JPH01501202A

JPH01501202A - ３―アシロキシ―ビシクロ〔３．３．０〕オクタン―７―オン―２―カルボン酸エステルの立体特異性の酵素または微生物的アシレート加水分解によるラセミ分割

Info

Publication number: JPH01501202A
Application number: JP62506737A
Authority: JP
Inventors: ペツツオルト，カール; ダール，ヘルムート; スクバラ，ヴエルナー
Original assignee: シエーリング　アクチエンゲゼルシヤフト
Priority date: 1986-11-13
Filing date: 1987-11-12
Publication date: 1989-04-27
Anticipated expiration: 2013-04-02
Also published as: EP0271432A2; HU202596B; CA1301100C; NO883109D0; NO172903C; JP2786437B2; IE873046L; HUT47157A; FI92499C; NO883109L; ZA878542B; FI92499B; BG48099A3; US4894336A; JP2736066B2; RU1788968C; WO1988003567A1; EP0271432A3; FI883316A0; AU613328B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】６−７シロキシービシクロ［３，３，０）オクタン−７−オン−２−カルボン版エステルの立体特異性の＃素またに仮住物的アシレート加水分％ｆ−よるラセミ分割不発明は、ラセミ坏の３−７シロキシービシクロ１：３．３．０）オクタン−７ −オン−２−カルボ／ばエステル金り＃素または仮住Ｖ＝使用し光学的に活性な６−アルコールに豆体籍Ａ注７シレートｍ水分解する万＠ＶＣ関する。

殊にこの方法に、式（＋ノー１＝レンとしてのＸを有する２績合注の２１１ｉ：　−０−Ｘ−０−ｔ−表わし、またはＲ１およびＲ２のそれ−ｅｔ″Ｌが、Ｃ原子数１〜７を有する直鎖−または分ＶｃｗＡベアルキルとしてのＲｓ　ｋ有する基：　ＯＲ５’ｊｊ表わし、かつＲ３が、水素原子、Ｃ原子数１〜７を有する直鎖−または分伏頗仏アルキル、Ｃ原子数６〜６を有するシクロアルキル、７エ二ルまたはＣＭ子十数〜１０を有するフルアルキルとしてのＺを有する基：　ｃｏｏｚを表わし、またはＲ，、が、１〜４の価のｎおよび、Ｃ原子数１〜７を有する直鎖−または分枝鎮状フルキル、Ｃ原子数３〜６を有するシクロアルキル、フェニルまたはＣ原子数７〜１０を有するフルフルキルとしてのＲａｆｆ１Ｗする基ニー　（ＣＨ２）ｎ−０−ＣＯＲ４ｋ　Ｒわす〕の光学活性の（＋）−ビシクロ［３，３，０）オクタツール誘導体を製造するのに適当で６る− この方法は、式（七−Ｉ：〔式中、Ｒ１，Ｒ，＃　ＲＢおよび穐は前述のものを表わす〕のラセミ体の６α −アシロキシ−シス−ビシクロＣ５゜３．０〕オクタン誘導体に、酵素的または微生物学的に立体特異性のアシレート加水分ｓを施こし、かつ生じる（十）−ビシクロ（３，３，０〕オクタツ一ル誘導体（＋）−Ｉを式（−）−１の不鹸化のビシクロ（３，３゜０〕オクタツール−アシレートと分離するか、または不鹸化のエナンチオマーＣ＋）　−ＩＩを鹸化せるビシクロ［３，３，０）オクタツール誘導体Ｃ−）　−Ｉ七分離し、かつ引αき化学的なアシレート加水分屏全厖こすことを特徴とする。

従って、ＸがＣ原子数１〜７τ有する直鎖または分枝鎖状アルキレン基を辰わす揚台、以下の基が挙げられるニー（ＣＨｚ）ｎ−１但しｎ＝１−７（メチレン、エチレン、トリー、テトラ−、ペンタ−、ヘキサ−およびヘプタメチレン）、− Ｃ（ＣＨ３）ｇ−１−ＣＨ（ＣＨｓ）−１−ＣＨ（ＣＨ３）〜ＣＨ２−１−Ｃ（ＣＨｓＪ２−ＣＨ２−１−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３Ｉ−１ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）２、−ＣＨ，−ＣＨ（ＣＨ３Ｉ）−ＣＨ２−１−ｃａ、−ｃ（ａ（３）、−ＣＨ２ −１−ＣＨ−（０２Ｈ６）−１−Ｃ（Ｃ２Ｈ５）２−１−ＣＨ（Ｃ，Ｈ，）−ＣＨ２〜、二Ｃ（ＣｚＨｓ）ｚ−ＣＨｇ−、−ＣＨ，−ＣＨ（Ｃ２Ｈ，）−、−ＣＨａ−Ｃ（ＣｇＨａ）ｚ−１−ＣＨ，−ＣＨ（Ｃ，Ｒ５）−ＣＨ，−１−ＣＨ２ −Ｃ（Ｃ，Ｈ，）２−ＣＨ２−等。

Ｃ原子数１〜７を有する直鎖ま′ｆｃは分枝鎖状アルキル基としてのＺ、Ｒ４およびＲ５は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イノエチル、Ｍ２ブチル、第６デチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、第２ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、イノヘキシル、ｎ−へエチル、イソへエチルを表わす。

Ｃ原子数７〜１０を有するアルアルキル基としての２ないしはＲ４は以下の基を包含する：　−ｃＨ，−ｃ６Ｈ，、−ｃＨ２−ｃａ、−ｃ、ａ、、、−ＣＨ２− ＣＨ２−ＣＨ，−Ｃ，Ｈ，、Ｃ３ＨフＣＨ３ＣＨ３Ｃ原子数３〜６を有するジクロフルキル基としての２ないしばＲ４は以下の基を包含するニジクロプロピル、シフΩブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルＯ光学活性の６ａ−カルバーゾロスタサイクリンおよび殊にこｎ工９誘導されｆｃ若干の化合物は、天然のプロスタサイクリン（ＰＧ工２）の女定な類縁体として大きい治療幼釆を有する［　Ｒ，Ｃ，ニコルソン（Ｎｌｋｏｌ日ｏｎ）、Ｍ、　Ｈ，タウ７　（ＴＯＷｎ　）、Ｈ，７オルプリユツグン（Ｖｏｒｂｒｕｅｇｇｅｎ　）　：プロスタサイクリンーアナログス（Ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ−Ａｎａｌｏｇｓ　）、メディカル・リサーチ・レビュース（Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　）、第５巻、第１号、１〜５６頁（１９８５年）〕。この新たな展望に示さルた会或は長時間かがり、かつ部分的にラセミ体のカルバサイクリンを生じるにすき゛ない。殊に費用ｏかかるのは、カルバサイクリンが天然（ＤＰＧ工２に相応する絶対配置で生じる合成である。このことは、容易に入手可能な適当な出発物質が昇カイラルすでに多数の合成が、元字活江１７ α−ヒドロキシ−６β−ヒドロキシメチル−２−オキサ−ビシクロ（３，３，０）オクタン−３−オン誘導体から出発する。夾＠にそｎにより、光学右性導入の難点が解決さｎる。しかしながら、さらに別状く多工程の合成列が、２−オキサ官能基【メチレン基によりｔＲし、長当クカルバサイクリン類縁体に七ａ（Ｊれ代表的なａ−およびω連鎖の組込みに適当である６α−ヒドロキシ−２β−ヒドロキシメチル−ビシクロ［３，３，０）オクタン−７−オンの誘導体を得るため１（夾抛さｎなけｎばならない。

