JPH02131571A - 新規な微生物ストレプトマイセスｓｐ．ｙ―１２５およびこれらからアミラーゼ阻害物質を製造する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （技術分野） 本発明は新規な微生物であるストレプトマイセスｓｐ．
Ｙ−１２５及びこれから製造されたアミラーゼ阻害物質
に関するものである。

（背景の技術） 一般的に、人体に必要である三大栄養素の一つである炭
水化物はその大部分が二ＩＪ！ｎ又は多糖類の形態で摂
取された後に、体内に吸収される直前にアミラーゼ又は
マルターゼ又はサツカラーゼ等の配糖体加水分解酵素の
作用により分解され、この際体内で過量の糖が生成する
と糖尿病、肥満症、過脂肪症、胃炎、胃潰瘍、十二指腸
潰瘍等の原因になる。

従って、これらの疾病を予防、治療するためには配糖体
加水分解酵素の阻害物質を使用して体内に存在する各種
の配塘体加水分解酵素の作用を抑制する事により過量の
糖が生成するのを防止する方法が知られており　（米国
特許第４，３０７，１９４号、同第４，４５１，４５５
号）、このような配糖体加水分解酵素阻害物質は放線菌
、特にストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
）によって生産されることが多い物質として知られてい
る。

従来の配糖体加水分解酵素はその分子看によって高分子
量のものはアミラーゼに対する阻害効果が優れ、これに
対し低分子量のものはマルターゼ又はサツカラーゼに対
する阻害効果が優れていると報告されているが、本発明
は比較的低分子量でありながらアミラーゼに対して特異
的な阻害効果を示すアミラーゼ阻害物質に関するもので
ある。

従来知られているアミラーゼ阻害物質の製造方法として
は、生物学的方法以外な方法、すなわち、サルチル酸又
はアビスシン（ａｂｉｓｃｉｎｅ）のような低分子物質
の物理的吸着によって非特異的に酵素を阻害するか、あ
るいは酵素を変成、沈澱させる高分子物質を利用して製
造する方法もある。

しかし、このような従来のアミラーゼ阻害物質は唾液ア
ミラーゼのみに影響を及ぼすにすぎず、膵臓アミラーゼ
にはほとんど影響を及ぼすことができず（Ｅ．κｎｅｅ
ｎ．　Ｒ．Ｍ．ＳＬａｎｄｔｅｄｔ，　ｒＡｒｃｈ．Ｂ
ｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓ．　」９，　２３５（１９
４６））．そのほかのアミラーゼに対しても非特異的で
あってほとんど阻害作用を及ぼすことができない欠点が
あると同時に、熱に対して不安定であり、トリプシンに
よって不活性になるため、活性度が比較的低いと報告さ
れている（米国特許第４，２８２．３１８号）。

そこで本発明者等はアミラーゼ阻害物質を生産する高い
活性を有する新規な微生物を発見し、その分離及び利用
に関して広範囲な研究を行った結果、上記新規な微生物
が生産するアミラーゼ阻害物質が従来のアミラーゼ阻害
物質に比べてその活性及び安定性が一層優れた物質であ
ることを見い出し、本発明に至ったものである。

本発明の目的はアミラーゼ阻害物質を生産する新規な菌
株及びこれを利用して高収率でアミラーゼ阻害物質を効
果的に製造する方法、ならびに製造されたアミラーゼ阻
害物質を提供することにある。

（発明の開示） 本発明の微生物であるストレプトマイセスｓｐ．Ｙ１２
５は大韓民国江原道春川及び京畿道鳥山で採取された土
壌試料から分離培養した新菌株で、■９８８年７月５日
付けにて韓国科学技術院に受託番号ＫＣＴＣ　８３８７
Ｐで受託され、１９８９年３月３１日付けにてアメリカ
ン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａ＋ｍｅｒｉ
ｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉ
ｏｎ）　（ＡＴＣＣ）に受託番号ＡＴＣＣ　５３８９０
で受託されている。

