JP7639008B2 - 肝再生促進又は肝細胞死の抑制もしくは防止のためのプロテインキナーゼ阻害剤 - Google Patents

Description

本発明は、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ４（ＭＫＫ４）を阻害するプロテインキナーゼ阻害剤に関し、特に、プロテインキナーゼＪＮＫ１及びＭＫＫ７よりもＭＫＫ４を選択的に阻害するプロテインキナーゼ阻害剤に関する。

肝疾患は、感染、傷害、アルコールや薬物等の毒性化合物への曝露、自己免疫過程、遺伝的欠陥及びその他の要因によって引き起こされる場合がある。肝臓には顕著な再生能力があるが、病態においては正常に機能しないことがあり、したがって、肝細胞や臓器機能の損失を補うには不十分な場合がある。

特許文献１には、プロテインキナーゼの異常な活性に関連する疾患及び状態の治療に有用なプロテインキナーゼ阻害剤である化合物が記載されている。これらの化合物は、Ｒａｆプロテインキナーゼ、特にＢ－Ｒａｆ及びｃ－Ｒａｆ並びにそれらの変異体の阻害剤であり、したがって癌治療に有用である。また、それらは他の多種多様なプロテインキナーゼ、とりわけｃ－Ｊｕｎ Ｎ－末端キナーゼ（ＪＮＫ）、特にＪＮＫ１を阻害すると言われている。

特許文献２には同様の開示があり、特許文献３及び特許文献４は、Ｒａｆプロテインキナーゼ阻害活性を有する修飾化合物を開示する。Ｈ．Ｖｉｎらは、ＪＮＫシグナル伝達のオフターゲット阻害を介してアポトーシスを抑制するＢ－Ｒａｆ阻害剤として、特許文献５の２つの化合物に言及する。

特許文献６には、ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン化合物が記載されており、この化合物はＲａｆプロテインキナーゼが介在する疾患や状態、例えば癌などの治療に有用なプロテインキナーゼ阻害剤である。さらに、これらは、他の多種多様なプロテインキナーゼ、とりわけｃ－Ｊｕｎ Ｎ－末端キナーゼ（ＪＮＫ）、特にＪＮＫ１を阻害すると言われている。特許文献７は、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ４（ＭＫＫ４）の阻害剤として、肝不全の治療、アポトーシスからの肝細胞の保護、及び肝細胞の再生に有用であると記載されているいくつかの化合物を開示している。

非特許文献１は、肝細胞の再生能力を高めるために利用できる遺伝子標的の同定のための機能的遺伝学的アプローチを記載する。特に、非特許文献１は、プロテインキナーゼＭＫＫ４を肝細胞再生の重要な調節因子として特定し、ＭＫＫ４の抑制が、ＭＫＫ７の代償的アップレギュレーションと、ＡＴＦ２及びＥＬＫ１のＪＮＫ１依存性活性化を介して肝細胞の再生を増加させたことを報告している。先行技術の発見に基づいて、ＭＫＫ４及びＪＮＫ１阻害剤は、ＪＮＫ１介在性疾患の治療に有用であり得ると結論づけられた。

しかしながら、臨床治療において、そのような化合物を用いた肝疾患の治療が失敗したことは認識されている。

国際公開第２００７／００２４３３号 国際公開第２０１０／００２３２５号 国際公開第２０１２／１０９０７５号 国際公開第２０１４／１９４１２７号 国際公開第２００７／００２４３３号 国際公開第２０１０／１１１５２７号 国際公開第２０１２／１３６８５９号

Ｗｕｅｓｔｅｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（Ｃｅｌｌ １５３：３８９－４０１，２０１３）

本発明の根底にある課題は、ＭＫＫ４阻害剤である有用な化合物、特にＭＫＫ７やＪＮＫ１よりもＭＫＫ４を選択的に阻害するＭＫＫ４阻害剤を提供することであった。さらなる課題は、ＭＫＫ７やＪＮＫ１よりもＭＫＫ４を選択的に阻害する肝疾患の治療に有用なＭＫＫ４阻害剤、特に肝再生促進又は肝細胞死の抑制もしくは防止に有用なＭＫＫ４阻害剤である化合物を提供することであった。

この課題は、式（Ｉ）の化合物を提供することによって解決された。
したがって、本発明は、以下の実施形態に関する：

１．式（Ｉ）を有する化合物、並びに、その薬学的に許容される塩、溶媒和物及び光学異性体：

Ｒ^１は、Ｈ、又はアルキル；
Ｒ^２は、Ｈ、又はアルキル；
Ｒ^４は、Ｈ、又はアルキル；
Ｒ^６は、Ｈ、又はアルキル；
Ｒ^Ｗは、－ＮＲ^１０ＳＯ_２Ｒ^１２；
Ｒ^１０は、Ｈ、アルキル、又はフェニルアルキル；
Ｒ^１２は、Ｈ、アルキル、ハロアルキル、又はフェニルアルキル（フェニル基は、アルキル及びハロゲンから独立して選択される１もしくは２個の基で任意に置換されている）；

Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚ、及びＲ^ｚｚは、以下から選択される：
ａ）Ｒ^ｘとＲ^ｙはＦであり、Ｒ^ｚとＲ^ｚｚはＨである；及び、
ｂ）Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、及びＲ^ｚｚは独立してハロゲンであり、Ｒ^ｚはＨである；

Ｒ^５は、以下から選択される：
（ａ）以下から独立して選択される１、２又は３個の基で置換されたフェニル：
－ＰＯジ（アルキル）；及び、
ヒドロキシアルキル－ＯＮＨ－ＣＯ－；
（ｂ）以下から独立して選択される１、２又は３個の基で置換されたピリミジニル；
アルキル；
シクロアルキル；
アルコキシ；及び、
アルキルスルファニル。

２．Ｒ^５が、－ＰＯジ（アルキル）及びヒドロキシアルキル－ＯＮＨ－ＣＯ－から独立して選択される１又は２個の基で置換されたフェニルである、実施形態１の化合物、並びに、その薬学的に許容される塩、溶媒和物及び光学異性体。

３．Ｒ^５が、アルキル、シクロアルキル、アルコキシ、及びアルキルスルファニルから独立して選択される１又は２個の基で置換されたピリミジニルである、実施形態１の化合物、並びに、その薬学的に許容される塩、溶媒和物及び光学異性体。

４．ピリミジニルが、５位で１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジンに結合し、２位がアルキル、シクロアルキル、又はアルコキシで置換され、任意に４位がアルキル又はアルキルスルファニルで置換されている、実施形態３の化合物、並びに、その薬学的に許容される塩、溶媒和物及び光学異性体。

５．ピリミジニルが、５位で１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジンに結合し、２位がシクロアルキル又はアルキルで置換されている、実施形態４の化合物、並びに、その薬学的に許容される塩、溶媒和物及び光学異性体。

６．ピリミジニルが、５位で１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジンに結合し、４位又は２位および４位がアルキルで置換されており、４位及び６位のアルキルが同じであっても異なっていてもよい、実施形態３の化合物、並びに、その薬学的に許容される塩、溶媒和物及び光学異性体。

７．Ｒ^１２が、Ｃ_１－Ｃ_４－アルキル又はフェニルアルキルであり、フェニルアルキルが特にベンジルである、実施形態１～６のいずれか一つの化合物、並びに、その薬学的に許容される塩、溶媒和物及び光学異性体。

８．Ｒ^１２が、Ｃ_１－Ｃ_４－アルキルであり、好ましくは、メチル、エチル、又はプロピルである、実施形態７の化合物、並びに、その薬学的に許容される塩、溶媒和物及び光学異性体。

９．式（Ｉａ）を有する、実施形態１～８のいずれか一つの化合物、並びに、その薬学的に許容される塩、溶媒和物及び光学異性体：

式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｗ、及びＲ^ｙは、実施形態１～８のいずれか一つで定義される通りである。