最近の刊行物ｉｃｄ、光学活性カルバサイクリンを合成するためシス−ビシクロ（３，３，０）オクタン−３，７−シオン誘導体の使用が記載さｎでいる。小島等（Ｋｏｊｉｍａ　ａｔ　ａｍ、）　ＫよりケＡ・７フームーブル（Ｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍ、　Ｂｕｌｌ、　）第６６巻、２６８８頁（１９８５年）に記載さｎた方法は、ラセミ体７，７−エチレンジオキシ−３α−ヒドロキシ−シス−ビシクロＣ５゜３．０）オクタン−２−カルボン酸のシアステレオマ−塩の分離を包含する。

さらにまたこの方法は、３−オキシグルタルエステルから出発しカルバサイクリン類縁体の出発＊’Ｊｔｔ−優るため、７つの反応工程を必要とする。さらに、不安定なβ−ケ）［中間工８を通る。

さらに、前記せるよりな光字活狂のカルバサイクリン類縁体の＃道には、簡単な装造？ｃ、？１：容する会成法が知らルていない。

＃素として、本発明による方法にとくに適当なのが、アルカリｒネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｓ　）からのリパーゼ−ＰＩ。

〔名ｍ産業社（Ｆａ、　Ｍｅｉｔｏ　Ｓａｎｇｙｏ　）　〕カンジダ・シリンドラセア（Ｃａｎｄｉａａ　ｃｙｌｉｎａｒａｃｅａ　）からのリパーゼーガ〔名糖産業社〕リゾプス＠　（Ｒｈ１ｚｏｐｕθ）からのリパーゼ１サイケン”（５ａｉｋｅｎ　）　（長瀬仕（Ｅ’ａ、　Ｎａｇａｓｅ　）　］リパ〜ゼ１スクレロチニア’ 　（５ｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ　）　（長瀬社〕牛膵誠からｃｏａ−キモトリグシ／（α−Ｃｈｙｍｏｔｒｙｐａｉｎ）〔ケミカル・ダイナミックス・コーポレーション社（Ｐａ、　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｄｙｎａｍｉｃｓ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　）　〕アルカラーゼＴ〔ノボ・インダストリ７ズ社（Ｐａ。

Ｎｏｖｏ　Ｚｎｄｕｇｔｒｉａｓ　ン　〕豚肝臓からのエステラーゼ〔ベーリンガー・マンノ１イム社（Ｐａ、　Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ　）　〕牛＃縁からのリパーゼ〔ケミカル・ダイナミックス・コーポレーション社〕り）その場合こｎｒ：）＃累が、溶解、懸濁されるかまたは、例えばＢｒＣＮ活性化セファロースまたはオキシランアクリル粒状物に定着さｎた形で、もしくは仕入の他の定着さｎた形で使用さｎることができる。

仮住讐として、本発明による方法にとくに適当なのが、アルカリダンス６フルシヤリ（Ａｌｃａｌｉｇｅｎａ　ｍｒａｈａｌｌｉ）人ＴＣＣ２１０３０ムコール−ｏウキシ（Ｍｕｃｏｒ　ｒｏｕｘ工ｉ　）　ＡＴＣＣ８０９７コリネバクテリウムーｊＣクイ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｅｑｕｉ）ＡＴＣＣ２１１（：＋７トリコデルマ・コニンギ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｋｏｎｉｎｇｉ　）ＣＢＳ８５０６８７ラボノバクテリウム・ル／テセンス（Ｆｌａｖｏｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｌｕｔｅｇｃｅｎＪ　）工Ｆ’０　３０８５アルカリゲネス・バラドクスス（Ａｌｃａｌｉｇｓｎｅｓｐａｒａｄｏｘｕａ　）　ＡＴＣＣ１７７１３でろる。

しかしまた、微生物から単離された＃累が溶解せるかまたは定着された形で使用さルてもよ一〇本発明による方法により装造可能な式：　（＋）−１の光学活性ビシクロオクタン誘導体は、薬理学的に有効なプロスタブイクリ／誘導体を合成するのに有用な中間生成物である。立体香典性加水分解性の多数の酵素力、式＝（±）−Ｉの２セミ体３α−アシロキシーシス応する式：（＋）−１０元光学活性ルコールに鹸化する。

このことは、分光および光学的特性を、光学活性カルバサイクリン類縁体合成の中間工程から常法によｐ製造さルることのできる比較物質と比奴することにより明白である。こうして得られた生成＊は、不電化の１擬性の”エナンチオマー（ −）−１を分層した後、直接に、天然のプロスタサイクリアＰＧ工２に相応する類一体の合成に使用さｎることができる。

しかしながら、例えばα−キモトリゾシンまたはアルカラーゼＴのよりな砿生吻お工び酵素も挙げられ、これらはラセミ化合１仕）−塁０２つの成分のうち、＠擬性の”非天然形立体配置のエナンチオマーを（−）−■に鹸化する。この場合、残任せる不電化のエナンチオマー（＋）−１が３工２類縁体であるカルバサイクリンの合成に使用される。

他の場合、本発明による方法は、一般に＃累による反応ないしは微生物による変換で通用さｎかつ実施例から明白でおる一般に公知の操作条件によジ作業する。

酵素または微生物による変換の経過が、連続的に採取されるサンダルを分析することによシ追跡される。分析法として、ＨＬＰＣま７’Ｃは薄層りａマドグラフ超速分析〔メルク社／ダルムシュタット在（Ｐａ、　Ｍθｒｃｋ　／Ｄａｒｍｓ　ｔａｄｔ　）の７リカグル板、エーテルによる展開、値数／エタノールによる膚色〕が適当でめる。

使用せるラセミ基質の５０チが反応したＦ！Ａに、反応を中止しかつバッチを処理する。

殊に、本発明による＃素条たぼぼ生物にＬる立体特異性アシレート鹸化が、以下のラセミ体プロスタ丈イクリン中間工程のアシレート鹸化に、４当である：０ＣＯＣＨ３０ＣＯＣＨ，０ＣＯＣ６Ｈ。

本発明による方法によ夕袈達された式：　（＋）−ＩＱ光学活注５α−ヒドロキシ化＠−物から、薬学的に有効なプロスタサイクリンが装造さｎることがでさる。例えば、Ｃ十）−Ｉから出発し有力′４！Ｊ質でるるアイロブロスト（工１ｏｐｒｏｓｔ　）　（欧州Ｉ＃許明ｉａ誉第１１５９１号に記載）が得られる。

１９８６年１１月１１日に、−株でろるムコル・ロウキシ（Ｍｕｃｏｒ　ｒｏｕｘｉｉ　）　（ＤＳＭ　５８９７　）　２よびアルカリゲネスａマルクヤリ（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｍａｒｓｈａｕｉｉ　）（ＤＳＭ３９００）がドイツチェン・デンムルング・７、ｔｙ−＜りａ　オルガニｘメｙ　（Ｄｅｕｔｓｃｈｅｎ　Ｓａｍｍｌｕｎｇｗｏｎ　Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉａｍｅｎ　）に寄託された。

出発化合物の製造ニー　−カルボン酸メチルエステル５５〜６０％水素化ナトリウム３８．３４９′ｔ−ジメチルカーボネート６１６ＩＲＪＩｌｆｌＩＣ懸濁し、室禦下に５０℃に加熱し、かつこのものに、３．３ −（２，２−ジメチルトリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ〔３゜３．０〕オクタン−７−オ７４９．３１　、Ｆのシメチルカーボ不−）　３７０７ｍ／Ｃｐ浴准のわずかなｌｔを添加する。

メタノール２ｄを龜ｍすることにより反応ｔＸ起し、こｎｉＣ残ｐの溶液を添加しかつ合釘７．５時間５０−Ｃで攪拌する。水浴中で冷却し、過剰ｔの水素化ナトリウムをメタノールで分解し、水を添加しかつ酢酸で中和する。生ｇ物をジクロルメタンで抽出し、Ｊｌｃ全中で濃縮し、かつ生成物ｔヘキサンで結晶化する。融点７２°Ｃの生成＊５３２．４４．Ｆが得らｎる。

