JP7250814B2

JP7250814B2 - 新規ｇｌｐ－１類似体

Info

Publication number: JP7250814B2
Application number: JP2020553627A
Authority: JP
Inventors: テナッティ，ラジャマンナル; チャトゥルヴェーディー，ニシス; ブラーデ，ヴィノード・サンパトラオ; シャヒ，プラディープ・ディネシュ; ナタラジャン，ムツクマラン; ナガラジャ，ラビシャンカラ・マダバティ; ザラワディア，リシ・マンスクラル; パンディア，クナル; パテル，ブリエッシュクマール; ジョシー，ディレン・ラメシュチャンドラ; ソニー，クルナル・ハリシュバイ; ティワーリー，アビシェーク; パテル，ヴィプルクマール・シャンカルバイ
Original assignee: Sun Pharmaceutical Industries Ltd
Current assignee: Sun Pharmaceutical Industries Ltd
Priority date: 2018-04-05
Filing date: 2019-04-05
Publication date: 2023-04-03
Anticipated expiration: 2039-04-05
Also published as: ES2980707T3; SI3774862T1; KR20200141469A; US20200362007A1; CL2020002574A1; WO2019193576A1; SI4122954T1; MX2020010505A; US11866477B2; PT4122954T; PL4122954T3; CN117964735A; LT4122954T; EP4364751A3; PT3774862T; AU2019247936C1; EP4364751A2; US11447535B2; EP3774862A1; PE20211417A1

Description

関連出願の相互参照
本出願は、出願番号ＩＮ２０１８／２１０１３１０９（２０１８年４月５日出願）、ＩＮ２０１８／２１０４０４６８（２０１８年１０月２６日出願）、およびＩＮ２０１８／２１０４０４７４（２０１８年１０月２６日出願）を有する３つのインド仮出願の利益を主張するものであり、これらは参照により本明細書に組み込まれる。

本開示は、Ｃ末端にＬｅｕまたはＩｌｅを有するアミノ酸配列を有する、新規グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）（７－３８）類似体に関する。この新たな類似体は、有害効果が減少され、作用持続時間が改善された、強力なＧＬＰ－１アゴニストである。本開示はさらに、効力および作用持続時間がさらに改善され、かつ経口投与に適した、新たな類似体のアシル化誘導体に関する。本明細書に開示される類似体は、延長部分でアシル化され、これは化合物の活性持続時間を増加させる。本明細書に開示される類似体は、糖尿病および肥満の治療において有用であり得る。

グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）は、主に腸の腸内分泌Ｌ細胞において産生され、脂肪、タンパク質加水分解物、および／またはグルコースを含有する食物が十二指腸に入ると血流中に分泌されるホルモンである。ＧＬＰ－１は、プレプログルカゴン遺伝子の細胞特異的翻訳後プロセシングに由来する。当初、ペプチドＧＬＰ－１（１－３７）はこのプロセシングから特定されたが、それは膵臓受容体を認識することが見出され、インビボで活性種であると決定された２つのＮ末端切断産物である、ＧＬＰ－１（７－３７）（配列番号１）およびＧＬＰ－１（７－３６）アミドであった。ＧＬＰ－１は、インスリン分泌を刺激し、それによって細胞によるグルコース取り込みおよび血清血糖値の減少を引き起こすことが見出されている。ＧＬＰ－１アゴニストは、低血糖がなく、体重減少の良好な利益を有するため、好ましい薬物として２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）の治療に利用可能である。内因性物質であるＧＬＰ－１（７－３７）およびＧＬＰ－１（７－３６）アミドは、ペプチダーゼによって切断され、そのため非常に短い半減期を有する。半減期が改善されたＧＬＰ－１類似体を開発することによって性能を改善するための努力がなされた。２００５年に承認された最初の薬剤は、用量レベル１０ｍｃｇで１日２回投与するエキセナチド（Ｅｘｅｎａｔｉｄｅ）であり、グルコース制御マーカーであるＨｂＡ１ｃにおいて有意な改善を示すことが見出された。さらに、ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋが、１日あたり皮下注射で１．８ｍｇを１日１回投与するリラグルチド（Ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）（米国特許第６，２６８，３４３号）（配列番号２）を開発し、２０１０年に承認された。さらなる研究および開発により、ＧＳＫによって開発されたアルビグルチド（Ａｌｂｉｇｌｕｔｉｄｅ）、およびＥｌｉＬｉｌｌｙによって開発されたデュラグルチド（Ｄｕｌａｇｌｕｔｉｄｅ）のような、週に１回投与する製品が製造された。最近では、ＧＬＰ－１類似体であるセマグルチド（Ｓｅｍａｇｌｕｔｉｄｅ）（国際公開ＷＯ２００６／０９７５３７（Ａ２）号）が、ＵＳＦＤＡによって承認された。セマグルチド（配列番号３）は、Ｏｚｅｍｐｉｃ（登録商標）のブランド名で市販されている。これは、皮下注射で週に１回投与される。

効力および作用持続時間が改善されたＧＬＰ－１類似体を作製するための多くの試みが文献に報告されている。米国特許第７，２９１，５９４（Ｂ２）号（ＵＳ‘５９４特許）は、アルギニンおよび／またはリジンのいくつかの残基をそのＣ末端に付加して、粘膜を介して高い生物学的利用能を提供する、ＧＬＰ－１（７－３５）誘導体を開示している。ＵＳ‘５９４特許は、これらの誘導体が、そのＧＬＰ－１アミノ酸配列においてアミノ酸８をＳｅｒで置換することによってジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ－ＩＶ）に対する耐性を付与するか、またはアミノ酸２６および３４をそれぞれＧｌｎおよびＡｓｎで置換することによってトリプシンに対する耐性を付与することができることをさらに開示している。
米国特許第７，８９３，０１７（Ｂ２）号（ＵＳ‘０１７特許）は、ＧＬＰ－１類似体が、ＧＬＰ－１（７－３７）に対して位置７および８で少なくとも１つのアミノ酸残基を修飾することによってＤＰＰ－ＩＶに対して安定であり、該アシル化が、該ＧＬＰ－１類似体のＣ末端アミノ酸残基に直接付着している二酸である、アシル化ＧＬＰ－１類似体を開示している。

米国特許第８，９５１，９５９（Ｂ２）号（ＵＳ‘９５９特許）は、配列ＧＬＰ－１に対して位置８にトリフルオロメチル基を含有する非タンパク原性アミノ酸残基を有し、位置２６のリジン残基に２つの酸性基を含む部分でアシル化された、ＤＰＰ－ＩＶ耐性ＧＬＰ－１（７－３７）類似体を開示している。

米国特許第７，０８４，２４３（Ｂ２）号（ＵＳ‘２４３特許）は、ＤＰＰ－ＩＶ耐性ペプチドとして、配列ＧＬＰ－１（７－３７）に対して位置８にＶａｌまたはＧｌｙを有する、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体を開示している。

国際公開第ＷＯ２０１７／１４９０７０（Ａ１）号（ＷＯ‘０７０）は、ＧＬＰ－１（７－３７）の位置８に対応する位置にＴｒｐを有する、ＧＬＰ－１類似体を開示しており、これらのＴｒｐ８化合物は、ＤＰＰ－ＩＶによる分解に対して非常に安定していることが示された。

国際公開第ＷＯ２００４／１０３３９０（Ａ２）号（ＷＯ‘３９０）は、Ｐ’_１位置（ＧＬＰ－１（７－３７）の場合の位置９に対応する）での修飾により、天然基質に対して酵素媒介性（例えば、ＤＰＰ－ＩＶ）切断への感受性が大幅に減少されているがなお天然基質の生物活性を維持する、ＧＬＰ－１類似体を生成することができることを開示している。ＷＯ‘３９０は、位置９に四置換Ｃβ炭素（例えば、ｔｅｒｔ－ロイシン）を有するアミノ酸を有する、ＧＬＰ－１（７－３７）類似体をさらに開示しており、ＤＰＰ－ＩＶによる分解に対して耐性のあるＧＬＰ類似体を提供する。

国際公開第ＷＯ２０１５／０８６６８６（Ａ２）号（ＷＯ‘６８６公開）は、ＧＬＰ－１類似体の主鎖へのアルファ－メチル官能化アミノ酸の直接的な組み込みによって、プロテアーゼ耐性（ＤＰＰ－ＩＶ耐性を含む）ペプチドが生成されることが決定されていることを開示している。

様々な他のＤＰＰ－ＩＶ耐性ＧＬＰ－１アゴニストが、国際公開第ＷＯ２００７／０３０５１９（Ａ２）号、同第ＷＯ２００４／０７８７７７（Ａ２）号、同第ＷＯ２００７／０３９１４０（Ａ１）号、同第ＷＯ２０１４／２０９８８６（Ａ１）号、同第ＷＯ２０１２／０１６４１９（Ａ１）号、同第ＷＯ２０１７／２１１９２２（Ａ２）号、同第ＷＯ２０１６／１９８５４４（Ａ１）号、および同第ＷＯ２０１３／０５１９３８（Ａ２）号などの特許公開において開示されている。

様々な特許出願が、安定性が増加し、かつより長い作用持続時間を有する、Ｃ末端伸長ＧＬＰ－１類似体を開示している。例えば、米国特許第７，４８２，３２１（Ｂ２）号、同第９，４９８，５３４（Ｂ２）号、および同第７，８９７，５６６（Ｂ２）号である。

様々な特許出願は、ＧＬＰ－１類似体が任意選択的にリンカーを介して親油性置換基に付着して、より長い作用持続時間を提供する、アシル化ＧＬＰ－１類似体を開示している。

米国特許第８，６０３，９７２（Ｂ２）号（ＵＳ‘９７２）は、ＧＬＰ－１類似体の位置３７または３８においてＬｙｓ残基がアシル化されている、ＧＬＰ－１類似体のモノアシル化誘導体を開示している。

