JPH0276822A - 免疫賦活剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は、免疫機能を活性化する免疫賦活剤に関する。

〈従来の技術〉 一般に動物は、外来の微生物等の異物及び異物的自己物
質を排除しようとする多種多様の防衛機能、即ち免疫機
能を有しており、免疫作用を活性化することによって各
種の疾病に対抗することができると考えられている。そ
こで最近、前記免疫作用を活性化するための物質の開発
が進められており、例えば食品成分中の免疫調節機能を
有する物質として、ＢＲＭ、多糖類、リグニン、レクチ
ン又は低分子の物質等について研究が成されている。し
かしながら、蛋白質を分解して得られるペプチドを含む
蛋白分解エキスが、免疫賦活作用を有するか否かは、全
く知られていないのが現状である。

〈発明が解決しようとする課題〉 本発明の目的は、副作用がなく、動物の免疫機能を活性
化する免疫賦活剤を提供することにある。

〈課題を解決するための手段〉 本発明によれば、蛋白分解酵素により蛋白質を分解して
得た分子量１０００〜１５０００のペプチドを含む蛋白
分解エキスを有効成分として含有することを特徴とする
免疫賦活剤が提供される。

以下本発明を更に詳細に説明する。

本発明の免疫賦活剤は、特定のペプチドを含む蛋白分解
エキスを有効成分として含有する。

本発明において、有効成分として含有するペプチドの分
子量は、１０００〜１５０００であり、好ましくは３５
００〜１００００の範囲である。

前記分子量が、１０００未満の場合及び１５０００を超
える場合には、充分な免疫賦活作用が得られない。

本発明に用いる前記ペプチドを含む蛋白分解エキスとし
ては、魚貝類及び／又は食用動物等を蛋白分解酵素によ
って分解して得た魚貝類エキス及び／又は食用動物エキ
ス等を用いることができる。

該魚貝類エキスは、例えば次のようにして製造すること
ができる。すなわち、原料魚貝類具体的には、アジ、サ
バ、イワシ、サンマ、カツオ、ホッケ、タラ、イカ、タ
コ、エビ、カキ、シジミ、アサリ、イガイ、モガイ、ア
カガイ、ハマグリ等を細切りスラリー化などの前処理を
することなく丸まま反応缶に投入し、投入後直ちに７５
℃以上。

好ましくは８０℃以上に昇温しで魚貝類の中に含まれる
自己消化酵素を完全に不活性化すると同時に自己消化酵
素の作用により発生する魚貝類特有のくさみ、悪臭など
の臭気を除去し１次いで、４０℃〜７０℃、ｐＨ５，０
〜７．Ｏ１好ましくはｐＨ５，５〜６．５において枯草
菌産生蛋白分解酵素を添加して魚貝類に含まれる蛋白質
をプロテオース級にまで分解する。次に、温度を少なく
とも６５℃以上、好ましくは７５℃以上に昇温し通常３
分〜１．５時間、好ましくは１０分〜１時間かけて枯草
菌産生蛋白分解酵素を不活性化させ、引続いて再度ｐＨ
を調整せずに３０〜６０℃、ｐＨ５〜７において麹菌産
生蛋白分解酵素を添加して分解し、実質的に分子量１０
００〜１５０００のペプチドに分解する。分解時間は１
０分〜３時間、好ましくは３０分〜２時間程度行なう。

分解時間が３０分未満ではプロテオースが残り特定のア
ミノ酸組成を構成するペプチドが得られず、一方３時間
を超えると、免疫賦活作用が低下するので好ましくない
。

かようにして得た分解液は遠心分離機等を用い常法にて
魚貝類エキス層、油層及び骨片類等の未分解物に分類す
ることができ、次いで限外濾過又は６０℃以下において
減圧濃縮する方法等を用いることにより製造することが
できる。