７．７−（ゾメチル〜トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ［３，３，０）オクタン−６−オン−２−カルボン酸メチルエステル５２．０９　ｋ加熱状態でメタノール１０００ＪＩｌｊＫ溶解し、かつ−４０−Ｃに冷却する。その後に、硼水素化ナトリウム２０．９１．９　ｋ装入し、３０分攪拌し、７セトン１７１ｊＬ／ｌ−徐々に混会し、かつ引続く１時間後に酢酸で中和する。土量の溶剤を溜去した後、水およびジクロルメタンを混合し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥しかつ真空中で濃縮する。

残渣をメタノール５５０ゴ中にと９、これにナトリウムメチレー）　９．９４９を添加し、かつ１０５分４０′ＣにＭＪ熱する。水浴中で冷却し、中和しかつ前記せるよりに処理する。得らｎた粗生成ｒ４Ｉを、シリカゲルでジクロルメタン −エチルアセテート混合物ヲ使用しクロマトグラフ処理する。ｆｆｒ望の化合ｖ４７１が得らｎｌこのものはへキサンで結晶化することができかつ融点４３℃を有する。

方法Ｂ７．７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ（３，３，０）オクタン−６−オン−２−カルボン酸メチルエステル５６．６　！！ｔエチルアセテー）　３０　Ｑａｇにｍ解し、かつ二酸化白金５．１ｇを添加した後、２２°Ｃで常圧下に、水素吸収が終了するまで水素添塀する。触媒と濾別しかつ真空中で濃縮する。所望の化曾物５６．８．９が得らｎｌその純度が結晶性エステルを製造するのに十分でｂる。生成物はヘキサンから結晶化することができ、かつ融点４６℃の初結晶体４４．４　Ｎが得らｎる。

例Ａ３７．７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）オクタン−２β−カルボン酸メチルエステル−６−二号法Ｂ　Ｋよる前記実厖例で得らｎた粗生成物１００ｇをビリシン５７ゴおよび無水酢酸５７ゴ中に溶解し、かつ６時間４０′Ｃに調熱する。冷却した後、氷水と添加し、ジクロルメタンで抽出し、有愼相を２″ −ノルマル硫酸、炭識水素ナトリウム溶液および塩化す）ｌラム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で濃縮し、かり残渣をヘキサノから結晶化する。融点５４°Ｃの生成物９７．６．９が得られる。

ｂ）ベンゾエート（±）−３とドロキシエステル粗生成物５．Ｃ１をビリシン１０ゴに溶解し、ベングイルクロリド２．４７ａ７を混合し、かつ４時間２２”Ｃ１′攪拌する。その後に、徐々に氷水１００ゴに添原し、６０分攪拌しかつ結晶を吸引濾別する。乾燥しかつメタノールから再結晶することにより、融点１０２℃の生Ｊｙ：、吻５．９７．９が得らルる。

Ｃ）インプチレー）　（ｉ）　−７結晶化せるヒドロキシエステル４，２６５．９’ｔ−ジクロルメタン４０ｍ１に溶解し、トリエチルアミン４．１６１ｎｌを混合しかつ徐々にインブチリルクロリド３．１４ＪＬ／を混合する。２２°Ｃで２．５時間後に、炭酸水素ナトリウム飽和溶液４０ゴを添７ＸＩＬ％有機相を分離し、かつ２ｎ−硫酸で氷冷下ｖＣおよび水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥しかり真空中で濃縮する。粗生成物を、シリカゲルでヘキサン−エチルアセテート混合’Ｉｌｌ’ｖ便市しクロマトグラフ処理する。融点４３℃の生成物４．９１．９が得られる。

ｄ）グチレート０）−益結晶化せるヒドロキシエステル４．２６５ｊｉｆピリジンｉ　ｏｙｔ’ｃ浴屏し、無水酪酸４．９０ｄを礒辺し、かつ２００時間２２′Ｃ攪拌する。氷水を混合し、ジクロルメタンで抽出し、かつこのものを炭酸水素ナトリウム浴数で、氷冷下に２　ｎ　−ｆｉＬｅＲおよび水で佃出し、濾販ナトリウムで乾燥し、真空中で濃縮し、かクシリカグルでへΦサンーエチルアセテート混曾ｖｌＪを使用しクロマドグ、７７処理する。生ｇｖ！Ｊ５．０３．９が無色の油状物として得らＣる。

リ　ヘミサクシネート（±）一旦結晶化せるヒドロキシエステル４．２６５９　ｋビリシン１Ｑｒｒｒｌに溶解し、４−ジメチルアミノビリシン１．８３３　、？および無水コノ・り戚１．５０１に’ｔ−添加し、かつ２０時間２２℃で攪拌する。その後に氷水に入へ２ｎ− 硫酸で一＝６に酸性化し、ジクロルメタンで抽出し、塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、かつ真空中で濃縮する。残渣を炭は水素ナトリウム溶液にと夕、ジエチルエーテルで抽出し、水相を−＝３に酸性化し、ジクロルメタンで佃出し、このものｔ塩化ナトリウム溶成で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、かり真空中で濃縮する。生成物５．０４　＃が無色の油状前として得らｎる。

７．７−エチレンジオキシ−３α−ヒドロキシ−シス−ビシクロ（３，３，０）オクタン−２β−カルボン酸メチルエステル１０．０．５’を例Ａ　５　ｔｘ）の条件下に反応させ、かつ粗生成物をシリカゲルでヘキサン−エチルアセテート混合物を使用しクロマトグラフ処理する。融点５０″０の生成物１０−２８．９が得らｎる。

例Ａ５７．７−（２，２−ジメチルトリメチレンジオキシ）例Ａ２からの結晶性ヒドロキシエステル５．０　、Ｆ　’ｔ−１ｎ−苛性ンーダ溶液１７．６ｄと６０分２２℃で攪拌し、エチルアセテートで抽出し、水冷下ＩＣ７に相１２ｎ−硫酸で一＝６に酸性化し、ジクロルメタンで抽出し、塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、かつ真空中で濃縮する。逐次反応用に十分に純粋である生成物４．６６　ｇが得られる。

例Ａ６６ａ−７セトキシー７．７−　２．２−ゾメチルトリメチレンジオキシ）−シス −ビシクロ（３，３，０）例Ａ５からのオキシ戚３．１３．Ｆｔ−ピリジン１５ａに溶解し、かつ無水酢酸２．７４ｉｉＬｔを添加した後２０時間２２℃で攪拌する。こｎに氷水を添加し、３０分攬押し、ジクミルメタンで？Ａ出し、このものを水で洗＃臥硫鹸ナトリウムで乾燥し、真空中で濃縮し、かつシリカゲルでヘキサン−エチルアセテート混合ｇ＝＆Ｍしりａマドグラフ処理する。生ｇ豐３．［］　４　、Ｆが涌已油状豐として得られる。

且人Ｊ７、−　−ジメチル−１メチレンマオキシー　ａ−ヒ　０ロキシーシスービシクロ、ｔｐｐ：ｙ−−一カルボン　エ　ルエスール例Ａ５で得らｎたオキシａ１４．７８１’ｃ、アセトン５Ｑａｌ、炭酸カリウム４．９０．９および沃化エタ：ｙ　５．７２ｄとともに２８還流下ＩＣ２１ｉｌ＋熱する。冷却した後１遍し、ｒＩｔ液を真空中で［Ｍｔ、、水を混合し、ジクロルメタンで抽出し、このものを硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、かり残渣をシリカゲルでヘキサン−エチルアセテート混合物を使用し精製する。生成物３．６５．！ｉ＋が無色油状物として得られる。