米国特許第８，６４８，０４１（Ｂ２）号、同第９，７５８，５６０（Ｂ２）号、同第９，００６，１７８（Ｂ２）号、同第９，２６６，９４０（Ｂ２）号、同第９，７０８，３８３（Ｂ２）号、および米国特許出願公開第ＵＳ２０１５／０１５２１５７（Ａ１）号、同第ＵＳ２０１５／０１３３３７４（Ａ１）号は、ＧＬＰ－１類似体のジアシル化誘導体を開示している。

米国特許出願公開第ＵＳ２０１６／０２００７９１（Ａ１）号は、ＧＬＰ－１類似体のトリアシル化誘導体を開示している。

国際公開第ＷＯ２０１６／０８３４９９（Ａ１）号、同第ＷＯ２０１６／０９７１０８（Ａ１）号、および同第ＷＯ２０１４／２０２７２７（Ａ１）号は、ＧＬＰ－１類似体のＬｙｓ残基が分岐状リンカーを介して２つの延長部分に付着している、アシル化ＧＬＰ－１類似体を開示している。

国際公開第ＷＯ２００９／０３０７７１（Ａ１）号および同第ＷＯ２０１８／０８３３３５（Ａ１）号は、ＧＬＰ－１類似体のＬｙｓ残基に付着してより長い作用持続時間を提供することができる、様々なアシル化剤（側鎖）を開示している。

国際公開第ＷＯ２０１３／１８６２４０（Ａ２）号は、エキセンディン－４アミノ酸配列の位置２において、Ｇｌｙ、Ｓｅｒもしくは官能化Ｓｅｒ、例えば、Ｓｅｒ（ＯＣＨ_３）、Ｄ－Ｓｅｒもしくは官能化Ｄ－Ｓｅｒ、例えば、Ｄ－Ｓｅｒ（ＯＣＨ３）、Ａｉｂ、Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａを有する、エキセンディン－４ペプチド類似体を開示している。

様々な他のＧＬＰ－１類似体が、国際公開第ＷＯ２００５／０２７９７８（Ａ２）号、同第ＷＯ１９９８／００８８７１（Ａ１）号、同第ＷＯ１９９９／０４３７０５（Ａ１）号、同第ＷＯ１９９９／０４３７０６（Ａ１）号、同第ＷＯ１９９９／０４３７０７（Ａ１）号、同第ＷＯ１９９９／０４３７０８（Ａ１）号、同第ＷＯ２０００／０３４３３１（Ａ２）号、同第ＷＯ２００９／０３０７７１（Ａ１）号、同第ＷＯ２０１１／０８０１０３（Ａ１）号、同第ＷＯ２０１２／１４０１１７（Ａ１）号、同第ＷＯ２０１２／０６２８０３（Ａ１）号、同第ＷＯ２０１２／０６２８０４（Ａ１）号、同第ＷＯ２０１３／０３７６９０（Ａ１）号、同第ＷＯ２０１４／２０２７２７（Ａ１）号、同第ＷＯ２０１５／０００９４２（Ａ１）号、同第ＷＯ２０１５／０２２４００（Ａ１）号、同第ＷＯ２０１６／０８３４９９（Ａ１）号、同第ＷＯ２０１６／０９７１０８（Ａ１）号、および同第ＷＯ２０１７／１４９０７０（Ａ１）号などの特許出願において開示されている。

依然として、安定性および作用持続時間に関して最適な望ましい特性を有するＧＬＰ－１類似体を開発する必要性がある。

本開示の一態様は、以下のアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、
Ｈ－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｇ－Ｔ－Ｆ－Ｔ－Ｓ－Ｄ－Ｖ－Ｓ－Ｓ－Ｙ－Ｌ－Ｘ１６－Ｇ－Ｑ－Ａ－Ａ－Ｘ２１－Ｅ－Ｆ－Ｘ２４－Ａ－Ｗ－Ｌ－Ｖ－Ｒ－Ｇ－Ｒ－Ｇ－Ｘ３３－Ｘ３４
式中、Ｘ２がＳｅｒ、Ｓｅｒ（ＯＭｅ）、Ｄ－Ｓｅｒ、Ｄ－Ｓｅｒ（ＯＭｅ）、Ａｌａ、またはＡｉｂであり、
Ｘ３が存在しないか、またはＧｌｎであり、
Ｘ４がＧｌｕであり、
Ｘ１６がＧｌｕであり、
Ｘ２４がＩｌｅであり、
Ｘ３３がＬｅｕ、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－Ｉｌｅ、またはＩｌｅであり、
Ｘ３４が存在せず、
Ｘ２１がＬｙｓであり、Ｌｙｓの側鎖アミノ（εアミノ）基が以下の部分でアシル化されており、

式中、ＱおよびＴが存在せず、
Ｕが存在しないか、または－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－｝であり、式中、｝が基Ｗとの付着点であり、
Ｗが存在しないか、または－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－］、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_３－４－ＮＨ－］、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ（ＣＨ_３）_２－ＮＨ－］、および

からなる群から選択され、式中、］が基Ｙとの付着点であり、
Ｙが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_２－ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ－－であり、式中、－－が基Ｚとの付着点であり、
Ｚが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＯＯＨまたは－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ_３であり、式中、ｎが１４～２０の整数である、ポリペプチドを提供する。

本開示のポリペプチドは、有害効果がより少ない、強力なＧＬＰ－１アゴニストである。さらに、本開示のポリペプチドは、安定であり、長い作用持続時間を有し、かつ経口投与に適している。

部分Ａ－ＯＳｕ（中間体３）の調製を図示する。部分Ａ－ＯＳｕ（中間体３）の調製を図示する。部分Ｃ－ＯＳｕの調製を図示する。部分Ｄ－ＯＳｕの調製を図示する。部分Ｅ－ＯＳｕの調製を図示する。部分Ｆ－ＯＳｕの調製を図示する。ラット、単回注射、１ｍｇ／ｋｇのグルコースＡＵＣ０～１２０分（図６Ａ＝２２時間後、図６Ｂ＝４６時間後）での、化合物１の経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）の結果を図示する。ラット、単回注射、１ｍｇ／ｋｇのグルコースＡＵＣ０～１２０分（図６Ａ＝２２時間後、図６Ｂ＝４６時間後）での、化合物１の経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）の結果を図示する。化合物１を用いた慢性治療後のｄｂ／ｄｂ２型糖尿病マウスにおける血糖値の減少を図示する。化合物１を用いた治療後のｄｂ／ｄｂマウスにおける食物摂取量の減少を図示する。ｄｂ／ｄｂマウスでの体重減少における化合物１の有効性を図示する。化合物１を用いた治療後のｄｂ／ｄｂマウスにおけるＨｂ１Ａｃの減少を図示する。

略語
Ａｉｂ：２－アミノイソ酪酸
ＡＤＯ：８－アミノ－３，６－ジオキソ－オクタン酸
ＯＧＴＴ：経口グルコース負荷試験
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ’－ジ－イソプロピルエチルアミン
ＨＯＢｔ：１－ヒドロキシベンズトリアゾール
ＤＩＰＣ：Ｎ，Ｎ’－ジ－イソプロピルカルボジイミド
ＨＯＳｕ：Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド
ＩＢＣＦ：イソブチルクロロホルメート
ＮＭＭ：Ｎ－メチルモルホリン
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＡＰ：４－ジメチルアミノピリジン
ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＭＡｃ：ジメチルアセトアミド

本開示は、頻繁な皮下投与を必要とせず、かつ経口投与にも適した、安定した長期作用ＧＬＰ－１類似体を提供する。驚くべきことに、配列のＣ末端に余分のＬｅｕを追加することによって、親ペプチドと比較した場合に有意に改善された効力および作用持続時間を有するポリペプチドを生成することが見出された。余分のＩｌｅを含むペプチドもまた、親ペプチドと比較した場合に、効力および作用持続時間の改善において同様の効果を示した。さらに、本開示は、本明細書において、ＧＬＰ－１（７－３７）の類似体であるペプチドにアシル化反応を介して付加されて、有意に改善された効力およびより長い作用持続時間を有する化合物を生成することができる、部分を実証する。開示される化合物の延長部分は、より安定した結合を有し、これは生物学的酵素による切断に対してより感受性が低い。したがって、本明細書に開示される化合物はより安定であり、かつより少ない頻度の投与を必要とし、患者の服薬順守を増す。したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、以下のアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、
Ｈ－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｇ－Ｔ－Ｆ－Ｔ－Ｓ－Ｄ－Ｖ－Ｓ－Ｓ－Ｙ－Ｌ－Ｘ１６－Ｇ－Ｑ－Ａ－Ａ－Ｘ２１－Ｅ－Ｆ－Ｘ２４－Ａ－Ｗ－Ｌ－Ｖ－Ｒ－Ｇ－Ｒ－Ｇ－Ｘ３３－Ｘ３４（配列番号４）
式中、Ｘ２がＳｅｒ、Ｓｅｒ（ＯＭｅ）、Ｄ－Ｓｅｒ、Ｄ－Ｓｅｒ（ＯＭｅ）、Ａｌａ、またはＡｉｂであり、
Ｘ３が存在しないか、またはＧｌｎであり、
Ｘ４がＧｌｕであり、
Ｘ１６がＧｌｕであり、
Ｘ２４がＩｌｅであり、
Ｘ３３がＬｅｕ、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－Ｉｌｅ、またはＩｌｅであり、
Ｘ３４が存在せず、
Ｘ２１がＬｙｓであり、Ｌｙｓの側鎖アミノ（εアミノ）基がアシル化されている、ポリペプチドを提供する。

