｉ） （式中Ｂは ！ で示される基を意味する） で示されるオキセタノシン−３°−カルボン酸類および
その薬理学的に許容される塩が抗ウィルス作用を有する
ことを見出し本発明を完成した。本発明の一般式（Ｉ）
の化合物を例示すると次の通りである。

化合物略号　　　一般式（１）のＢ（塩基の名称）トリ
ウム、水酸化カリウムなどが好ましい。

次に化合物０ＸＴ−ＡＣ，０ＸＴ−ＨＣ，０ＸＴ−ＧＣ
の製造法について簡単に説明する。

一般式（■）（式中Ｂは 本発明のオキセタノシン−３”−カルボン酸類はオキセ
タノシン類にＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する微生物
を作用させることにより得ることができる。

本発明の一般式（１）の化合物は酸または塩基と塩を形
成する。塩を形成するための酸または塩基としては薬理
学上許容される酸または塩基であればよく９例えば酸と
しては塩酸、硫酸リン酸などが好ましく塩基としては水
酸化すで示される基を意味する。） で示されるオキセタノシン類にＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
属に属し、オキセタン環の３°−位のヒドロキシメチル
基をカルボキシル基に酸化する能力を有する微生物を作
用させ 一般式（■）（式中Ｂは （Ｉ） で示される基を意味する。） で示されるオキセタノシン−３′−カルボン酸類を得る
。

本発明ではＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属し、オキセタ
ン環の３′−位のヒドロキシメチル基をカルボキシル基
に変換する能力を有する微生物を栄養培地で培養して得
られる培養物（菌体）をそのまま使用出来るほか、その
処理物例えばアセトン乾燥菌体、菌体の破砕物、界面活
性剤やりゾチーム等での処理物、天然あるいは合成高分
子に固定化した菌体を同様に使用することができる。

具体的には微生物として平成元年７月長野県塩尻市の土
壌より分離されたＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　　ｓｐ、Ｎ
ＫＯ７６１６１株〔微工研菌寄第１１５２８　（ＦＥＲ
Ｍ　Ｐ−１１５２８）〕が使用される。

以下、　　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　　ｓｐ、　ＮＫＯ
７６１６１株の菌学的性状を示す。

１、形態的特徴 ■細胞の形　　：桿状 細胞の大きさ＝０．５〜０．７χ１．４〜１．９μｍ■
μｍ性　　　：なし ■運動性　　　：あり、極鞭毛 ■胞子　　　　：なし ■ダラム染色性：陰性 ■抗酸性　　　：なし ２、各培地上の生育状態（２７６Ｃ，１〜７日培養し常
法により観察した。） ■肉汁寒天平板培養：生育は良好で増殖と共に円形また
は不規則な周縁を示しコロニーは鈍い光沢があり乳白色
の色調を呈し可溶性色素は認められない。また芳香性の
臭いを放つ。

■肉汁寒天斜面培養：生育は良好 ■肉汁液体培養　　：全体的に均等に発育するが上部が
やや良好で培養時間の経過と共に管底に菌体が溜る。

■肉汁ゼラチン穿刺培養：上部が層状に液化する。

■リドマスミルク　：不変（上部青色）３、生理的性質 ■硝酸塩の還元　　：陰性 ■脱窒反応　　　　：陰性 ■ＭＲテスト　　　　：陰性 ■ＶＰテスト　　　　：陰性 ■インドールの生成：陰性 ■硫化水素の生成　：陰性 ■澱粉の加水分解　：陰性 ■クエン酸の利用 Ｋｏｓｅｒの培地　　　：陽性 Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎの培地：陽性 Ｓｉｍｍｏｎｓの培地　　：陽性 ■無機窒素源の利用 臭化アンモニウム、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウ
ム、硝酸カリウム及び硝酸ナトリウムを利用する。

［相］色素の生成 ＫｉｎｇＡ：陰性 ＫｉｎｇＢ：陰性（水溶性の蛍光黄色）■アミノ酸の分
解 アルギニン：陰性 リジン　　：陰性 オルニチン：陰性 ■ウレアーゼ：陰性 ■オキシダーゼ：陽性 ■カタラーゼ：陽性 ［相］生育の範囲 温度　　＝　４〜３７°Ｃ 至適温度：２４〜２７°Ｃ ｐＨ：５〜ＩＯ 至適ｐＨ：６〜８ ［相］酸素に対する態度：好気的 ＠０−Ｆテスト　二酸化的 ［相］塩化ナトリウムの耐性 ５％　：　＋ ７％　： ［相］各種糖順に対する酸及びガスの生成各種糖類に対
する酸及びガスの生成の有無は第１表に示す通りである
。