例Ａ８６α−７セトキシー７．７〜（２，２−ジメチルトリメチレンジオキシン−シス −ビシクロ（，３，３，０）オクタン−２β−カルボン酸エチルエステルＣ土）　−１０ＮＡ７からＯヒドロキシエステル３．１０＆ｔ−例Ａ５ａ）の条件下に反応させ、かり粗生成物ｔシリカゲルでヘキサン−エチルアセテート混合物を使用しクロマトグラフ処理する。無色油状物としての生成物３．２０Ｉが得らｎる。

例Ａ５で得られたオキシば３−５２　ｊｉ’　ｘｓ　７七トン５０ｄ１炭戚カリウム３．５９．９およびペンシルクロリトロ、０−とともに５日還流−ＦＫ加熱し、かつ例Ａ７に記載せるよ５に処理する。Ｒ色油状物としての生成物２．０７．９が得らｎる。

例ＡＩＤ６α−アセトキシ−２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ　−シス−ビシクロ［：３．３，０）オクタン−２β−力々ボン酸ベンジルエステル（±）−１１例Ａ９かうのヒドロキシエステル１．８９１　’ｉ：例Ａ３ａ）の条件下に反応させ、かり粗生ｇ物をシリカゲルでヘキサン−エチルアセテート混合＊全使用しクロマトグラフ処理する。無色油状物としての生成物１．７８ｙが得らｎる。

７．７−　、　−ジメチル−トリメチレンジオキシ−シス−ビシクロ　、３．　オクタン−６−オン−２−カルボン酸ベンシルエステル７．７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ（３，３，０）オクタン−６−オン−２−カルボン酸メチルエステル２．５　Ｆのトルエン５ａｉｄｃｐ溶液に、ペンシルフルコール１．２ｄおよびジメチルアミノピリシン２１７Ｑｔ−添加し、かつこの溶液を８時間速流ｒＩＩＬ７１ｆ：に加熱する。引続き２５”Ｃに冷却し、埴化ナトリウム飽和溶液を添加し、メチレンクロリドで抽出し、塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、かつ真空中で蒸発績稲する。残澁を、シリカゲルでのカラムクロマドグ２フイーにより積装する。

ヘキサン／酢酸エステル８：２を使用し、無色結晶としての表記化合物２．６　ｉ　ｔ−ｔａ超する。酢葭エステル／ヘキテンから再結晶することＩＣよタ、融点７８゛Ｃの無色０ハ晶１．８ｙが得られる。

例Ａ１２．７−　２．　−ゾメチルート１メチレンゾオキシ−３ａ−ヒドロキシ−シス− ビシクロ　３，３．０オクタン−２−カルボン酸ベンジルエステル７．７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ［５，３，０３オクタン−６−オン−２−カルボンはベンジルエステル（例１１）１．５Ｉを還流温度でメタノール２５Ｊｄに溶解する。引続＠−４０℃に冷４し、硼水素化ナトリウム４７０ダを添加し、かつ１時間−４０℃で攪拌する。アセトン３．８ｄを添加し、１時間−４０℃で攬件し、酢酸約０．７ｄで中和し、かつ真空中で蒸発濃縮する。残渣を水１００ｄと混会し、メチレンクロリドで抽出し、塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、かつ真空中で′ｉＸ発謹醋する。シリカゲルでへ一？テン／酢虚エステル（６＋４）を使用しりａマドグラフ処理することによシ、無色油状物としての表記化合蜜１．４１が侍らｎる。

工Ｒ（ｃｌｉｃｔ、、）：３６００．　２９６０，２８７０．　１７２２゜７．７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−３α−ベンゾイルオキシ− シス−ビシクロ（３，３゜０〕オクタン−２β−カルボン酸ベンシルエステル７．７−（２，２−ジメチルトリメチレンジオキシ）−３α−ヒドロキシエステル７りＯｆｌ：３＃３＃Ｉ））オクタン−２β−カルボン酸べ／ゾルエステル（ＭＡ１２）１．３５．Ｆのメチレンクロリド１４ゴ中溶液ニＤ℃でビリシン１．４ハおよびベノゾイルクロリド０．６２１１Ｌｌを添加し、かつ０．５時間ｏ　− ｃ　Ｃおよび２時間２５゛Ｃで成性する。引続き累Ｑ、ｌａｌを添加し、１時間攪拌し、メチレンクロリドで希釈し、順次１ｃ７Ｘ、炭改水素ナトリウム５チ溶液および水とともに振とうする。硫酸マグネシクム上で乾燥し、かつ蒸発長線残渣きシリカゾルでクロマトグラフ処理する。ヘキテン／酢はエステル（３＋２）を使用し、無色油状物としての表記化仕り１．３６．！ｉｌ’が得られる。

１（ＣＮＣ２３）：　２９６０，２８７０，１７２５，１６０３αＣ１実施例以″ＦＬ／）夾凡例は、本発明による方法を詳説するために使用する。

例　１（±）−６α−アセトキシ−７，７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ〔６゜３．０）オクタン−２β−カルボ／威−メチルエステル３／ｒエタノール１００ゴに溶解し、かつアルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　）からりリパーゼ（Ｌ工ｐａｎｅ　）−ｐＬ［名砧産業社（ＦＡ、　Ｍｅｌｔｏ　ＳａｎｇｙＯ）　］　１−５１／の０．１　ＭｆＲ酸塩緩＠液−７１Ｊ中溶液と２１−エルシンマイヤーフラスコ中で合する。この懸濁ｆｉ、を、３０゛Ｃで回転振とり装置上で振とりし、その場合反応の軸過を、連成的に取出したす／ゾルτ分析することによジ追跡する。２１時間の反応時間後に、使用せる基質の５０％が変換されている。次いでこのバッチをメチルインジチルケトンで３回抽出し、抽出物で甘し、真空中で乾燥するまＣ蒸発４褪し、かつ未反応のエステルアシレートをシリカゾルカラムを経てクロマトグラフ処理する（傾ｆＰＪｒ法：メチレンクロリドーメチレンクロリ）”／１０％アセトン）。エナンチオマー形の純粋な（＋）−３α−とドａキシ−７，７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ〔３゜３．０）オクタン−２β−カルボン戚メチルニステルト１５Ｉが得られ、このものにヘキサン／イソゾロζルエーテルからＭ晶化することにより６４〜６６℃で戚屏する。（〔α〕ｑ　＋２６．２°、ＨＣＣｌ、中Ｃ＝１．２５５）。

例　２仕ノー３α−７セトキシー７．７−（２，２−ゾメチルートリメチレ／ゾオキシ）−シス−ビシクロ（３゜３．０）オクタン−２β−カルボ／戚メチルエステル３００に９を０．１　Ｍｍ酸堪緩衝猷−＝７　１００ｍに廠濁し、カンシダ・シリンドラセア（Ｃａｎｄｉａａ　ｃｙｌｉｎｄｒ−ａｃｅａ　）からのリパーゼＭｙＣ名砧座業社）７５０９を添加し、かつこの融濶献ｔウルトラ・タラツクス（Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ　）でホモジナイズする。引続き、この混合物を室温で回転振とう装置上で振とうする。

６０時間の反応時間後に、基質は５０％が反応している。次いでこのバッチをエーテルで３ＬＥｌ！１ｍ出し、抽出Ｐ＊全全会、かつ真空中で乾燥するまで蒸発績縮する。

残存せる残渣を、未反応の出発ｇ質を分離するためメチレンクロリド−メチレンクロリド／アセトン５チの溶剤胡斜を使用レジリカｒルカラムｔ−峰てクロマトグラフ処理する。（＋）　−３ｆｆ−ヒドロキシ−７，７−（２，２−ジメチル −トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ（３，３，０３オクタン−２β−カルホンｅ−１ｆｋエステル１　［１５Ｑ９が得られ、このものａヘキサンから結晶１とすることに工ρ融点６２〜６３℃を有しかつ旋元匣（α）”７　＋　２５ °（ＨＣＣｌ３１’ｐ　ｃ　＝＝１　、旧）を有する。これに対し、真正の比較基準を使用し比較測定することにより、エナンチオマー過剰＄　９３．６　、！：判明した。

