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JP7510518B2 - 抗ｃ－Ｍｅｔ抗体薬物複合体及びその応用 - Google Patents

抗ｃ－Ｍｅｔ抗体薬物複合体及びその応用 Download PDF

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Description

本発明は、抗体薬物複合体の分野に関し、具体的には、ｃ－Ｍｅｔを標的とする抗体薬物複合体及びその応用に関する。
ｃ－Ｍｅｔ（ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｍｅｔ）は、癌原遺伝子であり（文献１：Ｅｄａｋｕｎｉ Ｇ，Ｓａｓａｔｏｍｉ Ｅ，Ｓａｔｏｈ Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ／ｃ－Ｍｅｔ ｐａｔｈｗａｙ ｉｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｔ ｔｈｅ ｃａｎｃｅｒ ｆｒｏｎｔ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．［Ｊ］．Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２０１０，５１（３）：１７２－１７８）、転写・翻訳された生成物が肝細胞増殖因子受容体であり、ＨＧＦ（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）と一致するように、その前駆体が単鎖で様々な修飾の後にα鎖とβ鎖に切断され、ジスルフィド結合により連結されている。ｃ－Ｍｅｔは、細胞で主に細胞内と細胞外の２つの部分に分けられる。そのβ鎖は、細胞外ドメインがＳＤ（Ｓｅｍａ ｄｏｍａｉｎ）領域、ＰＳＩＤ（ｐｌｅｘｉｎ－ｓｅｍａｐｈｏｒｉｎ－ｉｎｔｅｇｒｉｎ）領域及びＩＰＴＤ（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ－ｌｉｋｅ ｒｅｇｉｏｎｓ ｉｎ ｐｌｅｘｉｎｓ ａｎｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ）領域を含み、細胞内領域が主にＪＤ（ｊｕｘｔａｍｅｍｂｒａｎｅ ｄｏｍａｉｎ）及びＴＫＣＤ（ａ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｄｏｍａｉｎ （ＴＫ ｄｏｍａｉｎ）ａｎｄ ａ ｃ－ｔｅｒｍｉｎａｌ ｄｏｃｋｉｎｇ ｓｉｔｅ）を含む（文献２：Ｓａｔｔｌｅｒ Ｍ，Ｒｅｄｄｙ Ｍ Ｍ，Ｈａｓｉｎａ Ｒ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃ－Ｍｅｔ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｙ［Ｊ］．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１１，３（４）：１７１－８４．）。ｃ－Ｍｅｔは、ＨＧＦの受容体であり、ＨＧＦがｃ－Ｍｅｔに結合すると、ｃ－Ｍｅｔの構造が変化し、細胞内のタンパク質チロシンキナーゼが活性化されることにより、自身の構造が主にＴｒｙ１２３５とＴｒｙ１２３４部位でリン酸化され、ｃ－Ｍｅｔが活性化されると、β鎖の末端にあるＴｒｙ１３４９とＴｒｙ１２５６がリン酸化される（文献３：Ｐｅｒｕｚｚｉ Ｂ ，Ｂｏｔｔａｒｏ Ｄ Ｐ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ｃ－Ｍｅｔ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００６，１２（１２）：３６５７－３６６０）。ＨＧＦがｃ－Ｍｅｔに結合すると、複数のシグナル経路：第一、細胞骨格の動きを引き起こすＲａｓ－Ｒａｃシグナル経路、第二、細胞の分裂と分化を促進するＲａｓ－ＭＡＰＫカスケード、第三、細胞の移動と浸潤を促進するＰＩ３Ｋ－ＦＡＫシグナル経路、第四、細胞の生存を促進するＰＩ３Ｋ－ＡＫＴシグナル経路がトリガーされる。ＨＧＦ／ｃ－Ｍｅｔシグナル経路は、腫瘍細胞の増殖と移動を促進する。
ｃ－Ｍｅｔは、頭頸部扁平上皮癌と下咽頭癌をはじめとする、腎細胞癌や、結腸・直腸癌、肺腺癌、卵巣がん、肝臓癌、乳がん、膀胱癌、非小細胞癌、胃癌などの多くの腫瘍細胞で過剰発現され、ｃ－Ｍｅｔが腫瘍細胞で高発現されるのに対して正常細胞で低発現されることにより、標的治療においてｃ－Ｍｅｔが優れた標的となっている。
抗体薬物複合体（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，ＡＤＣ）は、生物活性を有する薬物（Ｄｒｕｇ）と抗体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ）とを化学的リンカー（Ｌｉｎｋｅｒ）により連結される一種の生物薬剤である。近年、幾つの抗体薬物複合体は、悪性腫瘍の治療にブレークスルーを取得し、手術、化学療法、放射線療法に次ぐ主要な新治療法となっている。しかし、２０２１年３月まで、世界中で承認された抗体複合薬物（米国ＦＤＡが１０品名、日本ＰＭＤＡが１品目）は１１種類しかないし、承認された適応症の種類も少ないし、悪性腫瘍患者の臨床的ニーズがまだまだ満たされていない。
現在、研究段階又は臨床段階にあるｃ－Ｍｅｔを標的とする生物薬剤としては、モノクローナル抗体が中心となり、抗体薬物複合体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，ＡＤＣ）系薬物が少ない（文献４：ＬＩＬＩＡＮＥ ＧＯＥＴＳＣＨ，Ａ．Ｊ．Ａｎｔｉ－ＣＭＥＴ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ ｉｔｓ ｕｓｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ．ＷＯ２０１１０２０９２５ Ａ１，２０１２）。そこで、Ｈｅｎｇｒｕｉ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｃｏ Ｌｔｄにより開発された注射用ＳＨＲ－Ａ１４０３は、ヒト化抗ｃ－Ｍｅｔモノクローナル抗体と微小管阻害剤とを化学的に複合して形成されたＡＤＣであり、腫瘍細胞の表面にあるｃ－Ｍｅｔに結合することにより、抗体薬物複合体が腫瘍細胞にエンドサイトーシスされた後、リソソームで分解された後に小分子毒素を放出することができ、腫瘍細胞を殺す役割を果たす（文献５：Ｋｉ－Ｈｙｕｎ Ｋｉｍ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｂａｓｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＨＧＦ－ｃＭＥＴ ａｘｉｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１７）４９，ｅ３０７）。ＳＨＲ－Ａ１４０３は、２０１７年１月にＦＤＡにより米国での臨床試験が承認され、ＦＤＡ（ｈｔｔｐｓ：／／ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ０３８５６５４１？ｔｅｒｍ＝ＳＨＲ－Ａ１４０３＆ｒａｎｋ＝１）の公式ウェブサイトによると、その第Ｉ相の臨床試験が患者を募集しているところである。
ＡＢＢＶｉｅ社により開発されたＡＢＢＶ－３９９も、米国で第Ｉ相臨床試験段階にあり、ＡＢＴ－７００抗体とＭＭＡＥとの複合体であり、ＤＡＲ（Ｄｒｕｇ－ｔｏ－ａｎｔｉｂｏｄｙ ｒａｔｉｏ）値が３．１であり、ｃ－Ｍｅｔ過剰発現の非小細胞肺癌を治療するのに使用される。ｃ－Ｍｅｔの初期臨床試験の研究結果により、ＡＢＢＶ－３９９はｃ－Ｍｅｔ陽性の癌細胞に対して細胞毒性作用を生じる可能性があることが示された。第Ｉ相臨床試験（ＮＣＴ０２０９９０５８）では、２９名のｃ－Ｍｅｔ陽性のＮＳＣＬＣ患者を対象として、ＡＢＢＶ－３９９単独投与又はエルロチニブとの併用の安全性及び有効性について、予備的に調査された。単回投与コホートでは、１０％以上の患者が疲労や、吐き気、神経痛、吐き気（それぞれ４３．８％、３７．５％、２５％及び１８．８％）を主とした副作用を経験した。単回投与群では、３／１６名の患者が部分寛解を３．１～１１．１ヶ月間続いて経験した。１２週間投与後、単回投与群では、５６．３％の患者の病状がコントロールされた。併用投与群では、１０％以上の患者が神経痛や吐き気を主とした副作用（それぞれ４６．２及び２３．１％）を経験し、この群の４／１３名の患者が部分寛解を２．８～９．１ヶ月間続いて経験した（ただし、そのうち１人ではまだ確認されていない）。１２週間の治療後、併用投与群における７６．９％の患者の病状がコントロールされた。単回投与群及び併用投与群のいずれにおいても、治療に関連した死亡例は見られなかった。試験結果、ＡＢＢＶ－３９９は、２．７ｍｇ／ｋｇの用量で忍容性が良好であり、ＨＧＦ陽性のＮＳＣＬＣ患者に対しても良好な抗腫瘍活性を示すことが確認された（文献６：Ｗａｎｇ Ｊ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｍ Ｇ，Ｏｌｅｋｓｉｊｅｗ Ａ，ｅｔ ａｌ．