JP7214632B2 - ブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤のコハク酸塩形態および組成物 - Google Patents

Description

特許法第３０条第２項適用 平成２８年 ７月 ７日、ｈｔｔｐｓ：／／ｓｔｎｗｅｂ．ｃａｓ．ｏｒｇ／？＿ｇａ＝２．１９７７７５２７９．１６４１６９０５８０．１５５１３２０１６０－１０８６３５４４４２．１５５１３２０１６０にてオンライン公開

本出願は、２０１６年７月２１日に出願された米国仮特許出願第６２／３６５，３５３号および２０１６年９月８日に出願された米国仮特許出願第６２／３８５，２０２号の優先権を主張し、それらの各々の内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。

プロテインキナーゼは、腫瘍学、神経学および免疫学において多数のヒト疾患の発症および治療において重要な役割を果たす５００を超えるタンパク質からなる大きな多重遺伝子族である。Ｔｅｃキナーゼは、５つのメンバー（Ｔｅｃ（肝細胞癌で発現されるチロシンキナーゼ）、Ｂｔｋ（ブルトン型チロシンキナーゼ）、Ｉｔｋ（インターロイキン－２（ＩＬ－２）－誘導性Ｔ細胞キナーゼ）、ＥｍｔまたはＴｓｋとしても知られる）、Ｒｌｋ（静止リンパ球キナーゼ、Ｔｘｋとしても知られる）およびＢｍｘ（Ｘ染色体上の骨髄チロシンキナーゼ遺伝子、Ｅｔｋとしても知られる））からなる非受容体型チロシンキナーゼであり、ＢｍｘおよびＴｅｃの発現については内皮細胞および肝細胞で検出されているが、主に造血細胞において発現される。Ｔｅｃは内皮細胞および肝細胞において検出されている。Ｔｅｃキナーゼ（Ｉｔｋ、ＲｌｋおよびＴｅｃ）はＴ細胞において発現され、そしてすべてＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の下流で活性化される。Ｂｔｋは、Ｂ細胞活性化、増殖、および分化の調節に関与するＢ細胞受容体（ＢＣＲ）シグナル伝達の下流メディエーターである。より具体的には、Ｂｔｋはホスファチジルイノシトール（３，４，５）－トリスリン酸（ＰＩＰ３）に結合するＰＨドメインを含む。ＰＩＰ３結合はＢｔｋがホスホリパーゼＣ（ＰＬＣγ）をリン酸化するのを誘導し、それが次にＰＩＰ２を加水分解して２つの二次メッセンジャー、イノシトール三リン酸（ＩＰ３）およびジアシルグリセロール（ＤＡＧ）を生成し、それらはプロテインキナーゼＰＫＣを活性化し、それがさらにＢ細胞シグナル伝達を誘導する。Ｂｔｋ酵素活性を無効にする変異は、一次免疫不全症であるＸＬＡ症候群（Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症）を引き起こす。ＴｅｃキナーゼがＢ細胞シグナル伝達およびＴ細胞シグナル伝達の両方において果たす重要な役割を考えると、Ｔｅｃキナーゼは自己免疫障害の対象となる標的である。

その結果、当該技術分野において、Ｂｔｋの有効な阻害剤に対する大きな必要性がある。本発明はこれらおよび他の必要性を満たすものである。

本発明の新規な形態およびその組成物が、１つ以上のプロテインキナーゼの阻害剤として有用であり、それに対して望ましい特徴を示すことが今回見出された。一般に、そのような形態およびその薬学的に許容される組成物は、本明細書に詳細に記載されているように様々な疾患または障害の重症度を治療または軽減するのに有用である。

化合物２の形態１のＸＲＰＤパターンを示す。 化合物２の形態１（幾分かの化合物２の形態２が存在する場合）のＤＳＣデータを示す。 化合物２の形態１のＧＶＳデータを示す。 化合物２の形態１のＴＧＡデータを示す。 化合物２の形態２のＸＲＰＤパターンを示す。 化合物２の形態２のＤＳＣデータを示す。 化合物２の形態２のＧＶＳデータを示す。 化合物２の形態２のＴＧＡデータを示す。 化合物２の形態２の^１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。 蒸気拡散実験の設定を示す。 共有結合性ＢＴＫ阻害剤および化合物２の遊離塩基の活性に対するＣｙｓ４８１Ｓｅｒ変異の効果を示す。 化合物２を投与したヒトへの単回投与試験における化合物１の平均血漿中濃度対時間を示す。 化合物２を投与したヒトへの単回投与試験におけるＢＴＫ阻害パーセント対時間を示す。 化合物２を投与する単回投与ヒト試験におけるＢＴＫ阻害パーセント対化合物１の血漿中濃度を示す。 化合物２の濃度（ｎｇ／ｍＬ）およびＢＴＫ阻害パーセント対時間を示す。化合物２の５０ｍｇは、ＢＴＫ阻害％を示さなかった。 下記の第１段階＋第３段階（化合物２の２５ｍｇ単独）投与からの化合物２の投与後の、ＢＴＫ阻害％と化合物１の血漿中濃度（ｘ軸、ｎｇ／ｍＬ）との間の相関関係を示す。 ＨＥＫ２９３細胞において過剰発現されたＣ４８１ ＢＴＫ（ＷＴ）およびＣ４８１Ｓ ＢＫＴ変異体に対する化合物１およびイブルチニブ活性を示す。

本発明の特定の態様の一般的な説明：
その全体が参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ特許公開第２０１３／１８５０８４号（２０１３年６月７日に出願されたＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ１３／４４８００号（「‘８００出願」））は、特定のＢｔｋ阻害剤化合物を記載している。このような化合物には、（３Ｒ、３’Ｒ、４’Ｓ）－１’－（６－アミノ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－３－（（３－クロロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－４’－カルボキサミドが含まれる。

遊離塩基である化合物１は、‘８００出願において化合物番号Ｉ－１として示されている。化合物１の合成は、‘８００出願の実施例２に詳細に記載されており、参照を容易にするためにこれを本明細書に再現する。

化合物１は、ＢＴＫ阻害のアッセイにおいてＢＴＫに対して効力を示した（例えば、‘８００出願の実施例１１～１３参照）。例えば、‘８００出願は、化合物１がインビトロＢｔｋキナーゼアッセイにおいて測定されるように０．７３ｎＭのＩＣ_５０を有することを報告している。したがって、化合物１は、ＢＴＫの活性に関連した１つ以上の障害を治療するのに有用である。

改善された水溶性、安定性、吸収性、生物学的利用能、ならびに製剤および単離の容易さなどの特性を付与する化合物１の固体形態を提供することが望ましいであろう。したがって、本発明は、そのような特定の特徴を提供する化合物１のコハク酸形態を提供する。

化合物２（コハク酸×化合物１）
一実施形態によれば、本発明は、化合物１およびコハク酸を含む化学種化合物２を提供する。

いくつかの実施形態において、化合物２は、

として表される。

化合物２は様々な固体形態で存在し得ると考えられる。化合物２が固体形態であるとき、前記化合物は、非晶質、結晶質、またはそれらの混合物であり得る。例示的な固体形態は、以下により詳細に記載される。

いくつかの実施形態において、本発明は、不純物を実質的に含まない化合物２を提供する。本明細書で使用されるとき、用語「実質的に不純物を含まない」は、化合物が有意量の異物を含まないことを意味する。このような異物は、過剰なコハク酸、過剰な化合物１、残留溶媒、または化合物２の調製および／または単離から生じ得る他の任意の不純物を含み得る。特定の実施形態では、少なくとも約９５重量％の化合物２が存在する。本発明のさらに他の実施形態において、少なくとも約９９重量％の化合物２が存在する。

一実施形態によれば、化合物２は少なくとも約９７、９７．５、９８．０、９８．５、９９、９９．５、９９．８重量パーセントの量で存在し、ここでパーセントは組成物の総重量に基づく。別の実施形態によれば、化合物２は、ＨＰＬＣクロマトグラムの総面積に対して、約３．０面積パーセントＨＰＬＣ以下の総有機不純物、および約１．５面積パーセントＨＰＬＣ以下の総有機不純物を含有する。他の実施形態では、化合物２は、約１．０％以下の面積パーセントＨＰＬＣを含む単一不純物を含み、ＨＰＬＣクロマトグラムの総面積に対して、約０．６面積パーセント以下の任意の単一不純物のＨＰＬＣ、および特定の実施形態において、約０．５面積パーセント以下の任意の単一不純物のＨＰＬＣを含む。

化合物２について示した構造はまた、化合物２のすべての互変異性型を含むことを意味する。さらに、本明細書で示した構造はまた、１個以上の同位体濃縮原子の存在においてのみ異なる化合物を含むことを意味する。例えば、重水素または三重水素による水素の置換、または^１３Ｃまたは^１４Ｃに富む炭素による炭素の置換を除いて本構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。

化合物２は様々な固体形態で存在し得ることが見出された。例示的なそのような形態は、本明細書に記載されているものなどの多形体を含む。

いくつかの実施形態において、化合物２は非晶質である。いくつかの実施形態では、化合物２は非晶質であり、結晶性化合物２を実質的に含まない。

特定の実施形態において、化合物２は結晶性固体である。他の実施形態において、化合物２は、非晶質化合物２を実質的に含まない結晶性固体である。本明細書で使用される「実質的に非晶質化合物２を含まない」という用語は、化合物が有意な量の非晶質化合物２を含まないことを意味する。特定の実施形態において、少なくとも約９５重量％の結晶性化合物２が存在する。本発明のさらに他の実施形態において、少なくとも約９９重量％の結晶性化合物２が存在する。

いくつかの実施形態では、化合物２は、（化合物１）：（コハク酸）約１：１である化学量論を有する。

化合物２は少なくとも２つの異なる固体形態で存在し得ることが見出された。

化合物２の形態１
特定の実施形態において、化合物２の形態１の粉末Ｘ線回折パターンは、図１に提供されるＸＲＰＤと実質的に同様である。いくつかの実施形態において、化合物２の形態１は、以下の表Ａに列挙されたピークから選択される少なくとも１、２、３、４または５のスペクトルピークを有する。

いくつかの実施形態において、化合物２の形態１は、それが約５．３３、約７．５９、約９．７５、約１３．６９、約１７．９１、約１８．１４、約２０．１２、または約２４．７３度２θにあるピークから選択される１つ以上のピークをその粉末Ｘ線回折パターンに有することを特徴とする。いくつかの実施形態において、化合物２の形態１は、それが約５．３３、約７．５９、約９．７５、約１３．６９、約１７．９１、約１８．１４、約２０．１２、または約２４．７３度２θにあるピークから選択される２つ以上のピークをその粉末Ｘ線回折パターンに有することを特徴とする。いくつかの実施形態において、化合物２の形態１は、それが約５．３３、約７．５９、約９．７５、約１３．６９、約１７．９１、約１８．１４、約２０．１２、または約２４．７３度２θにあるピークから選択される３つ以上のピークをその粉末Ｘ線回折パターンに有することを特徴とする。いくつかの実施形態において、化合物２の形態１は、それが約５．３３、約７．５９、約９．７５、約１３．６９、約１７．９１、約１８．１４、約２０．１２、または約２４．７３度２θにあるピークから選択される４つ以上のピークをその粉末Ｘ線回折パターンに有することを特徴とする。いくつかの実施形態において、化合物２の形態１は、それが約５．３３、約７．５９、約９．７５、約１３．６９、約１７．９１、約１８．１４、約２０．１２、または約２４．７３度２θにあるピークから選択される５つ以上のピークをその粉末Ｘ線回折パターンに有することを特徴とする。いくつかの実施形態において、化合物２の形態１は、それが約５．３３、約７．５９、約９．７５、約１３．６９、約１７．９１、約１８．１４、約２０．１２、または約２４．７３度２θにあるピークから選択される６つ以上のピークをその粉末Ｘ線回折パターンに有することを特徴とする。いくつかの実施形態において、化合物２の形態１は、それが約５．３３、約７．５９、約９．７５、約１３．６９、約１７．９１、約１８．１４、約２０．１２、または約２４．７３度２θにあるピークから選択される７つ以上のピークをその粉末Ｘ線回折パターンに有することを特徴とする。いくつかの実施形態において、化合物２の形態１は、それが約５．３３、約７．５９、約９．７５、約１３．６９、約１７．９１、約１８．１４、約２０．１２、または約２４．７３度２θにあるピークから選択される８つすべてのピークをその粉末Ｘ線回折パターンに有することを特徴とする。本明細書で使用される、度２θ値に関連して使用されるときの「約」という用語は、述べられた値±０．２度２θを指す。

化合物２の形態１を調製する方法は以下に記載されている。

化合物２の形態２
特定の実施形態において、化合物２の形態２の粉末Ｘ線回折パターンは、図５に提供されるＸＲＰＤと実質的に同様である。いくつかの実施形態において、化合物２の形態２は、以下の表Ｂに列挙されるピークから選択される少なくとも１、２、３、４または５のスペクトルピークを有する。

いくつかの実施形態において、化合物２の形態２は、それが約６．７６、約８．７７、約９．０６、約１２．００、約１３．５３、約１８．１３、または約２０．０７度２θにあるピークから選択される１つ以上のピークをその粉末Ｘ線回折パターンに有することを特徴とする。いくつかの実施形態において、化合物２の形態２は、それが約６．７６、約８．７７、約９．０６、約１２．００、約１３．５３、約１８．１３、または約２０．０７度２θにあるピークから選択される２つ以上のピークをその粉末Ｘ線回折パターンに有することを特徴とする。いくつかの実施形態において、化合物２の形態２は、それが約６．７６、約８．７７、約９．０６、約１２．００、約１３．５３、約１８．１３、または約２０．０７度２θにあるピークから選択される３つ以上のピークをその粉末Ｘ線回折パターンに有することを特徴とする。いくつかの実施形態において、化合物２の形態２は、それが約６．７６、約８．７７、約９．０６、約１２．００、約１３．５３、約１８．１３、または約２０．０７度２θにあるピークから選択される４つ以上のピークをその粉末Ｘ線回折パターンに有することを特徴とする。いくつかの実施形態において、化合物２の形態２は、それが約６．７６、約８．７７、約９．０６、約１２．００、約１３．５３、約１８．１３、または約２０．０７度２θにあるピークから選択される５つ以上のピークをその粉末Ｘ線回折パターンに有することを特徴とする。いくつかの実施形態において、化合物２の形態２は、それが約６．７６、約８．７７、約９．０６、約１２．００、約１３．５３、約１８．１３、または約２０．０７度２θにあるピークから選択される６つ以上のピークをその粉末Ｘ線回折パターンに有することを特徴とする。いくつかの実施形態において、化合物２の形態２は、それが約６．７６、約８．７７、約９．０６、約１２．００、約１３．５３、約１８．１３、または約２０．０７度２θにあるピークから選択される７つすべてのピークをその粉末Ｘ線回折パターンに有することを特徴とする。