例　３（±）−６α−７セトキシー７．７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシ／ＨＣ５゜３．０）オクタン−２β−カルボン戚−メチルエステル３０Ωηをエタノールに溶解し、かつリゾプス属（Ｒｈｉｇｏｐｕｓ　）からのリパーゼ″サイクン”　（５ａｉｋｅｎ　）〔長瀬社（ｌＦａ、　Ｎａｇａｇｅ　）　）　７５０ｍ９の０．１Ｍ燐ＩＲ４叙衝漱ｐｔ′１７　１ＱＱａ４中懸濁液にｉ加する。このバッチを１振とう装置上で２８°Ｃで９６時ｉ４振とうした後メチルイノブチルケトンで抽出し、抽出′＃を乾燥するまで蒸発濃縮し、かつシリカゾルカラムを柱でクロマトグラブ処理する。ヘキサンから結畠化後の融照６４〜６５℃でおる（＋）−３α〜ヒドロキシ−７，７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ（３，３，０）オクタ／−２１− カルボ／酸−メチルエステル１１２．！ｉ＋が得られる。旋光度が〔α）”；　＋　２３．８°（ＨＣＣｌ３中のｃ＝１．０２）、冥土の基準に対する比較測定ＩＣよるエナンチオマー過剰率が９２・５％ｅｅでめる。

例　４（±）−３α−７セトキシー７．７−（２，２−ゾメチルートリメチレンシオキシ）−シス−ビシクロ［３゜５、ＯＥオクタン−２β−カルボン酸−メチルエステル３００−ｆを、０−ＩＭ＠［４緩衝ＮｐＨ７１ＱＱｄに懸濁し、牛膵臓からのα−キモトリックン〔ケミカル・ダイナミクス社（ＩＦａ、　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｄｙｎａｍｉｃｓ　Ｃｏｒｐｏｒａ−ｔ、１ｏｎ　）　〕７５０Ｑを添加し、かつクルトン・タラックスでホモジナイズする。引続き、反応混合物ｔ２元で回転振とう装置上で、使用せるエステルアシレート基質の５０％が反応するまで振とうする。その仮に、このバツｆｋ多ｅＩ！ｌ！Ｉメチルイノグチルケト／で抽出１合した抽出Ｗを真空中で乾床するまで７ｇ発ａ１１輪し、かつ非天然形立体ｒ！ｉ、ｆｔの、この場合は鹸化せるエナンチオマーを分離する目的で、メチレンクロリド−メチレンクロリド／７セト７５％の済剤＃ｉＮｔ：使用しシリカｒルカラム′ｔ−経てクロマトグラフ処理する。７５クシヨン１が、その絶対廖ン伊配置が天然のプロスタティクリンＰＧ工、ｔＫ相応する、鹸化されずに残存するエナンチオマーＣ＋）　−ＩＩ　ｔ−含有する。乾燥するまで蒸発濃縮することによ夕、（＋）−３α−７セトキクー７．７−（２，２−ツメチルートリメチレ／ゾオキシノーシスーピシクロ（３，３，０）オクタン−２β−カルボン酸 −メチルエステル１１５Ｉｖが、旋光度〔α］Ｄ＋２−６゜（りａｃｔホルＡ　ｃｐ　ｃ＝　１．０３５　）　ｆ有する非結晶性の油状物として得らｎる。

例　５例４の条汗下に、（±）−６α〜アセトキシ−７，７−ニチレンゾオキシーシスービシクロ〔３ν３，０）オクタン−２７−カルボン赦−メチルエステル３００ｍ９ｔ−１燐ｒＲ塩緩衝准−７中で、バチルス・／グチリス（５ｕｂｓｔｉｌｉｓｉｎ　）　（ベーリンガー・マンハイム社（Ｐａ、　Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ　）　］　７５０　ｌｖと反応させる・　このバンチを、２８ ℃で１０＃８間振とりした後メチルインブチルケトンで抽出し、抽出物を乾燥するまで蒸発−輪し、シリカゲルカラムを経てクロマトグラフ処理する。メチレンクロリド−メチレンクロリド／アセトン４％Ｌ０Ｄ解剤＃Ａ斜を使用し、第１の７ラクシヨ／として、天然のグロスタプイクリ７に相応する立体配置の、不鹸化の（＋）−エナンチオマーを解離する。

この７ラクシヨンを乾燥するまで蒸発１Ｍすることによｆｆ、（＋）−３α−７セトキシー７．７〜エチレンゾオキシーシスーピシクロ（３，３，０）オクタン −２β−カルボ／酸−メチルエステル１６０ダが、旋光度〔α）、　＋　２．４ °（クロロホルム中ｃ＝１−０８５）を有する油状の液体として得らｎる。

例　６ペプトン０．１チ、コーン・ステイープ・リカー（Ｃｏｒｎ　ｓｔ、ｅｅｐ　１ｉｑｕｏｒ　）　０．２　％、グルコース０．５％および酵母エキス０．５％よ９成る、６０分１２０”Ｃでオートクレープ中で滅菌した培養液５００ｉＬｔを −７，５に調節して官有Ｔる２１−エルレンマイヤーフラスコに、アルカリグ４　ス−マルシャリ（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅａ　ｍａｒｓｈａｌｌｉ）ｈｒｃｃ２１Ｄ５ＤＩｊ株の頑科管培養物を接種し、かつ４８ノ４間回転振とう装置上で振とりする。この成長培譬′＠を、成長培養物と同じ組成の阪薗せる培養媒体５ノが光槙された１０ノー発酵装置に接種する。消泡剤としてのシリコーンＳＨの添７１ｒＪ’Ｆに、２９゛Ｃで通気（５１／分）およびｆｆｉ＃（２２（Ｊ　ｒｐｍ）　Ｆに成長させる。！ｙ、長工程６６時間後に、基質を、減菌１通せる、（ ±）−６α−７セトキシー７．７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクーＣ５゜３．０）オクタン−２β−カルボン或−メチルエステル３０＆のエタノール１２５ｍ！液の形で波刃し、かつ反応−過を、連続的に取出したサンプルを分析することにより追跡する。基ＪＸ添ｍ後１０時間で、使用せる基質の５０％が反応される。久いで、発酵装置内容物をメチルインブチルケトンそれぞル６ノで４回抽出し、佃呂物τ合しかつ真空中で乾燥するまで蒸発長線する。残存せる残置をメタノールに溶解し、かつシリコーンオイルをは去するためひだ付きａｉｒ　Ｍ、　”ｃ通して濾過する。この濾ｇｋ爵び真空中で乾燥させ、かつ残渣を、未反応の非天然形立体配置の（−）　−Ｉ！エナンチオマー（７ラクシヨン１）を分離するため、シリカゲルカラムを経てクロマトグラフ処理する（傾斜：メチレンクロリド−メチレンクロリド／アセトン２０％）。

フラクション２で、ヘギサンから結晶化することにより、融点６６〜６４゛Ｃの（＋）−３α−ヒドロキシ−７゜７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロＣ５，３，０）オクタン−２β−カルボン戚−メチルエステルｉｏ、ｚ、ｐが得らｎｌこのことがエナンチオマー収率８１．９　％　（理＠ｔの）に相応する。旋光度が〔α）、　＋　２６．１°（クロロホルムＣｐｃ＝１．６）、エオンチオ？−２１！ｍ率ｔｉ９７．５％ｅｅでｂる。