１０．式（Ｉｂ）を有する、実施形態１～８のいずれか一つの化合物、並びに、その薬学的に許容される塩、溶媒和物及び光学異性体：

式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^ｘ、Ｒ^ｗ、Ｒ^ｙ、及びＲ^ｚｚは、実施形態１～８のいずれか一つで定義される通りである。

１１．Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、及びＲ^６が、Ｈ又はアルキル、特にＨである、実施形態１～１０のいずれか一つの化合物。

１２．Ｒ^１０がＨ又はアルキル、特にＨである、実施形態１～１１のいずれか一つの化合物。

［発明の詳細な説明］
一実施形態では、本発明は、選択的ＭＫＫ４阻害剤の化合物並びに、その薬学的に許容される塩、溶媒和物及び光学異性体に関する。該化合物は式Ｉの化合物であり、Ｒ^１～Ｒ^６、Ｒ^１０、Ａ及びＱは、任意の組み合わせで、上記の実施形態で定義された通りである。

一実施形態では、本発明の化合物並びに、その薬学的に許容される塩、溶媒和物及び光学異性体は、プロテインキナーゼＪＮＫ１及びＭＫＫ７よりもプロテインキナーゼＭＫＫ４を選択的に阻害する。

さらに、本発明は、肝再生を促進し、又は肝細胞死を抑制もしくは防止し、同時に肝細胞の増殖を増加させる使用のための前記化合物にも関する。

用語「本発明の化合物」又は「式（Ｉ）の化合物」は、その薬学的に許容される塩、プロドラッグ、生物学的に活性な代謝産物、溶媒和物及び立体異性体を含む。

本発明には、上記化合物の薬学的に許容される塩が含まれる。薬学的に許容される塩は、特に、薬学的に許容される酸又は塩基を用いた酸又は塩基付加塩である。好適な薬学的に許容される有機酸及び無機酸の例は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、スルファミン酸、メタンスルホン酸等のＣ_１－Ｃ_４－アルキルスルホン酸、Ｓ－（＋）－１０－樟脳スルホン酸等の脂環式スルホン酸、ベンゼンスルホン酸やトルエンスルホン酸等の芳香族スルホン酸、炭素数２～１０のジカルボン酸やトリカルボン酸及びヒドロキシカルボン酸、例えば、シュウ酸、マロン酸、マレイン酸、フマル酸、乳酸、酒石酸、クエン酸、グリコール酸、アジピン酸及び安息香酸である。

他の利用可能な酸は、例えば「Ｆｏｒｔｓｃｈｒｉｔｔｅ ｄｅｒ Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ［Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｄｒｕｇ ｒｅｓｅａｒｃｈ］，Ｖｏｌｕｍｅ １０，ｐａｇｅｓ ２２４ ｆｆ．，Ｂｉｒｋｈａｅｕｓｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｂａｓｅｌ ａｎｄ Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，１９６６」に記載されている。薬学的に許容される好適な有機塩基及び無機塩基の例は、水酸化ナトリウム又は水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物、水酸化カルシウム又は水酸化マグネシウム等のアルカリ土類金属水酸化物、水酸化アンモニウム、有機窒素塩基、例えば、ジメチルアミン、トリメチルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、コリン、２－アミノ－２－ヒドロキシメチル－プロパン－１，３－ジオール、メグルミン、プロカイン等、Ｌ－アルギニン、Ｌ－リジン、エチレンジアミン、又はヒドロキシエチルピロリジンである。

また本発明は、本発明の化合物及びその塩の任意の互変異性体、結晶体及び多形体、並びにそれらの混合物を含む。

また本発明は、水和物等の溶媒和物も含む。

本発明の化合物は、１つ以上のキラル中心を含んでいてもよく、エナンチオマーやジアステレオマー等の異なる光学活性形態で存在する。

本明細書で使用される場合、用語「プロドラッグ」は、何らかの生理学的な化学的プロセスによってｉｎ ｖｉｖｏで親薬物に変換される薬剤をいう。プロドラッグの例としては、これには限定されないが、エステルの形態の本発明の化合物である。

プロドラッグは、多くの有用な特性を有する。例えば、プロドラッグは、最終的な薬物よりも水溶性が高く、それにより薬物の静脈内投与が容易になる場合がある。またプロドラッグは、最終的な薬剤よりも高いレベルの経口バイオアベイラビリティを有する場合がある。投与後、プロドラッグは、酵素的又は化学的に切断され、最終的な薬物が血液又は組織に送達される。

例示的なプロドラッグとして、これには限定されないが、遊離水素が、（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル，（Ｃ_１－Ｃ_１２）アルカノイルオキシ－メチル，（Ｃ_４－Ｃ_９）１－（アルカノイルオキシ）エチル，炭素数５～１０の１－メチル－１－（アルカノイルオキシ）－エチル，炭素数３～６のアルコキシカルボニルオキシメチル，炭素数４～７の１－（アルコキシカルボニル－オキシ）エチル，炭素数５～８の１－メチル－１－（アルコキシカルボニルオキシ）－エチル，炭素数３～９のＮ－（アルコキシカルボニル）アミノメチル，炭素数４～１０の１－（Ｎ－（アルコキシカルボニル）アミノ）エチル，３－フタリジル，４－クロトノ－ラクトニル，γ－ブチロラクトン－４－イル，ジ－Ｎ，Ｎ－（Ｃ_１－Ｃ_２）アルキルアミノ（Ｃ_２－Ｃ_３）アルキル（例えば、β－ジメチルアミノエチル），カルバモイル－（Ｃ_１－Ｃ_２）アルキル，Ｎ，Ｎ－ジ（Ｃ_１－Ｃ_２）－アルキルカルバモイル－（Ｃ_１－Ｃ_２）アルキル，及びピペリジノ－，ピロリジノ－もしくはモルホリノ（Ｃ_２－Ｃ_３）アルキルで置換されたカルボン酸置換基を有する化合物を挙げることができる。

他の例示的なプロドラッグは式（Ｉ）のアルコールを放出する。式中、ヒドロキシル置換基（例えば、Ｒ基はヒドロキシルを含む）の遊離水素は、（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシ－メチル，１－（（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシ）－エチル，１－メチル－１－（（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイルオキシ）エチル，（Ｃ_１－Ｃ_１２）アルコキシ－カルボニル－オキシメチル，Ｎ－（Ｃ_１－Ｃ_６）－アルコキシ－カルボニルアミノメチル，スクシノイル，（Ｃ_１－Ｃ_６）アルカノイル，α－アミノ（Ｃ_１－Ｃ_４）アルカノイル，アリール，アシル，及びα－アミノアシルもしくはα－アミノアシル－α－アミノアシルで置換されている。前記α－アミノアシル部分は独立して、タンパク質に含まれる天然のＬ－アミノ酸、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）_２，－Ｐ（Ｏ）（Ｏ（Ｃ_１－Ｃ_６）アルキル）_２又はグリコシル（炭水化物のヘミアセタールのヒドロキシルの脱離から生じる基）のいずれかである。

語句「ＭＫＫ４阻害剤」は、投与においてＭＫＫ４のキナーゼ活性を＜１０μｍｏｌ／ｌ、好ましくは＜１μｍｏｌ／ｌ、特に＜０．５μｍｏｌ／ｌのＩＣ５０で阻害するものを意味する。本明細書で使用される表現「プロテインキナーゼＪＮＫ１及びＭＫＫ７よりもプロテインキナーゼＭＫＫ４を選択的に阻害する」は、対照又はＫｄのいずれかのパーセントで表される、ＭＫＫ４阻害活性に対するＭＫＫ７阻害活性の比、又はＭＫＫ４阻害活性に対するＪＮＫ１阻害活性の比が、ＫＩＮＯＭＥｓｃａｎ（商標）を用いて測定したとき、≧１０であることを意味する。

本明細書で使用される表現「肝再生促進又は肝細胞死の抑制もしくは防止」は、治療開始時の増殖細胞の数と比較して、増殖している肝細胞の相対的な数が少なくとも３０％、好ましくは少なくとも５０％増加することを意味する。特に、当該表現は、治療開始時の増殖細胞数と比較して、≧１００％の増加を意味する。