以下に、新菌株ストレプトマイセスＳρ．Ｙ−１２５の
系統学的特性を逐次に説明する。特性の測定はインター
ナショナル・ストレプトマイセス・プロジェクト（Ｉｎ
ｔａｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　
Ｐｒｃｙｊｅｃむ）（ＩｓＰ）によって勧奨されている
方法および「ハーゲイスマニュアル・オプ・ディターミ
ネイティブ・バクテリオロジ−（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍ
ａｎｕａｌ　ｏｆ　ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅＢａｃ
ｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）　Ｊ第２巻（１９８６）に記載さ
れている方法に準拠して行った。

■）培養学的特性 本発明の新菌株であるストレプトマイセスｓｐ．Ｙ１２
５は胞子の色が灰色系列に属する豊富な連続菌糸体を生
成するので、このような培養上の特性は次の表１に示す
ようにオートミール寒天（ＩＳＰ　Ｎｏ３）、無機塩類
澱粉寒天（ＩＳＰ　Ｎｏ．　４　）　、チロシン寒天（
ＩｓＰ　Ｎｏ．　７　）上で現われるし、特にオートミ
ール寒天（ＩｓＰ　Ｎｏ．　３　）で増殖状態及び色相
が明確に観察することができる。裏面の色相は黄褐色で
、此の色相はｐｌ＋の影響を受けない。チロシン寒天培
地では黄色色素が、脱脂乳培地では淡黄色色素が生成し
、これ以外の培地Ｆでは可溶性色素が生成しなかった。

２）形態学的特性 オートミール寒天上で増殖したストレプトマイセスｓｐ
．Ｙ−１２５の形態学的特性を観察した結果、分裂して
いない分技状菌糸体が生成し、胞子嚢は生成しなかった
。又、気生菌糸のふちには胞子体が生成し、気生菌糸は
波状形態であり、胞子は球形又は棒形である。胞子の表
面は柔らかであり、その大きさは０．７〜１．２　Ｘ　
１．２〜１．８μ―であった。

この際、形態学的特性は光学顕微鏡で調査し、胞子の表
面及び大きさは走査型電子顕微鏡で観察した。

３）生理学的特性 次の表２はストレプトマイセスＳρ．　Ｙ−　１２５の
炭素利用度を示し、滅菌した炭素源を加えて最終濃度を
１．０％にしたＩＳＰ培地を使用して炭素利用度を測定
した結果である。培養温度は３０゜Ｃとし、１４日後に
測定を行った。

２：ストレプトマイセスｓ　．Ｌ４２５の″ｒ＃ ｍ）−：利用されムい。　　　ｌ：利用される。

ストレプトマイセスｓｐ．Ｙ−１２５はＲ　＄５）を加
水分解させるが、脱脂乳及びゼラテンを加水分解させず
、硝酸塩を亜硝酸塩に還元させることもせず、又織維質
を加水分解させなかった。又、これらの閑株は２０〜８
０゜Ｃで増グ１＾し、特に２５〜３０゛Ｃで増殖が旺盛
であり、好気性で、チロシン寒天（ＩＳＰＮＯ．７）　
　トでメラニン色素を生成した。

上述のように、本発明のストレブトマイセスｓｐ．Ｙ−
１２５は、培養学的、形態学的及び生理学的特性を公知
の類似種の特性と比較すると、公知の神と種々の点で異
なるので、これを新規な菌株に分離した（参照：ハーゲ
イス・マニュアル・オブ・ディターミネイテブ・ハクテ
リオロジー」第２巻、第１３８３〜１４Ｉ８頁（１９８
６）　）。

本発明の新菌株であるストレプトマイセスｓｐ．Ｙ１２
５が生産するアミラーゼ阻害物質は多１５Ｍとアミノ酸
とから構成される物質で、その活性は１２．００ＯＡ１
１１／ＩＯｇで非常に高＜、１２０分間加熱しても阻害
特性には全く影響が認められなかった。