いくつかの実施形態では、Ｘ２１は、米国特許第６，２６８，３４３号、同第８，９５１，９５９（Ｂ２）号、同第８，６０３，９７２（Ｂ２）号、同第８，６４８，０４１（Ｂ２）号、同第９，７５８，５６０（Ｂ２）号、同第９，００６，１７８（Ｂ２）号、９，２６６，９４０（Ｂ２）号、同第９，７０８，３８３（Ｂ２）号、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２０１５／０１５２１５７（Ａ１）号、および同第ＵＳ２０１５／０１３３３７４（Ａ１）号；国際公開第ＷＯ２００９／０３０７７１（Ａ１）号、同第ＷＯ２００６／０９７５３７（Ａ２）号、および同第ＷＯ２０１８／０８３３３５（Ａ１）号に報告されている延長部分でアシル化することができる。

いくつかの実施形態では、Ｘ２１Ｌｙｓは、その側鎖アミノ（εアミノ）基において、脂肪酸基を含む部分でアシル化されている。脂肪酸基は、リンカーを介してＸ２１Ｌｙｓに付着し得る。したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、以下のアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、
Ｈ－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｇ－Ｔ－Ｆ－Ｔ－Ｓ－Ｄ－Ｖ－Ｓ－Ｓ－Ｙ－Ｌ－Ｘ１６－Ｇ－Ｑ－Ａ－Ａ－Ｘ２１－Ｅ－Ｆ－Ｘ２４－Ａ－Ｗ－Ｌ－Ｖ－Ｒ－Ｇ－Ｒ－Ｇ－Ｘ３３－Ｘ３４
式中、Ｘ２がＳｅｒ、Ｓｅｒ（ＯＭｅ）、Ｄ－Ｓｅｒ、Ｄ－Ｓｅｒ（ＯＭｅ）、Ａｌａ、またはＡｉｂであり、
Ｘ３が存在しないか、またはＧｌｎであり、
Ｘ４がＧｌｕであり、
Ｘ１６がＧｌｕであり、
Ｘ２４がＩｌｅであり、
Ｘ３３がＬｅｕ、Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－Ｉｌｅ、またはＩｌｅであり、
Ｘ３４が存在せず、
Ｘ２１がＬｙｓであり、Ｌｙｓの側鎖アミノ（εアミノ）基が以下の部分でアシル化されており、

いくつかの実施形態では、Ｘ２のアミノ酸は、Ｓｅｒ、Ｓｅｒ（ＯＭｅ）、Ｄ－Ｓｅｒ、Ｄ－Ｓｅｒ（ＯＭｅ）、Ａｌａ、またはＡｉｂから選択される。

いくつかの実施形態では、Ｘ２はＡｉｂである。

いくつかの実施形態では、Ｘ３は存在しない。

いくつかの実施形態では、Ｘ３３はＬｅｕである。

いくつかの実施形態では、Ｘ３３はＩｌｅである。

いくつかの実施形態では、Ｘ２１はＬｙｓであり、Ｌｙｓの側鎖アミノ（εアミノ）基は以下の部分でアシル化されており、

式中、Ｗは、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_３－４－ＮＨ－］、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ（ＣＨ_３）_２－ＮＨ－］、および

からなる群から選択される。

式中、ＵおよびＷは両方とも存在せず、Ｚは－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ_３であり、式中、ｎは整数１４である。

式中、Ｗは－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－］である。

式中、ＷはＣ（Ｏ）－Ｃ（ＣＨ_３）_２－ＮＨ－］である。

式中、Ｗは－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_４－ＮＨ－］である。

式中、Ｗは－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_３－ＮＨ－］である。

式中、Ｗは

である。

式中、Ｚは－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＯＯＨであり、式中、ｎは整数１６である。

式中、Ｚは－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ_３であり、式中、ｎは整数１４である。

いくつかの実施形態では、Ｘ２はＡｌａまたはＡｉｂであり、
Ｘ３が存在せず、
Ｘ３３がＬｅｕであり、
Ｕが存在せず、
Ｗが存在せず、
Ｙが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_２－ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ－－であり、式中、－－が基Ｚとの付着点であり、
Ｚは－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）ｎ－ＣＨ_３であり、式中、ｎは整数１４である。

いくつかの実施形態では、本開示は、以下のアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、
Ｈ－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｇ－Ｔ－Ｆ－Ｔ－Ｓ－Ｄ－Ｖ－Ｓ－Ｓ－Ｙ－Ｌ－Ｘ１６－Ｇ－Ｑ－Ａ－Ａ－Ｘ２１－Ｅ－Ｆ－Ｘ２４－Ａ－Ｗ－Ｌ－Ｖ－Ｒ－Ｇ－Ｒ－Ｇ－Ｘ３３－Ｘ３４
式中、Ｘ２がＡｉｂであり、
Ｘ３が存在せず、
Ｘ４がＧｌｕであり、
Ｘ１６がＧｌｕであり、
Ｘ２４がＩｌｅであり、
Ｘ３３がＬｅｕであり、
Ｘ３４が存在せず、
Ｘ２１がＬｙｓであり、Ｌｙｓの側鎖アミノ（εアミノ）基が以下の部分でアシル化されており、

式中、ＱおよびＴが存在せず、
Ｕが－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－｝であり、式中、｝が基Ｗとの付着点であり、
Ｗが－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－］であり、式中、］が基Ｙの付着点であり、
Ｙが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_２－ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ－－であり、式中、－－が基Ｚとの付着点であり、
Ｚが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＯＯＨであり、式中、ｎが整数１６である、ポリペプチドを提供する。

式中、ＱおよびＴが存在せず、
Ｕが－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－｝であり、式中、｝が基Ｗとの付着点であり、
Ｗが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_３）_２－ＮＨ－］であり、式中、］が基Ｙとの付着点であり、
Ｙが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_２－ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ－－であり、式中、－－が基Ｚとの付着点であり、
Ｚが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＯＯＨであり、式中、ｎが整数１６である、ポリペプチドを提供する。

式中、ＱおよびＴが存在せず、
Ｕが－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－｝であり、式中、｝が基Ｗとの付着点であり、
Ｗが－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_３－４－ＮＨ－］であり、式中、］が基Ｙとの付着点であり、
Ｙが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_２－ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ－－であり、式中、－－が基Ｚとの付着点であり、
Ｚが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＯＯＨであり、式中、ｎが整数１６である、ポリペプチドを提供する。

式中、ＱおよびＴが存在せず、
Ｕが－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－｝であり、式中、｝が基Ｗとの付着点であり、
Ｗが－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_４－ＮＨ－］であり、式中、］が基Ｙの付着点であり、
Ｙが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_２－ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ－－であり、式中、－－が基Ｚとの付着点であり、
Ｚが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＯＯＨまたは－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ_３であり、式中、ｎが１４～２０の整数である、ポリペプチドを提供する。

式中、ＱおよびＴが存在せず、
Ｕが－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－｝であり、式中、｝が基Ｗとの付着点であり、
Ｗが

であり、式中、］が基Ｙとの付着点であり、
Ｙが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_２－ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ－－であり、式中、－－が基Ｚとの付着点であり、
Ｚが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）ｎ－ＣＯＯＨであり、式中、ｎが整数１６である、ポリペプチドを提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、以下のアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、
Ｈ－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｇ－Ｔ－Ｆ－Ｔ－Ｓ－Ｄ－Ｖ－Ｓ－Ｓ－Ｙ－Ｌ－Ｘ１６－Ｇ－Ｑ－Ａ－Ａ－Ｘ２１－Ｅ－Ｆ－Ｘ２４－Ａ－Ｗ－Ｌ－Ｖ－Ｒ－Ｇ－Ｒ－Ｇ－Ｘ３３－Ｘ３４
式中、Ｘ２がＳｅｒ、Ｓｅｒ（ＯＭｅ）、Ｄ－Ｓｅｒ、Ｄ－Ｓｅｒ（ＯＭｅ）であり、
Ｘ３が存在せず、
Ｘ４がＧｌｕであり、
Ｘ１６がＧｌｕであり、
Ｘ２４がＩｌｅであり、
Ｘ３３がＬｅｕであり、
Ｘ３４が存在せず、
Ｘ２１がＬｙｓであり、Ｌｙｓの側鎖アミノ（εアミノ）基が以下の部分でアシル化されており、

式中、ＱおよびＴが存在せず、
Ｕが－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ２）_２－ＮＨ－｝であり、式中、｝が基Ｗとの付着点であり、
Ｗが－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_３－４－ＮＨ－］、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ（ＣＨ_３）_２－ＮＨ－］から選択され、式中、］が基Ｙとの付着点であり、
Ｙが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_２－ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ－－であり、式中、－－が基Ｚとの付着点であり、
Ｚが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＯＯＨまたは－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ_３であり、式中、ｎが１４～２０の整数である、ポリペプチドを提供する。

式中、Ｗは－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_３－４－ＮＨ－］である。

式中、Ｗは－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－である。

式中、Ｗは－Ｃ（Ｏ）－Ｃ（ＣＨ_３）_２－ＮＨ－］である。

いくつかの実施形態では、Ｘ２１は脂質修飾Ｌｙｓであり、Ｌｙｓの側鎖アミノ（εアミノ）基は、

表１に提供される部分によって表される部分でアシル化されている。

別の実施形態では、本開示は、表２に提供されるペプチドから選択される、先行する実施形態のいずれか１つに記載のポリペプチドを提供する。

特に明記しない限り、本開示は、配列中のアミノ酸のＬおよびＤ異性体の両方を網羅することを意図する。

本開示の本明細書に記載される場合、Ｓｅｒ（ＯＭｅ）は、そのヒドロキシル基がメチル化され、以下の構造を有する、アミノ酸セリンである。

本開示で言及されるポリペプチド配列は、ＩＵＰＡＣにより承認されたアミノ酸の単一文字コードによって表される。

本開示の実施形態のアシル化部分を定義するために本明細書で使用される場合、Ｑ、Ｔ、Ｕ、Ｗ、Ｙ、およびＺは、ポリペプチド配列を示すために使用されるアミノ酸の単一の文字コードとは異なる。