化合物２の形態２を調製する方法は以下に記載されている。

化合物を提供する一般的な方法
化合物１は、‘８００出願に詳細に記載されている方法に従って調製される。

本明細書に記載されるように、化合物２およびその形態は、化合物１をコハク酸と組み合わせて生成物化合物２を形成することにより化合物１から調製される。化合物１およびコハク酸の化学量論は変えることができる。したがって、本発明の別の態様は、化合物２、およびその形態を調製するための方法を提供する。

上に一般的に記載したように、いくつかの実施形態において、本発明は、化合物２を調製するための方法であって、

化合物２を形成するのに適した条件下で、化合物１を

コハク酸、および場合により適切な溶媒と組み合わせる工程を含む方法を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、化合物２の形態１である、化合物１およびコハク酸を含む固体形態を作製する方法を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、化合物２の形態２である、化合物１およびコハク酸を含む固体形態を作製する方法を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、非晶質である、化合物１およびコハク酸を含む固体形態を作製する方法を提供する。

適切な溶媒は、化合物１および／またはコハク酸が可溶性であるか、または少なくとも部分的に可溶性である任意の溶媒系（例えば、１つの溶媒または溶媒の混合物）であり得る。

本発明において有用な適切な溶媒の例としては、プロトン性溶媒、非プロトン性溶媒、極性非プロトン性溶媒、またはそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、適切な溶媒は、エーテル、エステル、アルコール、ケトン、またはそれらの混合物を含む。いくつかの実施形態において、溶媒は１つ以上の有機アルコールである。

特定の実施形態では、適切な溶媒はメタノール、エタノール、２－プロパノール、またはアセトンであり、ここで前記溶媒は無水であるかまたは水と組み合わせたものである。いくつかの実施形態において、適切な溶媒としては、アセトン、シクロヘキサノン、メチルｔ－ブチルエーテル、１，４－ジオキサン、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、メタノール、エタノール、２－プロパノール、または水が挙げられる。いくつかの実施形態では、適切な溶媒はエタノールである。いくつかの実施形態において、適切な溶媒は無水エタノールである。いくつかの実施形態では、適切な溶媒はエタノールと水の混合物である。いくつかの実施形態では、適切な溶媒はエタノールと酢酸エチルの混合物である。

いくつかの実施形態において、本発明は、溶媒を除去する工程および／または溶媒を添加する工程を含む、化合物２を調製する方法を提供する。いくつかの実施形態において、添加された溶媒は、除去された溶媒と同じである。いくつかの実施形態において、添加された溶媒は、除去された溶媒とは異なる。溶媒除去の手段は、合成および化学技術分野において公知であり、そして本明細書および以下の実施例に記載されるもののいずれかを含むが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態において、化合物２を調製する方法は、調製物を加熱および／または冷却する工程を含む。

いくつかの実施形態において、化合物２を調製する方法は、調製物をかき混ぜるおよび／または撹拌する工程を含む。

いくつかの実施形態において、化合物２を調製する方法は、化合物１の溶液またはスラリーにコハク酸を添加する工程を含む。

いくつかの実施形態において、化合物２を調製するための方法は、加熱する工程を包含する。

特定の実施形態において、化合物２は混合物から沈殿する。いくつかの実施形態において、化合物２は混合物から結晶化する。いくつかの実施形態において、化合物２は、溶液の播種（すなわち、化合物２の結晶を溶液に添加する）後に溶液から結晶化する。

化合物２は反応混合物から沈殿するか、または蒸発、蒸留、濾過（例えば、ナノ濾過、限外濾過）、逆浸透、吸収および反応などの方法を介して溶媒の一部または全部を除去することによって、ヘプタンのような貧溶媒を加えることによって、冷却することによって、もしくはこれらの方法の異なる組み合わせによって生成することができる。

上記に一般的に記載されているように、化合物２は場合により単離される。化合物２は、当業者に知られている任意の適切な物理的手段によって単離することができることが理解されよう。特定の実施形態において、沈殿した固体化合物２は、濾過により上清から分離される。他の実施形態において、沈殿した化合物２は、上清をデカントすることによって上清から分離される。

特定の実施形態において、化合物２は、濾過によって上清から分離される。

特定の実施形態において、単離された化合物２は空気中で乾燥される。他の実施形態において、単離された化合物２は減圧下で、任意に高温で乾燥される。

本明細書に記載されるように、化合物２は非晶質固体であり得る。非晶質固体は当業者に周知であり、とりわけ凍結乾燥、溶融、沈殿（例えば超臨界流体からの）、機械的処理（例えばミリング）、急冷、脱溶媒和、回転蒸発、沈殿、および噴霧乾燥などの様々な方法によって調製することができる。

用途、製剤化および投与
多くの種類の血液癌の中で、Ｂ細胞リンパ性悪性腫瘍は、リンパ節、そしてしばしば血液、骨髄、脾臓、および肝臓などの臓器におけるモノクローナルの新生物性Ｂリンパ球の蓄積から生じる。これらの癌の変異型には、例えば、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）－慢性リンパ性白血病／小リンパ性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、リンパ形質細胞性リンパ腫／ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＬＰＬ／ＷＭ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）が含まれる。これらの障害は、リンパ節症および脾腫を特徴とし、そして最終的に生命を脅かす臓器機能不全を誘発し得る。患者はまた、全身症状（発熱、寝汗、および／または体重減少）および疲労を有することもある。ＬＰＬ／ＷＭを有する患者は、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｍ産生形質細胞の過剰産生を有し、そして血漿過粘稠度を発症し得る。

これらの疾患に対する治療の目的は、疾患に関連する合併症を抑制しそして潜在的に寿命を延ばすために、腫瘍退縮を誘導するかまたは腫瘍進行を遅らせることである。治療を必要とする患者には、通常化学療法薬および／または免疫療法薬が投与される。前線と再発の両方の疾患に対して、より多くの非化学療法の選択肢が利用可能であり、イブルチニブ（ｉｂｒｕｔｉｎｉｂ）、ベネトクラックス（ｖｅｎｅｔｏｃｌａｘ）、およびイデラリシブ（ｉｄｅｌａｓｉｂ）が含まれる。前線への併用療法は、長期寛解を提供するのに効果的であり得るが、ほとんどの患者は最終的に疾患の再発を経験するであろう。これらの癌のいずれについても、疾患の発現を抑制するためにさらなる治療法が与えられている。機序が異なる薬剤を使用しているにもかかわらず、治療に対する漸進的耐性が頻繁に発生する。難治性または多発性再発進行性疾患（ＰＤ）患者は予後不良であり、最終的にこれらの癌で死亡する可能性がある。疾患の進行を経験したＢリンパ性悪性腫瘍患者に追加の治療選択肢を提供するためには、新しい機序が必要である。

ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）は、Ｂ細胞、骨髄細胞、肥満細胞、血小板などの造血系起源の細胞間で発現するＴＥＣキナーゼファミリーの非受容体酵素であり、増殖、分化、アポトーシス、細胞遊走を含む複数の細胞プロセスを調節する。ＢＴＫ活性化はいくつかのＢ細胞悪性腫瘍の病因に関与している（Ｂｕｇｇｙ ＪＪ，Ｅｌｉａｓ Ｌ．Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２；３１（２）：１１９－３２、Ｈｅｒｍａｎ ＳＥ，Ｇｏｒｄｏｎ ＡＬ，Ｈｅｒｔｌｅｉｎ Ｅ，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１１；１１７（２３）：６２８７－９６、Ｋｉｌ ＬＰ，ｄｅ Ｂｒｕｉｊｎ ＭＪ，ｖａｎ Ｈｕｌｓｔ ＪＡ，Ｌａｎｇｅｒａｋ ＡＷ，Ｙｕｖａｒａｊ Ｓ，Ｈｅｎｄｒｉｋｓ ＲＷ．Ａｍ Ｊ Ｂｌｏｏｄ Ｒｅｓ．２０１３；３（１）：７１－８３、Ｔａｉ ＹＴ，Ｃｈａｎｇ ＢＹ，Ｋｏｎｇ ＳＹ，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１２；１２０（９）：１８７７－８７、Ｗｏｙａｃｈ ＪＡ，Ｂｏｊｎｉｋ Ｅ，Ｒｕｐｐｅｒｔ ＡＳ，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２３（８）：１２０７－１３）。

イブルチニブ（ＰＣＩ－３２７６５、ＩＭＢＲＵＶＩＣＡ（登録商標））は、腫瘍学での使用が承認された最初の治療用ＢＴＫ阻害剤である。この経口送達された、低分子の不可逆的なＢＴＫの阻害剤は、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療のために開発された。重度の前治療を受けたＦＬ、ＭＣＬ、ＣＬＬ、およびＬＰＬ／ＷＭを有する対象において、イブルチニブは実質的な抗腫瘍活性を示し、リンパ節症および脾腫の永続的な後退を誘導した。これらの研究に基づき、イブルチニブは、ＭＣＬ、ＣＬＬ、およびＬＰＬ／ＷＭの治療に、米国、欧州連合（ＥＵ）、およびその他の地域の規制当局によって承認されている。

これらのデータは、癌への治療的アプローチとしてのＢＴＫ阻害の概念を支持している。しかしながら、イブルチニブに対する耐性が診療所で観察され、再発または疾病管理の喪失をもたらし、患者に治療選択肢をほとんど与えない。腫瘍進行の機序の中で、イブルチニブ－ＢＴＫ結合部位でのＣ４８１の後天的変異が、ＣＬＬ、ＭＣＬ、およびＷＭにおける腫瘍制御の喪失の原因として報告されている（Ｗｏｙａｃｈ ＪＡ，Ｂｏｊｎｉｋ Ｅ，Ｒｕｐｐｅｒｔ ＡＳ，ｅｔ ａｌ．２０１４）。耐性を生じる患者はまた、他のＢＴＫ変異またはＢＴＫの下流の変異、例えばホスホリパーゼＣガンマ２（ＰＬＣγ２）のＲ６６５ＷまたはＬ８４５Ｆ変異によってもそうなり得る。ＢＴＫおよびＰＬＣγ２の両方における変異の存在もまた観察されている（Ｗｏｙａｃｈ、２０１４）。さらに、第１相の経験では、イブルチニブ療法は用量制限毒性（ＤＬＴ）と関連していなかったが、この薬は慢性的な使用で有害事象（ＡＥ）を引き起こす可能性がある。これらの影響は、複数のキナーゼのその不可逆的なオフターゲット阻害に関連している可能性がある。一般的な副作用には、軽度から中等度の下痢および発疹が含まれており（ＩＭＢＲＵＶＩＣＡ（登録商標）ＵＳ Ｐａｃｋａｇｅ Ｉｎｓｅｒｔ，２０１６）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）のオフターゲット阻害によって潜在的に引き起こされる（Ｇａｏ Ｗ，Ｗａｎｇ Ｍ，Ｗａｎｇ Ｌ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．２０１４；１０６（９））。時折深刻な出血を伴うあざの傾向が高まることが注目されており（ＩＭＢＲＵＶＩＣＡ（登録商標）ＵＳ Ｐａｃｋａｇｅ Ｉｎｓｅｒｔ、２０１６）、そのような影響は血管損傷に応答した安定した止血栓の形成におけるＴＥＣキナーゼの関与と相関し得、そしてデータは、イブルチニブによるＢＴＫおよび他のＴＥＣキナーゼの同時阻害が血小板活性化を損なうことを示す。心房細動は、慢性的なイブルチニブ療法を受けている試験参加者の３．５～６．５％に見られ、実験データは、この心臓への影響の潜在的な原因として、ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）－ＡＫＴ活性に対するイブルチニブの影響を示唆している。

本発明は、イブルチニブとは異なり、ＢＴＫとの相互作用や独自の薬物動態との相互作用にＣ４８１は必要とせず、イブルチニブ不応性疾患を有する患者の耐病性を回避する可能性があり、他のキナーゼに対するＢＴＫの選択性を変えることにより、患者に改善された治療プロファイルを提供し得る、強力阻害剤の開発という認識を包含する。

特定の実施形態において、本発明の化合物は医学における使用のためのものである。いくつかの実施形態において、本発明は、Ｔｅｃキナーゼファミリー（例えば、Ｔｅｃ、Ｂｔｋ、Ｉｔｋ、Ｔｘｋ、Ｌｃｋ、およびＢｍｘ）中のキナーゼの酵素活性を低下させる方法を提供する。いくつかの実施形態において、そのような方法は、Ｔｅｃキナーゼファミリーのキナーゼを有効量のＴｅｃキナーゼファミリー阻害剤と接触させることを含む。したがって、本発明はさらに、Ｔｅｃキナーゼファミリーメンバーを本発明のＴｅｃキナーゼファミリー阻害剤と接触させることによってＴｅｃキナーゼファミリー酵素活性を阻害する方法を提供する。本明細書中で使用される場合、用語「Ｔｅｃキナーゼファミリーメンバー」とは、Ｔｅｃキナーゼファミリー中の任意の非受容体型チロシンキナーゼをいう。いくつかの実施形態において、Ｔｅｃキナーゼファミリーメンバーは、Ｔｅｃ、Ｂｔｋ、Ｉｔｋ、Ｔｘｋ、Ｌｃｋ、およびＢｍｘである。

いくつかの態様において、本発明はＢｔｋ酵素活性を低下させる方法を提供する。いくつかの実施形態では、そのような方法は、Ｂｔｋを有効量のＢｔｋ阻害剤と接触させることを含む。したがって、本発明はさらに、Ｂｔｋを本発明のＢｔｋ阻害剤と接触させることによってＢｔｋ酵素活性を阻害する方法を提供する。

不可逆的ＢＴＫ阻害剤であるイブルチニブおよびアカラブルチニブ（ａｃａｌａｂｒｕｔｉｎｉｂ）は、様々なＢ細胞悪性腫瘍において有効性を示したが（Ａｄｖａｎｉ ＲＨ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２０１３；３１：８８－９４；Ｂｙｒｄ ＪＣ，ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０１６；３７４：３２３－３２）、しかしながら、キナーゼ活性部位上のＣｙｓ４８１Ｓｅｒ変異に起因するイブルチニブに対する獲得耐性が報告されており、その結果実質的に活性が低下した（Ｂｉｎｎｅｒｔｓ ＭＥ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２０１５；１４（１２ Ｓｕｐｐｌ ２）、Ｗｏｙａｃｈ ＪＡ，ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０１４；３７０：２２８６－９４）。第１／２相臨床試験に参加した患者について報告されているように、Ｃ４８１耐性変異の発生もアカラブルチニブ曝露に応答して予想される（Ｂｙｒｄ、２０１６）。

化合物１は、ナノモル未満の濃度でＢＴＫ活性を阻害し、共有結合性ＢＴＫ阻害剤とは異なり、活性のためにキナーゼ活性部位上のＣｙｓ４８１との相互作用を必要としない。化合物１はまた、ＢＴＫの下流（例えば、ＣＤ６９発現、ホスホリパーゼＣγ［ＰＬＣγ］リン酸化、およびＣＤ６３のＦｃεＲ媒介発現）の阻害を示した。化合物２（遊離塩基）の活性は、イブルチニブおよびアカラブルチニブとは対照的に、Ｃｙｓ４８１Ｓｅｒ変異による影響を受けない。図１１を参照されたい。倍数変化（ｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅ）は、ＷＴ ＢＴＫに対する化合物のＩＣ_５０で割ったＣ４８１Ｓ－ＢＴＫに対する化合物のＩＣ_５０として表される。