これに関連して、実験的な測定及び定量は、標準的な方法、例えば、細胞増殖に正確に関連するタンパク質Ｋｉ６７の定量を用いて行われる。組織スライド中の増殖する肝細胞の定量化のために、いくつかの免疫組織化学標準法が利用可能であり、これは、一次抗Ｋｉ６７抗体を使用し、次いで、例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ結合二次抗体を使用して抗Ｋｉ６７結合の可視化を行うものである。発色基質の酵素変換によって可視化されるペルオキシダーゼ活性の量は、Ｋｉ６７タンパク質の量及び増殖細胞の数と相関する。

以下に説明する実験では、肝細胞増殖は、Ａｂｃａｍの１次ポリクローナルウサギ抗Ｋｉ６７抗体（品番：ａｂ １５５８０，Ａｂｃａｍ，ケンブリッジ，ＵＳＡ）及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎの２次ヤギポリクローナル抗体（品番：１６１０１，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を含む蛍光体テトラメチルローダミンを用いたＫｉ６７染色により定量化した。

いくつかの前臨床マウスモデルから得られたデータに基づいて、ＣＣｌ_４（四塩化炭素）による慢性肝障害マウスモデルにおけるｓｈＲＮＡ（スモールヘアピンＲＮＡ）を介したＭＫＫ４の抑制が、肝細胞増殖を１３％から２７％に増加させ（対照のｓｈＲＮＡとの比較）、そして肝障害（トランスアミナーゼ）の減少と肝線維症の減少に関連することが明らかになった。

前章の定義によれば、増殖細胞の相対的な増加率は１０８％であった。アルコール誘発性脂肪性肝炎（ＡＳＨ）のモデルでは、ＭＫＫ４のｓｈＲＮＡ媒介サイレンシングにより、対照のｓｈＲＮＡを使用した場合の２％と比較して、４％の肝細胞増殖率が得られた（相対的増加率：１００％）。肝細胞増殖の繰返しは、脂肪症（脂肪沈着）の減少及びトランスアミナーゼにより測定される肝障害の減少と関連していた。同様に、部分肝切除モデル（肝臓の３分の２の外科的切除後４８時間）において、ｓｈＲＮＡ媒介ＭＫＫ４サイレンシングは、肝細胞増殖を１６％（対照ｓｈＲＮＡ）から３３％（相対的増加：１０６％）に増加させた。繰り返しになるが、肝細胞増殖の増加は、肝再生の改善と肝質量の迅速な回復に関連していた。

上記の可変部の定義で言及された有機部分は、ハロゲンなる用語と同様に、個々のグループのメンバーの個々のリストの総称である。接頭辞Ｃ_ｎ－Ｃ_ｍは、それぞれの場合において、グループ内の炭素原子の可能な数を示す。

ハロゲンなる用語は、それぞれの場合にフッ素、臭素、塩素又はヨウ素を表し、特にフッ素又は塩素を表す。

アルキルは、直鎖又は分岐アルキル基であり、好ましくはＣ_１－Ｃ_６－アルキル基（すなわち、１～６個の炭素原子を有するアルキル基）、より好ましくはＣ_１－Ｃ_４－アルキル基である。アルキル基の例は、メチル，エチル，ｎ－プロピル，イソプロピル，ｎ－ブチル，２－ブチル，イソブチル，ｔｅｒｔ－ブチル，ペンチル，１－メチルブチル，２－メチルブチル，３－メチルブチル，２，２－ジメチルプロピル，１－エチルプロピル，ヘキシル，１，１－ジメチルプロピル，１，２－ジメチルプロピル，１－メチルペンチル，２－メチルペンチル，３－メチルペンチル，４－メチルペンチル，１，１－ジメチルブチル，１，２－ジメチルブチル，１，３－ジメチルブチル，２，２－ジメチルブチル，２，３－ジメチルブチル，３，３－ジメチルブチル，１－エチルブチル，２－エチルブチル，１，１，２－トリメチルプロピル，１，２，２－トリメチルプロピル，１－エチル－１－メチルプロピル，及び１－エチル－２－メチルプロピルである。

アルキルの定義は、アルキル基を含む任意の基にも同様に適用できる。

シクロアルキルは脂環式基であり、好ましくはＣ_３－Ｃ_８－シクロアルキル、すなわち３～８個の炭素原子を有するシクロアルキル基である。特に、３～６個の炭素原子が、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシル等の環状構造を形成する。環状構造は、非置換であってもよく、又は１、２、３もしくは４個のＣ_１－Ｃ_４アルキル基（好ましくは、１つ以上のメチル基）を有していてもよい。

本発明の化合物（その薬学的に許容される塩、プロドラッグ、生物学的に活性な代謝産物、溶媒和物及び立体異性体を含む）は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ２００７／００２４３３に開示される通り、又は類似の手順に従って調製することができる。酸又は塩基付加塩は、遊離塩基を対応する酸と混合するか、遊離酸を所望の塩基と混合することにより、慣用的な方法で調製される。任意に、反応は、有機溶媒、例えばメタノール、エタノールもしくはプロパノール等の低級アルコール、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルもしくはジイソプロピルエーテル等のエーテル、アセトンもしくはメチルエチルケトン等のケトン、又はＥｔＯＡｃ等のエステルの溶液中で行われる。

本発明の化合物は、肝再生を促進するか、又は肝細の死を抑制もしくは防止し、同時に肝細胞の増殖を増加させるのに有用である。したがって、本発明の化合物は、感染、傷害、毒性化合物への暴露、血液中の正常物質の異常な蓄積、自己免疫過程、遺伝的欠陥、又は不明の原因によって引き起こされ得る肝臓への急性又は慢性の損傷を伴う疾患の治療、調節、改善、又は予防に有用である。

これらの肝疾患は、可能性のある治療効果（すなわち、肝機能の部分的又は完全な回復）を達成するために、肝再生を促進し、肝細胞死を抑制又は防止することが有用であると考えられる全ての疾患を含む。これらの疾患には、以下が含まれる：
急性及び慢性の肝疾患又は急性増悪した肝疾患、例えば、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｅ型肝炎、エプスタイン・バーウイルス、サイトメガロウイルス、単純ヘルペスウイルス及び他のウイルスによる肝炎等の急性及び慢性ウイルス性肝炎、全てのタイプの自己免疫性肝炎、原発性硬化性肝炎、アルコール性肝炎；

代謝性肝疾患、例えば、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）等の脂肪肝、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性脂肪肝炎（ＡＳＨ）、ウィルソン病（Ｍｏｒｂｕｓ Ｗｉｌｓｏｎ）、ヘモクロマトーシス、α１－アンチトリプシン欠乏症、グリコーゲン貯蔵疾患；

全てのタイプの肝硬変、例えば、原発性胆汁性肝硬変、エチル中毒性肝硬変、特発性肝硬変；

急性（劇症）又は慢性肝不全、例えば、アセトアミノフェン（パラセタモール）誘発性肝不全、α－アマニチン誘発性肝不全、薬物誘発性肝毒性、例えば、抗生物質、非ステロイド性抗炎症薬及び抗痙攣薬によって引き起こされる肝不全、ハーブサプリメント（カバ、エフェドラ、スカルキャップ、ペニーロイヤル等）によって引き起こされる急性肝不全等の中毒性肝不全、バッドキアリ症候群等の血管疾患による肝疾患及び肝不全、原因不明の急性肝不全、右心不全による慢性肝疾患；

ガラクトース血症、嚢胞性線維症、ポルフィリン症、肝虚血灌流障害、肝移植後の過小グラフト症候群、原発性硬化性胆管炎又は肝性脳症。

肝再生を促進するため、又は肝細胞死を抑制もしくは防止するために、本発明の化合物は、それを必要とする患者に治療有効量で投与される。肝疾患の存在を検出するために、様々な診断方法が利用できる。臨床的に許容される正常範囲を超えたアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）とアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の血中濃度は、進行中の肝障害を示すことが知られている。血中ビリルビン濃度又は他の肝酵素は、検出又は診断基準として使用される。