該魚貝類エキスの成分はグルタミン酸、アスパラギン酸
、リジン、アルギニン、グリシン、アラニン、ロイシン
、プロリン、ヒスチヂン、フェニールアラニン、セリン
等の多種のパブタイドアミノ酸群及び遊離アミノ酸を含
み、実質的に分子量が１０００〜１５０００のペプチド
を主成分とする。また食用動物エキスは次のようにして
製造することができる。すなわち、例えば原料の鴇、牛
、豚等の食用動物の肉・骨・皮等を適当な大きさに切断
し、反応缶に投入して７５℃以上、好ましくは８０℃以
上に昇温することにより原料の変性を防止して自己分解
酵素を不活性化し、次いで４０℃〜７０℃、ｐＨ５，０
〜７．０、好ましくはｐＨ５，５〜６．５において、枯
草菌産生蛋白分解酵素を添加し、撹拌反応させて食用動
物の蛋白質をプロテオース級にまで分解する。次に、温
度を少なくとも６５℃以上、好ましくは７５℃以上に昇
温し通常３分〜１．５時間、好ましくは１０分〜１時間
かけて枯草菌産生蛋白分解酵素を不活性化させ、引続い
て再度ｐＨを調整せずに３０〜６０℃、ｐ　ｌ−ｌ５〜
７において麹菌産生蛋白分解酵素を添加して分解し、実
質的に分子量１０００〜１５０００のペプチドに分解す
る。最後にこれらを遠心三層分離機等により、油脂、水
溶液、骨片に分離し、限外濾過又は６０℃以下で真空濃
縮する方法等によって製造することができる。

前記蛋白分解エキスとしての魚貝類エキス及び／又は食
用動物エキスの製法は一例であり決してこれらに限定さ
れるものではない。例えば前記２つの方法は、いずれも
蛋白分解酵素を２段階に分けて作用させているが、１段
階だけで作用させ諸条件を変えた方法において得られる
蛋白分解エキスを用いることも可能である。また蛋白質
分解酵素としては、蛋白質を分解し得る酵素であればす
べての酵素が単独又は混合して使用することができる。

以上前記有効成分である蛋白分解エキスは、全て天然物
のみから成っているため毒性はなく。

極めて安全な物質である。

本発明の免疫賦活剤は５例えば経口投与、静脈注射等に
より投与することができ、この際の有効量は、経口投与
の場合、１０■／ｋｇ以上が好ましく、特に２５■／ｋ
ｇ以上が望ましい。また静脈注射の場合には、５■／ｋ
ｇ以上が好ましく、特に１５ｍｇ／ｋｇ以上が望ましい
。また前記ペプチドを含む蛋白分解エキスの他に、通常
医薬品に使用される例えばキノン、α−トコフェロール
等を含有させて使用することもできる。

本発明において、免疫賦活剤を経口投与する場合には、
食品又は飼料に添加して摂取することが可能であり、毎
日摂取することにより優れた免疫活性を得ることができ
る。

〈発明の効果〉 本発明の免疫賦活剤を用いることにより、免疫活性を向
上させることができる。また本発明の免疫賦活剤は、天
然の蛋白質を分解して得られるペプチドを主成分として
いるため、毒性がなく、しかも毎日摂取しても副作用の
恐れが全くない。

〈実施例〉 以下実施例及び比較例により更に詳細に説明するが、本
発明はこれらに限定されるものではない。

夫胤机よ りバ５ｔを反応缶に投入し、約９０℃に昇温しで自己消
化酵素を完全に不活性化すると同時に臭気を除去した。

次いで６０℃、ｐＨ，６，０において枯草菌産生蛋白分
解酵素を添加して１時間反応させた。次に、温度７５℃
に昇温し、３０分間かけて枯草菌産生蛋白分解酵素を不
活性化させ、５０℃、ｐＨ６において麹菌産生蛋白分解
酵素を添加して３０分間分解した。得られた分解液を遠
心分離機で、２０分間処理してサバ抽出の蛋白分解エキ
スを得た後、限外濾過を行い免疫賦活剤を調製した。得
られた免疫賦活剤中のペプチドの分子量をゲルパーミェ
ーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）で測定した結果
分子量７０００であった。