Ｍ１表 以上の各所見をもとにパージエイズ・マニュアル・オブ
・デターミネイティブ・バタテリオロジー第８版および
パージエイズ・マニュアル・オブ・システマチック・バ
クテリオロジー第１巻を参照した結果、シュードモナス
（Ｐｓｅｕｄｏｍ。

ｎａｓ　）に属する一菌株であることが明らかになり本
菌株をＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ、　ＮＫ０７６１
６１と命名した。

次に本発明の一般式（Ｉ）の化合物の製造法をより具体
的に説明する。

Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属し、オキセタン環の３”
位におけるヒドロキシメチル基をカルボキシル基に酸化
する能力を有する微生物を栄養培地にて２５〜３５°Ｃ
２４８〜　７２時間培養した後、遠心分離により生菌体
を集めこれを５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ・７）に懸濁
し、さらにこの懸濁液に一般式（Ｕ）の化合物を加え、
２０〜５０℃。

１２〜４８時間反応させることにより反応液中に目的と
する一般式（Ｉ）の化合物が生成される。反応液より生
成物を採取するのは公知の方法に従って行えばよく、遠
心分離等により菌体を除去し水や有機溶媒に対する溶解
度の差を利用する方法や活性炭や吸着樹脂およびイオン
交換樹脂による吸脱着法などを適当に組み合わせて用い
ることできる。

（試験例）本発明化合物の抗ＨＩ　Ｖ　（ＨｕｍａｎＩ
ｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｖｉｒｕｓ　）活性
２４穴トレーにＭＴ−４細胞約ｌＯ万個／ｍｌを入れさ
らに本発明の化合物を一定量含む溶液を１００μｌ加え
３７°Ｃ，５％（Ｖ／Ｖ）炭酸ガス岬卵器中にて２時間
培養した後、ＨＩＶ　　１０３〜１０４感染単位を加え
４日間培養後、培養液の一部をスライドグラスに塗抹し
アセトン固定した後、蛍光抗体法にてウィルス抗原の発
現をみた。なお蛍光抗体法の一次抗体にはエイズ患者の
血清、二次抗体にはＦＩＴＣをラベルしたヒトＩｇＧを
用いた。また本発明の化合物のＭＴ−４細胞に対する細
胞変性はウィルスを加えずに行い顕微鏡下で観察した。

第２表　本発明化合物のＨＩＶ対する活性＊細胞毒性： は毒性なしを示す。

本発明化合物は第２表から明らかなようにＨＩＶに対し
て生育阻害作用を示すとともに細胞変性は極めて少ない
ことから抗エイズ治療剤として期待される。

（実施例−１）化合物０ＸＴ−ＡＣの製造法ペプトン２
％、粉末酵母エキス１％、肉エキス１％、　ＮａＣ１０
，５％を含むｐＨ７，０の培地１００ｍ１を５００ｍ１
容の三角フラスコに分注した後、１２０°Ｃｌ２Ｏ分間
オートクレイプ滅菌した。このフラスコにＰｓｅｕｄｏ
ｍｏｎａｓ　ｓｐ、ＮＫＯ７６１６１を一白金耳接種し
３０°Ｃ２２４時間好気的に振盪培養を行った。これと
は別に同一組成の培地１００ｍ１を５００ｍ１容の三角
フラスコに分注した後、１２０℃、２０分間オートクレ
イプ滅菌した。このフラスコに上記培養液１ｍｌを接種
し３０°Ｃ１６０〜７０時間振盪培養した。次にこの培
養液５Ｌを１００００回転／分にて１０分間遠心分離し
生菌体を集め、０．８５％食塩水（ｐＨ７，０）　５０
０ｍｌで２回洗浄した後５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７
，０）ＩＬに懸濁した。二の懸濁液を５０ｍ１づつ　５
００ｍ１容の三角フラスコ２０本に分注しこれに各々０
ＸＴ−Ａ　　２０ｍｇを加え３５°Ｃにて２４時間振盪
した。次にこの反応液を３Ｎ塩酸にてｐＨを５゜０に調
整後１ｏｏｏｏ回転／分にて１０分間遠心分離して除菌
し得られた上清液を強酸性イオン交換樹脂（ＰＫ２０８
．Ｈ型、１１９０〜３００μ）２００ｍｌを充填したカ
ラムに通液し０ＸＴ−ＡＣおよび未反応０ＸＴ−Ａを吸
着させる。本反応において少量の０ＸＴ−Ｈおよび０Ｘ
Ｔ−ＨＣが副生ずるがこれらは強酸性イオン交換樹脂に
吸着されないためカラムを水洗することにより容易に分
離除去できる。吸着された０ＸＴ−ＡＣおよび０ＸＴ−
Ａは０．５Ｎアンモニア水を用いて溶出し得られた溶出
液を減圧下濃縮してアンモニアを除去した後弱塩基性イ
オン交換樹脂（ＷＡ３０．ＣＨ型、１１９０〜３００μ
）１００ｍｌを充填したカラムに通液し０ＸＴ−ＡＣを
吸着させる。０ＸＴ−Ａは弱塩基性イオン交換樹脂に吸
着されないためカラムを水洗することにより容易に分離
除去できる。吸着された０ＸＴ−ＡＣはＩＮ塩化アンモ
ニウム溶液を用いて溶出し得られた溶出液を活性炭粉末
（和光紬薬クロマト用）５０ｍｌを充填したカラムに通
液し０ＸＴ−ＡＣを吸着させ水洗を行った後０．ＩＮ塩
酸を通液して脱塩さらに水洗を行う。吸着・脱塩された
０ＸＴ−ＡＣは５０％アセトン−水を用いて溶出し得ら
れた溶出液を濃縮乾固することにより０ＸＴ−ＡＣ粗粉
末２３５ｍｇを得た。この粗粉末を蒸留水に溶解した後
濃縮し冷却して再結晶化させ生じた結晶を濾別乾燥する
ことにより無色結晶状の０ＸＴ−ＡＣ２２０ｍｇ（ｅ率
５５．’０％）を得た。