ＡＬＴとＡＳＴの血中濃度についての肝疾患患者の日常的モニタリングは、治療中の肝疾患の進行を測定するために使用される。上昇したＡＬＴ及びＡＳＴ濃度の許容範囲内への低下は、患者の肝障害の重症度の低下を反映した臨床的証拠と見なされる。ＦｉｂｒｏＴｅｓｔ／ＦｉｂｒｏＳＵＲＥ，ＨｅｐａＳｃｏｒｅ（商標），ＦｉｂｒｏＭｅｔｅｒ又はＣｉｒｒｈｏｍｅｔｅｒ等の商業的な試験は、脂肪肝、線維症、肝硬変の検出用に５つ以上の生化学的パラメーターの組み合わせ結果を評価する。さらに、磁気共鳴画像法、ソノグラフィー、特にエラストグラフィー法等の非侵襲的で革新的な物理的画像法は、肝疾患の状態と進行を検出及び監視するために利用できる。

さらに、ｓｈＲＮＡを介したＭＫＫ４の抑制は、変形性関節症におけるＴＮＦ－α駆動の軟骨基質分解を軽減させることが判明している（Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ （２０１７）８，ｅ３１４０）。したがって、本発明の化合物を使用したＭＫＫ４の活性の阻害は、さらに変形性関節症及び関節リウマチの治療に有用である。

本発明の化合物は、慣習的に、本発明による少なくとも１つの化合物、任意に不活性担体（例えば、薬学的に許容される賦形剤）及び、適切な場合には他の薬物を共に含む医薬組成物の形態で投与される。これらの組成物は、例えば、経口、直腸、経皮、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内又は鼻腔内に投与することができる。

適切な医薬組成物の例は、粉末、顆粒、錠剤、特にフィルム錠剤、トローチ剤、サッシェ剤、カシェ剤、糖衣錠等の固体医薬形態、ハードゼラチンカプセル及びソフトゼラチンカプセル又は坐剤等のカプセル、軟膏、クリーム、ヒドロゲル、ペースト又は膏薬等の半固体医薬形態、並びに溶液、エマルション、特に水中油型エマルション、懸濁液（例えば、ローション）、注射製剤及び注入製剤等の液状医薬形態である。さらに、リポソーム又はミクロスフェアを使用することも可能である。

組成物を製造する際、場合により本発明による化合物は、１つ以上の担体（賦形剤）と混合又は希釈される。担体（賦形剤）は、活性化合物のためのビヒクル、担体又は媒体として機能する固体、半固体又は液体の材料とすることができる。

適切な担体（賦形剤）は、専門の医薬研究論文に記載されている。さらに製剤は、薬学的に許容される補助物質を含むことができる。例えば、湿潤剤；乳化剤及び懸濁剤；保存料；抗酸化剤；抗刺激剤；キレート剤；コーティング助剤；乳化安定剤；フィルム形成剤；ゲル形成剤；臭気マスキング剤；矯味剤；樹脂；親水コロイド；溶剤；可溶化剤；中和剤；拡散促進剤；顔料；第四級アンモニウム化合物；再脂肪化及び過脂肪化剤；軟膏、クリーム又はオイルの原料；シリコーン誘導体；拡散助剤；安定剤；滅菌剤；坐剤基剤；結合剤、充填剤、流動促進剤、崩壊剤又はコーティング等の錠剤補助剤；噴霧剤；乾燥剤；乳白剤；増粘剤；ワックス；可塑剤及び白色鉱油である。この点に関する処方は、例えば「Ｆｉｅｄｌｅｒ，Ｈ．Ｐ．，Ｌｅｘｉｋｏｎ ｄｅｒ Ｈｉｌｆｓｓｔｏｆｆｅ ｆｕｅｒ Ｐｈａｒｍａｚｉｅ，Ｋｏｓｍｅｔｉｋ ｕｎｄ ａｎｇｒｅｎｚｅｎｄｅ Ｇｅｂｉｅｔｅ［薬学、化粧品及び関連分野の補助物質の百科事典］，第４版，Ａｕｌｅｎｄｏｒｆ：ＥＣＶ－Ｅｄｉｔｉｏ－Ｃａｎｔｏｒ－Ｖｅｒｌａｇ，１９９６」に記載されている専門知識に基づいている。

また本発明の化合物は、他の治療薬との組み合わせに好適な場合もある。したがって、さらに本発明は、特に肝再生の促進又は肝細胞死の抑制もしくは防止に使用するための、本発明の化合物及び１以上のさらなる治療薬を含む組み合わせに関する。本発明の併用療法は、補助的に投与することができる。補助的投与とは、別々の医薬組成物又はデバイスの形態での各成分の同時又は重複投与を意味する。

２つ以上の治療剤の治療的投与のこの方法（ｒｅｇｉｍｅ）は、通常、当業者によって、そして本明細書では補助的治療的投与と呼ばれる；追加的治療的投与としても知られている。患者が本発明の化合物及び少なくとも１つのさらなる治療剤を別々であるが同時に又は重複して治療投与を受ける任意の及び全ての治療計画は、本発明の範囲内である。本明細書に記載される補助治療的投与の一実施形態では、典型的には患者は１つ以上の成分の治療的投与で一定期間、安定化され、その後、別の成分の投与を受ける。

本発明の併用療法は、同時に投与することもできる。同時投与とは、両方の成分を有するもしくは含有する単一の医薬組成物もしくはデバイスの形態で、又はそれぞれが同時に投与される成分の１つを含む別々の組成物もしくはデバイスとして、各々の成分が一緒に投与される治療計画を意味する。同時に組み合わせるための別々の各々の成分のこの組み合わせは、部品のキットの形で提供されてもよい。

本発明の化合物と組み合わせて使用するのに適した薬剤としては、例えば以下が挙げられる：

ＴＯＦＡ（５－（テトラデシルオキシ）－２－フロ酸）、フィルソコスタット（以前はＧＳ ０９７６として知られた）、ＰＦ－０５２２１３０４、及びＷＯ２０１６／１１２３０５に開示されたＡＣＣ阻害剤等のＡＣＣ阻害剤；
アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬；
エナラプリル等のアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤；
セロンセルチブ（以前はＧＳ－４９９７として知られた）又はＳＲＴ－０１５等のＡＳＫ１（アポトーシスシグナル調節キナーゼ１；ＭＡＰ３Ｋ５）阻害剤；
エムリカサン等のカスパーゼ阻害剤；
混合カテプシンＢ／Ｃ型肝炎ウイルスＮＳ３プロテアーゼ阻害剤等のカテプシンＢ阻害剤（ＶＢＹ－３７６等）；
混合ＣＣＲ２／ＣＣＲ５ケモカイン拮抗薬等のＣＣＲ２ケモカイン拮抗薬（セニクリビロック等）；
ＣＣＲ５ケモカイン拮抗薬；
コビプロストン等の塩素イオンチャネル刺激薬；
コレステロール可溶化剤；

ＢＩ １４６７３３５（以前はＰＸＳ－４７２８Ａとして知られた）等の銅アミンオキシダーゼ３（ＡＯＣ３）阻害剤；
ＬＣＱ９０８又はＧＳＫ－３００８３５６等のジアシルグリセロールＯ－アシルトランスフェラーゼ１（ＤＧＡＴ１）阻害剤；
ＰＦ－０６８６５５７１等のジアシルグリセロールＯ－アシルトランスフェラーゼ２（ＤＧＡＴ２）阻害剤；
リナグリプチン等のジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）阻害剤；
ＩＮＴ－７４７（オベチコール酸）、クリオフェクサー（以前はＧＳ－９６７４又はＰＸ－１０２として知られた）、トロピフェクサー（以前はＬＪＮ４５２として知られた）、ＥＤＰ－３０５又はＬＭＢ－７６３等のファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）作動薬；