ＡＢＢＶ－３９９，ａ ｃ－Ｍｅｔ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｔｈａｔ Ｔａｒｇｅｔｓ Ｂｏｔｈ ＭＥＴ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｃ－Ｍｅｔ Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ Ｔｕｍｏｒｓ， Ｉｒｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｆ ＭＥＴ Ｐａｔｈｗａｙ Ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ［Ｊ］．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１６，２３（４）：９９２－１０００．）。２０１６年にＡＢＢＶｉｅが発表した最新のデータによると、Ｈ－ｓｃｏｒｅ≧１５０のＮＳＣＬＣ患者がＡＢＢＶ－３９９により治療された後、約１９％が部分寛解を経験し、ＡＢＢＶ－３９９の耐用量が３週間ごとに２．７ｍｇ／ｋｇであり、最も頻繁に発生する毒性反応が疲労（２５％）、吐き気（２３％）、神経痛（１５％）、食欲減退（１３％）、嘔吐（１３％）及び下痢（１０％）であった（文献７：Ａｎｇｅｖｉｎ Ｅ，Ｋｅｌｌｙ Ｋ，Ｈｅｉｓｔ Ｒ，ｅｔ ａｌ．Ｆｉｒｓｔ－ｉｎ－ｈｕｍａｎ ｐｈａｓｅ １，ｄｏｓｅ－ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ ａｎｄ －ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＡＢＢＶ－３９９，ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ （ＡＤＣ） ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｃ－Ｍｅｔ，ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ （ｐｔｓ） ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ［Ｊ］．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１６，２７（ｓｕｐｐｌ＿６）。
ｃ－Ｍｅｔを標的とする臨床段階に入った抗体は数十個であるが、腫瘍の治療効果は満足のいくものではない。ＡＤＣ薬物によれば、これらのよく標的化されたモノクローナル抗体と細胞毒素を効果的に組み合わせて、標的化を維持しながら細胞への殺傷作用を増強することができる。現在、ｃ－Ｍｅｔを標的とするＡＤＣの開発は比較的遅く、臨床段階にあるものは少なく、ＡＢＢＶｉｅのＡＢＢＶ－３９９及びＨｅｎｇｒｕｉ ＭｅｄｉｃｉｎｅのＳＨＲ－Ａ１４０３のように初期の臨床段階にあり、この２つのＡＤＣが臨床試験の第Ｉ相にあり、医薬品の安全性及び有効な標的適応症はまだ調査中である。従って、効果的な治療のためにより多くの標的適応症を拡充できるように、臨床では有効性及び安全性のより良い抗ｃ－Ｍｅｔの抗体薬物複合体の開発が求められている。
本発明は、ｃ－Ｍｅｔを標的とする抗体又はその抗原結合断片及びがんの治療におけるその使用を提供する。本発明は、さらに、上記抗体を含む抗体薬物複合体（ＡＤＣ）、上記ｃ－Ｍｅｔ抗体をコードするヌクレオチド、ポリヌクレオチドの組み合わせ、発現ベクター及び宿主細胞、上記ｃ－Ｍｅｔの抗体、抗体薬物複合体を含む医薬組成物及びがんを治療又は予防するための薬物の調製におけるそれらの使用を提供する。
具体的には、本発明は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含むヒト化抗体又はその抗原結合断片であって、
（１）重鎖可変領域が、配列番号７に示される配列、或いは配列番号７と同じＣＤＲ１～３を有し、かつ配列番号７と比較して同一性が８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％を超える配列を有し、かつ／又は
（２）軽鎖可変領域が、配列番号８に示される配列、或いは配列番号８と同じＣＤＲ１～３を有し、かつ配列番号８と比較して同一性が８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％を超える配列を有する、ｃ－Ｍｅｔを標的とするヒト化抗体又はその抗原結合断片を提供する。
いくつかの好ましい実施形態では、前記ヒト化抗体又はその抗原結合断片は、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、前記抗原結合断片を含む組換えタンパク質、又はＦａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）2断片、Ｆｖ断片、ｄＡｂ、Ｆｄ、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）から選択される。
いくつかの好ましい実施形態では、前記抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４から選択された免疫グロブリンの定常領域をさらに含む。
いくつかの特定の実施形態では、前記抗体又はその抗原結合断片の重鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号７に示され、かつ／又は前記抗体又はその抗原結合断片の軽鎖可変領域のアミノ酸配列は配列番号８に示される。
前記配列番号７に係るアミノ酸配列は以下の通りである。
Figure 0007510518000002
前記配列番号８に係るアミノ酸配列は以下の通りである。
Figure 0007510518000003
いくつかの他の特定の実施形態では、前記抗体又はその抗原結合断片の重鎖のアミノ酸配列は配列番号９に示され、かつ／又は前記抗体又はその抗原結合断片の軽鎖のアミノ酸配列は配列番号１０に示される。
前記配列番号９に係るアミノ酸配列は以下の通りである。
Figure 0007510518000004
前記配列番号１０に係るアミノ酸配列は以下の通りである。
Figure 0007510518000005
また、本発明は、上記のいずれかの抗体又はその抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチドに関する。
また、本発明は、上記のポリヌクレオチドを含む核酸構築物に関する。
上記の核酸構築物は、発現ベクターであることが好ましい。上記のポリヌクレオチドは、それによってコードされるポリペプチドの宿主細胞又は無細胞発現系における発現を可能にする調節配列に作動可能に連結されている。
また、本発明は、上記のポリヌクレオチド又は発現ベクターを含む宿主細胞に関する。前記宿主細胞は、原核細胞、真核細胞、酵母細胞、哺乳動物の細胞、大腸菌細胞から選択されることが好ましく、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、Ｓｐ２／０細胞又はＢＨＫ細胞であることがさらに好ましい。
また、本発明は、上記核酸構築物の発現を可能にする条件下で上記の宿主細胞を培養する工程と、生成された発現タンパク質を培養物から回収する工程とを含む、上記のいずれかの抗体又はその抗原結合断片の製造方法を提供する。
また、本発明は、上記のいずれかの抗体又はその抗原結合断片と１個又は複数個の治療剤との複合体であるｃ－Ｍｅｔを標的とする抗体薬物複合体を提供する。
いくつかの実施形態では、前記治療剤は、細胞毒性分子、免疫増強剤及び放射線性同位体から選択される。前記細胞毒性分子には、チューブリン阻害剤又はＤＮＡ損傷剤が含まれるが、これらに限定されない。さらに好ましくは、前記チューブリン阻害剤には、ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）及びアウリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）系細胞毒性分子、マイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）系細胞毒性分子が含まれるが、これらに限定されない。前記ＤＮＡ損傷剤には、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）系、デュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）系、アントラマイシン系誘導体ＰＢＤ、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｓ）及びカンプトテシン系誘導体、ＳＮ－３８、Ｄｘｄが含まれるが、これらに限定されない。さらに好ましくは、前記アウリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）系細胞毒性分子には、ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦ又はそれらの誘導体が含まれるが、これらに限定されない。前記マイタンシン系細胞毒性分子には、ＤＭ１、ＤＭ４又はそれらの誘導体が含まれるが、これらに限定されない。