ＦＡＢ−ＭＳ　；　２６６　（Ｍ＋Ｈ）”Ｕｖ；λ□ｇ
　２５９　ｎ　ｍ　（Ｈ２Ｏ，ｐｌ（＝’７．０）’Ｈ
−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δｐｐｍ；　３．
７０（２Ｈ、ｄ、２”−ｃＨ２）、　３．９８（１８，
ｍ、２’−ＣＩ（）、　４．９０（ＬＨ，ｄ、３’−Ｃ
）Ｉ）、　５．３０（ＩＨ，２”−０Ｈ）、　６．４８
（ＩＨ，ｄ、１’−ＣＨ）、　７゜４０（２Ｈ，ｂｒｓ
、６−ＮＨ２）、　８．１７（ＩＨ，ｓ、２−ＣＨ）、
　８．４８（ＩＨ、ｓ、　８−ＣＨ）、　１３．２（１
Ｍ、　ｓ、　３”−ＣＯＯＨ）（実施例−２）化合物０
ＸＴ−ＨＣの製造法実施例−１と同様の方法でＰｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ。

ＮＫＯ７６１６１を培養し培養液５Ｌから同様の方法で
菌体懸濁液ＩＬを調製した。この懸濁液を５０ｍ１づつ
　５００ｍ１容の三角フラスコ２０本に分注しこれに各
々０ＸＴ−Ｈ２０ｍｇを加え３５℃にて２４時間振盪し
た。次にこの反応液を３Ｎ塩酸にてｐＨを５．０に調整
後１００００回転／分にて１０分間遠心分離して除菌し
得られた上清液を弱塩基性イオン交換樹脂（ＷＡ３０゜
Ｃ１型、１１９０〜３００．ｃｚ）１００ｍｌを充填し
たカラムに通液し０ＸＴ−ＨＣを吸着させる。未反応０
ＸＴ−Ｈは弱塩基性イオン交換樹脂に吸着されないため
カラムを水洗することにより容易に分離除去できる。吸
着された０ＸＴＨＣはＩＮ塩化アジアンモニウム溶液い
て溶出し得られた溶出液を活性炭粉末（和光純薬、クロ
マト用）５０ｍｌを充填したカラムに通液し０ＸＴ−Ｈ
Ｃを吸着させ水洗を行った後０．ＩＮ塩酸を通液して脱
塩さらに水洗を行う。吸着・脱塩された０ＸＴ−ＨＣは
５０％アセトン−水を用いて溶出し得られた溶出液を濃
縮乾固することにより０ＸＴ−ＨＣ粗粉末１２０ｍｇを
得た。