本開示のポリペプチドは、驚くべきことに、ＳＤラットにおける経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）に供された場合に、血糖の有意な減少を示した。経口グルコースで試験した場合、ＳＤラットにおける血糖の減少率は、Ｘ３３位置で追加のＬｅｕまたはＩｌｅを欠いた対応するポリペプチドよりも有意に低かった。

本発明を、以下の実施例を参照しながらさらに詳述する。実施例はあらゆる点において例示的なものとして見なされることが望ましく、特許請求される本発明の範囲を限定することを意図していない。

一般的な調製方法：
本開示のポリペプチド化合物は、本明細書で以下に記載する方法によって調製することができる。プロセスには、親線形ペプチドの調製、およびそれに続く脂肪酸鎖の親ペプチドへの付着を含む、２つの工程が関与する。

本明細書に記載のペプチドは、固相技法、例えば、Ｇ．ＢａｒａｎｙおよびＲ．Ｂ．Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄの「ＴｈｅＰｅｐｔｉｄｅ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ」第２巻「ＳｐｅｃｉａｌＭｅｔｈｏｄｓｉｎＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，ＰａｒｔＡ」、３～２８４頁、Ｅ．ＧｒｏｓｓおよびＪ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９８０、ならびにＪ．Ｍ．ＳｔｅｗａｒｔおよびＪ．Ｄ．Ｙｏｕｎｇの「Ｓｏｌｉｄ－ＰｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ」第２版、ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．，１９８４に記載されているものなどを使用した化学合成によって調製され得る。望ましい戦略は、アミノ酸側鎖の一時的保護のためのｔｅｒｔ－ブチル（－ｔＢｕ）、ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル（－Ｂｏｃ）、トリチル（－Ｔｒｔ）基などの保護基と組み合わせた、α－アミノ基の一時的保護のためのＦｍｏｃ（９－フルオレニルメチル－オキシカルボニル）基に基づく（例えば、Ｅ．ＡｔｈｅｒｔｏｎおよびＲ．Ｃ．Ｓｈｅｐｐａｒｄの「ＴｈｅＦｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌＡｍｉｎｏＰｒｏｔｅｃｔｉｎｇＧｒｏｕｐ」、「ＴｈｅＰｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ」第９巻「ＳｐｅｃｉａｌＭｅｔｈｏｄｓｉｎＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，ＰａｒｔＣ」、１～３８頁、Ｓ．ＵｎｄｅｎｆｒｉｅｎｄおよびＪ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，１９８７を参照）。

ペプチドは、不溶性ポリマー支持体（「樹脂」とも称される）において、段階的に、ペプチドのＣ末端から開始して合成することができる。合成は、アミドまたはエステル結合の形成を通して、ペプチドのＣ末端アミノ酸を樹脂に添付することによって開始する。これにより、それぞれＣ末端アミドまたはカルボン酸として得られたペプチドの最終的な放出が可能となる。

合成において使用されるＣ末端アミノ酸および他のすべてのアミノ酸は、α－アミノ保護基が合成中に選択的に除去され得るように、それらのα－アミノ基および側鎖官能基（存在する場合）を差次的に保護することを必要とする。アミノ酸の結合を、活性エステルとしてのそのカルボキシル基の活性化、および樹脂に添付されたＮ末端アミノ酸の非遮断α－アミノ基との反応によって実施する。α－アミノ基の脱保護およびカップリングの配列を、ペプチド配列全体が組み立てられるまで繰り返す。次いで、ペプチドを、通常適切なスカベンジャーの存在下で、側鎖官能基の同時脱保護を用いて樹脂から放出し、副反応を制限する。得られたペプチドを、逆相ＨＰＬＣによって最終的に精製する。

次いで、活性化脂肪酸鎖を親ペプチドと結合することによって、親ペプチドを脂肪酸鎖に結合することができる。脂肪酸鎖は、有機化学的に周知の方法によって作製され得る。例えば、脂肪酸鎖は、直鎖脂肪酸鎖の調製を可能にする固相合成方法を使用して作製することができる。

合成された線形ペプチドを、以下に概説するとおり、分取ＨＰＬＣ手順によって生成した。
分取ＨＰＬＣ：ＷＡＴＥＲＳ２５５５ＱｕａｔｅｒｎａｒｙＧｒａｄｉｅｎｔＭｏｄｕｌｅ（最大合計流量：３００ｍＬ／分、最大圧力：３０００ｐｓｉ）
ＳｈｉｍａｄｚｕＬＣ－８Ａ（最大合計流量：１５０ｍＬ、最大圧力：２０Ｍｐａ）
カラム：Ｃ１８、１０μ
流量：７５ｍＬ／分
移動相：第１の精製の場合
移動相Ａ：ｐＨ７．５のリン酸緩衝液
移動相Ｂ：アセトニトリル
勾配：３００分で１０～４０％の移動相Ｂ
第２の精製の場合
移動相Ａ：水中１％の酢酸
移動相Ｂ：アセトニトリル中１％の酢酸：ｎ－プロパノール（５０：５０）
勾配：３００分で１５～４５％の移動相Ｂ

本開示の最終化合物を、以下に概説するとおり、分取ＨＰＬＣ手順によって精製した。
分取ＨＰＬＣ：ＷＡＴＥＲＳ２５５５ＱｕａｔｅｒｎａｒｙＧｒａｄｉｅｎｔＭｏｄｕｌｅ（最大合計流量：３００ｍＬ／分、最大圧力：３０００ｐｓｉ）
ＳｈｉｍａｄｚｕＬＣ－８Ａ（最大合計流量：１５０ｍＬ、最大圧力：２０Ｍｐａ）
カラム：Ｃ１８、１０μ
流量：７５ｍＬ／分

本開示の化合物の純度を、以下に概説するとおり、ＲＰ－ＨＰＬＣ法によって分析した。
ＨＰＬＣ法Ｂ１：
カラム：ＹＭＣＰａｃｋ－Ｐｈ（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、３μ）
溶離液：移動相Ａ：水中０．１％のトリフルオロ酢酸
移動相Ｂ：アセトニトリル中０．１％のトリフルオロ酢酸
流量：１．５ｍＬ／分
検出：２１０ｎｍでのＵＶ検出
カラム温度：５０℃
実行時間：５０分

ＨＰＬＣ法Ｂ２：
カラム：ＹＭＣ－ＰａｃｋＰｒｏＣ１８（４ｍｍ×２５０ｍｍ、３μ）
溶離液：移動相Ａ：緩衝液：アセトニトリル（９００：１００）
移動相Ｂ：緩衝液：アセトニトリル（３００：７００）
緩衝液：オルトリン酸でｐＨを３．０±０．１に調節した、水中のオルトリン酸二水素カリウム
流量：１．０ｍＬ／分
検出：２１０ｎｍでのＵＶ検出
カラム温度：５０℃
試料トレー温度：８℃

ＨＰＬＣ法Ｂ３：
カラム：ＷａｔｅｒｓＸ－ＳｅｌｅｃｔＣＳＨ－Ｃ１８（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ、２．５μ）
溶離液：移動相Ａ：緩衝液：アセトニトリル（９００：１００）
移動相Ｂ：緩衝液：アセトニトリル（３００：７００）
緩衝液：オルトリン酸でｐＨを１．５±０．１に調節した、水中のオルトリン酸二水素カリウム
流量：０．９ｍＬ／分
検出：２１０ｎｍでのＵＶ検出
カラム温度：４０℃
試料トレー温度：５℃

本開示の化合物を、以下に概説するとおり、ＬＣＭＳによって分析した。

質量スペクトルは、ＷａｔｅｒｓＡｃｑｕｉｔｙ（登録商標）ＱＤａ（登録商標）、ＷａｔｅｒｓＭｉｃｒｏｍａｓｓＱｕａｔｔｒｏＭｉｃｒｏＡＰＩ、またはＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＬＣＱＦｌｅｅｔ（商標）を使用して、ＬＣＭＳ上に記録した。試験溶液は、好適な量の分析物を、分析物のイオン化に応じて１μｇ／ｍｌ～５０μｇ／ｍｌの最終濃度で希釈液中に溶解することによって調製した。試験溶液を、毎分約１０μｌ～５０μｌの速度でＬＣＭＳに１分間注入し、質量スペクトルは、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）正または負のモードで記録し、適切な質量範囲内であった。