これらの知見は、Ｃ４８１ ＢＴＫ（野生型）またはＣ４８１Ｓ ＢＴＫ（変異体）のいずれかを過剰発現するようにトランスフェクトされたヒト胎児腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞を用いる細胞ベースのアッセイシステムに拡大された（図１７参照）。Ｃ４８１ ＢＴＫおよびＣ４８１Ｓ ＢＴＫの化合物１による阻害は類似していた。しかしながら、イブルチニブの効力は＞１００倍減少した。これらのデータは、Ｃ４８１Ｓ変異に対するイブルチニブ媒介ＢＴＫ阻害の感受性、および化合物１阻害活性に対するこの変異の最小の影響を確認する。

さらに、化合物１は、イブルチニブとは異なり、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）をそれほど阻害せず、そして制限されたキナーゼ選択性プロフィールを有する（４５６のキナーゼおよびキナーゼ変異型のパネルに対する活性が評価された）。化合物１は９個のキナーゼを阻害し、Ｋｍおよび／またはＩＣ５０および／またはＫｄは２５ｎＭ未満であった。インビトロキナーゼアッセイにおいて、化合物１は、それぞれ０．４ｎＭ、２４ｎＭ、および１９ｎＭのＩＣ５０値でＢＴＫ、ＩＴＫ、およびＴＥＣを阻害し、そしてＢＭＸおよびＴＸＫに対して有意な活性を示さなかった（Ｋｄ≧２００ｎＭ）。化合物１のキナーゼ選択性プロフィールは、これらの選択性の違いのために既存のＢＴＫ阻害剤よりも改善された安全性および耐容性をもたらし得る。

本明細書中で使用される場合、Ｂｔｋ酵素活性は、Ｂｔｋキナーゼ酵素活性をいう。例えば、Ｂｔｋ酵素活性が低下すると、ＰＩＰ３結合および／またはＰＬＣγのリン酸化が低下する。いくつかの実施形態において、Ｂｔｋに対するＢｔｋ阻害剤の最大半量阻害濃度（ＩＣ_５０）は、１μＭ未満である。いくつかの実施形態において、Ｂｔｋに対するＢｔｋ阻害剤のＩＣ_５０は５００ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、Ｂｔｋに対するＢｔｋ阻害剤のＩＣ_５０は１００ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、Ｂｔｋに対するＢｔｋ阻害剤のＩＣ_５０は１０ｎＭ未満である。いくつかの実施形態では、Ｂｔｋに対するＢｔｋ阻害剤のＩＣ_５０は１ｎＭ未満である。いくつかの実施形態において、Ｂｔｋに対するＢｔｋ阻害剤のＩＣ_５０は、０．１ｎＭから１０μＭである。いくつかの実施形態において、Ｂｔｋに対するＢｔｋ阻害剤のＩＣ_５０は、０．１ｎＭから１μＭである。いくつかの実施形態において、Ｂｔｋに対するＢｔｋ阻害剤のＩＣ_５０は、０．１ｎＭから１００ｎＭである。いくつかの実施形態において、Ｂｔｋに対するＢｔｋ阻害剤のＩＣ_５０は、０．１ｎＭから１０ｎＭである。

いくつかの実施形態では、そのようなＴｅｃキナーゼの阻害剤は、１つまたは複数のＴｅｃキナーゼの酵素活性を阻害する（すなわち低下させる）ことによって軽減され得る疾患および障害の治療に有用である。本発明の化合物は、Ｔｅｃファミリーキナーゼの有効な阻害剤であり、したがって１種以上のＴｅｃファミリーキナーゼの活性に関連する疾患を治療するのに有用であろう。用語「疾患」は、疾患、症候群、または疾患の症状を意味する。したがって、本発明は、それを必要とする対象において自己免疫障害、炎症性障害、癌、および前癌状態を治療する方法を提供する。本発明はさらに、ブルトンのチロシンキナーゼの阻害に反応する疾患を治療する方法を提供する。そのような方法は、治療有効量のＴｅｃ、Ｂｔｋ、Ｉｔｋ、Ｔｘｋ、Ｌｃｋ、および／またはＢｍｘキナーゼの阻害剤を対象に投与することを含む。

いくつかの実施形態において、本発明は、患者がＢＴＫ Ｃｙｓ４８１変異を有する、ＢＴＫの阻害に応答する障害を有する患者を治療する改善された方法を提供する。いくつかの実施形態において、患者は機能的ＢＴＫ Ｃｙｓ４８１変異を有する。いくつかの実施形態では、機能的ＢＴＫ Ｃｙｓ４８１変異はＣ４８１Ｓ、Ｃ４８１Ｆ、Ｃ４８１ＧまたはＣ４８１Ｔから選択される。いくつかの実施形態では、機能的ＢＴＫ Ｃｙｓ４８１変異はＣ４８１Ｓである。いくつかの実施形態において、そのようなＢＴＫ Ｃｙｓ４８１変異を有する患者は、以前にＢＴＫ阻害剤による治療を受けている。いくつかの実施形態では、ＢＴＫ Ｃｙｓ４８１変異を有する患者は、Ｃｙｓ４８１変異を有さないＢＴＫと比べて、Ｃｙｓ４８１変異を有するＢＴＫに対してより低い活性を有するＢＴＫ阻害剤による治療を以前に受けている。いくつかの実施形態では、ＢＴＫ Ｃｙｓ４８１変異を有する患者は、以前にイブルチニブまたはアカラブルチニブによる治療を受けている。いくつかの実施形態では、本発明は、ＢＴＫがイブルチニブに耐性がある、ＢＴＫの阻害に反応性の障害を有する患者を治療する方法を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、１回、２回、またはそれ以上の以前の治療を受けた患者を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、少なくとも１回の以前の治療はＢＴＫ阻害剤であった。いくつかの実施形態では、以前の治療用ＢＴＫ阻害剤は、イブルチニブまたはアカラブルチニブであった。

別の態様では、本発明は、ＢＴＫの阻害に応答する障害を有する患者を治療する方法であって、前記患者が以前の化学療法薬で治療され、以前の化学療法薬の活性を損なう変異を獲得しており、患者に有効量の提供される化合物を投与することを含む。

ＷＯ２０１６／０５４６２７ Ａ１は、対象における血液癌の治療方法を開示しており、その方法は、ＢＴＫまたはＰＬＣγ２における後天的変異の存在についてモニタリングするステップを含み、ここでＢＴＫ阻害剤活性に影響を及ぼすＢＴＫまたはＰＬＣγ２における後天的変異の存在は、対象がＢＴＫ阻害剤に対して抵抗性になりつつあることの指標である。

別の態様では、本発明は、ＢＴＫの阻害に応答する障害を有する患者を治療する方法であって、前記患者が第１のＢＴＫ阻害剤で治療され、そして第１のＢＴＫ阻害剤の活性を損なう変異を獲得しており、有効量の提供された化合物を患者に投与することを含む方法を提供する。

別の態様では、本発明は、ＢＴＫの阻害に応答性する障害を有する患者を治療する方法であって、前記患者が、第１のＢＴＫ阻害剤で治療され、そして第１のＢＴＫ阻害剤の活性を損なう機能的ＢＴＫ Ｃｙｓ４８１変異を獲得しており、有効量の提供された化合物を患者に投与することを含む方法を提供する。本明細書で使用されるとき、用語「第１のＢＴＫ阻害剤」は、非限定的な例として、イブルチニブ（ＰＣＩ－３２７６５）、アカララブルチニブ（ａｃａｌａｒａｂｒｕｔｉｎｉｂ）、ＢＧＢ－３１１１、ＧＳ－４０５９、ＡＲＱ５３１、ＲＤＸ０６９６１、およびスペブルチニブ（ｓｐｅｂｒｕｔｉｎｉｂ）を含む任意の公知のＢＴＫ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、第１のＢＴＫ阻害剤はＢＴＫの共有結合阻害剤である。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＢＴＫの阻害に応答する障害を有する対象を治療する方法であって、
（ａ）治療有効量の第１のＢＴＫ阻害剤を含む組成物を対象に投与することと、
（ｂ）対象から血液または組織試料を採取し、そこからＤＮＡを抽出することと、
（ｃ）ＤＮＡを分析して、第１のＢＴＫ阻害剤にＢＴＫ阻害剤耐性を付与する１以上の遺伝子配列を同定することと、
（ｄ）任意に、工程（ｂ）および（ｃ）を繰り返して、第１のＢＴＫ阻害剤に対してＢＴＫ阻害剤耐性を付与する後天的変異の存在についてモニターすることと、
（ｅ）治療有効量の提供された化合物を含む組成物を、第１のＢＴＫ阻害剤に対してＢＴＫ阻害剤耐性を付与する後天的変異を有する対象に投与することと、を含む方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＢＴＫの阻害に応答する障害を有する対象を治療する方法であって、
（ａ）治療有効量の第１のＢＴＫ阻害剤を含む組成物を対象に投与することと、
（ｂ）対象から血液または組織試料を採取し、そこからＤＮＡを抽出することと、
（ｃ）ＤＮＡを分析して、ＢＴＫ、ＰＬＣγ２、またはそれらの組み合わせに特徴的な１つ以上の遺伝子配列を同定することと、
（ｄ）任意に、工程（ｂ）および（ｃ）を繰り返して、第１のＢＴＫ阻害剤のＢＴＫ阻害活性に影響を及ぼすＢＴＫまたはＰＬＣγ２中の後天的変異の存在についてモニターすることと、
（ｅ）治療有効量の提供された化合物を含む組成物を、ＢＴＫまたはＰＬＣγ２の後天的変異を有する対象に投与することと、を含む方法を提供する。

いくつかの実施形態では、ＢＴＫ阻害に応答する障害は血液癌、または他の障害である。いくつかの実施態様において、血液癌はＢ細胞悪性腫瘍である。いくつかの実施態様において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、慢性リンパ性白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症（Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍ’ｓ ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）、またはマントル細胞リンパ腫（ｍａｎｔｌｅ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ）である。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＢＴＫの阻害に応答する障害を有する対象を治療する方法であって、
（ａ）対象から血液または組織試料を採取し、そこからＤＮＡを抽出することと、
（ｂ）ＤＮＡを分析して、ＢＴＫ阻害剤耐性を付与する１以上の遺伝子配列を同定することと、
（ｃ）治療有効量の提供される化合物を含む組成物を、ＢＴＫ阻害剤耐性を付与する後天的変異を有する対象に投与することと、を含む方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＢＴＫの阻害に応答する障害を有する対象を治療する方法であって、
（ａ）対象から血液または組織試料を採取し、そこからＤＮＡを抽出することと、
（ｂ）ＤＮＡを分析して、ＢＴＫ、ＰＬＣγ２、またはそれらの組み合わせに特徴的な１つ以上の遺伝子配列を同定し、ＢＴＫ阻害活性に影響を及ぼすＢＴＫまたはＰＬＣγ２中の後天的変異の存在を決定することと、
（ｃ）治療有効量の提供される化合物を含む組成物を、ＢＴＫまたはＰＬＣγ２に後天的変異を有する対象に投与することと、を含む方法を提供する。

本明細書に記載の提供された化合物を使用する方法に関して、本発明はそのような方法における化合物１の使用を包含することが理解されよう。

用語「自己免疫障害」は、天然抗原に対する不適切な免疫応答を伴う疾患または障害、例えば急性播種性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、円形脱毛症、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、溶血性貧血、自己免疫性肝炎、水疱性類天疱瘡（ＢＰ）、セリアック病、皮膚筋炎、１型糖尿病、グッドパスチャー症候群、バセドウ病、ギランバレー症候群（ＧＢＳ）、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、エリテマトーデスまたは全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、インヒビター保有血友病、悪性貧血、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、シェーグレン症候群、側頭動脈炎およびウェゲナー肉芽腫症が含まれる。用語「炎症性障害」は、アレルギー、喘息（例えば、アレルギー性喘息）、アトピー性皮膚炎、前立腺炎、糸球体腎炎、骨盤内炎症性疾患（ＰＩＤ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ、例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎）、再灌流障害、関節リウマチ、移植拒絶反応（陽性の交差適合を有する移植患者を含む）および血管炎、などの急性または慢性の炎症を伴う疾患または障害を含む。特定の実施形態において、本発明は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ＲＡ、ウェゲナー肉芽腫症（ＷＧ）および顕微鏡的多発性血管炎（ＭＰＡ）を含む、リツキシマブ（ＣＤ２０に対するモノクローナル抗体）による治療が承認されている疾患、障害、または状態を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書に開示されている化合物を使用して、関節リウマチ（ＲＡ）、ＳＬＥ、またはアトピー性皮膚炎を治療する方法を提供する。

用語「癌」は、神経膠腫、甲状腺癌、乳癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌）、胃癌、胃腸間質腫瘍、膵臓癌、胆管癌、卵巣癌、子宮内膜癌、前立腺癌、腎臓細胞癌、リンパ腫（例えば、未分化大細胞リンパ腫）、白血病（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞白血病、慢性リンパ性白血病）、多発性骨髄腫、悪性中皮腫、悪性黒色腫、マントル細胞リンパ腫、中枢神経系リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、および結腸癌（例えば、マイクロサテライト不安定性が高い大腸癌（ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ－ｈｉｇｈ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ））などの異常な細胞成長および／または増殖を伴う疾患または障害を含む。いくつかの実施形態では、癌は、Ｂ細胞、例えばＢ細胞悪性腫瘍の異常な活性によって特徴付けられる。

別の態様では、本発明は血液癌である癌を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態において、提供される方法は、治療有効量の提供される化合物を対象に投与することを含む。用語「血液癌」は、血液由来の腫瘍、ならびにリンパ腫、白血病、および骨髄腫などの造血起源の組織における異常な細胞成長および／または増殖を伴う疾患または障害を含む。本発明に従って治療することができる血液癌には、例えば、未分化大細胞型リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫（例えば、ＡＢＣびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＧＣＢびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）、Ｔ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、組織球性リンパ腫、Ｔ細胞性白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、小リンパ性リンパ腫（ＳＬＬ）、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＰＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性骨髄芽球性白血病、形質細胞性白血病、およびワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ、リンパ形質細胞性リンパ腫としても知られる）が含まれる。

いくつかの実施形態では、本発明は、Ｂリンパ系（Ｂ細胞）悪性腫瘍を治療する方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、急性骨髄性白血病（再発性または難治性ＡＭＬなど）または骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を治療する方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、Ｃ４８１Ｓ、Ｃ４８１Ｆ、Ｃ４８１Ｇ、Ｃ４８１ＴのようなＣｙｓ４８１変異の獲得による不可逆的ＢＴＫ阻害剤（例えば、イブルチニブ、アカラブルチニブ）に耐性のある自己免疫障害または癌または前癌状態を有する患者を治療する方法を提供する。