アミラーゼ阻害物質ｌ単位（ＩＡＩＵ）はアミラーゼの
単位が５０％阻害された時の阻害物質の量と定義し、ア
ミラーゼ１単位は！分間に〜粉から１μ門のグルコース
が生成する時の酵素量と定義し、生成するグルコースは
３．５−ジニトロサリチル酸で還元糖を測定し、マルト
ースで標準曲線を求めた 又、本発明のアミラーゼ阻害物質の活性は次の方法で測
定した。すなわち、５ＩＩＩＭの塩化カルシウムを含む
１００ｍ一　トリス塩酸緩衝？ａ．（ｐｌ！７．０　）
中に２ＸＩＯ−’％のアミラーゼ｝容液（１０　〜２Ｏ
ＡＩＩＩ／ｄ）　０．５ｙｍｌを溶解し、これに０．５
　ｄの阻害物質溶液（０〜３００　μｇ）又は培養液を
加え、混合した後にこれを３７゜ＣでＩＯ分間反應させ
、次いで１００ｍＭ　　トリス塩酸緩ｄｉ／容液中６こ
〆容解した１．５％の可ｊ容性耐ゎ）｝容液２ｄを添力
牝、１０分間反應させる。次いで、２　ｍｌの３、５−
ジニトロサリチル酸を加え、５分間加熱後充分に冷却し
、蒸留水で１０倍稀釈し、しがる後に５４６ｎ＋＋＋で
吸光凌を測定した。なお、対照試験は阻害物質溶液の代
わりに蒸留水０．５ｍｌ！を加えた点を除いて上述と同
一の方法で実施し、空試験はアミラーゼ溶液の代わりに
ｌｏｍＭトリス塩酸１Ｎ！　ｉＪｉ　／＆（ｐｌｌ７．
０　）　０．５　ｍｌを加え、阻害物質溶液の代わりに
芸留水０．５ｍｌを加えた点を除いて」−述と同−の方
法で実施した。吸光度の測定値から次式に基づいて１ｍ
害率（％）を求めた 上式においてＴ，　　Ｃ及びＢはそれぞれ阻害物質の試
験、対照試験及び空試験のそれぞれで得られた吸光度を
示す。

本発明のアミラーゼ阻害物質はｐｌ１に対する安定性が
掻めて高く、ｐＨ２．０ないし１２．０の範囲において
安定であり、従って分解過程においてその活性が低下す
ることはない。

本発明のアミラーゼ阻害物質は、セファテクス（Ｓｅｐ
ｈａｄｅｘ）　Ｇ　−２５　（商品名）で測定した分子
量が７００〜１５００であり、分子量が比較的低いにも
かかわらずアミラーゼ、マルターゼ、及び１ナノヵラー
ゼに対して充分な阻害効果を示し、特に唾液アミラーゼ
に対するよりも膵臓アミラーゼに対する阻害効果が一層
優れていることが分った。

以下に、本発明の新菌株であるストレプトマイセスＳρ
，Ｙ−１２５の培養方法及びその培養物からアラーゼ阻
害物質を分離する方法を詳述する。

（１）菌株の培養 酵母抽出物、脱脂大ヴ、ペプトンのような窒素源、可溶
性澱粉、グルコースのような炭素源、及び塩化ナトリウ
ムのような無機塩を含有する培地に希薄塩酸水溶；夜を
加えてそのｐＨを６．０〜７．０に調節し、１２１’Ｃ
で１５分間殺菌した後に、菌を接種して好気性条件下に
２５〜３０゜Ｃで２〜４日間培養を行った。

次の表３には種々の炭素源（ａ度１％）に対する阻害物
質の活性を示す。表４には窒素源に対する阻害物質の活
性を示す。表３及び表４から分るように、炭素源が可溶
性澱粉で、窒素源が酵母抽出物とポリペブトン（ｐｏｌ
ｙｐｅｐｔｏｎｅ　）の混合物である場合に活性は最も
高かった。

此の際、消泡剤を使用することもでき、消泡剤は一般的
に過度の泡を防止するのに有用である。

シリコーン消泡剤のように昔通に使用される消泡剤を使
用した。

３　；″ に　するストレプトマイセスｓ　．Ｙ−１２５の４：゛
１ に　するストレプトマイセスｓ　．Ｙ−１２５の（注）
表３の試験において、基本培地の組成は肉汁０．５％、
ポリペプトン０．５％、塩化ナトリウム０３％ごあり、
培地のｐｌ＋は７．０であった。