実施例１：活性化脂肪酸側鎖の調製：
１．１８－［［（１Ｓ）－１－カルボキシ－４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－４－オキソ－ブチル］アミノ］－１８－オキソ－オクタデカン酸（部分Ａ－ＯＳｕ、中間体３）の調製
活性化脂肪酸側鎖である部分Ａ－ＯＳｕを、図１Ａに概略的に表されるように、２－クロロトリチルクロリド樹脂を使用した固相合成によって調製した。２－［２－（２－Ｆｍｏｃ－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸（中間体１）を、Ｎ，Ｎ’－ジ－イソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）の存在下で２－クロロトリチルクロリド樹脂に付着させて、２－［２－（２－Ｆｍｏｃ－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。中間体１は、２－［２－（２－アミノエトキシ）－エトキシ］酢酸のＦｍｏｃＮ－ヒドロキシスクシンイミドエステルとの結合によって調製することができる。あるいは、中間体１は市販されており、そのように調達することができる。Ｆｍｏｃ保護基を、ピペリジンを使用した２－［２－（２－Ｆｍｏｃ－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂のアミノ基の選択的な脱遮断によって除去し、次いで、遊離アミノ基を、１－ヒドロキシベンズトリアゾール（ＨＯＢｔ）およびＮ，Ｎ’－ジ－イソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣ）を使用して２－［２－（２－Ｆｍｏｃ－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸と結合して、２－［２－［２－［［２－［２－（２－Ｆｍｏｃ－アミノエトキシ）エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。次いで、Ｆｍｏｃ群を、ピペリジンを使用した２－［２－［２－［［２－［２－（２－Ｆｍｏｃ－アミノエトキシ）エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂のアミノ基の選択的な脱遮断によって除去し、次いで、遊離アミノ基を、ＨＯＢｔおよびＤＩＰＣを使用してＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕに結合して、２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－Ｆｍｏｃ－アミノ－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。得られた２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－４－Ｆｍｏｃ－アミノ－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を、ピペリジンを使用して選択的に脱遮断し、次いでオクタデカン二酸モノｔｅｒｔ－ブチルエステルと結合して、中間体２、すなわち［２－［２－［２－［［２－［２－［２－［［（４Ｓ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－［（１８－ｔｅｒｔ－ブトキシ－１８－オキソ－オクタデカノイル）アミノ］－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸］－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。次いで、中間体２を、トリフルオロエタノール：ＤＣＭ（１：１）を使用して２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂から切断した。次いで、得られた化合物をイソブチルクロロホルメート（ＩＢＣＦ）およびＮ－メチルモルホリン（ＮＭＭ）の存在下でＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）と反応させ、続いてトリフルオロ酢酸を用いて脱保護して、表題化合物（部分Ａ－ＯＳｕ、中間体３）を得た。全プロセスは、図１Ｂに概略的に表されるように示すこともできる。

２．Ｎ－パルミトイル－Ｌ－γ－グルタミルスクシンイミドエステル（部分Ｂ－ＯＳｕ）の調製

Ｌ－グルタミン酸アルファ－ｔｅｒｔ－ブチルエステル（Ｈ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ）をＩＢＣＦおよびＮＭＭの存在下でパルミチン酸と反応させて、ＣＨ_３－（ＣＨ_２）_１４－Ｃ（Ｏ）－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕを得、次いでそれをＩＢＣＦおよびＮＭＭの存在下でＨＯＳｕと反応させて、ＣＨ_３－（ＣＨ_２）_１４－Ｃ（Ｏ）－Ｇｌｕ（ＯＳｕ）－ＯｔＢｕを得、次いでそれをトリフルオロ酢酸で脱保護して、部分Ｂ－ＯＳｕを得た。

３．１８－［［（１Ｓ）－１－カルボキシ－４－［４－［２－［２－［２－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルカルバモイルアミノ］ブチルアミノ］－４－オキソ－ブチル］アミノ］－１８－オキソ－オクタデカン酸（部分Ｃ－ＯＳｕ）の調製
活性化脂肪酸側鎖である部分Ｃ－ＯＳｕを、図２に概略的に表されるように、２－クロロトリチルクロリド樹脂を使用した固相合成を使用して調製した。２－［２－（２－Ｆｍｏｃ－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸を、ＤＩＰＥＡの存在下で２－クロロトリチルクロリド樹脂に付着させて、２－［２－（２－Ｆｍｏｃ－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。Ｆｍｏｃ保護基を、ピペリジンを使用したアミノ基の選択的な脱遮断によって除去し、次いで、遊離アミノ基を、ＴＨＦおよびＤＩＰＥＡ中のｐ－ニトロフェニルクロロホルメート使用して活性化し、続いてＴＨＦ：ＤＭＡｃおよびＤＩＰＥＡ中のＦｍｏｃ－アミノブチルアミン塩酸塩と反応させて、２－［２－［２－（４－Ｆｍｏｃ－アミノブチルカルバモイルアミノ）エトキシ］エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。Ｆｍｏｃ群を、ピペリジンを使用した選択的な脱遮断によって除去し、次いで、遊離アミノ基を、ＨＯＢｔおよびＤＩＰＣを使用してＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕに結合し、２－［２－［２－［４－［［（４Ｓ）－４－Ｆｍｏｃ－アミノ－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］ブチルカルバモイルアミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。得られた２－［２－［２－［４－［［（４Ｓ）－４－Ｆｍｏｃ－アミノ－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］－ブチルカルバモイルアミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を、ピペリジンを使用して選択的に脱遮断し、次いでオクタデカン二酸モノｔｅｒｔ－ブチルエステルと結合して、中間体２－［２－［２－［４－［［（４Ｓ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－［（１８－ｔｅｒｔ－ブトキシ－１８－オキソ－オクタデカノイル）アミノ］－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］ブチルカルバモイルアミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸］－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。次いで、中間体を、トリフルオロエタノール：ＤＣＭ（１：１）を使用して２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂から切断して、２－［２－［２－［４－［［（４Ｓ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－［（１８－ｔｅｒｔ－ブトキシ－１８－オキソ－オクタデカノイル）アミノ］－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］ブチルカルバモイルアミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸（ＬＣＭＳ＝ｍ／ｚ：８１４．５６（Ｍ＋Ｈ^＋））を得た。次いで、得られた化合物をジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）の存在下でＨＯＳｕと反応させて、スクシンイミド保護中間体を得、これを、トリフルオロ酢酸を用いて脱保護して、表題化合物（部分Ｃ－ＯＳｕ）を得た。

４．１８－［［（１Ｓ）－１－カルボキシ－４－［［２－［２－［２－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］－１，１－ジメチル－２－オキソ－エチル］アミノ］－４－オキソ－ブチル］アミノ］－１８－オキソ－オクタデカン酸（部分Ｄ－ＯＳｕ）の調製
脂肪酸側鎖を、図３に概略的に表されるように、２－クロロトリチルクロリド樹脂を使用した固相合成を使用して調製した。２－［２－（２－Ｆｍｏｃ－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸を、ＤＩＰＥＡの存在下で２－クロロトリチルクロリド樹脂に付着させて、２－［２－（２－Ｆｍｏｃ－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。Ｆｍｏｃ保護基を、ピペリジンを使用したアミノ基の選択的な脱遮断によって除去し、続いてＤＩＰＣおよびＨＯＢｔを使用してＴＨＦ：ＤＭＡｃ中のＦｍｏｃ－Ａｉｂ－ＯＨと結合して、２－［２－［２－［（２－Ｆｍｏｃ－アミノ－２－メチル－プロパノイル）アミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。Ｆｍｏｃ基を、ピペリジンを使用した選択的な脱遮断によって除去し、遊離アミノ基を、ＨＯＢｔおよびＤＩＰＣを使用してＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕと結合して、２－［２－［２－－［［２－［［（４Ｓ）－４－Ｆｍｏｃ－アミノ－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］－２－メチル－プロパノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。得られた化合物のＦｍｏｃ基を、ピペリジンを使用して選択的に脱遮断し、次いで、遊離アミノ基を、オクタデカン二酸モノｔｅｒｔブチルエステルと結合して、２－［２－［２－［［２－［［（４Ｓ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－［（１８－ｔｅｒｔ－ブトキシ－１８－オキソ－オクタデカノイル）アミノ］－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］－２－メチル－プロパノイル］－アミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。次いで、中間体を、トリフルオロエタノール：ＤＣＭ（１：１）を使用して２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂から切断して、２－［２－［２－［［２－［［（４Ｓ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－［（１８－ｔｅｒｔ－ブトキシ－１８－オキソ－オクタデカノイル）アミノ］－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］－２－メチル－プロパノイル］アミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸（ＬＣＭＳ＝ｍ／ｚ：７８６．３９（Ｍ＋Ｈ^＋））を得た。次いで、得られた化合物をＤＣＣの存在下でＨＯＳｕと反応させて、スクシンイミド保護中間体を得、これを、トリフルオロ酢酸を用いて脱保護して、表題化合物（部分Ｄ－ＯＳｕ）を得た。

