JPH04304892A - グリシンの生物学的製造法 - Google Patents
グリシンの生物学的製造法Info
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- JPH04304892A JPH04304892A JP8918891A JP8918891A JPH04304892A JP H04304892 A JPH04304892 A JP H04304892A JP 8918891 A JP8918891 A JP 8918891A JP 8918891 A JP8918891 A JP 8918891A JP H04304892 A JPH04304892 A JP H04304892A
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- glycine
- glycinamide
- genus
- microorganism
- pseudomonas
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はグリシンアミドから微生
物を用いることによりグリシンを製造する方法に関する
ものである。グリシンは食品添加物、医農薬合成原料と
して重要なものである。
物を用いることによりグリシンを製造する方法に関する
ものである。グリシンは食品添加物、医農薬合成原料と
して重要なものである。
【０００２】
【従来の技術とその問題点】グリシンの工業的製造法と
しては、従来、青酸、ホルムアルデヒドおよびアンモニ
アを主原料にしたストレッカー法によりグリシノニトリ
ルを合成し、続いて苛性アルカリを用い加水分解する方
法が知られている。この方法においては、反応液の著し
い着色、副反応によるイミノジ酢酸等の副生および大量
に生成する塩類の処理等が大きな問題となり、脱色や副
反応物の除去のための精製工程に高度な技術を必要とす
る。
しては、従来、青酸、ホルムアルデヒドおよびアンモニ
アを主原料にしたストレッカー法によりグリシノニトリ
ルを合成し、続いて苛性アルカリを用い加水分解する方
法が知られている。この方法においては、反応液の著し
い着色、副反応によるイミノジ酢酸等の副生および大量
に生成する塩類の処理等が大きな問題となり、脱色や副
反応物の除去のための精製工程に高度な技術を必要とす
る。
【０００３】一方、アミドの微生物的加水分解によるア
ミノ酸の製造法については、ＤまたはＬ体のアミノ酸ア
ミドより対応するＤまたはＬ体のアミノ酸を得る方法は
知られている〔特開昭６０−３６４４６号および特開昭
６３−８７９９８号各公報参照〕が、グリシンアミドか
らグリシンを得るという報告はない。わずかに、種々の
基質を用いその基質特異性を調べた実験の中に、ブレビ
バクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ） ｓｐ
．Ｒ−３１２ 、オクロバクトラム・アンスロピ−（Ｏ
ｃｈｒｏｂａｃｔｒｕｍ ａｎｔｈｒｏｐｉ） ＳＣＲ
Ｃ Ｃ１−３８およびアクロモバクタ−（Ａｃｈｒｏｍ
ｏｂａｃｔｅｒ） 属の細菌がグリシンアミドを加水分
解する活性があるとの記載〔Ａ．シイレイら、ザ・ジャ
−ナル・オブ・ベ−シック．マイクロバイオロジ− ２
６ 巻２９９−３１１（１９８６） ；浅野ら、ザ・ジ
ャ−ナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリ− ２６
４巻 １４２３３−１４２３９（１９８９）；特開平２
−２３４６７８号公報等参照〕があるのみである。しか
し、その活性は光学活性アミノ酸アミドに比べると極め
て低いものである。
ミノ酸の製造法については、ＤまたはＬ体のアミノ酸ア
ミドより対応するＤまたはＬ体のアミノ酸を得る方法は
知られている〔特開昭６０−３６４４６号および特開昭
６３−８７９９８号各公報参照〕が、グリシンアミドか
らグリシンを得るという報告はない。わずかに、種々の
基質を用いその基質特異性を調べた実験の中に、ブレビ
バクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ） ｓｐ
．Ｒ−３１２ 、オクロバクトラム・アンスロピ−（Ｏ
ｃｈｒｏｂａｃｔｒｕｍ ａｎｔｈｒｏｐｉ） ＳＣＲ
Ｃ Ｃ１−３８およびアクロモバクタ−（Ａｃｈｒｏｍ
ｏｂａｃｔｅｒ） 属の細菌がグリシンアミドを加水分
解する活性があるとの記載〔Ａ．シイレイら、ザ・ジャ
−ナル・オブ・ベ−シック．マイクロバイオロジ− ２
６ 巻２９９−３１１（１９８６） ；浅野ら、ザ・ジ
ャ−ナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリ− ２６
４巻 １４２３３−１４２３９（１９８９）；特開平２
−２３４６７８号公報等参照〕があるのみである。しか
し、その活性は光学活性アミノ酸アミドに比べると極め
て低いものである。
【０００４】
【問題を解決するための手段】本発明者らは、このよう
な従来の製造方法に対し、副生物の生成がなく、エネル