本発明によって提供される抗体薬物複合体は、一般構造式：Ａ－（Ｌ－Ｕ）ｎ（ただし、Ａは、上記のいずれかの抗体又はその抗原結合断片を表し、Ｕは、活性薬物単位であり、Ｌは、抗体又はその抗原結合断片Ａ及び活性薬物単位Ｕにそれぞれ共有結合されている任意の連結基であり、ｎは、１、２、３、４、５、６、７又は８であり、前記Ａは、１つ又は複数の連結基Ｌを介して１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個の活性薬物単位Ｕを連結していることが可能である。）を有することが好ましい。
前記連結基Ｌは、前記ｃ－Ｍｅｔを標的とする抗体又はその抗原結合断片Ａ上のアミノ残基又はスルフヒドリル残基に共有結合されている。好ましくは、前記連結基Ｌは、前記ｃ－Ｍｅｔを標的とする抗体又はその抗原結合断片Ａ上のスルフヒドリル残基に共有結合されている。より好ましくは、前記連結基Ｌは、前記ｃ－Ｍｅｔを標的とする抗体又はその抗原結合断片Ａ上の鎖間ジスルフィド結合が開かれた後に形成されたスルフヒドリル残基に共有結合されている。前記連結基Ｌには、切断可能なリンカー及び切断不可能なリンカーが含まれる。前記切断可能なリンカーはペプチド単位を含む。前記ペプチド単位は２～２０個のアミノ酸を含む。前記ペプチド単位は、－バリン－シトルリン－（－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－）、－グリシン－グリシン－フェニルアラニン－グリシン－（－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－）、－バリン－アラニン－（－Ｖａｌ－Ａｌａ－）、－バリン－リジン－（－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－）、－バリン－アルギニン－（－Ｖａｌ－Ａｒｇ－）、－フェニルアラニン－シトルリン－（－Ｐｈｅ－Ｃｉｔ－）、－フェニルアラニン－リジン－（－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－）、－フェニルアラニン－アルギニン－（－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－）及びそれらの組み合わせから選択されることが好ましい。
いくつかの好ましい実施形態では、前記Ｌは、以下：
Figure 0007510518000006
Figure 0007510518000007
Figure 0007510518000008
からなる群より選ばれる構造を含む。
いくつかの好ましい実施形態では、前記活性薬物単位Ｕは、以下の構造：
Figure 0007510518000009
Figure 0007510518000010
から選択される。
いくつかの好ましい実施形態では、前記抗体薬物複合体は、以下の構造：
また、本発明は、上記のいずれかの抗体又はその抗原結合断片及び／又は抗体薬物複合体と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
また、本発明は、がんを治療又は予防するための薬物の調製における、上記のいずれかの抗体又はその抗原結合断片、ポリヌクレオチド、核酸構築物、発現ベクター、抗体薬物複合体、或いは医薬組成物の使用を提供する。
いくつかの好ましい実施形態では、前記がんはｃ－Ｍｅｔ陽性がんである。
いくつかの特定の実施形態では、前記ｃ－Ｍｅｔ陽性がんは肺癌又は胃癌である。
また、本発明は、必要とする患者に治療の有効量の上記のいずれかの抗体薬物複合体又は医薬組成物を投与することを含む疾患の治療法を提供する。ここで、前記疾患は、ｃ－Ｍｅｔ陽性がんであり、好ましくは肺癌又は胃癌である。
また、本発明は、容器と、前記容器に入れられた、上記のいずれかの抗体、抗体薬物複合体又はその薬学的に許容される塩又は溶媒和物、或いは医薬組成物を含む製剤と、任意選択的な使用説明書とを含むキットを提供する。
また、本発明は、がんを治療又は予防するための薬物の調製における、上記のいずれかの抗体又はその抗原結合断片、抗体薬物複合体、ポリヌクレオチド、核酸構築物、発現ベクター、或いは医薬組成物の使用を提供する。ここで、前記がんは、固形腫瘍である。前記固形腫瘍には、肺癌又は胃癌がさらに含まれる。
また、本発明は、上記のいずれかの抗体又はその抗原結合断片を含む組換えタンパク質を提供する。
上記に記載の組換えタンパク質は、二重特異性抗体又は多重特異性抗体であることが好ましい。前記多重特異性抗体は、三重特異性抗体、四重特異性抗体、五重特異性抗体であることが好ましい。
また、本発明は、組換えタンパク質の調製における上記のいずれかの抗体又はその抗原結合断片の使用を提供する。
図１は、ヒト化抗体ＡＡＪ８Ｄ６及びキメラ抗体ｃＡＡＪ８Ｄ８の親和力の比較図である。 図２は、ヒト化抗体ＡＡＪ８Ｄ６及びＡＢＴ－７００の結合力の比較図である。 図３は、ヒト化抗体ＡＡＪ８Ｄ６、ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ、ＡＡＪ８Ｄ６－ＰＹ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ、及びＡＡＪ８Ｄ６－Ｄ０７－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥのエンドサイトーシス効果図である。 図４Ａは、ヒト化抗体ＡＡＪ８Ｄ６、及びその抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ、並びに対照群のＭＫＮ－４５に対する細胞毒性活性の比較図である。 図４Ｂは、ヒト化抗体ＡＡＪ８Ｄ６、及びその抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ、並びに対照群のＳＮＵ－６２０に対する細胞毒性活性の比較図である。 図４Ｃは、ヒト化抗体ＡＡＪ８Ｄ６、及びその抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ、並びに対照群のＨＴ２９細胞毒性活性の比較図である 図４Ｄは、ヒト化抗体ＡＡＪ８Ｄ６、及びその抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ、並びに対照群のＢＸＰＣ－３に対する細胞毒性活性の比較図である。 図５は、抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ及び抗体薬物複合体ＡＢＴ－７００－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥの最大阻害率の比較図である。 図６は、ＭＫＮ－４５担癌ヌードマウスの移植腫瘍に対する抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ及び対照群の治療効果の比較図である。 図７は、マウス（胃癌ＧＡ００４６）ＰＤＸモデルに対する抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ及び対照群の治療効果の比較図である。 図８は、マウス（肺癌ＬＵ２５０３）ＰＤＸモデルに対する抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ及び対照群の治療効果の比較図である。
［定義］
別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、当業者によって理解されるものと同じ意味を有する。この分野の定義と用語については、当業者がＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ）を具体的に参照すればよい。アミノ酸残基の略語は、当分野で用いられている、２０個の慣用のＬ－アミノ酸を表す標準的な３文字及び／又は１文字コードの１つを指す。
定義
本発明には、数値範囲及びパラメータ近似値の範囲が記載されており、特定の実施例で数値ができるだけ確実に記載されている。ただし、任意の数値は、その自身がそれぞれの測定に存在する標準偏差による一定の誤差を必ず含有するものである。また、本明細書に開示されるすべての範囲は、その中に含まれる任意及びすべてのサブ範囲を包含するということは、理解されよう。例えば、記載されている「１～１０」の範囲は、最小値１と最大値１０の間（端点を含む）の任意及びすべてのサブ範囲、即ち、１～６．１のような１以上の最小値で始まるすべてのサブ範囲、及び５．５～１０のような１０以下の最大値で終わるサブ範囲を含むと見なされるべきである。また、「本明細書に組み込まれる」任意の参考文献は、その全体が組み込まれるということは、理解されよう。
なお、本明細書で使用される単数形は、１つの対象のみを示すことが明示的にかつ明確に限定されない限り、示される該対象の複数形を含むことがあることに留意されたい。「又は」、「或いは」「や」という用語は、文脈が特に明示的に示さない限り、「及び／又は」という用語と交換可能に使用することができる。