（注）表４の試験において、基本培地の組成は可溶性澱
粉１％、塩化ナトリウム０．３％、硫酸マグネシウム０
．０５％、燐酸カルシウム０．１％、硫酸銅ｏ．ｏｏｔ
％であり、培地のｐＨは７．０であった。

（２）アミラーゼ阻害物質の分離 菌株培養物から培養液と菌体とを分離する工程は遠心分
離法またはセライト（ＣｅｌＨｅ、商品名）のような゜
濾過助剤を使用する濾過法等のような従来方法で行うこ
とができる。このようにして分離された培養液からアミ
ラーゼ阻害物質を分離する工程は、従来方法、すなわち
培養液の凍結乾燥、塩析、又は有機溶媒による沈澱、吸
着等のような方法、ならびにイオン交換樹脂による吸着
、ゲルｉｌｌ過のような方法を使用して行うことができ
る。

以下にこれらの方法を一層具体的に説明する。

イ）菌株培養地を遠心分ｆｌｉｔｆ　（３０，ＯＯＯ〜
４０，ＯＯＯｒｐｍ　）し゜ζ菌体と培養液とを分離し
た後に、培養液を５０〜７０′Ｃにおいて減圧（１０　
〜５０ｍｌｌｇ）下に１／５　〜１／１０に濃縮ずる。

次いで沈澱物をＪ別する。得られた濃縮液は所要に応じ
て凍結乾燥させる。

口）遠心分離された培養液または濃縮液に有機溶媒とし
てメタノール、アセトンのような親水性溶媒を加えて阻
害物質を沈澱させる。不純物は低濃度において沈澱し、
濃度６０〜７０％程度の場合に不純物の除去が容易であ
る。

ハ）硫酸アンモニウムまたは塩化ナトリウムのような塩
類を使用して沈澱物を沈澱分離する。沈澱物は遠心分離
又は有機溶媒で直接洗浄して透析、乾燥させる。

二）イオン交換樹脂による吸着；この方法はアミラーゼ
阻害物質が極性を有している場合に、この物質を分離す
るに最も適当な方法であって、イオン強度の変化または
ｐｌ＋の変化によって溶出さー『、分子量の大きさを利
用したゲル濾過によってアミラーゼ阻害物質を分ｎ１す
る。

上述のような分離方法のほかに、熱変成による不純物の
沈澱、分子量による分子膜の透過１勺、限外濾過等を利
用することも出来る。

（実ｊＦｉ例冫 次に本発明を実施例について説明する。

丈施例」一 ２Ｎしんとうフラスコに０．１　％の可溶性澱粉、１％
のグルコース、０．５％の肉汁、０．５％のペブトン、
及び０．３％の塩化ナｉ・リウムを含有ずるｐｌｌ７．
０の培地４００　ｍｌを入れ、１２１　’Ｃで１５分間
殺菌したｔｋに、予め培養しておいたストレプトマイセ
スｓｐ．Ｙ−１２５菌液２０ｍ１を接種し、２８゜Ｃで
４日間培養した。

培養後に、この培養液を遠心分離により菌体と培養液と
に分離し、得られた１５ＡＩＵ／ｄである培養冫夜２１
０ｒｎＲを４０〜６０゜Ｃにおいて減圧（１０〜５０＋
ｎａ＋ｌＩｇ　）■に濃縮して３Ｍの濃縮液を得た。こ
の濃縮液に９０％エタノールを加え、生成した沈澱を遠
心分離し、次いでこの濃縮液を蒸留水に溶解し、しかる
徐ニ３６時間凍結乾燥Ｌテ２　Ｘ１０’ＡＩｕ／ｇテア
ル０．０７ｇのアミラーゼ阻害物質を得た。