ギー的にも、また収率的にも工業的に有利なグリシンの
製造方法の開発を目的として、グリシンアミドの加水分
解によりグリシンを生成する活性が高く、且つ生成した
グリシンを分解、資化する活性を持たない微生物の探索
と培養および反応条件の研究を鋭意行った。その結果、
ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ） 属、アルス
ロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、カセオバ
クター（Ｃａｓｅｏｂａｃｔｅｒ） 属、シュードモナ
ス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ） 属、エンテロバクター
（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属、アシネトバクター（
Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ） 属、アルカリゲネス（
Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ） 属、コリネバクテリウム（
Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ） 属およびストレプ
トマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する微
生物にグリシンアミドからグリシンを生産する高い能力
があることを見出し、本発明を完成した。
な従来の製造方法に対し、副生物の生成がなく、エネル
ギー的にも、また収率的にも工業的に有利なグリシンの
製造方法の開発を目的として、グリシンアミドの加水分
解によりグリシンを生成する活性が高く、且つ生成した
グリシンを分解、資化する活性を持たない微生物の探索
と培養および反応条件の研究を鋭意行った。その結果、
ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ） 属、アルス
ロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、カセオバ
クター（Ｃａｓｅｏｂａｃｔｅｒ） 属、シュードモナ
ス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ） 属、エンテロバクター
（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属、アシネトバクター（
Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ） 属、アルカリゲネス（
Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ） 属、コリネバクテリウム（
Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ） 属およびストレプ
トマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する微
生物にグリシンアミドからグリシンを生産する高い能力
があることを見出し、本発明を完成した。
【０００５】すなわち、本発明は、微生物由来の加水分
解酵素の作用によりグリシンアミドからグリシンを生成
させる方法において、使用する微生物がロドコッカス（
Ｒｈｏｄ−ｏｃｏｃｃｕｓ）属、アルスロバクター（Ａ
ｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、カセオバクター（Ｃａｓ
ｅｏｂａｃｔｅｒ） 属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ） 属、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏ
ｂａｃｔｅｒ）属、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏ
ｂａｃｔｅｒ） 属、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇ
ｅｎｅｓ） 属、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍ） 属またはストレプトマイセス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属し該ニトリルを加水分
解する能力を有するものであること、を特徴とするグリ
シンの生物学的製造法である。
解酵素の作用によりグリシンアミドからグリシンを生成
させる方法において、使用する微生物がロドコッカス（
Ｒｈｏｄ−ｏｃｏｃｃｕｓ）属、アルスロバクター（Ａ
ｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、カセオバクター（Ｃａｓ