本明細書で使用される「医薬組成物」、「組み合わせ薬物」及び「薬物的組み合わせ」という用語は、交換可能に使用されて得、特定の目的を達成するために組み合わせた少なくとも１つの薬物と任意に薬学的に許容される担体又は添加物との組み合わせを意味する。ある実施形態においては、前記医薬組成物は、それと一緒に作用して本発明の目的を達成すれば、時間的及び／又は空間的に分離された組み合わせを含んでも良い。例えば、前記医薬組成物に含まれる成分（例えば、本発明による抗体、核酸分子、核酸分子の組み合わせ及び／又は抗体薬物複合体）は、対象に一括的に又は別々に投与され得る。前記医薬組成物に含まれる成分が対象に別々に投与される場合、前記成分は対象に同時に又は順次に投与されることができる。前記薬学的に許容される担体としては、水、緩衝水溶液、ＰＢＳ（リン酸塩緩衝液）のような等張生理食塩水、グルコース、マンニトール、デキストロース、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、炭酸マグネシウム、０．３％のグリセリン、ヒアルロン酸、エタノール、又はポリプロピレングリコールのようなポリアルキレングリコール、トリグリセリドであることが好ましい。使用される薬学的に許容される担体のタイプは、本発明に係る組成物が経口、経鼻、皮内、皮下、筋肉内、又は静脈内に投与されるものとして処方されるかどうかに依存する。本発明に係る組成物は、添加剤として湿潤剤、乳化剤又は緩衝液物質を含むことができる。
本発明に係る医薬組成物、ワクチン又は医薬製剤は、例えば、経口、経鼻、皮内、皮下、筋肉内又は静脈内などの任意の適切な経路によって投与することができる。
本明細書で使用される「治療剤」という用語は、治療作用（例えば、任意の疾患及び／又は病気を治療、予防、軽減又は阻害する）を発揮できる任意の物質や実体（ｅｎｔｉｔｙ）を指し、化学治療剤や、放射線治療剤、免疫治療剤、熱治療剤（ｔｈｅｒｍａｌｌｙ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｇｅｎｔ）を含むが、これらに限定されない。
本明細書で使用される「ＣＤＲ領域」又は「ＣＤＲ」とは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．によって定義される免疫グロブリンの重鎖及び軽鎖の超可変領域を指す（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ，１９９１，及び第５版以降の版を参考のこと）。３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲがある。場合によっては、本明細書で使用されるＣＤＲ又はＣＤＲｓという用語は、抗原又はその認識エピトープへの抗体の親和力を通じて結合を担当する大半のアミノ酸残基を含む領域の１つ、又はこれらの領域のうちのいくつか又は全部を示すために使用される。
本発明においては、２つの核酸又はアミノ酸の配列間の「一致性」、「同一性」又は「類似性」とは、最適なアラインメント（好適なアラインメント）を実行して得られた、比較される２つの配列が持つ共通ヌクレオチド又は共通アミノ酸残基のパーセンテージを指し、このパーセンテージは、純粹に統計的なものであり、２つの配列間の違いはランダムに分布し、その全長をカバーする。２つの核酸又はアミノ酸の配列間の配列比較は、通常、それらを最適な方法で整列させた後、これらの配列を比較することにより行われ、セグメントにより又は「比較ウィンドウ」により実施することができる。配列を比較するための最適なアラインメントは、手動で実施し得ることに加え、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）［Ａｄ．Ａｐｐ．Ｍａｔｈ．２：４８２］の局所相同性アルゴリズム、Ｎｅｄｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈの（１９７０）［Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３］局所相同性アルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ及びＬｉｐｍａｎの（１９８８）［Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４］類似性検索法、これらのアルゴリズムを使用するコンピューターソフトウェア（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ及びＴＦＡＳＴＡ ｉｎ ｔｈｅ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，又はＢＬＡＳＴ Ｎ ｏｒ ＢＬＡＳＴ Ｐ比較ソフトウェア）により実施することも可能である。
本明細書で使用される「治療有効量」又は「有効量」とは、それが投与される対象に利益を示すのに十分な用量を指す。投与される実際の量、投与の速度、及び時間経過は、治療される対象の自身の状態や重症度に依存する。治療の処方（例えば、用量の決定など）は、最終的には、一般医及び他の医師が、責任を負い、治療される疾患、患者の個人の状態、送達部位、投与方法及び医師に知られている他の要因を通常に考慮した上で決定される。
本明細書で使用される「対象」という用語は、ヒトなどの哺乳動物を指すが、野生動物（例えば、サギ、コウノトリ、ツル）、家畜（例えば、アヒル、ガチョウ）、又は実験動物（例えば、オランウータン、サル、ラット、マウス、ウサギ、モルモット、ウッドチャック、ジリス）などの他の動物であってもよい。
用語「抗体」には、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、又は抗原結合断片を含む組換えタンパク質が含まれる。用語「抗原結合断片」には、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）2断片、Ｆｖ断片、ｄＡｂ、Ｆｄ、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ－Ｆｃ断片、又はダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、或いは化学修飾又はリポソームへの組み込みによって半減期を増加できる任意の断片が含まれる。前記化学修飾としては、例えば、ポリエチレングリコールのようなポリ（アルキレン）グリコールの付加（「ポリエチレングリコール化、ＰＥＧ化」）（Ｆｖ－ＰＥＧ、ｓｃＦｖ－ＰＥＧ、Ｆａｂ－ＰＥＧ、Ｆ（ａｂ’）２－ＰＥＧ、又はＦａｂ’－ＰＥＧのポリエチレングリコール化断片として知られる）（「ＰＥＧ」はポリエチレングリコールを表す）である。ただし、前記断片は、ＥＧＦＲ結合活性を有する。好ましくは、前記機能的断片は、それを由来する抗体の重鎖又は軽鎖の可変鎖の部分配列からなるか、或いはそれらを含む。ただし、前記部分配列は、それを由来する抗体と同じ結合特異性や十分な親和力を十分に保持できるものである。ＥＧＦＲについては、それを由来する抗体の親和力の少なくとも１／１００に等しいものが好ましく、少なくとも１／１０に等しいものがより好ましい。このような機能的断片は、それを由来する抗体配列からの、最低５個のアミノ酸、好ましくは１０、１５、２５、５０及び１００個の連続アミノ酸を含む。
用語「ヒト化抗体」とは、非ヒト抗体に由来するＣＤＲ領域を含み、かつその分子の他の部分が１つ（又は複数）のヒト抗体に由来する抗体を指す。さらに、結合親和力を保持するためには、骨格（ＦＲと呼ばれる）セグメントのいくつかの残基が修飾されてもよい（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－５２５，１９８６；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４－１５３６，１９８８；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３－３２７，１９８８）。本発明に係るヒト化抗体又はその断片は、当業者に知られている技術により調製することができる。
用語「キメラ抗体」とは、可変領域配列がある種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体を指し、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体が挙げられる。本発明によるキメラ抗体又はその断片は、遺伝子組換え技術を使用して調製することができる。例えば、前記キメラ抗体は、プロモーターと、本発明による非ヒト、特にマウスモノクローナル抗体の可変領域をコードする配列と、ヒト抗体の定常領域をコードする配列とを含む組換えＤＮＡをクローニングすることにより製造することができる。このような組換え遺伝子によってコードされる本発明のキメラ抗体は、例えば、マウス－ヒトキメラであり、この抗体の特異性がマウスＤＮＡに由来する可変領域により決定され、またそのアイソタイプがヒトＤＮＡに由来する定常領域により決定される。キメラ抗体の調製方法については、例えば、Ｖｅｒｈｏｅｙｎ ｅｔ ａｌ．（ＢｉｏＥｓｓａｙｓ，８：７４，１９８８）の文献を参照されたい。
用語「モノクローナル抗体」とは、単一の分子組成を有する抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性及び親和性を示す。