線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）及びその類似体、例えばＦＧＦ１９の長時間作用型類似体（例：アルダフェルミン；以前はＮＧＭ－２８２として知られた）又はＦＧＦ２１の長時間作用型類似体（例：ＴＥＶ－４７９４８；Ｂｉｏ８９－１００もしくはＡＲＫ０１もしくはＰＦ－０５２３１０２３とも示される）；
ＩＮＴ－７６７等のＦＸＲ／ＴＧＲ５デュアルアゴニスト；
ＧＲ－ＭＤ－０２等のガレクチン－３阻害剤；
リラグルチド又はエクセナチド等のグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ１）作動薬；
グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ１）／グルカゴンデュアルアゴニスト（例えば共受容体作動薬）；
デュアルグルコース依存性インスリン分泌性ポリペプチド（ＧＩＰ）、及びグルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）受容体作動薬（例えば、チルゼパチド（以前はＬＹ３２９８１７６として知られた））；
グルタチオン前駆体；

混合カテプシンＢ／Ｃ型肝炎ウイルスＮＳ３プロテアーゼ阻害剤等のＣ型肝炎ウイルスＮＳ３プロテアーゼ阻害剤（ＶＢＹ－３７６等）；
スタチン等のＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（アトルバスタチン等）；
Ｒ０５０９３１５１等の１１β－ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ（１１β－ＨＳＤ１）阻害剤；
ＩＬ－１β拮抗薬；
混合ＩＬ－６／ＩＬ－１β／ＴＮＦαリガンド阻害剤等のＩＬ－６拮抗薬（ＢＬＸ－１００２等）；
ペグイロデカキン等のＩＬ－１０作動薬；

抗ＩＬ－１１抗体又はＩＬ－１１拮抗薬；
ＫＤ－０２５等のＩＬ－１７拮抗薬；
ボリキシバット（以前はＳＨＰ－６２６として知られた）等の回腸ナトリウム胆汁酸共輸送体阻害剤；
選択的αｖβ１－阻害剤等のインテグリン阻害剤（例えば、ＰＬＮ－１４７４、又はＷｉｌｋｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，８４２，２３９－２４７（２０１９）で報告されているもの）；
ＰＦ－０６８３５９１９等のケトヘキソキナーゼ阻害剤；
メトレレプチン等のレプチン類似体；
混合５－リポキシゲナーゼ／ＰＤＥ３／ＰＤＥ４／ＰＬＣ阻害剤等の５－リポキシゲナーゼ阻害剤（タイペルカスト等）；

アリポジーンティパルボベック等のＬＰＬ遺伝子刺激剤；
シムツズマブ（以前はＧＳ－６６２４として知られた）のような抗ＬＯＸＬ２抗体等のリシルオキシダーゼホモログ２（ＬＯＸＬ２）阻害剤、又はＷＯ２０１７／１３６８７０に開示されたもの等の小分子阻害剤；
ＭＣＣ９５０等のＮＯＤ様受容体ファミリーピリンドメイン含有タンパク質３（ＮＬＲＰ３）インフラマソーム小分子阻害剤；
オメガ－３多価不飽和脂肪酸及びその誘導体（例えば、イコサブテート及びＵＳ８，７３５，４３６ Ｂ２に開示された例；
２５－ヒドロキシコレステロール３－サルフェート及び２５－ヒドロキシコレステロール３、２５－ジサルフェート等のオキシステロールサルフェート；

ＡＳＰ－９８３１等のＰＤＥ４阻害剤；
ＰＰＡＲα作動薬（例えば、混合ＰＰＡＲα／δ作動薬エラフィブラノール（以前はＧＦＴ－５０５として知られた）、混合ＰＰＡＲα／γ／δ作動薬ラニフィブラノール、又は混合ＰＰＡＲα／γ作動薬サログリタザール）；
ピオグリタゾン等のＰＰＡＲγ作動薬；
セラデルパー等のＰＰＡＲδ作動薬；
ＫＤ－０２５等のＲｈｏ関連プロテインキナーゼ２（ＲＯＣＫ２）阻害剤；
レモグリフロジンエタボネート等のナトリウムグルコーストランスポーター－２（ＳＧＬＴ２）阻害剤；
リコグリフロジン等のナトリウムグルコーストランスポーター－１／２（ＳＧＬＴ１／２）阻害剤；
アラムコール又はＣＶＴ－１２８０５等のステアロイルＣｏＡデサチュラーゼ－１阻害剤；
ＭＧＬ－３１９６又はＶＫ２８０９等の甲状腺ホルモン受容体β作動薬；

腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）リガンド阻害剤；
メルカプタミン等のトランスグルタミナーゼ阻害剤及びトランスグルタミナーゼ阻害剤前駆体；
Ａ１１９５０５，Ａ２２０４３５，Ａ３２１８４２，ＣＰＴ６３３，ＩＳＩＳ－４０４１７３，ＪＴＴ－５５１，ＭＸ－７０１４，ＭＸ－７０９１，ＭＸ－７１０２，ＮＮＣ－５２１２４６，ＯＴＸ－００１，ＯＴＸ－００２，又はＴＴＰ８１４等のＰＴＰｌｂ阻害剤；並びに、
ナマシズマブ；カンナビノイド１受容体（ＣＢ１）を不活性型に安定化させる抗体（ナマシズマブ。

いくつかの実施形態では、１以上のさらなる治療剤は、アセチルサリチル酸、アリポジーンティパルボベック、アラムコール、アトルバスタチン、ＢＬＸ－１００２、セニクリビロク、コビプロストン、コレセベラム、エムリカサン、エナラプリル、ＧＦＴ－５０５、ＧＲ－ＭＤ－００２、ヒドロクロロチアジド、イコサペント エチルエステル（エイコサペンタエン酸エチル）、ＩＭＭ－１２４Ｅ、ＫＤ－０２５、リナグリプチン、リラグルチド、メルカプトアミン、ＭＧＬ－３１９６、オベチコール酸、オレソキシム。ペグイロデカキン、ピオグリタゾン、ＧＳ－９６７４、レモグリフロジン エタボネート、ＳＨＰ－６２６、ソリスロマイシン、ティペルカスト、ＴＲＸ－３１８、ウルソデオキシコール酸、及びＶＢＹ－３７６から選択される。

いくつかの実施形態では、１又は複数のさらなる治療薬の１つは、アセチルサリチル酸、アリポジーンチパルボベック、アラムコール、アトルバスタチン、ＢＬＸ－１００２、及びセニクリビロックから選択される。

一実施形態では、本発明は、以下の方法に関する：

プロテインキナーゼＭＫＫ４の阻害；
プロテインキナーゼＪＮＫ１及びＭＫＫ７よりもＭＫＫ４を選択的に阻害し、肝再生を促進すること、又は肝細胞死を防止すること；
急性、急性増悪した、又は慢性の肝疾患の治療；

急性及び慢性の、又は急性増悪した肝疾患、例えば、Ｂ型、Ｃ型、Ｅ型肝炎、エプスタイン・バー・ウイルス、サイトメガロウイルス、単純ヘルペスウイルス及び他のウイルスによる肝炎等の急性及び慢性ウイルス性肝炎、全てのタイプの自己免疫性肝炎、原発性硬化性肝炎、アルコール性肝炎の治療；

代謝性肝疾患、例えば、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）等の脂肪肝、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性脂肪肝炎（ＡＳＨ）、ウィルソン病（Ｍｏｒｂｕｓ Ｗｉｌｓｏｎ）、ヘモクロマトーシス、α１－アンチトリプシン欠乏症、グリコーゲン貯蔵疾患の治療；