５．１８－［［（１Ｓ）－１－カルボキシ－４－［３－［２－［２－［２－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルカルバモイルアミノ］プロピルアミノ］－４－オキソ－ブチル］アミノ］－１８－オキソ－オクタデカン酸（部分Ｅ－ＯＳｕ）の調製
脂肪酸側鎖を、図４に概略的に表されるように、２－クロロトリチルクロリド樹脂を使用した固相合成を使用して調製した。２－［２－（２－Ｆｍｏｃ－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸を、ＤＩＰＥＡの存在下で２－クロロトリチルクロリド樹脂に付着させて、２－［２－（２－Ｆｍｏｃ－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。Ｆｍｏｃ保護基を、ピペリジンを使用したアミノ基の選択的な脱遮断によって除去し、次いで、遊離アミノ基を、ＴＨＦおよびＤＩＰＥＡ中のｐ－ニトロフェニルクロロホルメート使用して活性化し、続いてＨＯＢｔを使用してＤＩＰＥＡの存在下でＴＨＦ：ＤＭＡｃ中の１，３－ジアミノプロパンと反応させて、ＮＨ_２－（ＣＨ_２）_３－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－｛（２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ｝－酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を形成した。次いで、遊離アミノ基を、ＨＯＢｔおよびＤＩＰＣを使用してＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕと結合し、これにより２－［２－［２－［３－［［（４Ｓ）－４－Ｆｍｏｃ－アミノ－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］プロピルカルバモイルアミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。得られた２－［２－［２－［３－［［（４Ｓ）－４－Ｆｍｏｃ－アミノ－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］プロピルカルバモイルアミノ］エトキシ］－エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を、ピペリジンを使用して選択的に脱遮断し、次いでオクタデカン二酸モノｔｅｒｔブチルエステルと結合して、２－［２－［２－［３－［［（４Ｓ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－［（１８－ｔｅｒｔ－ブトキシ－１８－オキソ－オクタデカノイル）アミノ］－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］プロピルカルバモイルアミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸］－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。次いで、中間体を、トリフルオロエタノール：ＤＣＭ（１：１）を使用して２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂から切断して、２－［２－［２－［［３－［［（４Ｓ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－［（１８－ｔｅｒｔ－ブトキシ－１８－オキソ－オクタデカノイル）アミノ］－５－オキソ－ペンタノイル］アミノ］－プロピルカルバモイルアミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸（ＬＣＭＳ＝ｍ／ｚ：８０１．４１（Ｍ＋Ｈ^＋））を得た。次いで、得られた化合物をジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）の存在下でＨＯＳｕと反応させて、スクシンイミド保護中間体を得、これを、トリフルオロ酢酸を用いて脱保護して、表題化合物（部分Ｅ－ＯＳｕ）を得た。

６．１８－［［（１Ｓ）－１－カルボキシ－４－［４－［２－［２－［２－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ－２－オキソ－エトキシ］エトキシ］エチルカルバモイルアミノ］－１－ピペリジル］－４－オキソ－ブチル］アミノ］－１８－オキソ－オクタデカン酸（部分Ｆ－ＯＳｕ）の調製
脂肪酸側鎖を、図５に概略的に表されるように、２－クロロトリチルクロリド樹脂を使用した固相合成を使用して調製した。２－［２－（２－Ｆｍｏｃ－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸を、ＤＩＰＥＡの存在下で２－クロロトリチルクロリド樹脂に付着させて、２－［２－（２－Ｆｍｏｃ－アミノエトキシ）エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。Ｆｍｏｃ保護基を、ピペリジンを使用したアミノ基の選択的な脱遮断によって除去し、次いで、遊離アミノ基を、ＴＨＦおよびＤＩＰＥＡ中のｐ－ニトロフェニルクロロホルメート使用して活性化し、続いてＨＯＢｔを使用してＤＩＰＥＡの存在下でＴＨＦ：ＤＭＡｃ中の４－アミノ－Ｂｏｃ－ピペリジンと反応させて、（２－［２－［２－（４－Ｂｏｃ－ピペリジルカルバモイルアミノ）エトキシ］エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。トリフルオロ酢酸を使用した切断において得られた化合物は、２－［２－［２－（４－ピペリジルカルバモイルアミノ）エトキシ］エトキシ］酢酸をもたらし、これを、トリエチルアミン（ＴＥＡ）の存在下でＦｍｏｃ－ＯＳｕとさらに反応させることによって、２－［２－［２－（４－Ｆｍｏｃ－ピペリジルカルバモイルアミノ）エトキシ］エトキシ］酢酸を得た。次いで、得られた化合物を、ＤＩＰＥＡの存在下で２－クロロトリチルクロリド樹脂にさらに付着させて、２－［２－［２－（４－Ｆｍｏｃ－ピペリジルカルバモイルアミノ）エトキシ］エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。Ｆｍｏｃ基を、ピペリジンを使用した選択的な脱保護によって除去し、次いで、遊離アミノ基を、ＨＯＢｔおよびＤＩＰＣを使用してＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕと結合して、２－［２－［２－［［１－［（４Ｓ）－４－アミノ－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－５－オキソ－ペンタノイル］－４－ピペリジル］カルバモイルアミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。得られた化合物を、ピペリジンを使用して選択的に脱遮断し、次いで、オクタデカン二酸モノｔｅｒｔ－ブチルエステルと結合して、２－［２－［２－［［１－［（４Ｓ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－［（１８－ｔｅｒｔ－ブトキシ－１８－オキソ－オクタデカノイル）アミノ］－５－オキソ－ペンタノイル］－４－ピペリジル］カルバモイルアミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸－２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂を得た。次いで、中間体を、トリフルオロエタノール：ＤＣＭ（１：１）を使用して２－Ｃｌ－Ｔｒｔ－樹脂から切断して、２－［２－［２－［［１－［（４Ｓ）－５－ｔｅｒｔ－ブトキシ－４－［（１８－ｔｅｒｔ－ブトキシ－１８－オキソ－オクタデカノイル）アミノ］－５－オキソ－ペンタノイル］－４－ピペリジル］カルバモイルアミノ］エトキシ］エトキシ］酢酸（ＬＣＭＳ＝ｍ／ｚ：８２７．４０（Ｍ＋Ｈ^＋））を得た。次いで、得られた化合物をＤＣＣの存在下でＨＯＳｕと反応させて、スクシンイミド保護中間体を得、これを、トリフルオロ酢酸を使用して脱保護して、表題化合物である部分Ｆ－ＯＳｕを得た。

実施例２：化合物１：
Ｎ－ε^２６－［２－（２－［２－（２－［２－（２－［４－（１７－カルボキシへプタデカノイルアミノ）－４（Ｓ）カルボキシブチリルアミノ］エトキシ）エトキシ］アセチルアミノ）エトキシ］エトキシ）アセチル］［（Ａｉｂ^８、Ａｒｇ^３４、Ｌｅｕ^３８ＧＬＰ－１（７－３８）ペプチドの合成
パートＡ．親線形ペプチドＡｉｂ^８、Ａｒｇ^３４、Ｌｅｕ^３８ＧＬＰ－１（７－３８）の合成
親ペプチドを固相方法により合成した。合成に使用した開始樹脂はＷａｎｇ樹脂であった。Ｆｍｏｃ保護ロイシンをＷａｎｇ樹脂との結合に使用した。結合は、４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下で、ジイソプロピルカルボジイミド、結合試薬としてＮ－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＤＩＣ－ＨＯＢｔ）を使用することによって実施し、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－Ｗａｎｇ樹脂を得た。ピペリジンを使用したＦｍｏｃ－Ｌｅｕ－Ｗａｎｇ樹脂のアミノ基の選択的な脱遮断に続いて、ＨＯＢｔおよびＤＩＰＣを使用してＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨと結合することにより、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－Ｗａｎｇ樹脂を得た。これにより、１サイクルが完了する。酢酸無水物およびジイソプロピルエチルアミン／ピリジンを使用して、各アミノ酸結合において未結合アミノ基を終結させた。

上述の２つの工程、すなわち、樹脂に付着したアミノ酸のＦｍｏｃ保護の選択的な脱遮断、および配列中隣のアミノ酸残基のＦｍｏｃ保護アミノ基との結合を、残りの３０個のアミノ酸残基に対して繰り返した。選択的な脱遮断、すなわち、Ｆｍｏｃ群の脱保護を、ピペリジンを使用して行い、隣のＦｍｏｃ保護アミノ酸との結合をＨＯＢｔ／ＤＩＰＣを使用して行った。Ｆｍｏｃ保護アミノ酸の側鎖は直交して保護され、例えば、セリン、チロシン、またはスレオニンのヒドロキシル基は、ｔｅｒｔ－ブチル（－ｔＢｕ）基で保護され、リジンおよびアルギニンのアミノおよびグアニド基は、それぞれｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル（－Ｂｏｃ）および２，２，４，６，７－ペンタメチルジヒドロベンゾフラン－５－スルホニル（－Ｐｂｆ）基で保護され、ヒスチジンのイミダゾールは、トリチル（－Ｔｒｔ）で保護され、アスパラギン酸またはグルタミン酸のカルボン酸基は、ｔＢｕ群で保護された。上述の２つの工程、すなわち、選択的な脱遮断、および次いで、隣のＦｍｏｃ保護アミノ酸との結合を実施して、Ｆｍｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－Ａｉｂ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ｖａｌ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｇｌｙ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－樹脂を得た。

ピペリジンを使用したＦｍｏｃ－Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）－Ａｉｂ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）－Ｖａｌ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－Ｔｙｒ（ｔＢｕ）－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｇｌｙ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－樹脂の脱遮断、続いてトリフルオロ酢酸をエタン－１，２－ジチオールとともに使用した切断および脱保護により、粗Ｈ－Ｈｉｓ－Ａｉｂ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－ＯＨ（Ａｉｂ^８、Ａｒｇ^３４、Ｌｅｕ^３８ＧＬＰ－１（７－３８）ペプチド）を得、これをＨＰＬＣにより精製した。

パートＢ：
活性化脂肪酸鎖である部分Ａ－ＯＳｕを、パートＡで得られた精製（線形ペプチド）Ｈ－Ｈｉｓ－Ａｉｂ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｖａｌ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｌｅｕ－ＯＨ上に、ｐＨ約１０のアセトニトリル中で移植することにより、粗表題ペプチドをもたらし、これを分取ＨＰＬＣにより精製した。化合物の特性評価を表３に提供する。

実施例３：化合物２、３、５、９、１０、および１２の調製
化合物２、３、５、９、１０、および１２の線形ペプチドを、実施例１のパートＡに記載の類似プロセスによって固相方法により調製した。実施例１のパートＢのプロセスに従って、活性化脂肪酸鎖である部分Ａ－ＯＳｕをそれぞれの線形ペプチド上に移植することにより、化合物２、３、５、９、１０、および１２を得た。