本明細書で使用される「ＡＡＪ８Ｄ６抗体」という用語は、特に断りのない限り、本発明者によって得られたｃ－Ｍｅｔを標的とするヒト化モノクローナル抗体ＡＡＪ８Ｄ６を指す。
本明細書で使用されるｃＡＡＪ８Ｄ６抗体は、マウス可変領域とヒト定常領域とを含むヒト－マウスキメラ抗体を指す。ｃＡＡＪ８Ｄ６抗体とＡＡＪ８Ｄ６抗体は、可変領域のフレームワーク領域のみで相違し、ｃＡＡＪ８Ｄ６のフレームワーク領域がマウス由来であり、ＡＡＪ８Ｄ６のフレームワーク領域がヒト由来である。
通常、モノクローナル抗体又はその機能的断片、特にマウス由来のモノクローナル抗体又はその機能的断片を調製するためには、マニュアル「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」に記載されている技術（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ ＮＹ，ｐｐ．７２６，１９８８）又はＫｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎによって記載されるハイブリドーマ細胞から調製するための技術（Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５－４９７，１９７５）をとりわけ参照されたい。
本発明によるモノクローナル抗体は、例えば、ｃ－Ｍｅｔ抗原をアフィニティーカラムに固定化しておいたか又は本発明によるモノクローナル抗体に特異的に認識され得るエピトープの断片の１つを含有させたアフィニティーカラムで精製することができる。より具体的には、前記モノクローナル抗体は、残留タンバク質夾雑物や、ＤＮＡ、ＬＰＳを除去することを目的としたイオン交換クロマトグラフィーを連接するか又は連接しないか、二量体又は他の多量体の存在による潜在的な凝集体を除去することを目的としたＳｅｐｈａｒｏｓｅゲルでの排除クロマトグラフィーに連接されるか又は連接されないプロテインＡ及び／又はＧクロマトグラフィーにより精製することができる。より好ましい形態では、これらの技術は、同時に又は連続して使用することができる。
本明細書で使用される「ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）」という用語は、海洋生物であるドラベラ アウリクラリア（Ｄｏｌｌａｂｅｌｌａ ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ）から単離されたポリペプチドを指し、ドラスタチン１０（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ１０）及びドラスタチン１５（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ１５）を含むが、これらに限定されない。ドラスタチンは、強力な抗癌活性を示す有糸分裂阻害剤であるから、抗癌剤の候補とされている。また、研究者は、ＭＭＡＥやＭＭＡＦなどのドラスタチンの多くの誘導体を発見して合成した。
本明細書で使用される「リンカー」という用語は、抗体薬物複合体（即ち、ＡＤＣ）における抗体を薬物に連結する部分を指し、切断可能であっても切断不可能であってもよい。切断可能なリンカー（即ち、切断可能なリンカー又は生分解性リンカー）は、標的細胞内又はその上で切断されて薬物を放出することができる。ある実施形態では、本発明におけるリンカーは、非常に良好な安定性を有し、標的への送達中（例えば、血液中）の薬物の放出を大幅に減少させ、それにより副作用及び毒性を減少させる。いくつかの特定の実施形態では、本発明におけるリンカーは、二硫化物を基づいたリンカー（チオール濃度のより高い腫瘍細胞において選択的に切断される）や、ペプチドリンカー（腫瘍細胞において酵素により切断される）、ヒドラゾンリンカーなどの切断可能のリンカーから選択される。いくつかの他の特定の実施形態では、本発明におけるリンカーは、チオエーテルリンカーなどの切断不可能なリンカーから選択される。好ましくは、本発明におけるリンカーは、切断可能なｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢリンカー及び切断不可能なｍｃリンカーから選択される。
［具体的な実施例］
実施例１ ヒト化ｃ－Ｍｅｔ抗体の調製及びそのアミノ酸配列の決定
ｃ－Ｍｅｔマウス抗体ｍＡＡＪ８Ｄ６に基づいて、様々なキメラ抗体及びヒト化抗体をさらに設計し、親和力を比較し、そして、候補のキラメｃ－Ｍｅｔ抗体ｃ ＡＡＪ８Ｄ６及びヒト化抗体ＡＡＪ８Ｄ６を決定した。
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Figure 0007510518000014
Figure 0007510518000015
Figure 0007510518000016
実施例２ キラメｃＡＡＪ８Ｄ６とヒト化抗体ＡＡＪ８Ｄ６の親和力の比較
キラメｃＡＡＪ８Ｄ６及びヒト化抗体ＡＡＪ８Ｄ６の親和力をＥＬＩＳＡ法で測定した。９６ウェルプレートを可溶性ＥＤタンパク質で被覆した後、希釈した抗体とともにインキュベートした。ただし、ＥＤ関連抗体は、ＨＲＰを結合したヤギＦ（ａｂ’）２抗－ヒトＩｇＧ Ｆｃ－特異的二次抗体で検出した。ＧｒａｐｈＰａＤ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、ＸをｌｏｇＸに変換し、用量反応曲線を使用してフィッティングした。フィッティングして得られた曲線を図１に示す。
図１に示した実験結果から、ＡＡＪ８Ｄ６とｃＡＡＪ８Ｄ６を比較すると、ヒト化して改造した抗体ＡＡＪ８Ｄ６は、キメラ抗体ｃＡＡＪ８Ｄ６と比較して、結合親和力が低下しなかっただけでなく、より有意な改善も見られ、同じ結合強度の下で、必要な抗体量が半分以下に減少したことが分かった。具体的な結果を表３に示す。
実施例３ ヒト化抗体ＡＡＪ８Ｄ６と競合物ＡＢＴ－７００の結合力の比較
ｃ－Ｍｅｔタンパク質を最終濃度２μｇ／ｍｌになるように希釈して調製し、１ウェルあたり１００μｌでマイクロプレートに加え、４℃で一晩置いた。ウェル中の溶液を廃棄し、ＰＢＳＴで３回洗浄した。ブロッキング液を３００μｌ／ウェルで加え、３７℃で２時間インキュベートした。ウェル中の溶液を廃棄し、ＰＢＳＴで３回洗浄した。ＡＡＪ８Ｄ６抗体及びＡＢＴ－７００（即ち、テリソツズマブとしても知られるｔｅｌｉｓｏｔｕｚｕｍａｂであり、その配列情報についてｈｔｔｐｓ：／／ｅｘｔｒａｎｅｔ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｓｏｉｎｎ／ｍｏｄ／ｐａｇｅ／ｖｉｅｗ．ｐｈｐ？ｉｄ＝１３７＆ｉｎｎ＿ｎ＝１０３６６を参照されたい。以下でも同じである。）を９個の濃度ポイントに希釈し、９６ウェルプレートに加え、２時間インキュベートした。ウェル中の溶液を廃棄し、ＰＢＳＴで３回洗浄した。希釈液を、希釈度を１：５０００として、１ウェルあたり１００μｌで加え、３７℃で１時間インキュベーし、ＨＲＰ検出抗体を調製した。ウェル中の溶液を廃棄し、ＰＢＳＴで３回洗浄した。ＴＭＢ発色液を加えて室温で２分間インキュベートした後、Ｅｌｉｓａ停止液を加え、リーダーに載せてデータを得た。結果を表４及び図２に示す。
表４及び図２から分かるように、ＡＡＪ８Ｄ６のＥＣ５０値は０．５４ｎｇ／ｍｌ、ＡＢＴ－７００のＥＣ５０は１．３３ｎｇ／ｍｌであった。その結果により、ｃ－Ｍｅｔ抗原に対する結合力は、ＡＡＪ８Ｄ６抗体のほうがＡＢＴ－７００よりも有意に優れたことが示される。
実施例４ 抗体薬物複合体の調製
抗体薬物複合体の調製としては、一般的な結合方法を使用した。精製水で還元剤及び保護剤をそれぞれ次のように調製した。１～２０ｍＭのＴＣＥＰ（Ｔｒｉｓ－２－ｃａｒｂｏｘｙｅｔｈｙｌ－ｐｈｏｓｐｈｉｎｅ）、１～２０ｍＭのＤＴＰＡ（Ｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅ ｔｒｉａｍｉｎｅ ｐｅｎｔａｃｅｔａｔｅ ａｃｉｄ）を母液として、必要な複合体化率に応じて一定の濃度範囲内の量で還元剤を添加し、ＴＣＥＰと抗体との最終濃度のモル比が０．５～６．０：１となるように、一定の体積比（１：１）で一定の濃度のモノクローナル抗体（例えば：５～３０ｍｇ／ｍＬ）を混合し、２５℃で１時間攪拌反応させた。ＴＣＥＰで還元された抗体をそのままに複合体化に使用した。
一定の濃度（５ｍＭ）のリンカー－活性薬物単位化合物を調製し、２５％のＤＭＳＯ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ，ジメチルスルホキシド）に溶解し、薬物とチオール基とのモル比０．３～２．８：１に従って薬物をゆっくりと加え、２５℃で１～４時間攪拌反応させた。反応終了後、ＰＢＳ緩衝液で遠心限外ろ過を３回行い、残留未反応薬物やＤＭＳＯなどの遊離小分子を精製して除去し、そして、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動及び疎水性高速液体クロマトグラフィー（ＨＩＣ－ＨＰＬＣ）法を使用して複合体化の程度を検出した。