災施斑Ｉ ２ｉしんとうフラスコ５個に、１％の可溶性澱粉、０．
５％のペプトン、０．５％の肉汁、及び０．３％の塩化
ナトリウムを含有するｐｌ＋７．０の培地をそれぞれ４
００　ｄづつ入れ、１２１゜Ｃで１５分間殺菌した後に
、予め培養しておいたストレブトマイセスｓｐＹ−１２
５菌液をそれぞれ２Ｏｄづつ接種し、２８゜Ｃで４日間
培養した。

？いで、この培養物を遠心分離により菌体と培養冫夜と
に分離して８５ＡｌｌＩ＃＋４！である培養冫夜１５０
０ｍｌを得、この培養液を５０〜６０’Ｃにおいて減圧
下に１５０戒まで濃縮し、濾過して不純物沈澱を除去し
、しかる後に６０％エタノールで処理し、生成した沈Ｒ
を濾過して除去し、濾液を濃縮した。この（農縮物を２
４時間凍結乾燥して３×１０″−ＡＩｌｌ／εである６
．４ｇのアミラーゼ阻害物質を得た。

尖籐桝３− ２ｆＬんとうフラスコ１０個を使用し、実施例２と同様
にして培養を行って培養液３００Ｍを得た。

この培養液を６０〜７０’Ｃにおいて減圧下に１／１ｏ
に■箕縮し、次いで９０％エタノールで処理し、生成し
た沈澱を濾過して除去し、ｄｖ液を再度濃縮し、生成し
た濃縮物を茎留水に溶解し、しかる後に２４時間凍結乾
燥して４．７　ＸＩＯ″’　Ａ　Ｉ　ＩＩ　／　ｇ−Ｃ
ある１０．２　ｇ　（７）　−７　ミラーゼ阻害物質を
得た。

実施七１− ２ｌしんとうフラスニ２５個に、２％の可溶性澱粉、０
．５％のポリペプトノ、０．５％の肉汁、及び０３％の
塩化ナトリウムを含有するＰＨ７．０の培地をそれぞれ
４００ｄづつ入れ、これを１２１゜Ｃで１５分間殺菌し
た後に、予め培養しておいたストレプトマイセスｓｐ．
Ｙ−１２５菌液を２０ｄづつ接種し、２８゜Ｃで３日間
培養し、しかる後にこの培養物を遠心分離により閑体と
培養液とに分離した。

このようにしてｉ辱だ２１８　ＡＩ［Ｉ／＋ｄの培養冫
＆ｌ５５０ｄを６０〜７０゜Ｃにおいて減圧下に１／１
０まで濃縮し、濾過して不純物沈澱を除去し、次いでこ
の濃縮液を９０％メタノールで処理し、生成した沈澱を
再度濾過して除去し、しかる後に濾液を濃縮して濃縮物
を得た。この濃縮物を蒸留水に溶解し、３６時間凍結乾
燥した結果、５．５　Ｘ　１０ＳＡＩＵ／ｇである８．
２ｇのアミラーゼ阻害物質を得た。

実施ｐトβ ２ｐ！シんとうフラスコ５個に、ｌ％のとうもろごし澱
粉、０．５％のポリペプトン、０．５％の肉汁、０３％
の塩化ナトリウムを含有するｐｌ＋７．０の培地をそれ
ぞれ４００　ｍｌづつ入れ、これを１２１゜Ｃで１５分
間殺菌した後に、予め培養しておいたストレブトマイセ
スｓｐ．Ｙ−１２５菌液２０ｍ１をそれぞれ接種し、２
８゜Ｃで４日間培養した。

次いで、この培養液を遠心分離により菌体と培養液とに
分離して１８６＾ＩＵ／ｒｄである培養液１６００ｄを
得、この培養液を１／１０まで濃縮し、沈澱を２ｌｔ遇
して除去した。次いで濃縮液に９０％エタノールを加え
て処理し、生成した沈澱を再度濾別し、しかる後にｉｌ
ｌ液を′ａ縮して濃縮物を得た。この濃縮物を蒸留水に
溶解し、４２時間凍結乾燥した結果、５Ｘ　１０’ＡＩ
Ｕ／ｇである９，８ｇのアミラーゼ阻害物質を得た。