ス】１１乳 ２ｋｇ前後の成長雄家兎を普通飼料で４週間飼育した。

次いで１２時間絶食させた後、耳静脈より末梢血を採取
し、ＣｏｎＡ刺激に対するリンパ球幼若化反応を測定し
た。次に実施例１にて調製した免疫賦活剤であるサバ抽
出液１ｇを、飼料１００ｇ中に添加し、３０日間投与し
た。その後再び１２時間絶食させた後、耳静脈より末梢
血を採取し、リンパ球幼若化を測定した。第１図にリン
パ球幼若化反応の測定結果を示す。また該リンパ球幼若
化測定法を下記に示す。

リンパ　′　他側６法 採取した末梢血は比重遠心法でリンパ球を分離し、洗浄
後、１０％ＦＣ５加１１ＰＭＩ−１６４０に浮遊させた
。

ＣｏｎＡ刺激は、細胞浮遊液０．５ｍＱに対してＣｏｎ
Ａを含む１０％ＦＣ３加ＲＰＭＩ−１６４０を０．５ｍ
Ｑ加えて調製した。コントロールとしてＣｏｎＡを添加
しない系を調製し、２４穴プラスチツクプレートで７２
時間培養（３７℃、５％ｃｏ２．９５％空気）した。

同様にＰＨＡ刺激も細胞浮遊液０．５ｍＱに対して円Ｉ
Ａを含むＦＣ５加１１ＰＭＩ−１６４０を０．５ｍＱを
添加して培養した。培養したリンパ球浮遊液を試験管に
回収し。

リンパ球を洗浄後上清液を除去した。残った細胞ペレッ
トに０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００溶液２＋ｎＱ、ト
リスバッファ　　（Ｔｒｉｓｂｕｆｆｅｒ）　０．２ｍ
Ｑ及びＥＢ溶液（２００μｇ／ｍＱ）０．１５ｍＱを加
え、４℃で２０分間反応させた後、スペクトラムｍ　（
Ｓｐｅ−ｃｔｒｕｍｌｌ［）　　（オーツ社製）により
測定した。

ル軟透よ 実施例１にて調製した免疫賦活剤を用いない以外は、全
て実施例２と同様にリンパ球幼若化測定を行った。第１
図にリンパ球幼若化反応の測定結果を示す。

実施例２及び比較例１の結果、第１図に示すとおり免疫
賦活剤を投与しない場合、実験開始日と３０日後の兎の
耳静脈末梢血リンパ球のＣｏ　ｎ　Ａに対する幼若化反
応に相関性はなかった。しかし免疫賦活剤を投与した場
合には、ＣｏｎＡに対する幼若化反応が、投与前３．３
５±３．３５　（Ｍ±ＳＤ）であったのにに対し、３０
日間投与後では、９．２６±２．９９　（ＭｆＳＤ）で
あった。

従って１本発明の免疫賦活剤を投与することにより、明
らかにリンパ球の幼若化反応が上昇することが判明した
。

失凰叢ユ 実施例１にてｙ４馴した免疫賦活剤を健常人１１人（年
齢３０±３．３、体重６１±５．３ｋｇ、男性）に朝夕
３ｇずつ計６ｇ／日、３０日間経口投与した。投与中の
アルコール、タバコ、薬剤の摂取は禁止したが１食事に
ついては制限しなかった。

次いで免疫賦活剤最終投与の約２４時間後である朝食前
の空腹時に採血を行い実施例２と同様にＰＩＩＡ及びＣ
ｏｎＡ刺激に対する末梢血リンパ球幼若化反応を測定し
た。第２８及びｂ図にそれぞれＰＩＩＡ及びＣｏｎＡ刺
激に対する末梢血リンパ球幼若化反応の測定結果を示す
。