本実施例で使用されるリンカー－活性薬物単位化合物は、Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ、Ｄ０７－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ及びＰｙ－ＭＡＡ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥであり、その構造式がそれぞれ以下の通りである（合成方法については、特許出願ＣＮ１０８８５３５１４Ａ（明細書第１４頁）、ＣＮ１１１４３３１８８Ａ（明細書第５３頁）、ＷＯ２０１９２２３５７９Ａ１（明細書第２５－２７頁）を参照のこと）。
上記の方法により以下のＡＤＣ（ただし、ｐは１、２、３、４、５、６、７、８から選択される整数で、ｑは１、２、３、４から選択される整数で、Ａｂは本発明で提供されるＡＡＪ８Ｄ６抗体である。）を調製した。これらのＡＤＣの平均ＤＡＲが４であった。
さらに、本実施例では、抗体部分がＡＢＴ－７００抗体、連結基がＭｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ、活性薬物単位がＭＭＡＥである抗体薬物複合体も調製した。ここで、ｐは１、２、３、４、５、６、７、８から選択される整数で、その平均ＤＡＲは４であった。
さらに、本実施例では、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ１と、Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢと、ＭＭＡＥとの抗体薬物複合体（即ち、ＩｇＧ１－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ）を調製した。ここで、ｐは１、２、３、４、５、６、７、８から選択される整数で、その平均ＤＡＲは４であった。
実施例５ 細胞エンドサイトーシスの実験
ＨＴ２９細胞をウェルあたり約１×１０5個の細胞で６ウェルプレートに再懸濁した。ＡＡＪ８Ｄ６抗体、ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ、ＡＡＪ８Ｄ６－ＰＹ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ、ＡＡＪ８Ｄ６－Ｄ０７－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥをそれぞれｐＨＡｂアミン反応性染料に抱合した後、細胞培養培地で１０μｇ／ｍｌに希釈した。１００μｌのＡＡＪ８Ｄ６抗体、ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ、ＡＡＪ８Ｄ６－ＰＹ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ、ＡＡＪ８Ｄ６－Ｄ０７－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥの染料複合体を細胞に加え、所定時間（０時間、１時間、３時間、５時間、２１時間和２４時間）で３７℃でインキュベートした。ＡＡＪ８Ｄ６抗体、ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ、ＡＡＪ８Ｄ６－ＰＹ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ、ＡＡＪ８Ｄ６－Ｄ０７－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥのエンドサイトーシス効果をフローサイトメトリーにより測定した。２４時間後、サンプルがＨＴ２９細胞に明らかにエンドサイトーシスされた。３時間後、エンドサイトーシス効果が９０％程度になった。それから、本発明で提供されるヒト化抗体及び調製されたＡＤは、良好なエンドサイトーシス効果を有し、薬物を標的細胞に効率的に送達することができたことが分かった。結果を図３に示す。
実施例６ ヒト化抗体ＡＡＪ８Ｄ６及びその抗体薬物複合体（ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ）の細胞毒性活性
対数増殖期でのｃ－Ｍｅｔ発現程度の異なる細胞ＭＫＮ－４５、ＳＮＵ－６２０、ＨＴ２９、ＢＸＰＣ－３を９６ウェルプレートにそれぞれ接種した。３７℃、５％ＣＯ2インキュベーターで一晩インキュベートした。ＡＡＪ８Ｄ６、ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ、ＩｇＧ１－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢを完全培地で濃度１．２５～２０００ｎｇ／ｍＬに調製し、ＭＭＡＥを完全培地で濃度０．００２１～８０ｎｇ／ｍＬに調製し、１００μＬでウェルに加え、濃度ごとに３つの重複ウェルを設定し、同時にブランク対照群を設定した。７２±２ｈの薬物作用の後、ＣＣＫ－８試薬を加え、３７℃、５％ＣＯ2インキュベーターで１～４時間インキュベートし、マイクロプレートリーダーの４５０ｎｍで各ウェルのＯＤ値を検出した。阻害率をＩＲ％＝（ＯＤブランク－ＯＤ薬物）×１００／ＯＤブランクとして算出した。阻害率及び薬物濃度に対して４パラメータフィッティングを行い、ＩＣ50を算出した。
結果及び結論：図４Ａ、図４Ｂ、図４Ｃ、図４Ｄに示すように、ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥの細胞毒性活性が細胞株におけるｃ－Ｍｅｔの発現量と正の相関関係を有し、ＡＡＪ８Ｄ６が標的細胞に対して細胞毒性がなく、ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥは細胞毒性が主にＭＭＡＥに由来し、ＩｇＧ１－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢと比較して明らかなターゲティング能力を持った。
実施例７ 抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥと抗体薬物複合体ＡＢＴ－７００－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥとのインビトロ有効性の違い
ヒト結腸がん細胞ＨＴ２９の細胞株懸濁液を１００μＬ／ウェル、５０００個／ウェルの密度で９６ウェルプレートに加え、水で飽和した３７℃のＣＯ2インキュベーターで一晩培養した。抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ及び抗体薬物複合体ＡＢＴ－７００－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥを段階希釈して細胞を含む９６ウェルプレートに１００μＬ／ウェルで加えた。３７℃インキュベーターで７２時間培養を続けた。マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍでのＯＤ値を読み取った。阻害率の計算式は：ＩＲ％＝（ＯＤブランク－ＯＤ薬物）×１００／ＯＤブランクであった。カーブフィッティングソフトウェアＳｏｆｔｍａｘ Ｐｒｏ７．０．３ ＧｘｐによりＩＣ50値を算出した。
結果を表５及び図５に示す。実験結果、ＩＣ５０最大阻害率には、ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥの方が抗体薬物複合体ＡＢＴ－７００－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥよりも有意に優れた。インビトロ有効性には、ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥの方が、抗体薬物複合体ＡＢＴ－７００－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥよりも優れたことが分かった。
実施例８ Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスにおけるヒト胃癌細胞ＭＫＮ－４５の皮下移植腫瘍に対する抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥの治療効果
６～７週齢の４２匹のＢａｌｂ／ｃヌードマウスを採用し、０．１ｍＬのＭＫＮ－４５細胞懸濁液（２．４×１０6ｃｅｌｌｓ／匹）をマウスの右脇の後方に皮下植入し、腫瘍が約１００～３００ｍｍ3に成長したら、腫瘍体積に応じてＶｅｈｉｃｌｅ（ＰＢＳ）群、ＩｇＧ１－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ（３ｍｇ／ｋｇ）群、抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ（０．７５ｍｇ／ｋｇ）群、抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ（１．５ｍｇ／ｋｇ）群、抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ（３ｍｇ／ｋｇ）、ヒト化抗体ＡＡＪ８Ｄ６（３ｍｇ／ｋｇ）群にランダムにグループ分け、各群に６匹の担癌マウスで、各群に週１回、計３回静脈内投与し、投与期間中、腫瘍の長径、短径及び体重を週２回測定した。投与２１日目に腫瘍阻害率（ＴＧＩRTV）を算出して有効性評価を行った。