例　７グルコース３％、コーン・ス？４−ｆ・ｖ　カー　ｉ、。

％、ＮａＮＯｓ’０−２　％１ＫＨｚＰＯ４０，１％、Ｋ、ＨＰｏ、　０−２　％、Ｍｇ５Ｏ，−７Ｈ２００，０５％１ＦｅＳＯ４”７ＪＯ０−００２チおよびＫＣｔ　Ｏ，０５チＬタ故る、３０分？２［１−Ｃでオートクレープ中で滅菌せる培養液を官有する２ノーエルレンマイヤーフラスコに、ムコール−ロウキシ（Ｍｕｃｏｒ　ｒｏｕｚｉｉ　）菌株（ＡＴＣＣ８０９７）のＵｆＩ＋管培養物を接種し、かり２土日３０°０で回転蚕とう装置上で振とうする。

これら２つの成長培養智の内容ｖｋ　ｓ　６０分１２ｉ−ｃおよびグーゾ圧ｉ、１ｂａｒｔ″滅菌せる、成長培養物と同じ組成の減俸１４７が充填された２０７ −発＃Ｉ装置に接種する。消泡剤としてのシリコーンＳＨの添加下に、２９°Ｃでゲージ圧０．７　ｂａｒで通気（１５Ａ！／分）および攪拌（２２０ｒｐｍ　）下に成長させる。成長工程１５時間後に、基ＩＸ、を、瓢−濾過せる、（±） −３α−７セトキシー７．７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）− シス−ビシクロ（＋、３．０）オクタン−２β−カルボン酸−メチルエステル９ｇのエタノール２２０ＩＺＬｔ’Ｆ靜献の形で麻加し、〃１り反応経通を、連続的に取出したサンプルを分析することにより追跡する。

基質添ｍ俊２Ｑ閾で、使用せる基質ｔＺ）５０チが反応される。、仄いで、発＃装［内谷辺をメチルイソブチルケトン七ｎぞｎｉ　ａｉで３回抽田し、抽出物を会しかつ真空中で乾燥するまで蒸発譲砺する。残存せる残はをメタノールｖｃ６解し、かクシリコーンオイルを除去するた０ひだ付＠濾紙を通してｍ遇する。濾欣を再び真空中で乾燥させ、かり残＆を、未反応の出発！ｌｌＩ！Ｉ質を分離するためシリカゲルカラムを社でクロマトグラフ処理する（傾斜：メチシンクΩリド５！−メチレンクロリド／アセト７１０％−５７）。（＋）−３ａ　−ヒＩ’ ロキシ−７，７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロＣ５，５，Ｄ〕オクタ７−２β−カルボン威−メチルエステル６．３ｙが得らｎｌこのものはヘキｖ　ｙ　／イソゾロビルエーテルから結晶化することにより６４〜６５′Ｃでａｍする。旋光度が〔α〕Ｈ＋　２５．７°（Ｈｃｃｔ３中（！＝１．０４５）である。

真正の基準に対し比較測定することにより、エナンチオマー過剰率を９６チθｅと確定した。

ペフトン０．１％、コーン・ステイープ・リカー〇、２チ、クルコース０．５チおよび酵母エキス０．５％より成る滅菌培養碩−７，３５００ｍｌが充填さｎた２ノ−エルレンマイヤーフラスコに、コリネバクテリウム・エクイ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｅｑｕｉ　）　函体（ＡＴＣＣ２１１０７）の＃Ａ糾雷管培養物接種し、かつ４８時間３０−Ｃで振とうする。これら２りの成長壇誉７の内谷吻を）こｎら成長層５Ｉ！吻と同じ埴成の戚菌培養鉦体１４ノき装入した２ｔＪ／−発＃装置に接種する。消泡剤としてのシリコ−ンＳ　ＨＣＤ　ｍ　１１０　’Ｆに、２９℃およびデージ圧０．７ｂａｒで通気（１５Ｊ／分）２よび撹拌（２２０ｒｐｍ　）丁に成長させる。成長時間１６Ｑ間後に、基質を、（± ）−３α−７セトキシー７．７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ） −シス−ビシクロＣ５゜３．０）オクタン−２β−カルボン酸−メチルエステル６ｇのエタノール１５０ゴ中滅函濾過浴液の形で添加し、かり引続き攪拌および通気する。基質添加後３時間で、使用せる基質の５０％が変換される。次いで、このバッチをメチルイノグチルケトンで抽出し、かつ抽出物を真空甲で乾燥するまで蒸発濃縮する。残任せる残置ｔ１メタノール処理すること＋Ｃよりシリコーン万イルと分離しかつシリカゲルカラムを経てクローｒ）グラフ処理する。（＋）−３α−ヒドロキシ−７，７＝（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ） −シス−ビシクロ（：３．３．０）オクタン−２β−カルボン戚−メチルエステル１．９ｇが得らル、このものはへキサン／イソゾロビルエーテルから結晶化することにより６３〜６５−Ｃで／８解する。旋光度が（α）、　＋２５．２’（ＨＣＣ２３甲ｃ＝１．０４）でわる。

例　９例７の条件下に、トリコデルマ・コニンギ（Ｔｒｉｃｈ−ｏｄｅｒｍａ　ｋｏｎｉｎｇｉ　）　Ｍ休（ｃＢｓ８５Ｑ６Ｂ）の培養物を使用し、（±）−６α−アセトキシ−７，７−（２゜２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ［３，３，０〕オクタン−２β−カルボン鍍−メチルエステル６！ｇを発ｇ１時間２８．５時間でＣ十）　−３α−ヒドロキシ−７，７−（２，２−ゾメチルートリメチレンシオキシ）−シス−ビシクロ［３，３，０）オクタン−２β− カルボン戚−メチルエステル２．０１　ｒこ変換する。ヘキサンから結晶化した葡質の旋光度が〔α）”　＋　２４．２°（ａｃｃｚ、中ｃ＝１−０１５）である。

例１Ｄ例８０条件下に、サルチナ・ルテア（５ａｒｔｉｎａ　１ｕｔｅａ）菌ａ（ＡＴＣＣ９３４１ンの培養’ｆＸＢ＜使用し、（±）−３α−アセトキシ−７，７− （２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ（３，３，０）オクタン−２β−カルボン酸−メチルエステル６１に発酵時間１６５時間でＣ＋）　−３α−ヒドロキシ−７゜７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ［３，３，０）オクタン−２β−カルボ７Ｍ−１チルエステル１．８５．ｌｉ’に変換する。旋光度が（Ｑ）”　＋２５．６°（ＴｉＣＣ１，５１’ｐ　ｃ　＝　１−０１０　）　テロ　ル。

例１１例７の条件下に、ペニシリウム・シトリヌム（Ｐθｎｎ−１ｃｉｌｌｉｕ　ｃｉｔｒｉｎｕｍ　）　＠休（ＡＴｃｃ８５［］６）の培養物を使用し、（±）−６ α−アセトキシー７．７−（２゜２−ジメチル−トリメチレンジオ中シン−シス −ビシクロ（３，３，０）オクタン−２β−カルボｙｄ−メチルエステル６．９　’Ｔｈ　（＋）　−５α−ヒドロキシ−７，７−（２，２−シメチルートリメチレンゾオキシ）−シス−ビシクロ（３，３，０３オクタ／−２β−カルボン酸 −メチルエステル２．３　ｊ！ＩＣ変換する。旋光度が［：（１）”　＋２１．８’　（Ｈｃｃｔ、　ＩＦｃ　＝　１．０５　）　ｔ’６る。