用語「前癌状態」は、癌性になる傾向があるかまたはそうになりそうな状態、異常な組織成長、および病変を含む。前癌状態としては、例えば、光線性角化症、結腸腺腫性ポリープ、子宮頸部異形成、および骨髄線維症、再生不良性貧血、発作性夜間血色素尿症、真性赤血球増加症、および骨髄異形成症候群などの先行する血液疾患が含まれる。

他の態様では、本発明は、自己免疫障害、炎症性障害、および癌から選択される障害の治療のための医薬の調製における化合物２の固体形態の使用を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、アトピー性皮膚炎、白血病、またはリンパ腫の治療のための医薬の調製における固体形態の使用を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、急性骨髄性白血病または慢性リンパ性白血病の治療のための医薬の調製における固体形態の使用を提供する。

本明細書で使用される用語「対象」は、薬学的組成物が投与される哺乳動物を指す。例示的な対象としては、ヒト、ならびにウマ、ブタ、ウシ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、および水生哺乳動物などの獣医学的動物および実験動物が挙げられる。

選択された適応症とＢ細胞阻害
上記のように、提供される化合物は、ＲＡおよびＳＬＥを含む疾患の治療に有用である。以下により詳細に記載されるように、これらの疾患はＢ細胞と関連している。したがって、本開示は、提供された化合物がこれらおよび他の適応症のための治療薬として有用であるという認識を包含する。したがって、一態様では、本発明は、病状がＢ細胞の異常な活性を特徴とする病状（ｍｅｄｉｃａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）、疾患（ｄｉｓｅａｓｅ）、または障害（ｄｉｓｏｒｄｅｒ）を治療する方法であって、有効量の本発明の化合物またはその組成物を対象に投与することを含む。

免疫系の調節不全は、ＲＡの病因の中心である（Ｐａｎａｙｉ ＧＳ，ｅｔ ａｌ．Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．２００１，２７：３１７－３３４）。滑膜内の浸潤白血球のほとんどはＴリンパ球（主に活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞）および単球／マクロファージ起源の細胞（ＩＬ－１、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６などの炎症性サイトカイン、コラゲナーゼやメタロプロテイナーゼなどのタンパク質分解酵素を放出する）であるが、Ｂ細胞および形質細胞も滑液中に見られる（Ｚｈａｎｇ Ｚ，Ｂｒｉｄｇｅｓ ＳＬ．Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．２００１；２７：３３５－３５３）。ＲＡにおけるＢ細胞およびそれらに関連するエフェクター機能の明確な役割は、ＲＡの治療に承認されている選択的Ｂ細胞枯渇治療薬であるリツキシマブの有効性によって実証されている（Ｃｏｈｅｎ ＳＢ，ｅｔ ａｌ．；ＲＥＦＬＥＸ Ｔｒｉａｌ Ｇｒｏｕｐ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．２００６ Ｓｅｐ；５４（９）：２７９３－８０６）。

ＳＬＥの病因は完全には理解されていないが、病原性自己抗体および免疫複合体の沈着は広範囲にわたる組織損傷の発生に決定的に重要であると考えられている（Ｋｌｉｐｐｅｌ ＪＨ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｉｍｅｒ ｏｎ ｔｈｅ ｒｈｅｕｍａｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ａｔｌａｎｔａ：Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ；２００１）。自己抗体および免疫複合体媒介活性化は、Ｆｃ受容体を介して刺激されたマクロファージによるマクロファージ活性化の阻害を測定することによって研究することができる（例示－一次ヒトマクロファージのＦｃγＲ活性化を参照）。自己抗原に対する寛容性の喪失は、最終的には、Ｂ細胞を刺激して、しばしば核または細胞質成分に対する自己抗体を産生させる。核成分に対する抗体（抗核抗体［ＡＮＡ］）は、ＤＮＡ（典型的には二本鎖ＤＮＡ［ｄｓＤＮＡ］）、ＲＮＡ、ヒストンおよび核内低分子リボ核タンパク質を含む核抗原を標的とする。これらの抗体は自己抗原と結合して組織内に沈着する免疫複合体を形成し、炎症反応を誘発し、そして組織損傷をもたらす。病原性自己抗体産生におけるそれらの役割に加えて、Ｂ細胞はＴ細胞に対する抗原提示細胞（ＡＰＣ）としても機能し、したがって抗原特異的応答の開始において役割を果たす。ＳＬＥの病因における免疫系の体液性腕の中心的役割を考えると、Ｂ細胞またはＢ細胞経路が望ましい治療標的を表す。ＳＬＥについて最近承認されたモノクローナル抗体であるベリムマブは、Ｂ細胞を発現しているその受容体へのＢＡＦＦの結合を遮断する。これらの受容体は、ベリムマブによる治療後に観察される循環Ｂ細胞の減少と一致して、Ｂ細胞の生存を活性化および増強するのに役立つ。Ｃｈａｎ ＯＴ，ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．１９９９ｂ；１６９：１０７－１２１、Ｎａｖａｒｒａ ＳＶ，ｅｔ ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ．２０１１ Ｆｅｂ ２６；３７７（９７６７）：７２１－３１、Ｆｕｒｉｅ Ｒ，ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．２０１１ Ｄｅｃ；６３（１２）：３９１８－３０も参照されたい。ＳＬＥなどの自己免疫疾患におけるＢ細胞および骨髄系統細胞の役割は、マウスを小分子不可逆性Ｂｔｋ阻害剤で処置したときの前臨床ＳＬＥ動物モデルにおける有効性を記載している最近の刊行物によってさらに支持される（Ｈｏｎｉｇｂｅｒｇ，ＬＡ ＰＮＡＳ．２０１０；１０７：１３０７５）。

組み合わせ
特定の実施形態において、本発明の化合物は他の薬剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、ＲＡを治療するために有用であり、限定するものではないが、メトトレキサート、アバタセプト、アザチオプリン、セルトリズマブ、クロロキンおよびヒドロキシクロロキン、シクロスポリン、Ｄ－ペニシラミン、アダリムマブ、エタネルセプト、ゴリムマブ、金塩（オーラノフィンおよび金チオリンゴ酸ナトリウムを含む）、インフリキシマブ、レフルノミド、ミノサイクリン、リツキシマブ、スルファサラジン、トシリズマブ、またはそれらの組み合わせを含む疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、ＮＳＡＩＤまたはコルチコステロイドと組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、本発明の化合物はＳＬＥを治療するのに有用であり、限定するものではないがコルチコステロイド、抗マラリア薬、ベリムマブ、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）またはミコフェノール酸ナトリウム、アザチオプリンまたはそれらの組み合わせを含むＳＬＥ治療薬と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、アトピー性皮膚炎の治療に有用であり、限定するものではないが、局所ステロイド、タクロリムス、メトトレキサート、モメタゾンフロエート（ＭＭＦ）、アザチオプリン、レチノイド、またはそれらの組み合わせを含むアトピー性皮膚炎の治療のための局所薬剤と組み合わせて投与される。

いくつかの実施形態において、本発明は、本発明の化合物またはその組成物と少なくとも１つの追加の活性薬剤またはその組成物との組み合わせによる癌の治療方法を提供する。

提供される化合物と組み合わせて第２の活性剤として使用され得る化学療法抗癌剤の例としては、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、クロラムブシル、シクロホスファミド、メルファラン、イホスファミド）、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート）、オーロラキナーゼ阻害剤（例えば、ＺＭ４４７４３９、ヘスペリジン、ＶＸ－６８０ ＡＺＤ１１５２）、プリンアンタゴニストおよびピリミジンアンタゴニスト（例えば、６－メルカプトプリン、５フルオロウラシル（５－ＦＵ）、シタラビン（Ａｒａ－Ｃ）、ゲムシタビン）、紡錘体毒（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、パクリタキセル）、ポドフィロトキシン（例えば、エトポシド、イリノテカン、トポテカン）、抗生物質（例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシン）、ニトロソウレア（例えばカルムスチン、ロムスチン）、無機イオン（例えば、シスプラチン、カルボプラチンなどの白金錯体）、酵素（例えば、アスパラギナーゼ）、ホルモン（例えば、タモキシフェン、ロイプロリド、フルタミド、およびメゲストロール）、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤または毒、ＥＧＦＲ（Ｈｅｒ１、ＥｒｂＢ－１）阻害剤（例えば、ゲフィチニブ）、抗体（例えば、ベバシズマブ、リツキシマブ）、ＩＭＩＤ（例えば、サリドマイド、レナリドマイド）、様々な標的薬剤（例えば、ボリノスタットなどのＨＤＡＣ阻害剤）、Ｂｃｌ－２阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ）、サイクリン依存性キナーゼ（ｃｄｋ）阻害剤（例えば、セリシクリブ（ｓｅｌｉｃｉｃｌｉｂ））、キノロン誘導体（例えば、ボサロキシン）、およびデキサメタゾンが挙げられるが、これらに限定されない。

他の実施形態において、提供された化合物は、ＰＤＫ１阻害剤、例えば、ＧＳＫ２３３４４７０（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＢＸ－７９５、ＢＸ－９１２、およびＢＸ－３２０（Ｂｅｒｌｅｘ）、Ａｋｔ阻害剤、例えばＭＫ－２２０６（Ｍｅｒｃｋ）、ＰＩ３Ｋ阻害剤、例えばＧＤＣ－０９４１（ピクチリシブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、イデラリシブ（Ｇｉｌｅａｄ）、ＢＴＫ阻害剤（例えば、ＧＳ－４０５９（Ｇｉｌｅａｄ））との併用療法において使用され得る。

血液学的腫瘍および固形腫瘍の治療において、第２の薬剤は、ＰＤ １／ＰＤ－Ｌ１の阻害剤、例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、ＢＭＳ ９３６５５９、およびＭＰＤＬ３２８ＯＡ、ＣＴＬＡ－４阻害剤、例えば、イピリムマブおよびトレメリムマブ、ならびにホスファチジルセリン阻害剤、例えば、バビツキシマブを含み得る。

急性骨髄性白血病の治療において、第２の薬剤には、例えば、シタラビン（ａｒａ－Ｃ）、低メチル化剤（例えば、アザシチジン、デシタビン）、ダウノルビシン、およびボサロキシンが含まれる。

慢性リンパ性白血病の治療において、第２の薬剤には、例えば、ＢＴＫ阻害剤（例えば、イブルチニブ（ＰＣＩ－３２７６５）、アラカラルチニブ、スペブチニブ）、ＣＤ２０アンタゴニスト、例えば抗ＣＤ２０抗体（例えば、オフマツマブ（Ｇｅｎｍａｂ（商標））、オビヌツズマブ（Ｇａｚｙｖａ（商標））、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（商標））、イブリツモマブ チウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（商標））、トシツマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ（ＯＣＲＥＶＵＳ（商標））、ベルツズマブ）、Ｂ細胞リンパ腫－２（Ｂｃｌ－２）タンパク質阻害剤（例えばベネトクラックス（Ｖｅｎｃｌｅｘｔａ（商標））、ＰＩ３Ｋ阻害剤（例えば、ピクチリシブ、イデラリシブ（Ｚｙｄｅｌｉｇ（商標））、デュベリシブ）、抗ＣＤ７４抗体（例えば、ミラツズマブ）、およびアルキル化剤（例えば、クロラムブシル）が挙げられる。

いくつかの実施形態において、例えば、ＣＤ２０アンタゴニストとＢｃｌ－２阻害剤（例えば、リツキシマブとベネトクラックス）との組み合わせなどの第２の薬剤の組み合わせを使用することができる。

製剤
本発明の化合物は、多種多様の経口投与形態、非経口投与形態、および局所投与形態で調製および投与することができる。したがって、本発明の化合物は注射（例えば、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、十二指腸内、または腹腔内）によって投与することができる。また、本明細書に記載の化合物は、吸入によって、例えば鼻腔内に投与することができる。さらに、本発明の化合物は経皮投与することができる。複数の投与経路（例えば、筋肉内、経口、経皮）が本発明の化合物を投与するために使用され得ることもまた想定される。したがって、本発明はまた、薬学的に許容される担体または賦形剤および１種以上の本発明の化合物を含む薬学的組成物を提供する。

本発明の化合物から薬学的組成物を調製するためには、薬学的に許容される担体は固体または液体のいずれであってもよい。固形調製物としては、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤、および分散性顆粒剤が挙げられる。固体担体は、希釈剤、香味剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤、またはカプセル化材料としても作用し得る１つ以上の物質であってよい。

散剤では、担体は、微粉化有効成分との混合物中の微粉化固体である。錠剤では、有効成分は、必要な結合特性を有する担体と適切な割合で混合され、そして所望の形状およびサイズに圧縮される。

散剤および錠剤は、好ましくは５％～７０％の活性化合物を含有する。適切な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、微結晶セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオバターなどである。用語「調製物」は、他の担体を含むかまたは含まない有効成分が担体に囲まれており、したがって、それに関連しているカプセルを提供している担体としてのカプセル化材料を含む活性化合物の製剤を含むことを意図する。同様に、カシェ剤およびトローチ剤が含まれる。錠剤、散剤、カプセル剤、丸剤、カシェ剤、およびトローチ剤は、経口投与に適した固形の剤形として使用することができる。

坐剤を調製するために、脂肪酸グリセリドまたはカカオ脂の混合物などの低融点ワックスを最初に溶融し、有効成分を撹拌などによってその中に均一に分散させる。次に、溶融した均質混合物を都合の良い大きさの型に注ぎ込み、冷却させ、それによって固化させる。

液状調製物としては、溶液、懸濁液、および乳濁液、例えば、水または水／プロピレングリコール溶液が含まれる。非経口注射のためには、液体調製物はポリエチレングリコール水溶液中の溶液で製剤化することができる。

非経口投与が必要または望ましい場合、本発明の化合物に特に適した混和剤は、注射可能な滅菌溶液、好ましくは油性または水性溶液、ならびに懸濁液、エマルジョン、または座薬を含むインプラントである。特に、非経口投与用の担体としては、デキストロース、生理食塩水、純水、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、落花生油、ゴマ油、ポリオキシエチレンブロックポリマーなどの水溶液が挙げられる。アンプルは便利な単位投与量である。本発明の化合物はまた、リポソームに取り込まれるか、または経皮ポンプまたはパッチを介して投与され得る。本発明での使用に適した薬学的混和剤としては、例えば、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１７ｔｈ Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）およびＷＯ９６／０５３０９に記載されているものが挙げられ、これらの両方の教示は参照により本明細書に組み込まれる。

経口使用に適した水溶液は、有効成分を水に溶解し、そして必要に応じて適切な着色剤、香味剤、安定剤、および増粘剤を添加することによって調製することができる。経口使用に適した水性懸濁液は、天然または合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および他の周知の懸濁剤のような粘性材料とともに微粉化有効成分を水中に分散させることによって製造することができる。

使用直前に経口投与用の液状調製物に変換することを意図した固形調製物も含まれる。そのような液状形態は、溶液、懸濁液、および乳濁液を含む。これらの調製物は、有効成分に加えて、着色剤、香味剤、安定剤、緩衝剤、人工および天然の甘味剤、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含み得る。

いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、または坐剤として、単位剤形（ｕｎｉｔ ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍ）で提供される。そのような形態では、組成物は適切な量の有効成分を含有する単位用量に細分され、単位剤形は、包装された組成物、例えば、包装された散剤、バイアル、アンプル、プレフィルドシリンジまたは液体を含む小袋であり得る。単位剤形は、例えば、カプセル剤または錠剤自体であり得るか、またはパッケージ形態の適切な数の任意のそのような組成物であり得る。このような単位剤形は、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２５０ｍｇ／ｋｇを含み得、そして単回投与または２回以上の分割投与で与えられ得る。投与量の変動は必然的に治療を受けている患者の種、体重、状態、そして患者の薬剤に対する個々の反応によって異なる。

単位用量調製物中の有効成分の量は、特定用途および有効成分の効力に応じて、０．１ｍｇ～１００００ｍｇ、より典型的には１．０ｍｇ～１０００ｍｇ、最も典型的には１０ｍｇ～５００ｍｇに変動または調整することができる。組成物は、所望であれば、他の適合性のある治療薬も含み得る。

いくつかの化合物は、水中での溶解度が制限されている可能性があり、したがって組成物中に界面活性剤または他の適切な共溶媒を必要としてよい。そのような共溶媒には、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ２０、６０、および８０、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－６８、Ｆ－８４、およびＰ－１０３、シクロデキストリンおよびポリオキシル３５ヒマシ油が挙げられる。そのような共溶媒は、典型的には約０．０１重量％から約２重量％の間のレベルで使用される。

単純な水溶液の粘度よりも大きい粘度は、製剤を分配する際の変動性を減少させるため、製剤の懸濁液またはエマルジョンの成分の物理的分離を減少させるため、および／またはそうでなければ製剤を改良するために望ましい。そのような粘度上昇剤（ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ ｂｕｉｌｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）としては、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、硫酸コンドロイチンおよびその塩、ヒアルロン酸およびその塩、ならびにそれらの組み合わせが挙げられる。そのような薬剤は、典型的には、約０．０１重量％～約２重量％のレベルで用いられる。

本発明の組成物は、持続放出および／または快適さを提供するための成分をさらに含み得る。そのような成分には、高分子量のアニオン性ムコミメティック（ｍｕｃｏｍｉｍｅｔｉｃ）ポリマー、ゲル化多糖類、および微粉化薬物担体物質が含まれる。これらの成分は、米国特許第４，９１１，９２０号、第５，４０３，８４１号、第５，２１２，１６２号および第４，８６１，７６０号にさらに詳細に論じられている。これらの特許の全内容は、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

本開示はまた、薬学的組成物を含むキットを提供する。特定の実施形態において、そのようなキットは化合物２を含む。キットは、薬を処方するための説明書を任意に含む。特定の実施形態では、キットは複数回投与を含む。特定の実施形態では、キットは投与用の装置を含む。キットは、１週間、２週間、３週間、４週間、または数ヶ月間対象を治療するのに十分な量の各成分を含み得る。キットは、治療の全サイクルを含み得る。
有効投与量

本発明によって提供される薬学的組成物は、有効成分が治療有効量、すなわちその意図する目的を達成するのに有効な量で含まれる組成物を含む。特定の用途に有効な実際の量は、とりわけ、治療されている状態に依存するであろう。例えば、癌を治療するための方法で投与されるとき、そのような組成物は所望の結果（例えば、対象における癌細胞の数を減少させる）を達成するのに有効な量の有効成分を含むであろう。

投与される化合物の投与量および頻度（単回または複数回投与）は、投与経路；レシピエントの、サイズ、年齢、性別、健康状態、体重、ボディマス指数、および食事；治療されている疾患（例えば、Ｂｔｋ阻害に応答する疾患）の症状の性質および程度；他の疾患や他の健康関連の問題の存在；同時治療の種類；ならびに任意の疾患または治療計画からの合併症、を含む様々な要因によって、変更可能である。他の治療計画または薬剤を本発明の方法および化合物とともに使用することができる。

本明細書に記載のいずれかの化合物について、治療有効量は最初に細胞培養アッセイから決定することができる。標的濃度は、例えば記載の方法を用いて測定した場合にキナーゼ酵素活性を低下させることができる活性化合物の濃度であろう。

ヒトにおける使用のための治療有効量は動物モデルから決定され得る。例えば、ヒトに対する用量は、動物において有効であることが見出されている濃度を達成するように製剤化することができる。ヒトにおける投与量は、上記のように、キナーゼ阻害をモニターし、そして投与量を上方または下方に調節することによって調節することができる。特定の実施形態では、投与量は、１日１回、２回、または２回超のいずれかで、１日あたり約１０ｍｇ～約１０００ｍｇの範囲である。

いくつかの実施形態では、投与量は約２５ｍｇ～３００ｍｇである。いくつかの実施形態において、投与量は、約５０ｍｇ～約３００ｍｇである。いくつかの実施形態では、投与量は３００ｍｇ超、例えば４００ｍｇまたは５００ｍｇである。いくつかの実施形態において、投与量は、約５０ｍｇ～約３００ｍｇであり、１日１回、２回、または２回を超えて投与される。いくつかの実施形態において、投与量は、約２５ｍｇ～約３００ｍｇであり、１日１回、２回、または２回を超えて投与される。いくつかの実施形態において、投与量は、約３００ｍｇ～約５００ｍｇであり、１日１回、２回、または２回を超えて投与される。いくつかの実施形態では、投与量は、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、または約３００ｍｇである。いくつかの実施形態では、投与量は、約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、または約５００ｍｇである。いくつかの実施形態では、投与量は、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、または約３００ｍｇであり、１日に１回、２回、または２回を超えて投与される。いくつかの実施形態では、投与量は、約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、または約５００ｍｇであり、１日に１回、２回、または２回を超えて投与される。いくつかの実施形態では、投与量は化合物２の量に基づく。いくつかの実施形態では、投与量は化合物１の量に基づく。

投与量は、患者の要求および使用されている化合物に応じて変更できる。本発明の文脈において、患者に投与される用量は、経時的に患者において有益な治療応答をもたらすのに十分であるべきである。用量の大きさもまた、有害な副作用の存在、性質、および程度によって決定されるであろう。一般に、治療はより少ない投与量で開始され、それは化合物の最適投与量より少ない。その後、状況下で最適な効果が得られるまで投与量を少しずつ増加させる。いくつかの実施形態では、投与量範囲は０．００１％～１０％ｗ／ｖである。いくつかの実施形態では、投与量範囲は０．１％～５％ｗ／ｖである。

投与量および投与間隔は、治療されている特定の臨床適応症に有効な投与化合物のレベルを提供するために個々に調整することができる。これは個体の病状の重症度に見合った治療計画を提供するだろう。

本明細書に記載の発明をより完全に理解することができるように、以下の実施例を記載する。これらの実施例は説明目的のためだけであり、そして本発明を限定するものとして決して解釈されるべきではないことが理解されるべきである。

以下の実施例は、本発明の特定の実施形態を説明することを意図しており、本発明の範囲を限定することを意図していない。

器具および方法
Ａ．ＮＭＲ
ＮＭＲ分析用の試料は、約０．７５ｍＬのＮＭＲ溶媒（Ｄ２Ｏ－ｄ６）中に適切な量の物質を完全に溶解させることによって調製した。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ ＡＴＢプローブを備えたＶａｒｉａｎ ＩＮＯＶＡ ４００ＭＨｚ ＮＭＲ分光計のいずれかを用いて２５℃で記録した。
標準取得パラメータを使用して、可変数のスキャン（１６～２５６）を適用した。ＮＭＲ定量化を実施するときはいつでも、取得前遅延を１０秒に設定した。スペクトルの処理において適切な位相補正およびベースライン補正を適用した。

Ｂ．ＸＲＰＤ
ＸＲＰＤスペクトルは、標準Ａｐｔｕｉｔ法を用いて、Ｘ’ｃｅｌｅｒａｔｏｒ検出器を備えたＰａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｘ’ｐｅｒｔ Ｐｒｏ機器にて透過モードで収集した。ＨｉｇｈＳｃｏｒｅ Ｐｌｕｓソフトウェアを使用してデータを評価した。使用した機器パラメータは以下の通りである。

Ｃ．ＴＧＡおよびＤＳＣ
ＴＧＡ分析は、ＴＡ Ｑ５０００機器で実行した。ＤＳＣ分析は、ＴＡ Ｑ２０００ ＭＤＳＣ機器で実行した。ＤＳＣおよびＴＧＡ法の詳細を以下に示す。

Ｄ．ＨＰＬＣ
ＨＰＬＣ実施は以下を用いて行った。
カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（５０×２ｍｍ、３μｍ）、カラム温度４０℃
移動相Ａ：０．０５％ＴＦＡ／水、Ｂ：０．０５％ＴＦＡ／アセトニトリル
勾配０分１００％Ａ～８分９５％Ｂ
流量１．０ｍＬ／分
検出器ＵＶ ＤＡＤ ２２０ｎｍにて

Ｅ．ＧＶＳ
ＧＶＳ分析は、Ｈｉｄｅｎ ＡｎａｌｙｔｉｃａｌによるＩＧＡ Ｓｏｒｐ機器で実施した。方法パラメータを以下に示す。

実施例１：化合物１の調製
化合物１の合成は、‘８００出願の実施例２に詳細に記載されており、これは参照を容易にするために本明細書にて再現する。

トランス－１’－ｔｅｒｔ－ブチル－４’－エチル－３－ヨード－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－１’，４’－ジカルボキシレートの合成。乾燥トルエン（１０ｍＬ）中のトランス－１’－ｔｅｒｔ－ブチル４’－エチル２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－１’，４’－ジカルボキシレート８（１４１ｍｇ、２．５８ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液へ０℃でＴＭＥＤＡ（０．８９ｇ、７．７ｍｍｏｌ、３．０当量）およびＴＭＳＣｌ（０．６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、２．０当量）をＮ_２下で連続して加えた。０．５時間後、Ｉ_２（０．９８ｇ、３．８７ｍｍｏｌ、１．５当量）を少しずつ注意深く加えた。反応溶液を０℃～室温で１６時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、飽和Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３（２０ｍＬ×２）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、そして真空中で濃縮した。粗生成物９（２．２ｇ、Ｙ：８１％）をさらに精製することなく次の工程に直接使用した。ＥＳＩ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ－５６）^＋：４２４．９。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：４．７８－４．７３（ｍ，１Ｈ），４．１９－４．０４（ｍ，４Ｈ），３．５５－３．３０（ｍ，４Ｈ），３．２４－３．１６（ｍ，２Ｈ），２．７３－２．６０（ｍ，１Ｈ），２．２２－２．１４（ｍ，２Ｈ），１．９６－１．７８（ｍ，２Ｈ），１．７０－１．６０（ｍ，１Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），１．２５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。

トランス－１’－ｔｅｒｔ－ブチル４’－エチル３－（（３－クロロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－１’，４’－ジカルボキシレートの合成。ＴＨＦ中のリチウムビス（トリメチルジシリル）アミドの１．０Ｍ溶液（１３ｍＬ、１２ｍｍｏｌ、２．０当量）を１０～１５℃で滴下漏斗を通してＴＨＦ（１３ｍＬ）中の３－クロロ－５－（トリフルオロメチル）アニリンの溶液（１５ｇ、７８ｍｍｏｌ、１．２当量）に加えた。混合物を室温で２０分間撹拌させ、ＴＨＦ（１３ｍＬ）中の粗製トランス－１’－ｔｅｒｔ－ブチル－４’－エチル－３－ヨード－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－１’，４’－ジカルボキシレート９（３．７ｇ、６５ｍｍｏｌ、１．０当量）を１０～１５℃で３０分かけて添加漏斗を通して添加した。添加後、反応物をその温度で３０分間撹拌させた。完了したら、反応物を５℃に冷却し、温度を２０℃未満に保ちながら水（１０ｍＬ）でゆっくりクエンチした。クエンチした反応物をＥｔＯＡｃで抽出した（２×３０ｍＬ）。合わせた有機層を飽和ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、そして真空中で濃縮した。得られた粗生成物をヘプタン中１０％から７５％のＥｔＯＡｃの勾配で溶出するシリカゲルにより精製して、所望の生成物１０を得た。ＥＳＩ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ－５６）^＋：４６３．１。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：６．９２（ｓ，１Ｈ），６．７１－６．６９（ｍ，２Ｈ），４．１７－４．０６（ｍ，４Ｈ），３．７８－３．６８（ｍ，２Ｈ），３．４６－３．３６（ｍ，３Ｈ），３．２３－３．０７（ｍ，２Ｈ），２．７３－２．６５（ｍ，１Ｈ），２．４４－２．３７（ｍ，１Ｈ），２．０３－１．８５（ｍ，３Ｈ），１．７１－１．６１（ｍ，２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．２７－１．１９（ｍ，３Ｈ）。

トランス－１’－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－３－（（３－クロロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－４’－カルボン酸の合成。ＥｔＯＨ（５ｍＬ）中のトランス－１’－ｔｅｒｔ－ブチル４’－エチル３－（（３－クロロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－１’，４’－ジカルボキシレート１０（１８０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、にＮａＯＨ（４０ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ、３．０当量）を加え、溶液を８０℃で１時間撹拌した。溶媒を真空で濃縮し、残渣を水（１０ｍＬ）に懸濁し、ＨＣｌ（４Ｎ）でｐＨ＝６に調整した。沈殿物を濾過して、（トランス）－１’－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－３－（（３－クロロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－４’－カルボン酸１１を黄色の固体として得て（１５０ｍｇ、Ｙ：８２％）、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。ＥＳＩ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ－８５）^＋：４６３．１。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：６．８５（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．７８（ｓ，１Ｈ），４．１２－３．９６（ｍ，４Ｈ），３．５３－３．３７（ｍ，２Ｈ），３．１１－３．０４（ｍ，２Ｈ），２．７５－２．６７（ｍ，１Ｈ），２．２４－２．１８（ｍ，１Ｈ），１．９８－１．８９（ｍ，３Ｈ），１．７１－１．５８（ｍ，２Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）。

トランス－ｔｅｒｔ－ブチル４’－カルバモイル－３－（（３－クロロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－１’－カルボキシレートの合成。ＤＭＦ（２ｍＬ）中のトランス１’－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－３－（（３－クロロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－４’－カルボン酸１１の溶液（７０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ、１．０当量）に、ＮＨ_４Ｃｌ（２２ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ、３．０当量）、ＨＢＴＵ（１０３ｍｇ、０．２７０ｍｍｏｌ、２．０当量）およびＤＩＰＥＡ（５２ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ、３．０当量）を加えた。反応溶液を室温で１６時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、水（５ｍＬ）およびブライン（５ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、真空中で濃縮して粗油状物を得、これを分取ＨＰＬＣ（移動相として０．０５％ＴＦＡを含むＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ）によって精製して、化合物（トランス）－ｔｅｒｔ－ブチル－４’－カルバモイル－３－（（３－クロロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－１’－カルボキシレート１２を明色の固体として得た（６０ｍｇ、収率：８６％）。ＥＳＩ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ－５６）^＋：４６３．１。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ：６．８７－６．８６（ｍ，１Ｈ），６．８４－６．８３（ｍ，１Ｈ），６．８０（ｓ，１Ｈ），４．１１－４．０３（ｍ，３Ｈ），３．５３－３．３５（ｍ，２Ｈ），３．２０－３．０８（ｍ，２Ｈ），２．７７－２．７４（ｍ，１Ｈ），２．２５－２．１８（ｍ，１Ｈ），１．９９－１．８８（ｍ，３Ｈ），１．７０－１．６０（ｍ，２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ）。