全てのタイプの肝硬変、例えば、原発性胆汁性肝硬変、エチル中毒性肝硬変、特発性肝硬変の治療；

急性（劇症）又は慢性肝不全、例えば、アセトアミノフェン（パラセタモール）誘発性肝不全、α－アマニチン誘発性肝不全、薬物誘発性肝毒性、例えば、抗生物質、非ステロイド性抗炎症薬及び抗痙攣薬によって引き起こされる肝不全、ハーブサプリメント（カバ、エフェドラ、スカルキャップ、ペニーロイヤル等）によって引き起こされる急性肝不全等の中毒性肝不全、バッドキアリ症候群等の血管疾患による肝疾患及び肝不全、原因不明の急性肝不全、右心不全による慢性肝疾患の治療；

ガラクトース血症、嚢胞性線維症、ポルフィリン症、肝虚血灌流障害、肝移植後の過小グラフト症候群、原発性硬化性胆管炎もしくは肝性脳症の治療；又は、

変形性関節症もしくは関節リウマチの治療；

該方法は、上で定義された化合物又は組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む。

一実施形態において、本発明の化合物は、治療される対象の０．２～１５ｍｇ／ｋｇ又は０．５～１２ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される。化合物は１日１回又は数回投与することができる。化合物は４～１２週間にわたって投与される。

以下の実施例は、本発明を限定することなく説明する。

略語：
ＡＴＰ ＝ アデノシン三リン酸
ＤＣＭ ＝ ジクロロメタン
４－ＤＭＡＰ ＝ （４－）ジメチルアミノピリジン
ＤＭＡ ＝ ジメチルアセトアミド
ＤＭＦ ＝ ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ＝ ジメチルスルホキシド
ＤＰＰＡ ＝ ジフェニルホスホリルアジド
ＤＴＴ ＝ ジチオスレイトール
ＥｔＯＨ ＝ エタノール
ＥｔＯＡｃ ＝ 酢酸エチル

ＦＣＣ ＝ フラッシュカラムクロマトグラフィー
ＨＥＰＥＳ ＝ ２－（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジニル）－エタンスルホン酸
ＨＯＢｔ ＝ ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ ＝ 高速液体クロマトグラフィー
ＩＰＡ ＝ イソプロピルアルコール（又はｉＰｒＯＨ）
ＬＣＭＳ ＝ 液体クロマトグラフィー質量分析
ＭｅＣＮ ＝ アセトニトリル
ＭｅＯＨ ＝ メタノール
ＮａＨＣＯ_３ ＝ 炭酸水素ナトリウム
ＮＢＳ ＝ Ｎ－ブロモスクシンイミド

ＮＭＰ ＝ Ｎ－メチルピロリドン
ＮＭＲ ＝ 核磁気共鳴
Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２ ＝ ［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）二塩化物
ＰＥ ＝ 石油エーテル
ｒｔ又はＲＴ ＝ ＲＴ
ＴＥＡ ＝ トリエチルアミン
ＴＦＡ ＝ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ ＝ テトラヒドロフラン
ＴＬＣ ＝ 薄層クロマトグラフィー

［実施例］
実施例０１：２，４－ジフルオロ－３－ニトロ安息香酸の合成
化学式：Ｃ_７Ｈ_３Ｆ_２ＮＯ_４（ＭＷ：２０３．１０）

工程１：１－ブロモ－２，４－ジフルオロ－３－ニトロベンゼンの合成
Ｈ_２ＳＯ_４（４００ｍＬ）中の１，３－ジフルオロ－２－ニトロベンゼン（１ｅｑ．、５０．０ｇ、３１４．２９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＮＢＳ（１．２０ｅｑ．、６７．１２ｇ、３７７．１４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を８０℃に１６時間加熱した。反応をＴＬＣ（１００％ヘキサン）でモニターし、完了後、反応混合物を氷冷水に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２Ｌ）で抽出した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液及びブラインで洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物をＦＣＣ（ｎ－ヘキサン中の勾配１－５％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、１－ブロモ－２，４－ジフルオロ－３－ニトロベンゼン（５０ｇ、６７％）を黄色の液体として得た。

分析データ：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．７８－７．７１（ｍ，１Ｈ），７．０９－７．０３（ｍ，１Ｈ）。

工程２：３－アミノ－２，４－ジフルオロ安息香酸メチルの合成
ＭｅＯＨ（１０００ｍＬ）中の１－ブロモ－２，４－ジフルオロ－３－ニトロベンゼン（１ｅｑ．、６０．０ｇ、２５２．２１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を窒素で１５分間脱気した。ＴＥＡ（５ｅｑ．、１２７．４９ｇ、１２６１．０３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物をさらに５分間脱気した。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２ ｘ ＤＣＭ（０．１０ｅｑ．、２０．５８ｇ、２５．２２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を一酸化炭素で２回フラッシュした。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、さらに一酸化炭素（２００ｐｓｉ）下で１００℃に１２時間加熱した。反応をＴＬＣ（１００％ＤＣＭ）でモニターした。完了後、反応混合物をセライトのパッドを通して濾過し、揮発性物質を減圧下で除去した。未精製のジエチルエーテルを加え、室温で３０分間撹拌し、セライトのパッドを通して濾過し、揮発性物質を減圧下で除去して、３－アミノ－２，４－ジフルオロ安息香酸メチル（３８．０ｇ、未精製）を黄色のシロップとして得た。

分析データ：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ７．０８－６．９６（ｍ，２Ｈ），５．４６（ｓ，２Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ）

工程３：２，４－ジフルオロ－３－ニトロ安息香酸メチルの合成
３０％Ｈ_２Ｏ_２（６８．４０ｍＬ）を撹拌し、ＴＦＡ（２０５ｍＬ）中の３－アミノ－２，４－ジフルオロ安息香酸メチル（１９．０ｇ，１０１．５２ｍｍｏｌ）溶液を室温で６０分間かけて滴下した。反応混合物を８０℃で１時間撹拌した。反応をＴＬＣ（ヘキサン中３０％ＥｔＯＡｃ）でモニターした。完了後、反応混合物を砕いた氷に注ぎ、得られた沈殿物を濾過し、水で洗浄した。未精製の化合物を真空下で乾燥させて、２，４－ジフルオロ－３－ニトロ安息香酸メチル（１９．０ｇ、未精製）を薄茶色の固体として得た。これをさらに精製することなく次の反応に使用した。

分析データ：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ８．３０－８．２１（ｍ，１Ｈ），７．６２（ｔ，Ｊ＝９．２９Ｈｚ，１Ｈ），３．９０（ｄ，Ｊ＝０．９８Ｈｚ，３Ｈ）。

工程４：２，４－ジフルオロ－３－ニトロ安息香酸の合成
ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の２，４－ジフルオロ－３－ニトロ安息香酸メチル（１９．０ｇ、８７．５１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｈ_２Ｏ（１００ｍＬ）に溶解したＬｉＯＨｘＨ_２Ｏ（１．２０ｅｑ．、４．４０ｇ、１０５．０１ｍｍｏｌ）を３０分かけて室温で一部分ずつ加えた。反応混合物をさらに室温で３時間撹拌した。反応をＴＬＣ（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ）でモニターした。完了後、反応混合物を１Ｎ ＨＣｌ溶液で中和し、減圧下で濃縮した。得られた粗生成物を１Ｎ ＨＣｌ溶液で酸性化し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、２，４－ジフルオロ－３－ニトロ安息香酸（１５．５０ｇ、未精製）をオフホワイトの固体として得た。

分析データ：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１３．８５（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．２７－８．１６（ｍ，１Ｈ），７．６２－７．５３（ｍ，１Ｈ）。

実施例０２：Ｎ－（３－（１－（２，６－ジクロロベンゾイル）－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－カルボニル）－２，６－ジフルオロフェニル）プロパン－１－スルホンアミドの合成
化学式：Ｃ_３０Ｈ_２８ＢＣｌ_２Ｆ_２Ｎ_３Ｏ_６Ｓ（ＭＷ：６７８．３４）

工程１：（５－ブロモ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル）（２，４－ジフルオロ－３－ニトロフェニル）メタノンの合成
工程１ａ：２，４－ジフルオロ－３－ニトロ安息香酸（１２．４ｇ、６０．９ｍｍｏｌ）をニトロメタン（５０ｍｌ、全量の２０％）に懸濁し、塩化オキサリル（５．４４ｍＬ，６３．４ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（０．１９７ｍＬ，２．５４ｍｍｏｌ）を滴下した。