実施例３の結果、第２ａ及びｂ図に示すとおり。

本発明の免疫賦活剤を投与することによりＣｏｎＡ及び
Ｐ　Ｉ−Ｉ　Ａに対する末梢血リンパ球幼若化反応が上
昇することが判った。特にＣｏ　ｎＡ刺激リンパ球幼若
化反応は、投与前１．７６９±０．３０４　（Ｍ±ＳＤ
）〜投与後２．３４２±０．６１４（Ｍ＋ＳＤ）に上昇
した。

失履■± マウスの肺細胞抗体産生能を調べるために雄のＣ５７Ｂ
Ｌ／６マウスを搬入後６日間一定の環境下で飼育した。

次いで普通粉末飼料１００ｇに、実施例１で調製した免
疫賦活剤を１ｇ添加し、前記マウスに１０日間経口投与
した。投与５日目にヒツジ赤血球（ＳＲＢＧ）５　ｘ　
ｔＯ’／ｍＱを尾静脈に０．２ｍＱ注射した。投与終了
５日後、マウスから肺臓を取り出し単細胞浮遊液とした
後、　ＩＥ−ＭＥＭで３回洗浄（１５００ｒｐｍ　５１
１ｉｎ）　Ｌ／、１，２５ＸＩＯ／ｍＱに調製した浮遊
液と５０％５ＲＢＣと補体［モルモット血清（Ｇｕｉｎ
−ｅｒ　Ｐｉｇ　Ｓｅｒｕｍ）の乾燥粉末をＥ−ＨＥＭ
で溶解した溶液］とを８：１：１の割合で混合して、カ
ニンガムチェンバーに５０μΩ入れた。次いで白色ワセ
リンで封入した後、３７℃インキュベータ内で９０分反
応させた。反応後、顕微鏡でプラークＲ（抗体産生細胞
数／マウス１匹の肺臓細胞数）を調べたところ、４０１
／１０６±５４／１０’であった。第３図にマウス肺臓
細胞のプラーク数の測定結果を示す。

１履１−ユ旦 実施例４で用いた粉末飼料を不断給餌させながら、実施
例１で調製した免疫賦活剤を２５■／ｋｇ又は５０■／
ｋｇ経口投与した以外は、全て実施例４と同様にマウス
肺臓細胞のプラーク数を測定したところ、２５ｍｇ／ｋ
ｇ経口投与した場合、４０１／１０′±１９／１０”で
あり、５０■／ｋｇ経口投与した場合、５２３／１０’
±１０／１０’であった。第３図にマウス肺臓細胞のプ
ラーク数の測定結果を示す。

よ較樵Ｉ 実施例１で調製した免疫賦活剤を使用しない以外は、全
て実施例４と同様にマウス肺臓細胞のプラーク数を測定
したところ、２４６／１０’±３１／１０”であった。

第３図にマウス牌ｍ細胞のプラーク数の測定結果を示す
。

よ■舊立 実施例１で調製した免疫賦活剤を使用しない以外は、全
て実施例５又は６と同様にマウス肺臓細胞のプラーク数
を測定したところ、２２２／１０’±８／１０’であっ
た。第３図にマウス肺臓細胞のプラーク数の測定結果を
示す。

実施例４〜６と比較例２，３との結果より本発明の免疫
賦活剤を投与することによりマウスの肺細胞抗体産生能
が上昇することが判明した。

【図面の簡単な説明】

第１図はＣｏｎＡ刺激に対する兎のリンパ球幼若化反応
の測定結果を示すグラフ、第２ａ図はＰＨＡ刺激に対す
る健常人のリンパ球幼若化反応の測定結果を示すグラフ
、第２ｂ図はＣｏｎＡ刺激に対する健常人のリンパ球幼
若化反応の測定結果を示すグラフ、第３図はマウス肺臓
細胞のプラーク数の測定結果を示すグラフである。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 蛋白分解酵素により蛋白質を分解して得た分子量１００
   ０〜１５０００のペプチドを含む蛋白分解エキスを有効
   成分として含有することを特徴とする免疫賦活剤。