ｅｏｂａｃｔｅｒ） 属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ） 属、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏ
ｂａｃｔｅｒ）属、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏ
ｂａｃｔｅｒ） 属、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇ
ｅｎｅｓ） 属、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍ） 属またはストレプトマイセス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属し該ニトリルを加水分
解する能力を有するものであること、を特徴とするグリ
シンの生物学的製造法である。
【０００６】本発明において使用される微生物は、上記
の各属に属するグリシン生産菌であるが、具体的にはロ
ドコッカス ｓｐ． ＳＫ４９ （微工研菌寄第１１３
０３ 号）、ロドコッカス ｓｐ． ＳＫ７０ （微工
研菌寄第１１３０４ 号）、ロドコッカス ｓｐ． Ｓ
Ｋ９２ （微工研条寄第３３２４号） 、ロドコッカス
ｓｐ． ＨＲ１１ （微工研菌寄第１１３０６ 号）
、ロドコッカス ｓｐ． ＥＡ４ （微工研菌寄第１２
１３６ 号）、アルスロバクター ｓｐ． ＳＫ１０３
（微工研菌寄第１１３００ 号） 、アルスロバクター
ｓｐ． ＨＲ１（微工研条寄第３３２３号）、アルス
ロバクター ｓｐ． ＨＲ４（微工研菌寄第１１３０２
号）、カセオバクター ｓｐ． ＢＣ４（微工研条寄
第３３１６号）、シュードモナス ｓｐ． ＳＫ１０
（微工研菌寄第１１３０７ 号）、シュードモナス ｓ
ｐ． ＳＫ１１ （微工研菌寄第１１３０８ 号）、シ
ュードモナス ｓｐ． ＳＫ１３ （微工研条寄第３３
２５号）、シュードモナス ｓｐ． ＳＫ ３１（微工
研菌寄第１１３１０ 号）、シュードモナス ｓｐ．
ＳＫ８７ （微工研菌寄第１１３１１ 号）、エンテロ
バクタ−ｓｐ． ＳＫ１２（微工研条寄第３３２２号）
、アシネトバクター ｓｐ． ＢＣ９−２（微工研条寄
第３３１７号）、アルカリゲネス ｓｐ． ＢＣ１６−
２ （微工研条寄第３３２１号）、コリネバクテリウム
ニトリロフィラス（ＡＴＣＣ ２１４１９）およびスト
レプトマイセス グリセウス（ＩＦＯ ３３５５）あ
るいはこれらの変異株を挙げることができる。
の各属に属するグリシン生産菌であるが、具体的にはロ
ドコッカス ｓｐ． ＳＫ４９ （微工研菌寄第１１３
０３ 号）、ロドコッカス ｓｐ． ＳＫ７０ （微工
研菌寄第１１３０４ 号）、ロドコッカス ｓｐ． Ｓ
Ｋ９２ （微工研条寄第３３２４号） 、ロドコッカス
ｓｐ． ＨＲ１１ （微工研菌寄第１１３０６ 号）
、ロドコッカス ｓｐ． ＥＡ４ （微工研菌寄第１２
１３６ 号）、アルスロバクター ｓｐ． ＳＫ１０３
（微工研菌寄第１１３００ 号） 、アルスロバクター
ｓｐ． ＨＲ１（微工研条寄第３３２３号）、アルス
ロバクター ｓｐ． ＨＲ４（微工研菌寄第１１３０２
号）、カセオバクター ｓｐ． ＢＣ４（微工研条寄
第３３１６号）、シュードモナス ｓｐ． ＳＫ１０
（微工研菌寄第１１３０７ 号）、シュードモナス ｓ
ｐ． ＳＫ１１ （微工研菌寄第１１３０８ 号）、シ
ュードモナス ｓｐ． ＳＫ１３ （微工研条寄第３３
２５号）、シュードモナス ｓｐ． ＳＫ ３１（微工
研菌寄第１１３１０ 号）、シュードモナス ｓｐ．
ＳＫ８７ （微工研菌寄第１１３１１ 号）、エンテロ
バクタ−ｓｐ． ＳＫ１２（微工研条寄第３３２２号）
、アシネトバクター ｓｐ． ＢＣ９−２（微工研条寄
第３３１７号）、アルカリゲネス ｓｐ． ＢＣ１６−
２ （微工研条寄第３３２１号）、コリネバクテリウム
ニトリロフィラス（ＡＴＣＣ ２１４１９）およびスト
レプトマイセス グリセウス（ＩＦＯ ３３５５）あ
るいはこれらの変異株を挙げることができる。
【０００７】これらの微生物のうち、コリネバクテリウ
ム ニトリロフィラス（ＡＴＣＣ ２１４１９）およ
びストレプトマイセス グリセウス（ＩＦＯ ３３５
５）以外は、本発明者らにより自然界から新たに分離さ
れたものであり、それぞれ上記寄託番号にて工業技術院
微生物工業技術研究所に寄託されており、その菌学的性
質は以下のとおりである。
ム ニトリロフィラス（ＡＴＣＣ ２１４１９）およ
びストレプトマイセス グリセウス（ＩＦＯ ３３５
５）以外は、本発明者らにより自然界から新たに分離さ
れたものであり、それぞれ上記寄託番号にて工業技術院
微生物工業技術研究所に寄託されており、その菌学的性
質は以下のとおりである。
【表１】
【表２】
【表３】
【表４】
【表５】
【０００８】以上の菌学的性質をバージーズ・マニュア
ル オブ システマティック バクテリオロジー
（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅ
ｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ， １９８６）