工程１ｂ：第２のフラスコ内で、５－ブロモ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン（１０ｇ、５０．８ｍｍｏｌ）と塩化アルミニウム（３３．８ｇ，２５４ｍｍｏｌ）をニトロメタン（２０４ｍｌ、全量の８０％）に溶解し、約１時間撹拌した。溶液と共にその場で生成した塩化２，４－ジフルオロ－３－ニトロベンゾイルを、１０分間にわたって第２のフラスコに加えた。溶液を５５℃で一晩撹拌した。ＴＬＣ分析は反応の完了を示した。混合物を０℃に冷却し、ＭｅＯＨ（１０２ｍｌ）を滴下して加えた後、生成物が沈殿し始めた。水（１６９ｍｌ）を加え、沈殿物を濾別し、真空内で乾燥させた。生成物はベージュ色の固体として得られた（１５．２ｇ；７５％の収率；９５％の純度）。

分析データ：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１３．１２（ｂｒ ｓ，１Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝２．４５Ｈｚ，１Ｈ），８．５２－８．４８（ｍ，１Ｈ），８．３８－８．３４（ｍ，１Ｈ），８．０７－７．９９（ｍ，１Ｈ），７．６４（ｔ，Ｊ＝９．２９Ｈｚ，１Ｈ）．

工程２：（３－アミノ－２，４－ジフルオロフェニル）（５－ブロモ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル）メタノンの合成
（５－ブロモ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル）－（２，４－ジフルオロ－３－ニトロフェニル）メタノン（１５．１ｇ、３７．５ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（６５９ｍＬ）とＴＨＦ（６５９ｍＬ）に懸濁した。混合物を６０℃に加熱し、塩化スズ（ＩＩ）二水和物（２９．６ｇ、１３１ｍｍｏｌ）を一部分ずつ加えた。２日間撹拌した後、ＴＬＣ分析は反応の完結を示した。混合物を室温に冷却し、半飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を加えた。沈殿物を海砂とセライトのパッドで濾別した。濾液をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で蒸発させた。固体をＭｅＣＮ（５０ｍｌ）に懸濁し、濾別し、真空内で乾燥させた。（３－アミノ－２，４－ジフルオロフェニル）－（５－ブロモ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル）メタノン（１１．９ｇ、３１．８ｍｍｏｌ、収率８５％）が淡いオレンジ色の固体として得られた。

工程３：（３－（３－アミノ－２，４－ジフルオロベンゾイル）－５－ブロモ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－１－イル）（２，６－ジクロロフェニル）メタノンの合成
ＴＨＦ（３３８ｍＬ）中の（３－アミノ－２，４－ジフルオロフェニル）－（５－ブロモ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル）メタノン（１１．９ｇ、３１．７ｍｍｏｌ）の氷浴冷却溶液に、ＴＥＡ（４．６５ｍＬ、３３．３ｍｍｏｌ）を加えた。２，６－ジクロロベンゾイルクロリド（４．６０ｍＬ、３２．１ｍｍｏｌ）を滴下し、続いて４－ジメチルアミノピリジン（０．１９４ｇ、１．５９ｍｍｏｌ）を加えた。氷浴を取り除き、出発物質が完全に消費されるまで混合物を室温で撹拌した。溶媒の量を約１／１０の体積に減少させ、残留物をＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）で希釈した。有機相を１Ｍ ＨＣｌで２回（各１００ｍｌ）、ブラインで１回（１００ｍｌ）洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、残留物をＴＨＦ（６６ｍｌ）に溶解した。ｎ－ヘプタン（３３０ｍｌ）を激しく撹拌しながら一部分ずつ加え、完了後、室温で１時間撹拌を続けた。沈殿物を濾別し、真空で乾燥させた。（３－アミノ－２，４－ジフルオロフェニル）－［５－ブロモ－１－（２，６－ジクロロベンゾイル）ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル］メタノンが、ベージュ色の固体として得られた（１４．７ｇ、２６．５ｍｍｏｌ、８４％の収率）。

工程４：Ｎ－（３－（５－ブロモ－１－（２，６－ジクロロベンゾイル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－カルボニル）－２，６－ジフルオロフェニル）プロパン－１－スルホンアミドの合成
工程４ａ：ＴＨＦ（７６．２ｍＬ）中の（３－アミノ－２，４－ジフルオロフェニル）－［５－ブロモ－１－（２，６－ジクロロベンゾイル）ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル］メタノン（８．００ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）の冷却溶液（－１０℃、ＭｅＯＨ／氷）に、ＴＥＡ（１５．５ｍＬ、１１１ｍｍｏｌ）を加えた。ＴＨＦ（３．６ｍＬ）中の１－プロパンスルホニルクロリド（３．５８ｍＬ、３１．８ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、ＴＬＣが完了を示すまで、反応混合物を－１０℃で撹拌した。

工程４ｂ：冷溶液に２Ｎ ＮａＯＨ（８ｅｑ．、６１ｍＬ）を加え、溶液を室温に温めた。ＴＬＣがジスルホンアミドの完全な加水分解を示した後、混合物を１Ｍ ＨＣｌ（ｐＨ＝２）で酸性化し、ＥｔＯＡｃで２回抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を真空で除去した。残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に溶解し、さらなる沈殿物が形成されなくなるまでｎ－ペンタンで処理した。固体を濾別し、真空で乾燥させた（生成物の主要画分）。濾液を減圧下で濃縮し、溶離液としてＰＥ／ＥＥ ３０％を使用するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した（生成物の２番目の画分）。

工程５：（３－（３－アミノ－２，４－ジフルオロベンゾイル）－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－１－イル）（２，６－ジクロロフェニル）メタノンの合成
乾燥１，４－ジオキサン（１００ｍＬ）中の（３－（３－アミノ－２，４－ジフルオロベンゾイル）－５－ブロモ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－１－イル）（２，６－ジクロロフェニル）メタノン（１ｅｑ．、７．０ｇ、１３．３３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ビス（ピナコラト）二ホウ素（１．２０ｅｑ、４．０６ｇ、１６．００ｍｍｏｌ）を加え、続いて酢酸カリウム（溶融、２．５０ｅｑ、３．２８ｇ、３３．３３ｍｍｏｌ）を加えた。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２×ＤＣＭ（０．０５ｅｑ．、０．５４ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を混合物に加え、撹拌を８０℃で３時間続けた。反応の進行をＴＬＣ（ヘキサン中２０％ＥｔＯＡｃ）及びＬＣ－ＭＳでモニターした。完了後、反応混合物を室温に冷却し、セライトのパッドを通して濾過した。得られた有機層を減圧下で濃縮した。得られた粗生成物をジエチルエーテル（２００ｍＬ）に溶解し、濾過し、有機層を減圧下で濃縮した。粗生成物をアセトニトリルで磨砕し、続いて濾過して、（３－（３－アミノ－２，４－ジフルオロベンゾイル）－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－１－イル）（２，６－ジクロロフェニル）メタノン５（７．０ｇ、）を薄茶色の固体として得た。

実施例０３：４－（３－（２，４－ジフルオロ－３－（プロピルスルホンアミド）ベンゾイル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－５－イル）－Ｎ－（２－ヒドロキシエトキシ）ベンズアミドの合成
工程１：４－ブロモ－Ｎ－（２－ヒドロキシエトキシ）ベンズアミドの合成