トランス－３－（（３－クロロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－４’－カルボキサミドの合成。ＣＨ_２Ｃｌ_２（１．０ｍＬ）中のトランス－ｔｅｒｔ－ブチル４’－カルバモイル－３－（（３－クロロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－１’－カルボキシレート１２の溶液（６０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）に室温でＣＦ_３ＣＯ_２Ｈ（１．０ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、真空中で濃縮して所望の生成物１３（４３ｍｇ、９０％）を得、これをさらに精製することなく次の工程に直接使用した。ＥＳＩ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：４１９．０。

トランス－１’－（６－アミノ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－３－（（３－クロロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－４’－カルボキサミドの合成。１－ブタノール（２ｍＬ）中のトランス－３－（（３－クロロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－４’－カルボキサミド１３（４２ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、１．０）の溶液に、６－クロロ－５－フルオロピリミジン－４－アミン（１８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、１．２当量）を加えた、ＤＩＰＥＡ（２６ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ、２．０当量）。反応溶液を１２０℃で１６時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、Ｈ_２Ｏ（１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、そして真空中で濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（移動相として０．０５％ＴＦＡを含むＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ）によって精製して、化合物（トランス）－１’－（６－アミノ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－３－（（３－クロロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－４’－カルボキサミド１４を黄色固体として得た（４４ｍｇ、収率：８３％）。ＥＳＩ－ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）^＋：５３０．０。ＨＰＬＣ：（２１４ｎｍ：１００％，２５４ｎｍ：１００％）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ：７．９７（ｓ，１Ｈ），６．８４（ｓ，１Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），６．７６（ｓ，１Ｈ），４．５８－４．５２（ｍ，２Ｈ），４．０９－４．０３（ｍ，１Ｈ），３．５２－３．３５（ｍ，３Ｈ），３．２９－３．２７（ｍ，４Ｈ），３．１２－３．０５（ｍ，１Ｈ），２．２４－２．１７（ｍ，１Ｈ），２．０２－１．９１（ｍ，３Ｈ），１．８０－１．６３（ｍ，２Ｈ）。

（３Ｒ、３’Ｒ、４’Ｓ）－１’－（６－アミノ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－３－（（３－クロロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－４’－カルボキサミド。化合物１４の４つのジアステレオマーの混合物をＳＦＣ（ＩＡ（２×１５ｃｍ）、３０％ＥｔＯＨ（０．１％ＤＥＡ）／ＣＯ_２、１００ｂａｒ、６０ｍＬ／分）によって３つのピークに分離し、標記化合物はピーク３に対応した。ＬＣＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ４６０、２５４ｎｍ）：ＥＳ（＋）ＭＳ ｍ／ｅ＝５３０．１（Ｍ＋１）＠１．２０分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ：７．７７（ｄ，Ｊ＝２．０１Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），６．９４（ｓ，２Ｈ），６．７５－６．８７（ｍ，２Ｈ），６．４１－６．６６（ｍ，３Ｈ），４．２９（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），４．２３（ｄ，Ｊ＝１３．０５Ｈｚ，１Ｈ），３．９６－４．１８（ｍ，２Ｈ），３．４４（ｔｄ，Ｊ＝６．１５，１２．３０Ｈｚ，１Ｈ），３．２４－３．３３（ｍ，１Ｈ），３．１０（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），２．８８（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），２．８２（ｔ，Ｊ＝１２．３０Ｈｚ，１Ｈ），２．１３（ｑｄ，Ｊ＝５．９４，１２．３０Ｈｚ，１Ｈ），１．７４－１．９３（ｍ，３Ｈ），１．５８－１．７４（ｍ，１Ｈ），１．４１－１．５８（ｍ，１Ｈ）。

（３Ｓ、３’Ｒ、４’Ｓ）－１’－（６－アミノ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－３－（（３－クロロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－４’－カルボキサミド。化合物１４の４つのジアステレオマーの混合物をＳＦＣ（ＩＡ（２×１５ｃｍ）、３０％ＥｔＯＨ（０．１％ＤＥＡ）／ＣＯ_２、１００ｂａｒ、６０ｍＬ／分）によって３つのピークに分離し、標記化合物はピーク２に対応した。ＬＣＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ４６０、２５４ｎｍ）：ＥＳ（＋）ＭＳ ｍ／ｅ＝５３０．１（Ｍ＋１）＠１．１９分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ：７．７７（ｄ，Ｊ＝１．７６Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），６．９６（ｓ，１Ｈ），６．７２－６．８８（ｍ，２Ｈ），６．５７（ｓ，２Ｈ），６．５４（ｄ，Ｊ＝７．７８Ｈｚ，１Ｈ），４．０５－４．３３（ｍ，４Ｈ），３．３７（ｔ，Ｊ＝６．２７Ｈｚ，２Ｈ），３．１１（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），２．９４（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），２．８２（ｔ，Ｊ＝１２．３０Ｈｚ，１Ｈ），２．０２－２．１６（ｍ，１Ｈ），１．７５－１．９２（ｍ，３Ｈ），１．５７－１．７４（ｍ，１Ｈ），１．３６－１．５４（ｍ，１Ｈ）．

（３Ｓ、３’Ｓ、４’Ｒ）－１’－（６－アミノ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－３－（（３－クロロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－４’－カルボキサミド。化合物１４の４つのジアステレオマーの混合物をＳＦＣ（ＩＡ（２×１５ｃｍ）、３０％ＥｔＯＨ（０．１％ＤＥＡ）／ＣＯ_２、１００バール、６０ｍＬ／分）によって３つのピークに分離した。３つ中のピーク１をＳＦＣ（ＡＤ－Ｈ（２×１５ｃｍ）、３０％ｉＰｒＯＨ（０．１％ＤＥＡ）／ＣＯ_２、１００ｂａｒ、６０ｍＬ／分）さらに精製し、標記化合物を得た。ＬＣＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ ４６０、２５４ｎｍ）：ＥＳ（＋）ＭＳ ｍ／ｅ＝５３０．１（Ｍ＋１）＠１．２０分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ：７．７７（ｄ，Ｊ＝１．７６Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），６．９４（ｓ，２Ｈ），６．８３（ｓ，１Ｈ），６．８０（ｓ，１Ｈ），６．４２－６．６６（ｍ，３Ｈ），４．１８－４．４７（ｍ，２Ｈ），３．９５－４．１８（ｍ，２Ｈ），３．３９－３．５２（ｍ，１Ｈ），３．２４－３．３１（ｍ，１Ｈ），３．１０（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），２．８８（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），２．８２（ｔ，Ｊ＝１２．３０Ｈｚ，１Ｈ），２．１３（ｑｄ，Ｊ＝５．９１，１２．３９Ｈｚ，１Ｈ），１．７３－１．９２（ｍ，３Ｈ），１．５８－１．７３（ｍ，１Ｈ），１．４２－１．５８（ｍ，１Ｈ）。

（３Ｒ、３’Ｓ、４’Ｒ）－１’－（６－アミノ－５－フルオロピリミジン－４－イル）－３－（（３－クロロ－５－（トリフルオロメチル）フェニル）アミノ）－２－オキソ－［１，３’－ビピペリジン］－４’－カルボキサミド。化合物１４の４つのジアステレオマーの混合物をＳＦＣ（ＩＡ（２×１５ｃｍ）、３０％ＥｔＯＨ（０．１％ＤＥＡ）／ＣＯ_２、１００バール、６０ｍＬ／分）によって３つのピークに分離した。３つ中のピーク１をＳＦＣ（ＡＤ－Ｈ（２×１５ｃｍ）、３０％ｉＰｒＯＨ（０．１％ＤＥＡ）／ＣＯ_２、１００ｂａｒ、６０ｍＬ／分）さらに精製し、標題化合物を得た。ＬＣＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ ４６０、２５４ｎｍ）：ＥＳ（＋）ＭＳ ｍ／ｅ＝５３０．１（Ｍ＋１）＠１．２０分。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ：７．７７（ｄ，Ｊ＝１．７６Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），６．９６（ｓ，１Ｈ），６．７３－６．８８（ｍ，２Ｈ），６．５７（ｓ，２Ｈ），６．５４（ｄ，Ｊ＝７．７８Ｈｚ，１Ｈ），４．０５－４．３５（ｍ，４Ｈ），３．３７（ｔ，Ｊ＝６．１５Ｈｚ，２Ｈ），３．１２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），２．９４（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），２．８２（ｔ，Ｊ＝１２．３０Ｈｚ，１Ｈ），２．０９（ｓｘｔ，Ｊ＝５．８０Ｈｚ，１Ｈ），１．７４－１．９２（ｍ，３Ｈ），１．５６－１．７３（ｍ，１Ｈ），１．３６－１．５２（ｍ，１Ｈ）。

実施例２：化合物２の調製
１３．４ｇの化合物１に、５０ｍＬのＥｔＯＨを加えた。得られたスラリーを６０℃に温めて透明な溶液を得た。この溶液に、５０ｍＬのＥｔＯＨ中のコハク酸（４．５ｇ、１．５当量）のスラリーを添加し、得られた混合物を加熱還流して透明な溶液を得た。温度を２時間かけて２０～２５℃に下げ、混合物をその温度で３時間撹拌した。次にスラリーを濾過し、湿ったケーキを１０ｍＬの冷ＥｔＯＨ（約４℃）で洗浄した。固体をハウス真空下５０℃で１２時間乾燥し、１．４％ＤＭＡＰ（出発物質中の１２％ＤＭＡＰからの残留物）を含有する１３．０ｇの化合物２を白色固体として得た（収率約９０％）。

実施例３：化合物２の多形体
化合物２について多形体スクリーニングを実施して結晶形を生成しそして特徴付けた。多形体を生成するために、それらの化学的多様性および化合物２との適合性を考慮して一連の溶媒系を選択した。溶媒／水の組み合わせもまた、水和物形態の存在を評価するために使用した。

長期スラリー（ＬＴ）
表１に報告された溶媒中に約２００ｍｇの化合物２を秤量し、０．５ｍＬの溶媒中にその固体を懸濁し、そして過剰の固体が溶解しないままであることを確認することによってスラリーを設定した。調製した試料はまた、使用した溶媒系中の化合物２の溶解度を計算するために用いた。

化合物２の溶解度
長期スラリー実験用に調製したスラリーを２０℃で１日後にサンプリングして、使用した溶媒系中の化合物２の溶解度を測定した。溶解度データは、アセトニトリル／メタノール４０／６０に既知の濃度で溶解した化合物２の６つの試料を調製しＨＰＬＣに注入した、応答係数に関し、ＨＰＬＣによって得られた。得られたＨＰＬＣ面積を用いて、化合物２のＨＰＬＣ応答係数を計算した（データ示さず）。溶解度計算の結果を表１に報告する。
表１：種々の溶媒中の化合物２の溶解度

溶解度計算後、スラリーを２０℃で１５日間撹拌した。ＸＲＰＤおよびＰＬＭ分析の前に、得られた固体を濾過し、室温で約３時間真空乾燥した。特定の試料について熱分析を実施した。表２はＸＲＰＤの結果を表す。長期スラリー試料の大部分は、出発物質と一致するＸＲＰＤパターンを有する形態２物質を示した。酢酸エチルおよび酢酸イソプロピル試料は出発物質の形態１への変換を示した。水試料は部分的に非晶質物質への変換を示した。エタノール／水９０／１０試料は、形態２から形態１への部分的な変換を示した。ＤＳＣデータは、これら２つの形態の存在を確認した。

温度サイクル
表１に報告された溶解度データを考慮して、上記に報告された溶媒系中にスラリーを設定した。スラリーを、温度を２０℃から４０℃へ温度を切り替え、およびその逆に切り替えて４８時間撹拌した（各温度で２時間）。一晩スラリーを２０℃で撹拌した。スラリーを濾過して残渣を単離し、単離した固体を、ＸＲＰＤおよびＰＬＭ分析の前に、室温で約３時間真空乾燥した。特定の試料について熱分析を実施した。表３はＸＲＰＤの結果を表す。大部分の温度サイクル試料は、出発物質と一致するＸＲＰＤスペクトルパターンを有する形態２物質を示した。

酢酸エチル、酢酸イソプロピル、およびエタノールの試料は、出発物質から形態１への部分的な変換を示した。ＤＳＣデータは、形態１と形態２の混合物の存在を確認した。

シクロヘキサノン試料は、形態２と新しい結晶形態の混合物と呼ぶことができるＸＲＰＤパターンを示した。ＤＳＣデータは、形態２物質の存在を確認し、そして１３５℃で吸熱事象を示し、それは新しい形態の融解に関連し得る。室温で１０日間貯蔵した後にＸＲＰＤによって分析したシクロヘキサノン試料は、形態２に変換する傾向を示した。

蒸発
飽和溶液を上記に報告された溶解度データに基づいて設定した。溶液を０．４５ｍｍのＰＴＦＥフィルターを通して濾過し、そして濾液を窒素流下室温で、ドライボックス中で蒸発乾固させた（ＲＨ ＜１０％）。得られた固体をＸＲＰＤおよびＰＬＭにより分析した。特定の試料について熱分析を実施した。表４はＸＲＰＤの結果を表す。蒸発試料の大部分は、出発物質と一致するＸＲＰＤパターンを有する形態２物質を示した。

シクロヘキサノン試料は、温度サイクリングシクロヘキサノン試料と同様のＸＲＰＤパターンを示した。ＤＳＣ分析は、３つ以上の結晶形の存在を示唆する複数の事象の存在を示した。

エタノールおよびエタノール／水９０／１０の試料は、出発物質の１型への部分変換を示した。

１，４－ジオキサン試料は新しいＸＲＰＤパターンを示した。ＤＳＣは２つの異なる形態の存在を示唆する２つの融解事象を示した。

密封飽和溶液
飽和溶液は、上に報告された溶解度データに基づいて設定された。溶液を０．４５ｍｍのＰＴＦＥフィルターを通して濾過しそして濾液を集めた。ろ液を密封バイアルに保ち、室温で固体形成について定期的に視覚的に検査した（１５日間）。固体形成を示さなかった試料は、最初に４℃（１４日）で貯蔵され、次いで必要ならば－２０℃（７日）で貯蔵された。得られた固体を上澄み除去によって単離し、そしてＸＲＰＤおよびＰＬＭによる分析の前に真空オーブン中室温で乾燥した。特定の試料について熱分析を実施した。表５はＸＲＰＤの結果を表す。密封飽和溶液試料は、形態２のＸＲＰＤパターンまたは形態２と他の形態との混合物を示した。シクロヘキサノン試料は、温度サイクリングおよび蒸発シクロヘキサノン試料と同様のＸＲＰＤパターンを示した。