に従って分類し、ＳＫ４９、ＳＫ７０、ＳＫ９２、ＨＲ
１１およびＥＡ４ 株はロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏ
ｃｃｕｓ） 属、ＳＫ１０３ 、ＨＲ１ およびＨＲ４
株はアルスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）
属、ＢＣ４ 株はカセオバクター（Ｃａｓｅｏｂａｃｔ
ｅｒ） 属、ＳＫ１０、ＳＫ１１、ＳＫ１３、ＳＫ３１
およびＳＫ８７株はシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ） 属、ＳＫ１２株はエンテロバクター（Ｅｎｔ
ｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属、ＢＣ９−２株はアシネトバク
ター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ） 属およびＢＣ１
６−２株はアルカリゲネス（Ａｌ−ｃａｌｉｇｅｎｅｓ
）属に属する細菌とそれぞれ同定した。
ル オブ システマティック バクテリオロジー
（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅ
ｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ， １９８６）
に従って分類し、ＳＫ４９、ＳＫ７０、ＳＫ９２、ＨＲ
１１およびＥＡ４ 株はロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏ
ｃｃｕｓ） 属、ＳＫ１０３ 、ＨＲ１ およびＨＲ４
株はアルスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）
属、ＢＣ４ 株はカセオバクター（Ｃａｓｅｏｂａｃｔ
ｅｒ） 属、ＳＫ１０、ＳＫ１１、ＳＫ１３、ＳＫ３１
およびＳＫ８７株はシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ） 属、ＳＫ１２株はエンテロバクター（Ｅｎｔ
ｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属、ＢＣ９−２株はアシネトバク
ター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ） 属およびＢＣ１
６−２株はアルカリゲネス（Ａｌ−ｃａｌｉｇｅｎｅｓ
）属に属する細菌とそれぞれ同定した。
【０００９】本発明に使用される微生物の培養には、ニ
トリル化合物、またはアミド化合物等の酵素誘導物質、
通常資化しうる炭素源、窒素源、および微生物の生育に
必要な有機および無機栄養素を含有する培地が用いられ
る。培養は好気的条件下でｐＨ４〜１０、温度２０〜５
０℃で、それぞれの微生物に適した範囲に制御しつつ行
えばよい。
トリル化合物、またはアミド化合物等の酵素誘導物質、
通常資化しうる炭素源、窒素源、および微生物の生育に
必要な有機および無機栄養素を含有する培地が用いられ
る。培養は好気的条件下でｐＨ４〜１０、温度２０〜５
０℃で、それぞれの微生物に適した範囲に制御しつつ行
えばよい。
【００１０】加水分解反応は、上記により微生物を培養
し、その培養液、培養液から分離した菌体または菌体
処理物（菌体破砕物、抽出酵素）または常法により固
定化した菌体あるいは酵素をを水、緩衝液または生理食
塩水に懸濁し、これにグリシンアミドを共存させればよ
い。グリシンアミドに前記菌体等を作用させる条件とし
ては、菌体等を乾燥菌体換算０．０１〜１０重量％、グ
リシンアミド０．１ 〜２０重量％を含む水性懸濁液を
温度氷点〜６０℃、好ましくは１０〜４０℃、ｐＨ５〜
１１、好ましくは６〜１０で、０．５ 〜５０時間反応
させればよい。
し、その培養液、培養液から分離した菌体または菌体
処理物（菌体破砕物、抽出酵素）または常法により固
定化した菌体あるいは酵素をを水、緩衝液または生理食
塩水に懸濁し、これにグリシンアミドを共存させればよ
い。グリシンアミドに前記菌体等を作用させる条件とし
ては、菌体等を乾燥菌体換算０．０１〜１０重量％、グ
リシンアミド０．１ 〜２０重量％を含む水性懸濁液を
温度氷点〜６０℃、好ましくは１０〜４０℃、ｐＨ５〜
１１、好ましくは６〜１０で、０．５ 〜５０時間反応
させればよい。
【００１１】かくして、グリシンアミドは、ほぼ １０
０％のモル収率でグリシンとアンモニアに転換され、グ
リシンアンモニウム塩の高濃度水溶液として生成蓄積さ
せることができる。グリシンアンモニウムを含有した反
応液からのグリシンの単離は濃縮、イオン交換、抽出、
晶析などの公知の方法を利用することにより目的物であ
るグリシンを取得できる。
０％のモル収率でグリシンとアンモニアに転換され、グ
リシンアンモニウム塩の高濃度水溶液として生成蓄積さ
せることができる。グリシンアンモニウムを含有した反
応液からのグリシンの単離は濃縮、イオン交換、抽出、