計算式：
腫瘍体積：ＴＶ＝Ｄ１×Ｄ２2／２、ここで、Ｄ１、Ｄ２はそれぞれ腫瘍の長径と、腫瘍の短径を表す。
相対腫瘍体積：ＲＴＶ＝ＴＶn／ＴＶ0、ここで、ＴＶ0は投与前の腫瘍体積で、ＴＶnは各測定時の腫瘍体積である。
相対の腫瘍阻害率：ＴＧＩRTV（％）＝（１－ＴRTV／ＣRTV）×１００％、ＴRTVは投与群又は陽性対照群ＲＴＶを表し、ＣRTVは陰性対照群ＲＴＶを表す。
結果と結論：ヌードマウスにおけるＭＫＮ－４５皮下移植腫瘍に対する各実験群及び対照群の阻害効果を表６及び図６に示す。表６はヌードマウスにおけるＭＫＮ－４５皮下移植腫瘍に対する各実験群及び対照群の体積及び阻害率を示す。図６は投与後の腫瘍増殖曲線である。実験結果、抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥが、ヌードマウスにおけるＭＫＮ－４５皮下移植腫瘍に対して有意な阻害効果を有することが示された。
実施例９ マウスＰＤＸモデル（胃癌ＧＡ００４６）に対する抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥの治療効果
マウス胃癌ＧＡ００４６のＰＤＸモデル（即ち、ヒト由来の組織異種移植片、ｐａｔｉｅｎｔ－ｄｅｒｉｖｅｄｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ）は、ヒト胃癌患者の腫瘍組織を重度の免疫不全マウスに移植することにより構築され、胃癌組織はマウス体内で成長して移植腫瘍を形成した。
良好な腫瘍増殖を示した担癌マウスを摘み取り、安楽死させ、腫瘍を摘出して小片（直径２～３ｍｍ）に切断し、次いでマウスの右肩に接種して胃癌の皮下モデルを確立した。定期的に腫瘍の成長を観察し、腫瘍が約１００～１５０ｍｍ3の平均体積に成長したら、腫瘍の大きさとマウスの体重に応じてランダムにグループ分けて投与し、腫瘍体積に応じてＶｅｈｉｃｌｅ（ＰＢＳ）群、抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ（１０ｍｇ／ｋｇ）群、ＩｇＧ１－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ（１０ｍｇ／ｋｇ）群にランダムにグループ分け、各群に６匹の担癌マウスで、各群に週に１回計２回、計２１回静脈内投与した。投与期間中、腫瘍の長径、短径及び体重を週２回測定した。投与２１日目に腫瘍阻害率（ＴＧＩRTV）を算出して有効性評価を行った。
計算式：
腫瘍体積：ＴＶ＝Ｄ１×Ｄ２2／２、ここで、Ｄ１、Ｄ２はそれぞれ腫瘍の長径と、腫瘍の短径を表す。
相対腫瘍体積：ＲＴＶ＝ＴＶn／ＴＶ0、ここで、ＴＶ0は投与前の腫瘍体積で、ＴＶnは各測定時の腫瘍体積である。
相対の腫瘍阻害率：ＴＧＩRTV（％）＝（１－ＴRTV／ＣRTV）×１００％、ＴRTVは投与群又は陽性対照群ＲＴＶを表し、ＣRTVは陰性対照群ＲＴＶを表す。
結果と結論：マウス胃癌ＰＤＸモデル（ＧＡ００４６）に対する各実験群及び対照群の腫瘍阻害効果をそれぞれ表７及び図７に示す。表７はマウス胃癌ＰＤＸモデル（ＧＡ００４６）の腫瘍体積及び阻害率を示す。図７は投与後の腫瘍増殖曲線である。その結果、抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥが１０ｍｇ／ｋｇの用量で胃癌ＧＡ００４６ＰＤＸ腫瘍モデルに対して有意な抗腫瘍効果を有することが示された。
実施例１０ マウスＰＤＸモデル（肺癌ＬＵ２５０３）に対する抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥの治療効果
マウス肺癌ＬＵ２５０３のＰＤＸモデル（即ち、ヒト由来の組織異種移植片、ｐａｔｉｅｎｔ－ｄｅｒｉｖｅｄｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ）は、ヒト肺癌患者の腫瘍組織を重度の免疫不全マウスに移植することにより構築され、肺癌組織はマウス体内で成長して移植腫瘍を形成した。
良好な腫瘍増殖を示した担癌マウスを選択し、安楽死させ、腫瘍を摘出して小片（直径２～３ｍｍ）に切断し、次いでマウスの右肩に接種して肺癌の皮下モデルを確立した。定期的に腫瘍の成長を観察し、腫瘍が約１５０ｍｍ3の平均体積に成長したら、腫瘍の大きさとマウスの体重に応じてランダムにグループ分けて投与し、Ｖｅｈｉｃｌｅ（ＰＢＳ）群、ヒト化抗体ＡＡＪ８Ｄ６（１０ｍｇ／ｋｇ）群、抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ低、中、高（１．１、３．３、１０ｍｇ／ｋｇ）群に分け、各群に６匹の担癌マウスで、抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥ及びヒト化抗体ＡＡＪ８Ｄ６群に週１回、計２回静脈内投与した。投与期間中、腫瘍の長径、短径及び体重を週２回測定した。投与２１日目に腫瘍阻害率（ＴＧＩRTV）を算出して有効性評価を行った。
計算式：
腫瘍体積：ＴＶ＝Ｄ１×Ｄ２2／２、ここで、Ｄ１、Ｄ２はそれぞれ腫瘍の長径と、腫瘍の短径を表す。
相対腫瘍体積：ＲＴＶ＝ＴＶn／ＴＶ0、ここで、ＴＶ0は投与前の腫瘍体積で、ＴＶnは各測定時の腫瘍体積である。
相対の腫瘍阻害率：ＴＧＩRTV（％）＝（１－ＴRTV／ＣRTV）×１００％、ＴRTVは投与群又は陽性対照群ＲＴＶを表し、ＣRTVは陰性対照群ＲＴＶを表す。
結果と結論：マウス肺癌ＰＤＸモデル（ＬＵ２５０３）に対する各実験群及び対照群の腫瘍阻害効果をそれぞれ表８及び図８に示す。表８はマウス肺癌ＰＤＸモデル（ＬＵ２５０３）の腫瘍体積及び阻害率を示す。図８は投与後の腫瘍増殖曲線である。その結果、抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥは、１．１ｍｇ／ｋｇ、３．３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇの用量で単独で使用された場合、ＬＵ２５０３腫瘍モデルに対して有意な抗腫瘍効果を有し、特に３．３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ群ではマウス腫瘍が完全に消失したことが示された。
Figure 0007510518000027
上記の実施例は、本発明で提供される抗体薬物複合体ＡＡＪ８Ｄ６－Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＭＭＡＥがｃ－Ｍｅｔ陽性腫瘍に対して非常に顕著な治療効果を有することを示した。
本明細書では、特定の実施例を用いて本発明の原理及び実施形態について述べたが、上記実施例の説明は、本発明の方法及びその要旨を理解するために使用されるものである。なお、当業者にとって、本発明の原理から逸脱することなく本発明に対していくつかの改良や修飾を行う可能性もあり、これらの改良及び修飾も本発明の特許請求の範囲内に含まれることに留意されたい。

Claims (36)

  1. 重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含むヒト化抗体又はその抗原結合断片であって、
    （１）重鎖可変領域が、Ｋａｂａｔによって定義される配列番号１～３に記載のＣＤＲ１～３を有し、かつ
    （２）軽鎖可変領域が、Ｋａｂａｔによって定義される配列番号４～６に記載のＣＤＲ１～３を有する、ことを特徴とするｃ－Ｍｅｔを標的とするヒト化抗体又はその抗原結合断片。
  2. 前記ヒト化抗体又はその抗原結合断片が、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）2断片、Ｆｖ断片、および単鎖抗体（ｓｃＦｖ）からなる群より選択される、ことを特徴とする請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  3. 前記抗体又はその抗原結合断片が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４から選択された免疫グロブリンの定常領域をさらに含む、ことを特徴とする請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  4. （１）重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号７に示され、かつ
    （２）軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号８に示される、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  5. 前記ｃ－Ｍｅｔを標的とするヒト化抗体の重鎖及び軽鎖は、それぞれ、
    （１）重鎖のアミノ酸配列が配列番号９に示され、かつ
    （２）軽鎖のアミノ酸配列が配列番号１０に示される、ことを特徴とする請求項４に記載の抗体又はその抗原結合断片。
  6. 請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合断片をコードする、ことを特徴とする単離されたポリヌクレオチド。