蒸気拡散
上記で報告された溶解度データを考慮して、飽和溶液をある範囲の溶媒中に設定した。得られた溶液を０．４５μｍのＰＴＦＥフィルターを通して濾過し、図１０に示すように貧溶媒の多い環境に置いた。

溶液を定期的に固体形成について目視検査した。ピペットで上清を除去することによって固形分を単離し、ＸＲＰＤおよびＰＬＭによる分析の前に、真空オーブン中室温で約３時間乾燥させた。特定の試料について熱分析を実施した。表６は、実験および結果を設定するために使用された溶媒／貧溶媒対を報告する。

貧溶媒としてジイソプロピルエーテルを使用して生成された試料は、形態２物質であると思われるＸＲＰＤパターンを示した。いくつかの追加のＸＲＰＤピークの存在は、試料中の他の形態の存在を示唆し得る。ＤＳＣトレースは、形態２に関連した単一の融解事象を示した。

貧溶媒として酢酸エチルまたは酢酸イソプロピルを使用して生成された試料は、形態１物質または形態１と形態２の混合物の存在を示した。

貧溶媒としてヘプタンを使用することによって生成された固体試料は、典型的な形態２のＸＲＰＤパターンを示した。

スケールアップ
１ｇの化合物２を反応管中で秤量した。出発物質を１５ｍＬの酢酸イソプロピルに懸濁した。スラリーを２０℃で１５日間撹拌した。その後、生成物を濾過して白色固体を得た。乾燥前に固体をＸＲＰＤによって分析して、形態１の存在およびいくつかの未知のピークを観察した。物質を真空オーブン中４０℃で一晩乾燥した。乾燥した物質をＸＲＰＤにより分析して形態１の物質の存在を示した。図１は乾燥物質のＸＲＰＤスペクトルを示す。スペクトルは形態１の典型的なパターンと一致する。

得られた物質は、ＤＳＣ、ＧＶＳ、ＨＰＬＣ、ＮＭＲおよびＰＬＭによっても特徴付けられた。ＤＳＣトレースは、ＸＲＰＤによって検出されないわずかな量の２型物質の存在を示した。ＤＳＣ試料中の形態２の存在は、ＤＳＣ加熱勾配の間に形態２に変換された非晶質物質に起因し得る（図２）。

ＧＶＳパターンは、物質の吸湿性の増加を強調していない（図３参照）。ＮＭＲスペクトルは化合物２の構造と一致した。コハク酸化学量論は１：１と評価された。

実施例４：ヒトＢ細胞刺激のためのプロトコル
ヒトＢ細胞を１５０ｍＬの血液から精製する。簡潔には、血液をＰＢＳで１／２に希釈し、そしてＦｉｃｏｌｌ密度勾配を介して遠心分離することができる。Ｂ細胞は、Ｍｉｌｅｎｙｉ（Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）からのＢ細胞単離キットＩＩを用いたネガティブ選択によって単核細胞から単離することができる。次いで、１ウェルあたり５０，０００個のＢ細胞を、９６ウェルプレート中で、１０μｇ／ｍＬのヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）で刺激することができる。化合物をＤＭＳＯで希釈して細胞に添加することができる。ＤＭＳＯの最終濃度は０．５％である。増殖は、Ｐｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を用いて３日後に測定することができる。

実施例５：インビトロＢＴＫキナーゼアッセイ：ＢＴＫ－ＰＯＬＹＧＡＴ－ＬＳアッセイ。
ＢＴＫインビトロアッセイの目的は、ＩＣ_５０の測定を介してＢＴＫに対する化合物の効力を決定することである。活性ＢＴＫ酵素（Ｕｐｓｔａｔｅ １４－５５２）、ＡＴＰ、および阻害剤の存在下でフルオレセイン標識ポリＧＡＴペプチド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＰＶ３６１１）のリン酸化量をモニターした後、化合物阻害を測定することができる。ＢＴＫキナーゼ反応は黒色９６ウェルプレート（ｃｏｓｔａｒ３６９４）中で行うことができる。典型的なアッセイのために、キナーゼ緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ ｐＨ７．５、１０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、２００μＭ Ｎａ_３ＰＯ_４、５ｍＭ ＤＴＴ、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、および０．２ｍｇ／ｍＬカゼイン）中のＡＴＰ／ペプチドマスターミックス（最終濃度；ＡＴＰ １０μＭ、ポリＧＡＴ １００ｎＭ）の２４μＬアリコートを各ウェルに添加することができる。次に、４倍の、１００％ＤＭＳＯ溶媒中の４０Ｘ化合物タイトレーションの１μＬを添加し、続いて１Ｘキナーゼ緩衝液中のＢＴＫ酵素混合物１５μＬ（最終濃度０．２５ｎＭ）を添加することができる。アッセイは、２８μＬの５０ｍＭ ＥＤＴＡ溶液で停止する前に３０分間インキュベートすることができる。キナーゼ反応のアリコート（５μＬ）を低容量白色３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ ３６７４）に移し、そして５μＬの２Ｘ検出緩衝液（４ｎＭのＴｂ－ＰＹ２０抗体を含むＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＰＶ３５７４、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＰＶ３５５２）を加えることができる。プレートを覆い、室温で４５分間インキュベートすることができる。時間分解蛍光（ＴＲＦ）をＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｍ５（３３２ｎｍ励起、４８８ｎｍ発光、５１８ｎｍフルオレセイン発光）において測定することができる。ＩＣ_５０値は、ＤＭＳＯ対照から決定された１００％酵素活性とＥＤＴＡ対照からの０％活性に適合する４つのパラメータを用いて計算することができる。

実施例６：ヒトにおける第１ａ相単回投与試験
最初のヒト第１ａ相無作為化二重盲検プラセボ対照単回投与試験を３段階で実施した：第１段階では、８人の対象の４つの連続コホートを無作為に割り当てて、５０、１００、２００、および３００ｍｇの用量での化合物２の次第に高くなる単回経口投与（コホート当たりｎ＝６、男性３人および女性３人）またはプラセボ（コホート当たりｎ＝２、男性１人および女性１人）を受けた。

第２段階では、化合物２の薬物動態に対する食物の影響を評価した。この段階では、新たに登録された１２人の対象（男性６人、女性６人；コホート６）に、絶食状態または摂食状態で、２回の投与の間に７２時間以上の期間をおいて化合物２を２回投与した。化合物２の用量レベルは２００ｍｇであった。１２人の対象を無作為化し、６人の対象（男性３人、女性３人）が一晩の絶食後に化合物２の投与を受け、６人の対象（男性３人、女性３人）が標準化高脂肪食摂取後に化合物２の投与を受けた。約４日後、最初の期間に食物なしで化合物２の投与を受けた人々が食物と一緒に薬物の投与を受ける一方、最初の期間に食物と一緒に化合物２を摂取した人々に食物なしで薬物の投与を受けるように対象を交差させた。

第３段階では、試験の第２段階ですでに化合物２の投与を受けていたコホート６の１２人の対象を評価した。２５ｍｇの用量の化合物２を１日目に絶食状態で１回投与し、そして対象を安全性、ＰＫおよびＰＤ評価について追跡した。４日目、次に対象は、摂食状態（７日目の朝の用量を除く）で４～９日目まで１日２回２００ｍｇの用量で投与をされるイトラコナゾール（強力なＣＹＰ３Ａ４阻害剤）の投与を受けた。７日目の朝に、対象は、イトラコナゾールを２００ｍｇの用量で投与を受け、その後すぐに化合物２を２５ｍｇの用量で投与された（両方の薬物が絶食状態で投与された）。次に、７、８、９、および１０日目に、安全性、ＰＫおよびＰＤ評価について対象を追跡した。１日目に化合物２を単独で投与した後に観察されたＰＫ結果を、７日目にイトラコナゾールとともに化合物２を投与した後にこれらの同じ対象において観察された結果と比較した。

安全性の主要評価項目は、有害事象（ＡＥ）、臨床検査値の異常、および心臓所見（ＥＣＧ）をモニタリングすることによって評価した。副次的評価項目には、血漿中濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ）、最大血漿中濃度（Ｃｍａｘ）、最高濃度到達時間（Ｔｍａｘ）、見かけの分布容積（Ｖｄ／Ｆ）、消失半減期（ｔ１／２）、消失速度定数（λｚ）、および見かけのクリアランス（Ｃｌ／Ｆ）のＰＫパラメータ、ならびに全血におけるＢＴＫ阻害の寿命のＰＤパラメータの評価を含む。

化合物２はコハク酸塩である。遊離塩基（化合物１）の血漿中濃度を測定し、そしてＰＫパラメータの推定および濃度／ＰＤ関係の作成のために使用した。

ＢＴＫ阻害は、リン酸化ＢＴＫ（ｐＢＴＫ）および総ＢＴＫ（ｔｏｔＢＴＫ）に基づいて計算した。すべての投与後の血液試料と１つの投与前の試料を、プロテアーゼとホスファターゼ阻害剤（ＰＰｉ）の存在下で溶解し、達成可能なｐＢＴＫの最大減少を推定するために、ＰＰｉなしで第２の投与前試料を溶解した。ＰＰｉなしの各ｐＢＴＫ／ｔｏｔＢＴＫからＰＰｉなしの前投与量ｐＢＴＫ／ｔｏｔＢＴＫの比を引いて、ｐＢＴＫ対投与量％を計算した。

式１

次いでＢＴＫ阻害％を計算した：

式２

結果
個体群統計
化合物２の投与を受けた２４人の対象の平均年齢は５５歳（範囲：２２～６４歳）であった。プラセボの投与を受けた８人の対象のうち、年齢の中央値は４２．５歳であった（範囲：２９～６５歳）。化合物２の投与を受けた対象の大多数は白人であった（９５．８％）。コホート１の１人の対象だけがアメリカインディアン／アラスカ出身であった（４．２％）。

安全性に関する調査結果
化合物２の投与を受けた８人の対象（３３％）およびプラセボの投与を受けた３人の対象（３８％）について、試験治療下での発現（Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ－ｅｍｅｒｇｅｎｔ）ＡＥ（ＴＥＡＥ）が報告された。化合物２の投与を受けた６人（２５％）の対象は、プラセボの投与を受けた３人（３８％）の対象と比較して治療関連のＴＥＡＥを有した。

化合物２の投与を受けた対象では、治療関連のＴＥＡＥには頭痛、吐き気、上室性頻拍が含まれ、さらに報告されたＴＥＡＥには、便秘、気管支炎、疲労、および起立性低血圧が含まれていた。用量依存毒性の明白なパターンは観察されなかった。プラセボ群では、すべてのＴＥＡＥが治療関連とみなされ、頭痛、吐き気、下痢が含まれていた。

グレード２の頭痛および疲労を経験した１人の対象（３００ｍｇの化合物２の投与を受けた）を除いて、ＡＥはすべてグレード１として報告された。グレード３以上のＡｅは報告されなかった。ＳＡＥは報告されなかった。報告されたＡＥ、実験室異常、またはＥＣＧまたは遠隔測定所見のいずれも臨床的に意味があるとみなされなかった。

ＰＫ／ＰＤの結果
中央値Ｔｍａｘ＝１時間（範囲：０．５～３．０）で、化合物は急速に吸収された。すべての用量コホートにわたる平均ｔ１／２値は７．４３～１７時間の範囲であった。図１２に示すように、化合物１の濃度は多相的に減少した。各コホートの平均ＰＫパラメータを表７に示す。総曝露量（ＡＵＣおよびＣｍａｘ）は用量にほぼ比例して増加した。図１３に示すように、化合物はすべての用量レベルでｐＢＴＫの急速で大きい（～１００％）そして長期の阻害を示した。

異なる血漿中濃度におけるｐＢＴＫ阻害の程度を図１４に示す。臨床的有効性についてのｐＢＴＫ阻害の具体的な目標レベルはまだ報告されていないが、約８５％の阻害が一般に臨床活性に十分であると予想される（Ｂｙｒｄ ＪＣ，ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０１６；３７４：３２３－３２）。

食物の影響
摂食および絶食状態の１２人の対象に２００ｍｇの化合物２を経口投与した後、化合物２の薬物動態に対する食物の影響を評価した。摂食状態における化合物２の吸収速度は減少し、Ｔｍａｘは２時間遅延し、Ｃｍａｘは約３０％減少したが、しかしながら、化合物２の吸収の程度（ＡＵＣ）および消失の程度（Ｔ１／２）には影響がなかった。同様に、見かけの全身クリアランスおよび分布容積は両方の食物条件において同程度であった。全体として、結果は、化合物２が食物の有無にかかわらず与えられ得ることを示す。

薬物間相互作用（ＣＹＰ３Ａ４阻害の影響）
２５ｍｇの化合物２の経口投与の薬物動態に対する強力なＣＹＰ３Ａ４阻害剤、イトラコナゾールの影響を１２人の対象において評価した（表７ａ）。イトラコナゾールを化合物２と同時投与した場合、それぞれ約２倍および６．３～７．０倍の化合物１血漿中曝露量（ＣｍａｘおよびＡＵＣ）の増加が観察された。これらの結果は、化合物１がＣＹＰ３Ａ４に対する感受性の基質であることを示している（すなわち、ＣＹＰ酵素阻害の存在下で曝露において≧５倍の増加を示す）。これらのデータに基づいて、中等度または強力なＣＹＰ３Ａ４阻害剤または誘発剤である薬物の同時投与を必要とする対象の登録に対する制約があり得、そしてプロトコル治療中そのような薬物の使用に対する制限があり得る。

薬物動態学／薬力学的関係
第１段階（１００、２００、および３００ｍｇ）および第３段階（２５ｍｇのみ）についてのＰＫおよびＰＤ測定値（化合物１の血漿中濃度対ＢＴＫ阻害％）の間の相関関係を時点ごとに（図１５）および全体として（ＬＯＥＳＳ回帰曲線および９５％信頼区間による散布図、図１６）示す。ＰＫとＰＤとの間に明確な相関関係が観察された。化合物１の血漿中濃度が１００ｎｇ／ｍＬより低いかまたはそれに近いとき、ＢＴＫ阻害％は７５％以下であった。化合物１の血漿中濃度が２００ｎｇ／ｍＬ以上の場合、８５％以上のｐＢＴＫの阻害が観察された。濃度が増加するにつれて阻害が増加し、それほど変動しなかった。ほとんどの対象にとって、１０００ｎｇ／ｍＬを超える血漿中濃度では８５％を超える阻害が発生し、ほぼ１００％が阻害された。