晶析などの公知の方法を利用することにより目的物であ
るグリシンを取得できる。
【００１２】
【発明の作用及び効果】本発明は、グリシンアミドの加
水分解活性を有する微生物を用いることを特徴とし、グ
リシンアミドからグリシンを生成せしめるものであり、
反応活性およびグリシンへの選択性が高い上に、グリシ
ンの蓄積濃度が極めて高く、工業的に十分満足し得るグ
リシンの製造方法を提供するものである。
水分解活性を有する微生物を用いることを特徴とし、グ
リシンアミドからグリシンを生成せしめるものであり、
反応活性およびグリシンへの選択性が高い上に、グリシ
ンの蓄積濃度が極めて高く、工業的に十分満足し得るグ
リシンの製造方法を提供するものである。
【００１３】
【実験例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれらの例のみに限定されるものではな
い。
るが、本発明はこれらの例のみに限定されるものではな
い。
【００１４】実施例１
（１） 培養
表−１に示す各微生物を下記のプレート培地に接種し、
培養した。 培地 グリセロール
５ ｇ／ｌアセトアミド
０．５ ｇ／ｌ酵母エキス
０．２ ｇ／ｌＫ２ＨＰＯ４
３ ｇ／ｌＮａ２ＳＯ４
０．３ ｇ／ｌＭｇＣｌ２
０．２
ｇ／ｌＣａＣｌ２
４０ｍｇ／ｌＭｎＳＯ４ ・４Ｈ２
Ｏ ４ ｍｇ／ｌ
ＦｅＣｌ３ ・７Ｈ２Ｏ
０．７ ｍｇ／ｌＺｎＳＯ４
０．１ｍｇ／ｌ寒
天
１８ ｇ／ｌｐＨ
７．２培養 ３０℃／３日間
培養した。 培地 グリセロール
５ ｇ／ｌアセトアミド
０．５ ｇ／ｌ酵母エキス
０．２ ｇ／ｌＫ２ＨＰＯ４
３ ｇ／ｌＮａ２ＳＯ４
０．３ ｇ／ｌＭｇＣｌ２
０．２
ｇ／ｌＣａＣｌ２
４０ｍｇ／ｌＭｎＳＯ４ ・４Ｈ２
Ｏ ４ ｍｇ／ｌ
ＦｅＣｌ３ ・７Ｈ２Ｏ
０．７ ｍｇ／ｌＺｎＳＯ４
０．１ｍｇ／ｌ寒
天
１８ ｇ／ｌｐＨ
７．２培養 ３０℃／３日間
【００１５】（１） グリシンアミドの加水分解各プレ
ートより菌体を一定量採取し、各々０．０５Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７．７）で洗浄した後、遠心分離して菌体を
集め、１ｍｌの上記リン酸緩衝液に懸濁した。次に、２
００ｍＭグリシンアミドを含む０．０５Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ ７．７） ０．５ｍｌに上記菌体懸濁液を ０
．５ｍｌ添加して３０℃で４８時間反応させた。反応終
了後、それぞれの反応液を遠心分離して菌体を除去した
後、上清液を液体クロマトグラフィーにて分析し反応液
中のグリシンを測定した。結果を表−１に示した。
ートより菌体を一定量採取し、各々０．０５Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７．７）で洗浄した後、遠心分離して菌体を
集め、１ｍｌの上記リン酸緩衝液に懸濁した。次に、２
００ｍＭグリシンアミドを含む０．０５Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ ７．７） ０．５ｍｌに上記菌体懸濁液を ０
．５ｍｌ添加して３０℃で４８時間反応させた。反応終
了後、それぞれの反応液を遠心分離して菌体を除去した
後、上清液を液体クロマトグラフィーにて分析し反応液
中のグリシンを測定した。結果を表−１に示した。
【表６】
【００１６】実施例２
（１） 培養
ロドコッカス ｓｐ． ＳＫ９２ 株を下記の条件で培
養した。 培地 アセトアミド
７ ｇ／ｌ酵母エキス
３ ｇ／ｌＫＨ２ＰＯ４
０．５ ｇ／ｌ
Ｋ２ＨＰＯ４
０．５ ｇ／ｌ無機塩混合液＊
５ ｍｌ／ｌｐＨ
７
．０＊ ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ ８．１０ｇ， Ｃａ
Ｃｌ２ １．５５ｇ， ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏ ０．
１５ｇ ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．２７ｇ， ＺｎＳＯ４・
７Ｈ２Ｏ ０．００６ｇ， ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ
０．２４ｇ を水 ２００ｍｌに溶解し調製したもの。 培養 ３０℃／２日間
養した。 培地 アセトアミド
７ ｇ／ｌ酵母エキス
３ ｇ／ｌＫＨ２ＰＯ４
０．５ ｇ／ｌ
Ｋ２ＨＰＯ４
０．５ ｇ／ｌ無機塩混合液＊
５ ｍｌ／ｌｐＨ
７
．０＊ ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ ８．１０ｇ， Ｃａ
Ｃｌ２ １．５５ｇ， ＭｎＳＯ４・４Ｈ２Ｏ ０．
１５ｇ ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．２７ｇ， ＺｎＳＯ４・
７Ｈ２Ｏ ０．００６ｇ， ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ
０．２４ｇ を水 ２００ｍｌに溶解し調製したもの。 培養 ３０℃／２日間
【００１７】（２） グリシンアミドの加水分解培養終
了後、得られた培養液から遠心分離によって菌体を集め
、０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ ７．７）で洗浄した
後、乾燥重量として ０．５重量％となるように前記緩
衝液に懸濁した。この菌体懸濁液４０ｍｌにグリシンア
ミド １０．４ｇを添加し、３０℃でｐＨを７．９ 〜
８．１ に制御しながら反応を行ったところ、反応開始
４５時間でグリシンアミドはほぼ完全に加水分解し、モ
ル収率ほぼ １００％（２２５ｇ／ｌ）でグリシンが生
成していた。
了後、得られた培養液から遠心分離によって菌体を集め
、０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ ７．７）で洗浄した
後、乾燥重量として ０．５重量％となるように前記緩
衝液に懸濁した。この菌体懸濁液４０ｍｌにグリシンア
ミド １０．４ｇを添加し、３０℃でｐＨを７．９ 〜
８．１ に制御しながら反応を行ったところ、反応開始
４５時間でグリシンアミドはほぼ完全に加水分解し、モ
ル収率ほぼ １００％（２２５ｇ／ｌ）でグリシンが生
成していた。
【００１８】実施例３
（１） 培養
ロドコッカス ｓｐ． ＥＡ４株を下記の条件で培養し
た。 培地 グリセロ−ル
５ ｇ／ｌ酵母エキス
０．０２ ｇ／ｌアセトアミド
５ ｇ／ｌＭｇＳＯ４
・７Ｈ２Ｏ ０．
５ ｇ／ｌＫＨ２ＰＯ４
０．５ ｇ／ｌＫ２ＨＰＯ４
０．５
ｇ／ｌｐＨ
７．０培養 ３０℃／２日間
た。 培地 グリセロ−ル
５ ｇ／ｌ酵母エキス
０．０２ ｇ／ｌアセトアミド
５ ｇ／ｌＭｇＳＯ４
・７Ｈ２Ｏ ０．
５ ｇ／ｌＫＨ２ＰＯ４
０．５ ｇ／ｌＫ２ＨＰＯ４
０．５
ｇ／ｌｐＨ
７．０培養 ３０℃／２日間
【００１９】（２） グリシンアミドの加水分解培養終
了後、得られた培養液から遠心分離により菌体を集め、
０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ ７．７）で洗浄した後
、乾燥重量として０．０９重量％となるように前記緩衝
液に懸濁した。この菌体懸濁液４０ｍｌにグリシンアミ
ド ２．９８ｇを添加し、３０℃でｐＨを７．９ 〜８
．１ に制御しながら反応を行ったところ、反応開始
２．７時間でグリシンアミドはほぼ完全に加水分解し、
モル収率ほぼ １００％（７５ｇ／ｌ） でグリシンが
生成していた。
了後、得られた培養液から遠心分離により菌体を集め、
０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ ７．７）で洗浄した後
、乾燥重量として０．０９重量％となるように前記緩衝
液に懸濁した。この菌体懸濁液４０ｍｌにグリシンアミ
ド ２．９８ｇを添加し、３０℃でｐＨを７．９ 〜８
．１ に制御しながら反応を行ったところ、反応開始
２．７時間でグリシンアミドはほぼ完全に加水分解し、
モル収率ほぼ １００％（７５ｇ／ｌ） でグリシンが
生成していた。
Claims (1)
- 【請求項１】 微生物由来の加水分解酵素の作用によ
りグリシンアミドからグリシンを生成させる方法におい
て、使用する微生物がロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃ
ｃｕｓ） 属、アルスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃ
ｔｅｒ）属、カセオバクター（Ｃａｓｅｏｂａｃｔｅｒ
） 属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）
属、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属
、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）
属、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ） 属、
コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ
） 属またはストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ）属に属し該アミドを加水分解する能力を有する
ものであること、を特徴とするグリシンの生物学的製造
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8918891A JPH04304892A (ja) | 1991-03-29 | 1991-03-29 | グリシンの生物学的製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8918891A JPH04304892A (ja) | 1991-03-29 | 1991-03-29 | グリシンの生物学的製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04304892A true JPH04304892A (ja) | 1992-10-28 |