実ＪｆＬ付−６ １％のとうもろこし澱粉を含有する培地を使用した点を
除いて実施例５と同一の条件で培養した結果、培養液は
２２Ｑ＾ＩＩＪ／ｄであり、このようにしてアミラーゼ
阻害物質を１２．０ｇ　（５．８　Ｘ１０’ＡＩＵ／ｇ
）得た。

凋ＩＷ工 ２１しんとうフラスコ５個に、２．５％の可溶性澱粉、
０．５％のポリベブトン、０．５％の酵母エキヌ、及び
０３％の塩化ナトリウムを含有し、ｐ｝１６．ＯＣこ調
節した培地をそれぞれ４００ｍＲづつ入れ、これを１２
１　゜Ｃで１５分間殺菌した後に、予め培養しておいた
ストレプトマイセスＳρ．Ｙ−１２５菌液を２Ｍづつ接
種し、２８゛Ｃで３［１間培養した。

次いで、この培養物を遠心分離により菌体と培谷液とに
分離して２７５０ＡＩＬＩ／＋ｆである培養液１５５Ｍ
を得た。この培養液を６０〜７０゜Ｃにおいて減圧下に
濃縮して濃縮液２００　ｍｌを得、これを濾過して不純
物沈澱を除去した後に９０％エタノールで処理し、ノｔ
成した沈澱を濾過して除去し、ｉ！ｉ液を濃縮した。

濃縮物を２４時間凍結乾燥した結果、７０Ｘ１０″′＾
ＩＵ／ｇである阻害物質を得た。この阻害物質を再度蒸
留水Ｑこ溶解したｅｔこ、セファデノクスＧ−１０カラ
ム（１．８　Ｘ３０（ｍ）を使用してゲル濾過を行った
。この際、〆容出にはｌ水を使用し、活性を有する部分
のみを隼めて凍結乾燥した結果、２、Ｉ　ＸＩＯ３ＡＩ
Ｕ／・Ω号ごあるアミラーゼ阻害物質０．８ｇを得た。

丈化例−（３ ２ｎＬんとうフラスコ１０個を使用し、実施例７と同様
にして培養を行って３０００ＡＩＬＩ／ｉｆである３０
００ｍｌの培養液を得た。

次いで、この培養液を３００雁まで濃縮し、次いで９０
％エタノールで処理し、．生成した沈澱を濾過して除去
し、濾液を濃縮して濃縮物を得た。この濃縮物を再度蒸
留水に溶解し、しかる後に２４時間凍結乾燥して７．１
　ＸＩＯ’へ１０／ｇである阻害物質１５．５ｇを得た
。これを再度蒸留水に溶解し、セファデンクス（，−１
０カラム（２．１×３０ｃｏ＋）に通してゲル濾過を行
い、活性を有する部分のみを集めて凍結乾燥した結果、
２７００ＡＩＵ／■であるアミラーゼ阻害物質１．０２
ｇを得た。

月１舛Ｊ 消泡剤として０．１　％のシリコーンＡ（シグマ社製、
商品名）を添加した点を除いて実飾例日と同様にして培
養を行った結果、７．３　Ｘ　１０’ＡＩＩＩ／ｇであ
る阻害物質１６．４ｇを得た。さらにセファデックスＧ
−１０カラム（２．　Ｉ　Ｘ　３０ｃｍ　）を使用し、
実施例８と同様にして３１００ＡＩＵ／■であるアミラ
ーゼ阻害物質１．２　ｇを得た。

ｎ件刊 ２Ｎしんとうフラスコ１０個に２，５％の可溶性澱粉、
０．５％のポリベプトン、０．５％の酵母抽出物、０．
３％の塩化ナトリウム、及び０．０５％の消泡剤を含有
し、ｐｕｅ．ｏに調節した培地を４００ｍｌづつ入れ、
これを１２１゜Ｃで１５分間殺菌した後に予め培養して
おいた菌液を２０−づつ接種し、２８゜Ｃで３日間培養
して得た培養物を遠心分離して５２５０ＡＩＵ／ａβの
培養液３０００ｄを得た。