実施例４：化合物４および１１の調製：
化合物４および１１の線形ペプチドを、実施例２のパートＡに記載の類似プロセスによって固相方法により調製したが、ただしここでは、Ｆｍｏｃ保護Ｄ－ロイシンを最初にＷａｎｇ樹脂と結合し、次いで順次他のアミノ酸を結合した。実施例２のパートＢのプロセスに従って、活性化脂肪酸鎖である部分Ａ－ＯＳｕをそれぞれの線形ペプチド上に移植することにより、化合物４および１１を得た。

実施例５：化合物８の調製
線形ペプチドを、実施例２のパートＡに記載の類似プロセスによって固相方法により調製したが、ただしここでは、Ｆｍｏｃ保護イソロイシンを最初にＷａｎｇ樹脂と結合し、次いで順次他のアミノ酸を結合した。実施例２のパートＢのプロセスに従って、活性化脂肪酸鎖である部分Ａ－ＯＳｕを線形ペプチド上に移植することにより、化合物８を得た。

実施例６：化合物６の調製
線形ペプチドを、実施例２のパートＡに記載の類似プロセスによって固相方法により調製した。実施例２のパートＢの類似プロセスに従って、活性化脂肪酸鎖である部分Ｂ－ＯＳｕを線形ペプチド上に移植することにより、化合物６を得た。

実施例７：化合物７の調製
実施例２のパートＢの類似プロセスに従って、活性化脂肪酸鎖である部分Ｂ－ＯＳｕを実施例２のパートＡの線形ペプチド上に移植することにより、化合物７を得た。

実施例８：化合物１３の調製
実施例１のパートＢの類似プロセスに従って、活性化脂肪酸鎖である部分Ｃ－ＯＳｕを実施例１のパートＡの線形ペプチド上に移植することにより、化合物１３を得た。

実施例９：化合物１４の調製
線形ペプチドを、実施例２のパートＡに記載の類似プロセスによって固相方法により調製した。実施例２のパートＢの類似プロセスに従って、活性化脂肪酸鎖である部分Ｃ－ＯＳｕを線形ペプチド上に移植することにより、化合物１４を得た。

実施例１０：化合物１５の調製
線形ペプチドを、実施例２のパートＡに記載の類似プロセスによって固相方法により調製し、Ｆｍｏｃ保護イソロイシンを最初にＷａｎｇ樹脂と結合し、次いで順次他のアミノ酸を結合することによって開始した。実施例２のパートＢの類似プロセスに従って、活性化脂肪酸鎖である部分Ｃ－ＯＳｕを線形ペプチド上に移植することにより、化合物１５を得た。

実施例１１：化合物１６の調製
実施例２のパートＢの類似プロセスに従って、活性化脂肪酸鎖である部分Ｄ－ＯＳｕを実施例２のパートＡの線形ペプチド上に移植することにより、化合物１６を得た。

実施例１２：化合物１７の調製
実施例２のパートＢの類似プロセスに従って、活性化脂肪酸鎖である部分Ｅ－ＯＳｕを実施例２のパートＡの線形ペプチド上に移植することにより、化合物１７を得た。

実施例１３：化合物１８の調製
実施例２のパートＢの類似プロセスに従って、活性化脂肪酸鎖である部分Ｆ－ＯＳｕを実施例２のパートＡの線形ペプチド上に移植することにより、化合物１８を得た。

本開示の合成化合物の特性評価データを、以下の表３に提供する。

実施例１４：ラットにおける経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）、単回注射、１ｍｇ／ｋｇ
動物を３つの群（正常対照群、試験群、および第３のセマグルチド群）に分け、各群４匹とした。動物を、ＯＧＴＴの開始前に１２時間絶食させた。試験群動物に、化合物１を１ｍｇ／ｋｇ用量で皮下注射した。セマグルチド群に、１ｍｇ／ｋｇの用量を皮下注射した。試験薬剤またはセマグルチドの皮下注射の２２時間後、１６６時間後、および３３４時間後に、血糖値測定器を用いて血糖値を測定した（時間０測定値）。次いで、すべての動物に２ｇ／ｋｇのグルコース溶液を経口投与した。血糖値を、グルコース試験の２０、４０、６０、９０、および１２０分後に測定した。体重および食物摂取量を記録した。血糖データを、二元配置分散分析（ＴｗｏＷａｙＡＮＯＶＡ）を使用して分析し、続いてＰＲＩＳＭ（ＧｒａｐｈＰａｄバージョン５．０３）を使用してＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの検定後補正を実施した。血糖ＡＵＣ_{０～１２０分}のデータを、ｔ試験を使用して分析した。

本開示のポリペプチドは、ラットにおける経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）で研究した場合、対照群と比較して有意なグルコース低下効果を示している。例えば、図６は、化合物１を投与された試験群およびセマグルチド治療群における、２２時間後および４６時間後の時間０～１２０分の血糖値の変化を提供する。単回投与の２２時間後、正常対照に対してｐ＜０．００１でのＡＮＯＶＡに続いて、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉの検定後補正を実施し、化合物１は血糖値の統計的に有意な減少を示した。化合物１のグルコース低下効果は、セマグルチドで観察されたグルコース低下効果に対して優れていた（図６Ａ参照）。皮下投与の４６時間後でさえも、化合物１のグルコース低下効果の優越性が観察された（図６Ｂ）。さらに、化合物１およびセマグルチドの両方が、２日目ならびに４日目に観察されたときの対照と比較して、食物摂取量の統計的に有意な減少を示した（表４および５参照）。４日目に化合物１によって示された食物摂取量の減少は、セマグルチドよりも大きかった（表５参照）。体重減少に関しては、試験化合物のみが４日目に体重の有意な減少を示した。

驚くべきことに、ＬｅｕおよびＩｌｅとしてＸ３３を有する化合物は、所与の研究において血糖の有意な減少を示し、一方でＬｅｕおよびＩｌｅ以外のアミノ酸を有する化合物は、血糖の低下において有意に少ない効果を有することを見出した。本開示のポリペプチドは、対照群と比較した場合、血糖の有意な減少を示している。また、Ｘ３３位置にＬｅｕおよびＩｌｅ以外のアミノ酸を有する化合物も試験した。例えば、化合物１（配列番号０５）の３２番目の位置にあるＬｅｕをＬｙｓおよびＳｅｒで置換し、それぞれ化合物標準１および標準２を得た。標準１および標準２は、血糖ＡＵＣ_{０～１２０分}において約３５％および１５％のみの減少を示した（表６）。

同様に、３２番目の位置に追加のＬｅｕを有する点でリラグルチドとは異なる化合物６、および第２のアミノ酸ＡｌａをＡｉｂで置換し、追加の３２番目のアミノ酸としてＬｅｕを有する点でリラグルチドとは異なる化合物７は、２４時間で血糖低下効果を示し、これはリラグルチドよりも有意に高かった（表６）。

化合物１が、グルコース減少、食物摂取量および体重減少に関して有意により良好であると決定されると、本発明の化合物の作用持続時間を決定するために実験を実施した。１６６時間（７日）後および３３４時間（１４日）後の本発明の代表的化合物（化合物１、１３、および１６）の効果を研究し、セマグルチドの効果と比較した。化合物を、以下に提供する方法によって試験した。

動物を３つの群（正常対照群、試験群、および第３のセマグルチド群）に分け、各群４匹とした。動物を、ＯＧＴＴの開始前に１２時間絶食させた。試験群動物に、化合物１、化合物１３、および化合物１６を、１ｍｇ／ｋｇ用量で皮下注射した。セマグルチド群に、１ｍｇ／ｋｇの用量を皮下注射した。試験化合物またはセマグルチドの皮下注射の２２時間後、１６６時間後、および３３４時間後に、血糖値測定器を用いて血糖値を測定した（時間０測定値）。次いで、すべての動物に２ｇ／ｋｇのグルコース溶液を経口投与した。血糖値を、グルコース試験後に２０、４０、６０、９０、および１２０分で測定した。体重および食物摂取量を記録した。血糖データを、二元配置分散分析（ＴｗｏＷａｙＡＮＯＶＡ）を使用して分析し、続いてＰＲＩＳＭ（ＧｒａｐｈＰａｄバージョン５．０３）を使用してＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの検定後補正を実施した。血糖ＡＵＣ_{０～１２０分}のデータを、ｔ試験を使用して分析した。

表７は、本発明の代表的化合物（化合物１、１３、および１６）の血糖ＡＵＣの減少を、投与の１日後、７日後、および１４日後の対照群と比較して提供する。

化合物１および１３を研究してある実験（実験１）においてセマグルチドと比較し、化合物１６を研究して別個の実験（実験２）においてセマグルチドと比較した。注射の１６８時間後、本発明の化合物１、１３、および１６は、時間ゼロ血糖値と比較した場合、血糖ＡＵＣの約６０％の減少を示した。一方、セマグルチドは、時間ゼロ血糖値に対して血糖値の約２５％の減少を示した。

食物消費量および体重変化について同様の観察を行った。以下の表８に見られるように、代表的化合物（化合物１、１３、および１６）を投与された動物は、セマグルチドを投与された動物と比較した場合、有意に少ない食物を消費した。化合物１６は、体重の実質的な低下を示し、肥満治療への潜在的な有用性を実証した。