例１２例８の条件下に、フラボバクテリウム・ルテセ／ス（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　１ｕｔｅｓｃｅｎｓ　）　［１休（工Ｆｏ３０８５）の培養物乞使用し、（±）−６α−７セトキシー７．７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ［３，３，０）オクタン−２β−カルボンば一メチルエステル６Ｉｔ発酵時間４７時間で（＋）トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ（３，３゜０〕オクタン−２β−カルボン酸−メチルエステル１．８．ＦｉＣ変換する。旋光度が〔α）”、；＋２１．８°（ＨＣＣ２３中ｃ＝１−１４５）でｂる。

例１６（七−３α−ブチリルオキシ−７，７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ（３，３，０）オクタン−２β−カルボン酸−メチルエステル５００Ｗ’ｉ：エタノール９ｄに醪解し、リゾプス属（Ｒｈｉｇｏｐｕｓ　）からのリパーゼ１Ｔイケン”（５ａｉｋｅｎ　）　（長頗社（Ｆａ、　Ｎａ６ａｓｅ　）　）　７５０’４’の０．１Ｍ燐は塩緩衝剤−７１ｔｌＯｄ中浴液と会する。

このＩｌｌ！濁欲を、１５０時間２８゛Ｃで回転をとう装置上反応のエステルアシレートを分隔するためシリカゲルカラムを経てクロマトグラフ処理する。旋光度〔ａ〕。

＋２２．８°（日ｃｃｔ３中Ｃ＝０．９０５）を有する（＋）−３α−ヒドロキシ−７，７−（２，２−ゾメチルートリメチレ／ジオキシ）−シス−ビシクロ（３，！１−０３オクタンー２β−カルボン戚−メチルエステル９５ダが得ら几る。

例１４例１６の条件下に、（±ノー５α−デチリルオキシー７．７−（２，２−ゾメチルートリメチレ／ジオキシ）−シス−ビシクロ（３，３，０）オクタン−２β− カルボン酸−メチルエステル６００ダを燐酸塩緩衝液−７中でフルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓｅ　）　Ｔ　（ノボ・インダストリ７ズ（ｉ″（Ｆａ、　Ｎｏｖａ　Ｉｎｄｕ８ｔｒｉａｓ］〕７５０１９の存在におｈて反応させる。２．５時間２８−Ｃで振とうした後、バッチｔメチルイソブチルクトンで迫出し、かつ？ｍ　出物をシリカゲルでりａマドグラ７処理する。旋光度（１１１）Ｄ＋２４．９ °（Ｈｃｃｔ、千〇＝＝１．０２０）を有する（−）−３α−ヒドロキシ−７，７−（２，２−ゾメチルートリメチレンシオキシ）−シス−ビシクロ（！ｌ−３ −０３オクタンー２β−カルボン戚−メチルエステル１００ダが得られる。

例１５（±）−５α−ジメチルアセトキシ−７，７−（２゜２−シメチルートリメチレンゾオキシ）−シス−ビシクロ［３，３，０）オクタン−２β−カルボン酸−メチルエステル３００ｖｋエタノール９　ｒｎｌ　Ｉｃ　浴Ｊ％し、かつ豚肝臓からの１：４０希釈エステラーゼ〔ベーリンガー社（Ｆａ　Ｂｏｅｈｒｉｎｇｓｒ　）　〕ｉ、５ａｕの０−Ｉ　Ｍ９４Ｍ４ｉ膏液ｐ）１７　ｊＤＤＨＩｌ中溶液と会する。この混合物を１時間２８℃で造と５装置上ご振とうし、引秩きメチルイノグチルケトンで抽出し、かつ真空甲で蒸発長線せる抽出（をシリカゲルカラムで経てクロマトグラフ地理する。（＋）　−３α−ヒドロキシ−７，７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シスルビシフ−（３，３，０）オクタ：／−２１−カルボン酸−メチルエステル１１４９が油状物として得られ、これが保体に結晶化する。融照６４〜６５℃：〔α）”、７　＋２５．１゜（ＨＣｃｔ３　ｃｐｃ　＝１−［Ｊ　Ｉ　Ｄ　）。

例１６（±）−３α−カルボキシゾロビオニルオキシ−７゜７−（２，２−ジメチル− トリメチレンジオキシン−シス−ビシクロＣ３，３，（１１）オクタン−２β− カルボ７販−メチルエステル３００＃ｅエタノール９ｍｔｖｃ靜屏し、かつリパーゼ１スクレｒ２テニア″（Ｓｃユθｒｏｔ−ｋｎｉ＆　）　（良瀬社（Ｆａ、　Ｎａｇａｓｅ　）　）　７５０　’？の０．１Ｍｖ４戚塩収４に！叙−７１０［Ｊｄ中浴准と曾する。撮とう装置よで２８　’Ｃで６０時間龜とうし７Ｃ後、浴献の声価τＱ、ｉ　ｎ　ＮａＯＨで−９，０に調節し、引就きメチルイノグチルケトンで畑出し、かり畑出吻を真空甲で乾燥するまで！ｇ＠ｍする。旋光度（ａ３　Ｊ）＋　２４．（］°（ＨＣＣｔ３甲Ｃ≧１−０８　）　’ｉｃ有する（＋）−３０−ヒドロキシ−７゜７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ −シス−ビシクロ（３，５，０）オクタン−２β−カルボン酸−メチルエステル１０５ηが侍らルる。

例１７（シー３α−アセトキシ−７，７−（２，２−シメチルートリメチレンゾオキシ）−シス−ビシクロ〔６゜３．０〕オクタン−２β−カルボン禮−エチルエステル３００ηをエタノール９　ｄに溶解し、かつ豚膵臓からのリパーゼ〔ケミカル・ダイナミックス仕（Ｆａ−Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｄｙｎａｍｉｃｓ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　）　］　７５０　’％’の燐酸塩緩衝紙ｐ！−１７１００ＪＬ／中溶液と会する。この溶液を２８“Ｃで１！２１転振とう装置上で振とうし、その礪合反応の経過を、ｉ１α的ｉＣ取出したサンプルを分析することにより追跡する。反応時間１時間後に、使用せる基質の５０チが変換さｎている。久いで、このバッチをメチルイノグチルケトンで３回烟出し、烟出智ヲ合し、Ｘ空中で乾燥するまで蒸発−紬し、かつ禾反応のエステルアシレート全分備するため、シリカゲルカラムを経てクロマドグ２７処理する（＃４Ｍ：メチレンクロリドーメチレンクロリド／７セトン１０チ）。旋光度〔α］”　＋　２５．８°（ａｃｃｔｓｃｐｃ＝＝１．２１５　）を有する（＋）−３α−ヒトａキシ−７，７−（２，２−ゾメチルートリメチレ／ゾオキシ〕−シス−ビシクーＣ５゜５．０）オクタン−２β−カルボン改−エチルエステル１１０号が得らｎる。

例１８例１７の条件下に、（−−３α−アセトキシ−７゜７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ（３，３，０）オクタン−２β−カルボン酸−エチルエステル３００ダを、１時間にわたり、豚肝臓からのエステラーゼ〔ベーリンガー・マンＩ・イム社（Ｐａ、　Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｌｍ　）　）　（１：　４０布釈）１．５ｄの燐酸塩緩衝液ＰＨ７１００ｄ中溶欣で処理する。メチルイノグチルケトンで抽出しかつシリカゾルカラムを経てクロマトグラフ処理することにより、旋光Ｋ（（１）Ｄ＋２４．３°（ＨＣＣＡｓ中ｃ＝　１．０７５　）　ｆｒ有する（＋）　−５ａ−ヒドロキシ−７，７− （２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ［３，３，０）オクタン−２β−カルボン酸−エチルエステル１１８９が得ら几る。