この培養液を６０〜７０゜Ｃにおいて減圧（１０〜５〇
一Ｈｇ）下に１／１０まで濃縮し、ｉＩ＃過して不純物
を除去し、これを９０％エタノールで処理し、生成した
沈澱を濾過して除去し、濾液をエタノールが完全に除去
されるまで濃縮した。

次いで、濃縮液を凍結乾燥して７．５　Ｘ　１０５ＡＩ
ＩＩ／ｇであるアミラーゼ阻害物質を得てた。これをセ
ファデンクスＧ−ｔｏカラム（１．８　Ｘ４０ｃ＋ａ）
に通してゲル濾過した結果、３３００ＡＩｔｌ／ｍｇで
あるアミラーゼ阻害物質１．７０ｇを得た。得られた阻
害物質１．７０ｇをセファデソクスＧ−２５カラム（２
．６　Ｘ６０ｃｍ）を通してゲル濾過した結果、１５２
００ＡＩＵ／　ｍｇの阻害物質３５０　ｌａｇを得た。

ｉ博１やＪゴＬｉ！Ｌ性 実施例１０で得たアミラーゼ阻害物質を使用して動物実
験を実施した。使用した動物は１７〜２０ｇのマウスで
、５匹を一群にして過血零ノ１症を誘発させ、これらの
マウスについて５，ｌ５及び３０分の間Ｍで血糖量の変
化を測定した。過血糖症を誘発させるには、２．５ｇの
澱粉又はマルトースを２．５　ｇ／ｋｇマウスの用量で
経口投与するか、あるいは５．０　ｇ／ｋｇマウスのサ
ノ力ロースを経口投［テした。血糖量の測定はグルコー
スオキノターゼを使用して行った。

ｌ　アミー−ゼに文・レし汰果 ３　サ，カー−ゼに　する・・ 洟オＬ欠狡 実施例１０で得たアミラーゼ阻害物質を使用して毒性実
験を行った。使用した動物は１７〜２０＋＋のマウスで
、５匹を一群にしてアミラーゼ阻害物質を３，　０００
〜３，０００，ＯＯＯＡＩＵ／ｋｇマウスの用噴で使用
した。観察の結果、死亡したマウスは認められず、また
特別な症状も見い出されなかった。

体洩』己切ζ個−：［ケ試−験 実施例１０で得たアミラーゼ阻害物質を濃度別にマウス
の飼料に混合して投与した後にマウスの体重の変化を測
定した。使用したマウスの体重は１７〜２０ｇで、５匹
を−群にして約６０日間体重の変化を観察した結果、ア
ミラーゼ阻害物質が３，ＯＯＯＡＩＵ／ｇの場合には４
２［ｊ後に少しづつ体重の減少が認められ、アミラーゼ
阻害物質が９．　ＯＯＯＡＩＵ／ｇの場合には２１［ｌ
後に体重の減少が認められた。

次の表５にマウスの体重の減少（％）を示す。

実施例１０で得たアミラーゼ阻害物質は次の特性を示し
た。

■）分了Ｙ アミラーゼ阻害物質の分子量を測定するために、アミラ
ーゼ阻害物質をセファデンクスＧ−２５カラムを使用し
てゲル濾過し、薄層クロマトグラフィ一により展開させ
た結果、分子量は７００〜１５００であることが分った
。この際、展開溶媒としてエチルアセテート：メタノー
ル：水−２７　：　１５　：　２３の混合物を使用した
。

２）　ｐｉ安定性 ρ１１２〜１２までの溶液にアミラーゼ阻害物質を加え
、３７゜Ｃで３０分間反應させた後に、人体の唾液アミ
ラーゼに対する活性を測定した。この結果、酸性、中性
、及び塩基性のいずれにおいても安定であった（第１図
参照）。

３）熱安定性 ｐＨ７．０の中性溶液に１％のアミラーゼ阻害物質を添
加し、１００゜Ｃで３０〜１２０分加熱した後に冷却し
、人体の唾液アミラーゼに対する活性を測定した。この
結果、３０分加熱の時は全く安定であり、１２０分加熱
の時でも８５％の活性を示した（第２図参照）。