実施例１５：慢性治療後のｄｂ／ｄｂ２型糖尿病マウスにおけるＨｂＡ１ｃの減少
この研究を、糖尿病マウスモデルにおいて行った。動物を、糖尿病対照群、試験群、およびセマグルチド治療群の３つの治療群に分けた。本開示の化合物１を、０．３ｍｇ／ｋｇ用量で１日１回、３日間（ｑｄ×３）、続いて、０．１ｍｇ／ｋｇ用量を隔日で７用量（ｑ２ｄ＊７）、続いて、０．１ｍｇ／ｋｇ用量を４日に１度、２用量サイクル（ｑ４ｄ×２）皮下注射した。同じ投与レジメンをセマグルチド治療群に投与した。血糖値および体重の測定を毎日行った。％ＨｂＡ１ｃを、カラムクロマトグラフィーによって、０日目、７日目、１４日目、および２７日目に測定した。累積食物摂取量を２７日目に計算した。％ＨｂＡ１Ｃデータを、二元配置分散分析（ＴｗｏＷａｙＡＮＯＶＡ）によって分析し、続いてＰＲＩＳＭ（ＧｒａｐｈＰａｄバージョン５．０３）を使用してＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの検定後補正を実施した。

化合物１を投与された試験群の動物は、糖尿病対照群と比較して血糖値の統計的に有意な減少を示し（図７参照）、効果は、研究後期におけるセマグルチド治療群よりも優れていた。化合物１を投与された試験群の動物は、図８に提供される結果に見られるように、食物摂取量の有意な減少を示した。図８は、対照および試験化合物で治療されたｄｂ／ｄｂマウスによる、０～２７日目の累積食物摂取量を提供する。試験化合物およびセマグルチドの両方が、糖尿病対照群と比較して、食物摂取量の統計的に有意な減少を示した。さらに、試験化合物は、セマグルチドと比較して有意に低い食物摂取量を示した。同じ研究では、化合物１は、糖尿病対照群と比較した場合、体重の有意な減少も示している。図９は、０日目～２７日目の対照群および試験群の体重変化率％の結果を提供する。試験化合物１は、セマグルチド治療群で観察された場合の－８％と比較して、－１６％の有意な減少を示した（図９参照）。

糖尿病において、より高い量のＨｂＡ１ｃは、血糖値のより不良な制御を示すものであり、心血管性疾患、腎症、神経障害、および網膜症に関連している。２７日間の研究では、化合物１は、慢性治療後のｄｂ／ｄｂ２型糖尿病マウスにおけるＨｂＡ１ｃレベルの統計的に有意な減少を示した。以下の表９および図１０は、糖尿病対照群および化合物１を用いた慢性治療後の群における０～２７日間でのＨｂＡ１ｃのレベルを提供する。効果は、セマグルチドと比較した場合でさえ統計的に有意であった。

別個の研究では、試験化合物１、１３、および１６を研究し、ＨｂＡ１ｃおよびインスリンレベル、ならびに累積食物消費量、体重変化、および血糖ＡＵＣに対するそれらの効果についてセマグルチドと比較した。この研究を、糖尿病マウスモデルに対して上記と同様の様式で実施した。動物を、糖尿病対照群、試験群、およびセマグルチド治療群の３つの治療群に分けた。本開示の代表的化合物である、化合物１、化合物１３、および化合物１６を、３．０４または６．０７８ｎＭ用量で皮下注射した（隔日で最長２８日目まで、ｑ２ｄ×１５）。同じ投与レジメンをセマグルチド治療群に投与した。血糖値および体重の測定を毎日行った。％Ｈｂａ１ｃ、インスリンを、０日目、１４日目、および２９日目に測定した。累積食物摂取量および体重変化を、１４日目および２９日目に計算した。％ＨｂＡ１ｃ、インスリンデータを、二元配置分散分析（ＴｗｏＷａｙＡＮＯＶＡ）によって分析し、続いてＰＲＩＳＭ（ＧｒａｐｈＰａｄバージョン５．０３）を使用してＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの検定後補正を実施した。一方、血糖ＡＵＣ、体重変化、および累積食物摂取量データを、一元配置分散分析（ＯｎｅＷａｙＡＮＯＶＡ）によって分析し、続いてＰＲＩＳＭ（ＧｒａｐｈＰａｄバージョン５．０３）を使用してＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの検定後補正を実施した。２９日目から４５日目まで、動物を回復期間に保ち、その間薬物治療は行わなかった。この期間中、血糖値および体重を測定した。４５日目に、体重変化、％Ｈｂａ１ｃ、インスリンを測定した。

結果を、以下の表１０、１１、および１２に提供する。

約３ｎＭおよび６ｎＭの用量での本開示の代表的化合物（化合物１、１３、および１６）は、対照と比較した場合にＨｂＡ１ｃ、血糖値、食物消費量、および体重において有意な減少を示した（表１２）。減少は、約１２ｎＭ用量でのセマグルチドによって示されるものと同等であった。さらに、効果は２９日後でさえ見られ（表１３および１４）、頻繁な投与を必要とせず、ひいては患者の服薬順守を増す長期作用薬剤を開発するための、本発明の化合物の潜在能力を実証する。

これらの結果は、本発明の化合物が、糖尿病および肥満の治療のための潜在的な使用を見出すことができることを実証する。

Claims

以下のアミノ酸配列を含むポリペプチドであって、
Ｈ－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｇ－Ｔ－Ｆ－Ｔ－Ｓ－Ｄ－Ｖ－Ｓ－Ｓ－Ｙ－Ｌ－Ｘ１６－Ｇ－Ｑ－Ａ－Ａ－Ｘ２１－Ｅ－Ｆ－Ｘ２４－Ａ－Ｗ－Ｌ－Ｖ－Ｒ－Ｇ－Ｒ－Ｇ－Ｘ３３－Ｘ３４
式中、Ｘ２がＳｅｒ、Ｓｅｒ（ＯＭｅ）、Ｄ－Ｓｅｒ、Ｄ－Ｓｅｒ（ＯＭｅ）、Ａｌａ、またはＡｉｂであり、
Ｘ３が存在しないか、またはＧｌｎであり、
Ｘ４がＧｌｕであり、
Ｘ１６がＧｌｕであり、
Ｘ２４がＩｌｅであり、
Ｘ３３がＬｅｕ、－Ｄ－Ｌｅｕ、Ｄ－Ｉｌｅ、またはＩｌｅであり、
Ｘ３４が存在せず、
Ｘ２１がＬｙｓであり、Ｌｙｓの側鎖アミノ（εアミノ）基が以下の部分でアシル化されており、

式中、ＱおよびＴが存在せず、
Ｕが存在しないか、または－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－｝であり、式中、｝が基Ｗとの付着点であり、
Ｗが存在しないか、または－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－］、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_３－４－ＮＨ－］、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ（ＣＨ_３）_２－ＮＨ－］、および

からなる群から選択され、式中、］が基Ｙとの付着点であり、
Ｙが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_２－ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ－－であり、－－が基Ｚとの付着点であり、
Ｚが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＯＯＨまたは－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ_３であり、式中、ｎが１４～２０の整数である、ポリペプチド。
Ｘ２がＡｉｂであり、
Ｘ３が存在せず、
Ｘ３３がＬｅｕであり、
Ｕが－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－｝であり、
Ｗが－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－］であり、
Ｚが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＯＯＨであり、式中、ｎが整数１６である、請求項１に記載のポリペプチド。
Ｘ２がＡｉｂであり、
Ｘ３が存在せず、
Ｘ３３がＬｅｕであり、
Ｕが－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－｝であり、
Ｗが－Ｃ（Ｏ）－Ｃ（ＣＨ_３）_２－ＮＨ－］であり、
Ｚが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＯＯＨであり、式中、ｎが整数１６である、請求項１に記載のポリペプチド。
Ｘ２がＡｉｂであり、
Ｘ３が存在せず、
Ｘ３３がＬｅｕであり、
Ｕが－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－｝であり、
Ｗが－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_４－ＮＨ－］であり、
Ｚが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＯＯＨであり、式中、ｎが整数１６である、請求項１に記載のポリペプチド。
Ｘ２がＡｉｂであり、
Ｘ３が存在せず、
Ｘ３３がＬｅｕであり、
Ｕが－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－｝であり、
Ｗが

であり、
Ｚが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＯＯＨであり、式中、ｎが整数１６である、請求項１に記載のポリペプチド。
Ｘ２がＡｉｂであり、
Ｘ３が存在せず、
Ｘ３３がＬｅｕであり、
Ｕが－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－｝であり、
Ｗが－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_３－ＮＨ－］であり、
Ｚが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＯＯＨであり、式中、ｎが整数１６である、請求項１に記載のポリペプチド。
Ｘ２がＳｅｒ、Ｓｅｒ（ＯＭｅ）、Ｄ－Ｓｅｒ、Ｄ－Ｓｅｒ（ＯＭｅ）であり、
Ｘ３が存在せず、
Ｘ３３がＬｅｕであり、
Ｕが－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－｝であり、
Ｗが－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－（ＣＨ_２）_２－ＮＨ－］、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_３－４－ＮＨ－］、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ（ＣＨ_３）_２－ＮＨ－］であり、
Ｚが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＯＯＨまたは－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ_３であり、式中、ｎが１４～２０の整数である、請求項１に記載のポリペプチド。
Ｗが、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ_２）_３－４－ＮＨ－］、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ（ＣＨ_３）_２－ＮＨ－］、および以下の式からなる群から選択される、請求項１に記載のポリペプチド。
Ｘ２がＡｌａであり、
Ｘ３が存在せず、
Ｘ３３がＬｅｕであり、
Ｗが存在せず、
Ｚが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ_３であり、式中、ｎが整数１４である、請求項１に記載のポリペプチド。
Ｘ２がＡｉｂであり、
Ｘ３が存在せず、
Ｘ３３がＬｅｕであり、
Ｗが存在せず、
Ｚが－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）_ｎ－ＣＨ_３であり、式中、ｎが整数１４である、請求項１に記載のポリペプチド。