例１９例１７０条件下に、（±〕−６α−７セトギシー７゜７−（２，２−ジメチル− トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロＣ５，５，ＯＥオクタン−２β−カルボン殴−ベンジルエステル６００ダｔ１１時間にわたり、アルカリゲネス（煎ｃａｌｉｇｅｎｅｓ　）からのリパーゼ−ｐＬ（名ａ産莱社（Ｆａ、　ＭｅｉｔＯｓａｎｇ７０　）　）　７５０ダの燐戚項収衡ｍ−７１００ｄ甲浴漱Ｃ処理する。

その後に、このバッチｔメチルイノデチルケトンで佃出し、肩出Ｗｔ乾燥するまで諷発誂縮し、かつ残流をシリカゾルカラムを経てクロマトグラフ処理する。旋光度〔α）、＋２３．９°（ａｃｃｔ３中のｃ＝１．０４５　）　’ｆ：有する（＋）−６α−ヒドロキシ−７，７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ［３，３，Ｏ〕オクタン−２β−カルボンば−ベンゾルエステル１０５〜が得ら扛る。

例２０例１７の条件下に、（±）−３０−アセトキシ−７゜７−（２，２−ジメチル− トリメチレンジオキシ）−シスービシクロ［３，３，０〕オクタン−２β−カルボン醒−ペンシルエステル３００θｌを、６時間にゎたり、カンシダ・ブイタリンドラセア（Ｃａｎｄｉａａ　ｃｙｃｌｉ−ｎｄｒａｃｅａ　）からのリパーゼＭｙ　Ｃ名砧産業社（Ｆａ、　ｎ６１ｔ。

ｓａｎｇｙｏ　）　Ｅ　７５０４Ｉの燐＆、］ｔｔＷｇＰＩ−１７１００ｄｌＦｕ液で処理する。その後に、このバッチτメチルイソグチルケトンで迫出し、佃出Ｖ＝乾燥するまで蒸発謹砺し、かり残流をシリカゲルカラムｆｉ−柱でクロマトグラス処理する。旋光＆　Ｃａ〕、　＋　２４．５°（ＨＣＣｌｓ　ｃｐＣ＝Ｌ１４５ンを有するＣ＋）　−５（１−ヒトａキシ−７゜７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロ（３，３，０）オクタン−２β− カルボン版−ペンシルエステル１１５Ｆ−＆が得らｎる。

例２１例８０条件下に、アルカリゲネス・バラドクスス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｐａｒａａｏｘｕｓ　）　函体（ＡＴＣＣ１７７１３）に、（±）−６α−アセトキシ−７，７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ〕−シス−ビシクロ（３，３，０）オクタン−２β−カルボン戚−メチルエステル６ｙを反応させる。基質の添刀後４時間で、使用したラセミ化合物０５０チが変換される。このバンチをメチルイソブチルケトンＣ畑吊し、かつ抽出物を真空甲で乾燥するまで蒸発譲縮する。残任せる桟面ｔ１非天然形立体配置の鹸化せるエナンチオマーを分離する目的で、シリカゲルカラムをばてりａマトグ２７処理する。この場合７ラクシヨ７１中に、その絶対ノｌ配置が天然のプロスタサイクリンＰＧＩ２（Ｃ＠　応ｆる不鹸化のエナンチオマ−（＋）−Ｒが生じる。このンラクションン乾床する筐で蒸発穢縞することにＬＤ、（＋）−６α−アセトキシ−７，７−（２，２−ジメチル−トリメチレンジオキシ）−シス−ビシクロＣ１，３゜０）オクタン−２β−カルボンば一メチルエステル２．４２が、災九度〔α〕っ＋２．２° （クロロホルム中Ｃ；１．１１）ｋｎする井結晶性油仏吻として侍らルる。

国際調査報告国際調査報告０ε８７００５１３

Claims

【特許請求の範囲】

１．式（＋）−１： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ１およびＲ２が一緒になって酸素原子またに、ｃ原子数１〜７を有する直鎖−またほ分枝鎖状アルキレンとしてのＸを有する２結合性の基：−Ｏ−Ｘ −Ｏ−を表わし、またはＲ１およびＲ２のそれぞれが、Ｃ原子数１〜７を有する直鎖−または分枝鎖状アルキルとしてのＲ５を有する基：ＯＲ５を表わし、かつＲ３が、水素原子、ｃ原子数１〜７を有する直鎖−または分枝鎖状アルキル、Ｃ原子数３〜６を有するシクロアルキル、フエニルまたはＣ原子数７〜１０を有するアルアルキルとしてのＺを有する基：ＣＯＯＺを表わし、またはＲ３が、１〜４の価のｎおよび、Ｃ原子数１〜７を有する直鎖−または分枝鎖状アルキル、Ｃ原子数３〜６を有するシクロアルキル、フェニルまたはＣ原子数７〜１０を有するアルアルキルとしてのＲ４を有する基：−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−ＣＯＲ４を表わす〕の化合物を製造するに当り、式（±）−ＩＩ： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４は前述のものを表わす〕のうセミ体の３ａ −アシロキシ−シス−ビシクロ〔３，３，０〕オクタン誘導体に、酵素的またほ微生物学的に立体特異性のアシレート加水分解を施こし、かつ生じる（十）−ビシクロ〔３，３，０〕オクタノール誘導体（十）−Ｉを式（−）−ＩＩの不鹸化のビシクロ〔３．３，０〕オクタノールーアシレートと分離するか、または不鹸化のエナンチオマー（十）−ＩＩを鹸化せるビシクロ〔３，３，０〕オクタノール誘導体（−）−Ｉと分離し、かつ引続き化学的なアシレート加水分解を施こすことを特徴とする光学活性の（十）−ビシクロ〔３，３，０〕オクタノール誘導体の製造法。
２．酵素として、アルカリグネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）からのリパーゼ− ＰＬ、カンジダ・シリンドラセア（Ｃａｎｄｉｄａｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）からのリパーゼ−Ｍｙ、リゾプス属（Ｒｈｉｚｏｐｕｅ）からのリパーゼ・サイケン、リパーゼ・スクレロチニア（ＬｉｐａｅｅＳｃｌｅｒｏｔｉｎｌａ）、牛膵臓からのα−キモトリプシン（ａ−Ｃｈｙｍｏｔｒｙｐｅｉｎ）、アルカラーゼｒ、豚肝臓からのエステラーゼ、またはバチルス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）からのスブチリシン（ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ）を、溶解せる、懸濁せるまたは、ＢｒＣＮ活性化セフアロースまたはオキシランアクリル粒状物で不動体化せる形で使用することを特徴と下る請求の範囲第１項記載の方法。
３．微生物として、アルカリグネス・マルシヤリ（Ａｌｃａｌｉｎｇｓｎｅｓ　ｍａｒｓｈａｌｌｉｉ）、ムコール・ロウキシ（Ｍｕｃｏｒ　ｒｏｕｘｉｉ）、コリネ・バクテリウム・エクイ（Ｃｏｒｙｎｅ　ｂａｃｔｅｒｉｕｍｅｑｕｉ）、トリコデルマ・コニンギ（Ｔｒｉｃｏｄｅｒｍａ　ｋｏｎｉｎｇｉ）、サルシナ・ルテア（Ｓａｒｃｉｎａ　ｌｕｔｅａ）、ペニシリウム．シトリヌム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｃｉｔｒｉｎｕｍ）、フラボバクテリウム・ルテセンス（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｌｕｔｅｓｃｅｎｓ）またはアルカリグネス・パラドクスス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｐａｒａｄｏｘｕｓ）を使用することを特徴とする、請求の範囲第１項記載の方法。
４．酵素として、請求の範囲第３項記載のの微生物から単離せる酵素を、溶解、懸濁または不動体せる形で使用することを特徴とする、請求の範囲第３項記載の方法。