４）他のアミラーゼに対する阻害効果 ヒトの唾液アミラーゼのほかに細菌、かび等の微生物が
生産するアミラーゼに対しても阻害特性を試験した結果
、次の表６に示すように微生物アミラーゼＱこ対しては
５０％未満の阻害度を示したが、豚の膵臓アミラーゼ、
ヒトの唾液のアミラーゼ等の動物アミラーゼに対しては
９０％以−トの顕著な阻害効果を示した。

次の表７に示すように、エルソン−モルガン反應に対し
て陽性である点のほか、赤外線吸収スペクトルがオリゴ
Ｉ．！　類の吸収波長における特性と類｛以している点
においてもマルトペントース（ｍａｌｔｏｐｅｎ　Ｌｏ
ｓｅ　）と類偵であった（第３図参照）。また、還元ｔ
１！測定値は塩酸による加水分解後に顕著に増大するこ
とが分った。

一Ｆ述の結果から、本発明のアミラーゼ阻害物質は３〜
６個の塘化合物から構成され、純粋な糖ではな《、ヘテ
ロオリゴｔＪ！（ｈｅｔｅｒｏｏｌｉｇｏａｃｃｈａｒ
ｉｄｅ）であることが分る。また、本発明のアミラーゼ
阻害物質は糖とアミノ酸とが結合した形態のものである
と思われる。又、水のみに可溶性であり、メタノール、
エタノール等には不溶性である。

（ｌ土）土・＝０〜５０％阻害 ー９０％以−Ｌ阻害 ５）アミラーゼ阻害物質の化学的特性 本発明のアミラーゼ阻害物質の化′？的特性は、：アミ
ー−ゼ 第１図 ６０　　　’？０ １度Ｃ’Ｃ）

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明のアミラーゼ阻害物質の一例の安定性を
示すグラフ、 第２図は本発明のアミラーゼ阻害物質の−例の熱安定性
を示すグラフ、 第３図は本発明のアミラーゼ阻害物質の一例の赤外スペ
クトルを示す図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、アミラーゼ阻害物質生産能を有することを特徴とす
   るストレプトマイセスｓｐ．Ｙ−１２５（ＫＣＴＣ８３
   ８７Ｐ、ＡＴＣＣ５３８９０）。 ２、ストレプトマイセスｓｐ．Ｙ−１２５（ＫＣＴＣ８
   ３８７Ｐ、ＡＴＣＣ５３８９０）菌株の培養物から分離
   されたものであることを特徴とするアミラーゼ阻害物質
   。 ３、ストレプトマイセスｓｐ．Ｙ−１２５（ＫＣＴＣ８
   ３８７Ｐ、ＡＴＣＣ５３８９０）の菌株を培養し、その
   培養物からアミラーゼ阻害物質を分離することを特徴と
   するアミラーゼ阻害物質の製造方法。 ４、ストレプトマイセスｓｐ．Ｙ−１２５（ＫＣＴＣ８
   ３８７Ｐ、ＡＴＣＣ５３８９０）菌株が生産するアミラ
   ーゼ阻害物質を活性成分とし、これに薬学的に許容可能
   な担体又は希釈剤を含有させたことを特徴とする肥満症
   、糖尿病、胃炎、過脂肪症、胃潰瘍、十二指腸潰瘍の予
   防及び治療剤。 ５、ストレプトマイセスｓｐ．Ｙ−１２５（ＫＣＴＣ８
   ３８７Ｐ、ＡＴＣＣ５３８９０）菌株が生産するアミラ
   ーゼ阻害物質を主成分とすることを特徴とする食品添加
   物。 ６、分子量が７００〜１５００であり、ｐＨ２〜１２に
   おいて安定である請求項２記載のアミラーゼ阻害物質。 ７、活性が１２，０００ＡＩＵ／ｍｇ以上である請求項
   ２記載のアミラーゼ阻害物質。 ８、微生物アミラーゼに対しては５０％未満の阻害効果
   を示し、動物アミラーゼに対しては９０％以上の特異的
   な阻害効果を示す請求項２記載のアミラーゼ阻害物質。