  7. 請求項６に記載のポリヌクレオチドを含む、ことを特徴とする核酸構築物。
  8. 前記核酸構築物が発現ベクターであって、前記ポリヌクレオチドが、それによってコードされるポリペプチドの宿主細胞又は無細胞発現系における発現を可能にする調節配列に作動可能に連結されている、ことを特徴とする請求項７に記載の核酸構築物。
  9. 請求項６に記載のポリヌクレオチドまたは請求項７に記載の核酸構築物を含むことを特徴とする宿主細胞。
  10. 原核細胞、真核細胞、酵母細胞、哺乳動物の細胞、大腸菌細胞からなる群より選択されることを特徴とする請求項９に記載の宿主細胞。
  11. 前記宿主細胞がＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、Ｓｐ２／０細胞およびＢＨＫ細胞から選択されることを特徴とする請求項９に記載の宿主細胞。
  12. 請求項８に記載の核酸構築物の発現を可能にする条件下で請求項９～１１のいずれか１項に記載の宿主細胞を培養する工程と、
    生成された発現タンパク質を培養物から回収する工程とを含む、ことを特徴とする請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片の製造方法。
  13. ｃ－Ｍｅｔを標的とする抗体薬物複合体であって、１個又は複数個の治療剤と複合体化された請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合断片を含む、ことを特徴とする抗体薬物複合体。
  14. 前記治療剤が、細胞毒性分子、免疫増強剤、及び放射線性同位体から選択され、
    前記細胞毒性分子が、チューブリン阻害剤およびＤＮＡ損傷剤からなる群より選択される、ことを特徴とする請求項１３に記載の抗体薬物複合体。
  15. 前記チューブリン阻害剤が、ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）系細胞毒性分子、アウリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）系細胞毒性分子及びマイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）系細胞毒性分子からなる群より選択され、前記ＤＮＡ損傷剤が、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）系、デュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）系、ＰＢＤ、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｓ）、ＳＮ－３８、Ｄｘｄからなる群より選択される、ことを特徴とする請求項１４に記載の抗体薬物複合体。
  16. 前記アウリスタチン系細胞毒性分子がＭＭＡＥおよびＭＭＡＦからなる群より選択され、および／または前記マイタンシン系細胞毒性分子がＤＭ１およびＤＭ４からなる群より選択される、ことを特徴とする請求項１５に記載の抗体薬物複合体。
  17. 前記抗体薬物複合体が一般構造式：Ａ－（Ｌ－Ｕ）ｎ（ただし、Ａは請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合断片を表し、Ｕは活性薬物単位であり、Ｌは前記Ａ及び前記Ｕにそれぞれ共有結合されている任意の連結基であり、ｎは１、２、３、４、５、６、７又は８から選択される整数であり、前記Ａは、１個又は複数個の前記Ｌを介して１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個の前記Ｕを連結している。）を有する、ことを特徴とする請求項１４に記載の抗体薬物複合体。
  18. 前記Ｌが、前記Ａ上のアミノ残基又はスルフヒドリル残基に共有結合されている、ことを特徴とする請求項１７に記載の抗体薬物複合体。
  19. 前記Ｌが、前記Ａ上のスルフヒドリル残基に共有結合されている、ことを特徴とする請求項１８に記載の抗体薬物複合体。
  20. 前記Ｌが、前記Ａ上の鎖間ジスルフィド結合が開かれた後に形成されたスルフヒドリル残基に共有結合されている、ことを特徴とする請求項１９に記載の抗体薬物複合体。
  21. 前記Ｌには、切断可能なリンカー及び切断不可能なリンカーが含まれる、ことを特徴とする請求項１８に記載の抗体薬物複合体。
  22. 前記切断可能なリンカーが、ペプチド単位を含み、
    前記ペプチド単位は、２～２０個のアミノ酸を含む、ことを特徴とする請求項２１に記載の抗体薬物複合体。
  23. 前記切断可能なリンカーが、－バリン－シトルリン－（－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－）、－グリシン－グリシン－フェニルアラニン－グリシン－（－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ－）、－バリン－アラニン－（－Ｖａｌ－Ａｌａ－）、－バリン－リジン－（－Ｖａｌ－Ｌｙｓ－）、－バリン－アルギニン－（－Ｖａｌ－Ａｒｇ－）、－フェニルアラニン－シトルリン－（－Ｐｈｅ－Ｃｉｔ－）、－フェニルアラニン－リジン－（－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－）、－フェニルアラニン－アルギニン－（－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－）及びそれらの組み合わせから選択されるペプチド単位である、請求項２１に記載の抗体薬物複合体。
  24. 前記Ｌが以下：
    Figure 0007510518000028
    Figure 0007510518000029
    Figure 0007510518000030
    Figure 0007510518000031
    からなる群より選ばれる構造を含むことを特徴とする請求項１８に記載の抗体薬物複合体。
  25. 前記Ｕが以下：
    Figure 0007510518000032
    Figure 0007510518000033
    Figure 0007510518000034
    からなる群より選ばれる構造を有する、ことを特徴とする請求項１７又は請求項２４に記載の抗体薬物複合体。
  26. 前記抗体薬物複合体が、以下の構造：
    Figure 0007510518000035
    Figure 0007510518000036
    から選ばれる、請求項１７記載の抗体薬物複合体。
  27. 請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合断片及び／又は請求項１３～２６のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
  28. がんを治療又は予防するための薬物の調製における、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合断片、請求項６に記載のポリヌクレオチド、請求項７又は８に記載の核酸構築物、請求項１３～２６のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体、或いは請求項２７に記載の医薬組成物の、使用。
  29. 前記がんがｃ－Ｍｅｔ陽性がん又は固形腫瘍である、請求項２８に記載の使用。
  30. 前記ｃ－Ｍｅｔ陽性がんが肺癌又は胃癌である、請求項２９に記載の使用。
  31. 請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合断片、および／または請求項１３～２６のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体を含む、疾患の治療に使用するための医薬組成物であって、
    前記疾患は、ｃ－Ｍｅｔ陽性がんである、医薬組成物。
  32. 当該疾患が肺癌又は胃癌である、請求項３１に記載の医薬組成物。
  33. 容器と、
    前記容器に入れられた、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合断片、或いは請求項１３～２６のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体又はその薬学的に許容される塩又は溶媒和物、或いは請求項２７に記載の医薬組成物を含む製剤と、
    任意選択的な使用説明書とを含むキット。
  34. 請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合断片を含む、ことを特徴とする組換えタンパク質。
  35. 前記組換えタンパク質が、二重特異性抗体又は多重特異性抗体である、請求項３４に記載の組換えタンパク質。
  36. 組換えタンパク質の調製における請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合断片の使用。
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