この粗粉末を蒸留水に溶解した後濃縮し冷却して再結晶
化させ生じた結晶を濾別乾燥することにより無色結晶状
の０ＸＴ−ＨＣ１０５ｍｇ　（収率２６．３％）を得た
。

ＦＡＢ−ＭＳ　；　２６７　（Ｍ十Ｈ）＋ＵＶ；λｗｎ
ａｘ　２４８　ｎ　ｍ　（Ｈ２Ｏ，ｐＨ＝７．０）１Ｈ
−Ｎ　Ｍ　Ｒ（２００ＭＢ２．　ＤＭＳＯ）δｐｐｍ；
　３．７１（２Ｈ２ｄ、２”　−ＣＨ２）、３．８９　
（ＩＨ＋　ｍ、２’　−ＣＨ）、４．９１　（ＩＨ９ｄ
、３’ＣＨ）、　５．３３（ＩＨ，２″−０Ｈ）、　６
．４６（ＩＨ，ｄ、１’−ＣＨ）、　８゜０９（ＩＨ，
ｄ、　２−ＣＨ）、　８．４８（ＩＨ，ｓ、　８−ＣＨ
）、　１２．４５（ＩＨ，ｓ、１−ＮＨ）、　１３．２
（ＩＨ，ｓ、３”−ＣＯＯＨ）（実施例−３）化合物０
ＸＴ−ＧＣの製造法実施例−１と同様の方法でＰｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ。

ＮＫＯ７６１６１を培養し培養液５Ｌから同様の方法で
菌体懸濁液ＩＬを調製した。この懸濁液を５０ｍ１づつ
　５００ｍ１容の三角フラスコ２０本に分注しこれに各
々０ＸＴ−Ｇ　　２０ｍｇを加え３５℃にて２４時間振
盪した。次にこの反応液を３Ｎ塩酸にてｐＨを５．０に
調整後１００００回転／分にて１０分間遠心分離して除
菌し得られた上清液を弱塩基性イオン交換樹脂（ＷＡ３
０Ｃ１型、１１９０〜３００μ）８０ｍｌを充填したカ
ラムに通液し０ＸＴ−ＧＣを吸着させる。未反応０ＸＴ
−Ｇは弱塩基性イオン交換樹脂に吸着されないためカラ
ムを水洗することにより容易に分離除去できる。吸着さ
れた０ＸＴ−ＧＣはＩＮ塩化アジアンモニウム溶液いて
溶出し得られた溶出液を活性炭粉末（和光純薬、クロマ
ト用）　４０’ｍｌを充填したカラムに通液し０ＸＴ−
ＧＣを吸着させ水洗を行った後０゜ＩＮ塩酸を通液して
脱塩さらに水洗を行う。吸着・脱塩された０ＸＴ−ＧＣ
は５０％アセトン−水を用いて溶出し得られた溶出液を
濃縮乾固することにより０ＸＴ−ＧＣ粗粉末１３９ｍｇ
（収率６９．５％）を得た。

ＦＡＢ−ＭＳ　　；　　２　８　２　　（Ｍ＋Ｈ）”Ｕ
Ｖ；　λｔ＝ａｘ　　２５４　ｎ　ｍ　　（Ｈ２Ｏ，ｐ
Ｈ４，０）’Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＢ２．ＤＭＳＯ）　
　δｐｐｍ；　３．４０（１８２ｍ、２’　−ＣＨ）、
３．６５　（２Ｈ９ｄ、２”　−ＣＨ２）、４．６５　
（Ｉ　Ｈ１ｄ＋　３’−ＣＨ）、　５．３０（ＩＨ，２
”−０Ｈ）、　６．２１（ＩＨ，ｄ、１°−ＣＨ）、　
６゜７２（２Ｈ，ｂｒｓ、２−ＮＨ２）、　　８．２９
（ＩＨ，ｓ、８−ＣＨ）、　　１０．６０（ＩＨ，ｓ、
　１−ＮＨ）、　　１３．２（ＩＨ，ｓ、　３”−ＣＯ
ＯＨ）特許出願人　　日本化薬株式会社

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中Ｂは ▲数式、化学式、表等があります▼▲数式、化学式、表
   等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される基を意味する） で示されるオキセタノシン−３’−カルボン酸類および
   薬理学上許容される塩。
2. （２）一般式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （式中Ｂは ▲数式、化学式、表等があります▼▲数式、化学式、表
   等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される基を意味する） で示されるオキセタノシン類にＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
   属に属する微生物又はその処理物を作用させることによ
   り一般式（ I ）で示されるオキセタノシン−３’−カ
   ルボン酸類に変換させるオキセタノシン−３’−カルボ
   ン酸類の製造法。