４－ブロモベンゾイルクロリド（１ｅｑ．、０．２００ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍｌ）に溶解し、トリエチルアミン（４ｅｑ．、０．２６２ｍｇ、３．６４ｍｍｏｌ）を加え、続いて２－（アミノオキシ）エタン－１－オールを加えた（１ｅｑ．、０．０７０ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）。反応をＴＬＣでモニターした。室温で１６時間撹拌した後、反応混合物を氷冷水に注ぎ、ＤＣＭ（１０ｍｌ）で抽出した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、次に減圧下で濃縮して、粗化合物を得た。カラムクロマトグラフィーにより粗化合物を精製し、４－ブロモ－Ｎ－（２－ヒドロキシエトキシ）ベンズアミド（０．１２０ｇ、５０％）を得た。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１１．８５（ｓ，１Ｈ），７．７２（ｍ，４Ｈ），４．７６（ｓ，１Ｈ），３．９２（ｍ，２Ｈ），３．６０（ｍ，２Ｈ）
ＬＣＭＳ：２６０．８０［Ｍ＋Ｈ］^＋，２６１．８０［Ｍ＋Ｈ］^＋，２６１．８［Ｍ＋Ｎａ］^＋，２６０．８［Ｍ＋Ｎａ］^＋

工程２：４－（３－（２，４－ジフルオロ－３－（プロピルスルホンアミド）ベンゾイル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－５－イル）－Ｎ－（２－ヒドロキシエトキシ）ベンズアミド

Ｎ－（３－（１－（２，６－ジクロロベンゾイル）－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－カルボニル）－２，６－ジフルオロフェニル）プロパン－１－スルホンアミド（１８０ｍｇ、０．２６５ｍｍｏｌ）、４－ブロモ－Ｎ－（２－ヒドロキシエトキシ）ベンズアミド（７５ｍｇ、２９０ｍｍｏｌ）及びフッ化カリウム（４６．２ｍｇ、０．７９５ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（０．９ｍＬ）と水（０．４５ｍＬ）に懸濁し、アルゴンで５分間脱気した。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２（８．０９ｍｇ、０．０１１１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を９０℃に６時間加熱した。溶媒を蒸発させ、残留物を１０ｍＬのＭｅＯＨに溶解した。炭酸カリウム（１ｇ）を加え、混合物を室温で撹拌した。６時間後、水を加え、ＨＣｌ水溶液（１Ｎ）でｐＨを約７に調整した。水相をＥｔＯＡｃで３回抽出し、合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を真空で除去した。生成物を分取ＲＰ－ＨＰＬＣにより精製した。

分析データ：
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１２．９４（ｓ，１Ｈ），１１．８５（ｓ，１Ｈ），９．６６（ｓ，１Ｈ），８．７４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），８．１０（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｄｄ，Ｊ＝１９．２，８．２Ｈｚ，４Ｈ），７．７０－７．５８（ｍ，１Ｈ），７．３５（ｔ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），４．７９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９５（ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，２Ｈ），３．６９－３．６１（ｍ，２Ｈ），３．１８－３．１０（ｍ，２Ｈ），１．８８－１．７７（ｍ，２Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．
ＬＣ－ＭＳ：５５９．２０［Ｍ＋Ｈ］^＋．

実施例２及び３と同様に、以下の生成物を調製した：

実施例１５：生物活性
本発明の化合物のキナーゼ活性は、ＰｒｏＱｉｎａｓｅ ＧｍｂＨ（フライブルク，ドイツ）が提供する３３ＰａｎＱｉｎａｓｅ（商標）アッセイサービスを用いて測定した。アッセイ条件の詳細は、ＰｒｏＱｉｎａｓｅのウェブサイト（https://www.proqinase.com/products-services-biochemical-assay-services/kinase-assays）に開示されている。
要約すると、全てのキナーゼアッセイは、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（ボストン，ＭＡ，ＵＳＡ）の９６ウェル ＦｌａｓｈＰｌａｔｅｓ（商標）を用いて、５０μｌの反応量で実施した。反応カクテルは、以下の順序で４つのステップでピペッティングした。
・２０μｌのアッセイバッファー（標準バッファー）
・５μｌのＡＴＰ溶液（Ｈ_２Ｏ溶液）
・５μｌの被験化合物（１０％ＤＭＳＯ液）
・２０μｌの酵素／基質ミックス

全てのタンパク質キナーゼアッセイは、７０ｍＭ ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ ｐＨ７．５、３ｍＭ ＭｇＣｌ_２、３ｍＭ ＭｎＣｌ_２、３μＭ Ｎａ－オルトバナジン酸、１．２ｍＭ ＤＴＴ、５０μｇ／ｍｌ ＰＥＧ２００００、ＡＴＰ（可変濃度、各キナーゼの見かけのＡＴＰ－Ｋｍに対応）、［γ－３３Ｐ］－ＡＴＰ（ウェルあたり約８×１００５ｃｐｍ）、タンパク質キナーゼ及び基質を含んでいた。
反応カクテルを３０℃で６０分間インキュベートした。反応を５０μｌの２％（ｖ／ｖ）Ｈ_３ＰＯ_４で停止し、プレートを吸引し、２００μｌの０．９％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌで２回洗浄した。^３３Ｐｉの導入は、マイクロプレートシンチレーションカウンター（Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ、Ｗａｌｌａｃ）を用いて決定した。
全てのアッセイは、ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ／ＳＡＧＩＡＮＴＭコアシステムで行った。

単一濃度アッセイの場合、試験化合物の有効性は残存活性％として表される。ＩＣ５０値を決定するために、１００μＭ～３ｎＭ（１０濃度）の最終濃度範囲で段階的希釈を試験した。ＩＣ５０値の決定のための適合モデルは、パラメータ「頂点（ｔｏｐ）」を１００％に固定し、「底（ｂｏｔｔｏｍ）」を０％に固定した「シグモイド応答（可変勾配）」であった。使用した適合方法は最小二乗法であった。

ＭＫＫ４有効性：

ＢＲａｆ、ＪＮＫ１、及びＭＫＫ７に対する試験化合物の選択性は、全てオフターゲットと称され、ＩＣ５０（オフターゲット）／ＩＣ５０（ＭＫＫ４）の比によって計算され、以下の通り分類された：

結果を以下の表１に示す。

Claims (7)

1. 式（Ｉ）を有する化合物、または、その薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは光学異性体：
   

   

   式中、
   Ｒ^１は、Ｈ、又はアルキル；
   Ｒ^２は、Ｈ、又はアルキル；
   Ｒ^４は、Ｈ、又はアルキル；
   Ｒ^６は、Ｈ、又はアルキル；
   Ｒ^Ｗは、－ＮＲ^１０ＳＯ_２Ｒ^１２；
   Ｒ^１０は、Ｈ、アルキル、又はフェニルアルキル；
   Ｒ^１２は、Ｈ、アルキル、又はフェニルアルキル（フェニル基は、アルキル及びハロゲンから独立して選択される１もしくは２個の基で任意に置換されている）；
   Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、Ｒ^ｚ、及びＲ^ｚｚは、以下から選択される：
   ａ）Ｒ^ｘとＲ^ｙはＦであり、Ｒ^ｚとＲ^ｚｚはＨである；及び、
   ｂ）Ｒ^ｘ、Ｒ^ｙ、及びＲ^ｚｚはＦであり、Ｒ^ｚはＨである；
   Ｒ^５は、以下から独立して選択される１、２又は３個の基で置換されたフェニルである：
   －ＰＯジ（アルキル）；及び、
   ヒドロキシアルキル－ＯＮＨ－ＣＯ－。
2. 式（Ｉａ）又は式（Ｉｂ）を有する、請求項１に記載の化合物、または、その薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは光学異性体。
   

   

   
3. Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^４、及びＲ^６がＨである、請求項１または２に記載の化合物、または、その薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは光学異性体。
4. 以下から選択される化合物、または、その薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは光学異性体。
   

   

   

   
5. 請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは光学異性体を含む医薬組成物。
6. プロテインキナーゼＪＮＫ１及びＭＫＫ７よりもプロテインキナーゼＭＫＫ４を選択的に阻害するために使用するための、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは光学異性体、あるいは、請求項５に記載の医薬組成物。
7. 肝再生の促進又は肝細胞死の防止に使用するための、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物、または、その薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは光学異性体、あるいは、請求項５に記載の医薬組成物。