Family
ID=13963753
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8918891A Pending JPH04304892A (ja) | 1991-03-29 | 1991-03-29 | グリシンの生物学的製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04304892A (ja) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001211892A (ja) * | 2000-02-03 | 2001-08-07 | Asahi Kasei Corp | グリシンの微生物学的製造法 |
| JP2001258586A (ja) * | 2000-03-24 | 2001-09-25 | Asahi Kasei Corp | アンモニアの反応分離を利用したグリシンの微生物学的製造方法 |
| JP2001269190A (ja) * | 2000-03-29 | 2001-10-02 | Asahi Kasei Corp | グリシンの着色を防止した微生物学的製造方法 |
| JP2001275692A (ja) * | 2000-03-29 | 2001-10-09 | Asahi Kasei Corp | グリシンの着色を防止した微生物学的製造法 |
| JP2001299378A (ja) * | 2000-04-24 | 2001-10-30 | Asahi Kasei Corp | グリシンの着色を防止した微生物学的な製造方法 |
| JP2001299377A (ja) * | 2000-04-28 | 2001-10-30 | Asahi Kasei Corp | グリシンの微生物学的な製造法 |
| JP2001340097A (ja) * | 2000-06-01 | 2001-12-11 | Asahi Kasei Corp | グリシンを微生物学的に製造する方法 |
| JP2001340096A (ja) * | 2000-06-01 | 2001-12-11 | Asahi Kasei Corp | グリシンの微生物学的な製造方法 |
| WO2018149819A1 (en) | 2017-02-16 | 2018-08-23 | Nestec S.A. | Natural flavor base and process for its preparation |
-
1991
- 1991-03-29 JP JP8918891A patent/JPH04304892A/ja active Pending
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001211892A (ja) * | 2000-02-03 | 2001-08-07 | Asahi Kasei Corp | グリシンの微生物学的製造法 |
| JP2001258586A (ja) * | 2000-03-24 | 2001-09-25 | Asahi Kasei Corp | アンモニアの反応分離を利用したグリシンの微生物学的製造方法 |
| JP2001269190A (ja) * | 2000-03-29 | 2001-10-02 | Asahi Kasei Corp | グリシンの着色を防止した微生物学的製造方法 |
| JP2001275692A (ja) * | 2000-03-29 | 2001-10-09 | Asahi Kasei Corp | グリシンの着色を防止した微生物学的製造法 |
| JP2001299378A (ja) * | 2000-04-24 | 2001-10-30 | Asahi Kasei Corp | グリシンの着色を防止した微生物学的な製造方法 |
| JP2001299377A (ja) * | 2000-04-28 | 2001-10-30 | Asahi Kasei Corp | グリシンの微生物学的な製造法 |
| JP2001340097A (ja) * | 2000-06-01 | 2001-12-11 | Asahi Kasei Corp | グリシンを微生物学的に製造する方法 |
| JP2001340096A (ja) * | 2000-06-01 | 2001-12-11 | Asahi Kasei Corp | グリシンの微生物学的な製造方法 |
| WO2018149819A1 (en) | 2017-02-16 | 2018-08-23 | Nestec S.A. | Natural flavor base and process for its preparation |
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