結論
化合物２は健康な対象において好ましい安全性およびＰＫ／ＰＤプロファイルを示した。最低投与量５０ｍｇでの平均暴露量は、それぞれの推奨投与量で投与した場合、イブルチニブ（Ｂｉｎｎｅｒｔｓ ＭＥ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２０１５；１４（１２ Ｓｕｐｐｌ ２）； ＩＭＢＲＵＶＩＣＡ（登録商標）（イブルチニブ）カプセル，経口投与用［処方情報］）．Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ：Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ ＬＬＣ．； ２０１６；Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０５５５２ Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｒｅｖｉｅｗ（Ｉｍｂｒｕｖｉｃａ（商標））．Ｊｕｌｙ ３０，２０１３）とアカラブルチニブ（Ｂｙｒｄ ＪＣ，ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０１６；３７４：３２３－３２）の両方で報告された報告された曝露量を上回った（表８）。

これらの結果は、化合物２がこれらの共有結合阻害剤を超えてバイオアベイラビリティおよび半減期を含む改善されたＰＫ特性を有することを示している。化合物２の薬学的特性は、ＢＴＫの持続的阻害を提供するのに十分な血清中濃度の維持を可能にし、潜在的な臨床的利益をもたらすことが期待される。

安全性プロファイル、化合物２曝露の程度、およびｐＢＴＫ阻害期間は有望である。これらのデータは、ＢＴＫ Ｃｙｓ４８１変異の有無にかかわらず進行性Ｂ細胞悪性腫瘍を有する患者を対象に計画された第１ｂ相／第２相試験における安全性と活性を評価する１日２回の投与を支持する。

実施例７：化合物２の薬物動態
化合物２の単回経口投与および単回静脈内（ＩＶ）投与後の化合物２の血漿ＰＫを調べるために、一連の単回投与ＰＫ試験をラット、イヌおよびサルで行った。結果を表９にまとめ、以下詳細に記載する。

１ｍｇ／ｋｇの化合物２の単回ＩＶ投与および５ｍｇ／ｋｇの単回経口投与後に、雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（ｎ＝３）において化合物２のＰＫプロファイルを評価した。各投与後、一連の血液試料を投与後０（投与前）、０．０８、０．２５、０．５、０．７５、２、５、１０、および２４時間に採取した。ＰＫパラメータを表９に報告する。

懸濁液としてまたはカプセル中の固体として製剤化された化合物２のＰＫを評価するために試験を行った。雄のビーグル犬（ｎ＝３）は、注射用に滅菌水中の０．５％ｗ／ｖのＫ１５Ｍおよび０．２％ｗ／ｖのドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）中の懸濁液として、またはカプセル中の粉末として３５および２００ｍｇ／ｋｇ（ＤＲＮ１０５－０００１）の単回経口強制胃管投与を受けた。各用量レベルについて３匹の異なるイヌを使用した。３５ｍｇ／ｋｇの経口投与に使用されたイヌは、次に、クエン酸緩衝液ｐＨ４．５中の１０％ｗ／ｖのヒドロキシプロピルβシクロデキストリン中に製剤化された５ｍｇ／ｋｇの化合物２の単回ＩＶボーラス投与を受けた。化合物２遊離塩基血漿中全身曝露における動物間変動は、製剤にかかわりなく、ＩＶおよび経口投与後に観察された。表９を参照されたい。

１ｍｇ／ｋｇの化合物２の単回ＩＶ投与および５ｍｇ／ｋｇ（ＤＲＮ１０５－００４２）の単回経口投与の後に、雄のカニクイザル（ｎ＝３）において化合物２のＰＫを調べた。各投与後、一連の血液試料を投与後０．０８、０．２５、０．５、１、２、４、７、１６、および２４時間に採取した。非コンパートメントＰＫ分析（ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ）を使用してデータを分析し、そしてＰＫパラメータを表９に報告する。

実施例８：化合物１は、イブルチニブに対する耐性を克服するＣ４８１Ｓ変異したブルトン型チロシンキナーゼを阻害する。
イブルチニブに対する獲得耐性の問題に取り組むために、この実施例は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の前臨床モデルにおけるブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤化合物１を特徴付ける。

方法：初代ＣＬＬ Ｂ細胞を同意した患者の全血からＦＩＣＯＬＬ密度遠心分離およびｒｏｓｅｔｔｅ－ｓｅｐネガティブセレクションにより単離した。アネキシンＶおよびヨウ化プロピジウムフローサイトメトリーを用いて患者のＣＬＬ細胞生存率を測定し、７ＡＡＤを用いて間質共培養における生存率を測定した。ＣＤ４０およびＣＤ８６の発現を、持続的な３．２μＭのＣｐＧ刺激に続いてフローサイトメトリーによって評価した。初代ＣＬＬ細胞におけるＢＣＲシグナル伝達を、ＸＬＡ細胞株中での１時間の処理および化合物１との１時間または２４時間のインキュベーションに続く免疫ブロットによって調べた。ＭＴＳ値は、２４時間の薬物インキュベーション後に読み取った。抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８で刺激し、そして化合物１とともに１時間インキュベートした後、免疫ブロットによりＩＴＫ阻害を調べた。特に断りのない限り、化合物１は前臨床試験において１μＭの濃度で使用した。ヒト組換えＷＴ ＢＴＫまたはＣ４８１Ｓ ＢＴＫにおけるキナーゼ活性の測定は、ＦＲＥＴキナーゼアッセイにおいて行った。

結果：ＷＴまたはＣ４８１Ｓ ＢＴＫでトランスフェクトしたＸＬＡ細胞のＢＴＫおよびＥＲＫリン酸化の免疫ブロットは、化合物１の阻害がＷＴ ＢＴＫ中のイブルチニブのそれに匹敵し、Ｃ４８１Ｓ ＢＴＫ中のイブルチニブのそれよりも大きいことを実証した。組換えキナーゼアッセイを使用して、ＷＴ ＢＴＫに対する化合物１のＩＣ_５０は４．６ｎＭであり、Ｃ４８１Ｓ ＢＴＫは１．１ｎＭであることが見出され、これは化合物１が変異ＢＴＫ変異型においてより有効であることを示唆する。さらに、化合物１は、Ｃ４８１Ｓ ＢＴＫに対して、イブルチニブよりも６倍強力であり、かつアカラブルチニブよりも６４０倍強力であることが見出された。

化合物１は、ＢＴＫリン酸化についてのイムノブロットを介した、イブルチニブに匹敵する初代患者ＣＬＬ細胞におけるＢＴＫの用量依存的阻害を示す。０．１μＭ、１．０μＭ、および１０．０μＭの化合物１で４８時間処理した初代患者細胞の生存率は、未処理の状態の生存率のそれぞれ９６．７％、９６．１％、および８８．１％であると測定された。４８時間で、化合物１は、ＨＳ５間質保護の存在下で初代ＣＬＬ細胞の生存率を５．５％減少させた。化合物１は、ＣｐＧ誘導ＣＤ４０およびＣＤ８６発現をそれぞれ８．７％および１５．７％減少させることが見出された。抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８刺激Ｊｕｒｋａｔ細胞の免疫ブロットは、化合物１が、ＩＴＫの阻害を意味するＥＲＫのリン酸化を減少させることを明らかにした。

結論：イブルチニブとは異なり、化合物１はＣ４８１Ｓ ＢＴＫにおけるＢＴＫリン酸化を減少させる。化合物１は、初代患者のＣＬＬ細胞においてＢ細胞活性化マーカー、生存率、および間質細胞保護を減少させ、そしてＩＴＫを阻害することが示された。

本開示をその詳細な説明と併せて説明したが、前述の説明は例示を目的としたものであり、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を限定するものではないことが理解されるべきである。他の態様、利点、および改変は以下の特許請求の範囲内にある。

Claims (29)

1. 化合物１およびコハク酸を含む、化合物２の固体形態であって、
   

   

   （ａ）前記固体形態が形態１であり、５．３３±０．２、７．５９±０．２、９．７５±０．２、１１．６１±０．２、１３．６９±０．２、１６．２６±０．２、１７．９１±０．２、１８．１４±０．２、２０．１２±０．２、または２４．７３±０．２度２θにあるピークを持つ粉末Ｘ線回折パターンを有する、又は
   （ｂ）前記固体形態が形態２であり、６．７６±０．２、８．７７±０．２、９．０６±０．２、１２．００±０．２、１３．５３±０．２、１５．４７±０．２、１８．１３±０．２、２０．０７±０．２、２４．４６±０．２、または２５．０７±０．２度２θにあるピークを持つ粉末Ｘ線回折パターンを有する、
   前記化合物２の固体形態。
2. 前記固体形態が結晶性固体であり、前記固体形態は少なくとも９５重量％の化合物２が存在する、請求項１に記載の固体形態。
3. 前記結晶性固体は、少なくとも９５重量％の結晶性固体形態の化合物２が存在する、請求項２に記載の固体形態。
4. 前記固体形態が形態１であり、５．３３±０．２、７．５９±０．２、９．７５±０．２、１１．６１±０．２、１３．６９±０．２、１６．２６±０．２、１７．９１±０．２、１８．１４±０．２、２０．１２±０．２、または２４．７３±０．２度２θにあるピークを持つ粉末Ｘ線回折パターンを有する、
   請求項２に記載の固体形態。
5. 前記固体形態が、下記図１に示すものと同様のＸＲＰＤを有する、
   請求項２に記載の固体形態。
   [図１]
   

   
6. 前記固体形態が形態２であり、６．７６±０．２、８．７７±０．２、９．０６±０．２、１２．００±０．２、１３．５３±０．２、１５．４７±０．２、１８．１３±０．２、２０．０７±０．２、２４．４６±０．２、または２５．０７±０．２度２θにあるピークを持つ粉末Ｘ線回折パターンを有する、
   請求項２に記載の固体形態。
7. 前記固体形態が、下記図５に示すものと同様のＸＲＰＤを有する、
   請求項２に記載の固体形態。
   [図５]
   

   
8. 請求項１～７のいずれか一項に記載の固体形態と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む組成物。
9. （ａ）癌および前癌状態からなる群から選択される障害;または（ｂ）病態がＢ細胞の異常な活性を特徴とする病状、疾患もしくは障害；を治療する方法において使用するための、請求項１～７のいずれか一項に記載の固体形態、または請求項８に記載の組成物であって、前記方法が、前記固体形態または組成物の有効量を、対象に投与することを含む、前記固体形態、または組成物。
10. （ａ）自己免疫障害および炎症性障害からなる群から選択される障害；または（ｂ）病態がＢ細胞の異常な活性を特徴とする病状、疾患もしくは障害；を治療する方法において使用するための、請求項１～７のいずれか一項に記載の固体形態、または請求項８に記載の組成物であって、前記方法が、前記固体形態または組成物の有効量を対象に投与することを含む、前記固体形態、または組成物。
11. さらに、薬学的に許容される担体または賦形剤を含む、
    請求項９～１０のいずれか一項に記載の使用のための固体形態、または組成物。
12. 前記固体形態または組成物が経口投与される、
    請求項９～１１のいずれか一項に記載の使用のための固体形態、または組成物。
13. 前記化合物２の有効量が２５ｍｇ～３００ｍｇである、
    請求項９～１２のいずれか一項に記載の使用のための固体形態、または組成物。
14. 前記化合物２の有効量が、５０ｍｇ～３００ｍｇである、
    請求項１３に記載の使用のための固体形態、または組成物。
15. 前記化合物２の有効量が、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、または３００ｍｇである、
    請求項９～１４のいずれか一項に記載の使用のための固体形態、または組成物。
16. 前記障害が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、アトピー性皮膚炎、白血病およびリンパ腫から選択される、請求項９～１５のいずれか一項に記載の使用のための固体形態、または組成物。
17. 前記障害が白血病、リンパ腫、またはＢ細胞悪性腫瘍である、
    請求項９～１０のいずれか一項に記載の使用のための固体形態、または組成物。
18. 前記固体形態、または組成物が、１日に１回、２回、もしくは２回より多い回数投与される、請求項９～１７のいずれか一項に記載の使用のための固体形態、または組成物。
19. ブルトンのチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）の阻害に応答する障害を治療する方法に使用するための、請求項１～７のいずれか一項に記載の固体形態、または、請求項８に記載の組成物であって、前記方法が、前記固体形態、または前記組成物の有効量を対象に投与することを含む、前記固体形態、または組成物。
20. 請求項１９に記載の固体形態または組成物であって、ＢＴＫの阻害に応答する前記障害が、イブルチニブに耐性である、前記固体形態、または組成物。
21. ＢＴＫの阻害に応答する障害を有する対象を治療する方法に使用するための請求項１～７のいずれか一項に記載の固体形態、または請求項８に記載の組成物であって、前記対象が第１のＢＴＫ阻害剤で治療され、そして前記第１のＢＴＫ阻害剤の活性を損なう機能的ＢＴＫ Ｃｙｓ４８１突然変異を獲得しており、前記方法が、有効量の前記固体形態、または組成物を前記対象に投与することを含む、前記固体形態、または組成物。
22. ＢＴＫの阻害に応答する障害を有する対象を治療する方法に使用するための請求項１～７のいずれか一項に記載の固体形態、または請求項８に記載の組成物であって、前記方法が、
    （ａ）前記対象から血液または組織試料を採取し、そこからＤＮＡを抽出すること；
    （ｂ）ＢＴＫ、ＰＬＣγ２、またはそれらの組み合わせに特徴的な１つ以上の遺伝子配列を同定するために前記ＤＮＡを分析し、前記第１のＢＴＫ阻害剤のＢＴＫ阻害活性に影響を及ぼすＢＴＫまたはＰＬＣγ２中の後天的突然変異の存在を決定すること、
    （ｃ）任意でステップ（a）および（ｂ）を繰り返すこと；ならびに
    （ｄ）治療有効量の前記固体形態、または組成物を、ＢＴＫまたはＰＬＣγ２に後天的突然変異を有する前記対象に投与することを含み、任意でステップ（ａ）の前に、第１のＢＴＫ阻害剤の治療的有効量を含む組成物が前記対象に投与されている、前記固体形態、または組成物。
23. 第１のＢＴＫ阻害剤が、イブルチニブ（ＰＣＩ－３２７６５）、アカララブルチニブ、またはスペブルチニブである、請求項２１または２２に記載の使用するための固体形態、または組成物。
24. 前記固体形態、または組成物の有効量が２５ｍｇ～３００ｍｇである、請求項２１～２３のいずれか一項に記載の使用のための固体形態、または組成物。
25. 前記固体形態、または組成物の有効量が、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、または３００ｍｇである、請求項２１～２４のいずれか一項に記載の使用のための固体形態、または組成物。
26. 前記対象が、ＢＴＫ Ｃｙｓ４８１突然変異または機能的ＢＴＫ Ｃｙｓ４８１突然変異である、請求項９～１８または２１～２５のいずれか一項に記載の使用のための固体形態、または組成物。
27. 前記突然変異がＣ４８１Ｓ、Ｃ４８１Ｆ、Ｃ４８１Ｇ、またはＣ４８１Ｔである、請求項２６に記載の使用のための固体形態、または組成物。
28. 前記障害が、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、ワルデンストレームマクログロブリン血症、またはマントル細胞リンパ腫である、請求項１７に記載の使用のための固体形態、または組成物。
29. 前記突然変異が、Ｃ４８１Ｓである、請求項２７に記載の使用のための固体形態、または組成物。

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